FI89064C - Foerfarande foer framstaellning av peptidderivat av hirudin som hindrar koagulationen i blod - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av peptidderivat av hirudin som hindrar koagulationen i blod Download PDFInfo
- Publication number
- FI89064C FI89064C FI882359A FI882359A FI89064C FI 89064 C FI89064 C FI 89064C FI 882359 A FI882359 A FI 882359A FI 882359 A FI882359 A FI 882359A FI 89064 C FI89064 C FI 89064C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- glu
- amino
- group
- peptide
- preparation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
1 89064
Mentelmä syklisten veren hyytymistä estävien hirudiinin peptidijohdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö koskee uusien syklisten peptidien 5 valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia veren hyytymistä estäviä aineita (antikoagulantteja).
Veren hyytymistä estävät aineet ovat käyttökelpoisia terapeuttisia aineita esimerkiksi akuutin syvän laskimotukoksen, keuhkoveritulpan, raajojen akuuttien valti-10 motukosten, sydäninfarktin ja sairauden, jossa veri hyytyy useassa elimistön kohdassa yhtäaikaa (DIC), farmakologisessa hoidossa. Antikoagulanttien ennaltaehkäisevän antamisen uskotaan estävän veritulpan uusiutumisen potilailla, joilla on reumaattinen tai verisuonten kalkkiutu-15 misesta johtuva sydänsairaus, ja estävän kirurgian yhteydessä tiettyjä, veren hyytymisestä muodostuvien tulppien aiheuttamia komplikaatioita. Veren hyytymistä estävien aineiden antaminen on myös ollut aiheellista sepelvaltimon ja aivoverisuonien sairauksien hoidossa. Valtimotu-20 kos, erityisesti sydänlihasta ja aivoja ravitsevissa valtimoissa, on huomattava kuoleman aiheuttaja.
Hirudiini on 65 aminohappotähdettä sisältävä poly-peptidi, joka on eristetty verijuotikkaiden sylkirauhasista. Se on veren hyytymistä estävä aine ja trombiinin 25 spesifinen estäjä. Verijuotikasuutteista eristetyn hiru diinin, vaikka se onkin melko tehokasta, kliininen käyttö näyttää epätodennäköiseltä, koska sitä on vähän, se on kallista ja aiheuttaa allergisia reaktioita niin kuin tavallisesti minkä tahansa tämän kokoisen vieraan proteii-30 nin antaminen.
Hakijat ovat löytäneet hirudiinistä tarkoin määrätyn alueen, joka saa aikaan, ainakin osaksi, sen veren hyytymistä estävän vaikutuksen. Tämä alue on syntetisoitu kemiallisesti ja eräät sen syklisistä analogeista näyttä-35 vät sitoutuvan trombiinin tunnistamiskohtaan, mutta eivät 2 89064 entsymaattiseen pilkkoroiskohtaan,joka on avaruudellisesti erillään. Synteettisten peptidien sitoutuminen kilpaillen (kompetitiivisesti) estää fibrinogeenin sitoutumisen trombiinin tunnistamiskohtaan, mikä on edellytys 5 fibriinin tuotannolle ja hyytymän muodostumiselle. Tämän keksinnön peptideillä on merkittävä veren hyytymistä estävää vaikutusta, ja niiden epätavallinen kyky sitoutua trombiinin tunnistamiskohtaan ilman, että ne sitoutuvat sen pilkkomiskohtaan, saattaa antaa tieteellisesti mie-10 lenkiintoisen ja terapeuttisesti merkittävän avun veren hyytymistä estävään hoitoon.
Tämä keksintö koskee hirudiinin johdannaisten valmistamista, joilla on rakennekaava 1: 15 CO A7—Ag NRi' \f— o l "—\l X-Ai-ArArAfAs - N(Ri)-C-R R'-CCO - Aio*An-Y 1
I I
20 Alki -B-Alk2 jossa X on aminoterminaalinen tähde, joka valitaan vedystä, l:stä 6:een hiiliatomia sisältävästä, yhdestä tai kahdesta alkyyliryhmästä, 2:sta 10:een hiiliatomia sisäl-25 tävästä, yhdestä tai kahdesta asyyliryhmästä, karbobent-syylioksista tai t-butyylioksikarbonyylistä; A1 on Gly-Asp tai sidos; A2 on Phe tai Tyr; A3 on Glu; 30 A4 on Glu; A5 on Ile; A7 on Glu;
Ae on Glu; A10 on Leu tai Cha; 35 Au on Gin; 3 89064 Y on karboksiterminaalainen tähde, joka valitaan OHrsta, (Ci.gJ-alkoksista, aminosta, mono- tai di-(C1.4)-alkyylillä substituoidusta aminosta tai bentsyyliaminos-ta; 5 R, R', Rx ja R[ valitaan jokainen vedystä tai () -alkyyliryhmästä; B on -S-S; ja
Alkt ja Alk2 valitaan jokainen (C1.8)-metyleeni-ryhmästä; 10 ja jossa "D" ja "L" ilmaisevat, että osoitetun hiilen stereokemia vastaa D-kysteiinin ja L-kysteiinin stereoke-miaa, tässä järjestyksessä, samoin kuin näiden peptidi-johdannaisten dimeerejä ja niiden seoksia.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomais-15 ta, että kaavan Ax mukainen sopivasti suojattu aminohappo sidotaan aktivoituun hartsikantajaan, myöhemmin kaavojen A2-An mukaiset muut alfa-aminosuojatut aminohapot sidotaan kasvavan peptidiketjun, josta on sillä välin poistettu sen aminon suojaryhmä, terminaaliseen aminoryhmään, 20 ja lopuksi lineaarinen peptidi altistetaan hapettavalle kytkennälle.
Koko tämän patenttiselityksen ajan aminohapoista käytetään seuraavia yleisiä lyhenteitä;
Gly - glysiini 25 Ala - alaniini
Vai - väliini Leu - leusiini Ile - isoleusiini Pro - proliini . 30 Phe - fenyylialaniini
Trip - typtofaani Met - met ioni ini • ; Ser - seriini
Thr - treoniini 35 Cys - kysetiini 4 89064
Tyr - tyrosiini Asn - asparagiini Gin - glutamiini Asp - asparagiinihappo 5 Glu - glutamiinlhappo
Lys - lysiini Arg - arginiini His - histidiini Nle - norleusiini 10 Hyp - hydroksiproliini 3,4-dehydroPro - 3,4-dehydroproliini Tyr(S03H) - tyrosiinisulfaatti Pgl - fenyyliglysiini NMePgl - N-metyylifenyyliglysiini 15 Sar - sarkosiini (N-metyyliglysiini) pSubPhe - para-substitutoitu fenyylialaniini SubPhe - substituoitu fenyylialaniini DAla - D-alaniini Ac - asetyyli 20 Sue - sukkinyyli pCIPhe - para-kloorifenyylialaniini PN02Phe - para-nitrofenyylialaniini Pen - penisillamiini (β,β-dimetyylikysteiini) DCys - D-kysteiini 25 Alkyyliryhmän ja alkoksiryhmän alkyyliosan katso taan käsittävän suorat, haaroittuneet tai sykliset al-kyyliryhmät, esimerkiksi metyyli, etyyli, propyyli, iso-propyyli, butyyli, isobutyyli, tert-butyyli, pentyyli, isopentyyli, sec-pentyyli, syklopentyyli, heksyyli, iso-30 heksyyli, sykloheksyyli ja syklopentyylimetyyli. 2:sta 10:een hiiliatomia sisältävän asyyliryhmän katsotaan käsittävän suorat, haaroittuneet, sykliset, tyydyttyneet ja tyydyttymättömät asyyliryhmät, joissa on ryhmää kohti 1 tai kaksi karbonyyliosaa, esimerkiksi asetyyli, bentsoyy-35 li ja sukkinyyli. Termi "(C1.8-metyleeniryhmä" merkitsee 5 89064 kaksiarvoista ryhmää, joka on saatu avoketjuisesta tai syklisestä, tyydyttyneestä tai tyydyttymättömästä alkyy-liryhmästä, jossa on l:stä 8:aan hiiliatomia, poistamalla käsitteellisesti alkyyliryhmästä kaksi vetyatomia yhdestä 5 hiiliatomista tai kahdesta vierekkäisestä hiiliatomista. Tämän keksinnön (C^g)-metyleeniryhmiä ovat esimerkiksi metyleeni tai metylideeni (-CH2-), etylideeni (CH3CH<), 1-metylietylideeni (CH3C( CH3)<), 1-metyylipropylideeni tai sec-butylideeni (CH3CH2C(CH3)<), 2,2-dimetyylipropyli-10 deeni tai neopentylideeni (CH3C(CH3)2CH<), etyleeni tai dimetyleeni (-CH2CH2-), metyylietyleeni (-CH2CH(CH3) -), etyylietyleeni (-CH2CH(C2H5)-), etenyleeni tai vinyleeni (-CH=CH-), 1,1-etenylideeni (CH2=C<), 1,1-sykloheksyli-deeni (C6H10<) ja 1,2-syklopentylideeni (C5H8<). Halogeeni-15 ryhmä on fluori-, kloori-, bromi- tai jodiryhmä.
Tässä käytetty termi "mikä tahansa aminohappo" käsittää luonnossa esiintyvät aminohapot, samoin kuin muutkin "ei-proteiini"-α-aminohapot, joita peptidikemian asiantuntijat tavallisesti käyttävät valmistaessaan luon-20 nossa esiintyvien peptidien synteettisiä analogeja. Luonnossa esiintyviä aminohappoja ovat glysiini, alaniini, väliini, leusiini, isoleusiini, seriini, metioniini, treoniini, fenyylialaniini, tyrosiini, tryptofaani, kys-teiini, proliini, histidiini, asparagiinihappo, aspara-25 giini, glutamiinihappo, glutaniini, arginiini, ornitiini ja lysiini. "Ei-proteiini" a-aminohappoja ovat esimerkiksi norleusiini, norvaliini, alloisoleusiini, homoarginii-ni, tiaproliini, dehydroproliini, hydroksiproliini (Hyp), homoseriini, sykloheksyyliglysiini (Chg), a-amino-n-voi-30 happo (Aba), sykloheksyylialaniini (Cha), aminofenyyli-voihappo (Pba), fenyylialaniinit, jotka on mono- tai di-substituoitu fenyyliosan orto-, meta- tai para-asemasta (Cj.4)—alkyyli—, (C^)-alkoksi-, halogeeni- tai nitroryh-millä tai metyleenidioksiryhmällä, B-(2- ja 3-tienyyli)-35 alaniini, β-(2 ja 3-furanyyli)alaniini, β-(2-, 3- ja 4- 6 89064 pyridyyliJalaniini, B-bentsoetienyl-2- ja 3-yyli)alanii-ni, B-(l- ja 2-naftyyli)alanlini, seriinin, treoniinin tai tyrosiinin O-alkyloidut johdannaiset, S-alkyloitu kysteiini, tyrosiinin O-sulfaattiesteri, 3,5-dijodityro-5 siini ja luonnossa esiintyvien aminohappojen D-isomeerit.
Termi "lipofiilinen aminohappo" sisältää Tyr:n, Tyr(S03H):N Phe:n, Leu:n, Nle:n, Ile:n, Valin, His:n ja Pro:n.
Luonnon aminohapoissa on, glysiiniä lukuunottamat-10 ta, kiraalinen hiiliatomi. Ellei nimenomaan toisin mainita, tässä käsiteltävillä optisesti aktiivisilla aminohapoilla on L-konfiguraatio. Esimerkiksi millä tahansa ryhmän Ax tai A10 aminohapolla voi olla D- tai L-konfiguraatio. Tässä peptidien rakenne esitetään, kuten tavallista, 15 niin, että aminoterminaalinen osa on ketjun vasemmalla puolella ja karboksiterminaalinen osa on ketjun oikealla puolella.
Termin "dimeerit" tarkoitetaan merkitsevän niitä peptidejä, jotka saadaan, kun kaksi erillistä lineaaris-20 ta peptidiä liittyy yhteen syklisointivaiheen aikana joko "head to head"- tai "head to tail" -tavalla. "B"-ryhmän kautta tapahtuvan halutun sisäisen syklisoinnin suorittamisen aikana joku lineaarinen lähtöainepeptidi liittyy mieluummin toiseen lineaariseen lähtöainepeptidiin kuin 25 itseensä. Saatu tuote on "dimeeri" siinä mielessä, että se on muodostunut kahdesta lineaarisesti lähtöpeptidistä, mutta se ei ole dimeeri siinä mielessä, että dimeerin mo-lekyylikaava on täsmälleen kaksi kertaa monomeerin molekyyli kaava. Tämän keksinnön peptidijohdannaisten dimee-30 rillä on rakennekaava: 7 89064 CO-A7 — As-NR,·
L~o L~J
X-Ai-AfArArAs — N(Ri)-C-R R’-C-CO - Ai0-A1VY
I I
c Alki Alk2
I I
B B
I I
Alk2 Alk i
Y-An-Aio —CO-C-R' ° ic-N(Ri)-A5-A4-Ai-A2-Ar-X
10 | |
NRi' — Ag — A7 — CO
"Head to tail"-dimeeri CO — A7 — a8-NRl·
L-. L-J
X-A1-A2-AJ-A4-A5 — N(Ri)-C-R R'*C-CO — Αιο-Αιι·Υ
I I
Alki Alk2
I I
B B
20 I I
Alki Alk 2 * O I -—χ)
X-At-A2-A3-A4rAs -N(Ri)-C-R R'-C*CO — Aio-An-Y
I I
CO-A7 — Ag-NRl' 25 "Head to head"-dimeeri jossa substituentlt ovat samoja kuin edellä on määritelty rakenteelle 1. Koko tämän selityksen ajan viittaus pepti-dljohdannaislln sisältää dimeerlt ja seokset ellei lause-30 yhteys edellytä toisin. Vaikka syklisointivaiheesta saatavat monomeerin ja dimeerln seokset voidaan erottaa helposti alan asiantuntijoille tunnetuin keinoin, tämän keksinnön mukaisissa veritulppia ehkäisevissä koostumuksissa voidaan käyttää seoksia niitä erottamatta.
35 Kaavan 1 mukaiset polypeptidit voivat muodostaa a 89064 farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja minkä tahansa myrkyttömän, orgaanisen tai epäorgaanisen hapon kanssa. Valaisevia esimerkkejä epäorgaanisista hapoista, jotka muo dostavat sopivia suoloja, ovat vetykloridi-, vetybromidi-, 5 rikki- ja fosforihappo ja happamat metallisuolat, kuten esimerkiksi natriummonovetyortofosfaatti ja kaliumvety-sulfaatti. Sopivia suoloja muodostaviin orgaanisiin happoihin kuuluvat esimerkiksi mono-, di- ja trikarboksyyli-hapot. Valaisevia esimerkkejä tällaisista hapoista ovat 10 etikka-, hydroksietikka-, maito-, palorypäle-, maloni-, meripihka-, glutaari-, fumaari-, omena-, viini-, sitruuna-, askorbiini-, maleiini-, hydroksimaleiini-, bentsoe-, hydroksibentsoe-, fenyylietikkakaneli-, salisyyli-, 2-fe-noksibentsoe- ja sulfonihapot, kuten esimerkiksi metaani-15 sulfonihappo ja 2-hydroksietaanisulfonihappo. Aminohappo- osan terminaalinen karboksiryhmän suoloihin kuuluvat myrkyttömät karboksyylihapposuolat, jotka ovat muodostuneet minkä tahansa sopivan epäorgaanisen tai orgaanisen emäksen kanssa. Näihin suoloihin kuuluvat kuvaavasti alkali-20 metallien, esimerkiksi natriumin ja kaliumin suolat; maa-alkalimetailien, kuten kalsiumin ja magnesiumin suolat; ryhmän IIIA kevytmetallien suolat aluminium mukaan lukien; ja orgaanisten primaaristen, sekundaaristen ja ter-tiääristen amiinien suolat, esimerkiksi trialkyyliamii-25 nien suolat, trietyyliamiinin, prokaiinin, dibentsyyli- amiinin, 1-etenamiinin, N,N*-dibentsyylietyleenidiamii-nin, dihydroabietyyliamiinin, N-(alempi)alkyylipiperidii-nin ja minkä tahansa muun sopivan amiinin suolat mukaan lukien.
30 Kuten kemiallisten yhdisteiden minkä tahansa ylei sen ryhmän kohdalla, tietyt ryhmät ovat edullisia. Hakijat pitävät edullisina niitä kaavan 1 mukaisia peptidi-johdannaisia, joissa X on vety, asetyyli tai sukkinyyli.
35 Edullisia ovat myös ne kaavan 1 mukaiset yhdis teet, joissa 9 89064 Αα on -Asp-, tai sidos.
A10, Leu;
Alk2 ja Alk2, kumpikin on metyleeniryhmä; Y, OH tai NH2; ja 5 B, -S-S-.
Erityisen edullisia ovat ne kaavan 1 mukaiset peptidi johdannaiset, joissa X on joko asetyyli ja Ax on Gly-Asp, tai X on sukkinyyli ja A2 on sidos, ja joissa A2, on Phe, tai Tyr; 10 R, R', Rt ja RJ, kunkin on vety;
Alki ja Alk2, kukin metyleeniryhmä; B, -S-S-; ja Y, OH.
Tämän keksinnön mukaiset peptidit voidaan valmis-15 taa eri menetelmillä, jotka alan asiantuntijat ilman muuta tuntevat. Tällaisiin menetelmiin kuuluvat kiinteän faasin jaksolliset ja "block" synteesit, geenikloonaus ja näiden tekniikkojen yhdistelmät. Kiinteän faasin jaksollinen menetelmä voidaan suorittaa vakiintuneita automati-20 soituja menetelmiä, kuten automatisoitua peptidin synte-tisointilaitetta käyttäen. Tässä menetelmässä a-aminosuo-jattu aminohappo sidotaan hartsikantajaan. Käytettävä hartsikantaja voi olla mitä tahansa sopivaa hartsia, jota käytetään tavanomaisesti alan piirissä polypeptidien 25 kiinteän faasin valmistamisessa, edullisesti se on poly- styreeniä, joka on ristiinsidottu 0,5:stä noin 3:een prosentilla divinyylibentseeniä, ja se on joko kloorimety-loitu tai hydroksimetyloitu, jotta on saatu kohtia, jotka muodostavat esterin alussa tuotetun α-aminosuojatun ami-30 nohapon kanssa.
Esimerkin hydroksimetyylihartsista esittävät Bodanszky et ai., Chem. Ind. (London) 38 (1966) 1597-98. Kloorimetyloitua hartsia on kaupallisesti saatavilla Bio Rad Laboratorie'ista, Richmond, Kalifornia, ja tällaisen ίο 89064 hartsin valmistamisen kuvaavat Stewart et al.f "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., San Francisco 1969), luku 1, s. 1-6. Suojatut aminohapot voidaan sitoa hartsiin Gisin'in, Helv. Chem. Acta, 56 (1973) 1476, menetelmällä.
5 Monia hartsiin sidottuja suojattuja aminohappoja on kaupallisesti saatavilla. Esimerkiksi tämän keksinnön mukaisen polypeptidin, jossa karboksiterminaalinen pää on Thr-täh-de, valmistamisessa voidaan käyttää tert-butyylioksikarbo-nyylillä (Boc) suojattua Thr:ä, joka on sidottu bentsyloi-10 tuun, hydroksimetyloituun fenyyliasetamidometyyli (PAM)-hartsiin, ja sitä on kaupallisesti saatavilla.
(X-aminosuojatun aminohapon hartsiin kytkemisen jälkeen suojaryhmä poistetaan mitä tahansa sopivaa menetelmää käyttäen, esimerkiksi käyttämällä trifluorietikka-15 happoa metyleenikloridissa, trifluorietikkahappoa yksinään tai HCl:a dioksaanissa. Suojaus poistetaan lämpötilassa, joka on 0 °C:een ja huoneen lämmön välillä. Erityisten 0L-aminon suojaryhmien poistamiseen voidaan käyttää muita lohkaisevia perusreagenssejä ja olosuhteita, ct-aminon 20 suojaryhmän poistamisen jälkeen muut aminosuojatut aminohapot kytketään asteittain halutussa järjestyksessä. Vaihtoehtoisesti monet aminohapporyhmät voidaan kytkeä liuosmene-telmällä ennen kytkemistä hartsiin,joka pitää yllä aminohappojärjestyksen.
25 (t-aminon suojaryhmä, jota käytetään jokaisessa polypeptidijonoon tuodussa aminohapossa, voi olla mikä tahansa tällainen alan piirissä tunnettu suojaryhmä. Mahdollisena pidettäviä suojaryhmiä Ot-aminon suojaryhmäluo-kista ovat (1) asyylityyppiset suojaryhmät kuten esimer-30 kiksi: formyyli, trifluoriasetyyli, ftalyyli, tolueeni-sulfonyyli (tosyyli), bentseenisulfonyyli, nitrofenyyli-sulfenyyli, trityylisulfenyyli, o-nitrofenoksiasetyyli ja -klooributyryyli; (2) aromaattiset uretaanityyppiset suojaryhmät, kuten esimerkiksi bentsyylioksikarbonyyli ja 35 substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, kuten p-klooribent-syylioksikarbonyyli, p-nitrobentsyylikarbonyyli, p-bromi- 11 89064 bentsyylioksikarbonyyli, p-metoksibentsyylioksikarbonyyli, 1-(p-bifenylyyli)-1-metyylietoksikarbonyyli, 06,#-dimetyyli- 3,5-dimetoksibentsyylioksikarbonyyli ja bentshydryylioksi-karbonyyli; (3) alifaattiset uretaanisuojaryhmät, kuten esi-5 merkiksi tert-butyylioksikarbonyyli (Boc), di-isopropyyli-metoksikarbonyyli, isopropyylioksikarbonyyli, etoksikarbo-nyyli ja allyylioksikarbonyyli; (4) sykloalkyyliuretaani-tyyppiset suojaryhmät, kuten esimerkiksi syklopentyylioksi-karbonyyli, adamantyylioksikarbonyyli ja sykloheksyylioksi-10 karbonyyli; (5) tiouretaanityyppiset suojaryhmät, kuten esimerkiksi fenyylitiokarbonyyli; (6) alkyylityyppiset suojaryhmät, kuten esimerkiksi trifenyylimetyyli (trityyli) bentsyyli; ja (7) trialkyylisilaaniryhmät kuten esimerkiksi trimetyylisilaani. Edullinen (X-aminon suojaryhmä on tert-15 butyylioksikarbonyyli.
Sopivan kytkentäreagenssin valitseminen on alan asiantuntemuksen piirissä. Erityisen sopiva kytkentärea-genssi silloin, kun lisättävä aminohappo on Gin, Asn tai Arg, on N,N'-di-isopropyylikarbodi-imidi ja 1-hydroksi-20 bentsotiratsoli. Näiden reagenssien käytöllä estetään nit-riilin ja laktaamin muodostuminen. Muita kytkentäreagens-seja ovat (1) karbodi-imidit (esim. N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidi ja N-etyyli-N'-(Y-dimetyyliaminopropyyli-karbodi-imidi); (2) syanamidit (esim. N,N-dibentsyylisyan-25 amidi); (3) ketenimiinit; (4) isoksatsoliumsuolat (esim.
N-etyyli-5-fenyyli-isoksatsolium-3'-sulfonaatti), (5) aro- maattisluontoiset monosykliset typpeä sisältävät hetero-sykliset amidit, joiden renkaassa on yhdestä neljään typ-piatomia, kuten esimerkiksi imidatsolidit, pyratsolidit .. . 30 ja 1,2,4-triatsolidit. Erityisiin käyttökelpoisiin hetero- syklisiin amideihin kuuluvat Ν,Ν'-karbonyylidi-imidatsoli ja N,N-karbonyylidi-l,2,4-triatsoli; (6) alkoksiloitu asetyleeni (esim. etoksiasetyleeni)? (7) reagenssit, jotka muodostavat seka-anhydridinaminohapon karboksyyliosan 35 kanssa (esim. etyyliklooriformaatti ja isobutyylikloori-— formaatti) tai kytkettävän aminohapon symmetrinen anhyd- 12 89064 ridi (esim. Boc-Ala-O-Ala-Boc) ja (8) typpeä sisältävät heterosykliset yhdisteet, joissa on hydroksiryhmä yhdessä rengastypessä (esim. N-hydroksi-ftaali-imidi, N-hydroksi-sukkinimidi ja 1-hydroksibentsotriatsoli). Kapoor, J. Pharm. 5 Sei., 59 (1970) s. 1 - 27, esittää muita aktivointireagens-sejä ja niiden käyttöä peptidikytkennässä. Hakijoista kyt-kentäreagenssina on edullista käyttää symmetristä anhydri-diä kaikkiin muihin aminohappoihin paitsi Arg:iin, Asnriin ja Glnsiin.
10 Jokaista suojattua aminohappoa tai aminohappojonoa pannaan kiinteän faasin reaktoriin noin nelinkertainen ylimäärä, ja kytkentä suoritetaan väliaineessa, jossa on dime-tyyliformamidia ja metyleenikloridia (1:1) tai pelkästään tai edullisesti pelkästään metyleenikloridia. Tapauksissa, 15 joissa kytkeytyminen on epätäydellistä, kytkentämenettely toistetaan ennen Oi-aminon suojaryhmän poistamista, ennen seuraavan aminohapon kytkemistä kiinteän faasin reaktorissa. Kytkeytymisreaktion onnistumista tarkkaillaan synteesin jokaisessa vaiheessa ninhydriinireaktiolla kuten E. Kaiser 20 et. ai., Analyt. Biochem. 34 (1970) 595, ovat esittäneet.
Sen jälkeen kun haluttu aminohappojärjestys on saatu, peptidi poistetaan hartsista. Se voidaan suorittaa hdyrolyysillä, kuten esimerkiksi käsittelemällä hartsia, johon polypeptidi on sidottu, liuoksella, jossa on dime-25 tyylisulfidia, p-kresolia ja tiokresolia laimeassa vety-fluoridihapon vesiliuoksessa.
Niin kuin kiinteän faasin peptidisynteesin alalla tiedetään, monissa aminohapoissa on funktionaalisia ryhmiä, jotka täytyy suojata ketjun valmistuksen aikana. So-30 pivan suojaryhmän käyttäminen ja valitseminen kuuluu alan asiantuntijoiden taidon piiriin ja riippuu suojattavasta aminohaposta ja peptidissä olevista muista suojatuista aminohappotähteistä. Tällaisen sivuketjua suojaavan ryhmän valitseminen on tärkeää siksi, koska ryhmän täytyy 35 olla sellainen, että se ei poistu lohkaisemalla 0(-amino-osan suojaryhmän lohkaisun aikana. Lysiinin sivuketjun 13 89064 sopivia suojaryhmiä ovat esimerkiksi bentsyylioksikarbonyy-li ja substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, mainittu subs-tituentti valitaan halogeenista (esim. kloori, bromi, fluori) ja nitrosta (esim. 2-klooribentsyylioksikarbonyyli, p-5 nitrobentsyylioksikarbonyyli, 3,4-diklooribentsyylioksikar-bonyyli), tosyyli, 5-amyylioksikarbonyyli, t-butyylioksi-karbonyyli ja di-isopropyylimetoksikarbonyyli. Treoniinin ja seriinin alkoholinen hydroksyyliryhmä voidaan suojata asetyyli-, bentsoyyli-, tertbutyyli-, trityyli-, bentsyy-10 li-, 2,6-diklooribentsyyli- tai bentsyylioksikarbonyyli-ryhmällä. Bensyyli on edullinen suojaryhmä.
Nämä ryhmät voidaan poistaa alan piirissä tunnetuin menetelmin. Suojaryhmä poistetaan tyypillisesti sen jälkeen, kun peptidiketjun synteesi on valmis, mutta suoja-15 ryhmät voidaan poistaa minä muuna sopivana ajankohtana tahansa.
Syklisoidut peptidit valmistetaan tavallisesti sopivasta lineaarisesta johdannaisesta joko ennen lineaarisen peptidin poistamista kiinteästä kantajasta tai sen 20 jälkeen. Rakenteen 1 mukaiset yhdisteet, joissa B on -S-S--ryhmä, valmistetaan vastaavista vapaan sulfhydryylin sisältävistä lineaarisista peptideistä tunnetuilla hapettavilla kytkentämenetelmillä, esimerkiksi hapettamalla lineaarinen peptidi kaliumferrisyanidilla, kuvattu esimer-25 kiksi teoksessa Stewart et ai., "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., San Francisco 1969) luku 1, s. 95. Rakenteen 1 mukaiset yhdisteet, joissa B on ·, . -S-Alk^-S -ryhmä ja Alk^ on (C1_g)-etyleeniryhmä, voidaan valmistaa vapaan sulfhydryylin sisältävistä lineaarisista 30 peptideistä antamalla niiden reagoida sopivan avoketjui-sen tai syklisen, tyydyttyneen tai tyydyttymättömän al-kyylin 1,2-dibromijohdannaisen kanssa vastaavalla tavalla kuin H.I. Mosberg ja J.R. Omnaas, J. Amer. Chem. Soc. 107 . (1985) 2986 - 2987, ovat esittäneet. Rakenteen 1 mukaiset 35 yhdisteet, joissa B on -S-Alk^-S- -ryhmä ja Alk^ on (Cj_g)-metyleeniryhmä, valmistetaan antamalla vapaan sulfhydryylin 14 89064 sisältävän lineaarisen peptidin reagoida sopivan avoketjui-sen tai syklisen, tyydyttyneen tai tyydyttymättömän alkyy-liketonin tai -aldehydin kanssa vastaavalla tavalla kuin julkaisussa J. Amer. Chem. Soc. 76 (1954) 1945 on esitet-5 ty. Niiden rakenteen 1 mukaisten yhdisteiden, joissa B on -S- -ryhmä, valmistaminen voidaan toteuttaa tavalla, joka on esitetty julkaisussa K. Jost, Collect. Czech. Chem. Commun. 36 (1971) 218 ja US-patentissa nro 4 161 521.
Tämän keksinnön peptidijohdannaisen hyytymistä estä-10 vä annos on päivässä 0,2 mg:sta 250 mg:aan potilaan kehon-painokiloa kohti riippuen potilaasta, veritulppaan liittyvän hoidettavan tilan vaikeudesta ja valitusta peptidijoh-dannaisesta. Tietylle potilaalle sopiva annos voidaan määrittää helposti. Päivittäiset annokset, joita on edullises-15 ti l:stä 4:ään, annetaan annoksina, joissa on tyypillisesti 5 mg:sta 100 mg:aan vaikuttavaa yhdistettä.
Veren hyytymistä estävä hoito on aiheellista erilaisten veritulppaan liittyvien tilojen, erityisesti sepelvaltimon ja aivoverisuonten sairauksien hoidossa ja ennal-20 taehkäisyssä. Alan asiantuntijat ovat ilman muuta selvillä niistä olosuhteista, jolloin hyytymistä estävä hoito on tarpeen. Tässä käytetyn termin "potilas" katsotaan tarkoittavan nisäkkäitä, kuten esimerkiksi kädellisiä, ihmiset, lampaat, hevoset, nautakarjat, siat, koirat, kissat, 25 rotat ja hiiret mukaan lukien.
Vaikka jotkut peptidijohdannaisista saattavat säilyä kuljettuaan suoliston läpi oraalisen antamisen jälkeen, hakijat pitävät muuta kuin oraalista antamista edullisena, esimerkiksi subkutaanista, intravenoosia, intramusku-30 laarista tai intraperitoneaalista antamista; pitkävaikutteisena ruiskeena antamista; implantoitavana valmisteena antamista; tai limakalvoille asettamista, kuten esimerkiksi nenän, kurkun ja keuhkoputkien limakalvoille, esimerkiksi aerosolina, joka voi sisältää tämän keksinnön pep-35 tidijohdannaista suihkeen tai kuivan jauheen muodossa.
is 89064
Parenteraalisessa antamisessa yhdisteet voidaan antaa ruiskutettavina annoksina, joissa yhdiste on liuoksena tai suspensiona fysiologisesti hyväksyttävässä laimentimes-sa farmaseuttisen kantaja-aineen kanssa, joka voi olla ste-5 riili neste, kuten vesi ja öljyt, yhdessä lisätyn pinta-ak-tiivisen aineen ja muiden farmaseuttisesti hyväksyttävien apuaineiden kanssa tai ilman niitä. Valaisevia esimerkkejä öljyistä, joita voidaan käyttää näissä valmisteissa ovat maaöljy, eläinöljyt, kasvisöljyt tai synteettistä alkupe-10 rää olevat öljyt, esimerkiksi maapähkinäöljy, soijapapuöl-jy ja mineraaliöljy. Yleensä vesi, suolaliuos, glukoosin vesiliuos ja vastaavanlaiset sokeriliuokset, etanoli ja glykolit kuten propyleeniglykoli tai polyetyleeniglykoli ovat edullisia nestemäisiä kantaja-aineita, erityisesti injek-15 tioliuoksiin.
Yhdisteet voidaan antaa pitkävaikutteisena ruiskeena tai implantoitavana valmisteena, joka voidaan formuloida niin, että vaikuttava aineosa vapautuu siitä pitkitetystä. Vaikuttava aineosa voidaan puristaa pillereiksi tai 20 pieniksi sylintereiksi ja implantoida ihon alle tai lihakseen pitkävaikutteisena ruiskeena tai implantaattina. Im-plantaateissa voidaan käyttää tehottomia aineita, kuten esimerkiksi biologisesti hajoavia polymeerejä tai synteet-tisiä silikoneja, esimerkiksi Silastic-silikonikumia, jota : 25 valmistaa Dow-Corning Corporation.
Esimerkit : : : Tätä keksintöä havainnollistetaan seuraavilla esi- :Y: merkeillä, jotka eivät ole rajoittavia.
Esimerkki 1 - i-1 30 H-Gly-Asp-Phe-Glu-Ile-DCys-Glu-Glu-Cys-Leu-Gln-OH: n valmistaminen_ * Peptidi syntetisoitiin kiinteän faasin menetelmil- lä käyttäen 0,66 mmol/g Boc-Gln-PAM -hartsia 0,1 mmol. Kaksinkertaiset kytkennät symmetrisellä anhydridillä suo-35 ritettiin 2,0 mmol:11a Na-Boc-aminohappoa (Peptides In-; ternational) paitsi Boc-Gln:n tapauksessa, jolloin kyt- 16 89064 kettiin DCC/HOBT -menetelmällä. Käytetty sivuketjun suojaus oli: Asp(Chx), Cys(pMeBzl), Glu(Bzl). Kun synteesi oli valmis, Na-Boc-suojaus poistettiin 50 %:isella trifluorietikka-hapolla metyleenikloridissa. Hartsia pestiin kolme kertaa metyleenikloridilla, neutraloitiin pesemällä kolme kertaa 10 %: isella di-isopropyyliedtyyliamiinilla metyleenikloridissa, pestiin kolme kertaa metyleenikloridilla, asetyloitiin N-asetyyli-imidatoslilla metyleenikloridissa, pestiin kolme kertaa metyleenikloridilla ja kuivattiin vakuumissa. Pep-10 tidin suojaus poistettiin ja se lohkaistiin hartsista vedellä, ja pH säädettiin 8,5:ksi aromoniumhydroksidilla. Liuokseen lisättiin kaliumferrisyanidia (0,01 N) kunnes keltainen väri pysyi. Liuosta sekoitettiin 30 minuuttia, sitten pH säädettiin etikkahapolla 4:n ja 5:n välille.
15 Sitten seosta sekoitettiin 2 tuntia Bio-Rad AG3-X4A-ionin-vaihtohartsin kanssa. Seos suodatettiin ja suodos kylmä-kuivattiin.
Peptidi puhdistettiin suolanpoistolla 92 x 2,6 cm:n
Sephadex G-15 -kolonnissa 5 % vesipitoisessa etikkahapossa 18
20 ja kylmäkuivattiin. Preparatiivinen HPLC suoritettiin C
Vydac 218TP1010 (250 x 10 mm) -kolonnilla käyttäen ajones-teenä asetonitriiliä 0,1 %:ssa vesipitoisessa trifluori-etikkahapossa ja virtausnopeutta 5 ml/min. Pääpiikki kerättiin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin haluttua tuotet-25 ta. Tasa-aineisuus määritettiin HPLC:llä ja TLC:llä. HPLC Vydac 218TP54 (250 x 4,6 mm) C*8 -kolonni, 2 ml/ml, t = 1,8 min: eluoitumisaika 25 - 50 %:isen asetonitriilin 0,1 %:ssa trifluorietikkahapossa lineaarisella gradientilla 1%/min (HPLC) on 5,5 min. FAB-MS: (M + H) - 1 411,7 + 1 mp 30 (laskettu 1 410). Aminohappoanalyysi: (6 N HCl-hydrolyy-si; 24 tuntia 106 °C:ssa), katso taulukko 1, peptidipi-toisuus 57 paino-%.
Taulukko 1 ESIMERKKI AMINOHAPPOANALYYSI (6 N HC1-HYDR0LYYSI; 24 TUNTIA 106 °CiSsa)_
Nn0 H is Asx Ser Gtx Pro Ala Gly Ile* Leo Tyr Phe 1 I - 1.00(1) I - [5.05(5)1 - 0.95(1) 0.60(1) 1.00(1) - 1 02(1) * Muuttumista allo-Ile:ksi hydrolyysin aikana ei määritetty kvantitatiivisesti.
Claims (6)
17 89064
1. Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen hi-rudiinijohdannaisen tai sen farmaseuttisesti käyttökel-5 poisen suolan valmistamiseksi, jolla on kaava CO-A7 — As-NR,' U—‘0 L^-χΙ X-Af-Aj-Aj-As-Aj — N(R,)-C-R R'-C-CO — Aio-An-Y ^
10. I Aik, _B_Alk2 jossa X on aminoterminaalinen tähde, joka valitaan vedystä, l:stä 6:een hiiliatomia sisältävästä, yhdestä tai 15 kahdesta alkyyliryhmästä, 2:sta 10:een hiiliatomia sisältävästä, yhdestä tai kahdesta asyyliryhmästä, karbobent-syylioksista tai t-butyylioksikarbonyylistä; Ax on Gly-Asp tai sidos; A2 on Phe tai Tyr;
20 A3 on Glu; A4 on Glu; A5 on Ile; A7 on Glu; Aa on Glu; : : 25 A10 on Leu tai Cha; Au on Gin; Y on karboksiterminaalinen tähde, joka valitaan 0H:sta, (Cj_6)-alkoksista, aminosta, mono- tai di-(0^)-.. . alkyylillä substituoidusta aminosta tai bentsyyliaminos- .; 30 ta; R, R', Rx ja R} valitaan jokainen vedystä tai (C^ 4)-alkyyliryhmästä; B on -S-S; ja Alkj ja Alk2 valitaan jokainen (C^g)-metyleeni-35 ryhmästä; 18 89064 ja jossa "D" ja "L" Ilmaisevat, että osoitetun hiilen stereokemia vastaa D-kysteiinin ja L-kysteiinin stereoke-miaa, tässä järjestyksessä, tunnettu siitä, että kaavan Ax mukainen sopivasti suojattu aminohappo sidotaan 5 aktivoituun hartsikantajaan, myöhemmin kaavojen A2-A11 mu kaiset muut alfa-aminosuojatut aminohapot sidotaan kasvavan peptidiketjun, josta on sillä välin poistettu sen aminon suojaryhmä, terminaaliseen aminoryhmään, ja lopuksi lineaarinen peptidi altistetaan hapettavalle kytken-10 nälle.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmistusmenetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan
15 H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-DCyS-Glu-Glu-Cys-Leu-Gln-OH 19 89064
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US5320487A | 1987-05-21 | 1987-05-21 | |
US5320487 | 1987-05-21 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI882359A0 FI882359A0 (fi) | 1988-05-19 |
FI882359A FI882359A (fi) | 1988-11-22 |
FI89064B FI89064B (fi) | 1993-04-30 |
FI89064C true FI89064C (fi) | 1993-08-10 |
Family
ID=21982612
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI882359A FI89064C (fi) | 1987-05-21 | 1988-05-19 | Foerfarande foer framstaellning av peptidderivat av hirudin som hindrar koagulationen i blod |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0291981B1 (fi) |
JP (1) | JP2598302B2 (fi) |
KR (1) | KR880013977A (fi) |
CN (1) | CN88103009A (fi) |
AT (1) | ATE88190T1 (fi) |
AU (1) | AU608846B2 (fi) |
CA (1) | CA1328540C (fi) |
DE (1) | DE3880194T2 (fi) |
DK (1) | DK278588A (fi) |
ES (1) | ES2054732T3 (fi) |
FI (1) | FI89064C (fi) |
HU (1) | HU198512B (fi) |
IL (1) | IL86439A (fi) |
NO (1) | NO882239L (fi) |
NZ (1) | NZ224677A (fi) |
PT (1) | PT87537B (fi) |
ZA (1) | ZA883444B (fi) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1328540C (en) * | 1987-05-21 | 1994-04-12 | John L. Krstenansky | Cyclic anticoagulant peptides |
US5192745A (en) * | 1987-05-21 | 1993-03-09 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Cyclic anticoagulant peptides |
US5236898A (en) * | 1987-05-21 | 1993-08-17 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Cyclic anticoagulant peptides |
NZ228995A (en) * | 1988-05-10 | 1992-03-26 | Merrell Dow Pharma | Hirudin peptide derivatives and pharmaceutical compositions |
US5196404B1 (en) * | 1989-08-18 | 1996-09-10 | Biogen Inc | Inhibitors of thrombin |
US5240913A (en) * | 1989-08-18 | 1993-08-31 | Biogen, Inc. | Inhibitors of thrombin |
US5192747A (en) * | 1989-10-03 | 1993-03-09 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
CA2026377A1 (en) * | 1989-10-03 | 1991-04-04 | John L. Krstenansky | Radiolabeled anticoagulant peptides |
CA2035917C (en) * | 1990-02-13 | 2001-10-02 | John L. Krstenansky | Stabilized sulfonate, sulfate, phosphonate and phosphate derivatives of hirudin |
US5242810A (en) * | 1990-12-07 | 1993-09-07 | Biogen, Inc. | Bifunctional inhibitors of thrombin and platelet activation |
DE4103649A1 (de) * | 1991-02-07 | 1992-08-13 | Basf Ag | Neue antikoagulatorisch wirksame peptide |
US5516889A (en) * | 1993-06-21 | 1996-05-14 | University Technologies International, Inc. | Synthetic thrombin receptor peptides |
DE102004037925A1 (de) | 2003-08-08 | 2005-02-24 | Westfalia Separator Ag | Separator mit einer Schleudertrommel mit einem Tellerpaket |
CN104054441A (zh) * | 2014-06-30 | 2014-09-24 | 泰州樱田农机制造有限公司 | 撒肥机排料调节装置 |
CN110981953B (zh) * | 2019-12-13 | 2021-10-08 | 首都医科大学 | 一种多肽和多肽的应用及包含多肽的组合物 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1328540C (en) * | 1987-05-21 | 1994-04-12 | John L. Krstenansky | Cyclic anticoagulant peptides |
-
1988
- 1988-05-16 CA CA000566915A patent/CA1328540C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-16 ZA ZA883444A patent/ZA883444B/xx unknown
- 1988-05-17 AU AU16343/88A patent/AU608846B2/en not_active Ceased
- 1988-05-18 NZ NZ224677A patent/NZ224677A/xx unknown
- 1988-05-19 DE DE8888108047T patent/DE3880194T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-19 FI FI882359A patent/FI89064C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-05-19 AT AT88108047T patent/ATE88190T1/de active
- 1988-05-19 KR KR1019880005871A patent/KR880013977A/ko not_active Application Discontinuation
- 1988-05-19 PT PT87537A patent/PT87537B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-05-19 EP EP88108047A patent/EP0291981B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-19 ES ES88108047T patent/ES2054732T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-19 IL IL86439A patent/IL86439A/xx unknown
- 1988-05-20 DK DK278588A patent/DK278588A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-05-20 NO NO882239A patent/NO882239L/no unknown
- 1988-05-20 JP JP63122189A patent/JP2598302B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-20 HU HU882615A patent/HU198512B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-05-21 CN CN198888103009A patent/CN88103009A/zh active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN88103009A (zh) | 1988-12-21 |
HUT47136A (en) | 1989-01-30 |
FI882359A0 (fi) | 1988-05-19 |
FI89064B (fi) | 1993-04-30 |
DK278588D0 (da) | 1988-05-20 |
EP0291981B1 (en) | 1993-04-14 |
ZA883444B (fi) | 1988-11-16 |
DK278588A (da) | 1988-11-22 |
KR880013977A (ko) | 1988-12-22 |
JP2598302B2 (ja) | 1997-04-09 |
ATE88190T1 (de) | 1993-04-15 |
HU198512B (en) | 1989-10-30 |
EP0291981A2 (en) | 1988-11-23 |
PT87537B (pt) | 1992-09-30 |
IL86439A0 (en) | 1988-11-15 |
AU1634388A (en) | 1988-11-24 |
AU608846B2 (en) | 1991-04-18 |
EP0291981A3 (en) | 1990-07-04 |
IL86439A (en) | 1992-11-15 |
DE3880194D1 (de) | 1993-05-19 |
NO882239L (no) | 1988-11-22 |
JPS63307895A (ja) | 1988-12-15 |
CA1328540C (en) | 1994-04-12 |
FI882359A (fi) | 1988-11-22 |
ES2054732T3 (es) | 1994-08-16 |
DE3880194T2 (de) | 1993-08-26 |
PT87537A (pt) | 1989-05-31 |
NZ224677A (en) | 1990-08-28 |
NO882239D0 (no) | 1988-05-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK173757B1 (da) | Blodkoaguleringsnedsættende peptidderivater | |
FI89064C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av peptidderivat av hirudin som hindrar koagulationen i blod | |
FI89063B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av peptidderivat av hirudin som hindrar koagulationen i blod | |
US5541161A (en) | Stabilized sulfonate, sulfate, phosphonate and phosphate derivatives of hirudin | |
JPH03120297A (ja) | 抗凝固ペプチド | |
AU630132B2 (en) | Anticoagulant peptides | |
NZ228995A (en) | Hirudin peptide derivatives and pharmaceutical compositions | |
JP3111075B2 (ja) | 抗凝固ペプチド | |
KR100200463B1 (ko) | 항혈소판 작용을 갖는 히루딘 동족체 | |
US5236898A (en) | Cyclic anticoagulant peptides | |
US5192745A (en) | Cyclic anticoagulant peptides | |
US5789540A (en) | Anticoagulant peptides | |
US6005071A (en) | Anticoagulant peptides | |
US5574012A (en) | Analogs of hirudin having anti-platelet activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
BB | Publication of examined application | ||
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: MERRELL DOW PHARMACEUTICALS INC. |