CN88103009A - 环状抗凝血肽的制备方法 - Google Patents

环状抗凝血肽的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用作抗凝血剂的环状肽衍生物及其制备方法。

Description

本发明及用作抗凝血剂的新颖的环状肽。
抗凝血剂在如急性深度静脉血栓症，肺栓塞、四肢的急性动脉栓塞、心肌梗塞及播散型血管内凝血的药理学治疗中是有用的治疗剂。预防性使用抗凝血剂被确信能防止风湿性或动脉硬化心脏病患者栓塞的复发及防止外科手术中某些血栓栓塞并发症。也曾指出，在治疗冠状动脉及脑血管病时，使用抗凝血剂。动脉血栓的形成、特别是在供应心肌及肪的动脉中的动脉血栓的形成是致死的主要原因。
水蛭素是从蚂蟥的唾腺中分离出来的一种65个残基的多肽。它是一种抗凝血剂，即它是凝血酶的一种特殊的抑制剂。尽管它十分有效，但临床使用由蚂蟥提取物中分离出来的水蛭素似乎是不可能的，这是因为其数量有限，价格昂贵及会引起过敏反应，这种过敏反应会随着服用任何同样大小的外来蛋白质而产生。
申请人发现了水蛭素和特定部位至少部分地具有抗凝血活性。用化学方法合成了这个部位，并且其某些环状类似物看来能和凝血酶的识别部位结合，而不和在空间上隔开的酶促裂解部位结合。合成肽的结合作用竞争性地防止了纤维蛋白原和凝血酶的识别部位的结合，纤维蛋白原和凝血酶的结合是产生纤维蛋白及凝块形成的前提条件。本发明的肽具有显著的抗凝血活性，它们仅和凝血酶的识别部位结合而不和其裂解部位结合的特殊性能在学术上是极有兴趣的，并且在治疗学上对于抗凝血剂疗法是一个重要的手段。
本发明涉及式1结构的水蛭素衍生物，
Figure 88103009_IMG3
其中X是从氢、1-6个碳原子的一个或两个烷基、2-10个碳原子的一个或两个酰基、苄氧羰基或叔丁氧羰基中选择出的氨基端基残基。
A1是一个键或是含1-5个任何氨基端基残基。
A2是phe、subphe，β-（2-和3-）噻吩基丙氨酸、β（2-和3-）呋喃基丙氨酸、β-（2-，3-，和4-）吡啶基丙氨酸、β-（2-和3-苯并噻吩基）丙氨酸，β-（1-和2-萘基）丙氨酸、Tyr或Trp;
A3是Glu或Asp;
A4是任何氨基酸;
A5是Ile，Val，Leu，Nle或Thr;
A7是任何氨基酸;
A8是任何氨基酸;
A10是从Tyr，Tyr（SO3H），Trp，Phe，Leu，Nle，Ile，Val，His和Pro中选择出的一种亲脂性氨基酸或者是至少含一个上述亲脂性氨基酸的二肽。
A11是一个键或者是含1-5个任何氨基酸残基的肽片断。
Y是从OH，（C1-C6）烷氧基，氨基，单或双（C1-C4）烷基取代的氨基或苄氨基中选择出的羧基端基残基;
R，R′，R1，R1′分别从氢或（C-C）烷基中选择;
B从-S-，-S-S-，或-S-AlK3-S-中选择，
AlK1，AlK2和AlK3分别从（C1-C8）亚甲基或1，2-亚乙基中选择;其中的“D”及“L”表示所指的碳原子的立体化学分别相应于D-半胱氨酸和L-半胱氨酸的构型。同时还指出这些肽衍生物及其混合物的二聚体以及这些肽的衍生物、二聚体及其混合物作为抗凝血剂使用。
本说明书全文使用如下的氨基酸的通用略语：
GLy-甘氨酸
ALa-丙氨酸
VaL-缬氨酸
Leu-亮氨酸
ILe-异亮氨酸
Pro-脯氨酸
Phe-苯丙氨酸
Trp-色氨酸
Met-蛋氨酸
Ser-丝氨酸
Thr-苏氨酸
Cys-半胱氨酸
Tyr-酪氨酸
Asn-天冬酰胺
Gln-谷氨酰胺
Asp-天冬氨酸
Glu-谷氨酸
Lys-赖氨酸
Arg-精氨酸
His-组氨酸
Nle-正亮氨酸
Hyp-羟基脯氨酸
3，4-脱氢脯氨酰-3，4-脱氢脯氨酸
Tyr（SO3H）酪氨酸硫酸酯
Pgl-苯基甘氨酸
NMepgl-N-甲基-苯基甘氨酸
Sar-肌氨酸（N-甲基甘氨酸）
Psub    Phe-对位取代苯丙氨酸
Sub    Phe-取代苯丙氨酸
DAla-D-丙氨酸
Ac-乙酰基
Suc-丁二酰基
PCl    Phe-对氯苯丙氨酸
PNO2Phe-对硝基苯丙氨酸
Pen-青霉胺（β，β-二甲基半胱氨酸）
DCys-D-半胱氨酸
烷基和烷氧基的烷基部分包括直链烷基，支链烷基或环烷基，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、环戊基、己基、异己基、环己基及环戊甲基。2-10个碳原子的酰基包括每个基上有1个或2个羰基部分的直链的、支链的、环状的饱和的及不饱和的酰基，例如，乙酰基、苯甲酰基、丁二酰基。“（C1-C8）亚甲基或1，2-亚乙基”这一术语是指由1-8个碳原子的非环的或环状的饱和的或不饱和的烷基中，从同一个碳原子上或者从两个相邻的碳原子上除去两个氢原子所得到的二价基。本发明的（C1-C8）亚甲基或1，2亚乙基的例子是亚甲基（-CH2-）、亚乙基（CH3CH
Figure 88103009_IMG4
）、1-甲基亚乙基（CH3C（CH3）
Figure 88103009_IMG5
）、1-甲基亚丙基或仲亚丁基（CH3CH2C（CH3）
Figure 88103009_IMG6
）、2，2-二甲基亚丙基或新亚戊基（CH3C（CH3）2CH
Figure 88103009_IMG7
）、1，2-亚乙基或二亚甲基（-CH2CH2-）、甲基-1，2-亚乙基（-CH2-CH（CH3）-）、乙基-1，2-亚乙基（-CH2-CH（C2H5）-）、亚乙烯基（-CH＝CH-）、1，1-亚乙烯基（CH2＝C
Figure 88103009_IMG8
）、1，1-亚环己基（C6H10
Figure 88103009_IMG9
）及1，2-亚环戊基（C5H8
Figure 88103009_IMG10
）。囟素是氟、氯、溴或碘。
本文用的“任何氨基酸”这一术语包括自然界存在的氨基酸及通常在制备自然界存在的肽的合成类似物时，在肽化学技术中通常所作用的那些其它“非蛋白”的α-氨基酸。自然界存在的氨基酸是，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、组氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、鸟氨酸及赖氨酸。“非蛋白”的α-氨基酸的例子是正亮氨酸、正缬氨酸、别异亮氨酸、高精氨酸、硫脯氨酸、脱氢脯氨酸、羟基脯氨酸（Hyp）、高丝氨酸、环己基甘氨酸（Chg）、α-氨基-正丁酸（Aba）、环己基丙氨酸（Cha）、氨苯基丁酸（Pba）、在苯丙氨酸的苯基的邻、间或对位单取代或二取代的苯丙氨酸、其取代基为（C1-C4）的烷基、（C1-C4）的烷氧基、囟素或硝基及亚甲二氧基、β-（2-和3-噻吩基）丙氨酸、β-（2-和3-呋喃基）丙氨酸及β（2-，3-和4-吡啶基）丙氨酸、β-（苯并2-和3-噻吩基）丙氨酸、β-（1-和2-萘基）丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的O-烷基化衍生物，S-烷基化的半胱氨酸、酪氨酸、3，5-二碘酪氨酸的O-硫酸酯及自然界存在的氨基酸的D异构体。
“亲脂性氨基酸”这一术语包括Tyr、Tyr（SOH）、Phe、Leu、Nle、Ile、Val、His及Pro。
除甘氨酸以外自然界的氨基酸都含手性碳原子，除非另外特别指明外，本文所指的光学活性氨基酸是L-构型的。例如任何一个A或A组中的氨基酸可以是D构型或者是L构型。按照习惯，本文写出的肽的结构是将氨基一端写在链的左边，将羧基一端写在链的右边。
“二聚体”这一术语是指在环化一步中或以“头-头”方式或以“头-尾”方式将两个单个的线型肽连接起来所得到的肽。在通过“B”基实现所需要的分子内的环化过程中，某些原料线型肽将和另一原料线型肽连接，而不是自己本身连接，所得到的产品在它是由两个线型的原料肽组成的这一意义上讲是“二聚体”，但在二聚体的分子式应正好是单体的分子式的两倍这一意义上讲却不能算是二聚体。本发明的肽的二聚体结构式为：
Figure 88103009_IMG11
“头-尾”二聚体
头-头二聚体
其中的取代基如上述结构Ⅰ所规定，除上下文另有要求外在本发明中所说的肽衍生物包括二聚体及混合物。而单体和由环化步骤所得到的二聚体的混合物很容易被分离，其方法对于熟悉技术的人是熟知的。混合物也可以不经分离用于本发明的抗血栓组合物。
式Ⅰ的多肽能和任何无毒的有机酸或无机酸形成制药学上可接受的盐类。形成适当的盐的无机酸的例子是盐酸、氢溴酸、硫酸及磷酸，及如磷酸（单）氢钠及硫酸氢钾那样的酸式金属盐。形成适当的盐的有机酸的例子包括一元酸、二元酸及三元酸，例如这些酸是乙酸、羟基乙酸，乳酸、丙酮酸、丙二酸，丁二酸，戊二酸，富马酸、苹果酸、洒石酸、柠檬酸，抗坏血酸、马来酸，羟基马来酸、苯甲酸，羟基苯甲酸，苯乙酸，肉桂酸、水杨酸、α-苯氧基苯甲酸及如甲磺酸和2-羟基乙磺酸那样的磺酸。氨基酸的端羧基部分形成的盐包括和任何适当的无机或有机碱形成的无毒性羧酸盐。例如这些盐包括碱金属如钠及钾的盐，碱土金属如钙及镁的盐，包括铝的ⅢA族轻金属的盐及有机伯、仲、叔胺的盐，如三烷基胺包括三乙胺、普鲁卡因，二苄基胺，1-乙烯胺，N，N′-二苄基乙撑二胺，二氢化枞胺，N-（低碳）烷基哌啶及任何其它适当的胺。
关于化合物的任何同属基团最好选择某些基团。申请人宁愿选择如下的式1的肽衍生物，其中
X是H、乙酰基、或丁二酰基。最好也选择式1的化合物，其中
A1是-His-Asn-Asp-Gly-Asp-，
-Asn-Asp-Gly-Asp-，
Asp-Gly-Asp-
-Gly-Asp-
-Asp-，或一个键;
A2最好是Phe，β（2-噻吩基）丙氨酸或β（3-噻吩基）丙氨酸，Tyr，Trp，或PCl Phe;
A3是Glu;
A4是Glu;Asp，Pro或Ala;
A5是Ile;
A7是Glu，Asp，或Ala
A8是Glu，或Asp;
A10是Leu;
A11是Pro，Gla，Asp，或Asp-Glu，
Al K1和AlK2分别是亚甲基
Y是为H或NH2;及
B是-S-S-。
特别是最好选择如下的式1的肽衍生物，其中X是乙酰基并且A是Glu-Asp或Asp，或者X是丁二酰基并且A1是一个键，其中
A2是Phe，
A3是Glu;
A4是Glu或Pro;
A5是Ilu;
A7是Glu;
A8是Glu或Asp;
A9是Tyr，Ala-Tyr或Glu-Leu;
A10是-Leu-Gln-或Asp-Glu;
A11是Pro;Gln，Asp或Asp-Glu;
R，R′，R1，R1′，分别是氢;
AlK1及AlK2分别是亚甲基;
B是-S-S-及
Y是-OH。
本发明的肽能用熟悉本技术的人熟知的各种方法制备，这些方法包括固相顺序及嵌段合成、基因无性繁殖及这些技术的结合。固相顺序方法可使用已建立起的自动化方法，例如使用肽自动合成器来完成。在这个方法中，被保护氨基酸的α-氨基被键合到一种树脂载体上，所用的树脂载体可以是在多肽的固相制备技术中通常使用的任何适当的树脂，用以约0.5～3%的二乙烯苯交联的聚苯乙烯较好，该树脂经氯甲基化或者羟甲基化以便为最初引入的被保护氨基酸的α-氨基提供酯化点。
羟甲基化树脂的例子被Bodanszky等人所描述;化学与工业（Chem，Ind，（London）38    1597-98（1966）。氯甲基化树脂能以商品从Bio    Rad    Laboratories，Richmond，California买到，这种树脂的制备被Stewart等人在“固相肽合成”（“Solid    Phase    Peptide    Sythesis”）第1章第1-6页中叙述（Freeman    &    Co.，San    Francisco    1969）。用Gisin的方法（Helv，Chem，Acta，56，1476，1973）将被保护的氨基酸键合到树脂上。很多键合了被保护的氨基酸的树脂是可以买到的，例如为了制备本发明中的其中羧端基是Thr残基的多肽，可以使用一种被键合到苄化了的羟甲基化苯乙酰胺甲基（PAM）树脂上，并被叔丁氧酰基（BOC）保护的Thr，并且它是可以买到的。
被保护的氨基酸的α-氨基偶联到树脂载体上之后，可以使用任何适当的方法，例如用溶于二氯甲烷中的三氟乙酸，单独用三氟乙酸，或溶于二氧六环中的HCl将保护基除去。脱保护反应在0℃到室温之间完成。也可以作用其它标准裂解剂及其它条件以脱除特定的α-氨基保护基。脱除α-氨基保护基之后，其它的被保护氨基酸的氨基按照所需的顺序逐个被偶联。另外，在用载有氨基酸顺序的树脂偶联之前，多个氨基酸基团可以用溶液方法偶联。
用于引入多肽顺序的每种氨基酸的α-氨基保护基可以是本技术中已知的保护基。在所预期的α-氨基保护基中有（1）酰基类型的保护基如甲酰基，三氟乙酰基，邻苯二甲酰基，甲苯磺酰基（tosyl），苯磺酰基，硝基苯基亚磺酰基，三苯甲基亚磺酰基，邻-硝基苯氧基乙酰基，α-氯代丁酰基;（2）芳香族氨基甲酸酯类型的保护基，如苄氧羰基和取代的苄氧羰基，例如对-氯苄氧羰基，对-硝基苄氧羰基，对-溴苄氧羰基，对-甲氧基苄氧羰基，1-（对-联苯基）-1-甲基乙氧羰基，2，2-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧羰基和二苯甲氧羰基;（3）脂肪族氨基甲酸酯保护基如叔丁氧羰基（BOC），二异丙甲氧羰基，异丙氧羰基，乙氧羰基及烯丙氧羰基;（4）环烷氨基甲酸酯保护基如环戊氧羰基，金刚烷氧羰基及环己氧羰基;（5）硫代氨基甲酸酯类型保护基如苯硫羰基;（6）烷基类型的保护基如三苯甲基及苄基，及（7）三烷基硅烷基如三甲基硅烷基。较好的α-氨基保护基是叔丁氧羰基。
选择适当的偶联剂是本工艺中的技巧，被加入的氨基酸是Gln，Asn或Arg时，特别适用的偶联剂是N，N′-二异丙基碳化二亚胺和1-羟基苯并三唑，这些试剂的作用防止了腈及内酰胺的生成。其它的偶联剂是（1）碳化二亚胺（例如N，N′-二环己基碳化二亚胺及N-乙-N′（r-二甲氨基丙基）碳化二亚胺）;（2）氨基氰（例如N，N′-二苄基氨基氰）;（3）烯酮亚胺;（4）异噁唑盐（例如N-乙基-5-苯基-3′-异噁唑磺酸盐;（5）环中含1-4中氮原子的具有芳香性的含氮所单环杂环酰胺，例如酰化咪唑啉，酰化吡唑啉，酰化1，2，4-三唑啉，有用的特殊的杂环酰胺包括N，N′-羰基二咪唑及N，N′-羰基-二-1，2，4-三唑;（6）烷氧基化的乙炔（例如乙氧基乙炔）;（7）和氨基酸的羧基部分形成混酐的试剂（例如氯代甲酸乙酯及氯代甲酸异丁酯，或者被偶联的氨基酸的对称的酸酐（例如Boc-Ala-O-Ala-Boc）R（8）在一个环的氮原子上有羟基的含氮杂环化合物（例如N-羟基-邻苯二甲酰亚胺，N-羟基琥珀酰亚胺及1-羟基苯并三唑）。其它活性试剂及它们在多肽偶联中的用途被Kappor，在药物科学杂志（J.Pharm，Sci.，59，pp    1-27，1970）中描述。除了Arg，Asn及Gln以外，申请人宁愿选择对称酸酐作为所有氨基酸的偶联剂。
每种被保护的氨基酸或氨基酸序列均以约四倍过量放入固相反应器内，并在1∶1的二甲基甲酰胺-二氯甲烷介质中进行偶联，或者单独使用二甲基甲酰胺或最好是单独作用二氯甲烷作反应介质。在偶联不完全情况下，应于固相反应器中偶联下一个氨基酸以前及除去α-氨基保护基前重复进行该偶联程序。在合成的每个阶段上偶联反应的成功与否用E.Kaiser等人描述的水合茚三酮反应监测。
得到所需的氨基酸序列后，将肽从树脂上移出。这可用水解方法完成，例如用二甲硫醚、对甲苯酚及甲硫酚的稀氢氟酸水溶液处理结合了多肽的树脂。
如在固相肽合成技术中所知道的，在制备肽链时，很多氨基酸都有需要保护的官能团，熟悉本技术的人有能力使用和选择适当的保护基，使用和选择适当的保护基将于被保护的氨基酸及在肽链上存在的其它被保护的氨基酸片断。侧链保护基的选择条件是，当裂解α-氨基部分的保护基时，它必须不能被裂解作用脱除，例如对于赖氨酸，合适的侧链保护基是苄氧羰基和取代的苄氧羰基，所说的取代基从囟素（例如氯、溴、氟）和硝基中选择（例如α-氯苄氧羰基，对-硝基苄氧羰基，3，4-二氯苄氧羰基），还有甲苯磺酰基、叔戊氧羰基、叔丁氧羰基及二异丙甲氧羰基。苏氨酸和丝氨酸中的醇羟基用乙酰基、苯甲酰基、叔丁基、三苯甲基、苄基、2，6-二氯苄基或苄氧羰基保护，较好的保护基是苄基。
这些基团能用本技术中熟知的方法脱除，典型的方法是在肽链的合成完成之后脱除保护基，但是也可以在任何其它适当的阶段除去保护基。
一般来说，环状肽可以由适当的线型衍生物或者在从树脂载体上移出线型肽之前，或者在其后来制备，结构Ⅰ中B是-S-S-基的化合物可以从相应的含游离巯基的线型肽用已知的氧化偶联技术来制备，例如，Stewart等人在“固相肽合成”（“Solid Phase Peptide Synthesis”）第1章第95页中叙述了用铁氰化钾氧化线型肽。（Freeman & Co，San Francisco1969）。结构I中的B是-S-AlK3-S-基，AlK3是（C1-C8）亚乙基的化合物能从含游离巯基的线型肽和一种适当的非环的或环状的，饱和的或不饱和的烷基1，2-二溴衍生物反应而制备，其方法类似于H.I.Mosberg及J.R.Omnass在美国化学会志（J.Amer.Chem.Soc）107，2986-2987（1985）中所述。结构Ⅰ中B是-S-AlK3-S-基，AlK3是（C1-C8）亚甲基的化合物能从含游离巯基的线型肽和适当的非环的或环状的，饱和的或不饱和的烷基酮或醛反应来制备，其方法类似于美国化学会志76 1945（1954）中所描述的方法。结构Ⅰ中B是-S-基的那种化合物可以用K.Jost，在Collect Czech.Chem，Commun 36，218（1971）及美国专利4161521中所提出的方法制备。
根据患者的不同，拟进行治疗的血栓形成状态的严重性及所选择的肽衍生物的不同，本发明的肽衍生物抗凝血剂的剂量为每个患者体重，每天0.2mg/kg到250mg/kg。对于特殊的患者的合适的剂量很容易确定，每天1-4剂，每剂5mg到100mg活性化合物较好。
治疗和预防各种血栓病，特别是冠状动脉及脑血管病都需要抗凝血疗法。这个领域中的有经验的工作人员很容易知道需要抗凝血疗法的情况。本文所用“患者”这一术语是指哺乳动物，如灵长类的人、羊、马、牛、猪、狗、猫、鼠及小鼠。
虽然口服以后某些多肽衍生物可以免强通过肠道，但申请人宁愿选择非口服的方式，例如皮下的，静脉内的，肌肉内的或腹膜内的注射，并以积存注射、植入制剂的方式给药。或者使用含本发明的肽衍生物的气溶胶罐以喷雾或干粉方式用于粘膜，例如鼻、喉及支气管粘膜。
不经消化道给药时，该化合物可以用其生理学上可接受的稀释剂的溶液或悬浮液以注射剂型给药，药用载体可以是无菌的液体如水或油，无论加入或不加表面活性剂及其它制药学上可接受的辅助剂均可。在这些制剂中所使用的油例如可以是石油、动物油、植物油及合成油，例如花生油、豆油及矿物油。一般而言，水，盐水，葡萄糖水溶液及其它糖溶液，乙醇，二元醇如丙二醇及聚乙二醇特别是对于注射溶液是较好的液体载体。
化合物能以积存注射或植入制剂的方式给药，这种给药方式允许其活性组份持续释放，活性组份可被压成小片或者小园柱体以积存注射液或植入物植入皮下或肌肉内。植入物可使用惰性材料如可生物降能的聚合物或合成硅酮例如Dow-Corning公司生产的硅橡胶、硅氧橡胶。
实例
本发明用下述非限制性实例来阐明。
Figure 88103009_IMG13
Leu-Glu-OH的制备
作用0.1mmol的0.66mmol/g的Boc-Gln-PAM树脂，采用固相法合成肽。除了Boc-Gln用DCC/HOBT方法偶联以外，双重对称的酸酐偶联剂和2.0mmol的Na-Boc-氨基酸一起反应。所作用的侧链保护是Asp（Chx），Cys（p    Me    Bzl），Glu（Bzl）。合成完成时，用溶于二氯甲烷中的50%三氟乙酸除去Na-Boc保护，树脂用二氯甲烷洗三次，用三倍量的10%的二异丙基乙基胺的二氯甲烷洗涤液中和，再用二氯甲烷洗三次，用溶于二氯甲烷中的N-乙酰咪唑进行乙酰化，再用二氯甲烷洗三次并于真空中干燥，将肽脱除保护基并用水从树脂上脱出，用氢氧化铵将PH值调到8.5，往溶液中加入铁氰化钾（0.01N）直到溶液维持黄色不变，将溶液搅拌30分钟，然后再用乙酸将PH值调到4-5，将该混合物和Bio-Rod    AG3-X    4A离子交换树脂一起搅拌2小时，然后过滤混合物，再将滤液冷冻干燥。
将肽在92×2.6cm的Sephadex G15柱子上，用5%醋酸水溶液进行脱盐纯化，并用冻干，制备型高压液相色谱（CPLC）采用C18Vydac218 TP1010（250×10mm）柱，用溶于0.1%的三氟乙酸水溶液中的乙腈为洗脱剂，流速5ml/min，收集主峰流出物并冻干即得到所需的产品。均一性用高压液相色谱（HPLC）及薄层色谱（TLC）测定。HPLC：Vydac218 TP54（250×4.6mm）C18柱;洗脱速度2ml/min，to＝1.8min：用溶于0.1%三氟乙酸中的25-50%的乙腈为洗脱剂在线性梯度为1%/min时的洗脱时间。HPLC进行5分钟。FAB-MS：（M+H）-1411.7±1μm（计算值1410）。氨基酸分析：（6NHCl水解，24小时，106℃），见表1，以重量计肽含量为57%。
Figure 88103009_IMG14

Claims (15)

1、如下式的肽衍生物的制备方法
式中X是从氢、1-6个碳原子的一个或两个烷基，2-10个碳原子的一个或两酰基、苄氧羰基或叔丁氧羰基中选择出的氨基端基残基；
A1是一个键或是含1-5个任何氨基酸残基的肽；
A2是phe、subphe，β-(2-和3-噻吩基)丙基酸、β-(2-和3-呋喃基)丙氨酸、β-(2-，3-，和4-吡啶基)丙氨酸、β-(2-和3-苯并噻吩基)丙氨酸，β-(1-和2-萘基)丙氨酸、Tyr或Trp；
A3是Glu或Asp；
A4是任何氨基酸；
A5是Ile，Val，Leu，Nle或Thr；
A7是任何氨基酸；
A8是Glu或Asp；
A10是从Tyr，Tyr(SO3H)，Trp，Phe，Leu，Nle，Ile，Val，His和Pro中选择出的一种亲脂性氨基酸或者是至少含一个上述亲脂性氨基酸的二肽。
A11是一个键或者是含1-5个任何氨基酸残基的肽片断。
Y是从OH，(C1-C6)烷氧基，氨基，单或双(C1-C4)烷基取代的氨基或苄氨基中选择出的羧基端基残基；
R，R′，R1，R1′分别从氢或(C1-C4)烷基中选择；
B从-S-，-S-S-，或-S-AlK3-S-中选择，
AlK1，AlK2和AlK3分别从(C1-C8)亚甲基或1，2-亚乙基中选择；和
式中的“D”及“L”表示所指的碳原子的立体化学分别相应于D-半胱氨酸和L-半胱氨酸，
该方法包括通过固相顺序或嵌段合成，基因无性繁殖或这些技术的结合制备含游离巯基的线性肽，接着使此线性肽氧化偶联。
2、制备如下式所示的肽衍生物的因相顺序或嵌段合成法，
Figure 88103009_IMG2
式中X是从氢、1-6个碳原子的一个或两个烷基，2-10个碳原子的一个或两个酰基、苄氧羰基或叔丁氧羰基中选择出的氨基端基残基;
A1是一个键或是含1-5个任何氨基酸残基的肽;
A2是phe、subphe，β-（2-和3-噻吩基）丙基酸、β-（2-和3-呋喃基）丙氨酸、β-（2-，3-，和4-吡啶基）丙氨酸、β-（2-和3-苯并噻吩基）丙氨酸，β-（1-和2-萘基）丙氨酸、Tyr或Trp;
A3是Glu或Asp;
A4是任何氨基酸;
A5是Ile，Val，Leu，Nle或Thr;
A7是任何氨基酸;
A8是Glu或Asp;
A10是从Tyr，Tyr（SO3H），Trp，Phe，Leu，Nle，Ile，Val，His和Pro中选择出的一种亲脂性氨基酸或者是至少含一个上述亲脂性氨基酸的二肽。
A11是一个键或者是含1-5个任何氨基酸残基的肽片断。
Y是从OH，（C1-C6）烷氧基，氨基，单或双（C1-C4）烷基取代的氨基或苄氨基中选择出的羧基端基残基;
R，R′，R1，R1′分别从氢或（C1-C4）烷基中选择;
B从-S-，-S-S-，或-S-AlK3-S-中选择，
AlK1，AlK2和AlK3分别从（C1-C8）亚甲基或1，2-亚乙基中选择;和
式中的“D”及“L”表示所指的碳原子的立体化学分别相应于D-半胱氨酸和L-半胱氨酸，
该方法包括结合式A1适当保护的氨基酸于一种活性树脂支持体上，接着，结合另一种式A1至A11的α-氨基保护的氨基酸于生长肽链的未端氨基（此未端氨基由于移除了氨基保护基而被暴露出来）上，最后，氧化偶联此线性肽。
3、权利要求1或2的方法，其特征在于A2是Phe，β-（2-或3-噻吩基）丙氨酸或Tyr。
4、权利要求1或2的方法，其特征在于A3是Glu。
5、权利要求1或2的方法，其特征在于A4是Glu。
6、权利要求1或2的方法，其特征在于A5是Ile。
7、权利要求1或2的方法，其特征在于A7是Glu或Ale。
8、权利要求1或2的方法，其特征在于A8是Glu或Asp。
9、权利要求1或2的方法，其特征在于A10是Leu。
10、权利要求1或2的方法，其特征在于A11是Pro，Glu，Asp，或Asp-Glu。
11、权利要求1或2的方法，其特征在于X是H、Z酰基或丁二酰基。
12、权利要求1或2的方法，其特征在于Y是OH或NH2。
13、权利要求1或2的方法，其特征在于R，R′，R1，R1′，分别是氢。
14、权利要求1或2的方法，其特征在于B是-S-S-基。
15、权利要求1或2的方法，其特征在于AlK1和AlK2分别是如式-（CH2）-的亚甲基。
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