DE1948610A1

DE1948610A1 - Verfahren zur Reinigung und Reindarstellung von Agglutinin Anti Anel aus Helix pomatia

Info

Publication number: DE1948610A1
Application number: DE19691948610
Authority: DE
Inventors: Kuehnemund Dipl-Chem Otto; Prokop Dr Otto
Original assignee: Akademie der Wissenschaften der DDR
Current assignee: Akademie der Wissenschaften der DDR
Priority date: 1968-11-14
Filing date: 1969-09-26
Publication date: 1970-06-11

Description

Verfahren zur Reinigung und Reindarstellung von Agglutinin Anti Ahel aus Helix pomatia Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Isolierung und Reinigung des Agglutinins aus Helix pomatia. Das Agglutinin ist ein Glykoprotein, mit dem man sowohl Blutkörperchen der Untergruppe H A1 als auch Streptokokken der Gruppe C, allgemein gesagt endständiges N-Acetyl-galactosamin, spezifisch nachweisen kann.
Das Agglutinin Anti Ahel wird bisher durch Extraktion aus getrpckneten EiweissdrUsen gewonnen. Das Agglutinin wird dabei jedoch nicht weiter gereinigt.
Bei der Untersuchung dieses Extraktes mit HilSe der Disk-Elektrophorese zeigt sich, daß ein Gemisch des Agglutinins mit mehreren anderen Xomponenten vorliegt, und daß das Agglutinin nur einen geringen Bruchteil darstellt. Das hat den Nachteil, daß in Lösungen mit einem hohen Agglutinintiter die Konzentration an Ballaststoffen so hoch ist, daß Störungen bei serologischen Reaktionen verursacht werden können.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, das Agglutinin aus Helix pomatia in reiner Borm und in einem zur Herstellung in größerem Maßstab geeigneten Verfahren zu isolieren.
ErSindungsgem§ß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß lyophilisierte, getrocknete oder zermahlene Eiweissdüsen bzw. Eingeweide von Helix pomatia mit physiologischer Kochsalzlösung in bekannter Weise mehrfach extrahiert werden. Anschließend werden die Extrakte gegen destilliertes Wasser salzfrei dialysiert und lyophil getrocknet. Vor der Dialyse kann durch Bällung bei O,7facher Sättigung mit- Ammoniumsulfat eine Konzentrierung vorgenommen werden. Der gewonnene lyophilisierte Rohextrakt wird in einer Eonzentration von 10% in vorzugsweise m/20 Phosphatpuffer vom pH 7,0 auf eine mit demselben Lösungsmittel eingestellte Sephadex-Säule, vorzugsweise vom Typ G 200, aufgetragen. Die Elution wird mit vorzugsweise m/20 Phosphatpuffer vorgenommen und mit einem UV-Durchflußabsorptiometer verfolgt. Alle im Eluat erscheinenden Peaks erweisen sich als serologisch inaktiv, Nachdem die Säule mit einer dem Inhaltsvolumen Vi entsprechenden Menge Puffer durchgespült wurde, wird die Elution mit 0,5 M Dextroselösung in oben genanntem Puffer fortgesetzt. Dabei erscheint im Eluat ein weiterer Peak, der die serologische Aktivität enthält und der sich in der Disk-Elektrophorese als einheitliche Substanz nachweisen läßt. Die das Agglutinin enthaltenden Fraktionen werden zur Entfernung von Puder und Dextrose gegen Wasser dialysiert und anschließend lyophilisiert.
Das beschriebene Verfahren gestattet nicht nur im Labor-, sondern auch im Teohnikumsmaßstab die Gewinnung eines von Begleitstoffen freien Produktes. Dazu lassen sich Abfälle der Herstellung von Weinbergschnecken-Konserven verwenden.
Die Erfindung soll nachstehend an einem Ausführungsbeispiel näher erläutert werden: 3 g getrockneter und zermahlener Siweissdrüsen bzw.
Eingeweide von Helix pomatia werden 3 x mit Je 50 ml physiologischer Kochsalzlösung je 6 Stunden bei + 40 unter Rühren extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden gegen Wasser salzfrel dialysiert und lyophil getrocknet (lyophilisierter Rohextrakt).
100 mg lyophilisierten Rohextraktes werden in 2 ml m/20 i?hosphatpuffer pH 7,0 gelöst und auf eine Sephadex G 200 Säule (2,5 x 40 cm) aufgetragen. Die Elution erfolgt mit einer Menge von vorzugsweise 250 ml m/20 Phosphatpuffer pH 7,0. Danach wird durch einen automatischen Umschalter mit einem zweiten Lösungsmittel, 0,5 M Dextrose in m/20 Phosphatpuffer pH 7,0 eluiert. Nachdem wiederum etwa 250 ml die Säule passiert haben, erschelnt im Durchflußabsorptiometer ein Peak, der das Agglutinin enthält. Die entsprechenden Braktionen werden vereinigt, gegen destilliertes Wasser salzfrei dialysiert und lyophil getrocknet.
Ausbeute: 5 mg.

Claims

P a t e n t a n s p r u c h :

Verfahren zur Reinigung und Reindarstellung von Agglutinin Antd Ahel, daduroh gekennzeichnet, daB der aus getrockneten oder frischen zermahlenen Eiweissdrüsen bzw. Eingeweiden von Helix pomatia gewonnene Rohextrakt an Sephadex, vorzugsweise G 200, absorbiert und stufenweise mit Phosphat- Puffer, vorzugsweise einer Konzentration von 20 , und einem pH-Wert von vorzugsweise 7t0 und dem gleichen Puffer mit einem Dextosezusatz in einer Konzentration von vorzugsweise 0,5 m das Agglutinin wieder eluiert, durch Dialyse von Salzen befreit und lyophil getrocknet wird.