CN1238689A - 玻连蛋白受体拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

公开了具有苯并二氮杂核心结构的化合物，它为玻连蛋白受体抑制剂，用于治疗骨质疏松、血管生成、肿瘤生长及转移、动脉粥样硬化、再狭窄及炎症。

Description

玻连蛋白受体拮抗剂
本发明领域
本发明涉及抑制玻连蛋白受体的药用活性化合物，该化合物用于治疗炎症、癌及心血管疾病如动脉粥样硬化和再狭窄，及以骨吸收为诱因的疾病，例如骨质疏松。
本发明背景
整联蛋白为细胞粘附受体的超家族，其为表达在各种细胞上的跨膜糖蛋白。这些细胞表面粘附受体包括gpⅡb/Ⅲa(纤维蛋白原受体)和αvβ3(玻连蛋白受体)。纤维蛋白原受体gpⅡb/Ⅲa在血小板表面表达，介导血小板的聚集并在出血伤口处形成止血凝块(philips等，Blood.,1988,71,831)。玻连蛋白受体αvβ3在多种细胞表达，包括内皮细胞、平滑肌细胞、破骨细胞和肿瘤细胞，因而它具有多种功能。在破骨细胞膜上表达的αvβ3受体介导破骨细胞对骨基质的粘附(骨吸收过程的关键步骤)(Ross等，J.Biol.Chem.,1987,262,7703)。骨质疏松是一种以骨的过度吸收为特征的疾病。在人主动脉平滑肌细胞上表达的αvβ3受体介导其移行进入新血管内膜(一种经皮冠状动脉血管成形术引起的再狭窄的过程)(Brown等，Cardiovascular Res.,1994,28,1825)。另外，Brooks等(Cell,1994,79,1157)已表明αvβ3拮抗剂可通过引起血管生成的血管的细胞程序死亡(apoptosis)而促使肿瘤消退。因而，阻断玻连蛋白受体的药物将用于治疗诸如骨质疏松、再狭窄和癌症等疾病。
目前已知玻连蛋白受体涉及三种不同的整联蛋白，称为αvβ1、αvβ3和αvβ5(Horton等，Int.J.Exp.Pathol.,1990,71,741)。αvβ1连接纤维结合素和玻连蛋白。αvβ3连接各种配体，包括纤维蛋白、纤维蛋白原、层粘连蛋白、血小板反应蛋白、玻连蛋白、von Willebrand氏因子、骨桥蛋白和骨涎液蛋白。αvβ5结合玻连蛋白。已表明玻连蛋白受体αvβ5受体参与各种类型细胞的细胞粘附，这类细胞包括微血管内皮细胞(Davis等，J.Cell.Biol.,1993,51,206)，它在血管生成方面的作用已被证实(Brooks等.，Science,1994,264,569)。这种整联蛋白在人伤口肉芽组织的血管上表达，但不在正常皮肤中表达。
已知所述玻连蛋白受体结合到含有三-肽Arg-Gly-Asp(或RGD)基序的骨基质蛋白中。Horton等(Exp.Cell Res.1991,195,368)公开了含RGD的肽和抗-玻连蛋白受体抗体(23C6)抑制牙质的吸收和破骨细胞所致的细胞扩散。另外，Sato等(J.Cell Biol.1990,111,1713)公开了锯鳞血抑肽(一种含有所述RGD序列的蛇毒肽)在组织培养中为骨吸收的有效抑制剂，并抑制破骨细胞对骨的吸附。
目前已经发现，某些化合物为αvβ3和αvβ5受体的有效抑制剂。尤其是，已经发现此类化合物是玻连蛋白受体(超过纤维蛋白原受体)的更有效的抑制剂。
本发明概述
本发明包括下面将要叙述的式(Ⅰ)化合物，所述化合物具有抑制玻连蛋白受体的药理学活性，因而用于治疗炎症、癌及心血管疾病如动脉粥样硬化和再狭窄，及以骨的吸收为诱因的疾病，例如骨质疏松。
本发明也是包含根据式(Ⅰ)化合物和药用载体的药用组合物。
本发明也是治疗由玻连蛋白受体介导的疾病的方法。尤其是，本发明化合物用于治疗动脉粥样硬化、再狭窄，炎症、癌及骨的吸收为诱因的疾病，例如骨质疏松。
本发明叙述
本发明包括为玻连蛋白受体超过纤维蛋白原受体的更有效抑制剂的新化合物。所述新化合物包含苯并氮杂_核心，其中含氮取代基存在于苯并氮杂_的芳族六元环上和含酸性部分的脂族取代基存在于苯并氮杂_的七元环上。据认为苯并氮杂_环体系与玻连蛋白有利地相互作用且定位于所述六元环和七元环的取代基侧链上，以使它们也能与所述受体有利地相互作用。优选在苯并氮杂_的七元环的脂族取代基上的酸性基团和苯并氮杂_的芳族六元环上的含氮取代基上的氮之间存在通过最短的分子内途径的大约12-14个插入的共价键。
本发明包含式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的盐：其中：R1为R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4链烯基、A-C2-4链炔基、A-C3-4氧代链烯基、A-C3-4氧代链炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基链烯基、A-C3-4氨基链炔基，任选由一个或多个R10或R7的任何可能的组合取代；A是H、C3-6环烷基、Het或Ar；R7为-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每个R8独立为-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9为-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10为H、卤代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6链烯基、A-C2-6链炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11为R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2为
Figure A9718016800202
Figure A9718016800211
W为-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或为CO、CRg 2、C(=CRg 2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg 2、CRg 2CRg(ORk)、C(O)CRg 2、CRg 2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg 2、CRg 2NRg、CRg 2O、OCRg 2、C≡C或CRg=CRg；G为NRe、S或O；Rg为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk为Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3个选自下列的基团取代的C1-6烷基：卤素、CN、NRg 2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc独立选自H、C1-6烷基、ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CON(Rf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc结合共同形成5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，任选由多达3个选自下列的取代基取代：卤素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亚甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4独立为N或C-Ry，前提为Q1、Q2、Q3和Q4中不超过一个为N；R’为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6环烷基-C0-6烷基；R”为R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2(NRf)2；Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2，或由下列基团任选取代的C1-6烷基：卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
本发明化合物的药学上可接受的加成盐和配合物也包括在本发明的范围内。在本发明化合物可以具有一个或多个手性中心的情况下，除非特别指明，本发明包括各种可用常规技术合成和拆分的独特的非外消旋化合物。在其中化合物具有不饱和碳-碳双键的情况下，顺式(Z)和反式(E)两种异构体均在本发明的范围内。在化合物可以以互变形式如酮-烯醇互变体，例如和
Figure A9718016800232
存在的情况下，每种互变形式，无论是以平衡态或是通过R1适当的取代来锁定的形式，都应认为包括在本发明范围内。
式(Ⅰ)化合物抑制玻连蛋白和其它含有RGD的肽与玻连蛋白受体的结合。抑制破骨细胞上的玻连蛋白受体可抑制破骨细胞的骨的吸收，并可用于治疗其中骨的吸收与病理学有关的疾病，如骨质疏松和骨关节炎。
另一方面，本发明为一种刺激骨形成的方法，它包括给予引起骨钙蛋白释放增加的化合物。增加骨质的产生对于其中矿物质化的骨质缺乏或需要骨质改造的疾病状态，如骨折愈合及预防骨折是明显有益的。产生骨(结构)质丢失的疾病和代谢失调也可由此种治疗中获益，例如，甲状旁腺功能亢进、paget氏病、恶性高钙血症、骨转移产生的溶骨性损害、因固定术或性激素缺乏引起的骨丢失、Behcet’s病、骨软化症、骨肥大和大理石样骨病都能从给予本发明化合物而获得益处。
另外，由于本发明化合物抑制许多不同类型细胞的玻连蛋白受体，所述化合物将用于治疗炎性疾病如类风湿性关节炎和牛皮癣，以及心血管疾病如动脉粥样硬化和再狭窄。本发明的式(Ⅰ)化合物可以用于治疗或预防其它疾病，包括(但不限于)血栓栓塞性疾病、哮喘、过敏、成人呼吸窘迫症、移植对宿主反应、器官移植排斥反应、脓毒性休克、湿疹、接触性皮炎、炎性肠道疾病和其它自身免疫性疾病。本发明化合物对伤口愈合也是有用的。
本发明化合物也用于治疗(包括预防)血管生成紊乱。本发明所用的术语血管生成紊乱包括异常的新血管生成。在新血管生长的原因为(或归因于)与疾病有关的病理时，抑制血管生成将减轻所述疾病的有害的作用。此类疾病目标的一个实例为糖尿病性视网膜病。在需要新血管生长以支持有害的组织生长时，抑制血管生成将减少该组织的血液供应并由此引起需要血液供应的组织团块的减小。实例包括肿瘤的生长，其中新血管生成是一种连续需要，以使肿瘤生长并实现实体瘤的转移。因而，本发明化合物抑制肿瘤组织的新血管生成，从而防止肿瘤的转移和肿瘤的生长。
因此，根据本发明的方法，使用本发明的化合物抑制血管生成可以改善所述疾病的症状，并在某些情况下可以治愈所述疾病。
本发明化合物的另一治疗目的是以新血管生成为特征的眼部疾病。此类眼部疾病包括角膜新血管生成疾病，如角膜移植、疱疹性角膜炎、梅毒角膜炎、与使用隐性眼睛有关的翼状胬肉和新血管角膜翳。其它的眼疾还包括与老年有关的黄斑变形、假定的(presumed)眼荚膜组织胞浆菌病和新血管性青光眼。
本发明还提供抑制肿瘤生长的方法，其包括分阶段给予式(Ⅰ)化合物或将式(Ⅰ)化合物和抗肿瘤剂(如托泊替堪和顺铂)以物理组合的方式联合给予。
至于式(Ⅰ)化合物：R2适合为
Figure A9718016800241
，其中Q1、Q2和Q3各自为CRy,Q4为CRy或N,u是0，优选每个R’为H,R”为H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C0-6烷基-Ar或C(O)OC0-6烷基-Ar,W为-CH2-CH2-,Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg、-CONRg 2或C1-6烷基。或者R2为
Figure A9718016800251
，其中Q1、Q2和Q3各自为CH和u是0，优选每个R’为H,R”为H或C1-4烷基，W为-CH2-CH2-和v是0。或者R2为
Figure A9718016800252
，其中G为NH,Rb和Rc各自为H，优选W为NRg-(CHRg)b-。
或者R2为，其中G为NH,Rb和Rc结合共同形成5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，任选由多达3个选自下列的取代基取代：卤素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亚甲基二氧基。优选Rb和Rc结合共同形成6元芳族碳环或杂环，且W为-CH2-CH2-。
或者R2为
Figure A9718016800254
其中每个R’为H,R”为H或C1-4烷基，Rg为H或C1-4烷基及s为0、1或2，优选W为-CH2-CH2-。
至于式(Ⅰ)化合物：R1适合为H,C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-6环烷基-C0-6烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’。优选R1为H,C1-4烷基、Ph-C0-4烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’,其中R1为H或C1-4烷基。最优选R1为-CH2CF3-。
本发明的代表性的新化合物为下列化合物或其药学上可接受的盐：
(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并
氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4-氨基-2吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4-甲氧基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(2-咪唑基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并
氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-四氢嘧啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四
氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(6-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮
杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(4-氮杂-2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-
苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯
并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-
四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯
并氮杂_-4-乙酸；
(R)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-
四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧
基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-
3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧
基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四
氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-
(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4,6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4,5,6,7-四氢-1H-1,3-二氮杂_-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲
基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧
基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧
基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙
基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三
氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙
基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-8-[3-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-[4-(三
氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟
乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；和
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲
基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸。
本发明优选的化合物或其药学上可接受的盐包括：
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；和
(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸。
在本发明化合物可以具有一个或多个手性中心的情况下，除非特别指明，本发明包括可通过常规技术合成和拆分的各种单一的非外消旋化合物。根据本发明，优选(S)构象的式(Ⅰ)化合物。
在化合物具有不饱和碳-碳双键的情况下，顺式(Z)和反式(E)两种异构体均在本发明范围内。在任何一种情况下出现的任何取代基的意义不受它的意义的限制，或在任何其它情况下出现的任何取代基的意义不受其它取代基的意义的限制。
本发明化合物的药物前体也包括在本发明中。药物前体被认为是任何共价结合的载体，它在体内释放出活性的根据式(Ⅰ)的母体药物。因此，本发明的另一方面为新的药物前体，它也是制备式(Ⅰ)化合物，式(Ⅱ)化合物的中间体。所述式(Ⅱ)化合物或其药学上可接受的盐结构如下：
Figure A9718016800301
其中：R1为R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4链烯基、A-C2-4链炔基、A-C3-4氧代链烯基、A-C3-4氧代链炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基链烯基、A-C3-4氨基链炔基，任选由一个或多个R10或R7的任何可能的组合取代；A是H、C3-6环烷基、Het或Ar；R7为-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每个R8独立为-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9为-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10为H、卤代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6链烯基、A-C2-6链炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11为R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2为
Figure A9718016800302
W为-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或为CO、CRg 2、C(=CRg 2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg 2、CRg 2CRg(ORk)、C(O)CRg 2、CRg 2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg 2、CRg 2NRg、CRg 2O、OCRg 2、C≡C或CRg=CRg；G为NRe、S或O；Rg为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk为Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3个选自下列的基团取代的C1-6烷基：卤素、CN、NRg 2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc独立选自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3- 6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CON(Rf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc结合共同形成5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，任选由多达3个选自下列的取代基取代：卤素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亚甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4独立为N或C-Ry，前提为Q1、Q2、Q3和Q4中不超过一个为N；R’为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6环烷基-C0-6烷基；R”为R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2；Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2，或由下列基团任选取代的C1-6烷基：卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
本发明的代表性的新药物前体或其药学上可接受的盐如下：(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯；和(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯。
本发明的又一方面为新的式(Ⅲ)化合物的中间体或其药学上可接受的盐：
Figure A9718016800331
其中：R1为R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4链烯基、A-C2-4链炔基、A-C3-4氧代链烯基、A-C3-4氧代链炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基链烯基、A-C3-4氨基链炔基，任选由一个或多个R10或R7的任何可能的组合取代；A是H、C3-6环烷基、Het或Ar；R7为-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每个R8独立为-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9为-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10为H、卤代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6链烯基、A-C2-6链炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11为R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；W为-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或为CO、CRg 2、C(=CRg 2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg 2、CRg 2CRg(ORk)、C(O)CRg 2、CRg 2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg 2、CRg 2NRg、CRg 2O、OCRg 2、C≡C或CRg=CRg；Rg为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk为Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3个选自下列的基团取代的C1-6烷基：卤素、CN、NRg 2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Q1、Q2、Q3和Q4独立为N或C-Ry，前提为Q1、Q2、Q3和Q4中不超过一个为N；R’为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6环烷基-C0-6烷基；R”为R’、C(O)R’或-C(O)OR’；Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2，或由下列基团任选取代的C1-6烷基：卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2；a是0、1或2；b是0、1或2；m是1或2；和r是0、1或2。
肽和化学领域中使用的缩略语和符号在此用来描述本发明化合物。一般来说，氨基酸缩略语遵循IUPAC-IUB Joint Commission onBiachemical Nomenclature的命名原则，如在Eur.J.Biochem.,158,9(1984)中所述。
此处所用的C1-4烷基意指任选取代的1-4个碳原子的烷基，包括甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基和叔-丁基。C1-6烷基还包括戊基、正-戊基、异戊基、新戊基和己基及其简单的脂肪族异构体。C0-4烷基和C0-6还指不需要烷基存在(即存在共价键)。
任何C1-4烷基或C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基或C1-6氧代烷基可任选为基团Rx取代，该基团可以在任何形成稳定结构的碳原子上并可通过常规合成技术获得。对于Rx的合适基团为C1-4烷基、OR’、SR’、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基sulfoxyl、-CN、N(R’)2、CH2N(R’)2、-NO2、-CF3、-CO2R’-CON(R’)2、-COR’、-NR’C(O)R’、氟、氯、溴、碘或CF3S(O)r-，其中r是0、1或2。
卤素或卤代指氟、氯、溴和碘。
此处所用的Ar或芳基指苯基或萘基，或由1-3个取代基取代的苯基或萘基，所述取代基有，例如，如上对烷基定义的那些基团，尤其是C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、CF3、NH2、氟、氯、溴或碘。
Het或杂环指任选取代的5或6元单环，或含有1-3个选自氮、氧和硫杂原子的9或10元双环，它们是稳定的并可通过常规化学合成获得。示例性的杂环为苯并呋喃基、苯并咪唑、苯并吡喃、苯并噻吩、呋喃、咪唑、二氢吲哚、吗琳、哌啶、哌嗪、吡咯、吡咯烷、四氢吡啶、吡啶、噻唑、噻吩、喹啉、异喹啉、以及四氢-或五氢喹啉和异喹啉。Het环上多达3个取代基(如上对烷基定义的那些基团)的任何可能的组合可通过化学合成获得，且是稳定的，并都在本发明范围内。
C3-7环烷基指任选取代的3-7个碳原子的碳环体系，其可以含有多至两个不饱和的碳-碳双键。常见的C3-7环烷基为环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基和环庚基。环烷基环上多达3个取代基(如上对烷基定义的那些基团)的任何组合可通过化学合成获得，且是稳定的，并都在本发明范围内。
当Rb和Rc结合共同形成与Rb和Rc连接的环稠合的5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，所形成的环通常将为选自上面对Het定义的5或6元杂环，或为苯基环、环己基环或环戊基环。优选Rb和Rc为-D1=D2-D3=D4，其中D1-D4独立为CH、N或C-Rx，前提为D1-D4中不超过2个为氮。最优选当Rb和Rc结合在一起时，它们形成-CH=CH-CH=CH-。
某些基团在此用缩写表示。t-Bu指叔丁基，Boc指叔-丁氧基羰基，Fmoc指芴基甲氧基羰基，Ph指苯基，Cbz指苄氧基羰基，Bn指苄基，Me指甲基，Et指乙基，Ac指乙酰基，Alk指C1-4烷基、Nph指1-或2-萘基和cHex指环己基。Tet指5-四唑基。
某些试剂在此用缩写表示。DCC指二环己基碳二亚胺，DMAP指二甲基氨基吡啶。DIEA指二异丙基乙基胺，EDC指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。HOBt指1-羟基苯并三唑，THF指四氢呋喃，DIEA指二异丙基乙胺，DEAD指重氮二甲酸二乙酯，PPh3指三苯膦，DIAD指重氮二甲酸二异丙酯，DME指二甲氧基乙烷，DMF指二甲基甲酰胺，NBS指N-溴代琥珀酰亚胺，Pd/C指钯炭催化剂，PPA指多磷酸，DPPA指二苯基磷酰叠氮化物，BOP指苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸磷鎓，HF指氢氟酸，TEA指三乙胺，TFA指三氟乙酸，PCC指氯酸铬吡啶鎓。
一般通过使式(Ⅳ)化合物与具有任何被保护的活性功能基团的式(Ⅴ)化合物反应：其中R1和R2如式(Ⅰ)中所定义，且L1为OH或卤代，制备式(Ⅰ)化合物；然后除去任何保护基团，并任选形成药学上可接受的盐。
适当地，通过使式(Ⅳ)化合物与具有任何被保护的活性功能基团的式(Ⅵ)化合物反应：
Figure A9718016800362
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和Q4如式(Ⅰ)中所定义，制备式(Ⅰ)化合物；然后除去任何保护基团，并任选形成药学上可接受的盐。
对于式(Ⅵ)化合物而言，优选Q1、Q2、Q3和Q4为CH,W为-CH2-CH2-,R’为H,R”为H、C1-4烷基或-C(O)OC1-4烷基。式(Ⅳ)化合物与式(Ⅵ)化合物之间的反应适宜在重氮二甲酸二乙酯和三苯膦存在下，在非质子溶剂中进行。
或者，通过使式(Ⅳ)化合物与具有任何被保护的活性功能基团的式(Ⅶ)化合物反应：
Figure A9718016800371
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和v如式(Ⅰ)中所定义，制备式(Ⅰ)化合物；然后除去任何保护基团，并任选形成药学上可接受的盐。
对于式(Ⅶ)化合物而言，优选Q1、Q2和Q3为CH,W为-CH2-CH2-,v为0,R’为H,R”为H或C1-4烷基。式(Ⅳ)化合物与式(Ⅶ)化合物之间的反应适宜在重氮二甲酸二乙酯和三苯膦存在下，在非质子溶剂中进行。
通过流程Ⅰ-Ⅶ中所述的通法制备式(Ⅰ)化合物。
                          流程Ⅰ
Figure A9718016800372
Figure A9718016800381
a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD,(Ph)3P,DMF；b)环己烯，10％Pd/C,2-丙醇；c)1.0N氢氧化锂，THF，水，然后酸化。
使Ⅰ-1化合物(按照Bondinell等(WO93/00095)所述通用方法制备)与2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物进行Mitsunobu型偶合反应(Organic Reactions 1992,42,335-656；Synthesis 1981,1-28)以提供Ⅰ-2。该反应受在重氮二甲酸二乙酯和三苯膦之间形成的配合物的介导，并在非质子溶剂如THF、二氯甲烷或DMF中进行。在转移氢化条件下，在惰性溶剂如甲醇、乙醇或2-丙醇中，用钯炭催化剂(优选在活性炭上的钯金属)使Ⅰ-2的吡啶-N-氧化物部分还原为相应的吡啶Ⅰ-3。通常在这类反应中使用环己烯、1,4-环己二烯、甲酸和甲酸的盐，例如甲酸钾或甲酸铵作为氢转移剂。用含水的碱，例如在THF水溶液中的氢氧化锂或在含水甲醇或乙醇中的氢氧化钠水解Ⅰ-3的甲酯，用适当的酸如TFA或盐酸酸化中间体甲酸盐获得甲酸Ⅰ-4。或者，如果需要，可以分离该中间体甲酸盐，或通过本领域技术人员熟知的方法可以制备游离甲酸的甲酸盐。
通过本领域技术人员已知的其它方法也可以制备式(Ⅰ)化合物。例如，通过使式1-流程1化合物的醇基团与含有可取代基团，例如氯代、溴代或碘代基团的R2-化合物反应可以形成式(Ⅰ)化合物的醚键。其它的醚-形成反应也可以采用，并且对本领域技术人员来说，应该是显而易见的。
                            流程Ⅱ
Figure A9718016800391
a)2-[N-(3-羟基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD,(Ph)3P,DMF；b)LiHMDS,4-三氟甲基苄基溴，DMF,c)环己烯，10％Pd/C,2-丙醇；d)1.0N氢氧化钠，甲醇；e)HCl/二氧六环；
按照流程1中的详述方法，使Ⅱ-1化合物(如流程1中所述制备)与2-[N-(3-羟基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物进行Mitsunobu型偶合反应。在本领域技术人员熟知的标准烷化条件下，可以使生成的产物Ⅱ-2在2位(苯并氮杂_编号)烷基化。例如，在适当的溶剂中，通常为THF、DMF、DME或它们的混合物，可用碱如氢化钠、LDA或六甲基二硅叠氮化锂处理Ⅱ-2，以使酰胺N-H去质子化。用适当的亲电子试剂如烷基卤或苄基卤处理生成的阴离子类可获得产物，例如Ⅱ-3。可以如流程Ⅰ中所述，将Ⅱ-3的N-氧化物还原获得Ⅱ-4,Ⅱ-4可如流程Ⅰ中所述经皂化为Ⅱ-5。在Greene(“ProtectiveGroups in Organic Synthsis”(由Wiley-Interscience出版))所述的标准酸化条件下可完成Ⅱ-5的去保护得到Ⅱ-6。这些条件对本领域技术人员来说是众所周知的。或者，通过交替的次序，例如先将Ⅱ-3的Boc去保护，接着经N-氧化物的还原，最后经皂化可以将Ⅱ-3转化为Ⅱ-6。
                          流程Ⅲ
Figure A9718016800411
a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD,(Ph)3P,DMF；b)LiHMDS,CH3I,DMF；c)环己烯，10％Pd/C,2-丙醇；d)1.0N氢氧化钠，甲醇，然后酸化。
在本领域技术人员熟知的标准烷化条件下，可以使Ⅲ-2(如流程Ⅰ所述制备)在2位(苯并氮杂_编号)和在连接吡啶环的氮原子上同时烷基化。例如，在适当的溶剂中，通常为THF、DMF、DME或它们的混合物，可用至少2摩尔量的碱如氢化钠、LDA或六甲基二硅叠氮化锂处理Ⅲ-2，以进行去质子化作用。用过量的适当的亲电子试剂如烷基卤或苄基卤处理生成的阴离子类可产生双-烷基化作用，以获得所述产物，例如Ⅲ-3。按照流程Ⅰ和Ⅱ中所述方法，可以将Ⅲ-3转化为Ⅲ-5。                        流程Ⅳ
Figure A9718016800412
a)环己烯，10％Pd/C,2-丙醇；b)HCl/二氧六环；c)叔-丁基乙酰氯，Et3N，二氯甲烷；d)1.0N氢氧化钠，甲醇，然后酸化。
在本领域技术人员熟知的标准烷化条件下，可以使Ⅳ-2(如流程Ⅰ-Ⅲ所述方法由Ⅳ-1制备)在连接吡啶环的氮原子上烷基化。例如，在适当的溶剂，通常为二氯甲烷中，在适当的酸清除剂(一般为三乙胺、二异丙基乙胺或吡啶)存在下，使Ⅳ-2与酰化剂如叔-丁基乙酰氯反应提供Ⅳ-3。已知还有许多氨酰化的方法，并可在标准参考书如“Compendium in Organic Synthetic Methods”卷Ⅰ～Ⅳ(由Wiley-Interscience出版)中发现。按照流程Ⅰ-Ⅲ中所述方法使Ⅳ-3皂化以提供Ⅳ-4。
                      流程Ⅴ
a)3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙醇，DEAD,(Ph)3P,DMF，二氯甲烷；b)H2 10％Pd/C，乙醇；c)2-甲基硫代-2-咪唑琳氢碘酸盐，(i-Pr)2NEt，二甲基乙酰胺，100℃；d)1.0N氢氧化锂，THF，水，然后酸化。
按照流程1中的所述的Mitsunobu型偶合反应方法，使Ⅴ-1化合物(如流程1中所述制备)与3-氨基-1-丙醇的保护的变体，如3-(叔-丁氧基羰基氨基)-1-丙醇，3-(苄氧基羰基氨基)-1-丙醇或3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙醇反应。使生成的化合物，Ⅴ-2去保护，提供Ⅴ-3。如本领域技术人员所熟知的，去保护的条件根据存在于Ⅴ-2中的官能度和保护基团进行选择。例如，在钯催化剂(一般为钯炭或在炭上的氢氧化钯)存在下，在适合的溶剂(通常为甲醇、乙醇、乙酸乙酯或它们的混合物)中，通过氢解可除去存在于Ⅴ-2的对-硝基-Cbz基团。如果需要，所述氢解可以在酸例如盐酸存在下进行，得到相应的Ⅴ-2的铵盐。在碱如二异丙基乙胺的存在下，在适合的溶剂如甲醇、乙醇、DMF或二甲基乙酰胺中，使Ⅴ-3与2-甲基硫代-2-咪唑琳氢碘酸盐反应，提供Ⅴ-4。影响有关转化的类似条件在WO95/32710中有描述。如流程Ⅰ所述可实现获得Ⅴ-5的皂化。
                    流程Ⅵ
Figure A9718016800441
a)3-(叔-丁氧基羰基氨基)-1-丙醇，DEAD,(Ph)3P,DMF,THF；b)TFA，二氯甲烷；c)2-溴代嘧啶，碳酸氢钠，乙醇，回流；d)氢气，Pd/C，盐酸，甲醇；e)碳酸钾，水。
在适当的溶剂如乙醇、DMF或二甲基乙酰胺中，在适当的酸清除剂(通常为碳酸氢钠、三乙胺、二异丙基乙胺或吡啶)存在下，使Ⅵ-3(按照流程Ⅴ概述的方法由Ⅵ-1制备)与2-卤代嘧啶，一般为2-氯代嘧啶或2-溴代嘧啶反应提供Ⅵ-4。根据报道的影响此种转化的条件(见，例如WO95/32710)，可将Ⅵ-4的嘧啶环还原为相应的1,4,5,6-四氢嘧啶环。因此，Ⅵ-4可在钯催化剂(优选在活性炭上的钯)的存在下，在适合的溶剂(如甲醇或乙醇)中经受氢化作用。反应通常在酸性条件下进行；加入无机酸如盐酸通常是优选的。用碳酸钾和水碱化过滤的反应混合物得到Ⅵ-5。
                       流程Ⅶ
Figure A9718016800451
a)氢化钠，4-(三氟甲基)苄基溴，DMF；b)氢气，氢氧化钯/C，甲醇。
在适当的碱，一般为氢化钠或双(三甲基硅烷基)氨化锂的存在下，在非质子溶剂中，优选为DMF、THF或它们的混合物，使Ⅶ-1(通过Bondinell等(PCT申请WO93/00095,1993年1月7日公开)和Bondinell等(PCT申请WO94/14776)所述通用方法制备)与4-(三氟甲基)苄基溴反应，提供双-烷基化的产物Ⅶ-2。通过氢解可以方便地除去Ⅶ-2的4-(三氟甲基)苄基醚，提供酚Ⅶ-3。氢解苄基醚的方法是本领域技术人员所熟知的，并在适当的参考书，例如在Greene的“Protective Groups in Organec Synthsis”(由Wiley-Interscience出版)中有描述。然后根据前面流程所述的方法，用Ⅶ-3的酚制备式(Ⅰ)化合物。
此处所用的酰胺偶合试剂指可以用来形成肽键的试剂。通常的偶合方法采用碳二亚胺，活化的酸酐、酯和酰卤。试剂如EDC、DCC、DPPA、PPA、BOP试剂、HOBt,N-羟基琥珀酰亚胺和草酰氯是常用的。
形成肽键的偶合方法通常是本领域所熟知的。通常由Bodansky等在THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS(Springer-Verlag,Berlin,1984,)，及Ali等在J.Med.Chem.,29,984(1986)和J.Med.Chem.,30,2291(1987)中提出的肽合成方法一般为示范性的技术，并通过引用结合到本文中。
一般地，任选在催化剂如1-羟基苯并三唑(HOBt)和二甲基氨基吡啶(DMAP)的存在下，用适合的碳二亚胺偶合剂如N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)，使所述胺或苯胺通过其游离的氨基偶合到适当羧酸底物上。其它的方法，例如活化的酯、酸酐或酰卤的形成，适当地保护的酸底物的游离羧基的形成，以及随后的与适当地保护的胺的游离胺的反应(任选在碱的存在下进行)也是适合的。例如，在碱如N-甲基吗琳、DMAP或三烷基胺的存在下，在无水溶剂如二氯甲烷或四氢呋喃(THF)中，用氯代甲酸异丁酯处理保护的Boc-氨基酸或Cbz-脒基苯甲酸，以形成“活化的酸酐”，随后再与第二级保护的氨基酸或苯胺的游离胺反应。
Nestor等在J.Med.Chem.1984,27,320中公开了制备其中R2为苯并咪唑的式(Ⅰ)化合物的有用的中间体。制备用作本发明中间体的苯并咪唑化合物的有代表性的方法对本领域来说也是常见的，并可在EP-A0381033中发现。
本发明化合物的酸加成盐可按照标准的方法，在适合的溶剂中，由母体化合物和过量的酸(如盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸或甲磺酸)来制备。某些化合物形成可接受的内盐或两性离子化合物。通过用过量的含有适合的阳离子的碱性试剂，如氢氧化物、碳酸盐或醇盐，或用合适的有机胺处理本发明化合物来制备阳离子盐。阳离子如Li+、Na+、K+、Ca++、Mg++和NH4 +均是存在于药学上可接受的盐的阳离子的特别的实例。
本发明也提供药用组合物，其包括根据式(Ⅰ)的化合物和药学上可接受的载体。因此，式(Ⅰ)化合物也可以用于制备药物。如上所述的式(Ⅰ)化合物的药用组合物可以配制成溶液或冻干粉末，以供胃肠外给药。粉末在使用前可通过加入适当的稀释剂或其它药学上可接受的载体来复制。液体制剂可以是缓冲的、等渗的水溶液。适合的稀释剂的实例为常规等渗生理盐水溶液、标准5％右旋糖的水溶液，或缓冲的乙酸钠或乙酸铵溶液。这种制剂特别适用于胃肠外给予，但也可以用于口服给予，或装在计量的剂量吸入器或喷雾器中以供吸入。加入赋形剂如聚乙烯吡咯烷酮。明胶、羟基纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇、甘露醇、氯化钠或柠檬酸钠可能是需要的。
另外，本发明化合物也可以为装胶囊的，片剂的，或制成乳剂或糖浆剂以供口服给予。可以加入药学上可接受的固体或液体载体以增强或稳定组合物，或有利于组合物的制备。固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、石膏粉、硬脂酸镁或硬脂酸、滑石粉、果胶、阿拉伯胶、琼脂或明胶。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水或水。所述载体也可以包括缓释材料如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，单独或与蜡混合。固体载体的量可有变化，但优选每剂量单位在约20mg-约1g之间。药用制剂按照制药的常规技术制备，制备片剂形式包括(需要时)磨碎、混合、制粒和压片，制备硬明胶胶囊形式时包括磨碎。混合和填充。当使用液体载体时，所述制剂可以为糖浆剂、酏剂、乳剂或含水或不含水的悬浮液。此种液体制剂可以直接口服或填充到软明胶胶囊中。
对于直肠给药，本发明化合物也可以与赋形剂如可可脂、甘油、明胶或聚乙二醇混合并模压成栓剂。
本文描述的化合物为玻连蛋白受体的拮抗剂，用于治疗其中主要病理学与玻连蛋白受体相互作用的配位体或细胞有关的疾病。例如，这些化合物用于治疗其中骨质丢失引起病理的疾病。因此，本化合物用于治疗骨质疏松、甲状旁腺机能亢进、Paget氏病、恶性高钙血症、骨转移产生的溶骨性损害、因固定术或性激素缺乏引起的骨丢失。相信本发明化合物也可用作抗肿瘤剂、抗血管生成剂、消炎药和抗转移剂，并用于治疗动脉硬化和再狭窄。
所述化合物可以足以抑制骨的吸收或其它此类病症的药物浓度口服或胃肠外给药。含有所述化合物的药用组合物可以约0.1-约50mg/kg的口服剂量给予，其量应与患者的病情一致。优选口服剂量应为约0.5-约20mg/kg。对于急性治疗，优选胃肠外给药。静脉输注在5％的右旋糖浆的水或生理盐水中的所述肽，或含有适当的赋形剂的类似制剂是最有效的，尽管肌内大剂量(bolus)注射也是有用的。一般地，胃肠外剂量在约0.01-约100mg/kg，优选在0.1-20mg/kg之间。所述化合物在达到每日总剂量约0.4-约400mg/kg/天的水平时，可以每日1-4次给予。所述化合物给予的准确水平和方法可以通过比较药物的血液水平和达到治疗效果所需的浓度而很容易确定。
本发明还提供治疗骨质疏松或抑制骨质丢失的方法，其包括分阶段给予式(Ⅰ)化合物或将式(Ⅰ)化合物与骨吸收的其它抑制剂如双膦酸盐(如阿仑膦酸钠)、激素替代疗法、抗-雌激素剂或降钙素以物理组合的方式联合给予。此外，本发明提供用本发明化合物和组成代谢剂，如骨形态形成蛋白、异丙黄酮进行治疗的方法，用于预防骨的丢失和/或增加骨质。
另外，本发明提供抑制肿瘤生长的方法，其包括分阶段给予式(Ⅰ)化合物或将式(Ⅰ)化合物与抗肿瘤剂以物理组合的方式联合给予。喜树碱类似物类化合物，如托泊替堪、irinotecan和9-氨基喜树碱，及铂配位配合物如顺铂、ormaplatin和tetraplatin是熟知的抗肿瘤剂类。喜树碱类似物类化合物在下列专利及文献中有描述：美国专利号5004758、4604463、4473692、4545880、4342776、4513138、4399276，欧洲专利申请公开号0418099和0088642,Wani等，J.Med.Chem.,1986,29,2358,Wani等，J.Med.Chem..,1980,23,554,Wani等，J.Med.Chem..,1987,30,1774和Nitta等，Proc.14thInternational Congr.Chemotherapy.,1985,Anticancer Section 1,28，每篇的全部公开均通过引用结合到本文中。铂配位配合物，顺铂，可在Platinol_名下，由Bristol Myers-Squibb Corporation获得。顺铂的有用的制剂在美国专利号5562925和4310515中有描述，其全部公开均通过引用结合到本文中。
在抑制肿瘤生长的方法中，包括分阶段给予式(Ⅰ)化合物或将式(Ⅰ)化合物和抗肿瘤剂以物理组合的方式联合给予，铂配位配合物如顺铂可以采用缓慢的静脉输注给予。优选的载体为含有甘露醇的右旋糖/盐水溶液。铂配位化合物的剂量方案可以以每个疗程每平米体表面积约1-约500mg(mg/M2)的基础给予。铂配位化合物的输注可以每周给予1-2次，此种治疗可以重复数周。胃肠外给予喜树碱类似物类化合物时，通常采用大约连续5天的疗程，每天每平米体表面积约0.1-约300.0mg/M2。对于托泊替堪来说，最优选采用大约连续5天的疗程，每天每平米体表面积约1.0-约2.0mg/M2。优选该疗程在经历一个大约7-约28天的间歇期后，再重复至少1个疗程。
药用组合物可以用式(Ⅰ)化合物和抗肿瘤剂在同一容器中配制，但优选在不同容器中配制。当两种药物以溶液形式提供时，它们可以被包含在输注/注射体系中，以同时或顺序给予。
为了同时或在不同的时间方便地给予式(Ⅰ)化合物和抗肿瘤剂，制备了包含单一容器如小盒、小箱或其它容器、单个玻瓶、小袋、小瓶或其它容器的药剂盒，其内含有如上所述的用于胃肠外给药的有效量的式(Ⅰ)化合物，以及如上所述的用于胃肠外给药的有效量的抗肿瘤剂。这种药剂盒可以含有，例如在分开的容器或在同一容器中的两种药物，任选为冻干药塞，及供复制溶液的容器。作为修改，药剂盒也可包括在单一容器的两个小室中分装的供复制的溶液和冻干药塞，在使用前使之混合。对于这种安排，所述抗肿瘤剂和本发明化合物可以分开包装，如在两个容器中，或一起被冻干成粉末并在一个容器中提供。
当两种药物以溶液形式提供时，它们可以被包含在输注/注射体系中，以同时或顺序给予。例如，式(Ⅰ)化合物可以为静脉注射的形式，或序列输注袋的形式，所述输注袋通过管子与装有抗肿瘤剂的第二个输注袋相连结。使用此种体系，患者可以接受式(Ⅰ)化合物的初始大剂量-型注射或输注，接着输注抗肿瘤剂。可以用几种生物学测定法之一来测定所述化合物，以确定产生药理学效应所需的化合物浓度。
玻连蛋白结合的抑制
[3H]-SK&F-107260与αvβ3的固相结合：用含有1mM氯化钙、1mM氯化锰、1mM氯化镁(缓冲液A)和0.05叠氮化钠的缓冲液T稀释缓冲液T(含有2mM氯化钙和1％辛基葡糖苷)中的人胎盘或血小板αvβ3(1-0.3mg/ml)，然后以每孔0.1ml立即加入到96-孔ELISA板(Corning,New York,NY)。每孔加入0.1-0.2μg αvβ3。将该板于4℃孵育过夜。在试验的时候，用缓冲液A洗涤各孔一次，于室温下在同样的缓冲液中用0.1ml 3.5％牛血清白蛋白孵育1小时。孵育后彻底抽出孔中的培养物，用0.2ml缓冲液洗涤2次。
将该化合物溶于100％DMSO中，得到2mM原液，用结合的缓冲液(15mM Tris-HCl(pH7.4),100mM氯化钠，1mM氯化钙、1mM氯化锰、1mM氯化镁)将原液稀释至100μM终浓度的化合物。然后将所述溶液稀释至所需的化合物的终浓度。按一式三份向各孔中加入各种浓度的未标记的拮抗剂(0.01-100μM)，接着加入5.0nM的[3H]-SK&F-107260(65-86Ci/mmol)。
将该板于室温下孵育1小时。孵育后彻底抽吸各孔中的培养物，用0.2ml冰冷的缓冲液A以逐孔(well-to-well)的方式洗涤1次。用0.1ml1％SDS溶解所述受体，加入3ml Ready Safe，在Beckman LS 6800Liquid Scintillation Counter上通过液体闪烁计数测定结合的[3H]-SK&F-107260，有效率40％。在2μM SK&F-107260的存在下，测定非特异性结合的[3H]-SK&F-107260，并与小于1％的总放射配体输入一致。通过非线性最小二乘曲线拟合方法(由LUNDON-2程序修改而来)测定IC50(抑制50％[3H]-SK&F-107260结合的拮抗剂的浓度)。根据方程：Ki=IC50/(1+L/Kd)计算Ki(拮抗剂的解离常数)，这里L和Kd分别为[3H]-SK&F-107260的浓度和解离常数。
本发明化合物在约4.0-约0.0003微摩尔(micomolar)的浓度范围内抑制玻连蛋白与SK&F-107260的结合。
用本领域的标准测定方法也对本发明化合物进行了体内和体外骨吸收的测定，以评价对骨形成的抑制，如在欧洲专利528 587中公开的凹痕(pit)形成测定，该测定也可用人的破骨细胞代替大鼠破骨细胞，以及Wronski等(Cell and materials 1991,sup.1,69-74)所述的卵巢切除大鼠模型来进行。
血管平滑肌细胞游走测定
使用人或大鼠主动脉平滑肌细胞。在Transwell细胞培养室中用带有8um孔的聚碳酸酯膜(Costar)监测细胞的游走。滤器的下表面用玻连蛋白包被。将细胞以2.5-5.0×106细胞/ml的浓度悬浮于补充有0.2％牛血清白蛋白的DMEM中，并于20℃用各种浓度的受试化合物预处理20分钟。单独的溶剂用作对照。将0.2ml的细胞悬浮液置于培养室上部的间隔室中。下部的间隔室含有0.6ml补充有0.2％牛血清白蛋白的DMEM。于37℃，在95％空气/5％二氧化碳的气体中孵育24小时。孵育后，轻轻刮去滤器上表面未游走的细胞。然后用甘露醇固定滤器，用10％吉姆萨染液染色。或者通过a)对游走到滤器下部表面的细胞进行计数，或者通过b)用10％乙酸提取染色细胞，接着测定600nM的吸收度来测定游走。
甲状腺甲状旁腺切除大鼠模型
每一试验组由5-6只成年雄性Sprague-Dawley大鼠(250-400g体重)组成。在使用前7天对大鼠进行甲状腺甲状旁腺切除术(由Taconic Farms提供)。所有大鼠每三天接受一次甲状腺素的替代剂量。收到大鼠时，在通过尾静脉穿刺取血到肝素化的管中后立即对全血检测循环离子钙水平。如果离子钙水平(用Ciba-Corning 634型钙pH分析仪检测)小于1.2mM/L，则该鼠包括在内。每只大鼠安插有内置的静脉和动脉导管，以分别传递受试物质和取血样。然后对大鼠喂饲无钙食物和去离子水。测量基础钙水平，使用外部注射泵通过导管连续静脉给予每只大鼠对照溶媒或人甲状旁腺激素1-34肽(hPHT1-34，剂量1.25ug/kg/h在盐水中/0.1％牛血清白蛋白，Bachem,Ca)或hPHT1-34和受试物质的混合物。在6-8小时的输注期间，以每两小时的间隔检测每只大鼠的血钙应答。
人破骨细胞的吸收和粘附测定
采用衍生自破骨细胞瘤组织的正常人破骨细胞已经开发出凹痕吸收和粘附测定法并使之标准化。通过激光共焦显微镜测定破骨细胞凹痕体积的测定法1已被开发出来。也开发出高输出量筛选的测定法2，其中胶原片段吸收时释放用竞争性ELISA测定。
测定1(用激光共焦显微镜)
●从液氮贮存装置中取出等份人破骨细胞瘤-衍生的细胞悬浮液，于37℃快速温热，并经离心(1000rpm，于4℃5分钟)，用RPMI-1640培养基洗涤1次。
●吸出该培养基，用鼠抗-HLA-DR抗体代替，然后用RPMI-1640培养基以1∶3稀释。将该悬浮液于冰上孵育30分钟并频繁搅匀。
●用冷的RPMI-1640洗涤细胞两次，接着离心(1000rpm，于4℃5分钟)，然后将细胞转移至无菌的15ml离心管中。在改进的Neubauer计数室中对单核细胞的数目进行计数。
●将包被羊抗-鼠IgG(Dynal,Great Neck,NY)的足量的磁珠(5个/单核细胞)从其储备瓶中取出并置于5ml新鲜培养基(洗去有毒的叠氮化物防腐剂)中。通过将磁珠固定在磁铁上除去培养基，并代之以新的培养基。
●将磁珠与细胞混合，使悬浮液于冰上孵育30分钟。频繁搅匀该悬浮液。
●磁珠包被的细胞被固定在磁铁上，将其余的细胞(富含破骨细胞的部分)倾入无菌的50ml离心管中。
●将新鲜的培养基加入磁珠包被的细胞中以除去任何捕获的破骨细胞。重复该洗涤过程10次。弃去磁珠包被的细胞。
●用二乙酸荧光素标记活细胞，在计数室对可见的破骨细胞计数。用一次性的大孔塑料巴士德吸量管将样品加入室中。
●通过离心使破骨细胞沉淀，并在补充有10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氢钠的EMEM中将密度调节至适当的数目(破骨细胞的数目随肿瘤的不同而变化)。
●将3ml等份的细胞悬浮液(每种化合物处理)倾入15ml离心管中。通过离心使细胞沉淀。
●向每管加入3ml适宜的化合物处理液(在EMEM培养基中稀释至50uM)。也包括适宜的溶媒对照，阳性对照(抗玻连蛋白受体鼠单克隆抗体[87MEM1]稀释至100ug/ml)和同型对照(IgG2a稀释至100ug/ml)。于37℃孵育样品30分钟。
●将0.5ml等份的所述细胞接种到48-孔板中的无菌牙质切片(dentine slices)上并于37℃孵育2小时。每种处理按一式四份进行筛选。
●将所述切片在温热的PBS中经6次换液(changes)(在6孔板中，10ml/孔)洗涤并置于含有化合物处理或对照样品的新鲜培养基中。将该样品于37℃孵育48小时。
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)方法(对破骨细胞谱系的细胞的选择性染色)
●将含有粘附的破骨细胞的骨切片在磷酸盐缓冲盐水中洗涤并在2％的戊二醛(在0.2M二甲胂酸钠)中固定5分钟。
●然后在水中洗涤它们，并于37℃在TRAP缓冲液(0.5mg/ml萘酚AS-BI磷酸酯溶于N,N-二甲基甲酰胺中，并与含有10mM酒石酸钠的0.25M柠檬酸盐缓冲液(pH4.5)混合)中孵育4分钟。
●在冷水中洗涤后，将该切片浸没在含有1mg/ml坚牢石榴红的冷乙酸盐缓冲液(0.1M,pH6.2)中，并于4℃孵育4分钟。
●吸出过量的缓冲液，用水洗后风干。
●用亮视野显微镜对TRAP阳性破骨细胞(砖红色(brick red)/紫色沉淀)计数，然后通过超声处理从所述牙质表面除去。
●凹痕体积用Nikon/Lasertec ILM21W共焦显微镜测定。
测定2(用ELISA示值读数法)
富集人破骨细胞，并如测定1开始的9个步骤所述制备人破骨细胞以筛选化合物。为清楚说明，这些步骤重复如下：
●从液氮贮存装置中取出等份人破骨细胞瘤-衍生的细胞悬浮液，于37℃快速温热，通过在离心(1000rpm，于4℃5分钟)用RPMI-1640培养基洗涤1次。
●抽出该培养基，用鼠抗-HLA-DR抗体代替，然后用RPMI-1640培养基以1∶3稀释。将该悬浮液于冰上孵育30分钟并频繁搅匀。
●用冷的RPMI-1640洗涤细胞两次，接着离心(1000rpm，于4℃5分钟)，然后将细胞转移至无菌的15ml离心管中。在改进的Neubauer计数室中对单核细胞的数目进行计数。
●将包被羊抗-鼠IgG(Dynal,Great Neck,NY)的足量的磁珠(5个/单核细胞)从其储备瓶中取出并置于5ml新鲜培养基(洗去有毒的叠氮化物防腐剂)中。通过将磁珠固定在磁铁上除去培养基，并代之以新的培养基。
●将磁珠与细胞混合，使悬浮液于冰上孵育30分钟。频繁搅匀该悬浮液。
●磁珠包被的细胞被固定在磁铁上，将其余的细胞(富含破骨细胞的部分)倾入无菌的50ml离心管中。
●将新鲜的培养基加入磁珠包被的细胞中以除去任何捕获的破骨细胞。重复该洗涤过程10次。弃去磁珠包被的细胞。
●用二乙酸荧光素标记活细胞，在计数室对可见的破骨细胞计数。用一次性的大孔径塑料巴士德吸量管将样品加入室中。
●通过离心使破骨细胞沉淀，并在补充有10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氢钠的EMEM中将密度调节至适当的数目(破骨细胞的数目随肿瘤的不同而变化)。
对照上面测定1所述方法，在4个剂量上筛选所述化合物IC50，如下所述：
●于37℃，将破骨细胞制剂与试验化合物(4个剂量)或对照物一起预孵育30分钟。
●将它们接种到48-孔组织培养板中的牛皮质骨切片(dentineslices)上并于37℃再孵育2小时。
●将所述骨切片用温热的磷酸缓冲盐水(PBS)经6次换液洗涤以除去非-粘附细胞，然后将其放回到含有新鲜化合物或对照物的48孔板各孔中。
●然后将该组织培养板于37℃孵育48小时。
●将每孔中的上清液吸入到各单独的管中并以竞争性ELISA筛选，该方法可检测在吸收过程中释放的Ⅰ型胶原质的c-端肽。含有兔抗体的ELISA试剂盒(Osteometer,Denmark)可由市售获得，该抗体能与存在于Ⅰ型胶原质的al-链羧基-末端端肽的8-氨基酸序列(Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)进行特异性反应。这些结果用与溶媒对照比较的吸收％抑制率表示。
人破骨细胞粘附测定
富集人破骨细胞，并如测定1开始的9个步骤所述制备人破骨细胞以筛选化合物。为清楚说明，这些步骤重复如下：
●从液氮贮存装置中取出等份人破骨细胞瘤-衍生的细胞悬浮液，于30℃快速温热，并经离心(1000rpm，于4℃5分钟)在RPMI-1640培养基中洗涤1次。
●吸出该培养基，用鼠抗-HLA-DR抗体代替，然后用RPMI-1640培养基以1∶3稀释。将该悬浮液于冰上孵育30分钟并频繁搅动。
●用冷的RPMI-1640洗涤细胞两次，接着离心(1000rpm，于4℃5分钟)，然后将细胞转移至无菌的15ml离心管中。在改进的Neubauer计数室中对单核细胞的数目进行计数。
●将包被羊抗-鼠IgG(Dynal,Great Neck,NY)的足量的磁珠(5个/单核细胞)从其储备瓶中取出并置于5ml新鲜培养基(洗去有毒的叠氮化物防腐剂)中。通过将磁珠固定在磁铁上除去培养基，并代之以新的培养基。
●将磁珠与细胞混合，使悬浮液于冰上孵育30分钟。频繁搅匀该悬浮液。
●磁珠包被的细胞被固定在磁铁上，将其余的细胞(富含破骨细胞的部分)倾入无菌的50ml离心管中。
●将新鲜的培养基加入磁珠包被的细胞中以除去任何捕获的破骨细胞。重复该洗涤过程10次。弃去磁珠包被的细胞。
●用二乙酸荧光素标记活细胞，在计数室对可见的破骨细胞计数。用一次性的大孔径塑料巴士德吸量管将样品加入室中。
●通过离心使破骨细胞沉淀，并在补充有10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氢钠的EMEM中将密度调节至适当的数目(破骨细胞的数目随肿瘤的不同而变化)。
●将破骨细胞瘤-衍生的破骨细胞与化合物(4个剂量)或对照物于37℃预培养39分钟。
●然后将细胞接种到骨桥蛋白包被的玻片(人或鼠骨桥蛋白，2.5ug/ml)上并于37℃培养2小时。
●通过在磷酸盐缓冲盐水中剧烈洗涤该玻片以除去非粘附细胞并将玻片上剩余的细胞用丙酮固定。
●用抗酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)，一种对该表型的细胞的选择性标记(见步骤15-17)，对破骨细胞进行染色，用亮视野显微镜计数。结果用与溶媒对照比较的粘附％抑制率表示。
细胞粘附测定
细胞和细胞培养
从ATCC(分类号CRL 1573)中获得人胚肾细胞(HEK293细胞)。使细胞在含有Earl’s盐、10％胎牛血清、1％谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素的Earl’s最小必需培养基(EMEM)中生长。
构成物和转染
通过平端连接将αv亚基的3.2kb EcoRⅠ-KpnⅠ片段和β3亚基的2.4kb XbaⅠ-XhoⅠ片段插入pCDN载体的EcoRⅠ-EcoRⅤ克隆位点(Aiyar等，1994)，该载体含有CMV启动子和G418选择标记。为了稳定表达，使用Gene Pulser(基因脉冲发生器)(Hensley等，1994)，将αv+β3构成物(每个亚基20μg DNA)电转化入80×106HEK293细胞内，并置于100mm板(5×105个细胞/板)。48小时后，向该生长培养基补充450μg/ml基因霉素(G418硫酸盐，GIBCO-BRL,Bethesda,MD)。在选择性培养基中维持细胞直至集落大到足以被测定。
转染细胞的免疫化学分析
为了确定HEK293转染子是否表达玻连蛋白受体，通过离心，于室温下用丙酮固定2分钟并风干，将细胞固定在玻璃显微镜载片上。用标准间接免疫荧光法证实与23C6，即一种对αvβ3配合物特异性的单克隆抗体的特异的反应性。
细胞粘附研究
于4℃用0.1ml人玻连蛋白(0.2μg/ml在RPMI培养基中)预包被Corning 96-孔ELISA板过夜。在试验时，用RPMI培养基洗涤该板一次并于室温下在RPMI培养基中用3.5％BSA封闭1小时。将转染293细胞以0.5×106细胞/ml的密度悬浮于RPMI培养基中，该培养基补充有20mM Hepes(pH7.4)和0.1％BSA。将0.1ml的细胞悬浮液加入每孔中，并在存在或不存在各种αvβ3拮抗剂时，于37℃孵育1小时。孵育后，加入0.025ml的10％甲醛溶液(pH7.4)并在室温下将细胞固定10分钟。用0.2ml RPMI培养基洗涤该板三次并于室温下用0.1ml的0.5％甲苯胺蓝对粘附细胞染色。通过大量的去离子水洗涤除去过量的染色剂。通过加入含有50mM盐酸的0.1ml 50％乙醇洗脱已掺入细胞的甲苯胺蓝。在微滴定板读板仪(Titertek Multiskan MC,Sterling,VA)上以600nm处光密度对粘附的细胞进行定量。
固相αvβ5结合测定
从人胎盘中纯化玻连蛋白受体αvβ5。用50mM Tris-HCl(pH7.5)、100mM氯化钠、1mM氯化钙、1mM氯化锰、1mM氯化镁(缓冲液A)稀释受体制剂并以每孔0.1ml立即加入到96-孔ELISA板。每孔加入0.1-0.2μg αvβ3。将该板于4℃孵育过夜。在试验的时候，用缓冲液A洗涤各孔一次，于室温下在同样的缓冲液中用0.1ml 3.5％牛血清白蛋白孵育1小时。孵育后彻底吸出各孔中的培养物，用0.2ml缓冲液A洗涤2次。
在[3H]-SK&F-107260竞争测定中，向各孔中加入各种浓度的未标记拮抗剂(0.001-100μM)，接着加入5.0nM[3H]-SK&F-107260。将该板于室温下孵育1小时。孵育后彻底吸出各孔中的培养物，用0.2ml冰冷的缓冲液A以逐孔的方式洗涤1次。用0.1ml 1％SDS使所述受体溶解，加入3ml Ready Safe，在Beckman LS 6800Liquid Scintillation Counter上通过液体闪烁计数测定结合的[3H]-SK&F-107260，40％的有效率。在2μM SK&F-107260的存在下，测定非特异性结合的[3H]-SK&F-107260，并与小于1％的总放射配体输入一致。通过非线性最小二乘曲线拟合方法(由LUNDON-2程序修改而来)确定IC50(抑制50％[3H]-SK&F-107260结合的拮抗剂浓度)。根据Cheng和Prusoff方程：Ki=IC50/(1+L/Kd)计算Ki(拮抗剂的解离常数)，这里L和Kd分别为[3H]-SK&F-107260的浓度和解离常数。
RGD介导的GPⅡb-Ⅲa结合的抑制
GPⅡb-Ⅲa的纯化
于4℃，通过在3％辛基糖苷、20mM Tris-HCl(pH7.4)、140mM氯化钠、2mM氯化钙中轻轻搅拌2小时，使10单位陈旧的，洗过的人血小板(得自红十字会)溶解。于100000g离心溶解产物1小时。在用20mM Tris-HCl(pH7.4)、100mM氯化钠、2mM氯化钙、1％辛基糖苷(缓冲液A)预平衡的5ml晶状体凝集素琼脂糖凝胶4B柱(E.Y.Labs)上将获得的上清液上柱。孵育2小时后，用50ml冷的缓冲液A洗涤该柱。用含有10％右旋糖的缓冲液A洗脱凝集素滞留(lectin-retained)的GPⅡb-Ⅲa。全部操作均在4℃进行。如SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳所显示，获得的GPⅡb-Ⅲa纯度大于95％。
GPⅡb-Ⅲa在脂质体中的结合
在氮气下，使磷脂酰丝氨酸(70％)和磷脂酰胆碱(30％)(Avanti PolarLipids)的混合物在玻璃管壁上干燥。将纯化的GPⅡb-Ⅲa稀释至终浓度0.5mg/ml并按1∶3(w/w)蛋白质：磷脂的比例混合。再悬浮该混合物并在水浴超声波仪中经超声处理5分钟。然后用12000-14000分子量截断透析管使该混合物对1000-倍过量的50nM Tris-HCl(pH7.4)、100nM氯化钠、2mM氯化钙(换液两次)透析过夜。将含GPⅡb-Ⅲa的脂质体于12000g离心15分钟，并以大约1mg/ml的最终蛋白浓度再悬浮于透析缓冲液中。该脂质体于-70℃贮藏直至需要时取出。
对GPⅡb-Ⅲa的竞争结合
通过间接竞争结合方法，用[3H]-SK&F-107260作为RGD-型配体测得对纤维蛋白原受体(GPⅡb-Ⅲa)的结合。结合测定在安装有(Millipore Corporaution,Bedford,MA)的96-孔过滤板上，用0.22um亲水durapore膜进行。于室温下，用0.2ml的10μg/ml聚赖氨酸(SigmaChemical Co.,St.Louis,MO.)预包被各孔1小时以阻断非特异性的结合。向各孔中按一式四份加入各种浓度的未标记的苯并氮杂_(0.001-100μM)。将[3H]-SK&F-107260以终浓度4.5nM加入各孔中，接着加入1μg纯化的含血小板GPⅡb-Ⅲa的脂质体。于室温下将该混合物孵育1小时。通过用微孔过滤多孔装置过滤将GPⅡb-Ⅲa-结合的[3H]-SK&F-107260与未结合的分离，然后用冰冷的缓冲液洗涤(2次，每次0.2ml)。在Beckman液体闪烁计数器(LS6800型)，在1.5ml ReadySolve(Beckman Instruments,Fullerton,CA)中对存留在滤器上的结合放射性进行计数，有40％的有效率。在2μM未标记的SK&F-107260的存在下，测定非特异性的结合，并与加入样品的小于0.14％的总放射性一致。所有的数据点均为4份测得值的平均值。
通过非线性最小二乘曲线拟合方法分析竞争性结合数据。该方法提供所述拮抗剂的IC50(在平衡时拮抗剂抑制[3H]-SK&F-107260特异性结合达50％的的浓度)。IC50与基于Cheng和Prusoff方程的拮抗剂的平衡解离常数(Ki)有关：Ki=IC50/(1+L/Kd)，这里L为用于竞争结合测定(4.5nM)的[3H]-SK&F-107260的浓度，而Kd为通过Scatchard分析在4.5nM处的解离常数。
本发明的优选化合物对玻连蛋白受体的亲和力与对纤维蛋白原受体的亲和力的比大于10∶1。最优选的化合物具有大于100∶1的活性比。
式(Ⅰ)化合物单独或与抗肿瘤剂联合使用的效果可以用几种移植性肿瘤的小鼠模型确定。见美国专利5004758号和5633016号对这些模型的详细描述。
下面的实施例并不意欲以任何方式限制本发明的范围，而是说明本发明化合物的如何制备和使用。许多其它的实施方案对本领域技术人员来说应是显而易见的。
                         实施例
                          总论
于250或400Hz记录1H核磁共振(NMR)谱。从内标的四甲基硅烷(TMS)以每百万分的分数(d)向低场记录化学位移。NMR数据的缩略语如下：s=单峰，d=二重峰，t=三重峰，q=四峰，m=多峰，dd=双二重峰，dt=双三重峰，app=明显，br=宽峰，J=指以Hertz测得的NMR偶合常数。CDCI3为氘代氯仿，DMSO-d6为六氘代二甲基亚砜，而CD3OD为四氘代甲醇。红外(IR)谱以发射型谱记录，谱带的位置用波数的倒数(inverse wavenumbers,CM-1)记录。质谱由电子喷射(ES)或FAB离子技术得到。元素分析在在室内(in-house)或通过Quantitative Technologies Inc(Whitehouse,NJ)进行。熔点在Thomas-Hoover熔点仪(未校正)上测定。所有的温度均用摄氏度报告。采用Analtech Silica Gel Gf和E.Merck Silica Gel 60 F-254薄层板进行薄层层析。在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅胶上进行快速层析和重力层析。在Rainin或Beckman色谱仪上进行进行分析的或制备性的HPLC。ODS指十八碳基硅烷基衍生的硅胶层析载体(support)。5μApex-ODS指含有由Jones Chromatography,Littleton,Colorado制备的。5μ大小颗粒的十八碳基硅烷基衍生的硅胶层析载体，YMC ODS-AQ_为ODS层析载体，其注册商标为Co.Ltd.,Kyoto,Japan。PRP-1_为polymeric(苯乙烯-二乙烯苯)层析载体，且注册商标是Hamilton Co.,Reno,Nevada。Cilite_为由酸-洗的硅藻土组成的助滤剂，且注册商标是Manville Corp.,Denver,Colorado。
制备1
(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的制备a) 4-溴代-3-溴代甲基茴香醚
将2-溴代-5-甲氧基甲苯(20g,0.10mol)，N-溴代琥珀酰亚胺(19.6g,0.11mol)，苯甲酰基过氧化物(1g,4mmol)，二氯甲烷(200ml)的混合物用泛光灯照射18小时以产生温和的回流。将该混回物冷至-10℃数小时，将溶液与沉淀的琥珀酰亚胺倾离。浓缩溶液，使残留物从氯仿/己烷中重结晶得到为淡黄色柱晶的标题化合物(19.7g,70％):1H NMR(CDCl3)δ7.45(d,J=8.9Hz,1H),6.99(d,J=3Hz,1H),6.74(dd,J=8.9,3Hz,1H),4.55(s,2H),3.80(s,3H)。b)3-双(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-溴代茴香醚
于室温下，在氩气中将4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(24g,86mmol)和二叔-丁基亚氨基二羧酸酯钾(24g,94mmol)在二甲基甲酰胺中的混合物搅拌18小时。然后真空浓缩反应物，使残留物在乙酸乙酯和水中分配。用水和盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)，并浓缩。使残留物从己烷中重结晶得到为白色固体的标题化合物(15g,42％):1H NMR(CDCl3)δ7.40(d,J=8.6Hz,1H),6.68(m,2H),4.81(s,2H),3.74(s,3H),1.44(s,18H)。c)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-双(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]-3-丁酸甲酯
将3-双(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-溴代茴香醚(15g,36mmol)、衣康酸二甲酯(7.5g,47mmol)、三-邻-甲苯基膦(1g,3mol)、乙酸钯(0.4g,2mmol)、二异丙基乙胺(12.8ml,72mmol)和丙腈(150ml)装入一500ml烧瓶中。向该混合物通入氩气(几个真空抽出/氩气冲洗周期)，然后在氩气下加热至回流1小时。允许反应物冷却至室温，然后倾入冰冷的乙酸乙酯(500ml)中。过滤除去生成的沉淀并浓缩滤液。使残留物经硅胶层析(在己烷中的10％-20％乙酸乙酯)纯化得到淡黄色油状物的标题化合物(11.8g,66％):1HNMR(CDCl3)δ7.94(s,1H),7.15(d,J=8.1Hz,1H),6.77(d,J=8.1Hz,1H),6.76(s,1H),4.73(s,2H),3.81(s,3H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),3.38(s,2H),1.45(s,18H)。d)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-双(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯
将装有(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-双(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]-3-丁酸甲酯(11.8g)、乙酸乙酯(120ml)和10％钯炭(1g)的压力容器在45psi氢气下振摇18小时。然后过滤该混合物，浓缩滤液得到为无色油状物的标题化合物(12g,100％):1H NMR(CDCl3)δ7.00(d,J=8.2Hz,1H),6.71(m,2H),4.81(s,2H),3.75(s,3H),3.66(s,3H),3.63(s,3H),3.05(m,2H),2.73(m,2H),2.42(dd,J=16.0,4.8Hz,1H),1.44(s,18H)。e)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(氨基甲基)-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯
于室温下，在氩气中将(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-双(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(12g)的氯仿(100ml)和三氟乙酸(50ml)的溶液搅拌4小时。然后真空浓缩溶液，得到粘性油状的标题化合物(10g,100％):MS(ES)m/e 296.2(M+H)+。f)(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(氨基甲基)-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(10g,24mmol)和三乙胺(17ml,120mmol)的甲苯(100ml)溶液于回流下加热18小时。然后真空浓缩反应物，使残留物在乙酸乙酯和水中分配。用乙酸乙酯萃取水层两次，用盐水洗涤合并的有机萃取物，干燥(硫酸镁)，并浓缩，得到为褐色固体的标题化合物(4.8g,76％):MS(ES)m/e 264.2(M+H)+。g)(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃及氩气下，将无水氯化铝(7.6g,57mmol)分次加入(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(3.0g,11mmol)和乙基硫醇(ethanethiol)(4.2ml,57mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。允许生成的混合物温热至室温，并搅拌过夜，然后浓缩。用冰水研磨残留物，过滤收集生成的固体，干燥得到灰白色固体的标题化合物(2.64g,91％):MS(ES)m/e 250.2(M+H)+。
制备2
(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的制备a)3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-溴代茴香醚
于室温下，将40％的含水甲胺(49ml,563mmol)快速加入在THF(280ml)中的4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(15.76g,56.29mmol)中。在2.5小时后，浓缩反应物，使残留物在乙醚(560ml)和1.0N氢氧化钠(100ml)中分配。分离各层，干燥(硫酸镁)有机层，并浓缩得到为黄色油状物：TLC(5％甲醇/三氯甲烷)Rf0.32。
将该油状物溶于三氯甲烷(280ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(1.29g,56.29mmol)。反应于RT搅拌45分钟，然后浓缩。硅胶层析(5％乙酸乙酯/甲苯)得到淡黄色油状标题化合物(16.81g,90％):TLC(5％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.43；1H NMR(400,CDCl3)外消旋体的混合物；δ7.42(d,J=8.7Hz,1H),6.65-6.80(m,2H),4.40-4.55(m,2H),3.77(s,3H),2.81-2.97(m,3H),1.37-1.60(m,9H)；MS(ES)m/e 352/354(M+Na)+。b)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-甲氧基苯基]-3-丁酸甲酯
将在丙腈(75ml)中的3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-溴代茴香醚(4.95g,15mmol)、衣康酸二甲酯(3.08g,19.5mmol)、乙酸钯(168mg,0.75mmol)、三-邻-甲苯基膦(457mg,1.5mol)、二异丙基乙胺(5.2ml,30mmol)的溶液加热至回流45分钟，然后在旋转蒸发器中浓缩。用乙醚(150ml)稀释残留物，通过celite_过滤该混合物以除去不溶性物质。浓缩滤液，从二甲苯中再浓缩残留物。硅胶层析(梯度洗：20％EtOAc/已烷，然后1∶1 EtOAc/已烷)除去膦和基线(Baseline)物质；将所有其它具有Rf0.40-0.70的物质收集在一起并浓缩留下浑浊的黄色油状物：TLC(30％乙酸乙酯/己烷)Rf0.41(主要产物)。
将该油状物溶于甲醇(75ml)中，小心加入10％钯炭。在氢气(50psi)下振摇该混合物2.5小时，然后通过celite_过滤该混合物以除去催化剂，浓缩滤液，使残留物再次置于该反应条件下。再过2.5小时后，通过celite_过滤该混合物以除去催化剂，浓缩滤液留下淡黄色油状物。从三氯甲烷/己烷中再次浓缩，然后经硅胶层析(梯度：20％乙酸乙酯/己烷，然后1∶1乙酸乙酯/己烷)得到为淡黄色油状物的标题化合物(4.53g,74％):TLC(30％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.46；1H NMR(400,CDCl3)旋转异构体混合物；δ7.03(d,J=8.2Hz,1H),6.65-6.80(m,2H),4.46(br s,2H),3.77(s,3H),3.64(s,3H),3.63(s,3H),2.62-3.12(m,7H),2.35-2.50(m,1H),1.47(br s,9H)；MS(ES)m/e 432(M+Na)+。c)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(甲基氨基)甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯
于0℃将THF(55ml)全部一次性加入(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(4.53g,11.6mmol)的无水二氯甲烷(55ml)中，使反应物温热至室温。1小时后，浓缩反应物，使残留物从甲苯(2×100ml)中再浓缩留下亮黄色油状标题化合物(11.06mmol，定量)：MS(ES)m/e 310(M+H)+。d)(±)-8-甲氧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(甲基氨基)甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(11.06mmol)和二异丙基乙胺(5.8ml,33.18mmol)的甲苯(110ml)溶液回流加热25小时，RT搅拌4天，再于回流下另外加热24小时。浓缩并硅胶层析(5％甲醇在1∶1乙酸乙酯/三氯甲烷)得到亮黄色固体标题化合物(2.88g,94％):TLC(5％MeOH在EtOAc/CHCl3中)Rf0.63；1HNMR(250,CDCl3)δ7.02(d,J=8.4Hz,1H),6.78(dd,J=8.4,2.7Hz,1H),6.63(d,J=2.7Hz,1H),5.29(d,J=16.3Hz,1H),3.50-3.90(m,2H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),2.73-3.16(m,3H),3.04(s,3H),2.41(dd,J=16.7,5.4Hz,1H)；MS(ES)m/e 300(M+Na)+,278(M+H)+。e)(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃及氩气下，将无水氯化铝(1.35g,10.15mmol)全部一次性加入在无水二氯甲烷(20ml)中的(±)-8-甲氧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(562mg,2.03mmol)和乙基硫醇(0.75ml,10.15mmol)的溶液中。将该混合物温热至室温并搅拌4.5小时，然后再次冷却至0℃。加入冰冷水(20ml)，强烈搅拌该混合物5分钟，然后用三氯甲烷提取(3×20ml)。干燥(硫酸镁)合并的三氯甲烷层并浓缩至留下残留物。抽吸过滤水层收集固体沉淀。在1∶1甲醇/三氯甲烷中合并从沉淀和得自三氯甲烷层的残留物，浓缩该溶液得到灰白色固体。用热甲醇研磨，使该混合物冷却至室温。抽吸过滤收集固体，用冷的甲醇和乙醚顺序洗涤。于40℃高真空干燥得到无色固体的标题化合物(467.9mg,88％):TLC(5％甲醇/三氯甲烷)Rf0.17；1H NMR(250,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),6.89(d,J=8.1Hz,1H),6.50-6.70(m,2H),5.16(d,J=16.4Hz,1H),3.84(d,J=16.4Hz,1H),3.60-3.85(m,1H),3.56(s,3H),2.30-3.00(m,4H),2.86(s,3H)；MS(ES)m/e 286(M+Na)+,264(M+H)+。
制备3
2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物
将2-氯代吡啶-N-氧化物(16.6g,0.1mmol)、3-氨基-1-丙醇(15.3ml,0.2mol)、碳酸氢钠(42g,0.5mol)和叔-戊醇(100ml)加热至回流。21小时后，冷却该反应物，用二氯甲烷(300ml)稀释，抽吸过滤除去不溶性物质。浓缩滤液并从甲苯中再浓缩留下黄色油状物。硅胶层析(20％甲醇/三氯甲烷)得到黄色固体的标题化合物(15.62g,93％):TLC(20％甲醇/三氯甲烷)Rf0.48；1H NMR(250,CDCl3)δ8.07(dd,J=6.6,1.2Hz,1H),7.34(brt,1H),7.10-7.30(m,1H),6.64(dd,J=8.5,1.4Hz,1H),6.40-6.60(m,1H),4.49(br s,1H),3.65-3.90(m,2H),3.35-3.60(m,2H),1.75-2.00(m,2H)；MS(ES)m/e 169(M+H)+。
制备4
2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物
根据制备3的方法，但用2-氯代-4-硝基吡啶-N-氧化物(见Jain,P.C.；chatterjee,S.K；Anand,N.Indean Journal of Chemical 1966,403)代替2-氯代吡啶-N-氧化物盐酸盐，制备为橙色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 214.2(M+H)+。
制备5
2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲氧基吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲氧基吡啶-N-氧化物
在氩气下，将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物(0.275g,1mmol)和0.5M NaOMe的甲醇(16ml,8mmol)的溶液于回流下加热3小时。使该反应物冷却，加入冰醋酸(0.5ml,8mmol)。将该溶液浓缩至干燥，用二氯甲烷研磨残留物。过滤除去不溶性物质，浓缩滤液。硅胶层析(5-15％甲醇/二氯甲烷)得到无色油状物的标题化合物(0.23g,90％):MS(ES)m/e 199.0(M+H)+。
制备6
(±)-8-羟基-3-氧代-8-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸酯的制备a)3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚
于室温下，将2,2,2-三氟乙胺(4.9ml,62.5mmol)快速加入4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(7.00g,25mmol)的无水DMSO(25ml)的溶液中。将该反应物温热至30-35℃。2小时后，该反应用冰冷的0.5N氢氧化钠(100ml)稀释，用乙醚提取(3×100ml)。合并的Et2O层用水(2×25ml)和盐水(25ml)顺序洗涤，干燥(硫酸镁)并浓缩至淡黄色油状物：TLC(甲苯)Rf0.43；
将该油状物溶于在圆底烧瓶内的二氯甲烷(48ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(10.48g,48.04mmol)。将含有反应溶液的烧瓶置于旋转蒸发器上并于50℃真空旋转16小时。用己烷(100ml)稀释生成的残留物，用少量纯净的固体产物(经硅胶层析，用10％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，由前面的试验获得)接种该溶液。使该混合物静置于室温数小时，然后放置冰箱过夜。通过抽吸过滤收集产物，用己烷洗涤。真空干燥得到无色固体的标题化合物。浓缩母液并经硅胶层析(10％乙酸乙酯/己烷)获得另一些标题化合物(1.42g；总计=8.61g,90％):TLC(10％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.48；mp86-89℃；1H NMR(250,CDCl3)δ7.44(d,J=9.0Hz,1H),6.64-6.82(m,2H),4.52-4.70(m,2H),3.61-4.00(m,2H),3.77(s,3H),1.22-1.68(m,9H)。b)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯
将3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚(9.17g,23.03mmol)、衣康酸二甲酯(4.73g,29.94mmol)、乙酸钯(259mg,1.15mmol)、三-邻-甲苯基膦(701mg,2.30mol)和二异丙基乙胺(8.0ml,46.06mmol)的丙腈(115ml)溶液进行脱氧(3×真空抽出/氩气净化周期)，然后在氩气下加热至回流。2小时后，浓缩该反应物，并从甲苯中再浓缩。硅胶层析(30％乙酸乙酯/己烷，用二氯甲烷装填样品)除去膦和基线物质；将所有其它具有Rf0.55-0.70的物质收集在一起并浓缩留下黄色油状物。将其溶解于20％乙酸乙酯/己烷(200ml)中并置于室温1小时，然后放置冰箱过夜。过量该混合物以除去黄色沉淀，浓缩滤液留下9.93g(91％)黄色油状物：TLC(30％乙酸乙酯/己烷)Rf0.55(主要产物)。
将该油状物溶于乙酸乙酯(100ml)中，加入10％钯炭(4.44g,4.18mmol)。在氢气(50psi)下振摇该混合物3.5小时，然后通过celite_过滤该混合物以除去催化剂，浓缩滤液，使残留物经硅胶层析(梯度：20％乙酸乙酯/己烷)得到无色油状物的标题化合物(7.98g，两个步骤73％):TLC(20％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.35；1H NMR(250,CDCl3)δ7.05(d,J=8.4Hz,1H),6.76(dd,J=8.4,27Hz,1H),6.60-6.72(m,1H),4.50-4.80(m,2H),3.45-3.95(m,2H),3.77(s,3H),3.63(s,6H),2.85-3.09(m,2H),2.58-2.80(m,2H),2.33-2.50(m,1H),1.20-1.70(m,9H)；MS(ES)m/e 500(M+Na)+。c)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(2,2,2-三氟乙基氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯
于0℃及氩气下，将THF(55ml)全部一次性加入(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(7.98g,16.71mmol)的无水二氯甲烷(42ml)中，使反应物温热至室温。1.5小时后，浓缩反应物，使残留物从二甲苯中再浓缩。于40℃高真空干燥留下黄色固体的标题化合物(8.70g，定量)：MS(ES)m/e378(M+H)+。d)(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(2,2,2-三氟乙基氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(16.71mmol)、三丙胺(9.5ml,50.13mmol)和二甲苯(170ml)的混合物于回流下加热。63小时后，浓缩反应物，使残留物经硅胶层析(2∶1乙酸乙酯/己烷，用二氯甲烷装填)。得到淡黄色固体的标题化合物(5.33g，两步92％):TLC(40％乙酸乙酯/已烷)Rf0.49；1H NMR(250,CDCl3)δ7.04(d,J=8.5Hz,1H),6.80(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.61(d,J=2.6Hz,1H),5.35(d,J=16.8Hz,1H),3.60-4.30(m,4H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),2.81-3.15(m,3H),2.46(dd,J=16.9,5.5Hz,1H):MS(ES)m/e 368(M+Na)+,346(M+H)+。e)(±)-8-羟基-2-甲基3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的制备
于-5～-10℃在氩气下用30分钟将BBr3的二氯甲烷(1.0M,60ml,60mmol)溶液滴加到(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸酯(5.16g,14.94mmol)的无水二氯甲烷(60ml)中。加入1小时后，于-5至-10℃，使反应物再次完全冷却于-10℃，通过小心滴加甲醇(60ml)使之骤冷。于-10℃-0℃搅拌该反应物1小时，然后在旋转蒸发器浓缩。先从甲醇(2×)，再从乙酸乙酯中再次浓缩残留物，然后通过硅胶垫过滤(乙酸乙酯洗脱)。浓缩滤液留下黄色固体，用热己烷研磨该固体。获得为灰白色固体的标题化合物(4.74g,96％):TLC(1∶1乙酸乙酯/己烷)Rf0.40；1H NMR(400,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),6.90(d,J=8.3Hz,1H),6.62(dd,J=8.3,2.5Hz,1H),6.57(d,J=2.5Hz,1H),5.27(d,J=16.7Hz,1H),4.22-4.38(m,1H),4.07-4.22(m,1H),4.07(d,J=16.7Hz,1H),3.72-3.83(m,1H),3.58(s,3H),2.94(dd,J=17.0,3.8Hz,1H),2.72(dd,J=16.7,9.1Hz,1H),2.65(dd,J=17.0,14Hz,1H),2.49(dd,J=16.7,5.0Hz,1H，由残留溶剂的信号部分掩蔽)；MS(ES)m/e 354(M+Na)+。
制备7
(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的对映体的HPLC分离a)(R)-(+)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
通过手性HPLC，使用下列条件：Diacel Chiralpak AS_柱(21.2×250mm)、EtOH流动相、7ml/min流速、于UV 254mm检测、70mg注入，将(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯拆分为它的对映体；(R)-(+)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=21.5min；(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=39.1min。
制备8
(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯对映体的HPLC分离a)(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
通过手性HPLC，使用下列条件：Diacel Chiralpak AS_柱(21.2×250mm)、乙腈流动相、15ml/min流速、于UV 254mm检测、500mg注入，将(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯拆分为它的对映体；(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=10.2min；(S)-(-)-8-甲氯基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=19.0min。
制备9
(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的去甲基化a)(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于-8℃及氩气下，用30分钟将在三氯甲烷(160ml)中的(S)-(-)-8-甲氯基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(15.0g,0.057mol)溶液滴加到三溴化硼(20.53ml,0.217mol)的三氯甲烷(160ml)的溶液中，维持温度在-5℃和0℃之间。于-8搅拌反应混合物30分钟，然后开始滴加甲醇(200ml)，维持温度在大约0℃。浓缩反应混合物得到粘性油状物，使其从甲醇(100ml)中再浓缩。将该油状物溶于水/甲醇中，过滤除去少量的深色固体。用50％氢氧化钠中和滤液(pH7)，沉淀出白色固体。通过加入少量的乙酸将悬浮液的pH调至4.5。收集固体并真空干燥获得标题化合物(9.7g,68％)。产物经HPLC测定手性纯度：Chiralpak AS_柱(4.6×50mm)、100％乙醇流动相、0.5ml/min流速、于UV 215mm检测；tR=7.5min(S-对映体，99％)；tR=4.4min(R-对映体，1％)。
制备10
2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4,6-二甲基吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4,6-二甲基吡啶-N-氧化物
根据制备4的方法，但用2-氯代-4,6-二甲基吡啶-N-氧化物(见Brown,E.V.J.Amer.Soc.1957,79,3565)代替2-氯代吡啶-N-氧化物盐酸盐，制备为澄清的油状标题化合物：MS(ES)m/e 197.2(M+H)+。
制备11
6-(甲基氨基)-2-吡啶基乙醇的制备a)2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基吡啶
于0℃将二碳酸二叔丁酯(9.69,44mmol)加入2-氨基-6-甲基吡啶(4.33g,40mmol)、Et3N(6.2ml,40mmol)和二氯甲烷(50ml)的搅拌溶液中。于室温搅拌过夜后，真空浓缩反应混合物，用水稀释，用二氯甲烷(2×250ml)萃取。干燥(硫酸镁)浓缩得到为无色油状物的标题化合物：MS(ES)m/e 209(M+H)+。b)2-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-6-甲基吡啶
于0℃将2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基吡啶(2.1g,10mmol)的DMF(30ml)的溶液加入NaH(60％分散于矿物油中，0.44g,11mmol)在DMF(20ml)的悬浮液中。于0℃搅拌该反应物15分钟；然后加入甲基碘(1.6g,11mmol)。真空浓缩反应混合物，用水稀释，用二氯甲烷(3×50ml)萃取。干燥(硫酸镁)浓缩得到为无色油状物的标题化合物：MS(ES)m/e 223(M+H)+。c)6-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-2-吡啶乙酸乙酯
在THF(30ml)中制备LDA(18mmol)，冷却至-78℃，加入2-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-6-甲基吡啶(2g,9mmol)，形成深红色溶液。15分钟后，加入碳酸二乙酯(18ml,15mmol)。于-78℃另外搅拌该burgundy黄色溶液15分钟，然后用饱和氯化铵溶液使反应物骤冷。将该混合物温热至室温，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。硅胶层析得到为无色油状物的标题化合物：MS(ES)m/e 294(M+H)+。d)6-(甲基氨基)-2-吡啶乙酸乙酯
于室温下，将6-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-2-吡啶乙酸乙酯(0.6g,2mmol)和4M盐酸/二氧六环(5ml,20mmol)的溶液搅拌过夜，然后浓缩。从甲苯(3×)中重结晶得到白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e195(M+H)+。e)6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇
向氢化铝理的THF(1.0M,20ml,20.4mmol)的机械搅拌的溶液滴加2-(甲基氨基)-2-吡啶乙酸乙酯(0.38g,2mmol)的THF(10ml)的溶液。加入完成后，将反应混合物温热至0℃，用10％氢氧化钠溶液淬灭之。过滤除去固体，真空浓缩滤液。将残留物溶于二氯甲烷中，干燥(硫酸镁)并浓缩。从甲苯(3×)中重结晶得到为无色油状物的标题化合物：MS(ES)m/e 153(M+H)+。
制备12
3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙醇的制备a)3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙醇
于0℃将二碳酸二叔丁酯(10.91g,50mmol)的二氯甲烷(50ml)的溶液滴加到3-氨基-1-丙醇(11.5ml,150ml)的二氯甲烷(250ml)中。将混浊溶液温热至室温并搅拌1小时，然后在旋转蒸发器中浓缩。将残留物溶于水(100ml)中，用乙醚(3×100ml)萃取。干燥(硫酸镁)并浓缩留下无色油状的标题化合物：1H NMR(250MHz,CDCl3)δ4.80(br s,1H),3.50-3.80(m,2H),3.13-3.42(m,2H),3.03(brt,1H),1.55-1.80(m,2H),1.45(s,9H)；MS(ES)m/e 198(M+Na)+。
制备13
3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙醇的制备a)3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙醇
在氩气中于室温下，向3-氨基-1-丙醇(0.77g,1.1mmol)和三乙胺(2.85ml,7mmol)的THF(5ml)的溶液中加入4-硝基苄基氯代甲酸酯(2g,1mmol)的THF(20ml)的悬浮液中。于室温下搅拌生成的混合物过周末，然后浓缩。硅胶层析(0％-2％甲醇/二氯甲烷)纯化残留物得到淡黄色油状物的标题化合物(0.80g,34％):MS(ES)m/e 254.3(M+H)+。
制备14
2-[N-(3-羟基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物的制备a)2-[N-(3-羟基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物
用二碳酸二叔丁酯(11.4g,55.3mmol)处理2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(18.0g,47.6mmol)的叔丁醇(80ml)溶液。18小时后，浓缩该溶液并用己烷研磨残留物。真空干燥生成的固体得到为灰白色固体的标题化合物(12.5g,98％):MS(ES)m/e 269.3(M+H)+。
制备15
(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基]-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的制备a)(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基]-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[N-(3-羟基-1-丙基]-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为浅橙色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 500.4(M+H)+。
制备16
2-[(3-羟基-1-丙基]氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物的制备
将2-氯代-4-甲基吡啶-N-氧化物(12.1g,0.068mol)(Brown,E.V.J.Amer.Soc.1957,79,3565)、3-氨基-1-丙醇(10.33ml,0.14mol)、碳酸氢钠(28g,0.34mol)和叔-戊醇(70ml)的混合物加热至回流。16小时后，冷却该反应物，用二氯甲烷(300ml)稀释，抽吸过滤除去不溶性物质。浓缩滤液并从甲苯中再浓缩留下黄色油状物。从二氯甲烷/乙醚重结晶得到黄色固体的标题化合物(10.87g,88％):TLC(15％甲醇/二氯甲烷)Rf0.44；1H NMR(400,CDCl3)δ7.92(d,J=6.7,1H),7.28(brt,1H),6.43(s,1H),6.33(dd,J=6.6,2.1Hz,1H),3.73(t,J=5.7Hz,2H),3.47(q,H=6.3Hz,2H),2.29(s,3H),1.82-1.88(m,2H)；MS(ES)m/e 183(M+H)+。
制备17
通过(S)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的烷基化制备(S)-8-羟基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯a)(S)-3-氧代-8-[4-(三氟甲基)苄氧基-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯向(S)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-1H-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.31g,1.24mmol)和4-(三氟甲基)苄基溴(0.89g,3.72mmol)的DMF(10ml)溶液中加入氢化钠(60％悬浮于油中，0.11g,2.75mmol)。于室温搅拌4小时后，真空除去原料DMF。使残留物在饱和碳酸氢钠和乙酸乙酯之间分配。用乙酸乙酯萃取水相，用饱和氯化钠洗涤合并的有机提取物，经硫酸钠干燥并浓缩得到澄清的油状物(0.90g)。径向层析(5％丙酮/二氯甲烷，硅胶，6m板)得到为白色泡沫状的标题化合物(0.53g):MS(ES)m/e 566.1(M+H)+。b)(S)-8-羟基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将在甲醇(20ml)中的(S)-3-氧代-8-[4-(三氟甲基)苄氧基-2-[4-(三氟甲基)苄基-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.78g,1.38mmol)和Pearlman’s催化剂(20mg)装入Parr氢化瓶中。于50psi氢化24小时后，开启反应瓶并通过过滤除去催化剂。除去溶剂得到白色泡沫物(0.60g)。径向层析(5％丙酮/二氯甲烷，硅胶，6m板)得到为白色泡沫的标题化合物(0.42g)。1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.50(d,J=8.5Hz,2H),7.23(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=7.5Hz,1H),6.67(dd,J=7.5,3.4Hz,1H),6.39(d,J=3.4Hz,1H),5.05(m,2H),4.35(d,J=15.4Hz,1H),3.85(m,1H),3.70(s,3H),3.60(m,1H),2.95(m,4H),2.45(dd,J=17.1,5.1Hz,1H)。
制备18
通过对映体选择性合成制备(S)-8-羟基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯a)4-溴代-3-溴代甲基茴香醚
向在无水二氯甲烷(500ml)中的4-溴代-3-甲基茴香醚(100g,497mmol)的搅拌溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(97g,545mmol)，接着加入苯甲酰基过氧化物(6g,25mmol)。将装备有反射器的150瓦泛光灯置于离反应瓶大约12英寸处温和地回流该反应物。24小时后，通过旋转蒸发浓缩反应物至其体积的一半并放置4小时。滤除形成的白色沉淀并用少量二氯甲烷洗涤。浓缩滤液至干燥，用己烷研磨剩余的固体并过滤。真空干燥得到为白色针状的标题化合物(100.25g,72％):GC tR=6.56min(HP 530μm×20m聚甲基硅氧烷柱，He载体流速20ml/min,100℃初始温度，1min初始时间，每10℃/min速率，200℃最终温度，1min最终时间)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=10Hz,1H),6.99(d,J=3Hz,1H),6.73(dd,1H),4.55(s,2H),3.80(s,3H)。b)3-[N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚
向在无水DMSO(50ml)中的4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(35g,125mmol)和无水THF(50ml)的搅拌溶液加入4-三氟甲基苄基胺(30g,171mmol)，接着加入三乙胺(18ml,129mmol)。于室温下搅拌18小时后浓缩反应物，用1N氢氧化钠(250ml)水溶液稀释并用乙醚(2×250ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)，浓缩至干。残留物经硅胶快速层析(10-20％乙酸乙酯/三氯甲烷)得到标题化合物(34.17g,73％):TLC(20％乙酸乙酯/三氯甲烷)Rf0.63；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,J=8.2Hz,2H),7.49(d,J=8.2Hz,2H),7.43(d,J=8.6Hz,1H),6.96(d,J=3.1Hz,1H),6.70(dd,1H),3.86(s,2H),3.84(s,2H),3.79(s,3H),1.75(br s,1H)。c)3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚
向在无水THF(100ml)中的3-[N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(34.17g,91mmol)的搅拌溶液加入二碳酸二叔丁酯(22g,101mmol)，在氩气下将该反应物搅拌18小时(观察到大量的气体发生)。浓缩并硅胶层析(5-10％乙酸乙酯/己烷)得到为澄清油状的标题化合物(41.09g,95％):TLC(硅胶，20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.44；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(d,J=8.3Hz,2H),7.40(d,J=8.3Hz,2H),7.39-7.33(m,2H),6.83和6.72(2s,1H),6.71(dd,1H),4.54和4.50(2s,2H),4.43(s,2H),3.75(s,3H),1.47(s,9H)。d)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基肉桂酸甲酯
将3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(37.08g,78mmol)、丙烯酸甲酯(35ml,390mmol)、乙酸钯(0.88g,3.9mmol)、三-邻-甲苯基膦(2.38g,7.8mol)和二异丙基乙胺(31ml,178mmol)的丙腈(200ml)溶液进行脱氧合作用(3个真空抽出/氩气冲洗周期)，然后在氩气下加热至回流(于80℃油浴)。6小时后，加入乙酸钯(0.88g,3.9mmol)和三-邻-甲苯基膦(2.38g,7.8mol)，然后在回流下再搅拌该反应液18小时。将反应物浓缩至干，使残留物溶于1∶1的乙醚/石油醚(300ml)中并放置4小时。滤除灰色的沉淀，用少量1∶1的乙醚/石油醚(100ml)洗涤。浓缩橙红色的滤液并经硅胶快速层析(15％乙酸乙酯/己烷)纯化。使残留物溶于己烷中，并将混合物静置数小时，然后经过滤除去黄色沉淀。浓缩滤液留下粘稠的黄色油状的标题化合物(34.52g,92％):TLC(硅胶，20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.45；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(br s,1H),7.57(d,J=8.1Hz,2H),7.53(d,J=8.6Hz,1H),7.29(br s,2H),6.83(dd,1H),6.72(br s,1H),6.23(d,J=15.7Hz,1H),4.58和4.53(2br s,2H),4.46和4.37(2br s,2H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),1.49(s,9H)。e)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸甲酯
向10％钯炭(5g,4.7mmol，用DMF预湿)加入2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基肉桂酸甲酯(34.52g,72mmol)的甲醇(100ml)溶液。在Parr装置中氢气(50psi)中振摇该混合物7小时，然后通过celite_垫过滤以除去催化剂，浓缩滤液得到无色油状的标题化合物(34.15g,98％):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J=8.1Hz,2H),7.31(br s,2H),7.09(d,J=8.4Hz,1H),6.76(dd,1H),6.66(s,1H),4.47(br s,2H),4.40(br s,2H),3.76(s,3H),3.63(s,3H),2.79(br s,2H),2.47(t,2H),1.48(s,9H)。f)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸
向2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸(34.15g,71mmol)的二氧六环(150ml)的搅拌溶液加入1N氢氧化钠(85ml,85mmol)水溶液。于室温下搅拌混浊的反应物4小时。用1N盐酸(85ml,85mmol)水溶液中和生成的均匀溶液并用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用盐水(250ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)并浓缩得到粘稠澄清的油状标题化合物(34.60g,100％):TLC(95∶4∶1三氯甲烷/甲醇/乙酸)Rf0.49；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J=8.1Hz,2H),7.30(br s,2H),7.09(d,J=8.4Hz,1H),6.78(dd,1H),6.65(d,J=2.6Hz,1H),4.47(br s,2H),4.42(br s,2H),3.76(s,3H),2.81(br s,2H),2.53(t,2H),1.47(s,9H)。g)(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基(oxazolidinonyl)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酰胺
在氩气下，通过注射器将氰脲酰氟(4.4ml,48mmol)加入到在无水二氯甲烷(200ml)的2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸(34.60g,71mmol)和吡啶(6.9ml,85mmol)的搅拌溶液中。于室温下搅拌反应物4小时。然后将生成的粘稠悬浮液通过celite_垫过滤，用少量的无水二氯甲烷(50ml)洗涤。将澄清的滤液倾入分液漏斗中并用冰冷的水(500ml)洗涤。干燥(硫酸镁)并浓缩留下粗品酰氟(34.70g,100％)，可无需进一步纯化而使用。
于-78℃及氩气下，通过注射器将正丁基锂的己烷(2.5M,30ml,75mmol)加入在无水THF(300ml)中的(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮(13.8g,78mmol)的搅拌溶液中。于-78℃搅拌反应物15分钟，然后通过注射器加入上面的酰氟(34.70g,71mmol)的无水THF(100ml)溶液。于-78℃搅拌反应物1小时，然后用饱和氯化铵溶液使之骤冷，用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。用盐水(400ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)，浓缩至干。经硅胶快速层析(20％乙酸乙酯/己烷)纯化得到为粘稠澄清的油状标题化合物(40.34g,90％):TLC(20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.21；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J=8.1Hz,2H),7.33-7.26(m,5H),7.16(m,3H),6.77(dd,1H),6.67(d,J=2.5Hz,1H),4.62(m,1H),4.60-4.40(m,4H),4.16(m,2H),3.76(s,3H),3.27(dd,1H),3.21-3.10(m,2H),2.88(brs,2H),2.72(dd,1H),1.48(s,9H)。h)(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺
于-78℃通过注射器将双(三甲基硅烷基)氨化锂(70ml,1M在THF中，70mmol)的溶液加入到在无水THF(300ml)的(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酰胺(40.30g,64mmol)的搅拌溶液中。30分钟后，通过注射器加入溴代乙酸甲酯(30ml,317mmol)。于-78℃再经过30分钟后，使该反应物升温至-20℃并再搅拌6小时。用饱和氯化铵溶液使反应物骤冷，用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。用盐水(300ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)，浓缩至干。经硅胶快速层析(20％乙酸乙酯/己烷)纯化得到为白色固体的标题化合物(38.62g,86％):HPLC(Altex UltrasphereTM-Si5u,20％乙酸乙酯/己烷)显示，约20％未烷基化的原料仍存在。粗品反应混合物的HPLC给出反应物90％的de；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(d,J=8.1Hz,2H),7.40-7.11(m,8H),6.71(dd,1H),6.63(d,J=2.7Hz,1H),4.57-4.34(m,6H),4.03(d,J=8.6,1H),3.85(t,1H),3.72(s,3H),3.61(s,3H),3.28(dd,1H),2.90(dd 1H),2.86-2.71(m,2H),2.70(dd,1H),2.44(m,1H),1.48和1.46(2s,9H)。i)(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃，用30分钟将30％过氧化氢(18.9ml)和氢氧化锂·H2O(2.3g,55mmol)的水(62ml)溶液滴加到(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基苄基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺(38.0g,54mmol)的THF(300ml)和水(100ml)的搅拌溶液中。于0℃再搅拌混浊的溶液1小时。于0℃用亚硫酸钠(34.3g,272mmol)的水(175ml)溶液缓慢处理生成的均匀溶液，然后用冰冷的浓盐酸(35ml)的水(150ml)溶液酸化。用乙酸乙酯(2×200ml)萃取该反应物，用盐水(400ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)并浓缩至干。于室温及搅拌下，用在二氧六环(400ml)中的4.0M盐酸处理生成的残留物(观察到有气体缓慢产生)。1小时后，浓缩反应物并从1∶1的三氯甲烷/甲苯(2×)再浓缩，然后将残留物(37.65g)溶于无水DMF(400ml)。于0℃及氩气中，在搅拌下向在Dewar烧瓶中的该溶液加入三乙胺(15.3ml,109mmol)和碳酸氢钠(22.9g,273mmol)，接着加入二苯基膦酰基叠氮化物(13ml,60mmol)。于0℃搅拌24小时后，浓缩反应物至干燥。使残留物溶于乙酸乙酯(400ml)中，顺序用水(300ml)和盐水(300ml)洗涤。干燥(硫酸镁)，浓缩并经硅胶快速层析(35％乙酸乙酯/己烷)得到为澄清粘稠的油状标题化合物(16.87g,74％):TLC(40％乙酸乙酯/己烷)Rf0.50；MS(ES)m/e 422.3(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(d,J=8.1,2H),7.29(d,J=8.1Hz,2H),7.02(d,J=8.5Hz,1H),7.75(dd,1H),6.36(d,J=2.7Hz,1H),5.18(d,J=16.5Hz,1H),4.96(d,J=15.4Hz,1H),4.48(d,J=15.4Hz,1H),3.87(m,1H),3.74(d,J=16.5Hz,1H),3.73(s,3H),3.71(s,3H),3.08(dd,1H),3.02(dd 1H),2.95(dd,1H),2.48(dd,1H)。j)(S)-8-羟基-3-氧代-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于-20℃及氩气下，用30分钟将三溴化硼的二氯甲烷(1.0M,160ml,160mmol)溶液滴加到(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(16.67g,39.6mmol)的无水二氯甲烷(150ml)溶液中。于-15℃至-20℃加入1.5小时后，使反应物冷却至-20℃，通过小心滴加甲醇(160ml)溶液使之骤冷。于-10℃至0℃再搅拌反应物1小时，然后于旋转蒸发器浓缩。从甲醇(2×)中再浓缩残留物。经硅胶快速层析(50-100％乙酸乙酯/己烷)纯化得到为白色固体的标题化合物(14.87g,92％):[α]D-81.8°(c,1.0，甲醇)；TLC(硅胶，50％乙酸乙酯/己烷)Rf0.54；MS(ES)m/e 408.2(M+H)+；1H NMR(400,CDCl3+2％DMSO-d6)δ7.53(d,J=8.1Hz,2H),7.31(d,J=8.1Hz,2H),6.93(d,J=8.4Hz,1H),6.70(dd,1H),6.41(d,J=2.3Hz,1H),5.16(d,J=16.4Hz,1H),5.01(d,J=15.6Hz,1H),4.39(d,J=15.6Hz,1H),3.84(m,1H),3.73(d,J=16.4Hz,1H),3.71(s,3H),3.01(dd,1H),2.98(m 1H),2.90(dd,1H),2.47(dd,1H)。
制备19
(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯对映体的HPLC分离a)(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
通过手性HPLC，使用下列条件：Diacel Chiralcel OJ_柱(21.2×250mm)、甲醇流动相、15ml/min流速、于UV 295mm检测、400mg注入，将(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯拆分为它的对映体；(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=4.9min；(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=6.6min。
制备20
(±)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯对映体的HPLC分离a)(R)-(+)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
通过手性HPLC，使用下列条件：Diacel Chiralcel OD_柱(21.2×250mm)、20％乙醇在己烷中的流动相、10ml/min流速、于UV 254mm检测、100mg注入，将(±)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯拆分为它的对映体；(R)-(+)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=14.4min；(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的tR=18.5min。
制备21
通过对映体选择性合成制备(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
a)4-溴代-3-溴代甲基茴香醚
向在无水二氯甲烷(500ml)中的4-溴代-3-甲基茴香醚(100g,497mmol)的搅拌溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(97g,545mmol)，接着加入苯甲酰基过氧化物(6g,25mmol)。将装备有反射器的150瓦泛光灯置于离反应瓶大约12英寸处温和地回流该反应物。24小时后，通过旋转蒸发浓缩反应物至其体积的一半并放置4小时。滤除形成的白色沉淀并用少量二氯甲烷洗涤。浓缩滤液至干燥，用己烷研磨剩余的固体并过滤。真空干燥得到为白色针状的标题化合物(100.25g,72％):GC tR=6.56min(HP 530μm×20m聚甲基硅氧烷柱，He载体流速20ml/min,100℃初始温度，1min初始时间，每10℃/min速率，200℃最终温度，1min最终时间)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=10Hz,1H),6.99(d,J=3Hz,1H),6.73(dd,1H),4.55(s,2H),3.80(s,3H)。b)3-[N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚
于室温下，将2,2,2-三氟乙胺(24g,242mmol)快速加入4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(33.6g,120mmol)的无水DMSO(125ml)的搅拌溶液中。使该反应物温热至30-35℃。搅拌18小时后，用冰冷的1N氢氧化钠(200ml)水溶液稀释并用乙醚(2×300ml)萃取。用盐水(300ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)，浓缩得到为淡黄色油状的标题化合物(41.35g,96％):TLC(甲苯)Rf0.32；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,J=9Hz,1H),6.97(d,J=3Hz,1H),6.71(dd,1H),3.93(br s,2H),3.80(s,3H),3.18(m,2H),1.86(br s,1H)。c)3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚
向3-[N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(41.35g,137mmol)中加入二碳酸二叔丁酯(36g,165mmol，通过在热水浴中液化)。用少量二氯甲烷(约20ml)冲洗该反应物，并在氩气下于50℃油浴中搅拌18小时(观察到气体缓慢发生)。在真空下通过旋转蒸发浓缩后，用己烷(100ml)稀释生成的残留物，用少量纯净的固体产物(通过硅胶层析前述的反应物，用10％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂获得)接种该溶液。允许该混合物于室温下静置数小时，然后放置冰箱过夜。通过抽吸过滤收集产物并用己烷洗涤。真空干燥得到为无色固体的标题化合物(48.54g,88％):TLC(10％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.52；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=9Hz,1H),6.75(dd,1H),6.71(s,1H),4.65和4.58(2s,2H),3.90和3.78(2m,2H),3.77(s,3H),1.51和1.42(2s,9H)。d)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基肉桂酸甲酯
将3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(48.19g,121mmol)、丙烯酸甲酯(55ml,605mmol)、乙酸钯(1.36g,6.1mmol)、三-邻-甲苯基膦(3.69g,12mol)和二异丙基乙胺(49ml,278mmol)的丙腈(200ml)溶液进行脱氧合作用(3个真空抽出/氩气冲洗周期)，然后在氩气下于80℃油浴加热至回流。6小时后，加入乙酸钯(1.36g,6.1mmol)和三-邻-甲苯基膦(3.69g,12mol)，然后在回流下再搅拌18小时。将反应物浓缩至干，使残留物溶于1∶1的乙醚/石油醚(300ml)中并放置4小时。滤除灰色的沉淀，用少量1∶1的乙醚/石油醚(约100ml)洗涤。浓缩橙红色的滤液并经硅胶快速层析(15％乙酸乙酯/己烷)纯化。使残留物溶于己烷中，并将混合物静置2小时，然后经过滤除去黄色沉淀。浓缩滤液留下黄色油状的标题化合物(45.85g,94％):TLC(20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.50；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.84(d,J=16Hz,1H),7.57(d,J=9Hz,1H),6.86(dd,1H),6.74和6.72(2s,1H),6.26(d,J=16Hz,1H),4.74和4.70(2s,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.80和3.66(2m,2H),1.51和1.45(2s,9H)。e)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸甲酯
向10％钯炭(5g,4.7mmol，用DMF预湿)加入2-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-甲氧基肉桂酸甲酯(45.85g,113mmol)的甲醇(100ml)溶液。在Parr装置中氢气(50psi)中振摇该混合物6小时，然后通过celite_垫过滤以除去催化剂，浓缩滤液得到无色油状的标题化合物(43.71g,95％):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.11(d,J=8Hz,1H),6.78(dd,1H),6.65(s,1H),4.63和4.60(2s,2H),3.84和3.70(2m,2H),3.77(s,3H),3.66(s,3H),2.86(t,2H),2.53(t,2H),1.50和1.44(2s,9H)。f)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸
向2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸甲酯(43.71g,108mmol)的二氧六环(200ml)的搅拌溶液加入1N氢氧化钠(130ml,130mmol)水溶液。于室温下搅拌混浊的反应物4小时。用1N盐酸(130ml,130mmol)中和生成的均匀溶液并用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用盐水(250ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)并浓缩得到粘稠澄清的油状标题化合物(45.01g,100％):TLC(95∶4∶1三氯甲烷，甲醇，乙酸)Rf0.49。g)(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酰胺
在氩气下，通过注射器将氰脲酰氟(6.8ml.74mmol)加入到在无水二氯甲烷(400ml)的2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酸(45.0g,108mmol)和吡啶(10ml,124mmol)的搅拌溶液中。于室温下搅拌反应物4小时。然后将生成的粘稠悬浮液通过celite_垫过滤，用少量的无水二氯甲烷(50ml)洗涤滤垫。将澄清的滤液倾入分液漏斗中并用冰冷的水(750ml)洗涤。干燥(硫酸镁)并浓缩留下粗品酰氟(43.32g,100％)，可无需进一步纯化而使用。
于-78℃及氩气下，通过注射器将正丁基锂的己烷(2.5M,113mmol)溶液加入在无水THF(400ml)中的(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮(21g,119mmol)的搅拌溶液中。于-78℃搅拌反应物15分钟，然后通过注射器加入上面的酰氟(43.32g,108mmol)的无水THF(100ml)溶液。于-78℃搅拌反应物1小时，然后用饱和氯化铵溶液使之骤冷，用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用盐水(500ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)，浓缩至干。经硅胶快速层析(20％乙酸乙酯/己烷)纯化得到为粘稠澄清的油状标题化合物(52.27g,91％):TLC(硅胶，20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.24；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.26(m,3H),7.19-7.16(m,3H),6.78(dd,1H),6.67(s,1H),4.68-4.63(m,3H),4.21-4.11(m,2H),3.87和3.74(2m,2H),3.77(s,3H),3.28(dd,1H),3.17(m,2H),2.93(m,2H),2.75(dd,1H),1.50和1.45(2s,9H)。h)(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺
于-78℃通过注射器将双(三甲基硅烷基)氨化锂(115ml,1M在THF中，115mmol)的溶液加入到在无水THF(300ml)的(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氢肉桂酰胺(55.2g,100mmol)的搅拌溶液中。30分钟后，通过注射器加入溴代乙酸甲酯(47ml,497mmol)。于-78℃再经过30分钟后，使该反应物升温至-20℃并再搅拌6小时。用饱和氯化铵溶液(400ml)使反应物骤冷，用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用盐水(400ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)，浓缩至干。经硅胶快速层析(20％乙酸乙酯/己烷)纯化得到为白色固体的标题化合物(52.44g,75％):HPLC(AltexUltrasphereTM-Si 5u,20％乙酸乙酯/己烷)显示，约6-7％未烷基化的原料仍存在。粗品反应混合物的HPLC给出反应物86％的de；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35-7.13(m,6H),6.73(dd,1H),6.64(s,1H),4.69-4.53(m,4H),4.04(d,1H),3.87(t,1H),3.85-3.72(m,2H),3.75(s,3H),3.64(s,3H),3.31(dd,1H),2.95(dd 1H),2.92-2.71(m,2H),2.71(dd,1H),2.50(m,1H),1.50和1.47(2br s,9H)。i)(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃，用30分钟将30％过氧化氢(26ml)和氢氧化锂·H2O(3.2g,75mmol)的水(85ml)溶液滴加到(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基]-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺(52.40g,75mmol)的THF(300ml)和水(100ml)的搅拌溶液中。于0℃再搅拌混浊的溶液1小时。于0℃用亚硫酸钠(46g,365mmol)的水(240ml)溶液缓慢处理生成的均匀溶液，然后用冰冷的浓盐酸(45ml)的水(200ml)溶液酸化。用乙酸乙酯(2×300ml)萃取该反应物，用盐水(600ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)并浓缩至干。于室温及搅拌下，用在二氧六环(500ml)中的4.0M盐酸处理生成的残留物(观察到有气体缓慢产生)。1小时后，浓缩反应物并从1∶1的三氯甲烷/甲苯(2×)再浓缩，然后将残留物(48.89g)溶于无水DMF(500ml)。于0℃及氩气中，在搅拌下向在Dewar烧瓶中的该溶液加入三乙胺(21ml,150mmol)和碳酸氢钠(31.5g,375mmol)，接着加入二苯基膦酰基叠氮化物(18ml,83.5mmol)。于0℃搅拌24小时后，浓缩反应物至干燥。使残留物溶于乙酸乙酯(500ml)中，顺序用水(400ml)和盐水(400ml)洗涤。干燥(硫酸镁)，浓缩并经硅胶快速层析(30％乙酸乙酯/己烷)得到为澄清粘稠的油状标题化合物(21.81g,84％):[α]D-132.6°(c,1.0，甲醇)，TLC(40％乙酸乙酯/己烷)Rf0.56；手性HPLC(Chiracel OD,20％乙醇/己烷)k’=2.05；得自具有k’=1.86(未检测出)的外消旋体标准品的相对对映体；MS(ES)m/e 346.2(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(d,J=8.5Hz,1H),6.79(dd,1H),6.61(d,J=2.6Hz,1H),5.35(d,J=16.7Hz,1H),4.17(m,1H),4.0(m,1H),3.99(d,J=16.7Hz,1H),3.84(m,1H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),3.01(m,2H),2.91(dd,1H),2.47(dd,1H)。C16H18F3NO4的分析计算值：C,55.65；H,5.25；N,4.06。实测值：C,55.62；H,5.27；N,4.04。j)(S)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于-20℃及氩气下，用30分钟将三溴化硼的二氯甲烷(1.0M,250ml,250mmol)滴加到(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(21.5g,62.3mmol)的无水二氯甲烷(230ml)溶液中。加入1.5小时后，于-15℃至-20℃使反应物冷却至-20℃，通过小心滴加甲醇(250ml)溶液使之骤冷。于-10℃至0℃再搅拌反应物1小时，然后于旋转蒸发器浓缩。从甲醇(2×)中再浓缩残留物。经硅胶快速层析(50％乙酸乙酯/己烷)纯化得到为白色固体的标题化合物(19.38g,94％):[α]D-130.5°(c1.0，甲醇)；TLC(硅胶，40％乙酸乙酯/己烷)Rf0.40；MS(ES)m/e 332.1(M+H)+；1H NMR(400,CDCl3+2％DMSO-d6)δ6.92(d,J=8.3Hz,1H),6.71(dd,1H),6.58(d,J=2.5Hz,1H),5.29(d,J=16.7Hz,1H),4.21-3.98(m,2H),3.96(d,J=16.7Hz,1H),3.82(m,1H),3.68(s,3H),2.98(dd,1H),2.94(dd,1H),2.83(dd,1H),2.46(dd,1H)。C15H16F3NO4的分析计算值：C,54.38；H,4.87；N,4.23。实测值：C,54.40；H,4.96；N,4.22。
制备22
通过对映体选择性合成制备(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯a)3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚
于室温下，将2-苯乙胺(19.0ml,150.0mmol)全部一次性加入在干燥THF(200ml)中的4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(14.0g,50.0mmol)中。在18小时后，浓缩混合物，使残留物溶于2M氢氧化钠(300ml)中，用CH2Cl2(3×200ml)萃取。经硫酸镁干燥合并的二氯甲烷层，粗产物通过硅胶塞过滤，用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂。减压浓缩滤液得到黄色油状物：MS(ES)m/e 320(M+H)+。
将上述黄色油状物溶于无水THF(200ml)中，于室温下，一次性加入二碳酸二叔丁酯(13.0g,60.0mmol)。1小时后浓缩滤液。硅胶快速层析(10％乙酸乙酯/己烷)得到灰白色固体标题化合物(20.8g，自4-溴代-3-溴代甲基茴香醚的100％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.51-7.10(m,6H),6.85-6.60(m,2H),4.52-4.33(m,2H),3.71(s,3H),3.52-3.31(m,2H),2.92-2.73(m,2H),1.61-1.33(m,9H)。b)4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丙酸
将在丙腈(250ml)中的3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚(20.0g,48.0mmol)、丙烯酸苄酯(23.0g,144mmol)、乙酸钯(540mg,2.40mmol)、三-邻-甲苯基膦(1.46g,4.80mol)和二异丙基乙胺(17.0ml,96.0mmol)的溶液进行脱氧合作用(3个真空抽出/氩气冲洗周期)，然后在氩气下加热至回流，48小时后使该反应物冷却至室温，通过celite_垫过滤，并浓缩，硅胶快速层析(10％乙酸乙酯/己烷)得到黄色油状物，使其溶解于10％乙酸乙酯/己烷(100ml)中，并于4℃放置72小时。通过过滤除去黄色沉淀，然后浓缩溶液得到淡黄色油状物(14.98g,62％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ8.00-7.85(m,1H),7.61-7.01(m,11H),6.85-6.76(m,2H),6.75-6.67(m,1H),6.32(m,1H),5.22(s,2H),4.60-4.41(m,2H),3.75(s,3H),3.52-3.20(m,2H),2.93-2.71(m,2H),1.55-1.33(m,9H)。
于0℃将上面所获油状物溶于甲醇(150ml)中，加入10％钯炭(6.40g,6.00mmol)。将该混合物温热至室温，在氢气(50psi)下振摇7小时，然后通过celite_垫过滤以除去催化剂，减压浓缩滤液得到为黄色粘稠的油状标题化合物(10.35g,83％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.35-7.02(m,6H),6.85-6.76(m,2H),6.75-6.73(m,1H),6.69-6.68(m,1H),4.42-4.25(m,2H),3.73(s,3H),3.44-3.25(m,2H),2.92-2.73(m,4H),2.59-2.50(m,2H),1.60-1.33(m,9H)。c)(R)-1,1-二甲基乙基[[5-甲氧基-2-[3-氧代-3-[2-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷酮基]丙基]苯基]甲基](2-苯基乙基]氨基甲酸酯
于室温下，向4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丙酸(10.35g,25.0mmol)的二氯甲烷(125ml)溶液加入吡啶(2.4ml,30.0mmol)，然后加入氰脲酰氟(1.4ml,15.0mmol)。2小时后，通过celite_垫过滤该混合物，用水(100ml)和盐水(100ml)顺序洗涤，经硫酸镁干燥，并浓缩。
于-78℃，将正丁基锂(11.0ml,2.5M在己烷中的溶液，27.5mmol)加入在无水THF(125ml)中的(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮(5.30g,30mmol)的溶液中。15分钟后，用5分钟滴加上述的酰氟的无水THF(25ml)溶液。1小时后，将该混合物倾入300ml水中并用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。用硫酸镁干燥合并的乙酸乙酯层并浓缩。硅胶快速层析(30％乙酸乙酯/己烷)得到粘稠的油状标题化合物(12.12g,85％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.41-7.12(m,11H),6.65(m,1H),6.60(m,1H),4.70-4.62(m,1H),4.50-4.35(m,2H),4.21-4.10(m,2H),3.71(s,3H),3.50-2.61(m,10H),1.55-1.41(m,9H)。d)[R-(R*,S*)]-β-[[4-甲氧基-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基](2-苯基乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-γ-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷丁酸甲酯
于-78℃，将双(三甲基硅烷基)氨化锂(22.0ml,1M在THF中，22.0mmol)加入到在无水THF(100ml)的(R)-1,1-二甲基乙基[[5-甲氧基-2-[3-氧代-3-[2-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷酮基]丙基]苯基]甲基](2-苯基乙基]氨基甲酸酯(12.12g,21.0mmol)的溶液中。15分钟后，加入溴代乙酸甲酯(9.9ml,105mmol)，然后使该混合物升温至-20℃。3小时后，将该混合物倾入200ml水中，用乙酸乙酯(3×500ml)萃取。用硫酸镁干燥合并的乙酸乙酯层并浓缩。经硅胶快速层析(25％乙酸乙酯/己烷)得到9.91g分别为标题化合物和(R)-1,1-二甲基乙基[[5-甲氧基-2-[3-氧代-3-[2-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷酮基]丙基]苯基]甲基](2-苯基乙基]氨基甲酸酯的3∶2的混合物(HPLC,20％乙酸乙酯/己烷)。该混合物无需进一步纯化而使用：MS(ES)m/e 667(M+Na)+。e)(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃，用10分钟将氢氧化锂一水合物(646mg,15.4mmol)和过氧化氢(5.2ml,30％在水中，46.2mmol)的水(25ml)溶液加入[R-(R*,S*)]-β-[[4-甲氧基-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基](2-苯基乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-γ-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷丁酸甲酯(9.91g,15.4mmol)的THF(75ml)的溶液中。1.5小时后，加入亚硫酸钠(9.7g,77mmol)的水(100ml)溶液。用2M盐酸(35ml)使该混合物酸化至pH4，用乙酸乙酯(3×200ml)萃取，用硫酸镁干燥合并的乙酸乙酯层并浓缩。使生成的残留物溶解于二氧六环(75ml)中的4.0M盐酸中。45分钟后，浓缩该反应物并从甲苯(200ml)再浓缩。
使上述的残留物溶于无水DMF(75ml)。于室温下，向该溶液加入碳酸氢钠(6.50g,770mmol)和三乙胺(4.3ml,30.8mmol)。将该混合物冷却至0℃，加入二苯基膦酰基叠氮化物(5ml,23.1mmol)。16小时后浓缩该混合物，使生成的糊状物溶于乙酸乙酯(500ml)中，用水(2×300ml)洗涤。经硫酸镁干燥，并浓缩。硅胶快速层析(40％乙酸乙酯/己烷)得到为澄清油状物的标题化合物(2.61g,33％得自[R-(R*,S*)]-β-[[4-甲氧基-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基](2-苯基乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-γ-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷丁酸甲酯)：MS(ES)m/e 390(M+Na)+。f)(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于-20℃，将三溴化硼(21.3ml,1M在二氯甲烷中，21.3mmol)加入(S)-8-甲氨基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(2.61g,7.1mmol)的无水二氯甲烷(40ml)溶液中。45分钟后，用甲醇(200ml)使该混合物骤冷并浓缩。通过硅胶塞过滤残留物，用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂。使生成的橙色固体从甲醇/水中重结晶得到为灰白色固体的标题化合物(2.16g,81％):MS(ES)m/e 376(M+Na)+。
实施例1
(±)-8-[3-(2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-(2-(N-氧代吡啶基)氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温、氩气中，将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(1.4g,8mmol)的无水DMF(8ml)溶液滴加到(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(1.7g,7mmol)、三苯膦(2.76g,11mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(2.33ml,14mmol)的无水DMF(4ml)和无水THF(10ml)的溶液中。搅拌生成的溶液18小时，然后真空浓缩。硅胶层析(2％-10％甲醇/二氯甲烷)得到标题化合物(1.2g):MS(ES)m/e400.2(M+H)+。还回收未反应的(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.4g)。b)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯
将(±)-8-[3-(2-氧代吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(1.2g,3mmol)、1.2g 10％钯炭(1.2g)、环己烷(3ml,15mmol)和乙醇(20ml)的混合物于回流下加热18小时。过滤该混合物并浓缩滤液。残留物经硅胶层析(2％-5％甲醇/二氯甲烷)纯化得到为白色泡沫物的标题化合物(0.72g,64％):MS(ES)m/e 398.2(M+H)+。c)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于室温下，将(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯(0.7g,2mmol)、氢氧化锂一水合物(0.12g,3mmol)、5ml THF(5ml)、水(5ml)和甲醇(2ml)的混合物搅拌18小时并浓缩。使残留物在乙酸乙酯和水中分配，分离各层。用3N盐酸小心使水相pH调至4，允许静置。过滤收集生成的晶体并干燥得到为褐色固体的标题化合物(0.4g,65％):MS m/e 370.4(M+H)+。C20H23N3O4·0.25H2O的分析计算值：C,64.25；H,6.34；N,11.24。实测值：C,64.02；H,6.37；N,11.20。
实施例2
(±)-8-[3-(4-氨基-2吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为橙色泡沫物的标题化合物：MS(ES)m/e 445.2(M+H)+。b)(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为白色泡沫物的标题化合物：MS(ES)m/e399.3(M+H)+。c)(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。C20H24N4O4·1.25H2O的分析计算值：C,59.03；H,6.56；N,13.76。实测值：C,58.80；H,6.49；N,13.62。
实施例3
(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[2-(4-甲氧基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲氧基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为无色油状的标题化合物：MS(ES)m/e 430.3(M+H)+。b)(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[2-(4-甲氧基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为淡黄色油状的标题化合物：MS(ES)m/e 414.4(M+H)+。c)(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为灰白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 400.3(M+H)+。C21H25N3O5·0.75H2O的分析计算值：C,61.08；H,6.47；N,10.18。实测值：C,61.15；H,6.20；N,10.12。
实施例4
(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-(2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温下，将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(253.3mg,1.5mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.24ml,1.5mmol)的无水DMF(7.5ml)溶液缓慢滴加到(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(197.5mg,0.75mmol)和三苯膦(413.1g,1.58mmol)的无水DMF(7.5ml)的溶液中。加入需要15分钟，为温和的放热反应。2小时后，浓缩反应物并从二甲苯再浓缩残留物。硅胶层析(2∶2∶1乙酸乙酯/三氯甲烷/甲醇)得到Rf0.48(TLC在2∶2∶1乙酸乙酯/三氯甲烷/甲醇中)的物质，为混浊，几乎无色的油状物。该物质经硅胶再层析(无水乙醇)获得为灰白色泡沫状的标题化合物(243.9mg,79％):TLC(无水乙醇)Rf0.33；1H NMR(250,CDCl3)δ8.12(app.dd,1H),7.10-7.23(m,1H),6.90-7.10(m,2H),6.78(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.45-6.72(m,3H),5.28(d,J=16.3Hz,1H),3.95-4.25(m,2H),3.60-3.90(m,1H),3.76(d,J=16.3Hz,1H),3.71(s,3H),3.51(q,J=6.4Hz,2H),2.73-3.15(m,3H),3.04(s,3H),2.41(dd,J=16.7,5.4Hz,1H),2.05-2.28(m,2H),MS(ES)m/e 414(M+H)+。
b)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯将(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(243.9mg,0.59mmol)、环己烯(0.60ml,59mmol)和10％钯炭(63g,0.06mmol)在2-丙醇(6ml)中的混合物于回流下加热。21.5小时后，使该反应物冷却至室温，通过celite_过滤。浓缩滤液，残留物从甲苯中再浓缩。硅胶层析(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)纯化得到无色油状的标题化合物(212.8mg,91％):TLC(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)Rf0.39；1H NMR(250,CDCl3)δ8.03-8.13(m,1H),7.35-7.48(m,1H),7.00(d,J=8.4Hz,1H),6.77(dd,J=8.4,2.5Hz,1H),6.63(d,J=2.5Hz,1H),6.52-6.62(m,1H),6.40(d,J=8.5Hz,1H),5.27(d,J=16.3Hz,1H),4.62-4.82(m,1H),3.95-4.20(m,2H),3.60-3.90(m,2H),3.71(s,3H),3.50(q,J=6.3Hz,2H),2.75-3.15(m,3H),3.03(s,3H),2.40(dd,J=16.7,5.3Hz,1H),2.00-2.22(m,2H),MS(ES)m/e 398(M+H)+。c)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于室温下，将1.0N氢氧化锂(0.80ml,0.80mmol)加入在THF(2.6ml)和水(1.8ml)中的(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(207.5mg,0.52mmol)的溶液中。起初混浊的溶液在1分钟内变得均一。18小时后，用TFA(0.12ml,1.56mmol)酸化该反应物并浓缩。ODS层析(含有1％TFA的20％乙腈/水)、浓缩并冻干得到为淡黄色吸湿固体的标题化合物(252.4g,83％):HPLC(PRP-1_，含有1％TFA的20％乙腈/水)K’=2.4；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.93(m,1H),7.76-7.83(m,1H),7.00-7.11(m,2H),6.83-6.91(m,1H),6.80(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.76(d,J=2.6Hz,1H),5.30(d,J=16.5Hz,1H),4.05-4.18(m,2H),3.94(d,J=16.5Hz,1H),3.77-3.90(m,1H),3.57(t,J=6.8Hz,2H),3.03(dd,J=17.0,4.2Hz,1H),2.99(s,3H),2.83(dd,J=17.0,9.1Hz,1H),2.72(dd,J=17.0,13.5Hz,1H),2.44(dd,J=17.0,4.7Hz,1H),2.11-2.23(m,2H),MS(ES)m/e384(M+H)+·C21H25N3O4·1.5CF3CO2H·1.5H2O的分析计算值：C,49.57；H,5.11；N,7.23。实测值：C,49.65；H,4.95；N,7.15。
实施例5
(±)-8-[3-(2-咪唑基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备
通常按照实施例1-4中详述的方法制备标题化合物。
实施例6
(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-四氢嘧啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温在氩气下，将3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙醇(0.14g,0.8mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.13ml,0.8mmol)的无水DMF(2ml)溶液滴加到(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.10g,0.4mmol)和三苯膦(0.21g,0.8mmol)的无水DMF(1.4ml)和无水THF(2ml)的溶液中。搅拌生成的溶液18小时，然后真空浓缩。硅胶层析(1％-3％甲醇/二氯甲烷)得到标题化合物(0.11g):MS(ES)m/e 407.3(M+H)+。b)(±)-8-(3-氨基-1-丙氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，三氟乙酸盐
于0℃、氩气中，将(±)-8-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-苄氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.70g)的二氯甲烷(7ml)和TFA(2ml)的溶液搅拌1小时，然后浓缩得到为无色玻璃状的标题化合物(0.75g,100％):MS(ES)m/e 321.4(M+H)+。c)(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(±)-8-(3-氨基-1-丙氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的三氟乙酸盐(0.75g,2mmol)、2-溴代嘧啶(0.5g,3mmol)、碳酸氢钠(1.4g,17ml)和乙醇(10ml)的混合物加热至回流。24小时后，过滤该混合物，用甲醇洗涤不溶性物质。合并滤液和洗液并浓缩，残留物经硅胶层析(1％-6％甲醇/二氯甲烷)得到白色泡沫状的标题化合物(0.54g,82％):MS(ES)m/e 385.5(M+H)+。d)(±)-8-[3-[(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
在氢气囊鼓气下，搅拌(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.36g,0.94mmol)、在二氧六环(0.25ml,1mmol)中的4.0M盐酸、10％钯炭(0.24g,0.24mmol)和甲醇(5ml)的混合物。18小时后，过滤该混合物并浓缩滤液，使残留物在乙酸乙酯和碳酸钾的水溶液之间分配。沉淀固体，过滤收集并干燥得到为白色固体的标题化合物：MSm/e 375.4(M+H)+。C19H26N4O4·2.5H2O的分析计算值：C,54.40；H,7.45；N,13.35。实测值：C,54.68；H,7.12；N,13.39。
实施例7
(±)-8-[2-[6-(氨基-2-吡啶氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_4-乙酸的制备
通常按照实施例1-4中详述的方法制备标题化合物。
实施例8
(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶基]乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸a)(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用6-(甲基氨基)-2-吡啶基乙醇代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为白色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 384(M+H)+。b)(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶基氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 370(M+H)+。
实施例9
(±)-8-[2-(2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用(2-苯并咪唑-2-基)-1-乙醇代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为灰白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 394.4(M+H)+,416.3(M+Na)+。b)(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色粉末的标题化合物：MS(ES)m/e 380.4(M+H)+,402.3(M+Na)+。
实施例10
(±)-8-[2-(4-氮杂-2-苯并咪唑基)-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备
通常按照实施例9中详述的方法制备标题化合物。
实施例11
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温下，用3-4分钟将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(252.3mg,1.5mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.24ml,1.5mmol)的无水DMF(7.5ml)溶液缓慢滴加到(±)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(248.5mg,0.75mmol)和三苯膦(413.1g,1.58mmol)的无水DMF(7.5ml)的溶液中。17小时后，浓缩反应物并从二甲苯/氯仿中再浓缩残留物。硅胶层析(梯度：乙酸乙酯(500ml)，然后5％甲醇/氯仿)获得为灰白色泡沫状的标题化合物(253.6mg,70％):1H NMR(250,CDCl3)δ8.11(dd,J=6.4,1.4Hz,1H),7.10-7.23(m,1H),6.93-7.10(m,2H),6.81(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.45-6.70(m,3H),5.34(d,J=16.7Hz,1H),3.75-4.30(m,6H),3.71(s,3H),3.51(q,J=6.4Hz,2H),2.80-3.15(m,3H),2.46(dd,J=16.8,5.5Hz,1H),2.07-2.28(m,2H),MS(ES)m/e 482.2(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(253.6mg,0.53mmol)、环己烯(0.54ml,5.3mmol)和钯黑(11.3g,0.11mmol)和异丙醇(5.3ml)的混合物于回流下加热。半小时后，加入10％钯炭(28.2mg,0.03mmol)，14.5小时后，加入钯黑(11.3mg,0.11mmol)和环己烯(0.27ml,2.65mmol)。加入48小时后，通过celite_热过滤该反应物，用热的1∶1的甲醇/氯仿洗涤滤垫。浓缩并从二甲苯中再浓缩滤液留下黄色油状物。硅胶层析(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)得到淡黄色油状的标题化合物(194.0mg,79％):TLC(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)Rf0.53；1H NMR(250,CDCl3)δ8.08(dd,J=5.0,1.0Hz,1H),7.37-7.48(m,1H),7.02(d,J=8.4Hz,1H),6.79(dd,J=8.4,2.5Hz,1H),6.63(d,J=2.5Hz,1H),6.52-6.62(m,1H),6.40(d,J=8.4Hz,1H),5.34(d,J=16.6Hz,1H),4.60-4.80(m,1H),3.75-4.30(m,6H),3.71(s,3H),3.50(q,J=6.4Hz,2H),2.80-3.15(m,3H),2.46(dd,J=16.8,5.4Hz,1H),2.00-2.25(m,2H),MS(ES)m/e 466(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于室温下，将1.0N氢氧化锂(0.44ml,0.44mmol)加入在THF(1.7ml)和水(1.3ml)中的(±)-8-[3-(2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(159.5mg,0.34mmol)的溶液中。该黄色的混浊反应液在10分钟内变得均一。24小时后，浓缩该反应物至干燥，使残留物溶于水(4ml)中。过滤溶液，然后小心用1.0当量盐酸中和(pH≈7)。收集沉淀，用大量的水洗涤，于40-45℃高真空干燥提供灰白色固体的标题化合物(130.0g,83％):HPLC(PRP-1_，含有0.1％TFA的25％乙腈/水)K’=3.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91-8.00(m,1H),7.28-7.40(m,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.76-6.87(m,2H),6.51-6.60(m,1H),6.39-6.50(m,2H),5.30(d,J=16.6Hz,1H),4.10-4.30(m,3H),4.02(t,J=6.3Hz,1H),3.70-3.82(m,1H),3.20-3.45(m,2H，由残留溶剂的信号部分掩蔽)，2.99(dd,1H),2.59-2.74(m,2H),2.39(dd,J=16.9,4.8Hz,1H),1.90-2.03(m,2H)；MS(ES)m/e 452(M+H)+。C22H24F3N3O4·0.5H2O的分析计算值：C,57.39；H,5.47；N,9.13。实测值：C,57.39；H,5.18；N,9.00。
实施例12
(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-(4.6-二甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4.6-二甲基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为白色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 442.3(M+Na)+。b)(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-(4.6-二甲基-1-氧代-吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为淡黄色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 426.3(M+H)+。c)(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e412.2(M+H)+。C23H29N3O4·0.5HCl·0.25H2O的分析计算值：C,63.62；H,6.96；N,9.68。实测值：C,63.62；H,6.96；N,9.69。
实施例13
(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-(2-氨基噻唑-4-基)乙醇(WO95/32710)代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为白色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 390(M+H)+。b)(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶基氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 376(M+H)+。C18H21N3O4S·1.3CF3CO2H·0.36H2O的分析计算值：C,46.62；H,4.38；N,7.93。实测值：C,46.45；H,4.57；N,8.27。
实施例14
(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸a)(±)-8-[3-(4-硝基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物且用(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物：MS(ES)m/e 459(M+H)+。b)(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-(4-硝基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(4-硝基-N-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为白色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 413(M+H)+。c)(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 399(M+H)+。C21H26N4O4·1.5CF3CO2H·0.125H2O的分析计算值：C,50.62；H,4.91；N,9.83。实测值：C,50.63；H,5.26；N,9.90。
实施例15
(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备
于室温下，将(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.071g,0.18mmol)和氢氧化锂一水合物(0.009g,2mmol)的THF(5ml)和水(2ml)混合物搅拌18小时，然后浓缩。使残留物溶于水中，用3N盐酸将水相pH调至4。过滤收集生成的固体并干燥得到为白色固体的标题化合物(0.05g,73％):MS m/e371.4(M+H)+。C19H22N4O4·0.5H2O的分析计算值：C,60.15；H,6.11；N,14.77。实测值：C,60.14；H,6.06；N,14.71。
实施例16
(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[2-(4-硝基-1-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为橙色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 445.3(M+H)+。b)(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(R)-8-[3-[2-(4-氨基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为白色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 399.4(M+H)+。c)(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为灰白色固体的标题化合物：[2]D 23+74.97°(C1.45，甲醇)；MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。C20H24N4O4·HCl·1.5H2O的分析计算值：C,53.63；H,6.30；N,12.50。实测值：C,53.87；H,6.13；N,12.42。
实施例17
(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-8-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制备为橙色泡沫物的标题化合物：MS(ES)m/e 445.3(M+H)+。b)(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(S)-8-[3-[2-(4-氨基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为白色泡沫物的标题化合物：MS(ES)m/e 399.4(M+H)+。c)(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色固体的标题化合物：[α]D 23-77.5°(C 1.45，甲醇)；MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。C20H24N4O4·1.125H2O的分析计算值：C,59.36；H,6.54；N,13.84。实测值：C,59.31；H,6.74；N,13.73。
实施例18
(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯的制备a)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯
将(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸(0.27g,0.7mmol)和在二氧六环(0.2ml,8mmol)中的4M盐酸的乙醇(10ml)溶液加热至回流。72小时后，浓缩反应物，使残留物在乙酸乙酯和碳酸钾水溶液之间分配。用盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)并浓缩。将残留物溶于甲苯(5ml)和三乙胺(0.35ml,2.5mmol)，加热生成的溶液至回流。18小时后，真空浓缩该反应物得到为褐色泡沫状的标题化合物(0.20g,69％):MS(ES)m/e 413.4(M+H)+。C22H28N4O4·0.25H2O的分析计算值：C,63.37；H,6.89；N,13.44。实测值：C,63.32；H,7.17；N,13.05。
实施例19
(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙醇代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物且用(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为无色油状的标题化合物：MS(ES)m/e 500.3(M+H)+。b)(±)-8-[3-氨基-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温下，在氢气囊鼓气时，搅拌(±)-8-[3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(1.4g,3mmol)、10％钯炭(0.55g,0.6mmol)和乙醇(20ml)的混合物。18小时后，过滤该混合物并浓缩滤液得到为褐色固体的标题化合物(0.89g,99％):MS(ES)m/e 321.4(M+H)+。c)(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
在氩气下，将(±)-8-[3-氨基-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.3g,1mmol)、2-甲基硫代咪唑琳(0.46g,2mmol)、二异丙基乙胺(0.42ml,2mmol)和二甲基乙酰胺(3ml)的混合物加热至100℃。2小时后，真空浓缩反应物，使残留物在氯仿和水之间分配。干燥(硫酸镁)有机相并浓缩。使残留物经制备性HPLC纯化得到为黄色油状的标题化合物(0.24g,51％):MS(ES)m/e 389.4(M+H)+。d)(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法皂化(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯。经制备性HPLC纯化得到为白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 375.4(M+H)+。C21H26N4O4·1.96CF3CO2H的分析计算值：C,46.08；H,4.73；N,9.39。实测值：C,46.37；H,4.53；N,9.01。
制备20
(±)-8-[3-(4,5,6,7-四氢-1H-2-二氮杂_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[(2-二氮杂_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例19(c)的方法，但用2-甲基硫代-1,3-二氮杂_代替2-甲基硫代咪唑琳，制备标题化合物：MS(ES)m/e 417.4(M+H)+。b)(±)-8-[3-[(2-二氮杂_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例19(d)的方法，但用(±)-8-[3-[(2-二氮杂_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯制备标题化合物：MS(ES)m/e 403.4(M+H)+。
实施例21
(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，并用(±)-3-氧代-8-羟基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羟基(±)-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物：MS(ES)m/e 496.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物：MS(ES)m/e 480.2(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为灰白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。C23H26F3N3O4·0.5H2O的分析计算值：C,58.22；H,5.74；N,8.86。实测值：C,58.54；H,5.58；N,8.64。
实施例22
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备为白色泡沫状的标题化合物：MS(ES)m/e 484.4(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[N-(吡啶-2-基)N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色粉末的标题化合物：MS(ES)m/e470.4(M+H)+。C25H30NaN3O6·3.25H2O的分析计算值：C,54.59；H,6.69；N,7.64。实测值：C,54.47；H,6.32；N,7.95。
实施例23
(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[N-(1-氧代嘧啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为白色粉末的标题化合物：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.6-8.3(m,8H),3.7-4.6(m,3H),3.3-3.6(m,5H),1.8-3.0(m,5H),1.6(s,6H),1.3(s,3H)；MS(ES)m/e 486.4(M+H)+。
实施例24
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备
a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.4g,0.8mmol)的DMF(5ml)冷却至-20℃(四氯甲烷/干冰浴)，滴加(TMS)2NLi(1.0M的THF溶液，0.9ml,0.9mmol)。10分钟后，加入4-三氟甲基苄基溴(0.211g,0.88mmol)的DMF(0.5ml)的溶液。于-20℃及氩气下，搅拌该溶液10分钟，然后于室温下搅拌18小时。浓缩溶液，使残留物溶于乙酸乙酯中并用5％碳酸氢钠(2×)、水(1×)、5％柠檬酸(2×)、水(1×)和盐水(1×)顺序洗涤。干燥(硫酸镁)乙酸乙酯层并浓缩得到标题化合物(0.42g,80％):MS(ES)m/e 658.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为澄清油状的标题化合物(0.321g,78％):MS(ES)m/e 642.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶基氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备为灰白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 628.4(M+H)+。C33H36F3N3O6·0.5H2O的分析计算值：C,62.25；H,5.86；N,6.60。实测值：C,62.01；H,5.92；N,6.81。
实施例25
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于室温下，用4M盐酸的二氧六环(3ml)液处理(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸(0.158g,0.25mmol)1小时，然后浓缩溶液。ODS层析(梯度：含有0.1％TFA的5-60％乙腈/水1小时)，浓缩并冻干得到标题化合物(0.117g,82％):MS(ES)m/e 528.4(M+H)+。C28H28N3O4·1CF3CO2H·1.5H2O的分析计算值：C,53.89；H,4.82；N,6.28。实测值：C,53.55；H,4.55；N,6.04。
实施例26
(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于氩气下，将(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(1.5g,3.8mmol)的DMF(10ml)冷却至-20℃，滴加(TMS)2NLi(1.0M的THF溶液，8ml,8mmol)。于-20℃搅拌该反应物30分钟，然后加入碘代甲烷(0.5ml,7.6mmol).于室温下搅拌该溶液18小时，然后浓缩。硅胶层析(10％甲醇/二氯甲烷)得到标题化合物(1g,62％):MS(ES)m/e 428.4(M+H)+。b)(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-甲基-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备标题化合物(0.7g,73％):MS(ES)m/e 412.4(M+H)+。c)(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备粗品标题化合物经ODS层析(含有0.1％TFA的5-60％乙腈/水1小时)，浓缩并冻干得到标题化合物：MS(ES)m/e 398.4(M+H)+。C22H27N3O4·1.5CF3CO2H·0.25H2O的分析计算值：C,52.40；H,5.10；N,7.33。实测值：C,52.09；H,5.26；N,7.20。
实施例27
(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(a)的方法，但用苄基溴代替4-三氟甲基苄基溴，制备标题化合物(0.105g,20％):MS(ES)m/e 590.4(M+H)+。b)(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.045g,44％):MS(ES)m/e574.4(M+H)+。c)(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备标题化合物(0.044g,定量)：MS(ES)m/e 560.3(M+H)+。d)(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例25(a)的方法，但用(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸，制备标题化合物(0.014g,40％):MS(ES)m/e 460.4(M+H)+。C27H29N3O4·CF3CO2H·2H2O的分析计算值：C,57.14；H,5.62；N,6.89。实测值：C,57.44；H,5.32；N,6.87。
实施例28
(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(a)的方法，但用溴代乙酸叔丁酯代替4-三氟甲基苄基溴，制备标题化合物(1.0g,80％):MS(ES)m/e 614.4(M+H)+。b)(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代-吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.72g,77％):MS(ES)m/e 598.4(M+H)+。c)(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例25(a)的方法，但用(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基])-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸，制备标题化合物(0.57g,定量)：MS(ES)m/e 442.3(M+H)+。d)(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备标题化合物(0.30g,56％):MS(ES)m/e 428.4(M+H)+。C22H25N3O6·2H2O的分析计算值：C,57.01；H,6.31；N,9.07。实测值：C,57.27；H,6.24；N,8.86。
实施例29
(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸a)(±)-2-(4-硝基苄基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(a)的方法，但用硝基苄基溴代替4-三氟甲基苄基溴，制备标题化合物(0.284g,69％):MS(ES)m/e 635.3(M+H)+。b)(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(±)-2-(4-硝基苄基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.104g,40％):MS(ES)m/e 589.3(M+H)+。c)(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备标题化合物(0.08g,79％):MS(ES)m/e 575.4(M+H)+。d)(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例25(a)的方法，但用(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸，制备标题化合物(0.029g,44％):MS(ES)m/e 475.4(M+H)+。C27H30N4O4·2CF3CO2H·1.5H2O的分析计算值：C,51.03；H,4.83；N,7.68。实测值：C,50.92；H,4.78；N,7.64。
实施例30
(±)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代-吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例25(a)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸，制备标题化合物(1.9g,90％):MS(ES)m/e 558.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代-吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.40g,88％):MS(ES)m/e 542.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将苯甲酰氯(0.094ml,0.8mmol)滴加到(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.4g,0.74mmol)和二异丙基乙胺(0.5ml,2.9mmol)的二氯甲烷(10ml)的溶液中。18小时后，浓缩溶液，使残留物经硅胶层析(1∶1乙酸乙酯/己烷)纯化得到标题化合物(0.293g,61％):MS(ES)m/e 646.2(M+H)+。d)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备粗品标题化合物。ODS层析(梯度：含有0.1％TFA的10-80％乙腈/水1小时)纯化，浓缩并冻干得到标题化合物(0.025g,10％):MS(ES)m/e 632.4(M+H)+。C35H32F3N3O5·0.85CF3CO2H的分析计算值：C,60.50；H,4.54；N,5.74。实测值：C,60.22；H,4.35；N,5.77。
实施例31
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
用草酰氯(1ml,11.4mmol)，接着用DMF(0.0005ml,0.06mmol)处理乙酸酯叔丁(0.228g,1.2mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。于室温下搅拌该反应物1.5小时，然后浓缩。使残留物溶于CH2Cl2(5ml)中并滴加到(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基)氨基-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.35g,0.6mmol)和Et3N(0.5ml,2.4mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。18小时后，用水(1×)、5％碳酸氢钠(2×)、水(1×)、5％柠檬酸(2×)、水(1×)和饱和盐水(1×)顺序洗涤。浓缩有机层得到标题化合物(0.4g,97％):MS(ES)m/e 656.4(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.22g,56％):MS(ES)m/e 642.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备粗品标题化合物。ODS层析(梯度：含有0.1％TFA的10-80％乙腈/水1小时)，浓缩并冻干得到标题化合物(0.022g,10％):MS(ES)m/e 626.4(M+H)+。C34H38F3N3O5·1H2O的分析计算值：C,63.44；H,6.26；N,6.53。实测值：C,63.24；H,5.96；N,6.39。
实施例32
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例30(c)的方法，但用氯代甲酸异丁酯代替苯甲酰氯，制备标题化合物(0.47g,80％):MS(ES)m/e 658.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.4g,63％):MS(ES)m/e 642.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯，制备粗品标题化合物。ODS层析(梯度：含有0.1％TFA的10-80％乙腈/水1小时)，浓缩并冻干得到标题化合物(0.008g,20％):MS(ES)m/e 628.3(M+H)+。C33H36F3N3O6·0.25CF3CO2H·0.5H2O的分析计算值：C,60.49；H,5.64；N,6.32。实测值：C,60.78；H,5.50；N,6.28。
实施例33
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(a)的方法，但用(S)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(3.0g,83％):MS(ES)m/e500.3(M+H)+。b)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(a)的方法，但用(s)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(2.3g,72％):MS(ES)m/e 658.2(M+H)+。c)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例24(b)的方法，但用(S)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(1.1g,50％):MS(ES)m/e 642.1(M+H)+。d)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例24(c)的方法，但用(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.8g,60％):MS(ES)m/e 628.1(M+H)+。e)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例25(a)的方法，但用(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸，制备粗品标题化合物。经ODS层析(含有0.1％TFA的30％乙腈/水1小时)，浓缩并冻干得到标题化合物(0.657g,72％):[α]D-42°(c1.0，甲醇)；MS(ES)m/e 528.1(M+H)+。C28H28F3N3O4·2CF3CO2H·3.75H2O的分析计算值：C,46.69；H,4.59；N,5.10。实测值：C,46.47；H,4.58；N,5.48。
实施例34
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例1(b)的方法，但用异丙醇代替乙醇，制备标题化合物(0.35g,76％):MS(ES)m/e 384.4(M+H)+。
实施例35
(S)-3-氧代-8-[3-(1,4,5,6-四氢吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-8-[3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃，将3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙醇(0.13g,0.51mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.08ml,0.50ml)的溶液滴加到(S)-8-羟基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]2,3,4,5-四氢-1 H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.14g,0.34mmol)和三苯膦(0.13g,0.50mmol)的二氯甲烷(2ml)的溶液中。加入完毕后，移去冷浴并于室温下搅拌该反应物。18小时后，除去溶剂，通过硅胶快速层析(100％氯仿至5％甲醇/氯仿)分离该产物得到为澄清油状的标题化合物(0.12g):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(d,J=8.2Hz,2H),7.65(m,1H),7.50(m,5H),7.40(d,J=8.2Hz,1H),7.03(d,J=9.8Hz,1H),6.70(m,1H),6.30(s,1H),5.23(m,3H),4.95(d,J=16.4Hz,1H),4.50(d,J=16.4Hz,1H),3.95(m,3H),3.78(s,3H),3.70(m,1H),3.45(m,2H),3.15-2.90(m,3H),2.50(dd,J=19.2,5.5Hz,1H),1.95(m,2H)。b)(S)-8-(3-氨基-1-丙氧基)-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将10％钯炭(20mg)加入(S)-8-[3-(4-硝基苄氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.12g,0.19mmol)的甲醇(2ml)中。用氢气冲洗反应容器，然后安装一个氢气充气囊。4.5小时后，排出氢气，通过celite_过滤除去催化剂。除去溶剂得到为淡黄色残留物的标题化合物(0.09)。该物质可不经进一步纯化而使用。MS(ES)m/e 465.3(M+H)+。c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(S)-8-(3-氨基-1-丙氧基)-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.09g,0.19mmol)、2-溴代嘧啶(0.09g,0.57mmol)和二异丙基乙胺(0.17ml,0.98mmol)的DMF(2ml)的溶液于80℃加热18小时。使该反应物冷却至室温，浓缩溶液得到黄色残留物。经硅胶快速层析(2％甲醇/乙酸乙酯)得到澄清油状的标题化合物(42mg):MS(ES)m/e 543.1(M+H)+。d)(S)-3-氧代-8-[3-(3,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将(S)-3-氧代-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(42mg,0.08mmol)、冰醋酸(2ml)、浓盐酸(0.2ml)和10％钯炭(10mg)加入Parr氢气装置中。在氢气(40psi)中振摇该混合物5小时，然后排出氢气，通过celite_过滤除去催化剂。蒸发溶剂得到为黑色残留物的标题化合物(52mg)。该物质可不经进一步纯化而使用。MS(ES)m/e 547.2(M+H)+。e)(S)-3-氧代-8-[3-(3,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
将1.0N氢氧化钠(0.25ml,0.25mmol)加入在乙醇(1ml)中的粗品(S)-3-氧代-8-[3-(3,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(得自实施例35d)中。在室温搅拌8.5小时后，加入1N盐酸(0.25ml,0.25mmol)使反应物骤冷。除去溶剂得到淡黄色固体。经制备性反相HPLC(Hamilton PRP-1_，含有1％TFA的30％乙腈/水)得到为白色粉末的标题化合物(18.1mg),MS(ES)m/e 533.3(M+H)+。C27H31N4F3O4·2H2O·2CF3CO2H的分析计算值：C,46.74；H,4.68；N,7.03。实测值：C,46.34；H,4.31；N,6.82。
实施例36
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(甲基氨基)]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例25(a)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸，制备所述盐酸盐。通过在乙酸乙酯和5％碳酸氢钠之间分配使该物质转化为所述游离碱。分离EtOAc层，并浓缩得到标题化合物(4.1g,100％):MS(ES)m/e 558.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代-吡啶-2-基)-N-(甲基氨基)]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例26(a)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(甲基氨基)]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(3.0g,94％):MS(ES)m/e 572.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例4(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.32g,60％):MS(ES)m/e 556.2(M+H)+。d)(±)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例4(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3(N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备标题化合物(0.02g,15％):MS(ES)m/e 542.1(M+H)+。C29H30N3O4F3·CF3CO2H·H2O的分析计算值：C,55.28；H,4.94；N,6.24。实测值：C,55.45；H,4.68；N,6.14。
实施例37
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温、氩气中，将2-(3-羟基丙基氨基)吡啶-N-氧化物(11.6g,69mmol)和三苯膦(18.0g,69mmol)加入(S)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(19g,57.4mmol)的无水THF(400ml)和无水DMF(200ml)的搅拌溶液中。在所有的固体完全溶解(约30分钟)后，在冰浴上使该反应物冷却至0℃，通过注射器加入偶氮二甲酸二异丙酯(14.3ml,69mmol)。将该反应物缓慢温热至室温并搅拌18小时。浓缩并经硅胶快速层析(8∶2∶1氯仿/乙酸乙酯/乙醇)纯化得到为泡沫的固体标题化合物(20.83g,75％)。通过回收上述反应的原料的再循环得到另外5.73g产物，这样共获得26.56g(96％)的标题化合物：MS(ES)m/e 482.2(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(dd,J=6.5,1.3Hz 1H),7.29(t,1H),7.18(t,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.84-6.79(m,3H),6.59(t,1H),5.32(d,J=16.5Hz,1H),4.28-4.14(m,2H),4.16(d,J=16.5Hz,1H),4.02(t,2H),3.84(m,1H),3.58(s,3H),3.40(dd,2H),3.01(dd,1H),2.73(dd,1H),2.70(dd,1H),2.52(dd,1H),2.02(ddd,2H)。b)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
向(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(26.56g,55mmol)的异丙醇(500ml)的搅拌溶液中加入活化的10％钯炭(8g,7.5mmol，在氩气下，丙醇中小心预湿)和环己烯(55.7ml,550mmol)。然后在氩气下，在设定90℃的油浴中使该反应物加热至回流。6小时后，加入额外量的10％钯(在活性碳上)(8g,7.5mmol，在氩气下，丙醇中小心预温)和环已烯(55.5ml,550mmol)。在加入18小时后，使反应物通过celite_热过滤，用1∶1甲醇/氯仿(400ml)洗涤滤垫。真空浓缩滤液，使残留物经硅胶快速层析(95∶5氯仿/甲醇)纯化得到为白色粘性泡沫的标题化合物(19.50g,76％):TLC(硅胶，5％甲醇在三氯甲烷中)Rf0.52；MS(ES)m/e 466.3(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.94(dd,1H),7.34(t,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.81(m,2H),6.54(t,1H),6.46(m,2H),5.31(d,J=16.5Hz,1H),4.23-4.13(m,2H),4.17(d,J=16.5Hz,1H),4.02(t,2H),3.82(m,1H),3.58(s,3H),3.36(m,2H),3.01(dd,1H),2.72(dd,1H),2.68(dd,1H),2.50(dd,1H),1.96(ddd,2H)。c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
将1N的氢氧化钠(75ml,75mmol)水溶液加入(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(19.50g,42mmol)的二氧六环(150ml)的搅拌溶液中。于室温下搅拌混浊的反应物2小时，然后用1N盐酸(75ml,75mmol)中和生成的均匀溶液。通过旋转蒸发浓缩该溶液至几近干以沉淀出产物。倾出上清液并将剩下的胶状固体再溶于甲醇中。然后通过旋转蒸发再浓缩澄清的溶液。用少量的水研磨剩余的固体，过滤并减压干燥得到白色粉末状的标题化合物(16.38g,86％)。HPLC(Hamilton PRP-1_，含有0.1％TFA的25％乙腈/水)K’=3.1；[α]D-112.3°(c,1.0，甲醇)；MS(ES)m/e 452.3(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(dd,1H),7.34(dt,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.81(m,2H),6.58(t,1H),6.47(m,2H),5.30(d,J=16.5Hz,1H),4.27-4.13(m,2H),4.15(d,J=16.5Hz,1H),4.02(t,1H),3.78(m,1H),3.37(m,2H),3.00(dd,1H),2.69(dd,1H),2.65(dd,1H),2.41(dd,1H),1.96(ddd,2H)。C22H24F3N3O4的分析计算值：C,58.53；H,5.36；N,9.31。实测值：C,58.37；H,5.42；N,9.20。
实施例38
(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(R)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温下，将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(0.33g,2mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.3ml,2mmol)无水DMF(10mmol)缓慢滴加到(R)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.3g,1mmol)和三苯膦(0.485g,26mmol)的无水二氯甲烷(10ml)的溶液中。17小时后，浓缩反应物。硅胶层析(梯度：0.5％-5％甲醇/乙酸乙酯)得到为无色油状的标题化合物(0.35g,80％):MS(ES)m/e482.3(M+H)+；b)(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
在氩气下，将(R)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.35g,0.7mmol)、环己烯(0.75ml,7mmol)、10％钯炭(88g,0.07mmol)和异丙醇(9ml)的混合物加热至回流。18小时后，加入10％钯炭(36g,0.03mmol)和环己烯(0.75ml,7mmol)。36小时后，使反应物通过celite_热过滤，用热的乙酸乙酯洗涤滤垫。浓缩留下黄色油状物。硅胶层析(1％-5％甲醇在二氯甲烷中)得到为无色油状的标题化合物(0.26g,77％):MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。c)(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于室温下，将氢氧化锂一水合物(25mg,0.6mmol)加入(R)-8-[3-(2-吡啶-基氨基)-3-氧代-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.25g,0.54mmol)的THF(5ml)和水(2ml)的溶液中。18小时后，浓缩反应物至干，使残留物溶于水(4ml)中。用3.0N盐酸小心使水相调至pH约4。收集沉淀物并于40-45℃高真空干燥得到为灰白色固体的标题化合物(0.15g,62％):MS(ES)m/e 452.1(M+H)+。C22H24F3N3O4·0.5H2O的分析计算值：C,57.38；H,5.47；N,9.12。实测值：C,57.72；H,5.24；N,8.92。
实施例39
(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温下，用3-4分钟将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物(0.60g,3.6mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.6ml,3.6mmol)的无水二氯甲烷(12mmol)缓慢滴加到(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.60g,1.8mmol)和三苯膦(0.95g,3.6mmol)的无水二氯甲烷(6ml)的溶液中。17小时后，浓缩反应物。硅胶层析(梯度：1％-5％甲醇/CH2Cl2)得到为无色泡沫状的标题化合物(0.45g,49％):MS(ES)m/e 496.3(M+H)+；b)(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
在氩气下，将(S)-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.45g,0.9mmol)、环己烯(0.93ml,9mmol)、10％钯炭(0.2g,0.18mmol)和异丙醇(9ml)的混合物加热至回流。18小时后，加入10％钯炭(0.2g,0.18mmol)和环己烯(0.27ml,2.65mmol)。36小时后，使反应物通过celite_热过滤，用热的乙酸乙酯洗涤滤垫。浓缩留下黄色油状物。硅胶层析(1％-3％甲醇在二氯甲烷中)得到为白色泡沫状的标题化合物(0.32g,74％):MS(ES)m/e 480.2(M+H)+。c)(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于室温下，将氢氧化锂一水合物(33mg,0.79mmol)加入(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.32g,0.67mmol)的THF(5ml)和水(2ml)的溶液中。18小时后，浓缩反应物至干，使残留物溶于水(4ml)中。用乙酸乙酯萃取该溶液，然后用3.0N盐酸小心使水相调至pH约5。收集沉淀物并于40-45℃高真空干燥得到为灰白色固体的标题化合物(0.22g,71％):MS(ES)m/e 466.1(M+H)+。C23H26F3N3O4的分析计算值：C,59.35；H,5.63；N,9.03。实测值：C,58.97；H,5.55；N,8.73。
实施例40
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
根据实施例37(a)的方法，但用6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，并用(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸酯代替(R)-8-羟基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸酯，制备为无色油状的标题化合物：MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。b)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
根据实施例37(c)的方法，但用(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯代替(R)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯，制备白色固体的标题化合物：MS(ES)m/e 452.2(M+H)+。C22H24F3N3O4·0.7H2O的分析计算值：C,56.94；H,5.52；N,9.05。实测值：C,56.80；H,5.19；N,8.85。
实施例41
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于室温下，将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(336mg,2.0mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.3ml,2.0mmol)的无水DMF(10ml)溶液加到(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(350mg,1.0mmol)和三苯膦(525mg,2.0mmol)的无水DMF(10ml)的溶液中。24小时后，浓缩该混合物。硅胶快速层析(梯度：乙酸乙酯500ml)，然后5％甲醇/氯仿)得到为橙色泡沫状的标题化合物(288mg,57％):MS(ES)m/e 504(M+H)+。b)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
在氩气下，将(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(288mg,0.57mmol)、环己烯(0.6ml,5.8mmol)和10％钯炭(62g,0.58mmol)在2-丙醇(6ml)中的混合物加热至回流。31小时后，使该反应物通过celite_垫过滤，然后用热得到1∶1甲醇/氯仿洗涤滤垫，浓缩滤液。硅胶快速层析(5％甲醇/氯仿中)后，经第二次硅胶快速层析(50％THF/环己烷)得到灰白色泡沫状的标题化合物(133mg,48％):MS(ES)m/e 488(M+H)+。c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
于0℃，将1.0N氢氧化锂(0.3ml,0.3mmol)加入在THF(1.5ml)和水(1.2ml)中的(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(133mg,0.27mmol)的溶液中。使该混合物温热至室温18小时。用乙醚(2×5ml)洗涤该反应物，然后在中度真空下除去残留的有机溶剂。使水层通过0.45μm Acrodisk滤膜，然后于0℃用在水中的10％盐酸小心酸化至pH6。收集沉淀物，用水洗涤，于50℃真空干燥得到为白色固体的标题化合物(62mg,48％):MS(ES)m/e 474(M+H)+。C28H31N3O4·0.75H2O的分析计算值：C,69.05；H,6.75；N,8.63。实测值：C,69.05；H,6.66；N,8.55。
实施例42
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
于0℃，将偶氮二甲酸二异丙酯(0.3ml,1.5mmol)加入(S)-8-羟基-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸酯(350mg,1.0mmol)、6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇(228mg,1.5mmol)和三苯膦(393mg,1.5mmol)的无水THF(10ml)溶液中。使该混合物温热至室温72小时，然后浓缩。硅胶快速层析(50％乙酸乙酯/己烷中)，接着经第二次硅胶快速层析(25％乙酸乙酯/己烷)得到白色泡沫状的标题化合物(250mg,51％):MS(ES)m/e 488(M+H)+。b)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
在室温下，将1.0 N氢氧化锂(0.62ml,0.62mmol)加入在THF(2.5ml)和水(1.9ml)中的(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(250mg,0.51mmol)的溶液中，然后于室温下搅拌18小时。用乙醚(2×5ml)洗涤该混合物，然后在中度真空下除去残留的有机溶剂。使水层通过0.45μm Acrodisk滤膜，然后于0℃用在水中的10％盐酸小心酸化至pH6。收集沉淀物，用水洗涤，于50℃真空干燥得到为白色固体的标题化合物(134mg,55％):MS(ES)m/e 474(M+H)+。C28H31N3O4·0.75H2O的分析计算值：C,69.05；H,6.73；N,8.63。实测值：C,69.23；H,6.59；N,8.55。
实施例43
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸的制备a)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯
将6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇(0.13g,0.88mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.14ml,0.89mmol)在CH2Cl2(2ml)中的溶液加入(S)-8-羟基-3-氧代-2-{4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.18g,0.44mmol)和三苯膦(0.23g,0.88mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。在室温2天后，减压除去溶剂，径向硅胶层析(6mm板，5％甲醇/氯仿)得到为澄清油状物(0.63g)，它含有所述标题化合物和未反应的(S)-8-羟基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯的混合物。该物质经径向硅胶层析(6mm板，50％乙酸乙酯/己烷中)进一步纯化得到澄清油状的标题化合物(0.12g):MS(ES)m/e 542.3(M+H)+。b)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸
将1N氢氧化纳(0.50ml)加入在乙醇(2ml)中的(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯(0.12g,0.22mmol)的溶液中。于室温3.5小时后，减压除去大量的溶剂得到白色残留物，将其溶解于水中并用1N盐酸中和至pH为7。收集生成的沉淀物，减压干燥得到为白色固体的标题化合物(28.1mg):[α]D-74.0°(c 0.05，乙醇)；MS(ES)m/e 528.3(M+H)+。C28H28F3N3O4·0.5H2O的分析计算值：C,62.68；H,5.45；N,7.83。实测值：C,62.60；H,5.35；N,7.66。
实施例44
胃肠外剂量单位组合物
含有20mg实施例1的化合物作为无菌干燥粉末制剂可如制备：将20mg该化合物溶于15ml蒸馏水中。在无菌条件下将该溶液过滤到25ml多剂量的安瓿中并冻干。通过加入20ml 5％右旋糖的水溶液(D5W)可将该粉末重新制成为供静脉内或肌内注射用的制剂。剂量取决于注射的体积。随后通过加入这种剂量单位的计量体积可稀释成另一种注射用的D5W体积，或者可以将计量剂量加入另一种机械容器以分散所述药物，如在用于滴注或其它注射-输液体系的输注瓶或袋中。
实施例45
口服剂量单位组合物
通过将50mg的实施例的1化合物与75mg乳酸和5mg硬脂酸镁混合并磨碎来制备口服用的胶囊。生成的粉末过筛并装入硬明胶胶囊中。
实施例46
口服剂量单位组合物
通过将20mg蔗糖、150mg硫酸钙二水合物和50mg的实施例的1化合物与10％的明胶溶液混合并磨碎来制备口服用的片剂。湿颗粒过筛、干燥、并与10mg淀粉、5mg滑石粉和3mg硬脂酸混合，再压制成片子。
以上描述全面公开了如何制备和使用本发明。然而，本发明并不受上述具体方案的限制，对其所作的所有修改均在其后的权利要求的范围内。在此引用的各种参考的杂志，专利及其它出版物包括了本领域的发展现状并通过引用全部结合到本文中。

Claims (55)

1．式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure A9718016800021
其中：R1为R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4链烯基、A-C2-4链炔基、A-C3-4氧代链烯基、A-C3-4氧代链炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基链烯基、A-C3-4氨基链炔基，任选由一个或多个R10或R7的任何可能的组合取代；A是H、C3-6环烷基、Het或Ar；R7为-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每个R8独立为-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9为-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10为H、卤代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6链烯基、A-C2-6链炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11为R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2为
Figure A9718016800022
W为-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或为CO、CRg 2、C(=CRg 2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg 2、CRg 2CRg(ORk)、C(O)CRg 2、CRg 2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg 2、CRg 2NRg、CRg 2O、OCRg 2、C≡C或CRg=CRg；G为NRe、S或O；Rg为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk为Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3个选自下列的基团取代的C1-6烷基：卤素、CN、NRg 2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc独立选自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc结合共同形成5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，任选由多达3个选自下列的取代基取代：卤素、CF3、C1-4烷基、ORfS(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亚甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4独立为N或C-Ry，前提为Q1、Q2、Q3和Q4中不超过一个为N；R’为H、C1-6烷基-Ar-C0-6烷基或C3-6环烷基-C0-6烷基；R”为R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2；Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2，或由下列基团任选取代的C1-6烷基：卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
2．权利要求1的化合物，其中R2为，其中Q1、Q2和Q3各自为CRy,Q4为CRy或N和u是0。
3．权利要求2的化合物，其中每个R’为H,R”为H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C0-6烷基-Ar或C(O)OC0-6烷基-Ar,W为-CH2-CH2-,Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2或C1-6烷基。
4．权利要求1的化合物，其中R2为，其中Q1、Q2和Q3各自为CH和u是0。
5．权利要求4的化合物，其中每个R’为H,R”为H或C1-4烷基，v是0和W为-CH2-CH2-。
6．权利要求1的化合物，其中R2为，其中G为NH,Rb和Rc各自为H。
7．权利要求6的化合物，其中W为NRg-(CHRg)b-。
8．权利要求1的化合物，其中R2为
Figure A9718016800054
     ，其中G为NH,Rb和Rc结合共同形成5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，任选由多达3个选自下列的取代基取代：卤素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亚甲基二氧基。
9．权利要求8的化合物，其中Rb和Rc结合共同形成6元芳族碳环。
10．权利要求9的化合物，其中W为-CH2-CH2-。
11．权利要求8的化合物，其中Rb和Rc结合共同形成6元芳族杂环。
12．权利要求11的化合物，其中W为-CH2-CH2-。
13．权利要求1的化合物，其中R2为，其中每个R’为H,R”为H或C1-4烷基，Rg为H或C1-4烷基及s为0、1或2。
14．权利要求13的化合物，其中W为-CH2-CH2-。
15．权利要求1的化合物，其中R1为H,C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-6环烷基-C0-6烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’，其中R’为H或C1-4烷基。
16．权利要求15的化合物，其中R1为H,C1-4烷基、Ph-C0-4烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’，其中R1为H或C1-4烷基。
17．权利要求16的化合物，其中R1为-CH2CF3。
18．权利要求1的化合物为下列化合物或其药学上可接受的盐：
(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并
氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4-氨基-2吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4-甲氧基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(2-咪唑基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并
氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-四氢嘧啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四
氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(6-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮
杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(4-氮杂-2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-
苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯
并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-
四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯
并氮杂_-4-乙酸；
(R)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5
四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧
基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-
3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧
基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-苄基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四
氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-2-(4-氨基苄基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-
(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四
氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-
1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4,6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-8-[3-(4,5,6,7-四氢-1H-1,3-二氮杂_-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲
基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧
基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(异丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧
基]-2-(4-三氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基苄基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙
基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三
氟甲基苄基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙
基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-8-[3-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟
甲基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-
2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟
乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸；和
(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲
基)苄基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸。
19．权利要求1的化合物为(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸或其药学上可接受的盐。
20．权利要求1的化合物为(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸或其药学上可接受的盐。
21．权利要求1的化合物为(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸或其药学上可接受的盐。
22．包括权利要求1的化合物和药学上可接受的载体的药用组合物。
23包括权利要求1的化合物、抗肿瘤剂和药学上可接受的载体的药用组合物。
24．权利要求23的药用组合物，其中抗肿瘤剂为托泊替堪。
25．权利要求23的药用组合物，其中抗肿瘤剂为顺铂。
26．包括权利要求1的化合物、骨吸收的抑制剂和药学上可接受的载体的药用组合物。
27．治疗对αvβ3受体的拮抗有效的疾病状态的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
28．治疗对αvβ5受体的拮抗有效的疾病状态的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
29．治疗骨质疏松的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
30．抑制血管生成的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
31．抑制肿瘤生长或肿瘤转移的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
32．治疗动脉粥样硬化或再狭窄的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
33．治疗炎症的方法，其包括给予需要此治疗的受试者权利要求1的化合物。
34．抑制肿瘤生长的方法，其包括分阶段给予或以物理组合的方式联合给予式(Ⅰ)化合物和抗肿瘤剂。
35．权利要求34的方法，其中抗肿瘤剂为托泊替堪。
36．权利要求34的方法，其中抗肿瘤剂为顺铂。
37．治疗骨质疏松或抑制骨丢失的方法，其包括分阶段给予或以物理组合的方式联合给予式(Ⅰ)化合物和骨吸收抑制剂。
38．式(Ⅱ)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure A9718016800111
其中：R1为R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4链烯基、A-C2-4链炔基、A-C3-4氧代链烯基、A-C3-4氧代链炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基链烯基、A-C3-4氨基链炔基，任选由一个或多个R10或R7的任何可能的组合取代；A是H、C3-6环烷基、Het或Ar；R7为-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每个R8独立为-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9为-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10为H、卤代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6链烯基、A-C2-6链炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11为R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2为
Figure A9718016800121
W为-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或为CO、CRg 2、C(=CRg 2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg 2、CRg 2CRg(ORk)、C(O)CRg 2、CRg 2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg 2、CRg 2NRg、CRg 2O、OCRg 2、C≡C或CRg=CRg；G为NRe、S或O；Rg为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk为Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3个选自下列的基团取代的C1-6烷基：卤素、CN、NRg 2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc独立选自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc结合共同形成5或6元芳族或非芳族碳环或杂环，任选由多达3个选自下列的取代基取代：卤素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亚甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4独立为N或C-Ry，前提为Q1、Q2、Q3和Q4中不超过一个为N；R’为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6环烷基-C0-6烷基；R”为R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6环烷基-C0-6烷基、卤素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2；Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2，或由下列基团任选取代的C1-6烷基：卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
39．权利要求38的化合物为：(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸甲酯；或(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-2-苯并氮杂_-4-乙酸乙酯；或其药学上可接受的盐。
40．式(Ⅲ)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure A9718016800141
其中：R1为R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4链烯基、A-C2-4链炔基、A-C3-4氧代链烯基、A-C3-4氧代链炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基链烯基、A-C3-4氨基链炔基，任选由一个或多个R10或R7的任何可能的组合取代；A是H、C3-6环烷基、Het或Ar；R7为-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每个R8独立为-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9为-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10为H、卤素、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6链烯基、A-C2-6链炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11为R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；W为-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或为CO、CRg 2、C(=CRg 2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg 2、CRg 2CRg(ORk)、C(O)CRg 2、CRg 2C(O)、CONRi 2、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg 2、CRg 2NRg、CRg 2O、OCRg 2、C≡C或CRg=CRg；Rg为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk为Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri为H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7环烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3个选自下列的基团取代的C1-6烷基：卤素、CN、NRg 2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Q1、Q2、Q3和Q4独立为N或C-Ry，前提为Q1、Q2、Q3和Q4中不超过一个为N；R’为H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6环烷基-C0-6烷基；R”为R’、C(O)R’或-C(O)OR’；Ry为H、卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2，或由下列基团任选取代的C1-6烷基：卤素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg 2；a是0、1或2；b是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2。
41．制备权利要求1的式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括使式(Ⅳ)化合物与具有任何保护的活性功能基团的式(Ⅴ)化合物反应：
Figure A9718016800161
其中R1和R2如式(Ⅰ)中所定义，且L1为OH或卤代；其后除去任何保护基团，并任选形成药学上可接受的盐。
42．制备权利要求1的式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括使式(Ⅳ)化合物与具有任何被保护的活性功能基团的式(Ⅵ)化合物反应：
Figure A9718016800162
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和Q4如式(Ⅰ)中所定义；然后除去任何保护基团，并任选形成药学上可接受的盐。
43．制备权利要求1的式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括使式(Ⅳ)化合物与具有任何被保护的活性功能基团的式(Ⅶ)化合物反应：其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和v如式(Ⅰ)中所定义；然后除去任何保护基团，并任选形成药学上可接受的盐。
44．权利要求1-21任一项的化合物用作药物。
45．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产治疗对αvβ3受体的拮抗有效的疾病的药物中的用途。
46．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产治疗对αvβ5受体的拮抗有效的疾病的药物中的用途。
47．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产治疗骨质疏松的药物中的用途。
48．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产抑制血管生成的药物中的用途。
49．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产抑制肿瘤生长和肿瘤转移的药物中的用途。
50．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产治疗动脉粥样硬化和再狭窄的方法。
51．权利要求1的式(Ⅰ)化合物在生产治疗炎症的药物中的用途。
52．权利要求1的式(Ⅰ)化合物和抗肿瘤剂在生产以物理组合的方式联合给予或分阶段给予的抑制肿瘤生长的药物中的用途。
53．权利要求52的用途，其中所述抗肿瘤剂为托泊替堪。
54．权利要求52的用途，其中所述抗肿瘤剂为顺铂。
55．权利要求1的式(Ⅰ)化合物和骨吸收抑制剂在生产以物理组合的方式联合给予或分阶段给予的治疗骨质疏松的药物中的用途。
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