CZ81998A3 - Zlepšené způsoby výroby nekovalentně komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin - Google Patents
Zlepšené způsoby výroby nekovalentně komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin Download PDFInfo
- Publication number
- CZ81998A3 CZ81998A3 CZ98819A CZ81998A CZ81998A3 CZ 81998 A3 CZ81998 A3 CZ 81998A3 CZ 98819 A CZ98819 A CZ 98819A CZ 81998 A CZ81998 A CZ 81998A CZ 81998 A3 CZ81998 A3 CZ 81998A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- proteosome
- lps
- vaccine
- amphiphilic
- shigella
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 title description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 125
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 125
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 121
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 claims abstract description 26
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 claims abstract description 25
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 16
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 claims abstract description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 30
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 20
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 19
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- 241000147000 Shigella flexneri 2a Species 0.000 claims description 16
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical group CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 15
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 15
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 claims description 13
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 13
- 241000607768 Shigella Species 0.000 claims description 12
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 claims description 12
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 claims description 7
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 5
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 101710099705 Anti-lipopolysaccharide factor Proteins 0.000 claims description 2
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 claims description 2
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 claims description 2
- 241000607766 Shigella boydii Species 0.000 claims description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims 2
- 241000607000 Plesiomonas Species 0.000 claims 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 claims 2
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 claims 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 2
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 27
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 206010040550 Shigella infections Diseases 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 208000004429 Bacillary Dysentery Diseases 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 7
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 2
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000002011 intestinal secretion Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- -1 liposaccharides Polymers 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 241001212279 Neisseriales Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 201000004283 Shwachman-Diamond syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/008—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1275—Lipoproteins; Chylomicrons; Artificial HDL, LDL, VLDL, protein-free species thereof; Precursors thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/25—Shigella (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Zlepšené způsoby výroby nekovalentně komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin
Oblast techniky
Vynález se týká způsobů výroby a složení nekovalentně komplexovaných multivalentnich proteosomových vakcin pro mukosální a parenterální podávání.
Dosavadní stav techniky
Aby se u multivalentních podjednotkových vakcin stimulovaly optimální imunitní odezvy na každou ze složek, měly by být vhodně složeny a každá z nich by měla být přístupná pro imunitní systém tak, aby byla účinně rozeznána a zpracována buňkami imunitního systému. Prvotní příklady takových nekovalentně komplexovaných vakcin zahrnuj i proteosomní vakciny, které se skládají z neisseriálních bílkovinných proteosomů vnější membrány nekovalentně komplexovaných s nejrůznějšími antigeny, mezi něž patří peptidy, lipopeptidy, transmembránové nebo toxoidisované proteiny, polysacharidy nebo lipopolysacharidy (LPS) (patentová přihláška č. 07/065,440 z 23. června 1987 Immunogenic peptide vaccines and methods of preparation; č. 07/336,952 z 12. dubna 1989 Immunopotentiating systém for large proteins and polypeptides; č. 07/958,426 z 8. října 1992 Oral or Intranasal Vaccines Using Hydrophobic Complexes Having Proteosomes and Lipopolysaccharides; č. 08/029,666 z
11. března 1993 Immunopotentiating Systems for Preparation of Immunogenic Materials; č. 08/143,365 z 29. října 1993 Immunopotentiating Systems for preparation of Immunogenic Materials; č. 93/10,402 z 29. října 1993 Submicron Emulsions as Vaccine Adjuvants; č. 08/063,613 z 18. května
4« 4 ♦· 444· 4444
4*4 «4« 9 9 99
999 9 9 999 9999 • 999*999 9 99 9999· «44 4* · · ·· ·· 9 99 999 9999
1994 Solid Fat Nanoemulsions as Vehicles for Vaccine Delivery a publikace Orr N., Robin G., Cohen D., Arnon R. and Lowell G.H. (1993): Imunogenicity and Efficacy of Oral or Intranasal Shigella flexneri 2a and Shigella sonnei Proteosome-Lipopolysaccharide Vaccines in Animal Models.
Infect. Immun. 61:2390; Mallett C.P., Hale T.L., Kaminski R. ,
Larsen T., Orr N., Cohen D. a Lowell G.H. (1995): Intranasal or intragastric immunization with lipopolysaccharide vaccines protéct against in a murine model of shigellosis.
63:2382-2386; Lowell G.H., Kaminski R.V., (1996):
proteosome-staphylococcal enterotoxin vaccines:immunogenicity and efficacy intoxication in mice. Infect. Immun.
Intranasal and proteosome-Shigella lethal pneumonia Infect. Immun.
Grate S et al.
intramuscular
G.H. (1990): Proteosomes, Hydrophobic Liposomes for Improved Presentation of Vaccines. in New Generation Vaccines:
(SEB) toxoid against Lethal SEB 64:1706-1713. Lowell
Anchors, Iscoms and
Peptide and Protein
G.C. Voodrow a M.M.
Levine, eds. (Marcel Dekker, NY), kapitola 12 (str 141-160) a Lowell G.H., Ballou V.R., Smith L.F., Virtz R.A., Zollinger V.D. a Hockmeyer V.T. (1988): Proteosome-lipopeptide vaccines: enhancement of immunogenicity for malaria CS peptides. Science 240:800.
Na obsah všech zde citovaných dokumentů se zde explicitně odkazuje.
Pro praktickou aplikaci při podáváni vakcin k ochraně před nemocí je obvykle nutné podat několik takových antigenů současně vzhledem ke skutečnosti, že někteří jedinci jsou vnímaví k získání nemocí způsobených různými organismy. Mimo to, některé organismy, ať už jsou spolu příbuzné nebo ne, jsou často endemické ve stejném místě a proto jedinci, kteří vyžadují ochranu potřebují naočkovat několika druhy vakcin.
V minulosti se produkce vakcin, které vyžaduji ·· ···· nekovalentní komplexování složek, prováděla jednoduchou dialýzou, při níž byly komponenty umístěny do dialyzačního zařízení v přítomnosti dialyzovatelného detergentu a směs se dialyzovala 7-10 dní, aby se zkusilo odstranění detergentu. Praktické nevýhody tohoto systému směřují k tomu, že přísně vylučují pokrok ve vývoji a komercionalizaci této technologie z několika důvodů, které představují 1) čas: dlouhá doba procedury: nezbytné používání GMP zdrojů po týdny, zatímco se vakcina dialýzuje, je nepraktické i vzhledem k vynaloženým nákladům i s ohledem na zvýšenou možnost selhání nebo kontaminace mechanických nebo biologických komponent během tohoto prodlouženého časového úseku; 2) kontaminace: zvýšená možnost kontaminace: dialyzační zařízení se obtížně sterilizuje, dialyzační zařízení vyžaduje ruční otevření a zavření systému a tím jsou během postupu při plnění i složky vystaveny kontaminaci vyprazdňování. Protože uběhne mnoho dní mezi plněním a vyprazdňováním, risiko malé kontaminace v počátečních dnech procesu, se může snadno zvětšit během mnoha dialyzačních dnů a tak se tato methoda stává neužitečná pro praktickou přípravu vakcin. Risiko propíchnutí vaku může způsobit ztrátu produktu. 3) Teplota: nezbytnost provádět dialýzu při 4 °C z důvodu dlouhé používané doby. 4) Objem dialyzační kapaliny: pro přípravu vakciny ve větším měřítku by bylo zapotřebí užívat mohutná množství dialyzační tekutiny, protože obvykle je kapaliny vně dialyzačního přístroje ke kapalině uvnitř dialyzačního přístroje zapotřebí v poměru 200:1. Tak na příklad produkce poloprovozní šarže dvou litrů vakciny by vyžadovala 400 litrů kapaliny vně zařízení za den, 4000 litrů za 10 dní a produkce sériové šarže 20 až 200 4,000.000 litrů. Tato a nepraktická ve srovnáni s litrů by vyžadovala 40.000 až množství j sou nehospodárná metodami, které se užívaj í podle předloženého vynálezu; dialyzační zařízení nejsou dostupná «9 · ♦ ♦ *··· • · pokud jsou problémem velká množství a 5) nezpůsobilost snadno změřit odstranění detergentu tak, aby byla maximalisována účinnost vakciny. Ježto je dialyzační vak umístěn v kontejneru s 200 objemy pufru, probíhající měření odstranění detergentu není ani praktické ani proveditelné a 6) mimo to nebyla popsána methoda pro měření přítomnosti detergentu Empigenu BB, užívaného v preferovaném provedení.
Druhý problém řešený v tomto vynálezu je demonstrace způsobu výroby a podávání multivalentních vakcin. Složky mohou být buď vyrobeny společně nebo připraveny separátně a smíseny před aplikací. Předkládaný vynález ukazuje optimální cestu pro přípravu takových multivalentních vakcin.
Podstata vynálezu
Předmět předkládaného vynálezu se všestranně vztahuje na výrobu a zhotovování proteosomně-amfifilních determinantních vakcin určených buď pro parenterální nebo zejména pro mukosální podávání, na, respiratorní a intrapulmonární), které představuje, ale neomezuje se jen (např. intranasální, intrafaryngální gastrointestinální (např. orální nebo rektální) nebo místní (např. spojivkovou nebo ušní) aplikaci pro vyvolání i systemické (sérum) i mukosální (včetně respiratorní a intestinální) determinant představuj e protilátkové odezvy. Amfifilní molekula s hydrofobními a hydrofilními oblastmi, která se, pokud je vhodně formulována s proteosomy, seskupuje s proteosomy do komplexu vyvolávajícího v subjektu imunologickou odezvu. Mezi typické amfifilní determinanty patří glykolipidy, liposacharidy (včetně detoxifikovaných lipopolysacharidů), lipopeptidy, transmembránové, obálkové nebo toxoidní proteiny, či proteiny nebo peptidy s vnitřním zakotvením hydrofobními aminokyselinami. Tyto determinantové materiály se dají získat
| ·« | • | • 4 | 99 | 44 | |||
| • · | 4 | • 4 | • | 9 4 | • | ||
| 9 · | 9 4 | 4 | 4 | • 44 | 4 4 | 4 4 | |
| • · | 9999 | 4 · | 4 | 4 4 | 999 | * | |
| « · | 9 | 4 4 | * | 4 | 4 | ||
| 99 | 4 | • 4 | 999 | 4 9 | 4· |
z gramnegativních bakterií včetně escherichia, klebsiella, pseudomonas, hem.ophi.lus, brucella, shigella a neisseria. Podrobněj i se vynález vztahuj e na proteosomní vakciny, ve kterých proteosomní přípravky meningokokálního proteinu vnější membrány (připravené z některého kmene N. meningitis nebo N. gonorrhea nebo jiných neisseriálnich druhů) jsou nekovalentně komplexovány s nativními nebo detoxifikovanými shigellárními nebo neisseriálními polysacharidy nebo lipooligosacharidy a tvoří vakciny určené k ochraně proti nákazám způsobeným gramnegativními organismy, které obsahují některou ze složek komplexu obsahujícího meningokoky nebo shigelly. Zevrubněji se vynález vztahuje na proteosomní vakciny, které obsahují LPS, jež vyvolávají odezvy protilátek rozeznávajících typově specifické somatické polysacharidické O-antigeny lipopolysacharidů shigelly a tím poskytují homologickou ochranu proti shigellose. Ještě zevrubněji jsou připravovány lipopolysacharidy, které, jsou-li komplexovány s proteosomy, vyvolávají takové proti shigelle chránící imunitní odezvy, a isolují se buď z Shigella sonnei nebo z Plesiomonas shigelloides pro imunitu vůči nákaze Shigella sonnei, z Shigella flexneri 2a pro imunitu vůči nákaze Shigella flexneri 2a a tak dále, s použitím LPS odvozených z homologických nebo antigenně křížově reaguj ících organismů pro propůjčení homologické imunity proti shigellose způsobené S. flexneri 2a (nebo 3a atd.), S. boydii, S. sonnei atd. Ještě více specificky, předkládaný vynález popisuje úspěšnou aplikaci proteosomních shigella vakcin, jež jsou multivalentní, protože dvě nezávisle zhotovené proteosomní vakciny za užití LPS shigelly odvozených z S. flexneri 2a (pro nákazu S. flexneri 2a) a P. shigelloides nebo S. sonnei (pro nákazu S. sonnei) jsou podávány spolu, vyvolávajíce tvorbu protilátek, které rozeznávají dva organismy a tím poskytují ochranu proti dvěma typům nákaz. Nejtypičtější je,
| • | ·· | ···· | • · | |||
| • | • | • | • · | • | • · | • · |
| • | • | • ♦ | • · | • ·· | • · | • · |
| • | • | ···· | • · · | • | • ··· | • · |
| • | • | • | • · | • | 9 | • 9 |
| ·· | * | «· | ··· | ·· | ·· |
že se předkládaný vynález týká proteosomní shigella LPS vakciny, ve které jsou komplexovány proteosomy z meningokoků skupiny B typu 2b s P. shigelloides LPS pomocí technologie diafiltrace dutými vlákny a vzniká vakcina podávaná mukosální, respiratorní a/nebo gastrointestinální cestou pro vyvolání protilátek, které rozeznají LPS somatického O-antigenu S. sonnei a tím ochrání proti shigellose způsobené tímto organismem. Uvažují se i ostatní konvenční ultrafiltrace/diafiltrace, např. plošná membrána a membránová patrona.
Předkládaný vynález poskytuje metodologii produkování nekovalentně komplexováných vakcin tím způsobem, že 1) zkracuje potřebný čas, 2) snižuje příležitost ke kontaminaci, 3) zvyšuje na okolní teplotu teplotu, při které mohou být takovéto vakciny produkovány, 4) umožňuje účinně zvyšovat produkční proces, aby vyžadoval minimální použití reagentů, 5) dovoluje spolehlivé a účinné vzorkování dialyzátu, aby se mohla opakovaně měřit míra odstranění detergentu, a aby se optimalisovala účinnost operace. To přímo vede ke vzrůstu účinnosti komplexace vakciny, tak aby se vakcina připravovala s měřitelně větší imunogenicitou v nízkých dávkách. Tímto způsobem se výrazně zlepšuje celková kvalita produktu. 6) Mimo to je popsána metoda měření přítomnosti Empigenu BB, detergentu použitého v preferovaném provedení. Místo Empigenu BB lze použít jiné dialyzovatelné detergenty. Dále bylo při použití postupu podle vynálezu prokázáno, že vakcina může být lyofilizována a rehydratována takovým způsobem, že se zachová optimální účinnost vakciny, jak bylo zjišťováno měřením imunogenicity vakciny.
Způsob podle předkládaného vynálezu činí nezbytným použití ultrafiltrační/diafiltračni patrony z dutých vláken, aby se uskutečnila komplexace odstraněním detergentu. Změnou velikosti pouzdra pro umístění patrony může být snížena doba ·· · • φφ • · ·φ • φ φφφφ · φ *φ ·· * ·· φφφφ • φφ •φφφφ • ·· φ φ· φφ ··· φφ ·· • φ ·φ φ φ φφ φ φφφ φφ φ φφ φφ φφ dialýzy mnoha vakcin z více než 7 až 10 dnů na méně než 72 hodin a obvykle méně než 48 nebo 24 hodin. Protože se užívá takto krátká doba, je možné zvýšit reakční teplotu ze 4 °C na normální pokojovou teplotu, aniž by se slevovalo na postupu nebo integritě produktů. Zatím se postup prováděl asi při 20 °C a do úvahy přicházejí teploty mezi 0 a 40 °C. Ježto se jedná o uzavřený systém je možnost kontaminace silně snížena. Vedle toho zvětšením velikosti pouzdra může být zpracováváno neobyčejně velké množství materiálu v poměrně krátké době a tím je umožněno účinné a reprodukovatelné rozšíření procedury pro komerční vývoj. Dále může být permeát opakovaně vzorkován pro stanovení odstranění detergentu Empigenu BB, který je užíván v preferovaném provedení. Jedinečnost této metodologie vyžadovala experimentální ověření vzhledem k tomu, že nebylo zřejmé, zda komplexace a struktura vakciny na imunogenní materiály, která byla dosažena pomalou dialýzou po 7 až 10 dní pomocí stacionárního dialyzačního vaku, by se mohla vyrovnávat nebo být lepší než aplikace technologie dutých vláken, při které se podíly, které mají být komplexovány, pohybují vedením s výjimečně vysokým průtokem ve srovnání s průtokem stacionární dialyzační trubicí.
Ježto nominální řez molekulové hmotnosti užívané membrány může být vybírán mezi 1 000, 3 000, 5 000, 10 000,
000, 50 000 nebo více, v závislosti na rozměru komponent, které mají být nekovalentně komplexovány, je tento systém snadno adaptovatelný na komplexování nativních nebo detoxifikovaných lipopolysacharidů, lipidů, peptidů, lipopeptidů, liposacharidů, polysacharidů, gangliosidů nebo transmembránových, obálkových nebo nativních nebo toxoidovaných proteinů navzájem nebo s přípravky proteinů proteosomů vnější meningokokální membrány.
Výsledný produkt může výt využit jako vakcina podávaná buď parenterálně nebo mukosálně tj. cestou respiratorního • · · ·
nebo gastrointestinálního traktu, např. intranasálně, orálně, orofaryngeální inhalací, topicky nebo rektálně. V uvedeném příkladu se ukazuje, že proteosomy jsou nekovalentně komplexovány s P. shigelloides LPS a vytvářejí vakcinu, která vyvolává anti-S. sonnei LPS odezvy k ochraně proti shigellose
S. sonnei.
Metodologie má tři stadia: předběžnou operaci; komplexaci proteosomu s amfifilní determinantem např. S. Shigelloides LPS; následovanou sterilní filtrací.
Předkládaný vynález ukazuje, že pro optimální dodání multivalentních vakcin je nej lepším způsobem připravit specifické vakciny individuálně a potom v témž dni imunizovat každou ze dvou individuálně připravených vakcin při optimální koncentraci. Jiné možnosti jako vytvořeni hybridních vakcin během vzniku nekovalentních komplexů byly rovněž provedeny nebo jsou uvažovány.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1. Intranasální imunizace vakcinou proteosom-P. shigelloides LPS: odezvy na sérum IgG zjištěné několika preparáty při snížených dávkách.
Obrázek 2. Intranasální imunizace vakcinou proteosom-P. shigelloides LPS: odezvy na sérum IgA zjištěné několika preparáty při snížených dávkách.
Obrázek 3. Podávání vakciny proteosom-P. shigelloides LPS (pro shigellosu S. sonnei) a vakciny proteosom-S. flexneri 2a společně ve stejném dni nebo v týdenním rozestupu vyvolává dobrou imunogenicitu k oběma LPS složkám S. sonnei a S. flexneri 2a.
Obrázek 4. Imunozlatem labelovaný elektronový mikrograf vakciny proteosom-shigella LPS ukazující sdružení shigella LPS s váčky proteosomu.
Obrázek 5. Vakcina proteosom-P. Shigelloides LPS chrání proti lethální Shigella sonnei pneumonia u zvířecího modelu Shigellosis.
Obrázek 6. Intranasální nebo orální imunizace vakc.ínámi proteosom-shigella flexneri 2a LPS indukuje anti-shigella LPS IgG a IgA v séru a IgA v tekutinách z intestinálního a plicního výplachu, což může vydržet 30 až 60 dní po imunizaci.
Obrázek 7. Intranasální nebo orální imunizace lidi jednou nebo dvěma dávkami vakcin proteosom-P. shigelloides LPS pro Shigella sonnei při použití různých množství vakciny: indukce anti-shigella LPS IgA, IgG a IgM periferálních ASC odezev krve a odezev protilátek v séru, slinách a moči.
Obrázek 8. LPS v HPLC frakcích po aplikaci nekomplexovaných P. shigelloides LPS a demonstrace nekovalentního komplexování LPS a proteosomních proteinů při současné eluci LPS a proteinů v HPLC frakcích po aplikaci vakciny proteosom-P. shigelloides LPS.
Obrázek 9. Baktericidní odezva protilátek u myší na vakcinu z meningokokálního proteinu vnější membrány a detoxifikovaného lipooligosacharidu; geometrický průměr reciprokých titrů proti meningokokálnímu kmenu 9162.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Tento příklad podrobně popisuje přípravu vakciny proteosom-P. shigelloides obsahující přibližně 2 až 3 g proteinu. Postup je stejně použitelný pro zvětšené měřítko používající 10ti až 100-násobně větší množství materiálu při příslušném zvětšení prostoru pro patronu membrány a příslušném vzrůstu objemů. Při použití vhodných velikosti • ······ · · · · • · · ··· ···« • ··· · · · · · · ··· • · ···· · · · · · ··· · « • · · ·· · · · « • · · ····· · · · · membrán s vhodným fezem molekulových hmotností, aby zadržely antigeny, které mají být komplexovány, je tento postup stejně použitelný pro komplexací proteosomů s ostatními nativními nebo detoxifikovanými lipopolysacharidy, lipidy, peptidy, lipopeptidy, liposacharidy, polysacharidy, gangliosidy nebo transmembránovými, obálkovými nebo nativními nebo toxoidovanými proteiny navzájem nebo s přípravky proteosomů proteinu vnější meningokokální membrány. Při tomto postupu je jako příklad detergentu používán Empigen BB; při postupu lze stejně aplikovat jakýkoliv dialyzovatelný detergent, který solubilisuje komponenty. Tento postup užívá patrony podle A/G technologie, avšak stejně dobře lze aplikovat jakýkoliv druh patrom pro systém ultrafiltrace/diafiltrace.
5.0.0.
Předběžné operace
5.0.0.1. Sterilně filtrovat zásobní roztok 30 % Empigenu BB, který je při postupu používaným detergentem.
5.0.0.2. Připravit 2X TEEN / 2 % Empigen (0,1 M Tris, 0,02 M dinatrium EDTA, 0,3 M chlorid sodný, VFI a 2 % Empigen, pH 8,0).
5.0.0.3. Připravit 150 1 roztoku TNS (tris normální fysiologický roztok) obsahující 0,05 M Tris, 0,15 M chloridu sodného pH 8,0 pro oddialyzování detergentu 5.0.0.4. Připravit 10 litrů hydroxidu sodného pro čistění UF patrony.
5.0.0.5. Rozmrazit požadované množství lipopolysacharidu (LPS) Shigella flexneri 2a.
5.0.1.
Komplexace proteosomů s 5. flexneri 2a LPS
5.0.1.6. Přidat stejný objem 2X TEEN pufru k objemu LPS a důkladně promíchat.
• · · • · ·· · ·
5. O .1.7. Rozmrazit a stanovit v mg množství masy proteosomů rovnaj ící se množství LPS rozmražených ve stupni 5.
5.0.1.8. K proteosomům na litr přidat 30 ml sterilně přefitrováného Empigenu. Důkladně promíchat a spojit s LPS ze stupně 5.
5.0.1.9. Obě komponenty důkladně smíchat. Obvykle dostačuj e 15 minut na desce míchadla v kombinaci s tyčkovým míchadlem.
5.0.1.10. Pro oddialyzování detergentu tak, aby proteosom mohl vytvořit komplexy, nastavit systém ultrafiltrace (založený na technice tangenciálního toku) za použití patrony dutých vlakem s nominálním řezem molekulové hmotnosti (NMVC) velikosti pórů 10.000 vyráběné A/G Technology, lne., napojený na sterilizované silikonové trubice a peristaltické čerpadlo. Zdravotnické tlakoměry pro monitorování tlaku během průběhu jsou umístěny na vstupní a výstupní straně patrony. Pokud se týká adjustace výstupního tlaku, je ventil konečného tlaku umístěn na výstupní straně patrony.
5.0.1.11. Ultrafiltrační systém se čistí a sterilizuje pomocí VFI a 0,5 M NaOH při teplotě 50°C po dobu delší než 60 minut. Systém se propláchne VFI a před použitím se uvede do rovnovážného stavu pomocí TNS pufru.
5.0.1.12. Sterilní zásobní nádoba se umísťuje do linky tak, že vstupující kapalina je hnána z reservoáru a vracející se retentát se vrací do téhož reservoáru. Jakmile kapalina projde patronou membrány (permeát nebo filtrát) je znovu naplněna pufrem buď přímým přidáním nebo kontinuálně pracuj ícím plnícím systémem. Seřízení kontinuálního plnícího systému po připojení silikonového potrubí k nádobě obsahující TNS pufr k reservoáru vzorku je pak • 4 « 4 z reservoáru vzorku odstraní vakuum, které způsobí, že nádoby tažen do reservoáru systém neprodyšný, zůstává v reservoáru konstantní.
neprodyšné. Jakmile se kapalina, vytvoří se TNS pufr je vzorku. Pokud ze své zůstává hladina vzorku .0.1.14.
.0.1.15.
.0.1.16.
Spustit recirkulační čerpadlo pro zahájení diafiltrace. Nastavit rychlost čerpadla a ventil končného tlaku tak, aby se na konci získal tlak 15 ± 4 psi (=103,4 ±27,6 kPa).
Ověřovat progresivní odstraňování Empigenu BB testováním vzorků permeátu v každých 10-15 litrech pomocí testu na Empigenový precipitin. Tento test spočívá ve vytvoření serie ředění permeátu a standardního roztoku známého množství Empigenu BB, přidání HC1 k okyselení roztoků a poté přidávání serie ředění SDS (dodecylsulfátu sodného), aby vznikl assay šachovnicového typu. Maximum precipitátu se bude tvořit, když bude přítomno stejné množství Empigenu a SDS. Tímto způsobem může být kvantifikováno množství přítomného Empigenu zaznamenáváním ředění SDS, permeátů a standardů při kterých se vytváří maximum precipitátu. Jak postupuje diafiltrace, snižuje se množství Empigenu a zkumavka obsahuj ící méně SDS bude zkumavkou s maximem precipitátu. Přítomnost precipitátu se kvantifikuje spektrometrickým měřením OD při 600 nm.
Pro množství komponent použitých v tomto příkladu, pokračovat v diafiltraci dokud se nezpracuje nejméně 120 litrů permeátu a chybí výrazné množství precipitátu při Empigen Precipitin Testu (maximum OD 600 nm je menší než 0.05).
Po skončení dialýzy koncentrovat produkt, aby • · · ·
·· konečný objem měl hodnotu OD280 blízkou 6,0. Vysušit systém a promýt 300 až 400 ml pufru TNS. Znovu vysušit systém a spojit obě části. Vyčistit patronu recirkulací velkých množství VFI následovaných 0,5 N NaOH při 50 °C po >60 minut. Vypláchnutí NaOH pomoci VFI a uchovávání systému v 0,01 N NaOH.
5.0.2. Sterilní filtrace
5.0.2.17. Pokud se požaduje, mohou být komplexy sterilně filtrovány. Koncentace proteosomu může být upravena před nebo po 0,22 μ filtraci. Sterilní filtrace se normálně provádí s filtračními jednotkami od Millipore Corp. Tyto jednotky se nazývají Millipak a jsou k dispozici v různých velikostech. Dokud operace není dokončena skladuje se sfiltrovaný objem při 4 °C a testuje se na sterilitu.
5.0.3.0. Specifický účel: spojit objem GMP preparátů meningokokálních proteosomů proteinu vnější membrány a lipopolysacharidu S. flexneri 2a na nekovalentní komplexy odstraněním detergentu.
5.0.3.1. Aplikace: tato GMP procedura vyúsťuje ve velkoobjemovou produkci tvorby nekovalentních komplexů, proteosomů s lipopolysacharidem 5. flexneri 2a pro užití jako vakciny proti infekci S. flexneri 2a.
Příklad 2
Nekovalentní komplexace zásobního množství čistých proteinů (proteosomů) vnější membrány Neisseria meningitis ···· kmene 9162 a alkalicky detoxifikovaného lipooligosacharidu N. meningitidis L8 isolovaného z kmene 8532.
5.1.0. Zásobní množství proteinu (proteosomů) vnější membrány kmene 9162, šarže 0136 a šarže 0203 zásobního detoxifikovaného meningokokálniho L8 lipooligosacharidu (LOS) byly vzaty ze zásoby a rozmraženy při teplotě místnosti. Zásobní množství LOS o objemu 182 ml obsahující 500 mg LOS ve sterilní destilované vodě bylo spojeno se zásobními proteosomy o objemu 306 ml, obsahujícími 400 mg proteinu v pufru složeném z 0,05 M Tris-HCl, 0,15 M NaCl, 0,01 M EDTA a 0,1 % Empigenu BB.
obj emu byla roztoku a při 5.1.3. Pufrovací přidána teplotě roztok pórů 0,22 ke byl sterilně filtrován pm a jedna šedesátina spojeným proteosomům a LOS místností míchána 1 hodinu.
proteosomů, destilovanou
LOS vodou ultrafiltační detergentu byl odstraněn od roztoku a nahrazen sterilní pomocí ultrafiltrace za použití patrony UFP-3-C-6 A/G Technology s řezem molekulární hmotnosti pórů 3000.
5.1.4. Procedura sestavení, desinfekce, promývání a čistění aparatury byly stejné jak je popsáno v přikladu 1. Vstupní tlak byl 15 ± 4 psi (=103,4 ± 27,6 kPa) a rychlost průtoku permeátu byla 175 ml za minutu.
5.1.5. Po každých 3 až 4 litrech byl permeát testován na přítomnost detergentu Empigenu BB srážecí metodou popsanou v příkladu 1. V ultrafiltaci se pokračovalo dokud nevznikl žádný precipitát při testu v dalších dodatečných 5 litrech. Nashromážděno bylo celkem 37 litrů permeátu.
5.1.6. Retentát byl čirý a byl sterilně filtrován filtrem s ·
·* ·«·« velikostí pórů 0,22 pm analyzovaným na protein a LOS a uchovávaným jako zásobní produkt při 4 °C.
5.1.7. Zásobní produkt byl zředěn na koncentraci 0,2 mg proteinu v ml a koncentrace NaCl byla upravena na 0,15 M. Pro konservaci bylo přidáno 0,01 % Thimerasolu a vzniklý objem byl za sterilních podmínek rozdělen do nádobek pro konečné uchovávání, oštítkovaných a skladovaných při -70 °C.
5.1.8. Tento produkt byl na myších testován na imunogenicitu, když byl podáván ve fysiologickém roztoku a absorbován na gelu hydroxidu hlinitého sloužícího jako adjuvans.
| Výsledky komplexy podávány | j sou uvedeny níže v Tabulce 1 a vakcin j sou imunogenní, když | ukazuj í, že jsou myším | |
| i.p. | TABULKA 1. | ||
| Baktericidní | odezva | protilátek u myší na | vakcinu z |
meningokokálního proteinu vnější membrány a detoxifikovaného lipooligosacharidu. Geometrický průměr reciprokého titru proti meningokokálnímu kmeni 9162.
| Vakcina | Dávka | Adj uvans | Den 0 | Den 28 | Den 42 |
| XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX | |||||
| Proteosomy | |||||
| dLOS | |||||
| podíl 0271 | 1 Pg | žádné | <8 | <8 | 16 |
| 3 pg | žádné | <8 | <8 | 128 | |
| 10 pg | žádné | <8 | <8 | 512 | |
| Proteosomy | |||||
| dLOS | |||||
| podíl 0271 | i pg | Al(OH)3 | <8 | <8 | 512 |
| 3 Pg | Al(OH)3 | <8 | <8 | 512 | |
| 10 pg | Al(OH)3 | <8 | 64 | 2048 |
Poznámka: Vakcina byla podávána intraperitonálně v nultém a 28 dni skupině deseti křížených CD-1 myší.
Φ φ φ··· ·· «ΦΦΦ • φ • ΦΦΦ
5.1.9. Komplexace proteosomů a LOS byla ověřována sloupcovou chromatografii proteosomů a složek LOS před a po komplexaci (Obrázek 9). Chromatografícká analýza zásobních meningokokálních L8 LOS a konečných komplexů proteosomy/LOS na nízkotlaké koloně Sephacryl S300.
Kolona byla vymývána pufrem obsahujícím 0,05 M Tris-HCl, 0,01 M EDTA a 0,15 M NaCl. Protein byl stanovován pomocí absorbance při 280 nm a LOS byly stanovovány na základě inhibice ELISA (enzyme linked immunosorbant assay), při které vazba monoklonální protilátky na vyčištěný L8 LOS adsorbovaný na plastové desce byla inhibována sérií zřeďování frakcí ze sephacrylové kolony. Před komplexaci vycházely LOS z kolony jako široký peak se středem ve frakci 39. Po komplexaci byly LOS vymývány spolu s proteosomy v peaku se středem přibližně ve frakci 33.
5.1.10. Specifický účel: spojit většinu GMP preparací proteosomů meningokokálních proteinů vnější membrány a detoxifikovaného lipopolysacharidu do nekovalentních komplexů odstraněním detergentu.
5.1.11. Aplikace: tato GMP procedura vyúsťuje ve velkoobjemovou produkci tvorby nekovalentních komplexů s detoxifikovaným meningokokálním lipopolysacharidem pro užití jako vakciny proti menigokokální infekci N. meningitides.
Příklad 3
Tento příklad je rovněž zaměřen na produkci vakciny proteosom-S. shigelloides. Tato aplikovatelná na větší měřítka tisícinásobně většího množství procedura j e rovnocenně při nasazování deseti- až materiálu s příslušným zvětšováním pouzdra pro patronu membrány a příslušným
·· AA • A A
A · AA
A A · ·
A A nárůstem objemů.
5.8.1. Příprava 25 ml sterilně filtrovaného 30 %-ního roztoku Empigenu BB.
5.8.1.1. Použít 100 ml Nalgene filtrační jednotku pro jedno použití s filtrační membránou s velikostí pórů 0,2 μ pro sterilní filtraci kolem 25 ml 30 %-ního roztoku Empigenu BB.
5.8.2. Připravit 4 1 TEEN 2x se 2 % Empigenu BB (sestávající z 0,1 M Tris, 0,02 M dinatrium EDTA, 0,3 M chloridu sodného, VFI a 2 %-ní roztok Empigenu BB).
5.8.4. Připravit 10 litrů roztoku 0,5 M hydroxidu sodného.
5.8.6. Pokud je nutné, rozmrazit zásobní lipopolysacharid (LPS) P. shigelloides pro přípravu komplexace s proteosomy a zaznamenat číslo šarže a koncentraci LPS, požadované množství LPS v mg a vypočtený objem LPS oddělit.
5.9.0. Komplexace proteosomů s LPS P. shigelloides
5.9.1. Příprava LPS pro komplexaci
5.9.1.2. Spojit alikvotní podíly zásobního LPS do čisté, sterilní, kalibrované 5 1 baňky. Změřit celkový objem a stanovit celkové množství LPS.
5.9.1.3. Přidat stejný objem pufru 2x TEEN jako je objem použitého LPS.
5.9.1.2. Změřit celkovou velikost spojených objemů, potom vložit tyčkové míchadlo a na míchací desce míchat 15 ± 2 minuty.
• · · • ♦ • · · • ···· • · ·
·· *··· •· •· •4 ·· ··· ♦ ·· ···· • · ·<
•· ·· ·· · ·· • ·· ····
5.9.2. Příprava proteosomů pro komplexaci
5.9.2.1. Zaznamenat celkový čas rozmrazování proteosomů, pokud něj aký byl.
5.9.2.2. Spojit alikvotní podíly zásobních proteosomů do čistého, sterilního odměrného válce o objemu 1 1. Změřit celkový objem a stanovit celkové množství proteosomů.
5.9.2.3. Z odměrného válce ze stupně 5.9.2.2. převést do jiného čistého, sterilního 1 1 odměrného válce takový objem proteosomů, který v množství mg odpovídá mg množství LPS použitého ve stupni 5.9.1.2.
5.9.2.4. Do válce obsahujícího proteosomy přidat přes 0,22 μ zfiltrovaného 30 % roztoku Empigenu BB v množství 30 ml na 1 1 proteosomů. Míchat tyčkovým míchadlem 15±2 minut.
5.9.3. Smísit proteosomy s P. shigelloid.es LPS
5.9.3.1. Za mírného míchání tyčkovým míchadlem přidat proteosomy ze stupně 5.9.3.2. do odměrné 5 1 baňky s LPS a míchat 15±2 minut.
5.9.3.3. Odejmout čtyři 1 ml vzorky a uložit při -75”C pro pozdější stanovení koncentrace proteinů Lowry-ho metodou a stanovení LPS pomocí KDO assay-e.
5.9.4. Odstranění detergentu pomocí ultrafiltrace/diadiltrace
5.9.4.1. Podrobnosti ultrafiltračního systému: A/G
Technology lne., patrona s dutými vlákny, velikost pórů 10.000 NMVC, velikost pouzdra 6, ultrafiltrační patrona.
Poznámka: nové patrony je nezbytné upravovat vymytím glycerolu. To se dá provést promýváním 6 litrů VFI skrze patrony o 6 sq/ft (=55,7 cm ) nebo méně bez tlaku na •4 9999 • · 9 9 9 9 · 9
9 9 ·
9
9 9 9
9 9 9 konci. Roztok permeátu nesmí být recyklován do reservoáru pro plnění.
Poznámka: Všechny ultrafiItrační kroky budou následovány čistěním, desinfikací a skladovacími stupni. Nové patrony musí být před použitím čištěny a desinfikovány.
5.9.4.2. Sestavení a desinfekce A/G ultrafiltračního systému.
Vyčistit a desinfikovat systém recirkulací nejméně 60 minut 2 až 3 litry 0,5 N hydroxidu sodného při počáteční teplotě 50 ± 5 °C. Promýt systém 4 až 5 litry VFI s následovanou recirkulací 2-3 litrů TNS (pufr 0,05 M Tris/fysiologický roztok pH 8,0 ± 0,2) nejméně 20 ±5 minut.
5.9.4.3. Změřit zvýšený objem v UF systému (včetně trubic vedení) přenesením z vstupních a výstupních trubic naplněných mimo reservoár kapalinou do 11 odměrného válce a potom vyčerpat dokud není UF systém prázdný.
5.9.4.4. Umístit 2 1 nádobu s postranním vývodem do hrnce a obklopit ledem s vodou po dobu trvání diafiltrační procedury.
5.9.4.5. Přenést 1,7 až 1,9 1 zásobní směsi proteosom/LPS ze stupně 5.9.3.3. do 2 1 nádoby s postranním vývodem.
Nasadit zátku s dvěma otvory opatřenou dvěma 10 ml pipetami a spoj it vstupní a výstupní trubice diafiltračního systému s pipetami na nádobě.
5.9.4.6. Zapnout recirkulační čerpadlo a nastavit seřízení čerpadla na 4 až 6. Nastavit závěrku koncového tlaku tak, aby vstupní tlak byl 15 ± 4 psi (=103,4 ± 27,6 kPa). Koncentrovat na celkový obj em 1,0 ±0,11 včetně zvýšeného obj emu.
5.9.4.7. Přenést 1 ± 0,1 1 směsi ze stupně 5.9.3.3. do 2 1 nádoby s postranním vývodem a opakovat stupeň 5.9.4.6.
5.9.4.8. Pokračovat v přenášení j ako ve stupni 5.9.4.7. a koncentrování jako ve stupni
| • · | • | • 4 | • · · · | ||
| • | • | • | Λ | • | • |
| • | • | • · | • | • | • · 9 |
| • | • | 9··· | • · | • | 9 9 |
| • | • | 9 | • | • | • |
| • · | • | • · | • · * |
5.9.4.9. dokud všechna směs proteosom-LPS ze stupně 5.9.3.3. nebyla převedena do 2 1 nádoby s postranním vývodem a objem retentátu není 1,4 ± 0,2 1 i se zvýšeným ob jemem.
5.9.4.10. Nastavit ultrafiltrační přístroj na kontinuální plnění TNS (0,05 M Tris, fysiologický roztok) do dvoulitrové nádoby s postranním vývodem až se kapalina membránou odtáhne. Seřídit rezervoár s použitím 10 litrové láhve obsahující TNS a opatřené trubicí dosahující na dno lahve. Spojit vstupní a výstupní vedení ultrafiltračního systému. Spustit recirkulační čerpadlo a nastavit seřízení čerpadla na 4 až 6. Nastavit závěrku koncového tlaku tak, aby vstupní tlak byl 15 ± 4 psi (=103,4 ±27,6 kPa).
Změřit rychlost tlak ±
toku při až
0,5 permeátu na UF jednotce a zaháj ení měření.
ml litrů, vzorek permeátu po použít vlastnoručně Pl, P2, P3 atd) a a maximální θ-Β.^θθ
5.9.4.11.
zaznamenat vstupní
5.9.4.12. Shromažďovat zpracování každých zhotovených štítků (Permeát zaznamenat čas, zpracovaný obj em vzorku. Ověřit maximální odstranění Empígenu testováním vzorků na přítomnost Empígenu BB pomocí Empigen Precipitin Testu. Tento test spočívá na vytvoření sérií naředění permeátu a odděleně pak roztoku obsahuj ícího známé množství Empígenu BB, přidání HC1 na okyselení roztoků a poté přidání serie naředění SDS (dodecylsulfát sodný), aby se vytvořil šachovnicovitý test. Když jsou přítomna stejná množství Empígenu a SDS bude se tvořit maximum precipitátu. Tímto způsobem lze kvantifikovat množství Empígenu tak, že se zaznamenaj í naředění permeátu a SDS při nichž se precipitát tvoří a tato naředění se srovnají s naředěním standardů. Jak pokračuje diafiltrace, množství Empígenu se zmenšuje a zkumavka obsahující méně SDS bude zkumavkou s maximem
4444
44
4 · • 4 4
4 4 · 4 ·
4 4 4 4 4 4
precipitátu. Přítomnost precipitátu se kvantifikuje spektrofotometrickým měřením OD při 600 nm.
Pro množství komponent použitých v tomto příkladu pokračovat v diafiltraci pokud nebylo zpracováno nejméně 120 litrů permeátu a schází zřetelný výskyt precipitátu při Empigen Precipitin Testu (maximum OD 600 nm je menší než 0,05).
5.9.4.13. Produkt koncentrovat na konečný objem 500 ± 50 ml retentátu včetně zvýšeného objemu (stupeň 9.4.3.). Odebrat 0,5 ml vzorku, vzorek zředit 1 : 10 a měřit
5.9.4.14. Požadované minimum O.D. pro koncentrovaný retentát je 5,7. Jestliže je O.D. menší než 5,7, pokračovat v koncentrování na 400 ± 50 ml včetně zvýšeného objemu (stupeň 5.9.4.3.) a opakovat θ·^·280·
5.9.4.15. Při uzavřeném vedeni retentátu vně roztoku retentátu a výstupního vedení filtrátu, pomalu čerpat v opačném směru dokud patrona a vedení nej sou prázdné. Převést plnící vedení a vedení retentátu z lahve pro retentát do nové čisté nádoby s 350 ± 50 ml TNS. Obrátit čerpání a zvolna recyklovat TNS 2 až 3 minuty.
5.9.4.16. Po recirkulaci TNS, zastavit čerpadlo, vyprázdnit systém, shromáždit promývací roztok retentátu do čistého, sterilního 1 1 odměrného válce a změřit objem a
5.9.4.17. Spojit původní roztok retentátu (stupeň 5.9.4.12.
nebo 5.9.4.13.) s promývacím roztokem retentátu (stupeň 5.9.4.15.) a změřit konečný objem retentátu. Uskladnit zásobní retentát při 4 °C ± 2 °C až do aseptické filtrace.
5.9.4.18. Vyčistit filtrační jednotku pomocí VFI a potom 0,5 N hydroxidem sodným při počátečních 50 ± 5 °C nejméně po 60 minut. Vypláchnout čistící činidlo pomocí VFI a potom •· ···· promyt 3 činidlem.
až 4 litry
0,1 N NaOH j ako konservačním
5.9.5. Sterilní filtrace
Pokud se filtrovány. Vzít a prohlédnout zda Pokud j e zásobní filtrovat sterilní, ve sterilní skříni.
to požaduje, zásobní komplexované proteosomy není přítomen precipitát komplexováný produkt s použitím jednotky Milipak vyžíhané nádoby. Tento stupeň mohou být komplexy sterilně a LPS nebo zákal.
čirý, asepticky 40, 0,22 μ do se má provádět
5.9.6. Specifický účel: spojit zásobu GMP preparátů proteosomů meningokokálních proteinů vněj ší membrány a lipopolysacharidu P. shigelloides (pro S. sonnei) do nekovalentních komplexů odstraněním detergentu.
5.9.7. Aplikace: tato GMP procedura vyúsťuje ve velkoobjemovou produkci preparace tvorby nekovalentních komplexů proteosomů s lipopolysacharidem P. shigelloides 2a pro užití jako vakciny proti infekci S. sonnei.
5.10. Studie imunogenicity:
5.10.1. Imunogenicita vakciny proteosom - P. shigelloides LPS za použití ultrafiltrace a diafiltrace na dutých vláknech.
Obrázky 1 a 2 znázorňuj i, že tři různé preparáty vakciny proteosom - shigella LPS, získané za použití diafiltrační techniky s dutými vlákny (HF) (HF-1, HF-2 a GMP/HF3) pro odstranění detergentu a usnadnění komplexace, jsou efektivnější při nejnižší, nejpřesnější testované dávce než přípravky získané za použití jednoduché dialyzační <*· · ·· ···· • »· · ·· • · · · · ···· • · ···♦ · · ·· · • ♦ · · ·· ·· » ·· *·· ·· <e • * ·4 •· ·· • 44 44
44 • 444 trubice (DT). Jinak řečeno, silnější imunitní odezvy IgG (obrázek 1) a IgA (obrázek 2) byly vyvolány vakcinami produkovanými podle předloženého vynálezu než podle starší, méně účinné technologie. Ježto silnější imunitní odezvy poskytují lepší úrovně ochrany, ukazují tato data jasně, že předkládaný vynález poskytuje vakciny, které se nejen efektivněji získávají, nýbrž i silněji působí. Silnější odezvy jsou dále vyvolávány vakcinou, když je podávána v nejnižší dávce (0,1 pg na dávku), čímž se ukazuje, že podle předloženého vynálezu by bylo zapotřebí méně vakciny, než by bylo nutné při užití starší technologie. Poněvadž formulace multivalentních vakcin vyžaduje mnoho různých antigenů, je pro minimalisaci celkového množství podávané vakciny vysoce výhodné, že lze použit jako složek vakciny komponety, které jsou účinné při nízkých dávkách. Technologie podle vynálezu tak přímo ovlivňuje a usnadňuje způsobilost formulovat multivalentní vakciny, které mají širokou paletu specifit. Protože pro komerční vývoj vakcin je výhodné, aby vakciny bylo možné lyofilisovat, zjistili jsme se zadostiučiněním, že lyofilisace HF komplexů vakciny z vodného roztoku poskytuje překvapivě vakcinu, která konsistentně vyvolává odezvy, které byly mezi nejvyššími ze všech testovaných dávek. Vyšší imunogenicita byla tedy zjištěna pro anti-LPS IgG (obrázek 1) a IgA (obrázek 2), když bylo podáváno 0,1 gg vakciny připravené HF technikou (s anebo bez lyofilisace). Tato data jsou významná, protože zvětšené měřítko a GMP procedura podle předkládaného vynálezu použila HF technologii jak je ukázáno na obrázcích 1 a 2 příčně šrafovanými sloupci představujícími GMP/HF-3.
i»· · ··> ····
5.10.2. Studie imunogenicity při použití multivalentní vakciny
Jak je ukázáno na obrázku 3, podávání vakcin proteosom P. shigelloides LPS (pro shigellosis S. sonnei) a proteosom S. flexneri 2a tentýž den nebo týdny poskytuje dobrou imunogenicitu vůči oběma LPS komponentám: S. sonnei LPS a S. flexneri 2a LPS.
5.11. Elektronová mikrofotografie vakciny proteosom-Shigella
Sdružení shigella LPS s proteosomy je jasně a dramaticky zobrazeno mikrosnímkem z elektronového mikroskopu na obrázku
4. Na tomto obrázku jsou váčky proteosomů prostoupeny pro záření neprostupnými černými tečkami. Tyto tečky jsou růžencovitě připojeny k sekundárním protilátkám, což prokazuje specifické anti-shigella LPS protilátky. Přítomnost zlatých teček tedy indikuje přítomnost shigella LPS. Jak lze vidět, vzhledem k tomu, že zlaté váčky proteosomů, je obraz vakcin proteosomů proteosomy. Konsistentní tečky obklopuj i a tímto prokázán a s LPS nekovalentně vesikulární povaha vytečkovávaj i visualisován vázaných na vakcin připravených pomocí HF technologie podle předkládaného vynálezu nebyla překvapivě zjištěna, získané podle starší technologie byly mikroskopií (nepublikované výsledky).
když DT preparáty zkoumány elektronovou
5.12. Ochrana vakcinou proteosom lethální pneumonii Shigella sonnei shigellosy
P. shigelloides proti u zvířecího modelu
Jak lze vidět na obrázku 5, shigelloides LPS důsledně přináší lethální infekci P. shigelloides, vakcina proteosom - P. výraznou ochranu proti jak bylo zjištěno na zvířecím modelu shigellosy, při němž byla zvířata pro zavedení lethální pneumonie vystavována živým organismům. Tato data také ukazují, že vakcinou proteosom - P. shigelloides LPS jsou produkovány nejen správné a ochranné protilátky, ale že také tato intranasální podjednotková vakcina může chránit proti lethální pneumonii.
5.13. Intranasální nebo orální imunisace vakcinami proteosom - Shigella flexneri 2a LPS vyvolávají anti-shigella LPS IgG a IgA v seru a IgA v intestinálních kapalinách a plicnlch sekretech, které mohou trvat 30 až 60 dní po imunizaci.
Jak ukazuje obrázek 6, dvě imunisace s vakcinami proteosom - shigella flexneri 2a vyvolávají protilátky v seru a plicních a intestináních sekretech, které mohou trvat 30 až 60 dní po imunisaci. Tyto údaje ukazují, že vakciny proteosomů mohou stimulovat běžný mukosální imunitní systém k vylučování protilátek i v oblastech daleko vzdálených od místa imunisace. Konkrétně intranasální imunisace může vyvolávat protilátky v intestinálních sekretech a více versa. Tato schopnost rozšiřuje potenciální užitečnost vakcin proteosomů při ochraňování proti pathogenům, které vnikají do hostitele mukosálními vstupními branami na těle.
5.14. Obrázek 7 znázorňuje indukci anti-shigella LPS IgA IgG a IgM periferálních ASC odezev v krvi a IgA a IgG protilátkových odezev v séru, slinách a moči po intranasální nebo orální imunisaci lidských dobrovolníků jednou nebo dvěma dávkami vakcin proteosom - P. shigelloides LPS pro Shigella sonnei v různých množstvích vakciny. Jak je ukázáno, intranasální imunisace vyvolává odezvy v dávce závislé na způsobu dávky, která vyvolává odezvy u všech šesti dobrovolníků.
IgA, IgG a IgM odezvy v séru byly vyvolány v každé z intranasálních skupin. Kromě toho byly vyvolány silné ACS odezvy buněk vylučujících protilátky, ukazující, že mukosální imunisace stimulovala činnost buněk vylučujících protilátky - především vylučujících IgA. Nejvýznamejší je, že zvláště buněk
IgA odezvy byly také zjištěny ve vzorcích slin a zejména ve vzorcích moči, což naznačuje, že sekretorni IgA se produkovala na mukosálních površích (ježto IgA neprochází ledvinami, urinární IgA odpovídá na lokální sekreci protilátky a předpokládá, že tak intranasální vakciny rovněž produkují lokální intestinální IgA, a že intranasální vakciny mohou být použity k ochraně proti infekcím urinárního traktu způsobovaných gramnegativními organismy). Zaznamenání hodné je, že většina těchto ASC a protilátkových odezev byla zjištěna jen po jedné imunisaci, což naznačuje, že revakcinace nemusí být nutná. IgA a IgG ACS a urinární IgA byly zjištěny také po orální imunisaci. Nejúčinnější aplikace orálního podávání j e, pokud se ukáže nutné, revakcinace po nasální náloži.
5.15. Demostrace nekovalentní komplexace multimolekulárních proteosomových proteinů a LPS je uvedena na obrázku 8. Graf ukazuje LPS v HPLC frakcích po aplikaci nekomplexováného P. shigelloides LPS, který se vyskytuje v jiných částech elučního profilu kolony než když se aplikuje vakcina proteosom - LPS. Společná eluce LPS a proteinů v HPLC frakcích po aplikováni vakciny proteosom - P. shigelloides LPS se ukazuje s peaky, které odpovídají největším proteinovým agregátům proteosomů. Údaje byly změřeny pomocí inhibice ELISA, pro stanovení LPS a pomoci OD při A280, aby se kvantifikovaly proteiny proteosomů. HPLC kolona byla
Tosohaas 50000Pwxl a molekulární standardy jsou označeny šípkami.
Claims (28)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat, vyznačený tím, že zahrnujea) vytvoření směsi proteosomů, dialyzovatelného detergentu a amfifilního determinantu,b) podrobení směsi diafiltraci nebo ultrafiltraci, aby se odstranil detergent a takto vytvořil komplex amfifilní determinat - proteosom,c) monitorování tvorby množství komplexu amfifilní determinat - proteosom ad) získání komplexu amfifilní determinat - proteosom.
- 2. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat podle nároku 1, vyznačený tím, že ultrafiltrace zahrnuje tangenciální tok.
- 3. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat podle nároku 1, vyznačený tím, že ultrafiltrace se provádí v systému voleném mezi patronou dutých vláken, plošnou membránou a membránovou patronou.
- 4. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat podle nároku 3, vyznačený tím, že ultrafiltračním systémem je patrona s dutými vlákny s NMVC velikostí pórů 10.000.
- 5. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat podle nároku 3, vyznačený tím, že ultrafiltračním systémem je patrona s dutými vlákny s NMVC velikostí pórů 3.000.
- 6. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní • · • · · · determinat podle nároku 1, vyznačený -tím, že monitorování dialyzovatelného detergentu zahrnuje kontinuální měření vzorků permeátu.
- 7. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat podle nároku 1, vyznačený tím, že monitorování zahrnuje měření optické hustoty vzorku permeátu nebo retentátu.
- 8. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifilní determinat podle nároku 1, vyznačený tím, že monitorování zahrnuje měření množství odstraněného detergentu smísením vzorku permeátu se známým množstvím SDS (dodecylsulfát sodný), aby se vytvořil precipitát, pokud je detergent přítomnen, a stanovení množství precipitace.
- 9. Způsob přípravy determinat podle nároku 8, komplex LPS - proteosom detergent v podstatě odstraněn.vakciny proteosom vyznačený t se získá, když byl amfifilní i m, že v permeátu
- 10. Způsob přípravy determinat podle nároku 1, detergentem je Empigen BB.vakciny vyzná proteosom č e n ý t amfifilní í m, že
- 11. Způsob přípravy determinat podle nároku 1, amfifilním determinantem vakciny proteosom č e n ý t je vyzná lipopolysacharid.amfifilní í m, že
- 12. Způsob přípravy podle nároku 11, vy lipopolysacharid získává z gramnegativních bakterií.vakciny proteosom - lipopolysacharid značený tím, že se ·» ··»*
- 13. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 12, vyznačený tím, že gramnegativní bakterií je plesiomonas.
- 14. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 13, vyznačený tím, že plesiomonas je Plesiomonas shigelloides.
- 15. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 12, vyznačený tím, že gramnegativní bakterií je shigella.
- 16. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 15, vyznačený tím, že shigella je Shigella flexneri, Shigella sonnei nebo Shigella boydii.
- 17. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 12, vyznačený tím, že gramnegativní bakterií je neisseria.
- 18. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 17, vyznačený tím, že neisseria je Neisseria meningitidis.
- 19. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 1, vyznačený tím, že proteosom je odvozen z N. meningiditis nebo N. gonorrhea.
- 20. Způsob přípravy vakciny proteosom - lipopolysacharid podle nároku 1, vyznačený tím, že získání komplexu LPS - proteosom se uskutečňuje, když monitorovaná míra odstraněni detergentu je klesající nebo konstantní.
- 21. Způsob přípravy vakciny proteosom determinat podle nároku 1 vyznačený dále zahrnujee) míšení získaného komplexu proteosom determinant s fysiologicky vytvoření vakciny.amfifílní tím, že amfifílní nosičem pro akceptovatelným
- 22. Způsob přípravy determinat podle nároku 21 vakciny proteosom vyznačený amfifílní tím, že dále zahrnuje komcentrování komplexu LPS - proteosom před získáním komplexu.
- 23. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifílní determinat podle nároku 22 vyznačený tím, že v koncentrování se pokračuje na žádanou konečnou koncentraci.
- 24. Způsob přípravy vakciny proteosom - amfifílní determinat podle nároku 21 vyznačený tím, že se proces provádí s různými typy amfifilních determinantů za vzniku serie komplexů proteosom - amfifilní determinant, které jsou míšeny ve stupni e) za vytvoření multivalentní vakciny.
- 25. Multivalentní vakcina připravená způsobem podle nároku 24.
- 26. Způsob ochrany proti nemoci vyznačuj ící se tím, že zahrnuje podávání vakciny podle nároku 25 příjemci v účinném množství.
- 27. Způsob ochrany proti nemoci vyznačuj ící se tím, že zahrnuje podávání vakciny připravené způsobem podle nároku 21 příjemci.Λ • Φ · φφ φ φ·· φφ φφΦΦΦ ΦΦΦ φφφφ φ ΦΦΦ · φφφφ φ ΦΦΦ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φφφφ φΦΦΦ φφ φ ΦΦΦ φφ φ φφ ΦΦΦ φφ φφ
- 28.nároku 21Multivalentní vakcina připravená postupem podleOBRÁZEK1.\\i m ·· · 44 4444 4444 ··· 4 4 4 4 4 4 4 • ··· 4 4 4 4 4 9 4 444 4 4444 444 9 · 444 44 ··· < · ·4*4 • · ♦ <4444 4 4*«Imunogenicita několika preparací vakciny proteosom Plesimonas shigelloides LPS: IgG titry anti-ShigelIa sonnei LPS v myším seru po dvou intranasálních imunisacích vakcinou obsahující 10, 1,0 nebo 0,1 gg proteinuPřípravy vakcinyDT-1 & DT-2 - Dialyzační trubiceHF-1 & HF-2 - Patrona dutých vlákenHF-2L - Patrona dutých vláken a lyofilisace GMP - Běžné zpracovatelské proceduryOBRÁZEK2.• ' ···· ·· ·· • · · · · « φ ·· • · * · · ··· ·· ·· ······· · · · 999 ·« • · * · · Φ · Φ ♦ ♦ · · ·* · Φ ΦΦImunogenicita několika preparací vakciny proteosom Plesimonas shigelloides LPS: IgA titry anti-Shigella sonnei LPS v myším seru po dvou intranasálních imunisacích vakcinou obsahující 10, 1,0 nebo 0,1 Mg proteinuPřípravy vakcinyDT-1 & DT-2 - Dialyzační trubiceHF-1 & HF-2 - Patrona dutých vlákenHF-2L - Patrona dutých vláken a lyofilisace GMP - Běžné zpracovatelské procedury iV V • 9 · 9 9 9 9·· • 99»>·9 9 9 · 99 999 • · 99·· · 9 999 • · · 9 9999 999999 ·· ·· • · ·99 99999· 99 • ·9 • 999OBRÁZEK 3IgG titry po intranasální imunisaci vakcinami proteosom Shigella LPS: simultánní a/nebo následné podávání vakcin pro S. sonnei a S. flexneri 2aProgram 1 Program 2 Program 3 Program 4Program 1 sestává z pěti myší intranasálně imunisovaných ve dnech 0 a 21 vakcinou proteosom- S. sonnei LPS (10 mikrogramů každý z proteosomů a LPS). Myším byla odebírána krev čtyři týdny po poslední imunisaci.Program 2 sestává z pěti myší intranasálně imunisovaných ve dnech 0 a 21 vakcinou proteosom- S. flexneri 2a LPS (10 mikrogramů každý z proteosomů a LPS). Myším byla odebírána krev čtyři týdny po poslední imunisaci.Program 3 sestává z pěti myší intranasálně imunisovaných ve dnech 0 a 21 vakcinou proteosom- S. sonnei LPS (10 mikrogramů každý z proteosomů a LPS) a vakcinou proteosom- S. flexneri 2a LPS (10 mikrogramů každý z proteosomů a LPS) . Myším byla odebírána krev čtyři týdny po poslední imunisaci.Program 4 sestává z pěti myší intranasálně imunisovaných ve dnech 0 a 21 vakcinou proteosom- S. sonnei LPS (10 mikrogramů každý z proteosomů a LPS) a potom ve dnech 49 a 70 vakcinou proteosom- S. flexneri 2a LPS (10 mikrogramů každý z proteosomů a LPS) . Myším byla odebírána krev čtyři týdny po poslední imunisaci S. flexneri 2a.vOBRÁZEK 4Elektronová shigelloides anti-shigella přidružené k proteosomům elektronového mikrofotografie vakcinyLPS ukazující zlatém ι. V ~V v § ·· · · · 4··« • 44 • 4 • 44« ·· • ♦· ··4 ·4 44444 4 • 4 • 44 · • 4 ·♦ proteosom labelováné ___ tomto mikrosnímku z sekundárníP.LPS r06» ·· · ··»· ·* ·· ·♦· ♦ · · ···· • ·· · ·« ·«· f ··♦ • · ···· · · · · · ·*· · « • · · 9 9 » 9 999 9 9 99 9 99 9 99 9OBRÁZEK 5.Křivky přežití myší imunisovaných vakcinou proteosom - P. shigelloides LPS ve srovnání $. kontrolními myšmi ošetřenými fysiologickým roztokem ( = šalina)Intranasální imunisace vakcinou proteosom - Plesiomonas shigelloides LPS chrání myši proti lethální pneumonii Shigella sonneiSkupiny křížených myší (skupina 14 až 15) byly imunisovány intranasálně v týdnu nula a tři vakcinou proteosom - P. shigelloides LPS (10 mikrogramů každého z proteosomů a LPS na 20 mikrolitrů). Ve stejném programu byl kontrolní skupině podán fysiologický roztok. Všem myším bylo v sedmém týdnu nasazeno intranasálně od pěti do deseti milionů kolonii tvořících jednotek S. sonnei. Myši byly denně pozorovány dva týdny po naočkování a byla zaznamenávána mortalita způsobená vzniklou plicní chorobou. Jak jsme dříve ukázali, 86 až 100 % kontrolních myší uhynulo během čtyř dní po nasazení. V obou experimentech, 93 % myší imunisovaných vakcinou přežilo po naočkování (P <0,001, Fisher-ův exaktní test).OBRÁZEK 6.Ί>ν ·· · • · · • · · · • · ···· · • · · ·· ·Intranasální a intragastrická imunogenicita vakcin proteosom-Shigella LPS ukazující indukci anti-LPS protilátek: sérum IgA a IgG stejně jako intestinální a bronchiální IgA.Nasální nebo orální vakciny proteosom-Shigella LPS u myší Anti-Shigella protilátky v seru, střevech a plicích 10, 30 a 60 dní po 2 imunisacích rplicilí ItAj int eg tinálný^jNASÁL Ni' >ri*rl P-P <0 d ΦΛ4 •P Φ ň-pORALMJIfnmuniracfe·S 101NASALNŮInauaixLOe «8 ' •S •HP m aΟ Φ •rl P 1 r-i \____ 10 dní 30 dní □60 dníI99 9 ·«««·« 9« • · · 999*999 • · · 9 9 9 999 9 9>99 9 9999 9 9 9 9 9 999 99 ••9 99 9999 ·· 9 99 9 99 99*9OBRÁZEK 7.knti-Shigella sonnei LPS imunitní odezvy dobrovolníků imunisovaných proti Shigella sonnei 1 nebo 2 dávkami vakciny proteosom - P. shigelloides
Cesta a dávka ASC (buňky vylučující protilátky čís./106PBLa Násobek vzrůstu ELISA protilátek (před/po imunisaci) Respondenti v essay ACS n. ELISA na protilátky IgG,IgA,IgM Sérum Sliny MOČ IgA IgA IgG IgM IgA IgG IgM IgA IgG 9 2 12 4 <2 <2 <2 2 6 i .η. 1 mg Intra- 49 0 45 11 4 57 4 2 18 nasálně 4 1 67 10 4 12 2 2 2 ASC: 6/6 2 2 1 4 5 <2 2 2 5 Sérum: 6/6 1 mg 476 190 220 55 34 12 9 4 35 Sliny: 3/6 143 36 47 105 11 5 10 15 50 Moč: 5/6 Respon- Celkem: 6/6 dentib: 4/6 4/6 5/6 6/6 5/6 4/6 3/6 2/6 5/6 1 2 3 3 <2 2 <2 <2 i.n. 0, 4 mg Intra- 0 0 7 <2 <2 2 <2 <2 <2 nasálně 2 11 7 <2 5 3 2 4 <2 ASC: 5/6 18 6 57 7 6 <2 <2 3 6 Sérum: 4/6 0,4 mg 3 0 1 <2 <2 6 <2 <2 <2 Sliny: 1/6 24 8 30 4 4 <2 2 <2 5 Moč 2/6 Respon- Celkem: 5/6 denti . 2/6 4/6 4/6 2/6 3/6 1/6 0/6 1/6 2/6 6 9 2 <2 16 i.n. 0, 1 mg Intra- 0 0 11 3 <2 nasálně 0 0 1 <2 <2 ASC: 3/6 20 18 42 5 3 / Sérum: 2/6 0,1 mg 2 0 0 <2 <2 Sliny: 1 0 1 <2 <2 Moč: Respon- Celkem: 3/6 dentib: 2/6 2/6 2/6 1/6 1/6 0 0 3 <2 <2 3 <2 <2 p.o. 2 mg 47 34 3 2 <2 <2 <2 7 Orálně 0 0 4 <2 <2 <2 <2 4 ASC: 3/6 7 7 2 <2 <2 <2 <2 <2 Sérum: 0/6 2 mg 3 0 3 <2 <2 3 <2 3 Sliny: 0/6 5 2 3 <2 <2 <2 <2 <2 Moč: 2/6 I «· · • ·· • · ·· • 999999 9999 9 99 99 999 99999 9 999 9· ··9 9999999 9 9· • 9999 999999 999 999OBRÁZEK 7.- pokračováníRespon- denti*5: 2/6 3/6 0/6 0/6 0/6 0/6 0/6 2/6 Celkem: 4/6 Orálně 0,5 mg 5 2 0 0 2 3 5 13 2 0 3 11 1 3 0 0 0 p.o. 0,5 mg ASC: 3/6 Sérum: Sliny: Moč: Celkem: 6/6 Respondenti*5: 1/6 2/6 0/6 aHodnoty ASC a ELISA sera = peaky odezev po 1 nebo 2 imunisacích (většina hodnot je pouze po 1 imunisaci.bRespondenti s = nebo >6,2 nebo 5 ACS na 106 PBL pro IgA, IgG resp. IgM (tyto hodnoty jsou 2 buňky > průměr všech buněk + 3 S.D. předimunisačních hodnot 30 dobrovolníků) ^Respondenti s = nebo > než čtyřnásobným nárůstem ELISA hladiny protilátek v seru ve srovnání před a po imunisaci.OBRÁZEK 8.** · ·· ···· ·· »· ··· · · · ··· • · · · · · ··· * · ·· • · «·«« o « « · · »r* « « • · · «9 · ··· ·· · ·· ··· ·· ··LPS v HPLC frakcích po aplkaci nekomplexovaných GMP P. shigelloides LPS (šarže 0232) aLPS a protein v HLPC frakcích po aplikaci GMP vakciny proteosom - P. shigelloides LPS (šarže 0238)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US385995P | 1995-09-18 | 1995-09-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ81998A3 true CZ81998A3 (cs) | 1998-10-14 |
| CZ298460B6 CZ298460B6 (cs) | 2007-10-10 |
Family
ID=21707938
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0081998A CZ298460B6 (cs) | 1995-09-18 | 1996-09-18 | Zlepšené zpusoby výroby nekovalentne komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6476201B1 (cs) |
| EP (1) | EP0854729B2 (cs) |
| JP (2) | JP4033489B2 (cs) |
| KR (1) | KR19990045763A (cs) |
| CN (1) | CN1211192A (cs) |
| AT (1) | ATE261313T1 (cs) |
| BR (1) | BR9610484A (cs) |
| CA (1) | CA2232410C (cs) |
| CZ (1) | CZ298460B6 (cs) |
| DE (1) | DE69631835T3 (cs) |
| DK (1) | DK0854729T3 (cs) |
| EA (1) | EA199800208A1 (cs) |
| ES (1) | ES2217325T5 (cs) |
| HU (1) | HUP9901577A3 (cs) |
| IL (1) | IL123720A (cs) |
| MX (1) | MX9802128A (cs) |
| NO (1) | NO320074B1 (cs) |
| PL (1) | PL325604A1 (cs) |
| PT (1) | PT854729E (cs) |
| WO (1) | WO1997010844A1 (cs) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5961970A (en) * | 1993-10-29 | 1999-10-05 | Pharmos Corporation | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| CA2332963C (en) * | 1998-05-29 | 2013-07-23 | Chiron Corporation | Combination meningitidis b/c vaccines |
| NZ581940A (en) | 1999-04-30 | 2011-07-29 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Conserved neisserial antigens |
| EP1179072A2 (en) * | 1999-05-19 | 2002-02-13 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
| EP1721618A3 (en) * | 2000-02-15 | 2007-01-10 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Proteosome influenza vaccine composition |
| EP1255561B1 (en) * | 2000-02-15 | 2006-06-28 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Proteosome influenza vaccine |
| PT1947187E (pt) | 2000-02-28 | 2011-07-04 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Expressões híbridas de proteínas de neisseria |
| WO2002072012A2 (en) * | 2001-03-09 | 2002-09-19 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | A novel proteosome-liposaccharide vaccine adjuvant |
| JP2006506467A (ja) * | 2002-08-02 | 2006-02-23 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン組成物 |
| SI2351579T1 (sl) | 2002-10-11 | 2017-05-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Polipeptidna cepiva za široko zaščito proti hipervirulentnim meningokoknim linijam |
| US7255867B2 (en) * | 2002-11-15 | 2007-08-14 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Vaccine |
| GB0316560D0 (en) * | 2003-07-15 | 2003-08-20 | Chiron Srl | Vesicle filtration |
| US7368537B2 (en) * | 2003-07-15 | 2008-05-06 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Subunit vaccine against respiratory syncytial virus infection |
| JP2007505836A (ja) * | 2003-09-15 | 2007-03-15 | アイディー バイオメディカル コーポレイション オブ ケベック | 麻疹サブユニットワクチン |
| US8173140B2 (en) | 2003-10-22 | 2012-05-08 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Compositions and methods for activating innate and allergic immunity |
| CN101039691B (zh) | 2004-06-25 | 2013-07-31 | 魁北克益得生物医学公司 | 用于治疗神经疾病的组合物和方法 |
| RU2007103343A (ru) * | 2004-06-30 | 2008-08-10 | АйДи БАЙОМЕДИКАЛ КОРПОРЕЙШН ОФ КВЕБЕК (CA) | Вакцинная композиция и способы лечения коронавирусной инфекции |
| US7552948B2 (en) | 2006-03-29 | 2009-06-30 | Tokai Rubber Industries, Ltd. | Quick connector |
| ZA200900899B (en) * | 2006-08-07 | 2010-07-28 | Harvard College | Protein matrix vaccines and methods of making and administering such vaccines |
| TWI565713B (zh) | 2006-08-07 | 2017-01-11 | 哈佛大學校長及研究員協會 | 蛋白基質疫苗以及該疫苗的製造與使用方法 |
| US20100288029A1 (en) * | 2006-08-30 | 2010-11-18 | Ge Healthcar Bio-Sciences Corp. | System and method for characterizing membranes and membrane filtration devices |
| RU2477145C2 (ru) * | 2008-05-30 | 2013-03-10 | ДЗЕ Ю.Эс.Эй., ЭС РЕПРЕЗЕНТЕД БАЙ ДЗЕ СЕКРЕТАРИ ОФ ДЗЕ АРМИ, ОН БЕХАФ ОФ УОЛТЕР РИД АРМИ | Мультивалентная вакцина из нативных везикул наружной мембраны менингококков, способы ее получения и применения |
| US20120231086A1 (en) * | 2009-09-09 | 2012-09-13 | Killen Kevin P | Protein matrix vaccines of improved immunogenicity |
| AU2015321698B2 (en) * | 2014-09-24 | 2018-06-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Combined enterotoxigenic Escherichia coli and Campylobacter jejuni recombinant construct |
| US20220226465A1 (en) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | ConserV Bioscience | Coronavirus Immunogenic Compositions, Methods and Uses Thereof |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4707543A (en) * | 1985-09-17 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Process for the preparation of detoxified polysaccharide-outer membrane protein complexes, and their use as antibacterial vaccines |
| RU1522494C (ru) * | 1987-06-16 | 1994-11-15 | Научно-производственное объединение "Иммунопрепарат" | Способ получения инактивированной вакцины гриппа |
| RU2023448C1 (ru) * | 1987-07-30 | 1994-11-30 | Сентро Насьональ Де Биопрепарадос | Способ получения вакцины против различных патогенных серотипов менингита нейссера группы в |
| US5145702A (en) * | 1988-09-19 | 1992-09-08 | Opta Food Ingredients, Inc. | Hydrophobic protein microparticles and preparation thereof |
| EP0449958B9 (en) * | 1988-12-19 | 2003-05-28 | American Cyanamid Company | Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine |
| US5102989A (en) * | 1991-03-15 | 1992-04-07 | Merck & Co., Inc. | Method of stabilizing recombinant hepatitis B virus surface proteins from recombinant host cells |
| WO1994002626A1 (en) * | 1992-07-20 | 1994-02-03 | Merck & Co., Inc. | Immunological conjugates of ompc and hiv-specific selected principal neutralization epitopes |
| US5576016A (en) * | 1993-05-18 | 1996-11-19 | Pharmos Corporation | Solid fat nanoemulsions as drug delivery vehicles |
| WO1995011700A1 (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| EP1255561B1 (en) * | 2000-02-15 | 2006-06-28 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Proteosome influenza vaccine |
-
1996
- 1996-09-18 PL PL96325604A patent/PL325604A1/xx unknown
- 1996-09-18 CN CN96197616A patent/CN1211192A/zh active Pending
- 1996-09-18 CA CA002232410A patent/CA2232410C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 EA EA199800208A patent/EA199800208A1/ru unknown
- 1996-09-18 ES ES96932269T patent/ES2217325T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 PT PT96932269T patent/PT854729E/pt unknown
- 1996-09-18 WO PCT/US1996/015002 patent/WO1997010844A1/en active IP Right Grant
- 1996-09-18 KR KR1019980702007A patent/KR19990045763A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-09-18 DE DE69631835T patent/DE69631835T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 US US09/043,529 patent/US6476201B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 AT AT96932269T patent/ATE261313T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 JP JP51287597A patent/JP4033489B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 HU HU9901577A patent/HUP9901577A3/hu unknown
- 1996-09-18 EP EP96932269A patent/EP0854729B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 IL IL12372096A patent/IL123720A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 CZ CZ0081998A patent/CZ298460B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 BR BR9610484-8A patent/BR9610484A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-09-18 DK DK96932269T patent/DK0854729T3/da active
-
1998
- 1998-03-17 NO NO19981189A patent/NO320074B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-03-18 MX MX9802128A patent/MX9802128A/es unknown
-
2003
- 2003-10-24 JP JP2003365270A patent/JP2004099619A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR19990045763A (ko) | 1999-06-25 |
| EP0854729A4 (en) | 2000-02-02 |
| ES2217325T3 (es) | 2004-11-01 |
| JP4033489B2 (ja) | 2008-01-16 |
| ATE261313T1 (de) | 2004-03-15 |
| US20020164357A1 (en) | 2002-11-07 |
| EA199800208A1 (ru) | 1998-10-29 |
| IL123720A (en) | 2002-02-10 |
| PL325604A1 (en) | 1998-08-03 |
| US6476201B1 (en) | 2002-11-05 |
| NO320074B1 (no) | 2005-10-17 |
| DK0854729T3 (da) | 2004-07-12 |
| IL123720A0 (en) | 1998-10-30 |
| EP0854729B2 (en) | 2008-10-22 |
| NO981189D0 (no) | 1998-03-17 |
| DE69631835T3 (de) | 2009-03-05 |
| CN1211192A (zh) | 1999-03-17 |
| PT854729E (pt) | 2004-08-31 |
| BR9610484A (pt) | 2001-09-11 |
| CA2232410C (en) | 2003-06-17 |
| ES2217325T5 (es) | 2009-04-01 |
| MX9802128A (es) | 1998-11-29 |
| EP0854729B1 (en) | 2004-03-10 |
| CZ298460B6 (cs) | 2007-10-10 |
| JP2000507913A (ja) | 2000-06-27 |
| DE69631835T2 (de) | 2005-02-10 |
| HUP9901577A2 (hu) | 1999-08-30 |
| HUP9901577A3 (en) | 2000-03-28 |
| JP2004099619A (ja) | 2004-04-02 |
| EP0854729A1 (en) | 1998-07-29 |
| WO1997010844A1 (en) | 1997-03-27 |
| DE69631835D1 (de) | 2004-04-15 |
| NO981189L (no) | 1998-05-14 |
| CA2232410A1 (en) | 1997-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ81998A3 (cs) | Zlepšené způsoby výroby nekovalentně komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin | |
| EP0624376B1 (en) | Preparation and uses of LOS-depleted outer membrane proteins of gram-negative cocci | |
| CN108430500B (zh) | 用于针对肠外致病性大肠杆菌的免疫保护的方法和组合物 | |
| Black et al. | Human immune response to iron-repressible outer membrane proteins of Neisseria meningitidis | |
| CA2212896C (en) | Oral vaccine against gram negative bacterial infection | |
| US6558677B2 (en) | Vaccine against gram negative bacteria | |
| Frasch et al. | Outer membrane protein vesicle vaccines for meningococcal disease | |
| Evans et al. | Plasmid-controlled colonization factor associated with virulence in Esherichia coli enterotoxigenic for humans | |
| Frasch et al. | Protection against group B Neisseria meningitidis disease: preparation of soluble protein and protein-polysaccharide immunogens | |
| US20040131642A1 (en) | Outer membrane vesicle vaccine against disease caused by neisseria meningitidis serogroup a and process for the production thereof | |
| MXPA03006038A (es) | Composiciones inmunizantes y metodos de uso. | |
| CZ281556B6 (cs) | Způsob výroby kompozitní vakcíny proti střevní infekci způsobené enterotexigenickými bakteriemi E. coli | |
| Berstad et al. | Inactivated meningococci and pertussis bacteria are immunogenic and act as mucosal adjuvants for a nasal inactivated influenza virus vaccine | |
| CA2348658C (en) | Vaccine preparations containing attenuated toxin | |
| Gulati et al. | Preclinical efficacy of a lipooligosaccharide peptide mimic candidate gonococcal vaccine. mBio 10: e02552-19 | |
| WO2004054611A1 (en) | Meningococcal vaccine based on outer membrane proteins porb2 and pora | |
| AU751063B2 (en) | Improved methods for the production of non-covalently complexed and multivalent proteosome sub-unit vaccines | |
| WO2023007456A1 (en) | A method for producing complexes of proteins with bacterial lipopolysaccharides, the use thereof, a vaccine comprising an lps/protein immunogenic complex and a method for producing the vaccine | |
| Carrasco Medina | Investigation of a leukotoxin containing immune stimulating complex (ISCOM) vaccine and early immunization in dairy calves | |
| Westerink et al. | New Concepts in Vaccines for Mucosal Non-Enteric Human Bacterial Pathogens | |
| PT98383A (pt) | Processo para a preparacao de uma proteina de classe ii da membrana exterior de neisseria meningitidis tendo propriedades de veiculo e de intensificacao imunologicas |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20160918 |