CN1522698A - 抗病毒药物 - Google Patents

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Abstract

一种药用组合物，该组合物含有式I化合物，其中Rx为氰基或溴；R1为卤素；R2为C1－C3烷基；及其它们的药学上可接受的盐和前药以及一种至三种另外的抗逆转录病毒药物和药学上可接受的载体或稀释剂。本发明还涉及该组合物在制备用于治疗或预防HIV的药物中的用途。

Description

抗病毒药物
本申请是申请号为99803908.X(PCT/SE99/00053)，申请日为1999年1月15日，发明名称为“抗病毒药物”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及抗病毒药物领域并且特别涉及HIV逆转录酶抑制剂。本发明提供新的化合物、含有这些化合物的药用组合物和使用它们用于抑制HIV的方法。
背景技术
在HIV的治疗中，在HIV逆转录酶抑制方面已经显示出临床相应活性的药物当中，大多数为核苷类似物例如AZT、ddI、ddC和D4T。这些核苷类似物并不是象所要求的那样是特异性的，因此不得不以相对高的剂量水平给药。在这些剂量水平下，核苷类似物引起相当的毒性，限制了它们的长期使用。
为克服这些特异性和毒性问题，已开发多种所述HIV逆转录酶的非核苷类抑制剂。例如来自杨森公司的逆转录酶抑制剂TIBO在纳摩尔浓度下抑制HIV且未呈现出临床显著的毒性。TIBO和所述非核苷类逆转录酶抑制剂奈韦拉平两者迅速进行患者II期临床试验。然而，不久变得明显的是这些非核苷类抑制剂体内迅速选择出其对抗通常剂量的所述各自抑制剂的HIV突变型。例如在奈韦拉平情况中，仅在治疗四周后，患者血清中分离出的病毒与未治疗患者中分离出的病毒相比较对所述药物的敏感性低100倍(Drug Design & Discovery19928第255-263页)。对已进入临床试验的其它非核苷类RT抑制剂已出现了相似的模式，即当给予患者时，有体外活性的默克公司的L-697661和普强公司的地位韦啶(delavirdine)(U-87201)已迅速产生对抗HIV的突变型。尽管限于在尝试延缓抗药性的发展中的特定联合给药方案，具有上述缺点的奈韦拉平和地位韦啶最近已经登记用于临床。
国际专利申请第WO 95/06034号描述一系列新的脲衍生物，其呈现良好的体外抗HIV逆转录酶活性并在细胞培养中呈现良好的抑制HIV复制作用。然而，在WO 95/06034中所述化合物的实际应用受到它们不佳的药代动力学表现的阻碍。此外，与许多非核苷类逆转录酶抑制剂一样，在WO 95/06034中的化合物在缓慢抗药性发展的关键参数上和由其它的抗病毒药方案产生的抗HIV突变型活性的良好模式上留有改进的余地。
berg等于1995年在Santa Fe举行的ICAR上用墙报特别公开了以上提及的WO 95/06034中并具有下式的外消旋化合物
此时，以上描述的化合物被看作比含有带甲氧基/乙酰基的苯环的硫脲的变体具有更小的意义。然而，与现有技术的具有良好的药代动力学性质和延长的病毒抗药性的时间的化合物相比较，我们现已发现另外的取代模式证实它们具有改善的抗药性模式。因此，本发明提供了将非核苷类抑制剂优越的特异性与所有现有技术抑制剂缺乏的临床实用性相结合的抑制剂。
发明内容
本发明提供式I化合物：
Figure A0312722400061
其中
R1为卤素；
R2为C1-C3烷基；
Rx为氰基或溴；
和它们的药学上可接受的盐和前药。
本发明另外提供包括式I化合物和为此药学上可接受的载体或稀释剂的药用组合物。本发明另外的方面提供了抑制HIV的方法，该方法包括将式I化合物给予HIV的患者。本发明也扩展到治疗中式I化合物的用途，例如在制备用于治疗HIV感染的药物中的用途。
在治疗HIV引起的疾病中，所述式I化合物优选以达到大约10至1000nM的血浆水平的量给药并且更优选为100至500nM。这相应于依所述制剂的生物利用度而定的剂量比例为0.01至10mg/kg/天，优选为0.1至2mg/kg/天。正常成人的一般剂量比例将为每天大约0.05至5g，优选为每天一至四个剂量单位，0.1至2g例如500-750mg。
在权利要求1中特别关于药代动力学的优选的化合物子集具有所述结构IA：
其中R1和R2如上定义，包括它们的药学上可接受的盐和前药。
在式I中，特别易于形成前药的另一个有利的化合物子集包括其中Rx为溴的化合物。
R1优选为氯并且更优选为氟。适宜的R2基团包括甲基、异丙基、正丙基并且优选为乙基。
如上所述，所述环丙基环以顺式构型存在，允许存在两个对映体，1S，2S和1R，2R(分别和非常规指明在SE 980016-7和SE 9800113-4中为2R，1S和2S，1R)：
Figure A0312722400071
这些对映体每一个为有效的抗逆转录病毒药物，尽管所述不同的对映体在生理性质上能够表现出细微的差异。例如所述1S，2S和1R，2R对映体在所述P450系统中能显示出不同模式的代谢。其中Rx为氰基的化合物的1S，2S对映体为特别优选，因为其独一无二地呈现出有能力避免所述P450系统中的关键成分。其它的逆转录病毒药物例如所述HIV蛋白酶抑制剂利托那韦(ritonavir)与所述P450系统广泛地相互作用，导致大量的不合乎需要的生理应答，其包括广泛改变其它联合给予药物的代谢。当患者期待多年(如果不是十年的话)服用多种药剂时，这与用于慢性感染所给予的药物特别相关。
式I化合物适宜的前药包括式II那些化合物：
其中
R1、R2和Rx如上定义，
R3为H、(CHm)nNR5R6；
R4为H、C1-C3烷基、(CHm)nNR5R6、(CHm)nC(＝O)R5、(CHm)nOH、OR7、卤素、CF3或CN；或者
R3和R4一起定义为具有0-2个杂原子和/或0-2个不饱和键和/或0-2个取代基的5或6元稠环；
R5为H、C1-C3烷基、C(＝O)R7或1至4个氨基酸的肽；
R6为H、C1-C3烷基；或者
R5和R6一起定义为具有0或1个另外的杂原子和/或0-2个不饱和键和/或0-2个取代基的5或6元环；
R7为H、C1-C12烷基、(CHm)nNR5R6；
X和包含其的环定义为具有0至3个不饱和键和/或0至3个选自S、O和N的杂原子的5或6元环；
m独立为1或2；
n独立为0、1或2；
和它们的药学上可接受的盐。
其中Rx为氯的化合物的相应前药形成本发明的另一个方面。
在下文指的是X-环的含有X的环结构可为饱和的或具有1-3个不饱和键，包括具有芳香特征的环。优选的X-环包括环己环或环己烯环或者更优选为苯环。其它优选的X-环包括吗啉代或者更优选为吡啶环。或者，X-环可定义为五元环例如戊烯基或吡咯基。
在R3和R4结合形成含有任选杂原子的环的情况中，对X-环适宜的稠合环系统包括萘基、喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基或苯并咪唑环系统。在R4和R5结合形成环的情况中，对X-环的适宜的取代基环包括吗啉代和哌啶子基。这些稠合的或取代基的环可以被卤素、卤代甲基、氨基如(CHm)nNR5R6、C(＝O)NR5R6、羟基、羟基甲基、羧基、羧基甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基等任选取代。
X-环可与相邻的羰基部分通过亚甲基或亚乙基隔开，其可以被取代基如卤素、卤代甲基、氨基、氨基甲基、羟基、羟基甲基、羧基、羧基甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基等任选取代。优选X-环与所述羰基相邻。
由X-环系统、R3、R4和如果存在的R5-R7表示的部分优选具有一点碱性。这能通过选择适宜的碱性杂环作为所述X-环，例如吡啶基或苯并吡啶基来达到。或者，R3至R7中的一个或多个可包含碱性取代基如伯、仲或叔胺、氨基酸等。
有利的R3和/或R4基团包括NH2、N(CH2)2和NHC1-3烷基如NHCH3或NHCH2CH3。R3优选处于相对于所述羰基和其任选的间隔基团的间位，尤其是当含有X的环为苯基或者当含有X的环为杂芳香环例如吡啶-3-基时，R3处于对位。通常优选的p和/或n的值为零，即各自的基团不存在。
本发明优选化合物包括：(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
和它们的药学上可接受的盐。
其它优选的化合物包括：
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
和它们的药学上可接受的盐。
本发明其它合适的化合物包括：
(1R，2R)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
和它们的药学上可接受的盐。
其它合适的化合物包括：
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；
和它们的药学上可接受的盐。
本发明优选的化合物包括：
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴代吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
和它们的药学上可接受的盐。
另外优选的化合物包括：
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；
和它们的药学上可接受的盐。
式I化合物的适宜的药学上可接受的盐包括有机羧酸盐，例如乙酸、乳酸、葡糖酸、枸橼酸、酒石酸、马来酸、苹果酸、泛酸、羟乙磺酸、草酸、乳糖酸和琥珀酸，有机磺酸例如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对氯苯磺酸和对甲苯磺酸的盐；并且包括无机酸例如盐酸、氢碘酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸盐。
在保持采用HIV抑制剂通常实践中，共同给予一至三种另外的抗病毒药物以提供协同应答和确保互补抗性模式是有利的。这样另外的抗病毒药可包括AZT、ddI、ddC、D4T、3TC、阿巴卡韦(abacavir)、阿德福韦(adefovir)、阿德福韦二匹伏酯(adefovir dipivoxil)、双-POC-PMPA、膦甲酸、羟基脲、赫斯特-拜耳HBY097、依法韦仑(efavirenz)、曲韦定(trovirdine)、奈韦拉平、地位韦啶(delaviridine)、PFA、H2G、ABT606、DMP-450、洛韦胺(loviride)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦、茚地那韦(indinavir)、氨普奈韦(amprenavir)(Vertex VX478)、奈非那韦(nelfinavir)等，一般的以反应它们各自的活性和生物利用度的摩尔比例给药。一般这样的比例相对于式I化合物为25∶1至1∶25。
尽管对于所述活性剂而言可单独给药，但是其优选作为药用制剂的一部分存在。这样的制剂将包括与一种或多种可接受的载体一起的以上定义的活性剂并且任选包括其它的治疗成分。所述载体必须在与所述制剂的其它成分相容性方面是可接受的并且对接受者无害。
所述制剂包括那些适宜于口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道或非肠道(包括皮下、肌内、静脉和透皮)给药。所述制剂可便利地以单位剂型例如片剂和缓释胶囊剂形式存在，并且可通过任何药学领域熟知的方法进行制备。
这样的方法包括使以上定义的活性剂与所述载体混合在一起的步骤。所述制剂一般通过使活性剂与液体载体或粉末的固体载体或两者皆有之均匀地和紧密地混合在一起，然后如果必要，使所述产物成形来制备。
在本发明中用于口服的制剂可作为独立的单位如每一种含有预先确定量的所述活性剂的胶囊剂、扁囊剂或片剂，作为散剂或颗粒剂，作为所述活性剂在水溶性或非水溶性液体中的溶液剂或混悬剂或者作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂和作为大药丸(bolus)等呈现。
关于口服给药的组合物(例如片剂和胶囊剂)，术语适宜的载体包括媒介物例如普通的赋形剂，例如粘合剂如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(povidone)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟基丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填充剂和载体如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、磷酸二钙、氯化钠和藻酸；和润滑剂如硬脂酸镁和其它的金属硬脂酸盐、硬脂酸、硅酮液、滑石粉、蜡类、油类和胶态二氧化硅。也能够使用矫味剂例如薄荷、冬青油、樱桃香精等。可要求加入着色剂以使所述剂型易于辨别。也可以本领域熟知的方法包衣片剂。
用于口服给药的合适的载体包括以溶液剂、混悬剂或乳剂形式存在的，任选以常规方法包囊化的或以单位剂型存在的液体制剂。有利的制剂包括阿拉伯胶/吐温/水、吐温/水、丙二醇、具有10-20％乙醇的植物油(如花生油、红花油、橄榄油等)、植物油/Capmul MGM、Capmul MCM/丙二醇、甲基纤维素/水、植物油/硬脂酰基单甘油酯、植物油/单不饱和脂肪酸甘油酯等。
片剂可通过任选与一种或多种辅助成分一起压制或模压来制备。通过在适宜的机械中，压制与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂任选混合的，以自由流动的形式如粉末或颗粒存在的所述活性剂可制备压制片剂。通过在适宜的机械中，模压用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物可制备模压片剂。所述片剂可任选被包衣或刻痕并且配制以便提供缓慢或控制释放的所述活性剂。
适宜用于局部给药的制剂包括含有在矫味的基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中的所述活性剂的糖锭剂、在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的所述活性剂的锭剂和含有在适宜的液体载体中的所述活性剂的漱口剂。
适宜用于皮肤局部给药的制剂包括可作为含有活性剂和药学上活性载体的软膏剂、霜剂、凝胶剂和糊剂呈现。举例说明的局部传递系统为含有所述活性剂的透皮贴剂。其它的局部制剂包括防腐药签，其在例如注射器或毛细管采血样的侵袭性过程之前释放所述活性剂到皮肤上。这样的药签中和来自所述侵袭性过程流出的血液或血清中的HIV，由此帮助防止HIV经针头意外转移至健康的护理工作者。这样的药签可包括浸泡在挥发性溶剂例如乙醇中的所述活性剂溶液中的灭菌手术纱布垫并且单个包装在密封的香囊中。
用于直肠或阴道给药的制剂可作为具有包括例如可可豆脂或水杨酸盐的适宜的基质的栓剂和阴道栓。其它的阴道制剂能够作为棉塞剂、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂呈现，它们含有除了所述活性剂以外的作为在本领域是已知的适当的载体。
适宜用于鼻给药的其中所述载体为固体的制剂包括具有粒子体积例如在所述范围20至500微米的粗粉末，该粉末以其中服用鼻吸药的方式给药，即通过从举至贴近鼻子的所述粉末容器迅速吸入给药。适宜用于例如作为鼻喷雾剂或者作为鼻滴剂给药的其中所述载体为液体的制剂包括所述活性剂的水或油溶液。
适宜用于非肠道给药的制剂包括可含有抗氧化剂、缓冲液、杀菌剂和使所述制剂与所打算的接受者的血液等渗的溶质的水和非水灭菌注射溶液剂和其可包括悬浮剂和增稠剂的水和非水灭菌混悬剂。所述制剂可以单位-剂量或多-剂量容器例如密封安瓿和小瓶呈现，并且可在冻干(冷冻干燥)条件下贮存，使用前仅需要立即加入所述灭菌液体载体例如注射用水。可由先前描述的那种灭菌散剂、颗粒剂和片剂制备临时的注射溶液和悬浮液剂。
本发明另一方面提供用于制备式I化合物尤其是所述顺式异构体的方法，该方法包括下式化合物的库尔提斯重排：
Figure A0312722400181
随后通过使下式化合物偶合和脱除保护，其中R1、R2和Rx如上定义并且PG为羟基保护基团：
Figure A0312722400182
本发明所述方法另外包括用活化的式III化合物酰化的步骤：
Figure A0312722400183
其中R3、R4、X和n如上定义但任选被保护，并且R8为氢或常规活化基团。或者本发明所述方法可另外包括用式IIIa化合物烷基化的步骤：
其中n、R3、R4和X如上定义，但暴露的胺、羟基等取代基用常规保护基团保护。
因此，式I对映体化合物可通过以下反应流程制备：
Figure A0312722400191
以上流程阐明其中Rx为氰基、R1为F和R2为乙基的本发明(1S，2S)化合物的制备，但是相应的方法适合于其它的Rx、R1和R2的变体。适用于第四步骤的所述手性配体可包括例如下式化合物：
为制备1R，2R对映体，使用镜像手性配体。或者为形成外消旋体而省去所述手性配体。
其中p为0的式II的前药能够通过用活化的式III化合物酰化式I化合物来合成，
其中R3、R4、X和n如上定义但是任选被保护，并且R8为氢或常规活化基团。
活化的式III化合物包括在偶合剂例如二环己基-碳二亚胺存在下的酰卤、酸酐、活化酸的酯或者所述酸。代表性的活化酸衍生物包括酰氯、甲酸和乙酸衍生的混合酸酐、衍生于烷氧基羰基卤例如异丁氧基羰基氯等的酸酐、N-羟基琥珀酰胺衍生的酯、N-羟基苯邻二甲酰亚胺衍生的酯、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰胺衍生的酯、2，4，5-三氯苯酚衍生的酯等。用于式III化合物特别是任何取代基的胺的适宜的任选保护基团包括那些打算保护氨基酸或肽的N-末端或者打算保护氨基基团以在合成过程中对抗不合乎需要的反应的基团。常用的N保护基团在Greene的“在有机合成中的保护基团”(John Wiley &Sons，New York，1981)中公开，其通过引用结合到本文中。N-保护基团包括酰基基团例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、三甲基乙酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等；磺酰基例如苯磺酰基、对甲苯磺酰基等，氨基甲酸酯形成基团例如苄氧基羰基、对氯苄氧基羰基、对甲氧基苄氧基羰基、对硝基苄氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、对溴苄氧基羰基、3，4-二甲氧基苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧基羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧基羰基、二苯甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、环戊氧基羰基、金刚烷氧基羰基、环己氧基羰基、苯基硫代羰基等；烷基例如苄基、三苯基甲基、苄氧基甲基等；和甲硅烷基例如三甲基甲硅烷基等。有利的N-保护基团包括甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、三甲基乙酰基、叔丁基乙酰基、苯磺酰基、苄基、叔丁氧基羰基(BOC)和苄氧基羰基(Cbz)。
所述酰化反应用常规酯化条件例如DMAP和DCC在溶剂例如二甲基甲酰胺或吡啶中进行。任选保护基团可以用如在以上Greene中综合讨论的常规技术除去，例如TFA、HCl(aq)/二氧六环或在催化剂存在下氢化，得到式II化合物。
其中p为1的式II化合物能够通过如下方法制备：在常规烷基化条件下，使式III化合物与碘氯甲烷或者混合的二氯甲烷/碘氯甲烷反应，形成式IIIa化合物：
Figure A0312722400211
其中n、R3、R4和X如上定义，但是暴露的胺、羟基等取代基用常规保护基团保护。然后，一般在碱性条件下，例如含有氢化钠的有机溶剂中，式IIIa化合物通过与NaI反应优选转化为相应的碘代衍生物随后与式I化合物偶合。
附图说明
本发明的这些方面现在将通过实施例阐明，仅参照以下非限制性实施例和附图，其中；
图1描述如同在生物实施例2中介绍的本发明化合物与现有技术化合物相比较的抗药性发展速率与时间的关系。
图2描述如同在生物实施例5中介绍的本发明化合物或者现有技术化合物口服给予大鼠后的时间与血浆水平的关系。
图3描述以如同在生物实施例10中介绍的如表面细胞质基因组共振方法测定的本发明化合物与现有技术化合物相比较的逆转录酶的结合动力学。
具体实施方式
中间体的制备
实施例1
3-[1，1-(亚乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯甲醛
在室温下，于5分钟内，向3-氟苯酚(22.4g，0.2mol)、吡啶(24ml，0.3mol)和二氯甲烷(200ml)的溶液中加入20ml(0.225mol)丙酰氯。该反应放热。将所述溶液搅拌另外30分钟。加入二氯甲烷后，以饱和NaHCO3溶液和水洗涤所述有机相，经MgSO4干燥并真空浓缩。得到33.8g(100％)3-氟-1-丙酰氧基苯。在150℃下，使该化合物与33.3g(0.25mol)AlCl3反应10分钟。在小心以水骤冷后，所述反应混合物以乙醚提取三次。干燥(MgSO4)所述醚相并蒸发，得到29.5g(0.176mol，88％)重排产物。将该中间体溶于200ml丙酮和K2CO3(42，0.3mol)中并加入MeI(25ml，0.4mol)。在40℃下，将所述反应混合物加热12小时。过滤反应混合物并蒸发丙酮。将残余物溶于乙醚并以0.5MNaOH溶液和水洗涤所述醚相。干燥(MgSO4)并蒸发，得到31.2g(0.17mol，三步收率86％)的4-氟-2-甲氧基苯基乙基酮。
向4-氟-2-甲氧基苯基乙基酮(31.2g，0.171mol)、乙二醇(10.5ml，0.188mol)在苯(300ml)的溶液中加入1g对甲苯磺酸。在迪安-斯达克装置中将所述反应混合物回流大约12小时。在冷却后，以1M NaOH溶液洗涤所述有机相几次并干燥(Na2SO4和K2CO3)。蒸发溶剂并得到大约38g缩醛。根据毛细管GC其纯度为88％和杂质基本上为未反应的酮。在-65℃和在氮气氛下，向所述缩醛在THF(450ml)的溶液中滴加入128ml(0.32mol)的2.5M正丁基锂。在保持所述温度在大约-65℃的同时，加入DMF(25ml，0.32mol)在THF(50ml)中的溶液。使所述反应混合物缓慢达到室温并根据GC在大约30分钟后未留下起始原料。在另一个1小时后，所述反应混合物以饱和NH4Cl溶液骤冷并以乙醚提取三次。干燥(Na2SO4)后在硅胶柱(来自默克硅胶60，粒度0.04-0.063mm)上纯化所述残余物，以EtOAc 1和己烷9洗脱，得到10g(25％)标题化合物。
1H NMR(CDCl3)δ0.85(t，3H)，2.1(q，2H)，3.8-3.95(m，2H)，3.97(s，3H)，4.0-4.15(m，2H)，6.9(t，1H)，7.7-7.8(m，1H)，10.4(s，1H)。
实施例2
3-[1，1-(亚乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯
在室温下和在氮气氛中，向甲基三苯基溴化鏻(14.3g，40mmol)在THF(250ml)的悬浮液中加入16ml(40mmol)的2.5M正丁基锂。然后向得到的溶液中加入在THF(30ml)中的3-[1，1-(亚乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯甲醛(10g，39.5mmol)。然后在室温下将所述反应混合物搅拌2小时并倾入到己烷和盐水的混合物中。所述有机相以盐水洗涤两次和以水洗涤一次。蒸发溶剂后，通过以氧化铝(来自默克的氧化铝90acc.Brockmann)填充的漏斗过滤所述残余物并以EtOAc 1和己烷9洗脱，以便于除去所形成的三苯基氧化鏻。蒸发有机溶剂得到残余物，最后将其在硅胶柱上纯化，以EtOAc 1和己烷9洗脱，得到6.9g(70％)如同通过毛细管GC测定的具有94.5％纯度的标题化合物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ0.85(t，3H)，2.1(q，2H)，3.8(s，3H)，3.8-3.95(m，2H)，4.0-4.1(m，2H)，5.55-5.65(m，1H)，5.95-6.05(m，1H)，6.7-6.85(m，2H)，7.3-7.4(m，1H)。
实施例3
(1S，2R)-顺式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)环丙基羧酸
如同Evans等在J.Am.Chem.Soc.1991，113，726-728中通常描述的那样，使用通过三氟甲磺酸铜(I)(679mg，1.35mmol)和手性配体([2，2’-亚异丙基双((4R)-4-叔丁基-2-噁唑啉)](794mg，2.7mmol)催化的不对称环丙烷化反应，由3-[1，1-(亚乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯(19.4g，69mmol)和重氮基乙酸乙酯(29ml，275mmol)制备(1S，2R)-顺式-2-[3-(1，1-亚乙二氧基)乙基-6-氟(2-甲氧基-苯基)环丙基羧酸乙酯。在硅胶层析法后，得到9.4g(40.5％)所述乙酯。通过在手性柱上的HPLC测定，对映体过量为99％。将所述酯溶于150ml二氧六环中并且加入30ml的6M HCl。将所述反应混合物搅拌过夜并在乙醚和盐水之间分配。蒸发溶剂，得到19g粗品。将所述产物溶于甲醇(250ml)和水(75ml)中并加入6g(250mmol)的LiOH。将所述反应混合物加热至90℃反应24小时并且蒸发大部分溶剂。将残留的混合物酸化并以二氯甲烷提取三次。蒸发溶剂，得到11.2g的标题化合物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ1.15(t，3H)，1.59(t，2H)，2.10-2.17(m，1H)，2.22-2.32(m，1H)，2.91(q，2H)，3.80(st，3H)，6.82(t，1H)，7.44-7.50(m，1H)，11.30(宽s，1H)。
实施例4
(1R，2S)-顺式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)环丙基羧酸
如同对实施例3中所述酸描述的那样，由3-[1，1-(亚乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯制备该化合物。所使用的手性配体为2，2’-亚异丙基双((4S)-4-叔丁基-2-噁唑啉)。
1H NMR(250 Mhz，CDCl3)δ7.48(q，1H)，6.84(t，1H)，3.82(s，3H)，2.93(q，2H)，2.29(q，1H)，2.14(q，1H)，1.60(m，2H)，1.16(t，3H)。
制备式I和II化合物
实施例5
(±)N-[顺式-2-(2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
在氮气氛下，将3-[1，1-(亚乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯(32.4g，实施例2)和溴化铜-二甲硫复合物(0.30g)在二氯乙烷(200ml)中的溶液加热至80℃。在7小时内加入在二氯乙烷(600ml)中的重氮基乙酸乙酯(54ml)。加入完成后，结束加热。在16小时后，蒸发溶剂并在硅胶上纯化所述残余物，以乙酸乙酯和己烷洗脱，得到顺式-酯(6.5g)。
将所述顺式-酯(3.7g，10.9mmol)溶于乙醇(20ml)中并将KOH(1.8g，32.7mmol)溶于水(10ml)中。合并所述溶液并加热至回流3小时。加入水(30ml)并以己烷(20ml)洗涤所述溶液两次。在冰浴上冷却水相并以稀HCl酸化。以甲苯提取所述溶液三次。干燥(MgSO4)甲苯相并蒸发，得到1.9g的(±)-顺式-2-[3-(1，1-亚乙二氧基丙基)-6-氟-2-甲氧基苯基]环丙基羧酸。
将三乙胺(59μl，0.43mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(92μl，0.43mmol)加入到所述酸(120mg，0.39mmol)在干燥甲苯的溶液中。在室温下，将所述溶液搅拌1小时，然后加热至120℃。在1小时后，加入2-氨基-5-氰基吡啶(51mg，0.43mmol)。维持加热另外3小时。在16小时后，蒸发溶剂，所述残余物溶于二氯甲烷(30ml)中并以稀HCl洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到152mg。将所述产物溶于二氧六环中并加入HCl(6N，1ml)。在2小时后，蒸发所述混合物，使其溶于二氯甲烷(25ml)中，以水(10+10ml)洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到117mg。所述残余物在硅胶上纯化，以乙酸乙酯和己烷洗脱，得到37mg的2-甲氧基苯基中间体产物。
在-60℃下，将三溴化硼在二氯甲烷中的1M溶液(194μl，0.194mmol)加入到所述2-甲氧基苯基中间体(37mg，0.097mmol)在二氯甲烷中的溶液中。在10分钟后，撤除冷却浴并继续搅拌2小时。以二氯甲烷稀释所述溶液，以稀NaHCO3和水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。所述残余物由MeCN重结晶，得到17mg标题化合物。
1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ1.07-1.16(m，4H)，1.41-1.50(m，1H)，1.91-2.01(m，1H)，3.06-3.19(m，3H)，6.86(dd，1H)，7.43(d，1H)，7.80-7.90(m，1H)，7.97-8.08(m，2H)，8.32(d，1H)，9.83(s，1H)，13.2(d，1H)。
实施例6
(1R，2R)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
将三乙胺(0.85ml，6.1mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(1.72g，6.1mmol)加入到在实施例4中制备的所述酸(1.47g，5.5mmol)在干燥甲苯(15mL)中的溶液中。在室温下，于氩气氛中将所述溶液搅拌30分钟，然后加热至120℃。在15分钟后，加入2-氨基-5-氰基吡啶(0.99g，8.9mmol)在DMF(3mL)中的溶液。继续加热4小时。蒸发甲苯，所述混合物以乙醚(100mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释并以1M HCl、H2O和盐水洗涤。干燥(Na2SO4)所述有机层并浓缩。所述残余物以硅胶快速柱层析法纯化，以乙酸乙酯/正己烷1∶10至1∶1洗脱，得到1.6g(66％)所述2-甲氧基苯基中间体。
在-72℃下，于氩气氛中将三氯化硼在CH2Cl2中的1M溶液(11.0mL，11.0mmol)加入到所述2-甲氧基苯基中间体(1.40g，3.66mmol)在CH2Cl2(80mL)中的溶液中。在10分钟后，撤除冷却浴并继续搅拌1小时15分钟。所述溶液以CH2Cl2稀释并以NaHCO3水溶液、H2O和盐水洗涤。干燥(NaSO4)有机层并浓缩。来自乙腈/H2O 1∶1的沉淀给出0.62g纯的标题化合物。将其残余物浓缩并通过以乙酸乙酯/正己烷1∶10至1∶1和乙酸乙酯洗脱的层析法，然后从乙腈结晶，给出0.2g标题产物。其产量为0.82g(61％)。如同通过在手性柱上的HPLC测定的那样，其ee为95％。[α]d 22-171.2°(c＝0.50，CH2Cl2)。
1H NMR(250Mhz，CDCl3)δ13.35(d，1H)，10.02(br s，1H)，9.40(br s，1H)，8.11(s，1H)，7.71(m，2H)，7.00(m，1H)，6.61(t，1H)，3.21(m，1H)，3.01(q，2H)，2.03(m，1H)，1.55(m，1H)，1.29(m，4H)。
实施例7
(1R，2R)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
在室温下，于氩气氛中向在实施例6中描述的化合物(1.64g，4.4mmol)、BOC-保护的3-氨基苯甲酸(1.6g，6.6mmol)和4-二甲基氨基吡啶(269mg，2.2mmol)在20ml二氯甲烷和10ml的DMF中的溶液中加入1.36g(6.6mmol)DCC。将所述反应混合物搅拌24小时。小心蒸发溶剂并使用作为溶剂的己烷/乙酸乙酯1∶1，在硅胶上纯化残余物，得到2.6g的BOC-保护的标题产物。在0℃下，将所述产物加入到75ml三氟乙酸中。然后在0℃下将所述混合物搅拌1小时。小心真空除去溶剂。在乙酸乙酯和饱和碳酸钾之间分配所述残余物。干燥所述有机相并蒸发。使用作为洗脱剂的乙酸乙酯/己烷4∶1，在硅胶柱上纯化残余物，得到1.03g为游离碱的标题化合物。以在乙醚中的3ml的1M HCl处理该中间体并得到标题化合物0.84g。HPLC纯度为大约97％。
1H NMR释出的胺(250MHz，CDCl3)δ1.09(t，3H)，1.2-1.3(m，1H)，1.4-1.5(m，1H)，1.95-2.00(m，1H)，2.83(q，2H)，3.15-3.25(m，1H)，3.85(s，2H)，6.90(dd，2H)，7.09(t，1H)，7.20-7.27(m，1H)，7.44-7.46(m，1H)，7.56(dd，1H)，7.65-7.77(m，2H)，8.13(d，1H)，9.1(宽s， 1H)，9.6(宽s，1H)。
实施例8
(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
在氮气氛下，将三乙胺(670μl，4.8mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(1.05ml，4.9mmol)加入到在实施例3中制备的所述酸(1.2g，4.5mmol)在干燥甲苯(10ml)中的溶液中。在室温下，将所述溶液搅拌30分钟，然后加热至120℃。在15分钟后，加入2-氨基-5-氰基吡啶(0.80g，6.7mmol)在二甲基甲酰胺(1.5ml)中的溶液并继续加热4小时。所述溶液以乙醚稀释并以1M盐酸洗涤。干燥(MgSO4)所述有机层并浓缩。残余物经硅胶快速层析法纯化(梯度洗脱，开始以正己烷/乙酸乙酯1∶1，以纯的乙酸乙酯完成)，得到稍微不纯的2-甲氧基苯基衍生物(0.93g)。如同以上描述的那样，重复层析法，得到所述纯的2-甲氧基苯基衍生物(0.70g，41％)。
在-60℃下，将三氯化硼在二氯甲烷中的1M溶液(5.5ml，5.5mmol)加入到所述2-甲氧基苯基中间体(700mg，1.8mmol)在二氯甲烷中的溶液中。在10分钟后，撤除冷却浴并继续搅拌2小时。所述溶液以二氯甲烷稀释并以碳酸氢钠水溶液洗涤。干燥(MgSO4)所述有机层并浓缩，将残余物通过硅胶快速层析法(梯度，正己烷∶乙酸乙酯2∶1、1∶1、1∶2，乙酸乙酯∶甲醇(8∶1)纯化，得到标题化合物(500mg，74％)。
[α]D 22+165.0°(C＝0.5，CH2Cl2)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.10-1.16(m，4H，CH3，CH2-环丙基)，1.45(dd，1H，CH2-环丙基)，1.96(q，1H，CH-环丙基)，3.10-3.19(m，3H，CH-环丙基，CH2)，6.85(t，1H，Ar)，7.43(d，1H，Ar)，7.86-8.07(m，3H)，8.32(s，1H)，9.83(s，1H)，13.22(s，1H，Ar-OH)。
实施例9
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
从在实施例6中描述的化合物开始，并使用在实施例7中描述的方法，得到作为盐酸盐的标题产物。
1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.94(t，3H)，0.9-1.0(m，1H)，1.3-1.4(m，1H)，1.85-1.95(m，1H)，2.91(q，2H)，3.05-3.15(m，1H)，7.4-7.5(m，2H)，7.6-7.7(m，1H)，7.9-8.1(m，5H)，8.08(d，1H)，9.85(s，1H)。
实施例10
(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
在室温下，于氩气氛中将(1S，2R)-顺式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)环丙基羧酸(3.0g，11.3mmol)、三乙胺(1.58ml，11.3mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(2.44ml，11.3mmol)溶于干燥甲苯(8ml)中。在室温下，将所述反应混合物搅拌30分钟，之后将温度升至120℃并维持另外15分钟。然后，加入2-氨基-5-溴吡啶(2.08g，12mmol)并在120℃下将所述反应混合物搅拌2.5小时。加入苯和1M HCl溶液并将所述有机相蒸发。使用己烷/乙酸乙酯1∶1作为洗脱剂，在硅胶上纯化残余物。收集适当的部分并得到5.0g(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲。将所述化合物溶于二氯甲烷(100ml)中，将所述溶液保持在氩气氛下并冷却至-65℃。加入三氯化硼(30ml在二氯甲烷中的1M溶液，30mmol)并使所述反应混合物达到室温过夜。加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠。蒸发有机相并使用乙酸乙酯∶甲醇9∶1作为洗脱液，在硅胶上纯化残余物。得到1.96g(41％)标题化合物。
分析：计算值：C 51.2，H 4.1，N 9.9。实测值：C 51.5，H 3.7，N 9.5。
Mp：198-199℃。[α]D 22+149.8°(c＝0.50，CH2Cl2)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ1.28(t，3H)，1.52-1.62(m，2H)，1.94-2.05(m，1H)，2.97-3.06(m，2H)，3.17-3.20(m，1H)，6.60(t，1H)，6.76(宽s，1H)，7.57(dd，1H)，7.67-7.72(m，1H)，7.83(宽s，1H)，8.53(宽s，1H)，13.32(d，1H)。
实施例11
(1R，2R)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
使用手性配体2，2’-亚异丙基双(4S)-4-叔丁基-2-噁唑啉(从Aldrich得到)，如同在实施例3中描述的那样，对在实施例2中描述的化合物实施不对称环丙烷化反应。然后把得到的(1R，2S)-顺式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)环丙基羧酸以类似于实施例10的方法使用，得到标题化合物。
1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ1.05-1.15(m，1H)，1.12(t，3H)，1.40-1.50(m，1H)，1.90(q，1H)，3.00-3.10(m，1H)，3.12(q，2H)，6.82(t，1H)，7.18(d，1H)，7.78(dd，1H)，7.88(宽s，1H)，7.95-8.05(m，1H)，9.41(宽s，1H)，13.20(s，1H)。
[α]D 22-153.8°(c＝0.50，CH2Cl2)。
实施例12
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
在室温下，于氩气氛中向实施例10的化合物(633mg，1.5mmol)、BOC-保护的3-氨基苯甲酸(475mg，2mmol)和4-二甲基氨基吡啶(123mg，1mmol)在20ml二氯甲烷∶DMF1∶1中的溶液中加入415mg(2mmol)的DCC。将所述反应混合物搅拌36小时。小心蒸发溶剂并使用作为溶剂的己烷∶乙酸乙酯1∶1，在硅胶上纯化残余物，得到811mg的BOC-保护的标题产物。将该产物溶于二氧六环(20ml)中并加入10ml的6M HCl，并将所述混合物搅拌过夜。小心真空除去溶剂。以乙醇和乙醚处理残余物，得到255mg作为HCl盐的标题产物。所述HPLC纯度为大约93％。
1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ1.15(t，3H)，1.3-1.4(m，1H)，1.5-1.6(m，1H)，2.05-2.15(m，3H)，3.04(q，2H)，3.23-3.27(m，1H)，7.16(d，1H)，7.34(t，1H)，7.85-7.93(m，2H)，8.05(dd，1H)，8.19(宽d，1H)，8.26(宽s，1H)，8.35-8.37(m，1H)，8.42-8.46(m，1H)。
实施例13
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-L-丙氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
参见例如Bodanszky的“肽合成的实践”第二版，Springer，使用标准化学方法从TCE-保护的3-氨基苯甲酸制备起始化合物BOC-保护的3-L-丙氨酰氨基苯甲酸。如同在实施例12中描述的那样，使该化合物与实施例10的化合物反应，得到作为HCl盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，释出的胺，CDCl3)δ1.10(t，3H)，1.15-1.25(m，1H)，1.4-1.5(m，1H)，1.42(d，2H)，1.76(宽s，2H)，1.88-1.97(m，1H)，2.84(q，2H)，3.1-3.2(m，1H)，3.59-3.67(m，1H)，6.78(d，1H)，7.09(t，1H)，7.85-7.93(m，2H)，8.08(d，1H)，8.11(s，1H)，8.29(宽s，1H)，9.05(宽s，1H)，9.70(宽s，1H)。
实施例14
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(4-吡啶基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲
以类似实施例12的方法，使实施例10的产物与异烟酸缩合，得到作为HCl盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ9.26(d，2H)，8.83(d，2H)，8.14(m，2H)，8.04(dd，1H)，7.39(t，1H)，7.10(d，1H)，3.38(m，1H)，3.08(m，2H)，2.15(m，1H)，1.62(m，1H)，1.38(m，1H)，1.13(t，3H)。
实施例15
(1S，2S)-N-{顺式-2-[2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基]环丙基}-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲
以类似于实施例12的方法，使实施例10的产物与3-二甲基氨基苯甲酸缩合，得到作为HCl盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ8.61(s，1H)，8.45(d，1H)，8.15-8.03(m，4H)，7.92(t，1H)，7.34(t，1H)，7.10(d，1H)，3.48(s，6H)，3.28(m，1H)，3.00(m，2H)，2.11(m，1H)，1.58(m，1H)，1.38(m，1H)，1.14(t，3H)。
实施例16
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-氨基甲基苯甲酰氧基甲氧基)-5-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
以四丁基氢氧化铵溶液(1M在MeOH中)处理3-叔丁氧基羰基酰氨基甲基苯甲酸至pH 9并蒸发。将残余物溶于二氯甲烷中并以氯碘甲烷处理过夜。以水洗涤所述溶液并蒸发，得到粗品3-叔丁氧基羰基酰氨基甲基苯甲酰氧基甲基氯。用少量碘化钠作为催化剂，该物料与实施例10的钠盐(在DMF中用氢化钠制备)反应。在2小时反应后，以乙酸骤冷所述溶液并以二氯甲烷稀释，以水洗涤并蒸发。经以乙酸乙酯/己烷1∶2洗脱，在硅胶上纯化所述粗品产物，并以三氟乙酸处理所述纯的物料并蒸发，得到作为固体的标题化合物的三氟乙酸盐。
1H-NMR(CDCl3)δ1.1(t，3H)，1.3-1.5(m，2H)，2.2(q，1H)，2.9(m，2H)，3.2(bs，1H)，4.2(s，2H)，5.9(q，2H)，6.8(d，2H)，7.0(t，1H)，7.3-8.1(m，9H)。
实施例17
(1S，2S)-N-(顺式-2-(2-(3-氨基-4-甲基苯甲酰氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
按照在实施例12中方法，使来自实施例10的(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲与3-叔丁氧基羰基酰氨基-4-甲基苯甲酸缩合。将其产物以三氟乙酸处理并蒸发，得到作为固体的标题化合物的三氟乙酸盐。
1H-NMR(CDCl3)δ1.1(t，3H)，1.3-1.5(m，2H)，1.9(q，1H)，2.4(s，3H)，2.9(q，2H)，3.1(BS，1H)，7.1(t，1H)，7.4(d，1H)，7.8(m，1H)，7.9(m，2H)，8.1(s，1H)，8.3(s，1H)。
实施例18
(1S，2S)-N-(顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯甲酰氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
按照在实施例12中方法，将实施例10的化合物与3-(N-乙基-叔丁氧基羰基酰氨基)苯甲酸缩合，并将其产物以三氟乙酸处理并蒸发，得到作为固体的标题化合物的三氟乙酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ1.1(t，3H)，1.3-1.6(m，5H)，2.9(q，2H)，3.1(bs，1H)，3.5(q，2H)，7.1(t，1H)，7.2(bs，1H)，7.6(t，1H)，7.7-7.8(m，2H)，7.9(d，1H)，8.1(s，1H)，8.2(d，1H)，8.4(s，1H)。
实施例19
(1S，2S)-N-(顺式-2-(2-quinolo-4-基氧基-6-氟-3-丙酰基苯基)环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
按照实施例12中方法，将实施例10的化合物与4-喹啉酸缩合，并将其产物溶于三氟乙酸中并蒸发，得到作为固体的标题化合物的乙酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ1.1(t，3H)，1.2(m，1H)，1.5(m，1H)，1.9(m，1H)，2.8(q，2H)，3.2(bs，1H)，6.7(d，1H)，7.2(t，1H)，7.5(m，1H)，7.7(t，1H)，7.8-8.0(m，2H)，8.2(d，1H)，8.3(d，1H)，8.8(d，1H)，9.1(m，2H)，9.2(bs，1H)。
实施例20
(1S，2S)-N-(顺式-2-(3-氨基甲基-2-甲基苯甲酰氧基)-氟-3-丙酰基苯基)环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
按照实施例12中方法，将实施例10的化合物与3-叔丁氧基羰基酰氨基-2-甲基苯甲酸缩合。将其产物以三氟乙酸处理并蒸发，得到作为固体的标题化合物。
1HNMR(CDCl3)δ1.1(t，3H)，1.1-1.3(m，2H)，1.9(m，1H)，2.5(s，3H)，2.9(q，2H)，3.1(bs，1H)，4.2(s，2H)，7.0-7.2(m，2H)，7.4(d，1H)，7.6-7.7(m，2H)，7.8-8.0(m，2H)，8.2(bs，2H)。
实施例21
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-(4-氨基甲基苯基羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
通过向4g4-氰基苯甲酸在200ml MeOH中的溶液中加入6.5gDCC制备4-(叔丁氧基羰基酰氨基甲基)苯甲酸。将所述混合物在室温下搅拌70小时，过滤除去沉淀出的二环己基脲并在真空下浓缩滤液，得到7g粗产物。将所述甲基酯溶于500ml MeOH中并加入9.6gCoCl2 6H2O。将所述混合物以NaBH4分次处理。5小时后把所述反应混合物浓缩并除去沉淀。滤液以150ml的1M HCl(aq.)酸化并以2×100ml的CH2Cl2提取。该酸性的水相以100ml的25％NH3(aq.)处理，以3×100ml CH2Cl2提取，以Na2SO4干燥并浓缩，得到2.64g棕色的油。
将该油溶于30ml的二氧六环/水混合物(2∶1)中并以1.5g NaOH(s)处理20小时。除去溶剂并加入40ml叔丁醇/水混合物(1∶1)。加入3.7g二碳酸二叔丁基酯后将该溶液搅拌24小时，然后加入更多的水并用2×50ml己烷提取该混合物。将所述水相以NaHSO4酸化(pH～1.5-2.0)并以3×75ml乙醚提取。将该合并的提取液以50ml盐水洗涤，以Na2SO4干燥并蒸发，得到作为白色固体的中间体4-(叔丁氧基羰基酰氨基甲基)苯甲酸。
将4-(叔丁氧基羰基酰氨基甲基)苯甲酸和来自实施例10的(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲缩合，并使用实施例12中描述的方法除去BOC-保护基团，得到作为盐酸盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ0.98(t，3H)，1.05-1.20(m，1H)，1.31-1.49(m，1H)，1.69-1.90(m，1H)，2.65(q，2H)，3.33-3.49(m，1H)，4.31(宽s，2H)，7.02-7.22(m，2H)，7.35-7.49(m，1H)，7.50-7.68(m，2H)，7.69-7.83(m，2H)，8.08(d，1H)，8.37(宽s，1H)。
实施例22
(1S，2SR)-N-[顺式-2-(6-氟-2-(N-甲基吲哚-5-羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-)-脲
i)N-甲基吲哚-5-羧酸的制备
在室温下，将0.1g吲哚-5-羧酸与2当量的三氟甲磺酸甲酯在1mlDMF中混合。5小时后蒸发溶剂并记录1H-NMR：
1H-MR(250MHz，DMSO-d6)δ2.76(s，3H)，6.57(宽s，1H)，7.46-7.50(m，2H)，7.75(dd，1H)，8.23-8.29(m，2H)，11.56(宽s，1H)。
ii)制备标题化合物
使用实施例12中描述的方法，将N-甲基吲哚-5-羧酸和来自实施例10的(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲缩合，得到作为盐酸盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ1.08(t，3H)，1.15-1.25(m，1H)，1.39-1.50(m，1H)，1.92-2.08(m，1H)，2.89(q，2H)，2.90(s，3H)，3.20-3.35(m，1H)，6.55(宽s，1H)，6.65(宽d，1H)，7.11(t，1H)，7.20-7.29(m，2H)，7.41(dd，1H)，7.72-7.83(m，2H)，7.95(dd，1H)，8.51(宽s，1H)，9.25(宽s，1H)，9.43(宽s，1H)。
实施例23
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-(吲哚-4-羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
使用实施例12中描述的方法，将吲哚-4-羧酸和来自实施例10的(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲缩合，得到作为盐酸盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ1.07(t，3H)，1.17-1.30(m，1H)，1.31-1.47(m，1H)，1.90-2.10(m，1H)，2.89(q，2H)，3.02-3.18(m，1H)，6.75(宽d，1H)，7.00-7.35(m，4H)，7.55(dd，1H)，7.60(d，1H)，7.79(dd，1H)，7.89(d，1H)，8.10(d，1H)，9.27(宽d，2H)。
实施例24
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-(3-氨基-4-氯苯基羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲
使用实施例12中描述的方法，将3-氨基-4-氯苯甲酸和来自实施例10的(1S，2S)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲缩合，得到作为盐酸盐的标题产物。
1H-NMR(250MHz，释出的胺，CDCl3)δ1.10(t，3H)，1.17-1.30(m，1H)，1.42-1.52(m，1H)，1.88-2.01(m，1H)，2.88(q，2H)，3.19-3.31(m，1H)，4.25(宽s，2H)，6.80(宽d，1H)，7.09(t，1H)，7.35(t，1H)，7.48-7.60(m，2H)，7.66(d，1H)，7.73-7.88(m，2H)，9.25(宽s，2H)。
实施例25
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-(吡啶-3-基羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
Figure A0312722400371
将实施例8的化合物(50g，0.68mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.168g，0.81mmol)、烟酸(0.1g，0.81mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(0.041g，0.34mmol)的于燥混合物溶于CH2Cl2(5ml)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(2.5ml)中。然后在室温下搅拌该混合物。20小时后，过滤所述混合物并真空干燥，然后再溶解在最小量的二氯甲烷中并过滤。将该澄清的溶液在硅胶上蒸发并通过层析法(乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(0.168 g，50％)。通过从氯仿-己烷重结晶得到分析样品。
1H NMR(CDCl3)：9.89(br s，1H)，9.41(m，1H)，9.33(br s，1H)，8.86(dd，1H)，8.46(dt，1H)，8.18(d，1H)，7.80(dd，1H)，7.71(dd，1H)，7.49(ddd，1H)，7.13(t，1H)，6.92(d，1H)，3.18(m，1H)，2.88(q，2H)，1.99(m，1H)，1.52(m，1H)，1.25(m，1H)，1.13(t，3H)。
实施例26
(1R，2R)-N-[顺式-2-(6-氟-2-(吡啶-3-基羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-环丙基]--N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
Figure A0312722400381
将实施例6的化合物(0.1g，0.27mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.067g，0.33mmol)和烟酸(0.037g，0.3mmol)的干燥混合物悬浮于二氯甲烷(2ml)中。滴加最少的DMF以得到相当澄清的溶液。然后加入4-(二甲基氨基)吡啶(0.016g，0.14mmol)。在室温下，搅拌该反应混合物。20小时后，真空蒸发溶剂并将粗品残余物溶于盐酸水溶液(pH1-2)中并过滤。然后以碳酸氢钠使所述澄清溶液呈稍微碱性并过滤所沉淀出的产物。通过层析法(二氯甲烷-甲醇，15∶1)纯化，得到标题化合物0.072g(56％)。
1H NMR(CDCl3)：9.85(br s，1H)，9.42(s，1H)，9.35(br s，1H)，8.86(d，1H)，8.47(dt，1H)，8.18(d，1H)，7.81(dd，1H)，7.71(dd，1H)，7.48(dd，1H)，7.13(t，1H)，6.92(d，1H)，3.19(m，1H)，2.91(q，2H)，1.99(m，1H)，1.49(m，1H)，1.24(m，1H)，1.13(t，3H)。
实施例27
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-(N-乙基，N-Boc-氨基)苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
Figure A0312722400391
将实施例8的化合物(0.37g，1.0mmol)，N，N’-二环己基碳二亚胺(0.25g，1.2mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.06g，0.5mmol)和3-(N-乙基-N-丁氧基羰基)氨基苯甲酸(0.320g，1.2mmol)(通过3-氨基苯甲酸的还原性胺化，随后保护所述氨基来制备)溶于二氯甲烷(8ml)和DMF(3ml)中。然后在室温下将所述混合物搅拌。在18小时后，真空除去溶剂并将粗品产物再溶于二氯甲烷中且过滤。所述澄清溶液在硅胶上蒸发并通过层析法(乙酸乙酯-己烷，3∶2)纯化，得到足够纯的标题化合物(0.24g，39％)。
1H NMR(CDCl3)：10.0(br s，2H)，8.20(d，1H)，8.06(d，1H)，8.03(m，1H)，7.77(dd，1H)，7.70(dd，1H)，7.48(m，2H)，7.10(t，1H)，6.95(d，1H)，3.71(q，2H)，3.14(m，1H)，2.90(q，2H)，1.95(q，1H)，1.44(s，10H)，1.2-1.09(m，7H)。
实施例28
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
Figure A0312722400401
将三氟乙酸(5ml)加入到实施例27的化合物(0.120mg，0.19mmol)在二氯甲烷(10ml)中搅拌着的溶液中。在室温下，将所述混合物放置1-2小时。然后蒸发至于。在HPLC(制备型C-18柱，40％水在乙腈中)上纯化所述粗品产物，得到0.045g(30％)作为三氟乙酸盐的标题化合物。
1H NMR(CDCl3)：11.08(br s，2H)，9.83(br s，1H)，9.36(br s，1H)，8.23-8.08(m，3H)，7.82-7.54(m，4H)，7.13(t，1H)，7.02(d，1H)，3.42(q，2H)，3.20(m，1H)，2.83(q，2H)，1.94(q，1H)，1.46(m，1H)，1.34(t，3H)，1.24(m，1H)，1.06(t，3H)。
实施例29
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-二-甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
Figure A0312722400411
将实施例8的化合物(0.1g，0.27mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.067g，0.33mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.016g，0.14mmol)和3-二甲基氨基苯甲酸(0.054g，0.39mmol)溶于二氯甲烷(3ml)和DMF(1ml)中。在室温下将所述反应物放置16小时。然后真空除去溶剂并将固体再溶于二氯甲烷中且过滤。通过层析法(乙酸乙酯-己烷，2∶1)随后经HPLC(C-18柱，0.1％TFA在乙腈中)纯化，得到作为三氟乙酸盐的标题化合物0.1g(58％)。
1H NMR(CDCl3)：8.38-8.23(m，3H)，7.92-7.69(m，4H)，7.15(t，1H)，7.05(m，1H)，3.32(s，6H)，3.26(m，1H)，2.89(q，2H)，2.02(m，1H)，1.55-1.27(m，2H)，1.10(t，3H)。
实施例30
(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-L-缬氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
a)3-(N-Boc-L-缬氨酰)氨基甲基苯甲酸酯
Figure A0312722400422
类似Villaneuve和Chan的方法，四面体快报，1997，第37卷第6489-6492页制备该中间体。在氮气氛下，将N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酸(2.17g，10mmol)和六氯丙酮(1.32g，5mmol)在二氯甲烷(20ml)中的混合物搅拌并冷却至-78℃。滴加入在二氯甲烷(10ml)中的三苯基膦(2.6g，10mmol)并把所述混合物搅拌30分钟。然后滴加入在二氯甲烷(10ml)中的3-氨基苯甲酸甲酯(1.5g，10mmol)，随后加入在二氯甲烷中的三乙胺(1g，10mmol)。然后使所述反应物达到室温，之后真空下蒸发溶剂。经硅胶层析法(己烷-乙酸乙酯，3∶1)纯化残余物，随后从乙酸乙酯-己烷中重结晶，得到0.7g(28％)以上描述的纯的中间体。
1H NMR(CDCl3)：8.30(br s，1H)，8.07(d，1H)，7.85-7.75(m，2H)，7.37(t，1H)，5.15(d，1H)，4.05(m，1H)，3.91(s，3H)，2.26(m，1H)，1.48(s，9H)，1.03(dd，6H)。
b)3-(N-Boc-L-缬氨酰)氨基苯甲酸
将步骤a)中间体(0.65mg，1.8mmol)悬浮于甲醇(6ml)和水(2ml)中。加入氢氧化锂(0.11g，3.9mmol)并在室温下将所述混合物搅拌24小时。然后加入水(10ml)并把其体积减少至一半。以10-20ml乙酸乙酯洗涤所述水溶液，然后以盐酸水溶液酸化。以乙酸乙酯(2×20ml)提取，干燥并真空蒸发，得到以上描述的纯的中间体0.524g(84％)。
1H NMR(CD3OD)：8.23(t，1H)，7.84(d，1H)，7.76(d，1H)，7.42(t，1H)，6.70(d，1H)，4.00(m，1H)，2.08(m，1H)，1.45(a，9H)，1.00(d，6H)。
c)(1 S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-N-Boc-L-缬氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
将实施例8的化合物(0.23g，0.62mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.153g，0.74mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.038g，0.3mmol)和步骤b)中间体(0.25g，0.74mmol)溶于二氯甲烷(9ml)和DMF(3ml)中。在室温下，将所述反应物放置19小时。真空除去溶剂并将固体重新溶于二氯甲烷中且过滤。通过层析法(乙酸乙酯-己烷，1∶1)纯化，得到0.029g(67％)纯的N-保护标题化合物。
1H NMR(CD3OD)：8.56(t，1H)，8.27(s，1H)，7.98-7.82(m，4H)，7.53(t，1H)，7.23(t，1H)，7.10(d，1H)，3.98(d，1H)，3.09(m，1H)，2.90(q，2H)，2.06-1.93(m，2H)，1.44(m，10H)，1.18-0.94(m，10H)。
d)(1S，2S)-N-[顺式-2-(2-(3-L-缬氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲
Figure A0312722400441
将N-保护的步骤c)的化合物(0.16g，0.23mmol)和苯硫酚(0.054g，0.46mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中并冷却至0℃。加入三氟乙酸(6ml)并使所述混合物达到室温且放置1小时。蒸发至干，随后经层析法(二氯甲烷-甲醇，10∶1.5)纯化，得到0.150g(90％)作为TFA盐的标题化合物。
1H NMR(CD3OD)：8.60(s，1H)，8.25(d，1H)，8.0-7.85(m，4H)，7.53(t，1H)，7.21(t，1H)，7.09(d，1H)，5.0(m，1H)，3.12(m，1H)，2.96-2.87(m，2H)，2.20(m，1H)，1.97(m，1H)，1.46(m，1H)，1.09-1.03(m，10H)。
实施例31
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-乙基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
Figure A0312722400451
a)6-乙基氨基烟酸
Figure A0312722400452
通过与实施例35步骤a)中描述的相同的方法，从6-氯烟酸和乙基胺制备该中间体。以1-丁醇替代乙酸乙酯用于提取。重结晶(MeOH-CHCl3)得到0.53g(50％)。
1H NMR(DMSO-d6)：12.1(br s，1H)，8.54(d，1H)，7.77(dd，1H)，7.15(t，1H)，6.45(dd，1H)，3.33(m，2H)，1.14(t，3H)。
b)(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-乙基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
将实施例8的化合物(0.1g，0.27mmol)、6-乙基氨基烟酸(0.084g，0.54mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.127g，0.62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.016g，0.13mmol)溶于DMF(3ml)中并在环境温度下放置。在19小时后，真空除去溶剂并把残余物悬浮于二氯甲烷中且过滤。除去溶剂并经层析法(乙酸乙酯-己烷，2∶1)纯化所述粗品产物，得到标题化合物(0.063g，45％)。
1H NMR(CDCl3)：9.85(br s，1H)，9.25(br s，1H)，8.91(d，1H)，8.18-8.02(m，3H)，7.76-7.67(m，2H)，7.65(t，1H)，6.96(d，1H)，6.37(d，1H)，5.40(m，1H)，3.37(m，2H)，3.19(m，1H)，2.8(q，2H)，1.98(m，1H)，1.49(m，1H)，1.28(t，3H)，1.15(m，1H)，1.10(t，3H)。
实施例32
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(5-溴吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
Figure A0312722400471
将5-溴烟酸(0.065g，0.33mmol)、实施例8的化合物(0.1g，0.27mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.127g，0.62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.016g，0.13mmol)溶于二氯甲烷(4ml)中并在环境温度下放置。在19小时后，将所述混合物过滤并真空除去溶剂。经层析法(乙酸乙酯-己烷，1∶1)纯化所述粗品产物，得到标题化合物(0.040g，27％)。
1H NMR(CDCl3)：9.80(br s，1H)，9.30(d，1H)，9.17(br s，1H)，8.89(d，1H)，8.57(dd，1H)，8.57(dd，1H)，7.80(dd，1H)，7.70(dd，1H)，7.12(t，1H)，6.83(d，1H)，3.25(m，1H)，2.87(q，2H)，2.00(q，H)，1.50(m，1H)，1.24(m，1H)，1.12(t，3H)。
实施例33
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
a)6-氨基烟酸甲酯
Figure A0312722400482
将6-氨基烟酸(2g，22mmol)溶于甲醇(10ml)和硫酸(0.5ml)中。将所述溶液回流过夜并真空蒸发溶剂。将其粗品产物溶于水-EtOAc中并经碳酸氢钠水溶液使之碱化。通过EtoAc提取，得到以上描述的纯的中间体(2.3g，70％)。
1H NMR(DMSO-d6)：8.51(dd，1H)，7.81(dd，1H)，6.66(br s，2H)，6.45(dd，1H)，3.77(s，3H)。
b)6-丁氧基羰基氨基烟酸甲酯
将步骤a)中间体(0.75g，4.9mmol)溶于THF(5ml)中。滴加入双(三甲基甲硅烷基)氨化钠(5ml，2M在THF中)。在室温下搅拌30分钟。加入在THF(8ml)中的二碳酸二叔丁基酯(1.1g，5mmol)。在氮气氛下，将所述反应混合物放置过夜。然后将所述溶液真空蒸发并使之溶于EtOAc(40ml)和0.1M盐酸(100ml)中。分层并以EtOAc(40ml)提取所述水相两次，然后以碳酸氢钠水溶液将其稍微碱化并以EtOAc(20ml)再提取一次。合并所述有机部分，经硫酸钠干燥并经层析法(EtOAc-己烷，1∶4)纯化，得到以上描述的纯的中间体(0.5g，40％)。1H NMR(CDCl3)：8.93(dd，1H)，8.62(s，1H)，8.26(dd，1H)，8.06(dd，1H)，3.91(s，3H)，1.60(s，9H)。
c)6-叔丁氧基羰基氨基烟酸
Figure A0312722400491
将步骤c)中间体(0.4g，1.6mmol)悬浮于甲醇(4ml)和水(1.25ml)中。加入LiOH(0.1g，4mmol)。在室温下，将所述浆化物放置48小时。然后将澄清的溶液真空浓缩并溶于水中，以乙酸酸化(pH＝4-5)。以EtOAc提取，得到以上描述的纯的中间体(0.27g，70％)。
1H NMR(DMSO-d6)：9.98(s，1H)，8.74(d，1H)，8.18(d，1H)，8.88(d，1H)，1.49(s，9H)。
d)(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-叔丁氧基羰基氨基-吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
Figure A0312722400501
将实施例8的化合物(0.150g，0.41mmol)、步骤c)中间体(0.17g，0.49mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.1g，0.49mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.06g，0.49mmol)溶于DMF(2ml)中。在室温下，将所述混合物搅拌过夜，然后放入50℃油浴中2小时。在硅胶上蒸发并经层析法纯化，得到N-保护的标题化合物(0.048g，20％)。
1H NMR(CDCl3/CD3OD)：9.02(s，1H)，8.43(dd，1H)，8.22(d，1H)，8.10(d，1H)，7.81-7.75(m，2H)，7.15(t，1H)，7.08(d，1H)，3.15-3.05(m，1H)，2.90(q，2H)，1.96(m，1H)，1.56(s，9H)，1.50-1.40(m，1H)，1.25-1.09(m，4H)。
e)(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
Figure A0312722400502
将步骤d)中间体(0.048g，0.08mmol)溶于二氯甲烷(2ml)中。加入三氟乙酸(1ml)并把所述混合物搅拌1小时。真空蒸发，得到粗品标题化合物。将所述产物溶于乙醚(2ml)中并放置过夜。滤出形成的白色沉淀，得到作为三氟乙酸盐的纯的标题化合物(0.032g，65％)。
1H NMR(CD3OD/CDCl3)：8.71(d，1H)，8.29(dd，1H)，8.16(t，1H)，8.82.7.74(m，2H)，7.20 7.10(m，2H)，6.96(d，1H)，3.25(m，1H)，2.86(m，2H)，1.96(m，1H)，1.52-1.43(m，1H)，1.24-1.19(m，1H)，1.09(t，3H)。
实施例34
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-氯吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
Figure A0312722400511
将实施例8的化合物(0.15g，0.4mmol)、6-氯烟酸(0.076g，0.49mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.1g，0.49mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.024g，0.2mmol)溶于二氯甲烷(4ml)中。将所述混合物放置过夜，真空蒸发，经层析法(EtOAc-己烷，1∶2)纯化，得到标题化合物(0.067g，32％)。
1H NMR(CDCl3)：9.77(br s，1H)，9.18(br d，2H)，8.39(dd，1H)，8.14，7.79(dd，1H)，7.71(dd，1H)，7.46(d，1H)，7.13(t，1H)，6.92(d，1H)，3.25(m，1H)，2.88(q，2H)，2.00-1.90(m，1H)，1.55-1.46(m，1H)，1.25-1.22(m，1H)，1.11(t，3H)。
实施例35
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-二甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
a)6-二甲基氨基烟酸
Figure A0312722400522
在130℃下，在密封压力容器中将6-氯烟酸(0.5g，3.17mmol)和二甲基胺(10ml，40％在水中)加热6小时。然后除去溶剂并以水提取残余物，并把其pH调至4-5。以二氯甲烷提取，得到以上描述的纯的中间体(0.1g，20％)。
1H NMR(CDCl3)：8.87(dd，1H)，8.04(dd，1H)，6.49(dd，1H)，3.18(s，6H)。
b)(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-二甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
将实施例8的化合物(0.13g，0.3mmol)、步骤a)中间体(0.05g，0.3mmol)、N，N’-二环己基碳二亚胺(0.09g，0.4mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.02g，0.18mmol)溶于二氯甲烷(3ml)和DMF(1ml)中。将所述混合物放置过夜，真空蒸发并经层析法(EtOAc-己烷，2∶1)纯化，得到标题化合物(0.06g，39％)。
1H NMR(CDCl3)：10.10(br s，1H)，9.29(br s，1H)，8.18(d，1H)，8.12(dd，1H)，7.76-7.60(m，2H)，7.06(t，1H)，6.95(d，1H)，6.62(d，1H)，3.18(m，7H)，2.83(q，2H)，2.10-1.99(m，1H)，1.51-1.42(m，1H)，1.19(m，1H)，1.09(t，3H)。
实施例36
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲-O-4-羟基苯甲酸酯
a)4-苄氧基苯甲酸
向4-羟基苯甲酸(6.9g，50mmole)在150ml的DMF中的溶液中加入叔丁醇钾(12.34g，110mmole)，并在室温下将所述混合物搅拌一小时。加入苄基溴(20.5g，120mmole)并在室温下将所述混合物搅拌两天。减压下蒸发所述混合物并加入100ml的1，4-二氧六环和氢氧化钠(6.0g，150mmole)在50ml水中的溶液。将所述混合物回流两小时，冷却并减压下蒸发。加入水并以乙酸使所述混合物酸化。将所述产物过滤，以冷水洗涤并干燥。产量：10.2g＝89％。
b)4-苄氧基苯甲酰氯
向4-苄氧基苯甲酸(2.28g，10mmole)在20ml干燥二氯甲烷中的混合物中加入5滴DMF和2.5ml亚硫酰氯。将所述混合物回流三小时并减压下蒸发。产量：2.45g＝100％。
c)(1S，2H)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶-2-基)脲-O-4-苄氧基苯甲酸酯
向(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲(184mg，0.5mmole)在3ml的DMF中的溶液中加入叔丁醇钾(78.5mg，0.7mmole)，并在室温下将所述混合物搅拌一小时。加入4-苄氧基苯甲酰氯(185mg，0.75mmole)在1ml的DMF中的溶液并在室温下把所述混合物搅拌过夜。加入40ml乙酸乙酯并以水将所述有机相洗涤四次。以硫酸钠干燥所述溶液并减压下蒸发。产物经硅胶柱层析法分离。产量：180mg＝62％。
1H-NMR(DMSOδ-6)：0.92(m，4H)，1.31(m，1H)，1.85(m，1H)，2.82(m，2H)，3.06(m，1H)，5.26(s，2H)，7.20(m，2H)，7.38-8.12(m，11H)，8.38(m，1H)。
d)(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)]脲-O-4-羟基苯甲酸酯的合成
在室温和正常压力下，将(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲-O-4-苄氧基苯甲酸酯(170mg，0.29mmole)在15ml乙酸乙酯和15ml甲醇中的溶液用10％披钯炭(30mg)氢化三次。过滤催化剂并以乙酸乙酯和甲醇洗涤，并减压下将所述溶液蒸发。产物经硅胶柱层析法分离。产量：100mg＝70％。
1H-NMR(DMSO δ-6)：0.93(m，4H)，1.32(m，1H)，1.88(m，1H)，2.85(m，2H)，3.05(m，1H)，6.92(m，2H)，7.38(m，2H)，8.00(m，4H)，8.38(m，1H)。
实施例37
(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)]脲-O-亚甲基-4-羟基苯甲酸酯
a)4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸甲酯
向4-羟基苯甲酸甲酯(6.85g，45mmole)在80ml DMF中的溶液中加入叔丁醇钾(5.6g，51mmole)并在室温下将所述混合物搅拌一小时。加入4-甲氧基苄基氯(8.3g，52mmole)并在室温下将所述混合物搅拌过夜。减压下将所述混合物蒸发并加入200ml乙酸乙酯。以水将所述有机相洗涤四次，以硫酸钠干燥并减压下蒸发。产量：12.3g＝100％。
1H-NMR(CDCl3)：3.82(s，3H)，3.88(s，3H)，5.03(s，2H)，6.96(m，4H)，7.36(d，2H)，7.98(d，2H)。
b)4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸
向4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸甲酯(12.2g，44.8mmole)在50ml的1，4-二氧六环中的溶液中加入氢氧化锂(2.15g，89.6mmole)溶液并在60℃下把所述混合物搅拌过夜。减压下蒸发所述混合物并加入5％乙酸。将所述产物过滤，以水洗涤并干燥。产量：10.1g＝87％。1H-NMR(DMSOδ-6)：3.74(s，3H)，5.08(s，2H)，6.92(d，2H)，7.06(d，2H)，7.36(d，2H)，7.90(d，2H)。
c)4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸氯甲酯
向4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸(5.16g，20mmole)在100ml的1，4-二氧六环中的溶液中加入40％氢氧化四丁基铵(14.27g，22mmole)溶液并在室温下将所述混合物搅拌2小时。减压下将所述混合物蒸发并与1，4-二氧六环共同蒸发两次且与甲苯共同蒸发两次。将所述干燥的产物溶于60ml二氯甲烷中并加入碘氯甲烷(35.3g，200mmole)。在室温下，将所述溶液搅拌两天并减压下蒸发。加入大约100ml乙酸乙酯并以水洗涤所述有机相两次。以硫酸钠干燥并减压下蒸发。经硅胶柱层析法纯化其产物。产量：4.48g＝73％。
1H-NMR(CDCl3)：3.83(s，3H)，5.06(s，2H)，5.94(s，2H)，7.00(m，4H)，7.36(d，2H)，8.05(d，2H)。
d)4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸碘甲酯
向4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸氯甲酯(0.77g，2.5mmole)在15ml干燥丙酮中的溶液中加入碘化钠(1.87g，12.5mmole)并在室温下将所述混合物搅拌过夜。减压下将所述混合物蒸发并以乙酸乙酯/水提取。以5％硫代硫酸钠溶液洗涤所述有机相，以硫酸钠干燥并减压下蒸发。产量：0.86g＝86％。
1H-MR(CDCl3)：3.84(s，3H)，5.05(s，2H)，6.14(s，2H)，6.98(m，4H)，7.36(d，2H)，8.00(d，2H)。
e)(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)脲-O-亚甲基-4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸酯
向(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)脲(368mg，1mmole)在5ml的DMF中的溶液中加入60％氢化钠在矿物油中的悬浮液(44mg，1.1mmole)并在室温下将所述混合物搅拌一小时。加入4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸碘甲酯(0.84g，2.1mmole)在2ml的THF中的溶液并在室温下将所述混合物搅拌过夜。加入50ml乙酸乙酯并以水把所述有机相洗涤四次，以硫酸钠干燥并减压下蒸发。经硅胶柱层析法分离所述产物。产量：525mg＝82％。
1H-NMR(CDCl3)：0.91(m，3H)，1.32(m，1H)，1.60(m，1H)，2.04(m，1H)，2.90(m，2H)，3.20(m，1H)，3.82(s，3H)，5.04(s，2H)，5.84-6.06(m，2H)，6.91-8.18(m，13H)。
f)(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)]脲-O-亚甲基-4-羟基苯甲酸酯
向(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)环丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)脲-O-亚甲基-4-(4-甲氧基苄氧基)苯甲酸酯(100mg，0.156mmole)在4ml二氯甲烷中的溶液中加入TFA(0.5ml)并在室温下将所述溶液搅拌一小时。减压下将所述溶液蒸发并经硅胶柱层析法分离产物。产量：45mg＝55％。
1H-NMR(DMSOδ-6)：0.84(m，3H)，1.10(m，1H)，1.48(m，1H)，2.12(m，1H)，2.80(m，2H)，3.19(m，1H)，5.85-6.02(m，2H)，6.84(m，2H)，7.18(m，1H)，7.46(m，2H)，7.74(m，2H)，8.04(m，2H)，8.38(m，1H)。
实施例39
(1S，2S)-N-{顺式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]环丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲
Figure A0312722400571
通过以实施例31相同的方法，由6-甲基氨基烟酸(0.050g，0.33mmol)和实施例8的化合物(0.1g，0.27mmol)制备该化合物。经层析法(乙酸乙酯)纯化所述粗品产物(含有标题化合物和未反应的原料)，得到0.030g(22％)标题化合物。
1H.NMR(CDCl3)：9.8(br s，1H)，9.25(br s，1H)，8.90(d，1H)，8.20(d，1H)，8.10(m，1H)，7.72(m，2H)，7.08(t，1H)，6.9(d，1H)，6.37(d，1H)，3.20(m，1H)，2.95(d，3H)，2.85(q，2H)，1.95(m，1H)，1.48(m，1H)，1.10(t，3H)。
生物实施例1
抗性模式
检测本发明化合物用于抗多种HIV株的抗病毒活性，所述的多种HIV株包括野生型和使用从在Schinazi等的综述中，InternationalAntiviral News，第4卷，第6期，95-107页(1996)描述的其它非核苷类逆转录酶抑制剂所出现的已知突变型。结果呈现在表1中。
表1
HIV株 实施例5  实施例6 实施例8  现有技术*
野生型 0.0012+/-0.0004  0.0008+/-0.0004 0.0007+/-0.0002  0.0056+/-0.004
野生型50％血清 0.01+/-0.009  0.006+/-0.003 0.007+/-0.001  0.023+/-0.011
K103N  0.05+/-0.04  0.017+/-0.008 0.037+/-0.007  0.13+/-0.060
K103N50％血清 0.38+/-0.31  0.17+/-0.07 0.39+/-0.31  0.9+/-0.6
Y181C 0.017+/-0.018  0.006+/-0.002 0.006+/-0.001  0.13+/-0.02
Y181C50％血清 0.10+/-0.06  0.08+/-0.05 0.08+/-0.O6  0.13+/-0.07
Y188L 0.13+/-0.07  0.08+/-0.06 0.06+/-0.02  0.17+/-0.03
Y188L50％血清 1.5+/-0.9  0.9+/-0.05 1.0+/-0.05  1.9+/-1.5
L100I，Y181C ND  ND 0.34+/-0.06  1.0
L100I ND  ND 0.009+/-0.001  0.026+/-0.009
SI ＞41 600  22 500 87 000  5 900
SI50％血清 ND  8 830 4 285  800
所述测试包括在MT-4细胞中以XTT诱导的多种测定(Weislow等，J Nat Cancer Inst 1989，第81卷第8期，577页等)，这包括在50％人血清存在下表明有助于蛋白结合的作用的测定。ED50以μg/ml呈现。基于计算的治疗指数(SI)的原始数据也被呈现，其定义在相应于无HIV细胞产生50％毒性的剂量除以所述ED50。来自所述1995 ICARSanta Fe的现有技术的化合物如上描述。
显而易见地是本发明化合物特别是所述对映体具有比迄今已知的化合物明显更低的ED50值，包括抗已知未定的突变型K103N和Y181C以及L100I和双重突变型L100I、Y181C的值。此外，所述对映体的治疗指数比现有技术的化合物高5至10倍。在HIV疗法的内容中将观察到这些结果，即使患者生命的其余部分不能显著抗众所周知的原病毒HIV，那么患者也能够期待长期服药治疗。因此，需要大的SI以避免蓄积毒性，同时适当给药以维持治疗压力并且防止自发产生对HIV株的抗性。
生物实施例2
时间与抗性
在微量滴定板上，以5-10 TCID50的HIV-1IIIB感染每孔2×104MT4细胞。使用每浓度8对，以大约ED50的浓度加入受试化合物。孵育6天后测量在10μl上清液中的RT活性。
在随后每周一次培养物传代之后，进行以下过程：使在显示＞50％的未处理感染细胞的RT活性的受试化合物的浓度(SIC，初始抑制浓度)下产生的病毒传代给新鲜的MT4细胞。将来自所述八对试验的每一个试验的15μl上清液转移至无受试化合物的细胞(对照组)中和含有相同浓度受试化合物的细胞中，并且另两种分别具有五倍高的浓度。(参见以下表2)。
当允许病毒在最高非毒性浓度(5-40μM)下生长时，收集2-4平行孔并且扩展给出物料用于结果的分析和交叉方式抗性。
表2
允许病毒生长
所抑制的病毒产生
                                                125×SIC
                                    125×SIC    25×SIC→
                                    25×SIC     5×SIC
                        25×SIC     5×SIC→   无化合物
             25×SIC    5×SIC→   无化合物
             5×SIC     SIC
             SIC→     无化合物
SIC→       无化合物
传代(pass)1  传代2     传代3       传代4        传代5
图1描绘了对于本发明化合物(实施例8)病毒抗性生长对时间的曲线。也描绘了以上提到的最近的Santa Fe化合物的相应曲线。显而易见的是本发明化合物显示显著低的抗药性发展的速率。
生物实施例3
P450代谢
在以人细胞色素P450 cDNA(超体(supersomes))Gentest公司Woburn USA转染的杆状病毒感染的昆虫细胞中，测定本发明化合物经过人细胞色素系统P450的主要同种型的代谢。
在过度表达多种细胞色素P450同种型的超体的存在下，在0.5、5和50μM的浓度下，一式两份孵育所述受试化合物，该同种型包括CYP1A2+P450还原酶、CYP2A6+P450还原酶、CYP2C9-Arg 144+P450还原酶、CYP2C19+P450还原酶、CYP2D6-Val 374+P450还原酶和CYP3A4+P450还原酶。孵育液含有固定浓度(例如50皮摩尔)的细胞色素P450并且进行1小时以上。通过UV HPLC色谱测量母体化合物的消失来测定在所述受试化合物代谢中所涉及的给定同种型。
将所述三种浓度测试7.5分钟后，所述寿命保留百分比图提示CYP3A4、1A2、2C19和2A6参与实施例7化合物的代谢。相似构象的P450同种型也参与现有技术的Santa Fe卤代吡啶基化合物的代谢。
令人惊奇地是对实施例8化合物，未记录到明显的具有任何异构体的P450代谢，暗示所述化合物在体内稳定并且联合给予药物的代谢干扰的可能性是相应低的。
生物实施例4
药物代谢动力学
监控来自口服给予式II的前药的式I化合物在大鼠中的释放。以相应于0.027mmol/kg的剂量，将实施例7化合物溶解在丙二醇媒介中并且口服给予成对禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠。在指明的时间间隔，从植入canis颈静脉的导管采集0.2ml的血，离心并冷冻用于以后的分析。释放的式I药物(实施例6)经HPLC测试。将含有40-100μl的每个血浆样品的等分试样与等体积乙腈混合(10秒，Vibrofex)。将所述样品离心(2分钟，14000 RPM)并把30μl的上清液注射进入如下的HPLC系统。
预柱：      RP-18，7μM，15×3.2mm
柱：        YMC基质，3μM，150×3mm
流动相：    60％乙腈在3mM乙酸铵中，pH 6.4
流速：      0.4ml/min
检测：      UV，250nm
表3
时间(min)  母体化合物的血浆水平(μg/ml)
30  0.24，0.35
60  0.18，0.28
120  0.13，0.17
240  0.07，0.12
360  0.05，0.07
在表3中，很清楚，口服给予式II的前药体内释放临床上显著量的式I化合物。
生物实施例5-8
i)预备
在药代动力学实施例中使用的大鼠为体重大约200-250g的雄性Sprague-Dawley大鼠。在实验之前，所述大鼠至少禁食16小时，但是自由接近水。在所述实验的前一天，使用的Efrane、笑气和氧的混合物麻醉所述大鼠。将导管插入大鼠颈静脉。在实验那天，记录大鼠的体重。在口服给予药物或静脉给药注射进入到所述颈的背部之前，短暂麻醉所述动物。每种物质给予两只大鼠。
在口服给药之前，猴子禁食12小时，但是自由接近水。借助婴儿鼻胃喂饲管给予所述受试化合物。在6小时后，所述猴子得到苹果。
ii)剂量制备
把在以下实施例中描述的适当量的所述活性成分溶解/悬浮在丙二醇溶液中或10％阿拉伯胶和1％吐温在水的溶液中，以用于口服给药。将化合物溶于DMSO中以用于静脉给药。
iii)血样采集
在药物给予前，采集血样(大鼠一般为0.6ml，猴子为2ml)并在在药物给予后于指定的时间间隔内(如图所示)，如同前者取得血样。从股静脉轻叩使猴血进入含有EDTA的试管中。将血样离心，以1％SDS/64°/20分钟中和感染的药物并将血浆于-20℃下贮存。
iv)生物分析
如下制备血浆样品：将40-100μl的血浆与等体积乙腈混合(10秒，Vibrofex)。将所述样品离心(2分钟，14000RPM)并把30μl的上清液注射进入如下的HPLC系统。
预柱：    RP-18，7μM，15×3.2mm
柱：      YMC基质，3μM，150×3mm
流动相：  60％乙腈在3mM乙酸铵中，pH 6.4
流速：    0.4ml/min
检测：    UV，250nm
生物实施例5
与最接近的现有技术化合物的比较
将式I化合物的体内稳定性和有效性与最接近的Santa Fe化合物即(+/-)-N-(顺式-2-(6-氟-2-羟基-3-丙酰基苯基)-环丙基)-N’-(5-氯吡啶-2-基)-脲相比较，从而给予在DMSO媒介中0.024mmol/kg剂量的所述各化合物。图2为整个时间内所述各化合物的血浆水平的曲线图(在每种情况下n＝2)。显而易见的是所述各曲线按照常规模式，但是本发明化合物具有超过最接近的现有技术化合物的AUC(0-4小时)1.5倍的AUC(0-4小时)。换言之，本发明化合物比先前描述的衍生物提供大于50％的体内接触，无论是否由于本发明化合物比现有技术化合物更缓慢的清除率还是更高程度的组织结合也已经被测定。
生物实施例6
前药与母体化合物的生物等效性
将多种式II化合物(即式I化合物的前药)给予大鼠并全程监控本发明母体化合物(在这个实施例中为实施例10化合物)的血浆水平。所述溶媒为在水或丙二醇中10％阿拉伯胶和1％吐温(加星号)。在表4中的血浆水平数据指的是个体动物。
表4
化合物 剂量(mmol/kg)  时间(min)   母体化合物的血浆水平(μg/ml)
实施例12  0.053  306090120180240330420  0.20.20.30.20.30.3  0.30.40.40.50.40.4  0.060.120.100.110.080.080.05  0.110.200.200.230.240.150.12
实施例12  0.026  3060120180240330420  0.090.100.090.080.06  0.050.070.080.080.050.030.02
实施例22  0.026  3060120180240360 0.050.040.030.02＜0.02  0.080.110.080.070.04＜0.02
实施例14  0.053  3060120180240360  0.100.150.270.350.350.24  0.080.080.070.090.090.12
实施例18  0.053  3060120180240360  0.120.150.150.230.120.08  0.030.030.070.140.160.08
实施例23  0.053  3060120180240360  0.140.220.360.440.350.14  0.320.490.490.320.270.14
实施例17  0.053  3060120180240360  0.050.070.060.070.070.04  0.050.050.140.200.170.12
实施例29  0.027*  3060120240360  0.2580.2680.1280.051＜0.03  0.031＜0.03＜0.03＜0.03＜0.03
实施例37  0.027*  3060120240360  0.2340.2730.1110.0560.054  0.1370.1890.1330.0450.056
显而易见地是式II的前药体内将临床相应量的式I化合物释放进入血液。所述绝对口服生物利用度(相对于所述iv剂量进行测定，如同在制备部分描述的那样)对实施例37的化合物为28-33％和对服用实施例27的化合物的评价动物为27％。
生物实施例7
不同物种中的生物利用度
将本发明式II的前药(实施例12)以相同剂量(0.026mmol/kg)和相同的溶媒(在水中10％阿拉伯胶和1％吐温)给予大鼠和短尾猴。式I母体化合物(实施例10)的血浆水平作为时间的函数来测量。
表5
物种  时间(min)  母体化合物的血浆水平(μg/ml)
大鼠  3060120180240330420  0.090.100.090.080.06  0.050.070.080.080.05
猴子  459018024036060024小时  0.080.201.00.720.380.130.03  0.040.260.550.540.390.100.03
显而易见地是式II的前药体内释放临床相应量的式I化合物。释放既发生在啮齿动物也发生在灵长目动物，在灵长目动物中存在显著更高的血浆水平。
实施例28的化合物的相应数据(大鼠：阿拉伯胶/吐温，猴子：丙二醇)显示在表5A中：
表5A
物种  时间(min)  母体化合物的血浆水平(μg/ml)
大鼠  3060120240360  0.0330.0390.0660.039＜0.03  0.0460.0840.1230.034＜0.03
猴子  3090180240540  0.1080.1590.062＜0.030.036  ＜0.030.0980.0500.0600.070
生物实施例8
抗病毒活性
在所述XTT甲测试中，在有和无50％人血清存在下，测试式I化合物用于抗野生型HIVIIIB和抗性突变型的HIV-1活性，其中在MT4细胞中测试对致细胞病变效应的抑制作用，在每一种情况下ED50以μM表明。
表6
HIV株  实施例10  实施例1050％血清  实施例11  实施例1150％血清
野生型  0.01  0.06  0.009  0.05
L100I  0.05  0.33  0.09  0.95
K103N  0.38  2.4  0.09  2.0
Y181C  0.09  0.4  0.07  3.3
在体内可达到的浓度下，式I化合物对抗多种HIV株具有高度活性。
生物实施例9
抗病毒活性
使用现有技术细胞培养测试也对本发明化合物与所述最接近的现有技术化合物进行了比较，其中人T细胞系MT4细胞在接种进入96孔微量滴定板(2·104细胞/孔)的补充10％胎牛血清、青霉素和链霉素的RPMI 1640培养基中生长，以每孔的HIV-1IIIB(野生型)或者载荷有RT Ile 100、Cys 181或Asn 103突变的突变型病毒10-20 TCID50感染。将被连续稀释的受试化合物加入到各自的孔中并将所述培养物在37℃下于富含CO2的气氛中孵育，并且在第五天或第六天用XTT活体染料测定细胞生存力。所述结果显示以下多种测定的平均值。结果表示为ED50μM。
表8
实施例  野生型  野生型50％血清  Ile100  Cys181  Asn103
现有技术Santa Fe  0.027  nd  0.220  0.340  0.350
实施例10  0.012  0.056  0.053  0.095  0.358
实施例11  0.008  0.058  0.100  0.069  0.080
实施例8  0.003  0.019  0.021  0.019  0.086
实施例6  0.002  0.016  0.064  0.018  0.046
本发明化合物已显著改善抗野生型并且特别是抗临床重要的、在以NNRTIs治疗期间出现的突变型的性能。
生物实施例10
结合动力学
NNRTI在所述靶酶上的结合与解离率能够直接通过表面细胞质基因组共振方法进行测试，其中将逆转录酶固定在嵌片的表面并且通过观察由伴随嵌片的质量增加或减少引起的折射率的变化来监控假定的抑制剂的结合或者解离。如同以上描述的那样，将本发明化合物(实施例8)与来自Santa Fe的最接近的现有技术的化合物进行比较。实验在Biacore 2000(Biacore AB，Uppsala，瑞典)上进行，使用BIA评价软件(3.0版)用于评价数据。所述小的分析物(NNRTI)对大得多的酶的结合导致在10-20 RU的范围内结合应答。在流动的缓冲液和样品之间的总体折射率的差异使得评价在注射样品期间得到的数据是困难的。在所述解离相期间，在总体折射率方面存在不明显的变化，因此在这个相中已评价了不同物质的结合。
固定：通过直接偶合于伯胺，所述酶和对照蛋白固定在CM5嵌片上(Markgren等，1998)。对Fc g(Biacore BR-1000-57)的抗体被用作对照蛋白并且按照制造商的说明书固定。使用Nanosept离心浓缩器10K(PalI Filtron，MA，U.S.A)，将HIV逆转录酶(Unge等，1990)从3M的(NH4)2SO4转移至含有4mM MgCl2的5mM Hepes，pH 7.6中。将相应于6800-9700 RU量的RT固定于所述传感器嵌片上。通过注射35ml的0.5M Tris pH 7.6、4mM MgCl2、0.5M KCl钝化所述传感器表面。所述固定方法在33℃下进行。
与抑制剂的相互作用：将抑制剂的贮存液(1mg/ml在DMSO中)溶于RT流动的缓冲液(10mM Hepes pH 7.6、4mM MgCl2、0.25mM精胺、40 mM KCl、0.5％Triton X-100、3％DMSO、0.5％胎牛血清)中以达到10mM的浓度。通过注射200ml的所述稀释物质来分析物质对RT的结合，流速为20ml/min和温度为25℃。在每一次注射物质后，通过注射在RT的流动的缓冲液中的120ml的10％的DMSO洗涤所述系统。
所述结果在图3中得到描绘。显而易见地是本发明化合物和现有技术的化合物显示不同的相互作用动力学，本发明化合物具有最低的解离率，这表明其更有效地与所述酶结合。
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Markgren P-O，Hamalainen M，Danielson UH，使用光学生物传感器技术筛选与HIV-1蛋白酶相互作用的化合物。Analytical Biochemistry1998，第265卷。(在印刷中)。
尽管参照以上具体的实施例、比较实施例和附图已阐明了本发明的多个方面和实施方案，易于理解的是本发明不以任何方式局限于这些实施方案，而是扩展到整个所附的权利要求书的精神和范围内。

Claims (9)

1.一种药用组合物，该组合物含有式I化合物：
Figure A031272240002C1
其中
RX为氰基或溴；
R1为卤素；
R2为C1-C3烷基；
及其它们的药学上可接受的盐和前药以及一种至三种另外的抗逆转录病毒药物和药学上可接受的载体或稀释剂。
2.权利要求1的组合物，其中所述另外的抗逆转录病毒药物选自AZT、ddI、ddC、D4T、3TC、阿德福韦、阿德福韦二匹伏酯、阿巴卡韦、双-POC-PMPA、膦甲酸、羟基脲、依法韦仑、曲韦定、奈韦拉平、地位韦啶、PFA、H2G、ABT606、利托那韦、沙奎那韦、茚地那韦、氨普奈韦(Vertex VX478)、Mitsubishi MKC-442和奈非那韦。
3.权利要求1或2的组合物，其中R1为氟。
4.权利要求1或2的组合物，其中R2为乙基。
5.权利要求1或2的组合物，其中所述式I化合物包括至少60％的1S，2S对映体形式。
6.权利要求1或2的组合物，其中所述式I化合物包括至少90％的1S，2S对映体形式。
7.权利要求1或2的组合物，其中RX为氰基。
8.权利要求1或2的组合物，其中所述式I化合物选自(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲、(1R，2R)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲、(1S，2S)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲和(1R，2R)-N-[顺式-2-(6-氟，2-羟基，3-丙酰基苯基)-环丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲和它们的药学上可接受的盐。
9.权利要求1至8中任何一项的组合物在制备用于治疗或预防HIV的药物中的用途。
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