CZ288935B6

CZ288935B6 - Piperazindionové deriváty, farmaceutický nebo veterinární přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití

Info

Publication number: CZ288935B6
Application number: CZ19971902A
Authority: CZ
Inventors: Philip Anthony Ashworth; Sukhjit Hunjan; Ian Andrew Pretswell; Hamish Ryder; Stephen James Brocchini
Original assignee: Xenova Limited
Priority date: 1994-12-23
Filing date: 1995-12-22
Publication date: 2001-09-12
Also published as: BR9510429A; GB2311780A; EP0799210A1; DE69522342T2; BG63305B1; AU4310296A; CN1176637A; PL186851B1; ES2160726T3; HK1001974A1; WO1996020180A1; FI972661A; ATE204569T1; GB2311780B; SK283385B6; NO308532B1; PL320915A1; MY131762A; IL116526A; CN1108294C

Abstract

Piperazindionov deriv ty obecn ho vzorce I, kde R.sup.1.n. je - vod k - skupina obecn ho vzorce -(NH).sub.t.n.-COR.sup.3.n., kde t=0 nebo 1 a R.sup.3.n. (i) skupina obecn ho vzorce A, kde v=0 pokud t je 1 a v=1 pokud t=0; a n=0 nebo 1 a m=0, 1, 2 nebo 3, p°i em alespo jedno n nebo m nen 0 a bu (a) R.sup.4.n. je H nebo alkyl a R.sup.5.n. je alkyl p° padn substituovan² jednou nebo dv ma fenylov²mi skupinami, fenylov skupina nebo skupiny jsou d le p° padn substituov ny; nebo (b) R.sup.4.n. a R.sup.5.n. spolu s atomem dus ku, k n mu jsou nav z ny, tvo° heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecn²ch vzorc 1, 2, 3 a 4, kde R.sup.6.n. a R.sup.7.n. jsou stejn nebo odliÜn a jsou H nebo alkoxy, nebo spolu tvo° methylendioxy skupinu; Y je O nebo -NR.sup.8.n., kde R.sup.8.n. je alkyl nebo fenyl p° padn substituovan² CF.sub.3.n.; (ii) skupina obecn ho vzorce B, kde p=1 nebo 2 a Z je C.sub.2.n.-C.sub.6.n. alkenyl nebo fenyl p° padn substituovan²; a (iii) skupina obecn ho vzorc\

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká piperazidinových derivátů sloužících jako modulátory multidrogové rezistence (MDR), způsobu jejich přípravy a farmaceutických a veterinárních přípravků je obsahující.

Dosavadní stav techniky

Rezistence nádorů vůči některým cytotoxickým léčivům je překážkou úspěšné chemoterapie pacientů trpících rakovinou. Nádor může získat rezistenci vůči cytostatiku použitému při předcházející léčbě. Nádor může rovněž manifestovat vlastní nebo zkříženou rezistenci vůči cytostatiku, které dosud nebylo k léčbě použito a není z hlediska struktury ani mechanismu účinku blízké dříve použitým cytostatikům.

Podobně i některé patogeny mohou získat rezistenci vůči léčivům, která byla použita při léčbě onemocnění nebo poruch, způsobených těmito patogeny. Patogeny mohou rovněž manifestovat vlastní nebo zkříženou rezistenci vůči léčivům, s nimiž se dosud nesetkaly. Příkladem tohoto jevu je multidrogová rezistence někteiých forem malárie, tuberkulózy, leishmaniózy a amébové dyzentérie.

Uvedené jevy bývají souhrnně označovány jako multidrogová rezistence (MDR). Jak bude podrobněji diskutováno dále, mechanismu MDR se účastní plazmatický membránový glykoprotein (P-gp), který má schopnost vázat léčivo. Některé látky, které mají schopnost modulovat MDR mohou proto rovněž usnadňovat průchod léčiva hematoencefalickou bariérou a napomáhat při léčbě AIDS a souvisejících obtíží.

Nedostatkem léčiv dosud používaných k modulaci MDR, tzv. modifíkátorů rezistence neboli RMA, je velmi častý nedostatečný farmakokinetický profil a/nebo toxicita při koncentracích nezbytných pro modulaci MDR.

Podstata vynálezu

Nyní bylo objeveno, že řada piperazindionových derivátů má účinky modulátorů multidrogové rezistence. Předkládaný vynález poskytuje piperazindionové deriváty obecného vzorce I:

(I) kde R¹ je voleno z:

-H

- skupina obecného vzorce -(NH),-COR³, kde t = 0 nebo 1 a R³ je voleno z:

(0

-1 CZ 288935 B6 kde v = 0 pokud t = 1 a v = 1 pokud t = 0; a

n = 0 nebo 1 a m = 0,1,2 nebo 2, přičemž alespoň jedno n nebo m není 0 a buď (a) R⁴ je H nebo C]-Ce alkyl a R⁵ je Ci-Ce alkyl případně substituovaný jednou nebo dvěma fenylovými skupinami, fenylová skupina nebo skupiny jsou dále případně substituovány jednou nebo dvěma Ci-C₆ alkoxy skupinami;

nebo (b) R⁴ a R³ spolu s atomem dusíku, k němuž jsou navázány, tvoří heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecných vzorců 1 až 4:

kde R⁶ a R⁷ jsou stejné nebo odlišné a jsou H nebo Ci-Ce alkoxy, nebo spolu tvoří methylendioxy skupinu; Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je Ci-C₆ alkyl nebo fenyl případně substituovaný CF₃;

(ii) —NH—(CH₂)_P—Z (B) kde p = 1 nebo 2 a Z je Ct-Cř alkenyl nebo fenyl případně substituovaný Ci-C₆ alkoxylem; a (iii)

(C) kde R⁹ je C]-C₆ alkyl, pyrimidinyl nebo fenyl případně substituovaný C]-C₆ alkoxylem; a

(F)

-2CZ 288935 B6 kde w = 1, 2 nebo 3 a L je heterocyklická skupina výše definovaného obecného vzorce 1;

- skupina obecného vzorce D:

R1O —-O-CH₂CH(0H)-CHz—n' (D) ¹ kde R¹⁰ a R¹¹ jsou stejné nebo odlišné a jsou Ci-C₆ alkyl; a

- skupinu obecného vzorce E:

kde s = 0 nebo 1 a r, stejná nebo odlišná, jsou 1, 2 nebo 3 a L je heterocyklická skupina výše definovaného obecného vzorce 1;

a R² je H nebo skupina výše definovaného obecného vzorce -COR³ za předpokladu, že jedna ze skupin R¹ a R² je H a druhá není H;

a farmaceuticky přijatelné soli definovaných sloučenin.

Alkylová skupina může být lineární nebo rozvětvená. C]-C₆ alkyl je typicky Ci-C₄ alkyl, např. methyl, ethyl, propyl, i-propyl, n-butyl, sec-butyl nebo terc-butyl. Ci-Ce alkoxy je typicky CjC₄ alkoxy, např. methoxy, ethoxy, propoxy, i-propoxy, n-butoxy, sec-butoxy nebo terc-butoxy. Kde R¹ je skupina obecného vzorce -(NH),-COR³, t může být 0, tedy R¹ je -COR³. Celé číslo v = 1 ve vzorci A. Pokud je R³ skupina obecného vzorce A, n = 1 am = 0,1,2 nebo 3, nebo n = 0 a m = 2. R⁴ a R⁵ jsou definovány jako v bodě (a), přičemž R⁴ je výhodně Ci-Ce alkyl, např. methyl. R⁵ je výhodně Ci-C₆ alkyl, např. methyl nebo ethyl, nesubstituované nebo substituované na terminálním uhlíkovém atomu jednou nebo dvěma fenylovými skupinami. Tyto fenylové skupiny mohou být substituované jednou nebo dvěma methoxy skupinami. R⁵ je např. difenylmethyl, 2,2-difenylethyl nebo 3,4-dimethoxyfenethyl. Alternativně jsou R⁴ a R⁵definovány jako v bodě (b). Pokud R⁴ a R⁵ spolu vytvářejí heterocyklický kruh (1), jsou typicky R⁶ a R⁷ stejné, výhodně H nebo methoxy, nebo spolu vytvářejí methylendioxy skupinu. Pokud R⁴a R⁵ spolu vytvářejí heterocyklický kruh (2), Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je výhodně methyl, fenyl nebo 3-trifluormethylfenyl.

Kde R³ je skupina obecného vzorce B, Z je výhodně ethenyl, prop-l-enyl nebo prop-2-enyl, nebo fenylová skupina substituovaná jednou nebo několika Cj-Có alkoxylovými skupinami, výhodně methoxy skupinou. Fenylový kruh je výhodně substituován dvěma methoxy skupinami.

Kde R³ je skupina obecného vzorce C, R⁹ je výhodně volena ze skupin methyl, ethyl, pyrimidinyl a fenyl, fenyl je monosubstituován v poloze 2, 3, nebo 4 Ci-Ce alkoxy skupinou, např. methoxy skupinou, výhodný je 4-methoxyfenyl.

Kde R¹ je skupina obecného vzorce D, R¹⁰ a R¹¹ jsou typicky stejné, výhodně methylové skupiny. Pokud je R¹ skupina obecného vzorce E a s = 0, je R¹ skupina obecného vzorce -(CH2)_r-L. Ve vzorci E jsou substituenty R⁶ a R⁷ heterocyklického kruhu typicky stejné a výhodně H nebo methoxy, nebo spolu tvoří methylendioxy skupinu.

-3CZ 288935 B6

Podle prvního provedení obecného vzorce I, kde t = 1 a v = 0, R¹ je H a R² je výše definovaná skupina -COR³, v níž R³ je skupina obecného vzorce A.

Podle druhého provedení obecného vzorce I R² je H a R¹ je výše definovaná skupina -COR³, v níž R³ je skupina obecného vzorce A, skupina obecného vzorce B, kde Z je ethenyl nebo fenyl substituovaný dvěma Ci-C6 alkoxy skupinami, nebo skupina obecného vzorce C, kde R² je methyl, pyrimidinyl nebo fenyl. Fenyl substituovaný dvěma Ci-C6 alkoxy skupinami je výhodně

3,4-dimethoxyfenyl.

V obecném vzorci A podle prvního a druhého provedení je výhodné, je-li n = 0 a m = 2, nebo η = 1 a m = 0, 1 nebo 2, a buď:

(a) R⁴ je C1-C4 alkyl a R⁵ je Ci-Ce alkyl substituovaný na koncovém atomu uhlíku dvěma nesubstituovanými fenyly nebo jedním fenylem substituovaným C]-Cé alkoxy skupinami; nebo (b) R⁴ a R⁵ vytvářejí spolu s atomem dusíku, k němuž jsou navázány, heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecného vzorce 1, kde R⁶ a R⁷ jsou současně H, nebo současně Ci-C₆ alkoxy, nebo spolu vytvářejí methylendioxy skupinu; skupin obecného vzorce 2, kde Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je methyl, fenyl nebo trifluormethylfenyl; skupin vzorce 3; a skupin vzorce 4.

Výhodně R⁴ je methyl a R⁵ difenylmethyl nebo 2-(3,4-dimethoxyfenyl)ethyl, nebo místo toho R⁴a R⁵ spolu vytvářejí heterocyklický kruh obecného vzorce 1, kde R⁶ a R⁷ jsou současně H, nebo současně OMe, nebo spolu vytvářejí methylendioxy skupinu.

Následující příklady výhodných sloučenin obecného vzorce I:

l-(4-((3Z,6Z)-6-Benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4-(2pyrimidyl)piperazin (9022) l-(4-((3Z,6Z)-6-Benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4methylpiperazin hydrochlorid (9052) l-(4-((3Z,6H)-6-Benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4-(4methoxyfenyl)piperazin hydrochlorid (9071)

N-Allyl-4-(3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9070)

N-(2-Difenylmethylmethylaminoethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9076)

N-(2-(l,2,3,4-Tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9116)

N-(3,4-Dimethoxyfenethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9117)

N-(4-(4-Fenyl-l-piperazinyl)methylfenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9104)

N-(2-(4-Methyl-l-piperazinyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9007)

N-(2-Morfolinoethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9053)

-4CZ 288935 B6

N-(2-Morfolinofenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9054)

N-(4-(2-(l,2,3,4—Tetrahydro-|3-karbolin-2-yl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9080)

N-(4-(l,2,3,4-Tetrahydro-3-karbolin-2-yl)methylfenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-

2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9096)

N-(4-(2-(4-Fenyl-l-piperazinyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo3-piperazinyliden)methylbenzamid (9103)

N-(4-(2-(l,2,3,4-Tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-

2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9065)

N-(4-(2-(4-Trifluormethylfenyl)-l-piperazinyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9049)

N-(4-(2-(4-(4-Chlorfenyl)-4-hydroxypiperidino)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methyl)benzamid (9079)

N-(4-(2-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9006)

N-(2-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4—tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9008)

N-(4-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9064) (3Z,6Z)-6-Benzyliden-3-(4-(3-dimethylamino-2-hydroxypropoxy)benzyliden-l-methyl-2,5piperazindion (9023) (3Z,6Z)-6-Benzyliden-3-(4—(2-(6,7-dimethoxy-l, 2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzyliden)-l-methyl-2,5-piperazindion (9115)

N-(4-(2-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9051)

N-(4-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)methylfenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9128)

N-(2-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9136)

N-(2-(3,4-Dimethoxyfenethyl)methylamino)ethyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid (9137)

N-(4-(2-(3,4-Dimethoxyfenethyl)methylamino)ethyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperaziny liden)methylbenzamid (9138)

N-(4-(2-(4-Fenyl-l-piperazinyl)ethyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo3-piperazinyliden)methylbenzamid (9083)

-5CZ 288935 B6

N-(4-(3-(6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)propyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (9161)

N-(2-(2,2-Difenylethyl)methylaminoethyl-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-35 piperazinyliden)methylbenzamid (9163) (3Z,6Z)-6-Benzyliden-3-(4-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzyloxy)benzyliden-l-methyl-2,5-piperazindion (9176) (3Z,6Z)-6-Benzyliden-3-(3-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzyloxy)benzyliden-l-methyl-2,5-piperazindion (9177)

N-(4-((3Z,6Z)-6-Benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylfenyl)-4-(2-(6,7dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzamid (9190) l-(4-((3Z,6Z)-6-Benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4-(6,7dimethoxy-1,2,3,4—tetrahydro-2-isochinolyI)methylpiperidin (9200)

Sloučeniny obecného vzorce I lze připravit postupem zahrnujícím reakci l-acetyl-3-benzyliden20 4-methyl-2,5-piperazindionu vzorce II:

(Π) s aldehydem obecného vzorce III:

(ΙΠ) kde R¹ a R² jsou definovány jako v obecném vzorci I, v organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze; a pokud je to žádoucí, převedení výsledné sloučeniny na příslušnou farmaceuticky 30 přijatelnou sůl.

Vhodné báze jsou uhličitan česný, sodný, draselný, hydrid sodný, t-butoxid draselný a triethylamin.

Vhodná organická rozpouštědla jsou dimethylformamid (DMF), tetrahydrofuran (THF), v případě t-butoxidu draselného t-butanol a směsi uvedených rozpouštědel.

Pokud je jako rozpouštědlo zvolen DMF, pohybuje se reakční teplota typicky v rozmezí 0 °C a teplotou varu, například v rozmezí 80 až 95 °C pokud je jako báze použit uhličitan česný.

Pokud je jako báze použit hydrid sodný nebo t-butoxid draselný, reakční směs se typicky ohřeje z 0 °C na laboratorní teplotu nebo na 40 °C.

Reakční doba se pohybuje v rozmezí 1 až 4 hodin, například 2 až 3 hodiny.

-6CZ 288935 B6

Sloučeninu vzorce II lze připravit podle níže uvedeného referenčního příkladu 1. Sloučeniny obecného vzorce III lze připravit z komerčně dostupných výchozích látek obecnými postupy, konkrétní výchozí materiál a zvolený postup závisí na typu aldehydu. Například aldehyd obecného vzorce III, kde R¹ a R² jsou H a ostatní skupiny jsou skupiny obecného vzorce -COR³, jak je definován výše, lze připravit postupem zahrnujícím reakci sloučeniny obecného vzorce IV:

OHC

(IV) kde jedna ze skupin R¹¹ nebo R²¹ je H a druhá -COOH, -COX, kde X je halogen, nebo -CO(OCOR'), kde R' je Ci~C₆ alkyl, s aminem obecného vzorce

H-R³, kde R³ je definováno výše, v inertním organickém rozpouštědle; a pokud R¹¹ nebo R²¹ je -COOH, probíhá reakce v přítomnosti kondenzačního činidla.

Pokud R¹¹ nebo R²¹ je -COOH, jsou vhodnými kondenzačními činidly 1,3-dicyklohexylkarbodiimid, l-cyklohexyl-3-(2-morfolinoethyl)karbodiimid metho-p-toluensulfonát a 2chlor-l-methylpyridinium jodid.

Pokud R¹¹ nebo R²¹ je -COX nebo -CO(OCOR'), jak je definováno výše, probíhá reakce obvykle v přítomnosti báze, například terciárního aminu jako je Et₃N, nebo v pyridinu. Vhodným rozpouštědlem je dichlormethan.

Aktivované sloučeniny obecného vzorce IV, kde R¹¹ nebo R²¹ je -COX nebo -CO(OCOR'), lze připravit zodpovídajících sloučenin obecného vzorce IV, kde R¹¹ resp. R²¹ jsou -COOH, obecnými postupy organické syntézy.

Například sloučeniny, kde R¹¹ nebo R²¹ je -COX, lze připravit halogenací karboxylové sloučeniny, například chloračním Činidlem jako je SOC1₂, PC1₃, oxalylchloridem nebo PC1₅.

Sloučeniny, kde R¹¹ nebo R²¹ je -CO(OCOR'), lze připravit reakcí karboxylové sloučeniny s C]—Cf> alkylhalogenformiátem v přítomnosti terciárního aminu, například působením EtOCOCl nebo iBuOCOCl v přítomnosti Et₃N. V takovém případě je obvykle vhodné nechat výslednou reakční směs reagovat přímo s aminem H-R³.

Pokud je R³ skupina obecného vzorce A, kde η = 1 a v = 1, lze amin H-R³ připravit redukcí odpovídající nitrosloučeniny obecného vzorce V:

kde m, R⁴ a R⁵ jsou definovány jako ve vzorci A. Redukci lze provést práškovým železem v koncentrované kyselině chlorovodíkové a methanolu, typicky varem pod zpětným chladičem. Alternativně lze redukci provést vodíkem za katalýzy palladiem na uhlíku.

Sloučeninu obecného vzorce V lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce VI:

kde m je stejné jako ve vzorci V a X je halogen, s aminem obecného vzorce VII:

H-N

R4 ✓

^xR5 (VH) kde R⁴ a R⁵ jsou definovány jako ve vzorci A, v organickém rozpouštědle a v přítomnosti báze. Organickým rozpouštědlem je typicky DMF nebo acetonitril, vhodnou bází je K2CO3. Reakční teplota se obvykle pohybuje v rozmezí laboratorní teploty a 100 °C, například 60 až 80 °C. Doba reakce se obvykle pohybuje v rozmezí 1 až 30 h, např. 2 až 24 h, typicky 8 až 12 h.

Pokud je R³ skupina obecného vzorce A, kde n = 0 a v = 1, lze amin H-R³ připravit redukcí odpovídajícího nitrilu obecného vzorce VIII:

kde m = 1, 2 nebo 3 a R⁴ a R⁵ jsou definovány jako ve vzorci A. Redukci lze provést L1AIH4 v ethylenglykoldimethyletheru, při reakční teplotě v rozmezí 0 až 40 °C, typicky za zvýšení teploty z 0 °C na laboratorní, např. z 0 na 20 °C. Jiné aminy H-R³ lze připravit analogicky ze známých nebo komerčně dostupných výchozích látek.

Nitril obecného vzorce VIII lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce VII se sloučeninou obecného vzorce X:

(X) kde X je halogen a m je stejné jako ve vzorci VIII, v organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze. Vhodným rozpouštědlem je acetonitril. Jako bázi lze použít K2CO3. Reakce se typicky provádí při teplotě varu rozpouštědla, po dobu 1 až 30 h, např. 1 až 20 h.

Aldehyd obecného vzorce III, kde R¹ je skupina obecného vzorce D, lze připravit reakcí sloučeniny vzorce XI:

(XI) s aminem obecného vzorce H-44(R¹⁰)(R¹¹), kde R¹⁰ a R¹¹ jsou definovány jako ve vzorci D, ve vhodném rozpouštědle. Vhodným rozpouštědlem je vodný THF. Sloučeninu vzorce XI lze připravit reakcí 4-hydroxybenzaldehydu s 1,5 mol.f¹ hydroxidem sodným a následně epichlorhydridem. Tato reakce se typicky provádí při 50 °C, 5 h.

-8CZ 288935 B6

Aldehyd obecného vzorce III, kde R¹ je skupina obecného vzorce E, kde r = 2 (sloučenina 5.1), lze připravit podle referenčního příkladu 5.

Odpovídající aldehydy, kde v obecném vzorci E je r = 1 nebo 3, lze připravit analogicky, nahrazením výchozí 4-(2-bromethyl)benzoové kyseliny kyselinou 4-(2-brommethylbenzoovou respektive 4-(3-brompropy l)benzoovou.

Aldehyd obecného vzorce III lze rovněž připravit reakcí odpovídajícího nitrilu obecného vzorce XII:

(XII) s kyselinou mravenčí na Raneyově niklu, jak je např. popsáno v referenčním příkladu 7.

Sloučeniny obecného vzorce I lze běžnými postupy převést na farmaceuticky přijatelné soli a naopak soli lze převést na volné sloučeniny. Vhodné jsou soli farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin. Vhodné anorganické kyseliny jsou kyselina chlorovodíková, sírová a ortofosforečná. Vhodné organické kyseliny jsou kyselina p-toluensulfonová, methansulfonové, slizová a jantarová.

U rakovinných buněk vykazujících multidrogovou rezistenci, tzv. buňky MDR, dochází ke snížení intracelulámí akumulace léčiv ve srovnání s odpovídajícími senzitivními buňkami. Studie na in vitro odvozených MDR buněčných liniích ukázaly, že MDR často souvisí se zvýšenou expresí plazmatického membránového glykoproteinu (P-gp), který má schopnost vázat léčivo. Předpokládá se, že P-gp působí jako přenašeč pro řadu hydrofobních sloučenin. Transfekční studie s nakloňovaným P-gp ukázaly, že zvýšená exprese P-gp může buňkám udělit fenotyp MDR: viz např. Ann. Rev. Biochem 58 137-171 (1989).

Hlavní funkcí P-gp v normálních tkáních je exportovat intracelulámí toxiny z buňky. Je očividné, že zvýšená exprese P-gp může být z hlediska multidrogové rezistence klinicky významná. Zvýšené hladiny P-gp mRNA nebo proteinu byly detekovány u mnohých forem lidské rakoviny -leukémií, lymfomů, sarkomů a karcinomů. Skutečně byly v některých případech nalezeny zvýšené hladiny P-gp v nádorových biopsiích získaných po recidivě během chemoterapie.

Inhibice funkce P-gp v případech MDR mediované P-gp vedla k čisté akumulaci protirakovinných agens v buňkách. Například se ukázalo, že Verapamil, známý blokátor průchodu kalcia, způsobil citlivost MDR buněk k Vinca alkaloidům in vitro i in vivo: Cancer Res., 41, 1967-1972 (1981). Předpokládaný mechanismus účinku spočívá vkompetici s protirakovinným agens o vazbu na P-gp. Byla popsána řada strukturně nepříbuzných činidel modifikujících rezistenci, které působí uvedených mechanismem, jako např. tamoxifen (Nolvadex:ICI) a příbuzné sloučeniny a cyklosporin A a deriváty.

U sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí (dále označované jako „předkládané sloučeniny“) byla na základě biologických testů nalezena modulační aktivita multidrogové rezistence. Výsledky jsou uvedeny v příkladu 3. Předkládané sloučeniny lze proto použít jako modulátory multidrogové rezistence, tzv. RMA („resistance modifying agent“). Předkládané sloučeniny modulují, tj. snižují nebo eliminují multidrogovou rezistenci.

Předkládané sloučeniny lze proto použít na zesílení cytotoxicity léčiva, cytotoxického vůči nádorovým buňkám. Takovýto postup zahrnuje např. aplikaci některé z předkládaných sloučenin

-9CZ 288935 B6 do národové buňky, která je již pod vlivem určitého cytotoxického léčiva. Terapeutický účinek tohoto chemoterapeutika nebo antineoplastika je tím zvýšen. Multidrogová rezistence nádorové buňky vůči cytotoxiku během chemoterapie je tedy snížena nebo eliminována.

Předkládané sloučeniny lze rovněž použít v postupu léčby takového onemocnění, jehož patogen je multidrogově rezistentní, např. některé multidrogově rezistentní formy malárie (Plasmodium falciparum), tuberkulóza, leishmanióza a amébová dyzeterie. Takovýto postup např. zahrnuje podání předkládané sloučeniny (separátně, současně nebo následně) s léčivem, vůči němuž je patogen multidrogově rezistentní. Terapeutický účinek léčívaje tím zvýšen.

Lidský nebo zvířecí pacient trpící nádorovým onemocněním může být léčen na rezistenci vůči chemoterapeutiku postupem zahrnujícím podání některé z předkládaných sloučenin. Předkládané sloučeniny jsou podávány v účinném množství zesilujícím cytotoxicitu použitého chemoterapeutika. Chemoterapeutika nebo antineoplastika vhodná pro použití s předkládanými sloučeninami jsou Vinca alkaloidy vincristin a vinblastin; antracyklinová antibiotika daunorubicin a doxorubicin; mitoxantron; aktinomycin D; taxany např. taxol; epipodofylotoxiny např. etopoposid a plicamycin.

Lidský nebo zvířecí pacient trpící onemocněním vyvolaným multidrogově rezistentním patogenem může být léčen na rezistenci vůči chemoterapeutiku postupem zahrnujícím podání některé z předkládaných sloučenin.

Příkladem takovýchto onemocnění jsou některé multidrogově rezistentní formy malárie (Plasmodium falciparum), tuberkulóza, leishmanióza a amébová dyzeterie.

Modulátory MDR mají další využití při přenosu léčiva hematoencefalickou bariérou a při léčbě AIDS a komplexu souvisejících obtíží. Předkládané sloučeniny jsou proto použitelné v postupech usnadňujících přenos léčiva hematoencefalickou bariérou a při léčbě AIDS a komplexu souvisejících obtíží. Lidský nebo zvířecí pacient vyžadující uvedenou léčbu, může být léčen postupem zahrnujícím podání některé z předkládaných sloučenin.

Předkládané sloučeniny lze podávat v různých dávkových formách, např. perorálně ve formě tablet, kapslí, tablet potahovaných cukrem nebo filmem, kapalných roztoků nebo suspenzí, nebo parenterálně, např. intramuskulámě, intravenózně nebo subkutánně. Předkládané sloučeniny lze tedy podávat injekčně i infúzně.

Dávkování závisí na řadě faktorů jako je věk, hmotnost a stav pacienta a cesta podání. Nicméně, typická dávka pro všechny cesty podání je pro dospělého člověka 0,001 až 50 mg/kg, častěji 0,01 až 5 mg/kg tělesné hmotnosti. Tato dávka může být aplikována jednou až pětkrát denně bolus infúzí, infúzí trvající několik hodin a/nebo opakovaným podáváním.

Piperazindionové deriváty obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být rovněž formulovány jako farmaceutické nebo veterinární přípravky obsahující rovněž farmaceutický nebo veterinární nosič či ředidlo. Přípravky lze připravovat běžnými postupy a jsou podávány ve farmaceuticky nebo veterinárně vhodné formě. Předkládaný vynález poskytuje léčivo obsahující některou z předkládaných sloučenin, které je použitelné jako modulátor multidrogově rezistence.

Například pevné perorální lékové formy mohou obsahovat vedle účinné složky ještě ředidla, jako je laktóza, dextróza, sacharóza, celulóza, obilný škrob nebo bramborový škrob; lubrikanty, jako je oxid křemičitý, talek, kyselina stearová, magnézium nebo lakcium stearát a/nebo polyethylenglykoly; pojivá jako jsou škroby, arabská guma, želatina, methylcelulóza, karboxymethylcelulóza nebo polyvinyl pyrrolidon; disintegrátoiy jako je škrob, kyselina alginová, algináty nebo sodné glykoláty škrobu; eferverscentní směsi; barviva, sladidla; smáčedla jako

-10CZ 288935 B6 lecitin, polysorbáty, lauryl sulfáty. Uvedené přípravky lze připravit známými postupy, zahrnujícími např. mixování, granulaci, tabletování, potahování cukrem nebo filmem.

Kapalné disperze pro perorální podávání jsou např. sirupy, emulze a suspenze. Sirupy mohou obsahovat jako nosiče např. sacharózu nebo sacharózu s glycerolem a/nebo manit a/nebo sorbit. Konkrétně sirup pro diabetické pacienty může jako nosič obsahovat pouze látky, např. sorbit, které nejsou metabolizovány na glukózu, nebo pouze na malé množství glukózy. Suspenze a emulze mohou jako nosič obsahovat např. přírodní pryskyřici, agar, alginát sodný, pektin, methylcelulózu, karboxymethylcelulózu nebo polyvinylalkohol.

Suspenze nebo roztoky na intramuskulámí injekce mohou obsahovat vedle účinné složky farmaceuticky přijatelný nosič jako je sterilní voda, olivový olej, ethyl oleát, glykoly jako propylenglykol a pokud je to žádoucí, vhodné množství lidokain hydrochloridu. Některé předkládané sloučeniny jsou nerozpustné ve vodě. Tyto sloučeniny lze enkapsulovat do lipozómů.

Vynález je podrobněji ilustrován následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Referenční příklad 1: l-acetyl-3-benzyliden-4-methyl-2,5-piperazindion l,4-Diacetyl-2,5-piperazindion (Marcuccio S. M., Elix J. A.; Aust. J. Chem., 1984, 37, 1791) (25,0 g, 126 mmol) se nechal reagovat v DMF (200 ml), při 130 °C, s triethylaminem (17,6 ml, 126 mmol) a benzaldehydem (13,0 ml, 126 mmol). Po 4 h byla reakční směs ochlazena na laboratorní teplotu, vlita do EtOAc (1000 ml) a 3x extrahována solným roztokem. Všechny pevné látky vzniklé v této fázi byly odfiltrovány. Filtrát byl vysušen (MgSO₄) a rozpouštědlo odpařeno ve vakuu. Zbytek byl rekrystalován ze směsi EtOAc-hexan s výtěžkem 11,78 g (38 %) 1-acetyl3-benzyliden-2,5-piperazindionu.

Výsledná sloučenina se nechala reagovat sNaH a CH₃I ve směsi DMF-THF (1:5), při teplotě 0 °C a teplota se nechala vystoupit na laboratorní teplotu. Titulní sloučenina vznikla s výtěžkem 57 %.

Referenční příklad 2: Příprava aminů H-R³ přes substituovaný nitrobenzen.

-11CZ 288935 B6

4-Bromethylnitrobenzen 2a se nechal reagovat s 1-fenylpiperazinem 2b v přítomnosti K₂CO₃, v DMF, při 80 °C, 8 h. Sloučenina 2c byla získána s výtěžkem 58 %. Sloučenina 2c byla dále redukována práškovým železem v koncentrované kyselině chlorovodíkové a methanolu varem 5 pod zpětným chladičem, 3 h. Požadovaný amin byl připraven s výtěžkem 40 %.

Analogicky byly připraveny další aminy H-R³ (tabulka 1) s použitím 4-brommethylnitrobenzenu nebo 4-(3-brompropyl)-nitrobenzenu místo 4-(2-bromethyl)nitrobenzenu 2a a nahrazením 4fenylpiperazinu 2b vhodnou sloučeninou obecného vzorce VII. Reakční podmínky pro jednotlivé 10 stupně příprav byly stejné jako pro výše uvedený amin 2.1, vyjma aminu 2.9, kde stupeň redukce byl proveden vodíkem při 50 p.s.i. za katalýzy palladiem na uhlíku, v ethanolu. Redukce probíhala 2,5 h při laboratorní teplotě. V případě aminu 2.4 byla redukce nitroskupiny doprovázena hydrogenolýzou 4-chlorfenylové skupiny za vzniku aminu 2.4.

-12CZ 288935 B6

Tabulka 1

-14CZ 288935 B6

Referenční příklad 3: Příprava aminů H-R³ přes substituovaný nitril

/0CH3

OCHs

3.1

6,7-Dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin hydrochlorid 3a se nechal reagovat s chloracetonitrilem v přítomnosti K₂CO₃, v acetonitrilu, za varu pod zpětným chladičem, 24 h. ío Sloučenina 3b byla získána s 92 % výtěžkem. Sloučenina 3b se dále nechala reagovat s LiALHj, v ethylenglykoldimethyletheru, při laboratorní teplotě, přes noc. Poté byla reakční směs ohřátá na 40 °C a reakce pokračovala ještě 30 min. Očekávaný amin 3.1 byl připraven s výtěžkem 98 %.

Analogicky, ale s úpravou reakčních podmínek prvního stupně a s nahrazením sloučeniny 3a 15 příslušnou sloučeninou obecného vzorce VII, byly připraveny další aminy H-R³, uvedené v tabulce 2:

-15CZ 288935 B6

Tabulka 2

H Sloučenina 1 vzorce VII	Podmínky 1. stupně	Amin H-R³ č.
HN NCH3 V_/	KíCOj, ClCHjCN, CH₃CN reflux 20h	/~\ Ji NCH3 ___/ (32)
_zCH3 H-N_x Ph CH i ^Ph	K₂CO₃ClCHjCN, CHjCN reflux, 24h	MCH3 (33)
CO	K₂CO₃ C1CH₂CN, CHjCN reflux 24h	HX^CO (3.4)
HCLHN 1	k₂co₃C1CH₂CN, CH₃CN reflux 24h	ryv““' (3-3) \|
Γτ°°^Η3	k₂co₃, ClCHjCN CHjCN reflux 4h	cVií (3«)

Referenční příklad 4: Příprava dalších aminů H-R³

-16CZ 288935 B6

1. (3,4-Dimethoxyfenethyl)methylamin

2-(3,4-Dimethoxyfenyl)ethylamin 4a se nechal reagovat s CH3OCOCI v přítomnosti triethylaminu, v CH2CI2, při -78 °C. Teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C. Sloučenina 4b byla získána s výtěžkem 9 %. 4b dále reagovala s L1AIH4 v THF při teplotě 0 °C a teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C. Sloučenina 4.1, výchozí amin pro přípravu sloučeniny 2.9 v referenčním příkladu 2, byla získána s výtěžkem 91 %.

2. H₂N-(CH2)2-N(CH₃)-CH2CHPh2

2,2-Difenylamin se nechal reagovat s (CF₃CO)₂O v Et20 při 0 °C, 1 h. Výsledný (Ph)2-CHCH2-NHCOCF3, připravený kvantitativně, dále reagoval s KH v THF při 0 °C a následně s CH3I a 18-crown-6 při laboratorní teplotě 24 h za vzniku (Ph)2-CH-CH2-N(CH3)-COCF3 s výtěžkem 91 %. Tento produkt se dále nechal reagovat s 2 mol.F¹ NaOH v CH3OH za varu pod zpětným chladičem, 2h, za vzniku (Ph)₂-CH-CH₂-NHCH₃ s výtěžkem 81 %. (Ph)2-CH-CH2-NHCH₃dále reagoval s chloracetonitrilem v přítomnosti K2CO3 v acetonitrilu za vzniku (Ph)₂-CH-CH2NCH3-CH2CN s výtěžkem 83 %. Redukce této sloučeniny L1AIH4 v ethylenglykoldimethyletheru, 2 h, vedla k titulnímu aminu, tj. sloučenině 4.2 s výtěžkem 90 %.

3. Amin 4.3

4c

4d

4e

-17CZ 288935 B6

Sloučenina 4c se nechala reagovat s 6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetraisochinolinem vCH₂C1₂ při 0 °C, v přítomnosti 2-chlor-l-methylpyririnium jodidu a triethylaminu. Teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C. Sloučenina 4d, připravená s výtěžkem 93 %, dále reagovala s kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu při laboratorní teplotě, 30 min. Sloučenina 4e byla 5 připravena s výtěžkem 10 % po trituraci acetonem.

Sloučenina 4e byla redukována LiAlH» v THF, při 10 °C a teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C. Sloučenina 4.3 byla získána s výtěžkem 75 %.

Referenční příklad 5: Příprava aldehydu 5.1

Sloučenina 5a se nechala reagovat s nadbytkem CH₂N₂ v THF při 0 °C, 7 h. 5b byla připravena s výtěžkem 98 %. Sloučenina 5d se dále nechala reagovat s 6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin hydrochloridem v DMF v přítomnosti K₂CO₃, při laboratorní teplotě, 5 dní s výtěžkem 56 % sloučeniny 5c. 5c byla dále redukována L1AIH4 v THF při laboratorní teplotě,

-18CZ 288935 B6 h, za vzniku 5d s výtěžkem 80 %, 5d dále reagovala s pyridiniumchlorchromátem (PCC) ve směsi pufrované NaOAc VCH2CI2 při laboratorní teplotě 16 h. Sloučenina 5.1 byla získána s výtěžkem 25 %.

Referenční příklad 6: Příprava aldehydů obecného vzorce III

Postup 1

Aldehydy obecného vzorce lila uvedené v tabulce 3 byly připraveny reakcí 3-formylbenzoové kyseliny s příslušným aminem H-R³ (sloučenina připravená podle referenčních příkladů 2 nebo 3) v CH2CI2 v přítomnosti 2-chlor-l-methylpyridinium jodidu při 0 °C. Teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C.

Tabulka 3: Aldehydy obecného vzorce lila

Aldehyd č.	R³	ss3s=a=ss=asassasssa»M*c Odpovídající. amin H-R³
6.1		2.2
6.2		2.1
6.3		2.7
6.4	CHJ	2.9
6.5	ryY“’	3.5
6.6	CHi	3.6
6.29	^C\|^H’	4.2

-19CZ 288935 B6

Postup 2

Aldehydy obecného vzorce Illb uvedené v tabulce 4 byly připraveny reakcí 4-foimylbenzoyl 5 chloridu s příslušným aminem H-R³ v CH₂1₂ v přítomnosti triethylaminu při 0 °C. V případě aldehydu 6.32 byl použit 4-karboxybenzaldehyd místo 4-formylbenzoylchloridu a v reakční směsi byl dále přítomen 2-chlor-l-pyririnium jodid. Teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C. Každý použitý amin byl buď připraven podle referenčního příkladu 2 nebo 3 nebo získán komerčně.

Tabulka 4: Aldehydy obecného vzorce Illb

(IHb)

Aldehyd o	R³	amin H-R³ \|
6.7		2.2
6.8	MCH3 —nit \/	3.2
6.9	„occ	3.1
6.10	-νΌ	komerční produkt
6.11	fv-xyó.	komerční produkt
6.12	—N MCHj V/	komerční produkt

-20CZ 288935 B6

6.13	r~\ —\__/	komerční produkt
6.14	—nh—	komerční produkt
6.15	_mAj	2.7
6.16	^jO^⁰⁰	2.3
6.17	—NH-CHjCH=CH₂	komerční j. produkt
6.18	\7 \=/	komerční 1 produkt
6.19	—NH-CHjCHí—N-CHPhí CH3	3.3
6.20		2.4
6.21	-khAJ	2.5
6.22	rpCcO	2.8
1 ^e·²³	-hhA>	2.1
6.24	-NH'^	2.6

-21CZ 288935 B6

1 6.25		3.4
6.26	MPh	komerční produkt
6.27		2.10
6.32		4.3

Postup 3

Aldehyd obecného vzorce III byl připraven reakcí sloučeniny obecného vzorce XI s vodným HN(CH₃)₂ v THF při laboratorní teplotě, 2 h, výtěžek 91 %.:

Postup 4

Sloučenina 5d, popsaná v referenčním příkladu 5, se nechala reagovat s 4-hydroxybenzaldehydem vTHF při 0°C v přítomnosti trifenylfosfmu a diethylazidokarboxylátu, za vzniku aldehydu obecného vzorce III s výtěžkem 40 %:

Tento postup byl opakován s 3-hydroxybenzaldehydem místo 4-hydroxybenzaldehydu. Následující aldehyd obecného vzorce III byl připraven s výtěžkem 50 %:

-22CZ 288935 B6

6.31

Referenční příklad 7: Příprava aldehydu 7.1

7.1

-23CZ 288935 B6

7a se nechal reagovat s nadbytkem SOC1₂ a katalytickým množstvím DMF v toluenu, za varu pod zpětným chladičem, 4h. Výsledná sloučenina 7b se dále nechala reagovat s 4-aminobenzonitrilem v CH₂C1₂ v přítomnosti triethylaminu při 0 °C. Teplota reakční směsi se nechala přes noc vystoupit na 0 °C. Flash chromatografií ve směsi hexan-ethylacetát (1:1) byla získána 5 sloučenina 7c s výtěžkem 39 %. Sloučenina 7c se dále nechala reagovat s 6,7-dimethoxy1,2,3,4-tetrahydroisochinolinem v přítomnosti K₂CO₃ v acetonitrilu, za varu pod zpětným chladičem, 18 h. Frakce chromatografií ve směsi 10% CH₃OH v ethylacetátu byla získána sloučenina 7d s výtěžkem 25 %. Sloučenina 7d se dále nechala reagovat s kyselinou mravenčí a 50% vodnou suspenzí Raneyova niklu, za varu pod zpětným chladičem, 2 h. Aldehyd 7.1 byl io připraven s výtěžkem 71 %.

Příklad 1: Příprava sloučenin obecného vzorce I

Sloučeniny obecného vzorce I, uvedené v tabulce 5, byly připraveny reakcí l-acetyl-3-benzyliden-4-methyl-2,5-piperazindionu, popsaného v referenčním příkladu 1, s aldehydem, připrave15 ným podle referenčního příkladu 5, 6, nebo 7, v DMF, v přítomnosti Cs₂CO₃, při teplotě 80 až °C.

Tabulka 5

Aldehyd č.	Sloučenina obecného vzorce I
6.7	9006
6.8	9007
6.9	9008
6.10	9022
6.28	9023
6.11	9049
6.1	9051
6.12	9052
6.13	9053
6.14	9054
6.15	9064
6.16	9065
6.17	9070
6.18	9071
6.19	9076
6.20	9079
6.21	9080
6.2	9083
6.22	9096
6.23	9103
6.24	9104
5.1	9115
6.25	9116
6.26	9117
6.3	9128
6.5	9136
6.6	9137
6.4	9138
6.27	9161
6.29	9163
6.30	9176
6.31	9177
7.1	9190
6.32	9200

-24CZ 288935 B6

Sloučeniny 9052, 9071, 9076, 9116, 9104, 9053, 9054, 9064 a 9051 byly převedeny v posledním stupni na hydrochloridy, probubláváním roztoku každé příslušné sloučeniny v THF plynným HC1. (V biologických testech popsaných v příkladu 3 byly hydrochloridy používány častěji než volné báze.)

Příklad 2: Farmaceutický přípravek

Příprava tablet o hmotnosti 0,15 g, obsahujících 25 mg předkládané sloučeniny:

Složení pro 10 000 tablet
předkládaná sloučenina	250 g
laktóza	800 g
obilný škrob	415 g
práškový talek	30 g
magnézium stearát	5g

Nejprve bylo smícháno: předkládaná sloučenina, laktóza a poloviční množství obilného škrobu. Směs byla poté protlačena sítem o velikosti ok 0,5 mm mesh. Obilný škrob (10 g) byl suspendován v teplé vodě (90 ml). Vzniklá pasta byla použita ke granulaci prášku. Granulát byl vysušen a rozemlet na malé fragmenty na sítu o velikosti ok 1,4 mm mesh. Poté byl přidán zbytek škrobu, talek a magnézium stearát, směs opatrně smíchána a komprimována do tablet.

Příklad 3: Testování sloučenin obecného vzorce I jako modulátorů MDR

Buněčná linie EMT6 myšího prsního karcinomu a MDR rezistentní sublinie AR 1.0 byly napěstovány v médiu RPMI 1640 obsahujícím 10% jehněčí sérum a 2 mmol.F¹ glutamin, při 37 °C, v 5% CO2. Buňky byly pasážovány mezi 1 ku 200 a 1 ku 2000 v případě rodičovské buněčné linie, mezi 1 ku 20 a 1 ku 200 v případě MDR rezistentní sublinie, po trypsinizaci (0,25% trypsin, 0,2 g.f¹ EDTA).

1. Test akumulace léčiva

AR 1.0 buňky byly vneseny do matných 96-jamičkových kultivačních ploten (Canberra Packard). Testovací médium obsahovala směs triciovaného daunorubicinu (DNR), cytotoxikum a neznačený DNR (0,3 u Ci/ml; 2 wmol.r¹). Sloučeniny obecného vzorce I byly postupně naředěny v testovacím médiu do koncentrační řady v rozmezí koncentrací 5 nmol-Γ¹ až 100 wmol.r¹. Buňky byly inkubovány 1 h při 37 °C, promyty a stanovena radioaktivita vázaná na buňky. Výsledky byly vyjádřeny jako % maximální akumulace, přičemž jako 100 % akumulace byla vzata hodnota akumulace v přítomnosti verapamilu známého RMA, při 100 ιαηοΙ.Γ¹. Kde to bylo možné, byla stanovena IC50.

Výsledky jsou uvedeny v tabulce 6.

Tabulka 6

Sloučenina č.	IC₅o (wmol.l*) akumulace	Maximální akumulace
9006	0,4
9007		30%
9008	3,0
9022	7,0
9023		30%

-25CZ 288935 B6

Tabulka 6 - pokračování

9049		20%
9051	0,15
9052	100
9053	50
9054		32%
9064	0,3
9065	6
9070	5
9071	6
9076		44%
9079	80
9080		18%
9083	2
9096		20%
9103		20%
9104	5
9115	5
9116	4
9117	5
9128	3
9136	0,9
9137	2
9138	0,8
9161		20%
9163	2,0
9176	1,000
9177	1,750
9190	0,350
9200	1,700

2. Zesílení toxicity doxorubicinu

Sloučeniny obecného vzorce I byly testovány z hlediska schopnosti zesílit účinnost doxorubicinu v AR 1.0 buňkách. V počátečních proliferačních testech byly předkládané sloučeniny titrovány proti pevným koncentracím doxorubicinu (0,86 wmol.r¹), které nejsou samy o sobě vůči AR 1.0 buňkám toxické. Po čtyřech dnech inkubace s doxorubicinem byla změřena proliferace pomocí kolorimetrického sulforhodamin B testu (Skehan et al·, J. Nati. Cancer Inst. 82, str. 1107-1112 (1990)). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 7.

Sloučeniny, které vyvolaly citlivost AR 1.Ό buněk na 0,86 ιλποΙ.Γ¹ doxorubicin a nebyly samy o sobě příliš toxické, byly zvoleny pro další studie. Buňky byly kultivovány 4 dny s různými koncentracemi doxorubicinu (0,01 až 50amol.r^l), v přítomnosti pevné koncentrace každé z testovaných předkládaných sloučenin. Proliferace byla kvantifikována postupem dle Skehan et al·, J. Nati. Cancer Inst. 82, str. 1107-1112 (1990). Byly odvozeny hodnoty IC50 (koncentrace nutná ke snížení proliferace na 50 % slepé kontroly) pro samotný doxorubicin a všechny testované sloučeniny a použity pro výpočty indexu zesílení účinnosti (Pl):

IC₅₀ pro samotný doxorubicin

PI = ------------------------IC50 pro doxorubicin plus RMA

Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 8:

-26CZ 288935 B6

Tabulka 7

Sloučenina č.	Toxicita sloučeniny (IC₅₀ wmol.r¹)	Toxicita s cytotoxikem (IC₅o wmol.i^-1)
9006	2	0,04
9008	10	2,0
9022	35	0,8
9023	10	5,0
9049	2	0,2
9051	2	0,01
9053	40	4,0
9054	50	30
9064	2	0,01
9065	2	0,2
9070	40	4,0
9071	6	0,2
9079	2	1,7
9083	3	0,1
9104	40	0,05
9115	60	2,0
9116	8	1
9117	8	3
9128	10	2
9136	13	2
9137	12	4,5
9138	8	1,0
9163	10	0,5
9176	10	0,2
9177	15	0,5
9190	15	0,05
9200	13	0,8

Tabulka 8

Indexy zesílení účinnosti
Sloučenina č.	Index zesílení (RMA při 1 wmol.i ’)
9006	1000
9022	5
9049	15
9051	2000
9064	750
9065	15
9071	4
9079	3
9104	17
9136	25
9138	333
9163	6,7
9176	300,0
9177	75,0
9190	75,0 (měřeno při 0,3 wmol.i¹)
	10,0 (měřeno při 0,1 wmol.i¹)
	3,3 (měřeno při 0,03 wmol.i¹)
	1,4 (měřeno při 0,01 wmol.i”¹)

-27CZ 288935 B6

Příklad 4:

Charakterizace předkládaných sloučenin

Sloučeniny a soli připravené v předcházejících příkladech byly charakterizovány hmotnostní 5 spektroskopií (MS), mikroanalýzou a protonovou nukleární magnetickou rezonancí (*H NMR).

Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 9 a 10:

Tabulka 9

N	o tí 0) N	\O CM cm CO** 10* vO	CO 0i
	Φ
	f—4
4 4 4 O M X ví X	Ιύ 95	σι xr o oco* 10	CO 0*	CO O vO CO *· —· kD 10 ··	o o m K. CO %o *» θ \O 10 «—»
o — ů 4) •P >o 0	01 *o o u «·. co Ό 1O	Γ— cn σΓ	c*> m o co — «θ’ ·. CM 1O 10 ·—·	40 co n - md — o <0 10 —·
	cu
	>1 >	O X	z	CJ X Z	O X Z
			co
		Ό τ>	CM r*.	•Λ ΌΟ	V) x> -**« Ό V»
		^□CCM Μ“«-·ΟΧ	-40 —0» es -	<DC3 3CÍ\ÍC» -CO corrcr .->iT ZE ·. *. xJCMO	XO10 ·<Μ * Q^CMmX-X ·« - ÍM ·<-*
	*O	CM / -Cs. r* X •10 -co co _·	CM CO —· • 10 * • ΟΓ3 -CM CO	CO01 · 0» -COCM .✓·» v cd^v <λ
		</>Ciřv> “ E • ·νπ - X -X ΟΧ lO^->r5 · -CO «fax -Q λ r·* —·<-·» Ό E · -O <0 -σι -o«m nxcixo^rx ^M - — cm cm rx. r-·-	V> wCQ V> * JO Π -r-^r- · S „5 . -S«ΛVJ <« ε trt - -u> ‘ ·Λ - řízcaccoZEZEuszE -<->ΤΤ <“Λ Λΐ r~.	<ΛΓ) V» — «3 — ’ - -r-r- ox x -x z--* CO-—-·—· · CM —» X> (Λ Ε OCO 10 -co - -Ol -co O1Z01XXCOX •ΛΓ »** o CM ·—1O ·’t** ·—»«—*


40 u E C x	go ^M 01	tM ^.X «X r— O o		o£J °s Ό	Ό
	Ό O H	<0 Ixl		+ § U-
40

4
+»	+
•σ	N
				•	_g______
MS	t) <β 4> P C 0 -« e a	s CM CM		431(100) 331(50)	--o θ!010Ο 01 co·—· co θθΟΓ* ωωο—

				O X	o X
V4 β 0	-r O		o*	o
Μ ®	z*		z	zzT
M# >4 H 0	·»· X		X	X* o
9 N W >	*· o		•w o	<3*
	o CM o 0»		CM 10 O 01	o· m o 01

28·

Tabulka 10

o 4-> Ό Ιέ c x		v>-—-CM - VÍKO n: - χ coco rx ' - xCT> «z> ^\DO - e <x • -r-x < □C·^ — oo e - xx — ZC V>CO COCM - CM x* 3C <=> C-Γό--^ -O • CO - - CT> MOO-—ZE ΟΟΌΌΟ εξ-“* NOUKr CM CO--« - x •-—XT —.—· x </>«/>«-· • · -Γχ ·—· ZC-— ΖΟ co ΙΛ·—· χ — -χ-όο-—- ZE · «Λ rxcocxio CD XCOCM3C -CM — x—< CMx-	$ f— co CM CM s. Of— co - - <Λ Ό EXX -—«CM X— O —-«<—to ->oco v. s r— CM-*— » ex> cr> - ΤΓΧΧ -«CM CM cm—— -00 —u>tr> V> -w * -co— X CO · ‘ νϊ'ε 1O · - coxx -JTOMO CM—'—	O ·< 1— •»ajDCM • vOr X> MO - -X —‘CM CO V> V»—* •IIlD ^^r-«CO 4/Ϊ—' * r— XiDřs como —· ·. — CKtJ cm ‘ ~ O— -X XtA^íM ro . V>—' XX) -co -r— — XX e<M—« x”** ΚΟίΟ’Μ’ —COOv— — -E OCOtO · Ok X •^ - .\O CM—'**—' • E v» to · -co t-xxe . <7”* * CM ——*í—	3τ> OO oo «· lOrv ε e XX COMD © rxCO · o^z X «/M •OTX X' iňcnro COCM <D χ x < «X® W WO XXX O^xCM cm«oix> οοίΠ X x COrxrx	— O\ v> ιΛ -CM x X— rx CO X x^>r. -M- -X> C3^x · CO -CM-— Χχ^Ό •CO —mx ε mou •O XX^ X»-«rx CM x CO --rx -a> « -x . rx-«r ει* COO - x xX · CMfx.O·'* X' «Λ --3—'CMX ε Exr·χ’χίχ'“'“' uz>3· · CD x-^x-^COCx CM ' ιΛ«—< fx rxcorx X X CM CO----- • · WO *s-co - lONZZ X W-XCM CMCOx-x	σχ o co ·«** <T — -- CO -*> <Λ • X to · tOCM -X CO—x—« coin- tn • O>CM co - ε · <o -CM CO—« XCM CO — —- CO · CO - -X W-·—xco ro ·——* • x CM co CM-ST cn xeo—« 'mCM -% -W CM—COCO • CO -co VJ <Λ - «Λ «fc · -CO -r^x X X ČM CO -r-4 -— E v>d LO -CO -tO coxrxx •CM —-iO CM—to—’w—·
Φ o ft w N O k	Kl x X 0 co 0 </> □z 0 • *□	fM X X CO <0 •^r e> O Q VO	tu X X O O r— O O O	*4 i 0 0 ΤΓ n O O O	X X 0 0 § v?	M X X 0 0 co X 0 • Ό
MS data	*O O ε	♦—· co UJ	CO LU	CO LU	·«· co LU	co LU	►—» 0
β Φ 4J a «-· <0 +» 0 e Λ	co o CO TJ“ tO	0 0 r—	O O r-1 —» r* to m	OO CM O <n—· o* co -srco	x—* 0 0 0 CD CO	<^x. 0 co co •^r co ^0 CMO CM-· roto xro toru
Sumární	υ m L o N >	«Λ <2. z, 1-» x rt O	r·» 0 W) z_ 3: x w 0	«/» 0 w z «» x r-> r» 0	r» 0 «· z «4 «V X w O*	> Lu -» X e> O	0 · ze «Λ O w z «0 X ··» cu
1^>u	tO O O 0x	r. O O O	CD O O OX	CM CM O Ο»	σ> 0 θ'	uo o 0

-29CZ 288935 B6 <NJ

O ror co

Xzn o —*

Er*. Ό •0

VO

Ό

CO eu·^·

CO*—*r** *-* tt E <y»c\icn Í0OK0 uf> CH co e tAx Ό v—4 r**

XXX VCXICM kD inr? O s XVO' co • v· — X 4Λ

X

X -x CM —<M x-* V) ' tn <Λ Ό O

E *** • *—* 4Λ X «OJO XT JO · «srcor^. — ——

CMO*CMC3 — CO*0r^

-CM - — O — E ' «Λ -CO

QOD 10*-* —’<n mo *nc0*O — v> e jo

UO <O c* o

c. * «Ο · CO CM

-CO · χ X ocmuo --r- — ·<τ X «η _% -CM JO co o —- — co · X . ^O —CM —to co o* — ε *· * o

X «ΛΌ — OXT - •w—xx

X ·—*CM —

CO CM— — «Λ • *n —o- —

CJOr**^ vO

X CM

X -X CM—CM —« «Λ ·— jo m -co — X*n ~ g </> · •X X*-* CO CM

ΟκΓ> CT* -%

M® CM *

O • % x

CO — —<m — V» «Λ——

JOJO _ cm - -r-«o tDIZOOX -JMCXI

X—XX

CO «Λ-—«CM r- co cn cr« co xcomx

-cm — CM«—«Oc··.

— <M — v> ««E -*£> X x co -*o— * </> e „·° *o -Ό · OI«TX v> «0*0 00 eoxx

X—: CO —— «τ' m

LíOO* σ» s

ř. Sumární MS data__'H ntnr data ___ vaorec__hmota (lntena,) mod ^rozB/pole

9053 ChMA.HCI 461(100). 331(10) FAB+ d_t-DMSO7

CM*CD CO inn oin f**w

CD*CM CO lOO mo co — v-ir·* r^KO

-30CZ 288935 B6

	x>;	cm co cm co ε OUDX r. CM --V> - -O ~zco e— * X · -«Γ —· </> X» χγ^γγΧ o ·- CM-—*’' a C/> </>O^ <30 . .<-1 CO xx ·* MO^O -cncn ^COO- E x. <O •cxír· · x n: CM - -CM ~ €=>** CM - -CM iDXTO sCO»-* *	V> V» w t CM·—CM COOO 10·—a O cOr CO . ví e ΕΞ XXX~ CO CM XT v> ΙΡ’Μ'ΓΜ·—4 COOr· —’ x * * CMrrr* • 10 -CD · v -03·* cd e e— -10 - X X ’ CO -03.-* v> o -cox cmtt^ CM'-'»· • · O> w co CM ·—* 1OC0CM > ** X» \O ΓΜΑ0Γ-.·—«	8Š ť>r^ -o — 0V-* Ε > = r* ,χΑ -CM X X * cm -cn cd ·/> O -O · COX10*** CM—-f* · • X -COCD CM -'xCOCM -' -10Γ O X o CM · - — “ <Λ <Λ 1Λ o · · X rZZ^-< <m·— e CM — — - XCM • OOV uo »r —· —- · ·/> · O -CO» CD—* X <D CO ' v) E · v) “Μ^- · -1O ‘ rXXVDX <M(\J - CM —’<*·—>	š — 10 v> —- _· -r* <0 CO co CD - — -CM CD X ·—· 10 —ar- CO-* CmC0-**O 03 ε • -X -\ΟΧ<Μ e X Cm-4-> Cm v · *JCO Xr <0—» ·“ rx — - ·—. v> -* E-O (Min <n - - r- -XX • #—< ——— - ir>\£> ΣΕ --^.->r~- «. ω E ·* --o —«· -r— r— 9^ •χ. \O-KT - · - ό ε v> »ήΣ2χπ:χ rMn—'—'-'	ιη cn -ΜΓ CO » ΟΓ-03 · *** νΟΟ EU3CM * ·— ΣΕ -rΌ^- —' ν» -^-. .^•ο -ιΐ ε - Κ—'XCM ΓΟ CO<χ>^ •CO «-Η Λ ^CM X ν>«Ο xJDO - r* X · CO ε - «Λ 10Χ -X tCt-ιΧΓ) CM — m m -r*. r»- - X χ * ΕΜ0Γ-Γ^ X - - - ν>-ο ε UDXXX —CMCMr^ CM’-'--'	- ν> -- -X ν> XCMX3 ΟΟ<~4 10 ΙΟCQ · ΙΟ co • * -X · ΧΟ1- Ο- U7 ·“< «Ο - LOX <30 Μ·—· Γ — · • mr* cd·—ir* * » COr^CO -*^^40 ΙΛ <ΛΌ - - -X XXXa-M CO CM ^ CM O<-IKP^T 03·—103 * x- O CMrr**—·
nmr data	v ·—< 0 Λ ά N 0	fM X X CD o Μ*x. §	«Μ X X o CD O O <0 X CD	»M X X o cd XT ·*. O </) X o	NJ X X ο ο *ΞΓ δ νο X ο	fM X 3: ο θ -« δ νο X ο	fM X X CD CD CO **. «·» O
	1m	9	•	•			o
X		Ό	Ό	-cf	Ό	Ό	<->
	TD
	o E	o	<0 LU	o	Ο	·—« CJ	o

	tí· o			o	Ο
	10		o	ο •—4
	0). 44.	co		·—·	in
0	Ci	vd <0		o CM	r<—4
4->	—Η *	·—»
« Ό	*< 43	-CD 10 CD	CD CD	10 <	ΓΟΟ	θ ο	CD CD
M E	£ Λ-	r*- <Min 10 CD	CM CM SO	CO o KO	CM S	δ σι 10	r* CD uO

						TĎ X	<_> X
0	u Φ	o	*» o	·-> o		ο	o ··
MU E W	u 0 >	w X, n r> o	•λ Z •n r·» X ·» o o	z* *» X 9 r·» O	X «ο Ο	ζ af> *η X U3	x_ rt O
		cn	CD CO	1O CTv	ΓΟ ο	Ο	UD
		o o>	CD CH	O 0»		σ*	cn
	1 ¹ ' 1X3

CZ 288935 Β6 «Ίβρ juiu η. sw

CO

4Λ v»*©*-*

XX

Cjr)^*<Nr* r*. ’Μ*

0*000 KD rv.

e -o s

CM*-» X jO^

0*7 r^XOO *. s f**CO e^r — e ro^r · *—*ď>·—*

-ooiocm —cxicn X **· «w ·*· * ť\jQM)r^rs <*>—r^

4/> * ίζ·—€0·0 — mov ε e · -— · Z·»^**·**» XX a» oca^-cr CO - -vX SíV)0 *·«-4 CM *-*·*—r*« *^X v>r^* mro · CO XX ’ _W<SJ^ — cv*^’**' ε {= W) 4ΛΓ>. XXX CM<M«—* — •CM - · ζ^ζΛ*-«·-**· *-» *.ετ> χ^χχ ca -oca v> O -0—4 oxcrtm iDr*

d	<>
—
rf
c	oo OCM
o	VZ
+>	—co
G	CM*~
»r4
	-

«	—o
-p	<n·—
	•_MZ'*_MZ
	0**0
£	car*·
X	lOCM

• -*>O

X r*.

r>Z\OI σ» v»-•x> ·*η e *x ·*

X '•'J, ^- · co ·—'^cocxt •Λ — ca -Oc»—X »ca - ca— • v» tn r>ca - ΜΟιΛΧΧ cxiCO rowD <y>—.c? cr»—'Ό · txicar— o>

CO «Λ

- v> ca»—cnx · OíiOinnx

X»

0*0 χ -J X *A -o^· · •*€300 WtD CM CO Car**. O —--- — cwuor— o co CO «Λ cm —— r* *** ε <λ *λ

X X to^ncvr· *^-cmo*-*o

XICO <Λ —-«CO·—**Λ O - ’ *X **· v> v>r** *-* O*-***-* *** •cm co—*mO —*cou> ΕΦ □C w w · «· CMOOXr* • O

-*X<M V»<“» *ouo · o X — -CM — <*> — ·— V> v»

- -~hX —*X *-4 *-* e*o —

-—*»—.

X · -M<Ο·<ΓΓ>® ^aoc3 *- «·Γ·*. OOr** o* cm·——e « S «Η ιΛ · -X r^XXO cm *·*>* •32CZ 288935 B6

CM 10

CO V>

<M u->co

01CO vno·*10CM e

X—X O «ΛΟ

-x x^x CO 0^^ — — 01

XX*-*

CM »0 —'—•©l

V)T)

- -O X X CM CO CM *. —co £3t0 COr* 1O

CO^cr o· O* = vi • '-CO — ·

C> —í- X e --CM

ZOiD O— *

CMCOlO *»- xXM ooco e «λ*** > · v>

xx · lOOX e εχ

Xr»rx <*> ♦ O

OCO ·**. oir*·

X —* CO <7* — CM

COfs.

CM *· CO 10 · . VlCO · X v>Xr** • rO X x COCM-£^

- v> co<nx cocO-^r X

CM 00

OJ

X _{Λ Λ}

CD «η -ιΛι0 -x-^01 X e *- < Γ)Ο 01 X X •wCM—· · ’ cm—

X*10 V»

XX CM^·*

101010 co^o

OJ <*><**> r>. u in JO

OCJOO* θ’—*·“*

QGirs^ O · *O <*ωοχ E X.OJ

DX oun —

Γ)ιηο «•^.kO ***· v> e •-«cmio ví 01—Ό — wu Ojr^vOO Ο» · · • <ími -*~*r CO»-* e

CMOO10 —•o —<n

XT •Γ'*· o*** v>

O ·*-* • I ví o ro · r*. XX •CM*“* CM ——

-33·

c	o
h	α·
MB	u
ε	0
	N
Vi	>

.34.

Claims

Průmyslová využitelnost

Předkládaný vynález poskytuje farmaceuticky použitelné sloučeniny vykazující účinnost modulátorů multidrogové rezistence (MDR). Vynález poskytuje syntetické postupy příprav těchto sloučenin a postupy příprav farmaceutických a veterinárních přípravků, jež je obsahují.

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Piperazindionové deriváty obecného vzorce I kde R¹je:

-H

- skupina obecného vzorce -(NH)_t-COR³, kde t = 0 nebo 1 a R³ je;

(i) skupina obecného vzorce A, kde v = 0 pokud t = 1 a v = 1 pokud t = 0; a n = 0 nebo 1 a m = 0,1, 2 nebo 3, přičemž alespoň jedno n nebo m není 0 a buď (a) R⁴ je H nebo Ci-C6 alkyl a R⁵ je Ci-C6 alkyl případně substituovaný jednou nebo dvěma fenylovými skupinami, fenylová skupina nebo skupiny jsou dále případně substituovány jednou nebo dvěma Ci-Ce alkoxy skupinami; nebo (b) R⁴ a R⁵ spolu s atomem dusíku, k němuž jsou navázány, tvoří heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecných vzorců 1 až 4

-35CZ 288935 B6 kde R⁶ a R⁷ jsou stejné nebo odlišné a jsou H nebo Ci-C6 alkoxy, nebo spolu tvoří methylendioxy skupinu; Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je Ci-Cé alkyl nebo fenyl případně substituovaný CF3;

(ii) skupina obecného vzorce B —NH—(CH₂)_P—Z (B), kde p = 1 nebo 2 a Z je C₂-C₆ alkenyl nebo fenyl případně substituovaný C]-C₆ alkoxylem; a (iii) skupina obecného vzorce C (C) kde R⁹ je Cj-C₆ alkyl, pyrimidinyl nebo fenyl případně substituovaný Ci-C₆ alkoxylem; a (iv) skupina obecného vzorce F (F) kde w = 1,2 nebo 3 a L je heterocyklická skupina výše definovaného obecného vzorce 1;

- skupina obecného vzorce D

R1O —O-CHzCH(OH)—CH₂—N_x ( D )

RÝl

-36CZ 288935 B6 kde R¹⁰ a R¹¹ jsou stejné nebo odlišné a jsou Ci-C₆ alkyl; a

- skupina obecného vzorce E kde s = 0 nebo 1 a r, stejná nebo odlišná, jsou 1, 2 nebo 3 a L je heterocyklická skupina výše definovaného obecného vzorce 1;

a R² je H nebo skupina výše definovaného obecného vzorce -COR³ za předpokladu, že jedna ze skupin R¹ a R² je H a druhá není H;

a farmaceuticky přijatelné soli definovaných sloučenin.
2. Piperazindionové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R¹ je H a R² je skupina COR³, kde R³ je skupina obecného vzorce A.
3. Piperazindionové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R² je H a R¹ je skupina -COR³, kde R³ je skupina obecného vzorce A, nebo skupina obecného vzorce B, kde Z je ethenyl nebo fenyl substituovaný dvěma Q-Cé alkoxy skupinami, nebo skupina obecného vzorce C, kde R² je methyl, pyrimidinyl nebo fenyl.
4. Piperazindionové deriváty podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 3, obecného vzorce I, kde ve vzorci A je n = 0 a m = 2 nebo η = 1 a m = 0, 1,2 nebo 3, nebo η = 1 a m = 0 a buď (a) R⁴ je Ci-C6 alkyl a R⁵ je C]-C6 alkyl substituovaný na terminálním atomu uhlíku dvěma nesubstituovanými fenylovými skupinami nebo jednou fenylovou skupinou disubstituovanou Ci-C₆ alkoxy skupinami; nebo (b) R⁴ a R⁵ vytvářejí spolu s atomem dusíku, k němuž jsou navázány, heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecného vzorce 1, kde R⁶ a R⁷ jsou současně H, nebo současně C₁-C₆ alkoxy, nebo spolu vytvářejí methylendioxy skupinu; skupin obecného vzorce 2, kde Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je methyl, fenyl nebo trifluormethylfenyl; skupin vzorce 3; a skupin vzorce 4.
5. Piperazindionové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R² je H a R¹ je skupina obecného vzorce D nebo E.
6. Piperazindionové deriváty podle nároku 1 až 5, kterými jsou l-(4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl-4-(2pyrimidyl)piperazin l-(4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4methylpiperazin hydrochlorid l-(4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4-(4methoxyfenyl)piperazin hydrochlorid

N-allyl-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

-37CZ 288935 B6

N-(2-difenyImethylmethylaminoethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid

N-(2-(l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid

N-(3,4-dimethoxyfenethyl)-4-((3Z,6H)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(4-fenyl-l-piperazinyl)methylfenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid

N-(2-(4-methyl-l-piperazinyl)ethyl-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(2-morfblinoethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid

N-(2-morfolinofenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid

N-(4-(2-(l,2,3,4-tetrahydro-[3-karbolin-2-yl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(l,2,3,4-tetrahydro-(3-karbolin-2-yl)methylfenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(4-fenyl-l-piperazinyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,6-dioxo3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(4-trifluormethylfenyl)-l-piperazinyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(4-(4~chlorfenyl)-4-hydroxypiperidino)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)fenyl)-4-((3Z,6Z)-6benzyliden-l-methyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,6-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid (3Z,6Z}-6-benzyliden-3-(4~(3-dimethylamino-2-hydroxypropoxy)benzyliden-l-methyl-2,5piperazindion (3Z,6Z)-6-benzyliden-3-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzyliden)-l-methyl-2,5-piperazindion

-38CZ 288935 B6

N-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid

N-(4-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)methylfenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(2-(3,4-dimethoxyfenethyl)methylamino)ethyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl~2,5dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(3,4-dimethoxyfenethyl)methylamino)ethyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-lmethyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(2-(4-fenyl-l-piperazinyl)ethyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo3-piperazinyliden)methylbenzamid

N-(4-(3-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)propyl)fenyl)-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzamid hydrochlorid
7. Piperazindionové deriváty podle nároku 1 až 5, kterými jsou

N-(2-(2,2-difenylethyl)methylaminoethyl-3-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3piperazinyliden)methylbenzamid (3Z,6Z)-6-benzyliden-3-(4-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzyloxy)benzyliden-l-methyl-2,5-piperazindion (3Z,6Z)-6-benzyliden-3-(3-(4-(2-(6,7-dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzyloxy)benzyliden-l-methyl-2,5-piperazindion

N-(4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylfenyl)-4-(2-(6,7dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)ethyl)benzamid l-(4-((3Z,6Z)-6-benzyliden-l-methyl-2,5-dioxo-3-piperazinyliden)methylbenzoyl)-4-(6,7dimethoxy-l,2,3,4-tetrahydro-2-isochinolyl)methylpiperidin
8. Farmaceutický nebo veterinární přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo a jako základní účinnou složku piperazindionové deriváty podle kteréhokoli z předcházejících nároků 1 až 7.
9. Způsob přípravy piperazindionových derivátů vzorceI podle nároku 1, vyznačující se tí m, že I-acetyl-3-benzyliden-4-methyl-2,5-piperazindion reaguje s aldehydem obecného vzorce III

OHC (IH) kde R¹ a R² jsou definovány jako v nároku 1, v organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze; a pokud je to žádoucí, převede se výsledná sloučenina na příslušnou farmaceuticky přijatelnou sůl.

-39CZ 288935 B6
10. Piperazindionové deriváty podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 pro použití jako modulátoru multidrogové rezistence.
11. Použití piperazindionových derivátů podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 pro přípravu léčiva určeného na modulaci multidrogové rezistence.
12. Piperazindionové deriváty obecného vzorce I (I) kde R* je:

-H

- skupina obecného vzorce -(NH)t-COR³, kde t = 0 a R³ je:

(i) skupina obecného vzorce A,

R4

Z ^XR5 (A) kde v=l, n = 0 nebo 1 a m = 0,1,2 nebo 3, přičemž alespoň jedno n nebo m není 0 a buď (a) R⁴ je H nebo Ci~C6 alkyl a R⁵ je Ci-Ce alkyl případně substituovaný jednou nebo dvěma fenylovými skupinami, fenylová skupina nebo skupiny jsou dále případně substituovány jednou nebo dvěma Ct-C₆ alkoxy skupinami; nebo (b) R⁴ a R⁵ spolu s atomem dusíku, k němuž jsou navázány, tvoří heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecných vzorců 1 až 4:

(4)

-40CZ 288935 B6 kde R⁶ a R⁷ jsou stejné nebo odlišné a jsou H nebo Ci-C6 alkoxy, nebo spolu tvoří methylendioxy skupinu; Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je Ci-C6 alkyl nebo fenyl případně substituovaný CF3;

(ii) skupina obecného vzorce B —NH—(CH₂)_P—Z (B), kde p = 1 nebo 2 a Z je C₂-C6 alkenyl nebo fenyl případně substituovaný Ci-C₆ alkoxylem; a (iii) skupina obecného vzorce C (C) kde R⁹ je Ci-C₆ alkyl, pyrimidinyl nebo fenyl případně substituovaný C]-Cé alkoxylem; a

- skupina obecného vzorce D

R1O —O-CHzCHíOH)—CH₂—N_x (D)

Rl« kde R¹⁰ a R¹¹ jsou stejné nebo odlišné a jsou C]-C₆ alkyl; a

- skupina obecného vzorce E kde s = 0 a r je 1,2 nebo 3 a L je heterocyklická skupina výše definovaného obecného vzorce I;

a R² je H nebo skupina výše definovaného obecného vzorce -COR³ za předpokladu, že jedna ze skupin R¹ a R² je H a druhá není H;

a farmaceuticky přijatelné soli definovaných sloučenin.
13. Piperazindionové deriváty podle nároku 12, obecného vzorce I, kde ve vzorci A je n = 0 a m = 2 nebo η = 1 a m = 0,1, 2 nebo 3, nebo η = 1 a m = 0 a buď (a) R⁴ je Ci-C6 alkyl a R⁵ je Ci-C6 alkyl substituovaný na terminálním atomu uhlíku dvěma nesubstituovanými fenylovými skupinami nebo jednou fenylovou skupinou disubstituovanou Ci-Ce alkoxy skupinami; nebo (b) R⁴ a R⁵ vytvářejí spolu s atomem dusíku, k němuž jsou navázány, heterocyklickou skupinu volenou ze skupin obecného vzorce 1, kde R⁶ a R⁷ jsou současně H, nebo současně Ci-Ce alkoxy, nebo spolu vytvářejí methylendioxy skupinu; skupin obecného vzorce 2, kde Y je O nebo -NR⁸, kde R⁸ je methyl, fenyl nebo trifluormethylfenyl; skupin vzorce 3; a skupin vzorce 4.

-41CZ 288935 B6
14. Farmaceutický nebo veterinární přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo a jako základní účinnou složku piperazindionové deriváty podle nároků 12 nebo 13.
15. Způsob přípravy piperazindionových derivátů obecného vzorce I podle nároku 12, vyznačující se tím,že l-acetyl-3-benzyliden-4-methyl-2,5-piperazindion reaguje s aldehydem obecného vzorce III:

OHC (ΙΠ) kde R¹ a R² jsou definovány jako v nároku 12, v organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze; a pokud je to žádoucí, převede se výsledná sloučenina na příslušnou farmaceuticky přijatelnou sůl.
16. Piperazindionové deriváty podle nároků 12 nebo 13 pro použití jako modulátoru multidrogové rezistence.
17. Použití piperazindionových derivátů podle nároků 12 nebo 13 pro přípravu léčiva určeného na modulaci multidrogové rezistence.