JP2012034668A - ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 - Google Patents
ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012034668A JP2012034668A JP2010180693A JP2010180693A JP2012034668A JP 2012034668 A JP2012034668 A JP 2012034668A JP 2010180693 A JP2010180693 A JP 2010180693A JP 2010180693 A JP2010180693 A JP 2010180693A JP 2012034668 A JP2012034668 A JP 2012034668A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lysine
- residue
- antibody
- variable region
- substituted
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/626—Diabody or triabody
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
【解決手段】特定のアミノ酸配列から成る抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のL鎖又はH鎖のヒト型化可変領域において、全てのリジン残基又は特定の一つの部位のリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸に置換されて成る、ヒト型化抗EGFR抗体リジン置換L鎖可変領域断片。
【選択図】図4
Description
[態様1]
配列番号2で示されるアミノ酸配列から成る抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のL鎖のヒト型化可変領域(5L)において、全てのリジン残基又は特定の一つの部位のリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸に置換されて成る、ヒト型化抗EGFR抗体リジン置換L鎖可変領域断片。
[態様2]
5Lにおける108番目のリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸残基に置換されていることを特徴とする、態様1記載のリジン置換L鎖可変領域断片。
[態様3]
5Lにおける以下の置換の少なくとも一つを含む、態様1または2記載のリジン置換L鎖可変領域断片:
44番目のリジン残基がアルギニン残基、
55番目のリジン残基がグルタミン残基、
79番目のリジン残基がトレオニン残基、
108番目のリジン残基がグルタミン酸残基、又は、
112番目のリジン残基がグルタミン酸残基。
[態様4]
5Lにおける以下の置換を含む、態様1記載のリジン置換L鎖可変領域断片:
44番目のリジン残基がアルギニン残基、
55番目のリジン残基がグルタミン残基、
79番目のリジン残基がトレオニン残基、
108番目のリジン残基がグルタミン酸残基、及び
112番目のリジン残基がグルタミン酸残基。
[態様5]
配列番号4で示されるアミノ酸配列から成る抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のH鎖のヒト型化可変領域(5H)において、全てのリジン残基又は特定の一つのリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸に置換されて成る、ヒト型化抗EGFR抗体リジン置換H鎖可変領域断片。
[態様6]
5Hにおける19番目のリジン残基以外のリジン残基が他のアミノ酸残基に置換されていることを特徴とする、態様5記載のリジン置換H鎖可変領域断片。
[態様7]
5Hにおける以下の置換の少なくとも一つを含む、態様5または6記載のリジン置換H鎖可変領域断片:
12番目のリジン残基がアラニン残基、
13番目のリジン残基がグルタミン酸残基、
19番目のリジン残基がグルタミン残基、
23番目のリジン残基がアラニン残基、
63番目のリジン残基がグルタミン酸残基、又は、
65番のリジン残基がグルタミン残基。
[態様8]
5Hにおける以下の置換を含む、態様5記載のリジン置換H鎖可変領域断片:
12番目のリジン残基がアラニン残基、
13番目のリジン残基がグルタミン酸残基、
19番目のリジン残基がグルタミン残基、
23番目のリジン残基がアラニン残基、
63番目のリジン残基がグルタミン酸残基、及び、
65番のリジン残基がグルタミン残基。
[態様9]
一つのリジン残基又はN末端アミノ基が部位特異的に修飾されている、態様1〜8のいずれか一項に記載のリジン置換L鎖可変領域断片又はリジン置換H鎖可変領域断片。
[態様10]
ポリエチレングリコールによって部位特異的に修飾されている態様9記載のリジン置換L鎖可変領域断片又はリジン置換H鎖可変領域断片。
[態様11]
態様1〜4、9又は10記載のリジン置換L鎖可変領域断片及び態様5〜8、9又は10記載のリジン置換H鎖可変領域断片を構成要素として含む抗体分子。
[態様12]IgG型抗体分子、一本鎖抗体(scFv)、一本鎖抗体の二量体、二重特異性抗体、ダイアボディ型二重特異性抗体、高機能性二重特異性抗体又は多量体化低分子抗体から成る群から選択される、態様11記載の抗体分子。
[態様13]
リジン置換L鎖可変領域断片又はリジン置換H鎖可変領域断片に含まれる一つのリジン残基が架橋されてなる、態様12記載の二量体。
[態様14]
抗CD3抗体OKT3のL鎖のヒト型化可変領域(OL)、及び、抗CD3抗体OKT3のH鎖のヒト型化可変領域(OH)が、夫々、配列番号6及び配列番号8で示されるアミノ酸配列から成る、態様11記載のダイアボディ型二重特異性抗体。
[態様15]態様11〜14のいずれか一項に記載の抗体分子を構成する一本鎖ポリペプチド。
[態様16]態様1〜8のいずれか一項に記載のリジン置換可変領域断片、又は、態様15に記載の一本鎖ポリペプチドをコードする核酸分子。
[態様17]態様11〜14のいずれか一項に記載の抗体分子を構成する2種類の一本鎖ポリペプチドを共にコードする核酸分子。
[態様18]態様16又は17記載の核酸分子を含有する複製可能なクローニングベクター又は発現ベクター。
[態様19]共発現ベクターである、態様18記載のベクター。
[態様20]プラスミドベクターである、態様18又は19記載のベクター。
[態様21]態様19ないし20のいずれか一項に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
[態様22]態様11又は12記載の抗体分子の製造方法であって、態様21に記載の宿主細胞を培養し、該抗体分子を構成する2種類の一本鎖ポリペプチドを発現させ、該ポリペプチドを回収・精製し、該2種類の一本鎖ポリペプチドを会合させ、形成された抗体分子を分離・回収することから成る、前記方法。
[態様23]原核細胞が大腸菌であり、2種類の一本鎖ポリペプチドを大腸菌の培養培地上清、ペリズマ画分、菌体内可溶性画分、又は、菌体内不溶性画分から回収する、態様22記載の製造方法。
[態様24]態様14記載の抗体分子の製造方法であって、態様19記載の共発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養し該抗体分子を構成する2種類の一本鎖ポリペプチドを発現させ、該形質転換菌内でダイアボディ型二重特異性抗体を形成せしめ、形成された二重特異性抗体を分離・回収することから成る、前記方法。
[態様25] 態様11〜14のいずれか一項に記載の抗体分子を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
[態様26]腫瘍細胞を排除する、殺傷する、傷害する及び/又は減少せしめるためのものであることを特徴とする態様25記載の医薬組成物。
ヒト型化抗EGFR抗体リジン置換L鎖可変領域断片及び同H鎖可変領域断片から構成される一本鎖抗体に残るリジン残基を介して化学架橋剤を用いて連結させて得られた二量体には期待通りの増殖抑制効果がみられ、架橋剤の長さに応じた効果の増強もみられた。
更に、ポリエチレングリコールで特定のリジン残基のみを部位特異的に化学修飾した可変領域断片を含むヒト型化ダイアボディ型二重特異性抗体が元のヒト型化ダイアボディ型二重特異性抗体と同様の抗原結合活性を有していることが確認された。
44番目のリジン残基がアルギニン残基、
55番目のリジン残基がグルタミン残基、
79番目のリジン残基がトレオニン残基、
108番目のリジン残基がグルタミン酸残基、又は、
112番目のリジン残基がグルタミン酸残基。
5Hにおける以下の置換:
12番目のリジン残基がアラニン残基、
13番目のリジン残基がグルタミン酸残基、
19番目のリジン残基がグルタミン残基、
23番目のリジン残基がアラニン残基、
63番目のリジン残基がグルタミン酸残基、又は、
65番のリジン残基がグルタミン残基。
まず、ヒト化型528抗体の結晶構造を分子置換法により決定した。その結果を表1に示す。こうして得られた構造を参照し、且つ、生殖配列データベース(非特許文献8)を利用することで、公知の位置指定変異導入法(部位特異的変異導入法)を用いて、配列番号2で示される抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のL鎖のヒト型化可変領域(5L)、及び、配列番号4で示される抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のH鎖のヒト型化可変領域(5H)において、各領域内のCDR中のリジン残基も含めて全てのリジン残基を他の適当なアミノ酸で置換させた。
44番目のリジン残基がアルギニン残基、
55番目のリジン残基がグルタミン残基、
79番目のリジン残基がトレオニン残基、
108番目のリジン残基がグルタミン酸残基、及び
112番目のリジン残基がグルタミン酸残基。
12番目のリジン残基がアラニン残基、
13番目のリジン残基がグルタミン酸残基、
19番目のリジン残基がグルタミン残基、
23番目のリジン残基がアラニン残基、
63番目のリジン残基がグルタミン酸残基、及び、
65番のリジン残基がグルタミン残基。
次に、こうして選択された各リジン置換可変領域断片を含む一本鎖抗体(リジン置換scFv )として、VH0K及びVL0Kを含む「0K」、VH1K及びVL0Kを含む「HK」、及びVH0K及びVL1Kを含む「LK」の3種類を以下の概要で調製した。
発現ベクターはすでに本発明者等によって構築されているヒト型化528scFv発現ベクター(pRA-h5Hh5L(G1):特許文献3)を基に作製した。即ち、それぞれのベクターを制限酵素NcoIとEagIで消化後、リンカー配列を含めてh5H部位あるいはh5L部位を入れ換えることで、15アミノ酸リンカー(GGGGS)3を有する各ヒト型化scFv発現ベクターを作製した。C末端側には精製のためのHis-tag (Hisx6:ヒスチジン6量体tag)が並列に導入されている。これを大腸菌を宿主として用いて発現させ、本発明の一本鎖抗体を得た。
抗体を加え同様の操作を行った後、蛍光を測定した。ネガティブコントロール(以下、「NC」)は一次抗体の代わりにPBS/0.1%/NaN3を加え、ポジティブコントロール(以下、「PC」)には一次抗体としてh528scFv(配列番号9、10)を用いた。図1に示す結果が得られた。
次に、実施例2で作製したHK又はLK(20μM)を含む6M Gdn-HCl/PBS溶液に一端にNHSエステルを有する5kDaのPEG(2mM)を加え、25℃で2時間(pH7〜10)静置してHK及びLKに含まれる特定の一つのリジン残基を部位特異的にPEG化し、その反応液をSDS−PAGEにかけた。得られた結果を図2に示す。これによれば、pH8.5において部位特異的PEG化が高い効率(64〜73%程度)で達成することが出来た。
更に、架橋試薬として、SANH(succinimidyl 4-hydrazinonicotinate acetone hydrazone)とSFB(succinimidyl 4-formylbenzoate)を用いてscFvであるHK及びLKの二量体化を行った。SANHは、一端にNHSエステル、逆端にヒドラジン基を持ち、SFBは一端にNHSエステル、逆端にアルデヒド基を持つ分子である。これらとHK又はLKをそれぞれ結合させた後、SANHと結合したHK又はLKと、SFBと結合したHK又はLKを混合することで、ヒドラゾン結合を形成させ、二量体化抗体を作製することができる。まず、NHSエステルとアミノ基の結合反応は、ホウ酸バッファ(pH 8.5、25℃)に透析後、ジメチルスルホキシド(DMSO)で20 mMに調製したSANH、またはSFBを終濃度2 mMとなるように加え(10% DMSO)、25℃で2時間静置し行った。ヒドラゾン結合は、pH 7.0以下のバッファに2時間透析することにより、過剰なSANH、SFBの除去と同時に、pHの変更を行い、透析完了後のSANH、SFBが結合したサンプルを混合し(pH 6.0(PBS))、25℃で2時間静置することで、二量体の形成を行った(図3)。ここで、架橋距離の異なる二種類の架橋試薬を用いることで各scFv間の距離が異なる二量体を作製することが出来た。
(注) MTS 試薬 (CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay, Promega社製) 、PMS(CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay,Promega 社製)
更に、特許文献1に記載された方法に準じて本発明のダイアボディ型二重特異性抗体を作製した。まず、本発明のリジン置換L鎖可変領域断片(VL1K)、及び、配列番号8で示されるアミノ酸配列から成る抗CD3抗体OKT3のH鎖のヒト型化可変領域(OH)の完全リジン置換体(含まれる全てのリジン残基を他のアミノ酸残基に置換したもの)から成る一本鎖ポリペプチド(528VL 1K (Lys108)-OKT3 VH Lys(-)))を作製し、これを実施例3に記載の条件(pH8.5)でPEG化し、528抗体のL鎖可変領域断片の108番目のリジンのみ部位特異的にPEG化されたリジン置換L鎖可変領域断片を含むPEG化一本鎖ポリペプチドを得た。
同様に、配列番号4で示される抗体528のH鎖のヒト型化可変領域(5H)及び配列番号6で示される抗CD3抗体OKT3のL鎖のヒト型化可変領域(OL)から成る一本鎖ポリペプチド(528VH -OKT3 VL)を作製した。
こうして作製した未精製のPEG化一本鎖ポリペプチドともう一方の一本鎖ポリペプチドを等モル混合し、透析法による巻き戻し後、ゲルろ過クロマトグラフィ(Hiload superdex(商標)200 26/60 PG、流速2 mL/min、溶出液PBS)により精製し、保持体積120-200 mL各画分をSDS-PAGEにかけた。その結果、ピーク2に、528抗体のL鎖可変領域断片の108番目のリジンのみ部位特異的にPEG化されたリジン置換L鎖可変領域断片を構成要素として含む本発明のダイアボディ型二重特異性抗体(PEG Ex3)を均一に含む(1 μM/mL)画分が得られた。以上の結果を図5に示す。
実施例5で作製したダイアボディ型二重特異性抗体について、実施例2に記載のフローサイトメトリー(Flow cytometry)を実施した。一次抗体試料としてゲルろ過クロマトグラフィににおけるピーク1及びピーク2から取得したPEG化ダイアボディ型二重特異性抗体(100 pmol)を使用した。但し、ゲルろ過クロマトグラフィにおけるピーク2に含まれるダイアボディ型二重特異性抗体とT-LAKとの反応については265 pmolの抗体試料を用いた。ポジティブコントロール(以下、「PC」)には一次抗体としてリジン残基が未置換であるExを用いた。続いて検出抗体としてFITC-conjugate anti-HA
抗体を加え蛍光を測定した。
Claims (26)
- 配列番号2で示されるアミノ酸配列から成る抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のL鎖のヒト型化可変領域(5L)において、全てのリジン残基又は特定の一つの部位のリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸に置換されて成る、ヒト型化抗EGFR抗体リジン置換L鎖可変領域断片。
- 5Lにおける108番目のリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸残基に置換されていることを特徴とする、請求項1記載のリジン置換L鎖可変領域断片。
- 5Lにおける以下の置換の少なくとも一つを含む、請求項1または2記載のリジン置換L鎖可変領域断片:
44番目のリジン残基がアルギニン残基、
55番目のリジン残基がグルタミン残基、
79番目のリジン残基がトレオニン残基、
108番目のリジン残基がグルタミン酸残基、又は、
112番目のリジン残基がグルタミン酸残基。 - 5Lにおける以下の置換を含む、請求項1記載のリジン置換L鎖可変領域断片:
44番目のリジン残基がアルギニン残基、
55番目のリジン残基がグルタミン残基、
79番目のリジン残基がトレオニン残基、
108番目のリジン残基がグルタミン酸残基、及び
112番目のリジン残基がグルタミン酸残基。 - 配列番号4で示されるアミノ酸配列から成る抗ヒト上皮細胞成長因子受容体1(Her1)抗体528のH鎖のヒト型化可変領域(5H)において、全てのリジン残基又は特定の一つのリジン残基以外の全てのリジン残基が他のアミノ酸に置換されて成る、ヒト型化抗EGFR抗体リジン置換H鎖可変領域断片。
- 5Hにおける19番目のリジン残基以外のリジン残基が他のアミノ酸残基に置換されていることを特徴とする、請求項5記載のリジン置換H鎖可変領域断片。
- 5Hにおける以下の置換の少なくとも一つを含む、請求項5または6記載のリジン置換H鎖可変領域断片:
12番目のリジン残基がアラニン残基、
13番目のリジン残基がグルタミン酸残基、
19番目のリジン残基がグルタミン残基、
23番目のリジン残基がアラニン残基、
63番目のリジン残基がグルタミン酸残基、又は、
65番のリジン残基がグルタミン残基。 - 5Hにおける以下の置換を含む、請求項5記載のリジン置換H鎖可変領域断片:
12番目のリジン残基がアラニン残基、
13番目のリジン残基がグルタミン酸残基、
19番目のリジン残基がグルタミン残基、
23番目のリジン残基がアラニン残基、
63番目のリジン残基がグルタミン酸残基、及び、
65番のリジン残基がグルタミン残基。 - 一つのリジン残基又はN末端アミノ基が部位特異的に修飾されている、請求項1〜8のいずれか一項に記載のリジン置換L鎖可変領域断片又はリジン置換H鎖可変領域断片。
- ポリエチレングリコールによって部位特異的に修飾されている請求項9記載のリジン置換L鎖可変領域断片又はリジン置換H鎖可変領域断片。
- 請求項1〜4、9又は10記載のリジン置換L鎖可変領域断片及び請求項5〜8、9又は10記載のリジン置換H鎖可変領域断片を構成要素として含む抗体分子。
- IgG型抗体分子、一本鎖抗体(scFv)、一本鎖抗体の二量体、二重特異性抗体、ダイアボディ型二重特異性抗体、高機能性二重特異性抗体又は多量体化低分子抗体から成る群から選択される、請求項11記載の抗体分子。
- リジン置換L鎖可変領域断片又はリジン置換H鎖可変領域断片に含まれる一つのリジン残基が架橋されてなる、請求項12記載の二量体。
- 抗CD3抗体OKT3のL鎖のヒト型化可変領域(OL)、及び、抗CD3抗体OKT3のH鎖のヒト型化可変領域(OH)が、夫々、配列番号6及び配列番号8で示されるアミノ酸配列から成る、請求項11記載のダイアボディ型二重特異性抗体。
- 請求項11〜14のいずれか一項に記載の抗体分子を構成する一本鎖ポリペプチド。
- 請求項1〜8のいずれか一項に記載のリジン置換可変領域断片、又は、請求項15に記載の一本鎖ポリペプチドをコードする核酸分子。
- 請求項11〜14のいずれか一項に記載の抗体分子を構成する2種類の一本鎖ポリペプチドを共にコードする核酸分子。
- 請求項16又は17記載の核酸分子を含有する複製可能なクローニングベクター又は発現ベクター。
- 共発現ベクターである、請求項18記載のベクター。
- プラスミドベクターである、請求項18又は19記載のベクター。
- 請求項19ないし20のいずれか一項に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
- 請求項11又は12記載の抗体分子の製造方法であって、請求項21に記載の宿主細胞を培養し、該抗体分子を構成する2種類の一本鎖ポリペプチドを発現させ、該ポリペプチドを回収・精製し、該2種類の一本鎖ポリペプチドを会合させ、形成された抗体分子を分離・回収することから成る、前記方法。
- 原核細胞が大腸菌であり、2種類の一本鎖ポリペプチドを大腸菌の培養培地上清、ペリズマ画分、菌体内可溶性画分、又は、菌体内不溶性画分から回収する、請求項22記載の製造方法。
- 請求項14記載の抗体分子の製造方法であって、請求項19記載の共発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養し該抗体分子を構成する2種類の一本鎖ポリペプチドを発現させ、該形質転換菌内でダイアボディ型二重特異性抗体を形成せしめ、形成された二重特異性抗体を分離・回収することから成る、前記方法。
- 請求項11〜14のいずれか一項に記載の抗体分子を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
- 腫瘍細胞を排除する、殺傷する、傷害する及び/又は減少せしめるためのものであることを特徴とする請求項25記載の医薬組成物。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010180693A JP2012034668A (ja) | 2010-08-12 | 2010-08-12 | ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 |
PCT/JP2011/066281 WO2012020622A1 (ja) | 2010-08-12 | 2011-07-16 | ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 |
EP11816288.2A EP2604626A4 (en) | 2010-08-12 | 2011-07-16 | FRAGMENT OF A HUMANIZED ANTI-EGFR ANTIBODY, VARIABLE FRAGMENT OF SUBSTITUTED LYSINE AND USE THEREOF |
US13/816,420 US9139650B2 (en) | 2010-08-12 | 2011-07-16 | Fragment of humanized anti-EGFR antibody substituted-lysine variable fragment and use thereof |
US14/809,687 US20150322156A1 (en) | 2010-08-12 | 2015-07-27 | Fragment of humanized anti-egfr antibody substituted-lysine variable fragment and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010180693A JP2012034668A (ja) | 2010-08-12 | 2010-08-12 | ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012034668A true JP2012034668A (ja) | 2012-02-23 |
Family
ID=45567591
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010180693A Pending JP2012034668A (ja) | 2010-08-12 | 2010-08-12 | ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9139650B2 (ja) |
EP (1) | EP2604626A4 (ja) |
JP (1) | JP2012034668A (ja) |
WO (1) | WO2012020622A1 (ja) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10421796B2 (en) * | 2014-01-21 | 2019-09-24 | Gray D Shaw | Variants of IgG Fc with limited amine groups |
CN107849150B (zh) | 2015-06-24 | 2021-12-14 | Jcr制药股份有限公司 | 含有bdnf的融合蛋白 |
IL258759B2 (en) | 2015-11-03 | 2023-04-01 | Ambrx Inc | Anti-cd3-folate conjugates and their uses |
CN106632681B (zh) | 2016-10-11 | 2017-11-14 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 抗egfr和抗cd3双特异抗体及其应用 |
CN110337448B (zh) * | 2016-12-23 | 2023-08-08 | 瑞美德生物医药科技有限公司 | 使用与程序性死亡配体1(pd-l1)结合的抗体的免疫疗法 |
CA3052936A1 (en) * | 2016-12-26 | 2018-07-05 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Fusion protein of bdnf and anti-transferrin receptor antibody |
WO2020004668A1 (ja) * | 2018-06-29 | 2020-01-02 | 国立大学法人京都工芸繊維大学 | 分離剤 |
JPWO2020004671A1 (ja) * | 2018-06-29 | 2021-08-12 | 国立大学法人京都工芸繊維大学 | 分離剤 |
WO2020047473A1 (en) | 2018-08-30 | 2020-03-05 | HCW Biologics, Inc. | Single-chain and multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof |
CN112996805A (zh) | 2018-08-30 | 2021-06-18 | Hcw生物科技公司 | 多链嵌合多肽和其用途 |
AU2019328313A1 (en) | 2018-08-30 | 2021-02-25 | HCW Biologics, Inc. | Single-chain chimeric polypeptides and uses thereof |
US11738052B2 (en) | 2019-06-21 | 2023-08-29 | HCW Biologics, Inc. | Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof |
CA3169243A1 (en) | 2020-02-11 | 2021-08-19 | HCW Biologics, Inc. | Methods of activating regulatory t cells |
EP4103601A2 (en) | 2020-02-11 | 2022-12-21 | HCW Biologics, Inc. | Methods of treating age-related and inflammatory diseases |
JP2023519106A (ja) | 2020-02-11 | 2023-05-10 | エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド | クロマトグラフィー樹脂およびその使用 |
CN115836087A (zh) | 2020-04-29 | 2023-03-21 | Hcw生物科技公司 | 抗cd26蛋白及其用途 |
IL298608A (en) | 2020-06-01 | 2023-01-01 | Hcw Biologics Inc | Methods for treating disorders related to aging |
WO2021247003A1 (en) | 2020-06-01 | 2021-12-09 | HCW Biologics, Inc. | Methods of treating aging-related disorders |
WO2023168363A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | HCW Biologics, Inc. | Method of treating pancreatic cancer |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004242638A (ja) * | 2003-02-17 | 2004-09-02 | Tohoku Techno Arch Co Ltd | 新規なダイアボディ型二重特異性抗体 |
WO2007108152A1 (ja) * | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Tohoku University | 高機能性二重特異性抗体 |
JP2008511290A (ja) * | 2004-07-26 | 2008-04-17 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | 抗cd154抗体 |
JP2009544327A (ja) * | 2006-07-21 | 2009-12-17 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | O−結合型グリコシル化配列によるペプチドのグリコシル化 |
JP2010119303A (ja) * | 2008-11-17 | 2010-06-03 | Tohoku Univ | 多量体化低分子抗体 |
WO2011062112A1 (ja) * | 2009-11-18 | 2011-05-26 | 国立大学法人東北大学 | ヒト型化抗egfr抗体可変領域の高機能性変異体 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4943533A (en) * | 1984-03-01 | 1990-07-24 | The Regents Of The University Of California | Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US4904584A (en) * | 1987-12-23 | 1990-02-27 | Genetics Institute, Inc. | Site-specific homogeneous modification of polypeptides |
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
EP1400536A1 (en) | 1991-06-14 | 2004-03-24 | Genentech Inc. | Method for making humanized antibodies |
US6451986B1 (en) * | 1998-06-22 | 2002-09-17 | Immunex Corporation | Site specific protein modification |
-
2010
- 2010-08-12 JP JP2010180693A patent/JP2012034668A/ja active Pending
-
2011
- 2011-07-16 WO PCT/JP2011/066281 patent/WO2012020622A1/ja active Application Filing
- 2011-07-16 US US13/816,420 patent/US9139650B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-07-16 EP EP11816288.2A patent/EP2604626A4/en not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-07-27 US US14/809,687 patent/US20150322156A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004242638A (ja) * | 2003-02-17 | 2004-09-02 | Tohoku Techno Arch Co Ltd | 新規なダイアボディ型二重特異性抗体 |
JP2008511290A (ja) * | 2004-07-26 | 2008-04-17 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | 抗cd154抗体 |
WO2007108152A1 (ja) * | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Tohoku University | 高機能性二重特異性抗体 |
JP2009544327A (ja) * | 2006-07-21 | 2009-12-17 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | O−結合型グリコシル化配列によるペプチドのグリコシル化 |
JP2010119303A (ja) * | 2008-11-17 | 2010-06-03 | Tohoku Univ | 多量体化低分子抗体 |
WO2011062112A1 (ja) * | 2009-11-18 | 2011-05-26 | 国立大学法人東北大学 | ヒト型化抗egfr抗体可変領域の高機能性変異体 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BIOCONJUGATE CHEM., vol. 14, JPN6011049572, 2003, pages 480 - 487, ISSN: 0002949489 * |
BIOCONJUGATE CHEM., vol. 5, JPN6014049975, 1994, pages 321 - 326, ISSN: 0002949490 * |
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING, vol. 109, no. 5, JPN6014049973, November 2009 (2009-11-01), pages 447 - 452, ISSN: 0002949488 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2012020622A1 (ja) | 2012-02-16 |
US9139650B2 (en) | 2015-09-22 |
EP2604626A4 (en) | 2014-05-21 |
EP2604626A1 (en) | 2013-06-19 |
US20130274446A1 (en) | 2013-10-17 |
US20150322156A1 (en) | 2015-11-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2012020622A1 (ja) | ヒト型化抗egfr抗体リジン置換可変領域断片及びその利用 | |
JP5725508B2 (ja) | Lh型二重特異性抗体 | |
JP3803790B2 (ja) | 新規なダイアボディ型二重特異性抗体 | |
JP5527627B2 (ja) | 高機能性二重特異性抗体 | |
Shalaby et al. | Development of humanized bispecific antibodies reactive with cytotoxic lymphocytes and tumor cells overexpressing the HER2 protooncogene. | |
WO2015146437A1 (ja) | 高機能性IgG2型二重特異性抗体 | |
WO2015146438A1 (ja) | ヒト上皮増殖因子受容体を標的とした二重特異性抗体 | |
CN110229232B (zh) | 双特异性抗体及其用途 | |
JP5818003B2 (ja) | ヒト型化抗egfr抗体可変領域の高機能性変異体 | |
CN113056486A (zh) | 改善的抗flt3抗原结合蛋白 | |
JP5614606B2 (ja) | 多量体化低分子抗体 | |
JP2005333993A (ja) | 新規なダイアボディ型二重特異性抗体 | |
JP6210455B2 (ja) | 剛直なヘリックス構造を有するオリゴペプチドが導入された二重特異性抗体 | |
JPH10155489A (ja) | 組換え抗体及びそれをコードする核酸 | |
WO2024074145A1 (zh) | 一种结合baffr和cd3的双特异性抗体及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130809 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141216 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150311 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150825 |