FR2948533A1 - Plante brassica restauratrice de la sterilite male cytoplasmique ogura, procede de production et utilisation de cette plante - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une plante Brassica, à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura et dont le génome ne présente pas d'allèle radis du marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2. L'invention concerne une plante hybride obtenue par croisement entre une plante telle que définie ci-dessus en tant que parent mâle et une autre plante Brassica CMS Ogura en tant que parent femelle, ainsi que le procédé de production d'une telle plante. L'invention concerne également les graines et la descendance de l'ensemble des plantes sus-mentionnées ainsi que l'utilisation des plantes sus-mentionnées pour des applications alimentaires, de préférence la production d'huile et/ou la production de tourteaux.

Description

PLANTE BRASSICA RESTAURATRICE DE LA FERTILITE POUR LA STERILITE MALE CYTOPLASMIQUE OGURA, PROCEDE DE PRODUCTION ET UTILISATION DE CETTE PLANTE

Le domaine de l'invention est celui de l'amélioration végétale, et en particulier le développement de nouveaux hybrides du colza, Brassica napus, oleracea et rapa. 10 La culture du colza, aussi appelé canola outre-atlantique, est très répandue sur tous les continents en raison du fait de ses multiples atouts tant dans le domaine alimentaire qu'industriel. En effet, le colza permet une grande production d'huile largement utilisée en tant que produit alimentaire mais également en tant que biocarburant notamment dans 15 l'industrie automobile ou autre. Le colza permet aussi la production de tourteaux qui sont une source de protéines intéressante en alimentation animale (gros bétail, porcins et volaille).

Malgré ces atouts, l'utilisation alimentaire de l'huile de colza oléagineux a été longtemps 20 restreinte à cause de sa teneur trop importante en acide érucique. En effet, en fonction des variétés de colza, le taux d'acide érucique pouvait représenter jusqu'à 50% des acides gras totaux de la plante et avoir ainsi un impact néfaste sur la santé humaine. De même, l'utilisation du colza pour la fabrication de tourteaux a également été longtemps freinée en raison des forts taux de glucosinolates contenus dans les graines. Lors de la 25 formation des tourteaux, le broyage des graines libère l'enzyme myrosinase qui transforme les glucosinolates des graines en divers sous-produits tels que glucoses, thiocyanates, isothiocyanates et nitriles qui peuvent entrainer des troubles du métabolisme chez les mammifères.

30 Le large développement de la culture de colza est principalement du à deux avancées techniques majeures : la diminution du taux d'acide érucique dans l'huile ainsi que la diminution du taux de glucosinolates dans les graines. En effet, aujourd'hui, un net travail d'amélioration des plantes a permis d'obtenir des variétés commerciales dont le taux d'acide érucique est inférieur à 2% des acides gras totaux de la plante de colza. De plus, en 35 Europe, le décret 2294/92 a fixé le taux maximal de glucosinolates acceptable dans les graines à 25 mol par gramme de graine à 9% d'humidité.

Le taux de glucosinolates et le taux d'acide érucique étant deux paramètres intéressants dans la production des produits dérivés du colza, les sélectionneurs ont, par conséquent, cherché à développer des variétés dites "doubles zéros" c'est-à-dire des variétés de colza qui présentent des taux très bas d'acide érucique dans l'huile et des taux très bas de glucosinolates dans les graines. Le colza étant une espèce autogame, ces variétés ont longtemps été uniquement des variétés population et non des plantes hybrides. Cependant, le développement de plantes hybrides de colza présente de multiples intérêts, tant pour l'agriculteur que pour le sélectionneur, puisque cela permet d'obtenir des plantes améliorées, présentant des qualités d'hétérosis (ou vigueur hybride), d'homéostasie (stabilité de la plante dans différents environnements), la possibilité d'introduire et de combiner des gènes de résistance à des insectes, des champignons, des bactéries ou des virus, ou encore l'adaptation à des stress abiotiques. Mais ce développement de plantes hybrides de colza nécessite des moyens efficaces de contrôle de la pollinisation. Pour ce faire, ont été développées des techniques de stérilité mâle cytoplasmique (ou CMS pour Cytoplasmic Male Sterility) tels que les systèmes Polima, Kosena et surtout Ogura. Le système de stérilité mâle cytoplasmique Ogura est basé sur l'utilisation d'un déterminant de stérilité mâle dérivé du cytoplasme du radis (Raphanus sativus), qui a été transférée depuis le radis dans les Brassica napus par croisements inter-spécifiques, sauvetages d'embryons et rétro-croisements (Bannerot et al, 1974). La fusion de protoplastes a été nécessaire pour produire des hybrides cytoplasmiques mâles stériles (Pelletier et al., 1983). Mais la stérilité mâle cytoplasmique CMS Ogura étant dominante, la plante hybride de colza ne produit pas de pollen, et sans pollen, la plante ne produit pas de graines. Pour remédier à cette situation et obtenir une récolte, il est nécessaire que le parent mâle de l'hybride contienne un gène de restauration de la fertilité mâle. Un tel gène de restauration de la fertilité mâle du système Ogura a été identifié chez le radis Raphanus sativus et transféré dans les plantes Brassica porteuses de la stérilité mâle cytoplasmique par l'Institut National de la Recherche Agronomique en 1987 (Pelletier et al, 1987, Proc 7th Int. Rapeseed Conf. Poznan, Poland, 113/119). Le gène de restauration Rf a été décrit dans la demande de brevet WO92/05251 et dans Delourme et al, 1991, Proc 8th Int. Rapeseed Conf. Saskatoon, Canada, 1506/1510. Toutefois, les plantes obtenues porteuses de ce gène Rf de restauration de la fertilité mâle présentent deux inconvénients majeurs : une augmentation importante des taux de glucosinolates dans les graines et une diminution importante des caractéristiques agronomiques de la plante telles qu'une diminution de la quantité de graines produites, une diminution de la résistance aux maladies et une susceptibilité accrue à la verse. Ces inconvénients semblent directement liés au fragment d'introgression porteur notamment du gène Rf de restauration de la fertilité mâle cytoplasmique transféré depuis Raphanus sativus. Cette région chromosomique ne comportant pas que le gène de restauration Rf, elle comprend aussi un ou plusieurs gènes qui entraînent les inconvénients susmentionnés. Afin de remédier à cette situation, divers programmes de recherches ont cherché à obtenir des évènements de recombinaisons dans cette région chromosomique, recombinaisons visant à casser la liaison génétique existant entre les segments d'ADN codant pour les différents caractères. Les recherches ont toutefois été rendues difficiles par le fait que la région chromosomique entourant le gène de restauration Rf est très difficilement sujette aux recombinaisons. De plus, des fragments d'introgression trop courts ne sont pas intéressants car certaines fonctions semblent perdues . L'hypothèse la plus séduisante, émise par l'INRA, serait d'arriver à une introgression très courte mais pas trop, comportant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle, mais où les segments chromosomiques de Raphanus sativus délétères sont remplacés par leurs homologues/homéologues Brassica, restaurant ainsi aussi les qualités agronomiques.

La demande de brevet W097/02737 (Zenco) divulgue un premier évènement de recombinaison au sein du fragment chromosomique issu de Raphanus sativus résultant en la création de plantes de Brassica napus combinant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle et des taux de glucosinolates diminués. Ces taux de glucosinolates, même diminués, sont toutefois toujours supérieurs aux minimums requis actuellement.

La demande de brevet W098/27806 (Pioneer) se rapporte à la création de plantes Brassica hybrides comprenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle et ayant un taux de glucosinolates inférieur à 30 'mol par gramme de matière sèche et un taux d'acide érucique inférieur à 2% en poids du contenu d'acide gras total. Ces plantes sont obtenues par croisement entre un premier parent choisi entre quatre lignées différentes et un second parent ayant un taux de glucosinolates suffisamment bas pour que l'hybride ait un taux inférieur à 30 mol. La liaison entre le gène restaurateur Rf et le locus responsable du taux de glucosinolates élevé a été rompue permettant ainsi d'obtenir des hybrides restaurateurs de la fertilité mâle et ayant des taux de glucosinolates faibles. Toutefois, il s'agit ici de la création d'hybrides, non de lignées restauratrices stables. La demande de brevet WO 2005/074671 (Syngenta) montre la réalisation d'un événement de recombinaison particulier entre le gène Rf de restauration de la fertilité mâle et le ou les gènes liés aux niveaux élevés de glucosinolates dans les graines. Cet évènement est caractérisé à l'aide de marqueurs spécifiques. En particulier, la plante produite contenant cet évènement de recombinaison est identifiée par le marqueur E33M47 mais pas par le marqueur OPY 17. Par ailleurs, la demande de brevet est silencieuse quand aux caractéristiques agronomiques de la plante produite, notamment sur le niveau de sa production de graines. Or, si la diminution du taux de glucosinolates dans les graines est une nécessité pour toute plante commercialisée, la diminution de ses qualités agronomiques, en particulier sa production grainière, doit être absolument évitée.

La demande de brevet WO 2005/002324 (INRA) concerne la mise au point d'une méthode de production de la lignée Rf restauratrice de la fertilité mâle double zéro , c'est-à-dire ayant un faible taux d'acide érucique dans l'huile et un faible taux de glucosinolates dans les graines. Afin d'augmenter la fréquence de recombinaison et donc la possibilité de cassure de la liaison génétique entre les séquences génétiques de restauration de la fertilité mâle et celles responsables des niveaux élevés de glucosinolates, les inventeurs ont irradié, avant la méiose, des plantes issues d'un croisement entre des lignées double zéro CMS restaurées et la lignée double zéro Drakkar. L'analyse des plantes obtenues, par les marqueurs moléculaires, tels que PGIo1, PgIUNT, PgLint, Bo1Jon et CP418, indique qu'une recombinaison semble effectivement avoir eu lieu, remplaçant le gène Pgi2 de Raphanus sativus par celui de Brassica oleracea. La lignée produite par l'INRA est connue aujourd'hui sous la dénomination R2000. Cependant, même si l'utilisation des radiations permet d'augmenter la fréquence de recombinaison, elle est toujours délicate, en particulier sur une région reconnue instable comme l'est celle de l'introgression de Raphanus sativus portant le gène Rf de restauration de la stérilité mâle cytoplasmique.

Dans ce contexte, l'un des objectifs essentiels de l'invention est d'obtenir une lignée Brassica Rf restauratrice de la fertilité mâle palliant tous les inconvénients cités précédemment et en particulier une lignée Rf restauratrice à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ainsi que ses graines et sa descendance.

Un autre objectif de l'invention est d'obtenir des graines et des plantes Brassica hybrides à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique contenant le gène Rf restaurateur de la fertilité mâle pour le système Ogura conservant des qualités agronomiques intéressantes. Un autre objectif de l'invention est d'obtenir les graines de ladite lignée Rf et desdites plantes hybrides et la descendance de ces plantes.

Un autre objectif essentiel de l'invention est de fournir un procédé efficace, rapide et économique de production de ces plantes hybrides à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique restauratrices de la fertilité mâle. Un autre objectif de l'invention est de fournir des plantes restauratrices de la fertilité mâle possédant des qualités agronomiques accrues.35 DESCRIPTION SUCCINCTE DE L'INVENTION Les objectifs susvisés, parmi d'autres, sont ainsi atteints par la présente invention qui concerne tout d'abord une nouvelle lignée restauratrice Rf à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique et possédant des qualités agronomiques accrues, en particulier une bonne production grainière. Cette lignée a été appelée R7631. Il s'agit plus précisément d'une lignée Brassica restauratrice de la fertilité mâle due au système Ogura de stérilité cytoplasmique mâle (CMS Ogura). Elle présente un profil génétique nouveau avec un fragment d'introgression restaurant la fertilité mâle différent et plus court que ceux divulgués dans l'art antérieur mais pas trop court de manière à obtenir de bonnes qualités agronomiques. Cette lignée a été conçue et identifiée, après de nombreux croisements, sélections et autres expérimentations faisant notamment appel à la biologie moléculaire et tout particulièrement grâce à des marqueurs moléculaires précis qui ont permis de dresser son profil génétique et ainsi de déterminer son caractère nouveau et plus performant par rapport aux lignées existantes, notamment sur la fertilité. Cette lignée a également été conçue grâce à des techniques n'utilisant pas d'irradiations avant la méïose. En effet, il est du mérite des inventeurs d'avoir conçu une telle lignée restauratrice non seulement sans avoir recours aux irradiations dans une région chromosomique où les recombinaisons homologues sont particulièrement difficiles mais également d'avoir réussi à établir une lignée alors que la région d'introgression portant le gène de restauration de le fertilité mâle dans le système Ogura est particulièrement instable. L'invention a également pour objet les plantes hybrides conçues par croisement à partir de ladite lignée restauratrice Rf à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ainsi que leur procédé de production qui consiste, entre autres, à croiser une plante de la lignée restauratrice Rf avec une autre plante, de préférence Brassica. L'invention a également pour objet des plantes Brassica restauratrices de la fertilité mâle et possédant des qualités agronomiques très intéressantes.

Enfin, l'invention a également pour objet les différentes applications des susdites plantes, notamment dans le domaine alimentaire (production d'huile et/ou de tourteaux).

DEFINITIONS Afin de mieux comprendre l'invention, il convient tout d'abord de rappeler ou de donner quelques définitions données à titre d'exemples non limitatifs. Au sens de la présente 5 demande : - Par plante, on entend par exemple un végétal à quelque stade de développement que ce soit, notamment : embryon, ou tout autre stade plantule ou de la plante adulte. - Par plante mâle ou parent mâle on entend par exemple une plante utilisée comme donneur de pollen dans un croisement. 10 - Par plante femelle ou parent femelle on entend par exemple une plante utilisée comme receveur de pollen, ou donneur d'ovule dans un croisement. - Par partie de plante on entend par exemple le pollen, les ovules, les embryons, les feuilles, les anthères, les tiges, les pétioles, les racines, les fruits, les graines, les fleurs, les bourgeons, les protoplastes, les cals, les cellules et tissus cellulaires. 15 - Par descendance de la plante, on entend par exemple un embryon de plante, une plante, les graines et les semences de la plante parente. - Par plante hybride, on entend par exemple une plante issue du croisement entre deux parents génétiquement différents. Pour une plante de la première génération d'un croisement entre deux parents homozygotes génétiquement distincts, par exemple deux 20 variétés distinctes, on parlera d'hybride F1. - Par introgression, on entend par exemple un fragment d'ADN d'une espèce introduit dans le génome d'une plante d'une autre espèce. En l'occurrence, l'introgression selon l'invention provient du radis (Raphanus sativus) et a été transférée chez une Brassica, de préférence une Brassica oleracea. 25 - Par évènement de recombinaison, on entend par exemple un fragment d'ADN introduit par recombinaison génétique qui consiste en un échange d'information génétique entre deux génomes différents ou bien entre deux chromosomes. - Par gène Rf, on entend par exemple le gène restaurateur de la fertilité mâle provenant du radis et ceci dans le système de stérilité cytoplasmique mâle Ogura. 30 - Par lignée Rf, on entend par exemple une lignée Brassica ou plante Brassica dont le génome comprend le gène Rf de restauration de la fertilité mâle provenant du radis et ceci dans le système de stérilité cytoplasmique mâle Ogura. - Par plante restauratrice, on entend une plante porteuse du gène Rf restaurateur de la fertilité mâle dans le système de stérilité cytoplasmique mâle Ogura. 35 - Par plante à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique, on entend par exemple une plante présentant à la fois un taux d'acide érucique inférieur ou égal à 2% des acides gras 6 totaux contenus dans la plante, de préférence inférieur ou égal à 0,5% et plus préférentiellement encore à 0,1% et un taux de glucosinolates dans ses graines inférieur ou égal à 25 mol par gramme de graines, de préférence situé entre 10 et 16 !mol par grammes de graines, à 9% d'humidité dans les graines. Par extension dans la présente demande par bas taux de glucosinolates ou taux bas de glucosinolates, on entend le taux limite sus-mentionné. Il en va de même respectivement pour l'acide érucique. - Par plante CMS Ogura, on entend par exemple une plante Brassica portant un déterminant de stérilité mâle Ogura tel que défini dans Bonhomme et al (1991) Curr. Genet., vol.19, pp.121-127 ; et Bonhomme et al (1992) MoL Gen.Genet., vol/235, pp.340- 348. -Par plante récurrente ou lignée récurrente ou lignée receveuse, on entend une plante Brassica de l'espèce napus ou oleracea qui ne contient pas le caractère de restauration de la fertilité ou gène Rf et qui le reçoit par croisement avec la plante Brassica napus dite donneuse déposée sous le n°NCIMB 41646. -Par rétrocroisement, on entend le croisement des descendants issus du premier croisement entre la lignée donneuse et la lignée récurrente, avec la lignée récurrente et ainsi de suite jusqu'à ce que le génome de la lignée donneuse soit remplacé par celui de la lignée récurrente à l'exception de la région introgressée comprenant le gène Rf. - Par marqueur moléculaire, on entend par exemple un fragment spécifique d'une séquence d'ADN pouvant être identifiée au sein du génome d'un individu et pouvant être notamment utilisée pour localiser un gène d'intérêt, vérifier si un individu a hérité d'une caractéristique particulière d'un parent ou différencier des individus. Il peut s'agir ou non d'une séquence codante. Le marqueur peut être dominant, co-dominant. La détection du marqueur moléculaire, ou sa non-détection, permet de sélectionner les individus présentant le gène d'intérêt ou la caractéristique particulière, ou au contraire, de ne pas sélectionner les individus ne présentant pas le gène d'intérêt ou la caractéristique particulière. Dans la présente invention, les marqueurs moléculaires permettent de tester rapidement les plantes issues de croisements donnés, les graines desdites plantes ou les parties de plantes et d'identifier les plantes à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ayant le gène restaurateur de la fertilité mâle. Un marqueur moléculaire spécifique selon la présente invention est un marqueur moléculaire identifiant spécifiquement la présence ou non du gène Rf restaurateur de la fertilité mâle et l'utilisation combinée de plusieurs marqueurs choisis petinettra de différencier la plante restaurée comprenant le gène Rf des plantes non restaurées ne comprenant pas le gène Rf ou des autres plantes produites dans l'art antérieur. - Par amorce nucléotidique ou primer, on entend par exemple une séquence artificielle d'ADN, courte (d'au moins 12 à 30 paires de bases ou nucléotides) complémentaire d'un des brins du fragment d'ADN que l'on souhaite amplifier par réaction de polymérisation en chaîne (PCR) ou que l'on souhaite séquencer. En l'occurrence, on choisit des amorces spécifiques du marqueur à tester. Les amorces sont désignées sur la séquence de la région à amplifier et il est vérifié que l'amplicon est monolocus et qu'il coségrège avec le gène Rf. - Par allèle, on entend selon la présente invention les diverses versions d'une séquence d'ADN donnée située à un locus (emplacement sur un chromosome) chromosomique donné, en l'occurrence dans la région chromosomique du gène Rf. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Bien que les recombinaisons génétiques homologues soient difficiles à obtenir dans la région chromosomique du gène Rf de restauration de la fertilité mâle et que la région d'introgression soit très instable dans la zone de recombinaison, les inventeurs ont réussi, suite à de nombreuses expérimentations et croisements, à obtenir une nouvelle lignée Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique restauratrice de la fertilité mâle due au système CMS Ogura. Grâce à des analyses de biologie moléculaire, la lignée Rf, nommée aussi R7631, a pu être identifiée comme présentant un profil génétique particulier et nouveau avec un fragment d'introgression original vis-à-vis des plantes restauratrices connues jusqu'à présent. Le premier objet de la présente invention porte sur une plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que ledit génome ne présente pas le marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2.

En utilisant le marqueur E33M47 tel que défini ci-dessus, aucune amplification d'allèle radis ou brassica n'est obtenue en PCR, ce qui conduit à dire que le génome de la plante 30 selon l'invention ne présente pas le marqueur E33M47.

De préférence, la présente lignée Rf selon l'invention comprend le gène Rf et est caractérisée en ce que son génome ne présente pas le marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué, d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et, 35 d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2.

Dans un variante de réalisation, la présente invention concerne une plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que: ^ ledit génome ne présente pas le marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué, d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2, et ^ ledit génome de la plante présente l'allèle Brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea, du marqueur OPY 17 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°3 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°3, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°4 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°4.

Dans une forme préférée de réalisation de l'invention, la présente lignée Rf selon l'invention comprend le gène Rf et est caractérisée en ce que son génome ne présente pas le marqueur E33M47 (pas d'allèle radis amplifié) défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué, d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et, d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et en ce que ledit génome présente le marqueur OPY 17 (allèle Brassica amplifié, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea) défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué par SEQ ID N°3, d'une part, et SEQ ID N°4 d'autre part. Dans une autre variante de réalisation, la présente invention concerne une plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que : ^ ledit génome ne présente pas le marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2, ^ ledit génome de la plante présente au moins un marqueur parmi les marqueurs suivants : un allèle Brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea, du marqueur OPY 17 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°3 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°3, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°4 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°4, un allèle radis du marqueur OPC 12 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°5 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°5, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°6 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°6, un allèle radis du marqueur OPF 10 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°7 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°7, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°8 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°8, sans allèle Brassica napus dudit marqueur OPF 10 tel que défini ci-dessus, un allèle brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea, du marqueur OPN20 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°9 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°9, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°10 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°10, sans allèle radis dudit marqueur OPN 20 tel que défini ci-dessus.

Les marqueurs moléculaires testés permettent de détecter la présence du gène restaurateur Rf dans les plantes testées. Ils permettent de déterminer le génotype des plantes obtenues avant leur floraison, ce qui fait gagner du temps aux sélectionneurs mais également de 35 l'espace car les plantes aux génotypes inadaptés sont éliminées. De plus, ces analyses moléculaires permettent de déterminer de façon grossière la taille du fragment d'introgression par comparaison avec les lignées restauratrices connues. Les analyses des croisements avec les marqueurs moléculaires ont permis d'affiuner que la 10 15 20 25 30 lignée restauratrice a un profil génétique nouveau et un fragment d'introgression différent et probablement plus court que celui des lignées restauratrices décrites dans l'art antérieur. Les marqueurs moléculaires permettent également de déterminer si les plantes testées sont homozygotes ou hétérozygotes pour le gène de restauration Rf, entre autres.

Les différents marqueurs moléculaires ont été testés par réaction de polymérisation en chaîne (PCR) avec des couples d'amorces spécifiques et définis de façon adaptée. Le fragment d'introgression selon l'invention pourrait être détecté par d'autres techniques de biologie moléculaire connues telles que l'utilisation de sondes radiomarquées. Lesdites amorces spécifiques desdits marqueurs moléculaires ont été générées par des méthodes classiques connues de l'homme du métier.

Les séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2 sont spécifiques du marqueur moléculaire E33M47 et ont pour séquences : Amorce sens SEQ ID N°I : TAA CAA AAT AGA GGG AGA GGA TG Amorce anti-sens SEQ ID N°2 : CAA GAT TAT AGC TAC CTA ACA GG Le marqueur E33M47 lorsqu'il est défini par le couple d'amorces SEQ ID N°1/SEQ ID N°2 ci-dessus permet une amplification par PCR, dans les lignées restauratrices de l'art antérieur, d'un fragment d'environ 135 paires de bases provenant du génome radis mais aucun marquage n'a été détecté dans la lignée Rf de la présente invention. Ceci signifie par conséquent que la lignée Rf selon l'invention ne possède plus la région provenant du radis détectée dans les lignées de l'art antérieur. Cette lignée Rf selon l'invention est donc différente de l'art antérieur.

Les séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4 sont spécifiques du marqueur moléculaire OPY 17 et ont pour séquences : Amorce sens SEQ ID N°3 : ACG TGG TGA GGA CAT GCC CTT TCT G Amorce anti-sens SEQ ID N°4 : CTG GTG TAT TCT ACC TCA TCA TTA AA Le marqueur OPY 17 selon la présente invention lorsqu'il est défini par le couple d'amorces SEQ ID N°3/SEQ ID N°4 ci-dessus correspond par exemple à un fragment d'environ 885 paires de bases provenant du génome de Brassica napus (allèle brassica napus). Les mêmes amorces SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4 définissant le marqueur OPY 17 permettent d'amplifier par PCR un fragment d'environ 305 paires de bases provenant du génome de radis et non de Brassica napus. Les différents fragments amplifiés par PCR ont été observé par électrophorèse capillaire. En d'autres termes, le fragment d'ADN de la plante selon l'invention qui comprend ce marqueur OPY 17 est avantageusement issu d'une recombinaison homologue entre le fragment d'ADN issu du radis et le génome Brassica, en particulier pour la région du gène Rf. L'allèle de 885 paires de bases correspond à l'allèle Rf provenant de Brassica et non du radis qui lui correspond à un allèle de 305 paires de bases.

Les séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6 sont spécifiques du marqueur moléculaire OPC2 et ont pour séquences : Amorce sens SEQ ID N°5 : GGG GAA GGA AGG AAG GAC TC Amorce anti-sens SEQ ID N°6 : TCA GGT TCA CAC AGC AGC ATA Les séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8 sont spécifiques du marqueur moléculaire OPF10 et ont pour séquences : Amorce sens SEQ ID N°7 : CTG ATG AAT CTC GGT GAG AC Amorce anti-sens SEQ ID N°8 : CCG TAT GCC TTG GTT ATC TC Les séquences SEQ ID N°9 et SEQ ID N°10 sont spécifiques du marqueur moléculaire OPN20 et ont pour séquences : Amorce sens SEQ ID N°9 : ATA GGT TCC TGG CAG AGA TG Amorce anti-sens SEQ ID N°10 : ATA GCA GTC AGA AAC CGC TC Les séquences SEQ ID N°11 et SEQ ID N°12 sont spécifiques du marqueur moléculaire OPH15 et ont pour séquences : Amorce sens SEQ ID N°11 : TCT GTA AAT CCT TTC CAC CC Amorce anti-sens SEQ ID N°12 : AAA AAA GCA CCC GAG AAT CT Plus de détails concernant les séquences SEQ ID N°l à 12 sus-mentionnées sont donnés ci-dessous dans les exemples.

De manière préférentielle la plante Brassica telle que définie ci-dessus est choisie panai les Brassica napus, oleracea et rapa. De manière très préférentielle, on choisit une plante Brassica napus ou Brassica oleracea, et de manière encore plus préférentielle, on choisit une plante Brassica napus. Par ailleurs, la présente invention concerne également les graines issues de la plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique telle que définie ci-dessus. Ces graines présentent de préférence un taux de glucosinolates inférieur ou égal à 25 !mol par gramme de graines à 9% d'humidité dans les graines, de préférence de préférence situé entre 10 et 16 mol par grammes de graines, et renferment dans leur génome au moins le gène Rf restaurateur. De plus, ces graines présentent également un taux d'acide érucique inférieur ou égal à 2% des acides gras totaux contenus dans la graine, de préférence inférieur ou égal à 0,5% et plus préférentiellement encore à 0,1%. Ces taux d'acide érucique peuvent être obtenus par des analyses de spectroscopie proche infra-rouge.

Ces graines ont une forte valeur commerciale.

L'invention porte également sur la descendance de la plante Brassica, de préférence Brassica napus ou oleracea ou rapa, telle que définie ci-dessus. La descendance couvre les graines, les semences, les plantes et toute partie de plantes.

La présente invention concerne également une plante Brassica napus à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique issue d'une graine déposée sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646 dont le génome comporte un fragment d'ADN issu d'un évènement de recombinaison contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que son génome ne présente pas d'allèle radis du marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2. De préférence, la présente plante Brassica napus restauratrice à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique est caractérisée en ce que son génome ne présente pas le marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué, d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et, d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2. Sa descendance, qui est également un objet de l'invention, présente également les critères de faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique selon l'invention et restaurateur en fonction de la ségrégation génotypique et phénotypique.

Dans une variante de réalisation, la présente invention concerne une plante Brassica napus à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique issue d'une graine déposée sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646 dont le génome comporte un fragment d'ADN issu d'un évènement de recombinaison contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que : ^ ledit génome de la plante ne présente pas d'allèle radis du marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2, et ^ ledit génome de la plante présente l'allèle Brassica napus du marqueur OPY 17 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°3 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°3, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°4 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°4.

De préférence, la présente plante Brassica napus restauratrice à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique est caractérisée en ce que son génome ne présente pas le marqueur E33M47 (allèle radis non amplifié) défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué, d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et, d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et en ce que son génome présente le marqueur OPY 17 (allèle brassica napus amplifié) défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué, d'une part, par SEQ ID N°3 et, d'autre part, par SEQ ID N°4.

Sa descendance, qui est également un objet de l'invention, présente également les critères de faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ainsi que le caractère restaurateur en fonction de la ségrégation génotypique et phénotypique.

Le fait que le colza (Brassica napus) soit une espèce allogame, la production d'hybrides de colza nécessite des systèmes de contrôle tels que les sytèmes Ogura, Kosena...et l'obtention de cette lignée Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique, restauratrice de la fertilité mâle dans le système Ogura est particulièrement intéressante car elle offre la possibilité de développer de façon contrôlée et orientée de nombreux hybrides restaurés à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique. Cette lignée Rf consiste alors en un outil précieux pour la réalisation de nouvelles plantes dont les qualités agronomiques et génétiques sont améliorées (hétérosis, homéostasie, résistances à divers pathogènes).

Les plantes selon la présente invention peuvent également être caractérisées avec des marqueurs moléculaires autres que E33M47. Ces marqueurs sont par exemple, OPC2, OPF10, OPN20, OPY17 et OPH15 et sont définis par les amorces données ci-dessus ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs des séquences respectivement données ci-dessus (SEQ ID N°3 à 12). Les plantes selon l'invention, d'une part, ne présentent systématiquement pas de marquage avec E33M47 (pas d'allèle radis ou brassica amplifié, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea) et d'autre part, ont par exemple un marquage avec au moins un des marqueurs suivants : OPY17 (un allèle Brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea) , OPC2 (un allèle radis), OPF10 (un allèle radis), - OPN20 (un allèle Brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea), OPH15 (un allèle radis) Les résultats de ces marquages sont donnés dans les exemples, en particulier dans l'exemple 4 ci-dessous.

Un autre objet de la présente invention concerne un procédé d'obtention d'une plante Brassica telle que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Mettre en oeuvre une plante mâle Brassica napus issue d'une graine déposée sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646, et comportant un fragment de génome de radis comportant le gène de fertilité Rf, et de préférence comportant un cytoplasme CMS Ogura, b) Mettre en oeuvre une plante femelle récurrente Brassica CMS Ogura ne présentant pas ledit fragment de génome de radis, c) Croiser les plantes de l'étape a) avec les plantes de l'étape b), d) Obtenir des plantes hybrides, e) Réaliser des rétrocroisements avec la plante de l'étape b) pour obtenir l'introgression du fragment d'ADN de radis comportant le gène Rf présent dans le génome des graines de plante Brassica napus déposées sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646, dans le génome de ladite plante récurrente. f) Sélectionner les plantes fertiles. g) Croiser entre elles les plantes de l'étape f) pour obtenir des plantes homozygotes.

La femelle de l'étape b) peut être une femelle Brassica napus. De préférence il s'agit d'une femelle d'une plante d'une autre variété que la plante issue de la graine déposée dans la collection sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646 ou d'une Brassica d'une autre espèce que Brassica napus, telle que Brassica oleracea. Une sélection des plantes fertiles peut être faite à l'issue de l'étape d) et l'étape f). Elle se fait grâce à des critères morphologiques, comme la présence de fleurs. Une telle sélection 35 est bien connue de l'homme du métier. Les rétrocroisements effectués visent à accroître le pourcentage de génome de la plante récurrente femelle et ainsi diminuer la quantité du génome de Brassica napus dans la plante obtenue à l'issue des croisements.

Le nombre de rétrocroisements effectués est répété autant de fois pour obtenir un pourcentage d'au moins 80% du génome de la plante femelle utilisée dans le croisement, de préférence au moins 98%. Ces pratiques sont largement connues de l'homme du métier. En l'occurrence, de préférence la plante femelle récurrente est une plante Brassica oleracea. A chaque génération lors des rétrocroisements, il convient de vérifier la présence ou l'absence du gène de fertilité R Ceci se fait grâce à des marqueurs visuels, morphologiques comme la présence de fleurs fertiles ou à l'aide des marqueurs moléculaires tels que définis dans la présente demande.

Le procédé décrit ci-dessus peut comprendre une étape supplémentaire dans l'étape e). Il est caractérisé en ce que l'étape e) comprend une étape supplémentaire e') de mise en oeuvre du marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2 et de sélection des plantes ne comprenant pas ce marqueur E33M47.

La présente invention couvre les plantes Brassica obtenues à l'issue de l'un ou l'autre des procédés décrits ci-dessus.

Ainsi, un autre objet de l'invention concerne une plante hybride à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique comprenant un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par croisement entre une plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique, de préférence Brassica napus, oleracea et rapa, de préférence Brassica napus, ou une plante Brassica issue de la graine déposée NCIMB 41646 telles que définies précédemment en tant que parent mâle et une autre plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ayant une stérilité mâle cytoplasmique (CMS Ogura) en tant que parent femelle.

Un autre objet de l'invention porte sur les graines hybrides issues de la plante hybride telle que définie ci-dessus ainsi que la descendance de ladite plante hybride.

Dans les plantes selon l'invention, outre les taux améliorés d'acide érucique et de glucosinolate, d'autres caractères agronomiques très intéressants ont pu être décelés. En effet, différents caractères agronomiques, tels que la longueur des siliques, le nombre de siliques par ampe ou par plantes, le nombre de graines par siliques ont été mesurés et il s'avère que ces plantes selon l'invention donnent des résultats agronomiques nettement accrus par rapport aux données sur les plantes de l'art antérieur. Ainsi, le fragment d'introgression présent dans les plantes selon l'invention aurait un effet sur le comportement agronomique desdites plantes. Cet effet a pu être observé par comparaison de la lignée Rf selon l'invention avec d'autres lignées de référence connues telles que Billy (variété conventionnelle non restauratrice du système CMS Ogura, commercialisée et inscrite par la société DSV) ou la lignée R2864-BSD (variété restauratrice du système CMS Ogura, commercialisée et inscrite par Limagrain). Différents tests statistiques (Anova) ont été mis en oeuvre suivant les critères testés (nombre de siliques par ampe, nombre de graines...) et ont permis de quantifier les différences phénotypiques des plantes de la lignée Rf et de déterminer l'origine de ces qualités.

Ainsi, un nouvel objet de la présente demande concerne une plante Brassica, de préférence Brassica napus, oleracea et rapa, éventuellement obtenue à partir de la graine déposée NCIMB 41646, dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, présentant des qualités agronomiques accrues, caractérisée en ce qu'elle répond à au moins l'un des critères agronomiques suivants : • le nombre de graines produites par plante est augmenté d'au moins 25%, de préférence 30% par rapport à la plante de référence Billy produite dans des conditions données, ^ le nombre de siliques par ampe est augmenté d'au moins 8%, de préférence 10% par rapport à la plante de référence Billy produite dans des conditions données, ^ la longueur des siliques est augmentée d'au moins 10%, de préférence 12% par rapport à la plante de référence Billy produite dans des conditions données.

Par comparaison avec d'autres lignées restauratrices, il a été observé en outre que le taux de glucosinolates contenu dans les graines desdites plantes Brassica selon l'invention telles que définies ci-dessus et dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour le système CMS Ogura, est de préférence diminué d'au moins 20%, de préférence 30% par rapport aux graines des plantes Brassica issues d'une autre lignée restauratrice telle que la lignée restauratrice R2864-BSD. Ceci est également le cas dans les graines des plantes Brassica napus selon l'invention et les graines éventuellement obtenue à partir de la graine déposée NCIMB 41646, et dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour le système CMS Ogura.

Les tests Anova d'analyse de variance comparant les lignées R7631 et R2864-BSD en autopollinisation ont montré que la production de siliques par ampe, la longueur de siliques (avec ou sans leur extrémité) et le nombre de graines produites par silique est lié au nouveau fragment d'ADN, issu d'évènement de recombinaison original, présent dans la lignée Rf ou R7631 selon l'invention.

Selon un autre mode de réalisation, l'invention porte sur une plante Brassica hybride telle que définie ci-dessus, dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, présentant des qualités agronomiques accrues, caractérisée en ce qu'elle répond à au moins l'un des critères agronomiques suivants : ^ le nombre de graines produites par silique est augmenté d'au moins 7%, de préférence au moins 8%, plus préférentiellement entre 8% et 15% par rapport à la plante de référence hybride R2864-BSD produite dans des conditions données, ^ le nombre de siliques par ampe est augmenté d'au moins 10% de préférence 20% par rapport à la plante de référence hybride R2864-BSD produite dans des conditions données, ^ la longueur des siliques est augmentée d'au moins 2%, de préférence 10% par 20 rapport à la plante de référence hybride R2864-BSD produite dans des conditions données.

L'hybride de référence utilisé est un hybride restaurateur qui est soit un hybride entre R2864-BSD en tant que parent mâle et FBHC215 en tant que parent femelle, soit un 25 hybride entre R2864-BSD (mâle) et F02228 (femelle). Les données agronomiques obtenues avec les hybrides selon l'invention montrent que les valeurs concernant le nombre de graines produites par siliques, le nombre de siliques par ampe et la longueur des siliques sont toujours supérieures à celles de l'hybride de référence, démontrant les bonnes qualités agronomiques d'une plante hybride selon l'invention. 30 De même, des tests Anova d'analyse de variance ont montré que les qualités agronomiques des plantes hybrides étaient largement accrues lorsque le parent mâle de l'hybride est une plante restauratrice Rf selon l'invention. Ceci corrobore la thèse selon laquelle le fragment d'introgression de la lignée Rf selon l'invention est responsable directement de 35 l'amélioration des qualités agronomiques desdites plantes.

Un autre objet de la présente invention concerne un procédé de production de plantes hybrides telles que définies ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mettre en oeuvre une plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique, de préférence Brassica napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement Brassica napus, éventuellement obtenue à partir de la graine déposée NCIMB 41646, dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura telle que définie ci-dessus, et reproduite pour être homozygote, ladite plante étant utilisée en tant que pollinisatrice, b) mettre en oeuvre une plante Brassica CMS du système Ogura à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique issue d'une lignée ou variété donnée, en tant que plante femelle, c) effectuer un croisement entre la plante de l'étape a) et la plante de l'étape b), pour obtenir une plante hybride, d) récolter les graines hybrides à partir de la plante obtenue à l'issue de l'étape c).

Pour obtenir une plante homozygote selon l'étape a), l'autofécondation est répétée entre 6 20 et 10 générations. Le croisement de la plante issue de l'étape a) et la plante de l'étape b) est réalisé de façon classique.

Enfin, un dernier objet de l'invention couvre l'utilisation des plantes telles que définies ci- 25 dessus, qu'il s'agisse des plantes Brassica Rf à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ou des hybrides Rf à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ou des plantes produites selon le procédé tel que défini ci-dessus pour des applications alimentaires. En effet, comme mentionné ci-dessus, les plantes de colza Brassica ont un intérêt dans la production d'huile qui est recherchée pour ses applications alimentaires 30 mais également industrielles, notamment dans l'automobile. Les plantes selon la présente invention permettent aussi la production de tourteaux qui est une source de protéines intéressante en alimentation animale (gros bétail, porcins et volaille). Les taux d'acide érucique et de glucosinolates sont particulièrement importants et réglementés dans la commercialisation des produits issus de ces plantes car ils peuvent avoir des conséquences 35 sanitaires et médicales importantes.

Les exemples qui suivent permettront de mieux comprendre la présente invention et d'appréhender tous ses avantages. 10 1.5 EXEMPLES :

Les plantes restauratrices selon l'invention désignée par R7631 sont issues d'un croisement entre F50731 et Zénith. Il a été possible d'établir une lignée de plantes restauratrices selon l'invention grâce à la mise en oeuvre d'un programme ambitieux de sélection de mâles restaurateurs avec plus de 200 croisements par an avec 50 lignées par croisement. La lignée de plantes restauratrices selon l'invention a été obtenue après 7 ans de sélection essentiellement centrée sur l'obtention d'une introgression radis plus courte et le maintien d'un haut niveau de qualité agronomique (faible taux de glucosinolates et d'acide érucique, bonne composante de rendement, haute teneur en huile et bon niveau de résistance aux maladies).

Exemple 1 : Culture des plantes selon l'invention

Les plantes selon la présente invention ainsi que toutes plantes utilisées comme comparatifs (R2864-BSD, Billy, Ladoga ou toute autre plante) ayant été étudiées quant à leurs données agronomiques ont été cultivées dans les conditions expérimentales suivantes : -La parcelle sur laquelle ont été semées les lignées de colza a un précédent blé. -La parcelle a été labourée et hersée avec une herse rotative. -Les lignées exemplifiées ont été semées au semoir classique avec une densité de 55 grains au m2. -Un désherbage a été effectué au NOVALL -Au printemps, un apport azoté sous forme d'engrais chimique a été effectué en 2 fois pour un total de 160 unités à l'hectare. -Un insecticide contre les Meligethes a été appliqué avant floraison (MAVRIK FLO ) puis un fongicide contre le sclerotinia.

Exemple 2 : Qualités agronomiques de la lignée Rf selon l'invention (R7631)

Afin de déterminer les différentes qualités agronomiques de la lignée Rf (R7631) selon 35 l'invention, différentes mesures ont été pratiquées.

La mesure de la teneur en huile et en glucosinolates a été réalisée par spectrométrie dans le proche infra-rouge avec les matériels et conditions suivants: 20 .appareil NIR Marque FOSS 5000 .Logiciel WinISI II .Température de mesure : 22°C Le tableau 1 ci-dessous recense, en fonction des génotypes des plantes testées ; les données mesurées concernant le taux de glucosinolates dans les graines, le taux d'huile dans la plante, selon l'invention ou dans une autre lignée restauratrice (R2864-BSD) ou une lignée non restauratrice de référence (Billy).

Echantillon Génotype de la Taux moyen Taux de plante testée d'huile par plante glucosinolates en pourcentage ( Mol/g) par g de (% de matière graine sèche) 1 Lignée selon 45,2 11,2 l'invention 2 Lignée selon 47,3 15,8 l'invention 3 Lignée selon 45,3 10,6 l'invention 4 Lignée selon 47,7 13,5 l'invention 5 Lignée 45,0 17,2 restauratrice R2864-BSD 6 Lignée 47,1 20,8 restauratrice R2864-BSD 7 Lignée Billy 49,9 13,9 8 Lignée Ladoga 47,6 14,2 Tableau 1 Ces données montrent que les plantes selon l'invention ont une bonne production oléagineuse et que le taux de glucosinolates contenu dans les graines des plantes selon l'invention est non seulement en conformité avec les taux fixés par le décret 2294/92 mais également nettement inférieur (au moins de 20%) au taux contenu dans la lignée R2864-BSD. Ces données illustrent les qualités agronomiques accrues de la lignée Rf selon l'invention qui s'approchent de celles obtenues avec une lignée non affectée par une introgression, telle que Billy. 21 Exemple 3 : Données agronomiques et tests statistiques Anova 1) Données agronomiques et tests statistiques Anova entre R7631 (invention) et R2864-BSD Nombre de siliques par ampe lignée individus Nombre de siliques par ampe R7631(lignée selon l'invention) 1 64 R7631(lignée selon l'invention) 2 65 R7631(lignée selon l'invention) 3 56 R7631(lignée selon l'invention) 4 59 R7631(lignée selon l'invention) 5 57 R7631(lignée selon l'invention) 6 44 R7631(lignée selon l'invention) 7 46 R7631(lignée selon l'invention) 8 65 R763 1(lignée selon l'invention) 9 57 R7631(lignée selon l'invention) 10 56 R2864-BSD 1 53 R2864-BSD 2 33 R2864-BSD 3 34 R2864-BSD 4 34 R2864-BSD 5 37 R2864-BSD 6 50 R2864-BSD 7 52 R2864-BSD 8 45 R2864-BSD 9 50 R2864-BSD 10 51 Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) lignée 1 845.00 845.00 13.705 0.001631 Résidus 18 1109.80 61.66

Où Df=nbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les 2 lignées pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%.

Il existe donc bien une différence significative entre le nombre de silique par ampe de R7631 et celui de R2864-BSD : R7631 produit plus de siliques par ampe. Nombre d'avortement lignée individus Nombre d'avortement R7631(lignée selon l'invention) 1 22 R7631(lignée selon l'invention) 2 25 R7631(lignée selon l'invention) 3 17 R7631(lignée selon l'invention) 4 19 R7631(lignée selon l'invention) 5 41 R7631(lignée selon l'invention) 6 32 R7631(lignée selon l'invention) 7 26 R7631(lignée selon l'invention) 8 25 R7631(lignée selon l'invention) 9 27 R7631(lignée selon l'invention) 10 17 R2864-BSD 1 28 R2864-BSD 2 36 R2864-BSD 3 32 R2864-BSD 4 25 R2864-BSD 5 27 R2864-BSD 6 20 R2864-BSD 7 25 R2864-BSD 8 30 R2864-BSD 9 22 R2864-BSD 10 21 Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) 10 lignée 1 11.25 11.25 0.2831 0.6012 Résidus 18 715.30 39.74

Où Df=nbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire 15 Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les 2 lignées pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%. Au-delà du risque de 5%, on estime qu'il n'y a pas de différences significatives entre R7631 et R2864-BSD quant au nombre d'avortement.5 Longueur des siliques sans l'extrémité Lignée individus Longueur des siliques sans l'extrémité (en cm) R7631(lignée selon l'invention) 1 5,85 R7631(lignée selon l'invention) 2 5,87 R7631(lignée selon l'invention) 3 5,735 R7631(lignée selon l'invention) 4 6,335 R7631(lignée selon l'invention) 5 5,97 R7631(lignée selon l'invention) 6 6 R7631(lignée selon l'invention) 7 6,04 R7631(lignée selon l'invention) 8 6,035 R7631(lignée selon l'invention) 9 6,505 R7631(lignée selon l'invention) 10 6,02 R2864-BSD 1 4,145 R2864-BSD 2 4,605 R2864-BSD 3 4,21 R2864-BSD 4 3,29 R2864-BSD 5 3,75 R2864-BSD 6 4,17 R2864-BSD 7 3,935 R2864-BSD 8 4,415 R2864-BSD 9 3,88 R2864-BSD 10 4,545 Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) lignée 1 18.8471 18.8471 179.19 8.52e-11 Résidus 18 1.8933 0.1052 Où Df=nbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les 2 lignées pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%. Il existe donc bien une différence significative entre la longueur des siliques sans l'extrémité de R7631 et celles de R2864-BSD : R7631 produit des siliques dont la longueur sans l'extrémité est plus importante. 24 Longueur des siliques avec leur extrémité lignée individus Longueur des siliques avec l'extrémité (en cm) R7631(lignée selon l'invention) 1 7,115 R7631(lignée selon l'invention) 2 7,305 R7631(lignée selon l'invention) 3 6,93 R7631(lignée selon l'invention) 4 7,525 R7631(lignée selon l'invention) 5 7,18 R7631(lignée selon l'invention) 6 7,125 R7631(lignée selon l'invention) 7 7,18 R7631(lignée selon l'invention) 8 7,23 R7631(lignée selon l'invention) 9 7,69 R7631(lignée selon l'invention) 10 7,065 R2864-BSD 1 5,135 R2864-BSD 2 5,66 R2864-BSD 3 5,205 R2864-BSD 4 4,235 R2864-BSD 5 4,77 R2864-BSD 6 5,165 R2864-BSD 7 4,915 R2864-BSD 8 5,42 R2864-BSD 9 4,88 R2864-BSD 10 5,65 Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) lignée 1 22.7058 22.7058 192.32 4.756e-11 Résidus 18 2.1251 0.1181 Où Df=nbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les 2 lignées pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%.

I1 existe donc bien une différence significative entre la longueur des siliques avec leur extrémité de R7631 et celles de R2864-BSD : R7631 produit des siliques dont la longueur avec leur extrémité est plus importante. 25 Nombre de graines lignée individus Nombre de graines R7631(lignée selon l'invention) 1 15,9 R7631(lignée selon l'invention) 2 18,1 R7631(lignée selon l'invention) 3 18 R7631(lignée selon l'invention) 4 23,4 R7631(lignée selon l'invention) 5 17,75 R7631(lignée selon l'invention) 6 20,2 R7631(lignée selon l'invention) 7 19,8 R7631(lignée selon l'invention) 8 22,95 R7631(lignée selon l'invention) 9 21,95 R7631(lignée selon l'invention) 10 20,05 R2864-BSD 1 11,95 R2864-BSD 2 15,55 R2864-BSD 3 13,3 R2864-BSD 4 8,75 R2864-BSD 5 10,3 R2864-BSD 6 13,85 R2864-BSD 7 10,45 R2864-BSD 8 14,5 R2864-BSD 9 11,35 R2864-BSD 10 14,15 Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) lignée 1 273.430 273.430 51.048 1.179e-06 Résidus 18 96.414 5.356 Où Df=nbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les 2 lignées pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%. Il existe donc bien une différence significative entre le nombre de graines produites par plante R7631 et celui de R2864-BSD : R7631 produit un nombre plus important de graines.

L'ensemble de ces données illustrent les qualités agronomiques accrues des plantes de la lignée R76031 par rapport aux plantes de la lignée R2864-BSD. 26 2) Données agronomiques comparatives entre R7631 (invention) et Billy (plante de référence) Le tableau 2 recense les résultats des données agronomiques testées sur les plantes R7631 5 selon l'invention et sur les plantes de référence Billy. lignée individus Nombre Nombre Longueur Longueur Nombre de d'avortement des des de siliques siliques siliques graines par sans leur avec leur ampe extrémité extrémité R7631 1 64 22 5,85 7,115 15,9 (lignée selon l'invention) R7631 2 65 25 5,87 7,305 18,1 (lignée selon l'invention) R7631 3 56 17 5,735 6,93 18 (lignée selon l'invention) R7631 4 59 19 6,335 7,525 23,4 (lignée selon l'invention) R7631 5 57 41 5,97 7,18 17,75 (lignée selon l'invention) R7631 6 44 32 6 7,125 20,2 (lignée selon l'invention) R7631 7 46 26 6,04 7,18 19,8 (lignée selon l'invention) R7631 8 65 25 6,035 7,23 22,95 (lignée selon l'invention) R7631 9 57 27 6,505 7,69 21,95 (lignée selon l'invention) R7631 10 56 17 6,02 7,065 20,05 (lignée selon l'invention) Billy 1 38 24 4,405 5,67 18,2 Billy 2 47 21 4,85 5,975 13 Billy 3 49 18 _ 6,415 12,5 5,155 Billy 4 43 33 5,37 6,715 12,55 Billy 5 41 20 5,33 6,495 12,45 Billy 6 46 22 5,33 6,75 14,15 Billy 7 48 32 5,245 6,235 19,5 Billy 8 56 31 5,205 6,49 14,35 Billy 9 55 24 6,28 7,46 19,55 Billy 10 41 16 4,895 6,145 14,55 Tableau 2 Les résultats illustrent le fait que R7631 possèdent des qualités agronomiques accrues par rapport à Billy. En effet, le nombre de siliques moyen par ampe est augmenté d'environ 22% chez R7631, la longueur des siliques sans leur extrémité est augmentée d'environ 16% chez R7631, la longueur des siliques avec leur extrémité est augmentée d'environ 12% et le nombre de graines produites par plantes est augmenté d'environ 31%. Toutes ces données témoignent d'une amélioration des qualités agronomiques de R7631 selon l'invention par rapport à une lignée de référence qu'est Billy.

3) Données agronomiques et tests statistiques Anova sur les hybrides

Le tableau 3 ci-dessous recense les résultats des données agronomiques testées sur les hybrides selon l'invention. Ceci permet également de voir l'impact du mâle et/ou de la femelle sur les qualités agronomiques. Femelle Mâle Hybrides Nombre Longueur Nombre moyen moyenne moyen de silique des siliques de graines par hybride par siliques X R2864-BSD 1 58,4 42,7 16,92 X R7631(lignée selon l'invention) 2 70,6 47,2 19,55 Y R2864-BSD 3 57,2 42,76 17,35 Y R7631(lignée selon l'invention) 4 63,9 44 18,72 Tableau 3 Ces résultats illustrent que lorsque le pollinisateur est une plante selon l'invention (R7631) et que la plante femelle est de type X ou Y, les données agronomiques des hybrides (2 et 4) 20 sont meilleures que lorsque le pollinisateur est R2864-BSD sur les même femelles. L'effet agronomique est manifestement du au mâle parent de l'hybride.

Ces résultats sont renforcés par les analyses des tests statistiques ci-après : 25 Nombre de siliques par ampe femelle 1 444.1 444.1 2.4783 0.12213 male 1 1150.1 1150.1 6.4182 0.01469 * Résidus 47 179.2 8421.9 15 Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) 30 Où Dfùnbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les males et les femelles pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%.

Il existe donc bien une différence significative sur le nombre de silique par ampe et ceci est lié au mâle restaurateur testé selon l'invention (résultats agronomiques meilleurs) et non à la femelle.

Longueur des siliques

Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) femelle 1 71.25 71.25 2.7171 0.10595 male 1 119.68 119.68 4.5640 0.03789 * Residus 47 1232.45 26.22 Où Dnbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les males et les femelles pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%.

Il existe donc bien une différence significative sur la longueur des siliques et ceci est lié au mâle restaurateur testé.

Nombre de graines Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) 30

Où Df=nbre de degré de liberté Sum Sq=Somme des carré des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire Mean Sq=Moyenne des carrés des écarts à la valeur prédite par le modèle linéaire 35 F value et Pr(>F)= probabilité que les moyennes obtenues chez les males et les femelles pour la variable calculée ne soient pas différentes au risque alpha de 5%. femelle 1 6.25 6.25 0.6834 0.41261 male 1 54.50 54.50 5.9597 0.01846 * Résidus 47 429.84 9.15 Il existe donc bien une différence significative sur le nombre de graines produites par siliques et ceci est lié au mâle restaurateur testé.

Exemple 4 : Marquages moléculaires sur la lignée Rf selon l'invention (R7631) Afin de caractériser au mieux le fragment d'introgression selon l'invention et la lignée restauratrice Rf portant ce fragment d'introgression, des analyses de marqueurs moléculaires connus ont été effectuées. Ces marquages ont été comparés aux marquages obtenus sur les lignées restauratrices connues de l'art antérieur. Ces marquages ont été réalisé à l'aide d'amorces spécifiques telles que SEQ ID N°1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, Il et/ou 12. Pour tester la présence ou non des marqueurs spécifiques, une extraction de l'ADN est nécessaire et se déroule comme suit : Pour chaque échantillon de plantes testé, l'ADN a été extrait à partir de tissu broyés à l'azote liquide en utilisant un protocole d'extraction au CTAB suivant le protocole donné dans Doyle and Doyle, 1990 (Doyle and Doyle, 1990, Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus, vol 12 pp13-15). Les amorces ou primers des marqueurs SCAR corespondants au SEQ ID N°1 + SEQ ID N°2, SEQ ID N°3+ SEQ ID N°4, SEQ ID N°5+ SEQ ID N°6, SEQ ID N°7+ SEQ ID N°8, SEQ ID N°9+ SEQ ID N°10 et/ou SEQ ID N°11+ SEQ ID N°12 ont été ajoutées au mix d'amplification à la concentration de 5pmol chacun. La composition du mix de réaction PCR est standard en utilisant la Taq Platinum d'INVITROGEN . Les conditions d'amplification sont les suivantes : 5 minutes de dénaturation à 94°C, suivi de 35 cycles de 30 secondes à 94°C, secondes à 57°C, 30 secondes à 72°C. Les produits d'amplification ont été séparés sur un gel d'agarose à 2%.

30 Le tableau 4 ci-dessous récapitule les résultats obtenus sur les lignées selon l'invention et sur d'autres lignées restauratrices (R2864-BSD, GAMIN, NK KARIBI, R2000) ou sur des lignées non restauratrices de référence (Billy ou Ladoga).35 Marqueur E33M47 OPC2 OPF10 OPN20 OPY17 OPH15 Sample Name Allèle 1 Allèle 2 Allèle allele 1 allele allele 2 allele 1 allele 2 allele 1 allele 2 allele 1 2 1 RF du RF du RF RF du RF Rf de Rf de RF du RF du Rf de RF du radis radis du radis du Brassica Brassica radis radis Brassica radis radis radis R2864-BSD 135 671 769 273 630 305 604 GAMIN 135 677 671 769 273 630 305 604 NK 135 677 671 769 273 630 305 604 KARIBIC R2000 135 671 769 273 630 305 R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention R7631 671 769 273 885 (lignée selon l'invention WT (Billy, 87 787 273 885 Ladoga) Tableau 4 Il apparait nettement que les lignées restauratrices selon l'invention ne présentent pas de marquage avec E33M47. En effet, aucune amplification avec les amorces SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2 n'a été obtenu en PCR, ceci signifie que la lignée selon l'invention a une région de radis délétée par rapport aux autres lignées restauratrices testées. La lignée selon l'invention présente un marquage avec OPY17 (885 paires de base) correspondant à une bande amplifiée de l'allèle Brassica napus du gène Rf et une amplification uniquement de l'allèle Brassica napus avec le marqueur OPN 20 défini par les amorces SEQ ID N°9 et SEQID N°10, l'allèle radis avec ce marqueur n'étant pas amplifié dans la lignée selon l'invention alors qu'il l'est dans les lignées restauratrices testées de l'art antérieur. Les lignées restauratrices de l'invention présentent les marqueurs OPC2 et OPF10 correspondant à un fragment amplifié de l'allèle radis associé à la fertilité. Ces caractéristiques illustrent bien le fait que la lignée selon l'invention a un profil génétique original et différent des autres lignées testées. Aucunes des plantes testées ne présente un marquage similaire à celui des plantes selon l'invention. Ceci prouve que les plantes selon l'invention contiennent un évènement de recombinaison différent et nouveau.

Claims (15)

1. REVENDICATIONS1- Plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que ledit génome ne présente pas le marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2.
2. 2- Plante Brassica selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit génome de la plante présente en outre l'allèle Brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea, du marqueur OPY 17 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°3 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°3, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°4 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°4.
3. 3- Plante Brassica selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit génome de la plante présente au moins un marqueur parmi les marqueurs suivants : un allèle radis du marqueur OPC 12 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°5 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°5, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°6 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°6, un allèle radis du marqueur OPF10 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°7 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°7, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°8 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°8, sans allèle Brassica dudit marqueur OPF 10 tel que défini ci-dessus, un allèle brassica, de préférence napus, oleracea ou rapa, plus préférentiellement napus ou oleracea, du marqueur OPN20 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°9 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°9, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°10 et/ou au moins une séquencecomprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°10, sans allèle radis dudit marqueur OPN 20 tel que défini ci-dessus.
4. 4- Plante Brassica selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que 5 la plante est une Brassica napus, une Brassica oleracea ou une Brassica rapa, de préférence une Brassica napus.
5. 5- Graine issue de la plante telle que définie dans l'une des revendications précédentes. 10
6. 6- Plante Brassica napus à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique issue d'une graine déposée sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646, dont le génome comporte un évènement de recombinaison contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce que ledit 15 génome ne présente pas d'allèle radis du marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2. 20
7. 7- Plante hybride restauratrice à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique comprenant un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité mâle cytoplasmique Ogura, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par croisement entre une plante telle que définie dans l'une des revendications 1 à 4 ou 6 en 25 tant que parent mâle et une autre plante Brassica à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique ayant une stérilité mâle cytoplasmique (CMS Ogura) en tant que parent femelle.
8. 8- Graine hybride issue de la plante telle que définie dans la revendication 7. 30
9. 9- Descendance de la plante telle que définie dans l'une des revendications 1 à 4, 6 et 7.
10. 10- Plante selon l'une des revendications 1 à 4 ou 6, dont le génome comprend un fragment d'ADN contenant le gène Rf de restauration de la fertilité mâle pour la stérilité 35 mâle cytoplasmique Ogura, présentant des qualités agronomiques accrues, caractérisée en ce qu'elle répond à au moins l'un des critères agronomiques suivants :^ le nombre de graines produites par silique est augmenté d'au moins 25%, de préférence 30% par rapport à la plante de référence Billy produite dans des conditions données, ^ le nombre de siliques par ampe est augmenté d'au moins 8%, de préférence 10% par rapport à la plante de référence Billy produite dans des conditions données, ^ la longueur des siliques est augmentée d'au moins 10%, de préférence 12% par rapport à la plante de référence Billy produite dans des conditions données.
11. 11- Procédé d'obtention d'une plante Brassica telle que défini dans l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Mettre en oeuvre une plante mâle Brassica napus issue d'une graine déposée sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646, et comportant un fragment de génome de radis comportant le gène de fertilité Rf, et de préférence comportant un cytoplasme CMS Ogura, b) Mettre en oeuvre une plante femelle récurrente Brassica CMS Ogura ne présentant pas ledit fragment de génome de radis, c) Croiser les plantes de l'étape a) avec les plantes de l'étape b), d) Obtenir des plantes hybrides, e) Réaliser des rétrocroisements avec la plante de l'étape b) pour obtenir l'introgression du fragment d'ADN de radis comportant le gène Rf présent dans le génome des graines de plante Brassica napus déposées sous la dénomination Brassica napus NCIMB 41646, dans le génome de ladite plante récurrente, f) Sélectionner les plantes fertiles, g) Croiser entre elles les plantes de l'étape f) pour obtenir des plantes homozygotes.
12. 12- Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que l'étape e) comprend une étape supplémentaire e') de mise en oeuvre du marqueur E33M47 défini par le couple d'amorces nucléotidiques constitué d'une part, par la séquence SEQ ID N°1 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°1, et d'autre part, par la séquence SEQ ID N°2 et/ou au moins une séquence comprenant au moins 12 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID N°2 et de sélection des plantes ne comprenant pas ce marqueur E33M47.
13. 13- Plante Brassica obtenue selon le procédé tel que défini dans l'une des revendications 11 ou 12.
14. 14- Procédé de production de plante telle que définie dans la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mettre en oeuvre une plante telle que définie dans l'une des revendications 1 à 4 ou la revendication 6, et reproduite pour être homozygote, ladite plante étant utilisée en tant que pollinisatrice, b) mettre en oeuvre une plante Brassica CMS Ogura à faibles taux de glucosinolates et d'acide érucique issue d'une lignée ou variété donnée, en tant que plante femelle, c) effectuer un croisement entre la plante de l'étape a) et la plante de l'étape b), pour obtenir une plante hybride, d) récolter les graines hybrides à partir de la plante obtenue à l'issue de l'étape c).
15. 15- Utilisation des plantes telles que définies dans l'une des revendications 1 à 4, 6, 7, 10, 13 ou produites selon le procédé tel que défini dans l'une des revendications 11 ou 12, pour des applications alimentaires, de préférence la production d'huile et/ou la production 20 de tourteaux.