CN1669478A - 一种醋蛋粉的制法及含醋蛋粉的组合物及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种果醋蛋粉的制法及含醋蛋粉的组合物及用途。果醋蛋粉的制备是将鸡蛋浸泡于由柑橘或山楂制得的果醋，再经绞碎、压滤、喷雾干燥等过程制备。含醋蛋粉的组合物由醋蛋粉，碳酸钙，淫羊藿，骨碎补，黄精，当归，三七，酪蛋白磷酸肽组成。本发明提供的组合物可在制备增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品中应用。

Description

一种醋蛋粉的制法及含醋蛋粉的组合物及用途
技术领域
本发明涉及一种醋蛋粉，尤其涉及醋蛋粉的制备方法及含醋蛋粉的组合物，及该组合物在制备增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品中的应用。
背景技术
随着社会老龄人口显著增加，骨质疏松已成为一个重要的公共健康问题，严重地威胁着老年人的身体健康。骨质疏松主要表现为骨矿物质密度减少和骨质变松，常导致脊椎骨压缩变形、股骨颈和前臂腕部易骨折。
据流行病学调查估计，欧美和日本约有7500万人患骨质疏松症。美国骨质疏松基金会的调查结果显示，绝经后白人妇女分别有54.0％和30.0％患骨量减少和骨质疏松，大于50岁的男性有3％～6％患骨质疏松，28％～47％为骨量减少。
目前，我国40岁以上人群骨质疏松患病率16.1％，随着年龄增加，骨质疏松发病率递增，60岁以上人群患病率22.6％，80岁以上人群患病率高于50％，而且，随着地区、性别差异，骨质疏松患病率也明显不一样，城市高于农村，女性多于男性。据预测我国骨质疏松患者8400万，占总人口的6.6％。
许多因素与骨质疏松症有关，如遗传、内分泌、生活方式及膳食营养等。在膳食因素中，关系较密切的为钙、磷、维生素D及蛋白质等，其中研究最多的是钙营养。钙是骨骼中主要矿物质成分之一，也是骨正常成长的先决条件。大量临床实验及流行病学调查结果表明，钙摄入不足所造成的骨质丢失是导致骨质疏松的主要危险因素。
骨质疏松症属于祖国医学“骨痿”、“骨痹”范畴。中医学认为本病的发生与年老脏衰，肾精亏虚及饮食失调，劳逸过度等因素有关。肾为先天之本，主骨藏精生髓，若肾气亏损，不能生精化髓充骨，则髓减骨枯；肝藏血而主筋束骨，利关节，若肝血不足，筋脉失于濡养，则筋骨懈怠，痿弱无力；故肝肾不足、精血亏虚，骨枯髓减，筋骨失养，瘀血阻络是形成骨质疏松症的主要原因。
骨密度降低是骨质疏松症的一项重要指标，目前用于增加骨密度的主要方法是补钙，但存在不易吸收或治标不治本的问题。
发明内容
本发明的一个目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种醋蛋粉的制备方法，通过以下步骤实现：将原料柑橘或山楂洗净、用破碎机、打浆机(0.5mm孔径)加工成果汁。加入0.5％的食品级果胶酶，进行澄清处理，温度35-45℃，自然pH值约为4。反应2小时后，用板框压滤机压滤(滤布120目)，在80℃下加热15分钟灭菌，得到柑桔或山楂汁。将果汁冷却到28℃，加入活化好的酵母发酵三天，待发酵液酒精度为6-7％(v/v)、总糖降至10g/l以下时停止发酵，得到柑桔或山楂果酒。将3％培养好的的醋酸菌加到发酵好的果酒里，搅拌转速为150r/min，通风比为1∶0.8，在32℃发酵4天，待总酸(以乙酸计)升至6-7％时停止发酵。用板框压滤机压滤除菌体后，在80℃加热15分钟灭菌，得到6-8％醋酸含量的柑桔或山楂果醋。将洗净、灭菌、消毒后的鸡蛋放入上述果醋中，果醋与鸡蛋配比为3～5∶1，浸泡72小时，至pH值约为5，搅拌均匀后压滤得到果醋蛋液，将果醋蛋液进行喷雾干燥得到果醋蛋粉，进风温度为150-160℃，出风温度为80-90℃。
本发明的另一个目的是提供含醋蛋粉的组合物，组合物由醋蛋粉、钙含量高的碳酸钙、淫羊藿、骨碎补、黄精、当归、三七、酪蛋白磷酸肽组成。
所述醋蛋粉可以是用本发明的方法制成的果醋蛋粉，也可以是用其他任何合成或酿造的食用醋和鸡蛋，并用传统的方法制成的醋蛋粉。
组合物1由含有下述重量配比的原料组成：醋蛋粉0.3-60％，碳酸钙5-50％，淫羊藿5-60％，骨碎补5-60％，黄精5-55％，当归5-50％，三七0.5-40％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-10％。
组合物2由含有下述重量配比的原料组成：醋蛋粉0.3-40％，碳酸钙5-30％，淫羊藿5-40％，骨碎补5-40％，黄精5-40％，当归5-30％，三七1-30％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-10％。
组合物3由含有下述重量配比的原料组成：醋蛋粉1-20％，碳酸钙10-20％，淫羊藿15-25％，骨碎补15-25％，黄精15-25％，当归10-25％，三七5-15％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-5％。
本发明的又一个目的是提供含醋蛋粉的组合物用途，在制备增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品的应用。
所述的保健食品组合物，其特征在于制剂形式为固体制剂，具体为片剂或胶囊剂或颗粒剂或冲剂。
根据上述配比，利用常规生产工艺进行有效成分的提取，按不同剂型添加常规辅料并充分混合后制成成品，可以是片剂或胶囊剂或颗粒剂或冲剂。因添加的辅料及用量、具体生产工艺均属现有公知技术，在此不再赘述。
本发明组合物的推荐量：片剂、胶囊制剂为4.0g/人/天，颗粒剂、冲剂为8.0g/人/天，每日口服一次，根据剂型不同用水吞服或冲服。
本发明组合物无毒副作用，增加骨密度效果明显，可运用于制备增加骨密度的保健食品。
鸡蛋的蛋白质是一种完全蛋白质，含有人体必须的八种氨基酸，在与醋的浸泡过程中一定程度地分解为肽和氨基酸；此外还有卵磷脂、蛋黄油、维生素等，对补钙和促进钙的吸收有一定的作用。另外果醋含有的糖类、脂类、蛋白质、氨基酸、维生素、生物类黄酮及矿物质，特别是水果经发酵制成果醋后B族维生素等营养成分含量明显提高，能使动物食品中的钙质溶解被人体利用，有促进血液新陈代谢、消除疲劳、抗衰老功效。有研究表明，将鸡蛋及蛋皮用10％醋酸浸泡烘干，以此作为钙源饲以大鼠，观察醋酸钙对大鼠生长发育和对血钙、尿钙、粪钙和股骨钙含量的影响，结果醋蛋皮组股骨钙的存留率，钙在体内的吸收率、存留率与碳酸钙和全脂奶粉无显著差异。动物实验研究结果表明，醋蛋液能明显促进动物肠蠕动，促进消化功能，提高细胞免疫功能，降低脑组织的脂质过氧化。醋蛋粉在本方中具有补充钙源，增加骨密度，缓解疲劳，增强免疫力，健胃消食之功。
碳酸钙是目前成人补钙中应用较多的补钙剂，具有分子量小，钙元素含量高，在中和胃酸时能较快地生成可溶性钙离子而易被肠道吸收的特点。研究表明，适量增加钙摄入量，可增强骨密度，减少骨质丢失，抗骨折，防治骨质疏松症。动物实验研究表明，碳酸钙对大鼠废用性骨质疏松症具有很好的预防作用，且与其它补钙剂比较更加经济合理。故碳酸钙在本方中作为钙源，有补钙，增加骨密度，改善骨质疏松的作用。
淫羊藿起到益精填髓，补肾壮骨作用。淫羊藿主要有效成分为淫羊藿总黄酮。研究表明，淫羊藿水提液具有抑制破骨细胞、促进成骨细胞功能，增加钙化骨的形成，从而抑制骨质疏松症。
骨碎补为滋补肝肾、续筋接骨、活血止痛之良药。与淫羊藿配合增强补肝肾、益精血、强筋骨，以治疗骨枯髓减、筋骨懈怠之症。骨碎补主要含柚皮甙、骨碎补双氢黄酮甙、骨碎补酸等。研究表明，骨碎补提取液对组织培养中的鸡胚骨基原的Ca++、P沉积有明显促进作用，提高组织中碱性磷酸酶(ALP)活性，促进蛋白多糖合成，抑制胶原合成。用大鼠后股骨下端实验性骨损伤模型研究表明，槲蕨根茎水煎液可促进实验性大鼠骨损伤愈合，随着剂量增加，作用也增强。
黄精具有滋肾填精，补脾益气之功，可缓解倦怠乏力之症。黄精主要含黄精皂甙、多糖类、氨基酸及微量元素等。研究表明，黄精多糖具有增强免疫、抗疲劳作用。
当归有补血养虚、活血止痛之效，以缓解腰背疼痛、关节疼痛之症。当归主要含有挥发油。研究表明，当归可促进骨髓和脾细胞造血功能，显著增加血红蛋白和红细胞数。水溶液灌胃可促进骨髓和脾细胞造血功能的恢复。
三七有化瘀生新，活血定痛之功，三七、当归合用增强活血通络止痛的作用，以缓解腰背疼痛、关节疼痛。三七主要含三七皂甙，三七素，槲皮素，挥发油等。研究表明，三七总甙可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化，促进成骨细胞OPG。
酪蛋白磷酸肽(CPP)是从天然酪蛋白中提取的一种多肽。可提高钙的溶解度，有促进钙吸收的作用。研究表明，CPP对人和动物钙的吸收和利用都具有促进作用。CPP作为促进因子，是一种非常有效的钙吸收促进因子，且能提高铁、锌、镁等金属离子的生物利用度。目前作为营养补充剂在日本，欧洲和国内已经广泛使用在食品、保健、饲料等行业中。
研究表明，本组合物各组分综合具有补充钙源，增加骨密度，防治骨质疏松、缓解疲劳，增强免疫力的作用。传统中医理论认为本组合物具有滋补肝肾，强筋壮骨，益气生血，化瘀止痛的功能，诸品合用，共奏补充钙源，滋补肝肾，强筋壮骨，益气生血，化瘀止痛之效。本组合物适用于缺钙、骨质疏松的中老年人群以及体弱的成年人群。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作详细说明，并以动物试验进一步说明本发明的有益效果。下述组方均为原料药的重量克数。
实施例1：果醋蛋粉的制备方法
取柑桔2500g，用清水洗净、去皮后，用破碎机、打浆机(0.5mm孔径)加工成果汁1500g。加入0.1％的食品级果胶酶进行澄清处理，温度40℃，自然pH值约4，反应2小时后用板框压滤机压滤(滤布120目)，再经80℃加热15分钟灭菌。将柑桔汁冷却到28℃，加入活化好的酵母，在28℃发酵三天，待发酵液酒精度为6-7％(v/v)，总糖降至10g/l以下时停止发酵，得到柑桔果酒。加入3％培养好的的醋酸菌，搅拌转速为150r/min，通风比为1∶0.8，在32℃发酵4天，待总酸(以乙酸计)升至6-7％时停止发酵。用板框压滤机压滤除菌体后，再经80℃加热15分钟灭菌得到醋酸含量为6-8％的柑桔果醋1200g。
将洗净、杀菌、消毒后的鸡蛋放入柑桔果醋中，果醋与鸡蛋配比为3∶1，浸泡72小时，pH值约为5，搅拌均匀后用板框压滤机压滤得到果醋蛋液。将果醋蛋液进行喷雾干燥得到果醋蛋粉，进风温度为150-160℃，出风温度为80-90℃。
可以用山楂代替柑桔，破碎制成山楂汁，按照同样步骤制得果醋蛋粉。
也可以用合成或酿造的食用醋和鸡蛋，并用传统的方法制成醋蛋后进行喷雾干燥得到的醋蛋粉。
实施例2：1g/片的片剂
成分     1000片用量
醋蛋粉(由柑橘果醋制成的醋蛋粉)碳酸钙淫羊藿骨碎补黄精当归三七酪蛋白磷酸肽(CPP)     150g320g750g750g675g500g250g30g
实施例3：1g/粒的胶囊
成分     1000粒用量
醋蛋粉(由山楂果醋制成的醋蛋粉)碳酸钙淫羊藿骨碎补     150g320g750g750g
黄精当归三七酪蛋白磷酸肽(CPP)     675g500g250g30g
实施例4：4g/包的颗粒剂
成分     1000包用量
醋蛋粉(用食用米醋制成的醋蛋粉)碳酸钙淫羊藿骨碎补黄精当归三七酪蛋白磷酸肽(CPP)     300g640g1500g1500g1350g1000g500g60g
实施例5：4g/包的冲剂
成分     1000包用量
醋蛋粉(用食用米醋制成的醋蛋粉)碳酸钙淫羊藿骨碎补黄精当归三七酪蛋白磷酸肽(CPP)     300g640g1500g1500g1350g1000g500g60g
实施例6：安全性毒理学试验
1材料与方法
1.1受试物：按本发明实施例1配方生产得到的片剂，以下均简称受试物。
1.2试验动物：(以下2和3实验)ICR小鼠、SD大鼠由浙江省实验动物中心提供，医学实验动物合格证号22001001，清洁级。(4喂养实验)SD大鼠由中科院上海实验动物中心提供，合格证号为中科动管第003号，清洁级，体重60-80g。
2急性毒性试验
SD大鼠体重180-220g，雌雄各20只；ICR小鼠体重18-22g，雌雄各20只。按霍恩氏法将SD大鼠、ICR小鼠随机分为1.00g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg、10.00g/kg体重四个剂量组，每组雌雄各5只。采用经口灌胃方式，按1ml/100g体重给受试物(10.00g/kg剂量组配成5.00g/kg按2ml/100g给受试物)。
观察大鼠及小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限2周，确定大鼠及小鼠的半数致死剂量LD50，并确定急性毒性分级。
表1受试物对大鼠及小鼠的急性毒性
剂量(g/kg)                雌性                             雄性 动物反应   LD50(g/kg体重)
动物数 死亡数 动物数 死亡数
SD大鼠   1.002.154.6410.0     5555     0000     5555     0000   正常正常正常正常 ＞10
ICR小鼠   1.002.154.6410.0     5555     0000     5555     0000   正常正常正常正常 ＞10
根据急性毒性分级标准，其大鼠及小鼠的经口毒性属于实际无毒类。
3遗传毒性试验
3.1 Ames试验：选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97A、TA98、TA100、TA102，设5000、1000、200、40、8μg/皿五个剂量组，每个剂量设三个平行皿，重复试验一次。同时设空白对照组和阳性对照组(敌克松、叠氮钠、柔毛霉素、二氨基芴、1，8-二羟基蒽醌)。
观察计数培养基上各菌株的回变菌落数，试验结果见表2、表3。
3.2小鼠骨髓细胞微核试验：ICR小鼠体重25-30g。小鼠随机分2.5、5.0、10.0g/kg体重三个剂量组，一个阴性对照组(蒸馏水)和一个阳性对照组(环磷酰胺60mg/kg体重)，每组10只，雌雄各5只。采用间隔24小时2次给样品，灌胃量按0.1ml/10g体重(10.00g/kg剂量组配成5.00g/kg按0.2ml/10g给受试物)。小鼠于第二次灌胃6小时后处死，取胸骨骨髓制成骨髓片，甲醇固定，Giemsa染色。观察镜检时每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，
                  表2受试物Ames试验结果(第一次)
剂量(μg/皿)                             回变菌落数(X±SD)
      TA97a                    TA98                   TA100                      TA102
      -S9          +S9       -S9         +S9       -S9          +S9         -S9         +S9
受试物 8               115±16.3     118±21.8   35±3.1      36±2.9    162±16.3      170±11.6    273±6.2      261±15.740              125±8.7      119±12.5   40±6.1      36±7.8    179±27.8      162±15.1    261±14.0     266±19.1200             121±17.7     122±22.1   32±9.1      31±8.0    163±16.8      166±15.6    259±8.7      263±13.01000            107±25.2     117±15 5   38±5.0      37±9.8    166±16.8      162±9.5     269±22.9     266±18.65000            132±17.7     119±20.5   39±5.5      32±5.5    155±6.2       170±20.7    257±20.6     268±14.8空白对照        126±21.5     119±20.5   32±5.6      35±5.0    170±15.7      175±18.1    255±14.0     248±12.3敌克松50        2925±152.7               976±81.2               547±85.5                   1312±170.3叠氮钠1.25                                                        1131±125.0柔毛霉素10                                1261±186.8二氨基芴40                    920±105.8               893±209.3                872±71.11.8-二羟基蒽醌                                                                                              1051±128.1
计算微核千分率(MN‰)，结果见表4。
                    表3受试物Ames试验结果(第二次)
剂量(μg/皿)                        回变菌落数(X±SD)
         TA97a                     TA98                   TA100                     TA102
   -S9        +S9        -S9         +S9      -S9        +S9         -S9         +S9
受试物 8              126±23.3    119±12.1   34±10.7     43±3.2    177±9.1     163±13.3    262±18.3    272±23.340             122±22.3    124±13.1   34±5.7      33±7.1    171±16.2    164±11.6    268±16.1    267±24.1200            115±26.8    125±25.7   37±6.1      33±9.0    172±15.8    164±12.5    263±16.9    260±16.71000           114±9.8     123±27.1   38±2.6      35±3.8    189±10.1    162±17.2    262±19.1    259±15.95000           106±9.5     119±13.0   38±3.1      42±3.8    171±19.5    170±9.8     260±16.3    277±9.8空白对照       114±21.0    121±13.7   33±4.9      35±4.4    167±23.7    164±15.9    253±25.1    264±23敌克松50       2912±154.5              1080±173.3             557±40.6                 1197±184.1叠氮钠1.25                                                                   1165±197.5柔毛霉素10                              1261±186.8二氨基芴40                  984±119.5               829±252.5              872±71.11.8-二羟基蒽醌                                                                                         1051±128.1
                          表4受试物对小鼠微核率的影响
性别 组别   剂量(g/kg) 鼠数     嗜多染红细胞数 微核细胞数   微核率(‰)
雌   阴性对照   0.0     5     5000     7   1.4
  受试物   2.5     5     5000     5   1.0
  5.0     5     5000     9   1.8
  10.0     5     5000     8   1.6
  环磷酰胺   60     5     5000     105   21.0*
雄   阴性对照   0.0     5     5000     9   1.8
  受试物   2.5     5     5000     7   1.4
  5.0     5     5000     7   1.4
  10.0     5     5000     7   1.4
  环磷酰胺   60     5     5000     111   22.2*
注：*P＜0.01(与阴性对照组比)
3.3小鼠精子畸形试验：ICR雄性小鼠，体重26-34g。设2.5、5.0、10.0g/kg体重三个剂量组，一个阴性对照组(蒸馏水)和一个阳性对照组(丝裂霉素C 2.0mg/kg体重)，每组7只。各组样品按0.1ml/10g体重(10.00g/kg剂量组配成5.00g/kg按0.2ml/10g给受试物)以灌胃方式给予，连续5天，对照组也相同处理。于首次灌胃后第35天后脱臼处死，随机选5只小鼠分别取两侧附睾，放入盛有适量生理盐水的平皿中，用眼科剪将附睾剪碎，四层檫镜纸吸滤，直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1％伊红染色。高倍镜下观察精子形态，每只小鼠计数完整精子1000个，记录畸变精子类型和数目，计算精子畸形发生率(％)，结果见表5。
               表5小鼠精子畸形试验结果
组别 鼠数 受检精子数(个)                畸形精子数(个) 小计(个)   畸形率(％)
  无定型 无钩 折叠 胖头 香蕉 双头/双尾
阴性对照(H2O)受    2500试    5000物    10000  5   5000   50  46  0  2  4  0     102  2.04
 5   5000   58  40  0  0  2  1     101  2.02
 5   5000   67  32  0  3  5  0     107  2.14
 5   5000   44  58  0  4  2  1     109  2.18
丝裂霉素C2.0  5   5000   152  124  0  9  14  6     305  6.10*
     H  0.806
     P  0.848
与阴性对照组比较*P＜0.01
4大鼠30天喂养试验
将SD大鼠随机分成4组，每组20只，雌雄各半。试验设对照组，受试物1.67、3.33、6.67g/kg体重组，相当于人推荐量的25倍、50倍和100倍(人推荐量为4.0g/日)。实验各剂量按体重10％折算分别均匀拌入基础饲料，以饲料喂养方式给予，自由进食、饮水。连续观察30天，周记录体重和进食量并计算食物利用率。实验期末尾静脉取血进行血液学检查，断头取血进行血生化检查，对每只大鼠进行脏器大体观察，同时取肝、肾、脾、睾丸(卵巢)称重并计算脏体化，并取肝、肾、脾、胃、肠、睾丸(卵巢)进行病理组织学检查。实验结果见表6、表7、表8、表9、表10、表11、表12。
                表6受试物大鼠体重的影响(X±SD)
性别     剂量(g/kg)   鼠数(只)   始重(g)   第1周(g)   第2周(g)  第3周(g)  第4周(g)
雌     对照组1.673.336.67     10101010   70.4±2.770.9±4.170.7±4.870.3±3.2   121.5±7.9120.0±8.1124.2±7.8120.7±6.8   153.5±18.3156.9±11.6159.1±10.1148.1±14.8  180.9±17.5178.5±20.1182.2±12.8181.8±9.6  210.8±18.2207.8±16.6200.4±17.6206.0±11.7
    FP   0.0570.982   0.5680.639   1.1510.342  0.1170.949  0.7310.540
雄     对照组1.673.336.67     10101010   66.3±3.668.6±3.067.6±3.467.9±3.4   119.3±7.3120.0±6.4126.2±5.1123.6±6.3   162.7±15.1161.6±14.3168.1±14.7162.2±12.1  205.8±23.9209.5±10.2220.9±15.6206.9±14.6  259.3±27.9260.7±14.3262.1±17.1244.6±17.1
    FP   0.7870.509   2.6450.064   0.4530.717  1.6900.187  1.6850.187
             表7受试物大鼠总食物利用率的影响(X±SD)
性别     剂量(g/kg)     鼠数(只)     体重增重(g)     进食量(g)     食物利用率(g)
雌     对照组1.673.336.67     10101010     140.5±18.9136.9±15.1129.7±16.2135.7±13.0     617.2±71.7613.1±50.9612.7±66.3614.5±41.1     22.7±1.422.4±2.121.2±2.122.1±2.2
    FP     0.7900.507     0.0120.998     1.0890.366
雄     对照组1.673.336.67     10101010     192.9±25.6192.1±14.2194.5±16.6176.7±16.3     656.0±54.3657.4±41.4657.0±67.5645.3±35.1     29.3±2.029.3±2.429.8±2.927.4±2.0
    FP     2.2610.098     0.1280.943     2.0830.120
结果见表2，原始数据符合方差齐的要求(P＞0.05)，各剂量组大鼠体重增重、进食量、食物利用率和对照组比较差异均无显著性(方差分析，P＞0.05)
                  表8受试物对大鼠HB、RBC、WBC的影响(X±SD)
性别   剂量(g/kg)   鼠数(只)   血红蛋白(g/l)     红细胞计数(×1012/L)   白细胞计数(×109/L)
雌     对照组1.673.336.67     10101010   152.6±15.5154.1±13.3156.1±12.6153.0±14.1     7.24±0.797.48±0.807.48±0.867.28±0.84   18.31±3.0416.78±4.3216.18±3.7017.36±4.69
    FP   0.1270.944     0.2450.864   0.5170.673
雄     对照组1.673.336.67     10101010   150.6±13.6149.1±12.2148.8±18.5153.7±19.6     7.55±0.517.24±0.607.30±0.867.47±0.79   17.26±2.7817.73±3.4316.56±2.6918.08±4.04
    FP   0.1900.903     0.4110.746   0.4020.753
                    表9受试物对大鼠WBC的影响(X±SD)
性别     剂量(g/kg)   鼠数(只)     淋巴细胞(％)     单核细胞(％)     粒细胞(％)
雌     对照组1.673.336.67     10101010     77.7±8.176.0±5.476.5±8.175.9±6.4     2.1±0.32.4±0.32.2±0.62.3±0.5     20.2±8.121.6±5.421.4±7.921.9±6.2
    FP     0.1410.935     0.8480.477     0.1110.953
雄     对照组1.673.336.67     10101010     76.7±7.776.5±5.576.3±8.475.2±8.0     2.4±0.42.1±0.32.3±0.32.3±0.5     21.0±7.621.4±5.321.4±8.422.5±7.8
    FP     0.0770.972     0.9920.407     0.0800.971
                          表10受试物对大鼠血生化的影响(X±SD)
  性别   剂量(g/kg)   鼠数(只)   谷丙转氨酶(u/L)   谷草转氨酶(u/L)   尿素氮(mmol/L)   肌酐(umol/L)   胆固醇(mmol/L)   甘油三脂(mmol/L)
雌   对照组1.673.336.67   10101010   37.9±11.341.6±13.039.9±10.636.1±9.9   194.6±37.2196.3±35.3204.1±32.5175.2±23.5   8.4±1.78.6±1.29.4±1.99.1±1.7   46.8±6.446.7±3.547.6±4.646.6±5.7   1.89±0.22.02±0.31.95±0.31.95±0.3   0.75±0.20.95±0.30.82±0.20.98±0.2
  FP   0.4500.719   1.4220.252   0.7370.537   0.0800.971   0.3530.787   2.0270.128
雄   对照组1.673.336.67   10101010   40.4±8.939.3±4.141.1±7.235.7±6.2   194.7±37.1198.2±31.4202.2±29.6184.5±28.1   7.8±2.06.7±0.67.8±1.67.3±1.8   47.0±5.443.1±3.543.1±3.645.4±2.8   1.80±0.41.76±0.41.82±0.31.97±0.3   0.67±0.20.69±0.20.68±0.20.66±0.2
  FP   1.2410.309   0.5700.638   1.1260.352   2.3650.087   0.7570.526   0.6540.983
                表11受试物对大鼠血生化的影响(X±SD)
  性别   剂量(g/kg)   鼠数(只)   血糖(mmol/L )   总蛋白(g/L)   白蛋白(g/L)   球蛋白(g/L)   白/球
雌   对照组1.673.336.67   10101010   5.56±0.65.72±0.35.39±0.55.84±0.8   65.1±2.565.5±2.066.2±2.365.5±1.9   32.2±3.232.2±2.232.4±2.432.4±2.0   32.9±2.133.3±2.833.8±2.533.1±2.4   0.98±0.10.99±0.20.98±0.11.00±0.1
  FP   1.1540.341   0.3920.760   0.0160.997   0.2340.872   0.0460.987
雄   对照组1.673.336.67   10101010   5.66±0.55.47±0.85.27±0.75.47±1.0   63.3±4.263.8±3.064.4±2.662.8±3.1   31.6±3.531.3±2.331.9±2.430.9±2.4   31.7±2.432.4±2.532.5±2.831.9±3.1   0.99±0.20.98±0.10.99±0.10.99±0.2
  FP   0.4220.739   0.4000.754   0.2280.876   0.2040.893   0.0120.998
                   表12受试物对大鼠脏体比的影响(X±SD)
性别     剂量(g/kg)   鼠数(只)   肝/体(％)   脾/体(％)   肾/体(％)   睾丸(卵巢)体(％)
雌     对照组1.673.336.67     10101010   3.46±0.443.19±0.343.40±0.223.70±0.53   0.26±0.030.24±0.040.26±0.040.27±0.03   0.95±0.090.91±0.080.90±0.050.90±0.10   0.06±0.010.06±0.010.07±0.010.07±0.01
    FP   2.7210.059   1.0510.392   1.0020.403   1.4100.256
雄     对照组     10   3.30±0.36   0.27±0.06   0.89±0.11   1.05±0.13
    1.673.336.67     101010   3.28 ±0.243.26±0.283.44±0.23   0.30±0.050.28±0.040.26±0.03   0.93±0.040.94±0.030.83±0.26   1.01±0.101.06±0.091.14±0.09
    FP   0.8880.457   1.4370.248   3.771(H)0.287   0.2860.095
5结论
根据本试验结果，本发明的组合物对雌雄大、小鼠经口LD50均大于10.00g/kg体重，属实际无毒。Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。大鼠30天喂养试验结果，未见实验动物出现中毒症状，大体解剖也未见异常病理改变，血常规及生化指标均无损害性影响。
实施例7：增加骨密度试验
为了验证本发明组合物的功效，委托中国疾病预防控制中心完成动物功效试验。
1材料与方法
1.1样品：按本发明实施例1配方生产得到的片剂，以下均简称受试物，由杭州鑫富药业公司提供，推荐摄入量为每人每次4片，每天1次。
1.2试验动物：50只初始体重60-75g的清洁级断乳WISTAR雄性大鼠，由中国医学科学院实验动物研究所提供，许可证编号：SCXK(京)2000-0006。
1.3试验方法：将大鼠按随机分成5组，即低钙饲料对照组，受试物低、中、高剂量试验组，分别相当于成人每公斤体重推荐量的5倍、15倍和30倍(根据大鼠平均每公斤体重进食100g，按0.335g/kgBW、1.005g/kgBW、2.010g/kgBW的剂量配制成半合成饲料，饲料中受试物的含量分别为3.35g/kg、10.05g/kg、20.10g/kg)，再根据高剂量试验组饲料的含钙量设置高剂量碳酸钙对照组。每组10只，单笼喂养，自由进食、饮去离子水，每周称体重，记录进食量。试验周期为12周。
1.4观察指标：
喂养12周后断头处死，剥离出右侧股骨，测量股骨长度。在105℃烤箱烤至恒重，称量骨重。用SD-1000骨密度仪测量大鼠股骨远心端及股骨中点的骨密度。
2试验结果
2.1受试物对大鼠体重的影响(表13)
                         表13受试物对大鼠体重的影响(M±SD)
组别 只数                               体重(g)
    第一周   第四周   第八周   第十二周
低钙对照组高剂量碳酸钙组低剂量实验组中剂量实验组高剂量实验组     101010109     85.4±5.385.2±5.385.6±5.485.0±5.385.2±4.8   195.4±11.5199.5±11.6203.2±11.4206.6±13.1210.7±13.2   274.8±20.2278.8±20.4285.4±15.2287.0±28.8300.4±20.5   326.8±24.9323.0±26.0333.7±20.2339.8±33.6344.6±21.4
2.2受试物对大鼠股骨长度、重量及骨钙含量的影响(表14)
          表14受试物对大鼠股骨长度、重量及骨钙含量(M±SD)
组别 只数   股骨长度(cm)   股骨重量(g)   股骨总含钙量(mg)   股骨钙含量(mg/g)
低钙对照组高剂量碳酸钙组低剂量实验组中剂量实验组高剂量实验组     101010109   3.60±0.093.61±0.063.63±0.113.63±0.993.68±0.06   0.553±0.0440.601±0.0410.553±0.0380.591±0.0510.614±0.039*   118.8±9.9144.4±11.8*127.3±12.4136.0±12.9*145.3±11.5*   214.7±5.2240.2±3.6*230.0±9.0*230.1±6.0*236.6±4.6*
与低钙对照组比较*P＜0.05
2.3受试物对大鼠骨密度的影响(表15)
            表15各组大鼠骨密度比较(M±SD)
组别 只数         大鼠股骨骨密度(g/cm2)
 股骨远心端   股骨中点
低钙对照组高剂量碳酸钙组低剂量实验组中剂量实验组高剂量实验组  101010109  0.246±0.0070.261±0.008*0.253±0.0100.261±0.010*0.267±0.013*   0.242±0.0060.258±0.009*0.247±0.0080.249±0.0080.255±0.004*
3试验结论
根据本试验结果，给予2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨重量显著高于低钙对照组(P＜0.05)；给予0.335g/kgBW、1.005g/kgBW、2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨钙含量显著高于低钙对照组(P＜0.05)；给予1.005g/kgBW、2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨远心端骨密度显著高于低钙对照组(P＜0.05)；给予2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨中点的骨密度显著高于低钙对照组(P＜0.05)。
实施例8：缓解疲劳、增强免疫力的功能试验
根据小鼠负重游泳试验结果呈阳性，血乳酸、血清尿素两项指标呈阳性，表明该组合物具有缓解疲劳的功能，同时功能试验表明，细胞免疫功能试验测定，单核-巨噬细胞功能测定，NK细胞活性测定三项呈阳性，体重以及脏器/体重均正常，表明该组合物具有增强免疫力的功能。
综上所述，本发明组合物无毒副作用，具有显著的增加骨密度功能，也具有缓解疲劳、增强免疫力功能，可以制成增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品。

Claims (9)

1、一种醋蛋粉的制备方法，其特征是通过以下步骤实现：将柑橘洗净、破碎制成果汁，加入食品级果胶酶，进行澄清处理，温度30-45℃，pH4，2小时后用板框压滤机压滤，高温灭菌15分钟，冷却至28℃后加入活化好的酵母，发酵三天，再加入醋酸菌，在32℃发酵4天，压滤除菌体后，经高温加热15分钟得到柑桔果醋，将洗净、灭菌、消毒后的鸡蛋放入上述果醋中，果醋与鸡蛋配比为3～5∶1，浸泡72小时，至pH值为5，搅拌均匀后压滤得到果醋蛋液，将果醋蛋液进行喷雾干燥得到果醋蛋粉，进风温度为150-160℃，出风温度为80-90℃。
2、根据权利要求1所述的醋蛋粉的制备方法，其特征是：柑橘可用山楂替换。
3、一种含醋蛋粉的组合物，其特征是：组合物由醋蛋粉、钙含量高的碳酸钙、淫羊藿、骨碎补、黄精、当归、三七、酪蛋白磷酸肽组成。
4、根据权利要求3所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是：醋蛋粉选择权利要求1制备的果醋蛋粉或由合成或酿造方法制成的醋蛋粉。
5、根据权利要求3或4所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是：由下述重量配比的原料组成：醋蛋粉0.3-60％，碳酸钙5-50％，淫羊藿5-60％，骨碎补5-60％，黄精5-55％，当归5-50％，三七0.5-40％，酪蛋白磷酸肽0.1-10％。
6、根据权利要求3或4所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是：由下述重量配比的原料组成：醋蛋粉0.3-40％，碳酸钙5-30％，淫羊藿5-40％，骨碎补5-40％，黄精5-40％，当归5-30％，三七1-30％，酪蛋白磷酸肽0.1-10％。
7、根据权利要求3或4所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是：由下述重量配比的原料组成：醋蛋粉1-20％，碳酸钙10-20％，淫羊藿15-25％，骨碎补15-25％，黄精15-25％，当归10-25％，三七5-15％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-5％。
8、权利要求3-7任一所述的醋蛋粉组合物的用途，在制备增加骨密度、防治骨质疏松的食品中应用。
9、权利要求3-7任一所述的醋蛋粉组合物的用途，在制备缓解疲劳、增强免疫力的食品中应用。
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