CN1518558B

CN1518558B - 肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性药物组合物的用途

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Publication number: CN1518558B
Application number: CN018225993A
Authority: CN
Inventors: P·佩策尔保尔
Original assignee: Fibrex Medical Research and Development GmbH
Current assignee: Fibrex Medical Research and Development GmbH
Priority date: 2000-12-12
Filing date: 2001-12-07
Publication date: 2010-06-16
Anticipated expiration: 2021-12-07
Also published as: CN101676299A; EP1586586A2; CN1518558A; DK1341819T3; PL209419B1; DK1586586T3; US8067373B2; US7271144B2; HUP0401536A3; HK1084400A1; ATE425184T1; KR20030060988A; CY1109107T1; ES2266093T3; NO330767B1; WO2002048180A2; PL362924A1; US7811985B2; DE50114771D1; ATE329614T1

Abstract

本发明涉及通式(I)的肽或蛋白质及其盐，以及例如酰胺，或者相互的混合物和/或与至少一种其它物质的混合物用于人和/或兽医学中治疗性和/或预防性应用，其中R₁和R₂相同或不同，表示氢、具有1-3个，特别是至多10个碳原子的饱和的或者不饱和的烃基，Z₁表示组氨酸残基或者脯氨酸残基，Z₂表示精氨酸残基、具有起始精氨酸末端的，特别是包含2-30个氨基酸的肽残基或者蛋白质残基。

Description

肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性药物组合物的用途

本发明涉及肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性药物组合物的用途，以及涉及一种药物组合物。

至今，在预防和治疗中用于抑制或阻止炎性反应的物质，即所谓的免疫抑制剂，主要包括两类不同的物质。第一类是天然存在于体内的激素衍生物，即可的松，和第二类是外源性免疫抑制剂，如环孢菌素和其衍生物、硫唑嘌呤、环磷酰胺等。所有这些物质都具有抗炎作用，但是，在长时间治疗中，这些物质表现出很大的副作用。这些副作用限制了长期治疗的作用，这就是为了将副作用降低到可容忍的水平或者为了能够实际进行治疗交替或联合应用这些物质的原因。作为副作用的例子可提及，与可的松有关的病理性骨折，这种骨折是由于可的松的骨质疏松作用引起的，或者可能由于环孢菌素引起的肾衰竭。这些副作用对这两类化合物来说是必然的，因此，问题只是治疗的持续时间和必须停止治疗时的总剂量。

本发明的目的是提供新的药物产品，所述产品适用于阻止或抑制炎性作用并只具有较小的副作用。另一个目的在于提供长期治疗。

下面，本发明的肽的氨基酸用常用的缩写表示，这些氨基酸是α-氨基酸。

“类似物”是指一种肽，是由血纤蛋白的序列，特别是由优选的序列，通过衍生化、取代，优选同源取代、缺失和/或插入而衍生的。

本发明提供具有通式I(SEQ ID NO 1、2)肽或蛋白质

其中R₁和R₂相同或不同，表示氢、具有1-3个，特别是至多10个碳原子的饱和的或者不饱和的烃基，

Z₁表示组氨酸残基或者脯氨酸残基，

Z₂表示精氨酸残基、包含起始精氨酸残基的，特别是包含2-30个氨基酸的肽残基或者蛋白质残基，

及其盐，以及例如酰胺，或者相互的混合物和/或与至少一种其它的物质的混合物，其中特别是只存在L-氨基酸，用于在人和/或兽医学中治疗性和/或预防性地应用。

完全出人意料的是，所定义的氨基酸序列阻止血流中的细胞在血管壁的内皮细胞上的粘附和/或其随后从血液向组织中的移居。

本发明提供具有通式II(SEQ ID NO 3-10)肽或者蛋白质

Z₁表示组氨酸残基或者脯氨酸残基，

Arg表示精氨酸残基

Z₃表示脯氨酸残基或缬氨酸残基，

Z₄表示亮氨酸残基或者缬氨酸残基，

Z₅表示蛋白质残基或者肽残基，特别是包含2-30个氨基酸的肽残基或者蛋白质残基，

或者含有1-3，特别是至多10个碳原子的醇基团，

或者有机或无机碱基团，

完全令人惊奇的是，血纤蛋白原的部分序列、肽或者片段具有抗炎作用。不受限于与此相关的理论思考，这种作用可能基于血纤蛋白通过其Bβ链的neo-N-末端结合到内皮细胞上和通过Aα-链的序列与血流中的细胞结合，由此导致细胞的粘附和向组织中移居。这些化合物具有副作用并且抑制血纤蛋白形成。但是这种抑制不构成对病人的潜在危害，因为在不存在血纤蛋白情况下，如果发生轻微的受伤，血液凝结也是足够的。只是在外科手术时，可能适合的是停止这种治疗。其它的副作用基本上可以排除，因为这些物质只与天然配体相互作用。此外，血液中的白细胞不会对天然防御产生相反的影响。这样，其组成，例如粒细胞、淋巴细胞和单核细胞保持不受影响，因此，天然的防御过程保持不变并且血液中对感染的抵御保持不变。

血纤蛋白原在肝脏中形成并且这种形式是生物无活性的，其在血液中的浓度一般为约3g/l。通过酶原凝血酶原的蛋白水解裂解作用生成凝血酶，它从血纤蛋白原上裂解掉血纤肽A和B。由此血纤蛋白原被转化成其生物活性的形式，生成血纤蛋白和血纤蛋白裂解产物。

在每一次的血液凝结活化过程中，即每次组织受伤、发生炎症、外伤或者变性发生(degenerativer Genese)时生成凝血酶，通过血纤蛋白的调节生成凝血酶是一个主要的保护过程，目的是尽快愈合任何血管系统的缺损。但是，血纤蛋白的生成也是一个致病过程。血纤蛋白血栓的形成作为要解决的引起心肌梗塞的起因是人类医学的最重要的问题之一。

至今还没有或者还没有充分研究血纤蛋白在炎性细胞从血流到组织的外渗过程中起的作用，这一方面是抵御致病性微生物或存在于组织中的肿瘤细胞的希望的过程，但是，另一方面，其本身是一个引起自身组织损伤或者继续损伤的过程。血纤蛋白借助于序列Bβ，通过其Bβ的neo-N-末端结合内皮细胞并且借助于序列Aα结合血流中的细胞，因此导致细胞的粘附和向组织中移居。

本发明的肽或者蛋白质可以抑制血流中的细胞与血管壁的内皮细胞的粘附和/或抑制随后细胞从血液向组织中的移居。

通式II的本发明的肽或者或者蛋白质，其中Z₅表示具有下述氨基酸序列(SEQ ID NO 11)的肽残基：

Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro Ser Leu Arg Pro Ala

Pro Pro Pro Ile Ser Gly Gly Gly Tyr Arg

和

Z₁表示组氨酸残基，

Arg表示精氨酸残基，

Z₃表示脯氨酸残基，

Z₄表示亮氨酸残基，

抑制血纤蛋白片段在血管壁上的沉积和粘附。因此，它使炎性细胞不能牢固地停留在动脉和静脉血管壁的内皮细胞上，并且阻止了这类细胞停留在血管壁上，因此阻止了向组织中的进一步渗透。

通式II的肽或者蛋白质，其中Z₅表示具有下述氨基酸序列(SEQ IDNO 12)的肽残基：

Glu Arg His Gln Ser Ala Cys Lys Asp Ser Asp Trp Pro

Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn Tyr Lys

并且Z₁表示脯氨酸残基，

Arg表示精氨酸残基，

Z₃表示缬氨酸残基，

Z₄表示缬氨酸残基，

具有抑制周围血液的细胞与血纤蛋白或者血纤蛋白片段的粘附的作用，因此抑制其向组织中的迁移。

所述裂解产物在文献中已知为肽Bβ和肽Aα。上述提及的预粘附和预迁移途径对于控制细胞从血液向组织中迁移的体系完全是新的。血纤蛋白的这一功能既可以被肽Bβ，也可以被肽Aα阻断。

因此，本发明的肽适合用作治疗剂用于人类或动物，以阻断细胞从血液向组织中的迁移。由于血纤蛋白或者通过蛋白水解裂解产生的血纤蛋白原的其它产物，例如被尿激酶-血纤蛋白溶酶原-激活剂裂解的血纤蛋白原，仅特异性和区域性地有限产生，即在炎性、凝结失调、动脉硬化、血栓形成和/或肿瘤生长位点，对此的所述治疗剂的作用是区域性受限的，即希望不在其它区域发生病理性副作用或者仅在有限的程度上发生。

本发明的肽和/或蛋白质的优选的和完全未预料的应用领域是用于制备在身体发生感染的情况下治疗或预防局部和/或全身性炎症的药物组合物，所述感染基于自主免疫反应、基于风湿性疾病、基于免疫系统紊乱、基于遗传疾病，用于预防和/或治疗器官移植之后发生的排异反应、动脉硬化、输注损伤、基于动脉硬化和/或血栓疾病和血纤蛋白沉积增加。这类肽，特别是Bβ，也特别适合用于制备将其它药物递送到人或动物内皮细胞的药物组合物。对此，将要递送的药物偶联到所述肽的一端，然后通过VE-钙粘着蛋白沉积到血管壁的游离位点上，即内皮细胞上。

下面通过实施例进一步说明本发明。

实施例1：血纤蛋白原裂解产物的制备：

血纤蛋白原的非聚合的降解产物是按照等人(Nature1968，218；130-134)通过用溴化氰分解得到的。如此裂解得到的血纤蛋白原主要由63kD的片段，即N-末端二硫桥连接，NDSK组成，并且包含Aα链1-51、Bβ链1-118和γ链1-78。为了得到NDSK-II(NDSK减去血纤肽A和B)，在室温下3小时用凝血酶(20单位/1μg NDSK)将Aα和Bβ链的N-末端的氨基酸裂解掉，然后用氟磷酸二异丙酯处理以阻断凝血酶的活性。如此得到的NDSK-II由Aα链17-51、Bβ链15-118和γ链1-78组成。

为了得到NDSK-uPA，在37℃下用Technoclone公司，奥地利维也纳，的200单位尿激酶-血纤蛋白溶酶原-激活剂(uPA)处理500μgNDSK 1小时。该反应用5mM苯基甲基磺酰氟终止。如此得到的NDSK-uPA是一种NDSK并且不具有血纤肽B。

作为阴性对照，从用溴化氰处理生成的血纤蛋白原裂解产物得到的第二级分，按照Nieuwenhuizen等(Biochem Biophys Acta 1983，755；531-533)称为FCB-2。FCB-2是43kD大小的蛋白质并且由Aα链148-208、Bβ链191-305和γ链95-265组成。为了对照，向这种蛋白质中加入凝血酶和氟磷酸二异丙酯。但是，不导致所述蛋白质的任何变化(在此后称为FCB-2-thr)。

对于其它的阴性对照，将培养基(Life techn.Inc.公司，Paisky，UK的RPMI)用凝血酶如上述处理并且随后灭活(RPMI-thr)或者用uPA按上述处理并且灭活(RPMI-uPA)。

实施例2：

肽Aα(SEQ ID NO 12)相应于血纤蛋白α链的氨基酸1-28并且与血纤蛋白原Aα链序列的氨基酸17-45相同：

Gly Pro Arg Val Val Glu Arg His Gln Ser Ala Cys Lys

Asp Ser Asp TrP Pro Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn

Tyr Lys

肽Bβ(SEQ ID NO 11)相应于血纤蛋白β链序列的氨基酸1-28，其与血纤蛋白原Bβ链序列的氨基酸15-43相同，其具有下述序列：

Gly His Arg Pro Leu Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro

Ser Leu Arg Pro Ala Pro Pro Pro Ile Ser Gly Gly Gly

Tyr Arg

按照Merrifield R.B.，J.Amer.Chem.Soc.1963；85，2149-2154，用多功能肽合成器，按照Carpino L.A.和Han.G Y，J.Amer.Chem.Soc.1981；37；3404-3409应用芴基甲氧基羰基(FMOC)-保护基策略通过固相肽合成合成两种肽。粗品肽的纯化通过制备反相HPLC，用Nucleosil 100-10，C18柱，按照Engelhart H.和MüllerH.的Chromatography 198419：77以及Henschen A.，Hupe K.P.和Lottspeich F.High Performance Liquid Chromatography VCH1985进行。用相同长度，但具有无规氨基酸序列的肽作为对照肽。

实施例3：HU-SCID小鼠模型：

将人的皮肤移植到SCID小鼠的背部，在两周后将人淋巴细胞注射到腹膜内。这一过程按照Petzelbauer等(J.Invest.Dermatol.1996，107；576-581)的方法进行。然后，将15只这样准备的小鼠通过其尾静脉注射：

a)100μg人类NDSK-II

b)100μg人类FCB-2

c)100μg肽Aα

d)100μg肽Bβ

e)100μg无规的Aα

f)100μg无规的Bβ

24小时后，取下人类皮肤并评价炎性位点的数量，用细胞数/0.3mm²表示，并且测定带有标准偏差的平均值。

对于a：22+/-2.8

对于b：9+/-2.1

对于c：4+/-1.1

对于d：6+/-1.1

对于e：5+/-1.2

对于f：7+/-1.3

由此可推出，NDSK-II引起炎症，因此，所述蛋白质被用作致病物质。其它化合物本身没有表现出炎性细胞量的任何明显的增加。

比较例4：

按照实施例3通过其尾静脉给15只小鼠注射

100μg人NDSK-II和

100μg无规的肽Aα。

按照实施例3继续实施，可测得23+/-3.5个炎性位点/0.3mm²。

比较例5：

按照实施例3通过其尾静脉给15只小鼠注射

100μg按照实施例1的人NDSK-II和

100μg无规的肽Bβ。

按照实施例3继续实施，可测得24+/-2个炎性位点/0.3mm²。

实施例6：

按照实施例3给15只小鼠注射

100μg人NDSK-II和

100μg合成的肽Aα。

按照实施例3继续实施，可测得21+/-2.2个炎性位点/0.3mm²。

实施例7：

按照实施例3通过其尾静脉给15只小鼠注射

100μg人NDSK-II和

100μg合成的肽Bβ。

按照实施例3继续实施，可测得14+/-2炎性位点/0.3mm²。

实施例4-7表明，肽Bβ阻断淋巴细胞的炎症。

比较例8：

用红色荧光染料(Cell Tracker Orange，1μg/ml，MolecularProbes，Eugene，OR)标记人类的脐静脉内皮细胞(HUVEC)并且接种到胶原基质(Collaborative Biomedical Products，Bedford，MA)上。在内皮细胞融合后，重叠用绿荧光染料(Cell Tracker Green，1μl/ml，Molecular Probes公司，Eugene，Origon)标记的外周血单核细胞(PBMC)(10⁵个细胞/25mm²)。此后，在37℃温育细胞12小时。

用激光扫描显微镜给粘附的进入凝胶的细胞照相，并转换成图像(Pixel)并且用“NIH image”按照

等(J.Immunol.Method1999；222：101-109)进行评价。

每0.1mm²的粘附的细胞的数量可例如按在“粘附”下提及的方法进行测定。每0.04mm³迁入的细胞的数量可例如按照在“迁移”下提及的方法测定。测定具有标准偏差的三次的平均值。

粘附迁移

a)RPMI-uPA 0,1μg/ml 40+/-4 4+/-3

1,0μg/ml 38+/-2 5+/-2

10,0μg/ml 32+/-4 5+/-1

b)NDSK 0,1μg/ml 31+/-18 6+/-3

1,0μg/ml 35+/-18 5+/-2

10,0μg/ml 36+/-24 6+/-3

c)NDSK-II 0,1μg/ml 55+/-21 12+/-5

1,0μg/ml 67+/-31 19+/-12

10,0μg/ml 65+/-31 19+/-10

d)NDS K-uPA 0,1μg/ml 58+/-3 10+/-2

1,0μg/ml 60+/-3,5 14+/-3

10,0μg/ml 65+/-3 18+/-1,5

e)FCB2 0,1μg/ml 30+/-26 6+/-4

1,0μg/ml 10+/-10 3+/-2

10,0μg/ml 21+/-7 5+/-4

f)FCB-2-thr 0,1μg/ml 20+/-12 6+/-5

1,0μg/ml 23+/-13 7+/-5

10,0μg/ml 26+/-11 4+/-2

g)RPMI-thr 0,1μg/ml 29+/-15 4+/-5

1,0μg/ml 26+/-14 5+/-5

10,0μg/ml 41+/-20 5+/-4

由此可以得出，NDSK-II导致外周血单核细胞(PBMC)的明显迁移比NDSK-uPA程度大，并且因此具有致病活性。对照a)、b)、e)、f)和g)均不导致明显的迁移。

实施例9：

将100μg NDSK-11和Bβ或者无规的Bβ加到按照实施例8的含有PBMC悬浮液的胶原基质中，并按照实施例8继续进行。

粘附迁移

a)不加NDSK-II 38+/-15 6+/-4

b)仅100μg NDSK-II 73+/-29 16+/-7

c)10μg Bβ+NDSK-II 63+/-33 7+/-4

d)100μg Bβ+NDSK-II 47+/-34 5+/-4

e)1000μg Bβ+NDSK-II 52+/-27 10+/-6

f)10μg无规的Bβ+NDSK-II 77+/-33 16+/-6

g)100μg无规的Bβ+NDSK-II 86+/-35 15+/-6

h)1000μg无规的Bβ+NDSK-II 78+/-31 13+/-8

从这些试验结果中可以得出，肽Bβ阻断炎症。

实施例10：

将100μg NDSK-11和Aα或者无规的Aα加到按照实施例8的含有PBMC悬浮液的胶原基质中，并按照实施例8继续进行。

粘附迁移

a)不加NDSK-II 42+/-6 10+/-1

b)仅NDSK-II 96+/-11 24+/-3

c)10μg Aα+NDSK-II 69+/-12 21+/-4

d)100μg Aα+NDSK-II 73+/-13 15+/-6

e)1000μg Aα+NDSK-II 70+/-6 13+/-5

f)10μg无规的Aα+NDSK-II 70+/-6 25+/-2

g)100μg无规的Aα+NDSK-II 65+/-16 24+/-3

h)1000μg无规的Aα+NDSK-II 70+/-12 26+/-3

从这些试验结果中可以得出，肽Aα只是部分地阻断PBMC的迁移。

实施例11：

由于PBMC主要由淋巴细胞和单核细胞的混合物构成，所以在实施例11中用纯的淋巴细胞代替PBMC(如在实施例8-10中)。

分别将100μg NDSK-uPA或100μg NDSK-II和Aα或Bβ加到按照实施例8的含有内皮细胞和淋巴细胞的胶原基质中。

粘附迁移

a)不加 68+/-8 16+/-3

b)NDSK-uPA 143+/-11 53+/-5

c)NDSK-II 119+/-11 43+/-4

d)仅100μg Bβ 58+/-18 14+/-1

e)NDSK-uPA+100μg Bβ 74+/-8 19+/-2

f)NDSK-II+100μg Bβ 74+/-8 17+/-3

g)仅100μg Aα 77+/-4 18+/-1

h)NDSK-uPA+100μg Aα 131+/-4 40+/-3

i)NDSK-II+100μg Aα 131+/-4 44+/-4

j)仅100g无规的Bβ 75+/-5 19+/-1

k)NDSK-uPA+100μg无规的Bβ 134+/-13 46+/-4

l)NDSK-II+100μg无规的Bβ 120+/-12 42+/-4

这些试验结果表明：

1)NDSK-II和NDSK-uPA都促进淋巴细胞的炎症，

2)肽Bβ完全阻断由NDSK-11和NDSK-uPA诱导的淋巴细胞粘附和迁移，而肽Aα不具有阻断活性，这表明自由的α链对诱导淋巴细胞的粘附和迁移不是需要的。

实施例12：

按照实施例11进行操作，但是替代淋巴细胞应用纯的单核细胞。分别将100μg NDSK-uPA或100μg NDSK-II加到肽Aα、无规的Aα、Bβ或者无规的Bβ中。

粘附迁移

a)不加 43+/-8 7+/-1

b)NDSK-uPA 48+/-10 10+/-2

c)NDSK-II 90+/-11 19+/-6

d)100μg Bβ 59+/-7 5+/-1

e)NDSK-uPA+100μg Bβ 61+/-11 8+/-3

f)NDSK-II+100μg Bβ 70+/-7 7+/-5

g)100μg无规的Bβ 40+/-7 6+/-1

h)NDSK-uPA+100μg无规的Bβ 45+/-5 8+/-3

i)NDSK-II+100μg无规的Bβ 92+/-10 20+/-7

j)100μg Aα 59+/-6 5+/-1

k)NDSK-uPA+100μg Aα 62+/-4 8+/-5

l)NDSK-II+100μg Aα 68+/-10 9+/-6

m)100g无规的Aα 58+/-7 6+/-1

n)NDSK-uPA+100μg无规的Aα 50+/-10 10+/-4

o)NDSK-II+100μg无规的Aα 108+/-8 21+/-5

这些试验结果表明，仅NDSK-II并且不是NDSK-uPA促进单核细胞的迁移，即α链和β链必须具有一个游离的N-末端并阻断单核细胞的迁移。

实施例13：

按照实施例11的步骤进行，应用纯的淋巴细胞。分别将100μgNDSK-uPA或100μg NDSK-II加到衍生于AαGly Pro Arg(Pro)-NH₂乙酸盐(Aα-衍生物)或者衍生于BβGly His Arg Pro-OH乙酸盐(Bβ-衍生物)的短肽的盐中。

粘附迁移

a)不加 60+/-8 14+/-1

b)NDSK-uPA 149+/-12 57+/-5

c)NDSK-II 121+/-11 48+/-7

d)仅100μg Bβ-衍生物 58+/-10 12+/-9

e)NDSK-uPA+100μg Bβ-衍生物 70+/-8 16+/-3

f)NDSK-II+100μg Bβ-衍生物 69+/-7 14+/-5

g)仅100μg Aα-衍生物 77+/-4 18+/-1

h)NDSK-uPA+100μg Aα-衍生物 134+/-4 48+/-5

i)NDSK-II+100μg Aα-衍生物 131+/-7 49+/-6

j)仅100μg无规的Bβ-衍生物 70+/-5 14+/-7

k)NDSK-uPA+100μg无规的Bβ-衍生物 130+/-12 49+/-6

l)NDSK-II+100μg无规的Bβ-衍生物 120+/-10 55+/-8

由这些试验得出，如果淋巴细胞迁移被抑制，这些以适当方式连续加入的短链肽与长链肽具有相同的活性。

实施例14：

按照实施例12进行操作，应用纯的单核细胞。分别将100μgNDSK-uPA或100μg NDSK-II加到衍生于AαGly Pro Arg(Pro)-NH₂乙酸盐(Aα-衍生物)或者衍生于BβGly His Arg Pro-OH乙酸盐(Bβ-衍生物)的短肽的盐中。

粘附迁移

a)不加 40+/-8 5+/-1

b)NDSK-uPA 54+/-9 7+/-2

c)NDSK-II 85+/-11 22+/-6

d)100μg Bβ-衍生物 52+/-7 6+/-1

e)NDSK-uPA+100μg Bβ-衍生物 61+/-11 8+/-3

f)NDSK-II+100μg Bβ-衍生物 68+/-7 8+/-4

g)100μg无规的Bβ-衍生物 40+/-7 6+/-1

h)NDSK-uPA+100μg无规的Bβ-衍生物 44+/-6 8+/-2

i)NDSK-II+100μg无规的Bβ-衍生物 92+/-10 23+/-7

j)100μg Aα-衍生物 50+/-5 4+/-4

k)NDSK-uPA+100μg Aα-衍生物 60+/-5 7+/-6

l)NDSK-II+100μg Aα-衍生物 64+/-11 8+/-2

m)100μg无规的Aα-衍生物 54+/-10 6+/-3

n)NDSK-uPA+100μg无规的Aα-衍生物 50+/-10 10+/-4

o)NDSK-II+100μg无规的Aα-衍生物 99+/-8 21+/-7

由这些试验得出，如果单核细胞迁移被抑制，这些以适当方式连续加入的短链肽与长链肽具有相同的活性。

实施例15：

该试验用220g-280g重的雄性Wistar大鼠进行。给这些大鼠提供标准的食物和水。为了进行该试验，将大鼠麻醉并进行频率为70次/分钟的人工呼吸，其中通过1mm-2mm水银的超压按照每千克8ml-10ml给予含有30体积％氧气的气体。给右心动脉安装测量插管并测定该动脉的血压和心率。测定压力比率，作为该动脉中的血压和心率的乘积，其量纲为mm水银/分钟/10³。在右侧的静脉安装测量插管用于施加测试物质。在进行外科处理后，向大鼠心脏提供2ml大鼠血液。30分钟后，将左侧的心动脉闭合。再过25分钟将闭合松开，以给缺血区域供血。在此刻，给半数动物静脉施用800μg/kg的肽Bβ或无规的肽Bβ，然后等待2小时。

然后，为了区分受损的和未受损的心肌组织，给左侧心脏动脉提供浓度为2重量％的evans蓝染料。然后将取下的心脏水平切片成5部分，去除右静脉壁并用氯化三苯基tetratol(1重量％)在37℃处理这些切片20分钟，以区分正常组织和梗塞的组织。用电脑控制的面积法评价这些切片。

由于血管闭合，对照大鼠心脏中心肌的62.5％受到威胁，而在试验大鼠心脏中为60％。在对照大鼠心脏中受到威胁的组织的46％坏死，相反在试验大鼠心脏中只有29％。这相当于坏死组织降低了37％(p＜0.05)。

按照本发明的物质以及按照本发明的物质的用于制备药物组合物的用途具有特别的意义：

用于治疗由自主反应的淋巴细胞的组织破坏作用引起的疾病中使用的药物组合物。

属于这类的疾病的是自身免疫领域的疾病，例如胶原性疾病、风湿病、牛皮癣和感染后/副感染疾病和由移植物与宿主反应引起的疾病。产生治愈效果，因为这些药物组合物阻断淋巴细胞迁移到组织中。因此，这些淋巴细胞停留在血液中并且不能产生自主反应性组织破坏作用。

在治疗和/或预防器官移植后发生排斥时这些药物产生治愈效果，因为这些药物阻止淋巴细胞从血液向外来器官中迁移，因此，外来器官不能被自主反应性淋巴细胞破坏。

在治疗和/或预防器官移植后的动脉硬化时这些药物产生治愈效果，因为这些药物抑制淋巴细胞和单核细胞向血管壁中的迁移，因此，阻止了血管壁中细胞的活化。对此，将器官移植后动脉硬化发生率最小化或者被阻止。

在治疗和/或预防术后再灌注损伤或者药物引起的血流恢复，例如心肌梗塞后、中风后、血管手术后、分流术和器官移植后的血流恢复时这些药物产生治愈效果，因为这些药物抑制淋巴细胞和单核细胞向血管壁中迁移。再灌注损伤是由于血流恢复过程中存在的血管细胞由于缺氧/酸中毒引起的并导致其活化。因此，淋巴细胞和单核细胞粘附到血管壁上并向其中迁移。淋巴细胞和单核细胞在血管壁上的粘附和向血管壁中的迁移被抑制的事实降低了缺氧/酸中毒引起的损伤，不会由于随后的炎性反应引起任何永久性血管损伤。

在治疗和/或预防代谢疾病或老化过程之后的动脉硬化时，这些药物产生治愈效果，因为这些药物抑制淋巴细胞和单核细胞向血管壁中的迁移，因此，抑制了由此引起的动脉硬化斑的进展。

也可以用本发明的药物组合物转运另一种药物物质。按照本发明的药物组合物特异性结合到内皮细胞的表面分子。因此，与其偶联的药物物质可以高浓度与内皮细胞接触，而使它们不会在其它位置引发副作用。作为实例可提及应用抑制细胞分裂的物质，这些物质被特异性地引导到内皮细胞之后发挥其抗血管生成作用。在这种情况下对肿瘤患者有治疗作用，因为通过抑制内皮细胞的增殖和因此通过避免新血管生成而阻断了肿瘤的生长。

序列表

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

<140>

<141>

<150>AT 2063/2000

<151>20001212

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>1

<211>32

<212>肽

<400>Gly His Arg X_aa2 X_aa29

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

<140>

<141>

<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>2

<211>32

<212>肽

<400>Gly Pro Arg X_aa2 X_aa29

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

<140>

<141>

<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>3

<211>7 to 35

<212>肽

<400>Gly His Arg Pro Val X_aa2 X_aa30

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

<140>

<141>

<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>4

<211>7to 32

<212>肽

<400>Gly His Arg Val Val X_aa2 X_aa30

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

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<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

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<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

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<212>肽

<400>Gly Pro Arg Pro Val X_aa2 X_aa30

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

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<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

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<212>肽

<400>Gly Pro Arg Val Val X_aa2 X_aa30

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

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<141>

<150>AT 2063/2000

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<212>肽

<400>Gly Pro Arg Pro Leu X_aa2 X_aa30

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Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

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<150>AT 2063/2000

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<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>8

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<212>肽

<400>Gly His Arg Pro Leu

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

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<150>AT 2063/2000

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<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

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<212>肽

<400>Gly Pro Arg Val Leu X_aa2 X_aa30

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

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<141>

<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>10

<211>7 to 35

<212>肽

<400>Gly His Arg Val Leu X_aa2 X_aa30

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

<140>

<141>

<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>11

<211>28

<212>肽

<400>Gly His Arg Pro Leu Asp Lys Lys Arg Glu Glu

Ala Pro Ser Leu Arg Pro Ala Pro Pro Pro Ile

Ser Gly Gly Gly Tyr Agg

<110>FIBREX医学研究和开发公司/

Petzelbauer Peter

<120>肽和/或蛋白质及其用于制备治疗性和/或预防性

药物组合物的用途

<130>

<140>

<141>

<150>AT 2063/2000

<151>2000 12 12

<160>12

<170>Microsoft Windows NT，Workstation 4.0，Office 97

<210>12

<211>28

<212>肽

<400>Gly Pro Arg Val Val Glu Arg His Gln Ser Ala

Cys Lys Asp Ser Asp Trp Pro Phe Cys Ser Asp

Glu Asp Trp Asn Tyr Lys

Claims

1.通式II的肽或蛋白质、其盐、酰胺或者相互的混合物用于制备在人和/或兽医学中的用于治疗和/或预防炎症的药物组合物的用途，

其中R₁和R₂相同或不同，表示氢、具有1-10个碳原子的饱和的或者不饱和的烃基，其中

a)Z₅表示氨基酸序列如下所述的肽残基

Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro Ser Leu Arg Pro

Ala Pro Pro Pro Ile Ser Gly Gly Gly Tyr Arg

Z₁表示组氨酸残基，

Arg表示精氨酸残基，

Z₃表示脯氨酸残基，

Z₄表示亮氨酸残基；

或者其中

b)Z₅表示氨基酸序列如下所述的肽残基

Glu Arg His Gln Ser Ala Cys Lys Asp Ser Asp Trp

Pro Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn Tyr Lys

Z₁表示脯氨酸残基，

Arg表示精氨酸残基，

Z₃表示缬氨酸残基，

Z₄表示缬氨酸残基。

2.按照权利要求1的通式I I的肽或蛋白质用于制备在人和/或兽医学中用于治疗和/或预防炎症的药物组合物的用途，其中Z₅表示氨基酸序列如下所述的肽残基：

Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro Ser Leu Arg Pro

Ala Pro Pro Pro Ile Ser Gly Gly Gly Tyr Arg

3.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备治疗感染引起的身体局部和/或全身炎症的药物组合物的用途。

4.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备治疗基于自身免疫反应的身体局部和/或全身炎症的药物组合物的用途。

5.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备治疗基于风湿病的身体局部和/或全身炎症的药物组合物的用途。

6.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备治疗基于免疫系统紊乱的身体局部和/或全身炎症的药物组合物的用途。

7.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备治疗基于遗传疾病的身体局部和/或全身炎症的药物组合物的用途。

8.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗器官移植后发生的排斥反应、再灌注损伤、动脉硬化疾病和/或在衰老过程中血纤蛋白沉积增多的药物组合物的用途。

9.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗器官移植后动脉硬化的药物组合物的用途。

10.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗再灌注损伤的药物组合物的用途。

11.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗动脉硬化和/或血栓疾病的药物组合物的用途。

12.按照权利要求1或2的肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗衰老过程中血纤蛋白沉积增多的药物组合物的用途。