CN1829714A

CN1829714A - Pna单体和前体

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Publication number: CN1829714A
Application number: CNA2004800220716A
Authority: CN
Inventors: 金成基; 李贤一; 林钟燦; 李星熙
Original assignee: Panagene Inc
Current assignee: Panagene Inc
Priority date: 2003-07-28
Filing date: 2004-04-07
Publication date: 2006-09-06
Anticipated expiration: 2024-04-07
Also published as: EP1651642A4; ATE447569T1; CN1829714B; EP1651642A1; US20050026930A1; EP1651642B1; KR100752552B1; US7211668B2; KR20060037415A; DE602004023951D1; JP2007500184A; KR20070040420A; DK1651642T3; JP4441535B2; WO2005009998A1

Abstract

本申请涉及用于制备PNA(肽核酸)寡聚物的具有通式(I)的单体，并提供了合成预定序列PNA寡聚物和随机序列PNA寡聚物的方法，其中，E是硫或氧；J是氮或C－R’；R1、R’独立地为H、卤素、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、或具有下列通式(A、B)之一的官能团，其中A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选H、卤素(如F、Cl、Br或I)、CF₃、烷基(优选C₁－C₄烷基)、硝基、腈、烷氧基(优选C₁－C₄烷氧基)、卤(如F、Cl、Br或I)代烷基(优选C₁－C₄烷基)、卤(如F、Cl、Br或I)代烷氧基(优选C₁－C₄烷氧基)、苯基、和卤(如F、Cl、Br或I)代苯基；R₂是H或被保护的天然或非天然α－氨基酸侧链；以及，B是天然或非天然的核酸碱基，其中，当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被在酸性条件下不稳定、但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。

Description

PNA单体和前体

技术领域

本发明涉及适于制备PNA寡聚物的单体。本发明还涉及该单体的前体和由该前体制造PNA单体的方法。此外，本发明涉及使用PNA单体制备PNA寡聚物的方法。

背景技术

在最近二十年中，通过修饰磷酸基、核糖环和核酸碱基来最优化寡核苷酸的性质的努力导致了许多新的寡核苷酸衍生物的发现，这些衍生物可以以反义或反义基因的形式用于DNA诊断和治疗的领域，并用于对分子生物学和生物技术的基础研究(U.Englisch andD.H.Gauss，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1991，30，613-629；A.D.Mesmaeker等.Curr.Opinion Struct.Biol.1995，5，343-355；P.E.Nielsen，Curr.Opin.Biotech.，2001，12，16-20.)。最显著的发现是由Nielsen、Egholm、Buchardt、和Berg组成的丹麦小组报道的肽核酸(P.E.Nielsen等，Science，1991，254，1497-1500)。PNA是DNA类似物，其中N-(2-氨乙基)甘氨酸聚酰胺代替了磷酸-核糖环主链，并且亚甲基-羰基连接剂将天然和非天然核酸碱基连接到N-(2-氨乙基)甘氨酸中间的胺上。尽管对天然的结构进行了很大的改变，但PNA仍能够遵守Watson-Crick碱基配对规则序列特异性地与DNA以及RNA结合。PNA以高于其天然对应物的亲和力与互补的核酸结合，这一部分是由于主链上缺乏负电荷，从而减小了电荷-电荷之间的斥力，也由于有利的几何因素(S.K.Kim等，J.Am.Chem.Soc.，1993，115，6477-6481；B.Hyrup等.，J.Am.Chem.Soc.，1994，116，7964-7970；M.Egholm等.，Nature，1993，365，566-568；K.L.Dueholm等，New J.Chem.，1997，21，19-31；P.Wittung等，J.Am.Chem.Soc.，1996，118，7049-7054；M.Leijon等.，Biochemistry，1994，9820-9825.)。还证实所得到的PNA/DNA双链体的热稳定性与杂交溶液的盐浓度无关(H.Orum等，BioTechniques，1995，19，472-480；S.Tomac等，J.Am.Chem.Soc.，1996，118，5544-5552.)。而且，PNA可以平行或逆平行的方式结合，逆平行模式是优选的(E.Uhlman等，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1996，35，2632-2635.)。

PNA/DNA双链体的错配远没有DNA/DNA双链体的错配稳定。单一的碱基错配将导致PNA/DAN和DNA/DNA的Tm分别降低15℃和11℃。全嘧啶PNA寡聚物和高嘧啶/嘌呤比例的PNA寡聚物可与互补DNA结合形成异常稳定的PNA2/DNA三螺旋(P.E.Nielsen等人，Science，1991，254，1497-1500；L.Betts等人，Science，1995，270，1838-1841；H.Knudsen等人，Nucleic Acids Res.，1996，24，494-500.)。尽管PNA具有酰胺键和核酸碱基，但PNA对核酸酶和蛋白酶都显出很强的抗性。与DNA相比(DNA用强酸处理会脱嘌呤，用碱金属氢氧化物处理会水解)，PNA是完全酸稳定的，且对弱碱足够稳定。

通常，PNA寡聚物是用已知的固相肽合成法合成的。一些研究小组独立开发了新的单体策略以优化PNA寡聚物的合成。PNA单体的制备可分为合成适当保护的N-(2-氨乙基)甘氨酸和适当保护的核酸碱基乙酸衍生物，然后将这两者偶联。

第一个有报道的用于PNA寡聚物合成的合成策略是采用t-Boc/苄氧羰基保护基团的Merrifield固相合成法，在该合成法中，主链氨基由t-Boc保护，核酸碱基的环外氨基用苄氧羰基保护(P.E.Nielsen等人，Science，1991，254，1497-1500；M.Egholm等人，J.Am.Chem.Soc.，1992，114，9677-9678；M.Egholm等，J.Am.Chem.Soc.，1992，114，1895-1897；M.Egholm等，J.Cllem.Soc.Chem.Commun.，1993，800-801；K.L.Dueholm等，J.Org.Chem.，1994，59，5767-5773；WO 92/20702)。用t-Boc/苄氧羰基保护的PNA单体现在可在商业上获得，但不便于使用，因为需要用TFA反复处理以去掉t-Boc的保护，同时需要用苛刻的HF或三氟甲烷磺酸处理以从树脂上切下，并从核酸碱基的环外胺上除去苄氧羰基的保护。因此，这种方法不能用来合成许多类型的经过修饰的PNA寡聚物，如PNA-DNA嵌合体。此外，考虑到操作人员的安全和对自动化设备和生产线的腐蚀作用，使用危险的酸如HF或三氟甲烷磺酸在商业上不可取。此外，t-Boc/苄氧羰基保护法是一种具有特异性的策略，它定义为保护基系统，其中，保护基用相同种类的试剂或条件去除，但依赖于不同的相对反应速度从而依次除去各个保护基。例如，在t-Boc/苄氧羰基保护法中两种保护基都是酸不稳定的，但需要较强的酸以有效去除苄氧羰基。当使用酸完全去除更加酸不稳定的t-Boc基时，存在同时去除部分苄氧羰基的可能性。不幸的是，在合成寡聚物的每个合成周期中都必需从主链氨基上去除t-Boc基。因此，TFA足以将部分侧链苄氧羰基过早地去保护，这就可能造成寡聚物分支化并降低所需产物的总产率。

在寻找用于PNA寡聚物合成的较温和的、与DNA寡聚物的合成不矛盾的去保护的其他努力中，一些研究小组开发出了用Mmt/酰基保护的PNA单体，其中，用Mmt保护主链氨基，用酰基保护核酸碱基的环外氨基，如对胞嘧啶或腺嘌呤用苯甲酰基、甲氧苯酰基和叔丁基甲酰基，对鸟嘌呤用异丁酰基、乙酰基(D.W.Will等，Tetrahedron，1995，51，12069-12082；P.J.Finn等，Nucleic AcidResearch，1996，24，3357-3363；D.A.Stetsenko等，Tetrahedron Lett.1996，3571-3574；G.Breipohl等，Tetrahedron，1997，14671-14686.)。

其他用Fmoc/二苯甲基氧羰基保护的PNA单体也可在商业上获得，其中，用Fmoc保护主链氨基，用二苯甲基氧羰基保护核酸碱基(J.M.Coull，等.，US 6,133,444)。但Fmoc/二苯甲基氧羰基法也有缺点，如Fmoc去保护时发生的副反应和溶液中单体的不稳定性。最重要的副反应是，在Fmoc去保护条件下，核酸碱基乙酰基从仲氨基官能团迁移到氨基乙基甘氨酸的游离N-末端氨基官能团(L.Christensen等人，J.Pept.Sci.1995，1，175-183)。寡聚物合成每个循环周期中的N-乙酰基转移反应导致副产物的积累，这种副产物由于有类似的极性和同样的分子量而难以分离。而且，Fmoc保护基在痕量胺存在时非常不稳定。因此，选择PNA单体的溶剂必须小心。通常，推荐使用高质量的N-甲基吡咯烷酮。这在合成PNA寡聚物时需要较高花费。

还报道了使用Fmoc/苄氧羰基(S.A.Thomson等人，Tetrahedron，1995，6179-6194.)和Fmoc/Mmt(G.Breipohl等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1996，6，665-670.)保护单体用于PNA寡聚物的合成。然而，就单体溶解性和制备、苛刻的反应条件和单体合成和/或PNA寡聚物合成中发生的副反应而言，所有这些方法都有严重缺点。

在其他寻找新单体的努力中，ISIS和Biocept报道了环状单体。ISIS研究的第一种方法用吗啉酮代替被保护的主链(美国专利No.5539083)，但该方法有严重缺点，即偶联反应产生的羟基官能团需要在寡聚物合成的每个延伸步骤中转化为胺官能团。或者，用N-t-Boc-哌嗪酮代替被保护的氨基乙基甘氨酸部分(WO00/02899)。但该方法也有一些缺点，即寡聚化过程中单体的反应性，以及在上述线性t-Boc法中出现的同样的问题。

尽管最近有发展，仍需要一种可提高产率、降低合成费用且适合自动合成和平行合成的新的单体。

发明内容

本公开发明提供了新的单体，这种单体在PNA寡聚物合成中具有高的效率、高的产率且简便。另一个目的是提供可方便地用于合成PNA寡聚物的自动合成器等设备的PNA单体。本发明的新单体是具有通式I的化合物：

其中

E是硫或氧，

J是N或C-R’

R1、R’可以独立地为H、卤素(例如F、Cl、Br或I)、CF₃、烷基(优选C1-C4烷基)、或具有下面通式的芳基：

A₁、A₂、A₃、A₄、A₅可以独立地为H、卤素(例如F、Cl、Br或I)、CF₃、烷基(优选C1-C4烷基)、硝基、腈、烷氧基(优选C1-C4烷氧基)、卤(例如F、Cl、Br或I)代烷基(优选C1-C4卤代烷基)、或卤(例如F、Cl、Br或I)代烷氧基(优选C1-C4卤代烷氧基)、苯基、或卤(例如F、Cl、Br或I)代苯基。

在另一具体实施方式中，Rl、R’可具有通式：

A₁、A₂、A₃、A₄、A₅如上所述。

R2可以为H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链，B可以为天然或非天然核酸碱基，其中当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被对酸不稳定但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。在另一实施方式中，B可以是胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、腺嘌呤(A)、或鸟嘌呤(G)。

更具体地，用于B的环外氨基官能团的保护基团具有通式：

R4代表的基团具有通式：

Y₁-Y₁₀代表的残基独立选自H、卤素(例如F、Cl、Br)、烷基(优选甲基、乙基、t-丁基)、以及烷氧基(如甲氧基、乙氧基和t-丁氧基)。

在另一实施方式中，R4可以具有通式：

Z₁-Z₅代表的残基独立选自H、卤素(例如F、Cl、Br)、烷基(优选甲基、乙基、t-丁基)、以及烷氧基(如甲氧基、乙氧基和t-丁氧基)、以及相邻两个残基的亚甲二氧基。

本发明进一步提供了由通式为V的化合物制备通式I的化合物的方法：

其中

E、J、R1、R2和B如上所述。

当所述B的核酸碱基有环外氨基官能团时，B的保护基团也是如上所述的，以及

R3可以为H、烷基(优选C1-C4烷基，例如甲基、乙基、和t-丁基)、或芳基。

在另一实施方式中，本发明提供了通式V的化合物以及从通式II的化合物制备其的方法：

其中

E、J、R1、R2和R3如上所述。

此外，本发明提供了化学式II的化合物及其制备方法。

在另一实施方式中，本发明涉及制备化学式V的化合物的方法，包括在非亲核有机碱和常用于肽合成的偶联剂存在下，化学式II的化合物与核酸碱基乙酸部分的偶联反应。

本发明进一步提供了由通式IV的化合物制备化学式I的化合物的方法：

其中

E、J、R1和R2如上所述，以及

HX为有机或无机酸。

本发明还提供了通式IV的化合物及其自由酸形式，以及它们的制备方法。

本发明进一步提供了从通式II的化合物制备通式IV的化合物的方法。

本发明还涉及制备化学式I的化合物的方法，包括在非亲核有机碱和常用于肽合成的偶联剂存在下，化学式IV的化合物与核酸碱基乙酸部分的偶联反应。

本发明还涉及制备化学式I的化合物的方法，包括在常用于肽合成的偶联剂或混合酸酐的存在下环化化学式VI的化合物。

E、J、R1、R2和B代表的实体如上所述。当所述B的核酸碱基具有环外氨基官能团时，B的保护基也如上所述。

本发明涉及化学式II的化合物，其残基定义如上。特别是，R2残基可以是H或者天然α-氨基酸的保护或未保护侧链。在其他实施方式中，化学式II的化合物可以有这样的结构：E是硫，而R可以是下面通式：

本发明还涉及制备化学式II的化合物的方法，包括在非亲核有机碱存在下，将噻二唑-2-磺酰氯、噁二唑-2-磺酰氯、噻唑-2-磺酰氯、或噁唑-2-磺酰氯衍生物与N-(2-氨基乙基)氨基乙酸酯反应。

本发明还涉及具有化学式IV的化合物及其自由酸形式。化学式IV的残基如上所述。特别地，R2残基可以是H或天然α-氨基酸的保护或未保护侧链。在其他实施方式中，化学式IV的化合物可以有下面的结构：R1可以为甲基、苯基、2-硝苯基、4-硝苯基、2-氯-4-硝苯基、4-氯-2-硝苯基、2，5-二氯苯基、或2，4-二氯苯基；E为硫；J为氮。在其他实施方式中，R1为H、甲基、或苯甲酰基；E为硫；J为C-CH₃或C-Ph。

本发明还涉及制备化学式IV的化合物的方法，包括在常用于肽合成的偶联剂或混合酸酐的存在下环化化学式III的化合物、然后在酸中将如t-Boc的保护基团去保护。

E、J、R1、和R2代表的实体如上所述。

本发明还涉及制备PNA寡聚物的方法，包括将化学式I的化合物连接在一起。

应该明了，上面引用的对R基团和E以及J的规定也适用于化学式I-VI化合物。还应该明了这些规定还适用于那些处于本发明的过程中的化合物。

从本发明下面的说明以及所附的参考附图和这里所附的权利要求，将更充分地理解本发明的这些和其他目的。应该进一步懂得在图中标注的化学式作为代表性实施方式。整篇说明书都在讨论本发明的化学式。在图中被引用的化学式不是为了以任何方式限制被引用化合物的范围。

附图说明

从下面给出的详细说明以及附图可以更充分地理解本发明，这些附图的提供仅为了举例，而不能限制本发明，其中：

图1示出用于DNA识别的天然或非天然存在的核酸碱基的化学结构图表。

图2示出用于DNA识别的天然或非天然存在的核酸碱基的化学结构另一张图表。

图3示出被保护主链的合成图示。

图4示出作为单体前体的被保护哌嗪酮的合成图示。

图5示出PNA单体的合成图示。

图6示出另一种合成PNA单体的图示。

图7示出合成PNA胸腺嘧啶单体的图示。

图8示出另一种合成PNA胸腺嘧啶单体的图示。

图9示出合成PNA胞嘧啶单体的图示。

图10示出合成PNA腺嘌呤单体的图示。

图11示出合成PNA鸟嘌呤单体的图示。

图12示出从PNA单体合成PNA寡聚物的图示。

图13示出合成的寡聚物(H2N-CGCTA-H)的HPLC结果。

具体实施方式

应该明了图中示出的化学式仅仅作为例举的型式，当权利要求提到具体的化学式时，它是指说明书中所讨论的型式。

在本发明中，具有通式I的化合物的基团1，3，4-噻二唑-2-磺酰基、1，3，4-噁二唑-2-磺酰基、噻唑-2-磺酰基、或噁唑-2-磺酰基起着重要作用，不仅作为主链的胺基团的保护基团，还作为偶联反应的活化基团。具有所述特性的单体适用于通过手工或自动合成器合成PNA寡聚物和通过组合化学形成PNA寡聚物库。发现通式I中的核酸碱基B，对天然产物如胸腺嘧啶或胞嘧啶来说连接在1-位，对腺嘌呤或鸟嘌呤、以及对于非天然存在的核酸碱基(核酸碱基类似物)、或核酸碱基结合部分来说连接在9-位。图1和图2列出一些核酸碱基和示例性的合成的核酸碱基。

被保护的主链的合成

制备具有通式I的新单体的第一步是合成具有化学式II的N-[2-(1，3，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑，噻唑或者噁唑-2-磺酰基氨基)-乙基]甘氨酸衍生物：

其中，对于N-[2-(1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]甘氨酸衍生物来说，E是硫，J是氮；对于N-[2-(1，3，4-噁二唑-2-磺酰胺基)-乙基]甘氨酸衍生物来说，E是氧，J是氮；对于N-[2-(噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]甘氨酸衍生物来说，E是硫，J是C-R’；对于N-[2-(噁唑-2-磺酰胺基)-乙基]甘氨酸衍生物来说，E是氧，J是C-R’；并且R’、R1、R2和R3同上所述。

具有通式II的衍生物的合成通常是通过N-(2-氨基乙基)甘氨酸衍生物与具有下面通式的磺酰氯化合物的选择性反应来合成：

其中，对于1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯衍生物来说，E是硫，J是氮；对于1，3，4-噁二唑-2-磺酰氯衍生物来说，E是氧，J是氮；对于噻唑-2-磺酰氯衍生物来说，E是硫，J是C-R’；对于噁唑-2-磺酰氯衍生物来说，E是氧，J是C-R’；并且R’和R1同上所述。

对于制备具有化学式II的衍生物的实例，N-[2-(1，3，4-噻二唑或噻唑-2-磺酰基氨基)-乙基]甘氨酸衍生物是通过由已知方法合成的伯胺N-(2-氨基乙基)甘氨酸衍生物的选择性反应而合成得到(例如，R2为H时，参见S.A.Thomson等人，Tetrahedron，1995，6179-6194；R2为保护或未保护的天然或非天然氨基酸的侧链时，参见A.Puschl等人，Tetrahedron Lett.，1998，39，4707-4710)。1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯衍生物或噻唑-2-磺酰氯衍生物是由相应的2-巯基-1，3，4-噻二唑或2-巯基-噻唑衍生物通过与合成苯并噻唑-2-磺酰氯相同的方法而制备(E.Vedejs，等人，J.Am.Chem.Soc.，1996，118，9796-9797.)。

用于制备N-[2-(1，3，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑、噻唑、或者噁唑-2-磺酰基氨基)-乙基]甘氨酸衍生物的偶联反应是通过室温下和在非亲核有机碱存在下向N-(2-氨基乙基)-甘氨酸衍生物的溶液中缓慢加入1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯、1，3，4-噁二唑-2-磺酰氯衍生物、噻唑-2-磺酰氯衍生物、或噁唑-2-磺酰氯而进行。上述反应的溶剂的实例包括但不限于水、甲苯、苯、乙酸乙酯、四氢呋喃、二异丙醚、二乙醚、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳，和乙腈。优选的溶剂为二氯甲烷。非亲核有机碱的实例包括但不限于三乙胺、三丙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、以及N-乙基吗啉。优选的非亲核有机碱是三乙胺。通过用薄层色谱法(TLC)监控完成反应后，将反应混合物水洗、干燥，并减压蒸发得到预期产物。

1-(1，3，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑，噻唑、或者噁唑-2-磺酰基)-哌嗪-2-酮的制备

用于制备具有通式I的单体的、具有化学式IV的第一前体合成物是由具有化学式II的N-[2-(1，3，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑，噻唑、或者噁唑-2-磺酰基氨基)-乙基]甘氨酸衍生物制得，该制备采用水解、仲胺保护、环化、以及仲胺保护基团的去保护(图4)。

E、J、R1、R2、和HX代表的实体可以同上所述。

首先，通过加入过量的氢氧离子源，将具有化学式II的N-[2-(1，3，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑，噻唑、或者噁唑-2-磺酰基氨基)-乙基]甘氨酸衍生物转化成相应的酸。化学式II中R3优选为甲基或乙基。氢氧离子源的实例包括但不限于氢氧化锂、氢氧化钠、和氢氧化钾。优选的氢氧离子源是氢氧化锂。然后将未处理的反应混合物用保护基团(例如重碳酸二叔丁基酯)加以处理，以保护仲胺，目的是为了获得通式III的化合物：

E、J、R1、和R2代表的实体可以同上所述。

优选的水解反应是通过室温下向N-[2-(1，3，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑，噻唑、或者噁唑-2-磺酰基氨基)-乙基]甘氨酸衍生物的溶液中加入氢氧化锂(2当量)水溶液而实现。在薄层色谱显示反应完全后，将重碳酸二叔丁基酯(1.5当量)和氢氧化锂水溶液(另加1当量)加入到反应混合物中。混合物搅拌足够时间。然后用乙酸乙酯萃取除去过量的重碳酸二叔丁基酯。然后将水溶液酸化、用二氯甲烷萃取、干燥、然后减压蒸发得到固体。上述反应的溶剂的实例有含水四氢呋喃、含水二氧六环、以及含水1，2-二甲氧乙烷。优选的溶解是含水四氢呋喃。

其次，具有通式III的羧酸的环化反应以及随后的t-Boc去保护产生具有通式IV的哌嗪酮衍生物。环化反应在活化羧酸的过程中同时发生。羧酸的活化可以通过利用肽合成的通用偶联剂在室温下进行。偶联剂的实例包括但不限于HATU、HOAt、HODhbt(L.A.Carpino等人，J.Am.Chem.Soc.，1993，115，4397-4398)、HAPyU、TAPipU(A.Ehrlich et al.，Tetrahedron Lett.，1993，4781-4784)、HBTU(V.Dourtoglou et al.，Synthesis，1984，572-574)、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU(R.Knorr et al.，Tetrahedron Lett.，1989，1927-1930)、TOTU、BOP(B.Castro et al.，Tetrahedron Lett.，1975，1219-1222)、PyBOP(J.Coste et al.，Tetrahedron Lett.，1990，205-208)、BroP(J.Coste et al.，Tetrahedron Lett.，1990，669-672)、PyBroP(J.Coste et al.，TetrahedronLett.，1991，1967-1970)、BOI(K.Akaji et al.，Tetrahedron Lett.，1992，3177-3180)、MSNT(B.Blankemeyer-Menge et al.，TetrahedronLett.，1990，1701-1704)、TDO(R.Kirstgen et al.，J.Chem.Soc.，Chem.Comnmun.，1987，1870-1871)、DCC、EDCI、CDI(H.A.Staab，JustusLiebigs Ann.Claem.，1957，609，75.)、HOBt(W Knig et al.，Chem.Ber.，1970，103，788，2024，2034)、HOSu(E.Wunsch et al.，Chem.Ber.，1966，99，110)、NEPIS(R.B.Woodward et al.，.J.Am.Chem.Soc.，1961，83，1010)、BBC(S.Chen et al.，Tetrahedron Lett.1992，33，647)、BDMP(P，Li et al.，Chem.Lett.，1999，1163)、BOMI(P，Li et al.，TetrahedronLett.，1999，40，3605)、AOP(L.A Carpino et al.，Tetrahedron Lett.，1994，35，2279)、BDP(S.Kim et al.，Tetrahedron Lett.，1985，26，1341)、PyAOP(F.Albericio et al.，Tetrahedron Lett.1997，38，4853)、TDBTU(R.Knorr et al.，Tetrahedron Lett.1989，30，1927)、BEMT(P.Liet al.，Tetrahedron Lett.1999，40，8301)、BOP-Cl(J.Diago-Meseguer etal.，Synthesis 1980，547)、BTFFH、TFFH(A.El-Faham et al..Chem.Lett.，1998，671)、CIP(K.Akaji，et al.，Tetrahedron Lett.，1994，35，3315)、DEPBT(H.Li et al.Organic Lett.1999，1，91)、Dpp-Cl(R.Ramage et al.，J Chem.Soc.，Perkin Trans I，1985，461)、EEDQ(B.Belleau et al.，J.Am.Chem.Soc.，1968，90，1651)、FDPP(S.Chen et al.，Tetrahedron Lett.，1991，32，6711)、HOTT、TOTT(M.A.Bailey et al.，J.Org.Chem.1999，64，8936)、PyCloP(J.Coste et al.，Tetrahedron Lett.，1991，32，1967 andJ.Coste et al.，J.Org Chem.，1994，59，2437)。溶剂可以选自四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、DMF、和N-甲基吡咯烷酮。优选溶剂为DMF。

可选地，可以通过利用氯甲酸烷基酯或烷酰基氯通过非亲核有机碱形成混合酐而进行羧酸的活化。适用的无水溶剂的实例包括但不限于乙腈、氯仿、二氯甲烷、1，2-二甲氧乙烷、二乙醚、二异丙醚、和四氢呋喃，优选的溶剂为二氯甲烷和四氢呋喃。最优选的反应温度是其中的反应混合物在加完氯甲酸异丁酯(-20℃下加入)后能缓慢升至0℃。

参看图4，t-Boc基团在酸存在下进行去保护。酸的实例包括但不限于HCl、HBr、HF、HI、硝酸、硫酸、甲磺酸、TFA、和三氟甲磺酸。优选TFA。用于去保护反应的溶剂可以没有限制地包括二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、乙酸乙酯、甲苯和苯。优选的溶剂是二氯甲烷。

PNA单体的合成

根据本发明的方法，通式I的PNA单体可以由至少两种方法合成。参照图5，合成PNA单体的第一种途径是：在环化反应之前给被保护的线性主链产生被保护或去保护核酸碱基乙酸部分。作为替代，PNA单体的合成可以由环化被保护的线性主链开始、然后进行环化主链的去保护以及保护或者未保护核酸碱基乙酸部分的偶联，以产生预期产物。

方法1

如图5所示，具有通式V的线性部分是通过利用偶联剂对核酸碱基乙酸部分进行酰化而从被保护的具有通式II的线性主链合成制得。

参考图5，通过向处于合适无水溶剂中的具有通式II的被保护线性主链、核酸碱基乙酸部分、非亲核有机碱的混合物中加入偶联剂进行偶联反应。偶联剂的实例包括但不限于HATU、HOAt、HODhbt、HAPyU、TAPipU、HBTU、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU、TOTU、BOP、PyBOP、BroP、PyBroP、BOI、MSNT、TDO、DCC、EDCI、CDI、HOBt、HOSu、NEPIS、BBC、BDMP、BOMI、AOP、BDP、PyAOP、TDBTU、BOP-Cl、CIP、DEPBT、Dpp-Cl、EEDQ、FDPP、HOTT、TOTT、PyCloP。优选偶联剂是PyBOP或EDCI。非亲核有机碱的例子包括但不限于三乙胺、三丙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、以及N-乙基吗啉。优选的非亲核有机碱是N，N-二异丙基乙胺。适用的无水溶剂的例子包括但不限于氯仿、二氯甲烷、1，2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、DMF、和N-甲基吡咯烷酮。优选的溶剂为DMF。

E、J、R1、R2、R3和B代表的实体同上所述。

通过加入过量的氢氧离子源将具有通式V的化合物转化成相应的例如通式VI的酸。优选地，R3可以是甲基或乙基。氢氧离子源的实例包括但不限于氢氧化锂、氢氧化钠和氢氧化钾。优选的氢氧离子源是氢氧化锂。

E、J、R1、R2、和B代表的实体同上所述。

此外，参看图5，通过在羧酸活化的同时进行的羧酸的环化反应产生具有通式I的PNA单体。羧酸的活化可以通过肽合成的通用偶联剂在室温下进行。偶联剂的实例包括但不限于HATU、HOAt、HODhbt、HAPyU、TAPipU、HBTU、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU、TOTU、BOP、PyBOP、BroP、PyBroP、BOI、MSNT、TDO、DCC、EDCI、CDI、HOBt、HOSu、NEPIS、BBC、BDMP、BOMI、AOP、BDP、PyAOP、TDBTU、BOP-Cl、CIP、DEPBT、Dpp-Cl、EEDQ、FDPP、HOTT、TOTT、PyCloP。优选偶联剂是EDCI或PyBOP。非亲核有机碱包括但不限于三乙胺、三丙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、以及N-乙基吗啉。优选的非亲核有机碱是N，N-二异丙基乙胺。溶剂可没有限制地选自四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、DMF、或N-甲基吡咯烷酮。优选的溶剂为DMF。

可选地，可以通过利用氯甲酸烷基酯或烷酰基氯与非亲核有机碱形成混合酐而进行羧酸的活化。卤甲酸烷基酯或烷酰基氯的实例包括但不限于氯甲酸甲基酯、氯甲酸乙基酯、氯甲酸丙基酯、氯甲酸丁基酯、氯甲酸异丁酯、新戊酰氯、和金刚羰基氯(adamantinecarboxyl chloride)。最优选的酰基氯(酸性氯化物)是氯甲酸异丁酯。利用氯甲酸异丁酯的环化反应是通过在-30℃到10℃的温度范围内慢慢加入处于合适无水溶剂中的氯甲酸异丁酯到羧酸和非亲核有机碱的反应溶液中而实现。非亲核有机碱的例子包括但不限于三乙胺、三丙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、以及N-乙基吗啉。优选的非亲核有机碱是N-甲基吗啉。适用的无水溶剂的实例包括但不限于乙腈、氯仿、二氯甲烷、1，2-二甲氧乙烷、二乙醚、二异丙醚、和四氢呋喃，优选的溶剂为二氯甲烷和四氢呋喃。优选的反应温度是其中的反应混合物在加完氯甲酸异丁酯(-20℃下加入)后能缓慢升至0℃。

方法2

作为替代方法，根据本发明的PNA单体可以通过将保护或未保护的核酸碱基乙酸部分偶联至具有通式IV的环状前体来制备：

E、J、R1、R2、和HX代表的实体可以同上所述。

参考图6，环状前体与保护或未保护核酸碱基乙酸部分的偶联反应是在室温下，通过利用肽合成通用的偶联剂和非亲核有机碱而进行。偶联剂的实例包括但不限于HATU、HOAt、HODhbt、HAPyU、TAPipU、HBTU、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU、TOTU、BOP、PyBOP、BroP、PyBroP、BOI、MSNT、TDO、DCC、EDCI、CDI、HOBt、HOSu、NEPIS、BBC、BDMP、BOMI、AOP、BDP、PyAOP、TDBTU、BOP-Cl、CIP、DEPBT、DPP-Cl、EEDQ、FDPP、HOTT、TOTT、PyCloP。优选偶联剂是PyBOP。非亲核有机碱的例子包括但不限于三乙胺、三丙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、以及N-乙基吗啉。优选的非亲核有机碱是N，N-二异丙基乙胺。无水溶剂可以没有限制地为四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、DMF、或N-甲基吡咯烷酮。优选的溶剂为DMF。

核酸碱基和保护基团

本发明核酸碱基的实例包括但不限于图1和2所示的腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、脲苷、2，6-二氨基嘌呤，以及天然或非天然存在的核酸碱基。优选的核酸碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、和胸腺嘧啶。核酸碱基可以通过用于合成PNA寡聚物的保护基团来保护。保护基团可以是但不限于Boc、金刚烷氧羰基、苄氧羰基(P.E.Nielsen et al.，Science，1991，254，1497-1500；M.Egholm etal.，J.Am.Chem.Soc.，1992，114，9677-9679；M.Egholm et al.，J.4m.Chem.Soc.，1992，114，1895-1897；M.Egholm et al.，J.Chem.Soc.Chem.Commun.，1993，800-801；K.L.Dueholm et al.，J.Org.Chem.，1994，59，5767-5773；WO 92/20702)、4-甲氧苄氧羰基、3，4-二甲氧苄氧羰基、二苯甲基氧羰基(U.S.Patent No.6,133,444)，胡椒基氧羰基衍生物、2-甲硫乙氧羰基(U.S.Patent No.6,063,569)、Mmt(G.Breipohl et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1996，6，665-670)、或者酸不稳定保护基团(T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Group inOrganic Synthesis，3rd Edition，pp 494-653)。

T-单体的合成

T-单体是具有通式I-t的化合物：

E、J、R1、和R2代表的实体同上所述

用于T-单体、(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸(见下式)的前体由已知方法(K.L.Dueholm et.al.，J.Org Chem.，1994，59，5767-5773；WO92/20702)制备。

参见图7，通式V-t的化合物是通过将(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸与具有通式II的1，3，4-噻二唑或噻唑-2-磺酰基保护的主链酯在偶联剂存在下进行偶联反应而制得的，所得化合物的通式为：

E、J、R1、R2、和R3代表的实体同上所述。

R3优选为甲基或乙基。

具有通式V-t的化合物通过加入过量氢氧离子源而被转化成相应的酸，得到通式VI-t化合物。

E、J、R1、和R2代表的实体同上所述。

参照图7，羧酸的环化反应产生具有通式I-t的PNA T-单体，该环化反应在羧酸活化过程中同时进行。羧酸的活化可以通过肽合成的通用偶联剂或混合酸酐而进行。反应条件和试剂与前述相同。

可选地，见图8，PNA T-单体可以通过将(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸偶联至具有通式IV的哌嗪酮衍生物而制备。反应条件和试剂与前述相同。

C-单体的合成

C-单体是具有通式I-c的化合物：

E、J、R1、R2、R3、和R4代表的实体同上所述。

用于PNA C-单体的前体——经过适当保护的(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸(见下式)，通过已知方法如美国专利第6,133,444号；美国专利第6,063,569；Dueholm，et al.，J.Org.Chem.，1994，59，5767-5773；和WO 92/20702或其更改的方法而制得，其全部内容合并在此作为参考。

R4可以是苄基、二苯甲基、4-甲氧苄基、或胡椒基(，3，4亚甲二氧苯甲)衍生物。

参照图9，PNA C-单体可以通过在偶联剂存在下，使适当保护的(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸与具有通式II的1，3，4-噻二唑或者噻唑-2-磺酰基保护的主链酯发生偶联，得到下面的通式化合物：

E、J、R1、R2、R3、和R4代表的实体同上所述。

通过加入过量的氢氧离子源将具有通式V-c的化合物转化成相应的酸，以得到具有通式VI-c的化合物：

E、J、R1、R2、和R4代表的实体同上所述。

参见图9，羧酸的环化反应通过在活化羧酸过程中的同时反应产生具有通式I-c的PNA单体。羧酸的活化可以通过肽合成通用的偶联剂或混合酸酐而进行。反应条件和试剂与前述相同。

可选地，PNA C-单体可以通过将适当保护的(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸偶联至具有通式IV的哌嗪酮衍生物而制备。反应条件和试剂与前述相同。

A-单体的合成

A-单体是具有通式I-a的化合物：

E、J、R1、R2、和R4代表的实体同上所述。

用于PNA A-单体的前体——适当保护的(腺嘌呤-9-基)-乙酸(见下式)，通过已知方法如美国专利第6,133,444号；S.A.Thomsonet al.，Tetrahedron，1995，6179-6194，或其改进的方法而制得，其全部内容合并在此作为参考。

R4选自苄基、二苯甲基、4-甲氧苄基、和胡椒基衍生物。

参见图10，PNA A-单体通过将适当保护的(腺嘌呤-9-基)-乙酸与具有通式II的1，3，4-噻二唑或噻唑-2-磺酰基保护的主链酯在偶联剂存在下进行偶联反应而制得的，所得化合物的通式V-a为：

E、J、R1、R2、R3、和R4代表的实体同上所述。

具有通式V-a的化合物通过加入过量氢氧离子源而被转化成相应的酸，得到通式VI-a的化合物：

E、J、R1、R2、和R4代表的实体同上所述。

参照图12，羧酸的环化反应产生具有通式I-a的PNA单体，该环化反应在羧酸活化过程中同时进行。羧酸的活化可以通过肽合成的通用偶联剂或混合酸酐而进行。反应条件和试剂与前述相同。

可选地，PNA A-单体可以通过将适当保护的(腺嘌呤-9-基)-乙酸偶联至具有通式IV的哌嗪酮衍生物而制备。反应条件和试剂与前述相同。

G-单体的合成

G-单体是具有通式I-g的化合物：

E、J、R1、R2、和R4代表的实体同上所述。

用于PNA G-单体的前体——适当保护的(鸟嘌呤-9-基)-乙酸(见下式)，通过已知方法如美国专利第6,172,226号或其改进的方法而制得。

R4可以是苄基、二苯甲基、4-甲氧苄基、或胡椒基衍生物。

参见图11，PNA G-单体通过将适当保护的(鸟嘌呤-9-基)-乙酸与具有通式II的1，3，4-噻二唑或噻唑-2-磺酰基保护的主链酯在偶联剂存在下进行偶联反应而制得的，所得化合物的通式V-g为：

E、J、R1、R2、R3、和R4代表的实体同上所述。

具有通式V-g的化合物通过加入过量氢氧离子源而被转化成相应的酸，得到通式VI-g化合物：

E、J、R1、R2、和R4代表的实体同上所述。

参照图11，羧酸的环化反应产生具有通式I-g的PNA单体，该环化反应在羧酸活化过程中同时进行。羧酸的活化可以通过肽合成的通用偶联剂或混合酸酐而进行。反应条件和试剂与前述相同。

可选地，PNA G-单体可以通过将适当保护的(鸟嘌呤-9-基)-乙酸偶联至具有通式IV的哌嗪酮衍生物而制备。反应条件和试剂与前述相同。

PNA寡聚物的合成

已经在化学文献中报道的各种组合合成方法一般适用于使用本发明的单体合成PNA寡聚物。这些方法包括但不限于固相合成和液相合成。在用上述方法合成了PNA单体以后，通过在适宜的支持材料上的固相合成而构成PNA寡聚物，这些支持材料例如但不限于聚苯乙烯、聚氧乙烯改性的聚苯乙烯，例如CLEAR^、Tentagel^或可控孔径玻璃(Controlled Pore Glass)，它具有潜在含有可裂解(分开)的胺官能团的结合团。在固相合成中，本发明的第一PNA单体通过偶联反应而引入到固体支持物。下一步是预期的PNA寡聚物序列的系统构建。该构建包括重复的去保护/偶联/封端(加帽)循环。通过在有机碱存在下用适宜的硫醇进行处理，定量去除位于最后的偶联单体上的主链保护基团——1，3，4-噻二唑-2-磺酰基或噻唑-2-磺酰基，以释放末端的自由胺。一旦PNA寡聚物合成完毕，该寡聚物即从固态支持物上断开(分开)，并且通过在大约室温和含有甲酚作为阳离子清除剂的TFA中培养1-2小时而将核酸碱基保护基同时去除。

下面是可用于PNA寡聚物合成的通用反应循环周期的实例，并且不是用来在任何方面(如步骤顺序)限制本发明，因为只要使用本发明的PNA单体，任何寡聚物合成方法通常都可以使用。

1.从树脂中去除保护基团以活化胺官能团。

2.将氨基酸、链接剂、或者带有末端保护胺基团的PNA单体引入树脂中。

3.洗涤。

4.在有机碱存在下用乙酸酐封端。

5.洗涤。

6.在磺酰胺中断开已反应的乙酰基。

7.洗涤。

8.去保护磺酰基团。

9.洗涤。

10.加入单体。

11.回到第3步并重复第4～11步。

在用于寡聚物合成反应的单体的偶联反应过程中，可通过使用催化剂加快酰化反应，这些催化剂例如(但不限于)乙酸汞、氟化四甲基铵、氟化四乙基铵、氟化四丁基铵、氟化苄基三甲基铵、氟化铯、三丁基膦、三苯膦。优选的催化剂是氟化四丁基铵。另外，反应速度取决于使用的溶剂和反应温度。溶剂的实例包括但不限于DMF、N-甲基吡咯烷酮、二甲氧乙烷、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、DMSO、四氢呋喃、六甲基磷酰胺、环丁砜、异丙醇、乙醇、以及所选溶剂的混合物。优选的溶剂为DMF。在溶剂中含有有机碱条件下，通过使用硫醇将N-端氨基保护基团断开。硫醇的实例包括但不限于C2-C20烷基硫醇、4-甲氧基甲苯硫酚、4-甲基苯硫酚、3，6-二氧-1，8-辛硫醇、4-氯甲苯硫酚、苄基硫醇、N-乙酰半胱氨酸、N-(t-Boc)半胱氨酸甲酯、3-巯基丙酸甲酯、4-甲氧苯硫酚。有机碱的实例包括但不限于三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、哌啶、N-甲基吗啉、和1，8-二氮二环[5，4，0]十一-7-酮。优选的有机碱为N，N-二异丙基乙胺。

缩写名录。

t-Boc 叔丁氧羰基

AOP O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-三(二甲氨基)膦

BBC 1-苯并三唑-1-基氧-双(吡咯烷)脲六氟磷酸盐

BDMP 5-(1H-苯并三唑-1-基氧)-3，4-二氢-1-甲基2H-吡咯啉

(pyrrolium)六氯磷酸盐

BDP 苯并三唑-1-基磷酸二乙酯

BEMT 2-溴-3-乙基-4-甲基噻唑四氟硼酸盐

BTFFH 双(四亚甲基氟甲咪离子)六氟磷酸盐

BOMI 苯并三唑-1-基氧-N，N-二甲基methaniminium六氯锑酸盐

BOI 2-(苯并三唑-1-基)氧-1，3-二甲基-咪唑啉六氟磷酸盐

BOP 苯并三唑-1-氧-三(二甲胺基)磷六氟磷酸盐

BOP-Cl 氯双(2-氧-3-噁唑烷基)膦

BroP 溴三(二甲胺基)磷六氟磷酸盐

CDI 羰基二咪唑

CIP 2-氯-1，3-二甲基咪唑六氟磷酸盐

DMF 二甲基甲酰胺

DCC 1，3-二环己基碳化二亚胺

DEPBT 3-(二乙氧基磷酰氧)-1，2，3-苯三嗪-4(3H)-酮

Dpp-Cl 氯二苯基膦

EDCI 1-乙基-3-(3′-二甲氨基丙基)碳化二亚胺氢氯化物

EEDQ 2-乙氧-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉

Fmoc 9-芴基甲氧羰基

FDPP 二苯基亚膦酸五氟苯基酯

HAPyU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-双(四亚甲基)脲六氟磷酸盐

HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸盐

HBTU O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐

HOBt 羟基苯并三唑

HOAt 1-羟基-7-氮苯并三唑

HODhbt 3-羟基-3，4-二氢-4-氧-1，2，3-苯并三嗪

HOSu 羟基琥珀酰亚胺

HOTT S-(1-环氧-2-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基硫脲六氟磷酸盐

MSNT 2，4，6-1，3，5三甲基苯磺酰基-3-硝基-1，2，4-三唑

Mmt 4-甲氧苯基二苯甲基

NEPIS N-乙基-5-苯基异噁唑-3′-sulfonate

PyAOP 7-氮杂苯并三唑氧三(吡咯烷)膦六氟磷酸盐

PyBOP 苯并三唑基-1-氧-三吡咯烷膦六氟磷酸盐

PyBroP 溴代三吡咯烷膦六氟磷酸盐

PyCloP 氯代三(吡咯烷)膦六氟磷酸盐

TAPipU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-双(五亚甲基)脲四氟硼酸盐

TBTU O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

TDO 2，5-二苯基-2，3-二氢-3-氧-4-羟基噻酚二氧化物

TFA 三氟乙酸

TFFH 四甲基氟formamidinium六氟磷酸盐

TOTT S-(1-环氧-2-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基硫脲四氟硼酸盐

TDBTU 2-(3，4-二氢-4-氧-1，2，3-苯三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

TNTU O-[(5-降莰烷-2，3-草酸亚胺)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

TOTU O-[(氰(乙氧羰基)亚甲基)氨基]-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

TPTU O-(1，2-二氢-2-氧-1-吡啶基-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

TSTU O-(N-琥珀酰亚胺基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

通过下面的实施例更详细说明本发明，除非特别指出，这些实施例不用来限制本发明。

实施例

实施例1 N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

在0℃下，向溶于50mL二氯甲烷中的N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl(1.4g，6.4mmol)的溶液中加入5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯(1.5g，5.1mmol)，其中，N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl按照Will(D.W.Will et al.，Tetrahedron，1995，51，12069.)披露的方法制备。然后慢慢加入三乙胺(2.7mL)。将得到的反应混合物在室温再搅拌2小时，用水洗涤(30mL)。有机层用MgSO₄干燥然后过滤。将滤液浓缩，然后通过柱层析分离，得到固体的题述化合物(1.1g，2.7mmol，53％)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ8.08(d，2H)，7.66(d，2H)，4.03(q，2H)，3.26(s，2H)，3.15(t，2H)，2.64(t，2H)，1.14(t，3H)。

实施例2 N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ8.05(d，2H)，7.60-7.56(m，3H)，4.02(q，2H)，3.26(s，2H)，3.16(t，2H)，2.64(t，2H)，1.14(t，3H)

实施例3 N-{2-[5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ8.27(s，1H)，7.80(d，1H)，7.75(d，1H)，4.03(q，2H)，3.35(s，2H)，3.21(t，2H)，2.71(t，2H)，1.15(t，3H)。

实施例4 N-{2-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ8.42(d，2H)，8.27(d，2H)，6.40(brs，2H)，4.05(q，2H)，3.35(s，2H)，3.21(t，2H)，2.71(t，2H)，1.15(t，3H)。

实施例5 N-{2-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HC与5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(MHz；DMSO-d₆)δ8.16(d，1H)，7.81-7.78(m，3H)，4.02(q，2H)，3.34(s，2H)，3.21(t，2H)，2.70(t，2H)，1.15(t，3H)。

实施例6 N-{2-[5-(2-氯-4-硝基-苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ8.60(d，1H)，8.54(d，1H)，8.40(dd，1H)4.05(q，2H)，3.27(s，2H)，3.19(t，2H)，2.67(t，2H)，1.16(t，3H)。

实施例7 N-{2-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-(2，4-二氯-苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ8.29(d，1H)，7.98(d，1H)，7.70(dd，1H)，5.65(brs，1H)，4.05(q，2H)，3.28(s，2H)，3.19(t，2H)，2.67(t，2H)，1.17(t，3H)。

实施例8 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ8.40(d，1H)，8.05(dd，1H)，8.02(d，1H)4.07(q，2H)，3.30(s，2H)，3.19(t，2H)，2.67(t，2H)，1.18(t，3H)。

实施例9 N-[2-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氯反应。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ4.07(q，2H)，3.27(s，2H)，3.09(t，2H)，2.82(s，3H)，2.62(t，2H)，1.18(t，3H)。

实施例10 N-[2-(4-甲基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与4-甲基-噻唑-2-磺酰氯反应。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)87.68(s，1H)，4.07(q，2H)，3.26(s，2H)，3.02(t，2H)，2.58(t，2H)，2.43(s，3H)，1.18(t，3H)。

实施例11 N-[2-(5-苯甲酰基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-苯甲酰基-4-苯基-噻唑-2-磺酰氯反应。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ7.46(d，2H)，7.36-7.24(m，4H)，7.19-7.11(m，4H)，4.05(q，2H)，3.28(s，2H)，3.19(t，2H)，2.66(t，2H)，1.16(t，3H)。

实施例12 N-[2-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯

采用与实施例1相同的操作合成题述化合物，将N-(2-氨基乙基)-甘氨酸乙酯2HCl与5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰氯反应。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ7.68(d，2H)，7.51(t，2H)，7.44(t，1H)，4.05(q，2H)，3.26(s，2H)，3.10(t，2H)，2.64(s，3H)，2.63(t，2H)，1.16(t，3H)。

实施例13 N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

向溶于30ml DMF中的N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯(4.05g，10mmol)溶液中加入1.68g(11mmol)1-羟基苯并三唑一水合物、2.27g(11mmol)的二环己基碳化二亚胺和1.84g(10mmol)的(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸。将反应混合物在室温下搅拌3小时。过滤除去沉淀出的二环己基脲，真空浓缩滤液，然后用硅胶柱进行柱层析，得到题述化合物(4.85g，8.5mmol，85％)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.6H)，11.26(s，0.4H)，9.15(brs，0.6H)，9.00(brs，0.4H)，8.07(d，2H)，7.67(d，2H)，7.31(s，0.6H)，7.24(s，0.4H)，4.65(s，1.2H)，4.47(s，0.8H)，4.31(s，0.8H)，4.16(q，0.8H)，4.06(q，1.2H)，4.03(s，1.2H)，3.55(t，1.2H)，3.45-3.38(m，2H)，3.23(t，0.8H)，1.73(s，3H)，1.21(t，1.2H)，1.16(t，1.8H)。

实施例14 N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯与(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.6H)，11.26(s，0.4H)，9.08(brs，1H)，8.05(d，2H)，7.66-7.57(m，3H)，7.32(s，0.6H)，7.24(s，0.4H)，4.65(s，1.2H)，4.47(s，0.8H)，4.32(s，0.8H)，4.16(q，0.8H)，4.06(q，1.2H)，4.04(s，1.2H)，3.56(t，1.2H)，3.43-3.38(m，2H)，3.24(t，0.8H)，1.73(s，3H)，1.21(t，1.2H)，1.16(t，1.8H)。

实施例15 N-{2-[5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯与(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.27(s，0.6H)，11.25(s，0.4H)，9.13(brs，1H)，8.26(d，0.4H)，8.25(d，0.6H)，7.81-7.74(m，2H)，7.32(s，0.6H)，7.23(s，0.4H)，4.63(s，1.2H)，4.47(s，0.8H)，4.32(s，0.8H)，4.16(q，0.8H)，4.06(q，1.2H)，4.04(s，1.2H)，3.55(t，1.2H)，3.45-3.38(m，2H)，3.25(t，0.8H)，1.73(s，3H)，1.22(t，1.2H)，1.16(t，1.8H)。

实施例16 N-{2-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯与(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.20(s，1H)，8.37(d，2H)，8.24(d，2H)，7.49(s，1H)，4.82(s，1.7H)，4.45(s，0.3H)，4.42(s，0.3H)，4.13(q，0.3H)，4.04(q，1.7H)，4.01(s，1.7H)，3.39(t，1.7H)，3.28(t，0.3H)，3.16(t，1.7H)，3.03(t，0.3H)，1.74(s，3H)，1.21(t，0.6H)，1.16(t，2.4H)。

实施例17 N-{2-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.29(s，0.6H)，11.28(s，0.4H)，9.21(brs，0.6H)，9.10(brs，0.4H)，8.26-8.21(m，1H)，7.97-7.89(m，3H)，7.33(d，0.6H)，7.26(d，0.4H)，4.68(s，1.2H)，4.45(s，0.4H)，4.33(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.08(q，1.2H)，4.07(s，1.2H)，3.59(t，1.2H)，3.47-3.40(m，2H)，3.28(t，0.8H)，1.74(s，3H)，1.24(t，1.2H)，1.18(t，1.8H)。

实施例18 N-{2-[5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯与(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.6H)，11.25(s，0.4H)，9.16(brs，1H)，8.62-8.57(m，1H)，8.54-8.48(m，1H)，8.42-8.36(m，1H)，7.33(s，0.6H)，7.24(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.47(s，0.8H)，4.33(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.08(q，1.2H)，4.06(s，1.2H)，3.57(t，1.2H)，3.45-3.40(m，2H)，3.28(t，0.8H)，1.75(s，1.8H)，1.74(s，1.2H)，1.24(t，1.2H)，1.18(t，1.8H)。

实施例19 N-{2-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.6H)，11.27(s，0.4H)，9.11(brs，1H)，8.28(d，0.6H)，8.27(d，0.4H)，8.00(d，0.6H)，7.98(d，0.4H)，7.72-7.68(m，1H)，7.33(s，0.6H)，7.25(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.48(s，0.8H)，4.33(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.08(q，1.2H)，4.06(s，1.2H)，3.57(t，1.2H)，3.45-3.39(m，2H)，3.26(t，0.8H)，1.75(s，3H)，1.25(t，1.2H)，1.17(t，1.8H)。

实施例20 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.29(s，0.6H)，11.28(s，0.4H)，9.20(brs，1H)，8.41-8.40(m，1H)，8.07-7.97(m，2H)，7.33(s，0.6H)，7.26(s，0.4H)，4.67(s，1.2H)，4.48(s，0.8H)，4.33(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.08(q，1.2H)，4.06(s，1.2H)，3.58(t，1.2H)，3.46-3.40(m，2H)，3.28(t，0.8H)，1.75(s，3H)，1.24(t，1.2H)，1.18(t，1.8H)。

实施例21 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(二苯甲氧基羰基)-胞嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[4-N-(二苯甲氧基羰基)-胞嘧啶-1-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.97(s，1H)，9.16(brs，1H)，8.40(d，0.6H)，8.38(d，0.4H)，8.06-7.94(m，2H)，7.91(d，0.6H)，7.85(d，0.4H)，7.45(d，4H)，7.37(t，4H)，7.29(t，2H)，6.96-6.93(m，1H)，6.80(s，1H)，4.81(s，1.2H)，4.63(s，0.8H)，4.36(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.07(s，1.2H)，4.06(q，1.2H)，3.61(t，1.2H)，3.48-3.40(m，2H)，3.27(t，0.8H)，1.25(t，1.2H)，1.17(t，1.8H)。

实施例22 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N{[6-N-(二苯甲氧基羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[6-N-(二苯甲氧基羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.90(s，0.45H)，10.89(s，0.55H)，9.30(brs，0.55H)，9.12(brs，0.45H)，8.59(s，0.45H)，8.58(s，0.55H)，8.39(d，0.55H)，8.38(d，0.45H)，8.34(s，0.55H)，8.33(s，0.45H)，8.02-7.97(m，1H)，7.92(d，0.55H)，7.89(d，0.45H)，7.53(d，4H)，7.38(t，4H)，7.29(t，2H)，6.83(s，1H)，5.39(s，1.1H)，5.18(s，0.9H)，4.48(s，0.9H)，4.23(q，0.9H)，4.09(s，1.1H)，4.03(q，1.1H)，3.73(t，1.1H)，3.54(t，1.1H)，3.45(t，0.9H)，3.29(t，0.9H)，1.27(t，1.35H)，1.15(t，1.65H)

实施例23 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(二苯甲氧基羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[2-N-(二苯甲氧基羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.65(brs，1H)，11.25(s，0.45H)，11.23(s，0.55H)，9.20(brs，1H)，8.39(s，1H)，8.03-7.91(m，2H)，7.82(s，0.55H)，7.80(s，0.45H)，7.46(d，4H)，7.38(t，4H)，7.30(dt，2H)，6.87(s，1H)，5.15(s，1.1H)，4.96(s，0.9H)，4.47(s，0.9H)，4.22(q，0.9H)，4.10(s，1.1H)，4.09(q，1.1H)，3.69(t，1.1H)，3.52(t，0.9H)，3.45(t，1.1H)，3.29(t，0.9H)，1.26(t，1.35H)，1.16(t，1.65H)

实施例24 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(4-甲氧苄氧羰基)-胞嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[4-N-(4-甲氧苄氧羰基)-胞嘧啶-1-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.69(s，1H)，9.21(brs，0.6H)，9.09(brs，0.4H)，8.40(s，1H)，8.07-7.96(m，2H)，7.92(d，0.6H)，7.86(d，0.4H)，7.36(d，2H)，7.02(d，0.6H)，7.01(d，1H)，6.94(d，2H)，5.12(s，2H)，4.81(s，1.2H)，4.64(s，0.8H)，4.37(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.08(s，1.2H)，4.08(q，1.2H)，3.76(s，3H)，3.62(t，1.2H)，3.47(t，1.2H)，3.43(t，0.8H)，3.28(t，0.8H)，1.24(t，1.2H)，1.17(t，1.8H)。

实施例25 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.56(s，1H)，10.59(s，0.55H)，9.31(brs，0.55H)，9.11(brs，0.45H)，8.57(s，0.45H)，8.56(s，0.55H)，8.40(d，0.55H)，8.39(d，0.45H)，8.31(s，0.55H)，8.30(s，0.45H)，8.03-7.99(m，1H)，7.93(d，0.55H)，7.91(d，0.45H)，7.39(d，1H)，6.95(d，2H)，5.38(s，1.1H)，5.17(s，0.9H)，5.14(s，2H)，4.48(s，0.9H)，4.23(q，0.9H)，4.08(s，1.1H)，4.07(q，1.1H)，3.76(s，3H)，3.72(t，1.1H)，3.54(t，1.1H)，3.45(t，0.9H)，3.29(t，0.9H)，1.27(t，1.35H)，1.15(t，1.65H)

实施例26 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(4-甲氧苄氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[2-N-(4-甲氧苄氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.39(brs，0.45H)，11.36(brs，0.55H)，9.20(brs，1H)，8.39(s，1H)，8.01(d，1H)，7.95(d，0.55H)，7.92(d，0.45H)，7.82(s，0.55H)，7.79(s，0.45H)，7.37(d，2H)，6.95(d，2H)，5.17(s，2H)，5.13(s，1.1H)，4.93(s，0.9H)，4.45(s，0.9H)，4.21(q，0.9H)，4.08(s，1.1H)，4.07(q，1.1H)，3.76(s，3H)，3.66(t，1.1H)，3.49(t，1.1H)，3.43(t，0.9H)，3.28(t，0.9H)，1.25(t，1.35H)，1.16(t，1.65H)。

实施例27 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基-N-{[4-N-(胡椒基氧羰基)-胞嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[4-N-(胡椒基氧羰基)-胞嘧啶-1-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.71(s，1H)，9.22(brs，0.6H)，9.08(brs，0.4H)，8.40(s，1H)，8.07-7.96(m，2H)，7.92(d，0.6H)，7.86(d，0.4H)，7.02(d，0.6H)，7.00(d，0.4H)，6.99(s，1H)，6.91(s，2H)，6.02(s，2H)，5.08(s，2H)，4.81(s，1.2H)，4.64(s，0.8H)，4.37(s，0.8H)，4.18(q，0.8H)，4.08(s，1.2H)，4.08(q，1.2H)，3.62(t，1.2H)，3.47(t，1.2H)，3.43(t，0.8H)，3.28(t，0.8H)，1.24(t，1.2H)，1.17(t，1.8H)。

实施例28 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(胡椒基氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰氨基]-乙基}-甘氨酸乙酯和[6-N-(胡椒基氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.60(s，0.45H)，10.59(s，0.55H)，9.31(brs，0.55H)，9.11(brs，0.45H)，8.58(s，0.45H)，8.57(s，0.55H)，8.40(d，0.55H)，8.39(d，0.45H)，8.32(s，0.55H)，8.31(s，0.45H)，8.03-7.98(m，1H)，7.93(d，0.55H)，7.90(d，0.45H)，7.05(s，1H)，6.95(d，1H)，6.91(d，1H)，6.02(s，2H)，5.38(s，1.1H)，5.17(s，0.9H)，5.11(s，2H)，4.48(s，0.9H)，4.23(q，0.9H)，4.08(s，1.1H)，4.07(q，1.1H)，3.73(t，1.1H)，3.54(t，1.1H)，3.45(t，0.9H)，3.30(t，0.9H)，1.27(t，1.35H)，1.15(t，1.65H)。

实施例29 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(胡椒基氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯和N-{[2-N(胡椒基氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.37(brs，0.4H)，11.35(brs，0.6H)，9.20(brs，1H)，8.39(s，1H)，8.03-7.99(m，1H)，7.95(d，0.6H)，7.92(d，0.4H)，7.82(s，0.6H)，7.79(s，0.4H)，7.01(s，1H)，6.94(d，1H)，6.91(d，1H)，6.02(s，2H)，5.14(s，3.2H)，4.93(s，0.8H)，4.45(s，0.8H)，4.21(q，0.8H)，4.08(s，1.2H)，4.07(q，1.2H)，3.65(t，1.2H)，3.48(t，1.2H)，3.43(t，0.8H)，3.27(t，0.8H)，1.25(t，1.2H)，1.16(t，1.8H)。

实施例30 N-[2-(5-苯甲酰-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-[2-(5-苯甲酰基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯和N-(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.26(s，0.6H)，11.24(s，0.4H)，8.90(brs，0.6H)，8.78(brs，0.4H)，7.72(d，2H)，7.58-7.53(m，1H)，7.47-7.43(m，2H)，7.38-7.32(m，2H)，7.31-7.22(m，4H)，4.61(s，1.2H)，4.48(s，0.8H)，4.32(s，0.8H)，4.15(q，0.8H)，4.06(s，1.2H)，4.05(q，0.8H)，3.56(t，1.2H)，3.44(t，2H)，3.30(t，0.8H)，1.72(s，1.8H)，1.71(s，1.2H)，1.21(t，1.2H)，1.15(t，1.8H)。

实施例31 N-[2-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸乙酯

运用与实施例13同样的操作，将N-[2-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯和N-(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.26(s，1H)，8.58(brs，0.6H)，8.50(brs，0.4H)，7.68(d，2H)，7.53-7.47(m，3H)，7.46-7.40(m，2H)，7.27(s，0.6H)，7.25(s，4H)，4.60(s，1.2H)，4.47(s，0.8H)，4.29(s，0.8H)，4.13(q，0.8H)，4.05(q，0.8H)，4.04(s，1.2H)，3.52(t，1.2H)，3.40(t，0.8H)，3.34(t，1.2H)，3.17(t，0.8H)，2.64(s，3H)，1.72(s，3H)，1.20(t，1.2H)，1.15(t，1.8H)。

实施例32 N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

将N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯(2.85g，5.0mmol)悬浮在10ml四氢呋喃和20ml水的混和溶剂中。加入氢氧化锂单水合物(0.84g，20mmol)，并在室温下搅拌10分钟。当薄层色谱显示反应完全后，加入20mL水，然后用1N的盐酸酸化反应混合物，将pH值调在3.0和3.5之间。过滤除去沉淀固体，水洗、吹氮气干燥，得到题述化合物(2.44g，4.5mmol，90％)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.5H)，11.24(s，0.5H)，8.09-8.05(m，2H)，7.68-7.65(m，2H)，7.31(s，0.5H)，7.24(s，0.5H)，4.64(s，1H)，4.44(s，1H)，4.13(s，1H)，3.95(s，1H)，3.54(t，1H)，3.45-3.38(m，2H)，3.25(t，1H)，1.73(s，1.5H)，1.71(s，1.5H)。

实施例33 N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.55H)，11.25(s，0.45H)，9.05(brs，1H)，8.05(d，2H)，7.68-7.57(m，3H)，7.32(s，0.55H)，7.24(s，0.45H)，4.64(s，1.1H)，4.46(s，0.9H)，4.20(s，0.9H)，3.97(s，1.1H)，3.54(t，1.1H)，3.45-3.37(m，2H)，3.24(t，0.9H)，1.74(s，1.1H)，1.73(s，0.9H)。

实施例34 N-{2-[5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.27(s，0.6H)，11.24(s，0.4H)，9.13(brs，1H)，8.26(d，0.4H)，8.25(d，0.6H)，7.82-7.25(m，2H)，7.32(s，0.6H)，7.24(s，0.4H)，4.62(s，1.2H)，4.45(s，0.8H)，4.20(s，0.8H)，3.97(s，1.2H)，3.54(t，1.2H)，3.43-3.37(m，2H)，3.26(t，0.8H)，1.73(s，3H)。

实施例35 N-{2-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ12.85(brs，1H)，11.29(s，0.5H)，11.25(s，0.5H)，8.43-8.39(m，2H)，8.36-8.32(m，2H)，7.33(s，0.5H)，7.25(s，0.5H)，4.65(s，1H)，4.47(s，1H)，4.22(s，1H)，3.98(s，1H)，3.56(t，1H)，3.42(t，2H)，3.27(t，1H)，3.03(t，0.3H)，1.75(s，1.5H)，1.74(s，1.5H)。

实施例36 N-{2-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ12.95(brs，1H)，11.30(s，0.55H)，11.28(s，0.45H)，9.22(brs，0.55H)，9.08(brs，0.45H)，8.27-8.23(m，1H)，7.99-7.89(m，3H)，7.34(s，0.55H)，7.27(s，0.45H)，4.67(s，1.1H)，4.48(s，0.9H)，4.24(s，0.9H)，4.00(s，1.1H)，3.57(t，1H)，3.47-3.41(m，2H)，3.33(t，0.9H)，1.75(s，3H)。

实施例37 N-{2-[5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.55H)，11.24(s，0.45H)，9.26(brs，1H)，8.62-8.57(m，1H)，8.55-8.48(m，1H)，8.43-8.36(m，1H)，7.34(s，0.55H)，7.24(s，0.45H)，4.65(s，1.1H)，4.46(s，0.9H)，4.20(s，0.9H)，3.99(s，1.1H)，3.56(t，1.1H)，3.46-3.39(m，2H)，3.29(t，0.9H)，1.75(s，1.1H)，1.73(s，0.9H)。

实施例38 N-2-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.28(s，0.5H)，11.25(s，0.5H)，9.23(brs，1H)，8.29(d，0.5H)，8.27(d，0.5H)，7.99(d，0.5H)，7.97(d，0.5H)，7.72-7.67(m，1H)，7.34(s，0.5H)，7.25(s，0.5H)，4.65(s，1H)，4.46(s，1H)，4.17(s，1H)，3.99(s，1H)，3.56(t，1H)，3.45-3.38(m，2H)，3.28(t，1H)，1.73(s，3H)。

实施例39 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.29(s，0.5H)，11.27(s，0.5H)，9.28(brs，1H)，8.41-8.39(m，1H)，8.06-7.97(m，2H)，7.33(s，0.5H)，7.26(s，0.5H)，4.66(s，1H)，4.47(s，1H)，4.19(s，1H)，3.99(s，1H)，3.57(t，1H)，3.46-3.39(m，2H)，3.29(t，1H)，1.75(s，1H)，1.74(s，1H)。

实施例40 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(二苯甲氧基羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(二苯甲氧基羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯，制得题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.95(brs，1H)，9.16(brs，1H)，8.39(d，0.45H)，8.37(d，0.55H)，8.06-7.94(m，2H)，7.91(d，0.45H)，7.84(d，0.55H)，7.45(d，4H)，7.37(t，4H)，7.29(t，2H)，6.94(d，0.45H)，6.90(d，0.55H)，6.80(s，1H)，4.79(s，0.9H)，4.58(s，1.1H)，4.07(s，0.9H)，3.98(s，1.1H)，3.56(t，1.1H)，3.46(t.0.9H)，3.41(t，1.1H)，3.30(t，0.9H)。

实施例41 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(二苯甲氧基羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(二苯甲氧基羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹HNMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.89(s，1H)，8.57(s，0.4H)，8.56(s，0.6H)，8.38(d，0.4H)，8.35(d，0.6H)，8.34(s，0.4H)，8.32(s，0.6H)，8.01-7.91(m，1.4H)，7.82(d，0.6H)，7.54(d，4H)，7.38(t，4H)，7.29(t，2H)，6.83(s，1H)，5.37(s，0.8H)，5.11(s，1.2H)，4.12(s，1.2H)，3.97(s，0.8H)，3.78(t，0.8H)，3.54(t，0.8H)，3.44(t，1.2H)，3.33(t，1.2H)。

实施例42 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(二苯甲氧基羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(二苯甲氧基羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹HNMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.20(brs，1H)，8.38(d，0.3H)，8.35(d，0.7H)，8.04-7.79(m，3H)，7.81(d，1H)，7.46(d，4H)，7.37(t，4H)，7.28(dt，2H)，6.86(s，0.3H，6.85(s，0.7H)，5.13(s，0.6H)，4.89(s，1.4H)，4.02(s，1.4H)，3.96(s，0.6H)，3.66(t，0.6H)，3.51(t，0.6H)，3.44(t，1.4H)，3.34(t，1.4H)。

实施例43N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(4-甲氧苄氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(4-甲氧苄氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.71(brs，1H)，8.40(s，0.5H)，8.38(s，0.5H)，8.07-7.96(m，2H)，7.92(d，0.5H)，7.85(d，0.5H)，7.36(d，2H)，7.02(d，0.5H)，6.98(d，0.5H)，6.94(d，2H)，5.11(s，2H)，4.80(s，1H)，4.59(s，1H)，4.09(s，1H)，3.98(s，1H)，3.76(s，3H)，3.59(t，1H)，3.47(t，1H)，3.42(t，1H)，3.30(t，1H)。

实施例44 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹HNMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.56(s，1H)，8.57(s，0.45H)，8.56(s，0.55H)，8.39(d，0.45H)，8.38(d，0.55H)，8.31(s，0.45H)，8.30(s，0.55H)，8.02-7.96(m，1H)，7.93(d，0.45H)，7.87(d，0.55H)，7.39(d，2H)，6.95(d，2H)，5.37(s，0.9H)，5.14(s，2H)，5.13(s，1.1H)，4.27(s，1.1H)，4.00(s，0.9H)，3.76(s，3H)，3.71(t，0.9H)，3.54(t，0.9H)，3.44(t，1.1H)，3.31(t，1.1H)

实施例45 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(4-甲氧苄氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(4-甲氧苄氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.38(s，1H)，11.35(brs，1H)，9.30(brs，0.5H)，9.12(brs，0.5H)，8.39(s，1H)，8.01(d，1H)，7.95(d，0.5H)，7.92(d，0.5H)，7.82(s，0.5H)，7.79(s，0.5H)，7.37(d，2H)，6.95(d，2H)，5.17(s，2H)，5.11(s，1H)，4.92(s，1H)，4.34(s，1H)，4.01(s，1H)，3.76(s，3H)，3.65(t，1H)，3.50(t，1H)，3.42(t，1H)，3.30(t，1H)。

实施例46 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(胡椒基氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(胡椒基氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹HNMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.71(brs，1H)，8.40(s，1H)，8.07-7.95(m，2H)，7.92(d，0.5H)，7.85(d，0.5H)，7.00(d，0.5H)，6.99(s，1H)，6.98(d，0.5H)，6.91(s，2H)，6.02(s，2H)，5.08(s，2H)，4.80(s，1H)，4.60(s，1H)，4.15(s，1H)，3.99(s，1H)，3.60(t，1H)，3.46(t，1H)，3.42(t，1H)，3.29(t，1H)。

实施例47 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(胡椒基氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(胡椒基氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.59(s，1H)，8.57(s，0.45H)，8.56(s，0.55H)，8.39(d，0.45H)，8.37(d，0.55H)，8.32(s，0.45H)，8.30(s，0.55H)，8.02-7.96(m，1H)，7.93(d，0.45H)，7.86(d，0.55H)，7.05(s，1H)，6.96(d，1H)，6.91(d，1H)，6.02(s，2H)，5.37(s，0.9H)，5.13(s，1.1H)，5.12(s，2H)，4.21(s，1.1H)，3.99(s，0.9H)，3.71(t，0.9H)，3.54(t，0.9H)，3.44(t，1.1H)，3.32(t，1.1H)。

实施例48 N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(胡椒基氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(胡椒基氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.50(brs，1H)，11.35(s，1H)，8.39(s，1H)，8.03-7.94(m，2.5H)，7.90(d，0.5H)，7.82(s，0.5H)，7.79(s，0.5H)，7.01(s，1H)，6.93(d，1H)，6.91(d，1H)，6.02(s，2H)，5.14(s，2H)，5.11(s，1H)，4.91(s，1H)，4.24(s，1H)，4.00(s，1H)，3.65(t，1H)，3.50(t，1H)，3.42(t，1H)，3.30(t，1H)。

实施例49 N-[2-(5-苯甲酰-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-[2-(5-苯甲酰-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.25(s，0.55H)，11.21(s，0.45H)，8.96(brs，1H)，7.72(d，2H)，7.58-7.53(m，1H)，7.47-7.43(m，2H)，7.38-7.32(m，2H)，7.31-7.22(m，4H)，4.60(s，1.1H)，4.46(s，0.9H)，4.17(s，0.9H)，3.99(s，1.1H)，3.54(t，1.1H)，3.44(t，2H)，3.31(t，0.9H)，1.73(s，1.65H)，1.71(s，1.35H)。

实施例50 N-[2-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸

运用与实施例32同样的操作，通过N-[2-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸乙酯的反应，以制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.26(s，1H)，8.61(brs，0.55H)，8.56(brs，0.45H)，7.68(d，2H)，7.53-7.47(m，2H)，7.46-7.40(m，1H)，7.27(s，0.55H)，7.24(s，45H)，4.58(s，1.1H)，4.45(s，0.9H)，4.17(s，0.9H)，3.97(s，1.1H)，3.49(t，1.1H)，3.38(t，0.9H)，3.33(t，1.1H)，3.17(t，0.9H)，2.63(s，3H)，1.73(s，3H)。

实施例51 N-[2-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸

往N-[2-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯(616mg，2mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)中加入溶于3ml水的氢氧化锂单水合物(252mg，6mmol)。在室温下搅拌1小时后，往反应混合物中加入重碳酸二叔丁酯(655mg，3mmol)。将得到的反应混合物搅拌30分钟。当用薄层色谱检测到反应完全后，在真空下去除四氢呋喃。残余溶液用乙醚(100mL)洗涤。在水层中加入2N盐酸，酸化至pH值为3，然后用50ml二氯甲烷提取。有机层用MgSO₄干燥，然后过滤。真空浓缩滤液得到预期产物(690mg，91％)。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ8.82(brs，1H)，3.84(s，1H)，3.81(s，1H)，3.28(t，2H)，3.21-3.16(m，2H)，2.82(s，3H)，1.38(s，4.5H)，1.33(s，4.5H)。

实施例52 N-[2-(4-甲基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸

运用与实施例51同样的操作，通过N-[2-(4-甲基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-甘氨酸乙酯的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ12.50(brs，1H)，8.29(s，0.5H)，8.27(s，0.5H)，7.59(s，1H)，3.72(s，1H)，3.69(s，1H)，3.14(t，2H)，3.06-2.98(m，2H)，2.34(s，3H)，1.27(s，4.5H)，1.23(s，4.5H)。

实施例53 N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸

运用与实施例51同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸乙酯的反应制备题述化合物。¹HNMR(500MHz；DMSO-d₆)δ9.01(brs，1H)，8.11-8.08(m，2H)，7.68(d，2H)，3.84(s，1H)，3.80(s，1H)，3.30-3.23(m，4H)，1.38(s，4.5H)，1.30(4.5H)。

实施例541-(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基)-哌嗪-2-酮，三氟乙酸盐

往N-[2-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸(760mg，2mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入二环己基碳化二亚胺(516mg，2.5mmol)，在室温搅拌2小时后，过滤除去沉淀。浓缩滤液至大约3ml，并冷却到0℃。往冷溶液中加入2mL三氟乙酸。在同样温度搅拌混合物2小时，再缓缓加入10mL乙醚。过滤沉淀产物，用乙醚洗涤，真空干燥，得到白色固体(602mg，80％)。¹H-NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.13(brs，2H)，4.16(t，2H)，3.95(s，2H)，3.54(t，2H)，2.87(s，3H)。

实施例551-(4-甲基-噻唑-2-磺酰基)-哌嗪-2-酮，三氟乙酸盐

运用与实施例54同样的操作，通过N-[2-(4-甲基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹HNMR(400MHz；DMSO-d₆)δ9.20(brs，2H)，7.94(s，1H)，4.08(t，2H)，3.94(s，2H)，3.52(t，2H)，2.46(s，3H)。

实施例56 1-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-哌嗪-2-酮，三氟乙酸盐

运用与实施例54同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-(叔丁氧羰基)-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ9.37(brs，2H)，8.15(d，2H)，7.70(d，2H)，4.14(t，2H)，3.98(s，2H)，3.56(t，2H)，1.41(s，9H)

实施例57 1-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

将1-乙基-3-(3′-二甲氨基丙基)碳化二亚胺氢氯化物(0.21g，1.1mmol)加到N-{2-[5-(4-氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-甘氨酸(0.54g，1.0mmol)的DMF(5mL)溶液中。在室温搅拌反应混合物3小时。往混合物中加入50mL水。然后过滤沉淀的固体，水洗，吹氮气干燥，得到题述化合物(0.45g，0.86mmol，86％)。

¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.29(s，0.6H)，11.28(s，0.4H)，8.13(d，2H)，7.68(d，2H)，7.33(s，0.6H)，7.27(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.57(s，0.8H)，4.43(s，0.8H)，4.29(s，1.2H)，4.16(t，1.2H)，4.02(t，0.8H)，3.94(t，1.2H)，3.84(t，0.8H)，1.74(s，3H)。

实施例58 1-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基)-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

往N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸(1.02g，2mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中加入N-甲基吗啉(3.3mL，3mmol)，然后混合物冷却至-20℃。在同样温度下搅拌5分钟后，向混合物中加入氯甲酸异丁酯(3.4mL，26mmol)。慢慢将反应混合物升温到0℃，反应1小时。然后真空挥发反应混合物，然后溶于乙酸乙酯和乙腈的混合物。溶液用盐水洗涤，硫酸钠干燥和过滤。真空挥发滤液，用四氢呋喃-乙醚(1/1，v/v)研磨以沉淀固体。滤出固体，并用乙醚洗涤固体，真空干燥得到题述化合物(883mg，90％)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.30(s，0.6H)，11.29(s，0.4H)，8.10(d，2H)，7.68-7.57(m，3H)，7.33(s，0.6H)，7.27(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.58(s，0.8H)，4.43(s，0.8H)，4.30(s，1.2H)，4.17(t，1.2H)，4.02(t，0.8H)，3.95(t，1.2H)，3.85(t，0.8H)，1.73(s，3H)。

实施例59 1-[5-(2，5-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-[2-(5-苯基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.30(s，0.6H)，11.28(s，0.4H)，8.31(s，1H)，7.85-7.75(m，2H)，7.33(s，0.6H)，7.27(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.58(s，0.8H)，4.43(s，0.8H)，4.30(s，1.2H)，4.18(t，1.2H)，4.04(t，0.8H)，3.95(t，1.2H)，3.85(t，0.8H)，1.74(s，3H)。

实施例60 1-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.30(s，0.6H)，11.29(s，0.4H)，8.44-8.39(m，4H)，7，34(s，0.6H)，7.25(s，0.4H)，4.69(s，1.2H)，4.59(s，0.8H)，4.45(s，0.8H)，4.31(s，1.2H)，4.18(t，1.2H)，4.05(t，0.8H)，3.97(t，1.2H)，3.86(t，0.8H)，1.75(s，3H)。

实施例61 1-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.31(s，1H)，8.27-8.24(m，1H)，7.99-7.90(m，3H)，7，35(s，0.6H)，7.30(s，0.4H)，4.69(s，1.2H)，4.61(s，0.8H)，4.49(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.21(t，1.2H)，4.07(t，0.8H)，3.98(t，1.2H)，3.88(t，0.8H)，1.75(s，3H)。

实施例62 1-[5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(2-氯-4-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.31(s，0.6H)，11.29(s，0.4H)，8.65-8.55(m，2H)，8.44-8.37(m，1H)，7.34(s，0.6H)，7.28(s，0.4H)，4.68(s，1.2H)，4.59(s，0.8H)，4.45(s，0.8H)，4.32(s，1.2H)，4.20(t，1.2H)，4.06(t，0.8H)，3.97(t，1.2H)，3.87(t，0.8H)，1.75(s，3H)。

实施例63 1-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(2，4-二氯苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.30(s，0.6H)，11.29(s，0.4H)，8.35(d，1H)，8.02(s，1H)，7.72(d，1H)，7.34(s，0.6H)，7.28(s，0.4H)，4.68(s，1.2H)，4.59(s，0.8H)，4.45(s，0.8H)，4.31(s，1.2H)，4.19(t，1.2H)，4.05(t，0.8H)，3.96(t，1.2H)，3.87(t，0.8H)，1.75(s，3H)。

实施例64 1-(4-甲基-噻唑-2-磺酰基)-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

往3mL DMF中加入0.30g(0.8mmol)的4-(4-甲基-噻唑-2-磺酰基)-哌嗪-2-酮三氟乙酸盐、0.147g(0.8mmol)的(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸和0.458g的PyBOP。室温下搅拌反应混合物4小时。真空去除几乎所有溶剂，将残余物溶在二氯甲烷中。溶液依次用饱和碳酸氢钠溶液、水、1N盐酸、水和盐水洗涤。浓缩有机层，用硅胶层析柱分离得到0.19g(56％)题述化合物。

¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.33(s，0.6H)，11.31(s，0.4H)，7.90(d，1H)，7.35(s，0.6H)，7.28(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.58(s，0.8H)，4.39(s，0.8H)，4.25(s，1.2H)，4.13(t，1.2H)，3.98(t，0.8H)，3.90(t，1.2H)，3.79(t，0.8H)，2.45(s，3H)，1.74(s，3H)。

实施例65 1-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基)-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例64描述的方法B的同样的操作，通过4-(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基)-哌嗪-2-酮的三氟乙酸盐和(胸腺嘧啶-1-基)-乙酸的反应制备题述化合物，

¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.31(s，1H)，7.34(s，0.6H)，7.28(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.58(s，0.8H)，4.41(s，0.8H)，4.28(s，1.2H)，4.14(t，1.2H)，3.99(t，0.8H)，3.92(t，1.2H)，3.82(t，0.8H)，2.86(s，3H)，1.74(s，3H)

实施例66 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-[(胸腺嘧啶-1-基)-乙酰基]-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.31(s，1H)，8.42(s，1H)，8.05(d，1H)，8.01(d，1H)，7.35(s，0.6H)，7.29(s，0.4H)，4.69(s，1.2H)，4.61(s，0.8H)，4.48(s，0.8H)，4.37(s，1.2H)，4.21(t，1.2H)，4.07(t，0.8H)，3.98(t，1.2H)，3.88(t，0.8H)，1.76(s，3H)。

实施例67 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[4-N-(二苯甲氧基羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(二苯甲氧基羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ8.42(s，1H)，8.06-7.95(m，2H)，7.90(d，0.6H)，7.86(d，0.4H)，7.46(d，4H)，7.37(t，4H)，7.29(t，2H)，6.96(d，1H)，6.80(s，1H)，4.83(s，1.2H)，4.76(s，0.8H)，4.52(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.21(t，1.2H)，4.06(t，0.8H)，4.01(t，1.2H)，3.87(t，0.8H)。

实施例68 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[6-N-(二苯甲氧基羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(二苯甲氧基羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.89(s，1H)，8.60(s，1H)，8.43(s，dH)，8.33(d，0.6H)，8.31(d，0.4H)，8.07-7.98(m，2H)，7.53(d，4H)，7.38(t，4H)，7.29(t，2H)，6.83(s，1H)，5.41(s，1.2H)，5.31(s，0.8H)，4.63(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.27(t，1.2H)，4.12-4.07(m，2H)，3.90(t，0.8H)。

实施例69 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[2-N-(二苯甲氧基羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(二苯甲氧基羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ11.26(s，1H)，8.43(s，1H)，8.06-7.93(m，2H)，7.81(d，1H)，7.46(d，4H)，7.38(t，4H)，7.30(t，2H)，6.86(s，1H)，5.17(s，1.2H)，5.09(s，0.8H)，4.60(s，0.8H)，4.36(s，1.2H)，4.25(t，1.2H)，4.10-4.05(m，2H)，3.89(t，0.8H)

实施例70 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[4-N-(4-甲氧苄氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(4-甲氧苄氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.69(s，1H)，8.42(s，1H)，8.40(s，1H)，8.07-7.96(m，2H)，7.90(d，0.6H)，7.87(d，0.4H)，7.36(d，2H)，7.03(d，1H)，6.94(d，2H)，5.11(s，2H)，4.83(s，1.2H)，4.75(s，0.8H)，4.52(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.21(t，1.2H)，4.06(t，0.8H)，4.01(t，1.2H)，3.88(t，0.8H)，3.76(s，3H)。

实施例71 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ10.57(s，1H)，8.59(s，0.6H)，8.58(s，0.4H)，8.43(s，0.4H)，8.42(s，0.6H)，8.31(s，0.6H)，8.29(s，0.4H)，8.04-8.00(m，2H)，7.39(d，2H)，6.95(d，2H)，5.40(s，1.2H)，5.31(s，0.8H)，5.14(s，2H)，4.63(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.28(t，1.2H)，4.11(t，1.2H)，4.08(t，0.8H)，3.90(t，0.8H)，3.76(s，3H)。

实施例72 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[2-N-(4-甲氧苄氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(4-甲氧苄氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.38(brs，1H)，8.42(s，1H)，8.08-7.99(m，2H)，7.82(s，0.6H)，7.80(s，0.4H)，7.38(d，2H)，6.95(d，2H)，5.18(s，2H)，5.15(s，1.2H)，5.07(s，0.8H)，4.60(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.25(t，1.2H)，4.12-4.05(m，2H)，3.89(t，0.8H)，3.76(s，3H)。

实施例73 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[4-N-(胡椒基氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[4-N-(胡椒基氧羰基)-胞核嘧啶-1-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)δ10.71(s，1H)，8.42(s，1H)，8.07-7.95(m，2H)，7.91(d，0.6H)，7.87(d，0.4H)，7.02(d，1H)，6.99(s，1H)，6.91(s，2H)，6.02(s，2H)，5.08(s，2H)，4.84(s，1.2H)，4.76(s，0.8H)，4.52(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.21(t，1.2H)，4.06(t，0.8H)，4.02(t，1.2H)，3.88(t，0.8H)。

实施例74 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[6-N-(胡椒基氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[6-N-(胡椒基氧羰基)-腺嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.60(s，1H)，8.59(s，0.6H)，8.58(s，0.4H)，8.43(s，0.4H)，8.42(s，0.6H)，8.31(s，0.6H)，8.30(d，0.4H)，8.08-7.99(m，2H)，7.05(s，1H)，6.95(d，1H)，6.92(d，1H)，6.02(s，2H)，5.40(s，1.2H)，5.31(s，0.8H)，5.11(s，2H)，4.63(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.28(t，1.2H)，4.12(t，0.8H)，4.08(t，1.2H)，3.90(t，0.8H)。

实施例75 1-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰基]-4-{[2-N-(胡椒基氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}]-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-{2-[5-(4-氯-2-硝基苯基)-1，3，4-噻二唑-2-磺酰胺基]-乙基}-N-{[2-N-(胡椒基氧羰基)-鸟嘌呤-9-基]-乙酰基}-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.38(brs，1H)，8.42(s，1H)，8.09-7.99(m，2H)，7.82(s，0.6H)，7.80(s，0.4H)，7.01(s，1H)，6.93(d，1H)，6.91(d，1H)，6.03(s，2H)，5.14(s，3.2H)，5.07(s，0.8H)，4.59(s，0.8H)，4.35(s，1.2H)，4.24(t，1.2H)，4.10-4.05(m，2H)，3.88(t，0.8H)。

实施例76 1-(5-苯甲酰-4-苯基-噻唑-2-磺酰基)-4-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-[2-(5-苯甲酰-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.30(s，0.6H)，11.29(s，0.4H)，7.76-7.72(m，2H)，7.59(t，1H)，7.47(d，2H)，7.40(t，2H)，7.34-7.26(m，4H)，4.66(s，1.2H)，4.60(s，0.8H)，4.47(s，0.8H)，4.33(s，1.2H)，4.20(t，1.2H)，4.06(t，0.8H)，3.95(t，1.2H)，3.84(t，0.8H)，1.73(s，1.65H)，1.74(s，3H)。

实施例77 1-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰基)-4-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-哌嗪-2-酮

运用与实施例57同样的操作，通过N-[2-(5-甲基-4-苯基-噻唑-2-磺酰胺基)-乙基]-N-(胸腺嘧啶-1-基-乙酰基)-甘氨酸的反应制备题述化合物。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)δ11.30(s，0.6H)，11.29(s，0.4H)，7.69(d，2H)，7.52(t，2H)，7.45(t，1H)，7.32(s，0.6H)，7.27(s，0.4H)，4.66(s，1.2H)，4.58(s，0.8H)，4.42(s，0.8H)，4.28(s，1.2H)，4.17(t，1.2H)，4.03(t，0.8H)，3.92(t，1.2H)，3.81(t，0.8H)，2.68(s，3H)，1.74(s，3H)。

PNA寡聚物的固相合成

总体程序

PNA寡聚物的合成是针对CLEAR-Base树脂(Peptideinternational)手动进行的，该树脂是带有胺官能团的交联的乙基化丙烯酸树脂。该树脂通过使用HBTU作为偶联剂，在DMF中用PAL链接剂(5-[4-(9-芴基甲氧羰基)氨基-3，5-二甲氧苯氧基]戊酸(Advanced ChemTech)偶联。将得到的树脂用20％的哌啶在DMF中处理，以活化用于PNA寡聚物合成的PAL链接剂上的胺官能团。按照下面的合成循环合成PNA寡聚物。所有的反应和树脂的洗涤都在烧结注射反应器(fritted syringe reactor)中进行。

下面是一种合成PNA寡聚物的无限制性的通用操作程序：

1.用10当量的合适的单体(0.4M溶在0.5M乙酸的DMF溶剂中)偶联2小时。

2.用DMF洗3次。

3.用乙酸酐(溶于DMF的5％乙酸酐和6％二甲基吡啶)封端5分钟。

4.用DMF洗2次

5.利用哌啶(1.0M溶于DMF中)裂解(断开)磺酰胺中经过反应的乙酰基5分钟。

6.用DMF洗3次。

7.用4-甲氧苯硫酚去保护噻唑或噻二唑-2-磺酰基基团15分钟。

8.用DMF洗3次。

在除去最后的噻唑或噻二唑-2-磺酰基基团后，树脂用DMF洗3次，用二氯甲烷洗2次，然后干燥。环外胺的保护基团的去除和从树脂的断开是在TFA中采用25％的间甲酚处理1.5小时而一步完成。滤去树脂，用TFA洗涤。通过吹持续的氮气流将混合在滤液中的TFA差不多除尽。将残余物悬浮在乙醚中并离心分离。小心倾析掉上层液体。将残留物——PNA寡聚物粗品再一次悬浮在乙醚中，然后离心、去除上层液。PNA寡聚物粗品用HPLC分析，用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)确认。

实施例78PNA寡聚物序列H₂N-CGCTA-H的合成

使用通式I的单体，通过上述通用操作程序人工合成题述序列，其中E是硫；J是氮；RI是4-氯-2-硝基-苯基；R2是H；而核酸碱基(A、C、和G)的环外胺的保护基团是二苯甲氧基羰基，图13给出HPLC图。MALDI-TOF MS：1352.5(M+H)。

本领域技术人员将会认识到，或仅利用常规试验就能发现，本说明书具体描述的发明的特定实施例存在许多的等同物。这些等同物都落入所要求的保护范围内。

Claims

1.一种具有化学式I的化合物：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

R1、R’可以独立地为H、卤素、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、或具有下列通式之一的官能团：

其中，A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选自H、卤素、CF₃、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、苯基、和卤代苯基；R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；以及，B为天然或非天然核酸碱基，其中当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被对酸不稳定、但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中，E是硫且J是氮。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中，E是硫且J是氮；R1是烷基、或具有下列通式的芳基：

其中，A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选自H、卤素、和硝基。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中，E是硫且J是CR’；而R1、R’独立地是H、烷基、苯基或苯甲酰基。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中，E是氧且J是CH。

6.根据权利要求1所述的化合物，其中，R2是H或天然α-氨基酸的保护或未保护侧链。

7.根据权利要求1所述的化合物，其中，B是胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、腺嘌呤(A)、或鸟嘌呤(G)。

8.根据权利要求1所述的化合物，其中，用于B的环外氨基官能团的所述保护基团具有通式：

其中，R4具有通式：

其中，Y₁、Y₂、Y₃、Y₄、Y₅、Y₆、Y₇、Y₈、Y₉、Y₁₀独立选自H、卤素、烷基、以及烷氧基。

9.根据权利要求1所述的化合物，其中，用于B的环外氨基官能团的所述保护基团具有通式：

其中，R4具有通式：

其中，Z₁、Z₂、Z₃、Z₄、Z₅独立选自H、卤素、烷基、烷氧基、以及相邻两个残基的亚甲二氧基。

10.根据权利要求1所述的化合物，其中，用于B的环外氨基官能团的所述保护基团是苄氧羰基、二苯甲基氧羰基、4-甲氧苄基氧羰基、或者胡椒基氧羰基。

11.根据权利要求1所述的化合物，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为卤代C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

12.一种制备权利要求1所述化合物的方法，包括在常用于肽合成的偶联剂或混合酸酐的存在下环化化学式VI的化合物，其中，所述化学式VI的化合物表示如下：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

R1、R’独立地为H、卤素、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、苯基、卤代苯基、苯甲酰基、烷基苯甲酰基、烷氧基苯甲酰基或卤代苯甲酰基；

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；B为天然或非天然核酸碱基，其中，当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被对酸不稳定、但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。

13.一种制备权利要求1所述化合物的方法，包括在非亲核有机碱和常用于肽合成的偶联剂存在下化学式为IV的化合物与核酸碱基乙酸部分的偶联反应，其中所述化学式IV表示如下：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

R1、R’独立地为H、卤素、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、或者具有下列通式之一的官能团：

其中，A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选自H、卤素、CF₃、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、苯基、和卤代苯基；而R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链，其中所述核酸碱基乙酸部分表示如下：

其中，B是天然或非天然核酸碱基，其中当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被对酸不稳定、但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

15.一种具有化学式V的化合物：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

其中，A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选自H、卤素、CF₃、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、苯基、和卤代苯基；

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；

R3是H、烷基、或芳基；以及

B是天然或非天然核酸碱基，其中当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被对酸不稳定、但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。

16.根据权利要求15所述的化合物，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为卤代C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

17.根据权利要求15所述的化合物，其中，R3是甲基或乙基。

18.根据权利要求15所述的化合物，其中，用于B的环外氨基官能团的所述保护基团是苄氧羰基、二苯甲基氧羰基、4-甲氧苄氧基羰基、或者胡椒基氧羰基。

19.一种制备权利要求15所述化合物的方法，包括在非亲核有机碱和通常用于肽合成的偶联剂存在下化学式II的化合物与核酸碱基乙酸部分的偶联反应，其中所述化学式II表示如下：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

其中，A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选自H、卤素、三氟甲基、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、苯基、或卤代苯基；

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；以及

R3是H、烷基、或芳基，

其中，所述核酸碱基乙酸部分表示如下：

其中，B是天然或非天然核酸碱基，其中当所述核酸碱基具有环外氨基官能团时，所述官能团被对酸不稳定但在硫醇存在下对弱至中等碱稳定的保护基团保护。

20.根据权利要求19所述的方法，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

21.一种具有化学式II的化合物：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；以及

R3是H、烷基、或芳基。

22.根据权利要求21所述的化合物，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

23.一种制备权利要求21所述化合物的方法，包括在非亲核有机碱存在下N-(2-氨基乙基)-甘氨酸衍生物与磺酰氯衍生物进行的偶联反应，其中，所述N-(2-氨基乙基)-甘氨酸衍生物表示如下：

其中：

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；以及

R3是H、烷基、和芳基，

其中，所述磺酰氯衍生物表示如下：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；以及

R1、R’独立地为H、卤素、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、或具有下列通式之一的官能团：

24.根据权利要求23所述的方法，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

25.一种具有化学式IV的化合物及其自由酸形式

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

其中，A₁、A₂、A₃、A₄、A₅独立选自H、卤素、CF₃、烷基、硝基、腈、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、苯基、和卤代苯基；以及

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链；以及

HX是有机或无机酸。

26.根据权利要求25所述的化合物，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

27.根据权利要求25所述的化合物，其中，HX为HCl或TFA。

28.一种制备权利要求25所述化合物的方法，包括在通常用于肽合成的偶联剂或混合酸酐的存在下环化化学式III的化合物，然后在酸中进行t-Boc的去保护，其中所述化学式III的化合物表示如下：

其中：

E是硫或氧；J是氮或C-R’；

R2是H或天然或非天然α-氨基酸的保护或未保护侧链。

29.根据权利要求28所述的方法，其中，在A₁、A₂、A₃、A₄、A₅中，所述卤素为F、Cl、Br或I；所述烷基为C₁-C₄烷基；所述烷氧基为C₁-C₄烷氧基；所述卤代烷基为F-、Cl-、Br-或I-烷基；所述卤代烷基为卤代C₁-C₄烷基；所述卤代烷氧基为F-、Cl-、Br-或I-烷氧基；所述卤代烷氧基为C₁-C₄烷氧基；以及，所述卤代苯基为F-、Cl-、Br-或I-苯基。

30.一种制备PNA寡聚物的方法，包括将权利要求1所述的化合物连结在一起。