CZ299076B6

CZ299076B6 - Deriváty vitronektinu

Info

Publication number: CZ299076B6
Application number: CZ0113299A
Authority: CZ
Inventors: Francis Callahan@James; Donova Cousins@Russell; McCullock Keenan@Richard; Kwon@Chet; Henry Miller@William; Nijole Uzinkas@Irene
Original assignee: Smithkline Beecham Corporation
Priority date: 1996-10-02
Filing date: 1997-10-01
Publication date: 2008-04-16
Also published as: UY24935A1; AP1463A; EP0957917A4; RO119881B1; NZ334953A; NO991590D0; CA2267224C; CN1114403C; ATE312089T1; PL190859B1; JP2010006838A; DE69734833T2; CN1238689A; NO991590L; AR008878A1; BG103299A; EA199900356A1; IL129243A; JP4491072B2; IL129243A0

Abstract

Rešení se týká farmaceuticky aktivních vitronektinových derivátu obecného vzorce I, které mají benzodiazepinylovou základní strukturu, které inhibujívitronektinové receptory a jsou použitelné pro lécení zánetu, rakoviny a kardiovaskulární poruchy, jako je ateroskleróza a restenóza a onemocnení, u kterých dochází k resorpci kostní hmoty, jako je osteoporóza.

Description

Deriváty vitronektinu

Oblast techniky

Vynález se týká antagonistů receptorů vitronektinu, to jest farmaceuticky aktivních sloučenin, které inhibují vitronektinové receptory a jsou použitelné pro léčení zánětů, rakoviny a kardiovaskulární poruchy, jako je ateroskleróza a restenóza a onemocnění, u kterých dochází k resorpci kostní hmoty, jako je osteoporóza.

Dosavadní stav techniky

Integriny jsou nadtřídou receptorů buněčné adheze, které jsou transmembránové glykoproteiny, exprimované na povrchu řady buněk. Tyto buněčné povrchové adhezní receptory zahrnují gpIIb/IIIa (fibrinogenový receptor) a α_νβ₃ (vitronektinový receptor). Fibrinogenový receptor gpIIb/IIIa je exprimován na povrchu krevních destiček a mediuje agregaci krevních destiček a vytváření hemostatické sraženiny v místě krvácející rány, Philips, a kol., Blood., 1988, 71, 831.

Vitronektinový receptor α_νβ₃ je exprimován množstvím buněk, v to počítaje endoteliální buňky, buňky hladkého svalstva, osteoklasty a nádorové buňky a v důsledku toho má mnoho funkcí. α_νβ₃ receptor exprimovaný na membráně osteoklastových buněk mediuje adhezí osteoklastů ke kostní matrici, což je klíčový krok při resorpci kostní hmoty, Ross, a kol., J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. Onemocnění charakterizované excesivní resorpci kostní hmoty je osteoporóza. α_νβ₃ receptor exprimován na lidských buňkách hladkého svalstva aorty mediuje jejich migraci do neiontima, proces, který vede k restenóze po perkutánní koronární angioplastice, Brown, a kol., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. Kromě toho Brooks, a kol., Cell, 1994, 79, 1157 ukázali, že α_νβ₃ antagonista je schopen podporovat regresi nádoru indukcí apoptózy angiogenních krevních cév. Činidlo, které blokuje receptory vitronektinu by tedy mohlo být použitelné při léčbě one30 mocnění, jako je osteoporóza, restenóza a rakovina.

Je nyní známo, že receptory vitronektinu zahrnují tři různé integriny, označované α_νβ,, α_νβ₃ηα_νβ₅, Horton, a kol., Int. J. Exp. Pathol., 1990, 71, 741. α_νβι váže fibronektin a vitronektin. α_νβ₃ váže velké množství ligandů, v to počítaje fibrin, fibrinogen, laminin, trombospondin, vitro35 nektin, von Willebrandův faktor, osteopontin a kostní sialoprotein I. α_νβ₅ váže vitronektin. Bylo ukázáno, že receptor vitronektinu α_νβ₅ se zúčastňuje buněčné adheze různých typů buněk, mezi jiným mikrovaskulámích endoteliálních buněk, (Davis, a kol., J. Cell Biol., 1993, 51, 206) ajeho role v angiogenezi byla potvrzena, Brooks, a kol., Science, 1994, 264, 569. Tento integrin je exprimován v krevních cévách lidské granulační tkáni u zranění ale nikoli v normální pokožce.

Je známo, že receptor vitronektinu se váže k proteinům kostní matrice, které obsahují tri-peptidový motiv Arg-Gly-Asp (neboli RGD). Horton, a kol., Exp. Cell Res. 1991, 195, 368, na základě toho objevili, že peptidy obsahující RGD a protilátka proti receptoru vitronektinu (23C6) inhibují resorpci dentinu a šíření buněk prostřednictvím osteoklastů. Kromě toho Sáto, akol., J. Cell Biol. 1990, 111, 1713, objevili, že echistatin, peptid hadího jedu, který obsahuje RGD sekvenci, je silný inhibitor resorpce kostní hmoty v tkáňových kulturách a inhibuje vazbu osteoklastů ke kostní tkáni.

Bylo objeveno, že jisté sloučeniny jsou silné inhibitory α_νβ₃ a α_νβ5 receptorů. Obzvláště bylo objeveno, že takové sloučeniny jsou silnější inhibitory receptorů vitronektinu než receptorů fibrinogenu.

-1 CZ 299076 B6

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká sloučenin obecného vzorce (I), jak jsou zde popsány, které mají farmakologickou aktivitu pro inhibici receptorů vitronektinu ajsou použitelné při léčení zánětů, rakoviny a kardiovaskulárních poruch, jako je ateroskleróza a restenóza a onemocnění, ve kterém je zahrnuta resorpce kostní hmoty, jako je osteoporóza.

Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozic, obsahujících sloučeninu obecného vzorce 1 a farmaceutický nosič.

Předložený vynález se také týká způsobu léčení onemocnění, které jsou mediovány receptory vitronektinu. Konkrétně jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou použitelné pro léčení aterosklerózy, restenózy, zánětů, rakoviny a onemocnění, ve kterém je zahrnuta resorpce kostní hmoty, jako je osteoporóza.

Detailní popis vynálezu

Předložený vynález se týká nových sloučenin, které jsou silnější inhibitory receptorů vitronektinu než receptorů fibrinogenu. Nové sloučeniny obsahují benzazepinové jádro, ve kterém se nachází dusík obsahující substituent na aromatickém šestičlenném kruhu benzazepinu a alifatický substituent, obsahující kyselou skupinu se nachází na sedmičlenném kruhu benzazepinu. Předpokládá se, že benzazepinový kruhový systém příznivě interaguje s receptoru vitronektinu a orientuje postranní řetězce, tvořené substituenty na šesti a sedmičlenných kruzích tak, že také mohou příznivě interagovat s receptorem. Je výhodné, aby na nejkratší intramolekulámí cestě mezi kyselou skupinou na alifatickém substituentu sedmičlenného kruhu benzazepinu a dusíkatým substituentem na aromatickém šestičlenném kruhu benzazepinu bylo asi dvanáct až čtrnáct intervenujících kovalentních vazeb.

Předložený vynález se týká sloučenin obecného vzorce I:

0), ve kterém:

R¹ představuje R⁷, nebo A-C₀-C₄-alkyl, A-C₂-C₄-alkenyl, A-C₂-C₄-alkinyl, A-C₃-C₄-oxo35 alkenyl, A-C₃-C₄-oxoalkinyl, A-Ci-C₄-aminoalkyl, A-C₃-C₄-aminoalkenyl, A-C₃-C₄-aminoalkinyl, popřípadě substituovaný libovolnou přípustnou kombinací jednoho nebo více substituentů R¹⁰ nebo R⁷;

A představuje atom vodíku, C₃-C₆-cykloalkyl, Het nebo Ar;

R⁷ představuje -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸, -S(O)mOR', -S(O)_mNR'R, -PO(OR'), -PO(OR')₂, -NO₂ nebo tetrazolyl;

každý R⁸ nezávisle představuje -OR', -NR'R, -NR'SO₂R', - NROR', nebo -OCR'₂CO(O)R':

R⁹ představuje -OR', -CN, -S(O)_rR', -S(O)_mNR'₂, -C(O)R', C(O)NR'₂, nebo -CO₂R';

-2CZ 299076 B6

R¹⁰ představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR¹¹, -CN, -NR'R, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r, -CO₂R', -CONR'₂, A-Co-C₆-alkyl- A-Ci-C₆-oxoalkyl-, A-C₂-C₆-alkenyl- A-C₂-C₆alkinyl-, A-C₀-C₆-alkyloxy-, A-C₀-C₆-alkylamino- nebo A-Co-C₆-alkyl-S(0)_r;

R¹¹ představuje R', -C(O)R', -C(O)NR'₂, -C(O)OR', -S(O)_mR', nebo -S(O)_mNR'₂;

W-

W představuje -(CHR^g)a-U- (CHR^g)b-;

U není přítomen nebo představuje CO, CR^g2, C(=CR^g2), S(O)_k, O, NR⁸, CR^gOR^g, CR⁸(OR^k)CR^g2, CR⁸2CR^g(OR^k), C(O)CR^g2, CR^g2C(O), CONR¹, NR‘CO, OC(O), C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR⁸, NR⁸C(S), S(O)2NR^g, NR⁸S(O)2N=N, NR^KNR^g, NR^gCR⁸2, CR^g2NR^g, CR^g2O, OCR⁸2, CC nebo CR^g=CR^Ě;

-3 CZ 299076 B6

G představuje NR^e, S nebo O;

R^g představuje atom vodíku, C]-C_Ď-alkyl, Het-Co-C6-alkyl, C₃-C₇-cykloalkyl-C₀-C₆-alkyl nebo Ar-Co-C₆-alkyl;

R^k představuje R^Ě, -C(O)R^g, nebo -C(O)OR^f; R¹ představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Het-C₀-C6-alkyl, C₃-C₇-cykloalkyl-C₀-C6-alkyl, Ar-Co-C6-alkyl, nebo C|-C₆-alkyl substituovaný jednou až třemi skupinami, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, CN, NR^g2, OR^B, SR^g, CO2R^g a CON(R⁸)2;

R^f představuje atom vodíku, C|-C₆-alkyl nebo Ar-Co-C₆-alkyl;

R^e představuje atom vodíku, C]-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl, C₃-C₇-cyklo15 alkyl-Co-Ce-alkyl, nebo (CH₂)_kCO₂R^g;

R^b a R^c jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, Ci-C6-alkyl, Ar-Co-C6-alkyl, Het-C0-C6-alkyl nebo C3-C7-cykloalkyl-C0-C6-alkyl, halogen, CF3, OR^f, S(O)kR^f, COR, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2, CH2N(R^f)2, nebo R^b a R^c jsou spojeny dohromady tak, že vytvářejí pěti- nebo šestičlenný aromatický nebo nearomatický karbocyklický nebo heterocyklický kruh, popřípadě substituovaný až třemi substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, skupiny CF₃, Ci-C₄-alkyl, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, CO2R^f, OH, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2 a CH2N(R^f)2; nebo methylendioxy;

Q¹, Q², Q³ a Q⁴ představují nezávisle na sobě N nebo C-R^y, za předpokladu, že nejvýše jeden z Q¹, Q², Q³ a Q⁴ představuje N.

R' představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C6-cykloalkyl-C₀-C₆alkyl;

R představuje R', -C(O)R' nebo -C(O)OR';

R' představuje atom vodíku, Cj-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C₆-cykloalkyl-C₀-C₆-alkyl, halogen, CF₃, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2,

CH₂N(R^f)₂;

R^y představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR^g, -SR⁸, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r- -CO₂R⁸, -COR⁸ nebo -CONR^g2, nebo Ci-C₆-alkyl popřípadě substituovaný atomem halogenu, skupinami -OR^g, -SR⁸, -CN, -NR^gR”, -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R⁶, -COR⁸ nebo

-CONR^S2;

a je rovno 0, 1 nebo 2; b je rovno 0, 1 nebo 2; k je rovno 0, 1 nebo 2;

m je rovno 1 nebo 2; r je rovno 0, 1 nebo 2; s je rovno 0, 1 nebo 2; u je rovno 0 nebo 1; a v je rovno 0 nebo 1;

nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.

-4CZ 299076 B6

Předložený vynález se také týká farmaceuticky přijatelných adičních solí a komplexů sloučenin podle předloženého vynálezu. V případech, kdy sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou mít jedno nebo více chirálních center, pak pokud není uvedeno jinak, předložený vynález zahrnuje každou jednotlivou neracemickou sloučeninu, která může být syntetizována a rozdělena obvyklými způsoby. V případech kdy sloučeniny podle předloženého vynálezu mají nenasycenou dvojnou vazbu uhlík-uhlík, pak je cis (Z), tak i trans (E) izomery spadají do rozsahu předmětu předloženého vynálezu. V případech, kdy sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou existovat v tautomemích formách jako jsou keto-enol tautomery, jako je

O io a

OR’ »

pak každá tautomemí forma spadá do rozsahu předloženého vynálezu bez ohledu, a to, zda existuje v rovnovážné podobě neboje omezena na jednu formu vhodnou substitucí R'.

Sloučeniny obecného vzorce I inhibují vazbu vitronektin a dalších peptidů obsahujících RGD k receptoru vitronektinu. Inhibice receptoru vitronektinu na osteoklasty inhibuje osteoklastovou resorpci kostní hmoty aje použitelná při léčení onemocnění, ve kterých je resorpce kostní hmoty vázána s patologií, jako je osteoporóza a osteoartritida.

Další předmět předloženého vynálezu je způsob stimulace vytváření kostní tkáně, který zahrnuje podávání sloučeniny, která způsobuje vzrůst vylučování osteokalcinu. Vzrůst vytváření kostní tkáně je zřejmý příznivý účinek u chorobných stavů, kde se vyskytuje nedostatek mineralizované kostní hmoty neboje požadována remodelace kosti, jako je léčba fraktur a prevence fraktur kostí. Onemocnění a metabolické poruchy, které mají za následek ztrátu kostní struktury budou také příznivě ovlivněny takovýmto způsobem léčení. Například hyperparathyroidismus, Pagetova nemoc, hyperkalkémie, při zhoubném bujení, osteolytické léze, způsobované kostními metastázami, ztráta kostní hmoty způsobená imobilizací nebo nedostatkem sexuálních hormonů, Behcetova nemoc, osteomalacie, hyperostóza a ostenopetróza mohou být příznivě ovlivněny podáváním sloučeniny podle předloženého vynálezu.

Kromě toho, jelikož sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují receptory vitronektinu v množství různých typů buněk, uvedené sloučeniny by mohly být použitelné pro léčení zánětlivých poruch, jako je rheumatická artritida a psoriáza a kardiovaskulární onemocnění, jako je ateroskleróza a restenóza. Sloučeniny obecného vzorce (I) podle předloženého vynálezu mohou být používány pro léčení nebo prevenci dalších onemocnění, které zahrnují, aniž by tím byly omezeny, tromboembolické poruchy, astma, alergie, respirační distress syndrom dospělých osob, odmítání štěpu hostitelem, odmítání transplantovaných orgánů, septický šok, ekzémy, kontaktní dermatitis, zánětlivá střevní onemocnění a další autoimunitní onemocnění. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také použitelné při léčbě zranění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také použitelné pro léčení, v to počítaje i prevenci, angiogenních poruch. Výraz angiogenní porucha, jak je zde používán, zahrnuje stavy, zahrnující abnormální neovaskularizaci. Pokud růst nových krevních cév je příčinou a nebo přispívá k patologii onemocnění, inhibice angiogeneze zmírní nepříznivé účinky onemocnění.

Příkladem takových cílových onemocnění je diabetická retinopatie. Pokud je růst nových krevních cév nutný pro podporu růstu nežádoucí tkáně, inhibice angiogeneze sníží přívod krve do takové tkáně a tím přispěje k omezení tkáně, která vyžaduje přívod krve. Příklady zahrnují růst

-5 CZ 299076 B6 nádorů, kde neovaskularizace je trvalý požadavek pro růst nádoru a vytvoření pevných nádorových metastáz. Sloučeniny podle předloženého vynálezu tedy inhibují angiogenezi nádorové tkáně a tím zabraňují růstu nádorů a nádorových metastáz.

Způsoby léčení podle předloženého vynálezu tedy tím, že přinášejí inhibici angiogeneze použitím sloučenin podle předloženého vynálezu, mohou zlepšit symptomy onemocnění a v některých případech mohou vyléčit onemocnění.

Jiným terapeutickým cílem sloučenin podle předloženého vynálezu jsou oční onemocnění 10 charakterizované neovaskularizací. Taková oční onemocnění zahrnují neovaskulámí poruchy rohovky, jako je transplantace rohovky, herpetická keratitida, luetická keratitida, pterygium a neovaskulámí panus související s používáním kontaktních čoček. Další oční onemocnění také zahrnují makulámí degeneraci starých osob, předpokládanou oční histoplasmózu, retinopatii dospívajících osob a neovaskulámí glaukom.

Předložený vynález se dále týká způsobu inhibice růstu nádorů, který zahrnuje podávání sloučeniny obecného vzorce I a antineoplastového činidla, jako je topotekan a cisplatin postupně po sobě nebo jejich současné podávání.

V obecném vzorci I je vhodným substituentem R²:

NR“-OT-Wá , ve kterém

Q¹, Q² a Q³ představují každý CR^y,

Q¹ představuje CR^y nebo N a u je rovno 0 a výhodně, každý R' představuje atom vodíku,

R představuje atom vodíku, Cj-C₆-alkyl, -C(O)C,-C₆-alkyl, C(O)OC,-C₆-alkyl, -C(O)C₀-C₆-alkyl-Ar, nebo C(O)OC₀-C₆-alkyl-Ar,

W představuje -CH₂-CH₂- a

R^y představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR⁸, -SR⁸, -CN, -NR⁸R^k, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R⁸, -COR⁸, -CONR⁸2, nebo C,-C₆-alkyl.

-6CZ 299076 B6

Alternativně R² představuje

ve kterém

Q¹, Q² a Q³ představují každý CH a u je rovno 0 a výhodně, každý R' představuje atom vodíku,

R představuje atom vodíku nebo Ci-C₄-alkyl, W představuje -CH₂-CH₂- a v je rovno 0.

Alternativně R² představuje

/ ve kterém G představuje NH a

R^b a R^c představují každý atom vodíku a výhodně,

W představuje -NH^g-(CHR^g)b25 Alternativně R² představuje

ve kterém

G představuje NH a

R^b a R^c jsou spojeny dohromady tak, že vytvářejí pěti- nebo šestičlenný aromatický nebo nearomatický karbocyklický nebo heterocyklický kruh, popřípadě substituovaný až třemi substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, skupiny CF3, C]-C4-alkyl, OR^f, S(O)kR^fCOR^f, CO₂R^f, OH, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2 a CH2N(R^f)2; nebo methylendioxy.

-7 CZ 299076 B6

Výhodně, R^b a R^c jsou spolu spojeny a vytvářejí šestičlenný aromatický karbocyklický nebo heterocyklický kruh a

W představuje -CH₂-CH₂Altemativně R² představuje .N. NFP— CR’ — Wι Y

()_sX/NR⁸ >

ve kterém každý R' představuje atom vodíku,

R představuje atom vodíku nebo Ci-C₄ alkyl,

R^s představuje atom vodíku nebo C)-C₄-alkyl a s je rovno 0, 1 nebo 2 a, výhodně,

W představuje -CH₂-CH₂20

V obecném vzorci (I), vhodné substituenty R¹ jsou atom vodíku, skupiny Ci-C6-alkyl, As-Ctr-Ce-alkyl, Het-C0-C6-alkyl, C3-C6-cykloalkyl-C0-C6-alkyl, -€H2CF3, -(CH2), 2C(O)OR', nebo -fCH2)2OR'. Výhodně, R¹ představuje atom vodíku, Ci-C4-alkyl, Ph-C₀-C₄-alkyl, -CH₂CF₃, -ýCH₂)i_₂C(O)OR', nebo -(CH₂)₂OR', ve kterém R' představuje atom vodíku nebo

C]-C₄-alkyl. Nej výhodněji R¹ představuje -CH₂CF₃.

Příklady nových sloučenin podle předloženého vynálezu jsou následující látky:

(±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-430 octová kyselina;

(±)-8-[3-(4-amino-2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-(4-methoxy-2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-{2-pyridylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-(2-imidazolylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4octová kyselina;

(±)—8—[3—[2—(1,4,5,6-tetrahydropyrimidinyl)amino]-1 -propy loxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro45 lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[2-[6-(methylamino)pyridyl]ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4octová kyselina;

-8CZ 299076 B6 (±)-8-[2-(2-benzimidazolyl)ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[2-(4-aza-2-benzimidazolyl)ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4octová kyselina;

(±)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^t-octová kyselina;

(±)-8-[2-(benzimidazol-2-yl)-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^loctová kyselina;

(±)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro15 1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(pyrimidin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin4-octová kyselina;

(R)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[( 1,4,5,6-tetrahydropyrimidin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(/erc-butoxykarbonyl)amino|-l-propyloxy]-2,3,4,530 tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-y l)-N-(fórc-butoxykarbony l)am ino]-1 -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^t-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-2-methyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-2-benzyl-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benz45 azepin-4-octová kyselina;

(±)-2-(karboxyniethyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-í-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin^l-octová kyselina;

(±)-2-(4-aminobenzyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(benzoyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

-9CZ 299076 B6 (±)-8-[3-(2-imidazolin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetra5 hydro-1 H-2-benzazepin^4-octová kyselina;

(±)-8-[2-(2-aminothiazoM-yl)-l-ethoxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-(4,6-dimethylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-octová kyselina;

(±)-8-[3-(4,5,6,7-tetrahydro-lH-l,3-diazepin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,

3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(ferc-butylacetyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluor 20 methylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazep i n-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2_(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(R) -3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetra35 hydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S) -8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-3-oxo-8-[3-(l,4,5,6-tetrahydropyrimid-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro—l H-2-benzazepin-4—octová kyselina;

(S)-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,550 tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina; a (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin^4-octová kyselina;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

-10CZ 299076 B6

Výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu zahrnují následující látky:

(S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetra5 hydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kysel ina;

(S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina; a (S)-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin^4-octová kyselina;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

V případech, kdy sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou mít jedno nebo více chirálních center, pak pokud není uvedeno jinak, předložený vynález zahrnuje každou jednotlivou neracemickou sloučenina, která může být syntetizována a izolována obvyklými způsoby. V případě sloučenin podle předloženého vynálezu jsou výhodné S konfigurace sloučenin obecného vzorce I.

V případě, že sloučeniny obsahují nenasycené dvojné vazby uhlík-uhlík, potom jak cis Z, tak i rans E izomery spadají do rozsahu předmětu předloženého vynálezu. Význam kteréhokoli substituentu vjednom jeho výskytu je nezávislý na jeho jiném výskytu nebo na významu kteréhokoli jiného substituentu v libovolném jeho výskytu.

Předložený vynález se také týká prekurzorů sloučenin podle předloženého vynálezu. Prekurzory jsou jakékoli kovalentně vázané nosič, které uvolňují aktivní základní sloučeninu obecného vzorce 1 in vivo. Jiným předmětem předloženého vynálezu jsou tedy nové prekurzory, které jsou také meziprodukty při přípravě sloučeniny obecného vzorce I a mají obecný vzorec II:

ve kterém:

R¹ představuje R⁷, A-C₀-C₄-alkyl, A-C₂-C₄-alkenyl, A-C₂-C₄-alkinyl, A-C₃-C₄-oxoalkenyl, A—C₃—C₄—oxoalkinyl, A—Cj—C₄—aminoalkyl, A—C₃—C₄—aminoalkenyl, A—C₃—C₄—aminoalkinyl, popřípadě substituovaný libovolnou přípustnou kombinací jednoho nebo více substituentů R¹⁰nebo R⁷;

R⁷ představuje -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸, -S(O)mOR', -S(O)_raNR'R, -PO(OR'), -PO(OR')₂, -NO₂, nebo tetrazolyl;

každý R⁸ nezávisle představuje -OR', -NR'R, -NR'SO₂R', -NROR', nebo -OCR'₂CO(O)R';

- 11 CZ 299076 B6

R¹⁰ představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR¹¹, -CN, -NR'Rⁿ, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r, -CO₂R', -CONR'2, A-Co-C₆-alkyl- A-C,-C₆-oxoalkyl- A-C₂-C₆-alkenyl-, A-C₂-C₆alkinyl-, A-Co~C6-alkyloxy-, A-Co-C₆-alkylamino- nebo A-Co-C6-alkyl-S(0)_r;

R² představuje

W-

W představuje-(CHR⁸)a-U-(CHR⁸)bU není přítomen nebo představuje CO, CR⁸2, C(=CR^g2), S(O)_k, O, NR⁸, CR⁸OR⁸, CR^s(OR^k)CR⁶2, CR⁸2CR⁸(OR^k), C(O)CR⁸2, CR⁸2C(O), CONR¹, NR’CO, OC(O), C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR^g, NR⁸C(S), S(O)2NR^g, NR^gS(O)2N=N, NR®NR⁸, NR^sCR⁸2, CR⁸2NR^g, CR⁸2O, OCR^g2,

C=C nebo CR^g=CR⁸.

G představuje NR^e, S nebo OO;

- 12CZ 299076 B6

R^g představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl, C₃-C7-cykloalkyl-Co-C₆-alkyl nebo Ar-C₀-C₆-alkyl;

R^k představuje R^g, -C(O)R^g nebo -C(O)OR^f;

R¹ představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Het-Co-C₆-alkyl, C₃-C₇-cykloalkyl-Co-C6-alkyl, Ar-Co-C₆-alkyl, nebo C|-C₆-alkyl substituovaný jednou až třemi skupinami, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, CN, NR^g2, OR⁸, SR⁶, CO2R^g a CON(R^g)2;

R^f představuje atom vodíku, C|-C₆-alkyl nebo Ar-C₀-C₆-alkyl;

R^e představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Ar-Co-Cg-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyI, C₃-C₇-cykloalkyl-C₀-C₆-alkyl, nebo (CH₂)_kCO₂R⁸;

R^b a R^c jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, C|-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C₇-cykloalkyl-Co-C6-alkyl, halogen, CF₃, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, NO2, N(R^f)₂, CO(NR^f)2, CH2N(R^f)2, nebo R a R^c jsou spojeny dohromady tak, že vytvářejí pěti- nebo šestičlenný aromatický nebo nearomatický karbocyklický nebo heterocyklický kruh, popřípadě substituovaný až třemi substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, skupiny CF₃, C]-C₄-alkyl, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, CO2R^f, OH, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2 a CH2N(R^f)2; nebo methylendioxy;

R' představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C₆-cykloalkyl-C₀-C6alkyl;

R představuje R', -C(O)R' nebo -C(O)OR';

R' představuje atom vodíku, C,-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C₆-cykloalkyl-C₀-C₆-alkyl, halogen, CF₃, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, NO2, N(R^f)₂, CO(NR^f)2, CH2N(R^f)2;

R^y představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR⁸, -SR^g, -CN, -NR⁸R^k, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R⁸, -COR⁸ nebo -CONR⁸2, nebo Ci-C₆-alkyl popřípadě substituovaný atomem halogenu, skupinami -OR⁶, -SR⁸, -CN, -NR⁶R, -NO2, -CF3, R'S(O)r-, -CO2R^g, -COR⁶ nebo -CONR⁶2;

a je rovno 0, 1 nebo 2;

b je rovno 0, 1 nebo 2;

k je rovno 0, 1 nebo 2;

m je rovno 1 nebo 2;

r je rovno 0, 1 nebo 2;

s je rovno 0, 1 nebo 2;

u je rovno 0 nebo 1; a v je rovno 0 nebo 1;

- 13CZ 299076 B6 nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.

Příklady nových prekurzorů podle předloženého vynálezu jsou následující látky:

Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát; a ethyl (±)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-acetát;

o nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ještě dalším předmětem předloženého vynálezu jsou nové meziprodukty obecného vzorce III:

οΙ

N+

NR·— CR' ¹¹ W O

R¹

Q²^ 3-0'

Q \^-C0₂C₁^alkyt (HI), ve kterém

R¹ představuje R⁷, nebo A-C₀-C₄-alkyl, A-C₂-C₄-alkenyl, A-C₂-C₄-alkinyl, A-C₃-C₄-oxoalkenyl, A-C₃-C₄-oxoalkinyl, A-C]-C₄-aminoalkyl, A-C₃-C₄-aminoalkenyl, A-C₃-C₄-aminoalkinyl, popřípadě substituovaný libovolnou přípustnou kombinací jednoho nebo více substituen20 tů R¹⁰ nebo R⁷;

A představuje atom vodíku, C₃-C6-cykloalkyl, Het nebo Ar;

R⁷ představuje -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸, -S(O)mOR', -S(O)_mNR'R, -PO(OR'), 25 -PO(OR')₂, -NO₂ nebo tetrazolyl;

R¹⁰ představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR¹¹, -CN, -NR'Rⁿ, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r, -CO₂R', -CONR'₂, A-Co-Cé-alkyl-, A-Ci-C₆-oxoalkyl-, A-C₂-C₆-alkenyl-, A-C₂-C₆alkinyl-, A-C₀-C₆-alkyloxy-, A-Co-C₆-alkylamino- nebo A-Co-C₆-alkyl-S(0)_r;

Rⁿ představuje R', -C(O)R', -C(O)NR'₂, -C(O)OR', -S(O)_mR', nebo -S(O)_mNR'₂;

W představuje -(CHR⁸)_a-U- (CHR⁸)b~;

U není přítomen nebo představuje CO, CR⁸2, C(=CR⁸2), S(O)_k, O, NR⁸, CR^gOR^g, 40 CR⁸(OR^k)CR⁸2, CR⁸2CR⁸(OR^k), C(O)CR^g2, CR^g2C(O), CONR¹, NRCO, OC(O), C(O)O, C(S)O,

OC(S), C(S)NR⁸S, NR⁸C(S), S(O)2NR^g, NR⁸S(O)2 N=N, NR^BNR^g, NR⁸CR^Ě2, CR⁶2NR^g, CR^g2O, OCR^g2, C=C nebo CR^g=CR^g;

R^g představuje atom vodíku, C]-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl, C₃-C₇-cykloalkyl-C₀-C₆-alkyl 45 nebo Ar-C₀-C₆-alkyl;

- 14CZ 299076 B6

R^k představuje R⁸, -C(O)R^B nebo -C(O)OR^f;

R¹ představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Het-Co-C₆-alkyl, C₃-C7-cykloalkyl-Co-C₆-alkyl, 5 Ar-Co-Cé-alkyl, nebo Ci-C₆-alkyl substituovaný jednou až třemi skupinami, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, CN, NR^g2, OR^g, SR^g, CO2R^g a CON(R⁸)2;

R^f představuje atom vodíku, Ci-Cg-alkyl nebo Ar-Co-C₆-alkyl;

R' představuje atom vodíku, Ci-C₄-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C₆-cykloalkyl-C₀-C₆alkyl;

R představuje R', -C(O)R' nebo -C(O)OR';

R^y představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR⁸, -SR⁸, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)-, -CO₂R⁸, -COR⁸ nebo -CONR⁸2, nebo C]-C₆-alkyl popřípadě substituovaný atomem halogenu, skupinami -OR⁸, -SR⁸, -CN, -NR⁸R, -NO₂, -CF₃, R'S(O)-, -CO₂R^g, -COR⁸ nebo -CONR⁸2;

a je rovno 0, 1 nebo 2; b je rovno 0, 1 nebo 2;

m je rovno 1 nebo 2; a r je rovno 0, 1 nebo 2; nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Zkratky a symboly, které jsou běžně používány v chemii peptidů a v obecné chemii jsou zde používány pro popis sloučenin podle předloženého vynálezu. Obecné zkratky a označení aminokyselin jsou v souladu s nomenklaturou, kterou stanovila IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, tak jak jsou popsány v Eur. J. Biochem. 158, 9 (1984).

Výraz C,-C4-alkyl, tak, jak je používán v této přihlášce vynálezu, znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu, obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a zahrnuje skupiny methyl, ethyl, npropyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl a t-butyl. Ci-C₆-alkyl kromě toho zahrnuje pentyl, n-pentyl, izopentyl, neopentyl a hexyl a jejich jednoduché alifatické izomery, Co-C4-alkyl a C₀-C₆-alkyl kromě toho indikují, že nemusí být přítomna žádná alkylová skupina (například zahrnují případ, kdy je přítomna kovalentní vazba).

Kterákoli skupina C_I-C₄-alkyl nebo C,-C₆-alkyl, C₂-C₆-alkenyl, C₂-C₆-alkinyl nebo C,-C₆-oxoalkyl může být popřípadě substituována skupinou R^x, která může být vázána ke kterémukoli atomu uhlíku a která vede k vytvoření stabilní struktury aje použitelný v obvyklých způsobech syntézy. Vhodné skupiny ve významu R^x jsou C]-C₄-alkyl, OR', SR', C]-C₄-alkylsulfonyl, C,-C₄-alkylsulfoxyl, -CN, N(R)₂ CH₂N(R)₂, -NO₂, -CF₃, -CO₂R', -CON(R')₂, -COR', -NR'C(O)R', F, Cl, Br, I, nebo CF₃S(O)-, kde r je rovno 0, 1 nebo 2.

Halogen nebo atom halogenu znamená F, Cl, Bral.

Výraz Ar, nebo aryl, tak, jak je zde používán, znamená fenyl nebo nafityl, nebo fenyl nebo nafty] substituovaný jedním až třemi substituenty, jako jsou substituenty definované výše ve významu alkyl, obzvláště Ci-C₄-alkyl, Ci-C₄-alkoxy, C,-C₄-alkylthio, CF₃, NH₂, OH, F, Cl, Br nebo I.

- 15 CZ 299076 B6

Het, nebo heterocyklus, indikuje popřípadě substituovaný pěti- nebo šestičlenný monocyklický kruh, nebo devíti nebo desetičlenný bicyklický kruhový systém, obsahující jeden až tři heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom dusíku, atom kyslíku a atom síry, které jsou stabilní a je možné vytvořit běžnými způsoby chemické syntézy. Příklady heterocyklů jsou benzofuryl, benzimidazol, benzopyran, benzothiofen, furan, imidazol, indolin, morfolin, piperidin, piperazin, pyrrol, pyrrolidin, tetrahydropyridin, pyridin, thiazol, thiofen, chinolin, izochinolin a tetra- a perhydro- chinolin a izochinolin. Libovolná možná kombinace až tří substituentů na Het kruhu, jako jsou kombinace, definované výše v případě alkylu, které lze získat chemickou syntézou ajsou stabilní, spadá do rozsahu předmětu předloženého vynálezu.

Výraz C₃-C₇-cykloalkyl se vztahuje k popřípadě substituovanému karbocyklickému systému tří až sedmi atomů uhlíku, které mohou obsahovat až dvě nenasycené vazby uhlík—uhlík.

Typickými příklady C₃-C₇-cykloalkylů jsou cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklopente15 nyl, cyklohexyl, cyklohexenyl a cykloheptyl. Libovolná možná kombinace až tří substituentů, jako jsou kombinace, definované výše v případě alkylu, které lze získat chemickou syntézou a jsou stabilní, spadá do rozsahu předmětu předloženého vynálezu.

Pokud R^b a R^c jsou spolu spojeny a vytvářejí pěti- nebo šestičlenný aromatický nebo nearoma20 tický karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu, ke kterému jsou R^b a R^cpřipojeny, vytvořený kruh je obecně pěti- nebo šestičlenný heterocyklus zvolený ze souboru, zahrnujícího heterocykly uvedené v případě symbolu Het nebo je jím fenylový, cyklohexylový nebo cyklopentylový kruh.

Výhodně R^b a R^c představují -Di=D₂-D₃=D₄, kde D[ - D₄ představují nezávisle na sobě CH, N nebo C-R_x s tím, že nejvýše dvě ze skupin Di-D₄ představují N. Nejvýhodněji, pokud R^b a R^cjsou spolu spojeny, vytvářejí skupinu -CH=CH-CH=CHPro označení některých skupin budou používány zkratky. t-Bu označuje terciární butylový zbytek, Boc označuje t-butyloxykarbonylový zbytek. Fmoc označuje fluorenylmethoxykarbonylový zbytek, Ph označuje fenylový zbytek. Cbz označuje benzyloxykarbonylový zbytek, Bn označuje benzylový zbytek. Me označuje methyl, Et označuje ethyl, Ac označuje acetyl, Alk označuje Ci-C₄-alkyl, Nph označuje 1-or 2-naftyl a cHex označuje cyklohexyl. Tet označuje 5-tetrazolyl.

Dále jsou používány zkratky pro některé reagenty. DCC označuje dicyklohexylkarbodiimid, DMAP označuje dimethylaminopyridin, DIEA označuje diizopropylethylamin, EDC označuje hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu. HOBt označuje 1-hydroxybenzotriazol, THF označuje tetrahydrofuran, DIEA označuje diizopropylethylamin, DEAD ozna40 čuje diethylazodikarboxylát, PPh₃ označuje trifenylfosfin, DIAD označuje diizopropylazodikarboxylát, DME označuje dimethoxyethan, DMF označuje dimethylformamid, NBS označuje N-bromsukcinimid, Pd/C označuje katalyzátor, tvořený paládiem na aktivním uhlí, PPA označuje kyselinu polyfosforečnou, DPPA označuje difenylfosforylazid, BOP označuje benzotriazoll-yloxy-tris(dimethylamino)fosfonium hexafluorfosforečnan, HF označuje kyselinu fluoro45 vodíkovou, TEA označuje triethylamin, TFA označuje kyselinu trifluoroctovou, PCC označuje pyridinium chlorchromát.

-16CZ 299076 B6

Sloučeniny obecného vzorce I se obecně připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce V:

ve kterých R? a R² mají stejný význam jako v obecném vzorci I, s chráněnými libovolnými 5 reakčními funkčními skupinami a L¹ představuje OH nebo atom halogenu;

a následným odstraněním ochranných skupin a popřípadě vytvořením farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodně je možno některé sloučeniny obecného vzorce I připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce VI:

ve kterém R¹, R', R, W, Q¹, Q², Q³ a Q⁴ mají stejný význam jako v obecném vzorci 1, s chráněnými libovolnými reakčními funkčními skupinami;

Výhodně, v případě sloučenin obecného vzorce I, Q¹, Q², Q³ a Q⁴ představují CH, W představuje 20 -CH2-CH2-, R' představuje atom vodíku a R představuje atom vodíku, Ci-C4-alkyl nebo

-C(O)OCi-C₄-alkyl. Výhodně se reakce mezi sloučeninou obecného vzorce IV a sloučeninou obecného vzorce VI provádí v přítomnosti diethylazodikarboxylátu a trifenylfosfinu v aprotickém rozpouštědle.

Kromě toho je možno některé sloučeniny obecného vzorce I připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce VII:

R' _N N+ NCR‘₂)_v—W — OH ^R‘ Τ ξ (VH),

- 17CZ 299076 B6 ve kterém R¹, R', R”, W, Q¹, Q², Q³ a v mají stejný význam jako v obecném I, s chráněnými libovolnými reakčními funkčními skupinami;

a následným odstraněním ochranných skupin a popřípadě vytvořením farmaceuticky přijatelné 5 soli.

V případě sloučenin obecného vzorce VII výhodně Q¹, Q² a Q³ představují CH, W představuje —CH₂—CH₂, v je rovno 0, R' představuje atom vodíku a R” představuje atom vodíku nebo

Ci-C₄-alkyl. Výhodně se reakce mezi sloučeninou obecného vzorce IV a sloučeninou obecného ío vzorce VII provádí v přítomnosti diethylazodikarboxylátu a trifenylfosfinu v aprotickém rozpouštědle.

Sloučeniny obecného vzorce I se připraví obecnými způsoby, popsanými ve Schématech 1—VII.

Schéma I

a) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxid. DEAD, (Ph)₃P. DMF;

b) cyklohexen, 10% Pd/C, 2-propanol;

c) 1,0 N LiOH, THF, H₂O, potom acidifikace.

-18CZ 299076 B6

Sloučenina I—1, jejíž příprava probíhá podle obecných procedur, popsaných v Bondinell, a kol. (WO 93/00095), se nechá reagovat s 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidem v kopulační reakci Mitsunobova typu (Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Synthesis 19S1,

1- 28) a tím se získá 1-2. Reakce se mediuje komplexem, vytvořeným mezi diethylazodikarbo5 xylátem a trifenylfosfinem a provádí se v aprotickém rozpouštědle, například THF, CH₂C1₂, nebo

DMF. Pyridin-N-oxidová část molekuly sloučeniny 1-2 se redukuje na odpovídající pyridin 1-3 za přenosových hydrogenačních podmínek s použitím paládiového katalyzátoru, výhodně kovového paládia na aktivním uhlí, v inertním rozpouštědle, jako je například methanol, ethanol, nebo

2- propanol. Cyklohexen, 1,4-cyklohexadien, kyselina mravenčí a soli kyseliny mravenčí, jako je ío mravenčan draselný nebo mraveněan amonný, jsou běžně používány jako reagent pro přenos vodíku v tomto typu reakce. Methylester sloučenin 1-3 se hydrolyzuje použitím vodné báze, například LiOH ve vodném THF nebo NaOH ve vodném methanolu nebo ethanolu a meziprodukt, tvořený karboxylátovou solí, se okyselí vhodnou kyselinou, například TFA nebo kyselinou chlorovodíkovou a tím se získá karboxylová kyselina 1-4. Alternativně může být izolován, je-li to požadováno, meziprodukt, tvořený karboxylátovou solí nebo karboxylová sůl volné karboxylové kyseliny může být připravena způsoby dobře známými odborníkům.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou také být připraveny alternativními způsoby, dobře známými odborníkům. Například, etherová vazba sloučenin obecného vzorce I může být vytvořena reakcí alkoholové skupiny sloučeniny obecného vzorce 1 ze Schématu 1 se sloučeninou R², obsahující přemístitelnou skupinu, jako je chlorová, bromová nebo jodová skupina. Mohou být použity i další reakce vytvářející ether, které jsou zřejmé odborníkům.

-19CZ 299076 B6

a) 2-[N-(3-hydroxy-l-propyl)-N-(torc-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-Oxid, DEAD, (Ph)₃P, DMF;

b) LiHMDS, 4-trifluormethylbenzylbromid, DMF;

c) cyklohexen, 10 % Pd/C, 2-propanol;

d) 1,0 N NaOH, MeOH; ío e) HCl/dioxan;

-20CZ 299076 B6

Sloučenina II—1, připravená postupem podle Schématu I, se nechá reagovat s 2-[N-(3-hydroxyI- propyl)-N-(fórc-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxidem kopulaění reakci Mitsunobova type, detailně popsané ve Schématu I. Výsledný produkt II-2 může být alkylován v poloze 2 (benzazepinové číslování) za standardních alkylačních podmínek, které jsou dobře známy odborníkům. Například může být II—2 zpracován bází, jako je hydrid sodný, LDA, nebo hexamethyldisilazid lithný, ve vhodném rozpouštědle, obvykle THF, DMF, DME, nebo jejich směsi, pro způsobení deprotonace amidu N-H. Působení na výsledné anionické seskupení vhodným elektrofilem, jako je alkyl-nebo benzylhalogenid, vede k N-alkylaci, dávající produkt, například ίο II—3. N-oxid sloučeniny II—3 může být redukován způsobem, popsaným ve Schématu I pro získání sloučeniny 11-4, která může být saponifikována na 11-5 způsobem, popsaným ve Schématu I. Deprotekce sloučeniny II—5 pro získání II—6 se provede za standard acidických podmínek popsaných v Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“ (publikoval WileyInterscience). Takové podmínky jsou dobře známy odborníkům. Alternativně se konverze slouče15 niny II—3 na II.6 může provést jiným způsobem, například počáteční Boc deprotekcí sloučeniny

II— 3, následovanou redukcí N-oxidu a konečnou saponifikací.

Schéma III

a) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxid, DEAD, (Ph)₃P, DMF;

b) LiHMDS, CH₃I, DMF;

c) cyklohexen, 10% Pd/C, 2-propanol;

d) 1,0 N NaOH, MeOH, potom acidifikace.

Sloučenina III—2, připravená jak bylo popsáno ve Schématu I, může být alkylována současně v poloze 2 (benzazepinové číslování) a na atomu dusíku, připojenému k pyridinovému kruhu za standardních alkylačních podmínek dobře známých odborníkům. Například může být III—2 zpracována alespoň 2 molámími ekvivalenty báze jako je hydrid sodný, LDA, nebo hexaío methyldisilazid lithný, ve vhodném rozpouštědle, obvykle THF, DMF, DME, nebo jejich směsi, pro provedení deprotekce. Působení na výsledné anionické seskupení vhodným elektrofilem, jako je alkyl- nebo benzylhalogenid, vede k bis-alkylaci, která dává produkt, například ΠΙ-3. Přeměna sloučeniny III—3 na III-5 postupuje způsoby, popsanými ve Schématech I a II.

Schéma IV

a) cyklohexen, 10% Pd/C, 2-propanol;

b) HCl/dioxan;

c) /erc-butylacetylchlorid, Et%3N, CH₂C1₂;

d) 1,0 N NaOH, MeOH, potom acidifikace.

Sloučenina IV-2, připravená zIV-1 způsoby, popsanými ve Schématech I - 111, může být acylována na atomu dusíku, vázanému k pyridinovému kruhu za standardních acylačních podmínek dobře známých odborníkům. Například reakce sloučeniny IV-2 s acylaěním činidlem, například terc-butylacetylchloridem, v přítomnosti vhodného vychytávače kyselin, obecně triethylío aminu, diizopropylethylaminu, nebo pyridinu, ve vhodném rozpouštědle, často CH₂C1₂, dává sloučeninu IV-3. Je známo množství dodatečných způsobů acylace aminu a mohou být nalezeny ve standardních referenčních publikacích, jako je „Compendium of Organic Synthetic Methods“,

Vol. 1 - VI (publikovalo Wiley-lnterscience). Saponifikace sloučeniny IV-3, jak byla popsána ve Schématech I - III, dává sloučeninu IV-4.

a) 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propanol, DEAD, (Ph)₃P, DMF, CH₂C1₂;

b) H₂, Pd/C, EtOH;

c) 2-methylthio-2-imidazolin, hydrojodid, (i-Pr)₂NEt, dimethylacetamid, 100 °C;

d) 1,0 N LiOH, THF, H₂O, potom acidifikace.

Sloučenina V-l, připravena jak bylo popsáno ve Schématu I, se nechá reagovat s chráněnou verzí

3-amino-l-propanolu, jako je 3-(/ere-butoxykarbonylamino)-l-propanol, 3-(benzyloxykarbo-23CZ 299076 B6 nylaminoj-l-propanol nebo 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propanol, kopulační reakci Mitsunobova typu jak bylo popsáno ve Schématu I. Výsledná sloučenina, V-2, se zbaví ochrany a tím se získá sloučenina V-3. Jak je dobře známo odborníkům, deprotekční podmínky jsou zvoleny na základě funkčních a ochranných skupin, které se nacházejí v V-2. Například p-nitro-Cbz skupina přítomná ve sloučenině V-2 se odstranění hydrogenolýzou v přítomnosti paládiového katalyzátoru, obecně paládia na aktivním uhlí nebo Pd(OH)₂ na uhlí, ve vhodném rozpouštědle, obvykle methanolu, ethanolu, ethylacetátu nebo jejich směsích. Je-li to požadováno, hydrogenolýza může být prováděna v přítomnosti kyseliny, například HCI, pro získání odpovídajících amonných solí sloučeniny V-2. Reakce V-3 s hydrojodidem 2-methylthio-210 imidazolinu v přítomnosti báze, například diizopropylethylaminu ve vhodném rozpouštědle jako je MeOH, EtOH, DMF nebo dimethylacetamid, dává V-4. Podobné podmínky pro provádění transformace jsou popsány ve WO 95/32710. Saponifikace pro získání sloučeniny V-5 se provádí tak, jak bylo popsáno ve Schématu I.

Schéma VI

a) 3-(fórc-butoxykarbonylamino)-l-propanol, DEAD, (Ph)₃P, DMF, THF;

b) TFA, CH₂C1₂;

c) 2-brompyrimidin, NaHCO₃, EtOH, zpětný tok;

d) H₂, Pd/C, HCI, MeOH;

e) K₂CO₃, H₂O.

Sloučenina VI-3, připravená zVI-1 způsobem popsaným ve Schématu V, se nechá reagovat 25 s 2-halopyrimidinem, obecně 2-chlorpyrimidinem nebo 2-brompyrimidinem, v přítomnosti vhodného vychytávače kyselin, obvykle hydrogenuhličitanu sodného, triethylaminu, diizopropyl-24CZ 299076 B6 ethylaminu nebo pyridinu, ve vhodném rozpouštědle, jako je ethanol, DMF, nebo dimethylacetamid a tím se získá sloučenina VI-4. Pyrimidinový kruh sloučeniny VI-4 se redukuje na odpovídající 1,4,5,6-tetrahydropyrimidinový kruh postupem podle podmínek, popsaných pro provádění takové transformace (viz například WO 95/32710). Sloučenina VI-4 se tedy podrobí hydrogenaci v přítomnosti paládiového katalyzátoru, výhodně paládia na aktivním uhlí, ve vhodném rozpouštědle, jako je methanol nebo ethanol. Reakce se obvykle provádí za acidických podmínek; přidání anorganické kyseliny, jako je HC1, je obecně výhodné. Sloučenina VI-5 se získá následnou bazifikací filtrované reakční směsi s K₂CO₃ a H₂O.

1»

Schéma Vil

a) NaH, 4-(trifluormethyl)benzyl bromid; DMF;

b) H₂, Pd(OH)₂/C, MeOH.

Sloučenina VII—1, připravená pomocí obecných procedur, které popsali Bondinell, a kol., PCT přihláška WO 93/00095, publikovaná 7. ledna 1993 a Bondinell, a kol., PCT přihláška WO 94/14776, se nechá reagovat s 4-(trifluormethyl)benzylbromidem v přítomnosti vhodné báze, obecně hydridu sodného nebo bis(trimethylsilyl)amidu lithného v aprotickém rozpouštědle, výhodně DMF, THF, nebo jejich směsi, čímž se získá bis-alkylovaný produkt VII-2.

4-(triluormethyl) benzylether sloučeniny VII-2 může být výhodně odstraněn hydrogenolýzou, čímž se získá fenol VII—3. Způsoby hydrogenolýzy benzyletherů jsou dobře známy odborníkům a jsou popsány ve vhodných referenčních monografiích, například v Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“ (publikovalo Wiley—Interscience). Fenol VII—3 se potom používá pro přípravu sloučenin obecného vzorce I způsoby, které byly popsány v předchozích Schématech.

Amidové kopulační reagenty, které jsou zde používány, představují reagenty, které mohou být používány pro vytváření peptidových vazeb. Typické kopulační způsoby používají karbodiimidy, aktivované anhydridy a estery a acylhalogenidy. Reagenty jako je EDC, DCC, DPPA, PPA, BOP reagent, HOBt, N-hydroxysukcinimid a oxalylchlorid jsou typické.

Kopulační způsoby vytváření peptidových vazeb jsou obecně dobře známy odborníkům. Způsoby syntézy peptidů jsou obecně popsány v monografii Bodansky a kol., THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984. Ali a kol. v J. Med. Chem, 29, 984 (1986) a J. Med. Chem, 30, 2291 (1987) jsou obecné ilustrace těchto způsobů ajsou zde zahrnuty jako reference.

Typicky se amin nebo anilin kopuluje prostřednictvím své aminoskupiny ke vhodnému substrátu, představovanému karboxylovou kyselinou, použitím vhodného karbodiimidového kopulačního

-25CZ 299076 B6 činidla jako je Ν,Ν'-dicyklohexyl karbodiimid (DCC), popřípadě v přítomnosti katalyzátorů jako je 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) a dimethylaminopyridin (DMAP). Další způsoby, jako je vytváření aktivovaných esterů, anhydridů nebo halogenidů kyselin, volného karboxylů příslušným způsobem chráněného kyselého substrátu a následná reakce s volným aminem vhodně chráněného aminu, popřípadě v přítomnosti a báze, je možno použít také. Například se chráněná Boc-aminokyselina nebo Cbz-amidinobenzoová kyselina zpracovává v bezvodém rozpouštědle jako je methylenchlorid nebo tetrahydrofuran (THF) v přítomnosti báze jako je N-methylmorfolin, DMAP nebo trialkylamin, s izobutylchlormravenčanem pro vytvoření „aktivovaného anhydridu“, který potom následně reaguje s volným aminem druhé chráněné aminokyseliny nebo anilinu.

Užitečné meziprodukty pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kteiých R² je benzimidazol, jsou popsány v Nestor a kol., J. Med. Chem. 1984, 27, 320. Reprezentativní způsoby přípravy benzimidazolových sloučenin, použitelných ve způsobu podle předloženého vynálezu, jsou také známy a mohou být nalezeny například v EP-A 0 381 033.

Adiční soli s kyselinami sloučenin podle vynálezu se připraví standardním způsobem ve vhodném rozpouštědle ze základní sloučeniny a v přebytku kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina fluorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina octová, kyselina trifluoroctová, kyselina maleinová, kyselina jantarová nebo kyselina methansulfonová. Jisté sloučeniny vytvářejí vnitřní soli nebo zwitteriony, které mohou být přijatelné. Kationtové soli se připraví zpracováním základní sloučeniny přebytkem alkalického reagentu, jako je hydroxid, uhličitan nebo alkoxid, obsahujícího vhodný kation; nebo vhodným organickým aminem. Kationty jako je Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ a NH₄ ⁺ jsou specifické příklady kationtů, přítomných ve farmaceuticky přijatelných solích.

Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozic, které zahrnují sloučeninu obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič. V souladu s tím sloučeniny obecného vzorce I mohou být používány pro výrobu léčiva. Farmaceutické kompozice sloučenin obecného vzorce I, připravené zde popsaným způsobem mohou být připraveny jako roztoky nebo lyofilizované prášky pro parenterální podávání. Prášky mohou být rekonstituovány přidáním vhodného ředidla nebo jiného farmaceuticky přijatelného nosiče před jejich použitím. Kapalný přípravek může být pufrovaný izotonický vodný roztok. Příklady vhodných ředidel jsou normální izotonický fyziologický roztok, standardní 5% dextróza ve vodě nebo pufrovaný roztok octanu sodného nebo amonného. Takový přípravek je obzvláště vhodný pro parenterální podávání, ale může také být používán pro orální podávání nebo obsažen v odměřené dávce v inhalačním nebo rozprašovacím přístroji pro vdechování. Může být požadováno přidat excipienty jako je polyvinylpyrrolidon, želatina, hydroxycelulóza, arabská guma, polyethylenglykol, mannitol, chlorid sodný nebo citrát sodný.

Alternativně tyto sloučeniny mohou být enkapsulovány, tabletovány nebo připraveny ve formě emulzí nebo sirupů pro orální podávání. Farmaceuticky přijatelné pevné nebo kapalné nosiče mohou být přidány pro zlepšení nebo stabilizaci kompozice nebo pro usnadnění přípravy kompozice. Pevné nosiče zahrnují škroby, laktózu, dihydrát síranu vápenatého, terru albu, stearan hořečnatý nebo kyselinu stearovou, talek, pektin, arabskou gumu, agar nebo želatinu. Kapalné nosiče zahrnují sirupy, kokosový olej, olivový olej, fyziologický roztok a vodu. Nosiče také mohou zahrnovat materiály se zpožděným uvolňováním, jako je glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát, samy o sobě nebo spolu s voskem. Množství pevného nosiče může být různé, ale výhodně je v rozmezí od asi 20 mg do asi 1 g na dávkovou jednotku. Farmaceutické příprav50 ky se vyrábějí obvyklými způsoby známými z farmaceutické techniky, jako jsou mletí, míchání, granulace a lisování, je-li to nutné, do formy tablet; nebo mletí, míchání a plnění do tvrdých želatinových kapslí. Pokud je používán kapalný nosič přípravky se vyrábí ve formě sirupů, elixírů, emulzí nebo vodných nebo bezvodých suspenzí. Takové kapalné přípravky mohou být podávány přímo perorálně nebo plněny do měkkých želatinových kapslí.

-26CZ 299076 B6

Pro rektální podávání mohou také být sloučeniny podle předloženého vynálezu spojeny s excipienty jako je kakaové máslo, glycerin, želatina nebo polyethylenglykoly a být odlity do formy čípků.

Sloučeniny, které jsou zde popsány, jsou antagonisté receptorů vitronektinu a jsou použitelné pro léčení onemocnění, ve kterých základní patologie souvisí s ligandy nebo buňkami, které interagují s receptory vitronektinu. Například jsou tyto sloučeniny jsou použitelné pro léčení onemocnění, ve kterých je patologie představována ztrátou kostní matrice. Sloučeniny podle předloženého vynálezu proto mohou být použity pro léčení osteoporózy, hyperparathyroidismu, Pagetovy nemoc, hyperkalkémie zhoubného bujení, osteolytických lézí, vytvářených kostními metastázami, ztrátou kostní tkáně v důsledku mobilizace nebo nedostatku sexuálních hormonů. Předpokládá se také, že sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být použita jako protinádorová, antiangiogenní, protizánětlivá a protimetastázová činidla a mohou být použitelná v léčení aterosklerózy a restenózy.

Sloučeniny se podávají buď orálně, nebo parenterálně pacientovi takovým způsobem, aby koncentrace látky byla dostatečná pro inhibici resorpce kostní hmoty nebo další indikace. Farmaceutické kompozice, obsahující sloučeninu podle vynálezu, jsou podávány v orální dávce mezi asi 0,1 až asi 50 mg/kg způsobem, který je slučitelný s aktuálním stavem pacienta. Výhodně je orální dávka od asi 0,5 do asi 20 mg/kg. Pro akutní terapii je výhodné parenterální podávání. Intravenózní infuze peptidu v 5% dextróze ve vodě nebo normálním fyziologickém roztoku nebo v podobném přípravku se vhodnými excipienty je nejúčinnější, ačkoliv intramuskulámí bolus injekce je také použitelná. Typicky je parenterální dávka od asi 0,01 do asi 100 mg/kg; výhodně mezi 0,1 a 20 mg/kg. Sloučeniny se podávají jednou až čtyřikrát denně v úrovni, která zaručí dosažení celkové denní dávky od asi 0,4 do asi 400 mg/kg/den. Přesné množství a způsob, kterým jsou sloučeniny podle vynálezu podávány odborník snadno určí na základě koncentrace, požadované pro dosažení terapeutického účinku.

Předložený vynález se dále týká způsobu léčení osteoporózy nebo inhibice ztráty kostní hmoty, který zahrnuje podávání sloučeniny obecného vzorce I a dalších inhibitorů resorpce kostní hmoty, jako jsou bisfosfonáty (například allendronát), hormonová nahrazovací terapie, antiestrogeny nebo kalcitonin a to buď po sobě, nebo současně. Kromě toho se předložený vynález týká způsobu léčení použitím sloučenin podle předloženého vynálezu a anabolického činidla, jako kostní morfogenní protein, iproflavon, použitelný při prevenci ztráty kostní hmoty a/nebo pro dosažení přírůstku kostní hmoty.

Kromě toho se předložený vynález týká způsobu inhibice růstu nádorů, který zahrnuje podávání postupně po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučenin obecného vzorce I a antineoplastového činidla. Sloučeniny kamptothecinové třídy jako je topotekan, irinotekan a 9-aminokamptothecin a platinové koordinační komplexy jako je cisplatin, ormaplatin a tetraplatin, jsou dobře známé skupiny antineoplastových činidel. Sloučeniny kamptothecinové třídy jsou popsány v Patentech US 5 004 758, US 4 604 463, US 4 473 692, US 4 545 880, US 4 342 776, US 4 513 138, US 4 399 276, publikovaných EP patentových přihláškách č. 0 418 099 a 0 088 642, v publikacích Wani, a kol., J. Med. Chem., 1986, 29, 2358, Wani, a kol., J. Med. Chem., 1980, 23, 554,

Wani, a kol., J. Med. Chem., 1987, 30, 1774 a Nitta, a kol., Proč. 14^th International Congr. Chemotherapy., 1985, Anticancer Section 1, 28, které jsou zde ve své celistvosti zahrnuty jako reference. Platinový koordinační komplex, cisplatin, je dostupný pod obchodním označením Platinol® od společnosti Bristol Myers-Squib Corporation. Použitelné přípravky obsahující cisplatin jsou popsány v patentech US 5 562 925 a US 4 310 515, které jsou zde ve své celistvosti zahrnuty j ako reference.

Ve způsobech inhibice růstu nádorů, které zahrnují podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučeniny obecného vzorce (I) a antineoplastového činidla může být koordinační sloučenina platiny, například cisplatin, podávána použitím pomalé intravenózní infuze. Výhodný nosič je roztok dextrózy/íyziologický roztok, obsahující mannitol. Dávkový rozvrh platinových koordi-27CZ 299076 B6 načních sloučenin může být v rozmezí od asi 1 do asi 500 mg na čtvereční metr (mg/m²) tělesného povrchu v průběhu léčení. Infuze platinových koordinačních sloučenin může být prováděna jednou nebo dvakrát týdně a týdenní léčení může být několikrát opakováno. Při použití sloučeniny kamptothecinové třídy při parenterálním podávání průběh léčby obecně používá od asi 0,1 do asi 300,0 mg/m² tělesného povrchu denně po asi pět po sobě následujících dní. Nejvýhodněji způsob léčení použitý pro topotekan je od asi 1,0 do asi 2,0 mg/m² tělesného povrchu denně po asi pět po sobě následujících dní. Alternativně se cyklus terapie opakuje alespoň jednou v intervalu od asi sedmi dní do asi dvaceti osmi dní.

ío Farmaceutické kompozice mohou být připraveny se sloučeninou obecného vzorce (I) a antineoplastovým činidlem v témže obalu, ale použití přípravků odděleným způsobem je výhodné. Pokud jsou obě činidla připravena ve formě roztoku, mohou být obsaženy v jediném systému pro podávání infuze nebo injekce pro současné podávání nebo v tandemovém uspořádání.

Pro výhodné podávání sloučeniny obecného vzorce I a antineoplastového činidla současně nebo v různých dobách je připravena souprava, která v jednom obalu jako je krabice nebo karton nebo jiný obal, obsahuje jednotlivé lahvičky, sáčky, nádobky nebo další obaly a v každém z nich je obsaženo účinné množství sloučeniny obecného vzorce I pro parenterální podávání jak je popsáno výše a účinné množství antineoplastového činidla pro parenterální podávání, jak je popsáno výše. Taková souprava může například obsahovat obě farmaceutická činidla v oddělených obalech nebo ve stejném obalu, popřípadě v lyofilizované formě spolu s nádobkami, obsahujícími roztoky pro rekonstituci. Variace této soupravy obsahují roztok rekonstituci a lyofilizovanou látku v oddělených komorách téhož obalu, ve kterém může být smíchán před použitím. Při takovémto uspořádání antineoplastové činidlo a sloučenina podle předloženého vynálezu mohou být baleny odděleně, to jest ve dvou různých obalech nebo lyofilizovány společně jako prášek a obsažené v jediném obalu.

Pokud jsou obě činidla podána ve formě roztoku, mohou být obsažena v infuzním/injekčním systému pro současné podávání nebo v tandemovém uspořádání. Například může být sloučenina obecného vzorce I v intravenózně injektovatelné formě nebo v infuzním sáčku, který je spojen do série prostřednictvím trubic s antineoplastovým činidlem v druhém infuzním sáčku. Při použití takového systému může pacient dostávat počáteční bolus injekce nebo infuzi sloučeniny obecného vzorce I, následovanou infuzi antineoplastového činidla.

Sloučeniny mohou být testovány jedním nebo více biologických testů pro určení koncentrace sloučeniny, kteráje nutná pro dosažení požadovaného farmakologického účinku.

Inhibice vazby vitronektinu

Vazba [³H]—SK&F—107260 v pevné fázi k α_νβ₃:

Receptor α_νβ₃ z lidské placenty nebo lidských krevních destiček (0,1-0,3 mg/ml) v pufru T (obsahujícím 2 mM CaCl₂ a 1% oktylglukosidu) byl zředěn pufrem T obsahujícím 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCl₂ (pufr A) a 0,05% NaN₃ a potom okamžitě přidán do 96-jamkových

ELISA desek (Corning, New York, NY) v množství 0,1 ml na jamku. 0,1 až 0,2 pg α_νβ₃ bylo přidáno na jamku. Destičky byly inkubovány přes noc při teplotě 4 °C. V okamžiku experimentu, jamky byly promývány jednou pufrem A a byly inkubovány 0,1 ml 3,5% hovězího sérového albuminu ve stejném pufru po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. Po inkubaci byly jamky úplně odsáty a promývány dvakrát 0,2 ml pufru A.

Sloučeniny byly rozpuštěny 100% DMSO a tím se získal 2 mM zásobní roztok, který byl zředěn vazebným pufrem (15 mM Tris-HCl (pH 7,4), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCl₂) na konečnou koncentraci sloučeniny 100 μΜ. Tento roztok byl potom zředěn na požadovanou koncentraci sloučeniny. Různé koncentrace neoznačených antagonistů (0,001 až 100 μΜ)

-28CZ 299076 B6 byly trojnásobně přidány do jamek, následovalo přidání 5,0 nM [³H]-SK&F-107260 (65 až 86 Ci/mmol).

Desky byly inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. Po ukončení inkubace byly jamky úplně odsáty a promývány jednou 0,2 ml ledového pufru A jamka po jamce. Receptory byly solubilizovány 0,1 ml 1% SDS a vazba [³H]-SK&F-107260 byla určena kapalinovým scintilačním počítačem s přidáním 3 ml Ready Safe v Beckmanově LS Liquid Scintillation Counter, s účinností 40%. Nespecifická vazba [³H]-SK&F-107260 byla určena v přítomnosti 2 μΜ SK&F107260 a byla konzistentně menší než 1 % celkového radioligandového vstupu. IC₅₀ (koncentrace ío antagonisty, která inhibuje 50 % vazby [³H]-SK&F-107260) byla určena nelineárním způsobem aproximací křivky metodou nejmenších čtverců, která byla odvozena modifikací programu

LUNDON-2. Ki (disociační konstanta antagonisty) byla vypočtena pomocí rovnice:

Ki = IC_5O/(1 + L/K_d), kde L a K_d byly koncentrace respektive disociační konstanta [³H]-SK&F-107260.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují vitronektinovou vazbu k SK&F 107260 v rozsahu koncentrací od 4,0 do asi 0,0003 μΜ.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly také testovány in vitro a in vivo resorpci kostní hmoty ve standardních testech pro zhodnocení inhibice vytváření kosti, jako je test vytváření jamek, popsaný v EP 528 587, který také může být prováděn s použitím lidských osteoklastů namísto krysích osteoklastů a ovarektomizovaný krysí model, který popsal Wronski a kol., Cells a Materials 1991, Sup. 1, 69-74.

Test migrace buněk vaskulámího hladkého svalstva

Byly používány krysí nebo lidské buňky hladkého svalstva aorty. Migrace buněk byla monitoro30 vána v komoře pro buněčné kultury Transwell použitím polykarbonátové membrány s póry 8 pm (Costar), Spodní povrch filtru byl pokryt vitronektinem. Buňky byly suspendovány v DMEM s přídavkem 0,2% hovězího sérového albuminu v koncentraci 2,5 až 5,0 χ 10⁶ buněk/ml a byly přezpracovány testovanou sloučeninou v různých koncentracích po 20 minut při teplotě 20 °C. Samotné rozpouštědlo bylo používáno jako kontrola. 0,2 ml buněčné suspenze bylo umístěno do horního oddílu komory. Dolní oddíl obsahoval 0,6 ml DMEM s přídavkem 0,2% hovězího sérového albuminu. Inkubace byla prováděna při teplotě 37 °C v atmosféře 95 % vzduchu/5% CO₂ po dobu 24 hodin. Po inkubaci byly nezmigrované buňky na horním povrchu filtru odstraněny jemným seškrábáním. Filtr potom byl fixován v methanolu a označen pomocí 10% Giemsa barviva. Migrace byla měřena buď

a) určením počtu buněk, které migrovaly na spodní povrch filtru, nebo

b) extrakcí označených buněk 10% octovou kyselinou, následovanou určením absorpce při 600 nM.

Thyroparathyroidektomizovaný krysí model

Každá pokusná skupina sestávala ze 5 až 6 dospělých krysích samců Sprague-Dawley (250 až 400 g tělesná hmotnost). Krysy byly thyroparathyroidektomizovány (provedeno prodávající společností, Taconic Farms) 7 dní před použitím. Všechny krysy dostaly náhradní dávku thyroxinu každé 3 dny. Při příjmu krys byly změřeny hladiny obíhajícího ionizovaného vápníku ve veškeré krvi okamžitě po odebrání ocasní venipunktury do heparinizovaných zkumavek. Krysy byly připuštěny do pokusu, pokud hladina ionizovaného Ca (měřená pomocí vápníkového pH analyzátoru Ciba-Coming model 634) byla menší než <l,2mM/l. Každá krysa byla

-29CZ 299076 B6 vybavena stálým žilním a tepenným katétrem pro dodávání testovaného materiálu a pro odebírání krevních vzorků. Krysy potom byly drženy o dietě prosté vápníku a o deionizované vodě. Byly měřeny základní hladiny Ca a každé kryse bylo podáváno bud’ kontrolní vehikulum, nebo lidský peptidový hormon příštitných tělísek 1-34 (hPTHl-34, dávka 1,25 pg/kg/h v fyziologickém roztoku/0,1% hovězím sérovém albuminu, Bachem, Ca) nebo směs hPTHl-34 a testovaného materiálu kontinuální intravenózní infuzi žilním katétrem použitím vnější stříkačkové pumpy. Kalcemická odezva každé krysy byla měřena v dvouhodinových intervalech v průběhu infuzní periody 6 až 8 hodin.

ío Test lidské osteoklastové resorpce a adheze

Testy s jamkovou resorpcí a adhezí byly vyvinuty a standardizovány pro použití normálních lidských osteoklastů, získaných z osteoklastomové tkáně. Test 1 byl vyvinut pro měření osteoklastových objemů laserová konfokální mikroskopií. Test 2 byl vyvinut jako třídění s velkým výkonem, ve kterém kolagenové fragmenty (uvolňované v průběhu resorpce) jsou měřeny kompetitivním ELISA testem.

Test 1 (použití laserové konfokální mikroskopie) Alikvoty suspenzí buněk, získaných z lidských osteoklastom byly odebrány ze zásoby v kapaném dusíku, zahříván rychle na teplotu 37 °C a promývány x 1 v RPMI-1640 médiu centrifugací (1000 otáček/min., 5 minut při teplotě 4 °C).

Médium bylo odsáto a znovu umístěno spolu s myšími protilátkami proti HLA-DR a potom zředěno 1:3 v RPMI-1640 médiu. Suspenze byla inkubována po dobu 30 minut na ledu a často míchána.

Buňky byly promývány x 2 studeným RPMI-1640 a následovala centrifugace (1000 otáček/min., 5 minut při teplotě 4 °C) a buňky potom byly přeneseny do sterilní 15ml centrifugační zkumavky. Počet jednojademých buněk byl spočítán ve zlepšené Neubauerově počítací komoře.

Dostatečný počet magnetických kuliček (5/jednojademou buňku), pokrytých kozími protilátkami proti myším IgG (Dynal, Great Neck, NY) byly odebrány ze zásobní láhve a umístěny do 5 ml čerstvého médium (které vymylo toxické azidové konzervační činidlo). Médium bylo odstraněno imobilizací kuliček na magnet a bylo nahraženo čerstvým médiem.

Kuličky byly smíchány s buňkami a suspenze byla inkubována po 30 minut na ledu. Suspenze byla často míchána.

Kuličkami pokryté buňky byly imobilizovány na magnetu a zbývající buňky (na osteoklasty bohatá frakce) byla dekantována do sterilní 50 ml centrifugační zkumavky.

K buňkám, pokrytým kuličkami, bylo přidáno čerstvé médium pro odplavení jakýchkoli zachycených osteoklastů. Tento proces promývání byl opakován desetkrát. Kuličkami pokryté buňky byly vyhozeny.

Životaschopné osteoklasty byly spočítány v čítači komoře s použitím fluoresceindiacetátu pro označení živých buněk. Pro přidávání vzorku do komory byla používána plastická Pasteurova pipeta pro jedno použití s velkým otvorem.

Osteoklasty byly peletovány centrifugací a hustota byla upravena na vhodnou velikost v DMEM médiu (počet osteoklastů se mění od nádoru k nádoru), s přídavkem 10 % fetálního telecího séra a 1,7 g/litr hydrogenuhličitanu sodného.

ml elikvotů buněčné suspenze (najedno působení sloučeniny) bylo dekantováno do 15ml centrifugovacích zkumavek. Buňky byly peletovány centrifugací.

-30CZ 299076 B6

Do každé zkumavky bylo přidáno 3 ml odpovídající sloučeniny (zředěna na 50 μΜ v EMEM médiu). Byly také přidány vhodná kontrolní vehikula, pozitivní kontrola (myší monoklonální protilátky proti receptorům vitronektinu [87MEM1] zředěné na 100 pg/ml) a izotypová kontrola (IgG_2a zředěná na 100 pg/ml). Vzorky byly inkubovány při teplotě 37 °C po 30 minut.

0,5 ml alikvotů buněk bylo naočkováno na sterilní dentinové řezy v 48-jamkové desce a inkubováno při teplotě 37 °C po 2 hodiny. Každé ošetření bylo kontrolováno čtyřnásobně.

Řezy byly promývány šesti šaržemi PBS (10 ml/jamku v 96 jamkové desce) a potom umístěny do io čerstvého média, obsahujícího testovanou sloučeninu nebo kontrolní vzorek. Vzorky byly inkubovány při teplotě 37 °C po dobu 48 hodin.

Procedura s tartarátově odolnou kyselou fosfatázou (TRAP) (selektivní označování pro buňky osteoklastové linie). Kostní řezy, obsahující připojené osteoklast, byly promývány ve fosforeč15 nanem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS) a fixovány v 2% gluteraldehydu (v 0,2 M kakodylátu sodném) po 5 minut.

Potom byly promývány ve vodě a inkubovány po 4 minuty v TRAP pufru při teplotě 37 °C (0,5 mg/ml naftol AS-BI fosforečnan rozpuštěný v Ν,Ν-dimethylformamidu a smíchaný s 0,25 M citrátovým pufrem (pH 4,5), obsahujícím lOmM tartarát sodný.

Po promývání ve studené vodě byly řezy ponořeny do studeného acetátového pufru (0,1 M, pH 6,2) obsahujícího 1 mg/ml červeného granátu a inkubovány při teplotě 4 °C po dobu 4 minut.

Přebytek pufru byl odsát a řezy byly sušeny na vzduchu s následujícím promýváním ve vodě. TRAP pozitivní osteoklasty (cihlově červený/ purpurový precipitát) byly spočítány bríght-field mikroskopií a potom byly odebrány z povrchu dentinu sonikací.

Jamkové objemy byly určeny konfokálním mikroskopem Nikon/Lasertec ILM21W.

Test 2 (používající ELISA čtení)

Lidské osteoklasty byly obohaceny a připraveny pro testování sloučenin způsobem popsaným v počátečních 9 krocích Testu 1. Pro úplnost výkladu jsou tyto kroky zopakovány.

Alikvoty suspenzí buněk, získaných z lidských osteoklastom byly odebrány ze zásoby v kapalném dusíku, zahříván rychle na teplotu 37 °C a promývány χ 1 v RPMI-1640 médiu centrifugací (1000 otáček/min., 5 minut při teplotě 4 °C).

Buňky byly promývány x 2 studeným RPMI-1640 a následovala centrifugace (1000 otáček/min.,

5 minut při teplotě 4 °C) a buňky potom byly přeneseny do sterilní 15ml centrifugaění zkumavky.

Počet jednojademých buněk byl spočítán ve zlepšené Neubauerově počítací komoře.

Dostatečný počet magnetických kuliček (5/jednojademou buňku), pokrytých kozími protilátkami proti myším IgG (Dynal, Great Neck, NY) byly odebrány ze zásobní láhve a umístěny do 5 ml čerstvého média (které vymylo toxické azidové konzervační činidlo). Médium bylo odstraněno imobilizací kuliček na magnet a bylo nahraženo čerstvým médiem.

-31 CZ 299076 B6

K buňkám, pokrytým kuličkami, bylo přidáno čerstvé médium pro vymytí jakýchkoli zachyce5 ných osteoklastů. Tento proces promývání byl opakován desetkrát. Kuličkami pokryté buňky byly vyhozeny.

Životaschopné osteoklasty byly spočítány v čítači komoře s použitím fluoresceindiacetátu pro označení živých buněk. Pro přidávání vzorku do komory byla používána plastická Pasteurova ío pipeta pro jedno použití s velkým otvorem.

Na rozdíl od způsobu popsaného v Testu 1, sloučeniny byly tříděny ve 4 dávkách pro určení IC₅o následujícím způsobem:

Osteoklastové preparáty byly preinkubovány po 30 minut při teplotě 37 °C s testovanou slouče20 ninou (4 dávky) nebo kontrolní látkou.

Potom byly naočkovány na řezy hovězí kortikální kosti v jamkách ve 48-jamkové tkáňové kultivační desce a byly inkubovány po další 2 hodiny při teplotě 37 °C.

Kostní řezy byly promývány v šesti dávkách teplého fosforečnanově pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) pro odstranění nepřilnutých buněk a potom byly navráceny do jamek 48 jamkové destičky, obsahujících čerstvé sloučeniny nebo kontrolní látky.

Tkáňová kultivační deska byla potom inkubována po 48 hodin při teplotě 37 °C.

Supematanty z každé jamky byly odsáty do jednotlivých zkumavek a byly testovány kompetitivním ELISA testem, který detekoval c-telopeptidy kolagenu typu I, které byly uvolňovány během procesu resorpce. Tento test je komerčně dostupný ELISA test (Osteometer, Denmark), který obsahuje králičí protilátky, které specificky reagují s 8-aminokyselinovou sekvencí (Glu-Lys35 Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg), která je přítomna v karboxy-terminálním telopeptidu řetězce al kolagenu typu I. Výsledky jsou vyjádřeny v % inhibice resorpce vzhledem ke kontrolnímu vehikulu.

Test adheze lidských osteoklastů

Alikvoty suspenzí buněk, získaných z lidských osteoklastom byly odebrány ze zásoby v kapal45 ném dusíku, zahříván rychle na teplotu 37 °C a promývány x 1 v RPMI-1640 médiu centrifugací (1000 otáěek/min., 5 minut při teplotě 4 °C).

-32CZ 299076 B6

Kuličkami pokryté buňky byly imobilizovány na magnetu a zbývající buňky (na osteoklasty ío bohatá frakce) byla dekantována do sterilní 50 ml centrifugační zkumavky.

K buňkám, pokrytým kuličkami, bylo přidáno čerstvé médium pro vymytí jakýchkoli zachycených osteoklastů. Tento proces promývání byl opakován desetkrát. Kuličkami pokryté buňky byly vyhozeny.

Životaschopné osteoklasty byly spočítány v citací komoře s použití fluoresceindiacetátu pro označení živých buněk. Pro přidávání vzorku do komory byla používána plastická Pasteurova pipeta pro jedno použití s velkým otvorem.

Osteoklasty byly peletovány centrifugací a hustota byla upravena na vhodnou velikost v DMEM médiu (počet osteoklastů se mění od nádoru k nádoru), s přídavkem 10% fetálního telecího séra a 1,7 g/litr hydrogenuhličitanu sodného.

Osteoklastové preparáty byly preinkubovány po 30 minut při teplotě 37 °C s testovanou sloučeninou (4 dávky) nebo kontrolní látkou.

Buňky byly potom naočkovány osteopontinem pokrytá sklíčka (lidský nebo krysí osteopontin, 2,5 pg/ml) a inkubovány po dobu 2 hodin při teplotě 37 °C.

Nepřilnuté buňky byly odstraněny intenzivním promýváním ve fosforečnanově pufrovaném fyziologickém roztoku a buňky, které zůstaly na sklíčkách byly fixovány v acetonu.

Osteoklasty byly označeny pro tartarátově odolnou fosfatázu (TRAP), selektivní markér pro buňky tohoto fenotypu (viz kroky 15 - 17) a byly počítány optickou mikroskopií. Výsledky jsou vyjádřeny jako % inhibice adheze ve srovnání s kontrolní látkou.

Test buněčné adheze

Buňky a buněčné kultury

Lidské zárodečné ledvinové buňky (HEK293 buňky) byly získány od ATCC (katalogové č. CRL1573). Buňky byly pěstovány na Earlově minimálním esenciálním médiu (EMEM), obsahujícím Earlovy soli, 10% zárodečného hovězího séra, 1% glutamin a 1 % Penicilinu - Streptomycinu.

Konstrukty a transfekce

3,2 kb EcoRl-KpnI fragment podjednotky ot_v a 2,4 kb Xbai-Xhol fragment podjednotky β₃ byly vloženy do EcoRI - EcoRV klonovacích míst pCDN vektoru (Aiyar a kol., 1994), který obsahuje

CMV promotor a G418 volitelný markér pomocí blunt end ligace. Pro stabilní expresi bylo 80 x 10⁶ HEK 293 buněk elektrotrsansformováno α_ν+β₃ konstrukty (20 pg DNA každé podjednotky) použitím přístroje Gene Pulser (Hensley a kol., 1994) a umístěny v 100 mm destičkách (5x10⁵ buněk/destičku). Po uplynutí 48 hodin bylo do růstového média přidáno 450 pg/ml Geneticinu (G418 Sulfáte, GIBCO—BRL, Bethesda, MD). Buňky byly udržovány v selekčním médiu, dokud kolonie nebyly dostatečně velké pro testování.

-33 CZ 299076 B6

Imunonocytochemická analýza transfektovaných buněk

Pro určení, zda HEK 293 transfektanty exprimovaly receptor vitronektinu byly buňky imobilizovány na skleněných mikroskopových sklíčkách centrifugací, fixovány v acetonu po 2 minuty při teplotě okolí a sušeny na vzduchu. Specifická reaktivita s 23C6, monoklonální protilátkou, specifickou pro α_νβ₃ komplex byla demonstrována použitím standardních nepřímých imunofluorescenčních metod.

Studie buněčné adheze

96jamkové ELISA destičky Corning byly předem pokryty přes noc při teplotě 4 °C 0,1 ml lidského vitronektinu (0,2 pg/ml v RPMI médium). V okamžiku experimentu byly desky promývány jednou RPMI médiem a blokovány 3,5% BSA v RPMI médiu po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. Transfektované 293 buňky byly resuspendovány v RPMI médiu s přídavkem

20 mM Hepes, pH 7,4 a 0,1% BSA při hustotě 0,5 x 10⁶ buněk/ml. 0,1 ml buněčné suspenze bylo přidáno do každé jamky a inkubováno po 1 hodinu při teplotě 37 °C v přítomnosti nebo nepřítomnosti různých antagonistů α_νβ₃. Po inkubaci bylo přidáno 0,025 ml 10% formaldehydového roztoku, pH 7,4 a buňky byly fixovány při teplotě okolí po 10 minut. Desky byly promývány třikrát 0,2 ml RPMI média a přilnuté buňky byly označeny 0,1 ml 0,5% toluidinové modři po 20 minut při teplotě okolí.

Přebytek barviva byl odstraněn extenzivním propíráním deionizovanou vodou. Toluidinová modř, která vstoupila do buněk, byla vymyta přidáním 0,1 ml 50% ethanolu, obsahujícího 50 mM HC1. Buněčná adheze byla kvantifikována pomocí optické hustoty při vlnové délce 600 nm ěteěce mikrotitračních destiček (Titertek Multiskan MC, Sterling, VÁ).

Vazebný test α_νβ₅ v pevné fázi:

Receptor vitronektinu α_νβ₅ byl purifikován z lidské placenty. Receptorový preparát byl zředěn

50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCI₂ (pufr A) a byl okamžitě přidán na 96jamkovou ELISA destičku v množství 0,1 ml na jamku. 0,1 až 0,2 pg α_νβ₃ bylo přidáno na jamku. Destičky byly inkubovány přes noc při teplotě 4 °C. V okamžiku experimentu byly jamky promývány jednou pufrem A a byly inkubovány 0,1 ml 3,5% hovězího sérového albuminu ve stejném pufr po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. Po ukončení inkubace byly jamky úplně odsáty a promývány dvakrát 0,2 ml pufru A.

V [³H]-SK&F-107260 kompetičním testu byly do jamek přidány různé koncentrace neoznačených antagonisty (0,001 až 100 μΜ), následovalo přidání 5,0 nM [³H]-SK&F-107260. Destičky byly inkubovány po 1 hodinu při teplotě okolí. Po ukončení inkubace byly jamky úplně odsáty a promývány jednou 0,2 ml ledového pufru A jamka po jamce. Receptory byly solubilizovány pomocí 0,1 ml 1% SDS a vazba [³H]-SK&F-107260 byla určena kapalinovým scintilačním počítačem s přidáním 3 ml Ready Safe v přístroji Beckman LS 6800 Liquid Scintillation Counter a s účinností 40 %. Nespecifická vazba [³H]-SK&F-107260 byla určena v přítomnosti 2 μΜ SK&F-l 07260 a byla konzistentně menší než 1 % celkového radioligando45 vého vstupu. IC₅₀ (koncentrace antagonisty, která inhibuje 50 % vazby [³H]-SK&F-107260) byla určena nelineárním způsobem aproximací křivky metodou nejmenších čtverců, která byla odvozena modifikací programu LUNDON-2. Ki (disociační konstanta antagonisty) byla vypočtena pomocí Cheng-Prusoffovy rovnice:

Ki = IC₅₀/(l+L/K_d), kde L a K_d byly koncentrace respektive disociační konstanta [³H]-SK&F-107260.

Inhibice RGD-mediované GPIIb-IIIa vazby

-34CZ 299076 B6

Čištění GPIIb-IIIa

Deset jednotek promývaných lidských destiček (získány od Červeného kříže) bylo lyžováno jemným mícháním v 3% oktylglukosidu, 20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2 mM CaCl₂při teplotě 4 °C po dobu 2 hodin. Lyzát byl centrifugován při 100 000 g po dobu 1 hodiny. Získaný supematant byl aplikován na 4B kolonu (E. Y. Labs) s 5 ml lentilové lektinsefarózy, preekvilibrovanou 20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 100 mM NaCl, 2 mM OC1₂, 1% oktylglukosidu (pufr A). Po uplynutí 2 hodin inkubace byla kolona promývána 50 ml studeného pufru A. ío Lektinem zadržené GPIIb-IIIa byly vymyty pufrem A obsahujícím 10 % dextrózy. Všechny procedury byly prováděny při teplotě 4 °C. Získaný GPIIb-IIIa byl > 95 % čistý, jak bylo prokázáno SDS polyakrylamidovou gelovou elektroforézou.

Včlenění GPIIb-IIIa do liposomů.

Směs fosfatidylserinu (70%) a fosfatidylcholinu (30%) (Avanti Polar Lipids) byla sušena na stěnách skleněné zkumavky pod proudem dusíku. Čištěný GPIIb-IIIa byl zředěn na konečnou koncentraci 0,5 mg/ml a smíchán s fosfolipidy v poměru proteimfosfolipid rovném 1:3 (hmotnostně). Směs byla resuspendována a sonikována v lázni sonikátoru po 5 minut. Směs potom byla dialyzována přes noc použitím dialyzační trubice s hraniční molekulovou hmotností 12 000-14 000 proti 1000 násobnému přebytku 50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl₂ (se 2 výměnami). GPIIb-IIIa-obsahující liposomy byly centrifugovány při 12 000 g po 15 minut a resuspendovány v dialyzačním pufru na konečnou koncentraci proteinu přibližně 1 mg/ml. Liposomy byly uchovávány při teplotě -70 °C až do použití.

Kompetitivní vazba k GPIIb-IIIa

Vazba k fibrinogenovému receptorů (GPIIb-IIIa) byla testována nepřímou kompetitivní vazebnou metodou použitím [³H]-SK&F-107260 jako ligandu typu RGD. Vazebný test byl prováděn v 96-jamkové filtrační destičkové sestavě (Millipore Corporation, Bedford, MA) použitím 0,22 pm hydrofilní duraporové membrány. Jamky byly předem pokryty 0,2 ml 10 pg/ml polylysinu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO.) při teplotě okolí po 1 hodinu pro blokování nespecifické vazby. Různé koncentrace neoznačených benzazepinů byly do jamek přidávány čtyřnásobně. [³H]-SK&F-107260 byl aplikován do každé jamky v konečné koncentrace 4,5 nM, následován přidáním 1 pg čištěných destičkových GPIIb-IIIa obsahujících liposomů. Směsi byly inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. K GPIIb-IIIa vázané [³H]-SK&F-107260 byly odděleny od nevázaných filtrací použitím filtrační sestavy Millipore, následovalo promývání ledovým pufrem (dvakrát, pokaždé 0,2 ml). Vázaná radioaktivita, zůstávající na filtrech byla určena v 1,5 ml Ready Solve (Beckman Instruments, Fullerton, CA) v přístroji Beckman Liquid Scintillation

Counter (Model LS6800) se 40% účinností. Nespecifická vazba byla určena v přítomnosti 2 pM neoznačených SK&F-l07260 a byla konzistentně menší než 0,14% celkové radioaktivity přidané ke vzorkům. Všechna určená data jsou střední hodnoty čtyřnásobného měření.

Kompetiční vazebná data byla analyzována nelineární aproximací křivky metodou nejmenších čtverců. Tento způsob dal hodnoty IC₅₀ antagonistů (koncentrace antagonisty, která inhibuje specifickou vazbu [³H]-SK&F-107260 o 50 % v rovnovážném stavu). IC₅₀ se vztahuje k rovnovážné disociační konstantě (Ki) antagonisty na základě Cheng-Prusoffovy rovnice:

Ki = IC₅₀/(l+L/Kd), kde L je koncentrace [³H]-SK&F-107260 používaná vkompetičním vazebném testu (4,5 nM) aKd je disociační konstanta [³H]-SK&F-107260, která byla určena na 4,5 nM pomocí Scatchardovy analýzy.

-35CZ 299076 B6

Popisované sloučeniny podle předloženého vynálezu mají afinitu pro receptor vitronektinu vzhledem k receptoru fibrinogenu vyšší než 10:1. Nejvýhodnější sloučeniny mají poměr aktivity vyšší než 100:1.

Účinnost sloučenin obecného vzorce (I) samotných nebo v kombinaci s antineoplastovým činidlem může být určena použitím několika modelů transplantovatelných myších nádorů. Viz patenty US 5 004 758 a US 5 633 016 pro detaily týkající se těchto modelů.

Příklady které následují nemají v žádném případě za cíl omezit rozsah předmětu předloženého ío vynálezu, ale poskytují ilustraci toho, jak lze vyrábět a používat sloučeniny podle předloženého vynálezu. Mnoho dalších možných provedení je okamžitě zřejmých odborníkům v oblasti.

Příklady provedení vynálezu

Obecný popis

Spektra 'H nukleární magnetická rezonance (NMR) byla zaznamenávána buď při 250, nebo 400 MHz. Chemické posuny jsou uváděny v částech na milion (δ) ze vnitřního standardu tetra20 methylsilanu (TMS). Zkratky používané pro NMR data jsou následující: s=singlet, d=doublet, t=triplet, q=kvartet, m=multiplet, dd=doublet doubletu, dt=doublet tripletů, app=zjevný, br=široký. J indikuje NMR kopulační konstantu měřenou v Hertzech. CDC1₃ je deuteriochloroform, DMSO-d₆ je hexadeuteriodimethylsulfoxid a CD₃OD je tetradeuteriomethanol. Infračervená (IR) spektra byla zaznamenávána v transmisním módu a polohy pásem jsou zaznamenávány v převrácených vlnových délkách (cm ’). Hmotová spektra byla získána použitím ES nebo FAB ionizačních způsobů. Elementární analýzy byly prováděny buď vlastním zařízením, neboje prováděla společnost Quantitative Technologies lne., Whitehouse, NJ. Teploty tání určovány na přístroji pro určování teploty tání Thomas-Hoover a jsou nekorigovány. Všechny teploty jsou uvedeny ve stupních Celsia. Pro chromatografii na tenké vrstvě byly používány tenkovrstevné desky Analtech Silikagel GF a E a Merck Silikagel 60 F-254. Jak mžiková, tak gravitační chromatografie byly prováděny použitím silikagelu E. Merck Kieselgel 60 (230 až 400 mesh, tj. 35 až 65 mikronů). Analytická a preparativní HPFC byly prováděny chromatograficky Rainin nebo Beckman. ODS označuje oktadecylsilylem derivatizovaný silikagelový chromatografický nosič. 5 μ Apex-ODS indikuje oktadecylsilylem derivatizovaný silika35 gelový chromatografický nosič, který má nominální velikost částic 5 μ, vyráběný společností Jones Chromatography, Littleton, Colorado. YMC ODS-AQ® je ODS chromatografický nosič a je registrovanou obchodní známkou YMC Co. Ltd., Kyoto, Japonsko. PRP-1® polymerický (styren-divinylbenzen) chromatografický nosič a je registrovanou obchodní známkou společnosti Hamilton Co., Reno, Nevada. Celit® je filtrovací pomůcka, skládající se z kyselinou promývané křemeliny a je registrovanou obchodní známkou společnosti Manville Corp., Denver, Colorado.

Příprava 1

Příprava methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu

a) ;4-Brom-3-brommethylanisol

Směs 2-brom-5-methoxytoluenu (20 g, 0,10 mol), N-bromsukcinimidu (19,6 g, 0,11 mol), benzoylperoxidu (1 g, 4 mmol) a methylenchloridu (200 ml) byla ozařována po dobu 18 hodin širokoúhlou lampou, která způsobila mírný zpětný tok. Směs byla potom ochlazována na teplotu -10 °C po dobu několika hodin a roztok byl usazováním oddělen od precipitovaného sukcinimidu. Roztok byl koncentrován a reziduum bylo krystalizováno ze směsi chloroform/hexan a tím se získala sloučenina z názvu (19,7 g, 70%) ve formě bledě žlutých hranolků:

-36CZ 299076 B6 'Η NMR (CDC1₃) δ 7,45 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,99 (d, J = 3 Hz, 1 H), 6,74 (dd, J = 8,9, 3 Hz, 1 H), 4,55 (s, 2 H), 3,80 (s, 3 H).

b) 3-Bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-4“bromanisol

Směs 4-brom-3-brommethylanisolu (24 g, 86 mmol) a di-terc-butyl iminodikarboxylátu draselného (24 g, 94 mmol) v dimethylformamidu (200 ml) byla míchána pod argonovou atmosférou při teplotě okolí po dobu 18 hodin. Reakční směs potom byla koncentrována za sníženého tlaku a reziduum bylo rozděleno mezi ethylacetát a vodu. Organická fáze byla promývána vodou io a solankou, sušena (MgSO₄), a koncentrována. Reziduum bylo rekrystalizováno z hexanu a tím se získala sloučenina z názvu (15 g, 42%) ve formě bílé pevné látky:

’H NMR (CDC1₃) δ 7,40 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,68 (m, 2 H), 4,81 (s, 2 H), 3,74 (s, 3 H), 1,44 (s, 18H).

c) Methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-4-methoxyfenyl]-3-butenoát

Baňka o objemu 500 ml byla naplněna 3-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-4-bromaniso20 lem (15 g, 36 mmol) dimethyl itaconátem (7,5 g, 47 mmol), tri-o-tolylfosfmem (1 g, 3 mol), octanem paladnatým (0,4 g, 2 mmol), diizopropylethylaminem (12,8 ml, 72 mmol), apropionitrilem (150 ml). Směs byla proplachována argonem (několik cyklů vyprázdnění a přivedení argonu), potom byla zahřívána na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou po dobu 1 hodiny. Reakční směs byla ponechána ochladit se na teplotu zpětného toku, potom byla vlita do ledového ethyletheru (500 ml). Výsledný precipitát byl odstraněn filtrací a filtrát byl koncentrován. Reziduum byl čištěn chromatografií na silikagelu (10 až 20% ethylacetát v hexanu) a tím se získala sloučenina z názvu (11,8 g, 66%) ve formě bledě žlutého oleje:

'HNMR (CDC1₃) δ 7,94 (s, 1 H), 7,15 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,77 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,76 (s, 1 H), 4,73 (s, 2 H), 3,81 (s, 3 H), 3,79 (s, 3 H), 3,71 (s, 3 H), 3,38 (s, 2 H), 1,45 (s, 18 H).

d) Methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-4-methoxyfenyl] butanoát

Tlaková nádoba naplněná methyl (±)-3-karbomethoxy—4-[2-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl-4-methoxyfenyl]-3-butenoátem (11,8 g), ethylacetátem (120 ml), a 10% paládiem na aktivním uhlí (1 g) byla protřepávána za tlaku 45 psi vodíku po dobu 18 hodin. Směs byla potom filtrována a filtrát byl koncentrován, a tím se získala sloučenina z názvu (12 g, 100%) ve formě bezbarvého oleje:

'HNMR (CDC1₃) δ 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,71 (m, 2 H), 4,81 (s, 2 H), 3,75 (s, 3 H), 3,66 (s, 3 H), 3,63 (s, 3 H), 3,05 (m, 2 H), 2,73 (m, 2 H), 2,42 (dd, J= 16,0, 4,8 Hz, 1 H), 1,44 (s, 18 H).

e) Methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-(aminomethyl)-4-methoxyfenyl]butanoát

Roztok methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-bis(terc-butoxykarbonyl)aminomethyl^l-methoxyfenyl]butanoátu (12 g) v chloroformu (100 ml) a trifluoroctová kyselina (50 ml) byl míchán pod argonovou atmosférou při teplotě okolí po dobu 4 hodin. Roztok potom byl koncentrován za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu (10 g, 100%) ve formě vazkého oleje:

MS (ES) m/e 296,2 (M + H)⁺.

-37CZ 299076 B6

f) Methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok methyl (±)-3-karbomethoxy-A-[2-(aminomethyl)-4-methoxyfenyl]butanoátu (10 g, 24 mmol) a triethylaminu (17 ml, 120 mmol) v toluenu (100 ml) byl zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 18 hodin. Reakční směs potom byla koncentrována a reziduum bylo rozděleno mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva byla extrahována dvakrát ethylacetátem a sloučené organické extrakty byly promývány solankou, sušeny (MgSO₄) a koncentrovány a tím se získala sloučenina z názvu (4,8 g, 76%) ve formě snědé pevné látky:

ío MS (ES) m/e 264,2 (M + H)⁺.

g) Methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-acetát

Bezvodý chlorid hlinitý (7,6 g, 57 mmol) byl přidán po částech do míchaného roztoku methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetátu (3,0 g, 11 mmol) aethanthiolu (4,2 ml, 57 mmol) v methylenchloridu (100 ml) při teplotě 0 °C pod argonovou atmosférou. Výsledná směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí a byla míchána přes noc, potom byla koncentrována. Reziduum byl rozetřen s ledovou vodou a výsledná pevná látka byla shromážděna filtrací a sušena a tím se získala sloučenina z názvu (2,64 g, 91%) ve formě bělavé pevné látky:

MS (ES) m/e 250,2 (M + H)⁺.

Příprava 2

Příprava methyl (±)-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin—4acetátu

a) 3-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino]methyl—4-bromanisol

40% vodný methylamin (49 ml, 563 mmol) byl přidán rychle do roztoku 4-brom-3-brommethylanisolu (15,76 g, 56,29 mmol) v THF (280 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí

2,5 hodin byla reakční směs koncentrována a reziduum bylo rozděleno mezi Et2O (560 ml) al,0N NaOH (100 ml). Vrstvy byly odděleny a organická vrstva byla sušena (MgSO₄) a koncentrován na žlutý olej:

TLC (5% MeOH/CHCb) R^f 0,32.

Olej byl rozpuštěn v CHC1₃ (280 ml) a byl přidán di-terc-butyl dikarbonát (1,29 g, 56,29 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě zpětného toku po dobu 45 minut potom byla koncentrována. Silikagelová chromatografie (5% EtOAc/toluen) poskytla sloučeninu z názvu (16,81 g, 90%); TLC (5% EtOAc/toluen) R^f 0,43;

*H NMR (400, CDC1₃) směs rotamerů: δ 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,65 - 6,80 (m, 2 H), 4,40 - 4,55 (m, 2 H), 3,77 (s, 3 H), 2,81 - 2,97 (m, 3 H), 1,37 - 1,60 (m, 9 H);

MS (ES) m/e 352/354 (M + Na)⁺.

b) Methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamino]methyl—4methoxyfenyljbutanoát

Roztok 3-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-methylamÍno]methyl—4-bromanisolu (4,95 g, 15 mmol), dimethyl itaconátu (3,08 g, 19,5 mmol), octanu paladnatého (168 mg, 0,75 mmol), tri-o-tolyl55 fosfinu (457 mg, 1,5 mol) a diizopropylethylaminu (5,2 ml, 30 mmol) v propionitrilu (75 ml) byl

-38CZ 299076 B6 zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 45 minut potom byl koncentrován v rotační odparce. Reziduum byl zředěn Et₂O (150 ml) a směs byla filtrována přes celit® pro odstranění nerozpustných materiálů. Filtrát byl koncentrován a reziduum bylo znovu koncentrováno z xylenů. Chromatografie na silikagelu (gradient: 20% EtOAc/hexany, potom 1:1 EtOAc/hexany) odstra5 nila fosfin a základní materiály; všechny další materiály s R^f 0,40 - 0,70 byly shromážděny a koncentrovány což dalo kalný žlutý olej:

TLC (30% EtOAc/hexany) R^f 0,41 (hlavní produkt).

ío Olej byl rozpuštěn v MeOH (75 ml) a opatrně bylo přidáno 10% Pd/C. Směs byla protřepávána pod vodíkovou atmosférou (50 psi) po dobu 2,5 hodin, potom byla filtrována přes celit® pro odstranění katalyzátoru. Filtrát byl koncentrován a reziduum bylo znovu vystaveno reakčním podmínkám. Po uplynutí dalších 2,5 hodin byla směs filtrována přes celit® pro odstranění katalyzátoru a filtrát byl koncentrován což dalo světle žlutý olej. Tento olej byl znovu koncentrován ze směsi CHCf/hexany, potom byl chromatografován na silikagelu (gradient: 20% EtOAc/hexany, potom 1:1 EtOAc/hexany) a tím se získala sloučenina z názvu (4,53 g, 74%) ve formě světle žlutého oleje:

TLC (30% EtOAc/toluen) R^f 0,46;

'Η NMR (400, CDCfi) směs rotamerů; δ 7,03 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,65 - 6,80 (m, 2 H), 4,46 (br s, 2 H), 3,77 (s, 3 H), 3,64 (s, 3 H), 3,63 (s, 3 H), 2,32 - 3,12 (m, 7 H), 2,35 - 2,50 (m, 1 H), 1,47 (br s,9H);

MS (ES) m/e 432 (M + Na)⁺.

c) Methyl (±)-3-karbomethoxy-A-[2-(methylamino)-methyl-4-methoxyfenyl]butanoát

TFA (55 ml) byl najednou přidán do roztoku methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-[N-(terc30 butoxykarbonyl)-N-methylamino]methyl-4-methoxyfenyl]butanoátu (4,53 g, 11,06 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (55 ml) při teplotě 0 °C a reakční směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 1 hodiny byla reakční směs koncentrována a reziduum byl znovu koncentrován z toluenu (2 x 100 ml), což zanechalo sloučeninu z názvu (11,06 mmol, kvantitativně) ve formě světle žlutého oleje:

MS (BS) m/e 310 (M + H)⁺.

d) Methyl (±)-8-methoxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-acetát

Roztok methyl (±)—3-karbomethoxy-4-[2—(methylamino)methyl-4-methoxyfenyl]butanoátu (11,06 mmol) a diizopropylethylaminu (5,8 ml, 33,18 mmol) v toluenu (110 ml) byl zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 25 hodin, míchán při teplotě zpětného toku po dobu 4 dní, potom zahříván na teplotu zpětného toku po dobu dalších 24 hodin. Koncentrace a silikagelová chromatografie (5% MeOH v 1:1 EtOAc/CHCfi) poskytla sloučeninu z názvu (2,88 g, 94%) ve formě žluté pevné látky:

TLC (5% MeOH v 1:1 EtOAc/CHCfi) R^f 0,63;

’HNMR (250, CDCfi) δ 7,02 (d, J= 8,4 Hz, 1 H), 6,78 (dd, J= 8,4, 2,7 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 5,29 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 3,50 - 3,90 (m, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 3,71 (s, 3 H),

2,73 - 3,16 (m, 3 H), 3,04 (s, 3 H), 2,41 (dd, J = 16,7, 5,4 Hz, 1 H);

MS (ES) m/e 300 (M + Na)⁺, 278 (M + H)⁺.

-39CZ 299076 B6

e) Methyl (±)-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát

Bezvodý chlorid hlinitý (1,35 g, 10. 15 mmol) byl najednou přidán do roztoku methyl (±)-8methoxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (562 mg,

2,03 mmol) a ethanthiolu (0,75 ml, 10,15 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (20 ml) při teplotě 0 °C pod argonovou atmosférou. Směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku a míchána po dobu

4,5 hodin, potom byla znovu ochlazena na teplotu 0 °C. Potom byla přidána ledová H₂O (20 ml) a směs byla prudce míchána po dobu 5 minut, potom byla extrahována CHC1₃ (3 x 20 ml). Sloučené CHC1₃ vrstvy byly sušeny (MgSO₄) a koncentrovány na reziduum. Vodná vrstva byla ío podtlakově filtrována na pevný precipitát. Tento precipitát a reziduum zCHCl₃ vrstvy byly sloučeniny v 1:1 MeOH/CHCl₃ a roztok byl koncentrován a tím vzniklá bělavá pevná látka. Ta byla rozetřena s horkým MeOH a směs byla ponechána ochladit se na teplotu zpětného toku. Pevná látka byla shromážděna podtlakovou filtrací a promývána postupně studeným MeOH a Et₂O. Sušení ve vysokém vakuu při teplotě 40 °C poskytlo sloučeninu z názvu (467,9 mg, 88%) ve formě bezbarvé pevné látky:

TLC (5% MeOH/CHCl₃) R^f 0,17;

‘HNMR (250, DMSO-d₆) δ 9,29 (s, 1 H), 6,89 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,50-6,70 (m, 2 H), 5,16 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 3,84 (d, J - 16,4 Hz, 1 Η), 3.M - 3,85 (m, 1 H), 3,56 (s, 3 H), 2,₃0 - 3,00 (m, 4 H), 2,86 (s, 3 H);

MS (ES) m/e 286 (M + Na)⁺, 264 (M + H)⁺.

Příprava 3

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu

a) 2-[(3-Hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxid

Směs 2-chlorpyridin-N-oxidu (16,6 g, 0,1 mol), 3-amino-l-propanolu (15,3 ml, 0,2 mol), NaHCO₃ (42 g, 0,5 mol) a amylalkoholu (100 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 21 hodin byla reakční směs ochlazena, zředěna CH₂C1₂ (300 ml) a podtlakově filtrována pro odstranění nerozpustných materiálů. Filtrát byl koncentrován a znovu koncentrován z toluenu a tím vznikl žlutý olej. Silikagelový chromatografie (20% MeOH/CHCl₃) poskytla sloučeninu z názvu (15,62 g, 93%) ve formě žluté pevné látky:

TLC (20% MeOH/CHCl₃) R^f0,48;

‘HNMR (250, CDC1₃) δ 8,07 (dd, J = 6,6, 1,2 Hz, 1 H), 7,34 (br t, 1 H), 7,10-7,30 (m, 1 H), 6.M (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 6,40 - 6,60 (m, 1 H), 4,49 (br s, 1 H), 3,65-3,90 (m, 2 H), 3,35 - 3,60 (m, 2 H), 1,75 - 2,00 (m, 2 H);

MS (ES) m/e 169(M + H)⁺.

Příprava 4

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-nitropyridin-N-oxidu

a) 2-[(3-Hydroxy-1 -pro py 1 jam ino]-4-nitropy rid in-N-oxid

Postupovalo se způsobem podle Přípravy 3, pouze byl použit 2-chlor-4-nitropyridin-N-oxid 55 (viz Jain, P. C.; Chatterjee, S. K.; Anand, N. Indián Journal of Chemistry 1996, 403) namísto

-40CZ 299076 B6 hydrochloridu 2-chlorpyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě oranžové pevné látky:

MS (ES) m/e 214,2 (M + H)⁺.

Příprava 5

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]^l-methoxypyridin-N-oxidu

a) 2-[(3-Hydroxy-1 -propyl)amino]-4-methoxypyridin-N-oxid

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-nitropyridin-N-oxidu (0,275 g, 1 mmol) a 0,5 M NaOMe v MeOH (16 ml, 8 mmol) byl zahříván na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou po dobu 3 hodin. Reakční směs potom byla ponechána ochladit se a byl přidán ledový AcOH (0,5 ml, 8 mmol). Roztok byl koncentrován do sucha a reziduum bylo rozetřeno s CH2CI2. Nerozpustné materiály byly odstraněny filtrací a filtrát byl koncentrován. Silikagelová chromatografie (5 až 15% MeOH/CH2Cl2) poskytla sloučeninu z názvu (0,23 g, 90%) ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 199,0 (M + H)⁺.

Příprava 6

Příprava (±)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetát

a) 3-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)amino]methyl-4-bromanisol

2,2,2-Trifluorethylamin (4,9 ml, 62,5 mmol) byl přidán rychle do roztoku 4-brom-3-brommethylanisolu (7,00 g, 25 mmol) v bezvodém DMSO (25 ml) při teplotě zpětného toku. Reakční směs byla zahřívána na teplotu přibližně 30 až 35 °C. Po uplynutí 2 hodin byla reakční směs zředěna ledový, 0,5 N NaOH (100 ml) a extrahována Et₂O (3 x 100 ml). Sloučené Et₂O vrstvy byly promývány postupně H₂O (2 x 25 ml) a solankou (25 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány na světle žlutý olej:

TLC (toluen) R^f0,43.

Olej byl rozpuštěn v bezvodém CH₂C1₂ (48 ml) v kulaté baňce a byl přidán di—terč—butyl dikarbonát (10,48 g, 48,04 mmol). Baňka, obsahující reakční směs roztok, byla umístěna v rotační odparce a rotována ve vakuu při teplotě 50 °C po dobu 16 hodin. Výsledné reziduum bylo zředěno hexany (100 ml) a roztok byl naočkován malým množstvím čistého produktu (získaného v předchozím pokusu pomocí silikagelové chromatografie s použitím směsi 10% EtOAc/hexany jako vymývacího rozpouštědla). Směs byla ponechána v klidu při teplotě zpětného toku po dobu několika hodin, potom byl umístěn v ledničce přes noc. Produkt byl shromážděn podtlakovou filtrací a promýván hexany. Sušení za sníženého tlaku poskytlo sloučeninu z názvu (7,19 g, 75%) ve formě bezbarvé pevné látky. Matečné tekutiny byly koncentrovány a chromatografovány na silikagelu (10% EtOAc/hexany) což poskytlo dodatečnou sloučeninu z názvu (1,42 g; celkově =

8,61 g, 90%);

TLC (10% EtOAc/toluen) R^f 0,48; teplota tání 86 až 89 °C;

-41 CZ 299076 B6 'HNMR (250, CDClj) δ 7,44 (d, J = 9,0 Hz, 1 H ), 6,64 - 6,82 (m, 2 H), 4,52 - 4,70 (m, 2 H), 3,61 - 4,00 (m, 2 H), 3,77 (s, 3 H), 1,22 - 1,68 (m, 9 H).

b) Methyl (±)-3-karbomethoxy-4-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)5 amino]methyl-4-methoxyfenyl]butanoát

Roztok 3-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)amino]methyl-4-bromanisolu (9,17 g, 23,03 mmol), dimethylitaconátu (4,73 g, 29,94 mmol), octanu paladnatého (259 mg, 1,15 mmol), tri-o-tolylfosfmu (701 mg, 2,30 mol) a diizopropylethylaminu (8,0 ml, 46,06 mmol) v propionitrilu (115 ml) byl deoxygenován (3x cyklus evakuace/naplnění argonem), potom byl zahříván na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou. Po uplynutí 2 hodin reakční směs byla koncentrována a znovu koncentrována z toluenu. Silikagelová chromatografie (30% EtOAc/hexany, vzorek s CH₂C1₂) odstranila fosfin a základní materiály; všechny ostatní materiály s R^f 0,55 až 0,70 byly shromážděny a koncentrovány a tím vznikl žlutý olej. Ten byl vyjmut v 20% EtOAc/hexany (200 ml) a ponechán stát při teplotě zpětného toku po dobu 1 hodiny a potom v ledničce přes noc. Směs byla filtrována pro odstranění žlutého precipitátu a filtrát byl koncentrován a tím vzniklo 9,93 g (91%) žlutého oleje:

TLC (30% EtOAc/hexany) R^f 0,55 (hlavní produkt).

Olej byl rozpuštěn v EtOAc (100 ml) a bylo přidáno 10% Pd/C (4,44 g, 4,18 mmol). Směs byla protřepávána pod dusíkovou atmosférou (50 psi) po dobu 3,5 hodin, potom byla filtrována přes celit ® pro odstranění katalyzátoru. Filtrát byl koncentrován a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (gradient: 20% EtOAc/hexany) a tím se získala sloučenina z názvu (7,98 g, 73% pro dva kroky) ve formě bezbarvého oleje:

TLC (20% EtOAc/toluen) R^f 0,35;

'HNMR (250, CDCb) δ 7,05 (d, J = 8,04 Hz, 1 H), 6,76 (dd, J = 8,4, 2,7 Hz, 1 H), 6,60-6,72 (m, 1 H), 4,50 - 4,80 (m, 2 H), 3,45 - 3,95 (m, 2H), 3,77 (s, 3 H), 3,63 (s, 6 H), 2,85 - 3,09 (m, 2 H), 2,58 - 2,80 (m, 2 H), 2,33 - 2,50 (m, 1 Η), 1,20 - 1,70 (m, 9 H);

MS (ES) m/e 500 (M + Na)⁺.

c) Methyl (±)-3-karbomethoxy^l-[2-(2,2,2-trifluorethylamino)methyl-4-methoxyfenyl]butanoát

TFA (55 ml) byl najednou přidán do roztoku methyl (±)-3-karbomethoxy—4-[2-[N-(tercbutoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)amino]methyl-4-methoxyfenyl]butanoátu (7,98 g,

16,71 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (42 ml) při teplotě 0 °C pod argonovou atmosférou a reakční směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 1,5 hodin byla reakční směs koncentrována a reziduum bylo znovu koncentrováno z xylenů. Sušení ve vysokém vakuu při teplotě 40 °C zanechalo sloučeninu z názvu (8,70 g, kvantitativně) ve formě žluté pevné látky:

MS (ES) m/e 378 (M + H)⁺.

d) Methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Směs methyl (±)-3-karbomethoxy-A-[2-(2,2,2-trifluorethylamino)methyl-4-methoxyfenyljbutanoátu (16,71 mmol), tripropylaminu (9,5 ml, 50,13 mmol) a xylenů (170 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 63 hodin reakční směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na oxidu křemičitém (2:1 EtOAc/hexany, plněné CH₂C1₂). Sloučenina z názvu (5,33 g, 92% pro dva kroky) byla získána ve formě žluté pevné látky:

-42CZ 299076 B6

TLC (40% EtOAc/hexany) R^f 0,49;

'HNMR (250, CDC1₃) δ 7,04 (d, J= 8,5 Hz, 1 H), 6,80 (dd, J= 8,5, 2,6 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 5,35 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 3,60 - 4,30 (m, 4 H), 3,79 (s, 3 H), 3,71 (s, 3 H),

2,81 - 3,15 (m, 3 H), 2,46 (dd, J = 16,9, 5,5 Hz, 1 H);

MS (ES) m/e 368 (M + Na)⁺, 346 (M + H)⁺.

e) Methyl (±)-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Roztok BBr₃ v CH₂C1₂ (1,0 M, 60 ml, 60 mmol) byl přidán po kapkách v průběhu 30 minut do roztoku methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (5,16 g, 14,94 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (60 ml) při teplotě -5 až -10 °C pod argonovou atmosférou. Po uplynutí další 1 hodiny při teplotě -5 až 10 °C byla reakční směs znovu ochlazena na -10 °C a reakce byla zastavena opatrným přidáním po kapkách MeOH (60 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě -10 až 0 °C po dobu 1 hodiny, potom byla koncentrována v rotační odparce. Reziduum bylo znovu koncentrováno z MeOH (2x) a potom z EtOAc, potom bylo filtrováno přes vrstvu silikagelu (EtOAc vymývací rozpouštědlo). Koncentrace filtrátu zanechala žlutou pevnou látku, která byla rozetřena s horkými hexany. Sloučenina z názvu (4,74 g, 96%) byla získána ve formě bělavé pevné látky:

TLC (1:1 EtOAc/hexany) R^f 0,40;

Ή NMR (400, DMSO-d₆) δ 9,28 (s, 1 H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,62 (dd, J = 8,3, 2,5 Hz,

1 H), 6,57 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,27 (d, J = 16,7 Hz, 1 H), 4,22 - 4,38 (m, 1 H), 4,07 - 4,22 (m, 1 H), 4,07 (d, J= 16,7 Hz, 1 H), 3,72 - 3,83 (m, 1 H), 3,58 (s, 3 H), 2,94 (dd, J = 17,0, 3,8 Hz, 1 H), 2,72 (dd, J = 16,7, 9,1 Hz, 1 H), 2,65 (dd, J = 17,0, 14 Hz, 1 H), 2,49 (dd, J = 16,7, 5,0 Hz, 1 H, částečně zakryto reziduálním signálem rozpouštědla);

MS (ES) m/e 354 (M + Na)⁺.

Příprava 7

HPLC separace enantiomerů methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu

a) Methyl (R)-(+)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát a methyl (S)-(-)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát byl rozdělen do svých enantiomerů chirální HPLC za následujících podmínek: Diacel Chirální pak AS® kolona (21,2 x 250 mm), EtOH mobilní fáze, 7 ml/min velikost průtoku, UV detekce na vlnové délce 254 nm, 70 mg injekce;

tR pro methyl (R)-(+)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát =

21,5 min;

ír pro methyl (S)-(-)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát = 50 39,1 min.

-43 CZ 299076 B6

Příprava 8

HPLC separace enantiomerů methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu

a) Methyl (R)-(+}-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát a methyl (S)-(-)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—t-acetát

Methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát byl rozdělen do ío svých enantiomerů chirální HPLC za následujících podmínek: Diacel Chirální pak AS® kolona (21,2 x 250 mm), CH₃CN mobilní fáze, 15 ml/min velikost průtoku. UV detekce na vlnové délce 254 nm, 500 mg injekce;

t_R pro methyl (R)-(+)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát =

10,2 min;

t_r pro methyl (S)-(-)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepinH-acetát =

19,0 min.

Příprava 9

Demethylace methyl (S)-(-)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-M-acetátu

a) Methyl (S)-(-)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Roztok methyl (S)-(-)-8-methoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (15,0 g, 0,057 mol) v CHC1₃ (160 ml) byl přidán po kapkách v průběhu 30 minut do roztoku bromidu boritého (20,53 ml, 0,217 mol) vCHCl₃ (160 ml) při teplotě -8 °C pod argonovou atmosférou, udržujíce teplotu v rozmezí od -5 do 0 °C. Reakční směs byla míchána při teplotě přibližně -8 °C po dobu 30 minut a potom byl přidán MeOH (200 ml), z počátku po kapkách, udržujíce teplotu přibližně 0 °C. Reakční směs byla koncentrována a tím se získal viskózní olej, který byl znovu koncentrován z MeOH (100 ml). Olej byl rozpuštěn v H₂O/MeOH a malé množství tmavé pevné látky bylo odstraněno filtrací. Filtrát byl neutralizován (na pH 7) 50% hydroxidem sodným a uložila se bílá pevná látka. pH suspenze bylo upraveno na 4,5 přidáním malého množství octové kyseliny a pevná látka byla shromážděna a sušena za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu (9,7 g, 68 %). Produkt byl testován na chirální čistotu pomocí HPLC: Chirální pak AS® kolona (4,6 x 50 mm), 100% EtOH mobilní fáze, 0,5 ml/min velikost průtoku, UV detekce na vlnové délce 215 nm; t_R = 7,5 minut (S-enantiomer, 99 %); t_R = 4,4 minut (R-enantiomer, 1%).

Příprava 10

Příprava 2-[(3-hydro xy-1-propy l)amino]-4,6-dimethylpyridin-N-oxidu

a) 2-[(3-hydroxy-l -propyl)amino]-4,6-dimethylpyridin-N-oxid

Postupovalo se způsobem podle Přípravy 4, pouze byl použit 2-chlor-4,6-dimethylpyridin-Noxide (viz Brown, Ε. V. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565) namísto hydrochloridu

2-chlorpyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě čirého oleje:

MS (ES) m/e 197,2 (M + H)⁺.

-44CZ 299076 B6

Příprava 11

Příprava 6-(methylamino)-2-pyridylethanol

a) 2-(terc-Butoxykarbonylamino)-6-pikolin

Do míchaného roztoku 2-amino-6-pikolinu (4,33 g, 40 mmol), Et₃N (6,2 ml, 40 mmol) a CH2CI2 (50 ml) při teplotě 0 °C byl přidán di-terc-butyl dikarbonátu (9,6 g, 44 mmol). Po míchání při teplotě zpětného toku přes noc byla reakční směs koncentrována za sníženého tlaku, zředěna H₂O a extrahována CH₂C1₂ (2 x 50 ml). Sušení (MgSO₄) a koncentrace poskytla sloučeninu z názvu ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 209 (M + H)⁺.

b) 2-[(terc-Butoxykarbonyl)methylamino]-6-pikolin

Do suspenze NaH (60% disperze v minerálním oleji, 0,44 g, 1 mmol) v DMF (20 ml) při teplotě 0 °C byl přidán roztok 2-(terc-butoxykarbonylamino)-6-pikolinu (2,1 g, 10 mmol) v DMF (30 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě 0 °C po dobu 15 min; potom byl přidán methyl20 jodid (1,6 g, 11 mmol). Reakční směs byla koncentrována za sníženého tlaku, zředěna H₂O a extrahována CH₂C1₂ (3 x 50 ml). Sušení (MgSO₄) a koncentrace poskytla sloučeninu z názvu ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 223 (M + H)⁺.

c) Ethyl-6-[(terc-butoxykarbonyl)methylamino]-2-pyridylacetát

LDA (18 mmol) byl připraven v THF (30 ml), ochlazen na -78 °C a byl přidán 2-[(terc-butoxykarbonyl)methylamino]-6-pikolin (2 g, 9 mmol), čímž se vytvořil sytě červený roztok. Po uplynutí 15 min byl přidán diethylkarbonát (18 ml, 15 mmol). Roztok v barvě burgundské červené byl míchán při teplotě -78 °C po dobu dodatečných 15 minut potom byla reakce zastavena nasyceným NH₄C1 roztokem. Směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku a extrahována EtOAc (3x30 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou, sušeny (MgSO₄), filtrovány a koncentrovány. Silikagelová chromatografie poskytla sloučeninu z názvu ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 294 (M + H)⁺.

d) Ethyl-6-(methylamino)-2-pyridylacetát

Roztok ethyl-6-[(terc-butoxykarbonyl)-methylamino]-2-pyridylacetátu (0,6 g, 2 mmol) a 4 M HCl/dioxanu (5 ml, 20 mmol) byl míchán při teplotě zpětného toku přes noc, potom byl koncentrován. Opětná koncentrace z toluenu poskytla sloučeninu z názvu ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 195 (M + H)⁺.

e) 6-(Methylamino)-2-pyridylethanol

Do mechanicky míchaného roztoku LiAlELj v THF (1,0 M, 20 ml, 20,4 mmol) byl přidán po kapkách roztok ethyl-2-(methylamino)-6-pyridylacetátu (0,38 g, 2 mmol) v THF (10 ml). Po ukončení přidávání byla reakční směs zahřívána na teplotu 0 °C a reakce byla zastavena 10% NaOH roztokem. Pevné látky byly odstraněny filtrací a filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH₂C1₂ a roztok byl sušen (MgSO₄) a koncentro55 ván. Rekoncentrace z toluenu (3 x) poskytla sloučeninu z názvu ve formě bezbarvého oleje:

-45 CZ 299076 B6

MS (ES) m/e 153 (M + H)⁺.

Příprava 12

Příprava 3-[(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propanol

a) 3-[(terc-butoxykarbonyl)amino]-l -propanol

Roztok di-terc-butyl dikarbonátu (10,91 g, 50 mmol) v CH2CI2 (50 ml) byl přidán po kapkách do roztoku 3-amino-l-propanolu (11,5 ml, 150 ml) vCH₂Cl₂ (250 ml) při teplotě 0 °C. Kalný roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku a míchán po dobu 1 hodiny, potom byl koncentrován v rotační odparce. Reziduum bylo vyjmuto vH₂O (100 ml) a extrahováno Et₂O (3 x 100 ml). Sušení (MgSO₄) a koncentrace zanechala sloučeninu z názvu ve formě bezbarvého oleje:

’H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 4,80 (br s, 1 H), 3,50 - 3,80 (m, 2 H), 3,13 - 3,42 (m, 2 H), 3,03 (br t, 1 Η), 1,55 - 1,80 (m, 2 Η), 1,45 (s, 9 H);

MS (ES) m/e 198 (M + Na)⁺.

Příprava 13

Příprava 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l -propanol

a) 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propanol

Do roztoku 3-amino-l-propanolu (0,77 g, 1,1 mmol) a triethylaminu (2,85 ml, 7 mmol) v THF (5 ml), míchaného pod argonovou atmosférou při teplotě okolí, byla přidána suspenze 4-nitrobenzyl chlormravenčanu (2 g, 1 mmol) v THF (20 ml). Výsledná směs byla ponechána za míchání při teplotě okolí přes víkend a potom byla koncentrována. Reziduum bylo čištěno chromatografií na silikagelu (0 až 2% MeOH/CH₂Cl₂) a tím se získala sloučenina z názvu (0,80 g,

34%) ve formě bledě žlutého oleje:

MS (ES) m/e 254,3 (M + H)⁺.

Příprava 14

Příprava 2-[N-(3-hydroxy-l-propyl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxid

a) 2-[N-(3-hydroxy-l-propyl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxid 45

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu (8,0 g, 47,6 mmol) v terc-BuOH (80 ml) byl zpracován di-terc-butyl dikarbonátem (11,4 g, 55,3 mmol). Po uplynutí 18 hodin byl roztok koncentrován a reziduum bylo rozetřeno s hexanem. Výsledná pevná látka byla sušena za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu (12,5 g, 98%) ve formě bělavé pevné látky:

MS (ES) m/e 269,3 (M + H)⁺.

-46CZ 299076 B6

Příprava 15

Příprava methyl (±)-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu

a) Methyl (±)-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepirM-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[N-(3-hydroxy-l-propyl)-Nío (terc-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridinN-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě oranžové pěny:

MS (ES) m/e 500,4 (M + H)⁺.

Příprava 16

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-N-oxid

Směs 2-chlor-4-methylpyridin-N-oxidu (12,1 g, 0,068 mol) (Brown, Ε. V. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565), 3-amino-l-propanolu (10,33 ml, 0,14 mol), NaHCO₃ (28 g, 0,34 mol) a terc-amylalkoholu (70 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 16 hodin byla reakční směs ochlazena, zředěna CH₂C1₂ (300 ml) a podtlakově filtrována pro odstranění nerozpustných materiálů. Filtrát byl koncentrován a znovu koncentrován z toluenu a tím vznikl žlutý olej. Rekrystalizace zCH₂Cl₂/Et₂O poskytla sloučeninu z názvu (10,87 g, 88%) ve formě žluté pevné látky:

TLC (15% MeOH/CH₂Cl₂) R^f 0,44;

’H NMR (400 CDC1₃) δ 7,92 (d, J = 6,7, 1 H), 7,28 (brt, 1 H), 6,43 (s, 1 H ), 6,33 (dd, J = 6,6, 2,1 Hz, 1 H), 3,73 (t, J = 5,7 Hz, 2 H ), 3,47 (q, J = 6,3 Hz, 2 H), 2,29 (s, 3 H), 1,82- 1,88 (m, 2 H);

MS (ES) m/e 183 (M + H)⁺.

Příprava 17

Příprava methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-240 benzazepin-4-acetátu alkylací methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-A-acetátu

a) Methyl (S)-3-oxo-8-[4-(trifluormethyl)benzyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Do roztoku methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-2-lH-benzazepin-4-acetátu (0,31 g, 1,24 mmol) a 4-(trifluormethyl)-benzyl bromidu (0,89 g, 3,72 mmol) v DMF (10 ml) byl přidán NaH (60% suspenze v oleji, 0,11 g, 2,75 mmol). Po míchání při teplotě zpětného toku po dobu 4 hodin, byla hlavní část DMF odstraněna za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozděleno mezi nasycený NaHCO₃ a EtOAc. Vodná fáze byla extrahována EtOAc a sloučené organické extrakty byly promývány nasyceným NaCl, sušeny nad Na₂SO₄ a koncentrovány a tím se získal čirý olej (0,90 g). Radiální chromatografie (5% acetonu/CH₂Cl₂, silikagel, 6 m deska) poskytla sloučeninu z názvu (0,53 g) ve formě bílé pěny.

MS (ES) m/e 566,1 (M + H)⁺.

-47CZ 299076 B6

b) Methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin-4-acetát

Parrova hydrogenační nádoba byla naplněna methyl (S)-3-oxo-8-[4-(trifluormethyl)benzyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátem (0,78 g, 1,38 mmol) a Pearlmanovým katalyzátorem (20 mg) v MeOH (20 ml). Po hydrogenaci při tlaku 50 psi po dobu 24 hodin byla reakční nádoba otevřena a katalyzátor byl odstraněn filtrací. Odstranění rozpouštědla dalo bílou pěnu (0,60 g). Radiální chromatografie (5% aceton/CH₂Cl₂, io silikagel, 6 m deska) poskytla sloučeninu z názvu (0,42 g) ve formě bílé pěny.

'H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 2 H ), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 6,90 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 6,67 (dd, J = 7,5, 3,4 Hz, 1 H), 6,39 (d, J = 3,4 Hz, 1 H ), 5,05 (m, 2 H), 4,35 (d, J = 15,4 Hz, 1 H), 3,85 (m, 1 H), 3,70 (s, 3H), 3,60 (m, 1H), 2,95 (m, 4 H), 2,45 (dd, J = 17,1,

5,1 Hz, 1 H).

Příprava 18

Příprava methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-acetátu enantioselektivní syntézou a) 4-Brom-3-brommethylanisol

Do míchaného roztoku 4-brom-3-methylanisolu (100 g, 497 mmol) v bezvodém dichlormethanu (500 ml) byl přidán N-bromsukcinimid (97 g, 545 mmol) následovaný benzoylperoxidem (6 g, 25 mmol). Reakční směs byla jemně zahřívána na teplotu zpětného toku 150 wattovou širokoúhlou lampou s reflektorem umístěným přibližně 12 palců od reakční nádoby. Po uplynutí 24 hodin byla reakční směs koncentrován rotačním odpařováním na poloviční objem a ponechána v klidu po dobu 4 hodin. Bílý precipitát, který se vytvořil, byl odfiltrován a proplachován malým množstvím dichlormethanu. Filtrát byl koncentrován do sucha a zbývající pevná látka byla rozetřena s hexany a filtrována. Sušení za sníženého tlaku poskytlo sloučeninu z názvu (100,25 g, 727d) ve formě bílých jehliček: GC t_R = 6,56 minut (HP 530 mm x 20 m methylkřemičitanová kolona, Tok nosiče He 20 ml/min, 100 °C počáteční teplota, 1 minut počáteční doba, rychlost

10 °C/min, 200 °C konečná teplota, 1 minut konečná doba);

*H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,44 (d, J = 10 Hz, 1 H), 6,99 (d, J = 3 Hz, 1 H), 6,73 (dd, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,80 (s, 3H).

b) 3-[N—(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]-4-bromanisol

Do míchaného roztoku 4-brom-3-brommethylanisolu (35 g, 125 mmol) v bezvodém DMSO (50 ml) a bezvodém THF (50 ml) byl přidán 4-trifluormethylbenzylamin (30 g, 171 mmol) následovaný triethylaminem (18 ml, 129 mmol). Po míchání po dobu 18 hodiny při teplotě zpětného toku reakční směs byla koncentrována, zředěna vodným 1 N NaOH (250 ml) a extrahována Et₂O (2 x 250 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou, sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Zbylé reziduum bylo čištěno mžikovou chromatografií na silikagelu (10 až 20% EtOAc/CHCl₃) a tím se získala sloučenina z názvu (34,17 g, 73%):

TLC (20% EtOAc/CHCl₃) R^f 0,63;

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,59 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,49 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,43 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 3,1 Hz, 1 H), 6,70 (dd, 1 H), 3,86 (s, 2 H), 3,84 (s, 2 H), 3,79 (s,3H), 1,75 (br s, 1 H).

-48CZ 299076 B6

c) 3-[N-(terc-Butoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]^4-bromanisol

Do míchaného roztoku 3-[N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]—4-bromanisolu (34,17 g, 91 mmol) v bezvodém THF (100 ml) byl přidán di-terc-butyldikarbonát (22 g, 101 mmol).

Reakční směs byla míchána pod argonovou atmosférou po dobu 18 hodin (byl pozorován prudký vývin plynu). Koncentrace a silikagelová chromatografie (5 až 19% EtOAc/hexan) poskytla sloučeninu z názvu (41,09g, 95%) ve formě čirého oleje:

TLC (oxid křemičitý, 20% EtOAc/hexan) R^f 0,44;

'H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,57 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,39-7,33 (m, 2H), 6,83 a 6,72 (2 s, 1H), 6,71 (dd, 1H), 4,54 a 4,50 (2 s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).

d) Methyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluoimethylbenzyr)aminomethyl]-4-methoxycinnamát

Roztok 3-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]-4-bromanisolu (37,08 g, 78 mmol), methylakrylátu (35 ml, 390 mmol), octanu paladnatého (0,889 g, 3,9 mmol), tri-o-tolylfosfinu (2,38 g, 7,8 mmol) a diizopropylethylaminu (31 ml, 178 mmol) v acetonitrilu (200 ml) byl deoxygenován (3 cykly evakuace a naplnění argonem), potom byl zahříván na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou (olejová lázeň nastavena na teplotu 80 °C). Po uplynutí 6 hodin byly přidány dodatečný octan palladnatý (0,88g, 3,9 mmol) a tri-o-tolylfosfin ((2,38 g, 7,8 mmol) a frakce byla míchána za teploty zpětného toku po dobu dodatečných

18 hodin. Reakční směs byla koncentrována do sucha a reziduum bylo vyjmuto v 1:1 směsi

Et2O/petrolejový ether (300 ml) a ponecháno stát po dobu 4 hodin. Šedivě zabarvený precipitát byl odfiltrován a promýván malým množstvím 1:1 směsi Et₂O/petrolejový ether (100 ml). Oranžově-červený filtrát byl koncentrován a čištěn mžikovou chromatografií na silikagelu (15% ethylacetát/hexany). Výsledné reziduum bylo vyjmuto v hexanu a směs byla ponechána v klidu po dobu několika hodin, potom bylo filtrováno pro odstranění žlutého precipitátu. Koncentrace filtrátu dala sloučeninu z názvu (34,52 g, 92%) ve formě hustého žlutého oleje:

TLC (oxid křemičitý, 20% EtOAc/hexany) R^f 0,45;

*H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,80 (br s, 1H), 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,29 (br s, 2H), 6,83 (dd, 1H), 6,72 (br s, 1H), 6,23 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 4,58 a 4,53 (2 br s, 2H), 4,46 a 4,37 (2 br s, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 1,49 (s, 9H).

e) Methyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]-4-meth40 oxydihydrocinnamát

Do 10% Pd/C (5 g, 4,7 mmol, předem namočeno v DMF) byl přidán roztok methyl 2-[N-(tercbutoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]-4-methoxycinnamátu (34,52 g, mmol) v methanolu (100 ml). Směs byla protřepávána pod vodíkovou atmosférou (50 psi) v Parrově přístroji po dobu 7 hodin, potom byla filtrována před vrstvu celitu® pro odstranění katalyzátoru. Filtrát byl koncentrován a tím se získala sloučenina z názvu (34,15 g, 98%) ve formě bezbarvého oleje:

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (br s, 2H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H),

6,76 (dd, 1H), 6,66 (s, 1H), 4,47 (br s, 2H), 4,40 (br s, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 2,79 (br s,

2H), 2,47 (t, 2H), 1,48 (s, 9H).

f) 2-[N-(terc-Butoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)ammomethyl]-4-methoxydihydroskořicová kyselina

-49CZ 299076 B6

Do míchaného roztoku 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluorbenzyl)aminomethyl]-4methoxydihydroskořicové kyseliny (34,15 g, 71 mmol) v dioxanu (150 ml) byl přidán vodný 1 N NaOH (85 ml, 85 mmol). Kalná reakční směs byla míchána při teplotě zpětného toku po dobu 4 hodin. Výsledný homogenní roztok byl neutralizován vodným 1 N HC1 (85 ml, 85 mmol) a extrahován ethylacetátem (2 x 250 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (250 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány a tím se získala sloučenina z názvu (34,60 g, 100%) ve formě hustého čirého oleje:

TLC (95:4:1 CHCl₃/MeOH/HOAc) R^f 0,49;

'H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,30 (br s, 2H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,65 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,47 (br s, 2H), 4,42 (br s, 2H), 3,76 (s, 3H), 2,81 (br s, 2H), 2,53 (t, 2H), 1,47 (s, 9H).

g) (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinonyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluonnethylbenzyl)aminomethylj-4-methoxydihydrocinnamid

Do míchaného roztoku 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]4-methoxydihydroskořicové kyseliny (34,60 g, 71 mmol) a pyridinu (6,9 ml, 85 mmol) vbez20 vodém dichlormethanu (200 ml) pod argonovou atmosférou byl přidán stříkačkou kyanurfluorid (4,4 ml, 48 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 4 hodin při teplotě zpětného toku. Výsledná hustá suspenze byla filtrována před vrstvu celitu® a proplachována malým množstvím bezvodého dichlormethanu (50 ml). Čirý filtrát byl vlit do separační nálevky a promýván ledovou vodou (500 m). Sušení (MgSO₄) a koncentrace zanechala surový fluorid kyseliny (34,70 g,

1 00%), který byl používán bez dalšího čištění. Do míchaného roztoku (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonu (13,8 g, 78 mmol) vbezvodém THF (300 ml) pod argonovou atmosférou při teplotě 78 °C byl přidán stříkačkou roztok η-BuLi v hexanech (2,5 M, 30 ml, 75 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě -78 °C po dobu 15 minut a potom byl přidán stříkačkou roztok výše uvedeného fluoridu kyseliny (34,70 g, 71 mmol) v bezvodém THF (100 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 1 hodin při teplotě -78 °C, potom byla reakce zastavena nasyceným NH(C1 a extrahována ethylacetátem (2 x 200 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (400 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Čištění mžikovou chromatografii na silikagelu (20% ethylacetát/hexany) poskytla sloučeninu z názvu (40,34 g, 90%) ve formě hustého čirého oleje:

TLC (20% EtOAc/hexany) R^f 0,21;

'H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,33 - 7,26 (m, 5H), 7,16 (m, 3H), 6,77 (dd, 1H), 6,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,60 - 4,40 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 3,76 (s, 3H),

3,27 (dd, 1H), 3,21 - 3,10 (m, 2H), 2,88 (br s, 2H), 2,72 (dd, 1H), 1,48 (s,9H).

h) (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinonyl 3-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)_N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]^4-methoxyfenyl]-2(S)-methoxykarbonylmethyl-propionamid

Do míchaného roztoku (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4-trifluormethylbenzyl)aminomethyl]-4-methoxydihydrocinnamidu (40,30 g, 64 mmol) v bezvodém THF (300 ml) při teplotě -78 °C byl přidán roztok lithium bis(trimethylsilyl)amidu (70 ml, 1 M v THF, 70 mmol) stříkačkou. Po uplynutí 30 minut byl přidán stříkačkou methyl bromacetát (30 ml, 317 mmol). Po uplynutí dalších 30 minut při teplotě -78 °C reakční směs byla ponechána zahřát se do -20 °C a stát po dobu dodatečných 6 hodin. Reakce byla zastavena nasyceným NHtCl (400 ml) a extrahována ethylacetátem (2 x 200 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (300 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Čištění mžikovou chromatografii na silikagelu (20% ethylacetát/hexany) poskytlo sloučeninu z názvu (38,62 g, 86%) ve formě bílé pevné látky:

-50CZ 299076 B6

HPLC (Altex Ultrasphere™-Si 5u, 20% EtOAc/hexany) vykázala, že přibližně 20 % nealkylovaného výchozího materiálu bylo stále přítomno. HPLC surové reakční směsi dalo výtěžek 90 % po dobu reakce.

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,4 - 7,11 (m, 8H), 6,71 (dd, ÍH), 6,63 (d, J = 2,7 Hz, ÍH), 4,57 - 4,34 (m, 6H), 4,03 (d, J = 8,6 Hz, ÍH), 3,85 (t, ÍH), 3,72 (s, 3H), 3,61 (s, 3H), 3,28 (dd, ÍH), 2,90 (dd, ÍH), 2,86-2,71 (m, 2H), 2,70 (dd, ÍH), 2,44 (m, ÍH), 1,48 a 1,46 (2s, 9H).

io i) Methyl (S)-8-methoxy-3-oxo-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetát

Do míchaného roztoku (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonyl 3-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(4trifluormethylbenzyl)aminomethyl]^l-methoxyfenyl]-2(S)-methoxykarbonylmethyl-propion15 amidu (38,0 g, 54 mmol) v THF (300 ml) a vody (100 ml) byl přidán po kapkách při teplotě 0 °C v průběhu 30 minut roztok 30% H₂O₂ (18,9 ml) a LiOH. H₂O (2,3 g, 55 mmol) ve vodě (62 ml). Kalný roztok byl míchán po dobu dodatečné 1 hodiny při teplotě 0 °C. Výsledný homogenní roztok byl pomalu zpracován roztokem siřičitanu sodného (34,3 g, 272 mmol) ve vodě (175 ml) při teplotě 0 °C, potom byl okyselen ledovým roztokem koncentrovaného HCl (35 ml) ve vodě (150 ml). Reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x200 ml) a sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (400 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Výsledné reziduum bylo zpracováno 4,0 M HCl v dioxanu (400 ml) za míchání při teplotě zpětného toku (byl pozorován pomalý vývin plynu). Po uplynutí 1 hodiny byla reakční směs koncentrována a znovu koncentrována z 1:1 směsi CHCl₃/toluen (2 x), potom reziduum (37,65 g) bylo vyjmuto v bezvodém DMF (400 ml). Do tohoto roztoku byly za míchání pod argonovou atmosférou při teplotě 0 °C vDewarově láhvi přidány triethylamin (15,3 ml, 109 mmol) a NaHCO₃ (22,9 g, 273 mmol), následované difenylfosforylazidem (13 ml, 60 mmol). Po míchání po dobu 24 hodin při teplotě 0 °C reakční směs byla koncentrována do sucha. Reziduum bylo vyjmuto v ethylacetátu (400 ml) a promýváno postupně vodou (300 ml) a solankou (300 ml). Sušení (MgSO₄), koncentrace a mžiková chromatografíe na silikagelu (35% ethylacetát/hexany) poskytla sloučeninu z názvu (16,87 g, 74%) ve formě čirého hustého oleje:

TLC (40% EtOAc/hexany) R^f 0,50;

MS (ES) m/e 422,3 (M + H)⁺;

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,52 (d, J = 8,1, 2H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,02 (d, J = 8,5 Hz, ÍH), 7,75 (dd, ÍH), 6,36 (d, J = 2,7 Hz, ÍH), 5,18 (d, J = 16,5 Hz, ÍH), 4,96 (d, J = 15,4 Hz, ÍH), 4,48 (d, J = 15,4 Hz, ÍH), 3,87 (m, ÍH), 3,74 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,08 (dd, ÍH), 3,02 (dd, ÍH), 2,95 (dd, ÍH), 2,48 (dd, ÍH).

j) Methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok bromidu boritého v CH₂C1₂ (1,0 M, 160 ml, 160 mmol) byl přidán po kapkách v průběhu 30 minut do roztoku methyl (S)-8-methoxy-3-oxo-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (16,67 g, 39,6 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (150 ml) při teplotě -20 °C pod argonovou atmosférou. Po uplynutí dalších 1,5 hodin při teplotě -15 °C až -20 °C byla reakční směs znovu ochlazena na teplotu -20 °C a reakce byla zastavena opatrným přidáním po kapkách MeOH (160 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě -10 až 0 °C po dobu 1 hodiny, potom byla koncentrována v rotační odparce. Reziduum bylo znovu koncentrováno z MeOH (2 x). Čištění mžikovou chromatografií na silikagelu (50 až 100% ethylacetát/hexany) poskytlo sloučeninu z názvu (14,87 g, 92%) ve formě bílé pevné látky:

[a]_D -81,8° (c, 1,0, MeOH);

-51 CZ 299076 B6

TLC (oxid křemičitý 50% EtOAc/hexany) R^f 0,54;

MS (ES) m/e 408,2 (M + H)⁺;

’H NMR (400 MHz, CDC1₃ 2% DMSO-d₆) δ 7,53 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,70 (dd, 1H), 6,41 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,73 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,47 (dd, 1H).

Příprava 19

HPLC separace enantiomerů methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,515 tetrahydro-2-benzazepin-4-acetátu

a) Methyl (R)-(+)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát a methyl (S)-(-)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro2-benzazepin-4-acetát

Methyl (±)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát byl rozdělen do svých enantiomerů chirální HPLC za následujících podmínek: Diacel Chiralcel OJ® kolona (21,2 x 250 mm), methanol mobilní fáze, 15 ml/min velikost průtoku, UV detekce na vlnové délce 295 nm, 400 mg injekce; t_R pro methyl (R)-(+)-8_methoxy-3-oxo-225 (2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát = 4,9 min; t_R pro methyl (Sý-(-)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát = 6,6 min

Příprava 20

HPLC separace enantiomerů methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-2-benzazepin^l-acetátu

a) Methyl (R)-(+)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát a methyl (S)-(-)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro2-benzazepin-4-acetát

Methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-ace40 tát byl rozdělen do svých enantiomerů chirální HPLC za následujících podmínek: Diacel Chiralcel OD® kolona (21,2 x 250 mm), 20% ethanol v hexanu mobilní fáze, 10 ml/min, UV detekce na vlnové délce 254 nm, 100 mg injekce; t_R pro methyl (R)-(+)-8-hydroxy-3-oxo-2(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát = 14 4 min; t_R pro methyl (S)-(-)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetát =

18,5 min.

Příprava 21

Příprava methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu enantioselektivní syntézou

-52CZ 299076 B6

a) 4-Brom-3-brommethylanisol

Do míchaného roztoku 4-brom-3-methylanisolu (100 g, 497 mmol) v bezvodém dichlormethanu (500 ml) byl přidán N-bromsukcinimid (97 g, 545 mmol) následovaný benzoylperoxidem (6 g,

25 mmol). Reakční směs byla jemně zahřívána na teplotu zpětného toku 150 wattovou širokoúhlou lampou s reflektorem umístěnou přibližně 12 palců od reakční nádoby. Po uplynutí 24 hodin reakční směs byla koncentrována rotačním odpařováním na poloviční objem a ponechána v klidu po dobu 4 hodin. Bílý precipitát, který se vytvořil, byl odfiltrován a proplachován malým množstvím dichlormethanu. Filtrát byl koncentrován do sucha a zbývající pevná látka byla rozetřena s hexany a filtrována. Sušení za sníženého tlaku poskytlo sloučeninu z názvu (100,25 g, 72%) ve formě bílých jehliček: GC t_R = 6,56 minut (HP 530 pm x 20 m methylkřemičitanová kolona, tok nosiče He 20 ml/min, 100 °C počáteční teplota, 1 minut počáteční doba, 10 °C/min, 200 °C konečný teplota, 1 minut konečná doba);

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,44 (d, J = 10 Hz, 1 H), 6,99 (d, J = 3 Hz, 1 H), 6,73 (dd, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,80 (s, 3H).

b) 3-[N-(2,2,2-Trifluorethyl)aminomethyl]^l-bromanisol-2,2,2-Trifluorethylamin (24 g, 242 mmol) byl prudce přidán do míchaného roztoku 4-brom-3-brommethylanisolu (33,6 g,

120 mmol) v bezvodém DMSO (125 ml) při teplotě zpětného toku. Reakční směs byla zahřívána na teplotu přibližně 30 - 35 °C. Po míchání po dobu 18 hodin byla reakční směs zředěna ledovým 1 N NaOH (200 ml) a extrahována Et₂O (2 x 300 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (300 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány a tím se získala sloučenina z názvu (41,35 g, 96%) ve formě bledě žlutého oleje:

TLC (toluen) R^f 0,32;

*H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,43 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,71 (dd, 1H), 3,93 (br s, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,18 (m, 2H), 1,86 (br s, 1H).

c) 3-[N-(terc-Butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)ammomethyl]-4-bromanisol

Do 3-[N-(2,2,2-trifluorethyl)aminomethyl]-4-bromanisolu (41,35 g, 137 mmol) byl přidán di-terc-butyl dikarbonát (36 g, 165 mmol, přeměněný na kapalinu zahříváním v horké vodní lázni). Reakční směs byla promývána malým množstvím dichlormethanu (-20 ml) a míchána pod argonovou atmosférou v 50 °C olejové lázni po dobu 18 hodin (byl pozorován pomalý vývin plynu). Po koncentraci rotačním odpařováním za sníženého tlaku výsledné reziduum bylo zředěno hexany (100 ml) a roztok byl naočkován malým množstvím čistého pevného produktu (získaného z předchozí reakce silikagelovou chromatografií s použitím 10% hexanů jako vymývacího rozpouštědla). Směs byla ponechána v klidu při teplotě zpětného toku po dobu několika hodin a potom byla umístěna v ledničce přes noc. Produkt byl shromážděn podtlakovou filtrací a promýván hexany. Sušení za sníženého tlaku poskytlo sloučeninu z názvu (48,54 g, 88%) ve formě bezbarvé pevné látky:

TLC (10% EtOAc/toluen) R^f 0,52;

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,44 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,75 (dd, 1H), 6,71 (s, 1H), 4,65 a 4,58 (2s, 2H), 3,90 a 3,78 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 1,51 a 1,42 (2s, 9H).

d) Methyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trilluorethyl)aminomethyl]-4-methoxycinnamát

Roztok 3-[N—(terc-butoxykarbonyl)—N—(2,2,2-trifluorethyl)aminomethyl]-4-bromanisolu (48,19 g, 121 mmol), methylakrylátu (55 ml, 605 mmol), octanu paladnatého (1,36 g, 6,1 mmol), tri-o-tolylfosfinu (3,69 g, 12 mol) a diizopropylethylaminu (49 ml, 278 mmol) v acetonitrilu

-53CZ 299076 B6 (200 ml) byl deoxygenován (3 x cykly evakuace a naplnění argonem), potom byl zahříván na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou v olejové lázni udržované na teplotě 80 °C. Po uplynutí 6 hodin byl přidán dodatečný octan paladnatý (1,36 g, 6,1 mmol) a tri-o-tolylfosfin (3,69 g, 12 mmol) a reakční směs byla míchána za teploty zpětného toku po dobu dodatečných

Et2O/petrolejový ether (300 ml) a ponecháno stát po dobu 4 hodin. Šedivě zbarvený precipitát byl odfiltrován a promýván malým množstvím 1:1 Et₂O/petrolejového etheru (přibližně 100 ml). Oranžově červený filtrát byl koncentrován a čištěn mžikovou chromatografií na silikagelu (15% ethylacetát/hexany). Výsledné reziduum bylo vyjmuto v hexanu a směs byla ponechána v klidu ío po dobu 2 hodin, potom byla filtrována pro odstranění žlutého precipitátu.

Koncentrace filtrátu zanechala sloučeninu z názvu (45,85 g, 94%) ve formě žlutého oleje:

TLC (20% EtOAc/hexany) R^f 0,50;

'HNMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,84 (d, J = 16 Hz, IH), 7,57 (d, J = 9 Hz, IH), 6,86 (dd, IH), 6,74 a 6,72 (2s, IH), 6,26 (d, J = 16 Hz, IH), 4,74 až 4,70 (2s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,80 a 3,66 (2m, 2H), 1,51 a 1,45 (2s, 9H).

e) Methyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)aminomethylJ-4-methoxydihydrocinnamát

Do 10% Pd/C (5 g, 4,7 mmol, předem namočeno v DMF) byl přidán roztok methyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)amino]methyl-4-methoxycinnamátu (45,85 g, 113 mmol) v methanolu (100 ml). Směs byla protřepávána pod vodíkovou atmosférou (50 psi) vParrově přístroji po dobu 6 hodin, potom byla filtrována před vrstvu celitu® pro odstranění katalyzátoru. Filtrát byl koncentrován a tím se získala sloučenina z názvu (43,71 g, 95%) ve formě bezbarvého oleje:

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,11 (d, J = 8 Hz, IH), 6,78 (dd, IH), 6,65 (s, IH), 4,63 a 4,60 (2s, 2H), 3,84 a 3,70 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 2,86 (t, 2H), 2,53 (t, 2H), 1,50 a 1,44 (2s, 9H).

f) 2-[N-(terc-Butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyI)aminomethyl]^4-methoxydihydro35 skořicová kyselina

Do míchaného roztoku methyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)aminomethylj^l-methoxydihydrocinnamátu (43,11 g, 108 mmol) v dioxanu (200 ml) byl přidán vodný 1 N NaOH (130 ml, 130 mmol). Kalná reakční směs byla míchána při teplotě zpětného toku po dobu 4 hodin. Výsledný homogenní roztok byl neutralizován pomocí 1 N HCI (130 ml, 130 mmol) a extrahován ethylacetátem (2 x 250 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (250 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány a tím se získala sloučenina z názvu (45,01 g, 100%) ve formě hustého čirého oleje:

TLC (95:4:1 CHC1₃, MeOH, HOAc) R^f 0,49.

g) (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinonyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)aminomethyl]-4-methoxydihydrocinnamid

Do míchaného roztoku 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)aminomethyl]^4methoxodihydroskořicové kyseliny (45,0 g, 108 mmol) a pyridinu (10 ml, 124 mmol) v bezvodém dichlormethanu (400 ml) pod argonovou atmosférou byl stříkačkou přidán kyanurfluorid (6,8 ml, 74 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 4 hodin při teplotě zpětného toku. Výsledná hustá suspenze byla filtrována před vrstvu celitu® a filtrační vrstva byla proplachována malým množstvím bezvodého dichlormethanu (50 ml). Čirý filtrát byl vlit do oddělovací nálevky

-54CZ 299076 B6 a promýván ledovou vodou (750 ml). Sušení (MgSO₄) a koncentrace zanechaly surový fluorid kyseliny (43,32 g, 100%), který byl používán bez dalšího čištění. Do míchaného roztoku (R)-4benzyl-2-oxazolidinonu (21 g, 119 mmol) v bezvodém THF (400 ml) pod argonovou atmosférou při teplotě -78 °C byl přidán stříkačkou roztok n-BuLi v hexanech (2,5 Μ, 113 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě -78 °C po dobu 15 minut a potom byl přidán stříkačkou roztok výše uvedeného fluoridu kyseliny (43,32 g, 108 mmol) v bezvodém THF (100 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 1 hodiny při teplotě -78 °C a potom byla reakce zastavena nasyceným NH₄C1 a extrahována ethylacetátem (2 x 250 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (500 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Čištění mžikovou chromatografií ío na silikagelu (20% ethylacetát/hexany) poskytlo sloučeninu z názvu (55,27 g, 91%) ve formě hustého čirého oleje:

TLC (oxid křemičitý, 20% EtOAc/hexany) R^f 0,24;

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,34- 7,26 (m, 3H), 7,19 - 7,16 (m, 3H), 6,78 (dd, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,68- 4,63 (m, 3H), 4,21 - 4,11 (m, 2H), 3,87 a 3,74 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,28 (dd, 1H), 3,17 (m, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,75 (dd, 1H), 1,50 a 1,45 (2s, 9H).

h) (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinonyl 3-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2-trifluorethyl)20 aminomethyl]-4-methoxyfenyl]-2(S)-methoxykarbonylmethyl-propionamid

Do míchaného roztoku (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonyl 2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2,2,2trifluorethyl)aminomethyl]-4-methoxydihydrocinnamidu (55,2 g, 100 mmol) v bezvodém THF (300 ml) byl při teplotě -78 °C stříkačkou přidán roztok bis(trimethylsilyl)amidu lithného (115 ml, 1 M v THF, 115 mmol). Po uplynutí 30 minut byl přidán stříkačkou methylbromacetát (47 ml, 497 mmol). Po uplynutí dalších 30 minut při teplotě -78 °C reakční směs byla ponechána zahřát se na -20 °C a míchána po dobu dodatečných 6 hodin. Reakce byla ukončena nasyceným NH₄C1 (400 ml) a extrahována ethylacetátem (2 x 250 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (400 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Čištění mžikovou chromatografií na silikagelu (20% ethylacetát/hexany) poskytlo sloučeninu z názvu (52,44 g, 75%) ve formě bílé pevné látky:

HPLC (Altex Ultrasphere™-Si 5u, 20% EtOAc/hexan) ukázala, že přibližně 6 až 7 % nealkylovaného výchozího materiálu byl stále přítomno. HPLC surové reakční směsi dala výtěžek reakce

86%.

'H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,35 - 7,13 (m, 6H), 6,73 (dd, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,69- 4,53 (m, 4H), 4,04 (d, 1H), 3,87 (t, 1H), 3,85-3,72 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,31 (dd, 1H), 2,95 (dd, 1H), 2,92 - 2,71 (m, 2H), 2,71 (dd, 1H), 2,50 (m, 1 Η), 1,50 a 1,47 (2 br s, 9H).

i) Methyl (S)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Do míchaného roztoku (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonyl 3-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N45 (2,2,2-tnfluorethyl)aminomethyl]-4-methoxyfenyl]-2(S)-methoxykarbonylmethyl-propionamidu (52,40 g, 75 mmol) v THF (300 ml) a voda (100 ml) byl přidán po kapkách při teplotě 0 °C v průběhu 30 minut roztok 30% H₂O (26 ml) a LiOH . H₂O (3,2 g, 75 mmol) ve vodě (85 ml). Kalný roztok byl míchán po dodatečnou 1 hodinu při teplotě 0 °C. Výsledný homogenní roztok byl zpracován pomalu roztokem siřičitanu sodného (46 g, 365 mmol) ve vodě (240 ml) při teplotě 0 °C, potom byl okyselen ledovým roztokem koncentrovaného HC1 (45 ml) ve vodě (200 ml). Reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2 x 300 ml) a sloučené organické vrstvy byly promývány solankou (600 ml), sušeny (MgSO₄) a koncentrovány do sucha. Výsledné reziduum bylo zpracováno 4,0 M HC1 v dioxanu (500 ml) za míchání při teplotě zpětného toku (byl pozorován pomalý vývin plynu). Po uplynutí 1 hodiny byla reakční směs koncentrována a znovu koncentrována z 1: 1 směsi CHCl₃/toluen (2 x), potom reziduum (48,89 g) bylo vyjmuto

-55CZ 299076 B6 v bezvodém DMF (500 ml). Do tohoto roztoku za míchání pod argonovou atmosférou při teplotě 0 °C v Dewarově nádobě byly přidány triethylamin (21 ml, 150 mmol) a NaHCO₃ (31,5 g, 375 mmol), následovaný difenylfosforylazidem (18 ml, 83,5 mmol). Po míchání po dobu 24 hodin při teplotě 0 °C byla reakční směs koncentrována do sucha. Reziduum bylo vyjmuto v ethylacetátu (500 ml) a promýváno postupně vodou (400 ml) a solankou (400 ml). Sušení (MgSO₄), koncentrace a mžiková chromatografie na silikagelu (30% ethylacetát/hexany) poskytla sloučeninu z názvu (21,81 g, 84%) ve formě bílé pevné látky:

[a]_D-132,6° (c, 1,0, MeOH);

TLC (40% EtOAc/hexan) R^f 0,56;

chirální HPLC (Chiralcel OD, 20% EtOAc/hexany) k' = 2,05;

opačný enantiomer z racemického standardu měl k' = 1,86 (nedetekován);

MS (ES) m/e 346,2 (M + H)⁺;

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,03 (d, J = 8,5 Hz, IH), 6,79 (dd, IH), 6,61 (d, J = 2,6 Hz, IH),

5,35 (d, J = 16,7 Hz, IH), 4,17 (m, IH), 4,0 (m, IH), 3,99 (d, J = 16,7 Hz, IH), 3,84 (m, IH),

3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,01 (m, 2H), 2,91 (dd, IH), 2,47 (dd, IH).

Analýza: Vypočteno pro Ci₆H₁₈F₃NO₄: C, 55,65; H, 5,25; N, 4,06.

Nalezeno: C, 55,62; H, 5,27; N, 4,04.

j) Methyl (S)-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-acetát

Roztok bromidu boritého v CH₂C1₂ (1,0 M, 250 ml, 250 mmol) byl přidán po kapkách v průběhu

30 minut do roztoku methyl (S)-8-methoxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetátu (21,5 g, 62,3 mmol) vbezvodém CH₂C1₂ (230 ml) při teplotě -20 °C pod argonovou atmosférou. Po uplynutí dalších 1,5 hodin při teplotě -15 až -20 °C byla reakční směs znovu ochlazena na teplotu -20 °C a reakce byla zastavena opatrným přidáním po kapkách MeOH (250 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě -10 až 0 °C po dobu 1 hodiny, potom byla koncentrována v rotační odparce. Reziduum bylo znovu koncentrováno z MeOH (2 x). Čištění mžikovou chromatografií na silikagelu (50% ethylacetát/hexany) poskytlo sloučeninu z názvu (19,38 g, 94%) ve formě bílé pevné látky:

[a]_D-130,5° (c 1,0, MeOH);

TLC (oxid křemičitý, 40% EtOAc/hexany) R^f 0,40;

MS (ES) m/e 332,1 (M + H)⁺;

’H NMR (400 MHz, CDCl₃-2% DMSO-d₆) δ 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,71 (dd, IH), 6,58 (d, J = 2,5 Hz, IH), 5,29 (d, J = 16,7 Hz, 1 H), 4,21 - 3,98 (m, 2H), 3,96 (d, J = 16,7 Hz, IH), 3,82 (m, IH), 3,68 (s, 3H), 2,98 (dd, IH), 2,94 (dd, IH), 2,83 (dd, IH), 2,46 (dd, IH).

Analýza: Vypočteno pro C₁₅H,₆F₃NO₄: C, 54,38; H, 4,87; N, 4,23.

Nalezeno: C, 54,40; H, 4,96; N, 4,22.

-56CZ 299076 B6

Příprava 22

Příprava methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetátu enantioselektivní syntézou

a) 3-[N-(terc-Butoxykarbonyl)-N-(2-fenylethyl)amino]methyM-bromanisol

2-Fenylethylamin (19,0 ml, 150 mmol) byl najednou přidán do roztoku 4-brom-3-brommethylanisolu (14,0 g, 50,0mmol) vbezvodém THF (200 ml) při teplotě zpětného toku. Po ío uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována. Reziduum bylo rozpuštěno v 2 M NaOH (300 ml) a extrahovno CH₂C1₂ (3 x 200 ml). Sloučené CH₂C1₂ vrstvy byly sušeny nad MgSO₄ a koncentrovány. Surový materiál byl filtrován přes vrstvu silikagelu použitím směsi 50% EtOAc/hexany jako vymývacího rozpouštědla. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a tím se získal žlutý olej:

MS (ES) m/e 320 (M + H)⁺.

Výše uvedený žlutý olej byl rozpuštěn v bezvodém THF (200 ml) a di-terc-butyl dikarbonátu (13,0 g, 60,0 mmol) byl najednou přidán při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 1 hodiny byl roz20 tok koncentrován. Mžiková silikagelová chromatografie (10% EtOAc/hexany) poskytla sloučeninu z názvu ve formě bělavé pevné látky (20,8 g, 100% z 4-brom-3-brommethylanisolu):

'H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,51 - 7,10 (m, 6H), 6,85 - 6,60 (m, 2H), 4,52 - 4,33 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,52 - 3,31 (m, 2H), 2,92-2,73 (m, 2H), 1,61 - 1,33 (m, 9H).

b) 4-[2-[N-(terc-Butoxykarbonyl)-N-(2-fenylethyl)amino]methyl-4-methoxyfenyl]propionová kyselina

Roztok 3-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2-fenylethyl)amino]methyl-4-bromanisolu (20,0 g,

48,0 mmol), benzylakrylátu (23,0 g, 144 mmol), octanu palladnatého (540 mg, 2,40 mmol), tri-o-tolylfosfinu (1,46 g, 4,80 mmol) a diizopropylethylaminu (17,0 ml, 96,0 mmol) v propionitrilu (250 ml) byl deoxygenován (3x cykly evakuace a naplnění argonem), potom byl zahříván na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou. Po uplynutí 48 hodin reakční směs byla ochlazena na teplotu zpětného toku, filtrována před vrstvu celitu® a koncentrována. Mžiková silikagelová chromatografie (10% EtOAc/hexany) dala žlutý olej, který byl rozpuštěn v 10% směsi EtOAc/hexany (100 ml) a ponechána při teplotě 4 °C po dobu 72 hodin. Žlutý precipitát byl odstraněn filtrací a potom byl roztok koncentrován a tím se získal bledě žlutý olej (14,98 g, 62%);

‘H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 8,00 - 7,85 (m, 1H), 7,61 - 7,01 (m, 1H), 6,85 - 6,76 (m, 2H), 6,75 - 6,67 (m, 1H), 6,32 (m, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,60 - 4,41 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,52 - 3,20 (m, 2H), 2,93 - 2,71 (m, 2H), 1,55 - 1,33 (m, 9H).

Výše uvedený olej byl rozpuštěn v MeOH (150 ml) a 10% Pd/C (6,40 g, 6,00 mmol) bylo přidáno při teplotě 0 °C. Směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku, protřepávána pod vodíkovou atmosférou (50 psi) po dobu 7 hodin, potom byla filtrována před vrstvu celitu® pro odstranění katalyzátoru. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu ve formě hustého žlutého oleje (10,35 g, 83%):

*H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,35 - 7,02 (m, 6H), 6,85 - 6,76 (m, 2H), 6,75 - 6,73 (m, 1H), 6,69 - 6,68 (m, 1H), 4,42 - 4,25 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,44 - 3,25 (m, 2H), 2,92 - 2,73 (m, 4H), 2,59 - 2,50 (m, 2H), 1,60 - 1,33 (m, 9H).

c) (R)—1, l-Dimethylethyl[[5-methoxy-2-[3-oxo-3-[2-oxo-4-(fenylmethyl)-3-oxazol55 idinyl]propyl]fenyl]methyl](2-fenylethyl)karbamát

-57CZ 299076 B6

Do roztoku 4-[2-[N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(2-fenylethyl)amino]methyl-4-methoxyfenyl]propionové kyseliny (10,35 g, 25,0 mmol) v CH2CI2 (125 ml) byl přidán pyridin (2,4 ml, 30,0 mmol) a potom kyanurfluorid (1,4 ml, 15,0 mmol) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí

2 hodin směs byla filtrována před vrstvu celitu®, promývána studenou H₂O (100 ml) a potom solankou (100 ml), sušena nad MgSO₄ a koncentrována.

Do roztoku (R)-4-benzyl-2-oxazolidinonu (5,30 g, 30,0 mmol) v bezvodém THF (125 ml) byl přidán n-BuLi (11,0 ml, 2,5 M roztok v hexanech, 27,5 mmol) při teplotě -78 °C. Po uplynutí

15 minut byl přidán po kapkách výše uvedený fluorid kyseliny v bezvodém THF (25 ml) v průběhu 5 minut. Po uplynutí 1 hodiny směs byla vlita do 300 ml H₂O a extrahována EtOAc (3 x 200 ml). Sloučené EtOAc vrstvy byly sušeny nad MgSO₄ a koncentrovány. Mžiková silikagelová chromatografie (30% EtOAc/hexany) poskytla sloučeninu z názvu ve formě hustého oleje (12,12 g, 85%):

^]H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,41 - 7,12 (m, 11H), 6,65 (m, 1H), 6,60 (m, 1H), 4,70-4,62 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H), 4,21 - 4,10 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,50- 2,61 (m, 10H), 1,55-1,41 (m, 9H).

d) [R-(R*,S*)]-Methyl P-[[4-methoxy-2-[[[(l,l-dimethylethoxy)karbonyl](2-fenylethyl)amino]methyl]fenyl]methyl]-y-oxo-4-(fenylmethyl)-3-oxazolidinbutanoát

Do roztoku (R)-1,1 -dimethylethyl [[5-methoxy-2-[3-oxo-3-[2-oxo-4-(fenyl methyl)-3-oxazolidinyl]propyl]fenyl]methyl](2-fenylethyl)karbamátu (12,12 g, 21,0 mmol) v bezvodém THF (100 ml) byl přidán bis(trimethylsilyl)amid lithný (22,0 ml, 1M v THF, 22,0 mmol) při teplotě

-78 °C. Po uplynutí 15 minut byl přidán methylbromacetát (9,9 ml, 105 mmol) a potom směs byla zahřívána na -20 °C. Po uplynutí 3 hodin směs byla vlita do 200 ml H₂O a extrahována EtOAc (3 x 500 ml). Sloučené EtOAc vrstvy byly sušeny nad MgSO₄ a koncentrovány. Mžiková silikagelová chromatografie (25% EtOAc/hexany) dala 9,91 g 3:2 směsi (HPLC, 20% EtOAc/30 hexany) sloučeniny z názvu respektive (R)-l,l-Dimethylethyl[[5-methoxy-2-[3-oxo-3-[2oxo-4-(fenylmethyl)-3-oxazolidinyl]propyl]fenyl]methyl](2-fenylethyl)karbamátu. Tato směs byla používána bez dalšího čištění:

MS (ES) m/e 667 (M+Na)⁺.

e) Methyl (S)-8-methoxy-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-bcnzazepin-Macetát

Do roztoku [R-(R*,S*)]-methyl 3-[[4-methoxy-2-[[[(l,l-dimethylethoxy)karbonyl](2-fenyl40 ethyl)amino]methyl]fenyl]methyl]-Ygama-oxo-4-(fenylmethyl)-3-oxazolidinebutanoátu (9,91 g, 15,4 mmol) v THF (75 ml) byl přidán roztok monohydrátu hydroxidu lithného (646 mg, 15,4 mmol) a H₂O₂ (5,2 ml, 30 % v H₂O, 46,2 mmol) v H₂O (25 ml) při teplotě 0 °C v průběhu 10 minut. Po uplynutí 1,5 hodiny byl přidán roztok Na₂SO₃ (9,7 g, 77 mmol) v H₂O (100 ml). Směs byla okyselena na pH 4 použitím 2 M HC1 a extrahována EtOAc (3 x 200 ml). Sloučené

EtOAc vrstvy byly sušeny nad MgSO₄ a koncentrovány. Výsledné reziduum bylo rozpuštěno v 4,0 M HC1 v dioxanu (75 ml). Po uplynutí 45 minut směs byla koncentrována a potom znovu koncentrována z toluenu (200 ml). Výše uvedené reziduum bylo rozpuštěno v bezvodém DMF (75 ml). Do tohoto roztoku byl přidán NaHCO₃ (6,50 g, 77,0 mmol) a triethylalanin (4,3 ml, 30,8 mmol) při teplotě zpětného toku. Směs byla ochlazena na 0 °C a byl přidán difenyl (5 ml,

23,1 mmol). Po uplynutí 16 hodin směs byla koncentrován. Výsledná pasta byla rozpuštěna v EtOAc (500 ml), promývána H₂O (2 x 300 ml), sušena nad MgSO₄ a koncentrována. Mžiková silikagelová chromatografie (40% EtOAc/hexany) poskytla sloučeninu z názvu (2,61 g, 33% z [R-(R*,S*)]-methyl 3-[[4-methoxy-2-[[[( 1,l-dimethylethoxy)karbonyl](2-fenylethyl)amino]methyl]fenyl]methyl]-Y-oxo-4-(fenylmethyl)-3-oxazolidinebutanoátu) ve formě čirého oleje:

-58CZ 299076 B6

MS (ES) m/e 390 (M + Na)⁺.

f) Methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4acetát

Do roztoku methyl (S)-8-methoxy-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (2,61 g, 7,1 mmol) v CH₂C1₂ (40 ml) byl přidán BBr₃ (21,3 ml, IM v CH₂C1₂, 21₃ mmol) při teplotě -20 °C. Po uplynutí 45 minut byla reakce zastavena přidáním MeOH (200 ml) a reakční směs byla koncentrována. Reziduum bylo filtrováno vrstvou silikagelu io pomocí 50% směsi EtOAc/hexany jako vymývacího rozpouštědla. Výsledná oranžová pevná látka byla rekrystalizována z MeOH/H₂O a tím se získala sloučenina z názvu ve formě bělavé pevné látky (2,16 g, 81%):

MS (ES) m/e 376 (M + Na)⁺.

Příklad 1

Příprava (±)-8- [3-[2-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-220 benzazepin-4-octové kyseliny

a) Methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H2-benzazepin^l-acetát

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu (1,4 g, 8 mmol) v bezvodém DMF (8 ml) byl přidán po kapkách do roztoku methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin-4-acetátu (1,7 g, 7 mmol), trifenylfosfinu (2,76 g, 11 mmol) a diethylazodikarboxylátu (2,33 ml, 14 mmol) v bezvodém DMF (4 ml) a bezvodého THF (10 ml) při teplotě zpětného toku pod argonovou atmosférou. Výsledný roztok byl míchán po dobu 18 hodin, potom byl koncentrován za sníženého tlaku. Silikagelová chromatografie (2 až 10% CH₃OH/CH₂C1₂) dala sloučeninu z názvu (1,2g):

MS (ES) m/e 400,2 (M + H)⁺.

Byl také odebrán nezreagovaný methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát (0,4 g).

b) Ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Směs methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin—4-acetátu (1,2 g, 3 mmol), 1,2 g 10% paládia na aktivním uhlí (1,2 g), cyklohexenu (3 ml, 15 mmol) a ethanolu (20 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu 18 hodin. Směs byla filtrována a filtrát byl koncentrován. Reziduum bylo čištěno chromatografií na silikagelu (2 až 5% CH₃OH/CH₂C1₂) a tím se získala sloučenina z názvu (0,72 g, 64 %) ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 398,2 (M + H)⁺.

^{50 c}) (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4octová kyselina

Směs ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (0,7 g, 2 mmol), monohydrátu hydroxidu lithného (0,12 g, 3 mmol), 5 ml THF (5 ml), H₂O (5 ml) a MeOH (2 ml) byla míchána při teplotě okolí po dobu 18 hodin, potom byla

-59CZ 299076 B6 koncentrována. Reziduum bylo rozděleno mezi ethylacetát a vodu a vrstvy byly odděleny. Vodná fáze byla opatrně upravena na pH 4 pomocí 3 N HCl a ponechána stát. Výsledné krystaly byly shromážděny filtrací a sušeny a tím se získala sloučenina z názvu (0,4 g, 65%) ve formě snědé pevné látky:

MS m/e 370,4 (M + H)⁺:

Analýza: Vypočteno pro C20H23N3O4.0,25 H₂O: C, 64,25; H, 6,34; N, 11,24.

Nalezeno: C, 64,02; H, 6,37; N, 11,20.

Příklad 2

Příprava (±)-8-[3-[(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H2-benzazepin^l-octové kyseliny

a) Methyl (±)-8-[3-[2-(4-nitro-N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin^t-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyI)amino]^l-nitropyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě oranžové pěny:

MS (ES) m/e 445,2 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-8-[3-[(4-amino-2-pyridyl)amino]_l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (b), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[2-(4-nitro-Noxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^4-acetát namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 399,3 (M + H)⁺.

c) (±)-8-[3-[(4-Amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[(4-amino-2pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-[(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 385,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C2oH₂₄N₄04.1,25 H₂O: C, 59,03; H, 6,56; N, 13,76.

Nalezeno: C, 58,80; H, 6,49; N, 13,62.

Příklad 3

Příprava (±)-8-[3-[(4-methoxy-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro55 1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

-60CZ 299076 B6

a) Methyl (±)-8-[3-[(4-methoxy-N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]^4-methoxypyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 430,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-8-[3-[(4-methoxy-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(b), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[2-(4-meth15 oxy-N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepinN-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bledě žlutého oleje:

MS (ES) m/e 414,4 (M + H)⁺.

c) (±)-8-[3-[(4-Methoxy-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[(4-methoxy25 2-pyridyl)amino]-1 -propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-[2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bělavé pevné látky:

MS (ES) m/e 400,3 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂iH₂₅N₃O₅.0,75 H₂O: C, 61,08; H, 6,47; N, 10,18.

Nalezeno: C, 61,15; H, 6,20; N, 10,12.

Příklad 4

Příprava (±)-8-[3-(2-pyridylamino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu (252,3 mg, 1,5 mmol) a diethylazodi45 karboxylátu (0,24 ml, 1,5 mmol) v bezvodém DMF (7,5 ml) byl přidán pomalu po kapkách do roztoku methyl (±)-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (197,5 mg, 0,75 mmol) a trifenylfosfinu (413,1 mg, 1,58 mmol) v bezvodém DMF (7,5 ml) při teplotě zpětného toku. Adice vyžadovala 15 minut a byla mírně exothermická. Po uplynutí 2 hodin byla reakční směs koncentrována a reziduum bylo znovu koncentrováno z xylenů.

Silikagelová chromatografie (2:2:1 EtOAc/CHCl₃/MeOH) dala R^f 0,48 (TLC v 2:2:1 EtOAc/CHCl₃/MeOH) materiálu ve formě kalného takřka bezbarvého oleje. Olej byl rechromatografován na silikagelu (absolutní EtOH) a tím se získala sloučenina z názvu (243,9 mg, 79%) ve formě bělavé pěny:

TLC (absolutní EtOH) R^f 0,33;

-61 CZ 299076 B6 ’Η NMR (250, CDC1₃) δ 8,12 (app. dd, 1 H), 7,10 - 7,23 (m, 1 H), 6,90 - 7,10 (m, 2 H), 6,78 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1 H), 6,45 - 6,72 (m, 3 H), 5,28 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 3,95 - 4,25 (m, 2 H), 3,60- 3,90 (m, 1 H), 3,76 (d, J= 16,3 Hz, 1 H), 3,71 (s, 3 H), 3,51 (q, J= 6,4 Hz, 2 H),

2,73 -3,15 (m, 3 H), 3,04 (s, 3 H), 2,41 (dd, J= 16,7, 5,4 Hz, 1 H), 2,05-2,28 (m, 2 H);

MS (ES) m/e 414 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydroi o 1 H-2-benzazepin-4-acetát

Směs methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-bcnzazepin-4-acetátii (243,9 mg, 0,59 mmol), cyklohexenu (0,60 ml, 5,9 mmol) a 10% Pd/C (63 mg, 0,06 mmol) v 2-propanolu (6 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku.

Po uplynutí 21,5 hodin byla reakční směs ochlazena na teplotu zpětného toku a filtrována přes celit®. Filtrát byl koncentrován a reziduum bylo znovu koncentrováno z toluenu. Silikagelová chromatografie (5 % MeOH v 1:1 EtOAc/CHCfi) poskytla sloučeninu z názvu (212,8 mg, 91%) ve formě bezbarvého oleje:

TLC (5 % MeOH v 1:1 EtOAc/CHCb) R^f 0,39;

'HNMR (250, CDCb) δ 8,03 - 8,13 (m, 1 H), 7,35 - 7,48 (m, 1 H), 7,00 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,77 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,52 - 6,62 (m, 1 H), 6,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 5,27 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 4,62 - 4,82 (m, 1 H), 3,95 - 4,20 (m, 2H), 3,60 - 3,90 (m, 2 H),

3,71 (s, 3 H), 3,50 (q, J = 6,3 Hz, 2 H), 2,75 - 3,15 (m, 3 H), 3,03 (s, 3 H), 2,40 (dd, J = 16,7,

5,3 Hz, 1 H), 2,00 - 2,22 (m, 2H).

MS (ES) m/e 398 (M + H)⁺.

c) (±)-8-[3-[2-Pyridylamino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin—4-octová kyselina

1,0 N LiOH (0,80 ml, 0,80 mmol) byl přidán do roztoku methyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-lpropyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (207,5 mg,

0,52 mmol) v THF (2,6 ml) a H₂O (1,8 ml) při teplotě zpětného toku. Původně kalný roztok se stal homogenním v průběhu 1 minuty. Po uplynutí 18 hodin byla reakční směs okyselena TFA (0,12 ml, 1,56 mmol) a koncentrována. ODS chromatografie (20% CH₃CN/H₂O obsahující 0,1% TFA), koncentrace a lyofilizace poskytla sloučeninu z názvu (252,4 mg, 83%) ve formě žluté hygroskopické pevné látky:

HPLC (PRF-1®, 20% CH₃CN/H₂O obsahující 0,1% TFA) K' = 2,4;

’H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7,83 - 7,93 (m, 1 H), 7,76 - 7,83 (m, 1 H), 7,00 - 7,11 (m, 2 H), 6,83 - 6,91 (m, 1 H), 6,80 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1 H), 6,76 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 4,05 - 4,18 (m, 2 H), 3,94 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 3,77 - 3,90 (m, 1 H), 3,57 (t, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,03 (dd, J = 17,0, 4,2 Hz, 1 H), 2,99 (s, 3 H), 2,83 (dd, J = 17,0, 9,1 Hz, 1 H), 2,72 (dd, J = 17,0, 13,5 Hz, 1 H), 2,44 (dd, J = 17,0, 4,7 Hz, 1 H), 2,11 - 2,23 (m, 2 H);

MS (ES) m/e 384 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C_2IH₂₅N₃O₄. 1,5 CF₃CO₂H . 1,5 H₂O: C, 49,57; H, 5,11; N, 7,23.

Nalezeno: C, 49,65; H, 4,95; N, 7,15.

-62CZ 299076 B6

Příklad 5

Příprava (±ý-8-[3-(2-imidazolylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benz5 azepin-4-octová kyselina

Sloučenina z názvu je obecně připravena způsobem, detailně popsaném v Příkladech 1-4.

ío Příklad 6

Příprava (±)-8-[3-[2-(l, 4,5,6-tetrahydropyrimidinyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin^t-octové kyseliny

a) Methyl (±)-8-[3-(terc-butoxykarbonylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin^f-acetát

Roztok 3-[(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propanolu (0,14 g, 0,8 mmol) a diethylazodikarboxylátu (0,13 ml, 0,8 mmol) vbezvodém DMF (2 ml) byl přidán po kapkách do roztoku methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (0,10 g,

0,4 mmol) a trifenylfosfinu (0,21 g, 0,8 mmol) vbezvodém DMF (1,4 ml) a bezvodého THF (2 ml) při teplotě zpětného toku pod argonovou atmosférou. Výsledný roztok byl míchán po dobu 18 hodin, potom byl koncentrován za sníženého tlaku. Silikagelová chromatografie (1 až 3% MeOH/CH2Cl₂) poskytla sloučeninu z názvu (0,11 g):

MS (ES) m/e 407,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-8-(3-amino-l-propyloxy)-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4acetát, trifluoracetátová sůl

Roztok methyl (±)-8-[3-(terc-butoxykarbonylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetátu (0,70 g) v CH₂C1₂ (7 ml) a TFA (2 ml) byl míchán pod argonovou atmosférou při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny, potom byl koncentrován a tím se získala sloučenina z názvu (0,75 g, 100%) ve formě bezbarvého skla:

MS (ES) m/e 321,4 (M + H)⁺.

c) Methyl (±)-8-[3-(pyrimidin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin-4-acetát

Směs trifluoracetátové soli methyl (±)-8-(3-amino-l-propyloxy)-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetátu (0,75 g, 2 mmol), 2-brompyrimidinu (0,5 g, 3 mmol), NaHCO₃(1,4 g, 17 mmol) a EtOH (10 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 24 hodin byla směs byla filtrována a nerozpustný materiál byl promýván MeOH. Filtráty a promyté látky byly sloučeniny a koncentrovány a reziduum bylo čištěno chromatografii na silikagelu (1 až 6% MeOH/CH₂Cl₂) a tím se získala sloučenina z názvu (0,54 g, 82 %) ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 385,5 (M + H)⁺.

⁵⁰ d) (±)-8-[3-[(l,4,5,6-tetrahydropyrimidin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Směs methyl (±)-8-[3-(pyrimidin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-acetát (0,36 g, 0,94 mmol), 4 M HC1 v dioxanu (0,25 ml, 1 mmol), 10% paládiem na aktivním uhlí (0,24 g, 0,24 mmol) a MeOH (5 ml) byl míchán pod vodíkovým balónkem. Po

-63CZ 299076 B6 uplynutí 18 hodin byla směs filtrována a filtrát byl koncentrován. Reziduum bylo rozděleno mezi EtOAc a vodný K2CO3. Precipitovaná pevná látka byla shromážděna filtrací a sušena a tím se získala sloučenina z názvu ve formě bílé pevné látky:

MS m/e 375,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C19H26N4O4.2,5 H₂O: C, 54,40; H, 7,45; N, 13,35.

Nalezeno: C, 54,68; H, 7,2; N, 13,39.

Příklad 7

Příprava (±)-8-[3-(6-amino-2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-215 benzazepin—4-octová kyselina

Příklad 8

Příprava (±)-8-[2-[6-(methylamino)pyridyl]ethoxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin—4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 6-(methylamino)-2-pyridylethanol namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 384 (M + H)⁺.

b) (±)-8-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-235 benzazepin—4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát methyl namísto ethyl (±)-8-[3-[2-pyridylamino-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benz40 azepin-4-acctátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 370 (M + H)⁺.

Příklad 9

Příprava (±)-8-[2-(2-benzimidazolyl)ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4octová kyselina

a) Methyl (±)-8-(benzimidazol-2-yl)-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin—4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-(benzimidazol-2-yl)-lethanol namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla při55 pravena ve formě bělavé pevné látky:

-64CZ 299076 B6

MS (ES) m/e 394,4 (M + H)⁺. 416,3 (M + Na)⁺.

b) (±)-8-[2-(Benzimidazol-2-yl)-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^t5 octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-8-[2-(benzimidazol2-yl)-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin—4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3[2-pyridylamino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, ío sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílého prášku:

MS (ES) m/e 380,4 (M + H)⁺, 402,3 (M + Na)⁺.

Příklad 10

Příprava (±)-8-[2-(4-aza-2-benzimidazolyl)ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

Sloučenina z názvu je obecně připravena způsobem, detailně popsaném v Příkladu 9.

Příklad 11

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1H-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)2.3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu (252,3 mg, 1,5 mmol) a diethylazodikarboxylátu (0,24 ml, 1,5 mmol) vbezvodém DMF (7,5 ml) byl přidán pomalu po kapkách v průběhu 3 až 4 minut do roztoku methyl (±)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (248,5 mg, 0,75 mmol) a trifenylfosfinu (413,1 mg,

1,58 mmol) vbezvodém DMF (7,5 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 17 hodin byla reakční směs koncentrována a reziduum bylo znovu koncentrováno z xylenů/CHCl₃. Silikagelová chromatografíe (gradient: EtOAc (500 ml) potom 5% MeOH/CHCfi) poskytla sloučeninu z názvu (253,6 mg, 70%) ve formě bělavé pěny:

‘H NMR (250, CDCfi) δ 8,11 (dd, J= 6,4, 14 Hz, 1 H), 7,10- 7,23 (m, 1 H), 6,93 - 7,10 (m, 2 H), 6,81 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1 H), 6,45 - 6,70 (m, 3 H), 5,34 (d, J = 16,7 Hz, 1 H), 3,75 - 4,30 (m, 6 H), 3,71 (s, 3 H), 3,51 (q, J= 6,4 Hz, 2 H), 2,80- 3,15 (m, 3 H), 2,46 (dd, J = 16,8, 5,5 Hz, 1 H), 2,07 - 2,28 (m, 2 H);

MS (ES) m/e 482,2 (M + N)⁺.

b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3

4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepirM-acetát

Směs methyl (±)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (253,6 mg, 0,53 mmol), cyklohexenu (0,54 ml, 5,3 mmol), paládiové černi (11,3 mg, 0,11 mmol) a izopropanolu (5,3 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 0,5 hodin bylo přidáno 10% Pd/C (28,2 mg, 0,03 mmol) a po uplynutí 14,5 hodin byla přidána Pd čerň (11,3 mg, 0,11 mmol) a cyklohexen (0,27 ml, 2,65 mmol). Po uplynutí dalších 48 hodin byla reakční směs za horka filtrována přes

-65CZ 299076 B6 celit® a filtrační vrstva byla promývána horkou směsí 1:1 MeOH/CHCf. Koncentrace a rekoncentrace z xylenů zanechala žlutý olej. Silikagelová chromatografie (5% MeOH v 1:1 EtOAc/CHCa) poskytla sloučeninu z názvu (194,0 mg, 79%) ve formě světle žlutého oleje:

TLC (5 % MeOH v 1:1 EtOAc/CHCl₃) R^f 0,53;

*H NMR (250, CDC1₃) δ 8,08 (dd, J = 5,0, 1,0 Hz, 1 H), 7,37 - 7,48 (m, 1 H), 7,02 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,79 (dd, J = 8 ,4 2,5 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,52 - 6,62 (m, 1 H), 6,40 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,34 (d, J = 16,6 Hz, 1 H), 4,60 - 4,80 (m, 1 H), 3,75 - 4,30 (m, 6 H), 3,71 ío (s, 3 H), 3,50 (q, J= 6,4 Hz, 2 H), 2,80- 3,15 (m, 3 H), 2,46 (dd, J= 16,8, 5,4 Hz, 1 H),

2,00-2,25 (m, 2H);

MS (ES) m/e 466 (M + H)⁺.

c) (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

1,0 N LiOH (0,44 ml, 0,44 mmol) byl přidán do roztoku methyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-lpropyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (159,5 mg, 0,34 mmol) v THF (1,7 ml) a H₂O (1,3 ml) při teplotě zpětného toku. Žlutá kalná reakční směs se stala homogenní v průběhu 10 minut. Po uplynutí 24 hodin byla reakční směs koncentrována do sucha a žluté reziduum bylo rozpuštěno v H₂O (4 ml). Roztok byl filtrován potom byl opatrně neutralizován (pH 7) pomocí 1,0 N HCI. Precipitát byl shromážděn, promýván množstvím H₂O a sušen za vysokého vakua při teplotě 40 až 45 °C a tím se získala sloučenina z názvu (130,0 mg, 83%) ve formě bělavé pevné látky:

HPLC (PRP-1®, 25% CH₃CN/Li₂O obsahující 0,1% TFA) k' = 3,1;

’H NMR (400 MHz, DMSO-4₆) δ 7,91 - 8,00 (m, 1 H), 7,28 - 7,40 (m, 1 H), 7,02 (d, J = 9,2 Hz,

1 H ), 6,76 - 6,87 (m, 2 H), 6,51 - 6,60 (m, 1 H), 6,39 - 6,50 (m, 2 H), 5,30 (d, J = 16,6 Hz, 1 H),

4,10 - 4,30 (m, 3 H), 4,02 (t, J = 6,3 Hz, 1 H), 3,70 - 3,82 (m, 1 H), 3,20 - 3,45 (m, 2 H, částečně zakryto reziduálním signálem rozpouštědla), 2,99 (dd, 1 H), 2,59 - 2,74 (m, 2 H), 2,39 (dd, J = 16,9, 4,8 Hz, 1 H), 1,90 - 2,03 (m, 2 H);

MS (ES) m/e 452 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂2H₂4F₃N₃O₄.0,5 H₂O: C, 57,39; H, 5,47; N, 9,13.

Nalezeno: C, 57,39; H, 5,18; N, 9,00.

Příklad 12

Příprava (±)-[3-(4,6-dimethylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,545 tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-[3-(4,6-dimethyl-l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepinH-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]H,6-dimethylpyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-I - propyl)amino]pyridin-Noxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 442,3 (M + H)⁺.

-66CZ 299076 B6

b) Methyl (±)-8-[3-(4,6-dimethylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-ben zazepi n-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(b), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-(4,6-dimethyl5 l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bledě žluté pevné látky:

io MS (ES) m/e 426,3 (M + H)⁺.

c) (±)-8-[3-(4,6-Dimethylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c) pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[(4,6-dimethylpyridin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 412,2 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C23H29N3O4.0,5 HCl. 0,25 H₂O: C, 63,62; H, 6,96; N, 9,68.

Nalezeno: C, 63,62; H, 6,96; N, 9,69.

Příklad 13

Příprava (±)-8-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-l -ethoxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H2-benzazepín^l-octová kyselina

a) Methyl (±)-8-[2-(2-aminothiazoM-yl)-l-ethoxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepi n-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-(2-aminothiazoM-yl)ethanol (WO 95/32710) namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 390 (M + H)⁺.

b) (±)-8-[2-(2-Aminothiazol-4-yl)-l-ethoxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-8-[2-(2-aminothiazol^4—yl)—1—ethoxy]—2—methyl—3—oxo-2,3,4,5—tetrahydro—1H—2—benzazepin—4—acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino-l-propyloxy)-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 376 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₁₈H₂₁N₃O₄S . 1,3 CF₃CO₂H . 0,36 H₂O: C, 46,62; H, 4,38; N, 7,93. Nalezeno: C, 46,45; H, 4,57; H, 4,57; N, 8,27.

-67CZ 299076 B6

Příklad 14

Příprava (±)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-8-[3-(4-nitro-l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyl)10 amino]-4-nitropyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxide a byl použit methyl (±)-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin—4-acetátu, byla připravena sloučenina z názvu:

MS (ES) m/e 459 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(b), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-(4-nitro-loxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetát namísto (±)-8-[3-(4-nitro-N-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 413 (M + H)⁺.

b) (±)-8-[3-(4-Aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 399 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂iH₂₆N₄O₄. 1,5 CF₃CO₂H . 0,125 H₂O: C 50,62; H, 4,91; N, 9,83.

Nalezeno: C, 50,63; hodin 5,26; N, 9,90.

Příklad 15

Příprava (±)-8-[3-(Pyrimidin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-245 benzazepin-4-octová kyselina

Směs methyl (±)-8-[3-(pyrimidin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin-4-acetátu (0,071 g, 0,18 mmol) a monohydrátu hydroxidu lithného (0,009 g, 2 mmol) v THF (5 ml) a H₂O (2 ml) byla míchána při teplotě okolí po dobu 18 hodin, potom byla koncentrována. Reziduum bylo rozpuštěno v H₂O a pH bylo upraveno na 4 pomocí 3 N HCI. Výsledná pevná látka byla shromážděna filtrací a sušena a tím se získala sloučenina z názvu (0,05 g, 73%) ve formě bílé pevné látky:

MS m/e 371,4 (M + H)⁺.

-68CZ 299076 B6

Analýza: Vypočteno pro C19H22N4O4.0,5 H₂O: C, 60,15; H, 6,11; N, 14,77.

Nalezeno: C, 60-14; H, 6,06; N, 14,71.

Příklad 16

Příprava (R)-8-[3-(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H2-benzazepin^l-octová kyselina

a) Methyl (R)-8-[3-[2-(4-nitro-l-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^t-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyl)15 amino]-4-nitropyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě oranžové pěny:

MS (ES) m/e 445,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (R)-8-[3-(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(b), pouze byl použit methyl (R)-8-[3-[2-(4-aminoN-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES): m/e 399,4 (M + H)⁺.

c) (R)-8-[3-[(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin^t-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (R)-8-[3-[(4-amino-2pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bělavé pevné látky:

[a]_D ²³ +74,97° (c 1,45, MeOH);

MS (ES) m/e 385,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C20H24N4O4 . HC1 . 1,5 H₂O: C, 53,63; H, 6,30; N, 12,50.

Nalezeno: C, 53,87; H, 6,13; N, 12,42.

Příklad 17

Příprava (S)-8-[3-[(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H50 2-benzazepin^l-octová kyselina

a) Methyl (S)-8-[3-(4-nitro-N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin^l-acetát

-69CZ 299076 B6

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]^l-nitropyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě oranžové pěny:

MS (ES) m/e 445,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (S)-8-[3-[(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (b), pouze byl použit methyl (S)-8-[3-[2-(4-aminoN-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetát namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin^l-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 399,4 (M + H)⁺.

c) (S)-8-[3-[(4-amino-2-pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin^J-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (S)-8-[3-[(4-amino-2pyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bělavé pevné látky:

[a]_D ²³ - 77,5° (c 1,45, MeOH);

MS (ES) m/e 385,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂oH₂₄N₄0₄. 1,125 H₂O: C, 59,36; H, 6,54; N, 13,84.

Nalezeno: C, 59,31; H, 6,74; N, 13,73.

Příklad 18

Příprava ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepi n-4-acetátu

a) Ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH40 2-benzazepin-4-acetát

Roztok (±)-8-[3-[(4—amino-4-pyridyl)amino]-l -propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin-4-octové kyseliny (0,27 g, 0,7 mmol) a 4 M HC1 v dioxanu (0,2 ml, 8 mmol) v ethanolu (10 ml) byl zahříván na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 72 hodin byla reakční směs koncentrována a reziduum bylo rozděleno mezi EtOAc a vodný K₂CO₃. Organická fáze byla promývána solankou, sušena (MgSO₄). a koncentrována. Reziduum bylo rozpuštěno v toluenu (5 ml) a triethylaminu (0,35 ml, 2,5 mmol) a výsledný roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin byla reakční směs koncentrována za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu (0,20 g, 69%) ve formě snědé pěny:

MS (ES) m/e 413,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₂H₂₈N₄O₄. 0,25 H₂O: C, 63,37; H, 6,89; N, 13,44.

Nalezeno: C, 63,32; H, 7,17; N, 13,05.

-70CZ 299076 B6

Příklad 19

Příprava (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octové kyseliny

a) Příprava methyl (±)-8-[3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-acetátu

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylio amino)-l-propanol namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu a byl použit methyl (±j-8-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 500,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (±ý-8-[3-amino-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Směs methyl (±)-8-[3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetátu (1,4 g, 3 mmol), 10% paládia na aktivním uhlí (0,55 g, 0,6 mmol) a EtOH (20 ml) byla míchána při teplotě zpětného toku pod atmosférou vodíku. Po uplynutí 18 hodin byla směs filtrována a filtrát byl koncentrován a tím se získala sloučenina z názvu (0,89 g, 99%) ve formě snědé pevné látky:

MS (ES) m/e 321,4 (M + H)⁺.

c) Methyl (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Směs methyl (±)-8-[3-amino-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (0,3 g, 1 mmol), 2-methylthioimidazolinu (0,46 g, 2 mmol), diizopropylethylaminu (0,42 ml, 2 mmol) a dimethylacetamidu (3 ml) byla zahřívána na teplotu 100 °C pod argonovou atmosférou. Po uplynutí 2 hodin byla reakční směs koncentrována za sníženého tlaku a reziduum bylo rozděleno mezi CHC1₃ a H₂O. Organická fáze byla sušena (MgSO₄) a koncentrována a reziduum bylo čištěno preparativní HPLC a tím se získala sloučenina z názvu (0,24 g, 51%) ve formě žlutého oleje:

MS (ES) m/e 389,4 (M + H)⁺.

d) (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydrolH-2-benzazepin-4-octová kyselina

Methyl (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetra45 hydro-1 H-2-benzazepin^l-acetát byl saponifikován způsobem podle Příkladu l(c). Čištění preparativní HPLC poskytlo sloučeninu z názvu ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 375,4 (M + H)⁺.

Analýza vypočteno pro: C₂₁H₂₆N₄O₄. 1,96 CF₃CO₂H: C, 46,08; H, 4,73; N, 9,39;

Nalezeno: C, 46,37; H, 4,53; N, 9,01.

-71 CZ 299076 B6

Příklad 20

Příprava (±)-8-[3-[(4,5,6,7-tetrahydro-lH-2-diazepin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-8-[3-[(2-diazepin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 19(c), pouze byl použit 2-methylthio-l ,3-diazepin ío namísto 2-methylthioimidazolinu, byla připravena sloučenina z názvu:

MS (ES) m/e 417,4 (M + H)⁺.

b) (±)-8-[3-[(2-diazepin-2-yl)amino]-1 -propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro15 1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 19(d), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[(2-diazepin2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetra20 hydro-1 H-2-benzazepin^l-acetátu, sloučeninu z názvu byla připravena:

MS (ES) m/e 403,4 (M + H)⁺.

Příklad 21

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-(4-methylpyridm-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)2.3.4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(4-methyl-l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(a), pouze byl použit 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-N-oxid namísto 2-[(3-hydroxy-1 -propyl)amino]pyridin-N-oxide a byl použit methyl (±)-3-oxo-8-hydroxy-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4acetátu, byla připravena sloučenina z názvu:

MS (ES) m/e 496,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^t-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(b), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-(445 methyl-l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo2.3.4.5- tetrahydro-ÍH-2-benzazepin-4-acetátu, byla připravena sloučenina z názvu:

MS (ES) m/e 480,2 (M + H)⁺.

c) (±)-3-oxo-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-(455 methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-72CZ 299076 B6 benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-acetátu, byla připravena sloučenina z názvu:

MS (ES) m/e 466,2 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₃H₂₆F₃N₃O4.0,5 H₂O: C, 58,22; H, 5,74; N, 8,86.

Nalezeno: C, 58,54; H, 5,58; N, 8,64.

Příklad 22

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]2.3.4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octové kyseliny (a) Methyl (±)-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-3oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(b), pouze byla použita methyl (±)-8-[3-[N-(l-oxo20 pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3oxo-2,3,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 484,4 (M + H)⁺.

(b) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbony l)amino]-l -propy loxy]-2,3,4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (c), pouze byla použita methyl (±)-8-[3-[N(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin^l-octová kyselina namísto ethyl (±)-3-oxo-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—1-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílého prášku:

MS (ES) m/e 470,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C25H3oNaN₃0₆.3,25 H₂O: C, 54,59; H, 6,69; N, 7,64.

Nalezeno: C, 54,47; H, 6,32; N, 7,95.

Příklad 23

Příprava (1 )-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l -propyloxy]-3oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina (a) (±)-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-3-oxo2.3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina 50

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (c), potom byl použit methyl (±)-8-[3-[N-(loxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-í-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo2.3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě 55 bílého prášku:

-73CZ 299076 B6 ’Η NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,6 - 8,3 (m, 8 H), 3,7 - 4,6 (m, 3 H), 3,3 - 3,6 (m, 5 H), 1,8-3,0 (m, 5 H), 1,6 (s, 6 H), 1,3 (s, 3 H);

MS (ES) m/e 486,4 (M + H)⁺.

Příklad 24 io Příprava (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-d)-N-(terc-butoxykarbonyl)ammo]-l-propyloxy]-2(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina (a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-lpropyloxy]-2-(4-trifIuormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok methyl (±)-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octové kyseliny (0,4 g, 0,8 mmol) v DMF (5 ml) byl ochlazen na teplotu -20 °C (lázeň CCl₄/suchý led) a byl přidán po kapkách (TMS)₂NLi (1,0 M roztok v THF, 0,9 ml, 0,9 mmol). Po uplynutí 10 minut byl přidán roztok 4-trifluor20 methylbenzylbromidu (0,211 g, 0,88 mmol) v DMF (0,5 ml). Roztok byl míchán pod argonovou atmosférou při teplotě -20 °C po dobu 10 minut a potom při teplotě zpětného toku po dobu 18 hodin. Roztok byl koncentrován a reziduum bylo vyjmuto v EtOAc a promýváno postupně 5% NaHCO₃ (2 χ), H₂O (1 x), 5% kyselinou citrónovou (2 χ), H₂O (1 x) a solankou (1 x). EtOAc vrstva byla sušena (MgSO₄) a koncentrována a tím se získala sloučenina z názvu (0,42 g, 80%):

MS (ES) m/e 658,3 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (b), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(loxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)2.3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z náz35 vu (0,321 g, 78%) byla připravena ve formě čirého oleje:

MS (ES) m/e 642,3 (c) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(440 trifluormethylbenzyl)—2,3,4,5-tetrahydro— 1H—2—benzazepin-4—octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-[N-(2-pyridylamino)-l45 propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bělavé pevné látky:

MS (ES) m/e 628,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₃₃H₃₆F₃N₃O₆.0,5 H₂O: C, 62,25; H, 5,86; N, 6,60.

Nalezeno: C, 62,01; H, 5,92; N, 6,81.

-74CZ 299076 B6

Příklad 25

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina (a) (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-tri10 fluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina (0,158 g,

0,25 mmol) byla zpracovávána 4 M HC1 v dioxanu (3 ml) při teplotě zpětného toku po dobu 1 hodiny, potom byl roztok koncentrován. ODS chromatografie (gradient 5-M% CH₃CN/Li₂O obsahující 0,1% TFA v průběhu 1 hodiny), koncentrace a lyofilizace poskytla sloučeninu z názvu (0,117 g, 82%):

MS (ES) m/e 528,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C28H28N3O4 . 1 CF₃CO₂H . 1,5 H₂O: C, 53,89; H, 4,82; N, 6,28.

Nalezeno: C, 53,55; H, 4,55; N, 6,04.

Příklad 26

Příprava (±)-2-methyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina (a) Methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-acetátu (1,5 g, 3,8 mmol) v DMF (10 ml) byl ochlazen na teplotu -20 °C po argonovou atmosférou a byl přidán po kapkách (TMS)₂NLi (1,0 M roztok v THF, 8 ml, 8 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě -20 °C po dobu 30 minut, potom byl přidán CH₃I (0,5 ml,

7,6 mmol). Roztok byl míchán při teplotě zpětného toku po dobu 18 hodin, potom byl koncentrován. Silikagelová chromatografie (10% MeOH/CH₂Cl₂) poskytla sloučeninu z názvu (1 g, 62%): MS (ES) m/e 428,4 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-2-methyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]2.3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin—4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (b), pouze byl použit methyl (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-445 acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin^4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,7 g, 73%):

MS (ES) m/e 412,4 (M + H)⁺.

⁵⁰ (c) (±)-2-Methyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-2-methyl-3-oxo-8[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin55 4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-75 CZ 299076 B6

H-2-benzazepin^l-acetátu, byla připravena surová sloučenina z názvu. Čištění pomocí ODS chromatografie (5 až 60% CH₃CN/H₂O obsahující 0,1% TFA v průběhu 1 hodiny). Koncentrace a lyofilizace poskytla sloučeninu z názvu:

MS (ES) m/e 398,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro 0₂₂Η₂₇Ν₃0₄.1,5 CF₃CO₂H . 0,25 H₂O: C, 52,40; H, 5,10; N, 7,33.

Nalezeno: C, 52,09; H, 5,26; N, 7,20.

Příklad 27

Příprava (±)-2-benzyl-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro15 1 H-2-benzazepin—4-octová kyselina (a) Methyl (±)-2-benzyl-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(a), pouze byl použit benzyl bromid namísto

4-trifluormethylbenzylbromidu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,105 g, 20%):

MS (ES) m/e 590,4 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-2-benzyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-lpropyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b), pouze byl použit methyl (±)-2-benzyl-3-oxo8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetra30 hydro-1 H-2-benzazepin^4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(tercbutoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trÍfluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,045 g, 44%):

MS (ES) m/e 574,4 (M + H)⁺.

(c) (±)-2-Benzyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 1 (c), pouze byl použit methyl (±)-2-benzyl-3-oxo-840 [3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,044 g, kvantitativně):

MS (ES) m/e 560,3 (M + H)⁺.

(d) (±)-2-Benzyl-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 25(a) pouze byla použita (±)-2-benzyl-3-oxo-8-[3[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octové kyseliny, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,014 g, 40%):

-76CZ 299076 B6

MS (ES) m/e 460,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C27H29N3O4. CF₃CO₂H . 2 H₂O: C, 57,14; H, 5,62; N, 6,89.

Nalezeno: C, 57,44; H, 5,32; N, 6,87.

Příklad 28

Příprava (±)-2-(karboxymethyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4_octová kyselina (a) Methyl (±)-2-(terc-butoxykarbonylmethyl)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(a) pouze byl použit terc-butyl bromacetát namísto 4-trifluormethylbenzylbromidu, tím byla připravena sloučenina z názvu (1,0 g, 80%):

MS (ES) m/e 614,4 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-2-(terc-butoxykarbonylmethyl)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(tercbutoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b) pouze byl použit methyl (±)-2-(terc-butoxy25 karbonylmethyl)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-lpropyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,72 g, 77%):

MS (ES) m/e 598,4 (M + H)⁺.

(c) Methyl (±)-2-(karboxymethyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 25(a) pouze byl použit methyl (±)-2-(terc-butoxykarbonylmethyl)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetra40 hydro—1H—2—benzazepin-4—octové kyseliny, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,57 g, kvantitativně):

MS (ES) m/e 442,3 (M + H)⁺.

(d) (±)-2-(Karboxymethyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-2-(karboxymethyl)3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,30 g, 56%):

MS (ES) m/e 428,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂2H₂5N₃O₆.2 H₂O: C, 57,01; H, 6,31; N, 9,07.

-ΠCZ 299076 B6

Nalezeno: C, 57,27; H, 6,24; N, 8,86.

Příklad 29

Příprava (±)-2-(4-aminobenzyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina ío (a) Methyl (±)-2-(4-nitrobenzyl)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl )amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(a), pouze byl použit 4-nitrobenzylbromid namísto

4-trifluormethylbenzylbromidu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,284 g, 69%):

MS (ES) m/e 635,3 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-2-(4-aminobenzyl)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b) pouze byl použit methyl (±)-2-(4-nitrobenzyl)3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5— tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-( l-oxopyridin-2-yl)-N(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro25 1 H-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,104 g, 40%):

MS (ES) m/e 589,3 (M + H)⁺.

(c) (±)-2-(4-Aminobenzyl)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]30 1 -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-2-(4-aminobenzyl)3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]35 3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,08 g, 79%):

MS (ES) m/e 575,4 (M + H)⁺.

(d) (±)-2-(4-Aminobenzyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-yl)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 25(a) pouze byla použita (±)-2-(4-aminobenzyl)-3oxo_8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-2,3,4,545 tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-octová kyselina namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)N-terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydrolH-2-benzazepin-4-octové kyseliny, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,029 g, 44%);

MS (ES) m/e 475,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₇H₃₀N₄O₄ . 2 CF₃CO₂H . 1,5 H₂O: C, 51,03; H, 4,83; N, 7,68. Nalezeno: C, 50,92; H, 4,78; N, 7,64.

-78CZ 299076 B6

Příklad 30

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(benzoyl)amino]-1 -propy loxy]-2-(4_trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-octová kyselina (a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-( 1 -oxo-pyridin-2-yl)amino-l -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupoval se způsobem podle Příkladu 25(a), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(lio oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)2.3.4.5- tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-Nterc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lI-l2-benzazepinH-octové kyseliny, tím byla připravena sloučenina z názvu (1,9 g, 90%):

MS (ES) m/e 558,3 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-yl)amino-l -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)2.3.4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-(loxo-pyridin-2-yl)amino-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepinH-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,40 g, 88%):

MS (ES) m/e 542,3 (M + H)⁺.

(c) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(benzoyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Benzoylchlorid (0,094 ml, 0,8 mmol) byl přidán po kapkách do roztoku methyl (±)-3-oxo-8-[3(pyridin-2-yl)amino-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (0,4 g, 0,74 mmol) a diizopropylethylaminu (0,5 ml, 2,9 mmol) v CH2CI2 (10 ml). Po uplynutí 18 hodin byl roztok koncentrován a reziduum bylo čištěno silikagelovou chromatografií (1:1 EtOAc/hexan) a tím se získala sloučenina z názvu (0,293 g, 61 %):

MS (ES) m/e 646,2 (M + H)⁺.

(d) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(benzoyl)amino]_l-propyloxy]-2-(4-trifluor40 methylbenzyl)—2,3,4,5—tetrahydro—1H—2—benzazepin—4—octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(pyridin-2-yl)-N-(benzoyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-3-oxo-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyl45 oxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin—4-acetátu, byla připravena surová sloučenina z názvu. Čištění ODS chromatografií (10-80% CH₃CN/Li₂O obsahující 0,1% TFA v průběhu 1 hodiny). Koncentrace a lyofilizace poskytla sloučeninu z názvu (0,025 g, 10%):

MS (ES) m/e 632,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₃₅H32F₃N₃O₅.0,85 CF₃CO₂H: C, 60,50; H, 4,54; N, 5,74.

Nalezeno: C, M.22; H, 4,35; N, 5,77.

-79CZ 299076 B6

Příklad 31

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butylacetyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepan^4-octová kyselina (a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butylacetyl)amino]-l -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Roztok terc-butyloctové kyseliny (0,228 ml, 1,2 mmol) v CH2CI2 (10 ml) byl zpracován oxalyl10 chloridem (1 ml, 11,4 mmol), následovaným DMF (0,0005 ml, 0,06 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě zpětného toku po dobu 1,5 hodiny, potom byla koncentrována. Reziduum bylo vyjmuto v CH2CI2 (5 ml) a bylo přidáno po kapkách do roztoku methyl (±)-3-oxo-8-[3[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydrolH-2-benzazepin-4-acetátu (0,35 g, 0,6 mmol) a Et₃N (0,5 ml, 2,4 mmol) v CH₂C1₂ (10 ml). Po uplynutí 18 hodin byl roztok promýván postupně H₂O (1 x), 5% NaHCO₃ (2 χ), H₂O (1 x), 5% kyselinou citrónovou (2 χ), H₂O (1 x) a nasyceným NaCl (1 x). Organická vrstva byla koncentrována a tím se získala sloučenina z názvu (0,4 g, 97%):

MS (ES) m/e 656,4 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butylacetyl)amino]-l -propyloxy]-2(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N25 (1 -oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butylacetyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,22 g, 56%):

MS (ES) m/e 642,3 (M + H)⁺.

(c) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butylacetyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(pyridm-2-yl)-N-(terc-butoylacetyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-8-[3-(2-pyridylamino]-l-propyloxy]3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát, byla připravena surová sloučenina z názvu. Čištění ODS chromatografii (10 až 80% CH₃CN/Li₂O obsahující 0,1% TFA v průběhu

1 hodiny), koncentrace a lyofilizace poskytla sloučeninu z názvu (0,022 g, 10 %):

MS (ES) m/e 626,4 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₃₄H_3gF₃N₃O₅. 1 H₂O: C, 63,44; H, 6,26; N, 6,53.

Nalezeno: C, 63,24; H, 5,96; N, 6,39.

Příklad 32

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina (a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l55 propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

-80CZ 299076 B6

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 30(c), pouze byl použit izobutylchlormravenčan namísto benzoylchloridu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,47 g, 80%):

MS (ES) m/e 658,3 (M + H)⁺.

(b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l -propyloxy]2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát ío Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(1 -oxo-pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1-oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin^t-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,4 g, 63%):

MS (ES) m/e 642,3 (M + H)⁺.

(c) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu l(c), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto ethyl (±)-3-oxo-8-[3-(2-pyridylamino)-lpropyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, byla připravena surová sloučenina z názvu. Čištění ODS chromatografií (10 až 80% CH₃CN/H₂O obsahující 0,1% TFA v průběhu 1 hodiny), koncentrace a lyofilizace poskytla sloučeninu z názvu (0,008g, 20%):

MS (ES) m/e 628,3 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₃₃H₃₆F₃N₃O6.0,25 CF₃CO₂H . 0,5 H₂O: C, M.49; H, 5,64; N,6,32.

Nalezeno: C, 60,78; H, 5,50; N, 6,28.

Příklad 33

Příprava (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octové kyseliny (a) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-lpropyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu I (a), pouze byl použit methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo2.3.4.5- tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát namísto (±)-8-hydroxy-3-oxo-2,3,4,5-tetra45 hydro-1 H-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (3,0 g, 83%):

MS (ES) m/e 500,3 (M + H)⁺.

(b) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-[N-(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l50 propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(a), pouze byl použit methyl (S)-3-oxo-8-[3-[N(l-oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin-4-acetát namísto methyl-(±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxo-pyridin-2-yl)-N-(terc-81 CZ 299076 B6 butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (2,3 g, 72%):

MS (ES) m/e 658,2 (M + H)⁺.

(c) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(b), pouze byl použit methyl (S)-3-oxo-8-[3-[Nío (1 -oxo-pyridin-2-yl)-N-{terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5— tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (1,1 g, 50%):

MS (ES) m/e 642,1 (M + H)⁺.

(d) (S)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 24(c) pouze byl použit methyl (S)-3-oxo-8-[3-[N(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin—4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,8 g, 60%):

MS (ES) m/e 628,1 (M + H)⁺.

(e) (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-yl-amino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 25(a) pouze byla použita (S)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l-octová kyselina namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro35 lH-2-benzazepin-4-octové kyseliny, byla připravena surová sloučenina z názvu. Čištění ODS chromatografií (30% CH₃CN/Li₂O obsahující 0,1% TFA v průběhu 1 hodiny), koncentrace a lyofilizace dala sloučenina z názvu (0,657 g, 72%) sloučenina:

[a]_L)^2° (c 1,0, MeOH);

MS (ES) m/e 528,1 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₈H₂₈ F₃N₃O₄.2 CF₃CO₂H . 3,75 H₂O: C, 46,69; H, 4,59; N, 5,10.

Nalezeno: C, 46,47; H, 4,58; N, 5,48.

Příklad 34

Příprava methyl (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin-4-acetátu (a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2benzazepin^l-acetát

-82CZ 299076 B6

Postupovalo se podle procedur, uvedených v Příkladu 1 (b), pouze byl použit izopropanol namísto ethanolu, tím byla připravena sloučenina z názvu (0,35 g, 76%):

MS (ES) m/e 384,4 (M + H)⁺.

Příklad 35

Příprava (S)-3-oxo-8-[3-(l,4,5,6-tetrahydropyrimid-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluorío methyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octové kyseliny

a) Methyl (S)-8-[3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Do methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (0,14 g, 0,34 mmol) a Ph₃P (0,13 g, 0,50 mmol) v CH₂C1₂ (2 ml) při teplotě 0 °C byl přidán po kapkách roztok 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propanolu (0,13 g, 0,51 mmol) a diethylazodikarboxylátu (0,08 ml, 0,50 ml). Když bylo přidávání ukončeno, ledová lázeň byla odstraněna a reakční směs byla míchána při teplotě zpětného toku. Po uplynutí

18 hodin bylo rozpouštědlo odstraněno a produkt byl izolován mžikovou chromatografií na silikagelu (100% CHC1₃ to 5% MeOH/CHCl₃) a tím se získala sloučenina z názvu (0,12 g) ve formě čirého oleje.

’H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 8,18 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,65 (m, 1H), 7,50 (m, 5H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,23 (m, 3H), 4,95 (d, J= 16,4 Hz, 2H), 4,50 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,95 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,15-2,90 (m, 3H), 2,50 (dd, J = 19,2, 5,5 Hz, 1H), 1,95 (m, 2H).

(b) Methyl (S)-8-(3-amino-l-propyloxy)-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetra30 hydro-1 H-2-benzazepin^l-acetát

Do methyl (S)-8-[3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetátu (0,12 g, 0,19 mmol) v MeOH (2 ml) bylo přidáno 10% Pd/C (20 mg). Reakční nádoba byla propláchnuta vodíkem a potom připevněna k balónku, obsahujícímu vodík. Po uplynutí 4,5 hodin byl vodík odsát a katalyzátor byl odstraněn filtrací přes celit®. Odstranění rozpouštědla poskytlo sloučeninu z názvu (0,09 g) ve formě bledě žlutého rezidua. Tento materiál byl používán bez dalšího čištění.

MS (ES) m/e 465,3 (M + H)⁺.

c) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-(pyridimin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro_lH-2-benzazepin^l-acetát

Roztok methyl (S)-8-(3-amino-l-propyloxy)-3-oxo-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetra45 hydro-1 H-2-benzazepin-4-acetátu (0,09 g, 0,19 mmol), 2-brompyridinu (0,09 g, 0,57 mmol) a diizopropylethylaminu (0,17 ml, 0,98 mmol) v DMF (2 ml) byl zahříván při teplotě 80 °C po dobu 18 hodin. Reakční směs byla ponechána ochladit se na teplotu zpětného toku a byla koncentrována a tím se získalo žluté reziduum. Mžiková chromatografie na silikagelu (2%, MeOH/EtOAc) poskytla sloučeninu z názvu (42 mg) ve formě čirého oleje.

MS (ES) m/e 543,1 (M + H)⁺.

d) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimid-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-acetát

-83CZ 299076 B6

Parrovo hydrogenační zařízení bylo naplněno methyl (S)-3-oxo-8-[3-(pyridimin-2-ylamino)l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátem (42 mg, 0,08 mmol), ledovou octovou kyselinou (2 ml), koncentrovaným HCl (0,2 ml) a 10% Pd/C (10 mg). Směs byla protřepávána pod vodíkovou atmosférou (40 psi) po dobu 5 hodin, potom byl vodík odsát a katalyzátor byl odstraněn filtrací přes celit®. Odpaření rozpouštědel poskytla surovou sloučeninu z názvu (52 mg) ve formě tmavého rezidua. Reziduum bylo používáno bez dalšího čištění.

MS (ES) m/e 547,2 (M + H)⁺.

e) (S)-3-oxo-8-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimid-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

Do surového methyl (S)-3-oxo-8-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimid-2-ylamino)-l-propyloxy]-215 [4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu z Příkladu 35d v

EtOH (1 ml) byl přidán 1 N NaOH (0,25 ml, 0,25 mmol). Po ukončení míchání při teplotě zpětného toku po dobu 8,5 hodin byla reakce ukončena přidáním 1 N HCl (0,25 ml, 0,25 mmol). Odstranění rozpouštědla poskytlo bledě žlutou pevnou látku. Preparativní HPLC s obrácenými fázemi (Hamilton PRP-1®, 30% CH₃CN/Li₂O obsahující 0,1% TFA) poskytla sloučeninu z názvu (18,1 mg) ve formě bílého prášku.

MS (ES) m/e 533,3 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₇H₃₁N₄F₃O₄.2 H₂O . 2 CF₃CO₂H: C, 46,74; H, 4,68; N, 7,03.

Nalezeno: C, 46,34; H, 4,31; N, 6,82.

Příklad 36

Příprava (±)-3-oxo-8-[3-(N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octové kyseliny

a) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxopyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2-[435 (trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 25 (a), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(1 -oxopyridin-2-yl)-N-(terc-butoxykarbonyl)amino]-1 -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^4-acetát namísto (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin40 2—yl)—N—(terč—butoxykarbonyl)amino]-l—propyloxy]—2-(4—trifluormethylbenzyl)—2,3,4,5—tetrahydro—ÍH—2—benzazepin—4—octové kyseliny, byla připravena HCl sůl. Tento materiál byl přeměněn na volnou bázi rozdělením mezi EtOAc a 5% NaHCO₃. EtOAc vrstva byla oddělena a koncentrována a tím se získala sloučenina z názvu (4,1 g, 100%):

MS (ES) m/e 558,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(N-( l-oxopyridin-2-yl)-N-methylamino)-l-propyloxy]-2-(4trifluormethylbenzyI)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 26 (a), pouze byla použita methyl (±)-3-oxo-8-[3-[N(l-oxopyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5tetrahydro-ÍH-2-benzazepin^l-octová kyselina namísto (±)-8-[3-[2-(N-oxopyridyl)amino]l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu (3,0 g, 94%):

-84CZ 299076 B6

MS (ES) m/e 572,3

c) Methyl (±)-3-oxo-8-[3-(N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino)-l -propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 4 (b), pouze byl použit methyl (±)-3-oxo-8-[3-(N-(loxopyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-M-acetát namísto (±)-8-[3-[2-[N-(oxopyridyl)amino]-l-propyloxy]2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^4-acetátu, tím byla připravena sloučeio nina z názvu (0,32 g, M%):

MS (ES) m/e 556,2 (M + H)⁺.

d) (±)-3-oxo-8-[3-(N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluor15 methyl)benzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 4 (c), pouze byl použit methyl(±)-3-oxo-8-[3-(N(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát namísto (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-220 methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu, tím byla připravena sloučenina z názvu 0,02 g, 15%):

MS (ES) m/e 542,1 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₉H₃oN₃0₄F₃. CF₃CO₂H . H₂O; C, 55,28; H, 4,94; N, 6,24.

Nalezeno: C, 55,45; H, 4,68; N, 6,14.

Příklad 37

Příprava (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

a) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin)-2-ylamino-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Do míchaného roztoku methyl (S)-hydroxy-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (19 g, 57,4 mmol) v bezvodém THF (400 ml) a bezvodého DMF (200 ml) pod argonovou atmosférou byl přidán 2-(3-hydroxypropylamino)pyridin N-oxid (11,6 g, 69 mmol) a trifenylfosfin (18,0 g, 69 mmol). Po úplném rozpuštění všech pevných látek (přibližně 30 minut) byla reakční směs ochlazena na teplotu 0 °C v ledové lázni a byl přidán stříkačkou diizopropyl azodikarboxylát (14,3 ml, 69 mmol). Reakční směs byla ponechána zahřát se pomalu na teplotu zpětného toku a byla míchána po dobu 18 hodin. Koncentrace a mžiková chromato45 grafie na silikagelu (8:2:1 CHCl₃/EtOAc/EtOH) poskytla sloučeninu z názvu (20,83 g, 75%) ve formě pevné pěny. Dodatečných 5,73 g produkt mohlo být získáno recyklací získaného výchozího materiálu výše uvedené reakce a tím se získalo celkově 26,56 g (96%) sloučeniny z názvu:

MS (ES) m/e 482,2 (M + H)⁺;

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,09 (dd, J = 6,5, 1,3 Hz, IH), 7,29 (t, IH), 7,18 (t, IH), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, IH), 6,84 - 6,79 (m, 3H), 6,59 (t, IH), 5,32 (d, J = 16,5 Hz, IH), 4,28 - 4,14 (m, 2H), 4,16 (d, J = 16,5 Hz, IH), 4,02 (t, 2H), 3,84 (m, IH), 3,58 (s, 3H), 3,40 (dd, 2H), 3,01 (dd, IH), 2,73 (dd, IH), 2,70 (dd, IH), 2,52 (dd, IH), 2,02 (ddd, 2H).

-85CZ 299076 B6

b) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát

Do míchaného roztoku methyl (S)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-25 (2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (26,56 g, 55 mmol) v izopropanolu (500 ml) bylo přidáno 10% paládia na aktivním uhlí (8 g, 7,5 mmol, opatrně navlhčené v izopropanolu pod argonovou atmosférou) a cyklohexanu (55,7 ml, 550 mmol). Reakční směs potom byla zahřívána na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou v olejové lázni, zahřívané na teplotu 90 °C. Po uplynutí 6 hodin bylo přidáno dodatečné množství 10% paládia na ío aktivním uhlí (8 g, 7,5 mmol, opatrně navlhčeného v izopropanolu pod argonovou atmosférou) a cyklohexen (55,7 ml, 550 mmol). Po uplynutí dalších 18 hodin reakční směs byla filtrována za horka přes celit® a filtrační vrstva byla promývána 1:1 směsí MeOH/CHCl₃ (400 ml). Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou chromatografií na silikagelu (95:5 CHCl₃/MeOH) a tím se získala sloučenina z názvu (19,50 g, 76%) ve formě bílé lepivé pěny:

TLC (oxid křemičitý, 5% MeOH v CHC1₃) R^f 0,52;

MS (ES) m/e 466,3 (M + H)⁺.

HNMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,94 (dd, 1H), 7,34 (t, 1H), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,81 (m,2H), 6,54 (t, 1H), 6,46 (m, 2H), 5,31 (d, J= 16,5 Hz, 1H), 4,23 -4,13 (m, 2H), 4,17 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,02 (t, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,36 (m, 2H), 3,01 (dd, 1H), 2,72 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,50 (dd, 1H), 1,96 (ddd, 2H).

c) (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Do míchaného roztoku methyl (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,230 trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (19,50 g, 42 mmol) vdioxanu (150 ml) byl přidán vodný 1 N NaOH (75 ml, 75 mmol). Kalná reakční směs byla míchána při teplotě zpětného toku po dobu 2 hodin, potom výsledný homogenní roztok byl neutralizován vodným 1 N HC1 (75 ml, 75 mmol). Roztok byl koncentrován skoro do sucha rotačním odpařováním pro vyprecipitování produktu. Supematant byl odstraněn usazováním a zbývající gumovitá pevná látka byla znovu rozpuštěna v methanolu. Čirý roztok potom byl znovu koncentrován rotačním odpařováním. Zbývající pevná látka byla rozetřena malým množstvím vody, filtrována a sušena za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu (16,38 g, 86%) ve formě bílého prášku.

TPLC (Halmilton PRP-1 ®, 25 % CH₃CN/H₂O obsahující 0,1 % TFA) k' = 3,1;

[a]_D-112,3°(c, 1,0, MeOH);

MS (ES) m/e 452,3 (M + H)⁺;

H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,95 (dd, 1H), 7,34 (dt, 1H), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,81 (m,2H), 6,58 (t, 1H), 6,47 (m, 2H), 5,30 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,27- 4,13 (m, 2 H), 4,15 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,02 (t, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,37 (m, 2H), 3,00 (dd, 1 H), 2,69 (dd, 1H), 2,65 (dd, 1H), 2,41 (dd, 1H), 1,96 (ddd, 2 H).

Analýza: Vypočteno pro C₂₂H₂₄F₃N₃O₄: C, 58,53; H, 5,36; N, 9,31.

Nalezeno: C, 58,37; H, 5,42; N, 9,20.

-86CZ 299076 B6

Příklad 38

Příprava (R)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octové kyseliny

a) Methyl (R)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^4-acetát

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu (0,33 g, 2 mmol) a diethylazodikarboio xylátu (0,3 ml, 2 mmol) v bezvodém DMF (10 ml) byl přidán pomalu po kapkách do roztoku methyl (R)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4acetátu (0,3 g, 1 mmol) a trifenylfosfinu (0,485 g, 26 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (10 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 17 hodin byla reakční směs koncentrována. Silikagelová chromatografie (gradient: 0,5 až 5% MeOH/CH₂Cl₂) poskytla sloučeninu z názvu (0,35 g, 80%) ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 482,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (R)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,20 4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát

Směs methyl (R)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (0,35 g, 0,7 mmol), cyklohexenu (0,75 ml, 7 mmol), 10% Pd/C (88 mg, 0,07 mmol) a izopropanolu (9 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou. Po uplynutí 18 hodin bylo přidáno dodatečné 10% Pd/C (36 mg, 0,03 mmol) a cyklohexen (0,75 ml, 7 mmol). Po uplynutí 36 hodin byla reakční směs filtrována za horka přes celit® a filtrační vrstva byla promývána horkým EtOAc. Koncentrace zanechala žlutý olej. Silikagelová chromatografie (1 až 5% MeOH v CH₂C1₂) poskytla sloučeninu z názvu (0,26 g, 77%) ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/e 466,2 (M + H)⁺.

c) (R)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro- 1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

LiOH . H₂O (25 mg, 0,6 mmol) byl přidán do roztoku methyl (R)-3-oxo-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4acetátu (0,25 g, 0,54 mmol) v THF (5 ml) a H₂O (2 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin byla reakční směs koncentrována do sucha a reziduum bylo rozpuštěno v H₂O (4 ml).

Roztok byl opatrně upraven na pH přibližně 4 pomocí 3,0 N HC1. Precipitát byl shromážděn a sušen za vysokého vakua při teplotě 40 až 45 °C a tím se získala sloučenina z názvu (0,15 g, 62%) ve formě bělavé pevné látky:

MS (ES) m/e 452,1 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂2H₂4F3N₃O4.0,5 H₂O: C, 57,38; H, 5,47; N, 9,12.

Nalezeno: C, 57,72; H, 5,24; N, 8,92.

Příklad 39

Příprava (S)-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octové kyseliny

-87CZ 299076 B6

a) Methyl (S)-8-[3-(4-methyl-l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-N-oxidu (0,60 g, 3,6 mmol) adi5 ethylazodikarboxylátu (0,6 ml, 3,6 mmol) v bezvodém CH2CI2 (12 ml) byl přidán po kapkách v průběhu 3 až 4 minut do roztoku methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (0,60 g, 1,8 mmol) a trifenylfosfinu (0,95 g, 3,6 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (6 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 17 hodin byla reakční směs koncentrována. Silikagelová chromatografie (gradient: 1 až 5% MeOH/CH₂Cl₂) poskytla sloučeninu z názvu (0,45 g, 49%) ve formě bělavé pěny:

MS (ES) m/e 496,3 (M + H)⁺.

b) Methyl (S)-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluor15 ethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát

Směs methyl (S)-8-[3-(4-methyl-l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^4-acetátu (0,45 g, 0,9 mmol), cyklohexenu (0,93 ml, 9 mmol), 10% Pd/C (0,2 g, 0,18 mmol) a izopropanolu (9 ml) byla zahřívána na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou. Po uplynutí 18 hodin bylo přidáno dodatečné 10% Pd/C (0,2 g, 0,1S mmol) a cyklohexen (0,27 ml, 2,65 mmol). Po uplynutí 36 hodin byla reakční směs filtrována za horka přes celit® a filtrační vrstva byla promývána horkým EtOAc. Koncentrace zanechala žlutý olej. Silikagelová chromatografie (1 až 3% MeOH v CH₂C1₂) poskytla sloučeninu z názvu (0,32 g, 74%) ve formě bílé pěny:

MS (ES) m/e 4S0,2 (M + H)⁺.

c) (S)-8-[3-(4-Methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

LiOH . H₂O (33 mg, 0,79 mmol) byl přidán do roztoku methyl (S)-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l -propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^lacetátu (0,32 g, 0,67 mmol) v THF (5 ml) a H₂O (2 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin byla reakční směs koncentrována do sucha a reziduum bylo rozpuštěno v H₂O (4 ml).

Roztok byl extrahován ethylacetátem, potom byl opatrně upraven na pH = 5 pomocí 3,0 N HCI. Precipitát byl shromážděn a sušen za vysokého vakua při teplotě 40 až 45 °C a tím se získala sloučenina z názvu (0,22 g, 71%) ve formě bělavé pevné látky:

MS (ES) m/e 466,1 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂3H₂₆F₃N3O₄: C, 59,35; H, 5,63, N, 9,03.

Nalezeno: C, 58,97; H, 5,55; N, 8,73.

Příklad 40

Příprava (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)lH-2-benzazapin-4-octová kyselina

a) Methyl (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluroethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát

Postupovalo se způsobem podle Příkladu 37(a), pouze byl použit 6-(methylamino)-2-pyridyl55 ethanol namísto 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxu a byl použit (S)-8-hydroxy-3-88CZ 299076 B6 oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-acetát namísto (R)-8hydroxy-3-oxo-2-(2,2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bezbarvého oleje:

MS (ES) m/z 466,2 (M + H)⁺.

b) (S)-8-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina ío Postupovalo se způsobem podle Příkladu 37(c), pouze byl použit methyl (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetát namísto (R)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy)-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin—4-acetátu, sloučenina z názvu byla připravena ve formě bílé pevné látky:

MS (EX) m/e 452,2 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C22H24F3N3O4 - 0,7 H₂O: C, 56,94; H, 5,52; N, 9,05.

Nalezeno: C, 56,80; H, 5,19; N, 8,85.

Příklad 41

Příprava (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propoxy]-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octové kyseliny

a) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-propyloxy]-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5tetrahydro- 1 H-2-benzazepin-4-acetát

Roztok 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu (336 mg, 2,0 mmol) a diethylazodikarboxylátu (0,3 ml, 2,0 mmol) vbezvodém DMF (10ml) byl přidán do roztoku methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (350 mg, 1,0 mmol) a trifenylfosfinu (525 mg, 2,0 mmol) v bezvodém DMF (10 ml) při teplotě zpětného toku. Po uplynutí 24 hodin směs byla koncentrována. Mžiková silikagelová chromatografie (gradient EtOAc (500 ml) potom 5% MeOH/CHCl₃) poskytla sloučeninu z názvu ve formě oranžové pěny (288 mg, 57%): MS (ES) m/e 504 (M + H)⁺.

b) Methyl (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-1-propyloxy]-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,540 tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-acetát

Směs methyl (S)-3-oxo-8-[3-(l-oxopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin—4-acetátu (288 mg, 0,57 mmol), cyklohexenu (0,6 ml, 5,8 mmol), 10% Pd/C (62 mg, 0,58 mmol) a 2-propanolu (6 ml) byla zahřívána a teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou. Po uplynutí 31 hodin směs byla filtrována za horka před vrstvou celitu^(R), filtrační vrstva byla promývána horkou 1:1 směsí MeOH/CHCl₃ (200 ml) a filtrát byl koncentrován. Mžiková silikagelová chromatografie (5% MeOH/CHCl₃) následovaná druhou mžikovou silikagelovou chromatografií (50% THF/cyklohexan) poskytla sloučeninu z názvu ve formě bělavé pěny (133 mg, 48%): MS (ES) m/e 488 (M + H)⁺.

c) (S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina

-89CZ 299076 B6

1,0 N LiOH (0,3 ml, 0,3 mmolu) byl přidán do roztoku methyl (S)-3-oxo-8-[3-pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (133 mg, 0,27 mmol) v THF (1,5 ml) a H₂O (1,2 ml) při teplotě 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se na teplotu zpětného toku v průběhu 18 hodin. Směs byla promýván Et₂O (2x5 ml) potom byl použit mírný podtlak pro odstranění residuálních organických rozpouštědel. Vodná vrstva byla filtrována přes 0,45 pm Acrodisk filtr, potom byla opatrně okyselena na pH 6 pomocí 10% HC1 v H₂O při teplotě 0 °C. Precipitát byl shromážděn, promýván H₂O a sušen za sníženého tlaku při teplotě 50 °C a tím se získala sloučenina z názvu ve formě bílé pevné látky (62 mg, 48%): MS (ES) m/e 474 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C28H31N3O4.0,75 H₂O: C, 69,05; H, 6,75; N, 8,63.

Nalezeno: C, 69,05; H, 6,66; N, 8,55.

Příklad 42

Příprava (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzezepin-4-octová kyselina

a) Methyl (S)-8-[2-[6-methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzezepin^l-acetát

Diisopropyl azodikarboxylát (0,3 ml, 1,5 mmol) byl přidán do roztoku (S)-8-hydroxy-3-oxo-225 (2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzezepin^í-acetátu (350 mg, 1,0 mmol), 6-(methylamino)-2-pyridylethanolu (228 mg, 1,5 mmol) a trifenylfosfinu (393 mg, 1,5 mmol) v bezvodém THF (10 ml) při teplotě 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se na teplotu zpětného toku v průběhu 72 hodin a potom byla koncentrována. Mžiková silikagelová chromatografie (50% EtOAc/hexany) následovaná druhou mžikovou silikagelovou chromatografií (25% EtOAc/hexany) poskytla sloučeninu z názvu ve formě bílé pěny (250 mg, 51%):

MS (ES) m/e 488 (M + H)⁺.

b) (S)-8-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetra35 hydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina

1,0 N LiOH (0,62 ml, 0,62 mmol) byl přidán do roztoku methyl (S)-8-[2-[6-(methylammo)pyridin-2-yl]ethoxy]-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-acetátu (250 mg, 0,51 mmol) v THF (2,5 ml) a H₂O (1,9 ml) při teplotě 0 °C a reakční směs byla ponechána za míchání při teplotě zpětného toku po dobu 18 hodin. Směs byla promývána H₂O (2x5 ml) a potom byl použit mírný podtlak pro odstranění residuálních organických rozpouštědel. Vodná vrstva byla filtrována přes 0,45 pm Acrodisk filtr a potom byla opatrně okyselena na pH 6 pomocí 10% HC1 v H₂O při teplotě 0 °C. Precipitát byl shromážděn, promýván H₂O a sušen za sníženého tlaku při teplotě 50 °C a tím se získala sloučenina z názvu (134 mg, 55%) ve formě bílé pevné látky:

MS (ES) m/e 474 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₈H₃₁N₃O4. 0,75 H₂O: C 69,05; H, 6,73; N, 8,63.

Nalezeno: C 69,23; H, 6,59; N, 8,55.

-90CZ 299076 B6

Příklad 43

Příprava (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxyl-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-octové kyseliny

a) Methyl (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetát

Do roztoku methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lHio 2-benzazepin-4-acetátu (0,18 g, 0,44 mmol) a Ph₃P (0,23 g, 0,8 mmol) vCH₂C1₂ (2 ml) byl přidán roztok 6-(methylamino)-2-pyridylethanolu (0,13 g, 0,88 mmol) a diethylazodikarboxylátu (0,14 ml, 0,89 mmol) v CH₂C1₂ (2 ml). Po uplynutí 2 dní při teplotě zpětného toku bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Radiální chromatografie na silikagelu (6 ml deska,

5% MeOH/CHCl₃) dala čirý olej (0,63 g), který obsahoval směs sloučeniny z názvu spolu s nez15 reagovaným methyl (S)-8-hydroxy-3-oxo-2-[4-(trifluomethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH2-benzazepin—4-acetátem. Tento materiál byl dále čištěn radiální chromatografii na silikagelu (6 mm deska, 50% EtOAc/hexany) a tím se získala sloučenina z názvu (0,12 g) ve formě čirého oleje:

MS (ES) m/e 542,3 (M + H)⁺.

b) (S)-8-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]_

2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina

Do roztoku methyl (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-acetátu (0,12 g, 0,22 mmol) v EtOH (2 ml) byl přidán 1 N NaOH (0,50 ml). Po uplynutí 3,5 hodin při teplotě zpětného toku byla hlavní část rozpouštědla odstraněna za sníženého tlaku a tím se získalo bílé residuum. Residuum bylo rozpuštěno ve vodě a roztok byl neutralizován na pH = 7 pomocí 1 N HCl. Výsledný precipitát byl shromážděn a sušen za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu (28,1 mg) ve formě bílé pevné látky:

[a]_D -74,0° (c 0,05 EtOH);

MS (ES) m/e 528,3 (M + H)⁺.

Analýza: Vypočteno pro C₂₈H₂₈F₃N₃O₄.0,5 H₂O: C, 62,68; H, 5,45; N, 7,83.

Nalezeno: C 62,60; H, 5,35; N, 7,66.

Příklad 44

Dávková jednotka parenterální kompozice

Přípravek, obsahující 20 mg sloučeniny podle Příkladu 1 ve formě sterilního bezvodého prášku byla připravena následujícím způsobem: 20 mg sloučeniny bylo rozpouštěno v 15 ml destilované vody. Roztok byl filtrován za sterilních podmínek do 25 ml vícedávkové zkumavky a lyofilizován. Prášek je možno rekonstituovat přidáním 20 ml 5% dextrózy ve vodě (DSW) pro intrave50 nózní nebo intramuskulámí injekce. Dávkování je tedy určeno objemem injekce. Následné zředění může být provedeno přidáním odměřeného objemu této dávkové jednotky do jiného objemu DSW pro injekce, nebo může být odměřena dávka vložena do jiného mechanismu pro podávání léku, jako je láhev nebo sáček pro IV drip infuzi nebo jiný injekční nebo infuzní systém.

-91 CZ 299076 B6

Příklad 45

Dávková jednotka orální kompozice

Kapsle pro orální podávání byla připravena smícháním a rozemletím 50 mg sloučeniny podle Příkladu 1 s 75 mg laktózy a 5 mg stearanu hořečnatého. Výsledný prášek tříděn a plněn do tvrdých želatinových kapslí.

ío Příklad 46

Dávková jednotka orální kompozice

Tableta pro orální podávání byla připravena smícháním a granulací 20 mg sacharózy, 150 mg dihydrátu síranu vápenatého a 50 mg sloučeniny podle Příkladu 1 s 10% želatinovým roztokem. Vlhké granule byly tříděny, sušeny, smíchány s lOmg škrobu, 5 mg talku a 3 mg kyseliny stearové a lisovány do tablet.

Výše uvedený popis plně popisuje výrobu a použití sloučenin podle vynálezu. Vynález však není omezen na konkrétní provedení uvedená výše, ale zahrnuje všechny jejich modifikace, které spadají do rozsahu přiložených patentových nároků. Různé reference a články v časopisech, patenty a další publikace, které jsou zde uvedeny popisují stav techniky ajsou zde zahrnuty jako reference, tak, jak byly uvedeny v předcházejícím textu.

Claims

1. Deriváty vitronektinu obecného vzorce I:

ve kterém:

35 R¹ představuje R⁷, nebo A-Co-C4-alkyl, A-C₂-C₄-alkenyl, A-C₂-C₄-alkinyl, A-C₃-C₄-oxoalkenyl, A-C₃-C₄-oxoalkinyl, A-Ci-C₄-aminoalkyl, A-C₃-C₄-aminoalkenyl, A-C₃-C₄-aminoalkinyl, nesubstituovaný nebo substituovaný kombinací jednoho nebo více substituentů R¹⁰nebo R⁷;

40 A představuje atom vodíku, C₃-C₆-cykloalkyl, Het nebo Ar;

R⁷ představuje -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸, -S(O)mOR', -S(O)_mNR'R, -PO(OR'), -PO(OR')₂, —NO₂ nebo tetrazolyl;

45 každý R⁸ nezávisle představuje -OR', -NR'R, -NR'SO₂R', - NROR', nebo -OCR'₂CO(O)R':

-92CZ 299076 B6

R¹⁰ představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR¹¹, -CN, -NR'Rⁿ, -NO₂, -CF₃, CF₃S(O)_r, -CO₂R', -CONR'₂, A-C₀-C₆-alkyl-, A-Ci-C₆-oxoalkyl- A-C₂-C6-alkenyl-, A-C₂-C₆5 alkinyl-, A-C₀-C₆-alkyloxy-, A-Co-C6-alkylamino- nebo A-Co-C₆-alkyl-S(0)_r;

(O)_u

R‘

R^NY^Ny^'Á-^w· q’ Q³Q²

N ,NR—CRC—W^Q Y ₃.Q⁴

Q » nebo .Ν. .NR·—-CR’ — W· r γ

O,^NR’

W představuje -(CHR⁸)a-U- (CHR^s)b-;

U není přítomen nebo představuje CO, CR^g2, C(=CR^g2), S(O)_k, O, NR⁸, CR^gOR⁸, CR^g(OR^k)CR^g2, CR^g2CR^g(OR^k), C(O)CR^g2, CR^g2C(O), CONŘ, NR'CO, OC(O), C(O)O, C(S)O,

-93CZ 299076 B6

OC(S), C(S)NR^g, NR⁸C(S), S(O)2NR^g, NR^gS(O)2N=N, NR®NR⁶, NR^gCR⁸2, CR^g2NR^g, CR⁸2O, OCR^g2, C=C nebo CR^g=CR⁸;

G představuje NR^e, S nebo O;

R^g představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Het-Co-Cé-alkyl, C₃-C₇-cykloalkyl-Co-C6-alkyl nebo Ar-C₀-C₆-alkyl;

R^k představuje R⁸, -C(O)R^g, nebo -C(O)OR^f; 10

R¹ představuje atom vodíku, Ci-C6-alkyl, Het-C0-C6-alkyl, C3-C7-cykloalkyl-Co-C6-alkyl, Ar-C0-C6-alkyl, nebo Ci-C6-alkyl substituovaný jednou až třemi skupinami, zvolenými ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, CN, NR⁶2, OR⁸, SR⁸, CO2R^g a CON(R^g)2;

15 R^f představuje atom vodíku, C|-C₆-alkyl nebo Ar-C₀-C₆-alkyl;

R^e představuje atom vodíku, Ci-C₆-alkyl, Ar-C₀-C_ň-alkyl, Het-Co-Cé-alkyl, C₃-C7-cykloalkyl-Co-C₆-alkyl, nebo (CH₂)_kCO₂R^g;

20 R^b a R^c jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, Q-Cé-alkyl, Ar-Co-C6-alkyl, Het-C0-C6-alkyl nebo C3-C7-cykloalkyl-Co-C6-alkyl, halogen, CF3, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2, CH2N(R^f)2, nebo R^b a R^c jsou spojeny dohromady tak, že vytvářejí pěti- nebo šestičlenný aromatický nebo nearomatický karbocyklický nebo heterocyklický kruh, popřípadě nesubstituovaný nebo substituovaný až třemi substituenty, zvolenými

25 ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, skupiny CF₃, Ci-C₄-alkyl, OR^f, S(O)kR^f, COR^f, CO2R^f, OH, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2 a CH2N(R^f)2; nebo methylendioxy;

Q¹, Q², Q³ a Q⁴ představují nezávisle na sobě N nebo C-R^y, za předpokladu, že nejvýše jeden zQ',Q², Q³aQ⁴jeN.

R” představuje R', -C(O)R' nebo -C(O)OR';

R' představuje atom vodíku, C]-C₆-alkyl, Ar-C₀-C₆-alkyl, Het-C₀-C₆-alkyl nebo C₃-C₆-cykloalkyl-C₀-C₆-alkyl, atom halogenu, CF₃, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, NO2, N(R^f)2, CO(NR^f)2, CH2N(R^f)2;

40 R^y představuje atom vodíku, atom halogenu, -OR⁸, -SR⁸, -CN, -NR⁶R^k, -NO2, -CF3, CF3S(O)r-, -CO2R^s, -COR^s nebo -CONR⁶2, nebo C|—Ce-alkyl nesubstituovaný nebo substituovaný atomem halogenu, -OR⁶, -SR^g, -CN, -NR⁸R”, -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR⁶ nebo -CONR^g2;

45 a je rovno 0, 1 nebo 2; b je rovno 0, 1 nebo 2;

k je rovno 0, 1 nebo 2;

m je rovno 1 nebo 2; r je rovno 0, 1 nebo 2;

-94CZ 299076 B6 s je rovno 0, 1 nebo 2;

u je rovno 0 nebo 1; a

5 v je rovno 0 nebo 1;

kde Ar je fenyl nebo naftyl nebo nafltyl substituovaný jedním až třemi substituenty, zvolenými ze souboru zahrnujícího skupiny C,-C₄-alkyl, C,-C₄-alkoxyl, C]-C₄-alkylthio, CF₃, NH₂, OH, F, Cl, Br nebo I, kde C,-C₄-alkyl je nesubstituovaný nebo substituovaný skupinou R^x na libovolném atomu uhlíku a zvolenou ze souboru zahrnujícího skupiny C]-C₄-alkyl, OR', SR', C,-C₄-alkylsulfonyl, C,-C₄-alkylsulfoxyl, -CN, N(R')₂, CH₂N(R')₂, NO₂, -CF₃, -CO₂R', -CON(R')₂, -COR', -NR'C(O)R', F, Cl, Br, I nebo -CF₃S(O)_r, kde r je 0, 1 nebo 2, kde Het je pěti nebo šestičlenný monocyklický kruh nebo devíti nebo desítičlenný bicyklický kruhový systém, obsahující jeden až tři heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atomy dusíku, kyslíku a síry, popřípadě substituovaný jedním až třemi substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího skupiny C]-C₄-alkyl, OR', SR', Ci-C₄-alkylsulfonyl, Ci-C₄-alkylsulfoxyl,

20 -CN, N(R')₂, CH₂N(R')₂, NO₂, -CF₃, -CO₂R', -CON(R')₂, -COR', -NR'C(O)R', F, Cl, Br, 1 nebo -CF₃S(O)_r, kde r je 0, 1 nebo 2, nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

25 2. Derivát vitronektinu podle nároku 1, obecného vzorce I ve kterém skupina R² představuje (?)„ «1 ->^N NR—CR'₂— W=V ve kterém Q¹, Q² a Q³ jsou každý CR^y, Q⁴ představuje CR^y nebo N, u je 0.

3. Derivát podle nároku 2, obecného vzorce I ve kterém R' představuje atom vodíku, 30 R představuje atom vodíku, C]-C₆-alkyl, -C(O)Ci-C₆-alkyl, C(O)OC,-C₆-alkyl, -C(O)Ci-C₆alkyl-Ar nebo C(O)OC,-C₆alkyl-Ar, W představuje -CH₂-CH₂- a R^y je atom vodíku, atom halogenu, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR^k, -NO2, -CF3, -CF3S(O)r-, -CO2R^g, -COR^g-CONR^E2 nebo

C,-C₆-alkyl.

35 4. Derivát podle nároku 3, obecného vzorce I ve kterém R¹ představuje -CH₂CF₃.

5. Derivát vitronektinu kterým je:

(±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l40 octová kyselina;

45 (±)-8-[3-(4-methoxy-2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin^l-octová kyselina;

-95CZ 299076 B6 (±)-8-[3-(2-pyridylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-(2-imidazolylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-45 octová kyselina;

(±)-8-[3-[2-(l,4,5,6-tetrahydropyrimidinyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydroΙΗ-2-benzazepin—4-octová kyselina;

10 (±)-8-[3-(6-amino-2-pyridylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[2-(2-benzimidazolyl)ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[2-(4-aza-2-benzimidazolyl)ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepinHoctová kyselina;

(±)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benz20 azepinH-octová kyselina;

(±)-8-[2-(benzimidazol-2-yl)-l-ethoxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4octová kyselina;

25 (±)-8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydrolH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(pyrÍmidin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin4-octová kyselina;

(R) -8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[( 1,4,5,6-tetrahydropyrimidin-2-yl)amino]-1 -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro35 1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S) -8-[3-(4-aminopyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

40 (±)—3—oxo—8—[3—[N—(pyridin—2-yl)—N—(terč—butoxykarbonyl)amino]— 1—propyloxy]—2,3,4,5tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-[N-(l-oxopyridin-2-yl)-N-(Zerc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(Zerc-butoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)—2,3,4,5-tetrahydro—l H-2-benzaz.epin—4—octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-{pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifliiormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetra50 hydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-2-methyl-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(methyl)amino]-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepinH-octová kyselina;

-96CZ 299076 B6 (±)-2-benzyl-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-2-(karboxymethyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-1 -propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro5 1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-2-(4-aminobenzyl)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro1 H-2-benz.azepin^l-octová kyselina;

ío (±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(benzoyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-(2-imidazolin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(pyi'idin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-l-ethoxy]-2-methyl-3-oxO“2,3,4,5-tctrahydro-l H-2-benz20 azepin-4-octová kyselina;

(±)-8-[3-(4,6-dimethylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

25 (±)-8-[3-(4,5,6,7-tetrahydro-l H-l ,3-diazepin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-methyl-3-oxo-2,

3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(/erc-butylacetyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-tri fluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-[N-(pyridin-2-yl)-N-(izobutoxykarbonyl)amino]-l-propyloxy]-2-(4-trifluor methylbenzyl)-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(4-trifluormethylbenzyl)-2,3,4,5-tetra35 hydro-1 H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(±)-3-oxo-8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-l H-2-benzazcpin-4-octová kyselina;

40 (±)—3—oxo—8—[3—[N—(pyridin—2—yl)—N—(methyl)amino]—1—propyloxy]—2—[4—(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin^l-octová kyselina;

(S)-3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy ]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(R) -3-oxo-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S) -8-[3-(4-methylpyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,550 tetrahydro-1 H-2-benzazepin^l—octová kyselina;

(S)-3-oxo-8-[3-(l,4,5,6-tetrahydropyrimid-2-ylamino)-l-propyloxy]-2-[4-(trifluormethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-l H-2-benzazepin-4-octová kyselina;

-97CZ 299076 B6 (S)-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-8-[3-(pyridin-2-ylamino)-l-propyloxy]-2,3,4,5-tetrahydro-l H2-benzazepin-4-octová kyselina;

(S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2-fenylethyl)-2,3,4,5-tetra5 hydro-1 H-2-benzazepin^l-octová kyselina;

(S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluorethyl)-2,3,4,5tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina; a ío (S)-8-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-l-ethoxy]-3-oxo-2-[4-(trifluonnethyl)benzyl]-2,3,4,5-tetrahydro-lH-2-benzazepin-4-octová kyselina;

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

15 6. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič.

7. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1,vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:

(1) reakci sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce V:

HI (IV)

R2,Ll (V) ve kterých R¹ a R² mají stejný význam jako v obecném vzorci I, s libovolnými chráněnými reakčními funkčními skupinami a L¹ představuje skupinu OH nebo atom halogenu;

(2) následné odstranění kterékoliv ochranné skupiny a (3) popřípadě vytvoření farmaceuticky přijatelné soli.

8. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 5 pro použití jako léčivo.

9. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení osteoporózy.

10. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro inhibici angiogeneze.