CZ297904B6 - Derivát epothilonu - Google Patents

Abstract

Deriváty epothilonu obecného vzorce V', ve kterémQ je vybráno ze souboru sestávajícího z skupin vzorce Q.sub.1.n. a Q.sub.2.n., G je skupina vzorce G.sub.1.n., W je NH; X a Y jsou O; Z.sub.1.n. a Z.sub.2.n. jsou kazdý CH.sub.2.n.; B.sub.1.n. a B.sub.2.n. jsou OH; R.sub.1.n., R.sub.2.n., R.sub.3.n., R.sub.4.n., R.sub.5.n., R.sub.7.n. a R.sub.12.n.jsou vybrány ze souboru sestávajícího z vodíku a nizsího alkylu; R.sub.6.n. je methyl; R.sub.8.n. je vodík nebo methyl a R.sub.11.n. je vybráno ze souboru sestávajícího z skupin vzorce R.sub.11.n..sup.1.n. a R.sub.11.n..sup.2.n., R je vodík, nizsí alkyl nebo nizsí alkyl substituovaný OH; a jejich stereomery.

Description

Deriváty epothilonu obecného vzorce V, ve kterém Q je vybráno ze souboru sestávajícího z skupin vzorce Qi a Q₂, G je skupina vzorce G_b W je NH; X a Y jsou O; Z| a Z₂ jsou každý CH₂; Bj a B₂ jsou OH; R_b R₂, R₃, R4, R₅, R₇ a R_]2 jsou vybrány ze souboru sestávajícího z vodíku a nižšího alkylu; R_ó je methyl; R₈ je vodík nebo methyl a Rn je vybráno ze souboru sestávajícího z skupin vzorce Rn¹ a Rn², Rje vodík, nižší alkyl nebo nižší alkyl substituovaný OH; ajejich stereomery.

CO

R,

979

Derivát epothilonu

Oblast techniky

Tento vynález se týká derivátů epothilonu. Zmiňují se také způsoby přípravy těchto derivátů a meziprodukty pro jejich přípravu.

Dosavadní stav techniky

Epothilony jsou makrolidové sloučeniny, které nacházejí uplatnění v oblasti farmacie. Například se zjistilo, že epothilony A a B, které mají následující strukturu:

I Epothilon A R = H

II Epothilon B R = Me vykazují stabilizující vliv na mikrotubuly, podobně jako TAXOL, a proto cytotoxické působení proti rychle zhoubně bujícím buňkám, jako nádorovým buňkám nebo proti jiným buněčným hyperproliferačním onemocněním, viz Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 13/14, 35 (1996).

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je derivát epithilonu obecného vzorce V'

ve kterém

Q je vybráno ze souboru sestávajícího z

G je

- 1 CZ 297904 B6

W je NH;

X je O;

Y je O;

Z] a Z₂ jsou každý CH₂;

B] a B₂ jsou OH;

R_b R₂, R₃, R4, R5, R7 a Ri₂ jsou vybrány ze souboru sestávajícího z vodíku a nižšího alkylu;

Ré je methyl;

Rs je vodík nebo methyl a

R11 je

nebo

kde

R je vodík, nižší alkyl nebo nižší alkyl substituovaný OH;

ajejich stereomery, kde výraz „nižší alkyl“ se týká přímé nebo rozvětvené nesubstituovaná uhlovodíkové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku.

Výhodnou formou tohoto vynálezu je derivát epithilonu uvedený svrchu, kde

Q je skupina vzorce

R_g je methyl a

Rn je

R je methyl nebo hydroxymethyl.

-2CZ 297904 B6

Zvláštní formou tohoto vynálezu je derivát epithilonu vzorce

nebo jeho stereoizomer.

Jinou zvláštní formou tohoto vynálezu je derivát epithilonu vzorce

Výhodnou formou tohoto vynálezu je derivát epithilonu, který je vybrán ze souboru zahrnujícího [4S-[4R* ,7S *, 8R* ,9R*, 15 R*(E)] ]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-16-[ 1 -methy 1-2-(2methyl^l-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(E)-cyklohexadecen-2,6-dion, [ 1 S-[ 1 R*,3R*(E),7R*, 1 OS *, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,11 -dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methyl-4-th iazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion, [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-7,ll-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]^4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(Z)-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[1 -methyl-2-(2-hydroxymethyl-4-thiazolyl)ethenyl]^l-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan5,9-dion a [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2hydroxymethyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(Z)-cyklohexadecen-2,6-dion, přičemž obzvláště výhodnou formou podle tohoto vynálezu je derivát epithilonu, kterým je [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-7,ll-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methy 1-2-(2-methy l-4-thiazoly l)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion.

-3CZ 297904 B6

Dále se uvádí podrobnější údaje vztahující se k tomuto vynálezu. Současně se uvádějí údaje, které umožňují zařadit předmětný vynález do širších souvislostí.

Sloučeniny obecného vzorce V' podle tohoto vynálezu spadají mezi sloučeniny obecného vzorce V

(v ) J kde Q je vybráno ze skupiny obsahující

G je vybráno ze skupiny obsahující alkyl, substituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, heterocykloskupinu,

W je atom kyslíku nebo NR45;

X je atom kyslíku nebo Η, H;

Y je vybráno ze skupiny obsahující atom kyslíku; atom vodíku, OR_i6; OR17, OR_I7; NOR|_g; atom vodíku, NOR^; atom vodíku, NR20R21; Η, H; nebo CHR22; OR_!7ORi₇ může být cyklický ketal;

Z] a Z₂ jsou vybrány ze skupiny obsahující CH₂, atom kyslíku, NR₂₃, atom síry nebo SO₂, přičemž pouze jedna skupina Z₃ nebo Z₂ může být heteroatomem;

B] a B₂ jsou vybrány ze skupiny obsahující OR₂4 nebo OCOR₂₅ nebo O₂CNR₂₆R₂₇, pokud Bi je atom vodíku a Y je OH, H pak mohou tvořit šestičlenný ketalový nebo acetalový kruh;

D je vybráno ze skupiny obsahující NR₂₈R₂9, NR₃₀COR₃i nebo nasycený heterocyklus;

Rb R2, R3, R4, R5, Re, R7, R13, R14, Ris, R19, R20, R21, R22, R26 a R27 jsou vybrány ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl nebo aryl a pokud jsou R] a R₂ alkyly, mohou být spojeny za vzniku cykloalkylu, jsou-li R₃ a R4 alkyly, mohou být spojeny za vzniku cykloalkylu;

R9, R10, Rió, R17, R24, R25 a R₃i jsou vybrány ze skupiny obsahující atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl;

-4CZ 297904 B6

Rs, Rii, R12, R₂8, R30, R32, R33 a R30 jsou vybrány ze skupiny obsahující atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, aryl, substituovaný aryl, cykloalkyl nebo heterocykloskupinu;

Říš, R₂3 a R₂9 jsou vybrány ze skupiny obsahující atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, aryl, substituovaný aryl, cykloalkyl, heterocykloskupinu, R₃₂C=O, R₃₃SO₂, hydroxyskupinu, O-alkyl nebo O-substituovaný alkoxyl;

a kterékoli jejich soli, solváty a hydráty.

Podmínka

Tento vynález nezahrnuje sloučeniny obecného vzorce V, kde

W a X jsou oba atomy kyslíku;

Ri, R₂ a R₇ jsou atomy vodíku;

R₃, R4 a Ré jsou methyly; a

Rs je atom vodíku nebo methyl; a

Zi a Z₂ jsou skupinou CH₂; a

G je l-methyl-2-(substituovaný-4-thiazolyl)ethenyl;

Q má stejný význam jako se uvádí výše.

Podrobný popis vynálezu

Níže se uvádějí definice různých termínů použitých pro popis tohoto vynálezu. Tyto definice se vztahují k termínům, jak se používají v celém tomto popisu vynálezu, kromě omezení ve zvláštních případech, buď jednotlivě, nebo jako část větší skupiny.

Termín „alkyl“ se týká lineárního nebo větveného řetězce nesubstituováných uhlovodíkových skupin obsahujících 1 až 20 atomů uhlíku, výhodně 1 až 7 atomů uhlíku. Vyjádření „nižší alkyl“ se týká nesubstituovaných alkylových skupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku.

Termín „substituovaný alkyl“ se týká alkylové skupiny substituované například jedním až čtyřmi substituenty, jako halogenem, trifluormethylem, trifluormethoxy-, hydroxy-, alkoxy-, cykloalkoxy-, heterocyklooxyskupinou, oxoskupinou, alkanoylovou skupinou, aryloxy-, alkanoyloxy-, amino-, alkylamino-, arylamino-, aralkylamino-, cykloalkylamino-, heterocykloaminoskupinou, disubstituovanými aminy, ve kterých jsou 2 substituenty aminu vybrány z alkylu, aiylu nebo arylalkylu, alkanoylamino-, aroylamino-, arylalkanoylaminoskupinou, substituovanou alkanoylaminoskupinou, substituovanou arylaminoskupinou, substituovanou aralkanoylaminoskupinou, thio-, alkylthio-, arylthio-, aralkylthio-, cykloalkylthio-, heterocyklothio-, alkylthiono-, arylthiono-, arylalkylthionoskupinou, alkylsulfonylovou skupinou, arylsulfonylovou skupinou, arylalkylsulfonylovou skupinou, sulfonamidoskupinou (např. SO₂NH₂), substituovanou sulfonamidoskupinou, nitro-, kyano-, karboxyskupinou, karbamylem (např. CONH₂), substituovaným karbamylem (např. CONH-alkyl, CONH-aryl, CONH-arylalkyl nebo případy, ve kterých jsou na atomu dusíku dva substituenty vybrané z alkylu, arylu nebo aralkylu), alkoxykarbonylem, arylem, substituovaným arylem, guanidino- a heterocykloskupinami, jako indolylem, imidazolylem, furylem, thienylem, thiazolylem, pyrrolidylem, pyridylem, pyrimidylem a podobně. Pokud se výše zmiňuje, že substituent je dále substituován, bude se jednat o substituci halogenem, alkylem, alkoxyskupinou, arylem nebo aralkylem.

-5CZ 297904 B6

Termín „halogen“ se týká fluoru, chloru, bromu a jodu.

Termín „aryl“ se týká monocyklických nebo bicyklických aromatických uhlovodíkových skupin obsahujících 6 až 12 atomů uhlíku v kruhové části, jako fenylových, naftylových, bifenylových a difenylových skupin, přičemž každá z nich může být substituována.

Termín „aralkyl“ se týká arylové skupiny přímo vázané na alkylovou skupinu, jako benzylu.

Termín „substituovaný aryl“ se týká arylové skupiny substituované například jedním až čtyřmi substituenty, jako alkylem, substituovaným alkylem, halogenem, trifluormethoxyskupinou, trifluormethylem, hydroxy-, alkoxy-, cykloalkoxy-, heterocyklooxyskupinou, alkanoylovou skupinou, alkanoyloxy-, amino-, alkylamino-, aralkylamino-, cykloalkylamino-, heterocykloamino-, dialkylamino-, alkanoylaminoskupinou, thio-, alkylthio—, cykloalkylthio-, heterocyklothio-, ureido-, nitro-, kyano-, karboxyskupinou, karboxyalkylem, karbamylem, alkoxykarbonylem, alkylthiono-, arylthionoskupinou, alkylsulfonylem, sulfonamido-, aryloxyskupinou a podobně. Substituent může být dále substituován halogenem, hydroxyskupinou, alkylem, alkoxyskupinou, arylem, substituovaným arylem, substituovaným alkylem nebo aralkylem.

Termín „cykloalkyl“ se týká případně substituovaných, nasycených uhlovodíkových kruhových soustav, výhodně obsahujících 1 až 3 kruhy a 3 až 7 atomů uhlíku v kruhu, které mohou být dále kondenzovány s nenasyceným karbocyklickým kruhem obsahujícím 3 až 7 atomů uhlíku. Příkladné skupiny zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklodecyl, cyklododecyl a adamantyl. Příkladné substituenty zahrnují jednu nebo více alkylových skupin jak jsou uvedeny výše nebo jednu nebo více skupin popsaných výše jako alkylové substituenty.

Termíny „heterocyklus“, „heterocyklický“ a „heterocyklo-“ se týkají případně substituované, plně nasycené nebo nenasycené, aromatické nebo nearomatické kruhové skupiny, která je například 4- až 7-člennou bicyklickou, 7- až 11-člennou bicyklickou nebo 10- až 15-člennou tricyklickou kruhovou soustavou, která má alespoň jeden heteroatom v alespoň jednom kruhu obsahujícím atomy uhlíku. Každý kruh heterocyklické skupiny obsahující heteroatom může mít 1, 2 nebo 3 heteroatomy vybrané z atomů dusíku, atomů kyslíku a atomů síry, přičemž heteroatomy dusíku a síry mohou být dále oxidovány a dusíkové heteroatomy mohou být dále kvarterizovány. Heterocyklická skupina se může vázat na kterýkoli heteroatom nebo atom uhlíku.

Příkladné monocyklické heterocyklické skupiny zahrnují pyrrolidinyl, pyrrolyl, indolyl, pyrazolyl, oxetanyl, pyrazolinyl, imidazolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, oxazolyl, oxazolidinyl, izoxazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, thiazolidinyl, izothiazolyl, izothiazolidinyl, furyl, tetrahydrofuryl, thienyl, oxadiazolyl, piperidinyl, piperazinyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperidinyl, 2-oxopyrolidinyl, 2-oxazepinyl, azepinyl, 4-piperidonyl, pyridyl, N-oxopyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, tetrahydropyranylsulfon, morfolinyl, thiomorfolinyl, thiomorfolinylsulfoxid, thiomorfolinylsulfon, zbytek 1,3-dioxolanu a tetrahydro1,1-dioxothienyl, dioxanyl, izothiazolidinyl, thietanyl, thiiranyl, triazinyl a triazolyl a podobně.

Příkladné bicyklické heterocyklické skupiny zahrnují benzthiazolyl, benzoxazolyl, benzthienyl, chinuklidinyl, chinolinyl, chinolinyl-N-oxid, tetrahydroizochinolinyl, izochinolinyl, benzimidazolyl, benzpyranyl, indolizinyl, benzofuryl, chromonyl, kumarinyl, cinnolinyl, chinoxalinyl, indazolyl, pyrrolpyridyl, furopyridinyl (jako furo[2,3-c]pyridyl, fůro[3,1—b]pyridyl nebo furo[2,3-b]pyridyl), dihydroizoindolyl, dihydrochinazolinyl (jako 3,4-dihydro-4-oxochinazolinyl), benzizothiazolyl, benzizoxazolyl, benzodiazinyl, benzofurazanyl, benzothiopyranyl, benzotriazolyl, benzotriazolyl, dihydrobenzofuryl, dihydrobenzothienyl, dihydrobenzothiopyranyl, dihydrobenzothiopyranylsulfon, dihydrobenzopyranyl, indolinyl, izochromanyl, izoindolinyl, nafthyridinyl, ftalazinyl, piperonyl, purinyl, pyridopyridyl, chinazolinyl, tetrahydrochinolinyl, thienofuryl, thienopyridyl, thienothienyl a podobně.

-6CZ 297904 B6

Příkladné substituenty zahrnují jednu nebo více alkylových skupin, jak se popisují výše, nebo jednu nebo více skupin výše popsaných jako alkylové substituenty. Zahrnují také menší heterocykly, jako epoxidy a aziridiny.

Termín „heteroatom“ zahrnuje kyslík, síru a dusík.

Sloučeniny obecného vzorce V mohou tvořit soli s alkalickými kovy, jako sodíkem, draslíkem a lithiem, s kovy alkalických zemin, jako vápníkem nebo hořčíkem, s organickými bázemi, jako dicyklohexylaminem, tributylaminem, pyridinem a aminokyselinami, jako argininem, lysinem a podobně. Takové soli se mohou získat například záměnou protonů karboxylové kyseliny ve sloučeninách obecného vzorce V, pokud obsahují karboxylovou kyselinu, požadovaným iontem, v prostředí, ve kterém se sůl sráží nebo ve vodném prostředí s následným odpařením. Jiné soli mohou vznikat, jak je odborníkovi v oboru známo.

Sloučeniny obecného vzorce V tvoří soli s různými organickými a anorganickými kyselinami. Takové soli zahrnují soli, které se tvoří s chlorovodíkem, bromovodíkem, kyselinou methansulfonovou, kyselinou hydroxyethansulfonovou, kyselinou sírovou, kyselinu octovou, kyselinou trifluoroctovou, kyselinou maleinovou, kyselinou benzensulfonovou, kyselinou toluensulfonovou a různými jinými kyselinami (např. nitráty, fosfáty, boráty, tartaráty, citráty, sukcináty, benzoáty, askorbáty, salicyláty a podobně). Takové soli se tvoří reakcí sloučeniny obecného vzorce V s ekvivalentním množstvím kyseliny v prostředí, ve kterém se sůl sráží nebo ve vodném prostředí a následným odpařením.

Navíc se tvoří obojetné ionty („vnitřní soli“).

Sloučeniny obecného vzorce V mohou také mít formy prekurzoru léčiva. Kterákoli sloučenina, která se konvertuje in vivo a poskytne bioaktivní činidlo (tj. sloučeninu pro obecného vzorce V) je prekurzorem léčiva v rozsahu a duchu tohoto vynálezu.

Například sloučeniny obecného vzorce V mohou tvořit esterovou skupinu karboxylátu skupinu. Estery karboxylátu se vhodně tvoří esterifikací kterýchkoli funkčních skupin karboxylové kyseliny nalézajících se na popisované kruhové struktuře (strukturách).

V obou jsou dobře známy různé formy prekurzorů léčiva. Pro příklady takových prekurzorových derivátů viz:

a) Design of Prodrugs, vydal H. Bundgaard, (Elsevier) (1985) a Methods in Enzymology, 42, 309 až 396, vydal K. Widder a kol. (Academie Press) (1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, vydal Krosgaard-Larsen a H. Bundgaard, Kapitola 5, „Design and Application of Prodrugs“, H. Bundgaard, str. 113 až 191 (1991);

c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1 až 38 (1992);

d) H. Bundgaard a kol., Joumal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1998) a

e) N. Kakeya a kol., Chem. Phar. Bull., 32, 692 (1984).

Rozumí se dále, že solváty (např. hydráty) sloučenin obecného vzorce V jsou v rozsahu tohoto vynálezu. Způsoby solvatace jsou v oboru obecně známy.

-7CZ 297904 B6

Použití a prospěšnost

Sloučeniny obecného vzorce V jsou prostředky stabilizující mikrotubuly. Mohou se tedy používat při léčení různých karcinomů nebo jiných onemocnění spojených s abnormální proliferací, včetně následujících (bez omezení pouze na ně):

- rakoviny, včetně rakoviny močového měchýře, prsu, tlustého střeva, ledvin, jater, plic, vaječníku, slinivky břišní, žaludku, děložního hrdla, štítné žlázy a kůže; včetně spinocelulámího karcinomu;

- krvetvorných nádorů lymfoidního původu, včetně leukémie, akutní lymfocytámí leukémie, akutní lymfoblastické leukémie, lymfomu B-buněk, lymfomu T-buněk, Hodgkinova lymfomu, non-Hodgkinova lymfomu, lymfomu vlasových buněk a Burkettova lymfomu;

- krvetvorných nádorů myeloidního původu, včetně akutní a chronické myelogenní leukémie a promyelocytické leukémie;

nádorů mesenchymálního původu, včetně zhoubného nádoru vazivové tkáně a zhoubného nádoru příčně pruhované svaloviny;

- jiných nádorů, včetně nádoru tvořeného z pigmentových buněk, nádoru varlete, nádoru u nezralých tkání různého druhu, zhoubného nádoru zárodečné tkáně zárodečného typu a gliomu;

- nádorů centrální a periferní nervové soustavy, včetně nádoru podpůrné tkáně nervové, zhoubného nádoru zárodečné tkáně zárodečného typu, gliomu a schwannomas·,

- nádorů mesenchymálního původu, včetně zhoubného nádoru vazivové tkáně, zhoubného nádoru příčně pruhované svaloviny a zhoubného nádoru kosti;

- jiných nádorů, včetně nádoru tvořeného z pigmentových buněk, xenoderma pigmentosum, keratoactanthomy, nádoru varlete, rakoviny štítného váčku a nádoru nezralých tkání různého druhu.

Sloučeniny obecného vzorce V mohou také potlačovat angiogenesi nádoru, čímž ovlivňuje nadměrné zhoubné buněčné bujení. Tyto antiangiogenní vlastnosti sloučenin obecného vzorce V mohou být užitečné v léčení jistých forem slepoty souvisejících s cévním zásobením sítnice, artritidy, zvláště zánětlivé artritidy, roztroušené sklerózy, restinózy a lupénky.

Sloučeniny obecného vzorce V mohou přivodit nebo potlačit apoptózu, fyziologický děj zámku buňky kritický pro běžný vývoj a homeostázi. Střídání apoptotických cest přispívá ke vzniku a vývoji chorobných změn u různých onemocnění lidí. Sloučeniny obecného vzorce V, jako modulátory apoptózy, budou užitečné v léčení různých onemocnění lidí s odchylkami v apoptóze, včetně rakoviny (zvláště folikulámích lymfomů, karcinomů s mutací p53, nádorů prsu, předstojné žlázy a vaječníku, závislých na hormonech a předrakovinných lézí, jako familiární adenomatózní polypózy, ale bez omezení pouze na ně), virových infekcí (včetně herpesviru, neštovic, viru Epstein-Barrové, viru Sindbis a adenoviru, ale bez omezení pouze na ně), autoimunitních onemocnění (včetně systemického zarudlého sžíravého vředu, imunně zprostředkované glomerulonefritidy, revmatoidní artritidy, lupénky, zánětlivého onemocnění střev a autoimunitní cukrovky, ale bez omezení pouze na ně), neurodegenerativních onemocnění (včetně Alzheimerovy choroby, demence spojené s AIDS, Parkinsonovy choroby, amyotropické laterální sklerózy, pigmentózního zánětu sliznice, zakrnění páteřního svalstva a degenerace mozečku, ale bez omezení pouze na ně), AIDS, myelodysplastických syndromů, aplastické chudokrevnosti, infarktů myokardu spojených s ischemickým poškozením mrtvice a reperfusních poškození, arytmie, aterosklerózy, onemocnění jater vyvolaného toxinem nebo alkoholem, hematologického onemocnění (včetně ale bez omezení na chronické anemie a aplastické anemie), degenerativního onemocnění svalověkos

-8CZ 297904 B6 těmi soustavy (včetně ale bez omezení na osteoporózy a artritidy), rhinosinusitidy při citlivosti na aspirin, cystické fíbrózy, roztroušené sklerózy, onemocnění ledvin a rakovinné bolesti.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou také užitečné v kombinaci se známými protirakovinnými a cytostatickými činidly a léčivy, včetně ozařování. Připraví-li se v pevných dávkách, využívají takové kombinované prostředky sloučenin podle tohoto vynálezu v rozmezí dávek popsaném níže a jiných farmaceuticky účinných činidel v doporučených rozmezích dávek. Sloučeniny obecného vzorce V se mohou používat postupně se známými protirakovinnými a cytostatickými činidly a léčivy, včetně ozařování, pokud není kombinovaný prostředek nevhodný. Zvláště účinná jsou kombinace cytostatických léčiv, ve kterých působí druhé léčivo v odlišném stadiu buněčného cyklu, např. v S-fázi, než přítomné sloučeniny obecného vzorce V, které projevují svůj účinek v G₂-M fázi.

Např. inhibitory thymidilátsyntázy, činidla způsobující zesítění DNA, inhibitory topoizomerázy I a II, činidla způsobující alkylaci DNA, inhibitory ribonukleosidreduktázy, cytotoxické faktoiy, např. TNF-α nebo inhibitory růstového faktoru, např. HER2 receptorů MAB.

Předkládané sloučeniny se mohou vyskytovat v násobných optických, geometrických izomerech a stereoizomerech. V rozsahu tohoto vynálezu jsou všechny takové izomery a jejich směsi.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou zpracovávat s farmaceutickými pomocnými prostředky nebo rozpouštědly pro ústní, nitrožilní nebo podkožní podávání. Farmaceutické prostředky se mohou zpracovávat běžným způsobem za použití pevných nebo kapalných pomocných prostředků, ředidel a doplňkových přísad vhodných pro požadovaný způsob podávání. Ústně se sloučeniny mohou podávat v podobě tablet, kapslí, granulí, prášků a podobně. Sloučeniny se podávají v dávkách v rozmezí od 0,05 do 200 mg.kg ¹ za den, výhodně méně než 100 mg.kg ¹ za den v jedné dávce nebo se toto množství rozdělí do 2 až 4 dávek.

Výhodné sloučeniny

Zvláště výhodnými sloučeninami obecného vzorce V jsou ty sloučeniny, ve kterých

nebo

X je atom kyslíku,

Y je atom kyslíku,

Z] a Z₂ jsou skupinami CH₂ a

W jeNR]₅

-9CZ 297904 B6

Způsob přípravy

Sloučeniny obecného vzorce V se připravují podle následujících schémat:

Schéma 1

(Q je ethylenová skupina)V (Q je oxiranová skupina) kde R₃, R4, R₅, Re, R₈ a R₁₅ mají stejný význam jako výše a

Pi je skupina chránící atom kyslíku.

Sloučeniny obecného vzorce V, ve kterých W je NR]₅ a X je atom kyslíku se mohou připravit podle schématu 1. Sloučenina obecného vzorce XII, kde P] je skupina chránící atom kyslíku, jako 15 /erc-butyldimethylsilyl, se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce VI známými způsoby (tj. Nicolaou K. C. a kol., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 36, 166 až 168 (1997)). Aldolová reakce

-10CZ 297904 B6 sloučeniny obecného vzorce XII a sloučeniny obecného vzorce XIV poskytuje sloučeninu obecného vzorce XIII. Sloučenina obecného vzorce XIV se může připravit známými způsoby (tj. Schinzer D. a kol., Eur. Chem. Chron., 1, 7 až 10 (1996)). Aldehyd vzorce XVIII se může připravit ze sloučeniny vzorce XV podle schématu 1 nebo známými způsoby (tj. Taylor R. E. a kol., Tetrahedron Lett., 38, 2061 až 2064 (1997)). Sloučenina obecného vzorce XIX se může připravit ze sloučeniny vzorce XVIII zpracováním s aminem za užití dehydratačních podmínek, jako katalytického množství kyseliny /n-toluensulfonové a azeotropickým odstraněním vody. Sloučenina obecného vzorce XX se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XIX zpracováním s allylačním činidlem, jako allyimagnesiumbromidem. Sloučenina obecného vzorce XXI se může připravit ze sloučenin obecných vzorců XIII a XX, reakcí s běžnými činidly vážícími se amidovou vazbou (tj. DCC, BOP, EDC/HOBT, PyBrOP). Sloučenina obecného vzorce XXII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXI uzavřením kruhu výměnnou reakcí za použití buď Grubbsova (RuC1₂ (=CHfenyl)(PCY₃)₂, viz Grubbs R. H. a kol., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 34, 2039 (1995), nebo Schrockova katalyzátoru (viz SchrockR. R. a kol., J. Am., Chem. Soc., 112, 3875 (1990)). Odstranění chránící skupiny ve sloučenině obecného vzorce XXI za použití, například je-li P_t fórc-butyldimethylsilylová skupina, fluorovodíku v acetonitrilu nebo tetra-n-butylamoniumfluoridu v THF poskytuje sloučeninu obecného vzorce V, kde Q je ethylenová skupina, W je NRj₅, X je atom kyslíku a R₃, R₄, R₅ a R₆ mají stejný význam jako výše. Regioselektivní epoxidace sloučeniny obecného vzorce V, kde Q je ethylenová skupina, za použití dimethyldioxiranu poskytuje sloučeninu obecného vzorce V, kde Q je oxiranová skupina, W je NR]5, X je atom kyslíku a R₃, R4, R5 a R₁₅ mají stejný význam jako výše.

Schéma 2

(XXIII)

Případně se sloučenina obecného vzorce VIII může připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XXIII s hořčíkem a chloridem kyseliny (R₅CH₂COC1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce XXIV (viz například Heathcock C. a kol., J. Org. Chem., 55 1114 až 1117 (1990)) a následnou ozonolýzou za vzniku sloučeniny obecného vzorce VIII, jak se ukazuje ve schématu 2.

Schéma 3

Sloučenina obecného vzorce XIV se může případně připravit jak znázorněno ve schématu 3. Reakce sloučeniny obecného vzorce XXV a pseudoefedrinu poskytuje sloučeninu obecného vzorce XXVI. Sloučenina obecného vzorce XXVII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXVI alkylací pentenylhalogenidem, jako 5-brompentenem, způsobem podle Meyerse (tj. Meyers A. a kol., J. Am. Chem. Soc., 116, 9361 a 9362 (1994)). Sloučenina obecného vzorce XXVIII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXVII reakcí s redukčním činidlem,

-11 CZ 297904 B6 jako lithiumpyrrolidinylborohydridem. Oxidace sloučeniny obecného vzorce XXVIII za použití například pyridiniumchlorchromatu poskytuje sloučeninu obecného vzorce XIV. Přímého převedení sloučeniny obecného vzorce XXVII na sloučeninu obecného vzorce XIV se může dosáhnout redukčním činidlem, jako lithiumtriethoxyaluminiumhydridu.

Schéma 4

Sloučenina obecného vzorce XX se může případně připravit z allylglycinu, jak se ukazuje ve schématu 4. Atom dusíku v allylglycinu se může chránit způsoby známými v oboru za vzniku sloučeniny obecného vzorce XXIX, kde P₂ je vhodná chránící skupina atomu dusíku, jako Zerc-butoxykarbonyl. Případně, není-li R₂9 atom vodíku, se sloučenina obecného vzorce XXX může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXIX alkylací alkylhalogenidem v přítomnosti báze, jako hydridu sodného. Sloučenina obecného vzorce XXXI se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXX použitím Ν,Ο-dimethylhydroxylaminu a běžných kondenzačních činidel, jako EDCI a HOBT. Sloučenina obecného vzorce XXXII se může připravit z hydroxamátu obecného vzorce XXXI zpracováním s organokovovým činidlem, jako alkyl- nebo arylmagneziumhalogenidem. Wittigova olefinace sloučeniny obecného vzorce XXXII poskytuje sloučeninu obecného vzorce XXXIII (Wittigovo činidlo se připraví jak uvádí Danishefsky S. E: a kol., J. Org. Chem., 61, 7998 až 7999 (1996)). Odstranění skupiny chránící atom dusíku ve sloučenině obecného vzorce XXXIII způsoby známými v oboru poskytuje sloučeninu obecného vzorce XX.

Schéma 5

V

- 12CZ 297904 B6

Sloučenina obecného vzorce V, kde W je NR45, X je atom kyslíku a G je 1,2-disubstituovaný olefín se může připravit jak je znázorněno na schématu 5. Sloučenina obecného vzorce XXXV se může připravit Wittigovou olefinací sloučeniny obecného vzorce XXXII. Sloučenina obecného vzorce XXXIV se může připravit způsoby známými v oboru. Sloučenina obecného vzorce XXXVI se může připravit odstraněním skupiny chránící atom dusíku ve sloučenině obecného vzorce XXXV použitím způsobů známých v oboru. Sloučenina obecného vzorce XXXVII se může připravit kondenzační reakcí sloučeniny obecného vzorce XXXVI a sloučeniny obecného vzorce XIII použitím běžných kondenzačních činidel, jako EDCI a HOBT. Sloučenina obecného vzorce XXXVIII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXVII způsoby, které se popisují ve schématu 1 pro přípravu sloučeniny obecného vzorce XXII. Použitím způsobů, které se popisují ve schématu 1 (kroky o a p), se může převést sloučenina obecného vzorce XXXVIII na sloučeniny obecného vzorce V, kde W je NRj₅, X je atom kyslíku a G je 1,2-disubstituovaný olefín.

Schéma 6

Sloučenina obecného vzorce V, kde W a X jsou atomy kyslíku a G je 1,2-disubstituovaný olefín se může připravit jak znázorněno ve schématu 6. Sloučenina obecného vzorce XXXX se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXIX zpracováním s allylačním činidlem, jako allylmagnesiumbromidem. Enantiomemě čistá sloučenina obecného vzorce XXXX se může připravit užitím chirálních činidel (viz například Taylor R. E. a kol., Tetrahedron Lett. 38, 2061 až 2064 (1997), NicolaouK. C. a kol., Angew Chem. Int. Ed. Engl., 36, 166 až 168 (1997), KeckG. a kol., J. Am. Chem. Soc., 115, 8467 (1993)). Sloučenina obecného vzorce XXXXI se může připravit ze sloučenin obecných vzorců XXXX a XIII použitím známých způsobů esterifíkace, jako s použitím DCC a DMAP. Sloučenina obecného vzorce XXXXII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXXI pomocí výměnné reakce kruh uzavírajícího olefinu, jak se popisuje ve schématu 1 pro přípravu sloučeniny obecného vzorce XXII. Sloučeniny obecného vzorce V, kde W a X jsou atomy kyslíku a G je 1,2-disubstituovaný olefín se mohou připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXXII odstraněním chránící skupiny (pokud je Q ethylenová skupina) a, požaduje-li se, epoxidací (pokud je Q oxiranová skupina), jak se popisuje výše.

- 13 CZ 297904 B6

Schéma 7

skupina)

Sloučenina obecného vzorce V, kde W a X jsou atomy kyslíku a G je alkyl, aryl, heteroaryl, bicykloaryl nebo bicykloheteroaryl se může připravit jak znázorněno ve schématu 7. Sloučenina obecného vzorce XXXXIV se může připravit allylací sloučeniny obecného vzorce XXXXIII, kde G je alkyl, substituovaný alkyl, aryl, heteroaryl, bicykloaryl nebo bicykloheteroaryl, reakcí s allylačním činidlem, jako allylmagnesiumbromidem. Sloučenina obecného vzorce XXXXV se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXXIV esterifikací se sloučeninou obecného vzorce XIII použitím například DCC nebo DMAP. Sloučenina obecného vzorce XXXXVI se může připravit ze sloučeniny XXXXV uzavřením kruhu výměnnou reakcí, jak se popisuje výše. Následují způsoby, které se popisují výše ve schématu 1, sloučenina obecného vzorce XXXXVI se může převést na sloučeniny obecného vzorce V odstraněním chránící skupiny a následnou epoxidací.

Schéma 8

Sloučenina obecného vzorce V, kde W je NR_]5, X je atom kyslíku a G je alkyl, aryl, heteroaryl, bicykloaryl nebo bicykloheteroaryl se může připravit jak znázorněno ve schématu 8. Sloučenina obecného vzorce XXXXVII se může připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XXXXIII, kde G je alkyl, substituovaný alkyl, aryl, heteroaryl, bicykloaryl neb bicykloheteroaryl, a aminu za dehydratačních podmínek. Sloučenina obecného vzorce XXXXVIII se může připravit ze sloučeniny XXXXVII zpracováním s allylačním činidlem, jako allylmagnesiumbromidem. Sloučenina obecného vzorce XXXXIX se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXXVIII a sloučeniny obecného vzorce XIII běžnými kondenzačními způsoby tvorby amidové vazby za použití

- 14CZ 297904 B6 například EDCI nebo HOBT. Sloučenina obecného vzorce L se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXXIX uzavřením kruhu výměnnou reakcí, jak se popisuje výše. Následující způsoby, které se popisují výše ve schématu 1, sloučenina obecného vzorce L se může převést na sloučeniny obecných vzorců V odstraněním chránící skupiny a následnou epoxidací.

Schéma 9

(liv) (v)

Sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku, W je NR_]5 a

G je »

a D je vybráno ze skupiny obsahující NR₂₈R₂₉, NR30COR31 a nasycený heterocyklus (tj. piperidinyl, morfolinyl, piperazinyl atd.), se může připravit jak je uvedeno ve schématu 9. Sloučenina obecného vzorce LI se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce XXXII reduktivní aminací za použití primárního nebo sekundárního aminu a redukčního činidla, jako triacetoxyborohydridu sodného. Sloučeniny obecného vzorce LIII, LIV a V se poté mohou připravit následnými způsoby, které se popisují výše ve schématu 1.

-15 CZ 297904 B6

Schéma 10

Alternativně se sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku W je atom kyslíku nebo NR15 nebo kyslík a

G je

a D je vybráno ze skupiny obsahující NR₂₈R₂₉, NR₃₀COR₃i a nasycený heterocyklus (tj. piperidinyl, morfolinyl, piperazinyl atd.) může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V jak je uvede10 no ve schématu 10. Sloučenina obecného vzorce V se může převést na sloučeninu obecného vzorce LV chráněním hydroxylových skupiny vhodnými chránícími skupinami, jako terc-butyldimethylsilyl. Sloučenina obecného vzorce LVI se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LV ozonolýzou. Zpracování sloučeniny obecného vzorce LVI s aminem a redukčním činidlem, jako triacetoxyborohydridem sodným poskytuje sloučeninu obecného vzorce LVII. Odstranění 15 ochranných skupin ze sloučeniny obecného vzorce LVII, například fluorovodíkem, poskytuje sloučeninu obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku W je NR₁₅ nebo atom kyslíku a

G je

D

- 16CZ 297904 B6

Schéma 11

O OH O (V)

Sloučenina obecného vzorce V, kde W je NR45, X je atom kyslíku a

G je

O

Ri3^_NAy z ^r

Rl4 se může připravit jak je uvedeno ve schématu 11. Sloučenina obecného vzorce LVII1 se může připravit ze sloučenin obecného vzorce XXX zpracováním s aminem a běžnými kondenzačními činidly tvořícími amidovou vazbu, jako EDCI a HOBT. Sloučenina obecného vzorce LX se může 10 připravit ze sloučeniny obecného vzorce LVII1 odstraněním skupiny chránící atom dusíku za použití například kyseliny trifluoroctové, je-li P₂ terc-butoxykarbonylová skupina, následnou kondenzací sloučenin obecných vzorců LIX a XIII použitím běžných kondenzačních činidel tvořících amidovou vazbu, jako EDCI a HOBT. Sloučenina obecného vzorce LXI se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LX uzavřením kruhu výměnnou reakcí. Sloučenina 15 obecného vzorce V se může následně připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXI způsoby, které se popisují výše ve schématu 1.

- 17CZ 297904 B6

Schéma 12

Sloučenina obecného vzorce V, kde W je atom kyslíku, X je atom kyslíku a

G je

O

r.*._nA/

Rj4 se může připravit jak je uvedeno ve schématu 12. Sloučenina obecného vzorce LXII se může připravit z allylglycinu zpracováním s kyselinou dusitou. Sloučenina obecného vzorce LXIII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXII zpracováním s aminem a běžnými konden10 začními činidly tvořícími amidovou vazbu, jako EDCI a HOBT. Sloučenina obecného vzorce

LXIV se může připravit ze sloučenin obecných vzorců LXIII a XIII použitím běžných kondenzačních činidel tvořících amidovou vazbu, jako EDCI a HOBT. Sloučenina obecného vzorce LXV se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXIV uzavřením kruhu výměnnou reakcí. Sloučenina obecného vzorce V se může následně připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXV 15 způsoby, které se popisují ve schématu 1.

-18CZ 297904 B6

Schéma 13

Sloučenina obecného vzorce V, kde G je 1,2-disubstituovaná ethylová skupina, se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde G je 1,2-disubstituovaná ethylenová skupina, hydrogenací s katalyzátorem, jako palladiem na uhlí, jak se ukazuje ve schématu 13. Kromě toho se může sloučenina obecného vzorce V, kde G je 1,2-disubstituovaná cyklopropylová skupina, připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde G je 1,2-disubstituovaná ethylenová skupina cyklopropanací s dijodmethanem a dvojicí zinek-měď, jak se ukazuje ve schématu 4.

Schéma 14

Sloučenina obecného vzorce V, kde je Z] atom kyslíku se může připravit jak je uvedeno ve schématu 14. Sloučenina obecného vzorce LXV11 se může připravit z α-hydroxyesteru obecného vzorce LXVI a 3-buten-l-yltrifluormethansulfonátu (nebo s 3-butenylbromidem a trifluormethylsulfonátem stříbrným). Sloučenina obecného vzorce LXVII se může redukovat redukčním činidlem, jako diizobutylaluminiumhydridem, pro poskytnutí sloučeniny obecného vzorce LXVIII. Případně se sloučenina obecného vzorce LXVIII může získat ze sloučeniny obecného vzorce LXVII dvoukrokovým postupem zahrnujícím redukci lithiumborohydridem a oxidaci pyridiniumchlorchromátem. Tato sloučenina obecného vzorce LXVIII se může substituovat sloučeninou obecného vzorce XIV ze schématu 1 za vzniku sloučeniny obecného vzorce LXIX. Další zpracování sloučeniny obecného vzorce LXIX způsobem popsaným výše poskytne sloučeninu obecného vzorce V, kde Z] je atom kyslíku.

-19CZ 297904 B6

Schéma 15

Podobně se může sloučenina obecného vzorce V, kde Zi je NR₂₃ připravit jak je uvedeno ve schématu 15. Sloučenina obecného vzorce LXXI se může připravit z α-aminoesteru obecného vzorce LXX a 3-buten-l-ylbromidu. Sloučenina obecného vzorce LXXI se může redukovat redukčním činidlem, jako diizobutylaluminiumhydridem pro poskytnutí sloučeniny obecného vzorce LXXII. Případně se sloučenina obecného vzorce LXXII může získat ze sloučeniny obecného vzorce LXXI dvoukrokovým postupem zahrnujícím redukci lithiumborohydridem a oxidaci pyridiniumchlorchromátem. Tato sloučenina obecného vzorce LXXII se může substituovat sloučeninou obecného vzorce XIV ze schématu 1 za vzniku sloučeniny obecného vzorce LXXIII. Dalším zpracováním sloučeniny obecného vzorce LXXIII způsobem popsaným výše poskytuje sloučeninu obecného vzorce V, kde Zi je NR₂₃.

Schéma 16

Sloučenina obecného vzorce V, kde Z₂ je atom kyslíku se může připravit jak je uvedeno ve schématu 16. Sloučenina obecného vzorce LXXV se může připravit z β-hydroxyesteru obecného vzorce LXXIV a allylačního činidla, jako allylbromidu (nebo allylbromidu a trifluormethylsulfonátu stříbrného). Sloučenina obecného vzorce LXXV se může redukovat redukčním činidlem, jako diizobutylamoniumhydridem pro poskytnutí sloučeniny obecného vzorce LXXVI. Případně se může sloučenina obecného vzorce LXXVI získat ze sloučeniny obecného vzorce LXXV dvoukrokovým postupem zahrnujícím redukci lithiumborohydridem a oxidaci pyridiniumchlorchromátem. Tato sloučenina obecného vzorce LXXVI se může substituovat sloučeninou obecného vzorce XIV ze schématu 1 za vzniku sloučeniny obecného vzorce LXXV11. Další zpracování sloučeniny obecného vzorce LXXVII způsobem popsaným výše poskytne sloučeninu obecného vzorce V, kde Z₂ je atom kyslíku.

-20CZ 297904 B6

Schéma 17

(LXXVItl)

( LXXIX ) ^H°2^CXTK^^R5

OP, o (XII)

OP, O ( LXXXI)

Podobně se může sloučenina obecného vzorce V, kde Z₂ je NR₂₃, připravit jak je uvedeno ve schématu 17. Sloučenina obecného vzorce LXXIX se může připravit z β-aminoesteru obecného vzorce LXXVIII a allylačního činidla, jako allylbromidu. Sloučenina obecného vzorce LXXIX se může redukovat redukčním činidlem, jako diizobutylaluminiumhydridem, pro poskytnutí sloučeniny obecného vzorce LXXX. Případně se sloučenina obecného vzorce LXXX může získat ze sloučeniny obecného vzorce LXXIX dvoukrokovým postupem zahrnujícím redukci lithiumborohydridem a oxidaci pyridiniumchlorchromátem. Tato sloučenina obecného vzorce LXXX se může substituovat sloučeninou obecného vzorce XIV ze schématu 1 za vzniku sloučeniny obecného vzorce LXXXI. Další zpracování sloučeniny obecného vzorce LXXXI způsobem popsaným výše poskytuje sloučeninu obecného vzorce V, kde Z₂ je NR₂₃.

Schéma 18

Sloučenina obecného vzorce V, kde W je atom kyslíku nebo NR_Í5 a Y je Η, H se může připravit jak je uvedeno ve schématu 18. Sloučenina obecného vzorce V se může převést na sloučeninu obecného vzorce LXXXII, kde P₄ a P₅ jsou skupiny chránící hydroxylové skupiny, zpracováním s činidlem, jako fórc-butyldimethylsilyltrimethylsulfonátem. Sloučenina obecného vzorce LXXXIII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce zpracováním s Lawessonovým činidlem. Sloučenina obecného vzorce LXXXIV se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXXXIII použitím redukčního činidla, jako tri-w-butylcínhydridu, je-li W atom kyslíku, nebo zpracováním s methyljodidem a borohydridem sodným, je-li W NR_]5. Odstranění chránících skupin ze sloučeniny obecného vzorce LXXXIV použitím například fluorovodíku, jsou-li P₄ a P₅ silylové skupiny, poskytuje sloučeninu obecného vzorce V, kde W je atom kyslíku nebo NR_]5 aYjeH, H.

-21 CZ 297904 B6

(C) (Cl)

Sloučenina obecného vzorce V, kde W a Y jsou atomy kyslíku a R| je alkyl nebo substituovaný alkyl se může připravit jak je uvedeno ve schématu 19. Sloučenina obecného vzorce V se může 5 chránit za vzniku sloučeniny obecného vzorce LXXXV, kde P₅ a P₆ jsou skupiny chránící hydroxylové skupiny, zpracováním s činidlem, jako Zerc-butyldimethylsilyltrifluonnethansulfonátem. Sloučenina obecného vzorce LXXXVI se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXXXV zpracováním s redukčním činidlem, jako borohydridem sodným. Sloučenina obecného vzorce LXXXVII se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXXXVI zavedením skupiny 10 chránící hydroxylovou skupinu, kde P₇ je například p-methoxybenzyl, s použitím p-methoxybenzyltrichloracetimidátu. Odstraněním chránících skupin P₅ a P₆ ze sloučeniny obecného vzorce LXXXVII, s použitím například fluorovodíku v pyridinu, jsou-li P₅ a P₆ terc-butyldimethylsilylové skupiny, poskytuje sloučeninu obecného vzorce LXXXXVIII, která se poté může selektivně chránit použitím například terc-butyldimethylsilylchloridu, za vzniku sloučeniny obecného vzor15 ce LXXXXIX, kde Ps je /erc-butyldimethylsilylová skupina. Sloučenina obecného vzorce C se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce LXXXXIX zpracováním s bází, jako lithiumdiizo

-22CZ 297904 B6 propylamidem, a následným zpracováním s alkylačním činidlem, jako methyljodidem. Sloučenina obecného vzorce C se může chránit za vzniku sloučeniny obecného vzorce Cl, kde P9 je skupina chránící hydroxylovou skupinu, zpracováním s činidlem, jako terc-butyldimethylsilyltrifluormethansulfonátem. Sloučenina obecného vzorce Cil se může připravit za sloučeniny obecného vzorce Cl, odstraněním skupiny P₇ použitím například DDQ, je-li P₇ /9-methoxybenzyiová skupina. Sloučenina obecného vzorce V, kde W a Y jsou atomy kyslíku a Ri je alkyl nebo substituovaný alkyl se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce Cil oxidací za použití například TPAP/NMO a následným odstraněním chránících skupin, použitím například fluorovodíku, jsouli P₈ a P9 silylové skupiny. Tato sloučenina obecného vzorce V se může dále oxidovat dimethyldioxiranem podle schématu 1 pro poskytnutí odpovídající epoxidové sloučeniny obecného vzorce V.

Schéma 20

B.

Sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku a Q je olefin, se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku a Q je oxiranový kruh, zpracováním s reaktivním metalocenem, jako titanocenem, zirkonocenem nebo niobocenem jak je uvedeno ve schématu 20 (viz například R. Schobert a U. Hohlein, Synlett, 465 až 466 (1990)).

Schéma 21

Sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku a W je NR15, přičemž R_[5 je atom vodíku se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde jak X, tak W jsou atomy kyslíku, jak je uvedeno ve schématu 21. Sloučenina obecného vzorce Clil se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde jak X tak W jsou atomy kyslíku, vytvořením pi-allylpalladiového komplexu za použití například palladiumtetrakistrifenylfosfinu a následným zpracováním s azidem sodným (viz například: Murahashi S.-I. a kol., J. Org. Chem., 54,3292 (1989)). Následná redukce slouče-23CZ 297904 B6 niny obecného vzorce Clil s redukčním činidlem, jako trifenylfosfinem, poskytuje sloučeninu obecného vzorce CIV. Sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku a W je NR45, přičemž R15 je atom vodíku, se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce CIV makrolaktamizací za použití například difenylfosforylazidu nebo bromtripyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfátu (PyBroP).

Schéma 22

kyslíku)

(W je NR₁₅)

Sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku a W je NR_!5, přičemž R15 je alkyl, substituovaný alkyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl, heterocyklyl, O-alkyl, O-substituovaný alkyl se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde jak X tak W jsou atomy kyslíku, jak je uvedeno ve schématu 22. Sloučenina obecného vzorce CV se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V, kde jak X, tak W jsou atomy kyslíku, vytvořením pi-allylpalladiového komplexu za použití například palladiumtetrakisfenylfosfinu a následným zpracováním s primárním aminem. Sloučenina obecného vzorce V, kde X je atom kyslíku a W je NR15, přičemž R_i5 je alkyl, substituovaný alkyl, aryl, heteroaiyl, cykloalkyl, heterocyklyl, hydroxylová skupina, O-alkyl, O-substituovaný alkyl, se může připravit ze sloučeniny obecného vzorce V makrolaktamizací za použití například difenylfosforylazidu nebo bromtripyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfátu (PyBroP). V případě, že R15 je hydroxylová skupina, může být nezbytné odstranění chránící skupiny, jako Zerc-butyldimethylsilylu, z meziproduktu, kde R15 je O-fórc-butyldimethylsilyl.

In vitro sledování biologické aktivity sloučenin obecného vzorce V se provádělo následovně:

Polymerace tubulinu in vitro

Dvakrát cyklovaný tubulin z telecích mozků se připravil podle způsobu Williamse a Leeho (viz Williams R. C. Jr., and Lee J. C., Preparation of tubulin from brain. Methods in Enzymology, 85, část D: 376 až 385 (1982)) a před použitím se uchovával v tekutém dusíku. Kvantifikace účinnosti polymerace tubulinu se dosáhlo následujícím upraveným postupem podle Swindella a kol. (viz Swindell C. S., Krauss N. E., Horwitz S. B. and Ringel I., Biologically active taxol analogues with deleted A-ring side chain substituents and variable C-2' configurations. J. Med. Chem., 34, 1176 až 1184 (1991)). Tyto úpravy částečně vyústily ve vyjádření účinnosti polymerace tubulinu jako účinné koncentrace pro kteroukoli danou sloučeninu. Při tomto způsobu se v mikrokyvetových celách UV spektrofotometru Beckman Model DU 7400 (Beckman Instruments) přidávají do tubulinu při 37 °C různé koncentrace sloučeniny v polymeračním pufru (0,1 M MES, 1 mM

-24CZ 297904 B6

EGTA, 0,5 mM MgCI₂, pH 6,6). Používají se konečná koncentrace mikrotubulámího proteinu 1,0 mg.ml“¹ a koncentrace sloučeniny obvykle 2,5, 5,0 a 10 μΜ. Výchozí směrnice změny optické hustoty (OD) měřené každých 10 sekund se počítala programem včleněným do přístroje poté, co ručně určily počáteční a koncové časy lineární oblasti zahrnující alespoň 3 časové body. Za těchto podmínek byly lineární odchylky obvykle <10“⁶, směrnice se pohybovaly v rozmezí od 0,03 do 0,002 jednotek absorbance za minutu a největší absorbance byla 0,15 jednotek absorbance. Účinná koncentrace (ECo.oi) se určuje jako interpolované koncentrace schopná vyvolání směrnice 0,01 OD.min ¹ a vypočítá se podle rovnice: ECo,oi=koncentrace/směmice. Hodnoty ECo,oi jsou vyjádřeny jako průměr standardní odchylky získané ze 3 různých koncentrací. Hodnoty ECo.oi sloučenin podle tohoto vynálezu spadají do rozmezí od 0,01 do 1000 μΜ.

Cytotoxicita (in vitro)

Cytotoxicita se stanovila na buňkách lidského karcinomu tračníku HCT-116 stanovením pomocí MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-karboxymethoxyfenyl)-2-(4-sulfenyl)-2H-tetrazolium, inertní sůl), jak uvádí T. L. Riss a kol. v Comparison of MTT, XTT and a novel tetrazolium compound MTS for in vitro proliferation and chemosensitivity assays, Mol. Biol. Cell, 3, (Suppl.), 184a (1992). Buňky se naočkovaly 4000 buněk na jamku na 96-jamkové mikrofiltrační plotny a po 24 hodinách se přidalo léčivo a postupně se ředilo. Buňky se inkubovaly při 37 °C po dobu 72 hodin, v této době se zbarvily tetrazoliem, přidalo se MTS v koncentraci 333 pg.ml“¹ (konečná koncentrace), v kombinaci s elektronovým kondenzačním činidlem fenazinmethosulfátem v koncentraci 25 μΜ (konečná koncentrace). Enzym dehydrogenáza v živých buňkách redukuje MTS na formu, která absorbuje světlo vlnové délky 492 nm, která se může stanovit spektrofotometricky. Čím větší je absorbance, tím větší je množství živých buněk. Výsledky se vyjádřily jako IC₅o, což je koncentrace léčiva nutná k zamezení buněčného zhoubného bujení (tj. absorbance na vlnové délce 450 nm) u 50 % buněk ve srovnání s neošetřenými srovnávacími buňkami. Hodnoty IC50 pro sloučeniny podle tohoto vynálezu spadají do rozmezí od 0,01 do 1000 nM.

Následující příklady objasňují tento vynález.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

[4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-Dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-16-[l-methyl-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l -aza-13(E)-cyklohexadecen-2,6-dion

A. N-[(2-Methyl)-l-propenyl]morfolin

Do míchaného morfolinu (165,5 g, 1,9 mmol) se přidal izobutyraldehyd (173 ml, 1,9 mol) rychlostí, která nedovolila reakční směsi přesáhnout teplotu 30 °C. Po úplném přidání se reakční směs míchala při teplotě místnosti po dobu 2 hodin, poté se baňka opatřila Dean-Starkovým nástavcem a zahřívala se na 160 °C po dobu 20 hodin. Reakční směs se poté ochladila na teplotu místnosti a baňka se opatřila kolonovým destilačním přístrojem vigreux. Destilace za vysokého vakua poskytla 135 g (50 %) sloučeniny A ve formě čistého bezbarvého oleje. MS (Μ + H, 142).

-25 CZ 297904 B6

B. 2,2-Dimethyl-3-oxopentanal

Do míchaného roztoku propionylchloridu (44 ml, 0,50 mol) v etheru (135 ml) se při 0 °C pod dusíkem přidal během 45 minut roztok sloučeniny A (69 g, 0,50 mol) v etheru (135 ml). Po úplném přidání se směs míchala pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin a poté se míchala při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Reakční směs se zfiltrovala a filtrační koláč se promyl etherem (50 ml). Těkavé podíly se vakuově oddestilovaly. Odparek se rozpustil v H₂O (80 ml) a roztok se upravil na pH 4. Přidal se ether a dvoufázová směs se míchala po dobu 16 hodin. Reakční směs se přelila do dělicí nálevky, vrstvy se oddělily a vodná vrstva se extrahovala etherem (5x100 ml). Spojené organické fáze se vysušily (MgSO₄), zfiltrovaly a odpařily za vakua. Odparek se destiloval za vysokého vakua a poskytl 10,4 g (16 %) sloučeniny B ve formě čirého bezbarvého oleje. MS (M-H, 217).

C. 4-/erc-Buty ld i methy 1 si ly loxy-5,5-d i methyl-6-oxo-1 -okten

Do roztoku (-)-B-methoxydiizopinokamfenylboranu (25,7 g, 81 mmol) v etheru (80 ml) se při 0 °C pod atmosférou dusíku během 1,5 hodiny přidal l,0M roztok allylmagnesiumbromidu v etheru (77 ml, 77 mmol). Reakční směs se míchala při 25 °C po dobu 1 hodiny a poté se odpařila za vakua. Odparek se extrahoval pentanem (2x150 ml) a extrakty se pod dusíkem zfiltrovaly přes Celíte. Spojené extrakty se poté odpařily za vakua a poskytly B-allyldiizopropinokamfenylboran. Tato látka se rozpustila v etheru (200 ml) a ochladila se pod dusíkem na -100 °C. Poté se přidal během 1 hodiny při -78 °C roztok sloučeniny Β (11,42 g, 89 mmol) v etheru (90 mmol). Reakční směs se míchala další 0,5 hodiny a poté se přidal methanol (1,5 ml). Reakční směs se přivedla k teplotě místnosti, zpracovala se s 3N roztokem NaOH (32 ml) a 30% H₂O₂ (64 ml) a poté se udržovala pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin. Reakční směs se ochladila na teplotu místnosti, oddělily se vrstvy a organická fáze se promyla H₂O (500 ml). Spojené vodné promývací podíly se reextrahovaly etherem (2x100 ml). Spojené organické extrakty se promyly nasyceným vodným roztokem NaCl (100 ml), vysušily (MgSO₄), zfiltrovaly a odpařily za vakua. Zbytek se rozpustil v CH₂C1₂ (250 ml), ochladil na 0 °C a přidal se diizopropylethylamin (93 ml, 535 mmol). Do míchaného roztoku se poté pomalu přidal terc-butyldimethylsilyltrifluormethansulfonát (69 g, 260 mmol) tak, aby teplota nestoupla nad 10 °C. Po úplném přidání se reakční směs přelila do H₂O (650 ml), vrstvy se oddělily a vodná vrstva se promyla CH₂C1₂ (2x650 ml). Spojené organické podíly se vysušily (Na₂SO₄), zfiltrovaly a odpařily za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografíí při eluci hexany a následně směsí 10 % EtOAc/hexany pro poskytnutí 17,2 g (78 %) sloučeniny C ve formě čirého bezbarvého oleje. Zjistil se enantiomemí rozdíl 94 % při stanovení ^]H NMR analýzou Mosherova esteru alkoholu. ¹³C NMR (CDC1₃, 80 MHz) d 215,8, 136,1, 116,5, 52,8, 39,0, 31,9, 26,0, 22,4, 20,1, 18,1, 7,6, -3,6, -4,4.

D. 3-terc—Butyldimethylsiloxy-^1,4-dimethyl-5-oxoheptanal

Roztokem sloučeniny C (10,8 g, 38,0 mmol) v CH₂C1₂ se při -78 °C probublával O₃, dokud roztok nebyl nastálo modrým (1 hodinu). Poté se probublával O₂ po dobu 15 minut, následovalo probublávání N₂ po dobu 30 minut, po této době se roztok stal čirý. Poté se přidal trifenylfosfín (10 g, 38 mmol) a reakční směs se ohřála na -35 °C a ponechala stát po dobu 16 hodin. Těkavé podíly se odpařily za vakua a odparek se přečistil velmi rychlou chromatografíí při eluci směsí 8 % EtOAc/hexany pro poskytnutí 8,9 g (74 %) sloučeniny D ve formě čirého bezbarvého oleje. 'HNMR (CDCIj, 300 MHz) d 9,75 (m, 1H), 4,53 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,40 až 3,60 (m, 4H), 1,10 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,98 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,07 (s, 3H), 0,04 (s, 3H).

E. Kyselina 3-terc-butyldimethylsiloxy-4,4-dimethyl-5-oxoheptanová

Do roztoku sloučeniny D (3,90 g, 13,6 mmol) v terc.butanolu (75 ml) se přidal 2-methyl-2buten (5,85 ml, 55,2 mmol) a poté se při teplotě místnosti po kapkách přidal roztok chloritanu sodného (4,61 g, 40,8 mmol) a jednosytného fosforečnanu sodného (2,81 g, 20,4 mmol) v H₂O

-26CZ 297904 B6 (15 ml). Reakční směs se míchala po dobu 0,5 hodiny a poté se rozpouštědla za vakua odstranila. Do odparku se přidala H₂O (150 ml) a následovala extrakce EtOAc (3x150 ml). Spojené organické extrakty se vysušily (MgSO₄), zfíltrovaly a těkavé látky se odstranily za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografii při eluci směsí 20 % EtOAc/hexany/1 % AcOH pro poskytnutí 3,79 g (92 %) sloučeniny E ve formě čirého bezbarvého vazkého oleje. MS (Μ + H, 303).

F. (R,R)-N-(2-Hydroxy-l-methyl-2-fenethyl)-N,2-(S)-dimethyl-6-heptenamid

Suspenze LiCl (6,9 g, 0,16 mol) a předem připraveného lithiumdiizopropylamidu (Aldrich, 2,0M roztok v heptanu/ethylbenzenu/THF, 27,6 ml, 55 mmol) v dodatečném THF (70 ml) se při -78 °C po kapkách zpracovala s roztokem (R,R)-N-(2-hydroxy-l-methyl-2-fenethyl)-N-methylpropionamidem (6,0 g, 27 mmol, Meyers A. G. a kol., J. Am. Chem. Soc., 116, 9361 (1994)) v THF (30 ml) po dobu 10 minut. Světle žlutá reakční směs se míchala při -78 °C (1 hodinu), při 0 °C (15 minut) a při 25 °C (5 minut) před tím, než se znovu ochladila na 0 °C a zpracovala s roztokem 5-brom-l-pentenu (4,8 ml, 40 mmol) v THF (5 ml). Reakční směs se míchala při 0 °C (24 hodin), přelila do nasyceného vodného roztoku NH₄C1 (100 ml) a EtOAc (100 ml). Oddělily se dvě fáze a vodná fáze se dále extrahovala EtOAc (3x100 ml). Organické extrakty se spojily, promyly se nasyceným vodným roztokem NaCl (200 ml), vysušily (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 4,0x25 cm, 2 % MeOH-CHCl₃) poskytla sloučeninu F (6,9 g, 88 %) ve formě žlutého oleje. MS (ESI⁺): 290 (M + H)⁺, MS (EST): 288,2 (Μ - H)“.

G. (S)-2-Methyl-6-heptanol

Baňka s kulatým dnem o objemu 250 ml se postupně plnila pyrrolidinem (2,6 ml, 30 mmol) a komplexem BH₃-THF (l,0M v THF, 31 ml, 30 mmol) při teplotě 0 °C. Komplex boran-pyrrolidin se zahříval na 25 °C (1 hodinu), ochladil na 0 °C a po kapkách se zpracoval s w-butyllithiem (1,6M v hexanu, 19 ml, 30 mmol) během 30 minut, zatímco se pečlivě udržovala vnitřní teplotě

5,5 °C. Reakční směs se míchala při 0 °C po dalších 30 minut před tím, než se po kapkách během 10 minut přidal roztok sloučeniny F (3,0 g, 10 mmol) v THF (23 ml). Reakční směs se míchala při 25 °C (6 hodin), dříve než se reakce přerušila přidáním po kapkách vodného roztoku 3N HC1 (25 ml). Reakční směs se poté přelila do vodného roztoku IN HC1 (200 ml) a extrahovala se Et₂O (4x80 ml). Spojené organické podíly se promyly směsí 1:1 nasyceného vodného roztoku NaCl a IN vodné HC1 (2x150 ml) a odpařila se za vakua. K odparku se přidal vodný roztok NaOH (IN, 200 ml) a suspenze se míchala po dobu 30 minut. Směs se extrahovala Et₂O (3x100 ml) a spojené etherové vrstvy se promyly směsí 1:1 nasyceného vodného roztoku NaCl a IN NaOH (2x200 ml), vysušily (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 4,0x25 cm, gradíentová eluce 15 až 25% roztokem Et₂O-pentan) poskytla sloučeninu G (1,26 g, 95 %) ve formě bezbarvého oleje. [a]²⁵ _D -11° (c 12, CH₂C1₂).

H. (S)-2-Methyl-6-heptenal

Roztok sloučeniny G (0,24 g, 1,9 mmol) v CH₂C1₂ (6 ml) se zpracoval s pyridiniumchlorchromatem (0,61 g, 2,8 mmol) a reakční směs se míchala při 25 °C po dobu 5 hodin. Výsledná tmavo hnědá viskózní suspenze se vedla přes sloupec směsi silikagel-Celite (Celíte 1,0x1 cm na vrcholu SiO₂, 1,0x5 cm, eluce 50 ml CH₂C1₂). Rozpouštědlo se odpařilo za vakua pro poskytnutí surové sloučeniny H (0,15 g, 63 %) ve formě bezbarvého oleje, která se byl dostatečně čistý pro použití v následných reakcích. '11 NMR (300 MHz, CD₂C1₂): d 9,62 (s, IH), 5,88 až 5,68 (m, IH), 5,13 až 4,92 (m, 2H), 2,37 až 2,24 (m, IH), 2,15 až 2,05 (m, 2H), 1,62 až 1,78 (m, IH), 1,51 až 1,32 (m, 3H), 1,07 (d, 3H, J = 7,0 Hz).

-27CZ 297904 B6

I. Kyselina (3 S,6R,7S,8S)-3-/erc-buty ldimethylsiloxy-4,4,6,8-tetramethyl-7-hydroxy-5oxo-12-tridecenová

Do předem připraveného roztoku LDA (Aldrich, 2,0M roztok ve směsi heptan/ethylbenzen/THF, 3,8 ml, 7,6 mmol) v dodatečném THF (25 ml) se při -78 °C po kapkách během 3 minut přidal roztok sloučeniny E (1,0 g, 3,4 mmol) v THF (5 ml). Reakční směs se míchala při -78 °C (10 minut), ohřála se na -40 °C (20 minut) a znovu se ochladila na -78 °C před tím, než se přidala sloučenina H (0,56 g, 4,4 mmol) v THF (5 ml). Reakční směs se ohřála na -40 °C, míchala 1 hodinu a zředila se nasyceným vodným roztokem NH4CI (50 ml). Oddělily se dvě vrstvy a vodná fáze se extrahovala EtOAc (4x50 ml). Spojené organické vrstvy se promyly nasyceným vodným roztokem NaCl (100 ml), vysušily se (Ňa₂SO₄) a odpařily se za vakua. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 2,5x20 cm, gradientová eluce 2 až 5% MeOH-CHCl₃) následovaná oddělením pomocí HPLC (YMC S—10, ODS, 30x500 mm kolona, eluce MeOH průtokem 20 ml.min ’) poskytla požadovaný syn-aldolový produkt, sloučeninu I (0,60 g, 43 %) a nežádoucí diastereoizomer (0,32 g, 22 %) spolu s výchozí sloučeninou E (asi 10 %).

MS (ESI⁺): 879,3 (2M+Na)⁺, 451,2 (M+Na)⁺, 429,2 (M+H)⁺, MS (ESF) 427,3 (M-H).

Stereochemie se potvrdila přímým srovnáním ¹³C NMR a 'H NMR následujícího esterového derivátu (použitého v syntéze epothilonu C) se stejným meziproduktem, který dříve popsal K. C. Nicolaou a kol. v Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 36, 166 (1997).

J. Kyselina (S)-2-[N-[/erc-butyloxy)karbonyl]amino]^l-pentenová

Roztok kyseliny L-2-amino-4-pentenové (NovaBiochem, 3,0 g, 26 mmol) v THF-H₂O (1:1, 200 ml) se při 0 °C postupně zpracoval s NaHCO₃ (6,6 g, 78 mmol) a di-tórc-butyldikarbonátem (10,4 g, 1,8 mmol). Reakční směs se zahřála na 25 °C a míchala po dobu 16 hodin. pH směsi se upravilo na pH 4 pečlivým přidáním nasyceného vodného roztoku kyseliny citrónové při 0 °C a směs se extrahovala EtOAc (4x50 ml). Spojené organické vrstvy se promyly nasyceným vodným roztokem NaCl (75 ml), vysušily (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 4,0x6 cm, gradientová eluce směsí 5 až 10% MeOH-CHCl₃) poskytla sloučeninu J (5,5 g, 99 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (ESF): 429,3 (2M-H), 214,1 (M-H)“.

K. (S)-2-[N²-[(/erc-Butyloxy)karbonyl]amino]-N-methoxy-N-methyl-4-pentenamid

Roztok sloučeniny J (2,9 g, 13 mmol) v CHC1₃ (55 ml) se při 0 °C zpracoval postupně s N,O-dimethylhydroxylaminhydrochloridem (1,4 g, 15 mmol), 1-hydroxybenzotriazolem (2,0 g, 15 mmol), 4-methylmorfolinem (4,4 ml, 40 mmol) a l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridem (3,4 g, 18 mmol). Reakční směs se pozvolna zahřála na 25 °C, míchala se po dobu 16 hodin a zředila se H₂O (100 ml). Oddělily se dvě vrstvy a vodná fáze se extrahovala EtOAc (3x75 ml). Spojené organické fáze se promyly 5% vodným roztokem HC1 (100 ml), nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (100 ml), nasyceným vodným roztokem NaCl (100 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Velmi rychlá chromatografíe (SiO₂, 3,0x20 cm, gradientová eluce 25 až 50% EtOAc-hexan) poskytla sloučeninu K (2,5 g, 71 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (ESI⁺): 258,9 (M+H)⁺, 202,9 (M-izobutylen), 158,9 (M-BOC), MS (ESF): 257,2 (M-H).

L. (Sj-3-[N-[(terc-Butyloxy)karbonyl]amino]-5-hexen-2-on

Roztok sloučeniny K (2,5 g, 1,0 mmol) v THF (65 ml) se při 0 °C zpracoval s methylmagnesiumbromidem (3,0M roztok vEtO₂, 8,1 ml, 2,4 mmol). Reakční směs se míchala při 0 °C (2,5 hodiny) a opatrně se přelila do nasyceného vodného roztoku NH4CI (100 ml). Oddělily se dvě vrstvy a vodná fáze se extrahovala EtOAc (3x75 ml). Spojené organické extrakty se promyly nasyceným vodným roztokem NH₄C1 (75 ml), H₂O (75 ml), nasyceným vodným roztokem NaCl (75 ml), vysušily se (MgSO₄) a odpařily se za vakua. Velmi rychlá chromatografíe (SiO₂,

-28CZ 297904 B6

3,0x20 cm, gradientová eluce směsí 10 až 25% EtOAc-hexan) poskytla (S)-2-[N-[(terc-butyloxy)karbonyl]amino]-5-hexen-2-on (2,2 g, 67 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (ESI⁺):

213,9 (M+H)⁺, 157,9 (M-izobutylen), 113,9 (M-BOC), MS (ESP): 212,2 (M-H)+

M. (S)-4-[3-[N-[(terc-Butyloxy)karbonyl]amino]-2-methyl-l(E),5-hexadienyl]-2-methylthiazol

Roztok 2-methyl^l-thiazolylmethyldifenylfosfinoxidu (2,5 g, 8,0 mmol, Danishefsky a kol., J. Org. Chem., 61, 7998 (1996)) v THF (38 ml) se při -78 °C po kapkách během 5 minut zpracoval s M-butyllithiem (1,6M roztok v hexanu, 5,2 ml, 8,4 mmol). Vzniklá zářivě oranžová směs se míchala po dobu 15 minut při -78 °C a zpracovala s roztokem sloučeniny L (0,81 g, 3,8 mmol) v THF (5 ml). Po 10 minutách při -78 °C se odstranila chladicí lázeň a reakční směs se ponechala zahřát na 25 °C (2 hodiny). Směs se přelila do nasyceného vodného roztoku NH₄C1 (50 ml) a oddělily se dvě vrstvy. Vodná fáze se extrahovala Et₂O (3x50 mi) a spojené organické extrakty se postupně promyly H₂O (75 ml), nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (75 ml), nasyceným vodným roztokem NaCl (75 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily se za vakua. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 4,0x30 cm, gradientová eluce směsí 10 až 20% EtOAc-hexan) poskytla sloučeninu M (0,23 g, 18 %) ve formě bezbarvého oleje spolu s obnoveným výchozím ketonem (20 až 30 %). MS (ESI⁺): 309,1 (M+H)⁺, 253,0 (M-izobutylen), MS (ESI): 307,3 (M-H)’.

N. (S)-4-(3-Amino-2-methyl-l (E),5-hexadienyl)-2-methylthiazol

Sloučenina M (0,15 g, 0,49 mmol) se zpracovala s 4,ON HC1 v 1,4-dioxanu (5 ml) při 0 °C pod argonem. Těkavé podíly se vakuově odpařily a výsledná bílá pěna se rozpustila v chladném nasyceném NaHCO₃ (3 ml). Tento roztok se extrahoval EtOAc (4x10 ml) a spojené EtOAc podíly se vysušily (Na₂SO₄) a vakuově se odpařily. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 1,0x5 cm, gradientová eluce 5 až 10% MeOH-CHCl₃) poskytla sloučeninu N (88 mg, 88 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (ESI⁺): 209,0 (M+H), MS (ESF): 207,2 (M-H)'.

O. (3S,6R,7S,8S)-N-(S)-[l-(2-Methyl-4-thiazolyl)-2-methyl-l(E),5-hexadien-3-yl]-3Z<?rc-butyldimethylsiloxy-4,4,6,8-tetra-methyl-7-hydroxy-5-oxo-12-tridecenamid

Roztok sloučeniny M (88 mg, 0,42 mmol) v DMF (1,3 ml) se při 0 °C postupně zpracoval se sloučeninou I (0,15 g, 0,35 mmol), 1-hydroxybenzotriazolem (49 mg, 0,36 mmol) a 1—(3—dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridem (0,10 g, 0,52 mmol). Reakční směs se pozvolna zahřála na 25 °C, míchala po dobu 15 hodin a zředila se H₂O (3 ml). Směs se extrahovala EtOAc (3x10 ml) a spojené organické fáze se promyly 5% vodným roztokem HC1 (10 ml), nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (10 ml), nasyceným vodným roztokem NaCl (10 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Velmi rychlá chromatografie (SiO₂, 1,5x20 cm, 2,5% směsi MeOH-CHCl₃) poskytla sloučeninu O (0,17 g, 77 %) ve formě bílé pěny. MS (ESI⁺): 619,3 (M+H)⁺.

P. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]-4-fórc-Butyldimethylsiloxy-8-hydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-16-[l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-l3(E)-cyklohexadecen-2,6dion

Roztok sloučeniny O (17 mg, 27 mmol) v odplyněném benzenu (8,0 ml) se pod atmosférou argonu zpracoval s Grubbovým katalyzátorem [bis(tricyklohexylfosfín)benzylidenrutheniumdichlorid, Strem Chemicals, 11 mg, 14 mmol). Reakční směs se míchala při 25 °C po dobu 15 hodin a znovu se zpracovala s dalším podílem katalyzátoru (5,0 mg, 4,5 mmol). Po dalších 7 hodinách se benzen odpařil za vakua a černý viskózní odparek se vede přes vrstvu silikagelu (1,0x3 cm) za eluce Et₂O (25 ml). Eluent se odpařil za vakua pro poskytnutí dělitelné směsi 5:1 (E/Z) geometrických izomerů. PTLC (SiO₂, 1 mm deska, 2 eluce roztokem 1:1:1 hexan-toluen-ethylacetát) poskytla E-izomer sloučeniny P (5,1 mg, 34 %) a odpovídající Z-izomer (1,0 g, 6,7 %). Pro slou-29CZ 297904 B6 ceninu P: MS (ESI⁺): 1181,7 (2M+H)⁺, 591,4 (M+H)⁺. Pro Z-izomer: MS (ESI⁺): 1181,5 (2M+H)⁺, 613,2 (2M+Na)⁺. 591,2 (M+H)⁺, MS (ESF): 589,3 (M-H)”.

Q. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-Dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-l 6-[l-methyl-2(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(E)-cyklohexadecen-2,6-dion

Do vialky o obsahu 3,55 cm ³ naplněné roztokem sloučeniny P (2,3 g, 3,9 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) se při 0 °C přidala kyselina trifluoroctová (0,1 ml). Reakční směs se utěsnila pod atmosférou argonu a míchala se při 0 °C. Po 4 hodinách se těkavé podíly odstranily při 0 °C za konstantního proudění argonu. Do zbytku se přidal nasycený vodný roztok NaHCO₃ (1 ml) a EtOAc (1 ml) a oddělily se dvě vrstvy. Vodná fáze se extrahovala EtOAc (4x1 ml) a spojené ethylacetátové vrstvy se vysušily (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. PTLC (SiO₂, 20x10x0,25 cm, eluce směsí 5% MeOH-CHCl₃) poskytla [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]^l,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-16-[l-methyl-2-(2-methyM-thiazolyl)-ethenyl]-l-aza-13(E)-cyklohexadecen-2,6dion (1,3 mg, 68 %) ve formě bílého filmu. MS(ESI): 953,5 (2M+H)⁺, 477,3 (M+H)⁺, MS(ESI“):

475,5 (M-H).

Příklad 2

Následující sloučeniny se mohou připravit podle dříve popsaných reakčních schémat:

[1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-4,13,17-trioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethyl-2-(2-methy I—4-thiazolyl)etheny 1]—4,13,17-trioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-16-[l-methyl-2-(2methyl^l-thiazolyl)ethenyl]-l, 10-dioxa-l 3-cyklohexadecen-2,6-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]H,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-16-[l-methyl-2-(2methyM-thiazolyl)ethenyl]-l, 10-dioxa-l 3-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methy l^l-thiazolyl)ethenyl]-4,14,17-trioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion, [ 1 S-[ 1R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[ 1methyl-2-(2-methyl-4-th iazoly l)etheny l]-4,14,17-trioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,l5R*(E)]M,8-dihydroxy-5,5,7,9,l3-pentamethyl-16-[l-methyl-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l, 11-dioxa-l 3-cyklohexadecen-2,6-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]H,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-l 6-[ l-methyl-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l, 11-dioxa-l 3-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,IOS*,1 IR*, 12R*,16S*]]-7,I l-dihydroxy-8,8,10,l2,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]^l, 17-dioxabicyklo[l 4,1,0]heptadekan-5,9-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethyl-2-(2-methyl-4-thiazoly l)etheny 1]—4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion,

-30CZ 297904 B6 [1 S-[ 1 R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-dihydroxy-3,8,8,10,12,16-hexamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methyMl-thiazolyl)ethenyl]-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR*, 12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-3,8,8,10,12-pentamethyl-3[ 1 -methy l-2-(2-methyl-4-thiazolyl)etheny 1]—4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13,16-hexamethyl-l 6-[ 1 -methy 1-2(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-oxa-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9,16-pentamethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2methyl^l-thiazolyl)ethenyl]-l-oxa-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-6,8,8,10,12,16-hexamethyl-3[ 1 -methy 1-2-(2-methylH-thiazolyl)ethenyl]-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-6,8,8,10,12-pentamethyl-3[ l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,l5R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-l6-[l-methyl-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-l3-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-4,8,8,10,12,16-hexamethyl-3[ l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion, [ 1 S-[ 1 R*,3 R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,11 -rlihydroxy-4,8,8,10,12-pentamethyl-3[l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]^l-aza-17-oxabicyklo[14,l,0]heptadekan-5,9dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]H,8Hihydroxy-l ,5,5,7,9,13-hexamethyl-l 6-[ 1 -methyl-2(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l -aza-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]^l,8-dihydroxy-l, 5,5,7,9-pentamethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [ 1 S-[ 1 R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-13-aza-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan5,9-dion, [ 1 S-[ 1 R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[ 1 methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l 3-aza-4,17-dioxabicyklo[l 4,1,0]heptadekan-5,9dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-16-[l-methy 1-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-10-aza-l-oxa-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-l6-[l-methyl-2-(2methyl—4-thiazolyl)ethenyl]-10-aza-l-oxa-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [ 1 S-[ 1 R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methylH-thiazoly l)etheny IJ-14-aza—4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan5,9-dion,

-31 CZ 297904 B6 [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-7,ll-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l 4-aza-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]—4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-l 6-[l-methyl-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l l-aza-l-oxa-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-16-[l-methyl-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l l-aza-l-oxa-13-cyklohexadecen-2,6-dion, [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-N-Fenyl-7,ll-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-5,9-dioxo-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-3-karboxamid, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-N-Fenyl-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-5,9-dioxo-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-3-karboxamid, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]]-N-Fenyl—4,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-2,6-dioxo-1-oxa-13-cyklohexadecen-l 6-karboxamid, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-N-Fenyl-4,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-2,6-dioxo-loxa-13-cyklohexadecen-l 6-karboxamid, [ 1 S-[ 1R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-Dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ l-methyl-2-(2-methyM-thiazolyl)cyklopropyl]-4,17-dioxabicyklo-[ 14,1,0]heptadekan-3dion a [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR*, 12R*,16S*]]-7,1 l-Dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethyl-2-(2-methy l-4-thiazoly l)cyklopropy l]-4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-3-dion.

Příklad 3

[ lS-[ IR*, 3R*(E),7R*,1 OS*, 11 R*,12R*,16S*]]-7,1 l-Dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)cyklopropyl]-4-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-3dion.

A. Kyselina (3S,6R,7S,8S, 12R, 13 S, 15 S)— 15-azido-l 2,13-epoxy-4,4,6,8,12,16-hexamethyl7-hydroxy-l 7-(2-methyl-4-thiazolyl)-5-oxo-l 6-heptadecenová

Roztok epothilonu B (0,35 g, 0,69 mmol) v odplyněném THF (4,5 ml) se zpracoval s katalytickým množstvím (80 mg, 69 mmol) tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0) a suspenze se míchala pod argonem při 25 °C po dobu 30 minut. Výsledný jasně žlutý homogenní roztok se všechen naráz zpracoval s roztokem azidu sodného (54 mg, 0,83 mmol) v odplyněné H₂O (2,2 ml). Reakční směs se zahřívala na 45 °C po dobu 1 hodiny, zředila se H₂O (5 ml) a extrahovala se EtOAc (4x75 ml). Organické extrakty se promyly nasyceným vodným roztokem NaCI (15 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografii (SiO₂,

-32CZ 297904 B6

3,0x15 cm, 95:5,0:0,5 CHCl₃-MeOH-AcOH) pro poskytnutí sloučeniny A (0,23 g, 61 %) ve formě bezbarvého oleje. MS(ESI⁺): 551 (M+H)⁺⁺, MS (ESI ): 549 (M-H)“.

B. Kyselina (3 S,6R,7S,8S, 12R, 13 S, 15 S>— 15-amino-l 2,13-epoxy-4,4,6,8,12,16-hexamethyl7-hydroxy-l 7-(2-methyl-4-thiazolyl)-5-oxo-l 6-heptadecenová

Roztok sloučeniny A (0,23 g, 0,42 mmol) v THF (4,0 ml) se při 25 °C zpracoval s H₂O (23 ml, 1,25 mmol) a na polymeru naneseným trifenylfosfinem (Aldrich, polystyren zesíťovaný 2 % DVB, 0,28 g, 0,84 mmol). Výsledná suspenze se míchala při 25 °C pod atmosférou argonu (32 hodin), přefiltrovala se přes Celíte a odpařila za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografií (SiO₂, 1,5x10 cm, gradientová eluce od 95:5,0:0,5 do 90:10:1,0 CHCl₃-MeOHAcOH) pro poskytnutí sloučeniny B (96 mg, 44 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (EST): 525,2 (M+H)⁺, MS(ESf): 523,4 (M-H)’.

Případně se do 25ml baňky s kulatým dnem naplněné sloučeninou A (0,26 g, 0,47 mmol) a PtO₂ (0,13 g, 50 % hmotnostních) pod argonem přidal absolutní EtOH. Výsledná černá směs se míchala pod atmosférou H₂ po dobu 10 minut, po této době se soustava propláchla N₂ a přidala se další část PtO₂ (65 mg, 25 % hmotnostních). Ještě jednou se reakční směs míchala pod atmosférou H₂ po dobu 10 hodin. Soustava se poté propláchla N₂ a reakční směs se zfiltrovala přes vrstvu Celíte při eluci CH₂C1₂ (3x25 ml). Rozpouštědla se odpařila za vakua a odparek se přečistil výše uvedeným způsobem pro poskytnutí sloučeniny B (0,19 g, 75 %).

Případně se roztok sloučeniny A (20 mg, 36 mmol) v THF (0,4 ml) pod argonem zpracoval s trifenylfosfínem (19 mg, 73 mmol). Reakční směs se zahřála na 45 °C, míchala po dobu 14 hodin a ochladila na 25 °C. Vzniklý iminofosforan se zpracoval s hydroxidem amonným (28%, 0,1 ml) a reakční směs se ještě jednou zahřála na 45 °C. Po 4 hodinách se těkavé podíly odstranily za vakua a odparek se přečistil výše uvedeným způsobem pro poskytnutí sloučeniny B (13 mg, 70 %).

C. [1 S-[ 1R*,3R*(E),7R*, 1 OS*, 11R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-Dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl—3-[ 1 -methy 1-2-( 2-methy l-4-th iazoly l)etheny l]-4-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion

Roztok sloučeniny B (0,33 g,0,63 mmol) v odplyněném DMF (250 ml) se při 0 °C pod atmosférou argonu zpracovával s pevným NaHCO₃ (0,42 g, 5,0 mmol) a difenylfosforylazidem (0,54 ml,

2,5 mmol). Výsledná suspenze se míchala při 4 °C po dobu 24 hodin, při 0 °C se zředila fosforečnanovým pufrem (250 ml, pH 7) a extrahovala se EtOAc (5x100 ml). Organické extrakty se promyly 10% vodným roztokem LÍCI (2x125 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Odparek se nejprve přečistil velmi rychlou chromatografií (SiO₂, 2,0x10 cm, gradientová eluce 2 až 5% MeOH-CHCl₃) a poté se přečistil za použití Chromatotronu (2 mm SiO₂, GF rotor, gradientová eluce 2 až 5 % MeOH-CHCl₃) pro poskytnutí uvedené sloučeniny (0,13 g, 40 %) ve formě bezbarvého oleje. *H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 6,98 (s, 1H), 6,71 (d, 1H, NH, J = 8,1 Hz), 6,56 (s, 1H), 4,69 až 4,62 (m, 1H), 4,18 až 4,12 (m, 1H), 4,01 až 3,96 (m, 1H), 3,86 (s, 1H), 3,38 až 3,34 (m, 1H), 2,92 (dd, 1H, J = 5,6, 6,0 Hz), 2,71 (s, 3H), 2,58 (s, 1H), 2,43 (dd, h, J = 9,0, 14,5 Hz), 3,34 (dd, 1H, J = 3,0, 14,5 Hz), 2,14 (s, 3H), 2,05 až 1,92 (m, 2H), 1,82 až 1,41 (série multipletů, 7H), 1,35 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 1,18 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,14 (s, 3H), 1,00 (d, 3H, J = 6,8 Hz); MS (ESI⁺): 507,2 (M+H)⁺; MS (ESI’): 505,4 (M-H) .

Příklad 4

Způsob redukce oxiranového kruhu epothilonu a analogů epothilonu

Do dvouhrdlé baňky se vložily nasekané kousky třísek hořčíku (24 mg, 1,0 mmol). Baňka se za vakua vysušila plamenem a ochladila se pod argonem. Přidal se bis(cyklopentadienyl)titandichlo

-33CZ 297904 B6 rid (250 mg, 1,0 mmol) a následně bezvodý THF (5 ml). Míchaná suspenze se odplynila hlubokým vakuem a baňka se znovu naplnila argonem. Červená suspenze se stala tmavou, přičemž přecházela po 1,5 hodině do rovnoměrně tmavě zelené s tím, jak se spotřeboval téměř veškerý kovový hořčík. Odebral se alikvotní podíl (3,5 ml, 0,70 mmol, 3,5 ekv.) a ochladil se pod argonem na -78 °C. Do tohoto roztoku se přidal epothilon A (99 mg, 0,20 mmol, 1,0 eq). Reakční směs se zahřála na teplotu místnosti a míchala po dobu 15 minut. Těkavé podíly se odpařily za vakua a odparek se dvakrát chromatografoval na oxidu křemičitém (25 g), přičemž se jako nosná kapalina použila směs 35% EtOAc/hexany při poskytnutí 76 mg (80 %) epothilonu C ve formě světle žlutého viskózního oleje.

Příklad 5

[lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-7,ll-Dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)cyklopropyl]-4-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion

A. Kyselina (3S,6R,7S,8S,I2R, 13S,l5S)-15-azido-3,7-dihydroxy-12,13-epoxy—4,4,6,8,16pentamethyl-17-(2-methyl—4-thiazolyl)-5-oxo-l 6(E)-heptadecenová

Do roztoku epothilonu A (4,97 g, 10,1 mmol, 1,0 ekv.) v odplyněném THF (100 ml) se při teplotě místnosti přidalo tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0) (1,17 g, 1,01 mmol, 0,10 ekv.) a míchalo se po dobu 30 minut pod argonem. Do této reakční směsi se přidal azid sodný (0,980 g, 15,1 mmol, 1,5 ekv.) a následně se přidala odplyněná voda (10 ml). Reakční směs se zahřívala po dobu 1 hodiny na 45 °C, ochladila se na teplotu místnosti, zředila se ethylacetátem (300 ml) a dále se zředila vodou (150 ml). Vodné vrstvy se extrahovaly ethylacetátem (3x100 ml). Spojené organické extrakty se promyly roztokem NaCl (150 ml), vysušily se (síranem sodným), zfiltrovaly a odpařily se za vakua. Olej ovitý zbytek se přečistil velmi rychlou chromatografií na silikagelu (eluce 0 až 5 % methanol/chloroform s 0,1 % kyseliny octové) pro poskytnutí sloučeniny A (1,84 g, 34,0% výtěžek) ve formě sklovité pevné látky. MS (EST): 537 (M+H)⁺, MS (ESE): 535 (M-H)’.

B. Kyselina (3S,6R,7S,8S,12R,13S,15S)-15-amino-3,7-dihydro-12-13-epoxy-^4,4,6,8,16pentamethyl-17-(2-methyl-4-thiazolyl)-5-oxo-l 6(E)-heptadecenová

Do roztoku sloučeniny A (1,85 g, 3,44 mmol, 1,0 ekv.) v absolutním ethanolu (137 ml) se přidal oxid platičitý (0,980 g, 4,30 mmol, 1,25 ekv.). Reakční směs se silně míchala při teplotě místnosti pod vodíkovým balónkem po dobu 16 hodin. Reakční směs se zfiltrovala a filtrát se odpařil za vakua. Olejovitý odparek se přečistil preparativní HPLC (YMC S—15 ODS 50x500 mm kolona, 45 minut/gradientová eluce, 0 až 100%, B, 50 ml.min“¹, retenční čas 17 minut, A = 0,1 % kyseliny octové/5 % acetonitrilu/95 % vody, B = 0,1 % kyseliny octové/5 % vody/95 % acetonitrilu). Příslušné frakce se odpařily za vakua a zbytek se lyofilizoval z vodného roztoku acetonitrilu pro poskytnutí sloučeniny B (1,33 g, 76,0% výtěžek) ve formě bezbarvé pevné látky.

MS (EST): 511 (M+H)⁺, MS (EST): 509 (M-H) .

-34CZ 297904 B6

C. [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3[ l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)cyklopropyl]-4-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan5,9-dion

Sloučenina B (0,860 g, 1,68 mmol, 1,0 ekv.) se rozpustila v bezvodém DMF (0,00250 M, 672 ml) a odplyňovala se po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Roztok se ochladil na 0 °C apod atmosférou argonu se přidal bezvodý hydrogenuhličitan sodný (1,13 g, 13,4 mmol, 4,0 ekv.) a difenylfosforylazid (1,85 g, 6,72 mmol, 8,0 ekv.). Reakční směs se udržovala pod atmosférou argonu na teplotě 4 °C a míchala se po dobu 16 hodin. Poté se reakční směs ochladila na -60 °C a pomalu se po přerušení reakce přidal fosforečnanový pufr o pH 7 (400 ml). Teplota se udržovala pod -30 °C. Tato směs se ponechala pomalu zahřát na teplotu místnosti a extrahovala se ethylacetátem (1 litr). Vodná vrstva se promyla ethylacetátem (4x300 ml). Organické extrakty se spojily, promyly se 10% roztokem LiCl (500 ml), vysušily se (síranem sodným) zfíltrovaly a odpařily se za vakua. Olejovitý odparek se přečistil preparativní HPLC (kolona YMC S-l5 ODS 50x500 mm, 45 minut/gradientová eluce, 0 až 100 % B, 50 ml.min^-1, retenční čas = 35 minut, A = 5 % acetonitrilu/95 % vody, B = 5 % vody/95 % acetonitrilu). Příslušná frakce se odpařily za vakua a odparek se lyofilizoval z vodného roztoku acetonitrilu pro poskytnutí uvedené sloučeniny (0,220 g, 26,0% výtěžek) ve formě bezbarvé pevné látky.

MS (ESI⁺): 493 (M+H)⁺; MS (ESL): 491 (M-H) .

Příklad 6

[4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]H,8-Dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-16-[l-methyl-2(2-methy l-4-th iazo ly l)etheny 1]-1 -aza-13 (Z)-cyklohexadecen-2,6-dion

Chlorid wolframový (0,19 g, 0,49 mmol, 0,5 ekv.) se rozpustil v THF (5,0 ml) a roztok se ochladil na -78 °C. Najednou se přidal roztok n-butyllithia v hexanu (1,6M, 0,63 ml, 1,0 mmol, 1,0 ekv.) a reakční směs se ponechala během 20 minut zahřát na teplotu místnosti (během zahřívání na teplotu místnosti roztok nabýval tmavě zelené barvy). 0,lM roztok takto připraveného wolframového činidla (0,79 ml, 0,079 mmol, 2,0 mmol) se při teplotě místnosti přidal ke sloučenině 4C (0,020 g, 0,039 mmol, 1,0 ekv.). Reakční směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 30 minut a poté se přelila nasyceným roztokem NaHCO₃ (2,0 ml). Tento roztok se zředil vodou (10 ml) a roztok se extrahoval CH₂C1₂ (4x20 ml). Spojené organické extrakty se vysušily (Na₂SO₄), zfíltrovaly a odpařily za vakua. Anorganické látky se odstranily vedením odparku přes vrstvu silikagelu (eluce roztokem CHCl₃/MeOH v poměru 19/1). Eluent se odpařil za vakua. Odparek se přečistil PHPLC (YMC S-5 ODS, 30 až 100 % B, A = 5% vodný roztok CH₃CN, B = 95% vodný roztok CH₃CN, 3 ml.min^-1, 220 nm, 30 minut, gradientová eluce) a příslušné frakce se odpařily za vakua. Lepkavá pevná látka se lyofílizovala z vodného roztoku acetonitrilu pro poskytnutí sloučeniny pojmenované v nadpisu (4,3 mg, 29 %), ve formě bílé pevné látky. TLC: Rf = 0,57 (9/1 CHCl₃/MeOH, zviditelnění pomocí UV záření), HRMS: (M+H)+, vypočteno 491,29436, nalezeno 491,2934.

-35CZ 297904 B6

Příklad 7

[1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-Dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[l-methyl-2-(2-hydroxymethyl-4-thiazolyl)ethenyl]^4-aza-l 7-oxabicyklo[14,l,0]heptadekan5,9-dion

A. N-Oxid [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1 IR* 12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-4,8,8,10,12pentamethyl-3-[ l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]^l-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dionu

Roztok epothilonu B (2,0 g, 3,9 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se při 25 °C během 2 hodin pod atmosférou argonu zpracoval s kyselinou 3-chlorperoxybenzoovou (1,0 g, 5,9 mmol). Přidalo se dalších 0,5 g (3,0 mmol) kyseliny 3-chlorperoxybenzoové a reakční směs se míchala po dobu 2 hodin. Reakční směs se zfiltrovala a filtrát se odpařil za vakua. Odparek se rozpustil v EtOAc (100 ml), promyl se nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (75 ml), 5% vodným roztokem Na₂SO₃ (75 ml), H₂O (75 ml), vysušil se (Na₂SO₄) a odpařil se za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografii (SiO₂, 4,5x30 cm, gradientová eluce 2 až 10% roztokem MeOHCHC1₃) pro poskytnutí sloučeniny A (1,04 g, 50 %) ve formě bílé pevné látky. MS (ESI⁺): 524,3 (M+H)⁺; MS (ESI^-): 522,5 (M-H).

B. [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-Dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[ l-methyl-2-(2-hydroxymethyl^l-thiazolyl)etheny 1]—4,17-dioxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion [epothilon F]

Do roztoku sloučeniny A (0,46 g, 0,88 mmol) v CH₂C1₂ (10 ml) v opakovaně uzavíratelné zkumavce se pod atmosférou argonu přidal 2,6-lutidin (0,82 ml, 7,0 mmol) a anhydrid kyseliny trifluoroctové (0,87 ml, 6,2 mmol). Reakční nádoba se pod atmosférou argonu utěsnila, zahřála se na 75 °C (12 minut), ochladila se na 25 °C a těkavé podíly se odstranily pod stálým proudem N₂. Reakční zkumavka se poté připojila k vysokopodtlakovému čerpadlu na 15 minut. Výsledný zbytek se rozpustil v MeOH (10 ml) a zpracoval s hydroxidem amonným (28 až 30 % NH₄ v H₂O, 1 ml). Směs se zahřívala na 45 °C (10 minut)) a těkavé podíly se odpařily za vakua. Surový reakční směs se přečistila HPLC (kolona YMC S—15 ODS 30x500 mm, 50% roztok acetonitril-36CZ 297904 B6 voda, izokratické podmínky, průtok 20 ml.min^-1, retenční čas 28 minut). Příslušné frakce se odpařily za vakua a odparek se lyofilizoval z vodného acetonitrilu pro poskytnutí sloučeniny B (0,22 g, 48 %) ve formě bílé pevné látky. MS(ESI⁺): 524,3 (M+H)⁺, 1047,6 (2M+H)⁺, MS (ESI^-):

522,5 (M-H)^-.

C. Kyselina (3S,6R,7S,8S,12R,13S,15S)-15-azido-3,7-dihydroxy-12,13-epoxy-4,4,6,8,12,-

16-hexamethyl-l 7-(2-hydroxymethyl-4-thiazolyl)-5-oxo-16(E)-heptadecenová

Roztok sloučeniny B (0,18 g, 0,34 mmol) v odplyněném THF (3,0 ml) se zpracoval s katalytickým množstvím (40 mg, 3,4.10^-2 mmol) tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0) a směs se míchala pod atmosférou argonu při 25 °C po dobu 30 minut. Výsledný jasně žlutý homogenní roztok se všechen najednou zpracoval s roztokem azidu sodného (27 mg, 0,41 mmol) v odplyněné H₂O (1,5 mmol). Reakční směs se zahřívala na 45 °C po dobu 1 hodiny, zředila se H₂O (5 ml) a extrahovala se EtOAc (4x10 ml). Organické extrakty se promyly nasyceným vodným roztokem NaCl (15 ml), vysušily (Na₂SO₄) a odpařily se za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografií (SiO₂, 2,5x15 cm, gradientová eluce 95:5,0:0,5 CHCf-MeOH-AcOH) pro poskytnutí sloučeniny C (39 mg, 20 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (ESI⁺): 567,4 (M+H)⁺, 1136,6 (2M+H)⁺, MS (ESI^-): 565,5 (M-H), 1131,8 (M-H)^-.

D. Kyselina (3S,6R,7S,8S, 12R, 13S, 15S)— 15-amino-3,7-dihydroxy-l2,13-epoxy-4,4,6,8,12,16-hexamethyl-l 7-(2-hydroxymethyl-4-thiazolyl)-5-oxo-l 6(E)-heptadecenová

Do baňky s kulatým dnem o objemu 10 ml naplněné sloučeninou C (40 mg, 71 mmol) a PtO₂ (12 mg, 30 % hmotnostních) se pod atmosférou argonu přidal absolutní ethanol (3 ml). Výsledná černá směs se míchala pod atmosférou vodíku po dobu 10 hodin. Soustava se naplnila dusíkem a reakční směs se zfíltrovala přes nylonovou membránu (promytou 25 ml MeOH). Rozpouštědla se odpařila za vakua pro poskytnutí sloučeniny D (29 mg, 76 %) ve formě pěny, která byla dostatečně čistá pro použití v dalším kroku. LCMS: 541,3 (M+H)⁺.

Ε. [ 1 S-[ 1 R*,3R*(E),7R*, 10S*,l 1R*, 12R*, 16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[ 1 -methyl-2-(2-hydroxymethyl-4-thiazolyl)etheny l]M-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion

-37CZ 297904 B6

Roztok sloučeniny D (29 mg, 54 mmol) v odplyněném DMF (21 ml) se při 0 °C pod atmosférou argonu zpracoval s pevným NaHCO₃ (36 mg, 0,43 mmol) a difenylfosforylazidem (46 ml, 0,21 mmol). Výsledná suspenze se míchala při 4 °C po dobu 19 hodin, ochladila se na -40 °C, zředila se 25 ml fosforečnanového pufru o pH 7 (opatrně přidávat, aby vnitřní teplota zůstala pod -30 °C) a extrahovala se EtOAc (4x10 ml). Organické extrakty se promyly chladným 10% vodným roztokem LiCl (25 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily se za vakua. Odparek se přečistil za použití chromatotronu (1 mm SiO₂, GF rotor, gradientova eluce směsí 2 až 5% MeOH-CHCl₃) pro poskytnutí sloučeniny E uvedené v nadpisu (9,1 mg, 34 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (EST): 523,2 (M+H)⁺, MS (ESF): 521,5 (M-H)’.

Příklad 8

[4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]-4,8-Dihydro-5,5,7,9,13-pentamethyl-16-[l-methyl-2-(2hydroxymethy l-4-th iazo ly l)ethenyl]-1 -aza-13 (Z)-cyklohexadecen-2,6-dion

A. [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-7,ll-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[l-methyl-2-(2-/erc-butyldifenylsilyloxymethyl^l-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17oxabicyklof 14,1,0]heptadekan-5,9-dion

Roztok sloučeniny 7E (6,8 mg, 13 mmol) v CH₂C1₂ (0,5 ml) se při 0 °C pod atmosférou argonu zpracoval s triethylaminem (2,7 ml, 20 mmol), 4-N,N-dimethylaminopyridinem (0,2 mg, 1,3 mmol) a fórc-butyldifenylsilylchloridem (3,7 ml, 14 mmol). Reakční směs se postupně zahřívala při 25 °C (1 hodinu), ochladila se na 0 °C, reakce se přerušila přidáním nasyceného vodného roztoku NaHCO₃ (1 ml) a reakční směs se extrahovala EtOAc (4x2 ml). Spojené organické extrakty se promyly roztokem chloridu sodného (5 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a odpařily se za vakua. Odparek se přečistil velmi rychlou chromatografií (SiO₂, 1,0x5 cm, gradientová eluce směsí 2 až 5% MeOH-CHCl₃) pro poskytnutí sloučeniny A (7,0 mg, 71 %) ve formě bezbarvého oleje. MS (ESI⁺): 761,5 (M+H)⁺, MS (ESF): 759,7 (M-H)~.

-38CZ 297904 B6

B. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]^l,8-Dihydro-5,5,7,9,13-pentamethyl-16-[l-methyl-2(2-hydroxymethyl^l-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(Z)-cyklohexadecen-2,6-dion

Roztok chloridu wolframičitého (0,10 g, 0,25 mmol) v bezvodém THF se při -78 °C pod atmosférou argonu zpracoval s ra-BuLi (1,6M roztok v hexanu, 0,32 ml, 0,50 mmol). Reakční směs se zahřívala při 25 °C po dobu 40 minut a poté se znovu ochladila na 0 °C. Alikvotní podíl (0,2 ml, 20 mmol) výsledného tmavě zeleného, homogenního roztoku se při 0 °C pod atmosférou argonu přidal do vialky o obsahu 3,55 cm³ (1 dram) naplněné sloučeninou A (7,0 mg, 9,2 mmol). Reakční směs se zahřála na 25 °C, míchala se 30 minut, reakce se přerušila přidáním nasyceného vodného roztoku NaHCO₃ (0,5 ml) a reakční směs se extrahovala EtOAc (4x1 ml). Spojené organické extrakty se vysušily (Na₂SO₄) a odpařily za vakua. Odparek se přečistil preparativní TLC (SiO₂, 20x20x0,025 cm, eluce směsí 5% MeOH-CHCl₃) pro poskytnutí nedělitelné směsi silylem chráněného (13Z) izomeru sloučeniny B a malého množství (<10 %) menšinového (13E) izomeru, u kterého se bezprostředně v následujícím kroku odstranila chránící skupina.

Směs silylem chráněných izomerů sloučeniny B (2,3 mg, 3,1 mmol) se při 25 °C zpracovala s 0,3 ml pufrovaného roztoku HF-pyridin v THF (roztok 2:1:0,5 THF/pyridin/HF-pyridin od Aldrich Chemical Co.). Po 1 hodině se směs zneutralizovala nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (0,5 ml) a extrahovala se EtOAc (4x1 ml). Spojené organické extrakty se promyly nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (1 ml), vysušily se (Na₂SO₄) a těkavé podíly se odstranily za vakua. Odparek se přečistil preparativní TLC (SiO₂, 20x10x0,025 cm, eluce směsí 5% MeOHCHC1₃) pro poskytnutí sloučeniny pojmenované v nadpisu (13Z-izomeru) spolu s neoddělitelným množstvím (<10 %) menšinového (13E) izomeru (0,96 mg, 20 % pro dva kroky) ve formě tenkého filmu. MS (EST): 507,3 (M+H)⁺, MS (EST): 505,6 (M-H)~.

PATENTOVÉ

Claims (6)

1. Derivát epithilonu obecného vzorce V' ve kterém

Q je vybráno ze souboru sestávajícího z

-39CZ 297904 B6

G je

W jeNH;

X je O;

Y je O;

Z] a Z₂ jsou každý CH₂;

Β, a B₂ jsou OH;

Ri, R₂, R₃, R4, R₅, R₇ a Ri₂ jsou vybrány ze souboru sestávajícího z vodíku a nižšího alkylu;

Rg je methyl;

Rs je vodík nebo methyl a

R11 je nebo kde

R je vodík, nižší alkyl nebo nižší alkyl substituovaný OH;

a jejich stereomeiy, kde výraz „nižší alkyl“ se týká přímé nebo rozvětvené nesubstituované uhlovodíkové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku.

2. Derivát epithilonu podle nároku 1 obecného vzorce V', kde

Q je skupina vzorce

Rs je methyl a

R11 je nebo

R je methyl nebo hydroxymethyl.

-40CZ 297904 B6

3. Derivát epithilonu vzorce nebo jeho stereoizomer.

4. Derivát epithilonu vzorce

5. Derivát epithilonu, který je vybrán ze souboru zahrnujícího [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)]H,8-dihydroxy-5,5,7,9-tetramethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2methy l-4-thiazolyl)etheny 1]-1 -aza-13 (E)-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[l-methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[l4,l,0]heptadekan-5,9dion, [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,llR*,12R*,16S*]]-7,ll-dihydroxy-8,8,10,12-tetramethyl-3-[lmethy l-2-(2-methy M-th iazoly 1 jetheny l]-4-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9-dion, [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*, 15R*(E)JH,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2methyl-4-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(Z)-cyklohexadecen-2,6-dion, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-hydroxymethyl-4-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan5,9-dion a [4S-[4R*, 7S*,8R*,9R*,15R*(E)]]%,8-dihydroxy-5,5,7,9,13-pentamethyl-l 6-[ 1-methy 1-2-(2hydroxymethyM-thiazolyl)ethenyl]-l-aza-13(Z)-cyklohexadecen-2,6-dion.

6. Derivát epithilonu, kterým je [1S-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,11R*,12R*,16S*]]-7,1 l-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3[ 1 -methyl-2-(2-methyl-4-thiazolyl)etheny l]-4-aza-l 7-oxabicyklo[ 14,1,0]heptadekan-5,9dion.

Konec dokumentu