PL80536B1 - - Google Patents

Description

Sposób wytwarzania nowego antybiotyku SL 3440 1 2 z glukoza, skrobia, dekstryna, laktoza, sacharoza i innymi. Ponadto jako zródla azotu stosuje sie organiczne i nieorganiczne zwiazki, zawierajace azot, jak na przyklad pepton, ekstrakty drozdzowe lub miesne, siarczan amonu, azotan amonu, ami¬ nokwasy i inne, jak równiez zwykle sole mine¬ ralne i pierwiastki sladowe.Nowy antybiotyk otrzymuje sie w hodowli no¬ wego szczepu Diheterospora chlamydosporia przez zaszczepienie plynnej pozywki zawiesina zarodni¬ ków, prowadzac inkubacje w temperaturze 18°C w ciagu 8 dni.Hodowle mozna prowadzic w warunkach tleno¬ wych powierzchniowo lub podpowierzchniowo na trzesawkach lub w fermentorach z napowietrza¬ niem lub natlenianiem i mieszaniem. Z chwila wy¬ tworzenia sie maksymalnej ilosci antybiotyku brze¬ czke uwalnia sie od grzybni, a z przesaczu izoluje sie antybiotyk znanym sposobem metoda ekstrak¬ cji i/lub adsorpcji.Antybiotyk SL3440 mozna równiez otrzymac dro¬ ga roztwarzania grzybni.Korzystna okazala sie metoda ekstrakcji anty¬ biotyku z plynu fermentacyjnego wolnego od grzy¬ bni przy uzyciu chlorku etylenu, chociaz mozna równiez stosowac i organiczne rozpuszczalniki, jak na przyklad benzen, chloroform, octan butylu, chlo¬ rek metylenu lub butanol. Nowy antybiotyk moz¬ na tez izolowac z surowego ekstraktu za pomoca chromatografii.Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowego antybiotyku oznaczonego dalej jako an¬ tybiotyk SL 3440.Zgodnie z wynalazkiem nowy antybiotyk SL3440 otrzymuje sie w powierzchniowej lub podpowierz- 5 chniowej hodowli nowego szczepu z gatungu grzy¬ ba Diheterospora chlamydosporia, przy czym an¬ tybiotyk ten izoluje sie w znany sposób z brzeczki fermentacyjnej i nastepnie oczyszcza.Stosowany zgodnie z wynalazkiem nowy szczep Diheterospora chlamydosporia wyizolowany zostal 10 z próbek gleby we Wloszech i zdeponowany pod nr NRRL3472 w United States Department of Agriculture (Northern Utilization Research and De- velopment Division). Peoria, III., USA.Nowy szczep z gatunku grzyba Diheterospora 15 chlamydosporia rosnie na agarze z dodatkiem glu¬ kozy, ekstraktu slodowego, ekstraktu miesnego i peptonu, w temperaturze 18—27°C, tworzac bia¬ la, plaska grzybnie powietrzna. Grzybnia podsta¬ wowa wykazuje zólto-brazowe zabarwienie podloza. 20 Cechy morfologiczne i fizjologiczne szczepu NRRL 3472 sa zgodne z opisem podanym przez G.L. Bar- ron i A.H.S. Onions, Canadian Journal of Botany, tom 44 strony 861—869 (1966).Nowy szczep z gatunku grzyba Diheterospora 25 chlamydosporia NRRL 3472 mozna hodowac na sze¬ regu pozywkach, które zawieraja zwykle substan¬ cje odzywcze. W hodowli tego rodzaju szczepu stosuje sie jako zródla wegla podloze, stosowane dla organizmów heterotrofowych, jalk na przyklad 30 80 53680 536 3 Nowy antybiotyk SL3440 charakteryzuje sie na¬ stepujacymi danymi fizyko-chemicznymi: Bezbarwny, lepki olej; wzór sumaryczny C28Hj8N406 Analiza elementarna: znaleziono: C — 64,3%; H — 7,7%; N — 10,3% obliczono: C — 63,9%; H — 7,3%; N — 10,6% Skrecalnosc wlasciwa: [a] ^ = —127,7° (c= l,0 w benzenie).Widmo w nadfiolecie (w metanolu): porównaj fig. 1.Widmo w podczerwieni (w chlorku metylenu): miedzy innymi pasma przy 1685 i 1635 cm-1 (fig. 2).Nowy antybiotyk wykazuje interesujace wlasci¬ wosci farmakologiczne i dlatego moze byc stoso¬ wany jako srodek leczniczy.Nowy antybiotyk posiada duza aktywnsoc grzy- bostatyczna wobec róznych infekcji spowodowa¬ nych grzybami chorobotwórczymi. In vitro dziala szczególnie na nastepujace grzyby.Trichophyton mentagrophytes (najmniejsze steze¬ nie hamujace 10 y /ml), Histoplasma capsulatum (najmniejsze stezenie ha¬ mujace 10 y (ml), Trichophyton tonsurans (najmniejsze stezenie ha¬ mujace 10 y (ml) Trichophyton rubrum (najmniejsze stezenie ha¬ mujace 10 y (ml)» Epidermophyton floccosum (najmniejsze stezenie hamujace (10 y (nil), Microsporum canis (najmniejsze stezenie hamu¬ jace 10 y (nil), Microsporus audouinii (najmniejsze stezenie ha¬ mujace 10 y (ml), Histoplasma duboisii (najmniejsze stezenie ha¬ mujace 10 y (ml) Beastomyces brasiliensis (najmniejsze stezenie hamujace 10 y (ml) Beastomyces dermatitidis (najmniejsze stezenie hamujace 1 y (n*l) Sporotrichum schenkii (najmniejsze stezenie ha¬ mujace 100 y tol) Ponadto nowy antybiotyk posiada szczególne dzialanie cytostatyczne, co mozna bylo ustalic in vitro na szczepie komórek, pochodzacych z nowo¬ tworu myszy (P-815-Mastocytom), jak równiez in vivo u szczura z rakiem Walkera. In vitro nowy antybiotyk w stezeniu 0,0004 y/™! hamuje w 50 procentach rozmnazanie komórek, zas in vivo dawki wynosza 0,5—120 mg/kg wagi ciala zwie¬ rzecia cieplokrwistego, przy czym wielkosc dawki zalezy od wymaganego dzialania oraz od sposobu podania. Na ogól dla duzych ssaków skuteczna jest jednostkowa 5—1000 mg dawka, stosowana korzy¬ stnie dotetniczo. Do stosowania miejscowego stosu- 5 je sie proszek, aerozol, masc lub tinkture zawie¬ rajace 0,1—2% substancji czynnej.W nastepujacym przykladzie, który podaje szcze¬ góly sposobu, nie ograniczajac zakresu wynalazku, wszystkie temperatury podano w stopniach Celsju- io sza.Przyklad I. Fermentor, zawierajacy 10 litrów pozywki o skladzie (w 1 litrze). cerelozy 40 g tryptonu 5 g 15 NaNOs 3 g K2HP04 lg KC1 500 mg MgS04-7H20 500 mg FeS04-7H20 10 mg 20 odmineralizowana woda, zaszczepia sie zawiesina zarodników szczepu Dihe- terospora chlamydosporia NRRL 3472 i nastepnie inkubuje, wprowadzajac 1 litr powietrza/minute 25 litr pozywki przy równoczesnym mieszaniu z pred¬ koscia 300 obrotów/minute, w temperaturze 18° w ciagu 8 dni. Po usunieciu grzybni przesacz eks¬ trahuje sie chlorkiem etylenu. Surowy wyciag pod¬ daje sie chromatografii na zelu krzemionkowym 30 Mercka (0,05—0,2 mm), po czym eluuje sie anty¬ biotyk mieszanina chloroformu i metanolu w sto¬ sunku 99 :1.Stosowana do szczepienia zawiesine zarodników otrzymuje sie z pierwotnie wyizolowanego szczepu, 35 który hoduje sie w temperaturze 27° w ciagu 8 dnia na podlozu agarowym o skladzie: cereloza 20 g agar wlóknisty 20 g ekstrakt slodowy (Schweiz. Ferment AG) 2 g 40 ekstrakt drozdzowy 2 g pepton 2 g KH2P04 2 g MgS04-7H20 2 g odmineralizowana woda ad 1 litr 45 PL PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowego antybiotyku SL3440, znamienny tym, ze nowy szczep z gatunku grzy¬ ba Diheterospora chlamydosporia NRRL 3472 ho- 50 duje sie na pozywce, po czym antybiotyk SL3440 izoluje sie znanymi metodami z plynu fermenta¬ cyjnego i oczyszcza.80 536 100 . x55 Fig. 1 3| - ye: 1 m 100 - 3055 Fig. 2 4000 cm" 3500 3000 2500 2000 1900 1600 1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 900 B00 700 cm* ¦CZYTEW«a| ^^ M**~*M * y^ PL PL