CZ118997A3 - Pharmaceutical preparation for treating diseases caused by il-6 production - Google Patents

Pharmaceutical preparation for treating diseases caused by il-6 production Download PDF

Info

Publication number
CZ118997A3
CZ118997A3 CZ971189A CZ118997A CZ118997A3 CZ 118997 A3 CZ118997 A3 CZ 118997A3 CZ 971189 A CZ971189 A CZ 971189A CZ 118997 A CZ118997 A CZ 118997A CZ 118997 A3 CZ118997 A3 CZ 118997A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
antibody
production
interleukin
group
diseases caused
Prior art date
Application number
CZ971189A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ296979B6 (cs
Inventor
Tadamitsu Kishimoto
Asao Katsume
Hiroyuki Saito
Original Assignee
Tadamitsu Kishimoto
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17300476&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ118997(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Tadamitsu Kishimoto, Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Tadamitsu Kishimoto
Publication of CZ118997A3 publication Critical patent/CZ118997A3/cs
Publication of CZ296979B6 publication Critical patent/CZ296979B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Description

Tento vynález se týká farmaceutického přípravku pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6. Tento přípravek obsahuje protilátku (anti-IL-6R-protilátku) na receptor interleukinu-6 (IL-6R).
Dosavadní stav techniky
IL-6 je vícefunkční cytokin, o kterém se předpokládá, že funguje v různých stupních imunologických reakcích, hematologických reakcích a reakcích v akutní fázi [Taga T. a spol.: Critical Reviews in Immunol. 11, 265 (1992).] a že hraje důležité role u násobného myelomu jako růstový faktor a také u takových onemocnění, která souvisejí s plasmocytosou, jako je revmatismus [Hirano T. a spol.: Eur. J. Immunol. 18, 1797 (1988) a Houssiau F. A. a spol.: Arth. Rheum. 31, 784 (1988).], u Castlemanova onemocnění [Yoshizaki K. a spol.: Blood 74, 1360 (1989), Brant S. J. a spol.: J. Clin. Invest. 86, 592 (1990).], proliferační nefritida mezangiálnich buněk [Ohta K. a spol.l.: Clin. Nephrol. (Německo) 38, 185 (1992), Fukatsu A. a spol.: Lab. Invest. 65, 61 (1991) a Horii Y. a spol.: J. Immunol. 143, 3949 (1989).] a kachexie doprovázená růstem nádoru [Strassmann G. a spol.: J. Clin. Invest. 89, 1681 (1992).] atd.
U H-2 Ld hIL-6 transgenních myší (IL-6 Tgm), které genetickým inženýrstvím exprimují nadbytečné hladiny lidského IL-6 (hIL-6), byla pozorována IgGl plasmocytosa, proliferační nefritida mezangiálnich buěnk, anemie, trombocytopenie, objevení se protilátek atd. [Miyai T. a spol.: přednáška na 21. setkání japonské imunologické společnosti Hematological change in H-2 Ld hIL-6 transgenic mice with age, 1991.], což ukazuje na to, že IL-6 souvisí s různými nemocemi. Není však známo, že protilátka proti receptoru interleukinu-6 je účinná na onemocnění způsobená produkcí interleukinu.
Podstata vynálezu
Podle předloženého vynálezu se tedy získává farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6.
Aby se shora uvedené problémy vyřešily, poskytuje předložený vynález farmaceutické přípravky pro předcházeni nebo léčení onemocněni způsobených produkcí interleukinu-6, při čemž tyto farmaceutické přípravky obsahují protilátku proti receptoru interleukinu-6.
V další části spisu budou stručně popsány obrázky.
Obrázek 1 je graf, který ukazuje změnu zvýšeni tělesné hmotnosti zvířat v každé skupině.
Obrázek 2 je graf, který ukazuje změnu positivního poměru proteinu v moči v každé skupině. Tento positivní poměr byl nula u jiných skupin než skupiny 1 a 3.
Obrázek 3 je graf, který ukazuje změnu hladiny hemoglobinu v každé skupině.
Obrázek 4 je graf, který ukazuje změnu počtu červených krvinek v každé skupině.
Obrázek 5 je graf, který ukazuje změnu počtu destiček v každé skupině.
Obrázek 6 je graf, který ukazuje změnu počtu bílých krvinek v každé skupině.
Obrázek 7 je graf, který ukazuje změnu koncentrace IgGl v každé skupině.
Obrázek 8 je graf, který ukazuje změnu koncentrace lidského IL-6 ve skupině l až 5.
Obrázek 9 znamená výsledek sortování buněk technikou fluorescenční protilátky použitím kontrolní protilátky IgG a Gr-1 protilátky ve skupině 1 a 2.
Obrázek 10 znamená výsledek sortování buněk technikou fluorescenční protilátky použitím kontrolní protilátky IgG a Gr-1 protilátky ve skupině 6 a 7.
Obrázek 11 je graf ukazující hmotnost sleziny živočichů v každé skupině na konci pokusu.
Obrázek 12 je graf, který ukazuje změnu tělesné hmotnosti zvířat v každé skupině.
Obrázek 13 je graf, který ukazuje koncentraci triglyceridů v krvi myší 11. den pokusu.
Obrázek 14 je graf, který ukazuje koncentraci glukosy v krvi myší 15. den pokusu.
Obrázek 15 je graf, který ukazuje koncentraci ionizovaného vápníku v krvi myší 11. den pokusu.
Obrázek 16 je graf ukazující přežívání kontrolních myší a nádorem.
Obrázek 17 je graf ukazující tělesnou hmotnost myší 10. a 12. den po počátku pokusu.
Obrázek 18 je graf ukazující koncentraci ionizovaného vápníku v krvi myší 10. a 12. den po počátku pokusu.
Mezi onemocnění způsobená produkcí interleukinu-6 patří například plasmocytosa, jako je revmatismus a Castlemanova cho4 roba, hyperimunoglobulinemie, anemie, nefritida, jako je mezangiální proliferační nefritida, kachexie atd.
Protulátka na receptor interleukinu-6, která se používá podle předloženého vynálezu, může být jakéhokoliv původu nebo typu (monoklonální, polyklonální), pokud může blokovat transdukci signálu IL-6 a inhibovat biologickou aktivitu IL-6. S výhodou však znamená monoklonální protilátku odvozenou od savce. Tato protilátka blokuje transdukci signálu IL-6 a inhibuje biologickou aktivitu IL-6 inhibováním navázání IL-6 na IL-6R.
Živočišné druhy buněk pro produkci monoklonální protilátky mohou být od jakéhokoliv druhu živočicha, který patří mezi savce. Protilátkou může být lidská protilátka nebo protilátka odvozená od jiného živočicha než je člověk. Monoklonální protilátky, odvozené od jiného živočicha než je člověk, jsou s výhodou monoklonální protilátky odvozené od králíků nebo hlodavců, protože se snáze ji připravují. Mezi výhodné hlodavce patří, ale bez omezení jenom na ně, myši, krysy, křečci atd.
Mezi protilátky, které jsou IL-6R protilátkami, patří například protilátka MR16-1 [Tamura T. a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci USA 90, 11924 (1993).], PM1 protilátka [Hirata Y. a spol.: J. Immunol. 143. 2900 (1989).] atd.
Monoklonální protilátky se mohou připravovat v podstatě následujícími způsoby známými z oblasti techniky. Tak se mohou vyrábět použitím IL-6R jako imunizačního činidla, které se používá pro imunizaci konvenčním zpsůobem. Potom se získané iraunocyty podrobí napojení buněk se známými rodičovskými buňkami konvenčním způsobem napojování buněk. Buňky, které produkují monoklonální protilátku, se vyhodnocují konvenčními způsoby vyhodnocování .
Podrobněji - monoklonální protilátky se připravují následujícím způsobem. Například se imunizační antigen může získat použitím genové sekvence lidského IL-6R, jak je uvedeno v ev5 ropské patentové přihlášce EP 325474. Sekvence genu lidského IL-6R se vloží do známého expresního vektorového systému pro transformaci vhodné hostitelské buňky. Potom se žádaný IL-6R protein vyčistí od hostitelských buněk nebo od supernatantu jejich kultury. Vyčištěný IL-6R protein se pak použije jako imunizační antigen.
Imunizační antigen odvozený od myši se může získat použitím genové sekvence myšího IL-6R, který byl popsán v japonském patentovém spisu bez průzkumu 3(1991)-155795 stejným způsobem, jako byl způsob použitý pro shora uvedenou genovou sekvenci lidského IL-6R.
Jako IL-6R se vedle těch, které se exprimují na buněčné membráně, mohou jako antigen použít ty (sIL-6R), které jsou možná odpojeny od buněčné membrány. SIL-6R sestává hlavně z extracelulární domény IL-6R, která je navázána na buněčnou membránu, a to ho odlišuje od IL-6R navázaného na membránu v tom, že mu chybí transmembránová doména nebo jak transmembránová membrána tak intracelulární doména.
Savci imunizovaní imunizačnim antigenem nejsou nijak zvlášt omezeni, ale jsou s výhodou vybráni tak, že se vezme v úvahu jejich slučitelnost s rodičovskými buňkami používanými pro napojení buněk. Obvykle se používají myši, krysy, křečci, králíci atd.
Imunizace Živočichů imunizačnim antigenem se může provádět známým způsobem z oblasti techniky. Obecný způsob například zahrnuje intraperitoneální nebo subkutánní podání imunizačního antigenu savci. Imunizační činidlo je zředěno nebo suspendováno v PBS (fosforečnanen pufrovaný solný roztok), fysiologickém solném roztoku atd. na vhodný objem a společně, jestliže je žádoucí, s vhodným množstvím adjuvans, jako je Freundovo kompletní adjuvans, se emulguje. Potom se tato emulze podává několikrát denně savcům každých 4 až 21 dnů. Pro imunizaci se může s imunizačnim antigenem použít také vhodný nosič.
Po imunizaci živočicha, jak shora uvedeno, a po potvrzení zvýšených hladin žádané protilátky v seru se od savce odeberou imunocyty pro napojení buněk. Zvláště výhodnými imunocyty jsou buňky sleziny.
Výhodné myelomové buňky, použité podle předloženého vynálezu jako partnerské rodičovské buňky, které jsou napojeny se shora uvedenými imunocyty, zahrnují různé známé buněčné linie, například P3 (P2x63Ag8.653) [J. Immunol. 121, 1548 (1978).], p3-Ul [Current Topics in Micro-biology and Immunolgy 81, 1 (1978).], NS—1 [Eur. J. Immunol. 6, 511 (1976).], MPC-11 [Cell 8, 405 (1976).], SP2/0 [Nátuře 276, 269 (1978).], FO [J. Immunol. Meth. 35, 1 (1980).], S194 [J. Exp. Med. 148, 313 (1978).] a R210 [Nátuře 277, 131 (1979).] atd.
Napojení buněk imunocytů s myelomovými buňkami může být prováděno v podstatě podle způsobů známých z oblasti techniky, například postupem podle Milsteina a spol. [Milstein a spol.: Methods Enzymol. 73, 3 (1981).] atd.
Podrobněji - shora uvedené napojení buněk se provádí v konvenční živné kultuře v přítomnosti například činidla urychlujícího napojení buněk. Činidlem urychlujícím napojení může být například polyethylenglykol (PEG) nebo Sendai virus (HVJ) atd. Pro zvýšení účinnosti napojení buněk, jestliže je to žádoucí, se může přímo přidávat adjuvans, jako je dimethylsulfoxid atd.
Použité poměry imunocytů a myelomových buněk jsou s výhodou 1 až 10-násobek imunocytů k myelomovým buňkám. Kapalným kultivačním mediem použitým pro shora uvedené napojení buněk může být například RPMI 1640 kapalné medium nebo kapalné medium MEM, která jsou nejvhodnější pro růst myelomové buněčné linie, a obvyklé kultivační živné půdy používané pro kultivaci buněk. Společně s mediem se mohou používat také doplňkové sérové roztoky, jako je plodové telecí sérum (FCS) atd.
Žádané napojené buňky (hybridomy) se mohou vytvořit řádným promícháním daných množství shora uvedených imunocytů a myelomových buněk ve shora popsané živné půdě, přidáním PEG roztoku předem zahřátého na 37 °C, například PEG s průměrnou molekulovou hmotostí 1 000 až 6 000, na koncentraci 30 až 60 % (hmotn. k obj.). Po postupném přidáváni vhodného kultivačního media a odstřeáování, aby se odstranil supernatant, se mohou odstranit činidla pro napojování buněk atd., která jsou nežádoucí pro růst hybridomů.
Vhodné hybridomy se vyberou kultivací v konvenčním selektivním kultivačním mediu, jako je například HAT kapalné kultivační medium (kapalné kultivační medium obsahující hypoxanthin, arainopterin a thymidin). Kultivace v HAT mediu pokračuje po takovou dobu, obvykle několik dnů až několik týdnů, která je dostatečná pro smrt buněk jiných než jsou žádané hybridomy (nenapojených buněk). Potom se provádí normální omezené ředění a hybridomy, které produkují žádanou protilátku, se analyzuji a monoklonují.
Hybridom, který produje monoklonání protilátky a který se připraví podle tohoto způsobu, se může kultivovat v konvenčním kapalném mediu. Může se také umístit do kapalného dusíku pro dlouhodobé skladování.
Aby se z hybridomů získala monoklonální protilátka, používají se takové způsoby, při nichž se hybridom kultivuje podle konvenčního způsobu, aby se získal supernatant z kultivace. Nebo se použije jiný způsob, při čemž se hybridom implantuje slučitelnému savci, nechá se růst a získá se protilátka jako kapalina z ascitů apod. První způsob je vhodný pro získání protilátky o vysoké čistotě, zatímco pozdější způsob je vhodný pro masovou produkci protilátky.
Monoklonální protilátky, získané podle shora uvedneých způsobů, mohou pak být vyčištěny konvenčními způsoby čištění, jako je vysolení, gelová filtrace, afinitní chromatografie nebo podobné.
Schopnost monoklonální protilátky, vyrobené tímto způsobem, rozpoznávat antiogen s vysokou afinitou a vysokou přesností se může potvrdit konvenčními imunologickými způsoby, jako je radioimunoanalýza, enzymová imunoanalýza (EIA, ELISA), technika fluorescenční protilátky (imunofluorescenční analýza) atd.
Monoklonální protilátka, použitá podle předloženého vynálezu, není omezena na monoklonální protilátku produkovanou hybridomy. Může jí být taková protilátka, která byla uměle upravena pro účely snížení heteroantigeničnosti na člověka. Například se může použít chimerní protilátka, která obsahuje proměnné oblasti myší monoklonální protilátky a konstantní oblasti lidské protilátky. Taková chimerní protilátka se může vyrobit známým způsobem výroby chimerních protilátek, zvláště způsobem genetického inženýrství.
V předloženém vynálezu se může používat také přetvéřená lidská protilátka. To je protilátka, v níž oblasti určující komplementaritu lidské protilátky byly nahrazeny oblastmi určujícími komplementaritu savčí protilátky jiné než lidské, např. myši protilátky. Obecný způsob genetického inženýrství je znám z oblasti techniky. Použitím známého způsobu se může získat přetvořená lidská protilátka, která je užitečná pro předložený vynález.
Jestliže je to nutné, mohou být aminokyseliny základních oblastí (FR) proměnné oblasti protilátky substituovány tak, že oblast určující doplňkovost rekonstituované lidské protilátky může vytvořit příslušné vazebné místo antigenu [Sáto a spol.: Cancer Res. 53, 1 (1993).]. Výhodným příkladem takové přetvařované lidské protilátky je humanizovaná PM-1 (hPM-1) protilátka (viz mezinárodní patentová přihláška WO 92/19759).
Geny, které kódují fragmenty protilátky, jako je Fab nebo
Fv, jednoduchý řetězec Fv (scFv), při čemž H a L řetězce Fv jsou spojeny vhodným linkerem, se mohou zkonstruovat a exprimovat ve vhodných hostitelských buňkách a mohou se použit pro shora uvedený účel, pokud se tyto fragmenty vážou na antigen a inhibují aktivitu IL-6 [viz například Bird a spol.: Tibtech 9, 132 (1991) a Huston a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85. 5879 (1988).]. Dále se shora uvedená přetvořená V oblast protilátky může použít pro Fv H řetězce a L řetězce a získat se tak scFv.
Farmaceutické přípravky pro předcházení nebo léčení onemocnění způsobených produkcí IL-6, které mají jako účinnou složku protilátku receptoru IL-6 podle předloženého vynálezu, se mohou používat v předloženém vynálezu, pokud blokují přenos signálu IL-6 a pokud jsou účinné pro onemocnění způsobená produkcí IL-6.
Farmaceutické přípravky pro léčení nebo předcházení onemocnění způsobených produkcí IL-6 jsou s výhodou podávány parenterálně, například intravenosní, intramuskulární, intraperitoneální nebo subkutánní injekcí, atd., jak systémově tak místně. Mohou existovat ve formě farmaceutického přípravku nebo sestavy společně s alespoň jedním farmaceutickým nosičem nebo ředidlem.
I když dávkování farmaceutických přípravků podle předloženého vynálezu závisí na stavu pacientova onemocnění, na věku pacienta a na způsobu podávání, je nutné vybrat vhodné množství. Jako příklad lze uvést množství v rozmezí od 1 do 1000 mg/pacienta rozdělené na čtyři dávky. Mohou se podávat také v množství 1 až 10 mg/kg/týden. Farmaceutický přípravek podle předloženého vynálezu pro prevenci nebo léčení však není shora uvedeným dávkováním omezen.
Farmaceutický přípravek podle předloženého vynálezu se může připravovat podle konvenčního způsobu. Například parenterální přípravky se mohou vyrobit rozpuštěním vyčištěné IL-6R protilátky v rozpouštědle, jako je např. fysiologický solný roztok nebo pufrovací roztok atd., k němuž se přidá antiadsorpční činidlo, např. Tween 80, želatina, lidský sérový albumin (HSA) atd. Směs se může před použitím rekonstitovat rozpuštěním, takže pak existuje v lyofilizované formě. Excipienty (ředidla), které se používají pro lyofilizaci, zahrnují například cukerný alkohol, jako je manítol nebo glukosa, nebo sacharidy.
Vynález bude nyní vysvětlen podrobněji pomocí následujících referenčních příkladů a příkladů, které nesmějí být zkonstruovány tak, aby omezovaly rozsah předloženého vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Referenční přiklad 1
Konstrukce B6Ld-IL-6 transgenních myši
Sphl-Xhol fragment (Ld-IL-6) o 3 300 pn (párech nukleotidů) s lidskou IL-6 cDNA navázanou na H-2Ld promotor [Suematsu a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86, 7547 (1989).] se injektuje do pronuklea oplodněného vajíčka C57BL/6J (B6) myší (Nihon Clea) mikroinjekci podle způsobu popsaného Yamamurou a spol.: J. Biochem. 96, 357 (1984).
Oplodněné vajíčko se transplantuje do vejcovodu ICR myších samiček, které byly podrobeny pseudotěhotenskému ošetření. Potom se u narozených myší vyhodnocuje integrace hIL-6 cDNA Southernovou blotovou analýzou koncové DNA rozštěpené působením EcoRI použitím sondy 32P-označeného Taql-Banll fragmentu lidské IL^-6 cDNA. Zvířata, která byla testována jako positivní na integraci, byla rozmnožována s B6 myšmi, aby se zajistila linie myší se stejným genotypem.
Referenční přiklad 2
Příprava krysí anti-lL-6R protilátky
CHO buňky produkující myši rozpustný IL-6R byly připraveny jak dříve uvedli Saito a spol.: J. Immunol. 147. 168 (1991). Buňky byly inkubovány v aMEM obsahujícím 5 % hmotn. plodového hovězího sera (FBS) při 37 °C ve zvlhčeném vzduchu obsahujícím 5 % hmotn. oxidu uhličitého. Upravené medium bylo isolováno a bylo použito jako přípravek myšího SIL-6R. Koncentrace myšího sIL-6R v mediu byla stanovena sendvičovým ELISA testem použitím monoklonální anti-myší IL-6R protilátky RS15 [Saito a spol.: J. Immunol. 147. 168 (1991).] a králičí polyklonální anti-myší IL-6R protilátky.
Myší sIL-6R byl vyčištěn od myšího sIL-6R přípravku afinitnl kolonou, na které byla adsorbována monoklonální anti-myší IL-6R protilátka (RS12). Padesát mikrogramů vyčištěného myšího sIL-6R v úplném Freundově adjuvans bylo subkutánní injekcí podáno kryse Wistar. Potom byly zvířeti podávány čtyřikrát subkutánní injekce po 50 pg myšího SIL-6R v neúplném Freundově adjuvans jednou týdně od doby po uplynutí dvou týdnů. Jeden týden po první další injekci bylo krysám intravenosně podáno 50 pg myšího SIL-6R ve 100 pl fosforečnanem pufrovaného solného roztoku (PBS).
Po třech dnech byly krysám odebrány sleziny. Krysí slezinové buňky (splenocyty) byly podrobeny napojování s myšími p3Ul myelomovými buňkami v poměru 10:1. Buňky byly inkubovány při 37 °C přes noc ve 100 pl RPMI 1640 media obsahujícího 10 % hmotn. FBS v jamkách desek o 96 jamkách (Falcon 3075). Potom k nim bylo přidáno 100 pl media obsahujícího hypoxanthin/aminopterin/ /thymidin (HAT). Polovina media byla denně nahražována HAT mediem po dobu 4 dnů.
O sedm dnů později se hybridom, který produkuje anti-myší SIL-6R, vybere testem navázáni myšího sIL-6R (ELISA). Ve struč12 nosti - 100 μΐ supernatantu kultury hybridomu se inkubuje na desce předem potažené 1 pg/ral králičí polyklonální anti-krysí IgG protilátky. Deska se promyje a potom se inkubuje se 100 Mg/ /ml myšího SIL-6R. Po promytí se přidá 2 pg/ml králičí polyklonální anti-myší IL-6R protilátky, deska se promyje a potom se inkubuje s kozí polyklonální anti-králičí IgG protilátkou (Tágo) konjugovanou s alkalickou fosfatasou 60 minut.
A konečně se po promytí deska inkubuje se substrátem alkalické fosfatasy (Sigma 104, p-nitrofenylfosfát) a odečte se při 405 nm čtečkou desek (Toso). Hybridom, který rozpoznává myší sIL-6R, byl dvakrát klonován omezujícím zřeáovacím způsobem. Pro přípravu ascitů bylo BALB/c nu/nu myši injekčně dvakrát podáno 0,5 ml přistanu a o tři dny později intraperitoneální injekci 3.106 buněk připravených hybridomových buněk. O 10 až 20 dů později byly ascity isolovány. Monoklonální protilátka MR16-1 byla vyčištěna použitím kolony s proteinem G (Oncogene Science).
Neutralizující účinek na IL-6 protilátku produkovanou MR16-1 byl testován inkorporací 3H-thymidinu MH60.BSF2 buňkami [Matsuda a spol.: Eur. J. Imraunol. 18. 951 (1988).]. MH60.BSF2 buňky byly rozděleny na jednotlivé podíly v množství 1.104 buněk/200 μΐ/jamku na desku o 96 jamkách. Potom byl do jamek přidán myší IL-6 (10 pg/ml) a MR16-1 nebo RS12 protilátka. Následovala inkubace buněk 44 h při 37 °C v 5 % hmotn. C02. Následně byl do každé buňky přidán 3H-thymidin (1 mCi/jamku) a po 4 h byl proveden test na inkorporací 3H-thymidinu.
Příklad 1
Třicet jedna transgenní myš s lidskou IL-6 cDNA byla získána z B6 IL-6 transgenní myši (B6 IL-6 Tgm) získané v referenčním přikladu 1. Bylo použito 11 normálních myši ze stejného hnízda, které neměly žádnou lidskou IL-6 cDNA (oboje jsou samci ve stáří 4 týdnů). B6 IL-6 Tgm byly rozděleny do 5 skupin (skupina 1 až 5) po šesti zvířatech ve skupině, pouze skupina 1 se13 stávala ze 7 zvířat. Normální myši byly rozděleny do skupiny 6 s 5 zvířaty a skupiny 7 se 6 zvířaty.
Schéma podávání bylo následující:
Skupina 1 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů (první den pokusu) byla intravenosní injekci v dávce 2 mg/0,2 ml podána krysí IgGl protilátka (KH5) (kontrolní protilátka), ve stáři 5 týdnů (8. den pokusu) a později bylo subkutánní injekcí podáváno 100 pg KH5 protilátky dvakrát každý týden (každé 3 až 4 dny).
Skupina 2 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byla intravenosní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1 protilátka, ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní inkekcí podáváno 100 pg MR16-1 dvakrát každý týden.
Skupina 3 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byl intravenosní injekcí podán fosforečnanem pufrovaný solný roztok, ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní injekci podáváno 100 pg MR16-1 dvakrát každý týden.
Skupina 4 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byla intravenosní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1 protilátka, ve stáři 5 týdnů a později bylo subkutánní injekcí podáváno 400 pg MR16-1 jednou za 2 týdny.
Skupina 5 (B6 IL-6 Tgm): Ve stáří 4 týdnů byla intravenosní injekci v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1, ve stáří 5 týdnů a později byl subkutánní injekcí podáván 1 mg MR16-1 jednou za dva týdny.
Skupina 6 (B6 normální myši): Ve stáří 4 týdnů byla intravenosní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána kontrolní protilátka KH5 a ve stáří 5 týdnů a později bylo subkutánní injekcí podáváno 100 pg KH5 dvakrát každý týden.
Skupina 7 (B6 normální myši): Ve stáří 4 týdnů byla intra14 venosní injekcí v dávce 2 mg/0,2 ml podána MR16-1 a ve stáří 5 týdnů a později byla subkutánni injekcí podávána v dávce 100 mg MR16-1 dvakrát týdně.
Způsoby testů, které se zde používají, jsou následující:
Měření tělesné hmotnosti a stanovení proteinů v moči: Měření tělesné hmotnosti a stanovení proteinů v moči papírkem pro testování proteinů v moči (Combistics Sankyo) se provádí každý týden. Hodnoty proteinu v moči tři plus (100 až 300 mg/ /dl) nebo vyšší byly vzaty jako positivní.
Odebírání krve: Krev byla odebírána z retroorbitální dutiny každý druhý týden od počátku pokusu (stáří 4 týdny). Celková krev byla z dolní duté Žíly odebrána na konci pokusu (stáři 18 týdnů).
Počet krvinek: Použitím mikropočítače buněk (Sysmex F-800) byl stanoven počet bílých krvinek (WBC), červených krvinek (RBC) a destiček (PLT) a také množství hemoglobinu (HGB). Na konci pokusu byly pro některé skupiny (skupina 1, 2, 6 a 7) provedeny krevní nátěry a byl vypočten diferenční počet bílých krvinek (v procentech).
Stanovení koncentrace IgGl v krvi: Koncentrace IgGl byla změřena testem ELISA specifickým pro myší IgGl s použitím myelomového proteinu jako standardu.
Stanovení koncentrace IL-6 v krvi: Koncentrace IL-6 byla měřena ELISA testem specifickým pro hIL-6.
Stanovení titru anti-krysí IgG protilátky (skupina IgGl) v krvi: Jelikož podávaná protilátka je pro myš heterogenní protilátka, produkce protilátky na danou protilátku byla měřena testem ELISA s použitím krysího IgG jako antigenu. Výsledky byly vyjádřeny jako jednotky s použitím IL-6 Tgm sera dospělého zvířete, kterému byla podána krysí protilátka, jako standardu
Stanovení chemických parametrů krve: Použitím autoanalyzátoru (Cobas, Fara II, Roche) byly na konci pokusu u sera myší ze skupiny 1, 2, 3, 6 a 7 měřeny: celkový protein (TP), albumin (Alb), glukosa (Glu), triglycerid (TG), kreatinin (CRE), dusík močoviny v krvi (BUN), vápník (Ca), alkalická fosfatasa (ALP), glutamin-pyruvát-transaminasa (GOT) a glutamát-pyruvát-transaminasa (GPT).
FACS analýza kostní dřeně a buněk sleziny: Na konci pokusu byla kostní dřeň a buňky sleziny, které byly získány od jednoho zvířete z každé skupiny 1, 2, 6 a 7, analyzovány na buněčné povrchové antigeny zařízením FACScan (Beckton Dickensian). Použité protilátky jsou protilátky (Pharmingen) směrované na Gr-1 (buňky kostní dřeně), CD4, CD8 a B220 (splenočyty).
Pitva: Na konci pokusu byla provedena pitva. Byla změřena hmotnost sleziny a hlavní orgány byly vizuálně prohlédnuty.
Tělesné hmotnosti: Změny v tělesných hmotnostech každé skupiny jsou uvedeny na obr. 1. Ve skupinách 1 a 3 existuje zvýšení hmotností. Žádný rozdíl nebyl pozorován ve změnách tělesných hmotnosti u dalších skupin.
Protein v moči: Ve skupině 1 byla zvířata positivní na protein v moči zřetelná od stáří 13 týnů (obr. 2), čtyři (dvě ve stáří 16 týdnů a 2 ve stáří 17 týdnů) ze 7 zvířat zemřela v době pitvy. Žádné úmrtí však nebylo pozorováno u dalších skupin. Také ve skupině 3 byla dvě ze šesti zvířat positivní na protein v moči na konci pokusu, ale žádné jiné zvíře v ostatních skupinách nebylo testováno jako positivní.
Hematologická zjištění: Ve skupině 1 bylo pozorováno snížení hemoglobinu (obr. 3) a počet RBC (obr. 4); stupeň se zhoršoval se stářím. Počet destiček (obr. 5) vykázal přechodné zvýšeni, ale pak rychle poklesl. Ve skupině 3 byla pozorována podobná tendence, i když byla trochu zpožděna proti skupině 1. Na druhou stranu však neexistovalo ani snížení množství herno16 globinu a RBC ani zvýšení počtu destiček a následné snížení ve kterékoliv ze skupin 2, 4 a 5. Při pozorování diferenčního počtu krevních buněk krevních nátěrů bylo u skupiny l zjištěno zvýšení neutrofilů a monocytů a odpovídající snížení v lymfocytové frakci, ale skupina 2 vykazovala normální hodnoty (tabulka 1). Rovněž neexistoval významný rozdíl mezi skupinami 6 a 7.
Tabulka 1
sku- pina juve- nilní neu- tro- fily matu- rované neu- tro- fily eosi- nofily baso- mono- lymfo- cyty jiné
fily cyty
1 střed 2,00 31,33 1,33 0,00 9,33 56,00 0,00
SD* 2,00 3,79 0,58 0,00 4,93 9,54 0,00
2 střed 0,33 13,83 2,33 0,00 2,00 81,00 0,50
SD* 0,52 4,17 1,03 0,00 2,28 4,82 0,55
t-test 0,0676 0,000 0,0557 - 0,0129 0,006 0,0676
3 střed 0,30 14,10 2,80 0,00 1,30 81,40 0,10
SD* 0,45 4,60 0,91 0,00 1,04 4,08 0,22
7 střed 0,42 10,67 2,42 0,08 0,58 85,75 0,08
SD* 0,38 2,32 0,97 0,20 0,49 1,92 0,20
t-test 0,6484 0,1406 0,5101 0,3816 0,1644 0,0427 0,8992
* SD znamená standardní odchylka
Koncentrace IgGl v krvi: Bylo ukázáno, že koncentrace IgGl v krvi ve skupině 1 vykazuje významné zvýšení okamžitě po počátku pokusu, nakonec dosahuje asi stonásobku koncentrace u normálních myší (obr. 7). Ve skupině 3 bylo zvýšení koncentrace IgGl zaznamenáno poněkud později než u skupiny 1. Naproti tomu u skupin 2, 4 a 5 nedošlo k žádnému zvýšení koncentrace IgGl, která zůstala na téměř stejné úrovni během pokusu. Na druhé straně u normálních myší nebyla pozorována žádná změna související s podáváním protilátky.
Koncentrace hIL-6 v krvi: Koncentrace hIL-6 v krvi (obr. 8) se měnila stejným způsobem jako u IgGl, vykazuje tedy zvýšení u skupin 1 a 3, zatímco zůstává na téměř stejné úrovni během pokusu u ostatních skupin.
Titr anti-krysí IgG protilátky v krvi: Protilátka proti anti-krysímu IgG byla detegována u skupiny 1, 3 a 6 (tabulka 2). Všechna zvířata ve skupině 1 a 3 vykazují vysoký titr, zatímco ve skupině 6 pouze 2 z 5 zvířat vykazovaly zvýšení titru. Na druhé straně však nebylo pozorováno žádné významné zvýšení u ostatních skupin.
Tabulka 2
Myší proti-krysí protilátka (jednotky/ml)
sku- 6 věk 8 (v týdnech)
pina 4 10 12 14 16 18
1 0,15 0,78 1,69 7,41 100< 100< 100< 100<
2 0,22 0,34 0,45 0,38 0,43 0,50 0,39 0,30
3 0,14 0,61 0,69 0,67 2,27 4,74 14,25 41,24
4 ND ND ND ND ND ND ND 0,57
5 ND ND ND ND ND ND ND 0,28
6 ND ND ND ND ND ND ND 3,55
7 ND ND ND ND ND ND ND 0,20
ND znamená nestanoveno
Stanovení chemických parametrů krve: U skupin 1 a 3 nedošlo ke zvýšení TP a snížení Alb. TG a ALP byly sníženy u skupiny l a 3, u skupiny 1 byla dokonce snížena Glu. U skupiny 2 nebyly žádné takové změny pozorovány.
Tabulka 3‘
sku- - TP Alb Glu TG CRE BUN Ca ALP GOT GPT
pi- (9/ (g/ (mg/ (mg/ (mg/ (mg/ (mg/ ( j-/ (mj./ ( j·/
na dl) dl) dl) dl) dl) dl) dl) 1) 1) 1)
1 14 2,41 77,4 20,7 0,4 34,8 8,6 27,67 33,33 6
1,33 0,3 14,5 8,33 0,2 23,7 0,35 5,69 5,86 1,73
2 5,68 3,31 199 62,3 0,51 28,3 8,67 156,5 37,5 5,6
0,3 0,2 29,5 10,9 0,22 4,08 0,58 14,31 8,22 1,14
3 12,6 2,92 253 41 0,61 26,4 9,82 54,17 27,33 6,83
2,85 0,64 60,2 16,3 0,17 6,25 0,83 42,62 5,65 1,72
6 5,9 3,84 289 105 0,87 27,9 8,9 181 33,2 9,6
0,65 0,46 98,9 28,8 0,22 6,32 0,74 21,24 8,9 5,81
7 5,86 3,63 300 94 0,75 26,8 8,98 196,83 34,5 6,5
0,53 0,34 25,5 20 0,2 5,26 0,82 21,68 4,89 3,08
* Číslice na první řádce u dané skupiny znamenají střední hodtu, číslice na druhé řádce pak znamenají střední odchylku.
FACS analýza: Analýza buněk kostní dřeně (LB) a analýza splenocytů (sp) skupin 1, 2, 6 a 7 odhalila, že existuje extrémní zvýšení počtu Gr-1 positivních buněk, které jsou granulocytovými prekursorovými buňkami, v BM buňkách ve skupině 1 (obr. 9 a obr. 10), ale ve skupině 2 mají podobné hodnoty jako normální myši. Mezi skupinou 6 a 7 nebyl v podstatě žádný rozdíl. Pokud jde o poměr CD4-, CD8- a B220-positivních buněk v sp, nebyly mezi skupinami žádné rozdíly až na to, že u skupiny 1 byl počet CD8- a B200-positivních buněk snížen díky zvýšení plasmových buněk (tabulka 4).
Tabulka 4
Analýza povrchového antigenu splenocytů
skupina CD4+ CD8+ B220+
1 13,2 % 5,4 % 23,1 %
2 18,5 % 14,3 % 50,0 %
3 19,9 % 15,0 % 53,1 %
4 13,9 % 10,6 % 57<3 %
Pitevní nálezy: U skupiny 1 a 3 bylo viditelné nabobtnání systémových lymfatických žláz a zvětšení sleziny (obr. 11), stejně jako odbarvení ledvin. Částečně bylo zaznamenáno také j zvětšeni jater. Tyto změny nebyly pozorovány u ostatních skupin. Vyjma nepatrného zvětšení sleziny u skupiny 2, 4 a 5, neexistovaly pozoruhodné změny při srovnání s normálními zvířaty.
Nyní budou vysvětleny výsledky tohoto pokusu. U IL-6 Tgm j (skupina 1), které byla podávána kontrolní protilátka, byly po- j zorovány rozmanité příznaky, jako je IgGl plasmocytosa, anemie, trombocytosa, trombocytopenie, renální selháni, abnormální chemické parametry krve atd. Bylo však zřejmé, že tyto příznaky mohou být úplně potlačeny MR16-1.
Je známo, že IL-6 způsobuje, že B buňky se nakonec dife- fl rencují na plasmové buňky [Maraguchi A. a spol.: J. Exp. Med.
167. 332 (1988).]. V případě IL-6 Tgm produkce IL-6 způsobila zvýšení koncentrace IgGl v krvi a zvýšení koncentrace TP a snížení koncentrace Alb v seru. Tyto skutečnosti ukazují nástup IgGl plasmocytosy.
Pozoruhodné zvětšení systémových lymfatických tkání, jako jsou lymfatické žlázy a slezina, by bylo zodpovědné za zvýšení tělesné hmotnosti přes zhoršení obecného stavu způsobeného progresí onemocnění ve skupinách 1 a 3. MR16-1 nejen že potlačuje tyto stavy, ale potlačuje také zvýšení koncentrace IL-6 v krvi.
Bylo tedy potvrzeno, že 2výšení koncentrace IL-6 v krvi se stárnutím, jak bylo pozorováno u 11-6 Tgm, přímo souvisí s progresí plasmocytosy. Předpokládá se proto, že proliferované plasmové buňky samy aktivně produkují IL-6, který dále zvyšuje růst plasmových buněk, což vede k tomu, že IL-6 je produkován ve velkých množstvích.
Jsou známy vlivy IL-6 na hemocyty, vliv na zvýšení množství destiček [Ishibashi T. a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86. 5953 (1989) a Ishibisahi T. a spol.: Blood 74, 1241 (1989).] a vliv na indukci makrocytické anemie [Hawley R. G. a spol.: J. Exp. Med. 176. 1149 (1992).]. Vedle shora uvedených byla u IL-6 Tgm pozorována trombocytopenie související se stárnutím, o níž se předpokládá, že jde o autoimunitu související s aktivaci polyklonálních B buněk [Miyai, Tatsui a spol.: viz shora.].
MR16-1 úplně inhibuje přímé a nepřívé vlivy IL-6 na hemocyty, ale neovlivňuje počty krvinek normálních myší. Bylo tedy potvrzeno, že protilátka anti IL-6 receptoru vůbec neovliňuje hematocyty. U IL-6 Tgm bylo pozorováno zvýšení poměru Gr-l-positivních buněk, které jsou považovány za granulocytické prekursorové buňky, a poměru periferních neutrofilů. I když je známo, že IL-6 zvyšuje počet neutrofilů, podrobný mechanismus nebyl dosud objasněn. V této studii bylo zjištěno, že tento účinek je jev, který se odehrává na úrovni prekurosorových buněk v kostní dřeni. Při této studii bylo také zjištěno, že MR16-1 úplně potlačuje vlivy IL-6, ale neovlivňuje hladinu neutrofilů v kostní dřeni a periferní krvi.
MR16-1 potlačuje také nástup nefritidy pozorované u IL-6 Tgm. Bylo popsáno, že IL-6 úzce souvisí s nástupem mezangiální proliferační nefritidy jako autokrinní faktor růstu mezangiální ch buněk. I když bylo potvrzeno, že nefritida u IL-6 Tgm je mezangiální proliferační nefritida, nemůže být popřeno zahrnutí imunního systému zvýšeného IL-6 [Katsume, Asao a spol.: příspěvek na 21. setkání Japonské imunologické společnosti: Charac21 terization of SCID x (Scid x H-2Ld hIL-6 transgenní myš), 1991.]. Jelikož neexistovalo potlačení proteinu v moči a úmrti, bylo jasné, že protilátka anti-IL-6 receptoru je účinná pro potlačování nástupu nefritidy způsobené produkcí IL-6.
U IL-6 Tgm bylo pozorováno významné snížení koncentrací Glu a Tg v seru, což jsou příznaky kachexie. V předloženém pokusu bylo zjištěno, že podání MR16-1 protilátky je účinné pro zlepšení kachexie, protože hodnoty Glu a Tg byly u skupiny 1 sníženy, zatímco u skupiny 2 se tyto hodnoty vrátily téměř na stejnou hodnotu jako u normálních myší.
Jelikož MR16-1 je krysí IgGl, heteroprotein pro myši, lze snadno předvídat, že mohou být produkovány protilátky proti podávané protilátce, což by způsobilo, že protilátky budou neúčinné.
Při pokusu indukovat imunologickou snášenlivost vystavením velkému množství antigenu při první senzibilizaci předloženého pokusu byly připraveny skupiny, kterým bylo při prvním podání intravenosně podáno 2 mg/myš protilátky. Ze skupin, jimž byla podána MR16-1, ty skupiny, které byly ošetřeny uvedeným způsobem (skupina 1, 4 a 5) neposkytly žádnou detegovatelnou anti-krysí IgG protilátku bez ohledu na interval a dávku podávání, což vede k úplnému potlačení nástupu onemocnění. Skupina 3 však popřípadě vykázala stejné příznaky jako skupina 1, která je skupinou podávání kontrolní protilátky, i když tato skupina vykázala zvýšení anti-krysí IgG protilátky a nástup onemocnění byl nepatrně zpožděn proti skupině 1.
Předpokládá se tedy, že léčení bylo účinné pro indukování imunologické snášlenlivosti, ale anti-krysí IgG protilátka byla detegována také ve všech zvířatech skupiny 1 a 2 z 5 zvířat skupiny 6, kterým byla v tomto schématu dána kontrolní protilátka. Jelikož progrese plasmocytosy indukuje aktivaci polyklonálních B buněk v IL-6 Tgm, nemůže být z toho vyvozeno, že anti-krysí IgG protilátka detegovaná ve skupině 1 a 3 je proti22 látka specifická pro danou protilátku. Bylo však usouzeno, že indukuje efekt imunologické snášenlivosti vystavením velkému množství antigenu při prvni senzibilizaci u skupin 2, 4 a 5 kombinovaný s inhibujícím účinkem produkce specifické protilátky díky podáni velkého množství MR16-1 slouží pro indukování úplné tolerance.
V předloženém pokusu bylo objasněno, že anti-IL-6 receptorová protilátka je mimořádně účinná na rozmanitá onemocnění způsobená produkcí IL-6 bez ovlivnění normální hladiny.
Příklad 2
Byl zkoumán účinek protilátky myšího IL-6 receptoru na model kachexie indukované tračníkem 26. Používané myši byly myší samečci BALB/c staří 6 týdnů, jimž byl subkutánně implantován 2mm blok tračníku 26 do bodu myši první den pokusu. Myší protilátka MR16-1 IL-6 receptoru (viz referenční přiklad 2) byla intravenosně podána v dávce 2 mg/myš bezprostředně před implantací tračníku 26 prvni den pokusu. Potom byla subkutánně podána dávka 0,5 mg/myš 7., 11., 14. a 18. den (n=7). Již v předchozím pokusu bylo potvrzeno, že neutralizující protilátky proti heteroproteinu se nesnadno objevují v tomto způsobu. Kontrolní skupině nesoucí nádor byla podle stejného schématu podávána krysí IgGl kontrolní protilátka (n=7). Skupina, které byl podáván PBS, byla ustavena jako kontrolní skupina bez nádoru (n=7). Po počátku pokusu byla tělesná hmotnost měřena každý den. 11. a
15. den po počátku pokusu byly měřeny chemické parametry krve a koncentrace ionizovaného vápníku.
Existovalo pozoruhodné snížení tělesné hmotnosti u skupiny s nádorem 10. den po srovnáni se skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR16-1 (obr. 12), byl ukázán částečný účinek potlačení snížení tělesné hmotnosti. Koncentrace triglycerídů v krvi 11. den a koncentrace glukosy v krvi 15. den jsou uvedeny na obr. 13 a 14. Tyto hodnoty byly pozoruhodně sníženy u kontrolní skupiny nesoucí nádor při srovnání s kon23 trolni skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR16-1, bylo pozorováno potlačení tendence glukosy a významné potlačení triglyceridů.
Koncentrace ionizovaného vápníku v krvi 11. den byla pozoruhodně zvýšena u kontrolní skupiny s nádorem při srovnání s kontrolní skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR-16, byl pozorován významný potlačující účinek (obr. 15).
Pokus potvrdit účinek na dobu přežití byl proveden podle podobného časového schématu jak shora uvedeno (n=10). Výsledkem bylo, že vliv na dobu přežití byl pozorován u skupiny, které byla podána MR16-1 (obr. 16).
Příklad 3
Byl zkoumán účinek protilátky IL-6 receptoru na model kachexie indukované occ-1 doprovázené hyperkalcemií. Jako myši byli použiti myší nazí samečci ve stáří 6 týdnů. První den pokusu byla do boku myší subkutánně implantována karcinomová buněčná linie, occ-1. Protilátka MR16-1 myšího IL-6 receptoru (viz referenční poříklad 2) byla podána intravenosně v dávce 2 mg/myš bezprostředně před implantací occ-1 první den pokusu. Potom byla podána subkutánně 7. a 10. den 100 Mg/myš (n=6). v předchozím pokusu bylo již potvrzeno, že neutralizující protilátky proti heteroproteinu, krysí protilátce, se snadno neobjevují v tomto způsobu. Kontrolní skupině nesoucí nádor byla podána krysí IgGl kontrolní protilátka (KH5) ve stejném časovém rozmezí (n=6). Skupina, které byl podán PBS, byla vedena jako kontrolní skupina bez nádoru (n=7). Po počátku pokusu byla 10. a 12. den změřena tělesná hmotnost a koncentrace ionizovaného vápníku.
U skupiny nesouc! nádor došlo ke snížení hmotnosti, ale skupina, které byla podána MR16-1, vykazovala podobnou změnu v tělesné hmotnosti jako kontrolní skupina bez nádoru, což u24 kazuje na potlačení snížení tělesné hmotnosti (obr. 17).
Koncentrace ionizovaného vápníku v krvi byla pozoruhodně zvýšena u kontrolní skupiny s nádorem při srovnání s kontrolní skupinou bez nádoru, zatímco u skupiny, které byla podána MR16-l, bylo zvýšení silně potlačeno (obr. 18).

Claims (14)

1. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6, vyznačující se tím, že obsahuje protilátku receptorů interleukinu-6.
2. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 1, vyznačující se tím, že onemocněním způsobeným produkcí interleukinu-6 je plasmocytosa.
3. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkci interleukinu-6 podle nároku 1, vyznačující se tím, že onemocněním způsobeným produkcí interleukinu-6 je hyperimunoglobulineraie.
4. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocněni způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 1, vyznačující se tím, Že onemocněním způsobeným produkcí interleukinu-6 je anemie.
5. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 1, vyznačující se tím, že onemocněním způsobeným produkcí interleukinu-6 je nefritida.
6. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 1, vyznačující se tím, že onemocněním způsobeným produkcí interleukinu-6 je kachexie.
7. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčeni onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 2, vyznačující se tím, že plasmocytosa je indukována revmatismem.
8. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 2, vyznačující se t í m, že plasmocytosa je indukována Castlemanovou nemocí.
9. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 5, vyznačující se tím, že nefritida znamená mezangiální proliferační nefritidu.
10. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle kteréhokoliv z nároků laž9, vyznačující se tím, že protilátkou je monoklonální protilátka.
11 Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 10, vyznačující se tím, že protilátkou je PM-1 protilátka.
12. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocněni způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 10, vyznačující se tím, že protilátkou je chimerní protilátka.
13. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčení onemocnění způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 10, vyznačující se tim, že protilátkou je přetvořená lidská protilátka.
14. Farmaceutický přípravek pro prevenci nebo léčeni onemocněni způsobených produkcí interleukinu-6 podle nároku 13, vyznačujíc! se tím, že protilátkou je přetvořená lidská PM-1 protilátka.
CZ0118997A 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení Castlemanovy nemoci CZ296979B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP25701094 1994-10-21
PCT/JP1995/002169 WO1996012503A1 (fr) 1994-10-21 1995-10-20 Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ118997A3 true CZ118997A3 (en) 1997-09-17
CZ296979B6 CZ296979B6 (cs) 2006-08-16

Family

ID=17300476

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0118997A CZ296979B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení Castlemanovy nemoci
CZ20060678A CZ298790B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení kachexie
CZ20050477A CZ298325B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20060678A CZ298790B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení kachexie
CZ20050477A CZ298325B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-20 Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20070036785A1 (cs)
EP (3) EP2319535A3 (cs)
JP (1) JP4896093B2 (cs)
CN (4) CN100350973C (cs)
CA (1) CA2203182C (cs)
CZ (3) CZ296979B6 (cs)
FI (3) FI121455B (cs)
HK (1) HK1067062A1 (cs)
HU (2) HU225392B1 (cs)
NO (6) NO324046B1 (cs)
PL (1) PL182089B1 (cs)
RU (1) RU2147442C1 (cs)
WO (1) WO1996012503A1 (cs)

Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
GB9702944D0 (en) * 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Reducing fibrosis
ES2382488T3 (es) 1997-03-21 2012-06-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Un agente preventivo o terapéutico para enfermedades mediadas por células t sensibilizadas que comprende un antagonista de il-6 como ingrediente activo
PT1004315E (pt) 1997-08-15 2008-07-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Profilácticos e/ou medicamentos contendo anticorpos neutralizantes anti-receptor de il-6 para reduzir a excreção de proteínas urinárias no lúpus eritematoso sistémico
CN101239185A (zh) 1998-03-17 2008-08-13 中外制药株式会社 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂
DE69934698T2 (de) * 1998-08-24 2007-10-04 Chugai Seiyaku K.K. Mittel zur vorbeugung oder behandlung von pankreatitis die anti-il-6 receptor antikörper als aktive komponente enthalten
DE19948126A1 (de) * 1999-10-06 2001-04-12 Max Delbrueck Centrum Pharmazeutisches Mittel zur Behandlung von Kachexie und/oder kardiogenem Schock
EP1334731B1 (en) * 2000-10-25 2008-02-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventives or remedies for psoriasis containing as the active ingredient il-6 antagonist
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
US20050118163A1 (en) * 2002-02-14 2005-06-02 Hidefumi Mizushima Antibody-containing solution pharmaceuticals
KR100688928B1 (ko) 2003-02-24 2007-03-02 모리나가 뉴교 가부시키가이샤 인터류킨-6 생성 억제제
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
SI1690550T1 (sl) 2003-10-17 2012-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Terapevtska sredstva za mezoteliom
US8617550B2 (en) 2003-12-19 2013-12-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
EP3736295A1 (en) * 2004-03-24 2020-11-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor
EP3623473A1 (en) 2005-03-31 2020-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
SI2314623T1 (sl) * 2005-06-21 2012-11-30 Xoma Technology Ltd IL beta vezavna protitelesa in njihovi fragmenti
WO2007043641A1 (ja) 2005-10-14 2007-04-19 Fukuoka University 膵島移植における移植膵島障害抑制剤
RU2450830C2 (ru) * 2005-10-21 2012-05-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Средства для лечения кардиопатии
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
CA2637917C (en) 2006-01-27 2015-11-24 Keio University Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
US9670269B2 (en) 2006-03-31 2017-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of modifying antibodies for purification of bispecific antibodies
JP5624276B2 (ja) 2006-03-31 2014-11-12 中外製薬株式会社 抗体の血中動態を制御する方法
JP5754875B2 (ja) 2006-04-07 2015-07-29 国立大学法人大阪大学 筋再生促進剤
CN102585002A (zh) 2006-06-02 2012-07-18 瑞泽恩制药公司 人il-6受体的高亲和力抗体
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
CN101528778A (zh) * 2006-08-18 2009-09-09 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽
AU2007285695B2 (en) 2006-08-18 2012-05-24 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with IL-6-mediated signalling
CL2008000188A1 (es) 2007-01-23 2008-07-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente para suprimir la reaccion de rechazo cronica que comprende como ingrediente activo un inhibidor de il-6; y uso del inhibidor de il-6.
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US8062864B2 (en) * 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
NZ601583A (en) * 2007-05-21 2013-08-30 Bristol Myers Squibb Co Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US7906117B2 (en) * 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
CA2688146C (en) * 2007-05-21 2018-03-06 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies to il-6 and use thereof
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US8404235B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
ES2566957T3 (es) 2007-09-26 2016-04-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Región constante de anticuerpo modificado
EP3689912A1 (en) 2007-09-26 2020-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
EP2206775B1 (en) 2007-09-26 2016-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-il-6 receptor antibody
EP2236604B1 (en) 2007-12-05 2016-07-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-nr10 antibody and use thereof
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
TWI564021B (zh) 2008-04-11 2017-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Repeated binding of antigen to antigen binding molecules
EP2297202B1 (en) 2008-05-13 2016-01-13 NovImmune SA Anti-il-6/il-6r antibodies and methods of use thereof
EP2305306B1 (en) 2008-06-05 2016-02-10 National Cancer Center Neuroinvasion inhibitor
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US9452227B2 (en) * 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
WO2010107108A1 (ja) * 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 関節リウマチ治療剤
TWI682995B (zh) 2009-03-19 2020-01-21 日商中外製藥股份有限公司 抗體恆定區域改變體
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2417163B1 (en) 2009-04-10 2019-02-27 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
WO2010115995A2 (en) 2009-04-10 2010-10-14 Ablynx Nv Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
MX2011012136A (es) 2009-05-15 2012-04-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-axl.
JP5837821B2 (ja) 2009-09-24 2015-12-24 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
PL2493922T3 (pl) 2009-10-26 2017-07-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Sposób wytwarzania glikozylowanych immunoglobulin
EP2504031A4 (en) 2009-11-24 2013-06-26 Alderbio Holdings Llc ANTI-IL-6 ANTIBODIES AND THEIR USE
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
JO3417B1 (ar) * 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
JP5889181B2 (ja) 2010-03-04 2016-03-22 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2578231B1 (en) 2010-05-28 2022-10-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antitumor t cell response enhancer
JP5904552B2 (ja) 2010-05-28 2016-04-13 国立研究開発法人国立がん研究センター 膵癌治療剤
EP4029881A1 (en) 2010-11-08 2022-07-20 F. Hoffmann-La Roche AG Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody
MX355060B (es) 2010-11-17 2018-04-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula multiespecifica de union a antigeno que tiene funcion alternativa a la funcion del factor viii de coagulacion sanguinea.
CA2818814A1 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-il-6 antibodies for the treatment of anemia
MX365235B (es) * 2010-11-30 2019-05-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula de unión a antígeno capaz de unir repetidamente a la pluralidad de moléculas de antígeno.
US20140093496A1 (en) 2011-02-25 2014-04-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc-gamma-RIIb-SPECIFIC Fc ANTIBODY
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
WO2013041722A1 (en) 2011-09-23 2013-03-28 Ablynx Nv Prolonged inhibition of interleukin-6 mediated signaling
TW201817745A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
US20150050269A1 (en) 2011-09-30 2015-02-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
JP6120451B2 (ja) 2011-10-28 2017-04-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ヒト化ｉｌ−６および／またはｉｌ−６受容体
WO2013176471A1 (ko) 2012-05-21 2013-11-28 한국생명공학연구원 곰보배추의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, stat3 매개 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN104797132B (zh) * 2012-09-13 2017-06-30 中外制药株式会社 基因敲入非人动物
EP3009518B1 (en) 2013-06-11 2020-08-12 National Center of Neurology and Psychiatry Method for predicting post-therapy prognosis of relapsing-remitting multiple sclerosis (rrms) patient, and method for determining applicability of novel therapy
BR112015032960B1 (pt) 2013-07-04 2021-01-05 F. Hoffmann-La Roche Ag imunoensaio suprimido por interferência para detectar anticorpos anti-fármaco em amostras de soro
DK3050896T3 (da) 2013-09-27 2021-07-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af en polypeptid-heteromultimer
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
US10118967B2 (en) 2014-10-21 2018-11-06 Ablynx N.V. Methods for treating rheumatoid arthritis by administering IL-6 receptor antibodies
CA2963760A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Yoshinao Ruike Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
CN113045650A (zh) 2014-12-19 2021-06-29 中外制药株式会社 抗-c5抗体及使用方法
EA201791754A1 (ru) 2015-02-05 2019-01-31 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ ЗАВИСЯЩИЙ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН, ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ, IL-8-СВЯЗЫВАЮЩИЕ АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
KR101892883B1 (ko) 2015-02-27 2018-10-05 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-6 관련 질환 치료용 조성물
WO2016159213A1 (ja) 2015-04-01 2016-10-06 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
JP6875683B2 (ja) 2015-05-19 2021-05-26 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 多発性硬化症（ｍｓ）患者の新規治療適用判断方法
WO2016195088A1 (ja) 2015-06-04 2016-12-08 国立研究開発法人 国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６阻害剤を有効成分とする精神疾患治療剤
KR20180034672A (ko) 2015-08-18 2018-04-04 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체
EP3377086B1 (en) * 2015-11-19 2024-05-01 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Lymphocyte antigen cd5-like (cd5l)-interleukin 12b (p40) heterodimers in immunity
EP3394098A4 (en) 2015-12-25 2019-11-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
JP7219005B2 (ja) 2015-12-28 2023-02-07 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
US11484591B2 (en) 2016-02-22 2022-11-01 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin A analogues or metabolites, and estradiol metabolites
TW202214700A (zh) 2016-03-14 2022-04-16 日商中外製藥股份有限公司 用於癌之治療的細胞傷害誘導治療劑
CA3026050A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for prophylaxis or treatment of il-8 related diseases
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
JP7191833B2 (ja) 2017-01-30 2022-12-19 中外製薬株式会社 抗スクレロスチン抗体およびその使用
US11033496B2 (en) 2017-03-17 2021-06-15 The Regents Of The University Of Michigan Nanoparticles for delivery of chemopreventive agents
WO2018203545A1 (ja) 2017-05-02 2018-11-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
WO2019078344A1 (ja) 2017-10-20 2019-04-25 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
EP3765494A4 (en) 2018-03-15 2022-03-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-DENGUE VIRUS ANTIBODIES WITH CROSS-REACTIVITY AGAINST ZIKA VIRUS AND METHODS OF USE
CN114206442A (zh) 2019-01-31 2022-03-18 赛诺菲生物技术公司 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体
US20220177978A1 (en) 2019-04-02 2022-06-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
CN117247451B (zh) * 2023-11-17 2024-02-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种针对人白介素6蛋白的单域抗体及其应用

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341152C (en) 1988-01-22 2000-12-12 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2
US5670373A (en) * 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5814307A (en) * 1989-04-10 1998-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Method for regulating cell growth, leukocyte differentiation and tumor cell growth using Oncostatin M to stimulate synthesis of IL-6
US5216128A (en) * 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
DE69029015T2 (de) * 1989-07-20 1998-01-22 Tadamitsu Kishimoto Antikörper gegen menschlichen Interleukin-6-Rezeptor
JPH03155795A (ja) * 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
JP3045172B2 (ja) * 1990-05-19 2000-05-29 岸本 忠三 Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット
JP3212597B2 (ja) * 1990-08-01 2001-09-25 忠三 岸本 ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット
JPH04187645A (ja) * 1990-11-22 1992-07-06 Chuzo Kishimoto インターロイキン―６作用抑制剤
JPH05227970A (ja) * 1992-02-19 1993-09-07 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体
AU668349B2 (en) * 1991-04-25 1996-05-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor
JP3258348B2 (ja) * 1991-08-02 2002-02-18 東ソー株式会社 Ｈｉｖ感染阻害剤
FR2694767B1 (fr) * 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
EP0672118B1 (en) * 1992-08-21 2002-03-13 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES A novel b-lymphoma cell line and antigen
JP3525221B2 (ja) * 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888510A (en) * 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US5759546A (en) * 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
ATE330629T1 (de) * 1995-02-13 2006-07-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Inhibitor des muskelproteinabbaus enthaltend einen il-6 rezeptor antikörper
US20020187150A1 (en) * 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
CN101239185A (zh) * 1998-03-17 2008-08-13 中外制药株式会社 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂
JP4889187B2 (ja) * 2000-10-27 2012-03-07 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する血中ｍｍｐ−３濃度低下剤
UA80091C2 (en) * 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
BR0309200A (pt) * 2002-04-12 2005-02-22 Pfizer Uso de ligandos receptores ep4 no tratamento de doenças envolvidas com a il-6
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases

Also Published As

Publication number Publication date
HU0304064D0 (en) 2004-03-01
CN1164194A (zh) 1997-11-05
WO1996012503A1 (fr) 1996-05-02
EP2319535A3 (en) 2011-08-31
JP2008297315A (ja) 2008-12-11
NO971816D0 (no) 1997-04-18
CZ298790B6 (cs) 2008-01-30
EP0791359A1 (en) 1997-08-27
EP1884524A3 (en) 2008-06-25
NO330589B1 (no) 2011-05-23
FI971669A0 (fi) 1997-04-18
CZ298325B6 (cs) 2007-08-29
CN100350973C (zh) 2007-11-28
NO330588B1 (no) 2011-05-23
CN1535728A (zh) 2004-10-13
FI121455B (fi) 2010-11-30
CN101011574A (zh) 2007-08-08
NO20073429L (no) 1997-06-18
AU3709995A (en) 1996-05-15
EP0791359A4 (en) 2002-09-11
PL319785A1 (en) 1997-08-18
FI971669A (fi) 1997-06-17
RU2147442C1 (ru) 2000-04-20
NO324046B1 (no) 2007-08-06
CN1306963C (zh) 2007-03-28
US20070036785A1 (en) 2007-02-15
CN101011574B (zh) 2012-10-03
PL182089B1 (en) 2001-11-30
EP2319535A2 (en) 2011-05-11
FI20115753A (fi) 2011-07-15
NO330615B1 (no) 2011-05-30
NO20073427L (no) 1997-06-18
HUT77035A (hu) 1998-03-02
FI122406B (fi) 2012-01-13
JP4896093B2 (ja) 2012-03-14
HK1067062A1 (en) 2005-04-01
CN101829325A (zh) 2010-09-15
NO20073431L (no) 1997-06-18
NO330582B1 (no) 2011-05-16
EP1884524A2 (en) 2008-02-06
NO20073432L (no) 1997-06-18
CA2203182A1 (en) 1996-05-02
FI122970B (fi) 2012-09-14
NO971816L (no) 1997-06-18
NO331944B1 (no) 2012-05-07
CA2203182C (en) 2009-11-24
NO20073430L (no) 1997-06-18
FI20105844A (fi) 2010-08-11
AU689657B2 (en) 1998-04-02
HU225392B1 (en) 2006-11-28
CZ296979B6 (cs) 2006-08-16
HU227708B1 (en) 2011-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ118997A3 (en) Pharmaceutical preparation for treating diseases caused by il-6 production
RU2147443C1 (ru) Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента
CA2211578C (en) Muscle protein proteolysis inhibiting agent containing il-6 receptor antibody
Mihara et al. IL‐6 receptor blockage inhibits the onset of autoimmune kidney disease in NZB/W F1 mice
EP2298332B1 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of the B-cell response
US9545086B2 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of B-cell response and treatment of autoimmune disorders
US20100233179A1 (en) BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of B-cell response
US20110223130A1 (en) USES OF IL-174 ANTAGONISTS FOR INHIBITING A Th2 IMMUNE RESPONSE
JP3827350B2 (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤
JP2004224801A (ja) Ｉｌ−６産生に起因する疾患の治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20131020