CZ306327B6

CZ306327B6 - Kompozice s regulovaným uvolňováním a způsob její výroby

Info

Publication number: CZ306327B6
Application number: CZ2003-3493A
Authority: CZ
Inventors: Kazumichi Yamamoto; Akiko Yamada; Yoshio Hata
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Company Limited
Priority date: 2001-06-29
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2016-12-07
Also published as: KR20090020708A; CY1105071T1; DE60225481T2; PT1949936E; EP1491236B1; TWI332407B; US20120283187A1; SI1949936T1; NO20035738L; DE60211464T2; NZ529969A; CN100348265C; CY1111708T1; DE60211464D1; DE60211464T3; US20110166084A1; BRPI0210561B1; CN100577206C; NO331883B1; NZ541884A

Abstract

Je popsána kompozice s regulovaným uvolňováním, obsahující fyziologicky aktivní látku ve vysokém množství, potlačující počáteční nadbytečné uvolňování a dosahující stabilní rychlosti uvolňování po delší dobu. Kompozice s regulovaným uvolňováním, která že obsahuje 1) derivát hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LH-RH nebo jeho sůl v množství 3 až 24 % hmotn./hmotn., vztaženo na celkovou hmotnost kompozice a 2) polymer složený pouze z kyseliny mléčné nebo jeho sůl, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 17 000 až 26 000, v němž obsah polymerů s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími je 5 % hmotnostních nebo méně. Tato kompozice je užitečná pro použití jako prevence nebo léčivo pro léčení rakoviny prostaty, hyperplazie prostaty, endometriózy, myomu dělohy, fibromu dělohy, předčasné puberty, dysmenorey nebo rakoviny prsu nebo jako antikoncepční činidlo.

Description

Kompozice s regulovaným uvolňováním a způsob její výroby

Oblast techniky

Předložený vynález se týká kompozice s regulovaným uvolňováním fyziologicky aktivní látky, způsobu její výroby, jejího použití jako léčivo a podobně.

Dosavadní stav techniky

Biologicky degradovatelné polymery, které mají vlastnost regulovat uvolňování, jsou užitečné například jako základní materiály mikrotobolek a podobných materiálů, které obsahují fyziologicky účinnou látku. Je známo, že jako biodegradovatelné polymery jsou užitečné polymery, které obsahují polymléčnou kyselinu, kopolymer mléčné kyseliny a kyseliny glykolové, a podobné (japonský patentový spis JP-A 11-269094 a podobné).

Jako biologicky degradovatelné polymery se používají takové, které jsou vyráběny konvenčním způsobem syntézy. Bylo však zjištěno, že ty, které se vyrábějí samotné, mají špatnou dostupnost jako základní materiál pro regulované uvolňování, protože mají nízký obsah koncových karboxylových skupin. Proto byla studována hydrolýza shora popsaného biologicky degradovatelného polymeru, který má vyšší molekulovou hmotnost, pro regulaci váženého průměru jeho molekulové hmotnosti na vhodnou úroveň před tím, než se použije jako základní materiál pro přípravek s regulovaným uvolňováním.

Polymery, které se získají hydrolýzou a promytím vodou, však mají tendenci k počátečnímu rychlému nárůstu uvolňování fyziologicky aktivní látky, což způsobuje, že tyto materiály nejsou vhodné jako základní materiál pro regulované uvolňování, i když mají příslušný vážený průměr molekulových hmotností a příslušný obsah koncových karboxylových skupin. Je tedy žádoucí zlepšení současného stavu.

Japonský patentový spis JP-A 7-97334 popisuje přípravek s regulovaným uvolňováním sestavený z fyziologicky aktivního peptidů nebo jeho soli a biologicky degradovatelného polymeru, který má na konci volnou karboxylovou skupinu, a způsob jeho výroby.

Britské patentové spisy GB 2 209 937, GB 2 234 169, GB 2 234 896 a GB 2 257 909 a evropský patentový spis EP 626 170 A2 popisují kompozici, která jako základní materiál obsahuje biologicky degradovatelný polymer obsahující ve vodě nerozpustnou sůl, jako jsou pamoáty peptidů a proteinu připravené odděleně, a způsob výroby této kompozice.

Spis WO 95/15 767 popisuje embonát (pamoát) cetrorelixu (LH-RH-antagonista) a způsob jeho výroby. Současně popisuje, že dokonce v tom případě, jestliže je pamoát zahrnut v biologicky degradovatelném polymeru, vlastnost 15 uvolňování tohoto peptidů je stejná jako u pamoátu samotného.

EP 1 158 014 popisuje proces výroby nového biologicky degradovatelného polymeru, v němž je dosažena regulace molekulové hmotnosti a obsahu volného karboxylu. Vyrobený polymer má vysokou čistotu a obsahuje malé katalytické znečištění a může se používat v přípravku s prodlouženým uvolňováním, v němž obsah polymerů majících Mw 5000 nebo menší je větší než 5 %.

EP 1 048 301 popisuje kompozice s trvalým uvolňováním vhodné pro LH-RH deriváty, obsahující polymer kyseliny D,L-mléčné sváženým průměrem molekulové hmotnosti v rozmezí 15 000 až 50 000. Není tam řádný popis polymerů kyseliny mléčné, v nichž obsah polymerů majících molekulové hmotnosti 5000 nebo menší je 5 % hmotnostních nebo méně.

- 1 CZ 306327 B6

Předměty vynálezu

Předmětem předloženého vynálezu je získat novou kompozici, která obsahuje fyziologicky aktivní látku ve vysokém obsahu a která je schopna dosáhnout stabilní rychlosti uvolňování po dlouhou dobu potlačením počátečního nadměrného uvolňování farmaceuticky aktivní látky, a způsob její výroby.

Podstata vynálezu

Autoři předloženého vynálezu, vzhledem ke shora uvedenému stavu, provedli intenzivní výzkum a nakonec uspěli ve výrobě polymeru kyseliny mléčné nebo jeho solí, které nezpůsobují okamžité počáteční nadměrné uvolňování, snížením obsahu polymeru kyseliny mléčné s nižší molekulovou hmotností, zvláště takového, který má vážený průměr molekulové hmotnosti 5000 nebo méně, v biologicky degradovatelném polymeru. Zjistili, že přípravek s regulovaným uvolňováním, který obsahuje tento polymer kyseliny mléčné nebo jeho sůl, může obsahovat fyziologicky aktivní látku v neočekávaně vysokém obsahu a že lze dosáhnout stabilní rychlosti uvolňování po dlouhou dobu tím, že se dosáhne potlačení počátečního nadbytečného uvolňování.

Autoři předloženého vynálezu na základě těchto znalostí provedli další studie. Výsledkem je dokončení předloženého vynálezu.

Předložený vynález konkrétně poskytuje:

1. kompozici s regulovaným uvolňováním, která obsahuje

1) derivát hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LH-RH nebo jeho sůl v množství 3 % hmotn./hmotn. až 24 % hmotn./hmotn. vztaženo na celkovou hmotnost kompozice a 2) polymer složený pouze z kyseliny mléčné nebo jeho sůl, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 17 000 až 26 000, v němž obsah polymerů s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími je 5 % hmotnostních nebo méně,

2. kompozici s regulovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž polymer složený pouze z kyseliny mléčné obsahuje 1,5 % hmotnostního nebo méně polymerů majících molekulové hmotnosti 3000 nebo méně,

3. kompozici s regulovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž derivát hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LH-RH znamená peptid vzorce

5-oxo-Pro-H is-T rp-Ser-T yr-Y-Leu-Arg-Pro-Z, v němž Y znamená DLeu, DAla, DTrp, DSer(tBu), D2Nal nebo DHis(ImBzl) a Z znamená HN-C2H5 nebo Gly-NH₂, nebo jeho sůl,

4. kompozici s regulovaným uvolňováním podle bodu 1, která se používá pro injekci,

5. způsob výroby kompozice s regulovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž se rozpouštědlo odstraní ze směsného roztoku derivátu hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LHRH nebo jeho soli, a polymeru složeného pouze z kyseliny mléčné nebo jeho soli, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 17 000 až 26 000, v němž obsah polymerů s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími je 5 % hmotnostních nebo méně,

6. léčivo, které obsahuje kompozici s regulovaným uvolňováním podle bodu 1,

7. kompozici s regulovaným uvolňováním podle bodu 1, která se používá jako preventivní nebo léčivé léčivo pro léčení rakoviny prostaty, hyperplazie prostaty, endometriosy, myomu dělohy, fibromu dělohy, předčasné puberty, dysmenorey nebo rakoviny prsu nebo jako antikoncepční činidlo,

8. kompozici s regulovaným uvolňováním podle bodu 1, která se používá při prevenci opětovného výskytu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.

Podrobný popis vynálezu

Fyziologicky aktivní látka použitá v předloženém vynálezu je peptidová sloučenina. Jako peptidová sloučenina jsou například výhodné fyziologicky aktivní peptidy a vhodné jsou fyziologicky aktivní peptidy s molekulovými hmotnostmi od asi 300 do asi 40 0000, s výhodou asi 400 až asi 30 000, ještě výhodněji asi 500 až asi 20 000, a podobné.

Jako fyziologicky aktivní peptid lze uvést například hormon uvolňující luteinizační hormon (LHRH).

Fyziologicky aktivní látkou použitou v předloženém vynálezu může být tato látka sama nebo farmaceuticky přijatelná sůl.

Jako takovou sůl, jestliže shora uvedená fyziologicky aktivní látka má bazickou skupinu, jako je aminová skupina, lze uvést soli s anorganickými kyselinami (nazývanými také anorganické volné kyseliny), například kyselinou uhličitou, kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou dusičnou, kyselinou boritou a podobnými, a organickými kyselinami (nazývanými také organické volné kyseliny) například kyselinou jantarovou, kyselinou octovou, kyselinou propionovou, kyselinou trifluoroctovou a podobnými, a podobně.

Jestliže má fyziologicky aktivní látka kyselinovou skupinu, jako je 20 karboxylová skupina a podobné, pak lze uvést soli s anorganickými bázemi, nazývanými také anorganické volné báze (například alkalickými kovy, jako je sodík, draslík a podobnými, kovy alkalických zemin, jako je vápník, hořčík a podobnými) a s organickými bázemi, nazývanými také organické volné báze (například organickými aminy, jako je triethylamin a podobnými, bazickými 25 aminokyselinami, jako je arginin a podobnými) a podobně. Fyziologicky aktivní peptid může tvořit komplexní sloučeninu kovu (například komplexní sloučeninu s mědí, komplexní sloučeninu se zinkem a podobně).

Jako výhodné příklady fyziologicky aktivního peptidu lze uvést LH-RH 30 deriváty nebo jejich soli účinné na onemocnění závislá na hormonech, zvláště rakovinu závislou na pohlavních hormonech (například rakovinu prostaty, rakovinu dělohy, rakovinu prsu, nádor podvěsku mozkového a podobné), onemocnění závislá na pohlavních hormonech, jako je hyperplazie prostaty, endometrióza, myom dělohy, předčasná puberta, dysmenorea, amenorea, premenstruační syndrom, syndrom mnohomístného vaječníku a podobně, antikoncepci (nebo využití zpětného vazebného efektu po tom, co se ukončí podávání léčiva, neplodnosti), a opětovného výskytu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu. Patří sem také LH-RH deriváty a jejich soli účinné na benigní nebo maligní nádory, které jsou citlivé na LH-RH, i když jsou nezávislé na pohlavních hormonech.

Mezi specifické příklady LH-RH derivátu a jeho soli patří peptidy popsané v Treatment with GnRH Analogs: Controversies and Perspectives [published by The Parthenon Publishing Group Ltd., 1996], v národním spisu japonské patentové přihlášky (vyložené) 3-503 165, v japonských patentových spisech 3-101 695, 7-97 334 a 8-259 460 a podobné.

Jako LH-RH derivát lze uvést LH-RH agonistu a LH-RH antagonistu a jako LH-RH antagonista se mohou použít například fyziologicky aktivní peptidy obecného vzorce I

-3 CZ 306327 B6

X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH₂,

[v němž X znamená N(4H₂-furoyl)Gly nebo NAc, A znamená zbytek vybraný z NMeTyr, Tyr, Aph(Atz) a NMeAph(ATz), B znamená zbytek vybraný z DLys(Nic), DCit, DLys(AzaglyNic), DLys(aAzaglyFur), DArg(Et)₂, DAph(Atz) a DhCim, a C znamená Lys(Nisp), Arg nebo hArg(Et₂)], nebo jejich soli a podobné.

Jako LH-RH agonista se používají například fyziologicky aktivní peptidy obecného vzorce II

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z,

[v němž Y znamená zbytek vybraný z DLeu, DAla, DTrp, DSerftBu), D2Nal a DHis(ImBzl) a Z znamená NH-C₂H₅ nebo Gly-NH₂], nebo jejich soli a podobně. Zvláště vhodným je peptid, v němž Y znamená DLeu a Z znamená NH-C₂H₅ (konkrétně peptid A vzorce 5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NHC₂H₅, leuprolin) nebo jeho soli (například acetát). Tyto peptidy se mohou vyrábět způsoby popsanými ve shora uvedené literatuře nebo publikacích nebo podle způsobů, které jsou s nimi ve shodě.

Zkratky, které jsou používány v této přihlášce, mají následující významy:

zkratka	název
N(4H₂-furoyl)Gly:	N-tetrahydrofuroylglycinový zbytek
NAc:	N-acetyiová skupina
D2Nal:	D-3-(2-naftyl)alaninový zbytek
D4ClPhe:	D-3-(4-chlor)fenylalaninový zbytek
D3Pal:	D-3-(3-pyridyl)alaninový zbytek
NMeTyr:	N-methyltyrosinový zbytek
Aph(Atz):	N-[5'-(3'-amino-l Ή-l ',2',4'-triazolyl)]fenylalaninový zbytek
NMeAph(Atz):	N-methyl-[5'-(3'-amino-l Ή-l ',2',9'-triazolyl)fenylalaninový zbytek
DLys(Nic):	D-(e-N-nikotinoyl)lysinový zbytek
DCit:	D-citrullinový zbytek
DLys(AzaglyN ic):	D-azaglycylnikotinoyl)lysinový zbytek
DLys(AzaglyFur):	D—(azaglycylfuranyl)lysinový zbytek
DhArg(Et₂):	D-(N,N'-diethyl)homoargininový zbytek
DAph(Atz):	D-N-[5'-(3'-amino-lTI-l ',2',4'-triazolyl)]fenylalaninový zbytek
DhCi:	D-homocitrullinový zbytek
Lys(Nisp):	(e-N-isopropyl)lysinový zbytek
hArg(Et₂):	(N,N'-diethyl)homoargininový zbytek

Jestliže jsou zkratkami reprezentovány jiné aminokyseliny, jsou tyto zkratky založeny na zkratkách podle IUPAC-IUB komise biochemické nomenklatury (Commission of Biochemical Nomenclature), (European Journal of Biochemistry 1984,138, 9 až 37.), a na konvenčních zkratkách z oblasti techniky. Jestliže aminokyseliny mají optické isomery, jsou ve formě L-aminokyselin, pokud není jinak uvedeno.

-4CZ 306327 B6

Polymer kyseliny mléčné používaný v předloženém vynálezu (zde v některých případech dále zkracovaný jako polymer kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu) znamená polymer složený pouze z kyseliny mléčné. Obvykle má obsah polymerů, které mají molekulové hmotnosti 5000 nebo méně, asi 5 nebo méně % hmotnostních, s výhodou má obsah polymerů, které mají molekulové hmotnosti 5000 nebo méně, asi 5 nebo méně % hmotnostních a obsah polymerů, které mají molekulové hmotnosti 3000 nebo méně, asi 1,5 nebo méně % hmotnostních. Dále má s výhodou obsah polymerů, které mají molekulové hmotnosti 5000 nebo méně, asi 5 nebo méně % hmotnostních, obsah polymerů, které mají molekulové hmotnosti 3000 nebo méně, asi 1,5 nebo méně % hmotnostních a obsah polymerů, které mají molekulové hmotnosti 1000 nebo méně, asi 0,1 nebo méně % hmotnostních.

Polymer kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu má vážený průměr molekulové hmotnosti obvykle od 15 000 do 50 000, s výhodou od 15 000 do 30 000, výhodněji od 17 000 do 26 000, zvláště výhodně od 17 500 do 25 500.

Dále pak polymer kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu má vážený průměr molekulové hmotnosti obvykle od 15 000 do 50 000, s výhodou od 15 000 do 40 000.

Polymer kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti, který je surovinou polymeru kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu, může být komerčně dostupným produktem nebo polymerem polymerovaným známým způsobem, a má vážený průměr molekulové hmotnosti obvykle od 15 000 do 500 000, s výhodou od 30 000 do 100 000. Jako známý způsob polymerace lze uvést například způsoby, podle kterých se kyselina mléčná kondenzačně polymeruje, například způsob, ve kterém laktid je polymerován s otevřením kruhu použitím takového katalyzátoru, jako jsou Lewisovy kyseliny nebo soli kovů, jako je například diethylzinek, triethyl-aluminium, oktylát zinečnatý a podobné, způsob, podle kterého se laktid polymeruje s otevřením kruhu v další přítomnosti derivátu hydroxykarboxylové kyseliny, jehož karboxylová skupina je chráněna, podle shora uvedeného způsobu (například mezinárodní patentový spis WO 00/35 990 a podobně) a dále způsob, podle kterého se katalyzátor za tepla přidává k laktidu, což způsobí polymeraci s otevřením kruhu (například J. Med. Chem. 1973, 16, 897, a podobné) a další způsoby.

Jako způsob polymerace lze uvést polymeraci ve velkém, při které se 15 laktid a podobné látky roztají a podrobí se polymerační reakci, a polymeraci v roztoku, při které se laktid a podobné látky rozpustí ve vhodném rozpouštědle a podrobí se polymerační reakci. Z hlediska průmyslové výroby je výhodné, mimo jiné, používat jako surovinu polymer kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu polymer získaný polymeraci v roztoku.

Jako rozpouštědlo, které rozpouští laktid v polymeračním roztoku, lze uvést například aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen, xylen a podobné, dekalin, dimethylformamid a podobná rozpouštědla.

Pro hydrolýzu polymeru kyseliny mléčné s vyšší molekulovou hmotností, získaného jak shora popsáno, se používá způsob hydrolýzy známý sám o sobě. Například je výhodné, aby se polymer kyseliny mléčné s vyšší molekulovou hmotností rozpustil ve vhodném rozpouštědle, potom se přidá voda a jestliže je to nutné, přidá se kyselina, která způsobí reakci.

Rozpouštědlem pro rozpuštění polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti může být s výhodou takové rozpouštědlo, které je schopno rozpustit tento polymer v desetinásobném nebo menším množství hmotnosti polymeru kyseliny mléčné. Konkrétně lze uvést halogenované uhlovodíky, jako je například chloroform, dichlormethan a podobné, aromatické uhlovodíky, jako je například toluen, o-xylen, m-xylen, p-xylen a podobné, cyklické ethery, jako je například tetrahydrofuran a podobné, aceton, N,N—dimethylformamid a podobné. Jestliže se to rozpouštědlo, které se může používat při hydrolýze polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti, používá při polymeraci polymeru kyseliny mléčné s vyšší molekulovou hmotností, polyme

-5CZ 306327 B6 race a hydrolýza se mohou provádět postupně po sobě bez izolace zpolymerovaného polymeru kyseliny mléčné s vyšší molekulovou hmotností.

Použité množství rozpouštědla pro rozpuštění polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti je obvykle od 0,1 do 100-násobku, s výhodou od 1 do 10-násobku, vztaženo na polymer kyseliny mléčné, který se má rozpustit.

Množství vody, které se přidává, je obvykle od 0,001 do 1-násobku hmotnosti, s výhodou od 0,01 do 0,1-násobku hmotnosti, vztaženo na polymer kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti.

Jako kyselina, jestliže je to nutné, se přidávají například anorganické kyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná a podobné kyseliny, organické kyseliny, jako je například kyselina mléčná, kyselina octová, kyselina trifluoroctová a podobné kyseliny. Výhodnou je kyselina mléčná.

Množství kyseliny, které se přidává, je obvykle od 0 do 10-násobku hmotnosti, s výhodou od 0,1 do 1-násobku hmotnosti, vztaženo na polymer kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti.

Reakční teplota u hydrolýzy je obvykle od 0 do 150 °C, s výhodou od 20 do 80 °C.

Reakční teplota hydrolýzy se liší také podle váženého průměru molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti a podle reakční teploty. Obvykle je od 10 minut do 100 hodin, s výhodou od 1 do 20 hodin.

Doba ukončení hydrolýzy se posuzuje na základě váženého průměru molekulové hmotnosti hydrolyzovaného produktu. Konkrétně - během hydrolyzačního zpracování se příslušně provádí odebírání vzorků. Vážený průměr molekulové hmotnosti hydrolyzovaného produktu ve vzorku se stanovuje změřením gelovou permeační chromatografií (GPC). Hydrolyzační zpracování se zastaví, jestliže potvrzená molekulová hmotnost je asi 15 000 až 50 000, s výhodou asi 15 000 až 30 000, výhodněji asi 17 000 až 26 000, zvláště výhodně 17 500 až 25 500.

Mezi způsoby srážení uvažovaného polymeru kyseliny mléčné obsaženého v roztoku, který obsahuje hydrolyzovaný produkt získaný podrobením polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti hydrolýzou jak shora popsáno, patří způsob, při kterém se tento roztok obsahující hydrolyzovaný produkt uvede do kontaktu s takovým rozpouštědlem, které je schopno vysrážet uvažovaný polymer kyseliny mléčné, který je v něm obsažen, a další způsoby.

Jako výhodné provedení roztoku obsahujícího hydrolyzovaný produkt lze uvést ta provedení, která se získají rozpuštěním asi 10 až 50 % hmotnostních polymeru kyseliny mléčné s váženým průměrem molekulové hmotnosti 15 000 až 50 000, s výhodou 15 000 až 30 000, výhodněji 17 000 až 26 000, zvláště výhodně 17 500 až 25 500, v takovém rozpouštědle, které je schopno rozpustit polymer kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti, jako je skupina halogenovaných uhlovodíků, jako je například chloroform, dichlormethan a podobné, skupina aromatických uhlovodíků, jako je například toluen, o-xylen, m-xylen, p-xylen a podobné, cyklický ether, jako je například tetrahydrofuran a podobné, aceton, Ν,Ν-dimethylformamid, dichlormethan, xylen a podobné.

Jako rozpouštědlo, ve kterém se může ukládat uvažovaný polymer kyseliny mléčné obsažený v roztoku obsahujícím hydrolyzovaný produkt, lze uvést alkoholy, jako je například methanol, ethanol a podobné, ethery s řetězcem, jako je například isopropylether a podobné, alifatické uhlovodíky, jako je například hexan a podobné, vodu a podobná rozpouštědla.

-6CZ 306327 B6

Množství použitého rozpouštědla, ve kterém se může ukládat uvažovaný polymer kyseliny mléěné, je obvykle od 0,1 do 100-násobku hmotnosti, s výhodou od 1 do 10-násobku hmotnosti, vztaženo na rozpouštědlo roztoku obsahujícího hydrolyzovaný produkt.

Jako výhodný specifický příklad kombinací tohoto druhu takových rozpouštědel a jejich používaného množství, lze uvést například provedení, ve kterém se v roztoku obsahujícím hydrolyzovaný produkt používající jako rozpouštědlo dichlormethan v množství 1 až 5-násobku hmotnostního, vztaženo na rozpuštěnou látku, použije isopropylether jako rozpouštědlo pro snížení rozpustnosti v množství 2 až 10-násobku hmotnostního, vztaženo na tento dichlormethan, a jiná provedení.

Teplota rozpouštědla, jestliže rozpouštědlo, ve kterém se má uložit uvažovaný rozpuštěný polymer kyseliny mléčné, se uvede do kontaktu s roztokem obsahujícím hydrolyzovaný produkt, je obvykle od -20 do 60 °C, s výhodou od 0 do 40 °C, a teplota roztoku obsahujícího hydrolyzovaný produkt je obvykle od 0 do 40 °C, s výhodou od 10 do 30 °C.

Jako způsob uvedení rozpouštědla do kontaktu s roztokem obsahujícím hydrolyzovaný produkt lze uvést způsob, podle kterého se veškerý roztok obsahující hydrolyzovaný produkt přidá najednou do rozpouštědla, způsob, podle kterého se roztok obsahující hydrolyzovaný produkt nakape do rozpouštědla, způsob, podle kterého se všechno rozpouštědlo přidá najednou do roztoku obsahujícího hydrolyzovaný produkt, způsob, podle kterého se rozpouštědlo přikape do roztoku obsahujícího hydrolyzovaný produkt, a podobné způsoby.

Polymer kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu, získaný jak shora uvedeno, je vhodný jako základní materiál pro kompozici s regulovaným uvolňováním, jelikož množství koncových karboxylových skupin je v rozsahu vhodném pro základní materiál pro kompozici s regulovaným uvolňováním.

Hmotnostní poměr fyziologicky aktivní látky v kompozici podle předloženého vynálezu je různý a závisí na druhu fyziologicky aktivní látky, na žádaném farmaceutickém účinku, na době trvání účinku a podobně. V případě fyziologicky aktivního peptidů nebo jeho soli je od asi 0,001 do asi 50 % hmotnostních, s výhodou od asi 0,02 do 40 % hmotnostních, výhodněji od asi 0,1 do asi 30 % hmotnostních, dále výhodně od asi 0,1 do asi 24 % hmotnostních, nejvýhodněji od asi 3 do asi 24 % hmotnostních.

Pojem „nerozpustnost ve vodě“ v tomto spisu znamená takový případ, v němž hmotnost látky rozpuštěné v 1 litru roztoku je 25 nebo méně miligramů, jestliže se shora uvedená látka míchá za teploty 40 nebo méně °C v destilované vodě po dobu 4 hodin.

Pojem „nepatrná rozpustnost ve vodě“ v tomto spisu znamená takový případ, v němž shora uvedená hmotnost je nad 25 mg a 5 nebo méně gramů. Jestliže shora uvedená látka znamená sůl fyziologicky aktivní látky, pro aplikaci shora uvedené definice se používá hmotnost fyziologicky aktivní látky rozpuštěné při shora uvedené operaci.

I když forma kompozice s regulovaným uvolňováním v tomto spisu není nijak zvlášť omezena, výhodnou je forma jemných částic, a zvláště výhodná je forma mikrokuliček (nazývaných také mikrotobolky v případě kompozice s regulovaným uvolňováním obsahujícím polymer kyseliny mléčné). Pojem mikrokulička znamená injektovatelnou jemnou částici ve tvaru kuličky, která může být v roztoku dispergována. Ověření formy se může provádět například pozorováním elektronovým mikroskopem skenovacího typu.

Příklady způsobu výroby kompozice s regulovaným uvolňováním (například mikrotobolky) obsahující fyziologicky aktivní látku nebo její sůl podle předloženého vynálezu a polymer kyseliny mléčné nebo jeho sůl podle předloženého vynálezu jsou uvedeny níže.

-7 CZ 306327 B6

V následujícím způsobu výroby se mohou přidat činidla (například želatina, kyselina salicylová a podobná činidla) obsahující léčivo, jestliže je to nutné, způsoby známými per se.

(I) Způsob sušení ve vodě (ii) Způsob oleje ve vodě (O/V)

Podle tohoto způsobu se nejdříve vyrobí roztok polymeru kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu (zde dále v některých případech popsaný jako biologicky degradovatelný polymer podle předloženého vynálezu) v organickém rozpouštědle. Organické rozpouštědlo použité pro výrobu kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu má s výhodou teplotu varu 120 nebo méně °C.

Jako takové organické rozpouštědlo se mohou používat například halogenované uhlovodíky (například dichlormethan, chloroform, dichlorethan, trichlorethan, tetrachlormethan a podobné), ethery (například ethylether, isopropylether a podobné), estery mastných kyselin (například ethylacetát, butyl-acetát a podobné), aromatické uhlovodíky (například benzen, toluen, xylen a podobné), alkoholy (například ethanol, methanol a podobné), acetonitril a podobná rozpouštědla. Z nich jsou výhodnými halogenované uhlovodíky, zvláště vhodný je dichlormethan. Tato rozpouštědla se mohou používat ve směsi v příslušných poměrech. V tomto případě jsou výhodnými směsné roztoky halogenovaných uhlovodíků a alkoholů, zvláště vhodným je směsný roztok dichlormethanu a ethanolu.

Koncentrace biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu v roztoku organického rozpouštědla se mění v závislosti na molekulové hmotnosti biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu a podle druhu organického rozpouštědla. Jestliže se jako organické rozpouštědlo používá například dichlormethan, je jeho koncentrace obvykle od asi 0,5 do asi 70 % hmotnostních, výhodněji od asi 1 do asi 60 % hmotnostních, zvláště výhodně od asi 2 do asi 50 % hmotnostních.

Jestliže se jako organické rozpouštědlo použije ethanol smíchaný s dichlormethanem, poměr těchto dvou rozpouštědel je obecně od asi 0,01 do asi 50 % (objemových), výhodněji od asi 0,05 do asi 40 % (objemových), zvláště výhodně od asi 0,1 do asi 30 % (objemových).

Do takto získaného roztoku biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu v organickém rozpouštědle se přidá fyziologicky aktivní látka a rozpustí se nebo se disperguje. V tomto postupu se přidané množství fyziologicky aktivní látky reguluje tak, aby horní mez hmotnostního poměru fyziologicky aktivní látky k biologicky degradovatelnému polymeru podle předloženého vynálezu byla až asi 1:1, s výhodou až asi 1:2.

Potom se výsledný roztok organického rozpouštědla obsahující kompozici složenou z fyziologicky aktivní látky nebo její soli a biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu přidá do vodné fáze. Vytvoří se tak emulze olejové fáze (O) ve vodné fázi (V). Potom se rozpouštědlo v olejové fázi odpaří. Vyrobí se tak mikrotobolka. Objem vodné fáze v tomto případě je obvykle od asi 1 do asi 10 000-násobku, výhodněji od asi 5 do asi 50 000-násobku, zvláště výhodně od asi 10 do asi 2000-násobku objemu olejové fáze.

Ke shora uvedené vnější vodné fázi se může přidat emulgační činidlo. Tímto emulgačním činidlem může být jakákoliv sloučenina za předpokladu, že může vytvořit obecně stabilní emulzi O/V. Konkrétně se mohou používat aniontová povrchově aktivní činidla (oleát sodný, stearát sodný, laurylsulfát sodný a podobná), neiontová povrchově aktivní činidla (estery mastných kyselin a polyoxyethylen-sorbitanu [Tween 80, Tween 60, dostupné od Atlas Powder] a podobné), deriváty polyoxyethylenového ricinového oleje [HCO-60, HCO-50, dostupné od NIKKO Chemicals K.K.], polyvinylpyrrolidon, polyvinylalkohol, karboxymethylcelulosa, lecithin, želatina, kyselina hyaluronová a podobné. Jakékoliv ze shora uvedených činidel se může používat samotné nebo ve

-8CZ 306327 B6 vzájemné kombinaci s jinými. Koncentrace při používání je s výhodou v rozmezí od asi 0,01 do asi 10 % hmotnostních, výhodněji v rozmezí od asi 0,05 do asi 5 % hmotnostních.

Ke shora uvedené vnější vodné fázi se může přidat činidlo pro regulaci osmotického tlaku. Toto osmotický tlak regulující činidlo s výhodou znamená takové činidlo, které po uvedení do vodného roztoku vykazuje osmotický tlak.

Takové osmotický tlak regulující činidlo může například znamenat polyalkoholy, monoalkoholy, monosacharidy, disacharidy, oligosacharidy, aminokyseliny stejně jako jejich deriváty a podobné.

Jako shora uvedené polyalkoholy se mohou používat například trihydroxyalkoholy, jako je glycerin a podobné, pentahydroxyalkoholy, jako je arabitol, xylitol, adonitol a podobné, hexahydroxyalkoholy, jako je mannitol, sorbitol, dulcitol a podobné, a další alkoholy. Ze shora uvedených jsou výhodné hexahydroxyalkoholy, zvláště výhodný je mannitol.

Shora uvedené monohydroxyalkoholy znamenají například methanol, ethanol, isopropylalkohol a podobné, při čemž výhodným je ethanol.

Jako shora uvedené monosacharidy se používají například pentosy, jako je arabinosa, xylosa, ribosa, 2-deoxyribosa a podobné, hexosy, jako je glukosa, fruktosa, galaktosa, mannosa, sorbosa, rhamnosa, fukosa a podobné, při čemž výhodné jsou hexosy.

Jako shora uvedené oligosacharidy se používají například triosy, jako je maltotriosa, rafinosa a podobné, tetrosy, jako je stachyosa a podobné, přičemž výhodnými z nich jsou triosy.

Jako deriváty shora popsaných monosacharidů, disacharidů a oligosacharidů se používají například glukosamin, galaktosamin, kyselina glukuronová, kyselina galakturonová a podobné.

Jako shora uvedené aminokyseliny se mohou používat jakékoliv L-amino-kyseliny, jako je například glycin, leucin, arginin a podobné aminokyseliny. Z nich je výhodný L-arginin.

Mohou se používat osmotický tlak regulující činidla, a to samotná nebo ve vzájemné kombinaci.

Tato osmotický tlak regulující činidla se používají v takových koncentracích, aby poskytla takový osmotický tlak vnější vodné fáze, aby byl od asi 1/50 do asi 5-násobku, s výhodou od asi 1/25 do asi 3-násobku osmotického tlaku fyziologického solného roztoku. Jestliže se jako činidlo regulující osmotický tlak používá mannitol, potom je jeho výhodná koncentrace 0,5 až 1,5 %.

Jako způsob odstranění organického rozpouštědla se používá jakýkoliv způsob, který je znám sám o sobě, nebo způsob, který je s ním v souladu. Například se podle jednoho způsobu organické rozpouštědlo odpaří za atmosférického tlaku za míchaní použitím příslušného míchadla, magnetického míchadla a podobného zařízení nebo za postupně snižovaného tlaku, nebo se podle jiného způsobu odpaří organické rozpouštědlo regulováním stupně vakua pomocí vakuového rotačního odpařováku a podobně nebo se použijí jiné způsoby.

Takto získané mikrotobolky se izolují odstřeďováním nebo filtrací a potom se volné formy fyziologicky aktivní látky, emulgačního činidla a podobných uložené na povrchu mikrotobolky několikrát opakovaně opláchnou destilovanou vodou a opět se dispergují v destilované vodě a podobně a vysuší se vymražením.

Během způsobu výroby se může přidat činidlo bránící koagulaci, aby se zabránilo koagulaci částic. Jako činidlo zabraňující koagulaci se používají například polysacharidy rozpustné ve vodě, jako je mannitol, laktosa, glukosa, škroby (například kukuřičný škrob a podobné) a podobné lát

-9CZ 306327 B6 ky, aminokyseliny, jako je glycin a podobné, a proteiny, jako je fibrin, kolagen a podobné. Z nich je výhodný mannitol.

Množství přidávaného činidla zabraňujícího koagulaci, jako je mannitol a podobná činidla, je obvykle od 0 do asi 24 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost mikrotobolky.

Po vysušení vymražováním se voda a organické rozpouštědlo obsažené v mikrotobolce mohou odstranit, jestliže je to nutné, zahříváním za takových podmínek, které nezpůsobují vzájemné napojení mikrotobolek za sníženého tlaku. S výhodou se zahřátí mikrotobolek provádí kolem teploty nebo při teplotě, která je nepatrně vyšší než přechodný bod skelného přechodu biologicky degradovatelného polymeru, změřený diferenčním skenovacím kalorimetrem za podmínek zvyšující se teploty o 10 až 20 °C za minutu. Výhodněji se zahřívání provádí za teplot kolem rozmezí teploty přechodného bodu skelného přechodu biologicky degradovatelného polymeru nebo v rozmezí od teploty jeho přechodného bodu skelného přechodu do teploty vyšší než je přechodná teplota skelného přechodu o asi 30 °C.

I když doba zahřívání může být různá, podle množství mikrotobolek a podobně, je asi 12 až asi 168 hodin, s výhodou asi 24 až asi 120 hodin, zvláště výhodně od asi 48 do asi 96 hodin po tom, co teplota samotné mikrotobolky dosáhne dané teploty.

Způsob zahřívání není nijak zvlášť omezen, pokud umožňuje stejnoměrné zahřívání sady mikrotobolek.

Jako způsob sušení zahříváním se používá například způsob sušení za zahřívání v termostatové komoře za konstantní teploty, ve fluidní komoře, v mobilní komoře nebo v peci, způsob sušení zahříváním v mikrovlnné troubě a podobné způsoby. Z těchto způsobů je výhodný způsob sušení zahříváním v termostatové komoře za konstantní teploty.

(ii) Způsob V/O/V

Nejdříve se připraví roztok biologicky degradovatelného polymeru podle 10 předloženého vynálezu v organickém rozpouštědle.

Jako organické rozpouštědlo se používají například halogenované uhlovodíky (například dichlormethan, chloroform, dichlorethan, trichlorethan, tetrachlormethan a podobné), ethery (například ethylether, isopropylether a podobné), estery mastných kyselin (například ethylacetát, butylacetát a podobné), aromatické uhlovodíky (například benzen, toluen, xylen a podobné), alkoholy (například ethanol, methanol a podobné), acetonitril a podobná rozpouštědla. Z nich jsou výhodnými halogenované uhlovodíky, zvláště vhodný je dichlormethan. Tato rozpouštědla se mohou používat ve směsi v příslušných poměrech. V tomto případě jsou výhodnými směsné roztoky halogenovaných uhlovodíků a alkoholů, zvláště vhodným je směsný roztok dichlormethanu a ethanolu.

Koncentrace biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu v roztoku organického rozpouštědla se mění v závislosti na jeho molekulové hmotnosti a druhu organického rozpouštědla. Jestliže se jako organické rozpouštědlo používá například dichlormethan, je jeho koncentrace obvykle od asi 0,5 do asi 70 % hmotnostních, výhodněji od asi 1 do asi 60 % hmotnostních, zvláště výhodně od asi 2 do asi 50 % hmotnostních.

Do roztoku biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu v organickém rozpouštědle (olejová fáze) se pak přidá roztok fyziologicky aktivní látky nebo její soli [jako rozpouštědlo se používá voda, směsný roztok vody a alkoholů (například methanolu, ethanolu a podobného)]. Tato směs se emulguje známým způsobem homogenizátorem nebo ultrazvukem a podobně. Vytvoří se tak emulze V/O.

-10 CZ 306327 B6

Objem olejové fáze, která se má smíchat, je obvykle asi 1-násobný až asi 1000-násobný, s výhodou 2-násobný až 100-násobný, výhodněji asi 3-násobný až 10-násobný vzhledem k objemu vnitřní vodné fáze.

Výsledná emulze V/O má viskozitu obvykle v rozsahu asi 10 až 10 000 cps (mPa-s) s výhodou asi 100 až 5000 cps, zvláště výhodně asi 500 a 2000 cps při asi 12 až 25 °C.

Potom se výsledná emulze V/O sestávající z fyziologicky aktivní látky a biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu přidá k vodné fázi. Vytvoří se emulze V (vnitřní vodná fáze)/O (olejová fáze)/V (vnější vodná fáze), načež se z olejové fáze odpaří rozpouštědlo. Připraví se tak mikrotobolka. Při tomto postupuje objem vnější vodné fáze obvykle od asi 1 do asi 10 000-násobku, výhodněji od asi 5 do asi 50 000-násobku, zvláště výhodně od asi 10 do asi 2000-násobku objemu olejové fáze.

Shora uvedené emulgační činidlo a osmotický tlak regulující činidlo, která se mohou přidat k vnější vodné fázi, a následující způsob přípravy jsou stejné jako ty, které byly shora popsány pod ad (I)(i).

(II) Způsob dělení fází

Když se podle tohoto způsobu vyrobí mikrotobolka, po částech se za míchání postupně přidá koacervační činidlo k roztoku organického rozpouštědla obsahujícího kompozici obsahující fyziologicky aktivní látku, popsanou u shora uvedeného způsobu sušení ve vodě ad (I), a biologicky degradovatelný polymer podle předloženého vynálezu, takže se vysráží mikrotobolka, která ztuhne. Množství koacervačního činidlo představuje množství od asi 0,01 do 1000-násobku, s výhodou od asi 0,05 do 500-násobku, zvláště výhodně od asi 0,1 do 200-násobku objemu olejové fáze.

Koacervační činidlo není zvlášť omezeno za předpokladu, že je vybráno ze sloučenin na bázi polymeru, na bázi minerálního oleje nebo na bázi sloučenin rostlinného oleje, které jsou mísitelné s organickým rozpouštědlem, a pokud nerozpouští biologicky degradovatelný polymer podle předloženého vynálezu. Konkrétně se používají například silikonový olej, sezamový olej, sójový olej, kukuřičný olej, bavlníkový olej, kokosový olej, lněný olej, minerální olej, hexan, heptan a podobné látky. Tyto se mohou používat ve směsi dvou nebo více činidel.

Takto získaná mikrotobolka se izoluje, potom se opakovaně promyje heptanem, aby se odstranilo koacervační činidlo a podobná činidla jiná než kompozice sestávající z fyziologicky aktivní látky a biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu. Zbytek se za sníženého tlaku vysuší. Promytí se alternativně provede stejným způsobem, jako je způsob shora popsaný u způsobu sušení ve vodě v odstavci ad (I) (i). Potom následuje vysušení vymražením s následujícím sušením za zahřívání.

(III) Způsob sušení rozprašováním

Jestliže se tímto způsobem vyrábí mikrotobolka, roztok nebo disperze organického rozpouštědla obsahující kompozici sestávající z biologicky degradovatelného polymeru podle předloženého vynálezu a fyziologicky aktivní látky popsané ve shora uvedeném způsobu sušení ve vodě v části ad (I), se rozprašuje tryskou do sušicí komory rozprašující sušárny (zařízení pro sušení rozprašováním), přičemž se v mimořádně krátké době odpaří organické rozpouštědlo v mikrokapičkách. Vyrobí se tak mikrotobolka. Taková tryska může znamenat například duální fluidní trysku, tlakovou trysku, trysku s rotujícím diskem a podobné. Potom může následovat promytí, jestliže je to nutné, podobným způsobem, jako je způsob popsaný u způsobu sušení ve vodě shora popsaný v části ad (I). Potom následuje sušení vymražením a sušení za zahřívání.

- 11 CZ 306327 B6

Pokud jde o jinou formu činidla než je shora uvedená mikrotobolka, může se roztok nebo disperze organického rozpouštědla, které obsahuje kompozici sestávající z fyziologicky aktivní látky, popsané ve způsobu sušení ve vodě shora uvedeného způsobu výroby mikrotobolky ad (I), a biologicky degradovatelný polymer podle předloženého vynálezu, vysušit na pevnou látku na rotačním odpařováku, kde se organické rozpouštědlo nebo voda odpaří za regulace vakua, následuje rozemletí tryskovým mlýnem a podobně, takže se získají jemné částice (mikročástice).

Potom se jemně rozemleté částice mohou promýt stejným způsobem, jako je způsob popsaný u způsobu sušení ve vodě způsobu výroby mikrotobolky ad (I). Potom následuje sušení vymrazováním a sušení za zahřívání.

Kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu může znamenat jakoukoliv formu, jako je mikrokulička, mikrotobolka, jemné částice (mikročástice) a podobně. Výhodnou je mikrotobolka.

Kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu se může podávat samostatně nebo se může používat jako výchozí materiál pro výrobu rozmanitých forem léčiva před podáváním, jako je injekční nebo implantovatelné činidlo do svalu, subkutánně, do orgánů a podobné, permukózní činidla do nosu, rekta, dělohy a podobě, orální činidla (například tobolky (tvrdé tobolky, měkké tobolky a podobné), pevná léčiva, jako jsou granule, prášek a podobné, kapalná léčiva, jako je sirup, emulze, suspenze a podobné) a podobně.

Například, pro použití kompozic s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu jako injekce, se může vyrobit vodná suspenze společně s dispergačním činidlem (například povrchově aktivním činidlem, jako je Tween 80, HCO-60 a podobné, polysacharidy, jako je hyaluronát sodný, karboxymethylcelulosou, alginátem sodným a podobně), ochranným činidlem (například methylparabenem, propylparabenem a podobným), isotonickým činidlem (například chloridem sodným, mannitolem, sorbitolem, glukosou, prolinem a podobným), nebo se disperguje společně s rostlinným olejem, jako je sezamový olej, kukuřičný olej a podobně. Získá se tak olejová suspenze, která se může použít jako injekce s regulovaným uvolňováním.

Velikost částice kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu, jestliže se používá jako suspendovaná injekce, může být s výhodou taková, aby umožňovala uspokojivý stupeň dispergování a projití jehlou injekční stříkačky. Střední velikost částic může být například od asi 0,1 do 300 pm, s výhodou od asi 0,5 do 150 pm, výhodněji od asi 1 do 100 pm.

Pro sterilizaci kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu se může použít způsob sterilizace celého výrobního způsobu, způsob sterilizace gama-paprsky, způsob, podle kterého se přidá ochranné činidlo, a podobné způsoby, ale způsob sterilizace není na ně omezen.

Jelikož kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu má nízkou toxicitu, může se používat jako bezpečné léčivo a podobně u savců (například u člověka, dobytka, prasat, psů, koček, myší, krys, králíků a podobných).

I když se dávka kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu může měnit podle druhu a obsahu fyziologicky aktivní látky, která je hlavním léčivem, podle dávkové formy, podle doby trvání uvolňování fyziologicky účinné látky, podle onemocnění objektu, podle objektu zvířete a podobně, může být výhodné efektivní množství fyziologicky aktivní látky. Dávka při podávání fyziologicky aktivní látky, která je hlavním léčivem, jestliže kompozice s regulovaným uvolňováním znamená šestiměsíční přípravek, je s výhodou vybrána v rozmezí od asi 0,01 mg do 10 mg/kg, výhodněji v rozmezí od asi 0,05 mg do 5 mg/kg dospělé osoby.

Dávka kompozice s regulovaným uvolňováním při podávání je s výhodou vybrána z rozmezí od asi 0,05 mg do 50 mg/kg, výhodněji od asi 0,1 mg do 30 mg/kg pro jednu dospělou osobu.

- 12 CZ 306327 B6

Frekvence dávky může být příslušně vybrána podle druhu a podle obsahu fyziologicky aktivní látky jako hlavního léčiva, podle léčivé formy, podle doby trvání uvolňování fyziologicky aktivní látky, podle onemocnění objektu, podle objektu živočicha a podobně, jako je například jednou za několik týdnů, jednou za měsíc, jednou za několik měsíců (například 3, 4 nebo 6 měsíců a podobně) a podobně.

Kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu se může používat jako preventivní nebo terapeutické činidlo při různých onemocněních v závislosti na druhu fyziologicky aktivní látky, která je v ní obsažena. Jestliže například obsahuje LH-RH derivát jako fyziologicky aktivní látku, může se používat jako profylaktické nebo terapeutické léčivo pro onemocnění závislá na hormonech, zvláště onemocnění závislá na pohlavních hormonech, jako jsou rakoviny závislé na pohlavních hormonech (např. rakovina prostaty, rakovina dělohy, rakovina prsu, rakovina podvěsku mozkového a podobně), při hyperplazii prostaty, endometrióze, myomu dělohy, předčasné pubertě, dysmenoree, amenoree, premenstruačním syndromu, syndromu vícemístného vaječníku a podobně, jako preventivní léčivo při opětovném výskytu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu, jako preventivní nebo terapeutické činidlo u Alzheimerovy choroby a imunitní nedostatečnosti a podobných, jako antikoncepční činidlo (nebo u prevence a léčení neplodnosti, jestliže se využije zpětnovazebný efekt po vynechání antikoncepce) a podobně. Dále pak se kompozice s regulovaným uvolňováním podle předloženého vynálezu může používat také jako preventivní nebo terapeutické činidlo u benigního nebo maligního nádoru, který není závislý na pohlavních hormonech, aleje závislý na LH-RH.

To znamená, že lze předcházet nebo léčit onemocnění závislá na hormonech, zvláště rakoviny závislé na pohlavních hormonech (například rakovinu prostaty, rakovinu dělohy, rakovinu prsu, nádor podvěsku mozkového a podobné), onemocnění závislé na pohlavních hormonech, jako je zvětšení předstojné žlázy, 30 endometrióza, hysteromyom, předčasná puberta, dysmenorea, amenorea, premenstruační syndrom, syndrom mnohomístného vaječníku a podobné, podáváním účinné dávky činidla podle tohoto vynálezu savci pro léčení nebo předcházení lze zabránit těhotenství a lze zabránit také opětovnému výskytu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.

Následující příklady a referenční příklady budou předložený vynález ilustrovat podrobně, ale vůbec neomezují rozsah tohoto vynálezu.

Příklady uskutečnění vynálezu

Vážený průměr molekulové hmotnosti a obsah každého polymeru v následujících příkladech a referenčních příkladech znamenají vážený průměr molekulové hmotnosti v pojmech polystyrenu, měřeno gelovou permeační chromatografii (GPC) použitím monodispergovaného polystyrenu jako standardní látky a obsahu každého polymeru z něho vypočteného. Všechna měření byla prováděna na zařízeních pro vysokoúčinnou GPC (vyrobeno Tosoh Corp.; HLC-8120 GPC). Jako kolony byly použity Super H 4000x2 a Super H 2000 (obě vyrobeny Tosoh Corp.). Jako mobilní fáze byl použit tetrahydrofuran při průtoku 0,6 ml/minutu. Způsob detekce je založen na diferenčním indexu lomu.

Referenční příklad 1: Syntéza polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti

Ke 230 ml dehydratovaného xylenu se přidá 4,1 ml roztoku diethylzinku v hexanu (1,0 mol/1), 1,35 g /erc-butylesteru kyseliny mléčné a 230 g DL-laktidu. Tato směs byla polymerována po dobu asi 2 hodin při teplotě 120 až 130 °C. Po ukončení reakce se do reakčního roztoku nalije 120 ml dichlormethanu a k tomuto roztoku se přidá 230 ml kyseliny trifluoroctové, aby se zastavila deprotekční reakce. Po ukončení reakce se k reakčnímu roztoku přidá 300 ml dichlor

- 13 CZ 306327 B6 methanu. Potom se reakční roztok nalije do 2800 ml isopropyletheru. Vysráží se žádaná látka. Potom se zopakuje přesrážení s dichlormethanem a isopropyletherem. Získá se tak polymer kyseliny mléčné, který má vážený průměr molekulové hmotnosti asi 40 000.

Referenční příklad 2

Polymer získaný v referenčním příkladu 1 se rozpustí v 600 ml dichlormethanu a promývá se vodou tak dlouho, dokud roztok není neutrální. Potom se přidá 70 g 90% vodného roztoku kyseliny mléčné a směs se nechá reagovat při 40 °C. Když vážený průměr molekulové hmotnosti polymeru rozpuštěného v reakčním roztoku dosáhl asi 20 000, roztok se ochladí na teplotu místnosti a nalije se do něj 600 ml dichlormethanu, aby se reakce zastavila. Tento roztok se promývá vodou tak dlouho, dokud reakční roztok není neutrální. Po promytí vodou se reakční roztok zahustí a vysuší. Získá se tak polymer kyseliny mléčné. Množství koncových karboxylových skupin výsledného polymeru kyseliny mléčné bylo asi 80 pmol na 1 g polymeru a obsah polymerů s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími byl 7,29 % hmotnostních.

Referenční příklad 3

Polymer získaný v referenčním příkladu 1 se rozpustí v 600 ml dichlormethanu a promývá se vodou tak dlouho, dokud roztok není neutrální. Potom se přidá 70 g 90% vodného roztoku kyseliny mléčné a nechají se reagovat při 40 °C. Když vážený průměr molekulové hmotnosti polymeru rozpuštěného v reakčním roztoku dosáhl asi 20 000, roztok se ochladí na teplotu místnosti a nalije se do něj 600 ml dichlormethanu, aby se reakce zastavila. Tento roztok se promývá vodou tak dlouho, dokud reakční roztok není neutrální. Reakční roztok se pak nakape do 2800 ml isopropyletheru, což způsobí vysrážení požadovaného polymeru kyseliny mléčné. Sraženina získaná dekantací se rozpustí v 600 ml dichlormethanu. Potom se roztok zahustí a vysuší se. Získá se tak 160 g polymeru kyseliny mléčné. Množství koncových karboxylových skupin výsledného polymeru kyseliny mléčné bylo asi 70 pmol na 1 g polymeru. V tabulce 1 jsou uvedeny vážený průměr molekulové hmotnosti použitého polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti, vážený průměr molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné po hydrolytickém zpracování, vážený průměr molekulové hmotnosti výsledného žádaného polymeru kyseliny mléčné a molekulární frakce.

Referenční příklady 4 až 6

Polymety kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu byly získány stejným způsobem jako v referenčním příkladu 3. V tabulce 1 jsou uvedeny vážený průměr molekulové hmotnosti použitého polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti, vážený průměr molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné po hydrolytickém zpracování, vážený průměr molekulové hmotnosti výsledného žádaného polymeru kyseliny mléčné a molekulární frakce.

-14CZ 306327 B6

[Tabulka 1]

Referenční příklad

4 5 6 7 8

Mw polymeru kyseliny mléčné o vyšší molekulové hmotnosti	40500 43600 40400 43300 38600 55000
Mw po hydrolýze	22200 22200 22700 22200 18600 27200

Mw výsledného polymeru kyseliny mléčné

22900 22200 21900 22300 19400 28200

molekulová hmotnost

frakce (%):

1 až 1000 0,03 0,07 0,00 0,01 0,08 0,04

1 až 3000 0,95 1,12 0,87 0,09 1,45 0,62

1 až 5000 3,86 4,17 3,89 3,92 4,89 2,50

Jak je zřejmé z tabulky 1, je známo, že polymer kyseliny mléčné podle předloženého vynálezu získaný způsobem podle předloženého vynálezu obsahuje frakci polymeru s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími v množství asi 5 nebo méně % hmotnostních, frakci polymeru s molekulovými hmotnostmi 3000 nebo menšími asi 1,5 nebo méně % hmotnostních a frakci polymeru s molekulovými hmotnostmi 1000 nebo menšími asi 0,1 nebo méně % hmotnostních.

Příklad 1

Připraví se roztok rozpuštěním 8,10 g polymeru DL-mléčné kyseliny (vážený průměr molekulové hmotnosti: 21 900; množství karboxylových skupin stanovené způsobem značení: 75,8 μηιοΙ/g) ve 14,15 g dichlormethanu. Celé toto množství roztoku organického rozpouštědla se odváží a smíchá se s vodným roztokem získaným rozpuštěním 0,93 acetátu peptidu A v 0,95 g destilované vody a zahřeje se na 60 °C. Tato směs se 20 vteřin emulguje homogenizátorem při 25 000 otáčkách za minutu za vzniku emulze V/O. Potom se tato emulze V/O nalije během 20 vteřin do 1 litru 0,1% (hmotn./hmotn.) vodného roztoku polyvinylalkoholu (EG-40, vyrobeného Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), jehož teplota se předtím upraví na 18,0 °C, a míchá se homomixérem rychlostí 7000 otáček za minutu. Vytvoří se tak emulze V/OA/. Tato emulze V/OA/ se míchá 3 hodiny za teploty místnosti, takže se odpaří nebo se odeženou dichlormethan a ethanol do vnější vodné fáze. Olejová fáze tímto ztuhne, potom se proseje sítem o veli

- 15 CZ 306327 B6 kosti otvorů 75 pm, promyje se pak vyčištěnou vodou, mikrotobolky se vysrážejí při 2500 otáčkách za minutu během 5 minut pomocí odstředivkového separátoru (05PR-22, Hitachi). Vysrážené mikrotobolky se izolují. Izolované mikrotobolky se opět dispergují v malém množství destilované vody, k této disperzi se potom přidá 1,00 g mannitolu, což způsobí rozpuštění. Roztok se vysuší vymražením. Potom se suší 30 hodin ve vakuu při asi 50 °C. Získá se tak prášek. Izolovaná hmotnost prášku mikrotobolek byla 5,44 g, což odpovídá izolovaným 54,17 %. Obsah peptidu A byl 8,03 %.

Příklad B2

Připraví se roztok rozpuštěním 205,5 g polymeru DL-mléčné kyseliny (vážený průměr molekulové hmotnosti: 21 400; množství karboxylových skupin stanovené způsobem značení: 76,1 pmol/g) ve 354,3 g dichlormethanu. Získá se tak roztok, který se zfiltruje za tlaku 0,2 pm filtrem (Emflow, DFA4201FRP). Teplota se upraví na 28,8 °C. Odváží se 380,4 g tohoto roztoku v organických rozpouštědlech a smíchá se s vodným roztokem získaným rozpuštěním 16,11 g acetátu peptidů A v 16,22 g destilované vody a zahřeje se na teplotu 55,4 °C. Tato směs se nahrubo emulguje mícháním 1 minutu, potom se emulguje minimixerem při 10 150 otáčkách za minutu 2 minuty za vzniku emulze V/O. Potom se tato emulze V/O ochladí na 18 °C, načež se nalije během 3 minut a 10 vteřin do 25 litrů 0,1% (hmotn./hmotn.) vodného roztoku polyvinylalkoholu (EG-40, vyrobeného Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), jehož teplota se předtím upraví na 18,7 °C, a míchá se rychlostí 7001 otáčka za minutu zařízením Homomic Line Flow (vyráběné Tokushu Kika K.K.). Získá se tak emulze V/OA/. Tato emulze V/OA/ se udržuje 30 minut při regulované teplotě asi 18,5 °C, potom se míchá 2 hodiny a 30 minut bez regulování teploty, takže se dichlormethan a ethanol odpaří nebo se dichlormethan a ethanol odeženou do vnější vodné fáze. Olejová fáze tím ztuhne, potom se prošije sítem o velikosti otvorů 75 pm, mikrotobolky se kontinuálně vysrážejí při 2000 otáčkách za minutu pomocí odstředivkového separátoru (H600S, domácí odstředivkový separátor). Vysrážené mikrotobolky se izolují. Izolované mikrotobolky se opět dispergují v malém množství destilované vody, prošijí se sítem o velikosti otvorů 90 pm, k této disperzi se potom přidá 18,85 g mannitolu, což způsobí rozpuštění. Roztok se vysuší vymražením. Získá se tak prášek. Izolovaná hmotnost prášku mikrotobolek byla 117,6 g, což odpovídá izolovaným 68,54 %. Obsah peptidů A byl 7,76 %.

Pokusný příklad 1

Asi 112 mg mikrotobolek popsaných v příkladu 1 se disperguje v 0,3 ml disperzního média (destilovaná voda obsahující rozpuštěných 0,15 mg karboxymethylcelulosy, 0,3 mg Polysorbátu 80 a 15 mg mannitolu) a tato disperze se subkutánně podá injekční jehlou 22G do zad SD krysího samce starého 7 týdnů. Po dané době po podání se krysa usmrtí, mikrotobolky zůstávající v místě podání se odeberou a kvantitativně se vyhodnotí obsah v nich obsaženého peptidů A, který se podělí počátečním obsahem. Získá se tak zbývající poměr, jak je uvedeno v tabulce 2.

[Tabulka 2] zbývající poměr: peptid A den po 187,7%

Jak je zřejmé z tabulky 2, mikrotobolky z příkladu 1 vyrobené pouze s peptidem A mohou obsahovat fyziologicky aktivní látku, dostatečně potlačují počáteční uvolňování fyziologicky aktivní látky a uvolňují léčivo dlouhou dobu přibližně konstantní rychlostí.

Pokusný příklad 2

Asi 116 mg mikrotobolek popsaných v příkladu B2 se disperguje v 0,3 ml disperzního média (destilovaná voda obsahující rozpuštěných 0,15 mg karboxymethylcelulosy, 0,3 mg Polysorbátu 80 a 15 mg mannitolu) a tato disperze se subkutánně podá injekční jehlou 22G do zad SD krysího samce starého 7 týdnů. Po dané době po podání se krysa usmrtí, mikrotobolky zůstávající v místě podání se odeberou a kvantitativně se vyhodnotí obsah v nich obsaženého peptidu A, který se podělí počátečním obsahem. Získá se tak zbývající poměr, jak je uvedeno v tabulce 3.

[Tabulka 3] zbývající poměr: peptid A den po 84,7 %

Jak je zřejmé z tabulky 3, mikrotobolka z příkladu B2 vyrobená pouze s peptidem A může obsahovat fyziologicky aktivní látku, dostatečně potlačuje počáteční uvolňování fyziologicky aktivní látky a uvolňuje léčivo dlouhou dobu přibližně konstantní rychlostí.

Referenční příklad 3

Připraví se roztok rozpuštěním 206,6 g polymeru DL-mléčné kyseliny (vážený průměr molekulové hmotnosti: 21 900) ve 354,8 g dichlormethanu. Tento roztok se zahřeje a udržuje se na přibližně 30 °C. Část 381,5 g tohoto roztoku se odváží a smíchá se s vodným roztokem získaným rozpuštěním 15,8 g acetátu leuprorelinu v 16,6 g roztoku vodné ledové kyseliny octové (0,6 g ledové kyseliny octové se rozpustí v 31,75 g destilované vody) a zahřeje se na teplotu asi 55 °C. Potom se emulguje minimixerem (vyrobený Tokushu Kika K.K.) za vzniku emulze V/O (rychlost otáčení: přibližně 10 000 otáček za minutu). Potom se tato emulze V/O ochladí na 18,0 °C a nalije se do 25 litrů 0,1% (hmotn./hmotn.) vodného roztoku polyvinylalkoholu (EG-40, vyrobeného Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.) a 1% mannitolu, jehož teplota se předtím upraví na asi 18,0 °C, a potom se sekundárně emulguje zařízením Homomic Line Flow (vyráběné Tokushu Kika K.K.) za vzniku emulze V/OA/ (rychlost rotace turbiny: asi 7000 otáček za minutu, rychlost rotace cirkulačního čerpadla: asi 2000 otáček za minutu). Tato emulze V/OA/ se suší ve vodě asi 3 hodiny, prošije se standardním sítem o velikosti otvorů 75 pm a potom se mikrotobolky kontinuálně vysrážejí použitím odstředivkového separátoru (H-600S, domácí odstředivkový separátor) (rychlost rotace: asi 2000 otáček za minutu; průtok: asi 600 ml/minutu). Vysrážené mikrotobolky se izolují. Izolované mikrotobolky se opět dispergují v malém množství destilované vody, prošijí se standardním sítem o velikosti otvorů 90 pm, k této disperzi se potom přidá 18,9 g mannitolu a směs se lyofilizuje použitím lyofilizátoru (Triomaster, vyráběný Kyouwa Sinkuu K.K.). Získá se tak prášek (prášek mikrokuliček). Obsah acetátu leuprorelinu v získaných mikrokuličkách byl 8,2 %, izolováno bylo asi 75 %. V/O emulze se může s úspěchem získat přidáním kyseliny octové a dispergovatelnost získaných mikrotobolek lze zlepšit přidáním mannitolu do vnější vodné fáze.

- 17CZ 306327 B6

Pokusný příklad Referenční příklad C8

Asi 110 mg mikrotobolek získaných v referenčním příkladu 3 se disperguje v 0,3 ml disperzního média (destilovaná voda obsahující rozpuštěných 0,15 mg karboxymethyícelulosy, 0,3 mg Polysorbátu 80 a 15 mg mannitolu) a tato disperze se subkutánně podá injekční jehlou 22G do zad SD krysího samce starého 7 týdnů. Po dané době po podání se krysa usmrtí, zbývající mikrotobolky zůstávající v místě podání se odeberou a kvantitativně se vyhodnotí v nich obsažený peptid A, který se podělí počátečním obsahem. Získá se tak zbývající poměr, jak je uvedeno v tabulce 4.

[Tabulka 4]

zbývající poměr: peptid A
1 den po	96,6 %
2 týdny po	89,8 %
4 týdny po	84,1 %

Jak je zřejmé z tabulky 4, mikrotobolky z příkladu 3 vyrobené přidáním pouze peptidu A mohou obsahovat fyziologicky aktivní látku s vysokou účinností zachycování, mají dobrou dispergovatelnost a také potlačují počáteční nadměrné uvolňování fyziologicky aktivní látky. Dále pak tato mikrotobolka uvolňuje fyziologicky aktivní látku velmi dlouhou dobu konstantní rychlostí.

Průmyslová využitelnost

Přípravek s trvalým uvolňováním podle předloženého vynálezu může obsahovat fyziologicky aktivní látku s vysokým obsahem, potlačuje nadměrné počáteční uvolňování a udržuje si stabilní rychlost uvolňování po dlouhou dobu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kompozice s regulovaným uvolňováním, vyznačující se tím, že obsahuje 1) derivát hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LH-RH nebo jeho sůl v množství 3 až 24 % hmotn./hmotn. vztaženo na celkovou hmotnost kompozice a 2) polymer složený pouze z kyseliny mléčné nebo jeho sůl, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 17 000 až 26 000, v němž obsah polymerů s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími je 5 % hmotnostních nebo méně.
2. Kompozice s regulovaným uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že polymer složený pouze z kyseliny mléčné obsahuje 1,5 % hmotnostního nebo méně polymerů majících molekulové hmotnosti 3000 nebo méně.

-18CZ 306327 B6
3. Kompozice s regulovaným uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že derivát hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LH-RH znamená peptid vzorce

5-oxo-Pro-Hi s-T rp-Ser-T yr-Y-Leu-Arg-Pro-Z, v němž Y znamená DLeu, DAla, DTrp, DSer(tBu), D2Nal nebo DHis(ImBzl) a Z znamená HNC₂H₅ nebo Gly-NH₂, nebo jeho sůl.
4. Kompozice s regulovaným uvolňováním podle nároku 1 pro použití pro injekci.
5. Způsob výroby kompozice s regulovaným uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že se rozpouštědlo odstraní ze směsného roztoku derivátu hormonu uvolňujícího luteinizační hormon LH-RH nebo jeho soli, a polymeru složeného pouze z kyseliny mléčné nebo jeho soli, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 17 000 až 26 000, v němž obsah polymerů s molekulovými hmotnostmi 5000 nebo menšími je 5 % hmotnostních nebo méně.
6. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici s regulovaným uvolňováním podle nároku 1.
7. Kompozice s regulovaným uvolňováním podle nároku 1 pro použití jako preventivní nebo léčivé léčivo pro léčení rakoviny prostaty, hyperplazie prostaty, endometriózy, myomu dělohy, fibromu dělohy, předčasné puberty, dysmenorey nebo rakoviny prsu nebo jako antikoncepční činidlo.
8. Kompozice s regulovaným uvolňováním podle nároku 1 pro použití při prevenci opětovného výskytu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.