CN1041157A - 肽醇抗血凝剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及作为适用抗血凝剂的肽衍生物。
Description
本发明涉及作为适用抗血凝剂的新型肽醇。
举例来说，抗血凝剂可用作对急性深位静脉血栓形成、肺栓塞、四肢的急性动脉栓塞形成、心肌梗塞形成和播散的血管内凝结进行药物治疗的治疗剂。人们认为，预防性地施用抗血凝剂可防止在风湿性心脏病或动脉硬化心脏病患者体内复发栓塞或可防止特定的外科血栓栓塞并发症。施用抗血凝剂还可用于治疗冠状动脉及脑血管疾病。动脉、尤其是向心脏肌肉和大脑供血的动脉中所形成的血栓是致死的主要原因。
水蛭素是一种由水蛭的涎腺分离得到的65残余多肽。这是一种可用作凝血酶特效抑制剂的抗血凝剂。虽然相当有效，但是似乎不可能临床应用由水蛭提取物中分离得到的水蛭素，其原因在于它数量有限、昂贵以及通常在施用任何如此大小的异质蛋白后所引起的过敏反应。
申请人发现对水蛭素的抗血凝活性至少是部分起因的特定区域。这种区域已经被化学合成制得，而且其类似物与凝学酶的识别部位结合而不是与空间上彼此分隔的酶裂区结合。选择性地与合成肽结合可防止凝血酶的识别部位与纤维蛋白原结合，也就是防止了纤维蛋白的产生与凝块形成的先决条件。申请人已经制得这种肽的特定还原衍生物。这些新型衍生物的羧酸官能度已被还原为相应的醇官能度。本发明的肽醇具备显著的抗血凝活性及其仅仅结合在识别部位而不是结合在凝血酶分裂区的非凡能力使其在学术界令人注目并且为抗血凝治疗的重要添加剂。此外，醇官能度的存在会提高效力并延长作用期限。
下式所示的肽衍生物为适用的抗血凝剂
X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-ol
式中X为氨基端余基，选自氢、一个或两个C1-6烷基、一个或两个C2-10酰基、苄酯基或叔丁氧羰基;
A1为一条键或含有1-11个任意氨基酸残基的肽;
A2为苯丙氨酸、邻、间、对-或二取代的苯丙氨酸、β-（2-和3-噻吩基）丙氨酸、β-（2-和3-呋喃基）丙氨酸、β-（2-、3-和4-吡啶基）丙氨酸、β-（苯并噻吩-2-和-3-基）丙氨酸、β-（1-和2-萘基）丙氨酸、色氨酸或酪氨酸;
A3为天冬氨酸或谷氨酸;
A4为任何氨基酸;
A5为异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸;
A6为脯氨酸、羟脯氨酸、3，4-脱氢脯氨酸、噻唑烷-4-羧酸酯、肌氨酸、NMe Pgl或右旋丙氨酸;
A7为任意氨基酸;
A8为任意氨基酸;
A9为亲油的氨基酸，选自酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、正亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、环己基丙氨酸和脯氨酸或含有至少一种这些亲油氨基酸的二肽;
A10-ol为含有0-5个任意氨基酸残基的还原肽部分，其中碳端氨基酸被还原为醇衍生物。
本说明书中采用下列通用缩写代表氨基酸：
Ac-乙酰基
Ala（或A）-丙氨酸
DAla（或a）-D-丙氨酸
Arg（或R）-精氨酸
Asn（或N）-天冬酰胺
Asp（或D）-天冬氨酸
pCl Phe-对氯苯丙氨酸
Cha-环己基丙氨酸
Cys（或C）-半胱氨酸
3，4-dehydro Pro-3，4-脱氢脯氨酸
Gly（或G）-甘氨酸
Glu（或E）-谷氨酸
D-Glu（或e）-D-谷氨酸
Gln（或O）-谷氨酰胺
Glt-戊二酰基
His（或H）-组氨酸
Hyp-羟脯氨酸
Ile（或I）-异亮氨酸
Leu（或L）-亮氨酸
Lys（或K）-赖氨酸
Mal-马来酰基
Met（或M）-蛋氨酸
NMe Pgl-N-甲基苯基甘氨酸
Npa-β-（萘基）丙氨酸
pNO2phe-对硝基苯丙氨酸
Nle-正亮氨酸
Orn-鸟氨酸
psub Phe-对位取代的苯丙氨酸
Phe（或F）-苯丙氨酸
Pgl-苯甘氨酸
Pro（或P）-脯氨酸
Sar-肌氨酸（N-甲基甘氨酸）
Ser（或S）-丝氨酸
SubPhe-邻、间或对-或二取代苯丙氨酸
Suc-琥珀酰基
Thr（或T）-苏氨酸
Trp（或W）-色氨酸
Tyr（或Y）-酪氨酸
Val（或V）-缬氨酸
“含有0-5个任意氨基酸残基、其中碳端氨基酸被还原为醇衍生物的还原肽部分”是指碳端氨基酸中羧酸部分的碳原子被羟甲基-CH2OH所取代。本发明多肽的A10基团可含有多达5个氨基酸，只有碳端氨基酸被还原为其相应的醇衍生物。由于除了碳端氨基酸以外的任何其它氨基酸不可能存在肽式键合，因而当然也不可能如此地被还原。当其中A10为单一氨基酸时，该单一氨基酸被还原为其醇衍生物。这种还原氨基酸的结构式为：
式中R为每一种氨基酸的特征基团。例如，甘氨酸中的R为氢，丙氨酸中的R为甲基，缬氨酸中的R为异丙基，苯丙氨酸中为苄基，而半胱氨酸中的R则为巯甲基。脯氨酸的还原形式为下列结构式所示的醇
在此使用三个字母（或更为简短的其它形式）或一个字母的代号加上“-ol”简化表示被还原为其醇衍生物的氨基酸，例如，“Alaa-ol”或“A-ol”表示羧酸部分已被还原为相应醇的丙氨酸，“Leu-ol”或“L-ol”表示其中羧酸部分已被还原为相应醇的亮氨酸。
烷基和烷氧基的烷基部分包括直链、支链或环状烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、环戊基、己基、异己基、环己基和环戊基甲基。C2-10酰基包括直链、支链、环状、饱和和不饱和的含有1或2个羰基部分的酰基，例如乙酰基、苯甲酰基、琥珀酰基、马来酰基和戊二酰基。卤素基团为氟、氯、溴或碘。
这里所用的“任意氨基酸”一词并不意味着包括任何具有氨基取代基的羧酸，而是多肽衍生物领域内技术人员常用的物质，它包括天然氨基酸以及在制备天然肽类似物时肽化学领域技术人员常用的其它“非蛋白质”α-氨基酸。天然氨基酸为甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，蛋氨酸，苏氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，半胱氨酸，脯氨酸，组氨酸，天冬氨酸，天冬酰胺，谷氨酸，谷氨酰胺，精氨酸，鸟氨酸和赖氨酸。“非蛋白质”α-氨基酸的实例为正亮氨酸，正缬氨酸，别异亮氨酸，高精氨酸，硫代脯氨酸，脱氢脯氨酸，羟脯氨酸（Hyp），高丝氨酸，环己基甘氨酸（Chg）、α-氨基-正丁酸（Aba）、环己基丙氨酸（Cha）、氨苯基丁酸（Pba），于其中苯基的邻位、间位或对位上被一个或二个下列基团所取代的苯丙氨酸：C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、或硝基或被亚甲二氧基所取代，β-2-和3-噻吩丙氨酸，β-2-和3-呋喃丙氨酸，β-2-、3-和4-吡啶丙氨酸，β-（苯并噻吩-2-和3-基）丙氨酸，β-（1-和2-萘基）-丙氨酸，丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸邻位烷基化衍生物，S-烷基化半胱氨酸，酪氨酸的O-硫酸酯，3，5-二碘代酪氨酸和天然氨基酸的D-异构体。
“亲油氨基酸”一词包括酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、脯氨酸、组氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸和正亮氨酸。
除了甘氨酸以外，所有天然氨基酸均含有手性碳原子。除非另有具体说明以外，这里所说的旋光活性氨基酸均是指L-构型的氨基酸。例如，A1或A10的任意氨基酸都可以是D-或L-构型。一般说来，在这里所给出的肽结构中氨基末端位于链左侧而羧基末端位于链右侧。
式1所示的多肽能够与任何无毒性有机或无机酸形成药用盐。能够形成适宜盐类的无机酸代表性实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸以及诸如二代磷酸钠和硫酸氢钾之类的酸性金属盐。能够形成适宜盐类的有机酸代表性实例包括一元、二元和三元羧酸，例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水杨酸、2-苯氧基苯甲酸和诸如甲磺酸和2-羟基乙磺酸之类的磺酸。羧基端氨基酸部分的盐类包括与任何适宜无机或有机碱形成的无毒性羧酸盐。举例来说，这些盐包括诸如钠和钾之类碱金属盐，诸如钙和镁之类碱土金属盐，包括铝在内ⅢA族轻金属盐，以及有机伯、仲和叔胺如包括三乙胺在内的三烷基胺、普鲁卡因、二苄基胺、1-乙烯胺、N，N′-二苄基乙二胺、二氢枞胺、N-（低级）烷基哌啶及其它适宜胺的盐。
以式1所式的肽衍生物为佳，其中
X为氢、乙酰基或琥珀酰基。
同样，以如下定义的式1所示化合物为佳
A1为Thr-Pro-Lys-Pro-Gln-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp，
-Ser-Thr-Pro-Asn-Pro-Glu-Ser-His-Asn-Asn-Gly-Asp-，
-His-Asn-Asp-Gly-Asp-，
-Asn-Asp-Gly-Asp-，
-Asp-Gly-Asp-，
-Gly-Asp-，
-Asp-，
或一条键;
A2为Phe、β-2-或3-噻吩基丙氨酸、Tyr、Trp、Npa或pclphe;
A3，Glu;
A4，Glu，Asp，Pro，Ala;
A5，Ile，Leu;
A6，Pro，Sar，D-Ala，Hyp，NMePgl;
A7，Glu，Gln，Asp，Ala;
A8，Glu，Asp，Ala;
A9，Pro，Ala-Tyr，Ala-Cha，Tyr-Cha，Tyr-Leu，Ala-Phe，Tyr-Tyr;
A10-ol，Glu-ol，Asn-ol，Pro-ol，Gln-ol，Ala-ol，D-Lys-ol，Lys-ol，D-Asp-ol，Orn-ol，Asp-Glu-ol.
尤以如下所定义的式Ⅰ所示肽衍生物为佳
X为乙酰基而A1为Gly-Asp或Asp或
X为琥珀酰基基而A1为一条键并且其中
A2为Phe，β-（2-噻吩基丙氨酸）或Tyr;
A3，Glu;
A4，Glu，Pro;
A5，Ile;
A6，Pro;
A7，Glu;
A8，Glu，Asp;
A9，Tyr-Leu，Ala-Tyr，Tyr-Tyr，Ala-Phe，Ala-Cha，Pro;
A10-ol，Ala-ol，Gln-ol，Asp-ol，Pro-ol，D-Asp-ol，D-Lys-ol，D-Glu-ol，-Asp-Glu-ol.
可以采用本领域技术人员已知的各种方法制备本发明的蛋白质。这些方法包括固相接续合成与封端合成、基因无性繁殖和这些技术的组合方法。可以采用自动化方法如借助自动化肽合成器完成固相接续方法。在该方法中，肽位于由倒数第二的C-端保护氨基酸开始的树脂上。所用的树脂载体可以是任何固相制备多肽领域内传统采用的适宜树脂，多肽以经过与0.5-3%左右二乙烯基苯交联为佳，并且最好是经过氯甲基化或羟甲基化处理以便提供用以与一开始导入的α-氨基保护的氨基酸形成酯的场所。待以上种类进行的偶联完成后，Boc保护基被留在适当位置或被脱除，而N-端氨基则被酰基化。可采用适宜的氨基醇置换树脂中被保护的部分。
Bodanszky等人在Chem.Ind.（London）38，1597-98（1966）中描述了羟甲基树脂的实例。可以选用Bio Rad Laboratories，Richmond，Califonia出品的氯甲基化树脂，其制备方法披露于Stewart等人所著《固相肽合成》（Freeman&Co.旧金山1969），第1章，第1-6页。可借助Gisin，Helv.Chem Acta，56，1476（1973）的方法将被护氨基酸连接于树脂之上。许多与树脂结合的被护氨基酸都可由市场购得。举例来说，采用可由市场上购得的其上连接有叔丁氧羰基（Boc）被护Thr的苄基化、羟甲基化苯基乙酰氨基甲基（PAM）树脂来制备其中羧基端基为Thr残基的本发明多肽。
于α-氨基被护氨基酸与树脂载体偶联之后，可以采用任何适宜的方法如借助处于二氯甲烷中的三氟乙酸、三氟乙酸或处于二恶烷中的HCl来脱除保护基。这一去保护过程于0℃至室温的温度范围内进行。还可以采用脱除特定α-氨基保护基所用的其它试剂及条件。待脱除α-氨基保护基后，可按照所需次序逐步地偶联其它氨基被护氨基酸。另外，在与树脂承载的氨基酸种类偶联之前，可借助溶液法使多氨基酸发生偶联反应。
每一被导入多肽类的氨基酸所用的α-氨基保护基可以是任何本领域公知的保护基。α-氨基保护基的种类包括（1）酰基类保护基如甲酰基、三氟乙酰基、邻苯二酰基、甲苯磺酰基、苯磺酰基、硝基苯基亚氧硫基、三苯甲基亚氧硫基、邻硝基苯氧基乙酰基和α-氯丁酰基;（2）芳族尿烷型保护基如苄氧羰基和取代的苄氧羰基，如对氯苄基氧羰基、对硝基苄氧羰基、对溴苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、1-（对联苯基）-1-甲基乙氧羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧羰基和二苯甲氧羰基，（3）脂族尿烷保护基如叔丁氧羰基（Boc）、二异丙基甲氧羰基、异丙氧羰基、乙氧羰基和烯丙氧羰基;（4）环烷基尿烷型保护基如环戊氧羰基、金刚烷氧羰基和环己氧羰基;（5）硫代尿烷型保护基如苯基硫代羰基;（6）烷基型保护基如三苯甲基和苄基;以及（7）三烷基硅烷如三甲硅烷。α-氨基保护基以叔丁氧羰基为佳。
如何选用适宜的偶联剂属于本领域公知技术。对于有待加入的氨基酸为Gln、Asn或Arg来说，特别适宜的偶联剂为N，N′-二异丙基碳化二亚胺和1-羟基苯并三唑。使用这些试剂可以防止腈和内酰胺的形成。其它偶联剂为（1）碳化二亚胺（例如N，N′-二环己基碳二亚胺和N-乙基-N′-（γ-二甲氨丙基碳二亚胺）;（2）氨腈（例如N，N-二苄基氨腈）;（3）烯酮亚胺;（4）异噁唑鎓盐（例如N-乙基-5-苯基-异噁唑鎓-3′-磺酸盐;（5）含1至4个氮原子的芳族杂环酰胺如咪唑酰胺、吡唑酰胺和1，2，4-三唑酰胺。适用的具体杂环酰胺包括N，N′-羰基二咪唑和N，N-羰基-二-1，2，4-三唑;（6）烷氧基化乙炔（例如乙氧基乙炔）;（7）与氨基酸的羧基部分形成混合酐的试剂（例如氯甲酸乙酯和氯甲酸异丁酯）或待偶联的氨基酸的对称酐（例如Boc-Ala-O-Ala-Boc）以及（8）在其中一个环氮上具有羟基的杂环化合物（例如N-羟基邻苯二甲酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和1-羟基苯并三唑）。其它活化试剂及其在肽偶联反应中的应用如Kapoor，J.Pharm.Sa.，59，pp.1-27（1970）所述。除了Arg Asn和Gln以外，对于所用其它氨基酸来说，以使用对称酐作为偶联剂为佳。
每个被护氨基酸或氨基酸类以大约过量4倍的数量被导入固相反应器中，于二甲基甲酰胺/二氯甲烷（1∶1）或于单一的二甲基甲酰胺或以单一二氯甲烷为佳的介质中进行偶联反应，当发生不完全偶联时，于脱除α-氨基保护基之前重复偶联步骤，随后在该固相反应器中进行另一种氨基酸偶联。可借助E.Kaiser等人Analt.Biochem.34，595（1970）所述的茚三酮反应检测每一合成步骤中的偶联反应进程。
待获得需要的氨基酸类之后，脱除树脂中的肽。可通过水解如采用碳端氨基醇残基、乙酸和二氯甲烷（DCM）处理连接在树脂上的多肽的方法完成这一过程。
正如固相肽合成领域已知的那样，许多氨基酸都带有在链制备过程中需要保护的官能度。如何选用适宜的保护基属于本领域技术人员的公知内容并且取决于待保护的氨基酸以及肽上是否存在其它被护氨基酸残基。选用这种侧链保护基的关键在于在断裂α-氨基部分的保护基时它不会被脱除。举例来说，适用于赖氨酸的侧链保护基为苄氧羰基和取代的苄氧羰基，所述取代基选自卤素（例如氯、溴、氟）和硝基（例如2-氯苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、3，4-二氯苄氧羰基）、甲苯磺酰基、叔戊氧羰基、叔丁氧羰基和二异丙基甲氧羰基。可以采用乙酰基、苯甲酰基、叔丁基、三苯甲基、苄基、2，6-二氯苄基或苄氧羰基保护苏氨酸和丝氨酸的醇类羟基，其中以采用苄基为佳。
可以借助本领域熟知的步骤脱除这些基团。典型的保护基脱除是在肽链合成完成之后进行，而不是在任何其它适宜的时间进行。
依据患者、待治疗的病症严重程度及所选用的肽衍生物确定的本发明肽醇衍生物的抗血凝剂量为0.2～250mg/kg患者体重/天。很容易确定特定患者的适宜剂量。每天用药以1-4次为佳，典型情况下每一次使用5-100mg活性化合物。本领域技术人员很容易确定在体外介质如库存全血中抑制或防止血凝所需的本发明肽醇的数量。
抗血凝治疗法是指治疗和预防各种血凝病症、尤其是冠状动脉和脑血管疾病的方法。本领域内的行家非常熟悉需要抗血凝治疗的情况。这里所用的“患者”一词是指诸如包括人类、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠在内灵长目之类的哺乳动物。抑制血凝不仅可以用于对具有血凝病症的单独患者进行抗血凝治疗而且可以用于任何需要场合，如防止库存全血以及在其它生物试验或贮藏样品中出现血凝。
虽然某些肽衍生物会残存于口服给药经过的内脏之中，但是以非口服给药为佳，例如皮下、静脉、肌内注射或腹膜内给药，储存注射给药，植入片制剂或将含有本发明肽衍生物的气溶胶或干粉喷涂于诸如鼻子、咽喉和支气管的粘液分泌膜。
对于非肠道给药来说，该化合物于生理用稀释剂中与药用载体形成溶液或悬浮液以可注射剂型被施用，上述载体可以是诸如水和油之类带有或不带有表面活性剂和其它药用助剂的消毒液体。这些制剂中所用的油品实例有石油、动物油、植物油或合成物，例如椰子油、豆油和矿物油。一般情况下，液体载体以水、盐水、葡糖水溶液和相关糖溶液、乙醇和二醇如丙二醇或聚乙二醇为佳，对于可注射溶液来说尤为如此。
该化合物可以储存注射液或移入片制剂的形式施用，这一施用方式可使活性组分缓慢释放。活性组分被压制为丸粒或小园柱形并以储存注射液或移入片的形式被移入皮下或肌内。所用移入片可以包含惰性材料如生物降解聚合物或合成硅氧烷，例如Dow-Corning公司出品的硅橡胶。
下列实施例仅供描述本发明之用，但是并不构成任何限制。
实施例1
制备碳端肽醇
采用由De Grado和Kaiser（J.Org.Chem.45，1295-1300，（1980））所述方法制备的对硝基二苯亚甲基肟基树脂合成肽。将该树脂（0.54g，0.52mmol/0.97mmol/g代用品）置于Applied Biosystems Model 430A肽合成器。在过量两倍的对称酐存在下将Boc被护氨基酸逐一地依次偶联。所采用的侧链保护如下所示：Asp（Chx）、Glu（Bzl）、Tyr（2-BrZ）。对合成器中所进行的每次循环中各步骤记录如下：
1）添加1mmol对称酐;
2）补充5%体积的DIEA;
3）涡旋搅拌1小时;
4）排放;
5）用DCM洗涤（5×/1分钟）;
6）用20%TFA/DCM溶液洗涤1分钟;
7）用20%TFA/DCM溶液处理15分钟;
8）用DCM洗涤（3×0.5分钟）;
9）用异丙醇洗涤（4分钟）;
10）洗涤（3×/0.5分钟）;
11）用异丙醇洗涤（4分钟）;
12）用DCM洗涤（3×/0.5分钟）;
13）洗涤（4分钟）异丙醇;
14）洗涤（3×/0.5分钟）。
待合成完成后，对该树脂进行真空干燥。然后用2当量（以初始树脂替代物为基准计）丙氨醇和1当量于DCM中的乙酸在室温下处理该树脂20小时。过滤后，冷冻干燥滤液。用含2%茴香醚的液态HF于-5℃下处理残余物30分钟。一旦于真空下脱除HF之后，用30%乙腈萃取肽并进行冷冻干燥。采用乙腈/0.1%TFA体系经制备性HPLC（Dynamax，C18 21.4×150mm柱）提纯残余物。如此得到的肽具备需要分子离子峰（FAB-MS），其氨基酸分析表明它正是所需要的肽。这样便制得下列具备所述特性的肽。
1）SucFEPIPEYL-ol
MW 1092.6 FAB-MS（MH）+1094.0tR17.53
E2801573 肽含量 79.8%
Glx（2）Pro（2）Ile（1）Tyr（1）Phe（1）
2.08 1.01 0.94 0.99 0.98
2）SucFEPIPEEYChaA-ol
MW 1332.7 FAB-MS（MH）+1333.4tR20，2min。
E2801755 肽含量 73%
Glx（3）Pro（2）Ile（1）Tyr（1）Phe（1）Cha（1）
3.04 2.03 0.92 1.00 0.97 0.95
3）SucFEPIPEEYL-ol
MW 1221.6 FAB-MS（MH）+1222.8tR16.83
E2801686 肽含量 72.1%
Glx（3）Pro（2）Ile（1）Tyr（1）Phe（1）
3.09 1.98 0.96 0.97 1.00
Claims (1)
1、一种制备下式所示肽醇衍生物的方法
X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-o1式中X为氢、一或两个C1-6烷基、或者一或两个
C2-10酰基；
A1为一条键或含有1-11个任意氨基酸残基的肽；
A2为苯丙氨酸、邻、间、对-或二取代的苯丙氨酸、β-(2-和3-噻吩基)丙氨酸、β-(2-和3-呋喃基)丙氨酸、β-(2-、3-和4-吡啶)丙氨酸、β-(苯并噻吩-2-和-3-基)丙氨酸、β-(1-和2-萘基)丙氨酸、色氨酸或酪氨酸；
A3为天冬氨酸或谷氨酸；
A4为任何氨基酸；
A5为异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸；
A6为脯氨酸、羟脯氨酸、3，4-脱氢脯氨酸、噻唑烷-4-羧酸酯、肌氨酸、NMe Pgl或右旋丙氨酸；
A7为任意氨基酸；
A8为任意氨基酸；
A9为亲油的氨基酸，选自酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、正亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、环己基丙氨酸和脯氨酸或含有至少一种这些亲油氨基酸的二肽；
A10-o1为含有0-5个任意氨基酸残基的还原肽部分，其中碳端氨基酸被还原为醇衍生物。
该方法包括(a)在与A9氨基酸相应的氨基酸得到适当保护后，将其连接在活化树脂载体之上(b)以由羧基至末端氨基A8-A1的次序将其它α氨基被保护氨基酸依次连接到生长的肽链的末端氨基上，同时脱除肽链上的氨基保护基(c)最后用的2当量与A10-o1相应的羧基末端氨基醇及约1当量处于二氯甲烷中的乙酸处理与肽结合的树脂，以便使肽由树脂中释放出来并同时将羧基末端肽醇结合在肽上从而产生所需要的肽醇衍生物。
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