DE10361794B3

DE10361794B3 - Optisch aktive heteroaromatische ß-Hydroxy-Ester und Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Zwischenprodukte bei der Epothilon-Totalsynthese

Info

Publication number: DE10361794B3
Application number: DE10361794A
Authority: DE
Inventors: Ulrich Klar; Johannes Platzek; Ludwig Zorn
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2003-12-31
Filing date: 2003-12-31
Publication date: 2005-10-06
Anticipated expiration: 2024-01-01
Also published as: CN100510098C; BRPI0418254A; KR20070029641A; ECSP066740A; ZA200606293B; WO2005064006A1; RU2006127553A; NO20063477L; HK1097000A1; CA2546981A1; AU2004309076A1; CR8492A; MXPA06007564A; CN1902322A; IL175908A0; EP2113031A1; JP2007516999A

Abstract

Die vorliegende Erfindung beschreibt optisch aktive heteroaromatische beta-Hydroxy-Ester und Verfahren zu deren Herstellung aus beta-Keto-Estern sowie Verfahren zur Herstellung dieser beta-Keto-Ester. DOLLAR A Die vorliegende Erfindung erlaubt es, aus einem literaturbekannten Ausgangsmaterial in sehr kurzer Sequenz (zwei Stufen) zu den heteroaromatischen beta-Hydroxy-Estern in hoher Gesamtausbeute und hohen optischen Reinheiten zu gelangen.

Description

Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen 1 mit 18 gekennzeichneten Gegenstand, das heißt optisch aktive heteroaromatische β-Hydroxy-Ester, sowie Verfahren zur deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Zwischenprodukte bei der Epothilon-Totalsynthese.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung von Zwischenprodukten liefert die neuen Zwischenprodukte in hoher chemischer und optischer Reinheit, sehr guten Ausbeuten und erlaubt die Herstellung im großen Maßstab.
Von Höfle et al. wird die cytotoxische Wirkung der Naturstoffe Epothilon A (R = Wasserstoff) und Epothilon B (R = Methyl)
Epothilon A (R = H), Epothilon B (R=CH₃) z.B. in Angew. Chem. 1996, 108, 1671-1673, beschrieben. Epothilone sind Vertreter einer Klasse von vielversprechenden Antitumormitteln, die als potent gegen eine Reihe von Krebslinien getestet wurden. Eine Übersicht zu den Synthesen ist z. B. von J. Mulzer in Monatsh. Chem. 2000, 131, 205-238 beschrieben worden. Diese Mittel weisen den gleichen biologischen Wirkungsmechanismus wie Paclitaxel und andere Taxane auf (zu Paclitaxel siehe D. G. I. Kingston, Chem. Commun. 2001, 867-880). Im Unterschied zu diesen sind Epothilone aktiv gegen eine Reihe von resistenten Zelllinien (siehe S. J. Stachel et al., Curr. Pharmaceut. Design 2001, 7, 1277-1290; K.-H. Altmann, Curr. Opin. Chem. Biol. 2001, 5, 424-431).
Wegen der in-vitro-Selektivität gegenüber Brust- und Darmzelllinien und ihrer im Vergleich zu Taxol deutlich höheren Aktivität gegen P-Glycoprotein-bildende, multiresistente Tumorlinien sowie ihre gegenüber Taxol verbesserten physikalischen Eigenschaften, z.B eine um den Faktor 30 höhere Wasserlöslichkeit, ist diese neuartige Strukturklasse für die Entwicklung eines Arzneimittels zur Therapie maligner Tumoren besonders interessant.
Es wurden eine ganze Reihe von synthetisch modifizierten Epothilonderivaten hergestellt, unter anderen auch solche, die anstelle der Methylthiazol-methylvinyl-Seitenketten eine aromatische bzw. eine heteroaromatische Gruppierung in 1-Position tragen.
Epothilon-Derivate mit anellierten arom. Hetereocyclen in der 1-Position sind in der Patentliteratur bekannt (Schering AG, WO 00/66589 und Novartis US 6,387,927 ). Da es sich bei diesen Verbindungen um sehr potente Antitumormittel handelt, ist es von hohem Interesse eine ökonische und effiziente Synthese dieser Strukturklasse in Händen zu haben. In der Patentliteratur werden Intermediate (Formel II und III) beschrieben, die teilweise Schlüsselverbindungen für den Aufbau dieser Strukturklasse darstellen
Die vorliegenden Erfindung beschreibt Verfahren zur Herstellung von neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I
worin A für einen bicyclischen heteroaromatischen Rest der Formel
worin
„Heteroaromat" für einen 5- oder 6-gliedrigen heteroaromatischen Ring mit bis zu 2 Heteroatomen ausgewählt aus Sauerstoff, Stickstoff oder Schwefel, der gegebenenfalls mit einem oder zwei Substituenten ausgewählt aus Alkyl, wie z. B.
Methyl oder Ethyl, ggf. geschütztes Hydroxyalkyl, wie z. B. TBDMS-OCH2-, Haloalkyl, wie z. B. F-CH2-, Cl, F, Br oder CN substituiert ist, stehen,
wie z.B.
und R für eine geradlinige oder verzweigte, gegebenenfalls ungesättigte Alkylkette, die gegebenenfalls durch 1-3 Sauerstoffatome unterbrochen ist, für eine Methyl, Ethyl, Propyl, 2-Propyl, n-Butyl, tert. Butyl, -CH2CH=CH2, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2OCH2CH2OCH3 -Gruppe, für einen Phenyl, Cyclohexl oder Benzylrest steht.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I sind wertvolle Synthese-Zwischenstufen für die Herstellung der bei Epothilonderivat-Totalsynthesen verwendeten Zwischenstufen der allgemeinen Formel II und Formel III
wobei Sg für eine Alkohol-Schutzgruppe steht, z.B. TBDMS, THP, MEM, Mom, TROC, -CH₂-C6H4-OCH₃, Benzyl. Bevorzugt ist aber die TBDMS-Gruppe.
Ausgehend von den synthesestrategisch wichtigen Verbindungen II und III werden die Epothilone aufgebaut.
Verbindungen der allgemeinen Formel II werden nach den dem Fachmann bekannten Verfahren zum Schutze sekundärer Alkohole hergestellt (Literatur: T.W. Greene „Protecting groups in organic synthesis", John Wifey and Sons, Inc. Ausgabe 1999).
Verbindungen der allgemeinen Formel III lassen sich entweder direkt aus dem Ester der Formel II durch Reduktion mit DIBAH (Literatur: Tetrahedron Lett. 1977, 3195-3198/Liebigs Ann. Chemie 1992, 145-158/JACS, 107, 1985, 3640-3645/Tetrahedron Lett. 31, 10, 1990, 1443-1446/Tetrahedron Lett. 31, 16, 1990, 2235- 2238/Chem. Communications, 1999, 2049-2050/Bull. Chem. Soc. Jp. 66, 2, 1993, 523) oder aber 2 stufig, indem man zuerst zum Alkohol reduziert und anschließend zum Aldehyd oxidiert (Literatur a) Reduktion: Tetrahedron Lett. 58, 1, 2002, 61/JACS, 123, 34, 2001, 8420/Chem. Europ. J., 7, 24, 2001, 5286,/Tetrahedron Asym. 12, 20, 2001, 2835/Org. Lett. 3, 20, 2001, 3149/JACS, 123, 13, 2001, 2946/Chem. Europ. J. 6, 18, 2000, 3313; b) Oxidation: JACS, 123, 38, 2001, 9313/Org. Lett. 4, 11, 2002, 1879/JACS, 123, 44, 2001, 10942/JOC, 66, 24, 2001, 8037/JOC, 66, 25, 2001, 8370/Tetrahedron Asym. 12, 20, 2001, 2835/Angewandte Chemie, 131, 2001, 3324/Org. Lett. 3, 22, 2001, 3549/Chem. Commun. 15, 2001, 1392), herstellen.
Die derzeit in der Literatur vorhandenen Wege zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel II und III zeichnen sich durch lange Synthesesequenzen und schlechte Gesamtausbeuten aus. In manchen Fällen werden auch technisch aufwendige Verfahren, wie technisch schwer handhabbare Tiefkälte-Reaktionen, Bestrahlung und auch sehr teure Rohstoffe und Reagentien eingesetzt.
Als Beipiele für Literatur-Synthesen für Verbindungen der allgemeinen Formel II seien folgende Synthesen beschrieben:
1. Schering AG (WO 00/66589)

Anzahl der Stufen: 5
Anzahl der Chromatographien: 4

Diese 5 stufige Synthese startet von dem recht teuren Chlorbenztriazol. Gleich im ersten Schritt werden Schwermetalle wie Nickel, Palladium verwendet. Das upscaling dieser Reaktion wird durch die hohe Reaktionstemperatur zusätzlich erschwert. Im zweiten Schritt wird eine Spaltung der Doppelbindung mit Osmiumtetroxid durchgeführt. Aufgrund der hohen Toxizität dieses Reagenzes verbietet sich eine Übertragung in den Pilotmaßstab. Die optische Aktivität wird durch eine Evans-Aldol-Reaktion erreicht, Hier wird das Evans-Auxiliar im Überschuss eingesetzt (diese muß in einer zweistufigen Sequenz hergestellt werden).
Die hier beschriebene Sequenz ist schwer in den technischen Maßstab zu übertragen, da teure und zum Teil sehr giftige Rohstoffe verwendet werden. Zusätlich werden mehrere chromatographische Reinigungen vorgenommen.
2. NOVARTIS ( US 6,387,927 und PCT/EP99/10129)
a)

Anzahl der Stufen: 4
Anzahl der Chromatographien: 4
Gesamtausbeute: kann nicht ermittelt werden, da keine Einzelausbeuten angegeben

Der erste Synthese-Schritt wird mit Hilfe einer Bestrahlung (im allgemeinen ungeeignet für die Durchführung in technischem Maßstab) im unter Umweltschutzgesichtspunkten nicht mehr zu vertretenden Lösungsmittel Tetrachlorkohlenstoff durchgeführt. Anschließend wird das intermediär durchlaufende Bromierungsprodukt mit einem Gemisch aus aq. Essigsäure und Urotropin zum Aldehyd hydrolisiert (110°C/80 min.). Die Reinigung erfolgt durch Flashchromatographie an Kieselgel. In der Folge-Umsetzung wird das recht teure Oppolzer-Sultam (Tetrahedron Lett. 33, 2439, (1992)) zur asymmetrischen Aldolreaktion verwendet (stöchiometrisch !) und in einer relativ komplex ablaufenden Prozessführung (via Borenolat) umgesetzt. Die Aufreinigung erfolgt erneut über Flashchromatographie. Anschließend wird unter Standardbedingungen mit TBDMS-Cl zum Silylether umgesetzt und erneut durch Chromatographie gereinigt. Die Abspaltung des Sultamrestes gelingt mit DIBAH in Dichlormethan bei –78°C. Dieses Vorgehen ist unter upscale Aspekten sicherlich kein ungefährlicher Schritt. Die Reinigung des Produktes erfolgt durch Chromatographie an Kieselgel.
Die oben beschriebene Sequenz ist schwerlich in den technischen Maßstab zu übertragen und zeichnet sich durch mehrere Chromatographie-Stufen aus, die zu zusätzlichen Kosten führen.
Als kritisch ist auch die Verwendung des teuren Sultam-Auxiliars zu sehen (fraglich ist auch inwieweit diese Verbindung in Bulkmengen (> 50 kg) verfügbar ist).
b)

Anzahl der Stufen: 6
Anzahl der Chromatographien: 5
Gesamtausbeute: kann nicht ermittelt werden, da keine Einzelausbeuten angegeben sind

Ausgehend von der Methyl-Benzimidazolsäure wird in relativ langer Sequenz zum Schlüsselintermediat umgesetzt. Auch hier wird das upscaling noch dadurch erschwert, daß 2 weitere Tieftemperatureaktionen hinzukommen (DIBAH-Reduktion und Swern-Oxidation)
Aufgrund der Komplexität dieser Stufen, vor allem unter dem Aspekt des upscalings, bestand der Bedarf nach kürzeren und billigeren Alternativen, die auch die Möglichkeit bieten derartige Zwischenstufen im 100 kg Maßstab herzustellen.
Diese Aufgabe wird mit der vorliegenden Erfindung gelöst, die es erlaubt in sehr kurzer Sequenz (2 Stufen) von einem literaturbekannten Ausgangsmaterial zu Verbindungen der allgemeinen Formel I in hoher Gesamtausbeute und hohen optischen Reinheiten (> 98% e.e.) zu gelangen Die Umsetzung zu den in der literaturbekannten Verbindungen der allgemeinen Formel II und III erfolgt wie oben beschrieben (1 oder 2 weitere Stufen).
Die Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I
erfolgt durch chemische, mikrobiologische oder enzymatische Reduktion des β-Ketoesters der allgemeinen Formel IV:
wobei A und R für die weiter oben unter der allgemeinen Formel I angegebenen Reste stehen.
Die Reduktion läuft nach dem dem Fachmann bekannten Verfahren der β-Ketoester-Reduktion. Als Beispiele dienen die im experimentell Teil beschriebenen Verfahren.
a) chemische Reduktion
Literaturbeispiele für chemische Reduktionen
1. Asymmetrische Hydrierungen und Tranferhydrierungen

M. Beller, C. Bolm „Transition Metals for Organic Synthesis", Volume 2, S. 25 ff., Wiley – VCH, 1998.
R. Noyori, Angew. Chemie 2001, 113, 40-75 (soie in diesem Artikel zitierte Literatur)
R. Noyori, Acc. Res. 1997, 30, 97-102
K. Murata, JOC 1999, 64, 2186-2187

Es ist jeweils der verwendete Katalystor mit angeführt:

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(+)-[(4,4'-PPh2-2,2',5,5'-Me-3,3'-bithiophene)RuCl(C6H6)]Cl HBF4 Journal; Benincori, Tiziana; Cesarotti, Edoardo; Piccolo, Oreste; Sannicolo, Franco; J.Org.Chem.; EN; 65; 7; 2000; 2043-2047.
(–)-2,2'-bis(diphenylphosphino)-4,4',6,6'-tetramethyl-3,3'-bibenzo<b>thiophene-RuCl2 Benincori, Tiziana; Brenna, Elisabetta; Sannicolo, Franco; Trimarco, Licia; Antognazza, Patrizia; Cesarotti, Edoardo; J.Chem.Soc.Chem.Commun.; EN; 6; 1995; 685-686.
(+)-3-[(2-Ph2P-5-MeO)C6H3]-2-(Ph2P)naphtho[2,1-b]thiophene Sannicolo, Franco; Benincori, Tiziana; Rizzo, Simona; Gladiali, Serafino; Pulacchini, Sonia; Zotti, Gianni; Synthesis; EN; 15; 2001; 2327-2336.
(+)-3-[2-(Ph2P)-C6H4]-2-(Ph2P)naphtho[2,1-b]thiophene Ru(II) Ref. 1 6304727; Journal; Benincori, Tiziana; Gladiali, Serafino; Rizzo, Simona; Sannicolo, Franco; J.Org.Chem.; EN; 66; 17; 2001; 5940-5942.
(R,R)-1,3-dicyclohexyl-1,3-propanediol cyclic sulfate [(C6H6)RuCl2]2 Marinetti, Angela; Jus, Sebastien; Genet, Jean-Pierre; Ricard, Louis; J.Organomet.Chem.; EN; 624; 1-2; 2001; 162-166.
RuCl3+(S)-MeO-BIPHEP Madec, J.; Pfister, X.; Phansavath, P.; Ratovelomanana-Vidal, V.; Genet, J. -P.; Tetrahedron; EN; 57; 13; 2001; 2563-2568.
(–)-(6,6'-O(CH2)4O-biphenyl-2,2'-diyl)bis(diphenylphosphine) [Ru(C6H6)Cl2]2 Ref. 1 6263058; Journal; Zhang, Zhaoguo; Qian, Hu; Longmire, James; Zhang, Xumu; J.Org.Chem.; EN; 65; 19; 2000; 6223-6226.
[Ru(cod)(C4H7)2]/HBr ferrocenyl ligand Ireland, Tania; Grossheimann, Gabriele; Wieser-Jeunesse, Catherine; Knochel, Paul; Angew.Chem.Int.Ed.; EN; 38; 21; 1999; 3212-3215; Angew.Chem.; GE; 111; 1999; 3397-3400.
[RuCl2(p-cymene)]2 (1S,2R)-ephedrine i-PrOK Everaere, Kathelyne; Carpentier, Jean-Francois; Mortreux, Andre; Bulliard, Michel; Tetrahedron: Asymmetry; EN; 10; 24; 1999; 4663-4666.
(–)-[4,4'-PPh2-2,2',5,5'-Me-3,3'-bithiophene] RuCl2 Marinetti, Angela; Genet, Jean-Pierre; Jus, Sebastien; Blanc, Delphine; Ratovelomanana-Vidal, Virginie; Chem.Europ.J.; EN; 5; 4; 1999; 1160 – 1165.
<Ru(p-cymene)Cl2>2, (1S,2R)-(+)-ephedrine, i-PrOK Everaere, Kathelyne; Carpentier, Jean-Francois; Mortreux, Andre; Bulliard, Michel; Tetrahedron: Asymmetry; EN; 9; 17; 1998; 2971-2974.
1,2-bis(t-butylmethylphsophino)ethane, hydrogen RuBr2 Yamano, Toru; Taya, Naohiro; Kawada, Mitsuru; Huang, Taisheng; Imamoto, Tsuneo; Tetrahedron Lett.; EN; 40; 13; 1999; 2577-2580.
<(–)-2,2'-bis(diphenylphosphino)-4,4',6,6'-tetramethyl-3,3'-bibenzo<b>thiophene>RuCl2 Benincori, Tiziana; Brenna, Elisabetta; Sannicolo, Franco; Trimarco, Licia; Antognazza, Patrizia; et al.; J.Org.Chem.; EN; 61; 18; 1996; 6244-6251.
RuBr2<(R)-binap> Noyori, R.; Ohkuma, T.; Kitamura, M.; Takaya, H.; Sayo, N.; et al.; J.Amer.Chem.Soc.; EN; 109; 19; 1987; 5856-5858.
Ru(R-Tol-P-Phos)(C6H6)Cl2 Wu, Jing; Chen, Hua; Zhou, Zhong-Yuan; Yeung, Chi Hung; Chan, Albert S. C.; Syn.Lett.; EN; 2001; S1050-S1054.
RuCl2[(–)-N,N'-Me2-3,3'-bis(Ph2P)-2,2'-biindole] Journal; Benincori, Tiziana; Piccolo, Oreste; Rizzo, Simona; Sannicolo, Franco; J.Org.Chem.; EN; 65; 24; 2000; 8340-8347.
(R)-Me-Duphos-RuBr2 Genet, J. P.; Ratovelomanana-Vidal, V.; Cano de Andrade, M. C.; Pfister, X.; Guerreiro, P.; Lenoir, J. Y.; Tetrahedron Lett.; EN; 36; 27; 1995; 4801-4804.
(NH2Me2][{RuCl[(R)-segphos]}2($m-Cl)3] Saito, Takao; Yokozawa, Tohru; Ishizaki, Takero; Moroi, Takashi; Sayo, Noboru; Miura, Takashi; Kumobayashi, Hidenori; Adv.Synth.Catal.; EN; 343; 3; 2001; 264-268.

Die asymmetrische Hydrierung wird in Lösungsmitteln wie Methanol, Ethanol Trifluorethanol, THF, 2-Methyl-THF, Dichlormethan sowie Mischungen dieser Lösungmittei durchgeführt. Die Reaktionstemperatur beträgt 0 bis 100°C, die Reaktionszeiten 3-72 Stunden. Der Katalysator wird in 0,01 bis 5 mol% (bzg. auf Substrat) zugesetzt. In manchen Fällen hat es sich als nützlich erwiesen bei mit Wasser mischbaren Lösungsmitteln 0,1-30% Wasser zuzusetzen. Es ist manchmal von Vorteil 0,01-5 mol eq. (bzg. aus Substrat) einer anorganischen oder organischen Säure zuzusetzen, wie z.B. HCl, H3PO4, H2SO4, Essigsäure, Methansulfonsäure, p-TsOH, Phenylsulfonsäure, Camphersuifonsäure. Die Hydrierung erfolgt bei Temperaturen von 0°C bis 100°C und Wasserstoff-Drücken von 1-270 Bar.
2. Asymmetrische Reduktion mit komplexen Hydriden

Reagenz: LiBH4, (R,R')-N,N'-dibenzoylcystine, t-BuOH
Journal; Soai, Kenso; Yamanoi, Takashi; Hikima, Hitoshi; Oyamada, Hidekazu;
J.Chem.Soc.Chem.Commun.; EN; 3; 1985; 138-139.
Reagenz: Weinsäure, NaBH₄
J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1990, 1826

b) Mikrobiologische Reduktion
Für die mikrobiologische Reduktion werden im allgemeinen Mikroorganismen der Spezies
Bäckerhefe, Brettanomyces bruxellensis, Candida albicans, Candida boidinii, Candida gropengiesseri, Candida guilliermondii, Candida kefyr, Candida pini, Candida rugosa, Candida solani, Candida tropicalis, Candida utilis, Candida valida, Clostridium beijerinckii, Clostridium pasteurianum, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus macerans, Debaryomyces hansenii, Debaryomyces kloeckeri, Debaryomyces nicotianae, Debaryomyces vini, Endomycopsis fibuliger, Hanseniaspora guilliermondii, Hanseniaspora osmophila, Hanseniaspora uvarum, Hansenula capsulata, Hansenula holstii, Hansenula polymorpha, Hansenula saturnus, Hansenula silvicola, Issatchenkia orientalis, Kloeckera apiculata, Kloeckera corticis, Kloeckera javanica, Kloeckera sp., Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus Kluveromyces sphaerica, Lactobacillus kefir, Nadsonia fulvescens, Octosporomyces octosporus, Pichia anomala, Pichia cactophila, Pichia farinosa, Pichia fermentans, Pichia holstii, Pichia jadinii, Pichia membranaefaciens, Pichia pijperi, Pichia silvicola, Pichia subpelliculosa, Pichia wickerhamii, Rhodotorula flava, Rhodotorula glutinis, Rhodotorula minuta var. minuta, Saccharomyces acidificans, Saccharomyces bailii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces carlsb. strain Herrliberg, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces chevalieri, Saccharomyces exiguus, Saccharomycopsis fibuligera, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces pasforianus, Saccharomyces pastorianus formerly Saccharomycopsis capsularis, Saccharomyces sp., Schizosaccharomyces pombe, Schizosaccharomyces octosporus, Sporobolomyces coralliformis, Sporobolomyces salmonicolor, Torulopsis pinus, Trigonopsis varabilis, Tremella fuciformis, Waltomyces lipofer, Zygosaccharomyces fermentati oder Zygosaccharomyces rouxii verwendet.
Literatur:

Bardot, Valerie; Besse, Pascale; Gelas-Miahle, Yvonne; Remuson, Roland; Veschambre, Henri; Tetrahedron: Asymmetry; EN; 7; 4; 1996; 1077-1088.
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Chenevert, Robert; Fortier, Genevieve; Rhlid, Rachid Bel; Tetrahedron; EN; 48; 33; 1992; 6769-6776.
Mochiziki, Naoki; Sugai, Takeshi; Ohta, Hiromichi; Biosci.Biotechnol.Biochem.; EN; 58; 9; 1994; 1666-1670.
Kumar, Ashok; Ner, Dilip H.; Dike, Suneel Y.; Tetrahedron Lett.; EN; 32; 16; 1991; 1901-1904.
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Manzocchi, Ada; Casati, Rosangela; Fiecchi, Alberto; Santaniello, Enzo; J.Chem.Soc.Perkin Trans.1; EN; 1987; 2753-2758.

c) Enzymatische Reduktion
Literatur:

Deol,B.S. et al.; Aust.J.Chem.; EN; 29; 1976; 2459-2467.
Ema, Tadashi; Moriya, Hiroyuki; Kofukuda, Toru; Ishida, Tomomasa; Maehara, Kentaro; Utaka, Masanori; Sakai, Takashi; J.Org.Chem.; EN; 66; 25; 2001; 8682-8684.

Bevorzugt werden aber die mikrobiologische Reduktion mit Hefen bzw. modifizierten Hefen und die an von Noyori angelehnten Verfahren zur asymmetrischen Hydrierung und Transferhydrierung verwendet.
Die oben beschriebenen Methoden erlauben es auch den Antipoden zu I, nämlich Ia, bei Bedarf herzustellen:
Die β-Ketoester der allgemeinen Formel IV
worin A und R für die weiter oben unter der allgemeinen Formel I angegebenen Reste stehen, lassen sich durch Umsetzung von aktivierten Säure-Derivaten der allgemeinen Formel V mit Malonsäureester-Derivaten der allgemeinen Formel VI in an sich bekannter Weise herstellen
Hierbei steht X für ein Chlor, Brom, 4-Nitrophenol oder den Imidazoylrest, R hat die oben unter der allgemeinen Formel I angegebenen Bedeutungen, und Y steht für Wasserstoff, Li, Na, K oder Mg/2 oder eine Silylschutzgruppe, wie z. B. Trimethylsilyl.
Beispiele für β-Ketoestersynthesen sind in der Literatur beschrieben:
Synthesis 1993(3), 290/292/Med. Chem. 1985, 28(12), 1864/Tetrahedron Lett. 1984, 25, 5681/J. Heterocycl. Chem. 1996, 33(4), 1407/Org. Prep. Proceed. 1997, 29(2), 231/Arch. Pharm. (Weinheim, Ger.) 1997, 330(3), 63-66/Tetrahedron Lett. 1994, 35(50), 9323/Tetrahedron Lett. 1994, 35(50), 9323/Synthesis, 1993, 290/J. Chem. Educ. 1983, Vol. 60, No. 3, 244/Tetrahedron Lett. 30, 1992, 5983/ Synthesis, 1998, S. 633/Chem. Commun. 1999, 1113/Tetrahedron, 1985, Vol. 41, 5229/Angewandte Chemie 1979, S. 76/Tetrahedron Lett. 35, 50, 1994, 9323-9326.
Die Ausgangsprodukte der allgemeinen Formeln V und VI sind literaturbekannt und teilweise kommerziell erhältlich bzw. können nach den dem Fachmann gut bekannten Methoden hergestellt werden.
Beispielhaft genannt seien: J. Chem. Soc. 1947, 437, 441/JACS 1939, 61, 183/ Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999, 2583/Chem. Commun. 2, 2002, 180/Chem. Ber. 23, 1890, 2272/ US 2647050 (1949 Du Pont)/Zh. Obshch. Khim., 26, 1956, 3388, 3390/J. Chem. Soc. 1949, 355, 361/Synthetic Commun. 26, 19, 1996, 3535-3542/J. Chem. Soc. 1966, 1980-1983/JACS 75, 1953, 6237/JACS, 75, 1953, 2770/J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1974, 903, 908/Zh. Obshch. Khim., 32, 1962, 1581/Chem. Pharm. Bull., 14, 1966, 375, 381.
Die meisten der in der Literatur beschriebenen β-Ketoester-Herstellungsverfahren haben den Nachteil, daß größere Mengen an Nebenprodukten, wie beispielsweise die Verbindungen A und B,
enstehen, die die quantitative Auskristallisation des gewünschten Produktes stören.
Selbst in der von X. Wang, Tetrahedron Letters, Vol. 35, 50, 1994, 9323, angegebenen Vorschrift zur Herstellung von β-Ketoestern, bei der im Deprotonierungsschritt DBU (Diazobicycloundecan) verwendet wird, werden beim up-scaling größere Mengen der Nebenprodukte A und B beobachtet.
Das neue, erfindungsgemäße Verfahren setzt zur Deprotonierung tert.-Butylate bzw. Amylate ein, die die Bildung der Nebenprodukte A und B vermeiden.
Als besonders vorteilhaft hat sich die nachfolgend beschriebene Eintopf-Sequenz, ausgehend von den Säuren der allgemeinen Formel VII erwiesen,
wobei A wiederum die oben in der allgemeinen Formel I angegebene Bedeutung hat:
Hierbei wird ausgehend von der Säure der allgemeinen Formel VII das Imidazolid nach den dem Fachmann geläufigen Methoden hergestellt.
Bevorzugt wird N,N-Carbodiimidazol (Staab-Reagenz) in einem nicht protischen Lösungsmittel, wie THF, 2-Methyl-THF, Dioxan, Dichlormethan, Tolouol, Dimethylformamid, gegebenenfalls unter Zusatz von Dimethylaminopyridin (0,001-3 eq.) bei Temperaturen zwischen 0-70°C für 1-10 Stunden mit der Säure VII umgesetzt.
Nach beendeter Reaktion kann das Imidazolid isoliert werden. Bevorzugt wird aber die so erhaltene Lösung zu einer zweiten Lösung (Herstellung: Malonsäure-Halbester-Kaliumsalz VIII in einem aprotischen Lösungsmittel, wie THF, 2-Methyl-THF, Dioxan, Dichlormethan, Tolouol, Dimethylformamid mit Trimethylsilylchlorid zum Silylether umsetzen, 1-10 Stunden Reaktionszeit bei Temperaturen von –10-30°C) gegeben. Anschließend erfolgt die Deprotonierung mit 1-4 eq. einer Base wie Kalium-tert.-butylat, Natrium-tert. butylat, Lithium-tert.butylat, Kalium-O-CH2C(CH3)3 (bei Umsetzungen im technischen Maßstab werden die anorganischen Basen bevorzugt gelöst in einem Lösungsmittel, wie z.B. THF, bei Temperaturen von –10-+30°C, Nachrührzeit 10 Minuten bis 5 Stunden, zugegeben. Die Zugabezeit beträgt 30 min bis 10 h, dabei kann eine kalte (0°C) oder aber bis 70°C warme Lösung zudosiert werden. Nach beendeter Zugabe wird 1-24 h nachgerührt, vorzugsweise bei Temperaturen zwischen 0-50°C.
In einigen Fällen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, 1-5 mol Äquivalente Lithiumchlorid oder Lithiumbromid vor Zugabe der Base zuzugeben, um die Rührbarkeit des Ansatzes zu verbessern. Diese Rührbarkeit ist gerade in Hinblick auf ein up scaling in den pilot plant (d. h. technischen) Maßstab von Wichtigkeit (Gefahr des Brechens des Rührers!).
Zur Aufarbeitung wird mit Wasser versetzt, mit einer Mineralsäure, wie HCl, Schwefelsäue oder Phosphorsäure der pH-Wert eingestellt (pH 1,5-8) und das Produkt durch Extraktion (z.B. Essigsäurethylester, MTB etc.) isoliert. Nach Trocknung der organischen Phase über ein Trockenmittel (MgSO₄ oder Na₂SO₄) oder durch azeotrope Destillation (pilot plant) wird auf das zur Kristallisation verwendete finale Lösungsmittel umdestilliert.
Da die Ketoester der allgemeinen Formel IV als kristalline Feststoffe anfallen, lassen sie sich bequem durch Kristallisation aufreinigen.
Die Isolierung erfolgt durch Filtration, Nachwaschen mit dem zuletzt benutzten Lösungsmittel und anschließende Trocknung (Vakuum oder Umluft).
Die nach oben beschriebener Weise hergestellten β-Ketoester der allgemeinen Formel IV werden in hoher Ausbeute (ca. 91-93% ausgehend von der Säure !) und Reinheit erhalten.
Anstelle des Kaliumsalzes des Malonhalbesters kann auch das Natrium bzw. Lithiumsalz verwendet werden.
Zum Vergleich mit den oben zitierten Beispielen aus der Patent-Literautur sei diesen das neue, erfindungsgemäße Verfahren gegenübergestellt Ausgehend von den literaturbekannten Säuren lassen sich die jeweils benötigten Schlüsselintermediate auf sehr kurzem Weg sehr sauber und in hohen Ausbeuten herstellen (ohne Chromatographie). Die erfindungsgemäße Sequenz sei prinzipiell an 2 Beispielen erläutert: 1. Beispiel: chiraler Methylbenzimidazol-Aldehyd
2. Beispiel: chiraler Methylbenzthiazol-Ethylester
Die nachfolgenden Beispiele dienen der näheren Erläuterung des Erfindungsgegenstandes, ohne diesen darauf einschränken zu wollen:
Beispiele
β-Ketoestersynthese (allgemeine Herstellungsvorschrift der Verbindungen der allgemeinen Formel IV
Herstellung der Lösung A:
260 mmol der Säure (A-COOH; Verbindung der allgemeinen Formel VII) werden in 300 ml THF bei Raumtemperatur suspendiert und 950 mg Dimethylaminopyridin zugegben. Bei 40°C tropft man eine Lösung, bestehend aus 285 mmol 1,1-Carbodimimidazol in 500 ml THF hinzu und rührt 7 Stunden bei 50°C.
Herstellung der Lösung B:
777 mmol Malonhalbester-Kalium-Salz (ROOC-CH2-COOK; Verbindung der allgemeinen Formel VIII) werden in 250 ml THF bei 20°C suspendiert. Anschließend werden 777 mmol Chlortrimethylsilan zugetropft und 7 Stunden nachgerührt. Man kühlt auf 0°C, gibt gegebenenfalls 1000 mmol Lithiumchlorid zu und tropft eine Lösung aus 1,365 mol Kalium-tert.butylat gelöst in 300 ml THF hinzu (unter Gegenkühlung). Anschließend rührt man 30 Minuten bei 0°C nach.
Die 50°C warme Lösung A wird unter kräftigen Rühren innerhalb von 30 min. zur Lösung B hinzugetropft (die Temperatur wird durch Gegenkühlung auf 0°C gehalten). Nach beendeter Zugabe rührt man 30 Minuten bei 0°C anschließend 15 Stunden bei 20°C.
Aufarbeitung:
Man setzt 1000 ml Essigsäureethylester zu und stellt unter Zugabe von 920 ml 2N Salzsäure auf pH 2 (dabei klärt die Lösung auf, es enstehen 2 Phasen). Die organische Phase wird abgetrennt und 2 mal mit 750 ml gesättigter aq. Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen. Anschließend wird die organische Phase mit 500 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Nach Trocknung über ein Trockenmittel (Natriumsulfat oder Magnesiumsulfat) wird 7 g Aktivkohle zugesetzt und 30 Minuten bei 20°C gerührt. Nach Abfiltration der Aktivkohle wird das Filtrat im Vakuum eingeengt und dann auf das finale Lösungsmittel zur Kristallisation umdestilliert.
Man kristallisiert aus dem jeweils günstigten Lösungsmittel um (siehe Tabelle). Aus den Mutterlaugen könnten meistens noch weitere Kristllfraktionen erhalten werden.
Das Produkt wird im Vakuumtrockenschrank oder unter Umlauft getrocknet (20-50°C).
Die nachfolgenden Beispiele wurde nach dem oben beschrieben Verfahren durchgeführt (Produkt = Verbindung der allgemeinen Formel IV): Beispiel 1
Beispiel 2
Beispiel 3
Beispiel 4
Beispiel 5
Beispiel 6
Beispiel 7

Beispiel 8
Beispiel 9
Beispiel 10
Beispiel 11
Beispiel 12
Beispiel 13
Beispiel 14
Beispiel 15
Die vorstehenden Verbindungen der allgemeinen Formel IV der Beispiele 1 bis 15 gehören alle zum Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Im Folgenden werden die zur asymmetrischen Reduktion verwendeten Verfahren jeweils in einer allgemeinen Vorschrift beschrieben
Chirale Reduktions-Methoden
A) Allgemeine Vorschrift für eine mikrobiologische Reduktion
Ein 500 ml Erlenmeyerkolben, der 100 ml einer 20 min bei 121°C im Autoklaven sterilisierten Nährlösung aus 5% Glucose und 2% Corn steep liquor (pH 6.0-6.5) enthält, wird mit einer Schrägröhrchen Kultur des Stammes Pichia wickerhamii (IFO 1278) beimpft und 48 h bei 28°C auf einem Rotationsschüttler geschüttelt. Mit je 50 ml dieser Anzucht werden zwei 2 l Erlenmeyerkolben beimpft, die mit 500 ml sterilem Medium der gleichen Zusammensetzung, wie für die Vorkultur beschrieben, beschickt sind.
Nach einer Anwachsphase von 6 h bei 28°C wird zu jedem Erlenmeyerkolben eine Lösung von 5 mmol β-Ketoester der allgemeinen Formel IV in 15 ml DMF hinzugegeben. Anschließend wird bei 28°C weitergeschüttelt.
Nach 114 h Kontaktzeit werden die vereinigten Kulturbrühen zweimal mit 1 l Essigester extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet, über Celitte (oder eine Kieselgelschicht) filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird aus einem Lösungmittel der Wahl umkristallisiert.
B) Asymmetrische Hydrierung mit chiralen Metall-Katalysatoren.
Die asymmetrische Hydrierung wurde nach Literatur-Methoden durchgeführt. Falls eine Säure zur Hydrierung mit verwendet wurde, ist dieses in den Beispielen mit angegeben.
Aufarbeitung der Hydrieransätze: Man dampft im Vakuum ein, nimmt mit einem unpolaren Lösungsmittel auf (z. B. Dichlormethan, MTBE) und filtriert über kurze Kieselgelschicht ab. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockene eingedampft und der Rückstand aus einem geeigneten Lösungsmittel umkristallisiert.
C) Beispiel für eine Transferhydrierung
Unter Stickstoffatmosphäre werden 1 mmol Dichloro(pentamethylcyclopentadienyl)rhodium (III) dimer zu einer Lösung, bestehend aus 4 mmol (R,R)-Tos-DPEN in 1 l Isopropanol gegeben und 20 Minuten bei 80°C bis zur orangeroten, homogenen Lösung gerührt. Anschließend gibt man 100 ml Kalium-isopropylat (0,12 m Lösung = 120 mmol) zu. Dann gibt man mol 200 β-Ketoester der allgemeinen Formel IV (gelöst in 500 ml Isopropanol) zu und rührt bei 50°C (1-20 Stunden) und verfolgt den Reaktionsfortschritt mittels DC.
Nach Beendigung der Reaktion wird im Vakuum zur Trockene eingedampft und der Rückstand über eine Schicht Kieselgel filtriert (Lösungsmittel: Hexan/ Essigsäureethylester-Mischungen). Man dampft im Vakuum zur Trockene ein und kristallisiert aus einem geeigneten Lösungsmittel um.
D) Asymmetrische Reduktion mit komplexen Hydriden (NaBH₄/LiBH₄)
Reduktionen mit der chiralen Hilfskomponente (R,R')-N,N' Dibenzoylcystein werden nach der Vorschrift aus J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1985, 138, durchgeführt.
Reduktionen mit der chiralen Hilfskomponente (2R,3R) – Weinsäure werden nach der Vorschrift aus J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1990, 1826, durchgeführt.
Beispiel 16

Reduktionsmethode: C
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 98%
Literatur: R. Noyori, Acc. Res. 1997, 30, 97-102 K. Murata, JOC 1999, 64, 2186-2187

Beispiel 17

Reduktionsmethode: B
Lösungsmittel: Methanol
Druck: 1200 psi
Temperatur: 25°C
Reaktionszeit: 14 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 98%
Literatur: JACS, Vol. 121, No30, 1999, S. 7061 (Verbindung 43)

Beispiel 18

Reduktionsmethode: B
Lösungsmittel: Ethanol
Druck: 1300 psi
Temperatur: 40°C
Reaktionszeit: 18 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 99%
Literatur: wie im Beispiel 17 angegeben

Beispiel 19

Reduktionsmethode: A
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 98%
Stamm: Pichia wickerhamii (IFO 1278)

Beispiel 20

Beispiel 21

Reduktionsmethode: B/Ru – (R) - MeO-Bipheg (Kat)
Lösungsmittel: EtOH
Druck: Atmosphären-Druck H₂
Temperatur: 50°C
Reaktionszeit: 50 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 98%
Literatur: Tetrahedron Letters, Vol. 36, No. 27, 4801-4804

Beispiel 22

Reduktionsmethode: B/Ru – (R) - MeO-BIHEP (Kat)
Lösungsmittel: MeOH
Druck: 10 bar
Temperatur: 80°C
Reaktionszeit: 40 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 98%
Literatur: Tetrahedron, 57 (2001), 2563-2568

Beispiel 23

Reduktionsmethode: B
Lösungsmittel: EtOH
Druck: 50 bar
Temperatur: 60°C
Reaktionszeit: 18 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 99%
Literatur: Angewandte Chemie 1999, 111, S. 3397

Beispiel 24

Reduktionsmethode: B
Lösungsmittel: Methanol
Druck: 120 psi
Temperatur: 60°C
Reaktionszeit: 18 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation:
Literatur: siehe Beispiel 17

Beispiel 25

Reduktionsmethode: B
Lösungsmittel: Ethanol
Druck: 1300 psi
Temperatur: 60°C
Reaktionszeit: 24 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 99%
Literatur: siehe Beispiel 17

Beispiel 26

Beispiel 27

Reduktionsmethode: A
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 99%
Stamm: Pichia wickerhamii (IFO 1278)

Beispiel 28

Beispiel 29

Beispiel 30

Reduktionsmethode: B
Lösungsmittel: Me OH
Druck: 50 bar
Temperatur: 50°C
Reaktionszeit: 24 Stunden
e.e. des Produktes nach Kristallisation: > 99%
Literatur: siehe Beispiel 23

Die vorstehenden Verbindungen der allgemeinen Formel I der Beispiele 16 bis 30 gehören alle zum Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
In den nachfolgenden Beispielen ist die Verwendung der neuen erfindungsgemäßen Zwischenprodukte zur Herstellung der in der Literatur bekannten Epothilon-Zwischenstufen demonstriert
Allgemeine Vorschrift zur Herstellung der TBDMS-Ether (Zwischenverbindungen aus WO 00/66589, Schering AG)
100 mmol des Hydroxyesters der allgemeinen Formel (I) und 150 mmol Imidazol werden in 150 ml Dimethylformamid gelöst und bei 0°C 125 mmmol Tert.butyldimethylsilylchlorid (TBDMS-Cl) zugegeben. Man rührt 12 Stunden bei Raumtemperatur. Zur Vernichtung des Überschusses an TBDMS-Cl wird 70 mmol Methanol zugegeben und weitere 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Man setzt 5 ml Wasser, sowie 50 ml n-Hexan zu und rührt 10 Minuten kräftig durch. Die Hexanphase wird abgetrennt und verworfen. Zur DMF-Phase gibt man 1000 ml Wasser und extrahiert 2 mal mit je 150 ml Essigester. Die vereingten organischenPhasen werden abgetrennt und im Vakuum zur Trockene eingeengt.
Im Falle einer Folge-Umsetzung mit DIBAH oder DIBAH/BuLi hat es sich als vorteilhaft erwiesen mit Dichlormethan oder Toluol zu extrahieren und mit der Lösung direkt die weitere Umsetzung durchzuführen.
Beispiel 31
Beispiel 32
Beispiel 33
Beispiel 34
Beispiel 35
Beispiel 36
Beispiel 37
Beispiel 38
Beispiel 39
Beispiel 40
Beispiel 41
Beispiel 42
Beispiel 43
Beispiel 44
Beispiel 45
Allgemeine Herstellvorschrift zur Reduktion der Silylester (Zwischenstufen aus US 6,387,927 und PCT/EP99/10129, NOVARTIS)
20 ml einer 1 M Lösung von DIBAH in Dichlormethan werden bei –78°C (unter Stickstoff) über 30 Minuten zu einer Lösung aus in Beispiel 31-46 hergestellten (mit Ausnahme der tert. Butylester) Silylester, 10 mmol gelöst in 100 ml Dichlormethan hinzugetropft. Man rührt 3 Stunden bei –78°C. Man setzt weitere 5 ml DIBAH Lösung hinzu und rührt weitere 2 Stunden. Man tropft 6 ml Methanol zu und lässt auf Raumtemperatur kommen. Man gibt 50 ml Dichlormethan und 50 ml Wasser zu und filtriert die Suspension über Celite. Die organische Phase wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen und im Vakuum zur Trockene eingeengt.
Beispiel 46
Beispiel 47
Beispiel 48
Beispiel 49
Beispiel 50
Beispiel 51
Beispiel 52
Beispiel 53
Beispiel 54
Beispiel 55
Beispiel 56
Beispiel 57
Beispiel 58

Claims

Verbindungen der allgemeinen Formel I
dadurch gekennzeichnet, daß A für einen bicyclischen heteroaromatischen Rest der Formel
worin „Heteroaromat" für einen 5- oder 6-gliedrigen heteroaromatischen Ring mit bis zu 2 Heteroatomen ausgewählt aus Sauerstoff, Stickstoff oder Schwefel, der gegebenenfalls mit einem oder zwei Substituenten ausgewählt aus Alkyl, ggf. geschütztes Hydroxyalkyl, Haloalkyl, Cl, F, Br oder CN substituiert ist, und R für eine geradlinige oder verzweigte, gegebenenfalls ungesättigte Alkylkette, die gegebenenfalls durch 1-3 Sauerstoffatome unterbrochen ist, Phenyl, Cyclohexl oder Benzylreststehen.
Verbindungen der allgemeinen Formel Ia
worin A und R die bereits in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben.
Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, worin R für die Methyl und Ethylgruppe steht
Verbindungen nach Anspruch 1, 2 oder 3, worin A für einen der Reste
steht.
Verbindungen nach Anspruch 4, worin A für den Rest
und R für eine Methyl oder Ethylgruppe steht
Verbindungen nach Anspruch 4, worin A für den Rest
und R für eine Methyl oder Ethylgruppe steht.
Verbindungen nach Anspruch 4, worin A für den Rest
und R für eine Methyl oder Ethylgruppe steht.
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 aus β-Ketoestern der allgemeinen Formel IV
durch chemische oder mikrobiologische oder enzymatische Reduktion.
Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichent, daß die chemische Reduktion durch eine asymmetrische Hydrierung mit einem chiralen Metallkatalysator durchgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet daß zur asymmetrischen mikrobiologischen Reduktion, Mikroorganismen der Spezies Bäckerhefe, Brettanomyces bruxellensis, Candida albicans, Candida boidinii, Candida gropengiesseri, Candida guilliermondii, Candida kefyr, Candida pini, Candida rugosa, Candida solani, Candida tropicalis, Candida utilis, Candida valida, Clostridium beijerinckii, Clostridium pasteurianum, Cryptococcus laurentii, Crypfococcus macerans, Debaryomyces hansenii, Debaryomyces kloeckeri, Debaryomyces nicotianae, Debaryomyces vini, Endomycopsis fibuliger, Hanseniaspora guilliermondii, Hanseniaspora osmophila, Hanseniaspora uvarum, Hansenula capsulata, Hansenula holstii, Hansenula polymorpha, Hansenula saturnus, Hansenula silvicola, Issatchenkia orientalis, Kloeckera apiculata, Kloeckera corticis, Kloeckera javanica, Kloeckera sp., Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus Kluveromyces sphaerica, Lactobacillus kefir, Nadsonia fulvescens, Ocfosporomyces octosporus, Pichia anomala, Pichia cactophila, Pichia farinosa, Pichia fermenfans, Pichia holstii, Pichia jadinii, Pichia membranaefaciens, Pichia pijperi, Pichia silvicola, Pichia subpelliculosa, Pichia wickerhamii, Rhodotorula flava, Rhodotorula glutinis, Rhodotorula minuta var. minuta, Saccharomyces acidificans, Saccharomyces bailii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces carlsb. strain Herrliberg, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces chevalieri, Saccharomyces exiguus, Saccharomycopsis fibuligera, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces pastorianus formerly Saccharomycopsis capsularis, Saccharomyces sp., Schizosaccharomyces pombe, Schizosaccharomyces octosporus, Sporobolomyces coralliformis, Sporobolomyces salmonicolor, Torulopsis pinus, Trigonopsis varabilis, Tremella fuciformis, Waltomyces lipofer, Zygosaccharomyces fermentati oder Zygosaccharomyces rouxii verwendet werden
Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß zur asymmetrischen mikrobiologischen Reduktion Pichia wickerhamii (IFO 1278) verwendet werden.
Verbindungen der allgemeinen Formel IV
in der A und R die in der allgemeinen Formel I, gemäß einem der Ansprüche 1 und 3 bis 7, angegebene Bedeutung haben, als Zwischenprodukte.
Verfahren zur Herstellung von β-Ketoestern der allgemeinen Formel IV gemäß Anspruch 12 aus Verbindungen der allgemeinen Formeln VII und VIII
dadurch gekennzeichnet, daß in einem ersten Schritt die Säure der allgemeinen Formel VII mit N,N-Carbodiimidazol aktiviert und dann mit dem durch Deprotonierung mit einer starken Base aus dem Kaliumsalz der allgemeinen Formel VIII mit Trimethylsilylchlorid hergestellten Silylester in situ umgesetzt und wässrig aufgearbeitet wird.
Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß R für Methyl oder Ethyl steht.
Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß als starke Base Kalium-tert.-butylat verwendet wird.
Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß Lithiumchlorid oder Lithiumbromid zur verbesserten Rührbarkeit zugesetzt wird.
Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel I und Formel IV gemäß Ansprüche 1 bis 7 und 12 zur Totalsynthese von synthetischen Epothilonderivaten.
Verwendung von Verfahren gemäß Ansprüche 8 bis 11 und 13 bis 16 zur Totalsynthese von synthetischen Epothilonderivaten.