CZ200755A3 - Peptidy protilátek anti-CD154 - Google Patents

Peptidy protilátek anti-CD154 Download PDF

Info

Publication number
CZ200755A3
CZ200755A3 CZ20070055A CZ200755A CZ200755A3 CZ 200755 A3 CZ200755 A3 CZ 200755A3 CZ 20070055 A CZ20070055 A CZ 20070055A CZ 200755 A CZ200755 A CZ 200755A CZ 200755 A3 CZ200755 A3 CZ 200755A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
amino acid
ser
glu
thr
asn
Prior art date
Application number
CZ20070055A
Other languages
English (en)
Inventor
Vlijmen@Herman Van
Alexandrovic Lugovskoy@Alexey
J. M. Hanf@Karl
Original Assignee
Biogen Idec Ma Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogen Idec Ma Inc. filed Critical Biogen Idec Ma Inc.
Publication of CZ200755A3 publication Critical patent/CZ200755A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2299/00—Coordinates from 3D structures of peptides, e.g. proteins or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)

Abstract

Resení poskytuje peptidy a jejich fragmenty, a také protilátky a jejich fragmenty, které obsahují peptidy podle resení nebo jejich fragmenty, pricemzpeptidy podle resení obsahují alespon jednu substituovanou aminokyselinu ve srovnání s protilátkou 5c8 divokého typu. Resení se dále týká kompozic a léku k lécení nemocí a poruch souvisejících s CD154.

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká protilátek anti-CD154 a jejich fragmentů, které obsahují alespoň jednu substituovanou aminokyselinu ve variabilní oblasti lehkého nebo těžkého řetězce nebo variabilních oblastech obou těchto řetězců, a dále se týká kompozice obsahující takové protilátky nebo jejich fragmenty a použití těchto protilátek nebo jejich, fragmentů.
Dosavadní stav techniky
Vývoj humorální imunity a buňkami zprostředkované imunity je řízen interakcí aktivovaných pomocných T lymfocytů s buňkami prezentujícími antigen („APC) a efektorovými T lymfocyty. Aktivace pomocných T lymfocytů není závislá pouze na interakci receptoru T lymfocytů specifického pro antigen („TCR) se svým rozpoznávaným ligandem, komplexem peptid-MHC, ale také vyžaduje koordinovanou vazbu a aktivaci celou řadou molekul buněčné adheze a kostimulačních molekul (SalazarFontana et al., Curr. Opin. Hemat., 2001, 8, 5).
Rozhodující kostimulační molekulou je CD154 (také známa jako ligand CD40, CD40L, gp39, T-BAM, molekula aktivující T lymfocyt, TRAP), transmembránový protein typu II, který je ·· · · ·· ·· ·· ···· • · · · · · · · · · · ··· · · · · · • · ···· · · · · · · ··
- 2 exprimován v závislosti na aktivaci časově omezeným způsobem na povrchu CD4+ T lymfocytů. CD154 je také exprimován po aktivaci na podskupině CD8+ T lymfocytů, basofilech, žirných buňkách, eosinofilech, přirozených zabiječich (NK buňkách), B lymfocytech, makrofázích, dendritických buňkách a krevních destičkách. Protějšek receptoru CD154, CD40, je membránový protein typu I, který je konstitutivně a široce exprimován na povrchu mnoha buněčných typů, včetně APC (Foy et al., Ann. Rev. Immunol., 1996, 14, 591).
Signalizace přes CD40 prostřednictvím CD154 iniciuje kaskádu událostí, které vedou k aktivaci buněk nesoucích receptor CD40 a optimálnímu instruování („priming) CD4+ T lymfocytů. Konkrétně analogická interakce mezi CD154 a CD40 podporuje diferenciaci B lymfocytů na buňky secernující protilátky a paměťové B lymfocyty (Burkly, v Adv. Exp. Med. Bio., Vol. 489., D. M. Monroe, U. Hedner, M. R. Hoffman, C. Negrier, G. F. Savidge a G. C. I. White, eds. Kluwer Academic/Plenum Publishers, 2001, p.135). Interakce CD154
CD40 dále podporuje imunitu zprostředkovanou buňkami přes aktivaci makrofágů a dendritických buněk a vytváření přirozených zabíječů a cytotoxických T lymfocytů (Burkly, viz výše).
Bylo ukázáno, že interakce CD40-CD154 je důležitá u některých experimentálně indukovaných autoimunních chorob, jako je například kolagenem indukovaná artritida, experimentální alergická encefalomyelitida („EAE), ooforitida, kolitida, léky indukovaná lupusová nefritida. Bylo specificky ukázáno, že indukce onemocnění ve všech těchto modelech může být blokována antagonisty CD154 v době podání antigenu (Burkly, viz výše).
Blokáda onemocnění použitím antagonisty anti-CD154 byla také pozorována ve zvířecích modelech spontánních autoimunních chorob, včetně diabetů závislého na inzulínu a lupusové • · · · · · • * · · »
- 3 nefritidy, a také v modelech reakce štěpu proti hostiteli, transplantace, plicní fibrózy a aterosklerózy (Burkly, viz výše) .
Ačkoli se prokázalo, že glykosylované protilátky anti-CDl54 jsou použitelné pro prevenci a léčení některých chorob souvisejících s imunitní reakcí, u některých pacientů je léčba, která tyto protilátky používá, někdy komplikována tromboembolickou aktivitou. Ačkoli mechanismus tohoto vedlejšího účinku není znám, mohl by zahrnovat spojení FcgRIIa a CD154 na krevních destičkách prostřednictvím protilátky anti-CDl54 nebo jejími agregáty, což vede k nepřiměřené aktivaci krevních destiček. Tento účinek by také mohla potencovat vazba k dalším receptorúm Fcy a komplementu. Tudíž formy protilátek anti-CD154, které se nevážou k efektorovým receptorúm, mohou být pro terapeutické použití bezpečnější a/nebo účinnější.
Mechanismus, kterým protilátky anti-CD154 inhibují imunitní funkci, může být složitější než jednoduchá vazba k CD154, aby se blokovala interakce s CD40, a ve skutečnosti může zahrnovat i příspěvek efektorových drah. Například vazba protilátky k antigenu může indukovat deleci aktivovaných T lymfocytú přes vazbu Fc domény k receptorúm Fcy nebo složkám komplementu. Alternativně, vazba protilátky k CD154 může být zesílena vytvořením buněčného povrchového „skeletu z protilátky na buňkách nesoucích receptor Fcy. Kromě toho přístup protilátky na místo jejího působení může být podpořen vazebnými interakcemi receptoru Fcy.
Rozhodující úloha CD154 v řízení funkce jak humorální tak buňkami zprostředkované imunitní reakce vyvolala velký zájem o použití inhibitorů této dráhy pro terapeutickou imunomodulaci (patent Spojených států č. 5 474 771) . Bylo ukázáno, že protilátky anti-CDl54 jako takové jsou prospěšné u • · • · ·· ····
celé řady modelů imunitní reakce pro proteiny nebo genovou terapii, alergeny, a transplantaci (patent Spojených států č viz výše).
jiné terapeutické autoimunni podněty 5 474 771; Burkly,
V důsledku toho přetrvává potřeba protilátek, které nevyvolávají silnou imunitní reakci, ale přesto se silně vážou ke svým antigenům, a způsobů identifikace takových protilátek, a zejména zlepšených protilátek CD154.
Podstata vynálezu
Shrnutí vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje peptidy obsahující aminokyselinovou sekvenci alespoň z 80 % identickou se sekv.
id. č.: 3, nebo její fragment, kde aminokyselina v každé
z poloh 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 54,
57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101, nezávisle, je
kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina, kde peptid nesestává ze sekv. id. č. : 1, a kde fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101, a když tvoří komplex s těžkým řetězcem divokého typu 5c8, může se peptid nebo jeho fragment vázat k CD154.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 24 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu a Lys; aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; aminokyselina ···«
··· · · · · · ♦ ·· ···· ·· ···· ·» ·
- 5 v poloze 27 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin, Asn, Cys, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 28 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr,
Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 30 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly,
His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys;
aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Arg, Ala, Ile, Leu a Lys;
aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří
Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Asp,
Glu, Arg, Ala, Val a Lys; aminokyselina v poloze 34 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met,
Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 35 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp a Tyr; aminokyselina v poloze 36 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp, Ala, Leu a Glu; aminokyselina v poloze 38 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří His, Asn, Cys, Gin, Gly, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 58 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Leu, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 59 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Glu, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr a Asp;
9» 999« • 9 aminokyselina v poloze 60 je vybrána ze skupiny, kterou tvoři Ser, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 93 je vybrána ze skupiny, kterou tvoři Gin, Asn, Cys, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 95 je vybrána ze skupiny, kterou tvoři Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 96 je vybrána ze skupiny, kterou tvoři Trp, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 97 je vybrána ze skupiny, kterou tvoři Glu a Asp; aminokyselina v poloze 98 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Ala, Leu, Pro, Val a Glu; aminokyselina v poloze 100 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Pro, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu; a aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser a Asp; aminokyselina v poloze 27 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin a Glu; aminokyselina v poloze 28 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg a Glu; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, His, Asn, Thr, Val a Trp; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Phe, Ile, Leu, Met a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Ala, Phe, Met, Val, Trp, Asp, Arg, Tyr a Gin; aminokyselina v poloze 34 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Ala, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, Val a Trp; aminokyselina v poloze 36 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Ala, Phe, Leu a Trp; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr a Glu; aminokyselina v poloze 96 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Trp, Asp, Glu, His, Arg, Ser a Thr; a aminokyselina v poloze ·· ···· • · ·»·· · ♦ · * Λ · · · · · ·· • · ···· · · · · · · ·>
- Ί 98 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Ala, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 27 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser a Tyr; aminokyselina v poloze 98 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 28 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Val; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp a Arg; a aminokyselina v poloze 54 je Glu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří His a Asn; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Trp a Phe; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Trp, Tyr a Gin; aminokyselina v poloze 36 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Leu a Trp; aminokyselina v poloze 96 je His; a aminokyselina v poloze 98 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe a Gin.
·· ···· • ·
V některých provedeních aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser a Asp; aminokyselina v poloze 27 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin a Glu; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser a Asn; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser a Phe; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Gin a Tyr; aminokyselina v poloze 98 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile a Gin; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser;
aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr;
aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 6.0 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, ·· ·· ·· ·· ·· • v ··· ···« • · · ··· ··· ·« ···· ·* ···· ·· ♦
- 9 poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 je Asn; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 a poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 32 je Phe; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser;
·· ···· ♦ · ·· «* ·* « ·· · * · « ♦ • · · » *
9 9 9 9 9
9 9 9 99 9 9 99 9 9
- 10 aminokyselina v poloze 27 a poloze 33 je Gin; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 33 je Tyr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 a poloze 98 je Gin; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
·· Μ··
- 11 V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Asn; aminokyselina v poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 32 je Phe; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His;
·· ·♦·· • « · · · · ··· Φ· ···· ·· ···· ·· *
- 12 aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Gin; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Tyr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je
4444
- 13 44 4444
4444 »44 »44 44 ♦
Gin; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 a poloze 36 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze poloze 93 je Gin;
aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 poloze 95 je Ser;
v poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze aminokyselina 98 je Ile;
aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 a poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, aminokyselina 57 je Asn;
kde aminokyselina v poloze 27 poloze je Gin;
aminokyselina v poloze 26, poloze 32, poloze 30, poloze 35,
4· ·♦<·« poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze je Ile;
aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze aminokyselina 57 je Asn;
aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 31 je Val; a aminokyselina v poloze 100 je Pro.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze poloze 93 je Gin;
aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 33 je Asp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, je Gin;
kde aminokyselina v poloze 27 a poloze
aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze
poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser;
v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina
Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze
je Arg;
aminokyselina v poloze 34 a poloze 36 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 54, poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro.
«« ·· • 9 9 · • · ·
9 9
9 9
9999
99
9 9 9
9 9
9 9 9
4 9
9999 ···«
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3,
Gin;
kde aminokyselina v poloze poloze je aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
Předkládaný vynález také poskytuje peptidy, které obsahují aminokyselinovou sekvenci alespoň z 80 % identickou se sekv. id. č. : 6, nebo její fragment, kde aminokyselina v každé z poloh 28, 30, 31, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58,
59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104,
105, 106 a 107, nezávisle, je kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina, kde peptid nesestává ze sekv. id. č. : 4, a kde fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 28, 30,
31, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, ·* ···· • · · · * · · ·« ·· ·· ·· ···· ♦·
- 16 63, 64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107, a když tvoří komplex s lehkým řetězcem divokého typu 5c8, může se peptid nebo jeho fragment vázat k CD154.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 28 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Asp, Glu, Arg, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp a Trp; aminokyselina v poloze 30 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asp, Glu, Arg, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Arg, His, Lys, Gin a Trp; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asp, Glu, Arg, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asp, Glu, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr,
Trp, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 35 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 50 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Glu a Asp; aminokyselina v poloze 52 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Ala, Leu, Val a Lys; aminokyselina v poloze 53 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Pro, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp,
Tyr, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe,
Thr, Trp, Tyr, Arg, Lys a Glu; aminokyselina v poloze 55 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Glu, Lys, Gin, Ser, Thr,
Met a Val; aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp, Glu, Phe a Leu; aminokyselina v poloze 58 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His,
Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 59 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, »* ··*·
- 17 Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 60 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe, Asp, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, Glu, Arg, Lys, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 61 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 62 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Glu a Asp; aminokyselina v poloze 63 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Lys, Asn, Cys,
Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Glu, Asp,
Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 64 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met,
Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 65 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 66 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 99 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asp, Glu a Ala; aminokyselina v poloze 100 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp a Glu; aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gly, Phe a Leu; aminokyselina v poloze 102 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr a Lys; aminokyselina v poloze 103 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Lys, Arg a Val; aminokyselina v poloze 104 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp a Glu; aminokyselina v poloze 105 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Met, Asp, Glu, Arg, His, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, Ser, Thr, Trp a Tyr; aminokyselina v poloze 106 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp a Glu; a aminokyselina v poloze 107 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val.
·« «·*· « ·
• · · ·· ·· ·
V některých provedeních aminokyselina v poloze 28 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, His, Asn, Gin, Ser, Thr a Glu; aminokyselina v poloze 30 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, His, Asn, Gin, Ser, Tyr a Arg; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Gin a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Ala, Pro, Ser, Thr, Val a Trp; aminokyselina v poloze 52 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Ala, Phe, His, Leu, Met, Ser, Thr, Val a Trp; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Thr, Trp, Tyr a Phe; aminokyselina v poloze 55 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Glu, Lys, Gin, Ser, Thr, Met a Val; aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp, Phe a Leu; aminokyselina v poloze 59 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Ala, Phe, Leu, Met, Pro, Val, Trp, Asp a Tyr; aminokyselina v poloze 99 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser a Ala; aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gly, Phe a Leu; a aminokyselina v poloze 103 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Met, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je nezávisle vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val, Trp, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gly, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; aminokyselina v poloze 103 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52,
« · • · ·
·· •9 9··« • 9 • · • 9
9 •
poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Trp a Gin; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Phe a Gin; aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp, Leu a Phe; aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gly, Leu a Phe; aminokyselina v poloze 103 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn a Tyr; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 28 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Phe; aminokyselina v poloze 54 je Thr; a aminokyselina v poloze 59 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp a Leu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 30 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří His a Arg; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Trp, Val a Pro; aminokyselina v poloze 52 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Met a Trp; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Phe a Gin; aminokyselina v poloze 55 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Met, Lys a Val; aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe a Leu; aminokyselina v poloze 59 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe a Tyr; aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe a Leu; a aminokyselina v poloze 103 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří His a Tyr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Trp; aminokyselina v poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina
v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a
poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a
poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a
poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a
aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Gin; aminokyselina v poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a • « • ♦ · poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 54 je Phe; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 54 je Gin; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser;
• ·
4 • · • · • · · · aminokyselina v poloze 57 je Phe; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Leu; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Phe; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina • · • · • ·
- 23 v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Leu; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Tyr; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp;
- 24 aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, ·· ····
- 25 poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 33, poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 59, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je
Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr;
aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je
Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
- 26 V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 59 je Leu; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
Předkládaný vynález také poskytuje kompozice obsahující jakýkoliv z peptidů popsaných v tomto textu.
Předkládaný vynález také poskytuje molekuly nukleové kyseliny kódující jakýkoliv z peptidů popsaných v tomto textu.
Předkládaný vynález také poskytuje vektory obsahující jakoukoliv z molekul nukleové kyseliny popsaných v tomto textu.
Předkládaný vynález také poskytuje kompozice obsahující jakoukoliv z molekul nukleové kyseliny nebo vektorů popsaných v tomto textu.
Předkládaný vynález také poskytuje hostitelské buňky obsahující jakoukoliv z molekul nukleové kyseliny nebo vektorů popsaných v tomto textu.
Předkládaný vynález také poskytuje protilátky nebo jejich fragmenty, obsahující jakýkoliv z peptidů popsaných v tomto textu, přičemž protilátky nebo jejich fragmenty se mohou vázat k humánnímu CD154.
··
V některých provedeních je fragment protilátky vybrán ze skupiny, kterou tvoří jednořetězcová protilátka (scFv), fragment F(ab')2, fragment Fab a fragment Fd.
V některých provedeních je protilátka nebo její fragment značena detekovatelným markérem, jako je například markér vybraný ze skupiny, kterou tvoří radioaktivní izotop, enzym, fluorochrom, koloidní zlato, barvivo a biotin.
V některých provedeních je protilátka nebo její fragment konjugována k terapeutickému agens, jako je například agens vybrané ze skupiny, kterou tvoří radioizotop, toxin, toxoid a chemoterapeutikum; nebo je konjugována k perličce.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje alespoň jeden polymer s vysokou molekulovou hmotností, jako je například polymer vybraný ze skupiny, kterou tvoří polyethylenimin a polylysin.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje alespoň jednu aminokyselinu, která je vybrána ze skupiny, kterou tvoří PEGylované a glykosylované aminokyseliny.
Předkládaný vynález jakoukoliv z protilátek v tomto textu.
také poskytuje nebo jejich kompozice fragmentů obsahuj ící popsaných
Předkládaný vynález jakoukoliv z protilátek v tomto textu.
také poskytuje soupravy nebo jejich fragmentů obsahuj ící popsaných
Předkládaný vynález se dále týká léčení nebo prevence lidských onemocnění nebo poruch souvisejících s CD154, které spočívá v podávání terapeuticky nebo profylakticky účinného množství protilátky podle vynálezu nebo jejího fragmentu (podle kteréhokoliv z nároků 55 až 77) nebo kompozice podle ·· ·♦·· onemocnění nebo se jim zabrání.
• · • · • · • * • · • ·
- 28 vynálezu (podle nároku 53) člověku tak, že porucha související s CD154 jsou zmírněny nebo
V některých provedeních vynálezu onemocnění nebo porucha u člověka je zánět, jako je například zánět vybraný ze skupiny, kterou tvoří zánět sdružený s artritidou, kontaktní dermatitidou, syndromem hyperimunoglobulinémie IgE, zánětlivými střevními onemocněními, alergickým astmatem a idiopatickými zánětlivými onemocněními.
V některých provedeních artritida je vybrána ze skupiny, kterou tvoří revmatoidní artritida, zánětlivé artritidy jiné než revmatického původu, artritida sdružená s Lymeskou nemocí a zánětlivá osteoartritida.
V některých provedeních idiopatické zánětlivé onemocnění je vybráno ze skupiny, kterou tvoří psoriáza a systémový lupus erythematodes.
V některých provedeních onemocnění nebo porucha jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří myasthenia gravis, Gravesova choroba, idiopatická trombocytopenická purpura, hemolytická anémie, diabetes mellitus, Crohnova choroba, sclerosis multiplex a autoimunní choroby indukované léky.
V některých provedeních porucha je rejekce transplantovaného orgánu pacientem, jako je například rejekce vybraná ze skupiny, kterou tvoří transplantované srdce, ledvina, játra, kůže, buňky Langerhansových ostrůvků pankreatu a kostní dřeň.
V některých provedeních porucha je vybrána ze skupiny, kterou tvoří reakce štěpu proti hostiteli, alergické reakce, autoimunní reakce a fibróza u pacienta, jako je například plicní fibróza nebo fibrotické onemocnění.
V některých provedeních plicní fibróza je vybrána ze skupiny, kterou tvoří plicní fibróza sekundární při syndromu ·« ···· ·♦ ♦·.
» · · « respirační tísně u dospělých, plicní fibróza indukovaná léky, idiopatická plicní fibróza a hypersenzitivní pneumonitida;, a kde fibrotické onemocnění je vybráno ze skupiny, kterou tvoří hepatitida C, hepatitida B, cirhóza, cirhóza jater sekundární při toxickém poškození, cirhóza jater sekundární při užívání léků, cirhóza jater sekundární při virové infekci a cirhóza jater sekundární při autoimunním onemocnění.
V některých skupiny, kterou spondylartritidy, tuberkulózy.
provedeních autoimunní reakce je tvoří reakce u Reiterova
Lymeské nemoci, infekce HIV, vybrána ze syndromu, syfilis a
V některých provedeních onemocnění nebo porucha je gastrointestinální onemocnění, jako je například nemoc vybraná ze skupiny, kterou tvoří dysmotilita jícnu, zánětlivá střevní onemocnění a sklerodermie; nebo je to vaskulární onemocnění, kde vaskulární onemocnění je vybráno ze skupiny, kterou tvoří ateroskleróza a reperfuzní poškození.
V některých provedeních onemocnění nebo porucha je rakovinné bujení T lymfocytů, jako je například to vybrané ze skupiny, kterou tvoří T lymfocytární leukémie a lymfom.
Předkládaný vynález také poskytuje peptidy a jejich fragmenty pro použití při léčení lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154 a při výrobě léku pro léčení lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154.
Popis výhodných provedení
Předkládaný vynález poskytuje peptidy, zejména variabilní oblasti lehkého řetězce a těžkého řetězce, a jejich fragmenty, a protilátky a jejich fragmenty, které obsahují výše zmíněné peptidy, přičemž peptidy obsahují alespoň jednu substituci aminokyseliny ve srovnání s protilátkou divokého typu 5c8.
···· ι · · * ·· ···· 0
Termín „protilátka, jak se v tomto textu používá, zahrnuje monoklonální protilátky (včetně kompletních monoklonálních protilátek), polyklonální protilátky, multispecifické protilátky (například bispecifické protilátky), chimérické protilátky, protilátky s tzv. naroubovanými CDR, humanizované protilátky, humánní protilátky apod., a jejich fragmenty.
Slovní spojení „fragment protilátky nebo podobné, jak se v tomto textu používá, zahrnuje například lehký řetězec protilátky (VL), těžký řetězec protilátky (VH) , jednořetězcovou protilátku (scFv), fragment F(ab')2, fragment Fab, fragment Fab' , fragment Fd, fragment Fv a fragment protilátky s jednou doménou (DAb).
Termín „CDR, jak se v tomto textu používá, zahrnuje úseky určující komplementaritu, jak byly popsány například v Kabat, Chothia nebo MacCallum et al. (viz například Kabat et al. , V „Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1983; Chothia et al. , J. Mol. Biol., 1987, 196, 901 - 917; a MacCallum et al, J.
Mol. Biol., 1996, 262, 732 - 745).
Polohy aminokyselinových zbytků, které typicky zahrnují CDR, jak byly popsány každým z výše citovaných literárních odkazů, jsou pro srovnání uvedeny níže.
Definice CDR
Kabat Chothia MacCallum 5c8
VH CDR1 31-35 26-32 30-35 26-35
VH CDR2 50-65 53-55 47-58 50-66
VH CDR3 95-102 96-101 93-101 99-107
VL CDR1 24-34 26-32 30-36 24-38
VL CDR2 50-56 50-52 46-55 54-60
VL CDR3 89-97 91-96 89-96 93-101
·« »··»
Slovní spojeni „Konzervativní úsek („framework region), jak se v tomto textu používá, zahrnuje protilátkovou sekvenci, který je mezi CDR a odděluje je. Konzervativní úsek variabilní oblasti je tedy dlouhý přibližně mezi 100 až 120 aminokyselinami, ale týká se skutečně jen těch aminokyselin, které jsou vně CDR. Pro specifický příklad variabilní oblasti těžkého řetězce a pro CDR, jak byly definovány v Kabat et al., konzervativní úsek 1 odpovídá doméně variabilní oblasti zahrnující aminokyseliny 1 až 30; úsek 2 odpovídá doméně variabilní oblasti zahrnující aminokyseliny 36 až 49; úsek 3 odpovídá doméně variabilní oblasti zahrnující aminokyseliny 66 až 94 a úsek 4 odpovídá doméně variabilní oblasti od aminokyseliny 103 ke konci variabilní oblasti. Konzervativní úseky pro lehký řetězec jsou podobně odděleny každou z CDR variabilních oblastí. Podobně při použití definice CDR vytvořené Chothia et al. nebo McCallum et al. jsou hranice konzervativního úseku odděleny příslušnými CDR konci, jak bylo popsáno výše.
Termín „variabilní oblast, jak se v tomto textu používá, zahrnuje amino-koncovou část protilátky, která umožňuje vazbu antigenu k molekule, a která není konstantní oblastí. Termín je užíván tak, že zahrnuje i funkční fragmenty, například fragmenty vázající antigen, které si udržují některé nebo veškeré vazebné funkce celé variabilní oblasti.
Termín „protilátka 5c8 se týká protilátky, která váže CD154 a je předmětem popisu a nároků patentu Spojených států č.
474 771. Hybridom hu5c8 mAb je k dispozici ve sbírce ATCC pod č. HB10916. Aminokyselinové sekvence divokého typu pro variabilní oblasti lehkého řetězce a těžkého řetězce protilátky 5c8 jsou uvedeny v sekv. id. č. : 1 a sekv. id. č. : 4, v daném pořadí.
V jednom aspektu předkládaný vynález poskytuje deriváty protilátky 5c8 obsahující alespoň jednu substituci ·· ···*
-ír ·· • · · e · · · • · · ·» ···· • · • * ·· ·· ·*.
• · · i • * · • · · ·,.* ··*·
- 32 aminokyseliny ve variabilní oblasti lehkého řetězce. Variabilní oblast lehkého řetězce divokého typu 5c8 je uvedena v sekv. id. č.: 1 (aminokyselinová sekvence). Předkládaný vynález poskytuje peptidy obsahující variabilní oblast lehkého řetězce divokého typu 5c8, kde je vytvořena alespoň jedna substituce aminokyseliny (tj. peptidy neobsahují sekv. id. č. : 1) . Peptid lehkého řetězce může obsahovat celý lehký řetězec, včetně jak konstantní oblasti tak i variabilní oblasti, nebo může obsahovat pouze variabilní oblast. Peptid lehkého řetězce může také obsahovat celou variabilní oblast a část konstantní oblasti, která může mít rozsah od celé konstantní oblast minus jedna aminokyselina k jedné jediné aminokyselině konstantní oblasti nebo jakýkoliv rozsah mezi těmito hranicemi. Alternativně může peptid lehkého řetězce obsahovat variabilní oblast fúzovanou k jakékoliv nepříbuzné peptidové sekvenci, a tak tvořit fúzní protein.
V některých provedeních peptid lehkého řetězce obsahuje alespoň jednu substituci aminokyseliny v jakékoliv z následujících poloh variabilní oblasti lehkého řetězce
protilátky 5c8 divokého typu (viz sekv. id. č. : 1) : polohy
vybrané ze skupiny, kterou tvoří 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32,
33, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98,
100 a 101, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Takový peptid obsahující tyto polohy, které mohou obsahovat substituci aminokyseliny, je uveden v sekv. id. č.: 3 (aminokyselinová sekvence). Tyto peptidy lehkého řetězce mohou také obsahovat alespoň 2, alespoň 3, alespoň 4, alespoň 5, alespoň 6, alespoň 7, alespoň 8, alespoň 9, alespoň 10, alespoň 11, alespoň 12, alespoň 13, alespoň 14, alespoň 15, alespoň 16, alespoň 17, alespoň 18, alespoň 19, alespoň 20, alespoň 21, alespoň 22 nebo alespoň 23 substitucí aminokyselin nebo substituce v každé z těchto 24 poloh.
• ·
V některých provedeních peptid lehkého řetězce obsahuje alespoň jednu substituci aminokyseliny v jakékoliv z poloh 26, 27, 31, 32, 33 a 98, nebo jakékoliv z jejích podskupin. Takový peptid obsahující tyto polohy, které mohou obsahovat substituci aminokyseliny, je uveden v sekv. id. č. : 3 (aminokyselinová sekvence), kde polohy 24, 28, 30, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 100 a 101 jsou aminokyseliny divokého typu. Tyto peptidy mohou také obsahovat alespoň 2, alespoň 3, alespoň 4 nebo alespoň 5 substitucí aminokyselin nebo substituce v každé z těchto 6 poloh.
Substituovaná aminokyselina v každé z předcházejících poloh (tj . polohy 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101) může být každá, nezávisle, kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina. Konkrétní peptid lehkého řetězce může tedy obsahovat jednu nebo více substitucí aminokyselin, které jsou přirozeně se vyskytující aminokyseliny a/nebo jednu nebo více substitucí aminokyselin, které jsou přirozeně se nevyskytující aminokyseliny.
Jednotlivé substituce aminokyselin jsou vybrány z jakékoliv z následujících: 1) soubor aminokyselin s nepolárními postranními řetězci, například Ala, Cys, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val; 2) soubor aminokyselin se záporně nabitými postranními řetězci, například Asp, Glu; 3) soubor aminokyselin s pozitivně nabitými postranními řetězci, například Arg, His, Lys; a 4) soubor aminokyselin s nenabitými polárními postranními řetězci, například Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ke kterému jsou přidány Cys, Gly, Met a Phe.
Přirozeně se vyskytující aminokyseliny zahrnují například alanin (Ala), arginin (Arg), asparagin (Asn), kyselinu asparagovou (Asp), cystein (Cys), glutamin (Gin), kyselinu • · · • · · ·· · glutamovou (Glu), glycin (Gly), histidin (His), izoleucin (Ile), leucin (Leu), lysin (Lys), methionin (Met), fenylalanin (Phe), prolin (Pro), serin (Ser), threonin (Thr), tryptofan (Trp), tyrosin (Tyr) a valin (Val).
Přirozeně se nevyskytující aminokyseliny zahrnují například norleucin, ornitin, norvalin, homoserin a jiné analogy aminokyselinových zbytků, jako jsou například ty popsané v Ellman et al., Meth. Enzym., 1991, 202, 301-336. Pro vytváření takových přirozeně se nevyskytujících aminokyselinových zbytků mohou být použity postupy podle Nořen et al., Science, 1989, 244, 182 a Ellman et al. , výše. Ve stručnosti, tyto postupy zahrnují chemickou aktivaci supresorové tRNA s přirozeně aminokyselinovým zbytkem, po které transkripce a translace RNA.
se nevyskytujícím následuje in vitro
V některých provedeních peptid lehkého řetězce obsahuje aminokyselinovou sekvenci, která je z alespoň 70 %, alespoň 75 %, alespoň 80 %, alespoň 85 %, alespoň 90 % nebo alespoň 95 % identická s odpovídající oblastí sekv. id. č. : 3. Například peptid lehkého řetězce, který obsahuje dvě substituce aminokyselin v polohách 26 a 27, může tedy ještě mít další substituce jinde v peptidu (tj . v polohách jiných než ty označené „Xaa v sekv. id. č. : 3), dokud je peptid identický alespoň ve stanoveném procentu. Peptidy, které mají další substituce aminokyselin nebo inzerce či delece aminokyselin, jsou tedy v tomto textu uvažovány. Rozumí se, že při určování procenta identity peptidu, který obsahuje část konstantní oblasti lehkého řetězce, je pro účely procenta
identity uvažována pouze variabilní oblast (tj . do procenta
identity není zahrnuta část konstantní oblasti ) ·
Fragment může obsahovat alespoň 8, alespoň 10, alespoň 15,
alespoň 20, alespoň 25, alespoň 30, alespoň 35, alespoň 40,
alespoň 45, alespoň 50, alespoň 55, alespoň 60, alespoň 65,
• · • · • · • · • · • · alespoň 70, alespoň 75, alespoň 80, alespoň 85, alespoň 90, alespoň 95, alespoň 100 nebo alespoň 105 aminokyselin, s maximem 110 aminokyselin. V některých provedeních fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101, nebo jakoukoliv z jejich podskupin, s odkazem na sekv. id. č. : 3. V některých provedeních fragment obsahuje jednu nebo více z jakýchkoliv předcházejících substitucí aminokyselin lehkého řetězce.
Peptidy lehkého řetězce a jejich fragmenty, popsané v tomto textu, si podržely svou schopnost vázat CD154. To znamená, že substituce odpovídajících aminokyselin divokého typu protilátky 5c8 peptidy nebo fragmenty popsanými v tomto textu stále umožní to, že výsledná protilátka bude vázat humánní CD154. Například substituce všech nebo části aminokyselin variabilní oblasti lehkého řetězce divokého typu 5c8 odpovídajícími aminokyselinami peptidu nebo fragmentu popsaného v tomto textu povede k protilátce, která si podrží schopnost vázat humánní CD154.
V některých provedeních lehký řetězec může být substituován následujícími typy aminokyselin v označených polohách: R24 (negativní, pozitivní, polární, nepolární); S26 (negativní, polární, nepolární); Q27 (pozitivní, negativní, polární); R28 (negativní, polární, nepolární); S30 (pozitivní, negativní, polární); S31 (pozitivní, polární, nepolární); S32 (pozitivní, polární, nepolární); T33 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); Y34 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); S35 (polární); Y 36 (polární, nepolární, negativní); H38 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); Y54 (negativní, polární, nepolární); N57 (negativní, polární); L58 (negativní, polární); E59 (negativní, polární); S60 (negativní); Q93 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); S95 (negativní, polární); W96 (negativní, pozitivní, polární); E97 ·· ···· • ·
(negativní); 198 (negativní, polární, nepolární); P100 (negativní, polární); a T101 (negativní, polární, nepolární).
V některých provedeních aminokyselina v poloze 24 (s odkazem na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 24 může také být výhodně Arg.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 26 (s odkazem na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 26 je výhodně Ser nebo Asp. Aminokyselina v poloze 26 může také být výhodně Ser, Asp nebo Glu; nebo výhodně Ser nebo Asp.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 27 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin, Asn, Cys, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 27 je výhodně Gin nebo Glu. Aminokyselina v poloze 27 může také být výhodně Gin, Asp nebo Glu; nebo výhodně Gin nebo Glu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 28 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 28 je výhodně Arg nebo Glu. Aminokyselina v poloze 28 může také být výhodně Arg.
• · • ·
- 37 V některých provedeních aminokyselina v poloze 30 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 30 může také být výhodně Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 31 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Arg a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, His, Asn, Thr, Val a Trp. Aminokyselina v poloze 31 je také vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, Thr a Tyr; nebo je výhodně Ser nebo Asn.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 32 (odkazuje se na sekv. id. č. : 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Arg, Ala, Ile, Leu a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Phe, Ile, Leu, Met a Trp. Aminokyselina v poloze 32 je také vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; nebo je výhodně Ser nebo Phe.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 33 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg, Ala, Val a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Ala, Phe, Met, Val, Trp, Asp, Arg, Tyr a Gin. Aminokyselina v poloze 33 je také vybrána ze skupiny, kterou
♦ · · · • » · ·· · tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser a Tyr; nebo je výhodně Thr, Gin nebo Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 34 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 34 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Ala, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, Val a Trp. Aminokyselina v poloze 34 může také být výhodně Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 35 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp a Tyr, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 35 může také být výhodně Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 36 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp, Ala, Leu a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 36 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Ala, Phe, Leu a Trp. Aminokyselina v poloze 36 může také být výhodně Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 38 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří His, Asn, Cys, Gin, Gly, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 38 může také být výhodně His.
·· ····
- 39 V některých provedeních aminokyselina v poloze 54 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 54 je výhodně Tyr nebo Glu. Aminokyselina v poloze 54 může také být výhodně Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 57 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 57 může také být výhodně Asn.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 58 (odkazuje se
na sekv. id. č. : 3) peptidu lehkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Leu, Asn, Cys,
Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp a Glu, nebo
z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 58 může také být výhodně Leu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 59 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Glu, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr a Asp, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 59 může také být výhodně Glu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 60 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 60 může také být výhodně Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 93 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho ·· <··· • *
• ·
• ♦ ·· fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gin, Asn, Cys, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 93 může také být výhodně Gin.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 95 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidů lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 95 může také být výhodně Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 96 (odkazuje se
na sekv. id. č.: 3) peptidů lehkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Trp, Asn, Cys,
Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys,
nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 96 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Trp, Asp, Glu, His, Arg, Ser a Thr. Aminokyselina v poloze 96 může také být výhodně Trp.
V některých na sekv. fragmentu podskupin. Glu.
provedeních aminokyselina v poloze 97 (odkazuje se id. č. : 3) peptidů lehkého řetězce nebo jeho je Glu nebo Asp, nebo z jakékoliv z jejích Aminokyselina v poloze 97 může také být výhodně
V některých provedeních aminokyselina v poloze 98 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidů lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Ala, Leu, Pro, Val a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 98 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Ala, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr. Aminokyselina v poloze 98 je vybrána ze
9999
99 > 9 9 <
skupiny, kterou tvoří Ile, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; nebo výhodně Ile nebo Gin.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 100 (odkazuje se na sekv. id. č.: 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Pro, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 100 může také být výhodně Pro.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 101 (odkazuje se na sekv. id. č. : 3) peptidu lehkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 101 může také být výhodně Thr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 28 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Val; aminokyselina v poloze 33 je Asp nebo Arg; a aminokyselina v poloze 54 je Glu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 31 je His nebo Asn; aminokyselina v poloze 32 je Trp nebo Phe; aminokyselina v poloze 33 je Trp, Tyr nebo Gin; aminokyselina v poloze 36 je Leu nebo Trp; aminokyselina v poloze 96 je His; a aminokyselina v poloze 98 je Phe nebo Gin.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze
4444 ·*
4 4 4 · · · · · ·
4444 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 6 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 7 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina 5 v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 14 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, ·· ·»·· poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 a poloze 36 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 3 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 a poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 5 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 31 je Val; a aminokyselina v poloze 100 je Pro. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 8 v tomto textu.
·· ···» • · · ·· ····
- 44 V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 33 je Asp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 9 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č.: 3, kde aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34 a poloze 36 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 54, poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 10 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu;
·· ···*
• · • · r · ·· aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 15 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 je Asn; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg;
·· ··· · aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 a poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 32 je Phe; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je lle; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 a poloze 33 je Gin; aminokyselina v poloze 98 je lle; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 33 je • · • · · · ·· ·· ·· ·· • · · · ···· · • · ···· ··· • · · o · · · • · · · · · ·· ····
Tyr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 a poloze 98 je Gin; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Asn; aminokyselina v poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tento peptid je v tomto textu také označován jako peptid „S26D/Q27E/S31N.
• · · ·
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 32 je Phe; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tento peptid je v tomto textu také označován jako peptid „S26D/Q27E/S32F.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Gin; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tento peptid je v tomto textu také označován jako peptid „S26D/Q27E/T33Q.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Tyr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr;
• · 4 4
444· aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tento peptid je v tomto textu také označován jako peptid „S26D/Q27E/T33Y.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 3, kde aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Gin; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr. Tento peptid je v tomto textu také označován jako peptid „S26D/Q27E/I98Q.
V dalším aspektu protilátky 5c8 aminokyseliny ve předkládaný vynález obsahující alespoň variabilní oblasti poskytuje deriváty jednu substituci těžkého řetězce.
Variabilní oblast těžkého řetězce divokého typu 5c8 je uvedena v sekv. id. č.: 4 (aminokyselinová sekvence). Předkládaný vynález poskytuje peptidy obsahující variabilní oblast těžkého řetězce divokého typu 5c8, kde je vytvořena alespoň jedna substituce aminokyseliny (tj. peptidy neobsahují sekv. id. č. : 4). Peptid těžkého řetězce může obsahovat celý těžký řetězec, včetně jak konstantní oblasti (CH1 a/nebo CH2 a/nebo CH3) tak variabilní oblasti, nebo může obsahovat pouze variabilní oblast. Peptid těžkého řetězce může také obsahovat celou variabilní oblast a část konstantní oblasti, která může mít rozsah od celé konstantní oblast minus jedna aminokyselina ·· ····
- 50 k jedné jediné aminokyselině konstantní oblasti nebo jakýkoliv rozsah v rámci uvedených mezí. Alternativně může peptid těžkého řetězce obsahovat variabilní oblast fúzovanou k jakékoliv nepříbuzné peptidové sekvenci, a tak tvořit fúzní protein.
V některých provedeních peptid těžkého řetězce obsahuje alespoň jednu substituci aminokyseliny v jakékoliv z následujících poloh variabilní oblasti těžkého řetězce
protilátky 5c8 divokého typu (viz sekv. id. č. : 4) : polohy
vybrané ze skupiny, kterou tvoří 28, , 30, 31, 32, 33, 35, 50,
52, 53, 54 , 55, 57, 58, 59, 60, 61, , 62, 63, 64, 65, 66, 99,
100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107, nebo z ( j akékoliv
z jejích podskupin. Takový peptid obsahující tyto polohy, které mohou obsahovat substituci aminokyseliny, je uveden v sekv. id. č.: 6 (aminokyselinová sekvence). Tyto peptidy těžkého řetězce mohou také obsahovat alespoň 2, alespoň 3, alespoň 4, alespoň 5, alespoň 6, alespoň 7, alespoň 8, alespoň 9, alespoň 10, alespoň 11, alespoň 12, alespoň 13, alespoň 14, alespoň 15, alespoň 16, alespoň 17, alespoň 18, alespoň 19, alespoň 20, alespoň 21, alespoň 22, alespoň 23, alespoň 24, alespoň 25, alespoň 26, alespoň 27, alespoň 28 nebo alespoň 29 substitucí aminokyselin nebo substituce aminokyselin v každé z těchto 30 poloh.
V některých provedeních peptid těžkého řetězce obsahuje alespoň jednu substituci aminokyseliny v jakékoliv z poloh 31, 54, 57, 101 a 103, nebo jakékoliv z jejích podskupin. Takový peptid obsahující tyto polohy, které mohou obsahovat substituci aminokyseliny, je uveden v sekv. id. č. : 6 (aminokyselinová sekvence), kde polohy 28, 30, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 55, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100, 102, 104, 105, 106 a 107 jsou aminokyseliny divokého typu. Tyto peptidy mohou také obsahovat alespoň 2, alespoň 3, alespoň 4, alespoň 5, alespoň 6, alespoň 7, alespoň 8, alespoň 9, alespoň
- 51 - ·· ·♦ • · · · • · · • * · · • · · ·· ···· ·· · • · · • · • · • · · ·· ·· • ·· ·· • · ♦ • · · • · · · · • · · • · ·· ·
10, alespoň 11, alespoň 12, alespoň 13, alespoň 14, alespoň
15, alespoň 16, alespoň 17, alespoň 18, alespoň 19, alespoň
20, alespoň 21, alespoň 22, alespoň 23 nebo alespoň 24
substitucí aminokyselin nebo substitucí aminokyselin v každé
z těchto 25 poloh.
Substituovaná aminokyselina v každé z předcházejících poloh (tj. polohy 28, 30, 31, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107) může být každá, nezávisle, kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina. Konkrétní peptid těžkého řetězce může tedy obsahovat jednu nebo více substitucí aminokyselin, které jsou přirozeně se vyskytující aminokyseliny a/nebo jednu nebo více substitucí aminokyselin, které jsou přirozeně se nevyskytující aminokyseliny.
V některých provedeních peptid těžkého řetězce obsahuje aminokyselinovou sekvenci, která je z alespoň 70 %, alespoň 75 %, alespoň 80 %, alespoň 85 %, alespoň 90 % nebo alespoň 95 % identická se sekv. id. č.: 6. Například peptid těžkého řetězce, který obsahuje substituci aminokyseliny v poloze 31, může tedy ještě mít další substituce jinde v peptidu (tj. v polohách jiných než ty označené „Xaa v sekv. id. č.: 6), dokud je peptid identický alespoň ve stanoveném procentu. Peptidy, které mají další substituce aminokyselin nebo inzerce či delece aminokyselin, jsou tedy v tomto textu uvažovány. Rozumí se, že při určování procenta identity peptidu, který obsahuje část konstantní oblasti těžkého řetězce, je pro účely procenta identity uvažována pouze variabilní oblast (tj . do procenta identity není zahrnuta část konstantní oblasti).
V některých provedeních je poskytován fragment peptidu těžkého řetězce, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci z alespoň %, alespoň 75 %, alespoň 80 %, alespoň 85 %, alespoň 90 % ·· ····
- 52 nebo alespoň 95 % identickou s odpovídající oblastí sekv. id.
č. : 6.
Fragment může obsahovat alespoň 8, alespoň 10, alespoň 15,
alespoň 20, alespoň 25, 5 alespoň 30, alespoň 35, alespoň 40,
alespoň 45, alespoň 50, alespoň 55, alespoň 60, alespoň 65,
alespoň 70, alespoň 75, alespoň 80, alespoň 85, alespoň 90,
alespoň 95, alespoň 100, alespoň 105, alespoň 110 nebo alespoň
115 aminokyselin, s maximem 117 aminokyselin. V některých provedeních fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 28, 30, 31, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107, nebo jakoukoliv z jejich podskupin, odkazuje se na sekv. id. č. : β. V některých provedeních fragment obsahuje jednu nebo více z jakýchkoliv předcházejících substitucí aminokyselin těžkého řetězce.
Peptidy těžkého řetězce a jejich fragmenty, popsané v tomto textu, si podržely svou schopnost vázat CD154. To znamená, že substituce odpovídajících aminokyselin divokého typu protilátky 5c8 peptidy nebo fragmenty popsanými v tomto textu stále umožní to, že výsledná protilátka bude vázat humánní CD154. Například substituce všech nebo části aminokyselin variabilní oblasti těžkého řetězce divokého typu 5c8 odpovídajícími aminokyselinami peptidu nebo fragmentu popsaného v tomto textu povede k protilátce, která si podrží schopnost vázat humánní CD154. V některých provedeních protilátky popsané v tomto textu mohou kontaktovat o jeden nebo více zbytků CD154 méně než protilátka 5c8 divokého typu.
V některých provedeních těžký řetězec může být substituován následujícími typy aminokyselin v označených polohách: 128 (pozitivní, negativní, polární); T30 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); S31 (pozitivní, polární); Y32 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); Y33 (pozitivní, negativní, polární, nepolární); Y35 (polární) ; E50 (negativní); N52 ·» ···«
- 53 (polární, (pozitivní, nepolární); nepolární);
nepolární) ; P53 (negativní, polární); S54 negativní, polární); N55 (negativní, polární,
D57 (negativní, nepolární); T58 (polární, polární, nepolární); F60
N59 (negativní, (negativní, pozitivní, polární, nepolární); N61 (negativní);
E62 (negativní); K63 (negativní, pozitivní, polární, nepolární); F64 (negativní, polární, nepolární);
K65 (negativní, pozitivní, polární, nepolární); S66 (negativní);
S99 (negativní, nepolární);
(nepolární); R102 (pozitivní, pozitivní, polární, nepolární); D104 (negativní); M105 (negativní, polární, pozitivní); D106 (negativní); a S107 (negativní, polární, nepolární).
D100 (negativní); G101 polární); N103 (negativní,
V některých provedeních aminokyselina v poloze 28 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, Asp, Glu, Arg, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr a Trp, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 28 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ile, His, Asn, Gin, Ser, Thr a Glu. Aminokyselina v poloze 28 může také být výhodně Ile.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 30 (odkazuje se
na sekv. id č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asp, Glu,
Arg, Lys, Asn l, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr,
Ala, Ile, Leu , Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin.
Alternativně aminokyselina v poloze 30 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, His, Asn, Gin, Ser, Tyr a Arg.. Aminokyselina v poloze 30 může také být výhodně Thr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 31 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Arg, His, Lys, Gin a Trp, nebo z jakékoliv z jejích podskupin.
9999
- 54 Alternativně aminokyselina v poloze 31 je výhodně Ser, Gin nebo Trp. Aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val, Trp, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; nebo výhodně je Ser, Trp nebo Gin.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 32 (odkazuje se
na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asp, Glu,
Arg, Lys, Asn, Cys, Gin , Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Ala,
Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin.
Aminokyselina v poloze 32 může také být výhodně Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 33 (odkazuje se
na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asp, Glu,
Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile,
Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin.
Alternativně aminokyselina v poloze 33 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Ala, Pro, Ser, Thr, Val a Trp. Aminokyselina v poloze 33 může také být výhodně Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 35 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 35 může také být výhodně Tyr.
V některých na sekv. fragmentu podskupin. Glu.
provedeních aminokyselina v poloze 50 (odkazuje se id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho je Glu nebo Asp, nebo z jakékoliv z jejích Aminokyselina v poloze 50 může také být výhodně
V některých provedeních aminokyselina v poloze 52 (odkazuje se na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho
9999
, ·· 99 99
9 9 >999
9 9 9 · < 9 9 9 9
9 · 9 9 » 9999 99 9999 fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Ala, Leu, Val a Lys, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 52 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Ala, Phe, His, Leu, Met, Ser, Thr, Val a Trp. Aminokyselina v poloze 52 může také být výhodně Asn.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 53 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Pro, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 53 může také být výhodně Pro.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 54 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Arg, Lys a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Thr, Trp, Tyr a Phe. Aminokyselina v poloze 54 je také vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val, Trp, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; nebo výhodně Ser, Phe nebo Gin.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 55 (odkazuje se
na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Glu, Lys,
Gin, Ser, Thr, Met a Val , nebo z j akékoliv z jejích podskupin.
Alternativně aminokyselina v poloze 55 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Glu, Lys, Gin, Ser, Thr, Met a Val. Aminokyselina v poloze 55 může také být výhodně Asn.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 57 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp, Glu, Phe a ···* ·· ···· • · · · · · • · · * ·· ···· <
Leu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 57 je výhodně Asp, Phe nebo Leu. Aminokyselina v poloze 57 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asp, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; nebo je výhodně Asp, Leu nebo Phe.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 58 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 58 může také být výhodně Thr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 59 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 59 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Ala, Phe, Leu, Met, Pro, Val, Trp, Asp a Tyr. Aminokyselina v poloze 59 může také být výhodně Asn.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 60 (odkazuje se
na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe, Asp, Asn,
Cys, Gin, Gly, His, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg,
Lys, Ala, Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích
podskupin. Aminokyselina v poloze 60 může také být výhodně Phe.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 61 (odkazuje se na sekv.
id.
6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je Asn, Asp nebo Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 61 může také být výhodně Asn.
4·4·
4 4 ·
·
4
4444
4
4 • 4 • · · · · 4 4 ·
4 4 ·
444·
4
4·
- 57 V některých na sekv. fragmentu, podskupin. Glu.
provedeních aminokyselina v poloze 62 (odkazuje se id. č.: 6) peptidů těžkého řetězce nebo jeho je Glu nebo Asp, nebo z jakékoliv z jejích Aminokyselina v poloze 62 může také být výhodně
V některých provedeních aminokyselina v poloze 63 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidů těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, . Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Glu, Asp, Ala, Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 63 může také být výhodně Lys.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 64 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidů těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Phe, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 64 může také být výhodně Phe.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 65 (odkazuje se
na sekv. id č. : 6) peptidů těžkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Lys, Asn, Cys,
Gin, Gly, His , Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Asp, Glu,
Ala, Ile, Leu, , Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin.
Aminokyselina v poloze 65 může také být výhodně Lys.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 66 (odkazuje se na sekv.
id.
6) peptidů těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je Ser, Asp nebo Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 66 může také být výhodně
Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 99 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidů těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je Ser, Asp, Glu nebo Ala, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 99 je výhodně ·· ···· • · • · » ·· ··
Α·Α·
Ser nebo Ala. Aminokyselina v poloze 99 může také být výhodně Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 100 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je Asp nebo Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 100 může také být výhodně Asp.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 101 (odkazuje se na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je Gly, Phe nebo Leu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 101 je výhodně Gly, Phe nebo Leu. Aminokyselina v poloze 101 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Gly, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; nebo je výhodně Gly, Leu nebo Phe.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 102 (odkazuje
se na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo j eho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Arg, Asn, Cys,
Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr a Lys, nebo
z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 102
může také být výhodně Arg.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 103 (odkazuje
se na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho
fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin,
Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Lys, Arg a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Alternativně aminokyselina v poloze 103 je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Met, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr. Aminokyselina v poloze 103 je také vybrána ze skupiny, kterou tvoří Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; nebo výhodně Asn nebo Tyr.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 104 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho
4444 • 4
4
4
4·
4 4 « · • 4 4 4
fragmentu je Asp nebo Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 104 může také být výhodně Asp.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 105 (odkazuje se na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Met, Asp, Glu, Arg, His, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, Ser, Thr, Trp a Tyr, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 105 může také být výhodně Met.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 106 (odkazuje se na sekv. id. č. : 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je Asp nebo Glu, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 106 může také být výhodně Asp.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 107 (odkazuje se na sekv. id. č.: 6) peptidu těžkého řetězce nebo jeho fragmentu je vybrána ze skupiny, kterou tvoří Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val, nebo z jakékoliv z jejích podskupin. Aminokyselina v poloze 107 může také být výhodně Ser.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 28 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Phe; aminokyselina v poloze 54 je Thr; a aminokyselina v poloze 59 je Asp nebo Leu.
V některých provedeních aminokyselina v poloze 30 je His nebo Arg; aminokyselina v poloze 31 je Gin nebo Trp; aminokyselina v poloze 33 je Trp, Val nebo Pro; aminokyselina v poloze 52 je Met nebo Trp; aminokyselina v poloze 54 je Asn, Phe nebo Gin; aminokyselina v poloze 55 je Met, Lys nebo Val; aminokyselina v poloze 57 je Phe nebo Leu; aminokyselina v poloze 59 je Phe nebo Tyr; aminokyselina v poloze 101 je Phe nebo Leu; a aminokyselina v poloze 103 je His nebo Tyr.
·· ···· • · • · • 9
9 9
9999
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Tato mutanta je označována jako mutanta č. Iv tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 2 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, ·· ···» ·* ·» • · · * • « · • · · · • · · ·· ···· ·· ·♦ • » · · • · · • · · • · · ·· ···· • * · • · « • · · * • · · ·· · poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; 5 aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 4 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 33, poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 11 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 59, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je poloze 58 je Thr; a poloze 35 je Tyr;
Ile; aminokyselina v poloze 30 a aminokyselina v poloze 32, poloze 33 aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
»·«·
Μ · • 4 4* » 4 4 I
444« ·· ·»
4 4 · • · · • · ·
4 4 ♦···
- 62 aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 12 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 59 je Leu; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Tato mutanta je označována jako mutanta č. 13 v tomto textu.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Trp; aminokyselina v poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Gin; aminokyselina v poloze 54 je
Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 54 je Phe; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 54 je Gin; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina ·· ···« • · v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Phe; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Leu; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp;
• · · · • · · • · · • · · aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Phe; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Leu;
aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr;
aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr;
aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
V některých provedeních peptid obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly;
• · ·· ···· ·· ·· • · · ·
• · aminokyselina v poloze 103 je Tyr; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
Identita nebo podobnost, pokud jde o tuto sekvenci, je v tomto textu definována jako procento aminokyselinových zbytků v modifikované sekvenci, které jsou identické (tj. jde o stejný zbytek) se zbytky protilátky 5c8 divokého typu, poté, co jsou sekvence porovnány přiřazením a zavedením mezer, pokud je to zapotřebí, pro dosažení maximálního procenta sekvenční identity. Typicky N-koncové, C-koncové nebo interní extenze, delece nebo inzerce do protilátkové sekvence vně variabilní domény nejsou chápány tak, že ovlivňují sekvenční identitu nebo podobnost. Protilátka může obsahovat jednu nebo více alterací aminokyselin přímo v jedné nebo více hypervariabilních oblastech nebo v oblastech s nimi sousedícími. Procento sekvenční identity může být určeno například programem „Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison, WI) s použitím standardního nastavení, který využívá algoritmus Smitha a Watermana (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482-489).
Předkládaný vynález také poskytuje molekuly nukleové kyseliny kódující kterýkoliv z peptidů nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu. Molekula nukleové kyseliny kódující peptid sekv. id. č. : 3 je uvedena v sekv. id. č. : 2. Molekula • · ♦ · ·· ···· nukleové kyseliny kódující peptid sekv. id. č. : 6 je uvedena v sekv. id. č.: 5. Odborník, který má k dispozici aminokyselinové sekvence peptidů popsaných v tomto textu, může snadno navrhnout a připravit molekuly nukleové kyseliny kódující tyto peptidy.
Předkládaný vynález také poskytuje vektory obsahující kteroukoliv molekulu nukleové kyseliny, která kóduje jakýkoliv z peptidů nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu. Odborník se snadno seznámí s četnými vektory, z nichž mnohé jsou dostupné komerčně.
Předkládaný obsahuj ící kterýkoliv vynález jakoukoliv z vektorů, také poskytuje hostitelské buňky z molekul nukleové kyseliny nebo jak jsou popsány v tomto textu.
Hostitelské buňky mohou být použity například pro expresi peptidů a protilátek nebo jejich fragmentů. Peptidy a protilátky nebo jejich fragmenty mohou také být exprimovány v buňkách in vivo. Hostitelská buňka, která je transformována (například transfekována) , aby produkovala peptidy a protilátky nebo jejich fragmenty, může být imortalizovaná savčí buněčná linie, jako jsou například linie lymfoidního původu (například myelomové, hybridomové, triomové nebo quadromové buněčné linie). Hostitelská buňka může také zahrnovat normální lymfoidní buňky, jako například B lymfocyty, které byly imortalizovány transformací virem (například virem Epstein-Barrové).
Některé imortalizované lymfoidní buněčné linie, jako například myelomové buněčné linie, ve svém normálním stavu secernují izolované lehké nebo těžké řetězce Ig. Pokud je taková buněčná linie transformovaná vektorem, který exprimuje mutantní protilátku nebo její fragment připravený v průběhu způsobu podle vynálezu, nemusí být nutné uskutečnit zbývající kroky způsobu za předpokladu, že normálně secernovaný řetězec je komplementární k variabilní doméně Ig řetězce kódované ·· ·· • · · • · • · · • · · ·· ··· ·· ····
- 68 vektorem připraveným dříve. Avšak pokud imortalizovaná buněčná linie nesecernuje nebo nesecernuje komplementární řetězec, bude nutné do buněk zavést vektor, který kóduje vhodný komplementární řetězec nebo jeho fragment.
V případě, kdy imortalizovaná buněčná linie secernuje komplementární lehký nebo těžký řetězec, může být transformovaná buněčná linie tvořena například transformací vhodné bakteriální buňky vektorem a pak fúzí bakteriální buňky s imortalizovanou buněčnou linií (například fúzí sféroplastů). Alternativně může být DNA zavedena přímo do imortalizované buněčné linie elektroporací.
V některých provedeních tohoto vynálezu hostitelské buňky zahrnují, aniž by byl výčet omezující: bakteriální buňky, jako například E. coli, Caulobacter crescentus, druh Streptomyces a Salmonella typhimurium; kvasinky, jako například Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris, Pichia methanolica; hmyzí buněčné linie, jako například linie od Spodoptera frugiperda (například buněčné linie Sf9 a Sf21 a buňky expresSF™ (Protein Sciences Corp., Meridn, CT, USA)), buňky Drosophila S2 a Trichoplusia v High Five® Cells (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA); a savčí buňky, jako například buňky COSI a COS7, buňky vaječníků křečíka čínského (CHO), myelomové buňky NSO, buňky NIH 3T3, buňky 293, buňky HEPG2, buňky HeLa, buňky L, HeLa, MDCK, HEK293, WI38, myší buněčné linie ES (například z kmenů 129/SV, C57/BL6, DBA-1, 129/SVJ), K562, buňky Jurkat a BW5147. Jsou dobře známy další použitelné savčí buněčné linie a jsou snadno dostupné ze sbírek American Type Culture Collection („ATCC) (Manassas, VA, USA) a National Institute of General Medical Sciences (NIGMS) Human Genetic Cell Repository v Coriell Cell Repositories (Camden, NJ, USA) . Tyto buněčné typy jsou uvedeny pouze jako vzor a tento výčet není zamýšlen jako vyčerpávající.
• · • · ·
Peptidy nebo protilátky a jejich fragmenty mohou být tvořeny v prokaryotických a eukaryotických buňkách. Vynález tedy také poskytuje buňky, které exprimují protilátky podle předkládaného vynálezu, včetně hybridomových buněk, B lymfocytů, plazmatických buněk, a také hostitelských buňky rekombinantně modifikovaných tak, aby exprimovaly protilátky podle předkládaného vynálezu.
Kromě jiných předpokladů, z nichž část byla popsána výše, může být kmen hostitelských buněk vybrán pro svou schopnost zpracovat exprimovaný peptid nebo protilátku nebo jejich fragment požadovaným způsobem. Posttranslačni modifikace polypeptidu zahrnují, aniž by byl výčet omezující, glykosylaci, acetylaci, karboxylaci, fosforylaci, lipidaci a acylaci a aspektem předkládaného vynálezu je poskytnout protilátky nebo jejich fragmenty s jednou nebo více z těchto posttranslačních modifikací.
Předkládaný vynález také poskytuje protilátky nebo jejich fragmenty, které obsahují jakýkoliv z peptidů popsaných v tomto textu, přičemž protilátka nebo její fragment se může vázat k humánnímu CD154. V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje jakýkoliv z peptidů lehkého řetězce nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu. V dalších provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje jakýkoliv z peptidů těžkého řetězce nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu. V ještě dalších provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje jakýkoliv z peptidů těžkého řetězce nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu a jakýkoliv z peptidů lehkého řetězce nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 14, a druhý peptid, který je peptid mutanty č. 1. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 16 v tomto textu.
··
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který je peptid mutanty č. 2. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 17 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který je peptid mutanty č. 1. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 18 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 14 a druhý peptid, který je peptid mutanty č. 4. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 19 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který je peptid mutanty č. 4. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 20 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 14 a druhý peptid, který je peptid mutanty č. 2. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 23 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 14 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze· 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
·· *··· • · • « • · • · aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 21 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 22 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 14 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 ·· ···«
• · · · • · · • · · · • · * • · • · · • · · ·· · je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 24 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 25 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 ·· ·· ···«
·· ···· je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 26 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 15 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č. : 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 27 v tomto textu.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje první peptid, který je peptid mutanty č. 14 a druhý peptid, který obsahuje sekv. id. č.: 6, kde aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met. Taková složená mutanta je označována jako mutanta č. 28 v tomto textu.
Φ« 944 «φ ·· • · · ·
·· ·· ··
- 74 Protilátka je glykoprotein přibližné molekulové hmotnosti 150 kDa, který je tvořen humorálním ramenem imunitního systému obratlovců jako reakce na přítomnost cizorodých molekul v organismu. Funkční protilátka nebo derivát protilátky jsou schopné rozpoznávat a vázat se ke svému specifickému antigenu in vitro nebo in vivo a mohou iniciovat veškeré následující akce sdružené s vazbou protilátky, včetně například přímé cytotoxicity, cytotoxicity závislé na komplementu („CDC), cytotoxicity závislé na protilátkách („ADCC) a produkce protilátek.
Po vazbě k antigenu protilátky aktivují jeden nebo více z mnoha efektorových systémů imunitního systému, které přispívají k neutralizaci, zničení a eliminaci infekčního mikroorganismu nebo jiné entity obsahující antigen, například rakovinné buňky.
Protilátky a jejich fragmenty popsané v tomto textu mají zvýšenou nebo sníženou afinitu, aviditu a/nebo specificitu ve srovnání s protilátkou 5c8 divokého typu. V některých provedeních protilátky a jejich fragmenty popsané v tomto textu mají zvýšenou afinitu, aviditu a/nebo specificitu ve srovnání s protilátkou 5c8 divokého typu. Afinita, avidita a/nebo specificita mohou být měřeny celou řadou způsobů. Všeobecně a bez ohledu na přesný způsob, kterým je definována nebo měřena afinita, způsoby podle vynálezu zlepšují afinitu protilátky, když poskytují protilátku, která je lepší v jakémkoliv aspektu své klinické aplikace než protilátka (nebo protilátky), ze kterých byla vytvořena (například způsoby podle vynálezu jsou považovány za účinné nebo úspěšné, když může být modifikovaná protilátka podávána v nižší dávce nebo méně často nebo příhodnější cestou podání než protilátka (nebo protilátky), ze kterých byla vytvořena).
Odborníci jsou si vědomi, že určování afinity není vždy tak jednoduché jako udělat jednoduchý součet. Protože protilátky ·· »99 ·* 9» • »9 · • · « • 9 · • · 9
9999 • 9 99 • · · · • « · • · · ·9· ·· 99*9 mají dvě ramena, jejich zjevná afinita je obvykle o hodně vyšší než vnitřní afinita mezi variabilní oblastí a antigenem. Vnitřní afinita může být měřena s použitím scFv nebo fragmentů Fab.
V některých provedeních fragment protilátky je jednořetězcová protilátka (scFv), fragment F(ab')2, fragment Fab, fragment Fab' nebo fragment Fd nebo jejich fragmenty vázající antigen. Jednořetězcová protilátka je tvořena variabilními oblastmi spojenými proteinovými spacery v jeden proteinový řetězec.
V dalších provedeních fragmenty protilátky zahrnují heteromerní protilátkové komplexy a protilátkové fúze, jako jsou například bispecifické protilátky, hemidimerní protilátky a multivalentní protilátky (jako jsou například tetravalentní protilátky). Hemidimerní protilátka je tvořena částí Fc a jednou částí Fab.
V některých provedeních protilátky nebo jejich fragmenty mohou také zahrnovat proteiny obsahující jeden nebo více imunoglobulinových lehkých řetězců a/nebo těžkých řetězců, jako jsou například monomery a homo- nebo heteromultimery (například dimery nebo trimery) těchto řetězců, kde tyto řetězce jsou volitelně vázané disulfidovou vazbou nebo jinak zesíťovány. Tyto protilátky nebo jejich fragmenty se mohou vázat k jednomu nebo více antigenům.
Fragmenty protilátek popsaných v tomto textu si zachovávají svou schopnost vázat CD154. Například co se týče fragmentu 5c8, který je schopný vázat CD154, odpovídající fragment, který obsahuje jakoukoliv mutaci popsanou v tomto textu, je také schopný vázat CD154. Aminokyseliny přítomné na CD154, které se dostávají do kontaktu s 5c8, zahrnují: V126, 1127,
S128, E129, A130, S131, S132
E142, K143, G144, Y145, Y146
V153, T154, L155, E156, N157
S179, N180, E182, A183, S184
K133, T134, Q139, W140, A141
T147, M148, S149, N150, N151
G158, K159, T176, F177, C178
R200, F201, E202, R203, 1204
• 4 ·· • · * · • · · • · » • · ♦ ·· ···· • r · ·· ····
- 76 L205, A209, A215, K216, P217, C218, G219, Q220, Q221, D243, P244, S245, Q246, V247, S248, H249, G250, T251, G252, F253 a T254. V některých provedeních některé nebo všechny z těchto zbytků na CD154 interagují s mutantami popsanými v tomto textu. V některých provedeních mutanty popsané v tomto textu mohou kontaktovat o jeden nebo více zbytků CD154 méně než protilátka divokého typu.
V některých provedeních je protilátka nebo její fragment značena detekovatelným markérem. Detekovatelné markéry zahrnují, aniž by byl výčet omezující, radioaktivní izotopy (jako je například P32 a S35) , enzymy (jako je například křenová peroxidáza, chloramfenikolacetyltransferáza (CAT), β-galaktosidáza (β-gal) apod.), fluorochromy, chromofory, koloidní zlato, barviva a biotin. Značené protilátky nebo jejich fragmenty mohou být použity při provádění diagnostických procedur (mnoho diagnostických testů spoléhá na detekci antigenního proteinu (jako je například PSA)) v celé řadě buněčných nebo tkáňových typů. Pro zobrazovací postupy, in vitro nebo in vivo, změněné protilátky tvořené způsoby popsanými v tomto textu mohou být značeny dalšími činidly, jako jsou například NMR kontrastní činidla, rentgenová kontrastní činidla nebo kvantové tečky. V oboru jsou známé způsoby navázání detekovatelného činidla k polypeptidům, včetně protilátek nebo jejich fragmentů. Protilátky mohou také být navázány na nerozpustný nosič (jako je například perlička, skleněná nebo plastová podložní destička apod.).
V některých provedeních je protilátka nebo její fragment konjugována k terapeutickému agens, které obsahuje, aniž by byl výčet omezující, radioizotopy (jako je například niIn nebo 90Y) , toxiny (jako je například tetanický toxoid nebo ricin), toxoidy a chemoterapeutika (viz patent Spojených států č. 6 307 026).
•4 444·
· * ····
- 77 V některých provedeních jsou protilátky nebo jejich fragmenty modifikovány tím, že jsou konjugovány k zobrazovacímu činidlu. Zobrazovací činidla zahrnují například značicí skupinu (jako je například biotin, fluorescenční skupiny, radioaktivní skupiny, histidinová značka nebo jiné peptidové značky) pro snadnou izolaci nebo detekci.
Při podávání jsou protilátky často rychle odstraněny z krevního oběhu a mohou proto vyvolat relativně krátkodobou farmakologickou aktivitu. V důsledku toho mohou být vyžadovány časté injekce relativně velkých dávek protilátek, aby se udržela terapeutická účinnost protilátkové léčby.
V některých provedeních protilátky nebo jejich fragmenty mohou být modifikovány (jako například připojením k jiným skupinám), aby se zvýšila integrita a délka života protilátky in vivo. Například protilátky nebo jejich fragmenty mohou být modifikovány tak, aby zahrnovaly skupinu, která může zvýšit stabilitu a tím prodloužit sérový poločas protilátky.
V některých provedeních protilátka nebo její fragment obsahuje alespoň jeden polymer s vysokou molekulovou hmotností, což zahrnuje, aniž by byl výčet omezující, polyethylenimin a polylysin. V dalších provedeních protilátky nebo jejich fragmenty jsou modifikovány kovalentní vazbou ve vodě rozpustných polymerů, jako je například polyethylenglykol, kopolymery polyethylenglykolu a polypropylenglykolu, karboxmethylcelulóza, dextran, polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon nebo polyprolin, o všech z nich je známo, že po intravenózní injekci projevují podstatně delší poločasy v krvi než odpovídající nemodifikované proteiny (Abuchowski et al. , V: „Enzymes as Drugs, 1981; Holcenberg et al, Ed., 1981, WileyInterscience, New York, NY, 367-383; Anderson, Human Gene Therapy, Science, 1992, 256, 808-813; Newmark et al., J. Appl. Biochem., 1982, 4, 185-189; a Katre et al. , Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 1487-1491).
• ·
V některých provedeních je protilátka nebo její fragment pegylován nebo glykosylován v alespoň jedné aminokyselinové poloze nebo modifikován jinými vhodnými ve vodě rozpustnými polymery včetně následujících, aniž by však byl tento výčet omezující: PEG, kopolymery ethylenglykolu a propylenglykolu, karboxymethylcelulóza, dextran, polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon, poly-1,3-dioxolan, poly-1,3,6-trioxan, kopolymer ethylenu a anhydridu kyseliny maleinové, polyaminokyseliny (buď homopolymery nebo náhodné kopolymery) a dextran nebo póly(n-vinylpyrrolidon) PEG, homopolymery propylenglykolu, kopolymery polypropylenoxidu a ethylenoxidu, polyoxyethylované polyoly (např. glycerol), polyvinylalkohol a jejich směsi.
Polymer může mít jakoukoliv vhodnou molekulovou hmotnost a může být rozvětvený nebo nerozvětvený.
Co se týče PEG, vhodná průměrná molekulová hmotnost je přibližně mezi 2 kDa a přibližně 100 kDa. Toto poskytuje snadnou manipulaci a výrobu. Odborníci jsou si vědomi toho, že v přípravcích PEG některé molekuly váží více a některé méně než je uvedená molekulová hmotnost. Molekulová hmotnost je tedy typicky specifikována jako „průměrná molekulová hmotnost. Mohou být použity další molekulové hmotnosti (velikosti) v závislosti na požadovaném terapeutickém profilu (např. požadovaná doba prodlouženého uvolňování; účinky, pokud vůbec, na biologickou aktivitu; snadná manipulace; stupeň antigenicity nebo její nedostatek a další známé účinky PEG na terapeutický protein). V různých provedeních je molekulová hmotnost přibližně 2 kDa, přibližně 5 kDa, přibližně 10 kDa, přibližně 15 kDa, přibližně 20 kDa, přibližně 25 kDa, přibližně 30 kDa, přibližně 40 kDa nebo přibližně 100 kDa.
V některých provedeních je průměrná molekulová hmotnost každého řetězce PEG přibližně 20 kDa. V dalších provedeních je průměrná molekulová hmotnost přibližně 10 kDa.
- 79 Počet molekul polymeru takto spojených se může měnit a odborník je schopen zjistit, jaký bude účinek na funkci. Může být připraven monoderivát nebo se mohou připravit di-, tri-, tetra- nebo několikeré kombinace derívatizace, se stejnými nebo různými chemickými skupinami (např. polymery, jako například různé hmotnosti PEG). Podíl polymerových molekul k proteinovým (nebo polypeptidovým) molekulám se bude měnit, stejně jako jejich koncentrace v reakční směsi. Obecně bude optimální poměr (ve smyslu účinnosti reakce, ve které neexistuje nadbytek nezreagovaného proteinu nebo polymeru) určován faktory, jako je například požadovaný stupeň derivatizace (např. mono, di-, tri-, apod.), molekulová hmotnost vybraného polymeru, zda je polymer rozvětvený nebo nerozvětvený a reakční podmínky.
Molekuly PEG (nebo jiné chemické skupiny) by měly být navázány k proteinu s ohledem na účinky na funkční nebo antigenní domény proteinu. Existuje velký počet metod připojování, které jsou odborníkům k dispozici. Viz například EP 0 401384 (kondenzace PEG ke G CSF); Malík et al., Exp. Hematol., 1992, 20, 1028-1035 (publikována pegylace GM CSF s použitím tresylchloridu).
Například PEG může být kovalentně navázán (pegylace) přes aminokyselinové zbytky prostřednictvím reaktivní skupiny, jako je například volná aminoskupina nebo karboxylová skupinu. Aminokyselinové zbytky, které mají volnou aminoskupinu, zahrnují lysinové zbytky a amino-koncový aminokyselinový zbytek. Ty, které mají volnou karboxylovou skupinu, zahrnují zbytky asparagové kyseliny, zbytky glutamové kyseliny a C-koncový aminokyselinový zbytek. Jako reaktivní skupina pro připojení molekuly(molekul) PEG mohou také být použity sulfhydrylové skupiny. Pro terapeutické účely může být připojení v aminoskupině, například na N konci nebo lysinové « · • ♦ « ·
- 80 skupině. Může se vyžadovat specificky amino-koncově chemicky modifikovaný protein.
Při použití PEG jako názorného příkladu předkládaných kompozic, se může vybírat z celé řady molekul PEG (podle molekulové hmotnosti, rozvětvení apod.), podílu molekul PEG k proteinovým (nebo peptidovým) molekulám v reakční směsi, typu pegylační reakce, která má být prováděna, a způsobu získávání vybraného amino-koncově PEGylovaného proteinu. Způsobem získávání amino-koncově PEGylovaného přípravku (tj. separací této skupiny od jiných monoPEGylovaných skupin, pokud je to zapotřebí) může být purifikace amino-koncově PEGylovaného materiálu od populace PEGylovaných proteinových molekul. Selektivní amino-koncová chemická modifikace může být uskutečněna redukční alkylací, která využívá rozdílnou reaktivitu různých typů primárních aminoskupin (lysin versus amino-konec) dostupných pro derivatizaci konkrétního proteinu.
I
Ve vhodných reakčních podmínkách je dosaženo v podstatě selektivní derivatizace proteinu na amino-konci s polymerem obsahujícím karbonylovou skupinu. Například se může selektivně pegylovat amino-konec proteinu prováděním reakce při pH, které umožní využít rozdíly pKa mezi aminoskupinou epsilon (ε) lysinových zbytků a aminoskupinou alfa (a) amino-koncového zbytku proteinu. Takovou selektivní derivatizaci je řízeno připojení ve vodě rozpustného polymeru k proteinu: konjugace s polymerem probíhá převážně na amino-konci proteinu a nenastane žádná významná modifikace dalších reaktivních skupiny, jako například aminoskupin lysinového postranního řetězce.
Při použití redukční alkylace ve vodě rozpustný polymer může být typu popsaného výše a měl by mít jednoduchý reaktivní aldehyd pro kondenzaci k proteinu. Může být použit PEG-propionaldehyd, obsahující jeden reaktivní aldehyd.
·· ···· « · « »· · · ·· * β · • · · «· ···«
Modifikace protilátky mohou také zvýšit rozpustnost proteinu ve vodném roztoku, eliminovat agregaci, zvýšit fyzikální a chemickou stabilitu proteinu a značně redukovat imunogenicitu a antigenicitu proteinu. V důsledku toho může být dosaženo požadované in vivo biologické aktivity méně častým podáváním takové adiční sloučeniny polymeru a proteinu nebo podáváním v nižších dávkách než při použití nemodifikovaného proteinu.
Termín „chimérická protilátka je použit k popisu proteinu, který obsahuje alespoň antigen vázající část molekuly imunoglobulinu, který je připojen například peptidovou vazbou nebo peptidovou spojovací sekvencí k heterolognímu proteinu nebo jeho peptidu. „Heterologní protein může být jiný než imunoglobulin nebo část imunoglobulinu odlišného živočišného druhu, třídy nebo podtřídy.
Existují četné způsoby, kterými mohou být vytvořeny takové protilátky. Například obsahující promotor, se muže připravit expresní vektor který je operativně spojen s DNA sekvencí, která kóduje alespoň VH nebo VL, a sekvencí, která kóduje heterologní protein (nebo jeho peptid (peptid má dostatečnou délku, takže může být rozpoznáván jako molekula jiná než imunoglobulin (například peptid, který nemá žádnou podstatnou sekvenční identitu s imunoglobulinem))). Pokud je to potřebné nebo žádoucí, může se připravit druhý expresní vektor obsahující promotor, který je operativně spojen s DNA sekvencí, která kóduje komplementární variabilní doménu (například, kde základní expresní vektor kóduje VH, druhý expresní vektor kóduje VL a naopak). Buněčná linie (například savčí buněčná linie) může jedním nebo oběma expresními kultivována za podmínek, které umožní expresi variabilní domény nebo chimérické protilátky (viz například mezinárodní patentová přihláška PCT/GB85/00392). Tento způsob může být použit pro expresi modifikovaných protilátek podle imortalizovaná transformována pak být vektory a chimérické € · • · · · • Λ
- 82 předkládaného vynálezu, protilátky obsahují kompletní těžké a lehké řetězce nebo jejich fragmenty (například Fab, F(ab')2 nebo fragmenty scFv popsané v tomto textu). Způsoby nejsou omezeny na expresi chimérických protilátek.
Ačkoli přirozeně se vyskytující protilátky pocházejí od jednoho živočišného druhu, geneticky upravené protilátky a protilátkové fragmenty mohou být derivovány z více než jednoho živočišného druhu, například chimérické protilátky. K dnešnímu dni byly již připraveny chimérické protilátky myší a lidské („murine/human) a myší a jiných primátů než lidí(murine/nonhuman primáte), ačkoli i kombinace jiných druhů jsou možné.
V některých provedeních protilátky nebo jejich fragmenty jsou chimérické protilátky. Typicky chimérické protilátky zahrnují variabilní oblasti těžkého a/nebo lehkého řetězce, včetně obou úseků určujících komplementaritu („CDR) a zbytků konzervativního úseku, jednoho druhu (typicky myší) fúzované ke konstantním oblastem jiného druhu (typicky humánní). Tyto chimérické myší/humánní protilátky obsahují přibližně 75 % humánních a 25 % myších aminokyselinových sekvencí, v daném pořadí. Humánní sekvence představují konstantní oblasti protilátky, zatímco myší sekvence představují variabilní oblasti (a tak obsahují místa vázající antigen) protilátky. Důvodem pro použití takových chimér je to, aby se udržela antigenní specificita myší imunogenicita myší protilátky protilátky, ale snížila se (myší protilátka by proti sobě vyvolala imunitní reakci v živočišných druzích jiných než u myší), a bylo by tak možné použít chiméru v léčbě u člověka.
V dalším provedení protilátky nebo jejich fragmenty zahrnují chimérické protilátky obsahující konzervativní úseky z jedné protilátky a oblasti CDR z další protilátky. V dalších provedeních protilátky nebo jejich fragmenty zahrnují chimérické protilátky obsahující oblasti CDR z různých tt ··♦· • · • ·
< · • · • · ·
humánních protilátek. V dalších provedeních protilátky nebo jejich fragmenty zahrnují chimérické protilátky obsahující oblasti CDR z alespoň dvou různých humánních protilátek.
Způsoby přípravy všech chimérických protilátek popsaných v tomto textu výše jsou odborníkovi známy (patent Spojených států č. 5 807 715; Morrison et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 15 1984, 81, 6851-5; Sharon et al., Nátuře, 1984, 309, 364-7; a Takeda et al., Nátuře, 1985 314, 452-4).
V dalším provedení protilátky nebo jejich fragmenty také zahrnují primatizované, humanizované a plně humánní protilátky. Primatizované a humanizované protilátky typicky obsahují CDR těžkého a/nebo lehkého řetězce z myší protilátky naroubované do oblasti V konzervativního úseku protilátky primáta jiného než člověka nebo humánní protilátky, obvykle dále obsahují humánní konstantní oblast (Riechmann et al., Nátuře, 1988, 332, 323-7; Co et al., Nátuře, 1991, 351, 501-2; a patenty Spojených států č. 6 054 297, 5 821 337, 5 770 196, 5 766 886, 5 821 123, 5 869 619, 6 180 377, 6 013 256, 5 693 761 a 6 180 370) .
Humanizovaná protilátka je protilátka produkovaná technologií rekombinantní DNA, ve které některé nebo všechny aminokyseliny humánního imunoglobulinového lehkého nebo těžkého řetězce, které nejsou vyžadovány pro vazbu antigenu (například konstantní oblasti a konzervativní úseky variabilní domény) jsou použity k substituci odpovídajícími aminokyselinami lehkého nebo těžkého řetězce analogické protilátky jiného než humánního původu. Například humanizovaná verze myší protilátky k danému antigenu má na obou ze svých těžkých a lehkých řetězců 1) konstantní oblasti z humánní protilátky;
2) konzervativní úseky z variabilní domény humánní protilátky; a 3) CDR z myší protilátky. Pokud je nezbytné, jeden nebo více zbytků v humánních konzervativních úsecích může být změněno na zbytky v odpovídajících polohách v myší protilátce tak, aby se »· ·· ···· zachovala vazebná afinita humanizované protilátky k antigenu. Tato změna je někdy nazývána „zpětná mutace. U humanizovaných protilátek je obecně méně pravděpodobné, že vyvolají imunitní reakci u lidí ve srovnání s chimérickými humánními protilátkami, protože první uvedené obsahují značně méně složek jiného než humánního původu. Způsoby přípravy humanizovaných protilátek jsou odborníkům v oblasti protilátek dobře známy (Evropský patent č. 239400; Jones et al., Nátuře, 1986, 321, 522-525; Riechmann et al. , Nátuře, 1988, 332, 323-327; Verhoeyen et al., Science, 1988, 239, 1534-1536; Queen et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 10029; Orlandi et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 3833; a patent Spojených států č. 6 180 370).
V některých provedeních humanizované protilátky jsou vytvářeny transplantací myších (nebo dalších jiných než humánního původu) CDR na humánní protilátku. Konkrétně toho může být dosaženo takto: 1) z hybridomu jsou izolovány cDNA kódující variabilní domény těžkého a lehkého řetězce; 2) DNA sekvence variabilních domén, včetně CDR, jsou určeny sekvencováním;
3) DNA kódující CDR jsou přeneseny do odpovídajících oblastí kódujících sekvencí variabilní domény těžkého nebo lehkého řetězce humánní protilátky místně cílenou mutagenezí; a
4) jsou přidány genové segmenty humánní konstantní oblasti požadovaného izotypu (například 1 pro CH a k pro CL) . Nakonec jsou humanizované geny těžkého a lehkého řetězce společně exprimovány v savčích hostitelských buňkách (například buňkách CHO nebo NSO) za vzniku rozpustné humanizované protilátky.
Časem přímý přenos CDR do humánního konzervativního úseku vede ke ztrátě vazebné afinity výsledné protilátky pro antigen. To je proto, že u některých analogických protilátek určité aminokyseliny v konzervativních úsecích interagují s CDR, a tak ovlivňují celkovou vazebnou afinitu protilátky pro antigen. V takových případech by bylo rozhodující zavést ·· ···· • »
- 85 „zpětné mutace do konzervativních úseků akceptorové protilátky, aby se udržela vazebná aktivita pro antigen analogické protilátky. Obecné přístupy pro přípravu zpětných mutací jsou odborníkům dobře známy (Quenn et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 10029; a Co et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 2869-2873; PCT patentová přihláška WO 90/07861; a Tempest, Biotechnology, 1991, 9, 266-271).
V některých provedeních protilátky nebo jejich fragmenty jsou plně humánní protilátky anti-CD154. Plně humánní protilátky mohou být připraveny s použitím in vitro instruovaných („in vitro primed) lidských splenocytů (Boerner et al., J. Immunol., 1991, 147, 86-95) nebo „fág-displej knihoven protilátek („phage-displayed libraries, viz patent Spojených států č. 6 300 064). Alternativně plně humánní protilátky mohou být připraveny repertoárovým klonováním (Persson et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 2432-2436; a Huang et al., J. Immunol. Methods, 1991, 141, 227-236). Kromě toho patent Spojených států č. 5 798 230 popisuje přípravu humánních monoklonálních protilátek z humánních B lymfocytů, kde B lymfocyty produkující lidskou protilátku jsou imortalizovány infekcí virem Epstein-Barrové, nebo jeho derivátem, který exprimuje nukleární antigen 2 viru EpsteinBarrové („EBNA2), protein požadovaný pro imortalizaci. Funkce EBNA2 je pak vypnuta, což vede ke zvýšení produkce protilátek.
Další způsoby produkce plně humánních protilátek zahrnují použití živočichů jiných než je člověk, kteří mají inaktivované endogenní Ig lokusy a jsou transgenní pro nepřeskupené humánní geny těžkého řetězce a lehkého řetězce protilátky. Taková transgenní zvířata mohou být imunizována aktivovanými T lymfocyty nebo proteinem Dl. 1 (patenty Spojených států č. 5 474 771; 6 331 433; a 6 455 044) a mohou být tvořeny hybridomy z B lymfocytů, které z těchto zvířat pocházejí. V oboru jsou popsány tyto metody detailně. Viz ·· ···· • ·
• * · ♦ • * · • φ * ♦ · * ·· ·»··
- 86 např. různé publikace/patenty GenPharm/Medarex (Palo Alto, CA) týkající se transgenních myší obsahujících humánní Ig minilokusy, včetně patentu Spojených států č. 5 789 650; různé publikace/patenty Abgenix (Fremont, CA) týkající se myší XENOMOUSE®, včetně patentů Spojených států č. 6 075 181, 6 150 584 a 6 162 963; Green et al., Nátuře Genetics, 1994, 7, 13-21; Mendez et al., Nátuře Genetics, 1997, 15, 146-56; a různé publikace/patenty Kirin (Japonsko) týkající se „transomických myší, včetně evropského patentu 843961 a Tomizuka et al., Nátuře Genetics, 1997 Jun; 16(2): 133-43.
Jakmile je rozhodnuto o sekvenci protilátky (například s naroubovaným CDR nebo jinak modifikovaná nebo „humanizovaná protilátka) , může být tato protilátka připravena technikami dobře známými v oboru molekulární biologie. Konkrétně mohou být použity techniky rekombinantní DNA, aby vznikl široký okruh polypeptidů transformací hostitelské buňky sekvencí nukleové kyseliny (například sekvencí DNA, která kóduje požadované proteinové produkty (například modifikovaný těžký nebo lehký řetězec; jejich variabilní domény nebo jejich jiné fragmenty vázající antigen)).
Konkrétně mohou být způsoby produkce prováděny tak, jak bylo popsáno výše pro chimérické protilátky. Sekvence DNA kódující například změněnou variabilní doménu může být připravena oligonukleotidovou syntézou. Variabilní doménou může být doména, která zahrnuje FR z humánní akceptorové molekuly a CDR z donora, například myši, buď předtím nebo poté, co byl jeden nebo více zbytků (například zbytek v CDR) modifikován tak, aby umožnil vazbu antigenu. Ta je umožněno určením sekvence konzervativního úseku akceptorové protilátky a alespoň sekvencí CDR donorové protilátky. Alternativně může být sekvence DNA kódující změněnou variabilní doménu připravena oligonukleotidovou místně cílenou mutagenezí směrovanou primerem. Tato technika zahrnuje hybridizaci oligonukleotidu
-87kódujícího požadovanou mutaci s jedním vláknem DNA obsahujícím místo mutace a použití tohoto jednoho vlákna jako templátu pro extenzi oligonukleotidu za vzniku vlákna obsahujícího mutaci. Tato technika je v různých formách popsána například v Zoller a Smith (Nuc. Acids Res., 1982, 10, 6487-6500), Norris et al. (Nuc. Acids Res., 1983, 11, 5103-5112), Zoller a Smith (DNA,
1984, 3, 479-488) a Kramer et al. (Nuc. Acids Res., 1982, 10, 6475-6485).
Jsou také známy další metody pro zavedení mutací do sekvence a mohou být použity ke vzniku změněných protilátek popsaných v tomto textu (viz například Carter et al., Nuc. Acids Res.,
1985, 13, 4431-4443). Oligonukleotidy použité pro místně cílenou mutagenezi mohou být připraveny syntézou oligonukleotidů nebo izolovány z DNA kódující variabilní doménu donorové protilátky s použitím vhodných restrikčních enzymů.
V dalším provedení mohou být protilátky nebo jejich fragmenty připraveny bezbuněčnou translací. Alternativně mohou být protilátky nebo jejich fragmenty produkovány v bioreaktorech obsahujících buňky exprimující protilátku, aby se usnadnila produkce ve velkém měřítku.
V některých provedeních mohou být protilátky nebo jejich fragmenty tvořeny v transgenních savcích, jako jsou například kozy, krávy nebo ovce, které exprimují protilátku v mléce, aby se usnadnila produkce protilátek ve velkém měřítku (patent Spojených států č. 5 827 690; a Pollock et al., J. Immunol. Meth., 1999, 231, 147-57).
Předkládaný vynález také poskytuje kompozice obsahující jakýkoliv jeden nebo více z peptidů nebo jejich fragmentů, jakoukoliv jednu nebo více z molekul nukleové kyseliny nebo vektorů nebo jakoukoliv jednu nebo více z protilátek nebo «· ···· ·
9
9999 ·« ♦ * • · # · • · ♦ · jejich fragmentů popsaných v tomto textu. Kompozice zahrnují například farmaceutické kompozice.
V profylaktických aplikacích jsou farmaceutické kompozice nebo léky podávány pacientovi, který trpí chorobným stavem, v množství postačujícím eliminovat nebo snížit riziko, zmenšit závažnost nebo oddálit počátek poruchy, včetně biochemických, histologických a/nebo behaviorálních symptomů poruchy, jejích komplikací a přechodných patologických fenotypů, které se prezentují během rozvoje poruchy. V terapeutických aplikacích jsou kompozice nebo léky podávány pacientovi, u kterého je taková porucha suspektní nebo už takovou poruchou trpí, v množství postačujícím vyléčit nebo alespoň částečně zastavit symptomy poruchy (biochemické, histologické a/nebo behaviorální), včetně jejích komplikací a přechodných patologických fenotypů během rozvoje poruchy.
Farmaceutické kompozice podle vynálezu mohou zahrnovat alespoň jednu protilátku nebo její fragment popsaný v tomto textu ve farmaceuticky přijatelném nosiči. Termín „farmaceuticky přijatelný nosič se týká alespoň jedné složky farmaceutického přípravku, která je normálně používána pro podávání účinných složek. Jako takový může nosič obsahovat kteroukoliv farmaceutickou pomocnou látku používanou v oboru a kteroukoliv formu vehikula pro podávání. Nosiče zahrnují, aniž by byl výčet omezující, fyziologický roztok pufrovaný fosfáty, fyziologický roztok, voda, formulace citrátu/sacharózy/Tween a emulze, jako je například emulze olej/voda.
Kompozice mohou zahrnovat účinné terapeutické agens a celou řadu dalších farmaceuticky přijatelných složek. Viz Remington's Pharmaceutical Science (15. vyd., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980). Požadovaná forma závisí na zamýšleném způsobu podávání a terapeutické aplikaci. Kompozice mohou také zahrnovat v závislosti na požadované formulaci farmaceuticky přijatelné netoxické nosiče nebo ·· ···· *· « » · * ♦ 4 9 4 · ·« 94·· formulován uvolňování protilátku formulovaný ředidla, která jsou definována jako vehikula obecně používaná k formulaci farmaceutických kompozic pro podávání zvířatům nebo člověku. Ředidlo je vybráno tak, aby neovlivnilo biologickou aktivitu kombinace. Příklady takových ředidel zahrnují, aniž by byl výčet omezující, destilovanou vodu, fyziologický roztok pufrovaný fosfáty, Ringerův roztok, roztok dextrózy a Hankův roztok. Kromě toho farmaceutická kompozice nebo formulace může také zahrnovat další nosiče, adjuvancia nebo netoxické, neterapeutické, neimunogenní stabilizátory apod. Tuhé formulace kompozic pro perorální podávání mohou obsahovat vhodné nosiče nebo pomocné látky, jako je například kukuřičný škrob, želatina, laktóza, arabská guma, sacharóza, mikrokrystalická celulóza, kaolín, mannitol, fosfát vápenatý, uhličitan vápenatý, chlorid sodný nebo kyselina alginová. Dezintegrátory, které mohou být použity jsou, aniž by byl výčet omezující, mikrokrystalická celulózu, kukuřičný škrob, sodná sůl glykolškrobu a kyselina alginová. Tabletová pojidla, která mohou být použita, jsou arabská guma, methylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy, polyvinylpyrrolidon (Povidone™) , hydroxypropylmethylcelulóza, sacharóza, škrob a ethylcelulóza. Lubrikanty, které mohou být použity, jsou stearáty hořečnaté, kyselina stearová, silikonová tekutina, talek, vosky, oleje a koloidní oxid křemičitý. Další pomocné látky jsou například barviva, činidla maskující (korigující) chuť, solubilizační činidla, suspendující činidlo, zahušťovadla, enterosolventní obaly, přísady pro prodloužené uvolňování, apod. Protilátky mohou být podávány ve formě depotní injekce nebo implantovaného přípravku, který může být takovým způsobem, aby umožnil prodloužené účinné složky. Vzorová kompozice obsahuje nebo její fragment v koncentraci 5 mg/ml ve vodném pufru, který se skládá z 50 mM
L-histidinu a 150 mM NaCl, upraveno na pH 6,0 pomocí HC1.
AA AAAA
A
A
• A • A
A A A
A •
A
A
Další příklad vhodného formulačního pufru pro monoklonální protilátky zahrnuje 20 mM citrát sodný, pH 6,0, 10 % sacharózu a 0,1 % Tween 80.
V některých provedeních tekuté formulace farmaceutické kompozice pro perorální podávání připravené ve vodě nebo jiných vodných vehikulech mohou obsahovat různá suspendující činidla, jako je například methylcelulóza, algináty, tragant, pektin, kelgin, karagenan, arabská guma, polyvinylpyrrolidon a polyvinylalkohol. Tekuté formulace farmaceutických kompozic podle tohoto vynálezu mohou také zahrnovat roztoky, emulze, sirupy a tinktury obsahující, spolu s účinnou sloučeninou (sloučeninami), smáčedla, sladidla a barviva a aromatizační činidla. Různé tekuté a práškové formulace , farmaceutických kompozic mohou být připraveny obvyklými metodami pro inhalaci do plic léčeného savce.
V některých provedeních tekuté formulace farmaceutické kompozice pro injekce mohou obsahovat různé nosiče, jako jsou například rostlinné oleje, dimethylacetamid, dimethylformamid, ethyllaktát, ethylkarbonát, isopropylmyristát, ethanol, polyoly, jako je například glycerol, propylenglykol, tekutý polyethylenglykol, apod. V některých provedeních kompozice zahrnuje nosič citrát/sacharóza/Tween. Co se týče intravenózních injekcí, ve vodě rozpustné verze kompozic mohou být podávány po kapkách, přičemž infúzí je podávána farmaceutická formulace obsahující antimykotikum a fyziologicky přijatelnou pomocnou látku. Fyziologicky přijatelné pomocné látky mohou být například 5% dextróza, 0,9% fyziologický roztok, Ringerův roztok nebo další vhodné pomocné látky. Vhodná nerozpustná forma kompozice může být připravena a podávána jako suspenze ve vodné bázi nebo farmaceuticky přijatelné olejové bázi, jako je například ester mastné kyseliny s dlouhým řetězcem, jako je například ethyloleát.
»· *· ♦ ♦ · • · • ♦ ·· ····
·· ··*·
Kompozice mohou být například injekční roztoky, vodné suspenze nebo roztoky, nevodné suspenze nebo roztoky, tuhé a tekuté perorální formulace, masti, gely, mazání, intradermální náplasti, krémy, lociony, tablety, tobolky, formulace s prodlouženým uvolňováním, apod. V některých provedeních pro topické aplikace mohou být farmaceutické kompozice formulovány ve vhodné mastí. V některých provedeních topická polotuhá masťová formulace typicky obsahuje koncentraci účinné složky přibližně od 1 do 20 % nebo 5 až 10 %, v nosiči, jako je například farmaceutický masťový základ. Některé příklady formulací kompozice pro topické použití zahrnují, aniž by byl výčet omezující, kapky, tinktury, lociony, krémy, roztoky a masti obsahující účinnou složku a různé podpůrné látky a vehikula.
Typicky jsou kompozice připravovány jako injikovatelné, buď jako tekuté roztoky nebo suspenze; mohou také být připraveny tuhé formy vhodné pro přípravu roztoku nebo suspenze v tekutém vehikulu před injekcí. Přípravek také může být emulgován nebo opouzdřen v lipozomech nebo mikročásticích, jako je například polylaktid, polyglykolid nebo kopolymer pro zesílený adjuvantní účinek (viz Langer, Science, 1990, 249, 1527 a Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews, 1997, 28, 97) . Může také být připraven sterilní injekční přípravek, jako je například sterilní injekční vodná nebo olejnatá suspenze. Tato suspenze může být formulována podle technik v oboru známých za použití vhodných dispergačních činidel, smáčedel a suspendujících činidel. V některých provedeních může být farmaceutická kompozice aplikována v mikroopouzdřovacím systému, aby se snížila imunitní reakce hostitele proti proteinu nebo se jí zabránilo.
Účinné dávky kompozic podle předkládaného vynálezu pro léčbu chorobného stavu se mění v závislosti na mnoha různých faktorech, včetně způsobů podávání, cílového místa, • Φ ··*·
ΦΦ ·· ♦ φ · · < ♦ · • · · • ♦ * ·· ···· 'φφ ·Φ·* fyziologického stavu pacienta, zda pacient je člověk nebo zvíře, dalších podávaných léků a na tom, zda je léčba profylaktická nebo terapeutická. Obvykle je pacientem člověk, ale mohou také být léčeni savci jiní než člověk, včetně transgenních savců.
Pro pasivní imunizaci protilátkou se dávka pohybuje od přibližně 0,0001 do 100 mg/kg, od přibližně 0,01 do 200 mg/kg nebo od přibližně 0,01 do 20 mg/kg tělesné hmotnosti příjemce. Například dávky mohou být 1 mg/kg tělesné hmotnosti nebo 10 mg/kg tělesné hmotnosti nebo v rozsahu 1 až 10 mg/kg nebo alespoň 1 mg/kg. Pacientům mohou být takové dávky podávány denně, obden, týdně nebo podle kteréhokoliv jiného schématu určeného empirickou analýzou. Vzorové léčení znamená podávání opakovaných dávek po delší dobu, například alespoň šest měsíců. Další vzorové léčebné režimy znamenají podávání jednou každé dva týdny nebo jednou za měsíc nebo jednou za 3 až 6 měsíců. Vzorová schémata dávek zahrnují 1 až 10 mg/kg nebo 15 mg/kg v po sobě jdoucích dnech, 30 mg/kg obden nebo 60 mg/kg týdně. V některých provedeních jsou podávány dvě nebo více protilátek nebo jejich fragmentů s různými vazebnými specificitami současně, v tomto případě dávka každé podávané protilátky spadá do uvedených rozsahů.
Protilátka je obvykle podávána opakovaně. Intervaly mezi jednotlivými dávkami mohou být týdenní, měsíční nebo roční. V některých provedeních je dávka upravena tak, aby dosáhla plazmatické koncentrace protilátky 1 až 1000 mg/ml a v některých metodách 25 až 300 μg/ml. Alternativně může být protilátka podávána jako formulace s prodlouženým uvolňováním, v tomto případě je vyžadováno méně časté podávání. Dávka a frekvence se mění v závislosti na poločase protilátky v organismu pacienta. Obecně nej delší poločas vykazují humánní protilátky, následované humanizovanými protilátkami, •4 4···
4
4
4444
4 4
4
4
4 4
4
4
4
4 • 4
- 93 chimérickými protilátkami a protilátkami jiného než humánního původu, v sestupném pořadí.
Dávka a frekvence podávání se může měnit v závislosti na tom, zda je léčba profylaktická nebo terapeutická. V profylaktických aplikacích jsou kompozice obsahující předkládané protilátky nebo jejich koktejl podávány pacientovi, který již není nemocný, aby se zesílila pacientova odolnost. Takové množství je definováno jako „profylaktická účinná dávka. Při tomto použití přesná množství opět závisí na celkovém zdravotním stavu a všeobecné imunitě pacienta, ale obecně se pohybují v rozsahu od 0,1 do 25 mg na dávku, obzvláště 0,5 až 2,5 mg na dávku. Relativně nízká dávka je podávána v relativně řídkých intervalech po dlouhé časové období. Někteří pacienti pokračují v léčbě po zbytek svého života.
V terapeutických aplikacích je někdy vyžadována relativně vysoká dávka (například od přibližně 1 do 200 mg protilátky na dávku, přičemž se nej častěji používají dávky od 5 do 25 mg) v relativně krátkých intervalech, dokud není zpomalena nebo zastavena progrese onemocnění, a eventuálně dokud pacient nevykazuje částečné nebo úplné zmírnění příznaků onemocnění. Poté může být pacientovi podávána protilátka v profylaktickém režimu.
V některých provedeních mohou být protilátky nebo jejich fragmenty nebo kompozice je obsahující podávány pacientovi subkutánně, intramedulárně, intraarteriálně, intrasynoviálně, intratekálně, intrahepatálně, intraspinálně, intrakraniálně, enterálně, intrapulmonárně, injekcí intravenózně, intramuskulárně, intraepidurálně, intraartikulárně, intraperitoneálně, intraventrikulárně, intravaskulárně, intrasternálně, intratumorálně, přes sliznici, intrauterinně, sublingválně nebo lokálně v místech zánětu nebo nádorového růstu s použitím standardních metod. Alternativně
4444 • 4
• 444
4 4 *
4 · • · · ♦ · ·
4444
- 94 mohou být protilátky nebo jejich fragmenty nebo kompozice je obsahující podávány pacientovi cestami zahrnujícími perorální, nosní, oční, rektální nebo topickou. Nejtypičtější způsob podání léku, kterým je protein, je intravaskulární, subkutánní nebo intramuskulární, ačkoli mohou být účinné i jiné způsoby. V některých provedeních jsou protilátky podávány jako kompozice nebo systémy, jako je například systém Medipad™, s prodlouženým uvolňováním. Proteinový lék může také být podáván prostřednictvím respiračního ústrojí, například při použití inhalačního přístroje na suchý prášek, nebulizéru nebo inhalátoru s odměřenými dávkami.
V některých provedeních mohou být protilátky nebo jejich fragmenty podávány pacientovi podáváním s prodlouženým uvolňováním takovými prostředky, jako jsou depotní injekce erodovatelných implantátů aplikovaných přímo v průběhu chirurgického výkonu, nebo implantací infúzní pumpy nebo biologicky kompatibilního implantátu s prodlouženým uvolňováním do organismu pacienta. Alternativně mohou být protilátky nebo jejich fragmenty podávány pacientovi způsoby podávání depotních injekcí, jako je například použití 1-, 3nebo 6měsíčních depotních injekcí nebo biologicky rozložitelných látek a způsobů, nebo aplikací transdermální náplasti obsahující protilátku, derivát protilátky nebo farmaceutickou kompozici na kůži pacienta, a ponechání náplasti v kontaktu s kůží pacienta, zpravidla po dobu 1 až 5 hodin na náplast.
Kompozice mohou být volitelně podávány v kombinaci s dalšími činidly, která jsou alespoň částečně účinná v léčbě imunitních poruch. V některých provedeních farmaceutická kompozice dále obsahuje imunosupresivní nebo imunomodulační sloučeninu. Taková imunosupresivní nebo imunomodulační sloučenina může být například jednou z následujících: agens, které přeruší kostimulační signální dráhu T lymfocytů prostřednictvím CD28;
··
- 95 • · ♦ · · • · · ·
Β ···« *· • · · « • · · · · • ♦ · ί ►·*· ·* ♦ sloučenina mizorubin, agens, které přeruší signální dráhu kalcineurinu, kortikosteroid, antiproliferativní agens, a protilátka, která se specificky váže na protein exprimovaný na povrch imunitních buněk včetně, aniž by byl výčet omezující, CD45, CD2, IL2R, CD4, CD8 a RANK FcR, B7, CTLA4, TNF, LT3 a VLA-4. Kromě toho je v některých provedeních imunosupresivní nebo imunomodulační takrolimus, sirolimus, mykofenolát mofetil, deoxyspergualin, brequinar sodný, leflunomid, soupravy obsahující fragmentů popsaných rapamycin nebo azaspiran.
Předkládaný vynález také poskytuje jakoukoliv z protilátek nebo jejich v tomto textu. Souprava může zahrnovat například nádobku, obal nebo dávkovač společně se štítky a instrukcemi pro podávání nebo použití.
Předkládaný vynález se také týká léčení nebo prevence lidského onemocnění nebo poruchy související s CD154. V některých provedeních způsob zahrnuje podávání terapeuticky nebo profylakticky účinného množství jakékoliv z protilátek nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu nebo kompozice je obsahující člověku tak, že lidské onemocnění nebo porucha související s CD154 je zmírněna nebo se jí zabrání. Pro účely tohoto vynálezu „podávání znamená jakýkoliv ze standardních způsobů podávání protilátky, fragmentu protilátky nebo kompozice odborníkovi známý a neměl by být omezen na příklady uvedené v tomto textu.
V některých .provedeních bude u léčeného pacienta dříve diagnostikováno, že má onemocnění nebo chorobný stav vhodný pro léčení popsané v tomto textu. Takoví pacienti budou tedy diagnostikováni jako pacienti, kteří potřebují léčbu. Alternativně léčba může být určena k léčbě konkrétního onemocnění nebo chorobného stavu, ale současně bude léčit také další nediagnostikovaný chorobný stav.
·* 99*9 ·*♦* *!·· ***· ·*♦· ··
- 96 Léčba pacient, který trpí onemocněním nebo poruchou, může být monitorována s použitím standardních metod. Některé metody znamenají, že se určí výchozí hodnota, například hladina protilátky nebo profil pacienta, před podáváním dávky přípravku a srovná se s hodnotou profilu nebo hladiny po léčbě. Významné zvýšení, jako je například vyšší než typická hranice experimentální chyby při opakovaných měřeních stejného vzorku, vyjádřená jako jedna směrodatná odchylka od průměru takových měření v hodnotě hladiny nebo profilu, signalizuje pozitivní výsledek léčby (tj. že podávání přípravku dosáhlo požadované reakce). Pokud se hodnota pro imunitní reakci významně nezmění nebo se sníží, je indikován negativní výsledek léčby.
V dalších provedeních je určena kontrolní hodnota, jako je například průměr a směrodatná odchylka, hladiny nebo profilu pro kontrolní populaci. Typicky jedinci v kontrolní populaci nedostávali dřívější léčbu. Měřené hodnoty hladiny nebo profilu pacienta po podávání terapeutického přípravku jsou pak srovnávány s kontrolní hodnotou. Významné zvýšení vzhledem ke kontrolní hodnotě, jako je například vyšší než jedna směrodatná odchylka od průměru, signalizuje pozitivní nebo postačující výsledek léčby. Absence významného zvýšení nebo snížení signalizuje negativní nebo nepostačující výsledek léčby. V podávání terapeutika se zpravidla pokračuje, zatímco hladina se zvyšuje relativně ke kontrolní hodnotě. Jako předtím, dosažení plateau vzhledem ke kontrolním hodnotám je indikátorem, že podávání léku může být přerušeno nebo snížena dávka a/nebo frekvence.
V dalších provedeních je určena kontrolní hodnota hladiny nebo profilu, jako je například průměr a směrodatná odchylka, z kontrolní populace jedinců, kteří podstoupili léčbu terapeutickým přípravkem, a jejichž hladiny nebo profily dosáhly plateau při reakci na léčbu. Měřené hodnoty hladin »« 4444 • 4
- 97 nebo profilů pacienta jsou srovnávány s kontrolní hodnotou. Pokud naměřená hladina u pacienta není významně odlišná, jako například o více než jednu směrodatnou odchylku, od kontrolní hodnoty, léčba může být vysazena. Pokud je hladina u pacienta je významně pod kontrolní hodnotou, pokračující podávání přípravku je oprávněné. Pokud hladina u pacienta přetrvává pod kontrolní hodnotou, pak může být indikována změna v léčbě.
V dalších provedeních je pacient, který v současnosti nedostává léčbu, ale podstoupil předchozí léčebnou kúru, monitorován na hladiny protilátek nebo profily, aby se určilo, zda je vyžadováno pokračování léčby. Měřená hladina nebo profil pacienta mohou být srovnány s hodnotou dosaženou dříve u pacienta po předchozí léčebné kúře. Významné snížení výhledem k předchozímu měření, jako například vyšší než typická hranice chyby při opakovaných měřeních stejného vzorku, je indikací, že v léčbě může být pokračováno. Alternativně hodnota naměřená u pacienta může být srovnána s kontrolní hodnotou (průměr plus směrodatná odchylka) určenou v populaci pacientů po podstoupení léčebné kúry. Alternativně může být hodnota naměřená u pacienta srovnána s kontrolní hodnotou v populacích profylakticky léčených pacientů, kteří zůstávají bez symptomů onemocnění, nebo populacích terapeuticky léčených pacientů, který vykazují zlepšení charakteristik onemocnění. Ve všech těchto případech je významné snížení výhledem ke kontrolní hladině, jako například vyšší než směrodatná odchylka, indikátorem, že léčba by u pacienta měla být obnovena.
Profil protilátek po podávání typicky ukazuje okamžitý vrchol koncentrace protilátky následovaný exponenciálním poklesem. Bez další dávky pokles dosáhne hladin před léčbou během období několika dnů až měsíců v závislosti na poločase podávané protilátky. Například poločas některých humánních protilátek je řádově 20 dnů.
·· ·♦»·
V některých postupech je provedeno měření výchozí hodnoty protilátky k danému antigenu u pacienta před podáváním, druhé měření je provedeno brzy poté, aby se určila maximální hladina protilátky a jedno nebo více dalších měření jsou prováděna v intervalech, aby se monitoroval rozpad hladin protilátek. Když se hladina protilátky snížila na výchozí hodnotu nebo předem určené procento maximální hodnoty minus výchozí hodnota, jako je například 50 %, 25 % nebo 10 %, je podávána další dávka protilátky. V některých provedeních jsou maximální nebo následné naměřené hladiny minus pozadí srovnány s referenčními hladinami dříve určenými, aby se ustanovil prospěšný profylaktický nebo terapeutický léčebný režim u jiných pacientů. Pokud je naměřená hladina protilátky významně menší než referenční hladina, jako například menší než průměr bez jedné směrodatné odchylky referenční hodnoty v populaci pacientů prospívajících při léčbě, je indikováno podávání další dávky protilátky.
Další provedení zahrnují uznávaných fyziologických somatický nebo psychický spoléhají badatelé nebo monitorování chorobných stavů monitorování veškerých v oboru symptomů, jako je například symptom, na které se rutinně lékaři při diagnostice nebo v průběhu léčebné kúry.
V některých provedeních jsou protilátky nebo jejich fragmenty popsané v tomto textu nebo farmaceutické kompozice je obsahující schopny inhibovat imunitní reakci u pacienta. Protilátka, derivát protilátky nebo farmaceutická kompozice je podávána pacientovi v účinném inhibičním množství. „Účinné inhibiční množství protilátky, derivátu protilátky, jako je například CD154 vazebný fragment, nebo farmaceutické kompozice, je jakékoliv množství, které je schopné účinně inhibovat interakci CD154-CD40 u pacienta, kterému je podáváno. Metody určování „inhibičního množství jsou odborníkům známy a závisí na faktorech včetně, aniž by byl ·· φφ • · • φ ···· ·<
• · φ · • · • * ·· φφ φ
φ φφφφ •Φ φφφφ φ φ · φ · · φ φ · φ φ φ «φ · výčet omezující, typu zainteresovaného pacienta, velikosti pacienta a aplikovaném terapeutickém přípravku.
V konkrétním provedení anti-CD154 protilátka, derivát protilátky nebo farmaceutická kompozice obsahující protilátku nebo derivát protilátky je schopná vazby k molekule CD154. V dalším provedení anti-CDl54 protilátka, derivát protilátky nebo farmaceutická kompozice obsahující protilátku nebo derivát protilátky je schopná inhibice imunitní reakce inhibici interakce CD154-CD40.
V některých provedeních anti-CD154 protilátka, derivát protilátky nebo farmaceutická kompozice obsahující protilátku nebo derivát protilátky je schopná inhibovat zánět. Pro účely tohoto vynálezu jsou zánětlivé reakce charakterizovány zarudnutím, otokem, teplem a bolestí, jako důsledky dilatace kapilár s edémem a migrací fagocytujících leukocytů. Některé příklady zánětlivých reakcí jsou, aniž by byl výčet omezující, artritida, kontaktní dermatitida, syndrom hyperimunoglobulinémie IgE, zánětlivá střevní onemocnění, alergické astma a idiopatická zánětlivá onemocnění. Některé příklady artritidy jsou, aniž by byl výčet omezující, revmatoidní artritida, zánětlivé artritidy jiného než revmatického původu, artritida sdružená s Lymeskou nemocí a zánětlivá osteoartritida. Některé příklady idiopatického zánětlivého onemocnění jsou, aniž by byl výčet omezující, psoriáza a systémový lupus erythematodes. Další nemoci, poruchy a chorobné stavy, které mohou být léčeny s použitím sloučenin a/nebo kompozicí popsaných v tomto textu jsou, aniž by byl výčet omezující, ateroskleróza, myasthenia gravis, Gravesova choroba, idiopatická trombocytopenická purpura, hemolytická anémie, diabetes mellitus, Crohnova choroba, sclerosis multiplex a autoimunní choroby indukované léky, jako je například lupus indukovaný léky.
- 100 V některých provedeních mohou být sloučeniny a kompozice použity k inhibici rejekce transplantovaného orgánu, jako je například transplantované srdce, ledvina, játra, kůže, buňky Langerhansových ostrůvků pankreatu nebo kostní dřeň, pacientem. V dalších provedeních mohou být sloučeniny a kompozice použity k inhibici reakce štěpu proti hostiteli, inhibici alergických reakcí, jako je například senná rýma nebo alergie na penicilín či jiné léky, inhibici autoimunní reakce pacienta trpícího autoimunní reakcí, která je důsledkem infekčního onemocnění, nebo k inhibici fibrózy u pacienta. Příklady fibrózy jsou, aniž by byl výčet omezující, plicní fibróza nebo fibrotické onemocnění. Příklady plicní fibrózy jsou, aniž by byl výčet omezující, plicní fibróza sekundární při syndromu respirační tísně u dospělých, plicní fibróza indukovaná léky, idiopatická plicní fibróza a hypersenzitivní pneumonitida. Příklady fibrotického onemocnění jsou, aniž by byl výčet omezující, hepatitida C, hepatitida B, cirhóza, cirhóza jater sekundární při toxickém poškození, cirhóza jater sekundární při užívání léků, cirhóza jater sekundární při virové infekci a cirhóza jater sekundární při autoimunním onemocnění.
V některých provedeních mohou sloučeniny a kompozice inhibovat autoimunní reakci u pacienta, který trpí autoimunní reakcí, která vyplývá například z Reiterova syndromu, spondylartritidy, Lymeské nemoci, infekce HIV, syfilis nebo tuberkulózy.
V některých provedeních mohou sloučeniny a kompozice inhibovat gastrointestinální onemocnění, jako je například dysmotilita jícnu, zánětlivá střevní onemocnění a sklerodermie. Alternativně mohou sloučeniny a kompozice inhibovat vaskulární onemocnění, jako je například ateroskleróza a reperfuzní poškození.
• ·
101 ·» ·· • · · · • · · • · · • · · · · ·
V některých provedeních mohou sloučeniny a kompozice inhibovat proliferaci rakovinných T lymfocytů u pacienta, který trpí rakovinou T lymfocytů, jako je například T lymfocytární leukémie nebo lymfom. Alternativně mohou sloučeniny a kompozice inhibovat virovou infekci T lymfocytů pacienta virem HTLV 1.
V některých provedeních mohou být sloučeniny a kompozice použity pro zobrazování nádorových buněk nebo rakovinných buněk u pacienta, které exprimují protein, který je specificky rozpoznáván hu5c8. Jeden způsob pro zobrazování nádorových buněk nebo rakovinných buněk u pacienta zahrnuje: podávání účinného množství protilátky nebo jejího fragmentu nebo kompozice, která je obsahuje, pacientovi, v podmínkách umožňujících tvorbu komplexu mezi protilátkou nebo protilátkovým fragmentem a proteinem na povrchu nádorových buněk nebo rakovinných buněk a zobrazování jakýchkoliv vytvořených komplexů protilátky a proteinu nebo komplexů fragmentů protilátky, a tím zobrazování jakýchkoliv nádorových buněk nebo rakovinných buněk u pacienta.
V některých provedeních mohou být sloučeniny a kompozice použity pro detekci přítomnosti nádorových buněk nebo rakovinných buněk u pacienta, které exprimují protein, který je specificky rozpoznáván hu5c8. Jeden způsob pro detekci přítomnosti nádorových buněk nebo rakovinných buněk u pacienta zahrnuje: podávání účinného množství protilátky nebo jejího fragmentu nebo kompozice, která je obsahuje, pacientovi, v podmínkách umožňujících tvorbu komplexu mezi protilátkou nebo protilátkovým fragmentem a proteinem, odstranění jakéhokoliv nenavázaného zobrazovacího agens z organismu pacienta, a detekce přítomnosti jakýchkoliv vytvořených komplexů protilátky a proteinu nebo komplexů fragmentů protilátky, přítomnost takovýchto komplexů ukazuje na přítomnost nádorových buněk nebo rakovinných buněk u pacienta.
• ·
• · ·· ·· ·· ·
102
Protilátky nebo jejich fragmenty a kompozice je obsahující mohou být podávány v určitých indikacích jako jednorázové dávky, jako například prevence imunitní reakce na antigen, kterému je pacient vystaven po krátkou dobu, jako například exogenní antigen podávaný v jediný den léčby. Příklady takové léčby by zahrnovaly společné podávání protilátky nebo derivátu protilátky podle vynálezu společně s terapeutickým přípravkem, například antigenním léčivem, alergenem nebo krevním derivátem nebo vektorem genové terapie. V indikacích, kde je antigen přítomný chronicky, jako například při kontrole imunitní reakce na transplantovanou tkáň nebo na chronicky podávaná antigenní léčiva, protilátky, farmaceutické kompozice podle v intervalech po tak dlouhou dobu, jak je lékařsky indikováno, v rozmezí od několika dnů či týdnů po celý života pacienta.
derivát protilátky nebo vynálezu jsou podávány
V některých provedeních pacient (pacienti), který může být léčen výše popsanými způsoby je živočich, jako například savec, včetně, aniž by byl výčet omezující, lidí, primátů jiných než člověk, hlodavců (včetně laboratorních potkanů, myší, křečků a morčat) krávy, koně, ovce, kozy, prasete, psa a kočky. Ve většině příkladů je savcem člověk.
Předkládaný vynález se také týká použití jakéhokoliv z peptidů nebo jejich fragmentů nebo protilátek nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu pro léčbu lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154.
Předkládaný vynález se dále týká použití jakéhokoliv z peptidů nebo jejich fragmentů nebo protilátek nebo jejich fragmentů popsaných v tomto textu pro výrobu léku pro léčbu lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154.
Provedením popsaným v tomto textu bude možné lépe porozumět na základě příkladů, které následují. Nicméně odborníkovi je okamžitě jasné, že diskutované specifické metody a výsledky
9 9
103 ·· ···· jsou pouze ilustrativním znázorněním vynálezu, který je podrobněji popsán v provedeních vynálezu, která následují.
V textu této přihláška jsou v závorkách uvedeny různé publikace a literární odkazy. Popisy těchto publikací a literární odkazy jsou tímto plně zahrnuty formou odkazu do této přihlášky, aby podrobněji přispěly k popisu stavu oboru, kterého se tento vynález týká. Materiály, metody a příklady jsou pouze ilustrativní a nejsou zamýšleny jako omezující.
Standardní referenční publikace uvádějící obecné principy technologie rekombinantní DNA odborníkům známé zahrnují: Ausubel et al., Current Protocols In Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York (1998 a Supplements k 2001); Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York (1989);
Kaufman et al
Eds., Handbook of Molecular And Cellular
Methods In Biology And Medicine, CRC Press, Boča Raton (1995); McPherson, Ed., Directed Mutagenesis: A Practical Approach, IRL Press, Oxford (1991).
referenční publikace uvádějící obecné principy Harlow and Lané,
Standardní imunologie
Antibodies odborníkům známé zahrnují:
A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1999); a Roitt et al., Immunology, 3d Ed., Mosby-Year Book Europe Limited, London (1993).
Standardní referenční publikace uvádějící obecné principy lékařské fyziologie a farmakologie odborníkům známé zahrnují: Fauci et al., Eds., Harrison's Principles of Internal
Medicine, 14th Ed., McGraw-Hill Companies, lne. (1998)
- 104 ·· ··· ·
Příklady provedení vynálezu
V textu příkladů byly použity následující materiály a metody, není-li uvedeno jinak. Následující příklady ukazují metody a produkty podle předkládaného vynálezu. Vhodné modifikace a adaptace popsaných podmínek a parametrů, se kterými se lze normálně setkat v oboru molekulární biologie, které jsou odborníkům zjevné, spadají plně do vynálezecké myšlenkz a rozsahu předkládaného vynálezu.
Při provedení předkládaného vynálezu se zpravidla používají, není-li uvedeno jinak, obvyklé techniky chemie, molekulární biologie, technologie rekombinantní DNA, imunologie (obzvláště například technologie protilátek) a standardní techniky elektroforézy. Viz například Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); Antibody Engineering Protocols (Methods in Molecular Biology) , 510, Paul, S., Humana Pr (1996); Antibody Engineering: A Practical Approach (Practical Approach Series, 169) , McCafferty, Ed., Irl Pr (1996); Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow et al, C.S.H.L. Press, Pub. (1999); a Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel et al, John Wiley & Sons (1992).
Příklad 1: Konstrukce protilátek
Metody popsané v tomto textu byly použity, aby se získala optimalizovaná protilátka (nebo její fragment vázající antigen) , ačkoli mohou být také použity bez omezení další metody odborníkům známé. Na základě výpočové analýzy mohou být identifikovány polohy ve kterékoliv dané protilátce, kde φφ ♦ · • φ · φ φ
- 105 existuje rozdíl (čím větší rozdíl, tím významnější může být) mezi distribucí náboje v komplexu optimalizované protilátky a antigenu a distribuci v komplexu původní protilátky a antigenu. Takové rozdíly v distribuci náboje jsou také spojeny se změnami ve volné vazebné energii protilátky, když je vázána k antigenu v rozpouštědle. Aminokyselinový zbytek v takové poloze pak může být změněn tak, že se elektrostatické síly v původní protilátce více přiblíží (nebo v alternativním provedeních naopak více odchýlí) silám v optimalizované protilátce, a tím se moduluje volná vazebná energie protilátky, když je navázána k antigenu v rozpouštědle. Změny jsou do protilátku zavedeny podle souboru jednotlivých kritérií nebo pravidel, jak jsou popsána v tomto textu a jak bylo již popsáno v mezinárodní přihlášce PCT/US04/24200, která je plně zahrnuta formou odkazu v tomto textu.
1. Pravidla pro modifikaci protilátek se zlepšenou funkcí
Pravidla pro modifikaci protilátek byla použita takto. Aby se modulovala vazebná afinita protilátky pro antigen, například aby se taková vazba zlepšila nebo obnovila, je nejdříve získána základní sekvence a/nebo strukturální data. Pak byly použity techniky optimalizace elektrostatického náboje pro navržení mutant se zlepšenou afinitou. Typicky byla optimalizace elektrostatického náboje nejdříve použita pro určení polohy(poloh) zbytku(ů) CDR, které jsou pro vazbu suboptimální (Lee et al·., J. Chem. Phys., 1997, 106, 86818690; Kangas et al., J. Chem. Phys., 1998, 109, 7522-7545). Pak byla jedna nebo více mutací (tj. modifikací) CDR podrobena další komputační analýze. Na základě těchto výpočtů pak byla určena vazebná afinita pro podskupinu modifikovaných protilátek, které mají jednu nebo více modifikací podle pravidel podle vynálezu.
·* *· ·· 44 ··
4 9 9 4 4 4 9 9 9 9 • 4 9 4 4 4 4 4 9 • · * · · · · « · 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9
9494 94 4444 94 4
- 106 S využitím modelu elektrostatického kontinua byla prováděna optimalizace elektrostatického náboje na každém postranním řetězci aminokyseliny v CDR protilátky. Optimalizace náboje dává náboje v atomových centrech, ale neposkytne vždy aktuální mutaci (mutace) . V důsledku toho byla prováděna řada optimalizací náboje s různými omezeními zavedenými tak, aby představovaly přirozené charakteristiky postranního řetězce v požadovaných polohách. Například byla prováděna optimalizace postranního řetězce pro čistý náboj -1, 0 a +1 s dalším omezením, že žádný atomový náboj nepřekročí konkrétní hodnotu, například 0,85 jednotky náboje elektronu. Pak byly určeny kandidátní polohy aminokyselinového postranního řetězce a modifikace zbytků v těchto polohách na základě potenciálního zisku elektrostatické volné vazebné energie pozorované v optimalizacích.
Byly vypočítány rozdíly volné vazebné energie (v kcal/mol) při přechodu z nativního zbytku na isoster s kompletně nenabitým postranním řetězcem, jako je například zbytek stejného tvaru, ale zcela bez nábojů nebo parciálních nábojů na atomech. Negativní čísla ukazují předpovezené zvýšení vazebné afinity. Optimální distribuce náboje, kde čistý náboj postranního řetězce je +1, 0 nebo-1, byla použita k výpočtu rozdílu volné vazebné energie.
V těch příkladech, ve kterých je výhodný rozdíl volné vazebné energie (ÁG <-0,25 kcal/mol) a je sdružený s přechodem od nativního zbytku k isosteru s kompletně nenabitým postranním řetězcem, jako je například zbytek stejného tvaru, ale zcela bez nábojů nebo parciálních nábojů na atomech, byly vybrány modifikace ze souboru aminokyselin s nepolárními postranními řetězci, například Ala, Cys, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val.
Kde je výhodný rozdíl volné vazebné energie, který může být získán s optimální distribucí náboje v postranním řetězci a ·· ····
107 čistý náboj postranního řetězce -1 (AG <-0,25 kcal/mol), byly vybrány modifikace ze souboru aminokyselin s negativně nabitými postranními řetězci, například Asp, Glu.
A podobně, kde je výhodný rozdíl volné vazebné energie, který může být získán s optimální distribucí náboje, v postranním řetězci a čistý náboj postranního řetězce +1 (AG <-0,25 kcal/mol), byly vybrány modifikace ze souboru aminokyselin s pozitivně nabitými postranními řetězci, například Arg, His, Lys.
Konečně, v těch případech, kde je výhodný rozdíl volné vazebné energie, který může být získán s optimální distribucí náboje v postranním řetězci a čistý náboj postranního řetězce 0 (AG <-0,25 kcal/mol), byly vybrány modifikace ze soubor aminokyselin s nenabitými polárními postranními řetězci, například Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ke kterým byly přidány Cys, Gly, Met a Phe.
Jak bylo popsáno v tomto textu, navržené modifikované protilátky byly konstruovány in silico a vazebná energie přepočítána. Modifikované postranní řetězce byly konstruovány prováděním skenu dihedrálního rotameru v CHARMM, s použitím nárůstu dihedrálního úhlu po 60 stupních, aby se určila co nejvhodnější poloha pro každý postranní řetězec. Vazebné energie pak byly vypočteny pro komplexy divokého typu (základní) a mutant (modifikované) s využitím PoissonBoltzmannovy elektrostatické energie a dalších veličin pro van der Waalsovu energii a oblast skrytého povrchu.
Výsledky z těchto počítačových výpočtů modifikací pak byly znovu vyhodnoceny dle potřeby, například po následných reiteracích metody buď in silico nebo pomocí informací z dalších experimentálních strukturálních/funkčních dat.
Pravidla umožňují vytvořit několik predikcí, které mohou být roztříděny takto:
·· ► · * ·
- 108 ► · ····
99 9
9 9 9 9 9 • · · · · • 9 9 9 · · * · 9 9 9 • 99 9 9 9 9
1) modifikace v interakčním rozhraní zahrnující zbytky na protilátce, které se po vazbě stanou částečně skrytými (interakce jsou zlepšeny vytvořením vodíkových vazeb s antigenem);
2) modifikace polárních zbytků na protilátce, který se po vazbě stanou částečně skrytými a tak jsou penalizovány při desolvataci, ale nevytvářejí žádné přímé elektrostatické interakce s antigenem (zlepšení jsou obvykle vytvořena modifikací na hydrofobní zbytek s tvarem podobným zbytku divokého typu nebo přidáním zbytku, který může vytvořit výhodné elektrostatický interakce); a modifikace vzdálesnoti
3) modifikace povrchových zbytků na protilátce, který jsou v oblastech nekomplementárních potenciálů. Věří se, že tyto zlepšují elektrostatické interakce na dlouhé mezi protilátkou a antigenem bez narušení interakcí pro skládání proteinu na vazebném rozhraní,
První typ modifikace je určen vyšetřením základních fyzikálněchemických aspektů, protože tyto zbytky v podstatě tvoří vodíkové vazby s neobsazenými vodíkovými partnery antigenu. Na rozdíl od jiných metod pravidla podle vynálezu umožňují překvapující modifikace zbytku, ve kterých je cena desolvatace ponechána taková, že převáží prospěšnou energii interakce.
Druhý typ modifikací, eliminace interakcí.
modifikace reprezentuje protože získaná energie nepříznivé desolvatace při ještě další soubor je primárně výsledkem udržování nepolárních
Třetí typ modifikace se týká interakcí na dlouhé vzdálenosti, které vykazují potenciál pro významný zisk afinity. Tyto typy modifikací jsou obzvláště zajímavé, protože nevytvářejí přímé kontakty s antigenem a představují tudíž menší poruchy v jemných interakcích na rozhraní protilátky a antigenu.
·· ····
- 109 ·« 99 99 99
9 9 9 9 9 9 9 · • · · 9 · 9 9 • · 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 ·· 99 99 99 9999
Takže když bylo určeno chemické složení požadovaných postranních řetězců pro kandidátní polohu(y) aminokyselin podle pravidel, poloha(y) zbytku pak byla modifikována nebo alterována například substitucí, inzercí nebo delecí, jak je v tomto textu popsáno dále.
Kromě výše uvedených pravidel pro modifikace protilátky, je známo, že určitá stanovení, například účinky rozpouštědla, mohou být zahrnuta do výchozích (a následných) výpočtů optimálních distribucí náboje.
2. Získání protilátky nebo jejího fragmentu vázajícího antigen
Způsoby podle vynálezu, které jsou zaměřeny na tvorbu přirozeně se nevyskytující protilátky (nebo jejího fragmentu vázajícího antigen) mohou, ale nemusí nutně, začít získáváním protilátky. Takováto protilátka může být v tomto textu nazývána jako „rodičovská či „základní („parent) protilátka nebo někdy jako „první („first) protilátka a může být použita k získání informace, která umožní modifikovat nebo měnit jeden nebo více aminokyselinových zbytků buď v této protilátce (jako například v základní protilátce) nebo v modifikované nebo. změněné protilátce mající sekvenci, která je podobná sekvenci základní protilátky nebo která obsahuje části sekvence základní protilátky. Jak bylo v tomto textu popsáno, například jeden nebo více CDR (nebo jejich části) základní protilátky, byly nahrazeny odpovídájícím(i) CDR z modifikované protilátky standardními technikami genetického inženýrství, aby se získal takzvaný CDR štěp nebo transplantát. V důsledku toho způsob vycházel ze savčí monoklonální nebo polyklonální protilátky (například myší nebo primáta), chimérické, s naroubovanou CDR, humanizované nebo humánní protilátky.
AA Α· AA • A A A A • · · ·
A A AAA • · · A A A A A A
AA AAAA AA AAAA AA A
- 110 Základní protilátky byly získány od zdrojů v oboru známých nebo byly vytvořeny technologií v oboru známou. Například základní protilátka byla s naroubovanou CDR nebo humanizovaná protilátka mající úseky CDR pocházející z jiného zdroje nebo živočišného druhu, například z myší.
Základní protilátka nebo jakákoliv z modifikovaných protilátek podle vynálezu může také být ve formátu monoklonální protilátky. Způsoby výroby monoklonálních protilátek jsou v oboru známy (viz například Kohler a Milstein, Nátuře, 1975, 256, 495-497), a známy jsou také techniky pro trvalé zavedení
DNA kódující imunoglobulin do myelomových buněk (viz například Oi et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1983, 80, 825-829;
Neuberger, EMBO J. , 1983, 2, 1373-1378; a Ochi et al., Proč.
Nati. Acad. Sci. USA, 1983, 80, 6351-6355). Tyto techniky, které zahrnují in vitro mutagenezi a DNA transfekci, umožňují konstrukci rekombinantních imunoglobulinů; tyto techniky mohou být použity k produkci základních a modifikovaných protilátek používaných ve způsobech podle vynálezu nebo k produkci modifikovaných protilátek, které jsou výsledkem těchto metod. Alternativně mohou být základní protilátky získány od komerčního dodavatele. Fragmenty protilátky (scFv a Fab) mohou také být tvořeny v E. coli (metody produkce a buněční hostitelé jsou popisováni dále v textu).
Základní protilátka nebo jakákoliv z modifikovaných protilátek podle vynálezu může být protilátka třídy IgA,. IgD, IgE, IgG nebo IgM.
Jak je uvedeno výše, způsoby podle vynálezu mohou být aplikovány na více než jen tetramerní protilátky (například protilátky mající strukturu imunoglobulinu třídy G (IgG)). Například způsoby modifikace protilátky mohou být také prováděny s fragmenty vázajícími antigen kterékoliv protilátky. Fragmenty mohou být rekombinantně tvořeny a geneticky upraveny, syntetizovány nebo produkovány štěpením
AA A·A · » · · * · » *« *· 99 99
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • · 9 9 9 9 9 9 9 • · · Φ Φ ♦ ····· • · · Φ · φ φ 9 9
9999 99 9999 99 9
- 111 protilátky proteolytickým enzymem. Například fragment může být fragment Fab; štěpení papainem přeruší protilátku v oblasti, před disulfidovou meziřetězcovou vazbou (jako je například Vh-Vh) , která spojuje dva těžké řetězce. To vede k tvorbě dvou identických fragmentů, které obsahují lehký řetězec a domény VH a CH1 těžkého řetězce. Alternativně fragment může být fragment F(ab')2. Tyto fragmenty mohou být vytvořeny štěpením protilátky pepsinem, který štěpí těžký řetězec po disulfidové vazbě mezi řetězci a vede k fragmentu, který obsahuje oba místa vázající antigen. Ještě další alternativou je použití „jednořetězcové protilátky. Jednořetězcové Fv (scFv) fragmenty mohou být konstruovány celou řadou způsobů. Například C-konec VH může být připojen k N-konci VL. Typicky je mezi VH a VL umístěna spojovací sekvence, „linker (například (GGGGS)4). Nicméně pořadí, ve kterém mohou být řetězce spojeny, může být obráceno a mohou být vloženy značky („tag) , které usnadňují detekci nebo purifikaci (například značky Myc-, His- nebo FLAG) (značky jako například tyto mohou být připojeny ke kterékoliv protilátce nebo fragmentu protilátky podle vynálezu; jejich použití není omezeno na scFv) . V důsledku toho, a jak je uvedeno níže, označené protilátky jsou v rozsahu předkládaného vynálezu. V alternativních provedeních protilátky používané ve způsobech popsaných v tomto textu nebo vytvářené těmito způsoby, mohou být dimery těžkého řetězce nebo dimery lehkého řetězce. Ještě dále může být použit lehký nebo těžký řetězec protilátky nebo jejich části, například protilátka s jednou doménou (DAb).
Protože způsob podle vynálezu mohou být iterativní, základní protilátka nemusí být přirozeně se vyskytující protilátka. Protože postup modifikace protilátky může být opakován tolikrát, kolikrát je nezbytné, výchozí protilátka (nebo její fragment vázající antigen) může být zcela jiného než humánního původu nebo protilátkou obsahující humánní FR a CDR jiného než ·· ·· » · · « » · « ·· ··»· ·· ····
- 112 humánního původu (například myšího). To znamená, že „základní protilátka může být protilátka s naroubovaným CDR, která je podrobena způsobům podle vynálezu, aby se zlepšila afinita protilátky, jako je například afinitní zrání protilátky. Jak je uvedeno výše, afinita může být zlepšena pouze do rozsahu, který je přibližně stejný jako (nebo není významně horší) je afinita přirozeně se vyskytující humánní protilátky (donor FR) pro její antigen. „Základní protilátka může tedy místo toho být protilátka vytvořená jedním nebo více dřívějšími koly modifikace, včetně protilátky, která obsahuje sekvence více než jednoho druhu (například humánní FR a CDR jiného než humánního původu). Způsoby podle vynálezu zahrnují použití „základní protilátky, která obsahuje jeden nebo více CDR z protilátky jiného než humánního původu (například myšího) a FR z humánní protilátky. Alternativně základní protilátka může být zcela humánní.
Kde je ovšem struktura již k dispozici, může se výpočetní analýza začít s touto strukturou (spíše než ji vytvářet znovu).
3. Způsob podle vynálezu založené na strukturálních datech protilátky a antigenu
Je známo, že proteiny se skládají do trojrozměrných struktur, které jsou určovány sekvencemi jejich aminokyselin a rozpouštědlem, ve kterém je daný protein (nebo komplex obsahující protein) dodáván, ovlivňuje jeho biologickou může být Empirické struktura způsobů.
Trojrozměrná struktura proteinu aktivitu a stabilitu a tato určena nebo předpovězena celou řadou metody zpravidla používají fyzikálně biochemickou analýzu. Alternativně terciární struktura může být předpovězena s použitím modelové stavby trojrozměrných struktur jednoho nebo více homologních proteinů (nebo • ·
- 113 proteinových komplexů), které mají známé trojrozměrné struktury. Rentgenová krystalografie je možná nejlepší známý způsob, jak určit proteinovou strukturu (podle toho může být použit termín „krystalová struktura místo termínu „struktura), ale mohou také být vytvářeny odhady s použitím cirkulárního dichroismu, rozptylu světla nebo měřením absorpce a emise energie záření. Další použitelné techniky zahrnují neutronovou difrakcí a nukleární magnetickou resonanci (NMR). Všechny tyto metody jsou odborníkům známy a byly dobře popsány ve standardních příručkách (viz například Physical Chemistry, 4th Ed. , W.J. Moore, Prentiss-Hall, N.J., 1972, nebo Physical Biochemistry, K.E. Van Holde, Prentiss-Hall, N.J., 1971) a četných publikacích. Jakákoliv z těchto technik může být prováděna, aby se určila struktura protilátky nebo komplexu obsahujícího protilátku a antigen, které pak mohou být analyzovány podle způsobů podle předkládaného vynálezu a použity například jako podkladové informace pro jeden nebo více kroků ve způsobech podle vynálezu.
Taktéž tyto a podobné způsoby mohou být použity, aby se získala struktura antigenu navázaného na fragment protilátky, včetně fragmentu, který tvoří například jednořetězcová protilátka, fragment Fab apod. Způsoby tvoření krystalů protilátky, fragmentu protilátky nebo komplexu scFv-antigenu byly publikovány například van den Elsen et al. (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1999, 96, 13679-13684, který je výslovně zahrnut v tomto textu formou odkazu).
4. Výpočetní analýza
Základní výpočtové vzorce použité při provádění způsobů podle vynálezu jsou poskytnuty například v patentu Spojených států č. 6 230 102, jehož obsah je celý zahrnut formou odkazu do předkládané přihlášky.
I · · · ····
114
Jak je uvedeno „módi f i kovány) výše, protilátky jsou změněny (nebo podle výsledky výpočetní analýzy elektrostatických sil mezi protilátkou a antigenem, ke kterému se váže, výhodně v souladu s jednotlivými kritérii nebo pravidly podle vynálezu popsanými v tomto textu. Výpočetní analýza umožňuje předpovídat optimální distribuce náboje v protilátce a jedním způsobem, jak reprezentovat distribuci náboje ve výpočtovém systému, je soubor multipólů. Alternativně distribuce náboje může být reprezentována souborem bodových nábojů lokalizovaných v polohách atomů protilátky. Jakmile je určena distribuce náboje (výhodně optimální distribuce náboje), může se modifikovat protilátka tak, aby souhlasila nebo lépe souhlasila s touto distribucí náboj e.
Výpočetní analýza může být zprostředkována postupem realizovaným počítačem, který provádí výpočty popsané v patentu Spojených států č. 6 230 102. Počítačový program je zde adaptován tak, že bere do úvahy skutečný kontext vazby antigenu a protilátky (a na rozdíl od jiných metod bere tento způsob podle vynálezu do úvahy například rozpouštědlo, elektrostatické síly na dlouhé vzdálenosti a dielektrické účinky ve vazbě mezi protilátkou a jejím antigenem v rozpouštědle). Postup je určen k identifikaci modifikací protilátkové struktury, která dosáhne distribuce náboje na „zralé protilátce, která minimalizuje elektrostatický příspěvek k volné vazebné energii mezi zralou protilátkou a jejím antigenem (ve srovnání s příspěvkem nemodifikované („výchozí nebo „základní) protilátky. Jak je typické, počítačový systém (nebo zařízení, která vykonávají operace popsané v tomto textu (a detailněji v patentu Spojených států č. 6 230 102) bude zahrnovat výstupní zařízení, které zobrazuje informace uživateli (například CRT displej, LCD displej, tiskárna, komunikační zařízení, jako je například
- 115 ·· ···· »· ···· modem, zvukový výstup apod.). Kromě toho instrukce pro provádění způsobu, částečné nebo celkové, mohou být přeneseny na médium vhodné pro použití v elektronickém zařízení pro provádění instrukcí. Způsoby podle vynálezu jsou tedy přístupné pro vysoce výkonné postupy zahrnující software (například počítačem snímatelné instrukce) a hardware (například počítače, roboty a čipy). Přitom postup realizovaný počítačem není omezen na konkrétní počítačovou platformu, konkrétní procesor nebo konkrétní vysokoúrovňový programovací jazyk.
Použitelný postup je uveden například v patentu Spojených států č. 6 230 102 a detailnější výklad je poskytnut například v Lee a Tidor (J. Chem. Phys., 1997, 106, 8681-8690), každý z nich je výslovně zahrnut v tomto textu formou odkazu.
5. Výpočetní metody pro návrh/konstrukci založené na struktuře
Vzorový přístup ke zlepšení afinity protilátky k jejímu antigenu je použití výpočetních metod pro konstrukci založených na struktuře. Jeden takový způsob je znám jako „přeskládání postranního řetězce s využitím algoritmu eliminace mrtvých konců (viz například Lasters et al., Protein Eng., 8, 815-22; Looger et al., J. Mol. Biol., 307, 429-45; Dahiyat et al., Protein Sci., 5, 895-903). Při takovém výpočtu jsou zbytky protilátky současně mutovány modelovým výpočtem na jakoukoliv z 20 přirozeně se vyskytujících aminokyselin a výsledné mutanty jsou výpočetně vyhodnoceny na jejich afinitu. Seznam výpočetm generovaných mutant může být tříděn podle vypočtené stability mutanty, aby se vytvořil seznam variant, které budou experimentálně exprimovány. V kalkulacích hlavního řetězce proteinu je ponechána velmi malá nebo žádná flexibilita, což zajistí, aby navržené mutanty byly podle předpokladu stabilní při dané konformaci CDR. Výpočetní
- 116 analýza tedy umožňuje predikovat takové mutace protilátky, které zesílí afinitu k jejímu antigenu.
6. Tvorba protilátek a jejich fragmentů vázajících antigen
Selekce, klonování a výroba protilátek, například chimérických, humanizovaných, monoklonálních a jednořetězcových protilátek jsou v oboru dobře popsány. Navíc, humanizace mAb hu5c8 byla popsána již dříve (viz Lederman S et al., J Exp Med. 1992 Apr 1; 175(4):1091-101 a Karpusas M et al, Structure (Camb), 2001 Apr 4; 9(4):321-9, v daném pořadí. Tato protilátka je k dispozici ve sbírce ATCC (PTA-4931). Protilátka 5c8 byla trvale exprimována v myelomových buňkách NSO a purifikována pomocí proteinu A a gelovou filtrační chromatografií. SDS-PAGE a analytická gelová filtrační chromatografie prokázaly, že protein vytvořil očekávaný tetramer spojený disulfidovou vazbou. Jednořetězcové protilátky podle vynálezu byly typicky exprimovány v E. coli a imunopurifikovány s použitím standardních technik.
7. Produkce 5c8 Fab
5c8 Fab byl exprimován bicistronickým plazmidem pBEF064. První cistron obsahuje 354 nukleotidů těžkého řetězce 5c8, které kódují variabilní oblast těžkého řetězce se 118 aminokyselinami, pak následuje ve shodném čtecím rámci 306 nukleotidů, které kódují prvních 102 aminokyselin humánní IgGl konstantní domény a 18 nukleotidů, které kódují značku se 6 histidiny. Druhé místo vstupu ribozomu je lokalizováno 7 nukleotidů za koncem cistronu těžkého řetězce. Druhý cistron obsahuje 333 nukleotidů, které kódují 111 aminokyselin variabilní oblasti lehkého řetězce 5c8, pak následuje ve shodném čtecím rámci 321 nukleotidů, které kódují 107 aminokyselin konstantní domény lehkého řetězce. Exprese byla • · · ··· ··· ·· ···· ·· ···· ·· ·
- 117 prováděna v E.coli a byla řízena promotorem ara-BAD a těžké a lehké řetězce jsou směrovány do periplazmatického prostoru pomocí periplazmatických lokalizačních signálů OmpA (těžký řetězec) a PhoA (lehký řetězec). Periplazmatické lokalizační signály byly odštěpeny od proteinu během periplazmatického exportu.
8. Vazebné testy
Vazebné testy byly typicky prováděny s použitím soupravy KinExA™. Test byl prováděn průchodem naředěného roztoku protilátky (nebo fragmentu vázajícího antigen) přes kolonu poskytnutou v soupravě, kdy některá protilátka (nebo její fragment vázající antigen) interaguje s antigenem na perličkách. Pak byla protilátka (nebo fragment) detekována se sekundární anti-humánní IgG protilátkou obsahující těžké a lehké řetězce konjugovanou s fluorescenčním barvivém Cy5 (Jackson ImunoResearch Laboratories, lne., West Grove, PA). Koncentrace protilátky (nebo fragmentu) byla nastavena tak, že signál fluorescenčního barviva byl přímo úměrný koncentraci proteinu. Aby se získala afinita interakce v kapalné fázi, byla protilátka (nebo fragment) smíchána se sérově ředěným rozpustným antigenem. Tyto proteiny (protilátka a antigen) byly ponechány, aby dosáhly rovnováhy během tříhodinové inkubace při teplotě místnosti nebo při inkubaci přes noc ve 4 °C. Směs byla ponechána protéci přes kolonu obsahující antigen a signál byl úměrný množství nenavázané protilátky (nebo fragmentu protilátky), která zůstává v roztoku. Výsledná data byla vynesena do grafu s lineárně-logaritmickou stupnici a nelineární regresí proložena kvadratickou funkcí, která poslytuje hodnotu pro KD.
- 118 « · · · · · ··· ·· ···· ·· ···· ·· ·
9. Vazebný test 5c8-CD154
Byl prováděn kompetitivní vazebný test založený na testu ELISA. Destičky NUNC Maxisorb byly potaženy mAb anti-c-myc v koncentraci 10 μ9/ιη1 v PBS po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Byla připravena sériová ředění neznačeného 5c8 Fab (mutanty nebo divokého typu) a smíchána se stejnými objemy kompetitoru 5c8 Fab značeného biotinem o fixní koncentraci (30 ng/ml) a přidána na destičku. Po 2 hodinách inkubace při teplotě místnosti byla destička promyta a navázaný kompetitor 5c8 Fab značený biotinem byl detekován streptavidinem-HRP.
Vazebné afinity byly funkcemi. získány z proložení čtyřparametrovými
Příklad 2: Protilátky
1. Tvorba protilátek
Selekce, klonování a humanizace dříve. Viz Lederman S et al, 175(4):1091-101 a Karpusas M et hu5c8 mAb byly popsány již J Exp Med., 1992, Apr 1; al, Structure (Camb), 2001,
Apr 4; 9(4):321-9, v daném pořadí. Hybridom hu5c8 mAb je k dispozici ve sbírce ATCC (HB10916).
2. Vazebný test CD154
Kompetitivní vazebný test založený na FACS byl prováděn na buňkách huCDl54+ Dl.l, které jsou k dispozici ve sbírce ATCC (CRL-10915). Vazba 0,1 mg/ml biotinylované hu5c8 mAb k buněčnému povrchu CD154 byla kompetována titraci hu5c8 mAb nebo jiné protilátky. Biotinylovaná hu5c8 mAb navázaná na buňku byla detekována streptavidinem-fykoerytrinem (PE)
- 119
9 · · ·· 9 9 9 9 9 9 9 9 • · 9 · 9*99 99 9
999 9 9 *9
999 999 999
9999 99 9999 99 9 (BD-PharMingen San Diego, CA, USA) . Relativní vazebné afinity byly odvozeny z hodnot IC50 získaných proložením čtyřparametrových funkcí.
3. CD154-FcyR přemosťovací testy
Vazebné afinity FcyR byly měřeny s použitím testů založených na schopnosti protilátky tvořit „můstek mezi antigenem a buňkou nesoucí FcyR (viz níže) . FcyRI (CD64) přemosťovací test byl prováděn potažením 96-jamkových ELISA destiček Maxisorb (Nalge-Nunc Rochester, NY, USA) rozpustným rekombinantním humánním CD154 v koncentraci 1 mg/ml přes noc ve 4 °C (Biogen, Karpusas M et al, Structure, 1995, Dec 15; 3(12) :1426) v PBS, a pak blokádou 1% BSA v PBS. Titry protilátky se pak vázaly k CD154 po dobu 30 minut ve 37 °C, destičky byly promyty a byla měřena vazba fluorescenčně značených buněk U937 (CD64+). Buňky U937 byly pěstovány v médiu RPMI s 10% FBS, 10 mM HEPES, L-glutaminem a penicilinem/streptomycinem, rozděleny v poměru 1:2 a aktivovány po dobu jednoho dne před testem s IFNy v koncentraci 1000 jednotek/ml, aby se zvýšila exprese FcyRI.
Přemosťovací testy FcyRIII (CD16) byly prováděny s použitím monovrstvy buněk vaječníků čínského křečka (CHO) (Biogen) exprimujících CD154 pěstovaných na 96-jamkových tkáňových kultivačních destičkách (Corning Life Sciences Acton, MA, USA) , s měřením na mAb závislé vazby fluorescenčně značených buněk Jurkat transfekovaných CD16 (dar od Dana Farber Institute, Boston, MA, USA). Buňky CHO-CD154+ byly nasazeny na 96-jamkové destičky v koncentraci lxlO5 buněk/ml a byly pěstovány do dosažení konfluence v α MEM s 10% dialyzovaným FBS, 100 nM metotrexátem, L-glutaminem a penicilin/streptomycinem (všechna činidla od Gibco-BRL Rockville, MD, USA). Buňky Jurkat CD16+, rostoucí v RPM s 10% FBS, ·· ····
99 99 99
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9
9999 99 9999 99 ·
- 120 400 mg/ml Geneticinem, 10 mM HEPES, pyruvátem sodným, L-glutaminem a penicilin/streptomycinem (všechna činidla od Gibco-BRL), byly rozděleny v poměru 1:2 jeden den předtím prováděním testu.
V testech pro oba receptory, FcyRI a FcyRIII, byly buňky nesoucí Fc receptor značeny 2',Ί'-bis-(2-karboxyethyl)-5-(a6)-karboxyfluorescein-acetoxymethylesterem (BCECF-AM) (Molecular Probes Eugene, OR, USA) po dobu 20 minut ve 37 °C. Po promytí, aby se odstranil nadbytek BCECF-AM, bylo lxlO5 značených buněk inkubováno v testu po dobu 30 minut ve 37 °C. Nenavázané buňky FcyR+ byly odstraněny několikanásobným promytím a destičky odečteny na čtečce destiček Cytofluor 2350 Fluorescent Microplate Reader (Millipore Corporation Bedford,
MA, USA) s excitační vlnovou délkou 485 nm a emisní vlnovou délkou 530 nm.
Příklad 3: Zlepšení vazebné afinity k antigenu u protilátky anti-CDl54
V tomto příkladu jsou popsány způsoby zlepšení vazebné afinity protilátky proti terapeuticky relevantnímu antigennímu cíli.
Protilátka proti humánnímu CD154 (viz například Yamada et al., Transplantation, 2002, 73, S36-9; Schonbeck et al. , Cell. Mol. Life Sci., 2001, 58, 4-43; Kirk et al. , Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Sci., 2001, 356, 691-702; Fiumara et al., Br. J. Hematol., 2001, 113, 265-74; a Biancone et al., Int. J. Mol. Med., 1999, 3, 343-53), který je členem TNF rodiny proteinů zapojených do zprostředkování imunologických reakcí, byla získána afinitní maturací v myších. Z těchto studií byla
- 121 ·· · · ·· ·· • · · ···· · 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
9999 99 9999 99 9 ·« ···· vyvinuta monoklonální protilátka 5c8 a určena pro inhibici patologických procesů zprostředkovaných CD154.
Při úsilí zvýšit afinitu interakce 5c8/CD154 byly použity optimalizační techniky elektrostatického náboje na krystalovou strukturu komplexu protilátky a antigenu ve dvoustupňovém postupu, aby se tak navrhly mutanty se zlepšenou afinitou. Nejdříve byla použita optimalizace elektrostatického náboje k určení polohy(poloh) CDR zbytku(ů), které jsou pro vazbu suboptimální (Lee a Tidor, J. Chem. Phys., 1997, 106, 86818690; Kangas a Tidor, J. Chem. Phys., 1998, 109, 7522-7545). Za druhé byly určeny soubory CDR mutací pro další výpočetní analýzu. Na základě těchto kalkulací byla modelovými výpočty určena vazebná afinita pro 23 modifikovaných protilátek, které mají jednu mutaci (tj. 23 „jednoduchých mutant). Bylo předpovězeno, že 8 jednoduchých mutant by bylo výhodnějších než protilátky divokého typu, jak pokud jde o elektrostatickou energii, tak pokud jde o plnou energetickou funkci včetně van der Waalsovy energie a povrchové oblasti dostupné rozpouštědlu. Tyto veličiny nesouvisejí s elektrostatickými silami, ale byly vypočteny, aby se zajistilo, že navržené mutace nejsou v kontaktu s jinými zbytky a nesnižují významně rozsah oblasti skrytého povrchu; zvětšená oblast skrytého povrchu při tvorbě komplexu je obvykle prospěšná (viz sloupec „Plná energie v tabulce uvedené níže).
Na základě výsledků optimalizace náboje byly určeny mutace pro komputační analýzu (byly vyšetřovány optimální distribuce náboje a návrhy mutací, které byly bližší optimálním než současný zbytek; tento postup byl prováděn inspekcí). Optimalizace náboje poskytla náboje v atomových centrech, ale neposkytovala skutečnou mutaci. Kolo optimalizací náboje bylo prováděno s různými omezeními zavedenými tak, aby reprezentovala přirozené charakteristiky postranního řetězce. Například byla prováděna optimalizace pro čistý náboj ·* ···· ·♦ ·· ·· 99
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 • · ·» · · · 9 9 · · • 9 · ··· ···
9999 99 9999 99 9
- 122 postranního řetězce -1, 0 a +1 s dalším omezením, že žádný atomový náboj nepřekročil absolutní hodnotu 0,85 jednotky náboje elektronu.
Krystalová struktura komplexu CDl54/5c8 (PDB kód: 1I9R) byla připravena s použitím standardních postupů pro přidání atomů vodíku s programem CHARMM (Accelrys, lne., San Diego, CA). Na N-konce a C-konce byly použity N-acetamidové a N-methylamidové fragmenty, v daném pořadí. S použitím modelu elektrostatického kontinua byla prováděna optimalizace elektrostatického náboje na každém postranním řetězci aminokyselin v CDR protilátky ACQ2. Příslušné mutace postranního řetězce byly pak určeny na základě potenciálního zisku energie elektrostatické vazby pozorovaného při optimalizacích. Postranními řetězce byly budovány prováděním skenu dihedrálního rotameru v CHARMM, s použitím nárůstu dihedrálního úhlu po 60 stupních, aby se určila co nejvýhodnější poloha pro každý postranní řetězec. Vazebné energie pak byly vypočteny pro komplexy divokého typu a komplexy mutant s použitím Poisson-Boltzmannovy elektrostatické energie a dalších veličin pro van der Waalsovu energii a oblast skrytého povrchu.
Krystalová struktura ligandu CD40 v komplexu s fragmentem Fab humanizované neutralizační protilátky (5c8) byla rozlišena na 3,1 Á v pH 6,50. Protože CD154 je přirozeně trimer, jsou v komplexu tři molekuly Fab 5c8 a 5 molekul CD154. V komplexu tvoří tři nezávislá rozhraní CDl54/5c8. Atom zinku (Zn) byl navázán ke každému z Fab 5c8 a byl zahrnut do výpočtu. Výpočty byly prováděny nezávisle pro tři rozhraní a substituce aminokyselin, o kterých bylo zjištěno, že jsou výhodné oproti divokému typu pro všechna tři místa, byly využity.
Následující tabulka ukazuje výsledky optimalizací získané pro variabilní kličku 1 CDR v lehkém řetězci 5c8 pro všechny tři molekuly 5c8. Sloupec Mut (mutační energie) odpovídá rozdílu volné vazebné energie (v kcal/mol) při přechodu z nativního • Φ · · ·· ·· • · · · φφφφ φ φ φ • · · φ · φφφφ • · · φ φ φ · · φ · φ φ φ φ · ♦ · φ φ φ • Φ φφφφ ·· φφφφ φφ ·
- 123 ·· ···· zbytku na isoster se zcela nenabitým postranním řetězcem, t j . stejného tvaru, ale úplně bez nábojů nebo parciálních nábojů na atomech. Negativní čísla ukazují předpovězené zvýšení vazebné afinity. Sloupec Opt-1 odpovídá rozdílu volné vazebné energie, která může být získána při optimální distribuci náboje v postranním řetězci a čistém náboji postranního řetězce -1. Sloupce OptO a Optl odpovídají rozdílům volné vazebné energie při optimálních nábojích, čistý náboj je 0 a +1, v daném pořadí. Na základě těchto výsledků a vizuální inspekce struktury jsou navrženy mutace, které by mohly využít tato zlepšení volné vazebné energie. Například mutace ze SER 31 na VAL, což je nenabitý isoster, využívá predíkované 1,23 až -0,98 kcal/mol v mutační energii. Mutace GLN 27 na GLU používá -1,21 až -0,88 kcal/mol predikovaného maximálního zisku volné energie pro mutaci postranního řetězce s čistým nábojem -1.
Tabulka 1 - Výsledky optimalizace získané pro variabilní kličku 1 CDR lehkého řetězce 5c8
Zbytek řetězce Mut Opt-1 OptO Optl
1L 24 ARG -0,11 0,17 -0,11 -0,37
1L 26 SER -0,06 -0,59 -0,06 0,57
1L 27 GLN 0,21 -1,21 -0,95 -0,26
1L 28 ARG 0,11 -0, 96 -0,71 -0, 40
1L 30 SER -0,01 -0,14 -0,42 -0,47
1L 31 SER -1,23 3,88 -2,16 -0,42
1L 32 SER 1,45 0, 91 -0, 65 -0,67
1L 33 THR -0,02 -0, 66 -0,41 0,07
1L 34 TYR -0,25 -1,00 -1,10 -0, 80
1L 35 SER -0,02 0,00 -0,11 0,04
1L 36 TYR 0,01 -0,95 -1,31 1, 74
• Φ ·· ·· ·· • · · · * · « · · · φ ·· · · φ « · φ · ·· ···· • · · · · · ··· ·· ···· ·· ···· ·φ ·
- 124 -
1L 38 HSD -0,15 -0, 48 -0,70 -0, 62
2L 24 ARG -0,46 -1, 04 -0,46 0,13
2L 26 SER -0,29 -1,60 -0,79 0,19
2L 27 GLN 0,26 -0,88 -0,41 0,35
2L 28 ARG -0,59 -0,94 -0,46 0,08
2L 30 SER 0,08 -0,38 -0, 55 -0,42
2L 31 SER -0, 98 4,04 -1,89 -0,54
2L 32 SER 0,74 2,31 -0,86 -0,87
2L 33 THR 0, 00 -0,65 -0, 38 0,09
2L 34 TYR -0,09 -0,62 -0, 48 -0,12
2L 35 SER 0,09 0, 02 0,09 0,18
2L 36 TYR 0, 10 -1,70 -1,24 2,37
2L 38 HSD -0,23 -1,20 -1,17 -0,79
3L 24 ARG -0,35 -0,34 -0,35 -0,35
3L 26 SER -0,27 -1,23 -0,53 0,27
3L 27 GLN 0,11 -1, 07 -0,71 -0,08
3L 28 ARG -0,30 -0, 85 -0, 30 0,15
3L 30 SER 0,03 0,02 -0,29 -0, 36
3L 31 SER -1, 06 4,02 -2,03 -0,90
3L 32 SER 0,82 1,18 -0,85 -1,05
3L 33 THR 0,20 -0, 32 -0,15 0,29
3L 34 TYR 0,09 -0,80 -0,74 -0,38
3L 35 SER 0,06 -0,05 -0,10 -0,02
3L 36 TYR 0,04 -0,99 -1, 30 1, 66
3L 38 HSD -0,20 -0,46 -0,76 -0,72
Jak bylo popsáno výše, navržené mutanty byly konstruovány
in silico a vazebná energie byla přepočítána. Výsledky
z těchto vypočtených mutací jsou ukázány níže. Čísla
představuj í změnu ve vazebné afinitě od divokého typu
k mutantě (mutanta s negativním významem je výhodnější). Jsou uvedeny energie pro všechny tři řetězce 5c8.
*»·· • t
- 125 ·· 99
9 9 · • · 9 • · ·
9 9
9999
99
9 9 9
9 9
9 9
9 9
9999
Tabulka 2 - Výpočty mutací pro CDR 5c8
Mutanta řetězce Plná energie Elektro síly
1H TYR33PHE 0,197 -2,741
1H ASN59ASP -0,995 -2,548
1H ASN59LEU -1,294 -2,517
1L SER26ASP -0,703 -0,712
1L GLN27GLU -0,514 -0,357
1L SER31VAL 8,154 -1,739
1L THR33ASP -0,219 -0,916
1L TYR54GLU -0,999 -0,729
2H TYR33PHE 0, 623 -2,726
2H ASN59ASP -0,218 -2,885
2H ASN59LEU -1,116 -3,067
2L SER26ASP -1,333 -1,627
2L GLN27GLU -0,658 -0,395
2L SER31VAL 9,293 -0,832
2L THR33ASP -0,430 -1,359
2L TYR54GLU -1,012 -1,030
3H TYR33PHE 0,145 -1,979
3H ASN59ASP -0,837 -2,267
3H ASN59LEU -1,179 -2,271
3L SER26ASP -0,540 -0,565
3L GLN27GLU -0,497 -0,342
3L SER31VAL 8,129 -1,284
3L THR33ASP -0,337 -0,676
3L TYR54GLU -1,123 -0,825
Jak výsledky ukazují, výpočetní postup popsaný výše byl úspěšně realizován pro predikci mutací postranního řetězce zvyšujících afinitu.
- 126 ·« Φφ ·Φ • 9 · » · · Φ · ·· · • Φ Φ « Φ Φ Φ φ Φ • · · Φ Φ φ φ φ φ ·· ···· ΦΦ ΦΦΦΦ ·· φ φ· »»·»
První typ mutace byl vyřešen inspekcí, protože tyto zbytky v podstatě vytvářejí vodíkové vazby s neobsazenými vodíkovými partnery antigenu. Překvapivě se zdálo, že ve většině případů cena desolvatace převáží prospěšnou energii interakce. Druhý typ mutace reprezentuje méně intuitivní typ nebo soubor mutací, protože získaná energie je primárně výsledkem eliminace nepříznivé desolvatace při udržování nepolárních interakcí. Třetí typ mutace se týká interakcí na dlouhé vzdálenosti, které vykazují potenciál pro významný zisk afinity. Tyto typy mutací jsou obzvláště zajímavé, protože nevytvářejí přímé kontakty s antigenem a představují tudíž menší poruchy v jemných interakcích na rozhraní protilátky a antigenu.
Podle výpočetních dat získaných tak, jak bylo popsáno výše, byly vytvořeny mutanty 5c8 (fragment Fab) a jejich afinita k CD154 byla srovnávána s afinitou divokého typu Fab 5c8 v kompetitivním vazebném testu založeném na testu ELISA a testu KinExA™ popsaných výše. Vybrané výsledky některých mutant jsou ukázány v tabulce, která následuje. Kde byl prováděn test afinity, jsou výsledky ukázány jako změny afinity svinutí („fold) oproti původnímu Fab 5c8 (divokého typu). Čísla větší než 1,0 ukazují zvýšenou afinitu, čísla menší než 1,0 ukazují sníženou afinitu.
Tabulka 3 - Pozorované změny afinity pro změněné fragmenty Fab protilátky 5c8
Mutace těžkého řetězce Mutace lehkého řetězce ELISA - násobek zlepšení proti divokému typu KinExa Kd (pM) Č. mutan- ty
(divoký typ)- (divoký typ) 1,0 264
T30H - 2,3 307 1
Y33W - 7,0 169 2
- Y36W 420 3
··
4 ·
« • 9
- 127 • 9 9 4 4 9 9 4
9 9 9 9 4 • » · 4 · · « <
• · · * 9 ·
9999 99 9994
S54N - 2,0 298 4
— T33W 5, 0 158 5
- S26D 2, 6 142 6
- Q27E 6, 3 81 7
- S31V 0, 02 8
- T33D 0,22 9
- Y54E 0,06 10
Y33F - 0,05 11
N59D - 0,13 12
N59L - 0,01 13
S26D/Q27E 5, 6 41 14
- S26D/Q27E/T33W 3,8 44 15
T30H S26D/Q27E 5,8 70 16
Y33W S26D/Q27E/T33W 5,9 23 17
T30H S26D/Q27E/T33W 5,4 54 18
S54N S26D/Q27E 65 19
S54N S26D/Q27E/T33W 44 20
T30H/Y33W/S54N S26D/Q27E 101 21
T30H/Y33W/S54N S26D/Q27E/T33W 55 22
Y33W S26D/Q27E 5,2 53 23
T30H/Y33W S26D/Q27E 8,0 52 24
T30H/Y33W S26D/Q27E/T33W 5, 6 12 25
T30H/S54N S26D/Q27E/T33W 63 26
Y33W/S54N S26D/Q27E/T33W 52 27
Y33W/S54N S26D/Q27E 77 28
Analýza odchylek od ideální distribuce náboje na 50 aminokyselinách v CDR protilátky 5c8 vedla k predikci pěti mutant, které by měly vyšší afinitu k CD154 ve srovnání s divokým typem: Asn59Asp, Asn59Leu, Ser26Asp, Gln27Glu a Tyr54 Glu. Tyto mutanty byly zkonstruovány a charakterizovány kompetitivním testem ELISA. Mutanty S26D a Q27E se zlepšenou afinitou byly také spojeny do dvojité mutanty, která měla 9krát vyšší afinitu ve srovnání s Fab 5c8 divokého typu.
O 4
444444 44 4444 ·4
- 128 Na CDR z 5c8 byl použit algoritmus znovusvinutí postranního řetězce. Pro 30 CDR zbytků bylo výpočtově analyzováno 104° sekvencí a 14 jednoduchých a dvojitých mutant bylo vybráno pro další experimentální sledování. Několik mutant vykazovalo vyšší afinitu ve srovnání s Fab 5c8 divokého typu. Mutanty se znovusvinutým postranním řetězcem byly dále kombinovány s mutantami s vyšší elektrostatickou afinitou. Kombinace 5 bodových mutací měla 25krát vyšší afinitu ve srovnání s divokým typem. Kromě toho v buňkách vykazovala lepší inhibici upregulace ICAM (biologický důsledek interakce CD40-CD154), která byla srovnatelná s blokádou projevovanou kompletní protilátkou 5c8. Pro obě metody bylo dosaženo celkové poměrné četnosti 40 % při predikci mutant.
Byl prováděn test aktivace B lymfocytů závislé na T lymfocytech. Inhibice aktivace B lymfocytů závislé na T lymfocytech byla měřena kokultivací Dl.1:Ramos. Navázání CD40 na B lymfocytech prostřednictvím CD154 vede k aktivaci B lymfocytů a upregulaci ICAM-1 (CD54). Anti-CD154 mAb a Fab inhibují aktivaci B lymfocytů přerušením interakce CD40-CD154. Ve stručnosti, titry Fab anti-CD154 byly přidány k poměru 1:4 buněk Dl.1:Ramos a inkubovány přes noc. Bylo provedeno dvoubarevné barvení FACS (CD20FITC/CD54APC), které umožňuje kvantifikaci upregulace ICAM-1 na buňkách Ramos. Výsledky jsou ukázány v tabulce 4.
Tabulka 4: Pozorovaná účinnost v testu aktivace B lymfocytů závislé na T lymfocytech
Mutace těžkého řetězce Mutace lehkého řetězce IC50 (gg/ml)
(divoký typ) (divoký typ) 1,215
- S26D/Q27E 0,287
Y33W S26D/Q27E/T33W 0,131
T30H/Y33W S26D/Q27E/T33W 0, 165
- 129
Ekvivalenty
Odborník si je vědom, že existuje řada ekvivalentů ke specifickým provedením vynálezu popsaným v tomto textu, aniž by se muselo užít více než rutinní experimentování. Předpokládá se, že takové ekvivalenty jsou zahrnuty do rozsahu připojených patentových nároků.
Různé modifikace vynálezu, kromě těch popsaných v tomto textu, budou odborníkům zjevné z předcházejícího popisu. Předpokládá se, že takové modifikace také spadají do rozsahu připojených patentových nároků. Každý odkaz (včetně, aniž by byl výčet omezující, článků v odborných časopisech, patentů Spojených států a jiných než amerických, publikací patentových přihlášek, publikací mezinárodních patentových přihlášek, přírůstkových čísel genové banky apod.) citovaný v předkládané přihlášce, je v tomto textu zahrnut jako celek formou odkazu.
• · • · · · ···· · · « · 9·· · · · • 9 999 9 999 99
999 999 999
SEZNAM SEKVENCÍ <110> Van Vlijmen, Herman
Lugovskoy, Alexey Alexandrovich Hanf, Karl J.M.
<120> Protilátky anti-CD154 <130> BGID0001-500WO (P0604) <150> US 60/591 337 <151> 2004-07-26 <160> 6 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 111 <212> PRT <213> syntetická sekvence <220>
<223> Popis syntetické sekvence: variabilní oblast lehkého řetězce divokého typu 5c8
<400> 1
Asp Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro
1 5 10 15
Gly Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gin Arg Val Ser
20 25 30
Ser Ser Thr Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly
35 40 45
Gin Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser
50 55 60
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
65 70 75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
80 85 90
Tyr Cys Gin His Ser Trp Glu Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly
95 100 105
Thr Lys Leu Glu Ile Lys 110 ·· «· · · • · • · • ·
- 131 ···· · · · · · · ·· · · * · · · ·» ···· · · · · · «·· · · · · · · ·« ·«·· ·· ··«· ·· · <210> 2 <211> 333 <212> DNA <213> syntetická sekvence <220>
<223> Popis syntetické sekvence: variabilní oblast lehkého řetězce mutanty 5c8 <220>
<221> různé znaky <222> (70)..(72), (76)..(84), (88)..(108), (112)..(114), (160)..(162), (169)..(180), (277)..(279), (283)..(294), (298) . . (303) <223> n je jakýkoliv nukleotid <400> 2
gac Asp 1 atc Ile gtt Val ctc Leu aca Thr 5 cag Gin tet Ser cct Pro get Ala acc Thr 10 tta Leu tet Ser gta Val tet Ser ccg Pro 15 45
gga gag agg gcc acc atc tea tgc nnn gcc nnn nnn nnn gtc nnn 90
Gly Glu Arg Ala Thr 20 Ile Ser Cys Xaa Ala 25 Xaa Xaa Xaa Val Xaa 30
nnn nnn nnn nnn nnn nnn atg nnn tgg tac caa cag aaa cca gga 135
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 Xaa Met Xaa Trp Tyr 40 Gin Gin Lys Pro Gly 45
cag cca ccc aaa ctc ctc atc aag nnn gca tcc nnn nnn nnn nnn 180
Gin Pro Pro Lys Leu 50 Leu Ile Lys Xaa Ala 55 Ser Xaa Xaa Xaa Xaa 60
ggg gtc cct gcc agg ttc agt ggc agt ggg tet ggg act gac ttc 225
Gly Val Pro Ala Arg 65 Phe Ser Gly Ser Gly 70 Ser Gly Thr Asp Phe 75
acc ctc acc atc tet tet gtg gag ccg gag gat ttt gca aca tat 270
Thr Leu Thr Ile Ser 80 Ser Val Glu Pro Glu 85 Asp Phe Ala Thr Tyr 90
tac tgt nnn cac nnn nnn nnn nnn cct nnn nnn ttc ggt ega ggg 315
Tyr Cys Xaa His Xaa 95 Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 100 Xaa Phe Gly Gly Gly 105
acc aag ctc gag att aag Thr Lys Leu Glu Ile Lys
110
333 • ·
- 132 « · 44*4 <210> 3 <211> 111 <212> PRT <213> syntetická sekvence <220>
<223> Popis syntetické sekvence: variabilní oblast lehkého řetězce mutanty 5c8 <220>
<221> různé znaky <222> (24)..(24), (26)..(28), (30)..(36), (38)..(38), (54)..(54), (57)..(60), (93)..(93), (95)..(98), (100)..(101) <223> Xaa je jakákoliv přirozeně se vyskytující nebo přirozeně se nevyskytující aminokyselina <400> 3
Asp 1 Ile Val Leu Thr 5 Gin Ser Pro Ala Thr 10 Leu Ser Val Ser Pro 15
Gly Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Val Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly
35 40 45
Gin Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys Xaa Ala Ser Xaa Xaa Xaa Xaa
50 55 60
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
65 70 75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
80 85 90
Tyr Cys Xaa His Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Phe Gly Gly Gly
95 100 105
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
110 <210> 4 <211> 118 <212> PRT <213> syntetická sekvence <220>
<223> Popis syntetické sekvence: variabilní oblast těžkého řetězce divokého typu 5c8
- 133 -
<400> 4
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr
20 25 30
Ser Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu
35 40 45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Asp Thr Asn Phe
50 55 60
Asn Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser
65 70 75
Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Ser Asp Gly Arg Asn Asp Met
95 100 105
Asp Ser Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
110 115
<210> 5 <211> 354 <212> DNA <213> syntetická sekvence <220>
<223> Popis syntetické sekvence: variabilní oblast těžkého řetězce mutanty 5c8 <220>
<221> různé znaky <222> (82)..(84), (88)..(99), (103)..(105), (148)..(150), (154)..(165), (169)..(198), (295)..(321) <223> n je jakýkoliv nukleotid <400> 5 cag gtt cag ctg gtg cag tca ggg gct gaa gtg gtg aag cct ggg 45
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly
10 15 gct tca gtg aag ttg tcc tgc aag gct tet ggc tac nnn ttc nnn
Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Xaa Phe Xaa
25 30 *♦
- 134 -
nnn Xaa nnn Xaa nnn Xaa atg Met nnn Xaa 35 tgg Trp gtg Val aag Lys cag Gin gcg Ala 40 ccc Pro gga Gly caa Gin ggc Gly ctt Leu 45 135
gag tgg att gga nnn att nnn nnn nnn nnn ggt nnn nnn nnn nnn 180
Glu Trp Ile Gly Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa
50 55 60
nnn nnn nnn nnn nnn nnn aag gcc aca ctg act gta gac aaa tcc 225
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser
65 70 75
gcc agc aca gca tac atg gag ctc agc agc ctg acg tet gag gac 270
Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
80 85 90
act gcg gtc tat tac tgt aca aga nnn nnn nnn nnn nnn nnn nnn 315
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
95 100 105
nnn nnn tgg ggc caa ggg acc ctg gtc acc gtc tcc tea 354
Xaa Xaa Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
110 115
<210> 6 <211> 118 <212> PRT <213> syntetická sekvence <220>
<223> Popis syntetické sekvence: variabilní oblast těžkého řetězce mutanty 5c8 <220>
<221> různé znaky <222> (28)..(28), (30)..(33), (35)..(35), (50)..(50), (52)..(55), (57)..(66), (99)..(107) <223> Xaa je jakákoliv přirozeně se vyskytující nebo přirozeně se nevyskytující aminokyselina
<400> 6
Gin 1 Val Gin Leu Val 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 Val Val Lys Pro Gly 15
Ala Ser Val Lys Leu 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Xaa Phe Xaa 30
Xaa Xaa Xaa Met Xaa 35 Trp Val Lys Gin Ala 40 Pro Gly Gin Gly Leu 45
Glu Trp Ile Gly Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa
4 · · 4 ·
4« ·· 44 44
4 4 4 · · · ·
4 4 4 » 4 4 · 4
444 4 4 4 444
- 135 - 44 44 44 • 4 4· '
50 55 60
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser
65 70 75
Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
95 100 105
Xaa Xaa Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
110 115
♦ ·

Claims (50)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptid obsahující aminokyselinovou sekvenci alespoň z 80 % identickou se sekv. id. č. : 3, nebo její fragment, kde aminokyselina v každé z poloh 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33,
    34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101, nezávisle, je kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina, kde peptid nesestává ze sekv. id. č. : 1, a kde fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 24, 26, 27, 28, 30,
    31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101, a když tvoří komplex s těžkým řetězcem divokého typu 5c8, může se peptid nebo jeho fragment vázat k CD154.
  2. 2. Peptid obsahující aminokyselinovou sekvenci alespoň z 80 % identickou se sekv. id. č. : 6, nebo její fragment, kde aminokyselina v každé z poloh 28, 30, 31, 32, 33, 35, 50, 52,
    53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100,
    101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107, nezávisle, je kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina, kde peptid nesestává ze sekv. id. č. : 4, a kde fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 28, 30, 31, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107, a když tvoří komplex s lehkým řetězcem divokého typu 5c8, může se peptid nebo jeho fragment vázat k CD154.
  3. 3. Kompozice obsahující peptid podle nároku 1 nebo nároku 2.
    «· ·♦··
    - 137 • φ φ · » « « φ · • Φ φφφφ ** ··*· ·· *
  4. 4. Molekula nukleové kyseliny kódující peptid podle nároku 1 nebo nároku 2.
  5. 5. Vektor obsahující molekulu nukleové kyseliny podle nároku
    4 .
  6. 6. Kompozice obsahující molekulu nukleové kyseliny podle nároku 4 nebo vektor podle nároku 5.
  7. 7. Hostitelská buňka obsahující molekulu nukleové kyseliny podle nároku 4 nebo vektor podle nároku 5.
  8. 8. Protilátka nebo její fragment obsahující peptid podle nároku 1 nebo nároku 2, kde protilátka nebo její fragment se může vázat k humánnímu CD154.
  9. 9. Protilátka nebo její fragment obsahující první peptid podle nároku 1 a druhý peptid podle nároku 2.
  10. 10. Peptid nebo jeho fragment podle nároku 1 nebo nároku 2 nebo protilátka nebo její fragment podle nároku 8 nebo nároku 9 pro použití při léčení lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154.
  11. 11. Použití peptidu nebo jeho fragmentu podle nároku 1 nebo nároku 2 nebo protilátky nebo jejího fragmentu podle nároku 8 nebo nároku 9, pro výrobu léku pro léčení lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154.
    * · · ·
    138 «· ···· ·· ····
  12. 12. Protilátka nebo její fragment obsahující:
    peptid lehkého řetězce, který obsahuj e aminokyselinovou sekvenci alespoň z 80 % identickou se sekv. . id. č. : 3, nebo její fragment, kde aminokyselina v každé z poloh 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38 , 54, 57 , 58, 59, 60, 93,
    95, 96, 97, 98, 100 a 101, nezávisle, je kterákoliv přirozeně se vyskytující aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina, kde peptid lehkého řetězce nesestává ze sekv. id. č.: 1, a kde fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 24, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 54, 57, 58, 59, 60, 93, 95, 96, 97, 98, 100 a 101; a/nebo peptid těžkého řetězce, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci alespoň z 80 % identickou se sekv. id. č. : 6, nebo její fragment, kde aminokyselina v každé z poloh 28, 30, 31,
    32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63,
    64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, nezávisle, je kterákoliv přirozeně se aminokyselina nebo kterákoliv přirozeně se nevyskytující aminokyselina, kde peptid těžkého řetězce nesestává ze sekv. id. č. : 4, a kde fragment obsahuje alespoň jednu z poloh 28,
    30, 31, 32, 33, 35, 50, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 a 107.
    106 a 107, vyskytuj ící
  13. 13. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12, kde:
    v peptidu lehkého řetězce:
    i) aminokyselina v poloze 24 je vybrána z Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, lle, Leu, Pro,
    Val, Asp, Glu a Lys; aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Ala, lle, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 27 je vybrána z Gin, Asn, Cys, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp,
    44 4·4 4
    4»
    44 44 • 4 4 4
    4 4 ·
    4<·4
    4 4 4
    44 4444
    - 139 • 4 ·
    4 4 4 ♦ 44
    4 4 4
    4 4 4
    Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 28 je vybrána z Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 30 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp,
    Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met,
    Phe, Thr, Trp, Tyr, Arg, Ala, Ile, Leu a Lys; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met,
    Phe, Ser, Trp, Tyr, Asp, Glu, Arg, Ala, Val a Lys;
    aminokyselina v poloze 34 je vybrána z Tyr, Asn, Cys, Gin,
    Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro, Val,
    Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 35 je vybrána ze
    Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp a Tyr; aminokyselina v poloze 36 je vybrána z Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp, Ala, Leu a Glu; aminokyselina v poloze 38 je vybrána z His, Asn, Cys, Gin,
    Gly, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val,
    Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 54 je vybrána z Tyr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 57 je vybrána z Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp,
    Tyr, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 58 je vybrána z Leu, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp a Glu;
    aminokyselina v poloze 59 je vybrána z Glu, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr a Asp; aminokyselina v poloze 60 je vybrána ze Ser, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 93 je vybrána z Gin, Asn, Cys, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp, Glu, Arg a Lys; aminokyselina v poloze 95 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 96 je vybrána z Trp, Asn, Cys, Gin, ·* ···· ·* «· > · « 4 > · I
    140 «· ···· *· »*«·
    Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, Asp, Glu, Arg aminokyselina v poloze je vybrána z Glu
    Lys;
    Asp;
    aminokyselina v poloze 98 je vybrána z Ile, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Ala, Leu, Pro, Val a Glu; aminokyselina v poloze 100 je vybrána z Pro, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu; a aminokyselina v poloze 101 je vybrána z Thr, Asn, Cys, Gin,
    Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; nebo ii) aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze Ser a Asp; aminokyselina v poloze 27 je vybrána z Gin a Glu; aminokyselina v poloze 28 je vybrána z Arg a Glu; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze Ser, Ala, His, Asn,
    Thr, Val a Trp; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze Ser, Ala, Phe, Ile, Leu, Met a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Thr, Ala, Phe, Met, Val, Trp, Asp, Arg, Tyr a Gin; aminokyselina v poloze 34 je vybrána z Tyr, Ala, Asp, Glu, Val a Trp; aminokyselina
    Ala, Phe, Leu a vybrána z Tyr a
    Trp;
    Glu;
    Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, v poloze 36 je vybrána z Tyr, aminokyselina v poloze 54 je aminokyselina v poloze 96 je vybrána z Trp, Asp, Glu, His, Arg, Ser a Thr; a aminokyselina v poloze 98 je vybrána z Ile, Ala, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; nebo iii) aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze Ser, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 27 je vybrána z Gin, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser a Tyr; aminokyselina v poloze 98 je vybrána z Ile, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze φφ φφφφ
    ΦΦ φφ φ φ φ φ φ φ φ • φ φ * φ φ φφ φφφφ
    - 141 φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ ♦ φ φ φ φ φφφφ • φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φ
    95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo iv) aminokyselina v poloze je 26 Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 28 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Val; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Asp a Arg; a aminokyselina v poloze 54 je Glu; nebo
    v) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 31 je vybrána z His a Asn; aminokyselina v poloze 32 je vybrána z Trp a Phe; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Trp, Tyr a Gin; aminokyselina v poloze 36 je vybrána z Leu a Trp; aminokyselina v poloze 96 je His; a aminokyselina v poloze 98 je vybrána z Phe a Gin; nebo vi) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je vybrána ze Ser a Asp; aminokyselina v poloze 27 je vybrána z Gin a Glu; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze Ser a Asn; aminokyselina v poloze 32 je vybrána ze Ser a Phe; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Thr, Gin a Tyr; aminokyselina v poloze 98 je vybrána z Ile a Gin; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo • Φ ΦΦΦΦ φφ ·* • φ φ · φ φ · • φ φ φ φ · φ φφ ΦΦΦΦ
    - 142 vii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je
    Asp; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu;
    aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo viii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo ix) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 31 je Asn; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je
    99 9999 ··
    99 »· **
    9 · « · · · « 9 9 · * • 9 9 9 9 9 9 9 9
    9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
    9 9 9 9 9 9 9 9 9
    99 9999 99 9999 99 9
    - 143 Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo
    x) v peptidů lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 a poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 32 je Phe; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze
    58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xi) v peptidů lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 a poloze 33 je Gin; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze
    59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xii) v peptidů lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 je Gin; aminokyselina v poloze 33 je Tyr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze
    9· 9999 « 9
    9 9 9
    9 9
    9 9 • ·
    144
    59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xiii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26, poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 27 a poloze 98 je Gin; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze .95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze
    59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xiv) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze
    60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xv) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Asn; aminokyselina v poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr;
    44 >4··
    44 44
    4 4 4 4
    4 4 4
    4 4 4
    4 4 4
    44 4444 v poloze 57 je
    44 ··
    4 4 4 ·
    4 4 4
    4 · ·
    4 4 4
    44 4444
    - 145 aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina
    Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xvi) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 32 je Phe; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile;
    aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser;
    aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xvii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Gin; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xviii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Tyr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a ♦ ··· * · ♦ · ·
    9 9 99
    9999 ·· 9999 poloze 35, poloze • · • « ··
    - 146 poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30,
    60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xix) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Gin; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; nebo xx) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30., poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 a poloze 36 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro; nebo
    99 ····
    9 9 9 9 9 9 ··· • 9 9999 99 9999 99 9
    - 147 xxi) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 a poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro; nebo xxii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 31 je Val; a aminokyselina v poloze 100 je Pro; nebo xxiii) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 33 je Asp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro; nebo
    9« 9999
    - 148 «· · · « · ···«· *·· ♦»· ··· ·· ···· »· ·»·· ·· · xxiv) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34 a poloze 36 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 54, poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro; nebo' xxv) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 27 a poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 26, poloze 31, poloze 32, poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 33 a poloze 101 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 96 je Trp; a aminokyselina v poloze 100 je Pro; nebo xxvi) v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a/nebo φφ φφφφ φ * φφ φ φ φ φ φφφφ φφ φ
    - 149 v peptidu těžkého řetězce:
    i) aminokyselina v poloze 28 je vybrána z Ile, Asp, Glu, Arg,
    Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp a Trp; aminokyselina v poloze 30 je vybrána z Thr, Asp, Glu, Arg, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp, Tyr, Ala,
    Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze
    Ser, Arg, His, Lys, Gin a Trp; aminokyselina v poloze 32 je vybrána z Tyr, Asp, Glu, Arg, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His,
    Met, Phe, Ser, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina
    v poloze 33 je vybrána z Tyr, Asp, Glu, Asn , Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 35 je vybrána z Tyr, Asn, Cys, Gin,
    Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 50 je vybrána z Glu a Asp; aminokyselina v poloze 52
    je vybrána z Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Ala, Leu, Val a Lys; aminokyselina v poloze 53 je vybrána z Pro, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Arg,
    Lys a Glu; aminokyselina v poloze 55 je vybrána z Asn, Glu, Lys, Gin, Ser, Thr, Met a Val; aminokyselina v poloze 57 je vybrána z Asp, Glu, Phe a Leu; aminokyselina v poloze 58 je vybrána z Thr, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Trp,
    Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 59 je vybrána z Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp,
    Tyr, Ala, Ile, Leu, Pro, Val, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 60 je vybrána z Phe, Asp, Asn, Cys, Gin, Gly, His,
    Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, Glu, Arg, Lys, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 61 je vybrána z Asn, Asp a Glu; aminokyselina v poloze 62 je vybrána z Glu a Asp; aminokyselina v poloze 63 je vybrána z Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Glu, Asp, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 64 je vybrána
    ·· ···· ·· ·· ·· »· >·«· «··· ·« I · · · · » · »
    I · ··»» ·»»· » « · · « · · · ·· *··· ·· ··»· ··
    - 150 z Phe, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; aminokyselina v poloze 65 je vybrána z Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, Arg, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val;
    aminokyselina v poloze 66 je vybrána ze Ser, Asp a Glu;
    aminokyselina v poloze 99 je vybrána ze Ser, Asp, Glu a Ala; aminokyselina v poloze 100 je vybrána z Asp a Glu; aminokyselina v poloze 101 je vybrána z Gly, Phe a Leu;
    aminokyselina v poloze 102 je vybrána z Arg, Asn, Cys, Gin,
    Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr a Lys; aminokyselina v poloze 103 je vybrána z Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe,
    Ser, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Lys, Arg a Val;
    aminokyselina v poloze 104 je vybrána z Asp a Glu;
    aminokyselina v poloze 105 je vybrána z Met, Asp, Glu, Arg,
    His, Lys, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, Ser, Thr, Trp a Tyr;
    aminokyselina v poloze 106 je vybrána z Asp a Glu; a aminokyselina v poloze 107 je vybrána ze Ser, Asn, Cys, Gin,
    Gly, His, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, Asp, Glu, Ala, Ile, Leu, Pro a Val; nebo ii) aminokyselina v poloze 28 je vybrána z Ile, His, Asn, Gin, Ser, Thr a Glu; aminokyselina v poloze 30 je vybrána z Thr, His, Asn, Gin, Ser, Tyr a Arg; aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze Ser, Gin a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Tyr, Ala, Pro, Ser, Thr, Val a Trp; aminokyselina v poloze 52 je vybrána z Asn, Ala, Phe, His, Leu, Met, Ser,
    Thr, Val a Trp; aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze Ser,
    Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Thr, Trp, Tyr a Phe;
    aminokyselina v poloze 55 je vybrána z Asn, Glu, Lys, Gin,
    Ser, Thr, Met a Val; aminokyselina v poloze 57 je vybrána z Asp, Phe a Leu; aminokyselina v poloze 59 je vybrána z Asn, Ala, Phe, Leu, Met, Pro, Val, Trp, Asp a Tyr; aminokyselina v poloze 99 je vybrána ze Ser a Ala; aminokyselina v poloze 101 je vybrána z Gly, Phe a Leu; a aminokyselina v poloze 103 ·· ·· ·· ·· *··· • · · · · · · · · · · • · ··· ···« • · * · · · · · · · · • · · ··· ··· ·· *··· ♦· ···· ·· »
    - 151 je vybrána z Asn, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Met, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr; nebo iii) aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je nezávisle vybrána ze Ser, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val, Trp, Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 57 je vybrána z Asp, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; aminokyselina v poloze 101 je vybrána z Gly, Ala, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val a Trp; aminokyselina v poloze 103 je vybrána z Asn, Cys, Gin, Gly, Ser, Thr a Tyr; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo iv) aminokyselina v poloze 31 je vybrána ze Ser, Trp a Gin;
    aminokyselina v poloze 54 je vybrána ze Ser, Phe a Gin; aminokyselina v poloze 57 je vybrána z Asp, Leu a Phe; aminokyselina v poloze 101 je vybrána z Gly, Leu a Phe; aminokyselina v poloze 103 je vybrána z Asn a Tyr;
    aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a
    I · · · · · • · • ·
    - 152 poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo
    v) aminokyselina v poloze 28 je Glu; aminokyselina v poloze 33 je Phe; aminokyselina v poloze 54 je Thr; a aminokyselina
    v poloze 59 je vybrána z Asp a Leu; nebo vi) aminokyselina v poloze 30 je vybrána z His a Arg; aminokyselina v poloze 31 je vybrána z Gin a Trp; aminokyselina v poloze 33 je vybrána z Trp, Val a Pro; aminokyselina v poloze 52 je vybrána z Met a Trp; aminokyselina v poloze 54 je vybrána z Asn, Phe a Gin; aminokyselina v poloze 55 je vybrána z Met, Lys a Val; aminokyselina v poloze 57 je vybrána z Phe a Leu; aminokyselina v poloze 59 je vybrána z Phe a Tyr; aminokyselina v poloze 101 je vybrána z Phe a Leu; a aminokyselina v poloze 103 je vybrána z His i a Tyr ?; nebo
    vii) aminokyselina v poloze 31 je Trp; aminokyselina v poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo viii) aminokyselina v poloze 31 je Gin; aminokyselina v poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a • · · · • ·
    - 153 • · poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo ix) aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 54 je Phe; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo
    x) aminokyselina v poloze 31 je Ser; aminokyselina v poloze 54 je Gin; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a
    154 poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xi) aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser;
    aminokyselina v poloze 57 je Phe; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp;
    aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze
    105 je Met; nebo xii) aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser;
    aminokyselina v poloze 57 je Leu; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xiii) aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser; aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Phe; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je lle; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr;
    • · • ·
    - 155 ·· ··»· aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xiv) aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser;
    aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Leu; aminokyselina v poloze 103 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp;
    aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze
    105 je Met; nebo xv) aminokyselina v poloze 31 a poloze 54 je Ser;
    aminokyselina v poloze 57 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103 je Tyr; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp;
    - 156 • · ··· · aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xvi) aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xvii) aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xviii) aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr;
    • ·
    - 157 aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je
    Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
    aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze
    105 je Met; nebo xix) aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 33, poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xx) aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 59, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je
    Ile; aminokyselina v poloze a poloze 58 je Thr;
    aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met; nebo xxi) aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina φ
    • · • φ φφφφ φφφφ ·· ΦΦ··
    φ. φ
    158 v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 59 je Leu; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  14. 14. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
    ·♦·· aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  15. 15. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  16. 16. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    - 160 φ« ·ΦΦ·
    ΦΦ ·· • ♦ Φ ·
    Φ · >
    • * ·
    Φ Φ Φ φφ ΦΦΦΦ v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  17. 17. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a »4 ·· *» ** ** ♦♦·· ··♦» · * · · · ♦ * ·· **· · · * ♦ φ· ·♦·* · * · · · *·»* «!·· *·» ···· ♦· *
    - 161 poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  18. 18. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a
    - 162 v peptidů těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  19. 19. Protilátka nebo jeji fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidů lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidů těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, • 9
    - 163 • 9 9
    9 *
    9 9
    9 9
    99·9 ·· 99
    9 9 9 9
    9 9 9
    9 9 9 • 99
    99 9999 •4 ·♦·· poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  20. 20. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn;
    aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr;
    aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je
    164 ♦ 99 9
    9 · ·
    9 9 9 9 • 9 ·
    99 9999
    Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  21. 21. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je
    Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr;
    aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je
    Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
    aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
    ·* • · « · • * · • · · ♦ · · ·» ·♦·*
    - 165 ·«
    I ♦ ♦ · ·· ·*·· «· 9999
  22. 22. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 13, kde:
    nebo nároku v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp;
    aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je
    Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr;
    aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je
    Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys;
    aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  23. 23. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a
    166
    44 444« ♦
    poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 54, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je
    Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr;
    aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je
    Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze . 65 je Lys;
    aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; aminokyselina v poloze 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  24. 24. Protilátka nebo jej i fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je φ« • φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φφ φφ
    - 167 φ φ φ φ φ φ ♦ φ φ · φφφφ φφ «·*φ φ ♦ φ φ φ φ φ φ φφ
    Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32, poloze 33 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; aminokyselina v poloze 30 je His; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  25. 25. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 33 a poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a « · · • · • ♦ • · ♦
    168 ·« ··♦« v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn; aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; poloze v aminokyselina 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  26. 26. Protilátka nebo její fragment podle nároku 12 nebo nároku 13, kde:
    v peptidu lehkého řetězce aminokyselina v poloze 26 je Asp; aminokyselina v poloze 27 je Glu; aminokyselina v poloze 31 a poloze 32 je Ser; aminokyselina v poloze 33 je Thr; aminokyselina v poloze 98 je Ile; aminokyselina v poloze 24 a poloze 28 je Arg; aminokyselina v poloze 30, poloze 35, poloze 60 a poloze 95 je Ser; aminokyselina v poloze 34, poloze 36 a poloze 54 je Tyr; aminokyselina v poloze 38 je His; aminokyselina v poloze 57 je Asn; aminokyselina v poloze 58 je Leu; aminokyselina v poloze 59 a poloze 97 je Glu; aminokyselina v poloze 93 je Gin; aminokyselina v poloze 96 je Trp; aminokyselina v poloze 100 je Pro; a aminokyselina v poloze 101 je Thr; a v peptidu těžkého řetězce aminokyselina v poloze 31, poloze 66, poloze 99 a poloze 107 je Ser; aminokyselina v poloze 57, poloze 100, poloze 104 a poloze 106 je Asp; aminokyselina v poloze 101 je Gly; aminokyselina v poloze 103, poloze 52, poloze 54, poloze 55, poloze 59 a poloze 61 je Asn;
    - 169 *· ·· ·« ·· ι · · · · · · ;
    I · » » · ' > · · · · ♦ · ř · · · · · ·* ···* ♦· ···<
    aminokyselina v poloze 28 je Ile; aminokyselina v poloze 30 a poloze 58 je Thr; aminokyselina v poloze 32 a poloze 35 je Tyr; aminokyselina v poloze 50 a poloze 62 je Glu; aminokyselina v poloze 53 je Pro; aminokyselina v poloze 60 a poloze 64 je Phe; aminokyselina v poloze 63 a poloze 65 je Lys; aminokyselina v poloze 102 je Arg; poloze v aminokyselina 33 je Trp; a aminokyselina v poloze 105 je Met.
  27. 27. Fragment protilátky podle kteréhokoliv z nároků 12 až 26, který je vybrán z jednořetězcové protilátky (scFv), fragmentu F(ab')2, fragmentu Fab a fragmentu Fd.
  28. 28. Protilátka nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 27 značená detekovatelným markérem.
  29. 29. Protilátka podle nároku 28, kde detekovatelný markér je vybrán z radioaktivního izotopu, enzymu, fluorochromu, koloidního zlata, barviva a biotinu.
  30. 30. Protilátka nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 29 konjugovaná na terapeutické agens nebo perličku.
  31. 31. Protilátka nebo její fragment podle nároku 30, kde terapeutické agens je vybráno z radioizotopu, toxinu, toxoidu a chemoterapeutika.
  32. 32. Protilátka nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 31 obsahující alespoň jeden polymer s vysokou molekulární hmotností.
    AA ♦·*·
    AAA ·
    A A ·
    A A A * • A A
    170
    A
    A
    A e
  33. 33. Protilátka nebo její fragment podle nároku 32, kde polymer je polyethylenimin nebo polylysin.
  34. 34. Protilátka nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 33, kde alespoň jedna aminokyselina je PEGylována nebo glykosylována.
  35. 35. Kompozice vyznačující se tím, že obsahuje protilátku nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 34.
  36. 36. Souprava vyznačující se tím, že obsahuje protilátku nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 34 .
  37. 37. Molekula nukleové kyseliny kódující protilátku nebo její fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 34.
  38. 38. Vektor obsahující molekulu nukleové kyseliny podle nároku 37.
  39. 39. Hostitelská buňka obsahující molekulu nukleové kyseliny podle nároku 37 nebo vektor podle nároku 38.
  40. 40. Použití protilátky nebo jejího fragment podle kteréhokoliv z nároků 12 až 34 pro výrobu léku pro léčení lidského onemocnění nebo poruchy sdružené s CD154.
    ·· ·· +· ···«
    171
  41. 41. Použiti podle nároku 40, kde lidské onemocněni nebo porucha je zánět vybraný ze zánětu sdruženého s artritidou, kontaktní dermatitidou, syndromem hyperimunoglobulinémie IgE, zánětlivými střevními onemocněními, idiopatickými zánětlivými onemocněními.
    alergickým astmatem a
  42. 42. Použití podle nároku 41, kde artritida z revmatoidní artritidy, zánětlivé artritidy revmatického původu, artritidy sdružené s Lymeskou nemocí a zánětlivé osteoartritidy, a kde idiopatické zánětlivé onemocnění je psoriáza nebo systémový lupus erythematodes.
    je vybrána jiného než
  43. 43. Použití podle nároku 40, kde onemocnění nebo vybrána z myasthenia gravis, Gravesovy choroby, trombocytopenické purpury, hemolytické anémie mellitus, Crohnovy choroby, sclerosis multiplex a chorob indukovaných léky.
    porucha je idiopatické , diabetes autoimunních
  44. 44. Použití podle transplantovaného z transplantovaného nároku 40, kde porucha orgánu pacientem, srdce, ledviny, jater, je rejekce vybraného kůže, buněk
    Langerhansových ostrůvků pankreatu a kostní dřeně
  45. 45. Použití podle nároku 40, kde porucha je vybrána z reakce štěpu proti hostiteli, alergických reakcí, autoimunní reakce a fibrózy u pacienta.
  46. 46. Použití podle nároku 45, kde fibróza je plicní fibróza nebo fibrotické onemocnění, a kde autoimunní reakce vyplývá z reakce vybrané z Reiterova syndromu, spondylartritidy, Lymeské nemoci, infekce HIV, syfilis a tuberkulózy.
    • · ·
    172 • · ·· ···» • · · • · · * • · * «· w··*
  47. 47. Použití podle nároku 46, kde plicní fibróza je vybrána z plicní fibrózy sekundární při syndromu respirační tísně u dospělých, plicní fibrózy indukované léky, idiopatické plicní fibrózy nebo' hypersenzitivní pneumonitidy, a kde fibrotické onemocnění je vybráno z hepatitidy C, hepatitidy B, cirhózy, cirhózy jater sekundární při toxickém poškození, cirhózy jater sekundární při užívání léků, cirhózy jater sekundární při virové infekci a cirhózy jater sekundární při autoimunním onemocnění.
  48. 48. Použití podle nároku 40, kde onemocnění nebo porucha je gastrointestinální onemocnění nebo vaskulární onemocnění.
  49. 49. Použití podle nároku 48, kde gastrointestinální onemocnění je vybráno z dysmotility jícnu, zánětlivého střevního onemocnění a sklerodermie; a kde vaskulární onemocnění je ateroskleróza nebo reperfuzní poškození.
  50. 50. Použití podle nároku 40, kde onemocnění nebo porucha je rakovinné bujení T lymfocytů vybrané z T lymfocytární leukémie a lymfomu.
CZ20070055A 2004-07-26 2005-07-26 Peptidy protilátek anti-CD154 CZ200755A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US59133704P 2004-07-26 2004-07-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ200755A3 true CZ200755A3 (cs) 2007-04-11

Family

ID=36090426

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20070055A CZ200755A3 (cs) 2004-07-26 2005-07-26 Peptidy protilátek anti-CD154

Country Status (17)

Country Link
US (2) US8647625B2 (cs)
EP (2) EP1791563A4 (cs)
JP (3) JP5102028B2 (cs)
KR (1) KR20070047327A (cs)
CN (1) CN101072587B (cs)
AU (1) AU2005287406B2 (cs)
BR (1) BRPI0513798A (cs)
CA (1) CA2575838A1 (cs)
CZ (1) CZ200755A3 (cs)
EA (1) EA014226B1 (cs)
GE (1) GEP20105059B (cs)
IL (1) IL180852A (cs)
IS (1) IS8596A (cs)
MX (1) MX2007001015A (cs)
NO (1) NO20071069L (cs)
RS (1) RS20070027A (cs)
WO (1) WO2006033702A2 (cs)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE482235T1 (de) * 2003-06-13 2010-10-15 Biogen Idec Inc Aglycosyl-anti-cd154 (cd40-ligand) antikörper und deren verwendungen
JP2007503206A (ja) 2003-08-22 2007-02-22 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 変更されたエフェクター機能を有する改良された抗体およびその抗体を産生する方法
EA014226B1 (ru) 2004-07-26 2010-10-29 Байоджен Айдек Ма Инк. Антитела к cd154, их фрагменты и способы применения антител и фрагментов
CN101679521B (zh) 2007-03-22 2014-03-12 拜奥根Idec马萨诸塞公司 特异性结合cd154的包括抗体、抗体衍生物和抗体片段在内的结合蛋白及其用途
EP2067785A1 (en) 2007-12-03 2009-06-10 Fresenius Medical Care Deutschland GmbH Human CD154-binding synthetic peptide and uses thereof
CN102341106A (zh) * 2009-02-13 2012-02-01 印第安那大学科技研究公司 用于抑制mmp2和mmp9的化合物和方法
US9109216B2 (en) 2009-09-24 2015-08-18 Ucb Pharma, S.A. Bacterial host strain
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
GB201000591D0 (en) 2010-01-14 2010-03-03 Ucb Pharma Sa Bacterial hoist strain
GB201000590D0 (en) 2010-01-14 2010-03-03 Ucb Pharma Sa Bacterial host strain
GB201000587D0 (en) 2010-01-14 2010-03-03 Ucb Pharma Sa Bacterial hoist strain
GB201012599D0 (en) 2010-07-27 2010-09-08 Ucb Pharma Sa Process for purifying proteins
JP2012034668A (ja) * 2010-08-12 2012-02-23 Tohoku Univ ヒト型化抗ｅｇｆｒ抗体リジン置換可変領域断片及びその利用
HUE035674T2 (en) 2011-07-13 2018-05-28 Ucb Biopharma Sprl Bacterial host strains expressing recombinant DSBC
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
TWI589299B (zh) * 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
US9943594B2 (en) 2011-10-11 2018-04-17 Sanofi Biotechnology Methods for the treatment of rheumatoid arthritis
US9808480B2 (en) 2012-04-27 2017-11-07 Nanocarrier Co., Ltd. Unit structure-type pharmaceutical composition for nucleic acid delivery
GB201208367D0 (en) 2012-05-14 2012-06-27 Ucb Pharma Sa Biological product
TWI660972B (zh) * 2012-09-10 2019-06-01 愛爾蘭商尼歐托普生物科學公司 抗ｍｃａｍ抗體及相關使用方法
TWI713453B (zh) 2014-06-23 2020-12-21 美商健生生物科技公司 干擾素α及ω抗體拮抗劑
MA41459A (fr) 2015-02-03 2017-12-12 Als Therapy Development Inst Anticorps anti-cd40l et méthodes pour traiter des maladies ou des troubles liés aux cd40l
KR20160132694A (ko) * 2015-05-11 2016-11-21 주식회사 프로젠 Cd154에 특이적으로 결합하는 항체
WO2016208948A1 (ko) * 2015-06-23 2016-12-29 서울대학교산학협력단 Cd154 결합 폴리펩타이드 및 그 용도
KR101810778B1 (ko) * 2015-06-23 2017-12-20 서울대학교산학협력단 Cd154 결합 폴리펩타이드 및 그 용도
EP3331563B1 (en) * 2015-08-05 2023-04-19 Janssen Biotech, Inc. Anti-cd154 antibodies and methods of using them
CN107922507B (zh) 2015-08-18 2022-04-05 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者
EP3551034A1 (en) 2016-12-07 2019-10-16 Progenity, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP4108183A1 (en) 2017-03-30 2022-12-28 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
SG10202111207TA (en) 2017-05-24 2021-11-29 Als Therapy Development Inst Therapeutic anti-cd40 ligand antibodies
EP3677268A4 (en) 2017-08-31 2021-04-21 The University Of Tokyo UNIT POLYIONIC COMPLEX FILLED WITH NUCLEIC ACID
US20230041197A1 (en) 2018-06-20 2023-02-09 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
US20230009902A1 (en) 2018-06-20 2023-01-12 Progenity, Inc. Treatment of a disease or condition in a tissue orginating from the endoderm
JP2022502350A (ja) 2018-08-29 2022-01-11 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. 関節リウマチを有する対象を治療するための方法および組成物
CN113348011B (zh) 2018-11-19 2023-04-18 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
US11498969B2 (en) 2019-01-31 2022-11-15 Sanofi Biotechnology Compositions and methods for treating juvenile idiopathic arthritis
CN115666704A (zh) 2019-12-13 2023-01-31 比奥拉治疗股份有限公司 用于将治疗剂递送至胃肠道的可摄取装置
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
IL311175A (en) 2021-09-01 2024-04-01 Biogen Ma Inc Anti-transferrin receptor antibodies and their uses

Family Cites Families (125)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2745144C2 (de) 1977-10-07 1979-11-15 Ruetgerswerke Ag, 6000 Frankfurt Verfahren zur ortho-Alkylierung von Phenolen
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
NO873164L (no) 1986-07-30 1988-02-01 Teijin Ltd Muse-humane kimaere antistoffer.
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
JP3095168B2 (ja) 1988-02-05 2000-10-03 エル． モリソン，シェリー ドメイン‐変性不変部を有する抗体
ATE159982T1 (de) 1988-09-15 1997-11-15 Univ Columbia Antikörper mit modifiziertem kohlenhydratgehalt und verfahren zur herstellung und verwendung
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE69233254T2 (de) 1991-06-14 2004-09-16 Genentech, Inc., South San Francisco Humanisierter Heregulin Antikörper
DE69233402T3 (de) 1991-10-25 2009-06-25 Immunex Corp., Seattle Neue cytokine
US5474771A (en) 1991-11-15 1995-12-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Murine monoclonal antibody (5c8) recognizes a human glycoprotein on the surface of T-lymphocytes, compositions containing same
JP4157160B2 (ja) 1991-12-13 2008-09-24 ゾーマ テクノロジー リミテッド 改変抗体可変領域の調製のための方法
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
CA2089229C (en) 1992-02-14 2010-04-13 Alejandro A. Aruffo Cd40cr receptor and ligands therefor
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
AU5098493A (en) 1992-08-21 1994-03-15 Schering Corporation Cd40 ligand, anti cd40 antibodies, and soluble cd40
US5540926A (en) 1992-09-04 1996-07-30 Bristol-Myers Squibb Company Soluble and its use in B cell stimulation
US6307026B1 (en) 1992-12-10 2001-10-23 Celltech Limited Humanized antibodies directed against A33 antigen
JPH06179814A (ja) 1992-12-15 1994-06-28 New Japan Chem Co Ltd ポリアミド樹脂組成物
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
ES2143553T3 (es) 1993-09-02 2000-05-16 Dartmouth College Anticuerpos anti-gp39 y sus utilizaciones.
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
CA2229043C (en) 1995-08-18 2016-06-07 Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh Protein/(poly)peptide libraries
CA2230759C (en) 1995-08-29 2012-02-21 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Chimeric animal and method for producing the same
DE19541844C1 (de) 1995-11-09 1997-07-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von menschlichen Antikörpern und deren Verwendung
US6340459B1 (en) 1995-12-01 2002-01-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Therapeutic applications for the anti-T-BAM (CD40-L) monoclonal antibody 5C8 in the treatment of reperfusion injury in non-transplant recipients
DE69731289D1 (de) 1996-03-18 2004-11-25 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
US7247302B1 (en) 1996-08-02 2007-07-24 Bristol-Myers Squibb Company Method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
JP2001506967A (ja) 1996-08-02 2001-05-29 ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー 治療およびインビボ診断における免疫グロブリンの使用の結果としての免疫グロブリン誘発毒性の抑制方法
US6013256A (en) 1996-09-24 2000-01-11 Protein Design Labs, Inc. Method of preventing acute rejection following solid organ transplantation
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US6230102B1 (en) 1997-04-04 2001-05-08 Massachusetts Institute Of Technology Computer system and process for identifying a charge distribution which minimizes electrostatic contribution to binding at binding between a ligand and a molecule in a solvent and uses thereof
AU7467898A (en) 1997-04-21 1998-11-13 Arch Development Corporation Fc receptor non-binding anti-cd3 monoclonal antibodies deliver a partial cr signal and induce clonal anergy
PL192521B1 (pl) 1997-05-17 2006-11-30 Biogen Idec Inc Zastosowanie przerywacza wiązania CD40:CD154 i kompozycja
NZ502052A (en) 1997-06-20 2001-01-26 Biogen Inc CD154 blockade therapy for pancreatic islet tissue transplantation
HUP0002048A3 (en) 1997-06-20 2002-09-30 Biogen Idec Ma Inc Cambridge Cd154 blockade therapy for therapeutic protein inhibitor syndrome
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
EP1068241B1 (en) 1998-04-02 2007-10-10 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6284536B1 (en) 1998-04-20 2001-09-04 The Regents Of The University Of California Modified immunoglobin molecules and methods for use thereof
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
GB9815909D0 (en) 1998-07-21 1998-09-16 Btg Int Ltd Antibody preparation
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
WO2001027253A1 (en) 1999-10-08 2001-04-19 Caliper Technologies Corp. Use of nernstein voltage sensitive dyes in measuring transmembrane voltage
US6849425B1 (en) 1999-10-14 2005-02-01 Ixsys, Inc. Methods of optimizing antibody variable region binding affinity
GB0006398D0 (en) 2000-03-16 2000-05-03 Novartis Ag Organic compounds
AU2001251612A1 (en) 2000-04-14 2001-10-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Roles of jak/stat family members in tolerance induction
CA2410786A1 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Regents Of The University Of Minnesota Immunotherapeutic method to prevent islet cell rejection
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
EP1314037A2 (en) 2000-09-01 2003-05-28 Biogen, Inc. Methods of designing and producing compounds having improved binding affinity for cd154 or other trimeric proteins
AU8867501A (en) 2000-09-01 2002-03-13 Biogen Inc Co-crystal structure of monoclonal antibody 5c8 and cd154, and use thereof in drug design
EP2357187A1 (en) 2000-12-12 2011-08-17 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US6979556B2 (en) 2000-12-14 2005-12-27 Genentech, Inc. Separate-cistron contructs for secretion of aglycosylated antibodies from prokaryotes
US20020147312A1 (en) 2001-02-02 2002-10-10 O'keefe Theresa Hybrid antibodies and uses thereof
HUP0303171A2 (hu) 2001-02-19 2003-12-29 Merck Patent Gmbh Csökkentett immunogenitású mesterséges fehérjék
WO2002079415A2 (en) 2001-03-30 2002-10-10 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
US7117096B2 (en) 2001-04-17 2006-10-03 Abmaxis, Inc. Structure-based selection and affinity maturation of antibody library
US20040010376A1 (en) 2001-04-17 2004-01-15 Peizhi Luo Generation and selection of protein library in silico
CA2443862A1 (en) 2001-04-17 2002-10-24 Peizhi Luo Structure-based construction of human antibody library
ITTO20010506A1 (it) 2001-05-25 2002-11-25 Iveco Motorenforschung Ag Turbina a geometria variabile.
US6720165B2 (en) 2001-06-14 2004-04-13 Zyomix, Inc. Methods for making antibody fragments and compositions resulting therefrom
GB2380127A (en) 2001-09-26 2003-04-02 Isis Innovation Treatment of chronic joint inflammation
GB0124317D0 (en) 2001-10-10 2001-11-28 Celltech R&D Ltd Biological products
BR0213761A (pt) 2001-10-25 2005-04-12 Genentech Inc Composições, preparação farmacêutica, artigo industrializado, método de tratamento de mamìferos, célula hospedeira, método para a produção de uma glicoproteìna e uso da composição
MXPA04004634A (es) 2001-11-16 2004-08-12 Idec Pharma Corp Expresion policistronica de anticuerpos.
KR100829283B1 (ko) 2002-01-09 2008-05-13 메다렉스, 인코포레이티드 Ｃｄ３０에 대한 인간 모노클로날 항체
WO2003068801A2 (en) 2002-02-11 2003-08-21 Genentech, Inc. Antibody variants with faster antigen association rates
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
CA2485732A1 (en) 2002-05-20 2003-12-04 Abmaxis, Inc. Generation and selection of protein library in silico
ATE483472T1 (de) 2002-05-30 2010-10-15 Macrogenics Inc Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten
PT1517921E (pt) 2002-06-28 2006-09-29 Domantis Ltd Ligandos duplamente especificos com semi-vida no soro aumentada
US20050260213A1 (en) 2004-04-16 2005-11-24 Scott Koenig Fcgamma-RIIB-specific antibodies and methods of use thereof
BRPI0314814C1 (pt) 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
PT1562972E (pt) 2002-10-15 2010-11-10 Facet Biotech Corp Alteração de afinidades de ligação ao fcrn ou semi-vidas séricas de anticorpos por mutagénese
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
PT1570267E (pt) 2002-12-03 2012-01-03 Ucb Pharma Sa Ensaio para a identificação de células produtoras de anticorpos
AU2004204942A1 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Xencor, Inc Novel proteins with altered immunogenicity
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
GB0303337D0 (en) 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
ATE482235T1 (de) 2003-06-13 2010-10-15 Biogen Idec Inc Aglycosyl-anti-cd154 (cd40-ligand) antikörper und deren verwendungen
SI1639011T1 (sl) 2003-06-30 2009-04-30 Domantis Ltd Pegilirana protitelesa z enojno domeno (dAb)
AU2004261198A1 (en) 2003-07-26 2005-02-10 Biogen Idec Ma Inc. Altered antibodies having improved antigen-binding affinity
JP2007503206A (ja) 2003-08-22 2007-02-22 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 変更されたエフェクター機能を有する改良された抗体およびその抗体を産生する方法
WO2005037867A1 (en) 2003-10-15 2005-04-28 Pdl Biopharma, Inc. ALTERATION OF Fc-FUSION PROTEIN SERUM HALF-LIVES BY MUTAGENESIS OF POSITIONS 250, 314 AND/OR 428 OF THE HEAVY CHAIN CONSTANT REGION OF IG
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
WO2005063815A2 (en) 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
WO2005056759A2 (en) 2003-12-04 2005-06-23 Xencor, Inc. Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof
WO2005077981A2 (en) 2003-12-22 2005-08-25 Xencor, Inc. Fc POLYPEPTIDES WITH NOVEL Fc LIGAND BINDING SITES
EP2154157A3 (en) 2004-01-12 2010-04-28 Applied Molecular Evolution Inc. FC region variants
KR20050082389A (ko) 2004-02-18 2005-08-23 메덱스젠 주식회사 직렬 연쇄체를 갖는 면역접합체를 포함하는 장기이식합병증 치료용 약제학적 조성물
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
KR100863776B1 (ko) 2004-07-15 2008-10-16 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체
EA014226B1 (ru) 2004-07-26 2010-10-29 Байоджен Айдек Ма Инк. Антитела к cd154, их фрагменты и способы применения антител и фрагментов
ES2426816T3 (es) 2004-08-04 2013-10-25 Mentrik Biotech, Llc Regiones Fc variantes
RU2367667C2 (ru) 2004-08-19 2009-09-20 Дженентек, Инк. Полипептидные варианты с измененной эффекторной функцией
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
CN100369932C (zh) 2005-04-07 2008-02-20 苏州大学 抗人cd154单克隆抗体及其应用
AU2006281981A1 (en) 2005-08-15 2007-02-22 Cephalon Australia Pty Ltd Chimeric antibodies with new world primate regions
CA2624189A1 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
ES2425571T3 (es) 2005-11-17 2013-10-16 Biogen Idec Ma Inc. Ensayos de agregación plaquetaria
TW200809660A (en) 2006-03-01 2008-02-16 Zi Decuma Ab A method for additive character recognition and an apparatus thereof
CN101679521B (zh) 2007-03-22 2014-03-12 拜奥根Idec马萨诸塞公司 特异性结合cd154的包括抗体、抗体衍生物和抗体片段在内的结合蛋白及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
JP2008511290A (ja) 2008-04-17
EA014226B1 (ru) 2010-10-29
CN101072587A (zh) 2007-11-14
EP2399936A3 (en) 2012-02-22
BRPI0513798A (pt) 2008-05-13
IS8596A (is) 2007-01-24
JP2008056676A (ja) 2008-03-13
JP5102028B2 (ja) 2012-12-19
MX2007001015A (es) 2007-04-12
KR20070047327A (ko) 2007-05-04
EA200700136A1 (ru) 2007-08-31
IL180852A0 (en) 2007-07-04
US8961976B2 (en) 2015-02-24
RS20070027A (en) 2008-11-28
US20080305116A1 (en) 2008-12-11
CN101072587B (zh) 2012-12-26
WO2006033702A2 (en) 2006-03-30
IL180852A (en) 2011-04-28
JP2012100660A (ja) 2012-05-31
AU2005287406A1 (en) 2006-03-30
US8647625B2 (en) 2014-02-11
NO20071069L (no) 2007-02-26
CA2575838A1 (en) 2006-03-30
EP2399936A2 (en) 2011-12-28
EP1791563A2 (en) 2007-06-06
US20140220031A1 (en) 2014-08-07
GEP20105059B (en) 2010-08-10
EP1791563A4 (en) 2009-07-08
WO2006033702A3 (en) 2007-01-04
AU2005287406B2 (en) 2011-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8961976B2 (en) Anti-CD154 antibodies
EP1639014B1 (en) Aglycosyl anti-cd154 (cd40 ligand) antibodies and uses thereof
US20190233530A1 (en) Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154 and uses thereof
AU751064B2 (en) Antibodies against human CD40
KR101276596B1 (ko) 면역억제 특성을 가진 인간화 항-ｃｄ4 항체
TW201632559A (zh) 結合ｃｄ１３７之抗體治療劑
CN107011445A (zh) 免疫球蛋白恒定区Fc受体结合剂
TW201837053A (zh) 具有消耗活性的人源化cxcr3抗體及其使用方法
AU2011224032B2 (en) Aglycosyl Anti-CD154 (CD40 Ligand) Antibodies and Uses Thereof
AU2013203712A1 (en) Binding Proteins, Including Antibodies, Antibody Derivatives And Antibody Fragments, That Specifically Bind CD154 And Uses Thereof