CS204988B2 - Process for preparing cephalosporine antibiotics - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu výroby antibiotik cefalosporinové řady.

Tyto sloučeniny jsou v průběhu přihlášky pojmenovány podle nomenklatury a po' užitím zkratky „cefam“ podle J. Am. Chem.

Soc., 1962, 84, 3400, přičemž termín „cefem“ se vztahuje na zálkadní cefamovou strukturu s jednou dvojnou vazbou.

Je známa řada cefalosporinových sloučenin s různým stupněm antibakteriální účinnosti, přičemž tyto sloučeniny mají dvoj« nou vazbu v poloze 3 a obvykle jsou v poloze 3 substituovány methylovou skupinou j nebo ' substituovanou methylovou skupinu a ‘i v poloze 7β acylamidovou skupinou. Je dob> ře známo, že antibiotické vlastnosti určitých kyselin 3-cefem-4-karboxylových jsou převážně určovány povahou substituentů v poloze 7β a v poloze 3. Byly vyvíjeny snahy nalézt vhodné kombinace těchto skupin, které by dávaly vznik sloučeninám s dobrými antibiotickými vlastnostmi.

Cefalosporinová antibiotika mají široké použití u lidí i u zvířat, například při léčbě onemocnění, která jsou způsobena bakteriemi, odolnými k jiným antibiotikům, například penicilinovým sloučeninám a k léčbě nemocných, přecitlivělých na penicilín. Často je žádoucí užít cefalosporin, účinný proti grampozitivním i gramnegativním mikroorganismům, přičemž je stále nutno nalézat cefalosporinové antibiotika s širším a širším spektrem.

Praktické použití řady cefalosporinových antibiotik je omezeno poměrně vysokou citlivostí na J-aktamázy různých bakterií. Žádoucí vlastností š ’ rokospe-ktrých antibiotik proto je, aby byly podstatně . resistentní vůči (3-aktamázám, včetně /3-aktamáz' produkovaných gram-negativními mikroorganismy. Další nevýhodou cefalosporinových antibiotik je, že podléhají rozkladu in vivo. Řada známých antibiotik tohoto typu je deaktivována tímto způsobem, často velmi rychle, převážně působením enzymů, například esteráz lidského nebo živočišného organismu.

Bylo zjištěno, že určitá skupina antibiotik se zvláštní kombinací 7/3acylaminoskupin a substituentu v poloze 3 . má široké spektrum účinnosti a . zároveň velkou stálost proti β-laktamázám i dobrou stálost v organismu. Tyto sloučeniny mají jako 7β-acylamidovou skupinu 2-aryÍ-2-(etherifikovaná oxyiminotkupincjayetcmidoskupinu, která se nachází v podstatě ve formě syn-isomeru, přičemž v poloze 3 se nachází karbamoyloxymethylová skupina.

Vynálezem je tedy způsob výroby cefalosporinových antibiotik obecného vzorce . I

Μ w ďc -CO/VW-j--f °

A , D-ⁿ CHO.CO.NR o * *

COORA (I) kde

R¹ znamená furyl, thienyl nebo fenyl,

R² znamená Ci až Cá alkyl, Сз až C7-cykloalkyl nebo, fenyl a

Ra znamená vodík nebo esterotvornou skupinu poskytující fyziologicky neškodné estery, ve formě syndsomeru nebo ve směsí syn-isomeru a anti-isomeru s obsahem alespoň 90 % syn-isomeru, a jejich fyziologicky neškodných solí odvozených v případě, že Ra značí vodík; nejvýhodnějšími sloučeninami obecného vzorce I jsou , syn-isomery, v podstatě prosté odpovídajících anti-isomerů.

Podstata způsobu podle vynálezu spočívá v tom, že se za teploty —50 až 4-50 °C kondenzuje sloučenina obecného vzorce II

kde

B.',' znamená =S nebo —S -> O, ' R¹¹ znamená vodík nebo skupinu, chránící karboxylovou skupinu, jako například d-fcnylmethyl nebo terc.butyl,

Ř!2 znamená ' vodík nebo . . N-ochrannou skupinu, ' jako . například mono-, , di- nebo tri-chloracetyl nebo chlorsulfonyl a přerušovaná · čára (--- —} mezi polohami 2, , 3 ' a 4 znamená, že ' může jít o 2-cefemovou ' nebo 3-cefemovou sloučeninu, nebo adiční sůl kyseliny s touto sloučeninou, , nebo N-sílylový derivát této .sloučeniny, s . acylačním . činidlem, odpovídajícím kyselině obecného vzorce III

..... Ri.C.COÚH

II.

N

A.-. \

OR2 (III), kde

R1 a . R2 mají syrchu uvedený význam, nu na odpovídající sulfid a posléze se izoluje sloučenina obecného' vzorce I, popřípadě po oddělení syn-isomeru a anti-isomeru, a popřípadě po . převedení sloučeniny obecného vzorce I, na její 1-oxid (v případech, jestliže ve vzorci I Ra značí vodík], nebo na její fyziologicky neškodné soli nebo estery.

Způsob podle vynálezu lze provádět tak, že se sloučenina obecného vzorce I nebo fyziologicky neškodná sůl sloučeniny obecného vzorce I, kde Ra značí vodík nebo její 1-oxid izoluje ve formě syn-isomeru, prostého anti-isomeru.

Jiné provedení způsobu podle vynálezu může být takové, že se sloučenina obecného . vzorce II, kde B, R11, R¹² a přerušovaná čára má význam uvedený v .bodě 1 kondenzuje s halogenidem kyseliny obecného vzorce III, kde R1 a R2 mají tamtéž udaný význam.

Tento způsob lze provádět také tak, že se kondenzace provádí za přítomnosti činidla, které váže kyselinu, a to ze skupiny zahrnující terciární aminy, anorganické zásady nebo oxirany.

Sloučeninu obecného vzorce II, kde B, Ru, r¹² a přerušovaná čára mají význam jako v bodě 1 je možno kondenzovat s volnou kyselinou vzorce III za přítomnosti kondenzačního činidla ze skupiny karbodiimidu, karbonyldiimidazolu nebo isoxazoliniových solí.

Výhodnou sloučeninu obecného vzorce I, kde R¹ znamená 2-furyl lze vyrobit, vyjde-li z odpovídající sloučeniny obecného vzorce III, tj. takové, kde R¹ ve vzorci III znamená 2-furyl.

Způsobem podle vynálezu lze vyrábět výhodné sloučeniny obecného vzorce I,· kde R2 znamená. methyl, ethyl, terc.butyl, · cyklopentyl nebo fenyl, a · to tak, že · se jako výchozí sloučeniny používá sloučeniny obecného vzorce III, kde ,R2 má výše uvedený význam.

Sloučeniny podle vynálezu · se nacházejí v syn(cis)-isomerní formě vzhledem ke konfiguraci skupiny OR2 . ke . karboxamidoskupině. V popise tohoto vynálezu je tedy konfigurace syn strukturně znázorňována takto:

Ri.C.CONH—

N

OR²

Konfigurace syn je znázorněna podle práce, . kterou publikovali Ahmad a Spenser , v časopise Can. J. Chem., 1961, 39, 1340.

Solemi sloučenin obecného vzorce I mohou být soli s anorganickými zásadami, například alkalickými kovy, jako sodíkem a draslíkem, kovy alkalických zemin, jako vápníkem nebo. soli s organickými zásadami jako . prokainem, . fenylethylbenzylaminem, dibenzylethylendiaminem, ethanolaminem, diethanolaminem, triethanolaminem a N-mea převede se libovolný A²-isomer na žádaný A3-isomer a/nebo se odstraní skupina blokující karboxyl nebo N-ochranná skupina a/nebo se redukuje sulfoxid cefalospori204988 thylglukozaminem. Soli mohou být také ve formě resinátů, například s polystyrénovou pryskyřicí nebo kopolymerem polystyrenu a divinylbenzenu s příčnými můstky a s obsahem aminoskupin nebo kvartérních aminoskupin.

V případě, že R¹ ve vzorci I znamená furyl, může jít o 2-furyl nebo 3-furyl, v případě, že jde o thienyl, může jít o 2-thienyl nebo 3-thienyl. Výhodným významem R1 je 2-furyl.

Jak již bylo uvedeno, znamená substituent R2 ve vzorci I alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, například methyl, ethyl nebo terc.butyl, cyklo^!alkyl o 3 až 7 atomech uhlíku, například cyklopentyl, nebo fenyl.

Sloučeniny podle vynálezu mají cenné vlastnosti, a to vysokou účinnost proti velkému množství grampozitivních a gramnegativních mikroorganismů a současně vysokou stálost proti /3-aktamázám různých gramnegativních organismů a dobrou stálost in vivo, zejména v případě působení esteráz.

Sloučeniny podle vynálezu je možné výhodně užít k léčbě různých onemocnění lidí i zvířat, způsobených bakteriemi.

Důležitou sloučeninou podle vynálezu je kyselina (6R,7R )-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- [ 2- - ury 1) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylová ve formě syn-isomeru, kterou lze vyjádřit obecným vzorcem IV

COOH (!V) obvykle ve formě soli s alkalickým kovem, zejména ve formě sodné soli. Tato sloučenina je účinná k velké řadě gramnegativních a grampozitivních mikroorganismů, například Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes a Streptococcus vilidans, Diplococcus pneuminiae, Haemophilus influenzae, Neisseria a Clostridia species, Escherichia coli, Klebsiella, Próteus a Enterobacter species, jak bylo prokázáno in vitro i in vivo. Sloučenina má in vitro vysokou účinnost zejména proti Haemopbilus inRuenzae, Neisseria gonorrhoeae a Neisseria meningitidis. Sloučenina je velmi stálá proti β-laktamázám řady gramnegativních organismů, jak bylo prokázáno například in vitro proti enzymům různých kmenů Escherichia, Enterobacter a Klebsiella. Sloučenina je odolná k působení esteráz savců a tedy stálá v lidských i v živočišných organismech, jak je možno prokázat vysokou hladinou nezměněné sloučeniny v moči. Mimoto dochází ke vzniku vysokých hladin těchto sloučenin v séru po parenterálním podání u lidí i u zvířat, přičemž sloučenina se málo váže na sérum.

Užití vysoce rozpustných zásaditých solí, například sodných solí je výhodné, protože tyto soli se velmi rychle rozmístí po celém těle po podání.

Bylo zjištěno, že sodná sůl, (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (2-furyl J -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylát sodný ve formě syn-isomeru se vyskytuje v celé řadě různých krystalických forem, včetně solvátů, přičemž všechny tyto soli spadají do oboru vynálezu.

Sodná sůl se obvykle vyrábí tak, že se roztok sloučeniny obecného vzorce IV uvede v reakci v polárním rozpouštědle, jako dimethylacetamidu, ve směsi těchto rozpouštědel, jako ve směsi dimethylacetamidu a acetonu nebo dimethylamidu a formamidu nebo v polárních směsích vody a organických rozpouštědel, například ve směsi vody a acetonu s malým molárním přebytkem 2-ethylhexanoátu sodného, a to ve formě roztoku ve vodném organickém rozpouštědle, například v alkanolu jako ethanolu, v ketonu jako acetonu, v chlorovaném uhlovodíku jako methylenchloridu, v esteru, jako například ethylacetátu nebo v etheru, jako například dioxanu, obvykle při teplotě místnosti a vysrážená sůl se oddělí po případném zchlazení roztoku například na 4 °C.

V případě, že se užije v podstatě bezvodých rozpouštědel, získá se forma I (6R,7R) -3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (2-

-f uryl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu sodného ve formě syn-itomeru. Tento materiál obsahuje ' přibližně 1,5 % vody. V případě, že rozpouštědlo obsahuje více než 2 % vody, Je výsledkem reakce sůl formy II, která také obsahuje přibližně 2'% vody. V případě, že rozpouštědlo obsahuje více než 60 % dioxanu, získá se sůl formy III, tento materiál je solvátem dioxanu s . obsahem přibližně 1 molu dioxanu. Formu II Je možno získat také tak, že se užije rozpouštědla s obsahem vody při teplotě 60 až ' 80 °C. Krystalizací téže sloučeniny z lyofiiízované formy v příslušném bezvodém, vodu obsahujícím nebo dioxan obsahujícím rozpouštědle Je rovněž možno získat formu I, II nebo III.

V případě, že se forma I vystaví působení vodních par, například při relativní vlhkosti 75 °/o, absorbuje sůl další množství vody a její krystalická forma se mění na formu IV, která obsahuje přibližně 4 ¹ % vody, tj. přibližně 1 mol a jde tedy pravděpodobně o hydrát. Tato forma je reverzibilní, takže formu IV Je možno převést zpět na formu I například sušením ve vakuu kysličníkem fosforečným. Forma II neabsorbuje další množství vody, lze Ji však převést na formu I zahříváním suspenze formy II ve vroucím methanolu.

Formu III ie možno vysrážet ve formě gelu, který Je pak možno sušit ve vakuu, čímž se získá pevná látka, která má velmi vysokou hustotu, je velmi málo krystalická ne204988 bo je amorfní. Krystalickou formu III je však možno také získat tak, že se na vodný roztok sodné soli působí velkým přebytkem (například 8 objemů) dioxanu, popřípadě za přítomnosti malého množství ethanolu a pak se oddělí výsledné bílé jehličkovité krystalky po případném zchlazení na 4 °C, po promytí produktu dioxanem a tyto krystaly še suší například ve vakuu při 20 °C.

Forma III je hygroskopická a při vystavení vlivu vodních par například při vlhkosti 75 °/o ztrácí tato forma dloxan a mění se na formu IV, kterou je pak možno sušit, například kysličníkem fosforečným na formu I. V případě, že se tímto způsobem zpracovává krystalická forma III, krystalická forma se nemění. Formu III je možno převést na formu I zahříváním v horkém methano lu, pak dojde ke ztrátě krystalické formy v případě, že forma III byla v této krystalické formě užita.

Čtyři formy sodné soli (6R,7R)-3-karbamoy loxymethyl-7- [ 2- (2-f ury 1) -2-methoxyiminoacetamido j -3-cef em-4-karboxylátu (sýn-isomer), tak jak byly svrchu popsány, byly charakterizovány v rtg záření ve formě prášku (d-vzdálenosti a intenzity] a spektrem v infračerveném světle:

Rentgenoskopické hodnoty práškových vzorků

Kamera: Debye-Scherrer, rádius 114,6 mm záření: měď K_o = 1,5418 10“¹⁰ m intenzita (I) při vizuálním srovnání s kalibrovaným standardem

Forma I
d	I	d	I
8,33	80	3,05	4
7,44	4	2,93	14 (široký)
6,85	45	2,72	8 (špatně oddělený)
6,38	5	2,69	10 (špatně oddělený)
5,86	4	2,57	9
5,36	4	2,47	6
4,82	100	2,40	10
4,56	35	2,35	10
4,36	6	2,26	4
4,19	40	2,20	3
3,95	26	2,11	8 (široký)
3,82	24	2,04	3
3,62	28	1,94	4
3,47	28	1,89	5
3,32	10	1,82	6 (široký)
3,19	10	1,77	2
Forma II
d	I	d	I
8,7»	60	3,49	14
7,81	9	3,07	6 (široký)
6,65	25	2,91	8
4,68	100 (široký)	2,77	6
4,45	10	2,32	3 (široký)
4,20	10	2,19	2
3,76	20 (široký)	2,08	2
Forma III
d	I	d	I
14,98	60	4,29	20
12,95	40	4,16	100
10,16	20	3,81	25 (široký)
8,23	45	3,60	20
7,52	5	3,47	5
6,61	65	3,32	10
6,08	3	3,26	30
5,57	20	3,13	17 (široký)
4,98	40	2,43	10
4,73	60	2,15	15

Forma IV

d	I	d	I
8,85	70	3,75	35
7,80	6	3,10	1
7,15	25	2,93	4
6,01	20	2,76	12
5,06	18	2,62	1
4,65	100	2,41	2
4,30	25	2,30	3
4,01	25
IR spektrum		4000—650 cnr	1 spektra zaznamenána
		jolovém mulu	(pruhy pro nu jol byly
Spektrometr —	Perkin-Elmer 521, oblast	Ceny)
Forma I
3520 w	+1590 s	1262 m	1004 m
3460 m	1556 m	1248 m	978 m
3370 m	1534 s	1170 m	918 w
3265 s	1480 m	1152 m	882 s
1770 sh	1410 s	1134 w	878 sh
1752 s	1400 s	1112 m	838 w
1706 s	1338 s	1076 m	814 w
1660 s	1328 s	1054 sh	790 w
1620 s	1284 m	+1042 s	778 w
			754 m
Forma II
3526 m	1544 m	1152 m	920 m
3492 w	1478 m	1142 m	882 m
+3364 m	1412 S	1112 m	878 w
3250 m	1398 s	1080 m	840 w
1758 s	1332 s	1058 m	818 w
1695 s	1284 m	+1045 m	792 w
1665 s	1268 m	1005 m	752 m
1642 sh	1240 m	980 m
1624 s	1172 m	954 w
Forma III
3465 m	1532 s	1155 m	820 w
3415 m	1482 m	+1124 s	800 w
3345 m	1412 s	1078 m	790 w
3275 m	1395 s	+1058 s	768 m
3200 m	1326 s	1048 s	748 m
1780 s	1285 m	1014 m
1702 s	1260 m	985 m
1660 s	1230 m	938 w
1632 m	1225 m	888 m
1618 s	1196 w	878 s
1552 m	1180 m	836 w

Forma IV

3585 w	1594 s	1264 m	1008 m	788 w
3520 w	1555 m	1240 m	980 m .....	752· ·, m
3370 m	1540 m	1172 w	956 w
+3260 s	1478 m	1152 m	920 w
1758 s	1410 s	1114 w	882 m
1712 s	1400 d	1078 m	878 · w
1664 s	1330 s	1058 m	838 w
1620 s	1285 m	' 1042 m	818' w	1 · · · · ··

Vysvětlivky s = silný sh^! =? 'hťb m = střední w = slabý 4- — pruhy, charakteristické pro určitou krystalickou formu

V případě, že , sloučenina I má být pro „některé použití přítomna ve formě nerozpustné soli, je možno ,, tuto sůl připravit běžným způsobem, například reakcí s příslušným aminem. .

Ve výše uvedené sloučenině obecného vzorce II

R11 znamená atom vodíku nebo skupinu, chránící karboxyl, jako zbytek alifatického nebo aralifatického alkoholu, tvořícího ester, fenolu, silanolu nebo stannanolu nebo symetrickou nebo smíšenou anhydridovou skupinu, odvozenou od příslušné kyseliny, zatímco

R12 znamená atom vodíku nebo N-ochrartnou skupinu, například acyl, zejména nižší alkanoyl jako acetyl nebo halogenem substituovaný nižší alkanoyl jako monochloracetyl, dichloracetyl, trichloracetyl nebo chlorsulfonyl.

Sloučenina obecného vzorce II může být používána popřípadě ve formě derivátu této sloučeniny, například adiční soli a anorganickou kyselinou, jako kyselinou chlorovodíkovou, brotňovodíkovou, sírovou, dusičnou nebo fosforečnou nebo s organickou kyselinou, jako kyselinou methansulfonovou nebo p-toluensulfonovou nebo jako N-silylový derivát.

Výše , uvedené fyziologicky neškodné deriváty karboxylových kyselin obecného vzorce, I, tj. v případě, že R^a znamená vodík, je možno vyrobit jakýmkoli známým způsobem. Soli se zásadami je možno vytvořit například reakcí cefalosporinové kyseliny s 2ethylhexanoátem sodným nebo draselným. Biologicky přijatelné estery je možno získat použitím běžných esterifikačních činidel. 1-Odidy je možno získat tak, že se na odpovídající sulfidy působí oxidačním čininidlem, například perkyselinou jako kyselinou metajodistou, peroctovou, monoperftalovou nebo· n-chlorperbenzoovou, terč, butylhypochloridem, například za přítomnosti slabé zásady jako pyridinu.

Sloučeniny obecného vzorce I je · možno vyrobit kondenzací sloučeniny vzorce II s acylačním činidlem, obsahujícím halogenid kyseliny, například chlorid nebo „ , bromid, acylace se provádí při teplotě ,—50 .až +50 st. Celsia, s výhodou —20 až +30°C.ve. vodném nebo nevo.dném prostředí. ,

Acyláce halogenidem kyseliny je, možno provádět za přítomnosti činidla, které , váže kyselinu, ,,, například terciárního ,, činidla, které váže kyselinu, například , terciárního aminu, jako triethylaminu nebo dimethylamlnu, za přítomnosti anorganickénzásady jako uhličitanu vápenatého nebo hydrogenuhličitanu sodného nebo za přítomnosti oxiranu, s výhodou nižšího 1,2-alkylenoxidu jako ethylenoxidu nebo propylenoexidu, který váže halogenid vodíku, který se· uvolňuje při acylaci.

Volnou kyselinu vzorce III je také možno užít jako acylačního činidla. Acylace tohoto typu se obvykle provádí za přítomnosti karbodiimidu; jako N,N‘-diethylkarbo'diimidu, N,N‘-dipropylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodiimidu, N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu nebo N-ethyl-N‘-dimethylaminopropylkarbodiimidú, za přítomnosti karbonylové sloučeniny jako · karbonyldiimidažolu, „nebo za přítomnosti isoxazoliniové soli ' jako N-ethyl-5-fenylisoxazolinium-3‘-sulfonátu nebo N-terc.butyl-5-methylisoxazoliniumperchlorátu. Kondenzace se obvykle provádí v bezvodém rěakčním prostředí, jako · methylenchloridu, dimethylformamidu nebo acetonitrilu.

Acylaci je možno provádět také s jinými deriváty kyseliny obecného vzorce III, „ které tvoří amidy, například se symetrickým anhydridem nebo smíšeným anhydridem, například s · anhydridem kyseliny pívalové nebo s halogenmravenčanem, , například nižším , alkylhalogenmravenčanem. Smíšené nebo symetrické anhydridy se obvykle připravují přímo v · reakční směsi. Je například možno vyrobit smíšený anhydrid použitím N-ethoxvkarbonvl-2-ethoxv-l,2-dihydrochinolinu. Smíšené anhydridy je možno tvořit také z kyselin fosforu, například fosforečné nebo fosforité, s kyselinou sírovou nebo alifatickými nebo aromatickými sulfono

14 vými kyselinami, jako je kyselina p-toluensulfonová.

Chránící skupinou substituující 4-karboxylovou skupinu slouCenin vzorce II je vhodně skupina, kterou je možno snadno odštěpit po acylaci, což je s výhodou skupina' o.. 1 až 20 atomech uhlíku. Vhodné chránící skupiny jsou dobře známy; jsou například. uvedeny ve výše uvedeném belgickém patentním spisu C. . 783 449. Výhodnými skupinami jsou například nižší arylalkoxykarbonylové skupiny jako p-methoxybenzyloxykarhonylová,. p-mtrobenzyloxykarbonylová a. difenylmethoxykarbonylová, nižší alkoxykarbonylové skupiny jako terc.butoxykarbonylová a nižší halogenalkoxykarbonylové skupiny, jako 2,2,24rrchloreihoxykarbonylová skupina. Tuto skupinu je pak možno odstranit známým způsobem, například kyselou, zásaditou nebo enzymaticky katalyzovanou hydrolýzou.

V případě, že se na konci reakce získá sulfoxid slouCeniny - - obecného vzorce I, - je možno provést reakci . na odpovídající sulfid například tak, že se redukuje odpovídající acyloxysulfoniová sůl nebo . alkyloxysulfoniová sůl, připravená přímo v reakCni směsi reakcí například s acetylchloridem v případě acetoxysulfoniové soli, přiCemž tato redukce se provádí- například dithionidem sodíku nebo jodidovým iontem, například roztokem jodidu draselného v rozpouštědle, mísitelném s vodou, jako jsou kyselina octová, -tetrahydrofuran, dioxan, dimethylformamid nebo dimethylacetamid. Reakce se provádí při teplotě —20 až -|-50 °C.

V případě, že reakCním produktem je ester kyseliny 2-cefem-4-karboxylové, je možno získat žádanou 3-cefemovou slouCeninu působením zásady.

Antibiotické' slouCeniny získané podle vynálezu - je možno zpracovávat na farmaceutické přípravky - urCené pro vhodné způsoby cesty podávání, způsobem obdobným jiným antibiotikům; ze slouCenin vyráběných podle vynálezu lze zejména zpracovávat slouCeniny obecného vzorce I nebo jejich fyziologicky neškodné soli (v případech, kde R^ř’ ve vzorci I znamená vodík] nebo 1-oxidy upravené pro používání v humánní nebo veterinární medicíně. K podávání se jich - užívá za pomoci běžných farmaceutických nosičů nebo pomocných - látek.

Antibiotika podle vynálezu mohou být pro injekCní podání v ampulích nebo ve větších nádobách s konzervaCním Cinidlem. Může jít o suspenze, roztoky nebo emulze v oleji nebo ve vodném prostředí za případnéhopoužití Cinidel, usnadňujících - vznik - suspenze, - stabilizátorů - -a/nebo dispergaCních Cinidel. ÚCinná - látka - může - mít také formu prášku, - který - se rozpouští těsně - před podáním například ve- - sterilní bezpyrogenní vodě.

Ve veterinárním lékařství může jít o přípravky pro podání - do mléCné - žlázy.

Přípravky obvykle obsahují minimálně 0,1 proC., například 0,1 až 99 %, s výhodou 10 až 60 % úCinné látky v závislosti na cestě podání. Jednotlivá dávka je obvykle 50 až 1500 mg úCinné látky. U dospělých se podává 500 až 4000 mg denně v závislosti - na způsobu a frekvenci podávání.

SlouCeniny podle vynálezu je také možno podávat kombinací s dalšími kompatibilními antibiotiky, například peniciliny, tetracykliny nebo jinými cefalosporiny.

Vynález bude osvětlen řadou následujících příkladů. Všechny teploty jsou uvedeny.. ve- - stupních Celsia, - . teploty - tání - byly stanoveny na Koflerově . bloku.

A) Příprava výchozích materiálů

Příprava 1 a ] Dlfenylmethyl (6R,7R )-7-(thien-2-ylacetamido) -3-trichloracetylkarbamoyloxymethyl^-cefem-á-karboxylát

13,2 g (70 mmol·- trichlotacetyiisokyanátu se přidá k míchané suspenzi difenylmethy 1 (6R,7R)-3-hydroxymethyl-7- (thien-2-ylacetamido) -3-cef em-4-karboxylátu (26,0 g, 50 mmol] v 600 ml bezvodého acetonu při 20 °C. Pevná látka se brzy rozpustí a směs jež byla- 1 hodinu při 20 °C míchána se chladí jednu hodinu a výsledná - sraženina se odfiltruje a promyje etherem, -aby vzniklo 33,1 g (93 %) výsledné slouCeniny s teplotou tání 183- až 184 °C.

[a]D21 +24° (c 0,95 v DMSO],

Λ ^EtP^H 295 nm ^- (ε 3120).

inf.

a '1' λ Ef 264 nm (ε 17 400_к

Údaje získané - infraCervenou - spektroskopií, NMR-spektroskopií a mikroanalýzou- potvrzují strukturu výsledné 'slouCeniny.

b) Sůl p-toluensuHonové kyseliny s d.ifenylmethyl- (6R,7R ] -7-allΊinilЗ-tгichlи’acetylkarbamoy^:loxyiuethylcef-3-em-4--karboxylátem '

31,0 - ml (0,384 mol]- bezvodého pyridinu se přidá k roztoku 20,0 g (96 mmol) - - chloridu fosforeCného ve 300 ml - bezvodého dichlormethanu při 3 °C. Suspenze se 10 minut míchá při 3 °C a přidá se 22,5 g (32 mim!) difenyImethyl- (6R,7R )-7-(thien--2-ylacetamido) -3-trichloracetylkarbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylátu.

Reakce probíhá za míchání asi při 2 °C po hodinu. Tmavý ' roztok se pomalu vlije do studené bezvodé' směsi 80,0 ml methanolu

a. 200,0 ml dichlormethanu, jejíž teplota je udržována pod 5 °C. Teplota roztoku se pak

1S nechá vystoupit na 23 °C a po hodinovém míchání roztoku při této teplotě se přidá 200,0 ml vody. Organická vrstva se oddělí a promyje 2 N kyselinou sírovou, vodou, roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, se suší se síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu. Vzniklý olej se rozpustí v ethylacetátu a smísí s roztokem kyseliny p-toluensulfonové v ethylacetátu. Asi 350 ml smíchaných roztoků se vlije do asi 1 litru diethyletheru a výsledná tuhá látka se odfiltruje a usuší ve vakuu, a získá 17,2 g (72 %) výsledné sloučeniny mající teplotu· varu 150 až 153 °C.

[a]n²i° +7,5° (c 0,82 v DMSO),

EtOH λ max. 278 nm (e 16 650).

a λ ?\^0Η 259 nm (ε 20 000),

Údaje získané infračervenou spektroskopií, NMR-spektroskopií a mikroanalýzou potvrzují, že struktura odpovídá výsledné sloučenině.

Odpaření filtrátu a rozmělnění zbytku s ethanolem poskytuje 3,2 g (14,2 %) nezměněného výchozího materiálu.

c) Sůl p-toluensulfonové kyseliny s difenylmethyl- (6R,7R) -7-amino-3-karbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylátem

17,2 g (22,7 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové s difenylmethyl-(6R,7R)-7-amino-3-trichloracetylkarbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylátem se rozpustí ve směsi 900,0 ml bezvodého methanolu a 45,0 ml acetylchloridu a ponechá se stát při 20 °C po ' dobu 5 hodin. Odstraněním rozpouštědla za sníženého tlaku se získá olej, který se rozpustí v dichlormethanu. Tento roztok se protřepává s vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak se promyje vodou. Přidá se 4,3 g (22,7 mmol) monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové a rozpouštědlo se ve vakuu odpaří. Zbytek se rozpustí asi ve 150 ml horkého isopropanolu a roztok se vlije do asi 600,0 ml diisopropyletheru. Vyloučená sraženina se odfiltruje a usuší ve vakuu, aby vzniklo 8,9 g (64 %) výsledné sloučeniny -s teplotou tání 110 až 112 st. Celsia.

Í«]d21° —14° (c, 1,0 - v CHC13),

EtOH max.

259 nm (ε 6120) a

EtOH λ 295 nm (ε 3700).

Údaje získané infračervenou spektroskopií, NMR-spektroskopií a mikroanalýzou potvrzují, že struktura odpovídá výsledné sloučenině.

Příprava 2

Sůl kyseliny p-toluensulfonové s difenylmethyl- (6R,7R) s7-aminos3skarbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylátem

Promíchaná suspenze 156,0 g (0,75 mmol) chloridu fosforečného v 1,5 litrech bezvodého dichlormethanu se chladí . na ledové lázni a působí se na ni 60,5 ml (0,75 mol) pyridinu, jež se přidává takovou rychlostí, že teplota směsi zůstane na asi 20 až 25 °C. Směs se protřepává a zchladí na 8°C a po částech se přidá 354,5 g (0,5 mol) difenylmethyl- (6R,7R) -7- (thien-2-yl) acetamido-3-trichloracetylkarbamoyloxymethyl-3-cefems4skarboxylátu během 10 minut. Směs se hodinu a třičtvrtě míchá při 8 °C a pak; se přidává po 10 minut k míchané směsi 225 ml (2,5 mmol) 1,3-butandiolu ' a - 500 ml dichlormethanu předem chlazeného ' na —20°C, takže teplota ' směsi se pohybuje v rozsahu —15 až — 20 °C. Chladicí lázeň - se odstraní a směs se míchá' při cca '—10 °C po 20 minut. Přidá se 1 litr vody a dvoufázová směs se míchá 30 minut. Vodná fáze se extrahuje dvakrát 500 ml dichlormethanu - a organická fáze se postupně promyje ' 1 litrem 2 N kyseliny chlorovodíkové, smísí se a odpaří se ' na zbytek konsistence hnědé pryže. Tato se rozpustí v 3,6 1 methanolu, tento roztok se míchá a působí se na něj 1,2 litry nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu po dobu 10 minut.

Směs se protřepá při asi 20 °C 1,5 hodiny, malé množství hnědé sraženiny se odstraní filtrací. Žlutý filtrát se koncentruje ve vakuu (teplota lázně není vyšší než 40 st. Celsia), na asi 1,5 litru a přidá se 1,5 litru vody. Vzniklá suspenze- se 1 hodinu mrazí a žlutá sraženina se odfiltruje, dobře se promyje vodou, odsaje '- se jak je to ' možné do sucha a suší ve vakuu při 40 °C po 24 hodin. Takto získaná mazlavá sraženina následovaná monohydrátem kyseliny p-toluensulfonové (81 g, 0,425 mol) se přidá k 2 litrům promíchávaného chloroformu. Po několika minutách začne krystalizovat sůl kyseliny p-toluensulfonové. V míchání se pokračuje po dalších 30 minut po nichž se odstraní azeotropicky voda ve vakuu s kontinuální náhradou chloroformu tak, aby se zachovával objem 2 litry. Suspenze se pak přes noc mrazí a výsledný produkt se odfiltruje, kal se promyje dvakrát 250 -ml chloroformu, znovu filtruje, promyje převrstvením chloroformem a suší ve vakuu při 40 °C, za vzniku výsledné sloučeniny jako 237,8 g (71,1 %) bílé krystalické pevné látky.

Amax (EtOH) 262 nm (ε 7250).

NMR-spektrum (DMSO-de) - indikuje přítomnost 0,25 mol chloroformu.

Příprava 3

Kyselina- (6R,7R) -7-amino-3-karbamoyl-. oxymethyl-3-C6fem-4-karboxylová

300,0 g (0,44 mol) soli kyseliny p-toluensulfonové s difenylmethyl-( 6R_?7R)-7-amino-3-karbanioyÍoxym6thyl-3-cefem-4-karboxylátem rozpuštěná v asi - 0,6 mol - chloroformu se po dílech v - ' - - průběhu 30, - minut přidá k promíchávané směsi 300 ml kyseliny trifluoroctové a 300 ml anisolu ponořené ve vodní lázni o teplotě 20 °C. Teplota směsi vzroste z 23 na 28 °C po prvých 20 minutách, ale vrátí se zpět na 26 °C na konci přidání. Zlatově žlutý roztok se 1 hodinu - - míchá, teplota poklesá na - 21 °C, pak se přidá k promíchávané směsi - - 1,5 - litru· . ethylacetátu a 1,5 litru vody ponořené v ledové lázni. ?

pH promíchávané směsi se upraví na 3,8 po 10 minutách roztokem. - amoniaku (specifická hmotnost 0,880), teplota se nechá vystoupit - na 38 °C. Suspenze se - míchá a- chladí na 10 °C po 1,25 hodiny a - - pak se filtruje. - Krémová sraženina se promyje - 750 - ml vody - a čtyřikrát 200 ml ethylacetátu a suší se ve vakuu. Získá se výsledná sloučenina (115,6 g, 96,2 %) A_inax (pH 6 fosfát) 265 nm (ε 7750), čistota stanovená tekutou chromatografií při vysokém tlaku 99,7 %.

Údaje získané mikroanalýzou potvrzují, že spektrum se shoduje s výslednou sloučeninou.

Příprava 4

a) Kyseiina (6R,7R)-7-(R^-benzoylamino-5-karboxypentanamido) -3-hydroxymethyl-O-cefem^-karboxylová

Promíchávaný roztok 62,0 g (asi 100 mmol) monodraselné soli kyseliny (6R,7R)-7- (R-5-amino-S-karboxypentanamidopO-hydroxymethylceO-em^-karboxylové (o čistotě asi 67 %) ve 300 ml vody se chladí na -f-5 °C a působí se na něj roztokem 17,4 ml (150 mmol) benzoylclhoridu ve 200 ml acetonu 25 minut. pH reakční směsi se udržuje na

8,2 ž- 8,5 oontrolovaýým přidáváním 30% (hmotnost:objem) vodného roztoku orthofosforečnanu draselného. Směs se míchá po dalších 10 minut v je pak převrstvena 140 ml ethylacetátu a pH se sníží na 5,6 kyselinou orthofosforečnou. Vrstvy se oddělí v vodná část se promyje přebytkem dvakrát 400 ml ethylacetátu. Vodná část se zředí 2 litry vody v převrství se 2 litry ethylacetátu v pH promíchávané směsi se upraví na 2,0 kyselinou orthofosforečnou. Vrstvy se oddělí v vodná vrstva se extrahuje s dalšími třikrát 1500 ml ethylacetátu.

Smíchané extrakty se promyjí s 800 ml nasycené solanky, suší v zahustí ve vvkuu nv objem 300 vž . -400 ml. Vzniklá sedlina se promíchá s 2 - litry etheru 20 minut v pak se- filtruje. Nashromážděná sraženina se promyje dvakrát 250 ml - etheru v vysuší ve vvkuu (133 Pa). Získá se výsledná sloučenina 54.95 g (88,6 %) jako bílý prášek. [ajo²⁰ +74° (c 1,00, dioxian), +iax (pH pufr) 231 nm • 1% (E ,_x cm 275), 266 nm - (inflexion, ^{e 1} cm ¹⁴⁵)· NMiR-^j^f^ecrum (DMSO-d6) prokazuje - - znečištění vsi 20 % laktonu v asi 0,4 mol ethylacetátu.

b) Sodná sůl kyseliny (6R, 7R )-7-(R-5-b6nzoylаmino-5-kаrboxyp6átаávmido) -3-chloracetylkarbamoyloxymethylcef-3em-4-karboxylové

Nv 25,46 g sloučeniny popsané v -bodě v) se působí roztokem 9,00 g (75 mmol) chloracetylisokyanátu v 92 ml bezvodého acetonu. Výsledný roztok se míchá 25 - minut při 20 °C, pvk se zchladí na vsi 5 °C po 5 minut a působí se na něj roztokem 8,47 g - (51 mmol) 2-ethylhexaooάtem sodným v 51 ml acetonu. Krystalická suspenze se po 5 minut při 5°C míchá a . - sraženina se shromáždí filtrací, promyje 80 ml acetonu v -250 ml etheru, pak se vysuší ve vakuu (133 Pv, Získá se výsledná sloučenina (27,23 g, 107,0 hmot. %).

fajn²⁰ 4-72,0° (c 1,00, 3% vodný roztok NvHCOs), '

Amax (pH pufr) - 227 nm (E ^j 249)^,261 nm (mfl6xioo^{, E 1} % ¹⁰⁵).

NME^-^jp^e^lt^^um prokazuje znečistění vsi 35 % laktonu v asi 1,0 mol chloracetamidu.

c) Kyselina (6R,7R)-7-amino-3-chloracetylkarbvmoyloxym6thy)-3-c6f6m-4-karboxylová

Suspenze 24,77 g sloučeniny získané podle postupu popsaném v bodě b) v 320 ml suchého m6thyl6ochloridu se- chladí při míchání pod dusíkem na 10 °C. Přidá -se 17,6 ml (218,0 mmol) pyridinu, pak se dále přidá 16,8 ml (139,2 mmol) dichlormethylsila- nu a bledě hnědá suspenze se míchá při vsi 20 °C po 20 minut a pak se zchladí nv —17 st. Celsia. 10,84 g (52,0 mmol) chloridu fosforečného se přidá v směs se při —17 vž —23 °C po 2 hodiny míchá. Přidá se 6,48 ml (80 mmol) pyridinu v směs- se přidá k me204988 thanolu (104 ml + 20 ml promytí, předchlazeného na —35 °C·) takovou rychlostí, že teplota míchaného roztoku nepřekročí —10 °C. Míchanému roztoku se dovolí dosáhnout během 25 minut 4-2 °C, pak se přidá 88 ml vody a pH směsi se upraví na od 0,6 do 3,8 pomocí vodného roztoku amoniaku (specifická hmotnost 0,880).

Vzniklá dvoufázová směs obsahující precipitovanou sraženinu se po 1 hodinu mrazí a pak se filtruje. Sraženina se postupně promývá 100 ml 50%o (objemová %) směsí vody a methanolu, 80 ml methanolu a 40 ml methylenchloridu, pak se suší ve vakuu 133 Pa), a vznikne výsledná sloučenina 6,86 g (27,7 hmot. %) ve formě krémového prášku, (a]o1⁹ 4-48° (c 1,04, Me2SO), '

Amax (pH 6 pufr)

237,5 nm ₁ % (E 1 cm 149), 261,5 nm (E %

cm

145).

B) Příklady

Přiklaď 1

a) Dlfenylmethyl- (6R,7R) -3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (fur-2-yl·) -2-methoxyiminoacetamido]-3-cefem-4-karboxylát (syn-isomer)

Metoda (i)

Surová sůl difenylmethyl(6R,7R)-7-amino-3-karbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylát s kyselinou p-toluensulfonovou získaná z odpovídající 3-trichloracetylkarbamoyloxymethylsloučeniny (25,0 ' ' g, 0,33 mol) se rozpustí ve směsi ethylacetátu a vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje vodou, zbaví se vody síranem hořečnatým a odpaří se na rotační odparce za vzniku 11,5 gramu , (0,262 mol, 77 %) difenylmethyl- (6R,7R) -7-amino-3-karbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylátu ve formě pěny.

Syn-isomer , kyseliny 2-(fur-2-yl)-2-methoxyimínooctové (5,32 g, 0,312 mol) v bezvodém dichlormethanu (100 ' ml) se přidá 'k roztoku tohoto aminu v dichlormethanu (50,0 ml) chlazenému na 3 °C, za 10 , minut později následuje přidání roztoku DL-^t^j^cyklohexylkarbodiimidu (6,5 g, 0,312 mol) v 30 ml , dichlormethanu. Reakční směs se míchá v ledové lázni 45 minut během nichž vykrystalizuje sraženina (především N,N‘-dicyklohexylmočovina). Ta se odfiltruje a zahodí a filtrát ,se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, zbaví se vody, síranem hořečnatým a odpaří se do sucha. Zbytek se rozmělní s ethanolem, aby vznikl surový produkt (10,6 g), který se čistí chromatograficky na silikagelu (1 kg). Eluce 10% acetonem v dichlormethanu odstraní nepolární znečištěniny a frakce vyluhované 20% acetonem v dichlormethanu poskytují výslednou sloučeninu (4,8 ' g, 31 %), teplota tání 199 až 202 °C, (ot]d21 +14° (c, 1,0 v DMSO), λ (235 nm (ε 14 500) a

λ ^^0H 256 nm , 8820).

Infračervená a NMR- spektroskopie a mlkroanalytické údaje potvrzují strukturu výsledné sloučeniny.

Metoda (ii)

1,86 g (18,4 mmol) trimethylaminu se přidá k roztoku 3,1 g (18,4 mmol) 2-(fur-2-yl)-2-methoxyirninooctové , kyseliny (syn-isomer) ve 35 ml dichlormethanu. Po 5minutovém chlazení tohoto roztoku v ledové lázni se přidají 1,57 ml (18,4 mmol) oxalylchloridu a kapka N,N-dimethylformamidu. Po půl hodině se rozpouštědlo za sníženého tlaku odstraní a suchý zbytek se suší ve vakuu , 1 hodinu. 150 ml bezvodého etheru se přidá, ' ' aby se rozpustil předtím vytvořený , chlorid kyseliny a nerozpustný triethylaminhydrochlorid (2,5 g) se odfiltruje. Ether se odpaří v rotační odparce a olejovitý zbytek se znovu rozpustí v dichlormethanu.

8,9 g , (14,7 'mmol) soli ’ kyseliny ' p-toluensulfonové s , difenylmethyl-(6R,7RJ -7-ámino-3-karbamoyloxymethýl-3-cefem-4-karboxylátem se rozpustí v bezvodém dichlormethanu. Tento roztok se třepe s vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, promyje se vodou a zbaví se vody síranem hořečnatým. , K tomuto roztoku volného aminu se přidá dichlormethanový roztok syn-isomeru , 2-(fur-2-yl)-2-methoxyiminoace- tylchloridu a 5 ml propylenoxidu. Po 10 minutách se odfiltruje 1,1 g krystalické sraženiny,, která je vzápětí identifikována jako sůl kyseliny chlorovodíkové s difenylmethyl- (6R,7R) -7-amino-3-karbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylátem. Filtrát se promyje 2 N kyselinou sírovou, vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, zbaví se vody síranem hořečnatým a odpaří se do sucha. Získá se 2,5 g (30,5 proč.) výsledné sloučeniny podobných fyzikálních vlastností jako produkt podle svrchu uvedené metody (i).

b) Syn-isomer (6R,7Rj-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2-fur-2-y 1) -2-methoxyimino- , acetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu sodného

20,0 ml kyseliny trifluoroctové se pomalu přidá ke směsi 5 ml anisolu a 4,7 g (8 mmol) syn-isomeru difenylmethyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethy 1) -7- [ 2- (fur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu, který se chladí v ledové lázni. V příštích 10 minutách se pak baňka příležitostně protřepává, aby se zajistilo úplné rozpuštění sraženiny. · Potom se odstraní z ledové lázně a přebytek kyseliny tri^íu^c^^^c^í^i^c^^é se odstraní na rotační odparce. Rozmělněním zbytku s 5 ml ethylacetátu poskytuje 3,3 g (94 %) syn-isomeru kyseliny 6R,7R) -3-karbamoyloxymethyl-7-(2-( f ur-2-y 1) -2-methoxyiminoacetamido]-3-cefem-4-karboxylové jako tuhé látky, » která se odfiltruje a promyje diethyletherem.

Volná kyselina se rozpustí v acetonu a přidá se v lehkém přebytku 2-ethylhexa. noát sodný v acetonu (8,0 ml molárního roztoku). Po dvouhodinovém míchání reakční směsi při 0°C se 2,3 g (73 %) výsledné soli odfiltruje. Ta se kombinuje s další šarží výsledné soli (0,8 g) a čistí se promytím vodného roztoku (250 ml] etherem (2X100 ml, 1X50 ml). Vodný roztok se lyofilizuje a získá se 2,66 ' g syn-isomeru (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (fur-2-yl) -2-methoxyimínoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu sodného.

(a]o²i +73,5° (c 1,06 v DMSO), λ Ja_X ⁶ 263 nm (ε 7600)

Vmax (nujol) 3450, 3330, 3250, (NH, NH2 a H2O),

1752 (azetidin-2-on) a 1652 a 1600 cm^-1 (karboxylát), τ (Me2SO-áe) 0,24 (d, J8Hz, CONH),

2,12 (d, J2Hz, furyl, C5-H],

3,25 a 3,30 (m, furyl, C3-H a Cu-H),

3,44 (široký s, CONH2),

4,34 (dd, J 5 a 7Hz, C7-H),

4,92 (d, 3,5 Hz, Ce-H),

5,15 (q, J13Hz, C3-CH2), ' « 6,07 (s, · NOCH3) a

6,58 (q, J18Hz, C2-H2).

Analýza pro . CteHisNíNaOeS . O . 5 H2O (455,37 ] vypočteno:

42,2 % C, 3,5 % H, 12,3 %o N, 7,0 % S nalezeno :

42,0 % C, 3,8 % H, 12,1 % N, 7,2 % S

Příklad 2 ________________

Syn-isomer kyseliny (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (fur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylové

Promíchávaná směs 75 ml N,N-dímethylacetamldu se 75 ml aci^l^i^ini^jrllu, 42 ml (0,3 mol) triethylaminu a kyseliny (6R,7R]-7-amino-3-karbamoyloxymethyi-3^-^cefem-4-karboxylové (16,40 g, 0,06 mol) se ponoří do ledové lázně a přidá se 10 ml vody. Směs se míchá při 0 až 2 °C 45 minut, pevná látka se pomalu rozpouští za vzniku žlutého roztoku.

Zatím se míchaná suspenze 14,99 g (0,0072 mol) chloridu fosforečného ve 150 ml bezvodého dichíormethanu chladí na 0 °C a přidá se , N,N-dimethylacetamid (27,5 ml). Výsledný roztok se ochladí na —10 °C a přidá se 12,17 g (0,072 mol) · syn-isomeru kyseliny 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminooctové. Směs se při —10 °C míchá 15 minut a přidá se 35 , g drceného ledu. Směs se · míchá 10 minut při 0 °C, potom se nižší díchlormethanová fáze · v , průběhu 10 minut přidá k cefalosporinovému roztoku připravenému jak bylo svrchu uvedeno. Chladí se při —10 st. Celsia , tak, aby teplota reakční směsi plynule dosáhla 0 °C.

Směs se míchá při 0 až 2 °C 1 hodinu, potom se chladicí lázeň odstraní a teplota reakční směsi se nechá vystoupit během hodiny na · 20 °C. Reakční směs se pak přidá pomalu k 2 N kyselině chlorovodíkové (100 ml) ředěné chladnou , vodou (1,15 litru) při 5 °C. , pH dvojfázové směsi se upraví pod 2 N kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a směs se míchá · a znovu zchladí na 5, °C. Sraženina, která precipitovala se promyje dichlormethanem (100 ml] a , vodou (250 ml) , a suší se ve vakuu přes noc při 40 °C, aby vznikla výsledná látka (22,04 g, 86,6 procent), (ajD2° +58° (c 1,08, DMSO), Amax (pH 6 fosfátový pufr) 274 nm (ε 17 500),

Amax (nujol) 3480, 3440, 3367, 3255, a 3133 (NH a· NH2), .....

2725 a 2590 (CO2H), 1760 (azf^eii^ii^-^l-onj,

1728, 1712 a 1698 (OCONH2 a CO2H), 1655 a 1530 cm (CONH), τ (Me2SO-d6)

0,25 · (d, J8Hz, CONH),

2.18 (s, furyl Cs-H),

3,28 a 3,4 (m, furyl Cí-H a C3-H),

3,42 (s, CONH2),

4.19 (dd, J7 a 5Hz, G^-JH),

4,80 (d, J5Hz, CeH),

5,06 a 5,39 (q, J13Hz, C—CH),

6,09 (s, NOCH),

6,44 (polohované ABq, C2H2) a 7,99 [0,03 mol CHsCON^m^).

Příklad 3

a) Monohydrát monochinolinové soli kyseliny (6R,7R )-7-( R-5-benzoy lamino^-karboxypentanamíido)-3-hy droxymethy 1-3-cefem-4-karboxylové

Míchaný roztok monodraselné soli kyselí204988 ny (6R,7R )-7-( R-5-amino-5-karboxypentanamido) -3-hydroxymethyl-3-cef em-4-karboxylové (18,45 g, 30 mmol) v 93 ml vody se chladí v ledové lázni na 0 až 5 °C a působí se na něj 5,19 ml (45 mmol) roztoku benzylchioridu v 63 ml acetonu po 25 minut. pH reakční směsi se udržuje na pH

8,5 0,1 kontrolovaným přidáním 30% (hmotnost:objem) vodného roztoku . orthofosforečnanu draselného (asi 100 ml). Směs se dalších 5 minut míchá, převrství se ethylacetátem (150 ml) a . pH se pak sníží na 5,6 kyselinou orthofosforečnou. Vrstvy se oddělí a vodná část se promyje dalším ethylacetátem (2.X300 ml).

Kombinované promývací roztoky se extrahují vodou (200 ml). Smíšená vodná . část a promývací roztoky se zředí 600 ml vody, převrství 600 ml ethylacetátu a pH míchané směsi se udržuje na 2,0 kyselinou orthofosforečnou. Organická vrstva se oddělí a přidá se 10,64 ml (45 mmol) . chinolinu v ethylacetátu (25 ml) za stálého míchání, čímž vznikne bílá sraženina. Vodná část se extrahuje s . dalším ethylacetátem (3X300 ml) a ty se přidají k suspenzi obsahující chinolin. Směs se 1 hodinu míchá při .asi 18 °C a pak se zahustí ve vakuu na asi 500 ml. Přidá se 900 ml etheru za míchání a po 30 minutách se sraženina shromáždí filtrací, promyje se s 2X 200 ml etheru a suší ve . vakuu (133 Pa). Získá se výsledná sloučenina jako bílý prášek (19,20 g, 104.1 hmotnostních %) ía]o¹⁸ +78° (c 1,00, dioxan), Amax (pH 6 pufr) 258 nm (inflexe,

Údaje infračervené a NMR-spektroskopie potvrzují strukturu výsledné sloučeniny a obsah asi 15 % znečištění laktonem a stopovými množstvími etheru a ethylacetátu.

b) Monoclimoiiniová sů 1 kyseiiny (6R,7R)- (R-5-be ηχογ^^ια-δ^ν boxypentanamído) -3-trichlora cetylkarbamoyloxymetliyl-S-cefem^-karboxylové

4,24 g (ekvivalentní 7 mmol) produktu získaného svrchu popsaným způsobem se Vystaví účinku bezvodého dioxanu (100 ml) ve kterém se částečně rozpustí. K míchané směsí se přidá trichloracetylisokyanát - (2,90 ml, 24,5 mmol). Výsledný roztok se po 30 minut míchá a pak se vyčeří filtrací a odpaří se ve vakuu za vzniku žluté pěny. Ta se rozpustí v acetonu (asi 10 ml) a vlije se do 100 ml míchaného isopropyletheru. Výsledná bílá sraženina se shromáždí filtrací a usuší ve vakuu (133 Pa), a získá se výsledná sloučenina jako 6,26 g (147,8 hmotnostních %) bílého prášku. Údaje NMR-spektroskopie potvrzují strukturu výsledné látky a také ukazují přítomnost laktonu (asi 22 %), isopropyletheru (0,75 mol), dioxanu (0,2 mol) a malého množství acetonu.

c) Kyselina [6R,7R)-7-amino-3-trlchloracetylkarbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylová

Roztok 4,77 g (ekvivalentní 6 mmol) svrchu popsaného produktu v bezvodém methylenchloridu (40 ml) se pod dusíkem chladí na asi 10 °C za stálého míchání. Přidá se

2,20 ml (27,3 mincO) pyridinu, pak . se přidá díchlordimethylensilan (2,10 ml, 17,4 mmol) a hnědý roztok se míchá 20 minut při . asi 17°C a pak se chladí na —17 °C. Přidá se 1,355 g (6,5 mmol) - chloridu fosforečného a směs se dvě - hodiny míchá při asi —16 °C. Přidá se 0,81 ml (10 mmol) pyridinu a směs se přidá k methanolu (13 ml + 2,5 . ml . na promytí) předem prochlazenému na — 35 °C, takovou rychlostí, aby teplota míchaného roztoku nepřevýšila —10 °C. Promíchaný roztok se ponechá, aby dosáhl -j-9 °C v průběhu . 25 minut, pak se přidá . 11 . ml vody a pH směsi se udržuje na 0,3 až 3,8 pomocí roztoku amoniaku (specifická . hmotnost 0,880).

Vzniklá dvoufázová směs . obsahující vysráženou pevnou látku se znovu na. 1 hodinu zmrazí a pak se filtruje. Sraženina se postupně promyje s 50% (objemově) směsí vody a methanolu . (12 ml), methanolem (10 ml) a methylenchloridem . (5 . ml), pak . se suší ve vakuu (133 Pa). Získá se . výsledná slouečnina jako krémový prach (1,22 g, 25,6 % (hmot.), [a]_D +-44° (c 1,02, MezSO), Amax (pH 6 pufr) 240 nm (E ! %^u _m 133),263 nm (E %

cm

140).

Odaie NMR-spektroskopie potvrzují strukturu výsledné sloučeniny.

d) Syn-isomer kyseliny ^7^)-34:8^ bamoyloxy methy 1-7 -(2-( f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -cef-3-em-4-karboxylové

4,5 g (21,5 mmol) chloridu fosforečného se rozpustí v bezvodém nethylenchloridu (90 ml) a za míchání se chladí na —15°C. Přidá se pomalu 9 ml N,N-dimethylacetamidu, teplota se udržuje pod —10 °C a směs se míchá po 10 minut. 3,66 g (21,5 mmol) syn-isomeru 2- (fur-2-yl) -2-methoxyiminooctové kyseliny se přidá a směs se míchá při . —15 °C 15 minut, 18 g drceného ledu se přidá opatrně tak, aby teplota směsi nepřevýšila —7 °C. Směs se 10 minut míchá a organická část se oddělí a po kapkách přidá k roztoku kyseliny (6R,7R)-7-amino-3-trichloracetylkarbamoyloxynlethy--3-cefem-4-karboxylové (7,52 g, 18 mmol) v bezvodém methylenchloridu (90 ml) a na —10 st. Celsia předchlazenému triethylaminu 5,5 ml, 40 mmol).

Roztok chloridu kyseliny se přidává po 20 minut, teplota reakční směsi se udržuje me204988 zi —10 až —8 °C. Směs se pak 80 minut míchá během nichž se teplota nechá vystoupit na +3 °C a přidá se 6 ml methanolu. Po dalších 5 minutách míchám se roztok extrahuje 3% (hmotnost/objem) hydrogenuhličitanem sodným (2X200 ml) a vodou (150 ml).

Smíšené extrakty se nechají stát při asi 20 °C 3,5 hodiny a pak se promyjí ethylacetátem (100 ml) a kyselí na pH 1,5 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Vzniklý usazený olej se extrahuje do ethylacetátu (2X300 ml). Spojené organické části se promyjí vodou (2X100 ml), zbaví vody síranem horečnatým a odpaří ve vakuu, aby vznikla žlutá sraženina (7,1 g), která se rozmíchá ve 150 ml etheru, filtruje a odpaří se ve vakuu (133 Pa) a poskytne výslednou sloučeninu jako bledě žlutou tuhou látku (5,20 g, 68,2 % z teoretických), Amax (pH 6 pufr) 275 nm (^E lem ³⁸⁵)·

Údaje infračervené a NMR-spektroskopie potvrzují, že struktura se . shoduje s výslednou látkou a znečištění stopami etheru.

příklad 4

Syn-isomer kyseliny (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2-methoxyimino-2- (thien-2-yl) acetamido ] -3-cef em-4-karboxylové

Způsobem podle příkladu 2 se připraví titulní sloučenina (888 mg, 50 %) z kyseliny (6R,7R) -7-amino-3-karbamoyloxymethyl-3-cefem-4-karboxylové (1,09 g, 4 mmol) a syn-isomeru 2-methoxyimino-2- (thien-2-yl) acetátu sodného (923 mg, 4,8 mmol). Má tyto vlastnosti: teplota tání 157 až 163 °C, [a]_D2° -j- 57,3° (c 1,0 v dioxanu), Rp_At; 0,8 (viz poznámka za tabulkou č. 1). Systém rozpouštědel A (viz poznámka za tabulkou č. 1), Amax (pH 6 pufr) 262,5 nm (ε 15 550), a inflexe při 235 nm (ε 10 350), τ (DMSO-ds) 0,20 (d, J8Hz, NH),

2,29 (dd, J2 a 5Hz, thienyl OH),

2,7 až 2,9 (m, thienyl C3-H a Ci-H),

3,40 (s, CONH2),

4,13 (dd, J5 a 7Hz, C7-H),

4,75 (d, J5Hz, Ce-H),

5,01 a 5,34 (AB-q, J13Hz,

C3-CH2),

6,08 (s, NOCHs) a 6,42 (kolabovaný AB-q, C2-H2), Amax (nujol) 3700 až 2100 (CO2H), 3480, 3440, 3365 a 3255 (NH a NH2), 1760 (azetidln-2-on), 1722 (CO2H), 1709 (OCONH2) a 162 a 1530 cm·' (amid).

Příklad 5

Syn-isomer kyseliny (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (fur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ) -3-cef em-4-karboxylové

1,5 ml Ν,Ν-dimethylacetamidu se přidá k roztoku chloridu fosforečného (750,0 mg,

3,6 mmol) v bezvodém dichlormethanu (15 mililitrů) chlazenému na —10 °C. Po 10 minutách se přidá syn-isomer kyseliny 2-(fur-2-yl)-2-methoxyiminooctové (612 .. mg, 3,6 mmol) ke vzniklé suspenzi, jež se brzy stane čirým roztokem a míchá se při —10 °C 15 minut. přidají se 3 g ledu a po 10 minutách se oddělí vrstvy v dělicí nálevce. Organická fáze se pomalu (v průběhu 5 minut) . vypustí do chlazeného roztoku 1,05 g (3 mmol) kyseliny (6R,7R)-7-amino-3-chloracetylkarbamoyloxymethy--3-cefem-4-karboxylové . v 15 ml dichlormethanu obsahujícího 0,9 ml (6,5 mmol) triethylaminu. Po 40 minutách se přidá 1 ml methanolu a o 5 minut později se reakční směs extrahuje dvakrát s 3% (hmotnost/objem) vodným. roztokem hydrogenuhličitanu sodného (150 mililitrů). Vodný extrakt se promyje s ethylacetátem (25 ml) a ponechá se 4 hodiny při 20 °C. Roztok se dvakrát promyje ethylacetátem, okyselí se 2N kyselinou chlorovodíkovou a třikrát se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se zbaví vody síranem hořečnatým, odbarví se aktivním uhlím a odpaří ve vakuu, a získá se bledě žlutá tuhá látka (1,15 g, 87%). Ta se promyje diethyletherem a odfiltruje se, aby vznikla výsledná sloučenina (0,91 g, 71 procent),

T»TT O λ £ 274 nm (ε 17 300).

Infračervené a NMR-spektra produktu souhlasí se spektry autentického vzorku.

příklad 6

Forma I syn-isomeru (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ) -3-cef em-4-karboxylátu sodného

Metoda (i)

Na 100,0 g· syn-isomeru kyseliny (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7-[ 2-(f ur-2-yl)-2-methoxyiminoaceta.mido ) -3-cef em-4-karboxylové ve směsi N,N-dimethylacetamidu (400 ml) s 1 litrem acetonu se působí 40 g 2-ethylhexanoátem sodným ve 200 mililitrech acetonu. Směs se třepe při teplotě okolí po 1,25 hodiny. Produkt se odfiltruje, promyje se acetonem (500 ml) a nakonec se vysráží etherem, aby vznikla výsledná sloučenina (101,4 g, 92,5 %) obsahující po ekvilibřaci v atmosféře 0,65 molekvivalentů vody.

Produkt má [a]_D + 61° (c 0,5 pH 4,5 fosfátový pufr) a A_max 273 nm %

E _lc ^/O _m 412 (H2O).

Údaje infračervené a NMR-spektroskopie potvrzují strukturu výsledné sloučeniny a infračervené spektrum ukazuje, že sloučenina je solí formy I.

Metoda (ii)

Způsob podle metody (i) se opakuje s výjimkou, že cefalosporinové kyselina se zpo čátku rozpustí ve směsi N,N‘-dimethylaceamidu s ethanolem denaturovaný methanolem namísto směsi N,N-dimethylacetamidu s acetonem, aby vznikla výsledná sloučenina (80%) s vlastnostmi podobnými produktu získanému způsobem podle metody (i). Infračervené spektrum ukazuje, že sloučenina je solí formy I.

Metoda (iii)

4,24 g (10 mmol) syn-isomeru kyseliny (8R,7R) -3-kar bamoýloxymethyl-7- [ 2-f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylové se rozpustí v N,N-dimethylacetamidu (20 ml), který se sušil molekulárním sítem (Linde 4A) po 24 hodin. К němu se přidá roztok 2-ethylhexanoátu sodného (2,0 g, 12 mmol, rekrystalizoVaného z dioxanu a sušeného nad kysličníkem fosforečným) v ethylacetátu (80 ml), který byl zbaven vody molekulárním sítem (Linde 4A) sušením po 24 hodin. Roztok se v uzavřené nádobě promíchává asi 15 minut, dokud nezačne krystalizace a pak se při 4 °C jednu hodinu chladí. Produkt se odfiltruje, promyje bezvodým ethylacetátem (asi 100 ml) a pokud je ještě vlhký rozpouštědly se přenese do sušárny a při 20 °C se suší ve vakuu nad kysličníkem fosforečným přes noc a tak se získá výsledná sloučenina (3,89 g, 87 %).

Infračervená a NMR-spektra produktu souhlasí se spektry autentického vzorku.

Příklad 7

Forma II syn-isomeru (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-y 1) -2-methoxylminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu sodného

Metoda (i)

0,2 g aktivního uhlí se přidá к roztoku syn-isomeru kyseliny (6R,7R]-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-y 1) -2-methoxyiminoacetamido ] cef-3-em-4-karboxylové (4,00 g, 9,42 mmol) ve směsi 132 ml acetonu a 1,33 ml vody. Suspenze se 30 minut míchá a filtruje přes vrstvu infusoríové hlinky, filtrační vrstva še promyje 10 ml acetonu. Filtrovaný roztok 2-ethylhexanoátu sodného (1,66 g, 10 mmol) v acetonu (20,0 mililitrů) se po hodině přidá к míchanému filtrátu. Výsledná suspenze se míchá dalších 10 minut a bílá sraženina se odfiltruje, promyje acetonem (2X 25 ml) a suší ve vakuu. Získá se výsledná sloučenina (4,06 g, 93,0%) [«]_D ²® + 60° (c 0,91, H2O), A_max (H2O) 274 nm (ε 17 400), [nalezeno %:

C: 41,0, 41,2, H: 3,45, 3,6, N: 12,3, 12,4, Na: 5,2, S: 6,6, 6,85, H2O: 2,7, 2,7,

Ci6Hi5N4NaO8S . 0,7 H O (459,0) vyžaduje %:

C: 41,8, H: 3,6, N: 12,2, Na: 5,0, S: 7,0, H2O: 2,7], čistota pomocí HPLC 99,4 %.

NMR-spektrum výsledné sloučeniny odpovídalo autentickému vzorku a infračervené spektrum indikovalo, že produkt je formou II soli antibiotika.

Metoda [ii]

Syn-isomer kyseliny (6R,7R]-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyimlnoacetamtdo ] -3-cef em-4-karboxylové (16,98 g, 40 mmol) se přidá к promíchávané směsi 333 ml acetonu a 8,5 ml vody. Po působení aktivním uhlím a filtrací tohoto roztoku se pomalu během hodiny přidá 2-ethylhexanoát sodný (7,32 g, 44 mol) v acetonu (85 ml). Reakční směs se míchá 15 minut, filtruje se a produkt se promyje acetonem 2X 65 ml) a suší ve vakuu při 20° Celsia přes noc. Získá se výsledná sloučenina (17,95 g, 98,5 %) obsahující 0,5 mol H2O. NMR-spektrum produktu je shodné se spektrem autentického vzorku, infračervené spektrum indikuje, že produkt je solí formy

II.

Příklad 8

Forma III syn-isomeru (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-y 1) -2-methoxyiminoacetamido]-3-cefem-4-karboxylátu sodného

4,0 g syn-isomeru (6R,7R)-3-kar bamoyloxymethyl-7- [ 2- (fur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ]-3-cefem-4-karboxylátu sodného se rozpustí ve 20,0 ml vody. 20 ml průmyslového methylalkoholu a 160 ml dioxanu se přidáš roztok se filtruje a pak se ponechá při 4 °C vykrystalizovat. Velmi bílé, jehlovité krystalky se odfiltrují, promyjí 100 ml dioxanu a pokud jsou ještě dioxanem zavlhlé se přenesou do sušárny a suší se při 20 °C ve vakuu pres noc. Získá se vý sledná sloučenina (3,96 g, 78,5%). Infračervené a NMR-^:spektrum produktu odpovídají spektrům autentického vzorku.

Příklad 9

Forma IV syn-isomer (6R,7R)-3-karbámoyloxymethyl-7-[ 2- (fur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylátu sodného

Vzorky formy I a formy III syn-isomeru 3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylátu sodného připravené podle metody (iii) příkladu 6 a 8 se ponechaly zvlhnout (na 75%o relativní vlhkosti), čímž ’ vznikla výsledná sloučenina. Infračervená a NMR-spektra produktů souhlasila s autentickým vzorkem. Stanovení vody podle Karl Fischera dává 4,0 respektive 3,85 % (1 mol H2O je ekvivalentní 3,9%).

Příklad 10

a) Syn-isomer terc.-butyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylátu

Suspenze 4,4 g syn-isomeru kyseliny (6R,7R) -3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylové ve 200 ml bezvodého methylenchloridu se vystaví účinku 6,6 ml O-terc.butyl-N,N‘-dicyk.lohexylisomočoviny, aby se vytvořil bledě žlutý roztok. . Po 24 hodinách při 23 °C, výchozí materiál zůstává a přidá se ještě 3,3 ml isomočoviny. Po 48 hodinách se směs filtruje a filtrát za sníženého tlaku se odpaří. Výsledný materiál se rozmíchá se směsí etheru a ethylacetátu, aby se odstranila zbývající dicyklohexylmočovina. Filtrát se promyje nasyceným vodným roztokem -hydrogenuhličitanu sodného a vodou, pak se suší a odpaří, a vznikne pěna (5,2 g). Cliromatog^rafií na sílikagelu se směsí toluen : ethylacetát v poměru 2 : 1 jako rozpouštědlem se získá výsledná sloučenina (3,9 g) jako bledě žlutá· pěna, Amax (ethanoí) 275,5 nm (ε 18 400).

b) Syn-isomer terc.butyl-(lR,6R,7R)-3-karbamoyloxy methyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) ] -2-methoxyiminoacetaímido ] -3-cef em-4-karboxylát-l-oxidu

0,3 . ml terc.butylhypochloritu se přidá k silně promíchávanému roztoku 0,98 g terc.butyl- (6R,7R )-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu ve 25 ml pyridinu a 1 ml vody při —45 °C. Po dvouminutovém míchání se přidá 1 ml 2 N kyseliny sírové a směs se ihned vlije do 100 mi 20% (hmotnost/objem) kyseliny ortofosforečné. Roztok se extrahuje ethylacetátem (2X 100 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 mililitrů) a vodou (100 ml) a suší síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Surový produkt se . chromatografuje na silikagelových preparačních deskách s užitím ethylacetátu jako eluentu, menší podíl S-oxidu předbíhá R-oxid. Extrakcí pomalejší složky ethylacetátem se získá výsledná sloučenina (0,27 g, 27%).

Údaje infračervené a NMR-spe-ktroskopie potvrzují strukturu výsledné sloučeniny.

c) Syn-isomer 1-oxid kyseiiny llR,RP^,7R--3-ka-rbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylové

0,42 g syn-isomeru terc.butyHU^R^R)-3-kar bamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylát-l-oxidu se rozpustí v 5 ml · kyseliny . triftuoгoctové a míchá se při teplotě místnosti 8 - minut. Roztok se odpaří ve vakuu na červený olej, rozpustí se v 5 ml směsi ethylacetátu s acetonem (1:1) a přidá se po kapkách za míchání k 50 ml petroletheru (60 až 80 °C). Usazená tuhá látka se shromáždí a suší se v exsikátoru. Surový produkt se rozmíchá s ethylacetátem a tekutá fáze se oddělí a po kapkách přidá k 50 ml petroletheru (60 až 80 °C). . Získá se výsledná sloučenina · jako bezbarvá tuhá látka (150 mg, 40 %),

Amax (0,25 N NaHCOs) 263,5 (ε 15 000) a 281 nm (ε 13 700), vmax (nujol)· 1799 (/3-aktam), 1725 a 1716 (COOH a OCONH2), 1684 a 1538 (CONH) a 1060 a 1050 cm⁴ (S — O], τ (DMSO-ds) hodnoty zahrnuje 0,02 (d, J8Hz, CONH), 4,17 (dd,-J4 a 8Hz, 7-H), 4,99 (d, J4Hz, 6-H) a 6,09 (s, N-OCH3).

Příklad 11

Syn-isomer 1-oxid kyseliny (lR,6R,7R)-3-karbamoyloxy methyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylové

K promíchávanému roztoku syn-isomeru (6R,7R) -3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (fur-2-yy ) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu sodného (2,59 g) ve vodě (25 ml) se přidá 1,93 g metaperyodátu sodného. Roztok se míchá po 30 minut při teplotě okolí a pak se okyselí 2 N kyselinou chlorovodíkovou přidávanou po kapkách. Výsledná sraženina se shromáždí, postupně promyje vodou, ethanolem a etherem a usuší se ve vakuu, aby se získala výsledná sloučenina jako ' bílý prášek (1,63 g) [a]_D ²⁰ + 113° (c 0,86, Me2SO),

Amax (pH 6 pufr) 264,5 (ε 17 200) a 279 nm (ε 15 600), Kmax (nujol) 1770 (/3-laktam), 1740 a 1716 (CO2H), 1688, 1654, 1589 a 1530 (CONH a OCONH2) a 1030 cm^-1 (S - O), τ (DM SO-de) 0,60 (d, J8Hz, NH), 211, 319, 3,31 (multiplet, furylové protony), 4,08 (c, J5 a 8Hz, C-7H),

4,87 a 5,45 (ABq , J1^-^l·^z, CH2OCONH2), 4,96 (d, J5Hz, C-6H), 6,08 (s, OCH3),

6,10 .a 64^2 (ABq , J18Hz, C-2 CH2).

Příklad 12

Syn-isomer kyseliny (1R,6R,7R)- a (1S,6R,7R) -3-karbamoyloxymethyli7i [ 2- (f ur-2-y 1) i2-^m^tbo:^^yíminoacetamido ] i3icefemi4-karboxylové

Roztok . 1,93 g jodistanu sodného v 10 ml vody se přidá k promíchávanému roztoku (6R,7R) i'3-karbamoyloxymethyli7i [ 2- (f ur-2-yl) i2-methoxyiminoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu (2,59 g) ve vodě (25 mililitrů). V míchání se pokračuje 30 minut při teplotě místnosti a roztok se pak 0kyselí 2 N kyselinou chlorovodíkovou (2 miiilitry). Usazený lS-oxid se odfiltruje, promyje se ethanolem (5 ml) a etherem (20 mililitrů) a suší se v exsikátoru. Výtěžkem 1,55 g bezbarvé tuhé látky, -[a]_D -|- 110° (c 1, DMSO), odpovídající ' produktu popsanému v příkladu 11.

Matečné louhy se . nasytí chloridem sodným a filtrují se. Filtrát se extrahuje s ethylacetátem (2X 100 ml). Organické extrakty se spojí, suší se síranem hořečnatým a koncentrují ve vakuu, přičemž vznikne žlutá tuhá látka. Surový . produkt - se promyje acetonem a nerozpustný materiál se odstraní filtrací. Filtrát se odpaří do sucha a promytí acetonem se opakuje. Získá se 380 miligramů IR-oxidu, . [a]D —88° (c 1, DM SO), τ (DMSO-de) s podobnými údaji jakojsou uvedené v příkladu 10.

Příklad 13

a) Syn-isomer difenylmethyI-(6R,7R)-3i ikarbamoyloxymethyl-7i [ 2- (fur^-yl) -2-f enoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxylátu

Roztok 7,75 g (0,382 mol) DL-dicyklohexylkarbodiimidu v 50 ml bezvodého dichlormethanu se přidá v průběhu 10 minut k roztoku 13,7 g (0,312 mol) difenylmethyl- (6R,7R) i7-íimmo-3-karbamoyloxymethyii i3-cefem-4-karboxylátu a 8,8 g (0,382 mol) syn-isomeru kyseliny 2-(fur-2-yl)-2-fenoxyi iminooctové v bezvodém dichlormethanu (200 ml) při 0°C. Po 45 minutách sraženina tvořená převážně N.N‘idicyklohexylmočovii nou se odfiltruje a filtrát se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se síranem hořečnatým a odpaří se na rotační odparce. Zbytek se chromatografuje na silikagelovém (1 kg) sloupci. Méně polární nečistoty než požadovaný produkt se eluují dichlormethanem (1 litr), směsí aceton s dichlormethanem 2- :98 (1 litr), směsí aceton dichlormethan - 5:95 (4 litry). Frakce eluované směsí aceton-dichlormethan 10 : 90 a acetondichlormethan 19 : 85 se odpaří na pryžovou - konzistenci (11 g), která se roztírá s diethyletherem, aby vznikla tuhá látka (8,35 g, 41·%). - Ta se odfiltruje a dále se čistí krystalizací z vodného ethanolu a získá se výsledná sloučenina (7,6 g), teplota tání 143 až 146 °C, [a]_DM' + 48° (c 1,0, DMSO),

FtDH λ r._a 273 nm (ε 18 700), λ П-, 271 nm (ε 17 600] a λ 254 nm (ε 16 500).

Infračervená a NMR-spektroskopie a mikroanalytické údaje potvrzují, že struktura se shoduje s výslednou sloučeninou.

b) Syn-isomer (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- (2- (f ur-2-yl) -2-f enoxyiminoacetamido ] i3icefem-4-karboxylátu sodného ml trffluoroctové kyseliny se přidává v průběhu 10 minut k ledem chlazené směsi . 8 ml anisolu a 7,4 g (11,4 mol) syn-ieomeru - difenyl^methyl-6^R,7R)-3ikarbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-f enoxyiminoacetamidoj-3-cefem-4-karboxylátu. Po - ' dalších 5 minutách při 0 °C se tmavý roztok opatrně vlije do směsi nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného - a ethylacetátu. Vodný roztok se oddělí a působí se na něj aktivovaným uhlím. Ethylacetátová vrstva se promyje vodou a vodné promývací tekutiny se spojí s extraktem hydrogenuhličitanu sodného a okyselí se koncentrovanou - kyselinou chlorovodíkovou. Tento kyselý roztok se extrahuje směsí ethylacetátu a diethyletheru, která se pak promyje 5X vodou, suší se síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu. Zbytek se promyje diethyletherem a diisopropyletherem a získá se kyselina cefalosporinová (4,5 g, 82 %) jako sraženina.

Tato . kyselina se rozpustí v ethylacetátu (150 ml), přidá se roztok 2-ethylhexanoátu sodného v ethylacetátu (10 ml s obsahem 10 mmol). Roztok se chladí v ledové lázni a třepe se 1,5 hodiny během této doby vykrystalizuje 2,84 g produktu a nezreagovaná kyselina [1,1 g znovu - pak vysrážená v petroletheru -(teplota -varu 60 až 80°C)] zůstává v roztoku. Sraženina se odfiltruje, aby poskytla výslednou sloučeninu.

Fyzikální konstanty výsledné sloučeniny jsou uvedeny v tabulce č. 1, jež následuje za příkladem 18.

Příklad 14

a) Syn-isomer difenylmethyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- (2-methoxyimino-2-f enylacetamido) -3-cefem-4-karboxylátu

1,83 g (3 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové s difenylmethyl- (6R,7R)-7-amino-3-karbamoyioxymethyl-3-cefem-4-karboxylátem se přidá ke směsi nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (50 mililitrů) a dichlormethanu [100 ml). Směs se protřepává, aby se rozpustila pevná látka a oddělila se organická vrstva, promyje se dvakrát vodou, suší se síranem horečnatým a koncentruje se za sníženého tlaku asi na 15 ml. Tento roztok se chladí na 0°C a přidají se roztoky D,L-dicyklohexylkarbodiimidu (824 mg, 4 mmol) v bezvodém dichlormethanu (10 ml) a syn-isomeru kyseliny 2-methoxyimino-2-fenyloctové (716 g, 4 mmol) v bezvodém dichlormethanu (10 ml). Reakční směs se míchá při 0 °C 70 minut, pak se filtruje, promyje se 2 N kyselinou sírovou, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, solankou, suší se síranem sodným a odpaří se a vznikne žlutá tuhá látka (2,05 g). Ta se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml), který se zchladí a dicyklohexylmočovina se odfiltruje. Přidáním diisopropyletheru к filtrátu vznikne sraženina, která se odfiltruje, promísí a promyje diisopropyletherem, filtruje se a nakonec promyje diethyletherem, aby vznikla výsledná sloučenina (1,10 g, 61,5%), teplota tání 173 až 182 °C, [a)_D +22,5° (c 1, CHCls),

FtOH λ ты 258,4 nm [ε 17 500),

FtQH λ -{i 227 nm (ε 15 800).

Infračervená a NMR-spektroskopie a údaje mikroanalýzy potvrzují strukturu výsledné sloučeniny.

b) Syn-isomer kyseliny (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- (2-methoxyimino-2-

-f enylacetamido) -3-cefem-4-karboxylové

Působením na produkt získaný způsobem uvedeným pod metodou podle příkladu 1b) se získá výsledná sloučenina (75%), sloučenina se čistí roztíráním surového produktu s ethylacetátem (10 ml), následovným dvojnásobným promytím za stálého třepání s diethyletherem (25 ml a 10 ml). Fyzikální konstanty výsledné sloučeniny jsou uvedeny v níže uvedené tabulce č. 1.

Příklad 15

a) Syn-isomer difenylmethyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7-(2-f enoxyimino-2-f enylacetamido) -3-cef em-4-karboxylátu

Způsob podle příkladu 14a se opakuje s tím rozdílem, že se použije syn-isomer kyseliny 2-fěnoxyimino-2-fenyloctové místo syn-isomeru kyseliny 2-methoxyimino-2-fenyloctové, aby vznikla rudá tuhá pěna. Tento surový produkt se krystalizuje ze směsi vody a acetonu, aby vzniklo 1,3 g červené tuhé látky, která se dvakrát promyje za stálého míchání diethyletherem, aby vznikla výsledná sloučenina (675 mg, 34%) jako bílá tuhá látka s teplotou tání 138 až 140 °C, [a]_D 4-44,5° (c 1, CHCls), λ 277 nm (ε 18 600),

EtOH ^λ inf.

268 a 281 nm (ε 16 850 a 14 000).

Zbytek získaný po odpaření matečných lou-. hů a promytím se krystalizuje z ethanolu, aby vznikla další výsledná sloučenina (431 miligramů, 17'%) ve dvou šaržích, jež byly za míchání promyty diethyletherem. Údaje infračervené a NMR-spektroskopie i mikroanalýzy potvrzují strukturu výsledné sloučeniny.

b) Syn-isomer (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- (2-fenoxyimino-2-fenylacetamido) -3-cef em-4-karboxylátu sodného

Na produkt získaný svrchu popsaným postupem v bodě a) se působí metodou podle příkladu lb), aby vznikla surová kyselina cefalosporinová, která se třepe s ethylacétátem a nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Výsledný precipitát se odfiltruje a promyje se acetonem a etherem, aby vznikla výsledná sloučenina (66%) mající fyzikální konstanty, jak je uvedeno v níže uvedené tabulce č. 1.

Příklad 16

a] Syn-isomer difenylmethyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7-[ 2-cyklopentyloxyimino-2- (f ur-2-yl) -acetamido ] -3-cefem-á-karboxylátu

Způsob podle příkladu 14a) se opakuje až na to, že se užije syn-isomer 2-cyklopentyloxyimino-2-(fur-2-yl) octové kyseliny místo syn-isomeru 2-methoxyimino-2-fenyloctové kyseliny, aby vznikla pěna (1,77 g), která se rozetře s ethylacetátem, aby vznikla výsledná sloučenina (1,90 g, 67%), jako bledě žlutá tuhá látka o teplotě tání 102 až 108 stupňů Celsia, («]d+12,5° (c l, CHCls),

EtOH

Л * _ax 270 nm (ε 17 900).

b) Syn-isomer kyseliny (6R,7R)-3-kar bamoyloxymethyl-7- [ 2-cyklopentyloxy imino-2- (f ur-2-y 1) -acetamido ] -3-cefem-4-karboxylové

Zpracováním produktu získaného podle svrchu uvedeného způsobu a) metodou podle příkladu lb) poskytuje surovou kyselinu cefalosporlnovou, která se vysráží z ethylacetátu s dlisopropyletherem za vzniku výsledné sloučeniny (55%) mající fyzikální konstanty, jak je uvedeno v níže uvedené tabulce č. 1.

Příklad 17

a) Syn-isomer dífenylmethyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- (2-ethoxyimino-2-f enylacetamido) -3-cef em-4-

-karboxylátu

Způsob podle příkladu 14a) se opakuje, až na to, že se užije syn-isomer 2-ethoxyimino-2-fenyloctové kyseliny místo syn-lsomeru 2-methoxyimino-2-fenyloctové kyseliny. Krystalizaci hrubého produktu z methanolu se získá výsledná sloučenina (1,30 g, 53 %), ve třech podílech, teplota tání 199 až 202 °C, [«]d 4θ>7° (c li dioxan), λ Z,ax 274 nm (ε 16 500],

A “i_f 267 nm (ε 7350).

b) Syn-isomer kyseliny (6R,7R)-3-karbamoyloxyměthyl-7- (2-ethoxyimino-2-f enylacetamido)-3-cef em-4-

-karboxylové

Zpracováním produktu získaného podle svrchu uvedeného způsobu a) metodou podle příkladu lb) se získá surová kyselina cefálosporinová, která se rozmělní s ethylacetátem (3 ml), odfiltruje se a promyje se za třepání ethylacetátem (5 ml) a pak di ethyletherem (2X 10 ml), aby vznikla výsledná sloučenina jako bílá tuhá látka (413 miligramů, 64%). Další množství (180 mg, 27%) vykrystalizuje z filtrátů, filtruje se a promyje dlethyletherem. Fyzikální konstanty výsledné sloučeniny jsou uvedeny v níže uvedené tabulce č. 1.

P ř í к 1 a d 18

a) Syn-isomer difenylmethyl-(6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2-terc.butoxyimino-2- (thien-2-yl) -acetamido ] -3-cefem-4-karboxylátu

Způsob podle příkladu 14a) se opakuje, až na to, že se užije syn-isomer 2-terc.butoxyimino-2-(thien-2-yl) octové kyseliny namísto syn-isomeru 2-methoxyimino-2-fenyloctové kyseliny. Surový produkt se čistí protřepáváním suspenze v diisopropyletheru (2 X 25 ml), aby vznikla výsledná sloučenina jako bledě růžová pevná látka (1,90 gramu, 73 %), teplota tání 148 až 152 °C, [a]_D +8,5° (c 1, CHCb),

EtOH ^λ 262*8 282 nm U 500 a ε 13 200).

b) Syn-isomer (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2-terc.butoxyimino-2- (thien-2-yl) acetamido ] -3-cef em-4-karboxylátu sodného

Na produkt získaný svrchu popsanou metodou a) se působí metodou podle příkladu lb), aby vznikla kyselina cefálosporinová jako látka konsistence klovatlny, která se změní v pevnou látku, rozetře-li se diisopropyletherem a poskytne surový produkt (1,20 g, 94 %). Část z této kyseliny (811 mg,

1,68 mtnol) a 2-ethylhexanoát sodný (282 mg, 1,68 mmol) se míchají v n-butanolu (5 ml) při 20 °C 10 minut a při 0 °C 20 minut. Výsledná žlutá sraženina se odfiltruje a promyje s chladným n-butanolem (3 ml) a dlisopropyletherem (7 ml), aby vznikla výsledná sloučenina (495 mg, 56 %), mající fyzikální konstanty uvedené v níže uvedené tabulce č. 1.

ř O o o

Fyzikální vlastnosti produktů z příkladů 13b až 18b

Příklad [a]_D Rpac(1) pH 6 (2) A_max (cm-¹) v nu jolu číslo (rozpouš- (rozpouštěcí Am_ax (ε) NH2 NH COOH Д-laktam CONH

CO | CD I o o o 00 CO OJ 00 ID CM ID CO CD ID CD ID CD ID τΗ rH H r-l Η H

O rH CD rH

CM O CM xf СО O tx 00 ID CM ID CM CO ID CO ID CD ID rH τΗ Η Η Η rH

ID O	. 00	co Q
rH O	r4	rH o
bs b>	1 Ьч	O Ú4
rH rH	rH	rH rH

O	Xf	o	Xf	o
rH	CM	O)	CM	OJ
O	b-	CD	o	cD
rH	rH	rH	rH	rH

ID	O	O	00	CO	o
CD	co	’Ф	eso	CD	LO
Ьч		Ьч	Ьч	Гч
rH	rH	rH	rH	г—1	rH

o	o o	o o
o	Гч !>	CO rH
CM	00 CM	CM CM
00	00 co	co co

o

o o	o	ID
Xf <ф	1	co
xf co	1 xf	oo
CO 00	00	co

g	o	CD	o	o	o
OJ	ID	o	co	LO
•0	xf	Xf	o	xf
co	00	00	co	00	oo

o o	o —	Sg	o o	_ d o
o o	o o	CZTcm	CM	ID ΖΓ
O CO	CM o	CD		o 2
CD 00	00 »	О Ьч CM rH	OJ rH	o LD co
rH rH	rH (>			т-Н
4—-1	'--'rH	00		__-O
		rH ID	ID	i—1
o o	CM ‘ '			CM
{> CD	со ID	'irT	σΓ	CD _
CM CM	cm *	O oo	ID	CM CD
	CD	OO CM	CM	CO
	CO	CM		CM

0. 4 9 8 8

38

Tabulka 1 — pokračování	(v DMSO-de)	C3-CH2 ABq J 13 Hz	Postranní řetězec
Příklad číslo	NH d J8Hz	NHz
C7-H dd J 5,7 Hz	Ce-H d J 5 Hz	aromatický (m)	alifatický
13b)	-0,10	3,43	4,23	4,85	5,00	1,98
				5,27	2,35— 3,02 3,22
14b)	0,23	3,4	4,11	4,74	5,07	2,1-	6,04
				5,34	2,7	(s)
15b)	(3)				4,53	1,9-
	1,72	—	3,82	4,61 (tmav-	4,87	2,9
				ne)
16b)	0,29	3,4	4,14	4,77	5,02	2,12	5,28
				5,32	3,3	7,9-
						3,4	8,7
							(m)
17b)	0,22	3,4	4,08	4,73	5,09	2,0—	5,76
				5,33	3,0	(q J 7 Hz) 8,70 (t, J7 Hz)
18b)	0,41	3,48	4,34	4,94	5,16	2,42	8,68
					2,92	(s)

Tabulka 1 — pokračování

Příklad číslo	Mikroanalýza (%) nalezeno/vypočteno	Empirický vzorec (rozpouštědlo přítomno)
C	H	N	S
13b)	48,2	3,8	10,5	5,9	C21H17N4SO8
	48,2	3,6	10,7	6,1	(1 mol H2O)
14b)	50,1	4,3	12,4	7,2	C18H181N1SO7
	49,8	4,2	12,9	7,4
15b)	49,5	3,65	9,6	5,8	C25Hi9N4SO7Na
	49,9	4,15	10,0	5,8	(2 mol H2O)
16b)	50,6	5,4	10,5		C20H212NSO8
	51,8	5,2	10,8		[0,4 mol
					(i-Pr)20J
17b)	52,6	4,3	11,9	7,1	C19H20N4SO7
	52,2	4,3	11,9	6,8	(0,2 mol
					anisolu)
18b)					Ci9H2iN4SáO7Na
Poznámky:

__________(R_f sloučeniny)_______ (Rf kyseliny (6R,7R)-3-acetoxymethyl-7-fenylacetamido-3-cefem-4-karboxylové)

Rozpouštědlový systém (A) je . n-butanol: : ethanol: voda (4:1:5)

Rozpouštědlový systém (B) je :

: voda (7:3) (2) inf. znamená inflexi (3) Spektrum kyseliny trifluoroctové

C) Příklady farmaceutických přípravků

Příklad A

Suchý prášek pro přípravu injekčního roz toku

Sterilní syn-isomer (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-yl) -2-methoxyiminoacetamido ] -3-cef em-4-karboxy204988

ЗЯ látu sodného se naplní do skleněných fiol, označený obsah je 500 mg nebo 1,0 g cefalosporinové sloučeniny. Plnění se provádí asepticky pod vrstvou dusíku. Fiolky se uzavírají s použitím gumových disků nebo zátek, jež jsou udržovány na místě aluminiovými těsnícími kroužky, čímž se předchází výměně plynů nebo vniknutí mikroorganismů. Produkt je určen к rozpuštění ve vodě pro injekce nebo v jiném vhodném sterilním vehikulu těsně před aplikací.

Příklad В

Intramammarní injekce (pro dobytek)

Složení v % (hmot.

°/o) Syn-isomer (6R,7R)-3-karbamoyloxymethyl-7- [ 2- (f ur-2-y 1) -2-methoxyimínoacetamido ] -3-cefem-4-karboxylát sodný 8,33 vehikulum ad 100,00 vehikulum složení:

Tween 603,00 bílý včelí vosk6,00 arašídový olej91,00

Poslední tři složky se spolu zahřívají na 150 °C jednu hodinu a pak se za míchání vychladí na teplotu místnosti. Sterilní antibiotikum, jemně práškované, se přidá asepticky к tomuto vehikulu a produkt se jemně rozptýlí na vysokorychlostním mixéru. Preparát se plní asepticky do sterilních hliníkových tub s hmotností náplně 3,0 g, každá tuba obsahuje 250 mg cefalosporinové sloučeniny. Výrobek je určen к aplikaci do mléčné žlázy skrze ústí mlékovodu.

Claims (8)

1. Způsob výroby cefalosporinových antibiotik obecného vzorce I

H И

CH^O.CO.NH^ a

kde

R¹ zůamená furyl, thlenyl nebo fenyl,

R² znarilená Ci až Cí-alkyl, Cs až C7-cykloalkyl nebo fenyl, a

R® znamená vodík nebo esterotvornou skupinu poskytující fyziologicky neškodné estery, ve formě syn-lsomeru nebo směsi syn-isomeru a anti-isomeru s obsahem alespoň 90 % syn-isomeru, a jejich fyziologicky neškodných solí odvozených v případě, že R® značí vodík, vyznačující se tím, že se za teploty —50 až -|-50^oC kondenzuje sloučenina obecného vzorce И

COOR _(u) kde

В znamená =S nebo =S-O,

Rh znamená vodík nebo skupinu, chránící karboxylovou skupinu, jako například d-fenylmethyl nebo terc.butyl,

R¹² znamená vodík nebo N-ochrannou skupinu, jako například mono-, di- nebo tri-chloracetyl nebo chlorsulfonyl a přerušovaná čára (--) mezi polohami 2,

3 a 4 znamená, že může jít o 2-cefemovou nebo 3-cefemovou sloučeninu, nebo adiční sůl kyseliny s touto sloučeninou, nebo N-silylový derivát této sloučeniny, a acylačním činidlem, odpovídajícím kyselině obecného vzorce III

Ri.C.COOH

II N \ OR² (III), kde

R¹ a R² mají svrchu uvedený význam, a převede se libovolný A²-isomer na žádaný A³-isomer a/nebo se odstraní skupina blokující karboxyl nebo N-ochranná skupina a/nebo se redukuje sulfoxid cefalosporinu na odpovídající sulfid, a posléze se izoluje sloučenina obecného vzorce I, popřípadě po oddělení syn-isomeru a anti-isomeru, a popřípadě po převedení sloučeniny obecného vzorce I na její 1-oxíd, v případě jestliže R® značí vodík nebo na její fyziologicky neškodné soli nebo estery.

2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce I nebo fyziologicky neškodná sůl sloučeniny obecného vzorce I, kde R® značí vodík nebo její 1-oxid izoluje ve formě syn-isomeru, prostého anti-isomeru.

3. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II, kde B, R¹¹ a R¹² a přerušovaná čára má význam udaný v bodě 1 kondenzuje s ⁴¹ halogenidem kyseliny obecného vzorce III, kde R¹ a R^z mají téměř udaný význam.

4. Způsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se kondenzace provádí za přítomnosti činidla, které váže kyselinu, a to ze skupiny zahrnující terciární aminy, anorganické zásady nebo oxirany.

5. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II, kde B, R¹¹, R¹² a přerušovaná čára mají význam jako v bodě 1, kondenzuje s volnou kyselinou vzorce III, kde R¹ a R² mají tamtéž udaný význam, za přítomnosti kondenzačního činidla ze skupiny karbodilmidu, karbonyldiimidazolu nebo isoxazoliniových solí.

6. Způsob podle bodů 1 až 5, к výrobě sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ zna mená fur-2-yl, vyznačující se tím, že jako výchozí sloučeniny se používá sloučeniny obecného vzorce III, kde R¹ znamená 2-furyl a R² má výše uvedený význam.

7. Způsob podle bodů 1 až 6 к výrobě sloučeniny obecného vzorce I, kde R² znamená methyl, ethyl, terc.butyl, cyklopentyl nebo fenyl, vyznačující se tím, že se jako výchozí sloučeniny používá sloučeniny obecného vzorce III, kde R² má v tomto bodě udaný význam, a R¹ má význam uvedený v bodě 1.

8. Způsob podle bodů 1 až 7 к výrobě slouj čeniny obecného vzorce I, kde R¹ znamená 2-furyl, R^z znamená methyl a R^a znamená vodík, vyznačující se tím, že jako výchozí sloučeniny se používá sloučeniny obecného vzorce III, kde R¹ znamená 2-furyl a R² znamená methyl.