CZ291186B6 - Rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, cytoplazma, rostlina, způsob přípravy rostliny, sonda nukleové kyseliny, DNA molekula - Google Patents

Rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, cytoplazma, rostlina, způsob přípravy rostliny, sonda nukleové kyseliny, DNA molekula Download PDF

Info

Publication number
CZ291186B6
CZ291186B6 CS1993454A CS4549391A CZ291186B6 CZ 291186 B6 CZ291186 B6 CZ 291186B6 CS 1993454 A CS1993454 A CS 1993454A CS 4549391 A CS4549391 A CS 4549391A CZ 291186 B6 CZ291186 B6 CZ 291186B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
plant
sequence
genome
dna
mitochondrial
Prior art date
Application number
CS1993454A
Other languages
English (en)
Inventor
Sandrine Bonhomme
Francoise Budar
Dominique Lancelin
Georges Pelletier
Original Assignee
Institut National De La Recherche Agronomique
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9400521&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ291186(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Institut National De La Recherche Agronomique filed Critical Institut National De La Recherche Agronomique
Publication of CZ45493A3 publication Critical patent/CZ45493A3/cs
Publication of CZ291186B6 publication Critical patent/CZ291186B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8287—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for fertility modification, e.g. apomixis
    • C12N15/8289—Male sterility
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/14—Plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Rekombinantn rostlinn² jadern² nebo mitochondri ln genom obsahuj c a) DNA sekvenci vymezenou nukleotidy . 928 a 1569 podle obr zku 1 -SEQ ID NO: 1 nebo b) DNA sekvenci k duj c proteinov² produkt translace identick² s t m, kter² je k dov n, kde uveden sekvence ud luje cytoplazmatickou sam sterilitu rostlin , v jej m mitochondri ln m genomu je p° tomna, p°i em tento rekombinantn genom neobsahuje funk n kopii genu z Ogurova genomu, p°i em tento gen z Ogurova genomu je definov n takto: i) gen pro formylmethionin-transferovou RNA pou van² pro iniciaci translace, kter² je charakterizov n t m, e po NruI t pen poskytuje DNA fragment o velikosti 15 kilob z nebo po SalI t pen poskytuje DNA fragment o velikosti 5,1 kilob z a oba tyto fragmenty je mo n vizualizovat hybridizac se sondou odpov daj c sekvenci vymezen nukleotidy 389 a 1199 v sekvenci zobrazen na obr zku 1 -SEQ ID NO: 1 nebo ii) Cox1 gen k duj c podjednotku . 1 cytochrom oxid zy, kter² je charakterizov n t m, e po BglI t pen poskytuje DNA fragment o velikosti 10,7 kilob z nebo po NruI t pen poskytuje DNA fragment o velikosti 11 kilob z a oba tyto fragmenty je mo n vizualizovat hybridizac s Cox1 sondou.\

Description

Oblast techniky
Předkládaný vy nález se týká biologického materiálu vykazujícího samčí sterilitu, která je vhodná pro vývoj hybridních variet druhů důležitých z agronomického hlediska.
Předkládaný vynález se zvláště týká rostlin náležejících do čeledi Cruciferae, jejichž buněčná cytoplazma obsahuje organely nesoucí nukleotidovou sekvenci, která uděluje vlastnosti samčí sterility a vhodné agronomické vlastnosti.
Dosavadní stav techniky
Vývoj hybridních variet může být usnadněn nebo umožněn použitím systému cytoplazmatické samčí sterility. Hybridi mohou být získány kříženým oplodněním mezi dvěma rodičovskými populacemi, z nichž jedna plní roli samčí a druhá roli samičí. Je-li cílem získat hybridní variety stejné kvality sexuálním křížením samooplodňujících se druhů, je jednu z překážek samoopylovací schopnost rostlin. Systém samčí sterility umožňuje získat samičí rostliny, které nejsou schopné samooplodnění a z nichž lze po opylení, bez použití náročných technik jako je například kastrace květů, přímo získat semena, která jsou všechna hybridní.
Genetické determinanty samčí sterility zahrnují determinanty nesené cytoplazmou. U každé sexuálním způsobem vzniklé generace, jsou tyto determinanty přenášeny výlučně matkou. V systému cytoplazmatické samčí sterility (CMS) je tedy 100 % samčího potomstva sterilní. Tyto genetické determinanty jsou neseny mitochondriálním genomem.
Vhodný systém samčí sterility pro Cruciferae je definován následujícími vlastnostmi:
1) Samčí sterilita musí být úplná, to znamená, že nesmí docházet k žádné produkci pylu nehledě na kultivační podmínky a bez ohledu na linii, která se používá jako samičí rodič. Není-li tato podmínka splněna, budou semena sklizená z těchto samičích rostlin zčásti pocházet ze samooplození a nebudou tudíž FI hybridního typu.
2) Při produkci těchto semen se musí využívat přírodních pylových vektorů, což v případě těchto druhů znamená využívat Hymenopter, Dipter a větru. Pyl musí být přenášen z pylujících rostlin na samčí (samičí) sterilní rostliny. Ve skutečnosti může u Cruciferae tento přenos na vzdálenost uskutečnit pouze hmyz.
Samičí rostliny musí proto být dostatečně přitažlivé pro hmyz, který na nich sbírá nektar. Morfologie květů musí nutit hmyz k plnění toho úkolu přes vršek květu tak, že především thorax hmyzu přijde do kontaktu s bliznou. V praxi to vede k situaci, kdy základ korunních plátků musí vytvořit trubičku kolem základu pestíku.
3) Morfologie samičích orgánů (pestíku) musí být stejná jako u fertilních rostlin, obzvláště jdeli o jeden pestík na květ, který’ má přímý tvar. Samčí sterility mají často za následek feminizaci prašníků, které jsou přeměněny v pseudopestíky a dokonce transformaci nektarií na kompletní květy. Někdy je takto vzniklý pestík nebo pestíky také deformován. Všechny tyto poruchy neumožňují dobrou produkci semen, což může být považováno za ekvivalent určitého stupně samčí sterility.
-1 CZ 291186 B6
4) Pro produkci F1 hybridních variet u druhů, z nichž jsou sbírána semena, jako jsou řepka nebo hořčice, je důležité, že samčí rodič hybrida naprosto potlačuje efekt samčí sterilní cvtoplazmy, takže hybridní rostliny jsou snadno opylovány.
U Cruciferae byl první případ samčí sterilní cytoplazmy neboli CMS popsán pro ředkev, Raphanus sativus Ogurou (1968). Bannerot (1974, 1977) přenesl Ogurovu cytoplazmu do Brassicae, čímž získal rostliny vykazující samčí cytoplazmatickou sterilitu. Tyto rostliny nevykazovaly vyhovující agronomické vlastnosti (chloróza za klesající teploty, slabá samičí fertilita), což mělo za následek malý výnos a nevhodnost těchto rostlin pro komerční využití.
Aby se u Cruciferae zabránilo této chloróze, musí být v jedné buňce kombinován jaderný a chloroplastový genom jednoho a téhož rodu. Rostliny Brassica obsahující jeden zchloroplastových genomů Brassicae nevykazují chlorózu. Pokud obsahují celý Ogurův mitochondriální genom, vykazují totální cytoplazmatickou samčí sterilitu, ale květy mají aberantní morfologii, což znemožňuje jejich opylení přirozenými vektory.
U těch druhů, kde je zájem soustředěn na semena, je vhodné u hybridních variet obnovit samčí fertilitu, čehož je dosahováno pomocí jaderných genů označovaných jako obnovující geny (restorer genes).
U rostlin obsahujících celý Ogurův mitochondriální genom je obtížné obnovit samčí fertilitu, protože je nutné dosáhnout účasti několika obnovujících genů zároveň.
Byla snaha získat vyhovující systém samčí sterility odstraněním genů zodpovědných za nevhodné vlastnosti Ogurovy cytoplazmy při současném zachování účinné a snadno obnovitelné samčí sterility.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález se týká rekombinantního rostlinného jaderného nebo mitochondriálního genomu, který obsahuje
a) DNA sekvenci vymezenou nukleotidy č. 928 až 1569 podle obrázku 1 -SEQ ID NO: 1 nebo
b) DNA sekvenci kódující proteinový produkt translace identický s tím, který je kódován a), kde uvedená sekvence uděluje cytoplazmatickou samčí sterilitu rostlině, v jejímž mitochondriálním genomu je přítomna, přičemž tento rekombinantní genom neobsahuje funkční kopii genu z Ogurova genomu, přičemž tento gen z Ogurova genomu je definován takto:
i) gen pro formylmethionin-transferovou RNA používaný pro iniciaci translace, který je charakterizován tím, že po Nrul štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 15 kilobází nebo po Sáli štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 5,1 kilobází a oba tyto fragmenty je možné vizualizovat hybridizací se sondou odpovídající sekvenci vymezené nukleotidy 389 až 1199 v sekvenci zobrazené na obrázku 1 - SEQ ID NO: 1 nebo ii) Coxl gen kódující podjednotku č. 1 cytochrom oxidázy, který je charakterizován tím, že po BglI štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 10,7 kilobází nebo po Nrul štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 11 kilobází a oba tyto fragmenty je možné vizualizovat hybridizací s Coxl sondou.
-2CZ 291186 B6
Předkládaný vynález se týká DNA sekvence, která zde bude označována jako DNA sekvence Ogurovy sterility, která uděluje uvedené rostlině, je-li přítomna v jejím mitochondriálním genomu, cytoplazmatickou samčí sterilitu.
Konkrétně je předmětem předkládaného vynálezu DNA sekvence Ogurovy sterility, která v mitochondriálních samčích sterilních rostlin je transkribována na RNA.
V následující části textu se budou vyskytovat odkazy na následující obrázky:
Obrázek 1: nukleotidová sekvence fragmentu Ogurovy mitochondriální DNA z ředkve, která nese CMS charakter.
Obrázek 2: restrikční mapa fragmentu mitochondriální DNA popsaného na obrázku 1.
Obrázek 3: elektroforéza mitochondriální DNA po štěpení BglI (3a) a Nrul (3b). Zobrazené pruhy odpovídají hybridizaci s Coxl sondou (Hiessel et al. 1987).
Obrázek 4: Elektroforéza mitochondriální DNA po Sáli štěpení. Zobrazené pruhy odpovídají hybridizaci se sondou vymezenou nukleotidy 389 až 1199 v sekvenci popsané na obrázku 1.
Obrázek 5: Plody produkované rostlinami zelí nesoucími různé cytoplazmatické genomy.
Obrázek 6: Elektroforéza mitochondriální RNA. Zobrazené pruhy odpovídají hybridizaci se sondou získanou označením EcoRI-BamHI fragmentu, který zahrnuje část sekvence označované jako ORF B.
DNA sekvence Ogurovy sterility je definována ve vztahu k sekvenci ohraničené čísly 1 až 2428 na obrázku 1. Je nesena transkribovanou sekvencí, jejíž 3' a 5' konce jsou na obrázku 2 spojeny přerušovanou čarou a která je pozorována pouze u sterilních samčích rostlin. ORF B odpovídá otevřenému čtecímu rámci; toto označení bylo zavedeno na základě pozorované homologie se sekvencí popsanou Brennickem. Na obrázku 2 je plným obdélníkem znázorněna sekvence odpovídající jednomu ze dvou genů pro formylmethionin-transferovou RNA.
DNA sekvence ohraničená nukleotidy 928 až 2273 podle obrázku 1 odpovídá transkriptu který může být vizualizován molekulární hybridizaci (1.4), což je znázorněno na obrázku 6. Na obrázku 6 odpovídají jamky označení (F) fertilní rostlině a jamky označené (S) sterilní rostlině. Pouze samčí sterilní rostliny syntetizují transkript dlouhý přibližně 1400 bází. Tento transkript začíná na pozici 928 (± 10 bází) sekvence z obrázku 1 a končí na pozici 2273 (± 5) (iniciace a terminace transkripce může v rostlinných mitochondriích probíhat na různých pozicích).
Především se předkládaný vynález vztahuje na cytoplazmu obsahující DNA sekvenci, která vykazuje přinejmenším 50% homologii se sekvencí ohraničenou nukleotidy 928 až 2273 podle obrázku 1 a která poskytuje vlastnosti CMS, nebo na cytoplazmu obsahující DNA sekvenci, která vykazuje přinejmenším 50% homologii se sekvencí ohraničenou nukleotidy 928 až 1569 podle obrázku 1, je transkribována do RNA, a která poskytuje vlastnosti CMS a je charakterizována takto:
- obsahuje chloroplasty stejného druhu jako jaderný genom nebo chloroplasty jiného druhu, které jsou slučitelné s tímto jaderným genomem,
- neobsahuje ani celý ani část jednoho nebo druhého (nebo obou) fragmentů Ogurova mitochondriálního genomu, který je definován níže:
nese jeden ze dvou genů pro formylmethionin-transferázovou RNA používanou při iniciaci translace,
-3CZ 291186 B6 nese Coxl gen kódující podjednotku č. 1 cytochrom oxidázy.
Absence těchto fragmentů, označovaných jako „nevhodné sekvence“, je naprosto nezbytná k získání mitochondriálních genomů odpovídajících dobré kvalitě samčí sterility, která vyhovuje čtyřem výše uvedeným charakteristikám.
Dalším aspektem, kterého se vynález týká je rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, charakterizovaný tím, že obsahuje DNA sekvenci Ogurovy sterility, která:
a) je nesena DNA sekvencí vymezenou nukleotidy 928 až 2273 znázorněna na obrázku 1 nebo
b) vykazuje alespoň 50% homologii se sekvencí uvedenou v a), a uděluje, je-li přítomna v cytoplazmě rostliny, uvedené rostlině cytoplazmatickou samčí sterilitu.
Jedním z předmětů tohoto vynálezu je rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, charakterizovaný tím, že obsahuje DNA sekvenci Ogurovy sterility, která:
c) je nesena sekvencí vymezenou nukleotidy s číslem 928 až 1569 podle obrázku 1 nebo
d) vykazuje alespoň 50% homologii se sekvencí uvedenou v c) a uděluje, je-li přítomna v cytoplazmě rostliny a transkribována na RNA, uvedené rostlině cytoplazmatickou samčí sterilitu.
Jaderný nebo mitochondriální genom lze podle vynálezu charakterizovat tím, že je zmíněný rekombinantní mitochondriální genom zbaven všech nebo části Ogurových genomových fragmentů:
- nesoucích jeden ze dvou genů pro formylmethyonin-transferovou RNA používanou pro iniciaci translace,
- nesoucích Coxl gen kódující podjednotku č. 1 cytochrom oxidázy nebojsou v tomto genomu zmíněné fragmenty neaktivní.
Podrobněji lze rekombinantní mitochondriální genom podle vynálezu charakterizovat tím, že:
1) je zbaven celého nebo části fragmentu o velikosti přibližně 10,7 kilobází (kb) vzniklého po BglI štěpení nebo fragmentu o velikosti přibližně 11 kilobází vniklého po Nrul štěpení, přičemž tyto fragmenty nesou Coxl gen.
To je konkrétně znázorněno na obrázku 3 pomocí molekulární hybridizace se sondou nesoucí Coxl sekvenci.
2) je zbaven celého nebo části fragmentu o velikosti 5,1 kilobází vzniklého po Sáli štěpení nebo fragmentu o velikosti přibližně 15 kilobází vzniklého po Nrul štěpení nebo fragmentu o velikosti přibližně 18,5 kilobází vzniklého po BglI štěpení, přičemž tyto fragmenty nesou jeden ze dvou genů pro formylmethionin-transferovou RNA.
To je konkrétně znázorněno na obrázku 4 pomocí molekulární hybridizace se sondou ohraničenou nukleotidy č. 389 až 1199 v sekvenci popsané na obrázku 1.
-4CZ 291186 B6
Genotypy na obrázcích 3 a 4, které jsou označeny čísly, odpovídají genotypům rostlin nesoucím vhodný systém cytoplazmatické samčí sterility.
GENOTYPY CHLOROPLASTY MITOCHONDRIE
B.n B. napus B. napus
27 B.napus B. napus/Ogura
OGU. R. sativus (OGU) R. sativus (OGU)
9, 17,21,24, 27c B. oleracea B. oleracea/Ogura
B.o B. oleracea B. oleracea
Existence CMS charakteru dobré kvality vyžaduje přítomnost DNA sekvence, která může být identifikována pomocí DNA/DNA hybridizací po štěpeních. Tento vynález se tedy týká DNA sekvence, kterou je možné definovat a která je charakterizována tím, že obsahuje sekvenci, která poskytuje po Ncol štěpení fragment o velikosti 2,5 kilobází, po Nrul štěpení fragment o velikosti 6,8 kilobází a po Sáli štěpení fragment o velikosti 4,4 kilobází.
Tuto sekvenci lze také identifikovat pomocí hybridizace s celkovou RNA samčích sterilních rostlin, přičemž je demonstrován transkript dlouhý 1400 párů bází. Tento transkript se nevyskytuje u rostlin, které znovu získaly fertilitu.
Definice „nevhodných“ nukleotidových sekvencí a nukleotidových sekvencí „nezbytných“ pro Ogurovu sterilitu podle vynálezu, umožňuje pomocí DNA hybridizačních metod, s nimiž jsou odborníci dobře obeznámeni, vybrat rostlinný materiál obsahující chloroplasty kompatibilní s jaderným genomem a obsahující mitochondrie dobré kvality, přičemž není třeba čekat na dospělost rostliny a výskyt květů a plodů. Uživatel má tedy k dispozici vysoce efektivní nástroj pro výběr rostlin nesoucích samčí sterilní cytoplazmu s dobrými agronomickými vlastnostmi.
Ve svém dalším aspektu se vynález týká mitochondrie charakterizované tím, že obsahuje nukleotidovou sekvenci odpovídající DNA vykazující alespoň 50%homologii se sekvencí vymezenou bázemi č. 928 až 2273 podle obrázku 1 a kódující Ogurovu cytoplazmatickou samčí sterilitu; nebo mitochondrie obsahuje DNA sekvenci nesenou sekvencí vymezenou nukleotidy 928 až 1569 podle obrázku 1 nebo vykazující 50% homologii s touto sekvencí, přičemž tato sekvence je v mitochondriích samčích sterilních rostlin transkribována na RNA. Tato DNA může navíc vykazovat charakteristiky definované výše, zvláště nepřítomnost nevhodných sekvencí.
Předkládaný vynález se také týká cytoplazmy čeledi Cruciferae, charakterizované tím, že obsahuje DNA sekvenci „Ogurovy sterility“; tato cytoplazma navíc obsahuje chloroplasty stejného druhu nebo jiného druhu, ale takové, které jsou slučitelné s jaderným genomem.
Sekvence Ogurovy sterility je charakterizována tím, že:
a) je nesena DNA sekvencí dlouhou 2428 párů bází znázorněnou na obrázku 1,
b) Je vymezena nukleotidy 928 až 2273 podle obrázku 1 a odpovídá transkriptu vyznačenému přerušovanou čarou na obrázku 2 a vizualizovanému pomocí molekulární hybridizace (1.4) na obrázku 6,
c) vykazuje alespoň 50% homologii se sekvencí uvedenou v b) a uděluje, je-li přítomna v mitochondriálním genomu rostliny, této rostlině cytoplazmatickou samčí sterilitu nebo
d) je nesena sekvencí vymezenou nukleotidy 928 až 1569 podle obrázku 1 a v mitochondriích sterilních rostlin je transkribována na RNA nebo
-5CZ 291186 B6
e) vykazuje alespoň 50% homologii se sekvencí uvedenou v d) a v mitochondriích sterilních rostlin je transkribována na RNA.
Předkládaný vynález se také týká rostliny z čeledi Cruciferae, charakterizované tím, že obsahuje chloroplasty a jádro stejného druhu nebo takové, které jsou slučitelné, a mitochondrie nesoucí genom udělující CMS charakter, jak je definováno výše.
Přesněji se předkládaný vynález týká také rostliny patřící do rodu Brassica charakterizované tím, že obsahuje chloroplasty a jádro rodu Brassica a mitochondrie nesoucí genom udělující CMS charakter, jak je definováno výše.
Mitochondriální genom musí nést také řadu genů rodu Brassica, o který se jedná. Toho je dosaženo rekombinací mezi Ogurovým genomem a genomem rodu Brassica.
Předkládaný vynález se konkrétně týká rostliny patřící k druhu Brassica napus charakterizované tím, že obsahuje jádro rodu Brassica a tím, že cytoplazma obsahuje chloroplasty rodu Brassica a samčí sterilní mitochondrie nesoucí DNA definovanou výše v předkládaném vynálezu; tyto mitochondrie mohou také nést většinu mitochondriálních genů Brassica napus (18s, Atp9, Atp6, CoxII, ndhl, cob). Brassica napus odpovídá řepce a tuřínu.
Předkládaný vynález se týká rostliny druhu Brassica oleracea charakterizované tím, že obsahuje jádro rodu Brassica a tím, že cytoplazma obsahuje chloroplasty rodu Brassica a mitochondrie nesoucí DNA sekvenci kódující CMS charakter, jak bylo definováno.
Brassica oleracea zahrnuje různé typy zelí: zralé zelí, růžičkovou kapustu, kedluben, brokolici, krmnou kapustu a květák.
Předkládaný vynález se také týká rostliny druhu Brassica campestris charakterizované tím, že obsahuje jádro rodu Brassica a tím, že cytoplazma obsahuje chloroplasty rodu Brassica, které jsou slučitelné sjaderným genomem, a mitochondrie nesoucí DNA sekvenci kódující CMS charakter, jak bylo definováno.
Brassica campestris odpovídá brukvi řepce, vodnici a čínskému, pekingskému a japonskému zelí.
Obdobně se předkládaný vynález týká rostliny vybrané ze skupiny obsahující B. juncea, B. nigra, B. hirta a B. carinata charakterizované tím, že obsahuje jádro rodu Brassica a tím, že cytoplazma obsahuje chloroplasty rodu Brassica, které jsou slučitelné s jaderným genomem, a mitochondrie nesoucí DNA sekvenci kódující CMS charakter, jak bylo definováno.
Podle dalšího aspektu je předmětem předkládaného vynálezu rostlina patřící do rodu Brassica, jejíž jaderný genom obsahuje výše definovanou sekvenci Ogurovy sterility a také prvky ovlivňující její expresi a transport produktu translace do mitochondrie. Tato rostlina může konkrétně patřit do jednoho z následujících druhů: B. napus, B. oleracea, B. campestris, B. nigra, B. juncea, B. hirta a B. carinata.
Přítomnost „sekvence Ogurovy sterility“ je nezbytná a dostačující pro indukci naprosté nepřítomnosti pylu v nepřítomnosti obnovujících genů. V důsledku dobré produkce nektaru probíhá opylení těchto rostlin normálně.
Morfologie samičích orgánů je normální, a vzniklé plody (šešule) obsahují normální počet semen. Obrázek 5 znázorňuje morfologii pozorovanou u normální kontrolní rostliny (z) a rostlinu s aberantní morfologií obsahující celý Ogurův genom (z(6)), chloroplasty Brassica oleracea, což je rostlina zelí, nesoucí chloroplasty Brassica napus a samčí sterilní mitochondrie s geny Brassica napus (z(A)), rostliny nesoucí chloroplasty rodu Brassica oleracea (z(9)) a rekombinantní
-6CZ 291186 B6 mitochondrie, které již neobsahující nevhodné sekvence (z(17)). Rostliny vykazují následující charakteristiky:
GENOTYP CHLOROPLASTY MITOCHONDRIE
z B. oleracea B. oleracea
z(A) B. napus B. napus/Ogura
z(6) B. oleracea Ogura
z(9) B. oleracea B. oleracea/Ogura
z(17) B. oleracea B. oleracea/Ogura
Genotypy z(A) a z(6) neposkytují vhodný systém cytoplazmatické samčí sterility.
Takovéto rostliny mohou být získány například metodami fáze protoplastů nebo jakýmikoli jinými metodami, které vedou k účinné rekombinaci mezi mitochondriálním genomem druhu, o nějž se jedná, a Ogurovým mitochondriálním genomem. V takovýchto rostlinách je fertilita 10 znovu nastolena jedním obnovujícím genem, označovaným Rfl, původem z ředkvičky, k čemuž nedochází u rostlin nesoucích celý nevhodný mitochondriální genom.
Takovéto rostliny mohou být také získány přirozenou nebo umělou sexuální reprodukcí.
ís Rostliny obsahující mitochondriální genom odpovídající tomuto vynálezu mohou být také získány genovým přenosem do mitochondrií.
Ve všech případech nesou tyto rostliny vhodný CMS systém, konkrétně:
- úplnou samčí sterilitu,
- morfologii umožňující dobré opylení a dobrou produkci semen, jak je znázorněno v tabulce 1 a v tabulce 2.
Předkládaný vynález se tedy týká také způsobu přípravy hybridních rostlin charakterizovaného tím, že rostlina nesoucí vhodný CMS charakter, obsahující sekvenci Ogurovy sterility ve svém mitochondriálním nebo jaderním genomu, je zkřížena s normální rostlinou, v případě jedlých nebo krmných plodin, nebo s rostlinou poskytující gen Rfl, který znovu nastolí fertilitu, v případě, že se mají sklidit semena. Vynález se také týká hybridní rostliny získané tímto 30 způsobem.
Obecně řečeno, jsou nejlepší agronomické vlastnosti získávány u samčích sterilních rostlin obsahujících chloroplasty stejného druhu, jako je jádro, a obsahujících mitochondrie, které nesou vhodný systém samčí sterility.
Tabulka 1 znázorňuje produktivitu linie zelí s různými typy cytoplazmy (vhodné jsou genotypy Z9 a Z17). Tabulka 2 znázorňuje produktivitu linie řepky s různými typy cytoplazmy (vhodné jsou genotypy Fu 27, Fu 58 a Fu 85).
Tabulka 1
Produktivita linie z (hlávkové zelí) obsahující různé typy cytoplazmy
Cytoplazma Genotypy Výnos semen
Chloroplasty B. oleracea Mitochondrie B. oleracea (z) g/rostlinu 53.1
(fertilní kontrola) B. napus Ogura (zC) 0
B. napus Ogura/napus (zA) 22.7
B. oleracea Ogura (z6) 9.3
Ogura Ogura (z0) 20.1
B. oleracea Ogura/oleracea (z9 nebo z 17) 91.8
Tabulka 2
Produktivita linie DARMOR (ozimná řepka) obsahující různé typy cytoplazmy * Výnos * Samčí fertilní a samčí sterilní (Fu) ozimná řepka DARMOR
Výnos (% DARMOR) Chloroplasty Mitochondrie
DARMOR 100 (35 qx) B.napus B. napus
Fu 27 118 B. napus B. napus/Ogura
Fu 58 120 B. napus B. napus/Ogura
Fu 77 96 B. campestris Ogura
Fu 85 114 B.napus B. napus/Ogura
Fu 118 103 B. napus B. napus/Ogura
BIENVENUE 108
JETNEUF 89
Tabulka 2 (pokračování)
Složky výnosu (Clermont-Ferrand)
NSq WlSq NSdPSq NSd WlSd TDM HI YLD HT
DARMOR 7183 81,9 9,9 70028 4,31 1077 0,256 31,6 120
BIENVENU 7334 80,7 11,2 81841 3,88 1064 0,269 30,7 109
JETNEUF 7977 87,7 8,6 67219 4,98 1176 0,262 33,3 115
Fu 27 DARMOR 9292 82,8 11,6 106188 4,09 1337 0,293 42,2 122
Fu 58 DARMOR 8617 76,5 11,7 99947 3,65 1228 0,270 36,0 131
Fu 118 DARMOR* 8389 84,6 11,0 92428 4,11 1243 0,276 38,1 132
NSq: počet šešulí/m2
WlSq: váha jedné šešule (mg) NSdPSq: počet semen/šešulí
NSd: počet semen/m2
WlSd: váha jednoho semene (mg)
-8CZ 291186 B6
TDM: celkový suchý materiál (g/m2)
HI: index výnosu (%)
YLD: výnos (qx/ha)
HT: výška (cm) * Tyto rostliny často nesou deformované plody (šešule).
Předmětem předkládaného vynálezu je také sonda obsahující sekvenci alespoň 10 bloků, s výhodou 15 bloků, z úseku sekvence vymezené nukleotidy č. 928 až 1569 podle obrázku 1; zmíněná sonda může být označena, například pomocí radioaktivní báze nebo jinými způsoby, jako například fluorescenčně. Tato sonda může být použita na demonstraci samčí sterility a může být konkrétně využita při selekci klonů.
Některé vlastnosti a výhody předkládaného vynálezu budou zřetelněji znázorněny na následujících příkladech.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Určení DNA sekvence zodpovědné za Ogurovu cytoplazmatickou samčí sterilitu
1. Rostlina
Pojem „cybrid“ označuje formy získané fůzí izolovaných protoplastů a následující regenerací celé rostliny. Tento způsob produkce umožňuje smíchání cytoplazmatické informace pocházející zobou rodičů v buňce. Cybrid č. 13 byl získán mezi přibližně 820zregenerovanými rostlinami pro fúzi protoplastů mezi Ogura-cms, což je cybrid B. napus rezistentní na triazin (potomstvo cybridu 77 popsaného vPelletier et alk., 1983 a Chétrit et al., 1985), a mezi fertilní varietou pocházející z linie Brutor, citlivou na triazin. Test rezistence na triazin (Ducruet a Gasquez, 1978) provedený na vzorku listu každé zregenerované rostliny umožnil určení typu chloroplastu (chloroplasty rezistentní na triazin pocházely zrodíce 77 a chloroplasty citlivé na triazin pocházely z linie Brutor). Rostliny byly kultivovány a byl pozorován stupeň kvetení. Rostliny vykazující nerodičovské kombinace (buď citlivost/samčí sterilita, nebo rezistence/samčí fertilita) byly vybrány jako cybridi. Cybrid č. 13 byl typu citlivost/samčí sterilita. Cybrid 1 byl typu rezistence/samčí fertilita.
2. Izolace nukleové kyseliny
Z listů rostlin starých 4 týdny byla metodou popsanou Dellaportem (1983) izolována celková DNA. Mitochondriální DNA byla extrahována z listů 8 týdnů starých rostlin podle Věděla a Mathieu, 1982, s následujícími modifikacemi:
Mitochondrie nebyly před lyží purifikovány na sacharózovém gradientu a lyže byla provedena v 4% sarkozylu s 0,5 mg/ml proteinázy K (Boehringer Mannheim GmbH) v 50mM Tris pH 8, 20mM EDTA. Po precipitaci byla mitochondriální DNA purifikována centrifugací v gradientu ethidium-bromidu/cezium-chloridu (metoda 1 - Vedek a Mathieu, 1982) v polyallomemích centrifugačních zkumavkách.
Celková RNA byla izolována z listů nebo květních pupenů podle Logemanna et al., 1987.
Mitochondriální RNA byla extrahována z rostlin květáku starých 8 týdnů podle metody Sterna a Newtona, 1986.
-9CZ 291186 B6
3. Restrikční analýza mitochondriální DNA a elektroforéza v agarózovém gelu
Tyto procedur}· byly provedeny podle Pelletiera et al., 1983. Celková nebo mitochondriální RNA byla nanesena na elektroforézní gel obsahující formaldehyd, jak bylo popsáno Sambrookem etal., 1989.
4. Hybridizace
Přenos DNA nebo RNA na nylonové membrány (Hybond-N, Amersham) byl proveden kapilární absorpcí v 6xSSC, v případě DNA, nebo v lOxSSPE, v případě RNA, podle návodu výrobce. Prehybridizace a hybridizace byly provedeny podle Amersham, s použitím sond označených DNA značícím systémem využívajícím více oček (primerů) (Amersham) purifikovaných na kolonách Sephadex G-50 (Sambrook et al., 1989).
5. Klonování mitochondriální DNA
S použitím EMBL3 vektoru odvozeného od fága lambda byly připraveny dvě genomové knihovny samčí sterilní linie (13-7) a revertované cybridní linie (13-6) a byly kultivovány na restriktivním kmeni E. coli Nm539 (Frischauf et al., 1983). Bylo získáno přibližně 2,5xl04 klonů na pg mitochondriální DNA.
Mitochondriální DNA knihovny byly testovány a vysety za účelem izolace plaků, které pak byly přeneseny na nylonové filtry (Sambrook et al., 1989). Hybridizační sonda používaná k testování dvou knihoven mitochondriální DNA byla připravena následovně: mitochondriální DNA fragment specifický pro cms byl vyčištěn s použitím Geneclean™ procedury (Bio 101 ONC.) z produktů digesce mitochondriální DNA nanesených na preparativní agarózový gel. Vyčištěná DNA pak byla označena, jak bylo popsáno.
Extrakce lambda DNA, subklonování 2,5 Ncol fragmentu do Ncol místa pTrc99A (amann et al., 1988) a extrakce plazmidové DNA byly provedeny podle protokolů Sambrook et al., 1989. Rekombinantní plazmidy byly vpraveny do E. coli kmene NM522 (Gough a Murray, 1983).
6. Genetický výzkum cybridu 13 a jeho potomstva
V první generaci potomstva získaného opylením cibridu 13 Brutorem, skládající se z 13 rostlin, je 5 samčích rostlin úplně sterilních (zahrnuje rostliny 13-2 a 13-7), jedna samčí rostlina je fertilní (č. 13-6) a 7 samčích rostlin je téměř sterilních s několika samčími fertilními květy.
Fertilní rostlina 13-6 byla samoopylena a zkřížena s Brutorem. V obou případech byly získány pouze fertilní rostliny (43, respektive 42).
Při kříženích mezi samčí sterilní rostlinou č. 13-7 a Brutorem, bylo 24 potomků naprosto sterilních a 6 neslo několik málo fertilních květů, což byl výsledek podobný tomu, pozorovanému scybridem samotným. Rostlina 13-2 byla křížena s obnovující („restorer“) linií RF, která je homozygotní ve specifickém obnovujícím genu pro Ogurovu samčí sterilitu (Chétrit et al., 1985). Potomstvo tohoto křížení se skládá z 53 samčích sterilních rostlin, 37 samčích fertilních rostlin a z 9 téměř sterilních rostlin, které mají několik málo fertilních květů. Tyto výsledky ukazují na to, že samčí sterilní rostliny z rodiny cybridu 13 obsahující Ogurovu cms determinantu, stejně jako další dříve studovaní cybridi s jednodušším obnovujícím profilem (Chétrit et al., 1985).
V tomto stadiu výzkumu mohou nastat dvě možnosti: buď obsahuje cybrid 13 směs samčích fertilních a samčích sterilních mitochondriálních genomů a je možné dále selektovat na oba fenotypy, nebo obsahuje cybrid 13 rekombinantní mitochondriální genom nestálé struktury, které
-10CZ 291186 B6 revertuje na stabilnější „fertilní“ konfiguraci a v následujících generacích bude nemožné udržet homogenní samčí sterilní fenotyp.
Samčí sterilní rostliny získané z potomstva samčí sterilní rostliny č. 13-7 byly množeny jak řízkováním tak sexuálním křížením s Brutorem. Ό obou metod poskytly po různém počtu generací (1 až 5) obě rodiny fertilní rostliny. Naproti tomu takto získané zcela fertilní rostliny nikdy nedaly vzniknout sterilním rostlinám.
Tyto výsledky ukazují, že správné je druhé z navržených vysvětlení, to znamená, že cybrid 13 nese nestabilní mitochondriální genom, který postupně ztrácí Ogurovu cms determinantu, což vede k fertilní konfiguraci bez možnosti návratu ke sterilnímu fenotypu.
7. Srovnání mitochondriálních DNA ze samčího sterilního a fertilního revertujícího potomstva. Izolace fragmentu specifického pro samčí sterilní rostliny.
Mitochondriální DNA byla extrahována z listů samčího sterilního potomstva rostliny 13-7 azfertilních revertantů (potomstvo rostlin 13-6 nebo 13-7) a štěpena několika restrikčními enzymy za účelem srovnání jejich restrikčních profilů. Mitochondriální genomy obou typů jsou si velmi podobné, protože s použitím různých enzymů nebyl pozorován žádný rozdíl v restrikčním profilu mitochondrií samčích sterilních rostlin a fertilních revertant. Pouze restrikční fragment o velikosti 6,8 kilobází nalezený v Nrul restrikčním profilu mitochondriální DNA ze samčí sterilní rostliny nebyl nikdy nalezen v odpovídajícím profilu fertilních revertant.
Tento fragment (označovaný jako N6,8) byl přečištěn z agarozového gelu, označen a použit jako sonda na Nrul restrikční profil mitochondriální DNA: intenzivní signál o velikosti 6,8 kilobází byl pozorován ve všech samčích sterilních potomcích cybridu 13, ale žádný fragment této velikosti nehybridizoval se sondou v mitochondriálních genomech fertilních revertant. Navíc, sonda N6,8 hybridizuje s fragmentem o velikosti 6,8 kilobází v Ogurově mitochondriální DNA štěpení Nrul, ale ne v B. napus cv Brutor, což ukazuje na Ogurův původ tohoto fragmentu.
Lambda knihovna obsahující mitochondriální DNA extrakty původem ze samčích sterilních rostlin (13-7) byla otestována s tímto označeným vyčištěným fragmentem a z 8 hybridizujících klonů byly izolovány 2 rekombinantní fágy obsahující celý N6,8 fragment spolu s přilehlými sekvencemi. Byla získána podrobná restrikční mapa této oblasti. Hybridizace restrikčních profilů mitochondriální DNA původem z fertilního a sterilního potomstva cybridu 13 se sondou N6,8 umožnila vymezit oblast specifickou pro samčí sterilní genotyp na Ncol fragment o velikosti
2,5 kilobází.
Ncol fragment o velikosti 2,5 kilobází byl označen a použit jako sonda vůči mitochondriální DNA pocházející z potomstva 13-7 a 13,6, která byla štěpena Ncol. Kromě signálu o velikosti
2,5 kilobází, který je specifický pro samčí sterilní profil, hybridizovalo u samčích sterilních profilů i u fertilních revertant několik Ncol fragmentů; tyto fragmenty byly dlouhé 2,2, 10 a 14 kilobází. Ncol fragment o velikosti 2,7 kilobází silně hybridizuje s mitochondriálním genomem fertilního potomstva, nikoli s genomem sterilního potomstva. Analýza hybridizačního profilu vede k závěru, že Ncol fragment o velikosti 2,5 kilobází je specifický pro samčí sterilní mitochondriální DNA, ale obsahuje i sekvence, které se opakují jinde v mitochondriálním genomu (ve fragmentech o velikosti 2,2 kilobází, 10 kilobází a 14 kilobází po Ncol štěpení) a tyto opakované sekvence jsou přítomny i v mitochondriální DNA fertilních revertant, které obsahující navíc specifický fragment o velikosti 2,7 kilobází.
Celková RNA byla izolována z listů nebo pupenů potomstva cybridu 13, ze samčích sterilních i samčích fertilních cybridů (pocházejících z jiných fúzních experimentů) a z linie Brutor. Byl proveden Northem blotting a membrány byly hybridizovány se sondou odpovídající inzertu z klonu lambda obsahujícího N6,8 popsaného v příkladu 3. Hlavní transkript o velikosti l,4kilobáze byl pozorován u všech samčích sterilních cybridů, včetně cybridu 13-7, zatímco
-11 CZ 291186 B6 u linie Brutor nebo u dvou fertilních cybridů (odlišných od 13) žádný transkript této velikosti pozorován nebyl. Navíc, fertilní rostliny obsahují transkript o velikosti 1,1 kilobází, který hybridizuje se zmíněnou sondou a který je u testovaných samčích sterilních cybridů přítomen ve velmi malém množství nebo není přítomen vůbec. Několik transkriptů společných pro všechny vzorky se sondou slabě hybridizuje, což souvisí s velkou velikostí značeného inzertu. Bylo potvrzeno, že ve vzorcích celkové RNA mohou být mitochondriální transkripty nalezeny pomocí hybridizace stejného Northem blotu s DNA fragmentem obsahujícím sekvenci genu atpa.
Stejný specifický 1,4 transkript byl nalezen s použitím 2,5NcoI fragmentu jakožto sondy v Ogurově mitochondriální RNA extrahované z rostlin květáku. Přesné hranice tohoto transkriptů byly určeny s použitím subklonů 2,5 Ncol fragmentu jakožto sond.
8. Studie cybridů 1 a jeho potomstva
Cybrid 1 byl samčí a fertilní. Zjeho potomstva byla rostlina 1.12 fertilní a rostlina 1.18 sterilní. Rostlina 1.12 poskytla ve svém potomstvu rostliny sterilní (S3) a fertilní (RF3). Rostlina 1.18 poskytla ve svém potomstvu rostliny sterilní (S2) a plodnou větev (RF2). Rostliny S2 a S3 jsou obnoveny stejným jaderným genem obnovujícím pylovou plodnost jako sterilní cybrid 13.
Při hybridizací se značeným Ncol fragmentem o velikosti 2,5 kilobází neposkytuje mitochondriální DNA rostlin S2 a S3 signál o velikosti 2,5 kilobází po Ncol štěpení ani signál o velikosti 6,8 kilobází po Nrul štěpení.
Obdobně hybridizace celkové RNA (Northem blotting) se sondou odpovídající ORFB sekvenci neposkytuje signál o velikosti 1,4 kilobází, jak se děje v případě sterilního cybridů 13. Naproti tomu, sonda odpovídající sekvenci vymezené nukleotidy 928 až 1569 podle obrázku 1 poskytuje signál na Northem blottingu o velikosti přibližně 1,3 kilobází. Tento signál není přítomen v RNA pocházející z rostlin RF], RF2, RF3 nebo zBrutora. Obdobně je možné použít tuto F sekvenci (928-1569) jako sondu pro dot-blotting celkové RNA a v tomto případě pouze samčí sterilní rostliny, a to všechny, poskytují signál.
Tyto výsledky ukazují, že rostliny S2 a S3, I když samčí a sterilní, neudržely nukleotidovou sekvenci popsanou na obrázku 1 v její původní konformaci a ukazují, že v této sekvenci část vymezená nukleotidy 928 až 1569 nese specifickou determinantu Ogurovy sterility a pokud je transkribována, způsobuje samčí sterilitu.
Tato sekvence nemá žádnou významnou homologii se sekvencemi přítomnými v databankách.
Příklad 2
Určení nevhodných sekvencí v Ogurově mitochondriálním genomu
Z druhu B. napus byl pomocí fuze protoplastů řepky nesoucí Ogurovu cytoplazmu a řepky normální získán soubor cybridů. Samčí rostliny řepky nesoucí Ogurovu cytoplazmu jsou sterilní a při nízkých teplotách deficientní v chlorofylu, zatímco rostliny normální řepky jsou zelené a fertilní. Mezi zregenerovanými rostlinami byli vybráni cybridi se sterilními a zelenými samčími rostlinami.
Stejným způsobem byl získán soubor cybridů druhu B. oleracea fúzí protoplastů z rostlin zelí nesoucích Ogurovu cytoplazmu a protoplastů z normálních rostlin zelí. Ze zregenerovaným rostlin byli vybráni cybridi se sterilními a zelenými samčími rostlinami.
-12CZ 291186 B6
Tito cybridi byli zkříženi s jinými varietami řepky v prvním případě a zelí v druhém případě. Křížení bylo opakováno v každé generaci se stejnými varietami za účelem získání definovaného genotypu blízkého genotypu původní variety.
Tyto různé variety s tímto způsobem změněnou cytoplazmou různých cybridů byly podrobeny agronomickým testům za účelem stanovení produkce zrna, která závisí na několika faktorech: dostatečné produkci nektaru, která umožní opylení hmyzem, normální morfologii květů, která umožní, že opylení je účinné a květy se vyvíjejí normálně.
Soubor cybridů tak může být rozdělen do dvou skupin:
- skupina cybridů vykazujících samčí sterilitu a vyhovujících komerční produkci semen,
- skupina cybridů nevykazujících všechny vlastnosti vhodné pro dobrou komerční produkci semen.
Cybridi řepky č. 27, 58 a 85 a cybridi zelí č. 9, 17, 21, 24 a 27c patří, například, do první skupiny.
Cybridi řepky č. 23s, 77 a 118 a cybridi zelí č. 1, 6 a 14 patří, například, do druhé skupiny.
Celková DNA těchto cybridů byla enzymaticky štěpena Sall, Ncol, Nrul, BglI, Pstl a KpnI. Získané Southem bloty byly hybridizovány s různými mitochondriálními sondami Atpa, Cob, Coxl, Atp6, 26S a 18S a se dvěma fragmenty Ogurova genomu - s fragmentem o velikosti
2,5 kilobází získaným po Ncol štěpení a s fragmentem o velikosti 19,4 kilobází získaným po Nrul štěpení.
Dvě skupiny cybridů se liší tím, že:
a) č. 23s, 77 a lis v případě řepky a č. 1, 16 a 11 v případě zelí obsahující oblast Ogurova genomu, která obklopuje Coxl gen a je rozpoznávána BglI fragmentem o velikosti 10,7 kilobází nebo Nrul fragmentem o velikosti 11 kilobází, a oblast Ogurova genomu, která obklopuje geny pro formylmethionin-transferovou RNA a je rozpoznávána Sall fragmentem o velikosti 5,1 kilobází nebo Nrul fragmentem o velikosti 15 kilobází.
b) č. 27, 58 a 85 v případě řepky a č. 9, 17, 21, 24 a 27c v případě zelí neobsahují odpovídající oblasti, protože byly v důsledku rekombinace mezi genomy dvou fúzovaných rodičů zaměněny za analogické oblasti mitochondriálního genomu č. 27, 58 a 85 v případě řepky a č. 9, 17, 21, 24 a 27c v případě zelí.
Z uvedených výsledků lze usuzovat, že tyto dvě oblasti Ogurova genomu, o kterých se pojednávalo, jsou nevhodné, je-li žádoucí získat systém samčí sterility vhodný pro komerční produkci semen.
Příklad 3
Tento příklad demonstruje jak je významné znát sekvence „Ogurovy samčí sterility“ a nevhodné sekvence pro provádění okamžitého třídění cybridů bez několikaletého čekání na zpětná křížení a agronomické testy.
Protoplasty rostliny Brassica, nesoucí Ogurovu cytoplazmu, jsou fúzovány s protoplasty druhů Brassica, o které se jedná. Kolonie získané po fúzí jsou pěstovány in vitro a regenerovány na médiu, které podporuje tvorbu pupenů (Pelletier et al., 1983).
-13CZ 291186 B6
Z jednoho gramu čerstvého materiálu, buď kalusu, nebo fragmentu zregenerované rostliny, je možné pomocí výše popsané techniky izolovat celkovou DNA. Po Sáli štěpení, by měla hybridizace Southemova typu se sondou vymezenou nukleotidy č. 389 až 1199 (viz obrázek 1) poskytnout signál pouze o velikosti 4,4 kilobází (neměla by poskytnout signál o velikosti 5,1 kilobází). Obdobně po štěpení Nrul a hybridizací se sondou nesoucí Coxl gen, by měl být získán signál jiné velikosti než 11 kilobází.
Tyto hybridizace umožňují předpovědět, že získaná samčí rostliny bude opravdu sterilní a vhodná pro komerční produkci semen.
Příklad 4
Tento příklad je obměnou příkladu 3 a místo provedení fúze protoplastů je založený na myšlence provedení sexuálního křížení mezi dvěma rodiči za speciálních podmínek nebo mezi rodiči se zvláštními genotypy s tím výsledkem, že, na rozdíl od známých procesů fertilizace u rostlin, zde dochází k smíšení cytoplazem oosfery a pylových trubiček nebo samčích gamet. Kdyby byla taková metoda popsána, mohlo by být stejným způsobem, s použitím stejných sond a stejných kriterií jako u příkladu 3, provedeno časné třídění mladých rostlin vzniklých z těchto umělých fertilizací.
Příklad 5
Tento příklad demonstruje, jak je významné znát sekvenci Ogurovy sterility pro způsob genetických manipulací, které již byly popsány u kvasinek (Johnston et al., 1988).
Počáteční normální rostlina Brassica, tedy její meristémy, případně buňky in vitro, jsou bombardovány mikroskopickými částečkami pokrytými DNA nesoucí sekvenci Ogurovy sterility. Pokud byla DNA schopná vstoupit do mitochondrií a integrovat se do genomu těchto organel budou rostliny získané v potomstvu takto zpracovaného meristému nebo zregenerované rostliny vykazovat znaky cytoplazmatické samčí sterility. Tato procedura umožní obejít problémy vyvolané nechtěnými sekvencemi, které nastávají, jsou-li jsou v procesu zahrnuty Ogurovy chloroplasty původem z ředkvičky nebo sekvence takto definovaného Ogurova mitochondriálního genomu.
Příklad 6
Tento příklad demonstruje, jak je významné znát sekvenci „Ogurovy sterility“ při konstrukci jaderné, nikoli cytoplazmatické, samčí sterility podléhající mendelovské dědičnosti za pomoci genetického inženýrství.
Po genetické transformaci buněk Brassica nebo buněk jiného rodu může být v jádrech přeměněných buněk zkonstruován chimemí gen vycházející z mitochondriální DNA sekvence vymezené nukleotidy 928 až 1569, který bude transkribován. Pokud chimemí gen obsahuje úvodní sekvenci, která umožňuje import jeho proteinového translačního produktu do mitochondrie, pak budou tyto přeměněné buňky vykazovat samčí sterilitu a tento charakter se bude chovat jako dominantní znak podle mendelovské dědičnosti.
Literatura
Amann E, Ochs B a Ábel K-J (1988) Gene 69:301-315
Bannerot H, Boulidard L, Cauderon Y a Tempé J (1974) Proč Eucarpia Meeting Cruciferae 25:52-54
-14CZ 291186 B6
Bannerot H, Boulidard L a Chupeau Y (1977) Eucarpia Cruciferae News 1:2-16
Chétrit P, Mathieu C, Vedel F, Pelletier G a Primard C (1985) Theor Appl Genet 69:361-366 Dellaporta S L, Wood J a Hicks J B (1983) Plant Mol Biol Rep 1:19—21
Ducruet J M a Gasquez J (1978) Chemosphere 8:691-696
Frishauf A M, Lehrach H, Poutska A a Murray N (1983) J Mol Biol 170:827-842
Gough J a MurrayN (1983) J Mol Biol 166:1-19
Hiesel R, Schobel W, Schuster W a Brennicke A (1987) EMBO J 6:29-34
Johnston S A, Anziano P Q, Shark K, Sanford J C a Butow R A (1988) Science 240:1538-1541 Logemann J, Schell J a WillmitzerL (1987) Analytical Biochem 163:16-20
Ogura H (1968) Mem Fac Agric Kagoshima Univ 6:39-78
Pelletier G, Primard C, Vedel F. Chétrit P, Rémy R, Rousselle P a Renard M (1983)
Mol Gen Genet 191:244-250
Sambrook J, Fritsch E F a Maniatis T (1989) Molecular cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York
Stem D B a Newton K J (1986) Methods Enzymol 118:488-496
Vedel F a Mathieu C (1982) Anal Biochem 127:1-8
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (27)

1. Rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom obsahující:
c) DNA sekvenci vymezenou nukleotidy č. 928 až 1569 podle obrázku 1 -SEQ ID NO: 1 nebo
d) DNA sekvenci kódující proteinový produkt translace identický s tím, který je kódován, kde uvedená sekvence uděluje cytoplazmatickou samčí sterilitu rostlině, v jejímž mitochondriálním genomu je přítomna, přičemž tento rekombinantní genom neobsahuje funkční kopii genu z Ogurova genomu, přičemž tento gen z Ogurova genomu je definován takto:
ii) gen pro formylmethionin-transferovou RNA používaný pro iniciaci translace, který· je charakterizován tím, že po Nrul štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 15 kilobází nebo po Sall štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 5,1 kilobází a oba tyto fragmenty je možné vizualizovat hybridizaci se sondou odpovídající sekvenci vymezené nukleotidy 389 až 1199 v sekvenci zobrazené na obrázku 1 - SEQ ID NO: 1 nebo iv) Coxl gen kódující podjednotku č. 1 cytochrom oxidázy, který je charakterizován tím, že po BglI štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 10,7 kilobází nebo po Nrul štěpení poskytuje DNA fragment o velikosti 11 kilobází a oba tyto fragmenty je možné vizualizovat hybridizaci s Coxl sondou.
2. Jaderný nebo mitochondriální genom podle nároku 1, přičemž tento genom obsahuje sekvenci, která po Ncol štěpení poskytuje fragment o velikosti 2,5 kilobází, po Nrul štěpení poskytuje fragment o velikosti 6,8 kilobází a po Sall štěpení poskytuje fragment o velikosti 4,4 kilobází.
3. Jaderný genom podle nároku 1, přičemž tento genom dále obsahuje úvodní sekvenci umožňující import translačního produktu této sekvence do mitochondrie.
4. Genom podle nároku 1, přičemž tento genom je mitochondriální.
- 15CZ 291186 B6
5. Mitochondrie obsahující genom podle nároku 4.
6. Cytoplazma obsahující mitochondriální genom podle nároku 4 a dále obsahující chloroplasty stejného druhu jako uvedený jaderný genom nebo chloroplasty jiného druhu, které jsou slučitelné s uvedeným jaderným genomem.
7. Rostlina náležející do rodu Brassica a obsahující chloroplasty Brassica, které jsou slučitelné s uvedeným jaderným genomem této rostliny, a mitochondrie podle nároku 5.
8. Rostlina náležející do rodu Brassica a mající jaderný genom obsahující genom podle nároku
3 a mající prvky ovlivňující jeho expresi a transport jeho translačních produktů do mitochondrie.
9. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica napus.
10. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica oleracea.
11. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica campestris.
12. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica jimcea.
13. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica nigra.
14. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica hirta.
15. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhu Brassica carinata.
16. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina patřící k druhům B. napus, B. oleracea, B. campestris, B. nigra, B. juncea, B. hirta nebo B. carinata.
17. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina se získaná fúzí protoplastů.
18. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina se získaná sexuální reprodukcí.
19. Rostlina podle nároku 7, kterou je rostlina se získaná genovým přenosem do mitochondrie.
20. Způsob přípravy hybridních rostlin, vyznačující se t í m, že zahrnuje křížení rostliny vykazující vlastnosti sterilní samčí cytoplazmy podle nároku 6 s rostlinou stejného druhu.
21. Sonda nukleové kyseliny obsahující jako první sekvenci alespoň 15 bází z druhé sekvence ohraničené nukleotidy č. 928 až 1569 zobrazených na obrázku 1 - SEQ ID NO: 1, přičemž druhá sekvence udělující vlastnosti cytoplazmatické samčí sterility je značena radioaktivním nebo neradioaktivním způsobem.
22. Izolovaná DNA molekula, která obsahuje:
a) DNA sekvenci vymezenou nukleotidy č. 928 až 1569 podle obrázku 1 - SEQ ID NO: 1 nebo
b) DNA sekvenci kódující proteinový produkt translace identický s tím, který je kódován;
přičemž zmíněná sekvence uděluje rostlině cytoplazmatickou samčí sterilitu, je-li přítomna v mitochondriálním genomu rostliny a je-li transkribována na RNA v mitochondriích zmíněné rostliny.
-16CZ 291186 B6
23. DNA molekula podle nároku 22, která obsahuje sekvenci vymezenou nukleotidy č. 928 až 1569 podle obrázku 1 - SEQ ID NO: 1.
24. DNA molekula podle nároku 22, která obsahuje sekvenci vymezenou nukleotidy č. 928 až 2273 podle obrázku 1 - SEQ ID NO: 1 nebo sekvenci kódující proteinový produkt translace identický stím, který je kódován zmíněnou sekvencí vymezenou nukleotidy 928 až 2273; přičemž zmíněná sekvence je transkribována na RNA v mitochondriích sterilní samčí rostliny.
25. DNA molekula podle nároku 24, která obsahuje sekvenci vymezenou nukleotidy č. 928 až 2273 podle obrázku 1 - SEQ ID NO: 1, přičemž zmíněná sekvence uděluje cytoplazmatickou samčí sterilitu rostlině, je-li přítomna v mitochondriálním genomu zmíněné rostliny.
26. Hybridní rostlina získaná způsobem podle nároku 20.
27. Způsob přípravy hybridních rostlin, vyznačující se tím, že zahrnuje křížení rostliny vykazující charakter cytoplazmatické samčí sterility podle nároku 6 s rostlinnou stejného druhu obsahující gen obnovující fertilitu Rfl.
CS1993454A 1990-09-21 1991-09-20 Rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, cytoplazma, rostlina, způsob přípravy rostliny, sonda nukleové kyseliny, DNA molekula CZ291186B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR909011670A FR2667078B1 (fr) 1990-09-21 1990-09-21 Sequence d'adn conferant une sterilite male cytoplasmique, genome mitochondrial, mitochondrie et plante contenant cette sequence, et procede de preparation d'hybrides.
PCT/FR1991/000741 WO1992005251A1 (fr) 1990-09-21 1991-09-20 Sequence d'adn conferant une sterilite male cytoplasmique, genome mitochondrial, genome nucleaire, mitochondrie et plante contenant cette sequence, et procede de preparation d'hybrides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ45493A3 CZ45493A3 (en) 1994-02-16
CZ291186B6 true CZ291186B6 (cs) 2003-01-15

Family

ID=9400521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS1993454A CZ291186B6 (cs) 1990-09-21 1991-09-20 Rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, cytoplazma, rostlina, způsob přípravy rostliny, sonda nukleové kyseliny, DNA molekula

Country Status (21)

Country Link
US (1) US5789566A (cs)
EP (2) EP0549726B1 (cs)
JP (2) JP3156792B2 (cs)
KR (1) KR930702520A (cs)
AT (2) ATE211170T1 (cs)
AU (1) AU652964B2 (cs)
CA (2) CA2393476C (cs)
CZ (1) CZ291186B6 (cs)
DE (2) DE69133597D1 (cs)
DK (2) DK0549726T3 (cs)
ES (2) ES2307308T3 (cs)
FR (1) FR2667078B1 (cs)
HU (2) HU9300801D0 (cs)
IE (2) IE20020681A1 (cs)
PL (4) PL169149B1 (cs)
PT (1) PT99024B (cs)
RO (1) RO114978B1 (cs)
RU (1) RU2117704C1 (cs)
SK (1) SK284748B6 (cs)
UA (1) UA26445C2 (cs)
WO (1) WO1992005251A1 (cs)

Families Citing this family (230)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2108230C (en) * 1992-10-14 2006-01-24 Takako Sakai Methods for introducing a fertility restorer gene and for producing f1 hybrid of brassica plants thereby
NL194904C (nl) * 1993-07-14 2003-07-04 Sakata Seed Corp Mannelijke steriele plant.
US5866782A (en) * 1993-10-01 1999-02-02 Mitsubishi Corporation Gene which determines cytoplasmic sterility and a method of producing hybrid plants using said gene
WO1996021010A1 (en) * 1994-12-30 1996-07-11 Asgrow Seed Company Male sterile brassica oleracea plants
GB9513881D0 (en) 1995-07-07 1995-09-06 Zeneca Ltd Improved plants
NL1003239C2 (nl) * 1996-05-31 1997-12-03 Bejo Zaden Bv Cytoplasmatisch mannelijk steriele Brassica oleracea plant, alsmede werkwijze voor het verkrijgen van een dergelijke plant.
JPH1084998A (ja) 1996-09-13 1998-04-07 Sumitomo Chem Co Ltd 細胞質雄性不稔因子ｄｎａを含有する植物の識別方法及び利用される細胞質雄性不稔因子ｄｎａ
CA2193938A1 (en) 1996-12-24 1998-06-24 David G. Charne Oilseed brassica containing an improved fertility restorer gene for ogura cytoplasmic male sterility
US6852908B2 (en) 1997-05-30 2005-02-08 Mcgill University Method for enhancement of naturally occurring cytoplasmic male sterility and for restoration of male fertility and uses thereof in hybrid crop production
EP0983371A1 (en) * 1997-05-30 2000-03-08 THE ROYAL INSTITUTION FOR THE ADVANCEMENT OF LEARNING (McGILL UNIVERSITY) Method for enhancement of naturally occurring cytoplasmic male sterility and for restoration of male fertility and uses thereof in hybrid crop production
CA2206673A1 (en) * 1997-06-10 1998-12-10 Lomas K. Tulsieram Use of molecular markers for genotype determination of the ogura rf gene in brassica napus
US6323392B1 (en) * 1999-03-01 2001-11-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Formation of brassica napus F1 hybrid seeds which exhibit a highly elevated oleic acid content and a reduced linolenic acid content in the endogenously formed oil of the seeds
AU2002251533B2 (en) * 2001-04-25 2006-09-28 Institut National De La Recherche Agronomique Protein involved in restoration of cytoplasmic male sterility to fertility and gene encoding the protein and gene
DE10136378C2 (de) * 2001-07-26 2003-07-31 Norddeutsche Pflanzenzucht Han Männliche Sterilität in Gräsern der Gattung Lolium
EP1545190B1 (en) * 2002-08-23 2012-06-20 BASF Plant Science GmbH Male sterility restoration as a selectable marker in plant transformation
GB0402106D0 (en) * 2004-01-30 2004-03-03 Syngenta Participations Ag Improved fertility restoration for ogura cytoplasmic male sterile brassica and method
US8030549B2 (en) 2004-05-19 2011-10-04 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Broccoli type adapted for ease of harvest
GB2429462A (en) * 2005-08-23 2007-02-28 Elsoms Seeds Ltd Male sterile swede plants and F1 hybrids
CN101522896B (zh) * 2005-10-26 2016-09-07 坂田种苗株式会社 莴苣属的胞质杂种植物和其生产方法
CA2628656C (en) 2005-11-22 2016-05-17 Franciscus Van Den Bosch Broccoli type having curds with detached florets
US8247655B2 (en) 2006-09-13 2012-08-21 Syngenta Participations Ag Rucola plants with cytoplasmic male sterility (CMS)
CL2007003743A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
EP1969930A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969934A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
WO2008110281A2 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag 3,4-disubstituierte phenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
EP1969929A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
WO2008110279A1 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag Dihalogenphenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
CA2684340A1 (en) 2007-04-19 2008-10-30 Bayer Cropscience Ag Thiadiazolyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
EP2016821A1 (en) 2007-06-13 2009-01-21 Syngeta Participations AG New hybrid system for Brassica napus
DE102007045919B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045957A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akarziden Eigenschaften
DE102007045920B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistische Wirkstoffkombinationen
DE102007045922A1 (de) 2007-09-26 2009-04-02 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045953B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045956A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045955A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
WO2009046837A2 (de) * 2007-10-02 2009-04-16 Bayer Cropscience Ag Methoden zur verbesserung des pflanzenwachstums
EP2090168A1 (de) 2008-02-12 2009-08-19 Bayer CropScience AG Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2060168A1 (en) 2007-11-16 2009-05-20 Syngenta Participations AG Method for the production of pink colored cabbage
EP2072506A1 (de) 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
CA2714400C (en) 2008-02-06 2019-03-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brassica ogura restorer line r1931 with shortened raphanus fragment (srf)
EP2113172A1 (de) * 2008-04-28 2009-11-04 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
US7947877B2 (en) * 2008-05-14 2011-05-24 Monosanto Technology LLC Plants and seeds of spring canola variety SCV328921
US7935870B2 (en) * 2008-05-14 2011-05-03 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV354718
US8829282B2 (en) * 2008-05-14 2014-09-09 Monsanto Technology, Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV425044
US7964774B2 (en) 2008-05-14 2011-06-21 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV384196
FR2932062B1 (fr) * 2008-06-04 2013-05-10 Clause Plantes du genre eruca porteuses d'une sterilite male cytoplasmique
EP2168434A1 (de) 2008-08-02 2010-03-31 Bayer CropScience AG Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
MX2011001601A (es) 2008-08-14 2011-03-29 Bayer Cropscience Ag 4-fenil-1h-pirazoles insecticidas.
DE102008041695A1 (de) * 2008-08-29 2010-03-04 Bayer Cropscience Ag Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2201838A1 (de) 2008-12-05 2010-06-30 Bayer CropScience AG Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2198709A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge
EP2204094A1 (en) 2008-12-29 2010-07-07 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction
EP2039771A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039770A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039772A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction
JP5558490B2 (ja) 2009-01-19 2014-07-23 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 環状ジオンならびに殺虫剤、殺ダニ剤および／または殺真菌剤としてのその使用
EP2227951A1 (de) 2009-01-23 2010-09-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren
ES2406131T3 (es) 2009-01-28 2013-06-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Derivados fungicidas de N-cicloalquil-N-biciclometileno-carboxamina
AR075126A1 (es) 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
EP2218717A1 (en) 2009-02-17 2010-08-18 Bayer CropScience AG Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives
EP2398770B1 (en) 2009-02-17 2016-12-28 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicidal n-(phenylcycloalkyl)carboxamide, n-(benzylcycloalkyl)carboxamide and thiocarboxamide derivatives
TW201031331A (en) 2009-02-19 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance
FR2942583A1 (fr) 2009-03-02 2010-09-03 Clause Plantes du genre diplotaxis porteuses d'une sterilite male cytoplasmique
DE102009001469A1 (de) 2009-03-11 2009-09-24 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001681A1 (de) 2009-03-20 2010-09-23 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001732A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001728A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001730A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
EP2232995A1 (de) 2009-03-25 2010-09-29 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
CN102448305B (zh) 2009-03-25 2015-04-01 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨虫特性的活性成分结合物
US9012360B2 (en) 2009-03-25 2015-04-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistic combinations of active ingredients
JP2012521371A (ja) 2009-03-25 2012-09-13 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺虫特性および殺ダニ特性を有する活性化合物の組合せ
AP3073A (en) 2009-03-25 2014-12-31 Bayer Cropscience Ag Active ingredient combinations with insecticidal and acaricidal properties
EP2410847A1 (de) 2009-03-25 2012-02-01 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften
EP2239331A1 (en) 2009-04-07 2010-10-13 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2427059B1 (en) 2009-05-06 2015-06-03 Bayer Intellectual Property GmbH Cyclopentanedione compounds and their use as insecticides and acaricides
AR076839A1 (es) 2009-05-15 2011-07-13 Bayer Cropscience Ag Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas
EP2251331A1 (en) 2009-05-15 2010-11-17 Bayer CropScience AG Fungicide pyrazole carboxamides derivatives
EP2255626A1 (de) 2009-05-27 2010-12-01 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
CN102595889A (zh) 2009-06-02 2012-07-18 拜耳作物科学公司 琥珀酸脱氢酶抑制剂在控制核盘菌属真菌中的应用
US8071848B2 (en) * 2009-06-17 2011-12-06 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV218328
AU2010272872B2 (en) 2009-07-16 2014-08-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistic active substance combinations containing phenyl triazoles
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
FR2948533A1 (fr) 2009-08-03 2011-02-04 Limagrain Verneuil Holding Plante brassica restauratrice de la sterilite male cytoplasmique ogura, procede de production et utilisation de cette plante
EP2292094A1 (en) * 2009-09-02 2011-03-09 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2343280A1 (en) 2009-12-10 2011-07-13 Bayer CropScience AG Fungicide quinoline derivatives
EP2519103B1 (en) 2009-12-28 2014-08-13 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
JP5894928B2 (ja) 2009-12-28 2016-03-30 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 殺菌剤ヒドロキシモイル−ヘテロ環誘導体
US20130012546A1 (en) 2009-12-28 2013-01-10 Christian Beier Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2525658B1 (de) 2010-01-22 2017-03-01 Bayer Intellectual Property GmbH Akarizide und/oder insektizide wirkstoffkombinationen
EP2353387A1 (de) 2010-02-05 2011-08-10 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat-Dehydrogenase (SDH)-Inhibitoren in der Behandlung von Pflanzenarten der Familie der Süßgräser
US8148611B2 (en) * 2010-02-26 2012-04-03 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV453784
US8138394B2 (en) * 2010-02-26 2012-03-20 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV431158
US8143488B2 (en) * 2010-02-26 2012-03-27 Monsanto Technoloy LLC Plants and seeds of spring canola variety SCV470336
WO2011107504A1 (de) 2010-03-04 2011-09-09 Bayer Cropscience Ag Fluoralkyl- substituierte 2 -amidobenzimidazole und deren verwendung zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
US8581048B2 (en) * 2010-03-09 2013-11-12 Monsanto Technology, Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV119103
US8153865B2 (en) * 2010-03-11 2012-04-10 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV152154
AR080684A1 (es) 2010-03-18 2012-05-02 Bayer Cropscience Ag Aril- y hetarilsulfonamidas como sustancias activas contra un estres abiotico de plantas
EP2555619A2 (de) 2010-04-06 2013-02-13 Bayer Intellectual Property GmbH Verwendung der 4-phenylbuttersäure und/oder ihrer salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
EP2555626A2 (de) 2010-04-09 2013-02-13 Bayer Intellectual Property GmbH Verwendung von derivaten der (1-cyancyclopropyl)phenylphosphinsäure, deren ester und/oder deren salze zur steigerung der toleranz in pflanzen gegenüber abiotischem stress
EP2377397A1 (de) 2010-04-14 2011-10-19 Bayer CropScience AG Verwendung fungizider Wirkstoffe zur Kontrolle von Mykosen an Palmengewächsen
WO2011134911A2 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
JP2013525401A (ja) 2010-04-28 2013-06-20 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺菌剤ヒドロキシモイル−複素環誘導体
EP2563772A1 (en) 2010-04-28 2013-03-06 Bayer Cropscience AG Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
PL2576517T3 (pl) 2010-06-03 2015-06-30 Bayer Ip Gmbh N-[(het)aryloalkilo)]pirazolo(tio)karboksyamidy i ich analogi heteropodstawione
CN102933556B (zh) 2010-06-03 2015-08-26 拜尔农科股份公司 N-[(杂)芳基乙基]吡唑(硫代)羧酰胺及其杂取代的类似物
UA110703C2 (uk) 2010-06-03 2016-02-10 Байєр Кропсайнс Аг Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду
UA111593C2 (uk) 2010-07-07 2016-05-25 Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх Аміди антранілової кислоти у комбінації з фунгіцидами
AU2011281679B2 (en) 2010-07-20 2015-09-03 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of anthranilic acid amide derivatives for controlling insects and spider mites by watering, mixing with soil, drench treatment, droplet application, injection into the soil, stems or blossoms, in hydroponic systems, by treating the planting hole or immersion application, floating or seed box application or by the treatment of seeds, and for increasing the stress tolerance in plants to abiotic stress
WO2012010579A2 (en) 2010-07-20 2012-01-26 Bayer Cropscience Ag Benzocycloalkenes as antifungal agents
WO2012028578A1 (de) 2010-09-03 2012-03-08 Bayer Cropscience Ag Substituierte anellierte pyrimidinone und dihydropyrimidinone
EP2460406A1 (en) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops
BR112013006612A2 (pt) 2010-09-22 2017-10-24 Bayer Ip Gmbh uso de agentes de controle biológico ou químico para controle de insetos e nematódeos em culturas resistentes
CN103338638B (zh) 2010-10-07 2016-04-06 拜尔农科股份公司 包含四唑基肟衍生物和噻唑基哌啶衍生物的杀真菌剂组合物
AR083501A1 (es) 2010-10-21 2013-02-27 Bayer Cropscience Ag 1-(heterociclo carbonil)piperidinas
WO2012052490A1 (en) 2010-10-21 2012-04-26 Bayer Cropscience Ag N-benzyl heterocyclic carboxamides
KR20130116074A (ko) 2010-11-02 2013-10-22 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 Ｎ-헤타릴메틸 피라졸릴카르복사미드
CN103313971B (zh) 2010-11-15 2015-12-02 拜耳知识产权有限责任公司 N-芳基吡唑（硫代）甲酰胺
CN103369962A (zh) 2010-11-15 2013-10-23 拜耳知识产权有限责任公司 5-卤代吡唑(硫代)甲酰胺
CN103391925B (zh) 2010-11-15 2017-06-06 拜耳知识产权有限责任公司 5‑卤代吡唑甲酰胺
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
AP3519A (en) 2010-12-01 2016-01-11 Bayer Ip Gmbh Use of fluopyram for controlling nematodes in crops and for increasing yield
EP2474542A1 (en) 2010-12-29 2012-07-11 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
US20130289077A1 (en) 2010-12-29 2013-10-31 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2471363A1 (de) 2010-12-30 2012-07-04 Bayer CropScience AG Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
WO2015106205A1 (en) * 2014-01-11 2015-07-16 Rutger, The State University Of New Jersey Transfer of mitochondria in plant species for conferring cytoplasmic male sterility
EP2494867A1 (de) 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
WO2012120105A1 (en) 2011-03-10 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
JP2014509599A (ja) 2011-03-14 2014-04-21 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
US8513487B2 (en) 2011-04-07 2013-08-20 Zenon LISIECZKO Plants and seeds of spring canola variety ND-662c
US8513494B2 (en) 2011-04-08 2013-08-20 Chunren Wu Plants and seeds of spring canola variety SCV695971
US20140051575A1 (en) 2011-04-08 2014-02-20 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2511255A1 (de) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer CropScience AG Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate
AR090010A1 (es) 2011-04-15 2014-10-15 Bayer Cropscience Ag 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento
AR085585A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas
AR085568A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas
TR201901837T4 (tr) 2011-04-22 2019-03-21 Bayer Cropscience Ag Bir (tiyo)karboksamit türevi ve bir mantar öldürücü bileşik içeren etkin bileşik terkipleri.
US8507761B2 (en) 2011-05-05 2013-08-13 Teresa Huskowska Plants and seeds of spring canola variety SCV372145
US8513495B2 (en) 2011-05-10 2013-08-20 Dale Burns Plants and seeds of spring canola variety SCV291489
CN103957711A (zh) 2011-07-04 2014-07-30 拜耳知识产权有限责任公司 取代的异喹啉酮、异喹啉二酮、异喹啉三酮和二氢异喹啉酮或其各自的盐作为活性剂对抗植物非生物胁迫的用途
US9265252B2 (en) 2011-08-10 2016-02-23 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
US20140206726A1 (en) 2011-08-22 2014-07-24 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
CN103781353B (zh) 2011-09-09 2016-10-19 拜耳知识产权有限责任公司 用于改良植物产量的酰基高丝氨酸内酯衍生物
JP6002225B2 (ja) 2011-09-12 2016-10-05 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌性４−置換−３−｛フェニル［（ヘテロシクリルメトキシ）イミノ］メチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−５（４ｈ）−オン誘導体
BR112014006208B1 (pt) 2011-09-16 2018-10-23 Bayer Intellectual Property Gmbh método de indução de respostas reguladoras do crescimento nas plantas aumentando o rendimento de plantas úteis ou plantas de cultura e composição de aumento do rendimento da planta compreendendo isoxadifen-etilo ou isoxadifeno e combinação de fungicidas
IN2014CN01860A (cs) 2011-09-16 2015-05-29 Bayer Ip Gmbh
JP6138797B2 (ja) 2011-09-16 2017-05-31 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 植物収量を向上させるためのアシルスルホンアミド類の使用
CN103929964A (zh) 2011-09-23 2014-07-16 拜耳知识产权有限责任公司 4-取代的1-苯基吡唑-3-甲酸衍生物作为对抗非生物植物胁迫的活性物质的用途
PL2764101T3 (pl) 2011-10-04 2017-09-29 Bayer Intellectual Property Gmbh RNAi do kontroli grzybów i lęgniowców poprzez hamowanie genu dehydrogenazy sacharopinowej
WO2013050324A1 (de) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b)
EP2782920B1 (en) 2011-11-21 2016-12-21 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
EP2785698B1 (en) 2011-11-30 2018-10-10 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicidal n-bicycloalkyl and n-tricycloalkyl (thio)carboxamide derivatives
US9414595B2 (en) 2011-12-19 2016-08-16 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
BR112014015993A8 (pt) 2011-12-29 2017-07-04 Bayer Ip Gmbh composto, composição, método para o controle dos fungos, utilização dos compostos e processo para a produção das composições
MX343871B (es) 2011-12-29 2016-11-25 Bayer Ip Gmbh Derivados de 3-[(piridin-2-ilmetoxiimino)(fenil)metil]-2-sustituid o-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-ona fungicidas.
HUE036328T2 (hu) 2012-02-22 2018-06-28 Bayer Cropscience Ag Fluopirám alkalmazása fabetegségek leküzdésére szõlõn
PL2819518T3 (pl) 2012-02-27 2018-02-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Kombinacje związku aktywnego zawierające tiazoiloizoksazolin i fungicyd
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
US9357778B2 (en) 2012-04-12 2016-06-07 Bayer Cropscience Ag N-acyl-2-(cyclo)alkypyrrolidines and piperidines useful as fungicides
MX2014012449A (es) 2012-04-20 2015-01-19 Bayer Cropscience Ag Derivados de n-cicloalquil-n-[(heterociclilfenil)metilen]-(tio) carboxamida.
JP2015516396A (ja) 2012-04-20 2015-06-11 バイエル・クロップサイエンス・アーゲーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ａｇ Ｎ−シクロアルキル−ｎ−［（三置換シリルフェニル）メチレン］−（チオ）カルボキサミド誘導体
US8878009B2 (en) 2012-04-26 2014-11-04 Monsanto Technology, LLP Plants and seeds of spring canola variety SCV318181
US8835720B2 (en) 2012-04-26 2014-09-16 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV967592
US8859857B2 (en) 2012-04-26 2014-10-14 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV259778
US8802935B2 (en) 2012-04-26 2014-08-12 Monsanto Technology Llc Plants and seeds of spring canola variety SCV942568
MX2014013489A (es) 2012-05-09 2015-02-12 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopirazolindanil carboxamidas.
EP2847170B1 (en) 2012-05-09 2017-11-08 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
EP2871958A1 (en) 2012-07-11 2015-05-20 Bayer CropScience AG Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress
WO2014037340A1 (de) 2012-09-05 2014-03-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung substituierter 2-amidobenzimidazole, 2-amidobenzoxazole und 2-amidobenzothiazole oder deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
CA2888556C (en) 2012-10-19 2020-07-07 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
CA2888559C (en) 2012-10-19 2021-03-02 Bayer Cropscience Ag Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
US9801374B2 (en) 2012-10-19 2017-10-31 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations comprising carboxamide derivatives
EP2908641B1 (en) 2012-10-19 2018-01-10 Bayer Cropscience AG Method for treating plants against fungi resistant to fungicides using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
MX2015006328A (es) 2012-11-30 2015-09-07 Bayer Cropscience Ag Mezcla fungicida o pesticida binaria.
CN104812247A (zh) 2012-11-30 2015-07-29 拜耳作物科学股份公司 二元杀真菌混合物
BR122020019349B1 (pt) 2012-11-30 2021-05-11 Bayer Cropscience Ag composição, seu processo de preparação, método para controlar um ou mais microrganismos nocivos, semente resistente a microorganismos nocivos e seu método de tratamento
US9775351B2 (en) 2012-11-30 2017-10-03 Bayer Cropscience Ag Ternary fungicidal and pesticidal mixtures
UA117819C2 (uk) 2012-11-30 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійні пестицидні і фунгіцидні суміші
EP2740720A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
EP2740356A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate
US20150305334A1 (en) 2012-12-05 2015-10-29 Bayer Cropscience Ag Use of substituted 1-(aryl ethynyl)-, 1-(heteroaryl ethynyl)-, 1-(heterocyclyl ethynyl)- and 1-(cycloalkenyl ethynyl)-cyclohexanols as active agents against abiotic plant stress
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
IN2015DN04206A (cs) 2012-12-19 2015-10-16 Bayer Cropscience Ag
US20160016944A1 (en) 2013-03-07 2016-01-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungicidal 3--heterocycle derivatives
US9550752B2 (en) 2013-04-12 2017-01-24 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Triazolinthione derivatives
EA028812B1 (ru) 2013-04-12 2018-01-31 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Триазольные производные
EP2986117A1 (en) 2013-04-19 2016-02-24 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Binary insecticidal or pesticidal mixture
BR112015026235A2 (pt) 2013-04-19 2017-10-10 Bayer Cropscience Ag método para melhorar a utilização do potencial de produção de plantas transgênicas envolvendo a aplicação de um derivado de ftaldiamida
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
BR112015031235A2 (pt) 2013-06-26 2017-07-25 Bayer Cropscience Ag derivados de n-cicloalquil-n-[(biciclil-fenil)metileno]-(tio)carboxamida
AR096827A1 (es) 2013-07-09 2016-02-03 Bayer Cropscience Ag Uso de piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como ingredientes activos contra estrés abiótico en plantas
CA2918909A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method for producing hybrid brassica seed
EP2837287A1 (en) 2013-08-15 2015-02-18 Bayer CropScience AG Use of prothioconazole for increasing root growth of Brassicaceae
WO2015032692A1 (de) 2013-09-03 2015-03-12 Bayer Cropscience Ag Verwendung fungizider wirkstoffe zur kontrolle von chalara fraxinea an eschenbäumen
EP3077377B1 (en) 2013-12-05 2020-01-22 Bayer CropScience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
US10070645B2 (en) 2013-12-05 2018-09-11 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
EP2865267A1 (en) 2014-02-13 2015-04-29 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phenylamidine compounds and biological control agents
EP2865265A1 (en) 2014-02-13 2015-04-29 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phenylamidine compounds and biological control agents
AR101214A1 (es) 2014-07-22 2016-11-30 Bayer Cropscience Ag Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas
AR103024A1 (es) 2014-12-18 2017-04-12 Bayer Cropscience Ag Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas
US10214510B2 (en) 2015-04-13 2019-02-26 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-(biheterocyclylethylene)-(thio)carboxamide derivatives
US10415101B2 (en) 2015-04-30 2019-09-17 Monsanto Technology Llc Methods for producing canola plants with clubroot resistance and compositions thereof
WO2017102923A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Bayer Cropscience Nv Brassicaceae plants resistant to plasmodiophora brassicae (clubroot)
WO2017174430A1 (en) 2016-04-06 2017-10-12 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Combination of nuclear polyhedrosis virus and diamides
WO2018019676A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants
BR112019005660A2 (pt) 2016-09-22 2019-06-04 Bayer Cropscience Ag novos derivados de triazol e seu uso como fungicidas
US20190211002A1 (en) 2016-09-22 2019-07-11 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
MX2019004930A (es) 2016-10-26 2019-06-06 Bayer Cropscience Ag Uso de piraziflumid para el control de sclerotinia spp en aplicaciones de tratamiento de semillas.
UA124504C2 (uk) 2016-12-08 2021-09-29 Баєр Кропсаєнс Акціенгезельшафт Застосування інсектицидів для контролю за дротяниками
EP3332645A1 (de) 2016-12-12 2018-06-13 Bayer Cropscience AG Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
WO2019025153A1 (de) 2017-07-31 2019-02-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
KR20210013180A (ko) * 2018-05-25 2021-02-03 필립모리스 프로덕츠 에스.에이. 식물 재료를 분류하는 방법
JP2021525774A (ja) 2018-06-04 2021-09-27 バイエル アクチェンゲゼルシャフトＢａｙｅｒ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 除草活性二環式ベンゾイルピラゾール
EA202190389A1 (ru) 2018-07-26 2021-06-16 Байер Акциенгезельшафт Применение ингибитора сукцинатдегидрогеназы флуопирама для борьбы с корневой гнилью и/или фузариозной гнилью, вызванной rhizoctonia solani, видом fusarium и видом pythium, у видов brassicaceae
CN112714614A (zh) 2018-09-17 2021-04-27 拜耳公司 杀真菌剂异氟普仑用于在谷物中防治麦角菌和减少菌核的用途
AU2019343723A1 (en) 2018-09-17 2021-04-15 Bayer Aktiengesellschaft Use of the succinate dehydrogenase inhibitor fluopyram for controlling claviceps purpurea and reducing sclerotia in cereals
CA3225922A1 (en) 2021-07-23 2023-01-26 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Blackleg resistant plants and methods for the identification of blackleg resistant plants

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1987001726A2 (en) * 1985-09-23 1987-03-26 Allelix, Inc. Protoplast fusion product and process for preparing same
GB8901677D0 (en) * 1989-01-26 1989-03-15 Ici Plc Hybrid seed production
HU204561B (en) * 1987-12-17 1992-01-28 Zaadunie Bv Process for producing hybrid brassicaceae with citoplasmic male sterility
AU5664090A (en) * 1989-05-05 1990-11-29 Biosource Genetics Corporation Male sterility in plants

Also Published As

Publication number Publication date
EP0549726B1 (fr) 2001-12-19
EP0909815B1 (fr) 2008-05-21
ES2307308T3 (es) 2008-11-16
DK0549726T3 (da) 2002-04-02
ATE396257T1 (de) 2008-06-15
FR2667078B1 (fr) 1994-09-16
WO1992005251A1 (fr) 1992-04-02
FR2667078A1 (fr) 1992-03-27
PL169149B1 (en) 1996-06-28
US5789566A (en) 1998-08-04
EP0549726A1 (fr) 1993-07-07
RU2117704C1 (ru) 1998-08-20
PL168666B1 (pl) 1996-03-29
ATE211170T1 (de) 2002-01-15
IE20020681A1 (en) 2002-12-30
DE69133597D1 (de) 2008-07-03
CZ45493A3 (en) 1994-02-16
PT99024B (pt) 1999-02-26
CA2393476A1 (fr) 1992-04-02
JP3156792B2 (ja) 2001-04-16
PT99024A (pt) 1992-08-31
EP0909815A2 (fr) 1999-04-21
CA2092097A1 (fr) 1992-03-22
SK22293A3 (en) 1993-10-06
HU9300801D0 (en) 1993-06-28
JPH06501613A (ja) 1994-02-24
PL169783B1 (pl) 1996-08-30
HUT66675A (en) 1994-12-28
KR930702520A (ko) 1993-09-09
SK284748B6 (sk) 2005-11-03
DE69132878T2 (de) 2002-08-29
JP2001145497A (ja) 2001-05-29
IE913320A1 (en) 1992-02-25
ES2169720T3 (es) 2002-07-16
CA2092097C (fr) 2003-11-11
AU8663191A (en) 1992-04-15
RO114978B1 (ro) 1999-09-30
CA2393476C (fr) 2010-06-01
DK0909815T3 (da) 2008-06-30
EP0909815A3 (fr) 1999-06-02
DE69132878D1 (de) 2002-01-31
AU652964B2 (en) 1994-09-15
PL169165B1 (pl) 1996-06-28
UA26445C2 (uk) 1999-08-30
HU215494B (hu) 1999-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ291186B6 (cs) Rekombinantní rostlinný jaderný nebo mitochondriální genom, cytoplazma, rostlina, způsob přípravy rostliny, sonda nukleové kyseliny, DNA molekula
IE84070B1 (en) DNA sequence imparting cytoplasmic male sterility, mitochondrial genome, nuclear genome, mitochondria and plant containing said sequence and process for the preparation of hybrids
Jean et al. Genetic mapping of nuclear fertility restorer genes for the ‘Polima’cytoplasmic male sterility in canola (Brassica napus L.) using DNA markers
Murfett et al. S-RNase expressed in transgenic Nicotiana causes S-allele-specific pollen rejection
JP2002500512A (ja) 天然に生じる雄性不稔性の増強および雄性不稔性の回復のための方法並びにハイブリッド作物の生産におけるその使用
US20230383308A1 (en) Modified promoter of a parthenogenesis gene
EP0519869A2 (en) A receptor protein kinase gene encoded at the self-incompatibility locus
US20060123514A1 (en) Self-fertile apple resulting from S-RNAase gene silencing
US6583335B1 (en) Direct transformation of higher plants through pollen tube pathway
WO2023135335A1 (en) Modified tom2a gene involved in tobamovirus resistance
WO1998035052A1 (en) Production of self-compatible brassica hybrids using a self-incompatible pollination control system
Brown Molecular analysis of gene expression during pollen development in Oenothera organensis
Bravo Cell culture and conventional breeding studies to establish cytoplasmic male sterility in the cultivated tomato (Lycopersicon esculentum)
Kjellsson et al. Glossary of terms and abbreviations
Ai Molecular genetic and biochemical studies of self-incompatibility in Petunia
L'Homme Molecular characterization of cytoplasmic male sterility in Brassica napus
He Studies of plant nuclear-mitochondrial genetic interactions
Mahe Import of chimeric proteins into plant mitochondria

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20110920