DE1815332A1 - Verfahren zur Bindung organischer Verbindungen an Polymere - Google Patents

Verfahren zur Bindung organischer Verbindungen an Polymere

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Description

RECHTSANWÄLTE
DR. JUR. DIPL-CHEM. WALTER BEIl
ALFRED KCE2PF.NER
DR. JUR. DIP.--HiV. H..J. WOLFP
DR. JUR. HANS CM-S. BEIL ( J
623FRANKFURTAMArtAIN-HaCHST
ADELONSTKASSE 58
Unsere Nr0 15
Pharmacia Aktiebolag Uppsala, Schweden
Verfahren zur Bindung organischer Verbindungen an Polymere,
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bindung organischer Verbindungen mit einer oder mehreren Gruppen der Formel -YH1 in der -YH eine primäre oder se« kundäre Äminogruppe darstellt, an Polymere mit einer oder mehreren Gruppen der Formel -XH1 in der -XH eine Hydroxylgruppe oder eine primäre oder sekundäre Äminogruppe darstellt, unter Bildung covalenter Bindungen, wobei das Polymer mit einer Verbindung umgesetzt wird, die zur Bildung eines reaktionsfähigen Derivats des Polymers befähigt ist, und dieses Derivat mit der organischen Verbindung umgesetzt wird.
Derartige Verfahren sind bereits bekannt. Organische Verbindungen mit einer oder mehreren Gruppen der Formel -YH, deren Bindung an Polymere von speziellem Interesse ist, sind insbesondere Proteine, Polypeptide, Peptide, Aminosäuren und deren Derivate. Beispiele solcher Verbindungen sind Enzyme, Antikörper, Protein- und/oder Peptid-Hormone,.Antigen-Proteine, Allergene oder Haptene. Ein wichtiges Beispiel sind die Antikörper, die zur analytischen Bestimmung auf diese Weise an Polymere gebunden werden können. Weitere Beispiele derartiger
. 909830/1SQ5
organischer Verbindungen sind Derivate von Kohlehydraten, beispielsweise Polysaccharide, die eine Aminogruppe der For« mel -YH aufweisen« Beispiele für Polymere mit einer oder mehreren Gruppen der Formel -XH sind Polysaccharide wie Dextran, Cellulose, Stärke, Dextrin und 4gar-Agar ("Sepharos"), Copolymere von Dextran mit Epichlorhydrin oder Derivate dieser Verbindungen wie Hydroxyäthylcellulose und 2-fiydroxy~3~(i*'~ amino-phenoxy)-propyl-substituierte Copolymere von Dextran mit Epichlorhydrin. Auch Polyaminostyrol ist ein geeignetes Polymer»
φ Zur Herstellung eines reaktionsfähigen Derivats des Polymers bekannte Verbindungen sind Mittel zur Einführung von Azidgruppen, Isocyanatgruppen und Diazoniumgruppen. Die Herstellung der reaktionsfähigen Derivate ist häufig kompliziert, und die Ergebnisse sind nur schwer reproduzierbar. Es war ferner bekannt, äaft reaktionsfähige Gruppen in ein Polymer einzuführen, das eine oder mehrere Gruppen der Formel -XH aufweist, durch Behandeln des Polymers mit Bromcyan. Diese Verbindung ist jedoch sehr toxisch und daher zum Arbeiten in technischem Maßstab ungeeignet»
Während Bromcyan ein reaktionsfähiges Derivat ergibt, das unter verschiedenen Gesichtspunkten außerordentlich gute w Eigenschaften zeigt, besteht ein Nachteil dieser Verbindung darin, daß die Reaktionsfähigkeit des so erhaltenen Derivats kaum variiert bezw. dem jeweiligen Fall angepaßt werden kann.
Gemäß vorliegender Erfindung wurde nun eine Methode ermittelt, durch die die obigen Nachteile weitgehend vermieden werden können« Erfindungsgemäß wird zur Bildung des reaktionsfähigen Derivats des Polymers eine Verbindung eingesetzt, die eine oder mehrere Cyanatgruppen aufweist.
Bevorzugte Verbindungen dieser Art besitzen die Formel R (OCN)x
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in der R beispielsweise eine halogenierte Alkylgruppe, eine substituierte aromatische Gruppe, ein heterocyclisches Ringsystem oder eine cycloaliphatische Gruppe und χ die Zahl 1 oder 2 bedeuten, Substituenten der aromatischen Reste sind beispielsweise Nitrogruppen, Halogen wie Chlor, Alkylreste wie Methyl oder tert· -Butyl, Alkoxygruppen wie z.B. die Methoxygruppe.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Verbindungen mit mindestens einer Cyanatgruppe können sehr verschiedener Natur sein* Es kann sich beispielsweise um substituierte oder un~ substituierte organische Verbindungen wie substituierte oder unsubstituierte aliphatische, alicyclisch-aromatische oder heterocyclische Cyanatverbindungen handeln, oder um anorganische Cyanate wie Natrium-, Kaliumcyanat oder dgl. Als Beispiele derartiger Verbindungen seien genannt: β,β,β-Irichloräthylcyanat, 1-Adamantylcyanat, Phenylcyanat, o-Nitrophenylcyanat, p-Nitrophenylcyanat, m-Chlorphenylcyanat, p-Methoxyphenylcyanat, o-tert.-Butylphenylcyanat, 2,2-Dlmethylphenyl« cyanat, 2,M-, o-Tri-tert.-butylphenylcyanat, 2-Naphthylcyanat, 1,4-Dicyanatobenzol.
Wie bereits erwähnt, besteht das vorliegende Verfahren aus zwei Stufen. Die erste Stufe, nämlich die Herstellung des reaktionsfähigen Derivats, erfolgt gewöhnlich derart, daß man das eine oder mehrere Gruppen der Formel -XH enthaltende Polymer mit dem betreffenden Cyanat in Berührung bringt. Die Umsetzung erfolgt zweckmäßig in wässriger Lösung oder Suspension, wobei sowohl saure wie .auch basische Bedingungen möglich sind. Die pH-Werte liegen jedoch im allgemeinen zwischen 7 und 13. Die Reaktion kann ferner in von Wasser verschiedenen Lösungsmitteln, beispielsweise mit Wasser mischbaren Lösungsmitteln wie Aceton oder Dioxan erfolgen. Zur Einstellung des zweck« mäßigen pH-Werts oder pH-Bereichs geeignete Verbindungen sind Natriumhydroxyd, Calciumhydroxyd, Natriumbicarbonat, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Triäthylamin«
909830/ 1505
Der geeignete pH-Wert oder pH-Bereich, der unter anderem von Reaktionstemperatur und Reaktionszeit abhängt, kann vom Fachmann leicht ermittelt werden. Die Reaktion kann bei verschiedenen Temperaturen, beispielsweise im Bereich zwischen 0 und 500C erfolgen, und die Reaktionszeit kann in einem breiten Bereich schwanken und beispielsweise von wenigen Minuten bis zu mehreren Stunden betragen. Das reaktionsfähige Derivat des Polymers wird vor der Bindung an die organische Verbindung zweckmäßig gereinigt, beispielsweise durch Waschen mit geeigneten Lösungsmitteln, etwa Wasser oder Aceton. In der zweiten Verfahrensstufe, d.h. bei der Bindung des reaktionsfähigen Derivats an die organische Verbindung, die eine ode r mehrere Gruppen der Formel -YH aufweist, wird vorzugsweise in einer schwach alkalischen Lösung bei einer Temperatur von im allgemeinen 0 bis 5O0C, beispielsweise bei Raumtemperatur, gearbeitet· Die zweite Stufe erfolgt zweckmäßig in wässriger Lösung.
Bin wesentlicher Vorteil bei der Verwendung- von Cyanatverbindungen als Mittel zur Einführung der reaktionsfähigen Gruppen besteht darin, daß man auch sehr empfindliche Verbindungen an Polymere binden kann, ohne daß erstere einer nicht erwünschten Veränderung unterliegen. Durch Umsetzung des die Gruppen der Formel -XH enthaltenden Polymers mit verschiedenen Cyanatverbindungen erhält man sehr reaktionsfähige» Zwischenprodukte, die schematisch wie folgt dargestellt werden können:
P-X-C-O-R1
Il 1
NH
worin X die obige Bedeutung besitzt und R1 den Cyanatrest darstellt. Diese Zwischenprodukte reagieren leicht unter milden Reaktionsbedingungen mit einer Aminogruppe der betreffenden organischen Verbindung. Beispielsweise kann man einen Antikörper auf diese Weise an das Polymer binden, ohne daß die Fähigkeit des Antikörpers zur Bindung seines Antigens verlorengeht·
Das erfindungsgemäß eingesetzte Polymer kann auch in Wasser
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unlöslich sein. Als Beispiel für ein solches Polymer sei ein Copolymer aus Dextran und Epichlorhydrin ("Sephadex") genannt. Dieses Polymer ist durch verschiedene Wasseraufnahme und variierende Teilchengrößen gekennzeichnet. Zur Bindung, beispielsweise von Antikörpern an das Dextran-copolymer, kann man eine aus kleinen Körnchen, vorzugsweise von 1 bis 10 /um, e bestehende Qualität verwenden.
Aus nachstehendem Beispiel ist ersichtlich, daß die Art des Substituenten in der organischen Cyanatverbindung variiert werden kann. Der Substituent kann fähig sein, Elektronen abzugeben oder aufzunehmen, ferner kann er eine gewisse sterlsehe Hinderung verursachen} die Stellung des Substituenten |B gegenüber der Cyanatgruppe ist nicht essentiell. Die Aktivierung des Polymers kann bei verschiedenen pH-Werten und Temperaturen erfolgen, wobei der Fachmann für jede einzelne Cyanatverbindung die besten Bedingungen leicht feststellen kann0
Beispiel
A. Herstellung des reaktionsfähigen Derivats« Allgemeines Verfahrenj
1 g des Polymers (d.fcu vernetztes Dextran, Agar-gel von Agar-Agar, Cellulose) wird in ^O ml destilliertem Wasser 3 Minuten lang gerührt, dann werden 2 g der mindestens eine Cyanatgruppe 'aufweisenden Verbindung zugesetzt* Der pH-Wert wird auf ™ 10,7 eingestellteren automatische Zugabe einer wässrigen 2« molaren Lösung von Natriumhydroxyd auf diesem Wert gehalten. Die Reaktion wird 6 Minuten lang fortgesetzt, dann wird das Reaktionsprodukt abfiltriert und sorgfältig mit Wasser, Aceton und Wasser und schließlich Aceton gewaschen und getrocknet*
Die Herstellung des reaktionsfähigen Derivats kann auch bei anderen pH-Werten und unter Verwendung anderer Reaktionszeiten (Tabelle 5) erfolgen. Solche Abweichungen vom allgemeinen Verfahren sind nachstehend illustriert.
9Q983Q/1SQ5
B. Bindung des reaktionsfähigen Derivats an organische Verbindungen, die eine oder mehrere Gruppen der Formel -YH enthalten»
1. Bindung von Insulin-Antikörpern an Teilchen aus vernetztem Dextran, 4gar*-^gar unä Cellulose.
100 g des reaktionsfähigen Derivats werden in ^t-OO/Ul eines Natriumcarbonat-Natriumbicarbonat-Puffers (pH 9,2) 10 Minuten lang gequollen. 100 au. der Lösung des Antikörpers in der gleichen Pufferlösung werden dem reaktionsfähigen Derivat zugegeben, dann wird bei +It-0C 2 bis 3 Tage lang geschüttelt. Danach gibt man wenige ml einer 0,1-molaren Natriumbicarbonatlösung zu, worauf zentrifugiert und die klare Lösung abgesaugt wird. Der feste Rückstand wird mit 0,1-molarer Natriumbicarbonatlösung, 0,5-isolarem Essigsäurepuffer (pH k,5) und schließlich mit dem Puffer, der später für die auszuführende Analyse verwendet wird (Tabelle 1-^), gewaschen.
2. Bindung von Cystein, Glycylleucin und Glycyltyr osin an das reaktionsfähige Derivat von vernetztem Dextran. 0,20 g des reaktionsfähigen Derivats von vernetztem
Dextran und 0,08 g Cystein, Glycylleucin oder Glycyltgrosin werden in 1 ml einer Natriumcarbonat-Natriumbicarbonat-Pufferlösung (pH 9,2) 2 Tage lang bei k°G gerührt. Das Produkt wird abfiltriert und mit 0,5-molarer Natriumbicarbonatlösung und 0,01-molarer Salzsäure und 1-molarem NaCl, und schließlich mit Wasser gewaschen. Das gewaschene Produkt wird mit Aceton geschrumpft und getrocknet.
Analyse:
1) Die an das vernetzte Dextran gebundene Cysteinmenge beträgt 6%*
Z) Die an das vernetzte Dextran gebundene !«enge Glycylleucin beträgt 13##
3) Dio an das vernetzte Dextran gebundene Menge an Glyoyltyrosin beträgt
In den folgenden Tabellen werden die Eigenschaften verschiedener Arten von vernetztem Dextran, die durch verschiedene
£09830/1505
organische Cyanate aktiviert sind, miteinander verglichen. Die Ergebnisse der jeweiligen Tabellen sind nicht untereinander ver· gleichbar· Unter cpm wird die Anzahl von Ausschlägen pro Mi«
nute angegeben, die mit
IOC -Insulin/absorbiert durch 0,1 mg
eines Komplexes zwischen Antikörpern und aktiviertem vernetzten Dextran, erhalten wird.
Tabelle 1
Cyanat
Phenylcyanat
p-Nitrophenylcyanat o-Nitrophenylcyanat m-Chlorphenylcyanat
cpm
9200
9300
4600
1400
Tabelle 2
Cyanat
Phenylcyanat
p-Methoxyphenylcyanat 2,4~Dichlorphenylcyanat 2-tert.-Butylphenylcyanat 2,6-Dimethylphenylcyanat 1-Adamantylcyanat
cpm
2600
2240
540 2040 1100
580
Tabelle 3
Cyanat
ßtß,ß-Trichloräthylcyanat 2,4,6-Tri-tert.-butylphenylcyanat cpm
34000
18000
Tabelle 4
Cyanat
1-Naphthylcyanat
1,4-Phenyl'endicyanat Phenylcyanat
cpm 1200 600 1250
909830/15
Tabelle 5
Cyanat Eä Aktivierungszeit, Min. Tabelle 6
Phenylcyanat 10, 7 1,5 Polymer
N 10, 7 6 vernetztes Dextran
N 8 6 (Sephadexw)
Il 7 6 Cellulose
H 4 6 Agar-Agar
(Sepharos^)
Cyanat Tabelle 7
Phenylcyanat Polymer
H
N
Cyanat
cpm
112000
93000
44000
4000
7000
Natriumcyanat Polyν inylalkoho1
cpm 9200
9000 9100
vernetztes Dextran
cpm 1000
7000
3# Bindung von Insulin-Antikörpern an Teilchen aus ver«
netztem Dextran*
Es wurde nach obigem Verfahren B· 1· feearbeitet, jedoch mit folgenden Abweichungen:
Die Lösung des Antikörpers wurde dem reaktionsfähigen Derivat zugesetzt und bei +230C 1,2,4,6 bezw, 24 Stunden lang geschüttelt· Die Ergebnisse sind in Tabelle 8 zusammengefaßt.
Tabelle 8
Cyanat Reaktionszeit
Phenylcyanat 1
H 2
Il 4
Il 6
Il 909830/^505
cpm
4500 4700 4800 4800 4800
Mit Ausnahme von l-Adamantylcyanat und o-Nitrophenylcyanat waren alle getesteten Verbindungen aus der Literatur bekannt (vgl. Grigat, Ec, und Pütter, H., Angew. Ghem. 21t 219 (1967). Das 1-Adamantylcyanat wurde nach einem bekannten Verfahren g hergestellt, (vgle Kauer, J0G0, und Hendersson, W.W· J.Am, ChemeSoCe 86,, 4·732, 1964-), ebenso das o-Nitrophenylcyanat, (vgl. Grigat, E. und Pütter, R., Chem. Bere 2Z» 3018 (196^).
1-Adamantyloyana t.
Eine 50#ige Suspension von Natriumhydrid (5 g) in Öl wurde zweimal mit trockenem Benzol gewaschen, das dann abdekan« tiert wurde. Das .Natriumhydrid wurde sodann in 75 ml trockenem Benzol dispergiert, danach wurden 15,3 g 1-Adamantanol züge« setzt. Das Gemisch wurde unter Rühren ^ Stunden lang am Rück« fluß gekocht, dann wurde auf Raumtemperatur abgekühlt« Sodann wurden 10,5 g Bromcyan, in 25 ml trockenem Benzol gelöst, im Verlauf von etwa 15 Minuten zugetropft. Nach weiterem 10-minütigern Rühren wurde der Niederschlag abfiltriert und mit trocke« nem Benzol gewaschen. Piltrat und Waschlösungen wurden ver« einigt und zur Trockene eingedampft. 10 g des Rückstands wurden in 25 ml siedendem Benzol gelöst und die Lösung wurde über Nacht bei -200C stehen gelassen» Der resultierende Nieder« schlag wurde abfiltriert und das Piltrat wurde zur Trockene eingedampft. Der so erhaltene Rückstand wurde als Aktivierungsmittel verwendet.
o-Nitrophenylcyanat. . . .
13»9 g o-Nitrophenol und 11,1 g Bromcyan wurden in 30 ml Aceton gelöst, Dann wurden 10,1 g Triethylamin unter Eiskühlung in solcher -Geschwindigkeit zugetropft, daß die Temperatur nicht über 1O0G anstieg. Nach beendeter Zugabe wurde noch 5 Minuten lang gerührt« Sodann wurde das Reaktionsgemisch fil~ triert, und das Piltrat wurde in Eiswasser gegossen. Das Pro« dukt wurde abfiltriert und in einem Exsiccator-über Phosphor« pentoxyd getrocknet«, Man erhielt 1^,2 g Produkt (87$). Dieses Rohprodukt wurde als Aktivierungsmittel verwendet.
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Claims (8)

Ίο Patentansprüche ·
1. Verfahren zur Bindung organischer Verbindungen mit einer oder mehreren Gruppen der Formel -YH, die eine primäre oder sekundäre Aminogruppe darstellt, an Polymere mit einer oder mehreren Gruppen der Formel -XH, die eine Hydroxylgruppe oder eine primäre oder sekundäre Aminogruppe darstellt, durch kovalente Bindungen, wobei das die Gruppe (n) der Formel -XH enthaltende» Polymer mit einer Verbindung umgesetzt wird, die ein reaktionsfähiges Derivat des Polymers zu bilden vermag, worauf das Derivat mit der organischen Verbindung umgesetzt wird, dadurch gekennzeichne tip daß man als zur Bildung des reaktionsfähigen Derivats des Polymers befähigte Verbindung eine Verbindung mit einer oder mehreren Cyanatgruppen verwendet. - -■ -■ ."ν -■ "
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das eine oder mehrere Gruppen der Formel -XH enthaltende Polymer ein Polysaccharid oder ein Polysaccharidderivat ist, das Hydroxylgruppen und/oder primäre und/oder sekundäre Aminogruppen enthält·
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das eine oder mehrere Gruppen der Formel -XH enthaltende Polymere in Wasser unlöslich ist«
4. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das eine oder mehrere Gruppen der Formel -XH enthaltende Polymer aus einem vernetzten, dreidimensionalen, hydroxylgruppenhaltigen Netzwerk besteht und in Wasser unlöslich ist«
5· Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die eine oder mehrere Gruppen der Formel -YH enthaltende organische Verbindung ein Protein, Polypeptid oder ein Peptid oder ein Derivat eines Proteins, Polypeptids oder Peptide ist·
909830/1505
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 « 4·, dadurch gekennzeichnet, daß die eine oder mehrere Gruppen der Formel -YH enthaltende organische Verbindung efne Aminosäure oder ein Derivat einer Aminosäure ist·
7· Verfahren nach Anspruch 5» dadurch gekennzeichnet, daß die organische Verbindung ein Enzym oder ein Derivat eines Enzyms ist.
8. Verfahren nach Anspruch 5# dadurch gekennzeichnet, daß die organische Verbindung ein Antikörper oder ein Derivat eines Antikörpers ist·
9« Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die organische Verbindung ein Antigen oder ein Derivat eines Antigens ist»
Für Pharmacia Afetiebolag Uppsala, Schweden
Rechtsanwalt
909830/1505
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2365854A1 (de) * 1972-05-03 1976-07-29 Grace W R & Co Katalysator fuer biochemische umsetzungen und verfahren zu dessen herstellung
US3980772A (en) * 1969-12-02 1976-09-14 Baxter Laboratories, Inc. Methods of dissolving blood clots and the like with streptokinase chemically bonded to a carbohydrate matrix
WO1995008348A1 (en) * 1993-09-22 1995-03-30 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
US5849301A (en) * 1993-09-22 1998-12-15 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Producing immunogenic constructs using soluable carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
US6309646B1 (en) 1996-05-09 2001-10-30 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Protein-polysaccharide conjugate vaccines and other immunological reagents prepared using homobifunctional and heterobifunctional vinylsulfones, and processes for preparing the conjugates

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2322533C2 (de) * 1972-11-06 1986-08-28 Pharmacia AB, Uppsala Verfahren zum Binden von Immunoglobulin und Hilfsmittel zur Durchführung des Verfahrens
CA1023287A (en) * 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
US3925344A (en) * 1973-04-11 1975-12-09 Community Blood Council Plasma protein substitute
US3876501A (en) * 1973-05-17 1975-04-08 Baxter Laboratories Inc Binding enzymes to activated water-soluble carbohydrates
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US3949064A (en) * 1973-10-26 1976-04-06 Baxter Laboratories, Inc. Method of detecting antigens or antibodies
CH594367A5 (de) * 1974-05-17 1978-01-13 Brenner Beat Max
US4046633A (en) * 1974-07-01 1977-09-06 University Of Utah Direct renin assay system and method
US3963691A (en) * 1974-10-07 1976-06-15 Merck & Co., Inc. Synthetic antigens of luteinizing hormone releasing hormone
US4001401A (en) * 1975-02-02 1977-01-04 Alza Corporation Blood substitute and blood plasma expander comprising polyhemoglobin
US4009264A (en) * 1975-03-03 1977-02-22 Meito Sangyo Kabushiki Kaisha Complexes of polysaccharides or derivatives thereof with reduced glutathione and process for preparing said complexes
US4046513A (en) * 1976-06-30 1977-09-06 Miles Laboratories, Inc. Printed reagent test devices and method of making same
US4197220A (en) * 1976-08-27 1980-04-08 California Institute Of Technology Impregnated metal-polymeric functional beads
US4108975A (en) * 1977-03-04 1978-08-22 Becton, Dickinson And Company Radioimmunoassay system
US4140662A (en) * 1977-03-25 1979-02-20 Ortho Diagnostics, Inc. Attachment of proteins to inert particles
GB1604249A (en) * 1977-05-31 1981-12-02 Kolehmainen S Selective measurement of somatic and microbial cells
US4229537A (en) * 1978-02-09 1980-10-21 New York University Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands
US4289748A (en) * 1979-05-31 1981-09-15 United States Of America Ultrasensitive enzymatic radioimmunoassay method
SE445116B (sv) * 1979-09-12 1986-06-02 Pharmacia Fine Chemicals Ab Sett att odla celler pa mikroberare med fibronektinytskikt
JPS5670028A (en) * 1979-11-12 1981-06-11 Teijin Ltd Polymer bonding with albumin
US4441943A (en) * 1981-05-18 1984-04-10 Hri Inc. Polypeptides as chemical tagging materials
JPS57190003A (en) * 1981-05-18 1982-11-22 Asahi Chem Ind Co Ltd Wholly porous activated gel
US4560653A (en) * 1983-06-06 1985-12-24 W. R. Grace & Co. Process for preparing L-aspartic acid
US4496689A (en) * 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4478938A (en) * 1984-03-02 1984-10-23 The Dow Chemical Company Process for crosslinking polyamines
US5206344A (en) * 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4894226A (en) * 1986-11-14 1990-01-16 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation
US4847325A (en) * 1988-01-20 1989-07-11 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
US5510418A (en) * 1988-11-21 1996-04-23 Collagen Corporation Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates
US5306500A (en) * 1988-11-21 1994-04-26 Collagen Corporation Method of augmenting tissue with collagen-polymer conjugates
US5565519A (en) * 1988-11-21 1996-10-15 Collagen Corporation Clear, chemically modified collagen-synthetic polymer conjugates for ophthalmic applications
US5162430A (en) * 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
CZ277766B6 (en) * 1990-01-04 1993-04-14 Vnii Textilno Biologically active material and process for preparing thereof
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
DK130991D0 (da) * 1991-07-04 1991-07-04 Immunodex K S Polymere konjugater
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
WO1996029094A1 (en) * 1995-03-22 1996-09-26 Andrew Lees Producing immunogenic constructs using soluble carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
KR100417183B1 (ko) * 1995-03-22 2004-05-31 헨리 엠. 잭슨 파운데이션 포 더 어드벤스먼트 오브 밀리터리 메디신 유기시아닐화제로활성화된가용성탄수화물을이용한면역원성구조체제조
ATE523211T1 (de) * 1995-12-18 2011-09-15 Angiodevice Internat Gmbh Vernetzte polymerzusammensetzungen und verfahren zu deren verwendung
US7883693B2 (en) * 1995-12-18 2011-02-08 Angiodevice International Gmbh Compositions and systems for forming crosslinked biomaterials and methods of preparation of use
US6458889B1 (en) 1995-12-18 2002-10-01 Cohesion Technologies, Inc. Compositions and systems for forming crosslinked biomaterials and associated methods of preparation and use
US6833408B2 (en) * 1995-12-18 2004-12-21 Cohesion Technologies, Inc. Methods for tissue repair using adhesive materials
KR20010085742A (ko) * 1998-08-28 2001-09-07 추후제출 정밀한 길이의 폴리아미드 사슬, 그 제조방법 및 단백질결합체의 제조방법
JP2006519766A (ja) * 2002-12-30 2006-08-31 アンジオテック インターナショナル アクツィエン ゲゼルシャフト 組織反応性化合物および組成物、ならびにそれらの使用法
EP1594459B1 (de) 2002-12-30 2010-02-17 Angiotech International Ag Wirkstofffreisetzung von schnell gelierender polymerzusammensetzung
KR101148445B1 (ko) 2004-04-28 2012-07-05 안지오디바이스 인터내셔널 게엠베하 가교된 생합성물질을 형성하기 위한 조성물 및 시스템, 및 이와 관련된 제조 및 사용 방법
EP1789437A4 (de) * 2004-07-30 2008-11-05 Sinai School Medicine Npc1l1 und npc1l1-inhibitoren und verfahren zu deren anwendung
CA2581093C (en) 2004-09-17 2014-11-18 Angiotech Biomaterials Corporation Multifunctional compounds for forming crosslinked biomaterials and methods of preparation and use

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3980772A (en) * 1969-12-02 1976-09-14 Baxter Laboratories, Inc. Methods of dissolving blood clots and the like with streptokinase chemically bonded to a carbohydrate matrix
DE2365854A1 (de) * 1972-05-03 1976-07-29 Grace W R & Co Katalysator fuer biochemische umsetzungen und verfahren zu dessen herstellung
WO1995008348A1 (en) * 1993-09-22 1995-03-30 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
US5651971A (en) * 1993-09-22 1997-07-29 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Producing immunogenic constructs using soluble carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
US5693326A (en) * 1993-09-22 1997-12-02 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Producing immunogenic constructs using soluble carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
US5849301A (en) * 1993-09-22 1998-12-15 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Producing immunogenic constructs using soluable carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
US6309646B1 (en) 1996-05-09 2001-10-30 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Protein-polysaccharide conjugate vaccines and other immunological reagents prepared using homobifunctional and heterobifunctional vinylsulfones, and processes for preparing the conjugates

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Publication number Publication date
SE343210B (de) 1972-03-06
BE725872A (de) 1969-06-20
DE1815332B2 (de) 1979-08-02
FR1595332A (de) 1970-06-08
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CH503707A (fr) 1971-02-28
DE1815332C3 (de) 1980-04-03
US3788948A (en) 1974-01-29
NL6818410A (de) 1969-06-24
IT959324B (it) 1973-11-10

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