RO119881B1 - Derivaţi de benzazepină, procedeu de preparare, compoziţie farmaceutică care îi cuprinde şi utilizarea acestora - Google Patents

Derivaţi de benzazepină, procedeu de preparare, compoziţie farmaceutică care îi cuprinde şi utilizarea acestora Download PDF

Info

Publication number
RO119881B1
RO119881B1 RO99-00353A RO9900353A RO119881B1 RO 119881 B1 RO119881 B1 RO 119881B1 RO 9900353 A RO9900353 A RO 9900353A RO 119881 B1 RO119881 B1 RO 119881B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
tetrahydro
oxo
benzazepine
propyloxy
methyl
Prior art date
Application number
RO99-00353A
Other languages
English (en)
Inventor
James Francis Callahan
Russell Donovan Cousins
Richard Mccullock Keenan
Chet Kwon
William Henry Miller
Irene Nijole Uzinkas
Original Assignee
Smithkline Beecham Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Corporation filed Critical Smithkline Beecham Corporation
Publication of RO119881B1 publication Critical patent/RO119881B1/ro

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D223/14—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D223/16—Benzazepines; Hydrogenated benzazepines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la compuşi care au, ca structură de bază, benzodiazepinil şi care sunt antagonişti ai receptorului de vitronectină şi sunt folositori pentru tratarea osteoporozei, angiogenezei, dezvoltării tumorale şi metastazării, aterosclerozei, restenozei şi inflamaţiei. ŕ

Description

Orice persoană interesată are dreptul să formuleze în scris și motivat, la OSIM, o cerere de revocare a hotărârii de acordare a brevetului de invenție, în termen de 6 luni de la publicarea mențiunii acesteia
RO 119881 Β1
Prezenta invenție se referă la derivați de benzazepină, la un procedeu de preparare, la o compoziție farmaceutică care îi cuprinde și la uzilizarea acestora pentru tratarea afecțiunilor inflamatorii, a cancerului și a bolilor cardiovasculare, precum și a aterosclerozei și restenozei, și pentru tratarea bolilor în care resorbția osoasă este un factor, precum osteoporoza.
Integrinele reprezintă o superfamilie de receptori ai adeziunii celulare, care sunt glicoproteine transmembranare exprimate într-o varietate de celule. Acești receptori de adeziune la suprafața celulară includ gpllb/lHa (receptorul de fibrinogen) și ανβ3 (receptorul de vitronectină). Receptorul de fibrinogen gpllb/llla este exprimat pe suprafața plachetară și mediază agregarea trombocitelor și formarea cheagului hemostatic pe locul unei răni sângerânde. Philips și colab., Blood, 1988,71,831. Receptorul ανβ3 de vitronectină este exprimat pe un număr de celule, incluzând celulele endoteliale, ale mușchiului neted, osteoclastului și celule tumorale, și acesta are o diversitate de funcții. Receptorul ανβ3 exprimat pe membrana celulelor de osteoclast mediază adeziunea osteoclastelor la matricea osului, o etapă cheie în procesul de resorbție osoasă. Ross și colab., J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. O boală caracterizată printr-o resorbție osoasă excesivă este osteoporoza. Receptorul ανβ3 exprimat pe celulele de mușchi neted aortic mediază migrarea lor în neointimă, un proces care conduce la restenoză după angioplastie coronariană percutanată. Brown și colab., Cardiovascular Res., 1994,28,1815. în plus, Brooks și colab., Cell, 1994, 79,1157 au arătat că un antagonist ανβ3 este capabil să promoveze regresia tumorală prin inducerea apoptozei vaselor de sânge angiogenice. Astfel, agenți care blochează receptorul de vitronectină ar fi folositori în tratarea unor boli, precum osteoporoza, restenoză și cancerul.
Este cunoscut faptul că receptorul de vitronectină se referă la trei integrine diferite, denumite ος,β,, ανβ3 și ανβ5. Horton și colab., Int.J. Exp.Pathol, 1990, 71,741. ανβ, se leagă la fibronectină și vitronectină. ανβ3 se leagă la o mare varietate de liganzi, incluzând fibrină, fibrinogen, laminină, trombospondină, vitronectină, factorul lui von Willebrand, osteopontină și sialoproteina I din os. ανβ5 se leagă la vitronectină. S-a arătat că receptorul ανβ5 este implicat în adeziunea celulară a unei diversități de tipuri de celule, incluzând celule endoteliate microvasculare, (Davis și colab., J.Cell Biol, 1993, 57, 206) și a fost confirmat rolul său în angiogeneză. Brooks și colab., Science, 1994,264,569. Această integrină este exprimată în vasele de sânge pe țesutul uman de granulație rănit, dar nu pe pielea normală.
Receptorul de vitronectină este cunoscut că se leagă la proteinele din matricea osului, care conțin motivul tripeptidic Arg-Gly-Asp (sau RGD). Astfel, Horton și colab., Exp. Cell. Res. 1991, 195, 368, descriu că peptidele care conțin RGD și un anticorp al receptorului de anti-vitronectină (23C6) inhibă resorbția dentinei și răspândirea celulelor de către osteoclaste. în plus, Sato și colab., J. Cell. Biol, 1990, 111, 1713 descriu că echistatinul, o peptidă din venin de șarpe, care conține secvența RGD, este un inhibitor eficient al resorbției osoase în cultura de țesut și inhibă atașarea osteoclastelor la os.
Acum s-a descoperit că anumiți compuși sunt inhibitori eficienți ai receptorilor ανβ3 și ανβ5. în particular, s-a descoperit că astfel de compuși sunt inhibitori mai eficienți ai receptorului de vitronectină decât ai receptorului de fibrinogen.
Prezenta invenție se referă la derivați de benzazepină cu formula I:
RO 119881 Β1 în care:
R’ este H, alchil C,^, Ar-alchil C0.6, Het-alchil C0.6, cicloalchil C36-alchil Co^, -CH2CF3, -(CH2)12-C(O)OR’, sau -(CH2)2OR’;
R2 este
sau în care:
Q1, Q2 și Q3 sunt fiecare CRy și Q4 este CRy sau N;
W este -CH2-CH2-;
R9 este H, alchil C^, Het-alchil C0.6, cicloalchil C3 7-alchil Co e sau
Ar-alchil Co<;
Rk este R9, -C(O)R9, sau -C(O)OR';
R' este H, alchil Cb6 sau Ar- alchil Co^;
R’ este H, alchil C^, Ar-alchil CM sau cicloalchil C36-alchil C0.6;
R”este R’, -C(O)R’ sau -C(O)OR’;
Ry este H, halogen, -OR9, -SR9, -CN, -NR9Rk, -NO2, -CF3, CF3S(O)r, -CO2R9, -COR9, -CONR9 sau alchil CV6;
r este 0,1 sau 2;
s este 0,1 sau 2;
u este 0 sau 1;
v este 0 sau 1;
Arestefenil sau naftil care poate fi substituit cu unul până la trei substituenți selectați dintre alchil CM, alcoxi CM, tioalchil CM, CF3, NH2, OH, F, CI, Br sau I; și
Het este un monociclu cu cinci sau șase atomi în ciclu, sau un biciclu cu nouă sau zece atomi în ciclu, care conține unul până la trei heteroatomi aleși din grupul azot, oxigen și sulf, opțional substituit cu unul până la trei substituenți selectați dintre alchil C^, OR’, SR’, sulfonilalchil CM, sulfoxilalchil C^, -CN, N(R’)2, CH2N(R')2, -NO2, -CF3, -CO2R’-CON(R’)2, COR’, -NR’C(O)R’, F, CI, Br, I, sau CF3S(O)02;
sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic a acestora.
Un alt obiect al invenției se referă la o compoziție farmaceutică care este constituită dintr-un compus cu formula I și un purtător acceptabil farmaceutic.
Un compus cu formula I poate fi preparat printr-un procedeu care cuprinde reacția unui compus cu formula IV cu un compus cu formula V:
R2-L1 (V)
RO 119881 Β1 în care R1 și R2 sunt definiți în formula I, cu oricare grupări reactive funcționale protejate, și
L1 este OH sau halogen;
și apoi înlăturarea oricărei grupări protectoare și formarea, opțional, a sării acceptabile din punct de vedere farmaceutic.
Un alt obiect al prezentei invenții îl constituie utilizarea unui compus cu formula I pentru fabricarea unui medicament pentru tratamentul osteoporozei.
De asemenea, prezenta invenție se referă și la utilizarea unui compus cu formula I pentru fabricarea unui medicament pentru tratamentul osteoporozei pentru inhibarea angiogenezei.
Această invenție cuprinde compuși cu formula I așa cum sunt descriși în cele ce urmează, care au activitate farmacologică pentru inhibarea receptorului de vitronectină și sunt utili în tratamentul inflamației, cancerului și afecțiunilor cardiovasculare, cum ar fi ateroscleroza și restenoza și a bolilor în care unul din factori este resorbția osoasă, cum ar fi osteoporoza.
Această invenție cuprinde compuși care sunt inhibitori mai activii ai receptorului de vitronectină decât ai receptorului de fibrinogen.
Derivații de benzazepină cuprind un nucleu central de benzazepină, în care este prezent un substituent care conține azot pe ciclul aromatic de șase atomi ai ciclului benzazepinic și un substituent alifatic conținând un rest acid este prezent pe nucleul cu șapte membri al ciclului benzazepinic.Se crede că sistemul ciclic al benzazepinei interacționează favorabil cu receptorul de vitronectină și că orientează substituentul de pe catena laterală pe ciclul de șase și șapte atomi astfel încât aceștia să poată, de asemenea, interacționa favorabil cu receptorul. Se preferă ca între gruparea acidă a substituentului alifatic de pe ciclul de șapte atomi al ciclului de benzazepină și între azotul din substituentul conținând azot de pe ciclul de șase atomi al benzazepinei, să existe de la douăsprezece la paisprezece legături covalente care intervin pe cea mai scurtă cale intramoleculară.
De asemenea, prezenta invenție se referă la sărurile de adiție și complecșii acceptabili farmaceutic ai compușilor invenției. în cazul în care compușii aceastei invenții pot avea unul sau mai mulți centri chirali, cu excepția cazului în care se specifică altfel, această invenție include fiecare compus unic neracemic care poate fi sintetizat și rezolvat prin tehnici convenționale. în cazurile în care compușii au duble legături nesaturate carbon-carbon, din domeniul acestei invenții fac parte atât izomerii cis (Z), cât și izomerii trans (E). în cazurile în care compușii pot exista în forme tautomere, cum ar fi tautomeri ceto-enolici, precum:
O și OR', și fiecare formă tautomeră este privită ca fiind inclusă în această invenție, fie că există în echilibru, fie că este stabilită ca una dintre forme, prin substituirea adecvată cu R’.
Compușii cu formula I inhibă legarea vitronectinei și a altor peptide care conțin RGD, la receptorul de vitronectină. Inhibarea receptorului de vitronectină la osteoclaste inhibă resorbția osoasă osteoclastică și este utilă pentru tratarea bolilor în care resorbția osoasă este asociată cu patologia, cum ar fi osteoporoza și osteoartrita.
într-un alt aspect, această invenție se referă la o utilizare a unui compus care provoacă o mărire a eliberării osteocalcinului, la fabricarea ttnui medicament pentru stimularea
RO 119881 Β1 formării osului. Mărirea producției de substanță osoasă reprezintă un avantaj clar în stările 1 de boală în care există o deficiență de masă osoasă mineralizată sau, dacă se dorește, pentru remodelarea osului, precum vindecarea fracturii și prevenirea fracturării osului. Bolile și 3 dereglările metabolice care conduc la pierderea structurii osului vor avea de asemenea de câștigat de pe urma unui astfel de tratament. De exemplu, în urma administrării unui compus 5 conform invenției, pot beneficia hiperparatiroidismul, boala Paget, hipercalcemia de natură malignă, leziunile osteolitice produse de metastaza osoasă, pierderea osoasă din cauza imo- 7 bilizării sau deficienței hormonilor sexuali, boala lui Behcet, osteomalacia, hiperostoza și osteopetroza. 9 în plus, deoarece compușii din prezenta invenție inhibă receptorii de vitronectină, la un număr diferit de tipuri de celule, respectivii compuși vor fi folositori în tratamentul afec- 11 țiunilor inflamatorii, precum artrita reumatoidă și psoriazisul și în tratamentul bolilor cardiovasculare, cum ar fi ateroscleroza și restenoza. Compușii cu formula I din prezenta invenție 13 pot fi folositori în tratamentul sau prevenirea altor boli incluzând, dar fără a se limita la, dereglări tromboembolice, astm, alergii, sindrom de epuizare respiratorie la adulți, boala gazdă 15 versus grefă, respingerea organului transplantat, șoc septic, eczemă, dermatită de contact, boala inflamatorie a intestinului și alte boli autoimune. Compușii din prezenta invenție pot fi 17 de asemenea folositori pentru vindecarea rănilor.
Compușii din prezenta invenție sunt de asemenea folositori pentru tratamentul, inclu- 19 zând prevenirea, afecțiunilor angiogenice. Termenul afecțiuni angiogenice, așa cum este utilizat aici, include stări care implică neovascularizarea anormală. Acolo unde cauza este 21 dezvoltarea de vase de sânge noi, sau contribuie, la patologia asociată cu o boală, inhibarea angiogenezei va reduce efectele dăunătoare ale bolii. Un exemplu de astfel de boală țintă 23 este retinopatia diabetică. Acolo unde este cerută dezvoltarea a noi vase de sânge pentru a susține dezvoltarea unui țesut deteriorat, inhibarea angiogenezei va reduce alimentarea 25 de sânge la țesut și, prin aceasta, contribuie la reducerea masei țesutului bazat pe cerințele de alimentare cu sânge. Exemplele includ dezvoltarea tumorilor atunci când neovasculariza- 27 rea este o cerință continuă pentru ca tumoarea să se dezvolte și să se stabilizeze metastaze ale tumorii solide. Astfel, compușii din prezenta invenție inhibă angiogeneza țesutului tu- 29 moral, prin aceasta prevenind metastaza tumorii și dezvoltarea tumorii.
Astfel, conform metodelor din prezenta invenție, inhibarea angiogenezei utilizând 31 compușii din prezenta invenție poate ameliora simptomele de boală și în unele cazuri, poate vindeca boala. 33
O altă țintă terapeutică pentru compușii din prezenta invenție sunt bolile de ochi caracterizate prin neovascularizare. Astfel de boli de ochi includ afecțiunile neovasculare ale 35 corneei, cum ar f< transplantul de cornee, cheratita herpetică, cheratita luetică, pterigion și panus neovascular asociat cu lentilele de contact. Alte boli ale ochiului includ, de asemenea, 37 degenerarea maculară asociată vârstei, histoplasmoza oculară prezumtivă, retinopatia prematurității și glaucomul neovascular. 39
Această invenție mai oferă o metodă de inhibare a dezvoltării tumorii care cuprinde administrarea în etape sau în combinație fizică a unui compus cu formula I și a unui agent 41 antineoplazic, cum ar fi topotecan și cisplatin.
în legătură cu formula I, semnificația adecvată pentru R2 este: 43 (θ)« ’
RO 119881 Β1 în care Q1, Q2 și Q3 sunt fiecare CRy, Q4 este CRy sau N și u este 0, și preferabil, fiecare R' este H, R este alchil C,^, -C(0) alchil C^, C(O)Oalchil C16, -C(O)alchil C06-Ar, sau -C(O)Oalchil C06-Ar, W este -CH2-CH2-, și Ry este H, halo, -OR9, SR9, -CN, NR9Rk, NO2, -CF3, CF3S(O),-, -CO2R9, -COR9, CONR92, sau alchil
6· în mod alternativ R2 este (O)o
în care, Q1, Q2 și Q3 sunt fiecare CRy, Q4 este CRy sau N și u este 0, și preferabil, fiecare R' este H, R“ este alchil Cb4, W este -CH2-CH2.
Cu privire la formula (I), în mod adecvat R1 este H, alchil C,^, Ar-alchil C 0^, Het-alchil C0.6, cicloalchil CM-alchil C0.6, -CH2-CF3, -(CH2)V2 C(O)OR' sau -(CH2)2 OR'.
Preferabil, R1 este H, alchil C,^, Ph-alchil C0.4, -CH2-CF3, -(CHg),^ C(O)OR' sau (CH2)2 OR', în care Ri este H sau alchil CM. Mai ales, R1 este -CH2-CF3.
Compușii reprezentativi printre compușii prezentei invenții sunt următorii:
acid (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetic;
acid (±)-8-[3-(4-amino-2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[3-(4-metoxi-2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[3-(2-imidazolilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetic;
acid (±)-8-[3-[2-( 1,4,5,6-tetrahidropirimidinil)amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[2-[6-(metilamino)piridil]etoxi]-3-oxc>-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetic;
acid (±)-8-[2-(2-benzimidazolil)etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetic;
acid (±)-8-[2-(4-aza-2-benzimidazolil)etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetic;
acid (±)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1 -etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[2-(benzimidazol-2-il)-1 -etoxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4acetic;
acid (±)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino)]-1-propiloxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-3-oxo8-[3-(pirimidin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetic;
RO 119881 Β1 acid (R)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino)]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2- 1 benzazepin-4-acetic;
acid (±)-3-oxo-8-[3-[(1,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro- 3
H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (S)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino)]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2- 5 benzazepin-4-acetic;
acid(±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(-oxo-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2,3,4,5-7 tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[3-[N-(1 -oxopiridin-2-il)-N-(-tert-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-3-oxo-9
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(-oxo-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2-(4-11 trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetra-13 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-2-metil-3-oxo-8-[N-(piridin-2-il)-N-(metil)amino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-15
H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benz-17 azepin-4-acetic;
acid (±)-2-(carboximetil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-19
2-benzazepin-4-acetic;
acid(±)-2-(4-aminobenzil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-21
H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(benzoil)amino]-propiloxi]-2-(4-trifluor-23 metilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[3-(2-imidazolin-2-ilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-25 benzazepin-4-acetic;
acid(±)-3-oxo8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-27
H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[2-(2-aminotiazol-4-il)-1-etoxi]-2-metil-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benz-29 azepin-4-acetic;
acid(±)-8-[3-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-31
H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-8-[3-(4,5,6,7-tetrahidro-1 H-1,3-diazepin-2-ilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-33
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-3-oxo8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(-terț-butilacetil)amino]-propiloxi]-2-(4- trifluor-35 metilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(izobutoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2-(4- tri-37 fluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-te-39 trahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(±)-3-oxo-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-te-41 trahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(metil)amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)- 43
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro- 45
H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(R)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro- 47
H-2-benzazepin-4-acetic;
RO 119881 Β1 acid(S)-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(S)-3-oxo-8-[3-(1,4,5,6-tetrahidropirimid-2-ilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetil) benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(S)-3-oxo-2-(2-feniletil)-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic;
acid(S)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic;
acid(S)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (S)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,
4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestora.
Compușii preferați din invenție includ:
acid(S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluormetil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic;
acid (S)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic; și acid(S)-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic a acestora.
în cazurile în care compușii din această invenție pot avea unul sau mai mulți centri chirali, cu excepția cazului în care se specifică altfel, această invenție include fiecare compus individual neracemic care poate fi sintetizat și supus rezoluției prin tehnici convenționale.
Conform prezentei invenții, este preferată configurația (S) a compușilor cu formula I. în cazurile în care compușii au duble legături nesaturate carbon-carbon, din domeniul acestei invenții fac parte ambii izomeri cis (Z) și trans (E). Semnificația oricărui substituent la oricare apariție este independentă de semnificația sa și a oricărui alt substituent la oricare apariție.
De asemenea, în această invenție sunt incluși precursori din această invenție. Precursorii sunt considerați a fi orice purtători legați covalent care eliberează in vivo medicamentul activ de bază conform formulei I. Astfel, într-un alt aspect al prezentei invenții sunt cuprinși precursorii noi, care sunt de asemenea intermediari pentru prepararea compușilor cu formula I, și care au formula II:
în care:
R1 și R2 sunt definiți ca în formula I sau săruri acceptabile farmaceutic, ale acestora.
Reprezentantativi pentru noii precursori ai prezentei invenții sunt următorii: (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-1-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil; și (±)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino)-1-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de etil;
sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestora.
RO 119881 Β1
Un alt aspect al acestei invenții sunt intermediarii cu formula III: 1
,,N+
Q
V-C02 alchil C,6 în care: i 9
R1, W, R’, R, Q1, Q2, Q3 și Q4 sunt definiți ca în formula I sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, a acestora. 11
Abrevierile și simbolurile utilizate în mod obișnuit în domeniul peptidelor și chimiei sunt utilizate aici pentru a descrie compușii din această invenție. în general, abrevierile de 13 aminoacizi urmează Nomenclatura Biochimică a Comisiei IUPAC-IUB așa cum este descrisă în Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984). 15
Termenul alchil C,.4 așa cum este folosit aici reprezintă o grupare alchil substituită opțional cu de la 1 la 4 atomi de carbon și include metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izo- 17 butii și f-butil. Alchil C16 include în plus pentil, n-pentil, izopentil, neopentil și hexil și izomerii alifatici simpli ai acestora. Termenii alchil C04 și alchil C0.6 indică suplimentar că nu este pre- 19 zentă nici o grupare alchil (de exemplu, că este prezentă o legătură covalentă).
Oricare din termenii alchil C14 sau alchil C^, alchenil C2.6, alchinil C2.6 sau oxoalchil 21 Cb6 poate fi substituit opțional cu gruparea Rx, care poate fi la oricare atom de carbon care conduce la o structură stabilă și care este accesibilă prin tehnici convenționale de sinteză. 23 Grupări potrivite pentru R* sunt alchil CV4, OR', SR', alchil sulfonil, alchil sulfoxil, CN, N(R')2, CH2N(R')2, -N02, -CF3, -C02R', -CON(R')2, -COR’-, -NR'C(O)R', F, CI, Br, I sau 25 CF3SD(O)r -, în care r este 0,1 sau 2.
Termenul halogen sau halo înseamnă F, CI, Br sau I. 27
Termenul Ar sau arii, așa cum este folosit aici semnifică fenil sau naftil, sau fenil sau naftil substituit cu de la unu la trei substituenți, precum cei definiți mai sus pentru alchil, în 29 special alchil C14, alcoxi C14 tioalchil C,.4, CF3, NH2, OH, F, CI, Br sau I.
Termenul Het sau heterociclu indică un inel monociclic de cinci sau șase atomi, opțio- 31 nai substituit, sau un inel biciclic cu nouă sau zece atomi care conține de la unu la trei heteroatomi aleși din grupa constând din azot, oxigen și sulf, care este stabil și accesibil prin sin- 33 teză chimică convențională. Heterocicli ilustrativi sunt benzofuril, benzimidazol, benzopiran, benzotiofen, furan, imidazol, indolină, morfolină, piperidină, piperazină, pirol, pirolidină, tetra- 35 hidropiridină, piridină, tiazol, tiofen, chinolină, izochinolină, și tetra- și perhidrochinolină și izochinolină. Face parte din domeniul invenției orice combinație accesibilă de până la trei sub- 37 stituenți pe ciclul Het, cum ar fi cei definiți mai sus pentru alchil, care sunt accesibili prin sinteză chimică și care sunt stabili. 39
Cicloalchil C3.7 se referă la un sistem carbociclic substituit opțional, cu de la trei la șapte atomi de carbon, care poate conține până la două legături carbon-carbon nesaturate. 41 Cicloalchili C3.7 caracteristici sunt ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclopentenil, ciclohexil, ciclohexenil și cicloheptil. Din domeniul acestei invenții face parte orice combinație de până 43 la trei substituenți, cum ar fi cei definiți mai sus pentru alchil, pe inelul cicloalchil care sunt accesibili prin sinteză convențională și care sunt stabili. 45
Anumiți radicali sunt prescurtați aici. t-Bu se referă la un radical tert-butil, Boc se referă la un radical t-butoxicarbonil, Fmoc se referă la un radical fluorenilmetoxicarbonil, Ph 47
RO 119881 Β1 se referă la un radical fenil, Cbz se referă la un radical benziloxicarbonil, Bn se referă la un radical benzii, Me se referă la metil, Et se referă la etil, Ac se referă la acetil. Ale se referă la alchil C,„, Naf se referă la 1- sau 2-naftil și cHex se referă la ciclohexil. Tet se referă la
5-tetrazolil.
Anumiți reactivi sunt prescurtați aici. DCC se referă la diciclohexilcarbodiimidă, DMAP se referă la dimetilaminopiridină, DIEA se referă la diizopropiletil amină, EDC se referă la 1(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimidăclorhidrat. HOBt se referă la 1-hidroxibezotriazol, THF se referă la tetrahidrofuran, DIEA se referă la diizopropiletilamină, DEAD se referă la azodicarboxilat, PPh3 se referă la trifenilfosfină, DIAD se referă la diizopropil azodicarboxilat, DME se referă la dimetoxietan, DMF se referă la dimetilformamidă, NBS se referă la Nbromsuccinimidă, Pd/C se referă la catalizator paladiu pe carbon, PPA se referă la acid polifosforic, DPPA se referă la difenilfosforilazidă, BOP se referă la hexafluorfosfat de benzotriazol-1 -iloxi-tris (dimetilamino) fosfoniu, TFA se referă la acid trifluoracetic, PCC se referă la eloreromat de piridiniu.
Compușii cu formula I sunt preparați în general prin reacționarea unui compus cu formula IV cu un compus cu formula V:
R^-jJ (V) în care R1 și R2 sunt definiți ca în formula I, cu orice grupare funcțională reactivă protejată, și L1 este OH sau halo;
și după aceasta îndepărtând orice grupare protectoare, și opțional formând o sare acceptabilă farmaceutic.
în mod potrivit, anumiți compuși cu formula I sunt preparați prin reacționarea unui compus cu formula IV cu un compus cu formula VI:
în care R’, R', R, W, Q1, Q2, Q3 și Q4 sunt definiți ca în formula I, cu orice grupare funcțională reactivă protejată;
și după aceasta îndepărtând orice grupare protectoare, și formând opțional o sare acceptabilă farmaceutic.
Preferabil, pentru compușii cu formula VI, Q1, Q2, Q3 și Q4 sunt CH, W este -CH2CH2-, R' este H și R“ este H, alchil sau -C(O)Oalchil C14. în mod adecvat, reacția dintre un compus cu formula IV și un compus cu formula VI este efectuată în prezență de azodicarboxilat de dietil și trifenilfosfină într-un solvent aprotic.
RO 119881 Β1
Suplimentar, anumiți compuși cu formula I sunt preparați reacționând un compus cu 1 formula IV cu un compus cu formula VII:
(IV)
O-
(GR’?)V —W —OH (VII) în care R1, R', R, W, Q1, Q2, Q3 sunt definiți ca în formula I, cu orice grupare reactivă 11 protejată;
și după aceasta îndepărtând orice grupare protectoare, și formând opțional o sare 13 acceptabilă farmaceutic.
Preferabil, pentru compușii cu formula VII, Q1, Q2 și Q3 sunt CH, W este -CH2-CH2-, 15 v este 0, R' este H și R este H sau alchil C14. în mod adecvat, reacția dintre un compus cu formula IV și un compus cu formula VII este efectuată în prezență de azodicarboxilat de dietil 17 și trifenilfosfină într-un solvent aprotic.
Compușii cu formula I sunt preparați prin metodele generale descrise în schemele 19 l-VII:
SshsmaJ 21
RO 119881 Β1
a) 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]piridin-N-oxid, DEAD, (Ph)3P, DMF; b) ciclohexenă,
Pd 10%/C, 2-propanol; c) LiOH 1,0 N, THF, H2O, apoi acidulare.
Compusul 1-1, a cărui preparare urmează procedeele generale descrise de Bondinell și colab. (WO 93/00095), este reacționat cu 2-[(3-hidroxi-1 -propil)amino]piridin-N-oxid într-o reacție de cuplare tip Mitsunobu (Organic Reactions, 1992, 42, 335-656; Synthesis 1981, 1-28) pentru a da I-2. Reacția este mediată de complexul format între azodicarboxilatul de dietil și trifenilfosfină și este efectuată într-un solvent aprotic, de exemplu THF, CH2CI2, sau DMF. Radicalul de piridin-N-oxid al lui I-2 este redus la piridina I-3 corespunzătoare în condiții de hidrogenare de transfer utilizând catalizator de paladiu, preferabil paladiu metalic pe cărbune activ, într-un solvent inert, de exemplu metanol, etanol sau 2-propanol. Drept reactiv de transfer a hidrogenului în acest tip de reacție se utilizează în mod obișnuit ciclohexenă, 1,4-ciclohexadienă, acid formic și săruri ale acidului formic, cum ar fi formiat de potasiu sau formiat de amoniu. Esterul metilic al I-3 este hidrolizat utilizând o bază apoasă, de exemplu LiOH în THF apos, NaOH în metanol sau etanol apos și sarea carboxilat intermediară este acidulată cu un acid adecvat, de exemplu TFA sau HCI, pentru a da acidul carboxilic I-4. în mod alternativ, sarea carboxilat intermediară se poate izola, dacă se dorește, sau o sare carboxilat a acidului carboxilic liber se poate prepara prin metode bine cunoscute specialiștilor în domeniu.
Compușii cu formula I pot fi preparați de asemenea prin metode alternative cunoscute specialiștilor în domeniu. De exemplu, legătura eterică din compușii cu formula I se poate forma reacționând gruparea alcool a compusului cu formula I, din schema I cu un compus R2, care conține o grupare dizlocuibilă, cum ar fi clor, brom sau iod. Se pot folosi și alte reacții formatoare de eter și acestea sunt evidente specialiștilor în domeniu.
RO 119881 Β1
Schema Π a
a) 2-[N-(3-hidroxi-1-propil)-N-(terț-butoxicarbonil)amino]piridin-N-oxid, DEAD, (Ph)3P, DMF;
b) LiHMDS, bromură de 4-trifluormetilbenzil, DMF; c) ciclohexenă, Pd 10%/C, 2-propanol; 41 d) NaOH 1,0 N, MeOH; e) HCI/dioxan.
Compusul 11-1, preparat așa cum s-a descris în schema I, este reacționat cu 2-[N-(3- 43 hidroxi-1 -propil)-N-(-terț-butoxicarbonil)amino]piridin-N-oxid într-o reacție de cuplare de tip
Mitsunobu așa cum s-a descris în schema I. Produsul rezultat, 11-2, poate fi alchilat în poziția 45 (numărătoarea din ciclul benzazepinei) în condiții standard de alchilare bine cunoscute specialiștilor în domeniu. De exemplu, II-2 poate fi tratat cu o bază, cum ar fi hidrură de 47 sodiu, LDA sau hexametildisilazidă de litiu, într-un solvent adecvat, de obicei THF, DMF,
RO 119881 Β1
DME, sau amestec al acestora, pentru a efectua deprotonarea N-H a amidei. Tratarea speciilor anionice rezultate cu un electrofil adecvat, cum ar fi halogenură de alchil sau de benzii, conduce la N-alchilare pentru a da produsul, de exemplu ΙΙ-3, N-oxidul lui II-3 poate fi redus așa cum se descrie în schema I pentru a da II-4, care poate fi saponificat la II-5 așa cum se descrie în schema I. Deprotejarea lui II-5 pentru a da II-6 este realizată în condiții acide standard așa cum este descris de Greene, Grupări protectoare în sinteza organică (publicat de Wiley-lnterscience). Astfel de condiții sunt bine cunoscute specialiștilor în domeniu. în mod alternativ, transformarea lui II-3 în II-6 se poate realiza printr-o secvență alternativă, de exemplu deprotejarea Boc inițială a lui II-3, urmată de reducerea N-oxidului și, în final, de saponificare.
Schema m
RO 119881 Β1
a) 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]piridin-N-oxid, DEAD, (Ph)3P, DMF; b) LiHMDS, CH3I, DMF; 1
c) ciclohexenă, Pd 10%/C, 2-propanol; d) NaOH 1,0 N, MeOH, apoi acidulare.
Compusul III-2 preparat așa cum s-a descris în schema I, poate fi alchilat simultan 3 în ambele poziții, la 2 (numerotarea din ciclul benzazepinei) și la azotul atașat la cicliul de piridină, în condiții standard de alchilare bine cunoscute specialiștilor în domeniu. De exem- 5 piu, III-2 poate fi tratat cu cel puțin 2 echivalenți molari dintr-o bază, cum ar fi hidrură de sodiu, LDA sau hexametildisilazidă de litiu, într-un solvent adecvat, de obicei THF, DMF, DME, 7 sau amestec al acestora, pentru a efectua deprotonarea. Tratarea speciilor anionice rezultate cu un exces dintr-un electrofil adecvat, cum ar fi halogenură de alchil sau benzii, 9 conduce la bis-alchilare pentru a da produsul, de exemplu III-3. Transformarea lui ΙΙΙ-3 în III5 urmează metodele descrise în schemele I și II. 11
Schema IV
>—co2ch3
a) ciclohexenă, Pd 10%/C, 2-propanol; b) HCI/dioxan; c) clorură de -oxo-butilacetil, ET3N,
CH2CI2; d) NaOH 1,0 N, MeOH, apoi acidulare. 47
RO 119881 Β1
Compusul IV-2, preparat din IV-1 prin procedeele schițate în Schemele l-lll, poate fi acilat la atomul de azot atașat la inelul de piridină în condiții standard de acilare bine cunoscute specialiștilor în domeniu. De exemplu, reacția lui IV-2 cu un agent de acilare, cum ar fi clorură de ferf-butilacetil, în prezența unui captator adecvat de acid, în general trietilamină, diizopropiletilamină sau piridină, într-un solvent potrivit, adesea CH2CI2, dă IV-3. Sunt cunoscute multe alte metode de acilare ale unei amine și se pot găsi în cărți standard de referință, cum ar fi Compendium of Synthetic Methods, voi. I-IV (publicat de WileyInterscience). Saponificarea lui IV-3 așa cum s-a descris în schemele l-lll dă IV-4.
Schema V
a) 3-(4-nitrobenzoiloxicarbonilamino-1-propanol, DEAD, (Ph)3P, DMF, CH,CI2; b) H2, Pd/C, EtOH; c) iodhidratde 2-metiltio-2-imidazolină, (i-Pr)2NEt, dimetilacetamidă, 100°C; d) LiOH 1,0 N, THF, H2O, apoi acidulare.
Compusul V-1, preparat așa cum s-a descris în schema I, este reacționat cu o versiune protejată a 3-amino-1-propanolului, cum ar fi 3-(terț-butoxicarbonilamino)-1-propanol, într-o reacție de cuplare de tip Mitsunobu așa cum este descris în schema I. Compusul rezultat, V-2, este deprotejat pentru a da V-3. După cum este binecunoscut specialiștilor în domeniu, condițiile de deprotejare sunt slectate bazat de funcționalitatea și gruparea protectoare prezentă în V-2. De exemplu, gruparea p-nitro-Cbz prezentă în V-2 este îndepărtată prin hidrogenoliză în prezența unui catalizator de paladiu, în general paladiu pe cărbune sau Pd(OH)2 pe cărbune, într-un solvent adecvat, în mod uzual, metanol, etanol, acetat de etil;
RO 119881 Β1 sau amestecuri ale acestora. Dacă se dorește, hidrogenoliza poate fi efectuată în prezența 1 unui acid, de exemplu HCI, pentru a se obține sarea de amoniu corespunzătoare a lui V-2.
Reacția lui V-3 cu iodhidrat de 2-metiltio-2-imidazolină în prezența unei baze, de exemplu, 3 diizopropiletilamină, într-un solvent potrivit, cum ar fi MeOH, EtOH, DMF sau dimetilacetamidă, dă V-4. Condiții similare pentru efectuarea unei transformări asemănătoare sunt 5 descrise în WO 95/32710. Saponificarea pentru a da V-5 este realizată așa cum s-a descris în schema I. 7
SgbcmaJYl
a) 3-(tert-butoxicarbonilamino)-1 -propanol, DEAD, (Ph)3P, DMF, THF; b) TFA, CH2CI2; c) 2- 35 brompirimidină, NaHCO3, EtOH, reflux; d) H2, Pd/C, MeOH, HCI; e) K2CO3, H2O.
Compusul VI-3, preparat din VI-1 prin procedeul schițat în schema V, este reacționat 37 cu o 2-halopirimidină, în general 2-clorpirimidină sau 2-brompirimidină, în prezența unui captator potrivit de acid, în mod obișnuit, bicarbonat de sodiu, trietilamină, diizopropiletilamină, 39 sau piridină, într-un solvent adecvat, cum ar fi etanol, DMF sau dimetilacetamidă, pentru a da VI-4. Ciclul de pirimidină a lui VI-4 este redus la 1,4,5,6-tetrahidropirimidina corespun- 41 zătoare conform condițiilor raportate pentru efectuarea unei astfel de transformări (vezi, de exemplu, WO 95/32710). Astfel, VI-4 este supus hidrogenării în prezența unui catalizator de 43 paladiu, preferabil paladiu pe cărbune activ, într-un solvent adecvat, cum ar fi metanol sau etanol. Reacția este condusă în mod uzual în condiții acide; adăugarea unui acid mineral 45 cum ar fi HCI este în general preferată. VI-5 este obținut după alcalinizarea amestecului de reacție filtrat cu K2CO3 și H2O. 47
RO 119881 Β1
a) NaH, bromură de 4-(trifluormetil)benzil, DMF; b) H2, Pd(OH)2/C, MeOH.
Compusul VII-1, preparat prin procedeele generale descrise de Bondinell și colab., în publicația cererii PCT WO 93/00095, publicată la 9 ianuarie 1993 și de Bondinell și colab., în publicația cererii PCT 94/14776, este reacționat cu bromură de 4-(trifluormetil)benzil în prezența unei baze adecvate, în general hidrură de sodiu sau bis (trimetilsilil) amidă de litiu într-un solvent aprotic, preferabil DMF, THF sau un amestec al acestora, pentru a da produsul b/s-alchilat VII-2. Eterul 4-(trifluormetil)benzil al lui VII-2 poate fi îndepărtat în mod convenabil prin hidrogenoliză pentru a da fenolul VII-3. Metodele pentru hidrogenoliza esterilor benzilici sunt bine cunoscute specialiștilor în domeniu și sunt descrise în volume de referință, de exemplu în Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (publicat de WileyInterscience). Fenolul VII-3 este apoi utilizat pentru a prepara compușii cu formula I utilizând metodele descrise în schemele precedente.
Reactivii de cuplare a amidei așa cum sunt utilizați aici semnifică reactivi care se pot utiliza pentru a forma legătură peptidică. Metodele caracteristice de cuplare folosesc carbodiimide, anhidride și esteri și halogenuri de alchil activate. Sunt caracteristici reactivi cum ar fi EDC, DCC, DPPA, PPA, recativ BOP, HOBt, N-hidroxisuccinimidă și clorură de oxalil.
Metode de cuplare pentru a forma legături peptidice sunt în general binecunoscute specialiștilor în domeniu. Metodele pentru sinteza peptidelor prezentate în general de Bodansky și colab., The practice ofpeptede synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984, Aii și colab., J. Med. Chem., 29,984 (1986) și J.Med. Chem. 30,2291 (1987) sunt în general ilustrative ale tehnicii și sunt încorporate aici prin referire.
în mod caracteristic, amina sau anilina este cuplată prin intermediul grupării amino libere la un substrat de acid carboxilic potrivit utilizând un reactiv de cuplare carbodiimidă potrivit, cum ar fi Ν,Ν-diciclohexil carbodiimidă (DCC), opțional în prezență de catalizatori cum ar fi 1 -hidroxibenzotriazol (HOBt) și dimetilamino piridină (DMAP). Alte metode, cum ar fi formarea de esteri, anhidride sau halogenuri de acil activate ale carboxilului liber al unui substrat acid protejat adecvat, și reacția ulterioară cu amina liberă a unei amine protejate adecvat, opțional în prezența unei baze, sunt de asemenea potrivite. De exemplu, un aminoacid protejat cu Boc sau acid Cbz-amidino benzoic se tratează într-un solvent anhidru, cum ar fi clorură de metilen sau tetrahidrofuran (THF), în prezența unei baze, cum ar fi N-metilmorfolină, DMAP sau trialchilamină, cu cloroformiat de izobutil pentru a forma anhidrida activată, care ulterior este reacționată cu amina liberă a unui al doilea amino acid sau anilinetprotejate.
RO 119881 Β1
Intermediarii utili pentru prepararea compușilor cu formula (I) în care R2 este 1 un benzimidazol sunt descriși de Nestor și colab. în J. Med. Chem. 1984, 27, 320.
Metode reprezentative pentru prepararea compușilor benzimidazol utili ca intermediari în 3 prezenta invenție sunt de asemenea cunoscute în domeniu și se pot găsi de exemplu, în
EP-A-0 381 033. 5
Sărurile de adiție de acid ale compușilor sunt preparate în manieră standard, într-un solvent potrivit, din compusul de bază și un exces de acid, cum ar fi acid clorhidric, brom- 7 hidric, fluorhidric, sulfuric, fosforic, acetic, trifluoracetic, maleic, succinic sau metansulfonic.
Anumiți compuși formează săruri interne sau amfioni care pot fi acceptabili. Săruri cationice9 sunt preparate prin tratarea compusului de bază cu un exces de reactiv alcalin, cum ar fi un hidroxid, carbonat sau alcoxid, care conține cationul potrivit; sau cu o amină organică11 potrivită. Cationi cum ar fi Li+, Na+, K+, Ca++, Mg++ și NH/ sunt exemple specifice de cationi prezenți în săruri acceptabile din punct de vedere farmaceutic.13
Această invenție oferă de asemenea o compoziție farmaceutică care cuprinde un compus conform formulei I și un purtător acceptabil farmaceutic. în consecință, compușii cu15 formula I se pot utiliza la fabricarea unui medicament. Compozițiile farmaceutice ale compușilor cu formula I preparați așa cum s-a descris mai înainte pot fi formulate ca soluții 17 sau pulberi liofilizate pentru administrare parenterală. Pulberile pot fi reconstituite prin adăugarea unui diluant potrivit sau a unui purtător acceptabil farmaceutic înainte de utilizare. 19
Formularea lichidă poate fi o soluție apoasă izotonică, tamponată. Exemple de diluanți potriviți sunt soluție izotonică salină, normală, dextroză standard 5% în apă sau soluție tam- 21 ponată de acetat de sodiu sau amoniu. Asemenea formulare este potrivită în special pentru administrare parenterală, dar poate fi utilizată, de asemenea, pentru administrare orală sau 23 conținută într-un inhalator cu doză măsurată sau într-un nebulizator pentru insultare. Poate fi de dorit să se adauge excipienți cum ar fi polivinilpirolidonă, gelatină, hidroxiceluloză, 25 acacia, polietilenglicol, manitol, clorură de sodiu sau citrat de sodiu.
în mod alternativ, acești compuși pot fi încapsulați, tabletați sau preparați sub formă 27 de emulsie sau sirop pentru administrare orală. Pentru a îmbunătăți sau stabiliza soluția, sau pentru a facilita prepararea compoziției se pot adăuga purtători solizi sau lichizi acceptabili 29 farmaceutic. Purtătorii solizi includ amidon, lactoză, sulfat de calciu dihidrat, anhidrit, stearat de magneziu sau acid stearic, talc, pectină, acacia, agar sau gelatină. Purtătorii lichizi includ 31 sirop, ulei de arahide, ulei de măsline, soluție salină și apă. Purtătorul poate include de asemenea un material cu eliberare susținută cum ar fi monostearat de gliceril sau distearat de 33 gliceril, singur sau cu o rășină. Cantitatea de purtător solid variază, dar, preferabil, va fi între circa 20 mg și 1 g pe unitate de dozaj. Preparatele farmaceutice sunt obținute urmând teh- 35 nici convenționale în farmacie și care implică mărunțirea, amestecarea, granularea și comprimarea, atunci când este necesar, pentru a forma tablete; sau măcinarea, amestecarea 37 și umplerea pentru forme de capsule tari din gelatină. Atunci când se utilizează un purtător lichid, preparatul va fi sub forma unui sirop, elixir, emulsie sau suspensie apoasă sau nea- 39 poasă. O astfel de formulare lichidă poate fi administrată direct p.o. sau poate fi introdusă într-o capsulă moale din gelatină. 41
Pentru administrare rectală, compușii din acestă invenție pot fi de asemenea combinați cu excipienți cum ar fi unt de cacao, glicerină, gelatină sau polietilenglicoli și se mode- 43 lează în formă de supozitor.
Compușii descriși aici sunt antagoniști ai receptorului de vitronectină și sunt utili 45 pentru tratamentul bolilor în care patologia de bază este atribuită ligandului sau celulei care interacționează cu receptorul de vitronectină. De exemplu, acești compuși sunt utili pentru 47 tratarea bolilor în care pierderea matricei osoase crează patologia. Astfel, compușii prezentei
RO 119881 Β1 invenții sunt utili pentru tratarea osteoporozei, hiperparatiroidismului, bolii lui Paget, hipercalcemiei provocată de malignitate, leziunilor osteolitice produse de metastaza osoasă, pierderea osoasă datorată imobilizării sau deficienței de hormon sexual. Compușii conform invenției se crede, de asemenea, că sunt folositori ca agenți antitumorali, anti-angiogenici, antiinflamatori și antimetastazici și că sunt utili pentru tratamentul aterosclerozei și restenozei.
Compusul este administrat unui pacient fie pe cale orală, fie pe cale parenterală, întrun asemenea mod, încât concentrația de medicament să fie suficientă pentru a inhiba resorbția osoasă sau o altă astfel de indicație. Compoziția farmaceutică care conține compusul este administrată într-o doză orală cuprinsă între circa 0,1 și circa 50 mg/kg într-o manieră dependentă de starea pacientului. Preferabil, doza orală va fi de la circa 0,5 la circa 20 mg/kg. Pentru terapia acută, este preferată administrarea orală. O infuzie intravenoasă a peptidei în 5% dextroză în apă sau soluție salină normală, sau o formulare similară cu exciepienți adecvați este cea mai eficientă, deși este de asemenea utilă o injecție bolus intramusculară. în mod caracteristic, doza parenterală va fi de circa 0,01 la circa 100 mg/kg, perferabil între 0,1 și 20 mg/kg, compușii sunt administrați zilnic de la una la patru ori într-o asemenea cantitate, încât să atingă o doză zilnică de la circa 0,4 la circa 400 mg/kg. Nivelul precis și metoda prin care sunt adminstrați compușii se determină cu ușurință de către un specialist cu experiență în domeniu prin compararea nivelului sanguin al agentului față de concentrația cerută pentru a avea efect terapeutic.
Această invenție mai oferă și o metodă pentru tratamentul osteoporozei sau inhibarea pierderii osoase care cuprinde adminstrarea în etape sau în combinație fizică a compusului cu formula (I) și a altor inhibitori ai resorbției osoase, cum ar fi bisfosfonați (adică, allendronat), terapie hormonală de substituție, antiestrogeni sau calcitonină. în plus, această invenție furnizează o metodă de tratament utilizând un compus din această invenție și un agent anabolic, cum ar fi proteina morfogenică din oase, iproflavonă, utilă pentru prevenirea pierderii și/sau măririi masei osoase.
în plus, această invenție furnizează o metodă de inhibare a dezvoltării tumorii care cuprinde administrarea în etape sau în combinație fizică a unui compus cu formula I și a unui agent antineoplazic. Compușii din clasa analogilor de camptotecin, cum ar fi topotecan, irinotecan și 9-aminocamptotecin și complecși de coordinare a platinei cum ar fi cisplatin, ormaplatin și tetraplatin sunt grupe bine cunoscute de agenți antineoplazici. Compușii din clasa camptotecinului sunt descriși în brevetele US 5004758,4604463,4473692,4545880, 4342776,4513138,4399276, publicațiile de brevet EP 0418099 și 0088642, Wani și colab., J. Med. Chem., 1986,29,2358, Wani și colab., J.Med Chem., 1980,23,554, Wani și colab., J. Med. Chem., 1987, 30, 1774 și Nitta și colab., Proc. 14th Internațional Congr. Chemotherapy., 1985, AnticancerSection i, 28, a căror întreagă descriere este prin aceasta încorporată aici prin referință. Complexul de coordinare a platinei, cisplatin, este disponibil sub denumirea de Platinol ® de la Bristol Myers-Squibb Corporation. Formulări utile pentru cisplatin sunt descrise în brevetele US 5562925 și US 4310515, a căror întreagă descriere este prin aceasta încorporată aici prin referință.
în metoda de inhibare a dezvoltării tumorii, care cuprinde administrarea în etape sau în combinație fizică a unui compus cu formula I și a unui agent antineoplazic, compusul de coordinare al platinei, de exemplu cisplatinul, se poate administra utilizând infuzie intravenoasă lentă. Purtătorul preferat este soluție dextroză/salină care conține manitol. Schema dozei de compus de coordinare a platinei poate fi, pe o bază, de la circa 1 la circa 500 mg pe metru pătrat (mg/m2) a suprafaței ariei corpului în cursul tratamentului. Infuzia compusului de coordinarea a platinei se poate da o dată sau de două-orrpe-săptămână și tratamentele
RO 119881 Β1 săptămânale se pot repeta de mai multe ori. Utilizând un compus din clasa analogilor de 1 camptotecin într-o administrare parenterală, cursul terapiei folosite în general este de la circa
0,1 la circa 300,0 mg/m2 de suprafață a corpului pe zi, timp de cinci zile consecutiv. Cel mai 3 preferat, cursul terapiei folosit pentru topotecan este de la circa 1,0 la circa 2,0 mg/m2 de suprafață a corpului pe zi, timp de circa cinci zile consecutiv. Preferabil, cursul terapiei este 5 repetat cel puțin o dată la un interval de la circa șapte la douăzeci și opt de zile.
Compoziția farmaceutică poate fi formulată atât cu compusul cu formula I, cât și cu 7 agentul antineoplazic în același recipient, dar este preferată formularea în recipiente diferite.
Atunci când ambii agenți sunt administrați sub formă de soluție, aceștia pot fi conținuți într-un 9 sistem infuzie/injecție pentru administrare simultană sau în aranjament în tandem.
Pentru administrare corespunzătoare a compusului cu formula I și a agentului anti- 11 neoplazic deodată sau la momente diferite, este preparată o trusă cuprinzând, într-un singur recipient, cum ar fi o cutie, un recipient de carton sau alt recipient, sticle separate, săculeți, 13 fiole sau alte recipiente individuale, având fiecare o cantitate eficientă din compusul cu formula I pentru administrare parenterală, așa cum s-a descris mai sus, și o cantitate eficientă 15 de agent antineoplazic pentru administrare parenterală, așa cum s-a descris mai sus. O astfel de trusă cuprinde, de exemplu, ambii agenți farmaceutici în recipiente separate sau 17 în același recipient, opțional ca tampoane liofilizate și recipiente cu soluții pentru reconstituire. O variantă a acesteia este de a include soluția pentru reconstituire și tamponul liofilizat 19 în două încăperi ale unui singur recipient, care pot fi amestecate înainte de utilizare. Cu un astfel de aranjament, agentul antineoplazic și compusul conform invenției pot fi ambalate 21 separat, în două recipiente, sau pot fi liofilizate împreună sub formă de pulbere și furnizate într-un singur recipient. 23
Atunci când ambii agenți sunt preparați sub formă de soluție, aceștia pot fi conținuți într-un sistem de infuzie/injecție pentru administrare simultană sau într-un aranjament în 25 tandem. De exemplu, compusul cu formula I poate fi în formă injectabilă i.v., sau într-o pungă sac de infuzie legată în serie, prin tuburi, la agentul antineoplazic aflat într-o a doua 27 pungă de infuzare. Utilizând un astfel de sistem, un pacient poate primi o injecție sau infuzie inițială de tip bolus sau cu compusul cu formula I, urmată de o infuzie cu agent antineoplazic. 29
Compușii pot fi testați prin unul sau mai multe teste biologice pentru a determina concentrația de compus care este necesară pentru a avea un efect farmacologic dat. 31
Inhibarea legării vitronectinei
Fază-solidă [3H]-SK&F-107260 se leagă la ανβ3: ανβ3 din placentă umană sau 33 trombocite umane (0,1-0,3 mg/ml) în tampon T (care conține 2mM CaCI2 și 1% octiglucozidă) s-a diluat cu tampon T care conține 1 mM CaCI2, 1 mM MnCI2, 1mM MgCI2 (tampon 35 A) și 0,05% NaN3 și apoi imediat sunt adăugate pe plăci ELISA cu 96 de godeuri (Corning, New York, NY) câte 0,1 ml în fiecare godeu. în fiecare godeu se adăugă 0,1-0,2 pg ανβ3. 37 Plăcile se incubează peste noapte la 4°C. în momentul experimentului, godeurile sunt spălate o dată cu tampon A și sunt incubate cu 0,1 ml de albumină serică de bovină în același 39 tampon, timp de 1 h la temperatura camerei. După incubare godeurile sunt aspirate complet și spălate de două ori cu 0,2 ml de tampon A. 41
Compușii sunt dizolvați în DMSO 100% pentru a da o soluție mumă de 2mM care este diluată cu tampon de legare (15 mM Tris-HCI (pH 7,4), 100 mM NaCI, 1 mM CaCI2, 1 43 mM MnCI2,1 mM MgCI2) la o concentrație finală de compus de 100 μΜ. Această soluție este apoi diluată până la concentrația finală de compus cerută. în godeuri sunt adăugate în 45 triplicat diverse concentrații (0,001 -100 μΜ) de antagoniști nemarcați, urmată de adăugarea a 5,0 nM de [3H]-SK&F-107260 (65=B6OT/mmol). 47
RO 119881 Β1
Plăcile sunt incubate timp de 1 h la temperatura camerei. După incubare, godeurile sunt aspirate complet și spălate o dată cu 0,2 ml de tampon A, răcit cu gheață, godeu cu godeu. Receptorii sunt solubilizați cu 0,1 ml de SDS 1% și este determinat [3H]-SK&F107260 legat, prin numărare prin scintilație cu lichid cu adăugarea a 3 ml de Ready Safe într-un aparat Beckman LS Liquid Scintillation, counter cu eficiență de 40%. Legarea nespecifică a [3H]-SK&F-107260 este determinată în prezență de 2 μΜ de SK&F-107260 și este în mod constant mai mică de 1 % din totalul radioligandului adăugat. IC50 (concentrația de antagonist pentru a inhiba cu 50% legarea [3H]-SK&F-107260) este determinată printr-o metodă de rutină, de potrivire la curba nelineară a celor mai mici pătrate, care a fost modificată față de programul LUNDON-2. Se calculează Ki (constanta de disociere a antagonistului) conform ecuației: K, = IC50/ (1+L/KJ, unde L și Kd sunt concentrația și respectiv constanta de disociere a [3H]-SK&F-107260.
Compușii din prezenta invenție inhibă legarea vitronectinei la SK&F-107260 în intervalul de concentrații micromolare de la circa 4,0 la circa 0,0003.
Compușii din prezenta invenție sunt de asemenea testați pentru determinarea resorbției osoase in vitro și in vivo în teste standard în domeniu pentru evaluarea inhibării formării substanței osoase, precum testul de formare a adânciturilor descris în EP 528587, care se poate realiza de asemenea utilizând osteoclaste umane în locul osteoclastelor de șobolan, și modelul de șobolan cu ovarectomie descris de Wronski și colab., Cell and Materials 1991, Supl. 1,69-74.
Testul de migrare a celulelor de mușchi neted vascularizat
S-au utilizat celule de mușchi neted aortic de șobolan sau uman. Migrarea celulelor este monitorizată în camera de cultură celulară de tip Transwell prin utilizarea unei membrane de policarbonat cu pori de 8 um (Costar). Suprafața inferioară a filtrului a fost acoperită cu vitronectină. Celulele sunt suspendate în DMEM suplimentat cu 0,2% albumină serică de bovină într-o concentrație de 2,5-5,0 x 106celule/ml și sunt pretratate cu compus de testat în concentrații diferite, timp de 20 de min la 20°C. Drept control este utilizat solventul singur. 0,2 ml de suspensie de celule sunt introduse în compartimentul superior al camerei. Compartimenul inferior conține 0,6 ml de DMEM suplimentat cu 0,2% albumină serică de bovină. Incubarea se realizează la 37’C într-o atmosferă din 95% aer/5% CO2 timp de 24 ore. După incubare, celulele care nu au migrat pe suprafața superioară a filtrului sunt îndepărtate prin răzuire ușoară. Filtrul este apoi fixat în metanol și este colorat cu 10% Giemsa (soluție de colorare). Migrarea este măsurată fie prin a) numărarea celulelor care au migrat pe suprafața inferioară a filtrului, fie prin b) extragerea celulelor colorate cu acid acetic 10% urmată de deteminarea absorbantei la 600 nM.
Model de șobolan tiroparatiroidectomizat
Fiecare grup de experiment constă din 5-6 șobolani adulți rasa Sprague-Dawley (250-400 g greutate corporală). Șobolanii sunt tiroparatiroidectomizați (de către comerciant, Taconic Farms) cu șapte zile înainte de utilizare în experiment. Toți șobolanii primesc câte o doză de tiroxină la fiecare 3 zile. La primire șobolanilor li se măsoară nivelurile de calciu ionizat care circulă în sânge, imediat după ce li s-a extras prin venipuncție a cozii, în tuburi heparinizate. Șobolanii sunt incluși dacă nivelul de Ca ionizat (măsurat cu un analizor CibaCorning model 634 a pH-ului pentru calciu) este <1,2 mM/Ι. Fiecare șobolan este prevăzut cu un cateter interior, venos și arterial, pentru eliberarea materialului de testat și respectiv pentru luarea de probe de sânge. Șobolanii sunt apoi puși pe o dietă alimentară fără calciu și apă deionizată. Nivelurile de bază ale Ca sunt măsurate și fiecărui șobolan i se administrează fie vehicol de control, fie peptidă 1 -34 a hormonului paratiroidian uman (hPTHI-34,
RO 119881 Β1 doză 1,25 pg/kg/h în soluție salină/0,1% albumină serică de bovină, Bachem, Ca) sau un 1 amestec de hPTHI-34 și material de testat, prin infuzie intravenoasă continuă prin cateterul venos utilizând o seringă cu piston extern. Răspunsul calcemic a fiecărui șobolan este 3 măsurat la intervale de două h în timpul perioadei de infuzie de 6-8 ore.
Testul de resorbție și adeziune a osteoclastelor umane 5
Testele de resorbție și adeziune a eroziunilor au fost inițiate și standardizate utilizând osteoclaste umane normale provenind de la țesut osteoblastoma. Testul 1 a fost realizat 7 pentru măsurarea volumelor eroziunilor osteoclastelor prin microscopie confocală cu laser.
Testul 2 a fost realizat ca o selecție de mare trecere în care fragmentele de colagen (elibe-9 rate în timpul resorbției) sunt măsurate prin analiza competitivă ELISA.
Testul 1 (utilizând microscopie confocală cu laser)11
Părțile alicote de suspensie de celule provenind de la osteoclastom uman sunt îndepărtate de la conservare în azot lichid, se încălzesc rapid la 37°C și se spală o dată cu 13 mediu RPMI-1640 prin centrifugare (1000 rpm, 5 min la 4’C).
Mediul este aspirat și înlocuit cu anticorp anti-HLA-DR murin, apoi se diluează 1:315 în mediul RPMI-1640. Suspensia este incubată timp de 30 de min pe gheață și se omogenizează permanent.17
Celulele se spală de două ori cu RMPI-1640 rece urmată de centrifugare (1000 rpm, min la 4°C) și celulele sunt apoi transferate într-un tub steril de centrifugare de 15 ml. 19 Numărul de celule mononucleare se determină într-o cameră de numărare Neubauer perfecționată.21
Suficiente perle magnetice (5/celulă mononucleară), acoperite cu Ig-G anti-șoarece de capră (Dynal.Great Neck, NY) se îndepărtează din sticlele lor de depozitare și se introduc 23 în 5 ml de mediu proaspăt (acesta îndepărtează conservantul azidic care este toxic). Mediul este îndepărtat prin imobilizarea perlelor pe un magnet și se înlocuiește cu mediu proaspăt. 25
Perlele sunt amestecate cu celulele și suspensia este incubată timp de 30 min pe gheață. Suspensia este omogenizată permanent. 27
Celulele acoperite cu perle sunt imobilizate pe un magnet și celulele care rămân (fracția bogată în osteoclaste) se decantează într-un tub steril de centrifugare de 50 ml. 29
La celulele acoperite cu perle se adaugă mediu proaspăt pentru a dislocui orice osteoclaste captate. Acest proces de spălare este repetat de 10 ori. Celulele acoperite cu 31 perle sunt descărcate.
Osteoclastele viabile sunt numărate într-o cameră de numărare, utilizând diacetat de 33 fluoresceină pentrua marca celulele vii. Se utilizează o pipetă Pasteur din plastic cu orificiu mare pentru a adăuga proba în camera de numărare. 35
Osteoclastele sunt peletizate prin centrifugare și densitatea se ajustează la numărul potrivit în mediu EMEM (numărul de osteoclaste variază de la tumoră la tumoră), suplimentat 37 cu 10% ser fetal de vițel și 1,7 g/l bicarbonat de sodiu.
Părțile alicote de 3 ml de suspensie de celule (pentru fiecare compus pentru trata- 39 ment) se decantează în tuburi de centrifugare de 15 ml. Celulele sunt peletizate prin centrifugare. 41
La fiecare tub se adaugă 3 ml din compusul pentru tratament adecvat (diluat la uM în mediu EMEM). Se includ de asemenea controale potrivite cu vehicol, un control 43 pozitiv (anticorp monoclonal murinic pentru receptor anti-vitronectină [87MEM1] diluat la
100 pg/ml) și un control cu izotop (lgG23 diluat la 100 pM/ml). Probele sunt incubate la 37°C 45 timp de 30 min.
RO 119881 Β1
Părțile alicote de 0,5 ml de celule sunt însămânțate pe fâșii sterile de dentină pe o placă cu 48 de godeuri și se incubează la 37’C timp de 2 h. Fiecare tratament este realizat în patru exemplare.
Fâșiile sunt spălate de șase ori cu PBS cald (10 ml/godeu pe o placă cu 6 godeuri) și apoi se introduce în mediul proaspăt care conține compusul pentru tratament sau probele de control. Probele se incubează la 37°C timp de 48 h.
Procedura cu fosfatază acidă rezistentă la tartrat (TRAP) (colorare selectivă pentru celulele cu origine de osteoclaste)
Bucățile subțiri de os care conțin osteoclastele atașate sunt spălate în soluție salină tamponată cu fosfat și se fixează în 2% glutaraldehidă (în 0,2 M cacodilat de sodiu) timp de 5 min.
Acestea se spală în apă și se incubează timp de 4 min în soluție tampon TRAP la 37°C (0,5 mg/ml naftol AS-BI fosfat, dizolvat în Ν,Ν-dimetilformamidă și amestecat cu 0,25 M tampon citrat, pH 4,5), conținând 10 mM tartrat de sodiu.
După o spălare în apă rece bucățile subțiri sunt imersate în tampon acetat rece (0,1 M, pH 6,2) conținând 1 mg/ml roșu granat rapid și se incubează la 4°C timp de 4 min.
Excesul de tampon este aspirat și apoi bucățile subțiri sunt uscate la aer după o spălare în apă.
Osteoclastele TRAP pozitive (precipitat roșu cărămiziu/purpuriu) sunt numărate prin microscopie în câmp luminos și sunt apoi îndepărtate de pe suprafața dentinei prin sonicare.
Se determină volumele eroziunilor utilizând un microscop confocal Nikon/Lasertec ILM21W.
Testul 2 (utilizând o interpretare ELISA)
Osteoclastele umane sunt îmbogățite și preparate pentru testarea compușilor așa cum s-a descris în cele 9 etape inițiale ale Testului 1. Pentru claritate, aceste etape sunt repetate mai jos.
Părțile alicote de suspensie de celule provenind de la osteoclastom uman sunt îndepărtate de la conservare în azot lichid, se încălzesc rapid la 37°C și se spală o dată cu mediu RPMI-1640 prin centrifugare (1000 rpm, 5 min la 4°C).
Mediul este aspirat și înlocuit cu anticorp anti-HLA-DR murin, apoi se diluează 1:3 în mediul RPMI-1640. Suspensia este incubată timp de 30 de min pe gheață și se omogenizează permanent.
Celulele se spală de două ori cu RMPI-1640 rece urmată de centrifugare (1000 rpm, 5 min la 4°C) și celulele sunt apoi transferate într-un tub steril de centrifugare de 15 ml. Numărul de celule mononucleare se determină într-o cameră de numărare Neubauer perfecționată.
Suficiente perle magnetice (5/celulă mononucleară), acoperite cu Ig-G anti-șoarece de capră (Dynal,Great Neck, NY) se îndepărtează din sticlele lor de depozitare și se introduc în 5 ml de mediu proaspăt (acesta îndepărtează conservantul azidic care este toxic). Mediul este îndepărtat prin imobilizarea perlelor pe un magnet și se înlocuiește cu mediu proaspăt.
Perlele sunt amestecate cu celulele și suspensia este incubată timp de 30 de min pe gheață. Suspensia este omogenizată permenent.
Celulele acoperite cu perle sunt imobilizate pe un magnet și celulele care rămân (fracția bogată în osteoclaste) se decantează într-un tub steril de centrifugare de 50 ml.
La celulele acoperite cu perle se adaugă mediu proaspăt pentru a dislocui orice osteoclaste captate. Acest proces de spălare este repetat de 10 ori. Celulele acoperite cu perle sunt descărcate.
RO 119881 Β1
Osteoclastele viabile sunt numărate într-o cameră de numărare, utilizând diacetat de 1 fluoresceină pentrua marca celulele vii. Se utilizează o pipetă Pasteur din plastic cu orificiu mare pentru a adăuga proba în camera de numărare. 3
Osteoclastele sunt peletizate prin centrifuagre și densitatea se ajustează la numărul potrivit în mediu EMEM (numărul de osteoclaste variază de la tumoră la tumoră), suplimentat 5 cu 10% ser fetal de vițel și 1,7 g/l bicarbonat de sodiu.
Spre deosebire de metoda descrisă mai sus în Testul 1, compușii sunt selectați la 7 doze pentru a se obține un IC50, așa cum se arată mai jos.
Preparatele de osteoclaste sunt preincubate timp de 30 de min la 37‘C cu compușii 9 de testat (4 doze) sau cu controale.
Acestea se însămânțează pe bucăți subțiri de os cortical de bovină în godeurile unei 11 plăci de cultură de țesut cu 48 de godeuri și se incubează timp de încă 2 h la 37*C.
Bucățile subțiri de os sunt spălate de șase ori cu soluție salină caldă, tamponată cu 13 fosfat (PBS), pentru a îndepărta celulele neaderente, și apoi se returnează în godeurile unei plăci cu 48 godeuri conținând compușii sau controalele proaspete. 15
Placa cu cultura de țesut este apoi incubată timp de 48 de h la 37°C.
Supernatanții din fiecare godeu se aspiră în tuburi individuale și se selectează într-o 17 analiză ELISA competitivă care detectează c-telopeptida din colagen de tip I care este eliberată în timpul procesului deresorbție. Acesta este o analiză ELISA accesibilă comercial 19 (Osteometer, Danemarca) care conține un anticorp de iepure care reacționează specific cu o secvență de 8 aminoacizi (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg), care este prezentă în 21 telopeptida cu carboxi terminal a colagenului de tip I cu catenă-a1. Rezultatele sunt exprimate ca % de inhibare a resorbției comparativ cu un vehicol control. 23
Testul de adeziune a osteoclastelor umane
Osteoclastele umane sunt îmbogățite și preparate pentru testarea compusului așa 25 cum s-a descris mai sus în cele 9 etape inițiale ale testului 1. Pentrru claritate, aceste etape sunt repetate mai jos. 27
Părțile alicote de suspensie de celule provenind de la osteoclastom uman sunt îndepărtate de la conservare în azot lichid, se încălzesc rapid la 37°C și se spală o dată cu mediu 29 RPMI-1640 prin centrifugare (1000 rpm, 5 min la 4’0).
Mediul este aspirat și înlocuit cu anticorp anti-HLA-DR murin, apoi se diluează 1:331 în mediul RPMI-1640. Suspensia este incubată timp de 30 de min pe gheață și se omogenizează permanent.33
Celulele se spală de două ori cu RMPI-1640 rece urmată de centrifugare (1000 rpm, min la 4°C) și celulele sunt apoi transferate într-un tub steril de centrifugare de 15 ml. 35
Numărul de celule mononucleare se determină într-o cameră de numărare Neubauer perfecționată.37
Suficiente perle magnetice (5/celulă mononucleară), acoperite cu Ig-G anti-șoarece de capră (Dynal.Great Neck, NY) se îndepărtează din sticlele lor de depozitare și se introduc 39 în 5 ml de mediu proaspăt (acesta îndepărtează conservantul azidic care este toxic). Mediul este îndepărtat prin imobilizarea perlelor pe un magnet și se înlocuiește cu mediu proaspăt. 41
Perlele sunt amestecate cu celulele și suspensia este incubată timp de 30 min pe gheață. Suspensia este omogenizată permanent. 43
Celulele acoperite cu perle sunt imobilizate pe un magnet și celulele care rămân (fracția bogată în osteoclaste) se decantează într-un tub steril de centrifugare de 50 ml. 45
La celulele acoperite cu perle se adaugă mediu proaspăt pentru a dizlocui orice osteoclaste captate. Acest proces de spălare este repetat de 10 ori. Celulele acoperite cu 47 perle sunt descărcate.
RO 119881 Β1
Osteoclastele viabile sunt numărate într-o cameră de numărare, utilizând diacetat de fluoresceină pentru a marca celulele vii. Se utilizează o pipetă Pasteur din plastic cu orificiu mare pentru a adăuga proba în camera de numărare.
Osteoclastele sunt peletizate prin centrifugare și densitatea se ajustează la numărul potrivit în mediu EMEM (numărul de osteoclaste variază de la tumoră la tumoră), suplimentat cu 10% ser fetal de vițel și 1,7 g/l bicarbonat de sodiu.
Osteoclastele provenite de la osteclastoma sunt preincubate cu compus (4 doze) sau cu controale la 37”C timp de 30 minute.
Celulele sunt apoi însămânțate pe bucăți acoperite cu osteopontina (osteopontină umană sau de șobolan, 2,5 ug/ml) și sunt incubate timp de 2 h la 37°C.
Celulele neaderente sunt îndepărtate prin spălarea viguroasă a bucăților în soluție salină tamponată cu fosfat și celulele care rămân pe bucăți sunt fixate în acetonă.
Osteoclastele sunt colorate pentru fosfatază acidă rezistentă la tartrat (TRAP), un marker selectiv pentru celulele acestui fenotip (vezi etapele 15-17) și sunt numărate prin microscopie simplă. Rezultatele sunt exprimate ca % de inhibare a adeziunii comparativ cu un vehicol de control.
Testul de adeziune celulară
Celule și culturi de celule
Celule de rinichi de embrion uman (celule HEK 293) au fost obținute de la ATCC (număr catalog CRL 1573). Celulele au fost crescute în mediu esențial minim al lui Earl (EMEM), mediu conținând sărurile lui Earl, 10% ser fetal de bovină, 1% glutamină și 1% penicilină-Streptomicină.
Construcții și transfecții
Un fragment de 3,2 kb EcoRJ-Kpnl a subsunității av și un fragment de 2,4 kb XbalXhol a subunității β3 sunt inserate pe situsurile de donare Ecol-EcoRV a vectorului pCDN (Aiyar și colab., 1994) care conține un promotor CMV și un marker G418 selectabil prin ligarea capetelor tăiate. Pentru exprimarea stabilă, 80 x 10® celule HEK 293 sunt electrotransformate cu construcți αν + β3 (20 pg DNA din fiecare subunitate) utilizând un Gene Pulser (Hensley și colab., 1994) și sunt aplicate pe plăci de 100 mm (5 x 105 celule/placă). După 48 de ore, mediul de dezvoltare este suplimentat cu 450 pg/ml Geneticin (G418 Sullfat, GEBCO-BRL, Bethesda, MD). Celulele sunt menținute în mediul de selecție până când coloniile sunt destul de mari pentru a fi testate.
Analiza imunochimică a celulelor trasfectate
Pentru a determina dacă transfectanții HEK 293 exprimă receptorul de vitronectină, celulele sunt imobilizate pe plăci microscopice din sticlă prin centrifugare, fixate în acetonă timp de 2 min la temperatura camerei și uscate cu aer. Reactivitatea specifică cu 23C6, un anticorp monoclonal specific pentru complexul ανβ3 este demonstrată utilizând o metodă standard de imunofluorescență indirectă.
Studii de adeziune a celulei
Plăci granulare Elisa cu 96 de godeuri sunt preacoperite peste noapte la 4“C cu 0,1 ml de vitronectină umană (0,1 pg/ml în mediu RPMI). în momentul experimentului, plăcile sunt spălate o dată cu mediu RPMI și sunt blocate cu 3,5% BSA în mediu RPMI timp de 1 h la temperatura camerei. Celulele 293 transfectate sunt resuspendate în mediu RPMI, suplimentat cu 20 mM Hepes pH 7,4 și 1% BSA la o densitate de 0,5 x 106 celule/ml. în fiecare godeu se adăugă 0,1 ml de suspensie de celule și sunt incubate timp de 1 h la 37°C, în prezența sau absența a diverși antagoniști de ανβ3. După incubare se adăugă 0,025 ml dintr-o soluție 10% de formaldehidă, pEU7,4 și celulele sunt fixate la temperatura camerei
RO 119881 Β1 timp de 10 min. Plăcile sunt spălate de trei ori cu 0,1 ml de mediu RPMI și celulele aderente 1 sunt colorate cu 0,1 ml de albastru de toluidină 0,5% timp de 20 de min la temperatura camerei. Excesul de colorant este îndepărtat prin spălare din belșug cu apă deionizată. 3
Albastrul de toluidină incorporat în celule este eluat prin adăugarea a 0,1 ml de etanol 50% care conține HCI 50 mM. Adeziunea celulelor este determinată cantitativ la o densitate optică 5 de 600 nm pe un cititor pentru plăci de microtitrare (Titertek Multiskan MC, Sterling, VA).
Test de legare a ανβ3 în fază solidă7
Receptorul de vitronectină ανβ3 este purificat din placentă umană. Preparatul de receptor este diluat cu 50 mM Tris-HCI, pH 7,5, 100 mM NaCI, 1 mM CaCI2, 1 mM MnCI2,9 mM MgCI2 (tampon A) și se adăugă imediat la o placă ELISA cu 96 de godeuri, câte 0,1 ml în fiecare godeu. în fiecare godeu se adăugă 0,1-0,2 pg de ανβ3. Plăcile sunt incubate11 peste noapte la 4°C. în momentul experimentului godeurile sunt spălate o dată cu tampon
A și sunt incubate cu 0,1 ml de albumină serică de bovină 3,5%, în același tampon, timp de 13 h la temperatura camerei. După incubare godeurile sunt aspirate complet și sunt spălate de două ori cu 0,2 ml tampon A.15 într-un test de comparație cu [3H]-SK&F-107260, în godeuri sunt adăuge diverse concentrații de antagoniști nemarcați (0,001 -100 uM), urmată de adăugarea a 5,0 nM de [3HJ-17
SK&F-107260. Plăcile sunt incubate timp de 1 h la temperatura camerei. După incubare godeurile sunt aspirate complet și spălate o dată cu 0,2 ml de tampon A răcit cu gheață 19 godeu în godeu. Receptorii sunt solubilizați cu 0,1 ml de SDS 1% și legarea lui [3H]-SK&F107260 este determinată prin numărătoare cu lichid de scintilație cu adăugarea a 3 ml de 21 Ready Safe în Beckman LS 6800 Liquid Scintillation Counter, cu eficiență de 40%. Legarea nespecifică a [3H]-SK&F-107260 este determinată în prezența a 2 μΜ de SK&F-107260 și 23 a fost în mod constant mai puțin de 1% din totalul de radioligand introdus. ICgo (concentrația de antagonist pentru a inhiba cu 50% legarea lui [3H]-SK&F-107260) este determinată printr- 25 o metodă de rutină de potrivire, la curba nelineară a celor mai mici pătrate, care este modificată față de programul LUNDON-2. Se calculează K, (constanta de disociere a 27 antagonistului) conform ecuației lui Cheng și Prusoff: K, = IC^ (1+L/KJ, unde L și sunt concentrația și constanta de disociere a [3H]-SK&F-107260 respectiv. 29
Inhibarea legării GP-llb-llla mediată de RGD
Purificarea GPIIb-llla 31
Zece unități de trombocite umane spălate expirate (obținute de la Crucea Roșie) sunt lizate prin agitare ușoară în 3% octilglucozidă, 20 mM Tris-HCI, pH 7,4,140 mM NaCI, 2 mM 33 CaCI2 la 4*C timp de 2 h. Uzatele sunt centrifugate la 100000 r timp de 1 h. Supernatanti il obținut este aplicat pe o coloană 4B de 5 ml cu lentil lectin sefaroză (E.Y.Labs) preechilibrată 35 cu 20 mM Tris-HCI, pH 7,4,100 mM NaCI, 2 mM CaCI2,1% octilglicozidă (tampon A). După h de incubare, coloana este spălată cu 50 ml de tampon A rece. GPIIb-llla reținut de 37 lectină este eluat cu tampon A conținând 10% dextroză. Toate procedurile sunt efectuate la 4°C. GPIIb-llla obținut are puritate >95% după cum s-a constatat prin electroforeză pe gel 39 de poliacrilamidă SDS.
încorporarea GPIIb-llla în lipozomi 41
Un amestec din 70 % fosfatidilserină și 30% fosfatidilcolină (Avânți Polar Lipids) este uscat pe pereții unui tub de sticlă sub curent de azot. GPIIb-llla purificat este diluat la o con- 43 centrație finală de 0,5 mg/ml și este amestecat cu fosfolipidele într-un raport proteină :fosfolipidă de 1:3 (g:g). Amestecul este resuspendat și sonicat pe o baie de sonicare 45 timp de 5 minute. Amestecul este apoi dializat peste noapte utilizând un tubaj de dializă, subțire din masă plastică, secționat, cu 12.000-14.000 greutate moleculară împotriva unui 47
RO 119881 Β1 exces de 1000 ori din 50 mM Tris-HCI, pH 7,4, 100 mM NaCI, 2 mM CaCI2 (cu două schimbări). GPIIb-llla conținând lipozomi este centrifugat la 12.000 r timp de 15 min și este resuspendat în tamponul de dializă la o concentrație finală de proteină de aproximativ mg/ml. Lipozomii sunt depozitați la -70’C atât timp cât este necesar.
Legarea competitivă la GPIIb-llla
Legarea la receptorul de fibrinogen (GPIIb-llla) este testată printr-o metodă de legare competitivă indirectă utilizând [3H]-SK&F-107260 ca ligand de tip RGD. Testul de legare este realizat pe un ansamblu de plăci de filtrare cu 96 de godeuri (Millipora Corporation, Bedford, MA) utilizând membrane durapor hidrofile de 0,22 um. Godeurile sunt preacoperite cu 0,2 ml din 10 pg/ml polilizină (Sigma Chemical Co., St Luis, MO) la temperatura camerei timp de 1 h pentru a bloca legarea nespecifică. în godeuri se adăugă concentrații diferite de benzazepine nemarcate, în patru exemplare. Se aplică [3H]-SK&F-107260 în fiecare godeu într-o concentrație finală de 4,5 nM, urmată de adăugarea a 1 pg de lipozomi conținând GPIIb-llla din trombocite purificate. Amestecul este incubat timp de 1 h la temperatura camerei. GPIIb-llla legat la [3H]-SK&F-107260 este separat de cel nelegat prin filtrare utilizând un multiplicator de filtrare Millipore, urmată de spălare cu tampon răcit cu gheață (de 2 ori, câte 0,2 ml). Radioactivitatea legată care rămâne pe filtre este măsurată în 1,5 ml de Ready Solve (Beckman Instruments, Follerton, CA) într-un Beckman Liquid Scintillation Counter (Model LS6800), cu eficiență de 40%. Legarea nespecifică este determinată în prezența a 2 μΜ de SK&F-107260 nemarcat și a fost în mod constant mai puțin de 0,14% din radioactivitatea totală adăugată la probe. Toate datele obținute reprezintă media celor patru determinări.
Rezultatele legării competitive sunt analizate prin procedura de potrivire la curba nelineară a celor mai mici pătrate. Această metodă dă IC50 a antagoniștilor (concentrația de antagonist care inhibă legarea specifică a [3H]-SK&F-107260 prin 50% la echilibru). IC50 este legat de constanta de disociere la echilibru (Ki) a antagonistului pe baza ecuației lui Cheng și Prusoff: Ki = IC50/(1 tl_/Kd)m unde L este concentrația de [3H]-SK&F-107260 utilizată în testul de legare competitivă (4,5 nM) și Kd este constanta de disociere a [3HJSK&F-107260 care este 4,5 nM după cum s-a determinat prin analiza Scatchard.
Compușii preferați din această invenție au afinitate pentru receptorul de vitronectină comparativ cu receptorul de fibrinogen mai mare de 10:1. Compușii cei mai preferați au un raport de activitate mai mare de 100:1.
Eficaciența compușilor cu formula I singuri sau în combinație cu un agent antineoplazic poate fi determinată utilizând anumite modele tumorale transplantabile la șoarece. Vezi brevetele US 5004758 și 5633016 pentru detalii privind aceste modele.
Se dau în continuare exemple de realizare a invenției.
Exemple. Generalități
Spectrele de rezonanță magnetică nucleară de 1H (RMN) sunt înregistrate fie la 250, fie la 400 MHz. Deplasările chimice sunt raportate în părți per milion (d) linia de bază a standardului intern terametilsilan (TMS). Abrevierile pentru datele RMN sunt după cum urmează: s = singlet; d = dublet; t = triplet; q = cvartet; m = multiplei; dd = dublet al dubleților; dt = dublet al tripleților, app = apparent; br = larg. J indică, constanta de cuplare RMN măsurată în Herți. CDCI3 este deuterocloroform, DMSO-d6 este hexadeuteroddimetilsulfoxid și CD3OD este hexadeuterometanol. Spectrele în infraroșu (IR) sunt înregistrate în transmitere și pozițiile benzilor sunt raportate în numere a lungimilor de undă inverse (cm1). Spectrele de masă sunt obținute utilizând tehnici de electropulverizare (ES) sau de ionizare FAB. Analizele elementare sunt efectuate fie local, fie de Quantitative Technologies Inc., Whitehouse,
RO 119881 Β1
NJ. Toate temperaturile sunt date în grade Celsius. Pentru cromatografia în strat subțire s-au utilizat plăci Anatech Silica Gel GF și E. Merck Silica Gel 60F-254. Atât cromatografia rapidă cât și cea gravitațională sunt realizate pe silicagel E. Merck Kieselgel 60 (230- 3
400 mesh). HPLC analitic și preparativ s-a făcut pe cromatografe Rainin sau Beckman. ODS se referă la suport cromatografie din silicagel derivatizat cu octadecilsilil. 5 μ Apex-ODS se 5 referă la un suport cromatografie din silicagel derivatizat cu octadecilsilil care are dimensiunea nominală a particulelor de 5 μ, fabricat de Jones Chromatography, Littleton, Colorado. 7 YMC ODS-AQ® este un suport cromatografie ODS și este înregistrat ca marcă de comerț a YMC Co., Ltd, Kyoto, Japonia. PRP-1®este un suport cromatografie din polimer stiren-di- 9 vinilbenzen și este o marcă înregistrată a lui Hamilton Co., Reno, Nevada. Celite® este un mijloc de filtrare compus din silice de diatomee spălată cu acid și este înregistrată ca marcă 11 de comerț a lui Manville Corp., Denver, Colorado.
Prepararea 1. Prepararea (+) -8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4- 13 acetatului de metil
a) 4-brom-3-brommetilanisol 15
Un amestec constituit din 20 g (0,10 moli) de 2-brom-5-metoxitoluen, 19,6 g (0,11 moli) de N-bromsuccinimidă, 1 g (4 mmoli) de peroxid de benzoil și 200 ml de clorură 17 de metilen este iradiat timp de 18 h cu o lampă cu flux pentru a efectua un reflux ușor. Amestecul este apoi răcit la -10’C timp de mai multe ore și soluția se decantează de pe 19 succinimidă precipitată. Soluția este concentrată și reziduul este cristalizat din cloroform/hexan pentru a da 19,7 g (70%) compus din titlu sub forma unor prisme galben 21 deschis.
Ή RMN (CDCI3) δ 7,45 (d, J=8,9 Hz, 1H), 6,99 (d, J=3Hz, 1H), 6,74 (dd, 8,9, 3 Hz,
1H), 4,55 (s, 2H), 3,80 (S, 3H).
b) 3-bis(terț-butoxicarbonil)aminometil-4-brom-anisol
Un amestec din 24 g (86 mmoli) de 4-brom-3-brommetilanisol și 24 g (94 mmoli) de potasiu iminodicarboxilat de dr-terț-butil în 200 ml de dimetilformamidă se agită sub argon la temperatura camerei timp de 18 h. Reacția se concentrează apoi la vid și reziduul se repartizează între acetat de etil și apă. Faza organică se spală cu apă și saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează. Reziduul se recristalizează din hexan pentru a da 15 g (42%) de compus din titlu sub forma unui solid alb.
Ή RMN (CDCI3) δ 7,40 (d, J=8,6 Hz, 1H), 6,68 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 1,44 (1s, 18H).
c) (±)-3-carbometoxi-4-[2-bis(-terț-butoxicarbonil)aminometH-4-metoxifenil]-3-bute- noat de metil 35
Un balon de 500 ml se încarcă cu 15 g (36 mmoli) de 3-b/s(-tert-butoxicarbonil)amioetil-4-bromanisol, 7,5 g (47 mmoli) de itaconat de dimetil, 1 g (3 moli) de tri- o-tolifosf ină, 37
0,4 g (2 mmoli) de acetat de paladiu, 12,8 ml (72 mmoli) de diizopropiletilamină și 150 ml de propionitril. Amestecul se purjează cu argon (mai multe cicluri spălare cu argon/evacuare), 39 apoi se încălzește la reflux sub argon timp de 1 h. Reacția este lăsată să se răcească la temperatura camerei, apoi se toarnă peste 500 ml de etileter rece. Precipitatul rezultat este 41 îndepărtat prin filtrare și filtratul este concentrat. Reziduul se purifică prin cromatografie pe silicagel (10-20% acetat de etil în hexan) pentru a da 11,8 g (66%) compus din titlu sub 43 forma unui ulei galben pal.
Ή RMN (CDCI3) δ 7,94 (s, 1H), 7,15 (d, J=8,1 Hz, 1H), 6,77 (d, J=8,1 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 4,73 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,38, 18H).
RO 119881 Β1
d) (±)-3-carbometoxi-4-[2-bis(terț-butoxicarbonil)aminometil-4-metoxifenil]butanoat de metil
Un vas de presiune încărcat cu 11,8 g de (±)-3-carbometoxi-4-[2-b/s(terț-butoxicarbonil)aminometil-4-metoxifeni]]-3-butenoat de metil, 120 ml de acetat de etil și 1 g de paladiu 10% pe cărbune se agită la presiune de 3,1 x 105 Pa hidrogen timp de 18 h. Amestecul este apoi filtrat și filtratul se concentează pentru a da 12 g (100%) compus din titlu sub forma unui ulei incolor.
Ή RMN (CDCI3) δ 7,00 (d, J=8,2 Hz, 1H), 6,71 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,63 (m, 2H), 3,05(m, 2H), 2,73(m, 2H), 2,42 (dd, J=16,0, 4,8 Hz, 1H), 1,44 (s, 18H).
e) (±)-3-carbometoxi-4-[2-(aminometil)-4-metoxifenillbutanoat de metil
O soluție de 12 g (±)-3-carbometoxi-4-[2-b/s(terț-butoxicarbonil)-aminometil-4-metoxifeniljbutanoat de metil în 100 ml de cloroform și 50 ml acid trifluoracetic se agită sub argon la temperatura camerei timp de 4 ore. Soluția se concentrează la vid pentru a da 10 g (100%) de compus din titlu sub forma unui ulei viscos; MS (ES) m/e 296,2 (M+H)+.
f) (±)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție din 10 g (24 mmoli) de (±)-3-carbometoxi-4-[2-(aminometil)-4-metoxifenil] butanoat de metil și 17 ml (120 mmoli) de trietilamină în 100 ml de toluen se încălzește la reflux timp de 18 h.
Reacția este apoi concentrată și reziduul este repartizat între acetat de etil și apă. Stratul apos se extrage de două ori cu acetat de etil și extractele organice combinate se spală cu saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a da 4,8 g (76%) compus din titlu sub forma unui solid bej. MS (ES) m/e 264,2 (M+H)+.
g) (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O cantitate de 7,6 g (57 mmoli) de clorură de aluminiu anhidră se adaugă în porțiuni la o soluție sub agitare din 3,0 g (11 mmoli) de (±)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil și 4,2 ml (57 mmoli) de etantiol în 100 ml de clorură de metilen, la 0°C sub argon. Amestecul rezultat este lăsat să se încălzească la temperatura camerei și este agitat peste noapte, apoi este concentrat. Reziduul se triturează cu apă-gheață și solidul care rezultă se colectează prin filtrare și se usucă pentru a da 2,64 g (91%) de compus din titlu sub forma unui solid aproape alb. MS (ES) m/e 250,2 (M+H)+.
Prepararea 2. Prepararea (+)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzazepin-4-acetat de metil
a) 3-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-metilamino]metil-4-bromanisol ml de soluție apoasă 40 % de metilamină (563 mmoli) se adaugă rapid la o soluție de 15,76 g (56,29 mmoli) de 4-brom-3-brommetilanisol în 280 ml de THF, la temperatura camerei. După 2,5 ore, reacția se concentrează și reziduul se repartizează între 560 ml de Et2O și 100 ml de NaOH 1,0N. Straturile se separă și stratul organic se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a da un ulei galben: CSS (5% MeOH/CHCI3), Rf 0,32.
Uleiul se dizolvă în 280 ml de CHCI3 și se adaugă 1,29 g (56,29 mmoli) de dicarbonat de d/-terț-butil. Reacția se agită la temperatura camerei timp de 45 min, apoi se concentrează. Cromatografia pe silicagel (5% AcOEt/toluen) dă compusul din titlu (16,81 g, 90%) ca un ulei galben deschis; CSS (5% EtOAc/toluen), Rf 0,43;
’H RMN (400, CDCI3) amestec de rotameri; δ 7,42 (d, J=8,7 Hz, 1H), 6,65-6,80 (m, 2H), 4,40-4,55 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,81-2,97 (m, 3H), 1,37-1,60 (m, 9H);
MS (ES) m/e 352/354 (M+Na)+. H ț
I
RO 119881 Β1
b) (±)-3-carbometoxi-4-[2-[N-(-terț-butoxicarbonil)-N-metilamino]metil-4-metoxifenil]1 butanoat de metil
O soluție constituită din 4,95 g (15 mmoli) de 3-[N-(fert-butoxicarbonil)-N-metilamino]3 metil-4-bromanisol, 3,08 g (19,5 mmoli) de itaconat de dimetil, 168 mg (0,75 mmoli) de acetat de paladiu, 457 mg (1,5 moli) de frZ-o-tolilfosfină și 5,2 ml (30 mmoli) de diizo-5 propiletilamină în 75 ml de propionitril se încălzește la reflux timp de 45 min, apoi se concentrează într-un evaporator rotativ. Reziduul se diluează cu 150 ml de Et2O și amestecul se fii- 7 trează prin celită® pentru a îndepărta materialele insolubile. Filtratul se concentrează și reziduul se reconcentrează din xileni. Cromatografia pe silicagel (gradient: 20% AcOEt/hexani, 9 apoi 1:1 AcOEt/hexani) îndepărtează fosfină și materiile prime; toate celelalte materiale cu R( 0,40-0,70 sunt colectate împreună și se concentrează pentru a da un ulei galben tulbure; 11 CSS (30% AcOET/hexani) R( 0,41 (produs majoritar).
Uleiul se dizolvă în 75 ml de MeOH și apoi se adaugă cu precauție Pd 10%/C. Ames-13 tecul se agită sub presiune de 3,4 x 105 Pa, de hidrogen timp de 2,5 h, apoi se filtrează prin celită ® pentru a îndepărta catalizatorul. Filtratul se concentrează pentru a da un ulei galben15 pal. Acesta este reconcentrat din CHCI3/hexani, apoi se cromatografiază pe silicagel (gradient: 20% AcOEt/hexani, apoi 1:1 AcOEt/hexani) pentru a da 4,53 g (74%) compus din titlu17 sub forma unui ulei galben pal: CSS (30% AcOEt/toluen) Rf 0,46;
’H RMN (400, CDCI3) amestec de rotameri; δ 7,03 (d, J=8,2 Hz, 1H), 6,65-6,80 (m,19
2H), 4,46 (br s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 2,62-3,12 (m, 7H), 2,35-2,50 (m, 1H), 1,47 (br s, 9H); MS (ES) m/e 432 (M+Na)+.21
c) (±)-3-carbometoxi-4-[2-(metilamino)metil-4-metoxifenil]butanoat de metil
La o soluție constituită din 4,53 g (11,06 mmoli) de (±)-3-carbometoxi-4-[2-[N-(tert-bu-23 toxicarbonil)-N-metilamino]metil-4-metoxifenil]butanoat de metil în 55 ml de CH2CI2 anhidru, la 0’C se adaugă 55 ml TFA și reacția se încălzește la temperatura camerei. După 1 h,25 reacția este concentrată și reziduul este reconcentrat din toluen (2 x 100 ml) pentru a da 11,06 mmoli (cantitativ) de compus din titlu sub forma unui ulei galben deschis: MS (ES) m/e 27 310(M+H)+.
d) (±)-8-metoxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil29
O soluție constituită din 11,06 mmoli de (±)-3-carbometoxi-4-[2-(metilamino)metil-4metoxifeniljbutanoat de metil și 5,8 ml (33,18 mmoli) de diizopropiletilamină în 110 ml toluen 31 se încălzește la reflux timp de 25 h, se agită la temperatura camerei timp de 4 zile, apoi se încălzește la reflux încă 24 h. Concentrarea și cromatografia pe silicagel (5% MeOH în 33 AcOEt/CHCI31:1) dă 2,88 g (94%) de compus din titlu sub forma unui solid galben pal: CSS (5% MeOH în AcOEt/CHCI31:1) Rf 0,63; 35 1H RMN (250, CDCI3) δ 7,02 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,78 (dd, J=8,4, 2,7 Hz, 1H), 6,63 (d, J=2,7 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,3 Hz, 1H), 3,50-3,90 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H),37
2,73-3,16 (m, 3H), 3,04 (s, 3H), 2,41 (dd, J=16,7,5,4 Hz, 1H); MS (ES) m/e 300(M+Na), 278 (M+H)+.39
e) (±)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
La o soluție din 562 mg (2,03 mmoli) de (±)-8-metoxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-41
H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,75 ml (10,15 mmoli) etantiol în CH2CI2 anhidru se adaugă 1,35 g (10,15 mmoli) de clorură de aluminiu anhidră, într-o porție, la 0°C, sub argon. 43
Amestecul se încălzește la temperatura camerei și se agită timp de 4,5 h, apoi se răcește din nou la 0°C sub argon. Se adaugă 20 ml H2O rece gheață și amestecul se agită puternic 45 timp de 5 minute, apoi se extrage cu 3 x 20 ml de CHCI3. Straturile combinate de CHCI3 se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a da un reziduu. Stratul apos se filtrează prin 47 aspirare pentru a colecta un precipitat solid. Acest precipitat și reziduul din stratul de CHCI3
RO 119881 Β1 se combină în MeOH/CHCI31:1 și soluția se concentrează pentru a da un solid aproape alb.
Acesta se triturează cu MeOH fierbinte și amestecul este lăsat să se răcească la temperatura camerei. Solidul se colectează prin filtrare cu aspirare și se spală secvențial cu
MeOH rece și ET2O. Uscarea la vid înalt la 40°C dă 467,9 mg compus din titlu (88%) sub forma unui solid incolor. CSS (MeOH 5%/CHCI3) R( 0,17;
’H RMN (250, DMDO-d6) δ 9,29 (s, 1H), 6,89 (d, J=8,1 Hz, 1H), 6,50-6,70 (m, 2H), 5,16 (d, J=16,4 Hz, 1H), 3,84 (d, J=16,4 Hz, 1H), 3,60-3,85 (m, 1H), 3,56 (s, 3H), 2,30-3,00 (m, 4H), 2,86 (s, 3H); MS (ES) m/e 286(M+Na)+, 264 (M+H)+.
Prepararea 3. Prepararea 2-[(3-hidroxi-1-propil)-amino]piridin-N-oxidului
a) 2-[(3-hidroxi-1 -propil)-amino-1-piridin-N-oxid
Un amestec constituit din 16,6 g (0,1 moli) de 2-clorpiridin-N-oxid, 15,3 ml (0,2 moli) de 3-amino-1 -propanol, 42 g Na HCO3 (0,5 moli) și 100 ml de alcool tert-amilic se încălzește la reflux. După 21 h, reacția se diluează cu 300 ml de CH2CI2 și se filtrează prin aspirare pentru a îndepărta materialele insolubile. Filtratul se concentrează și se reconcentrează din toluen pentru a da un ulei galben. Cromatografia pe silicagel (20% MeOH/CHCI3) dă 15,62 g (93%) de compus din titlu sub forma unui solid galben: CSS (20% MeOH/CHCI3) R( 0,48;
1HRMN (250, CDCI3) δ 8,07 (dd, J=6,6 Hz, 1H), 7,34 (br t, 1H), 7,10-7,30 (m, 1H), 6,64 (dd, J=8,5,1,4 Hz, 1H), 6,40-6,60 (m, 1H), 4,49 (br s, 1H), 3,65-3,90 (m, 2H), 3,35-3,60 (m, 2H), 1,75-2,00 (m, 2H); MS (ES) m/e 169 (M+H)+.
Prepararea 4. Prepararea 2-[(3-hidroxi-1-propil)-amino]-4-nitropiridin-N-oxidului
a) 2-[(3-hidroxi-1-propil)-amino]-4-nitropiridin-N-oxid
Conform procedeului din Prepararea 3, cu excepția înlocuirii cu 2-clor-4-nitropiridin-Noxid (vezi Jain P. C; Chatterjee S. K.; Anand N. Indian Journal of Chemistry 1996, 403) a clorhidratului de 2-clorpiridin-N-oxid, se prepară compusul din titlu ca un solid portocaliu: MS (ES) m/e 214,2 (M+H)+.
Prepararea 5. Prepararea 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]-4-metoxipiridin-N-oxidului
a) 2-[(3-hidroxi-1 -propil)amino]-4-metoxipiridin-N-oxid
O soluție constituită din 0,275 g (1 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]-4nitropiridin-N-oxid și 0,5 M de NaOMe în 16 ml de MeOH (8 mmoli) se încălzește la reflux sub argon timp de 3 h. Reacția este lăsată să se răcească și se adaugă 0,5 ml (8 mmoli) de AcOH glacial. Soluția se concentrează la sec și reziduul se triturează cu CH2CI2. Materialele insolubile se îndepărtează prin filtrare și filtratul se concentrează. Cromatografia pe silicagel (5-15% MeOH/CH2CI2) dă 0,23 g (90%) sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 199,0 (M+H)+.
Prepararea 6. Prepararea (+)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil
a) 3-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)amino]metil-4-bromanisol
4,9 ml (62,5 mmoli) de 2,2,2-trifluoretilamină se adaugă rapid la o soluție din 7,0 g (25 mmoli) de 4-brom-3-brommetilanisol în 25 ml de DMSO anhidru la temperatura camerei. Reacția este încălzită la aproximativ 30-35’C. După 2 h, reacția se diluează cu 100 ml de NaOH 0,5 N răcit cu gheață și se extrage cu 3 x 100 ml de Et2O. Straturile de Et2O combinate se spală consecutiv cu 2 x 25 ml de H2O și 25 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a da un ulei galben deschis. CSS (toluen) R( 0,43.
Uleiul se dizolvă în 48 ml de CH2CI2 într-un balon cu fund rotund și se adaugă 10,48 g (48,04 mmoli) de dicarbonat de d/-fert-butil. Vasul care conține soluția de reacție este plasat într-un evaporator rotativ și este rotit la vid la 50’C timp de 16 h. Reziduul rezultat este diluat cu 100 ml de hexani și soluția- este însămânțată cu o cantitate mică de produs 1
RO 119881 Β1 solid pur (obținut dintr-un experiment precedent, prin cromatografie pe silicagel utilizând 1
AcOEt 10%/hexani ca eluant). Amestecul este lăsat să stea la temperatura camerei mai multe ore, apoi este introdus într-un frigider peste noapte. Produsul este colectat prin filtrare 3 cu aspirare și se spală cu hexani. Uscarea la vid dă 7,19 g (75%) de compus din titlu sub form unui solid incolor. Apele mumă sunt concentrate și cromatografiate pe silicagel (AcOEt 5 10%/hexani) pentru a da încă 1,42 g de compus din titlu (în total 8,61 g, 90%): CSS (AcOEt 10%/toluen) R( 0,48; p.t. 86-89°C; 7 1H RMN (250, CDCI3) δ 7,44 (d, J=9,0 Hz, 1H), 6,64-6,82 (m, 2H), 4,52-4,70 (m, 2H), 3,61-4,00 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 1,22-1,68 (m, 9H). 9
b) (±)-3-carbometoxi-4-[2-[N-(-oxo-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)amino]metil-4- metoxifenil-1 -butanoat de metil 11
O soluție constituită din 9,17 g (23,03 mmoli) de 3-[N-(tezț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2trifluoretil)amino]metil-4-bromanisol, 4,73 g (29,94 mmoli) de itaconat de dimetil, 259 mg 13 (1,15 mmoli) de acetat de paladiu, 701 mg (2,30 mmoli) de trAo-tolilfosfină și 8,0 ml (46,06 mmoli) de diizopropiletilamină în 115 ml de propionitril se deoxigenează (3 cicluri de purjare 15 cu argon/evacuare), apoi se încălzește la reflux sub argon. După 2 h reacția este concentrată și reconcentrată din toluen. Cromatografia pe silicagel (30% ACOEt/hexani, probă în- 17 cărcată cu CH2CI2) îndepărtează fosfină și materiile prime; toate celelalte materiale cu Rf 0,55-0,70 sunt colectate împreună și se concentrează pentru a da un ulei galben. Acesta se 19 reia cu 200 ml de AcOEt 20%/hexani și este lăsat să stea la temperatura camerei timp de 1 oră, apoi în frigider peste noapte. Amestecul este filtrat pentru a îndepărta un precipitat 21 galben și filtratul este concentrat pentru a da 9,93 g (91%) dintr-un ulei galben: CSS (30% ACOEt/hexani) R( 0,55 (produs major). 23
Uleiul se dizolvă în 100 ml de AcOEt și se adaugă 4,44 g (4,18 mmoli) de Pd 10%/C. Amestecul este agitat sub presiune de 3,4 x 105 Pa, de hidrogen timp de 3,5 h, apoi este 25 filtrat prin cetită ® pentru a îndepărta catalizatorul. Filtratul se concentrează și reziduul se cromatografiază pe silicagel (gradient: 20% AcOEt/hexani) pentru a da 7,95 g (73% pentru 27 două etape) compus din titlu sub forma unui ulei incolor: CSS (20% AcOEt/toluen) Rf 0,35;
1H RMN (250, CDCI3) δ 7,05 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,76 (dd, J=8,4, 2,7 Hz, 1H), 6,60-29
6,72 (m, 1H), 4,50-4,80 (m, 2H), 3,45-3,95 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,63 (s, 6H), 2,85-3,09 (m, 2H), 2,58-2,80 (m, 2H), 2,33-2,50 (m, 1H), 1,20-1,70 (m, 9H); MS (ES) m/e 500 (M+Na)+.31
c) (±)-3-carbometoxi-4-[2-(2,2,2-trifluoretil)amino]-4-metoxifenil]butanoat de metil
La o soluție de 7,98 (16,71 mmoli) de (±)-3-carbometoxi-4-[2-[N-(tert-butoxicarbonil)-33
N-(2,2,2-trifluoretil)amino]metil-4-metoxifenil]butanoat de metil în 42 ml de CH2CI2, la 0°C, sub argon, se adaugă 55 ml de TFA și reacția se încălzește la temperatura camerei. După 35 1,5 ore, reacția se concentrează și reziduul se reconcentrează din xileni. Uscarea la vid înalt la 40°C dă 8,70 g (cantitativ) de compus din titlu, sub forma unui solid galben: MS (ES) m/e 37 378 (M+H)+.
d) (±)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat 39 de metil
Un amestec constituit din 16,71 mmoli de (+)-3-carbometoxi-4-[2-(2,2,2-trifluoretil) 41 amino]-4-metoxifenil]butanoat de metil, 9,5 ml (50,13 mmoli) de tripropilamină și 170 ml de xileni se încălzește la reflux. După 63 de h reacția se concentrează și reziduul se cromato- 43 grafiază pe silicagel (AcOEt/hexani 2:1, încărcat cu CH2CI2). Se obțin 5,33 g (92% în total pentru două etape) de compus din titlu sub forma unui solid galben deschis: CSS (40% 45
AcOEt/hexani) Rf 0,49;
Ή RMN (250, CDCI3) δ 7,04 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,80 (dd, J=8,5, 2,6 Hz, 1H), 6,61 (d, 47
J=2,6 Hz, 1H), 5,35 (d, J=16,8 Hz, 1H), 3,60-4,30 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,81-3,15 (m, 3H), 2,46 (dd, J=16,9, 5,5 Hz, 1H); MS (ES) m/e 368 (M+Na)+, 346(M+H)+. 49
RO 119881 Β1
e) (±)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-4-acetat de metil
La o soluție constituită din 5,16 g (14,94 mmoli) de (±)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 60 ml de CH2CI2 anhidru, la temperaturi între -5 și -10’C sub argon, se adaugă prin picurare, timp de 30 min, 60 ml de soluție 0,1 M de BBr3 (60 mmoli) în CH2CI2 După încă 1 h la temperaturi între -5 și -WC, reacția este răcită din nou cu precauție la -10°C și se stinge prin adăugarea în picătură a 60 ml de MeOH. Reacția se agită între -10°C și 0°C timp de 1 h, apoi se concentrează pe un evaporator rotativ. Reziduul se reconcentrează de două ori din MeOH, apoi din AcOEt, apoi se filtrează printr-un strat de silicagel (eluant AcOEt). Concentrarea filtratului dă un solid galben care este triturat cu hexan fierbinte. Se obțin 4,74 g (96%) de compus din titlu sub forma unui solid aproape alb: CSS (AcOEt/hexani 1:1) R( 0,40;
1H RMN (250, DMSO-d6) δ 9,28 (s, 1H), 6,90 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,62 (dd, J=8,3, 2,5 Hz, 1H), 6,57 (d, J=2,5 Hz, 1H), 5,27 (d, J=16,7 Hz, 1H), 4,22-4,38 (m, 1H), 4,07-4,22 (m, 1H), 4,07 (d, J=16,7 Hz, 1H), 3,72-3,83 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,94 (dd, J=17,0, 3,8 Hz, 1H), 2,72 (dd, J=16,7, 9,1 Hz, 1H), 2,65 (dd, J=17,0, 14 Hz, 1H), 2,49 (dd, J=16,7, 5,0 Hz, 1H, parțial mascat de semnalul solventului rezidual); MS (ES) m/e 354 (M+Na)+.
Prepararea 7. Separarea prin HPLC a enantiomerilorde (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
a) (R)-(+)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-2-benzazepin-4-acetatde metil și (S)(-)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil se separă în enantiomerii săi prin HPLC chirală utilizând următoarele condiții: coloană Diacel Chiralpak AS® (21,2 x 250 mm), fază mobilă EtOH, viteză de curgere de 7 ml/minut, detecție UV la 254 nm, 70 mg injectate; tR pentru (R)-(+)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil = 21,5 minute; tR pentru (S)-(-)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil = 39,1 min.
Prepararea 8. Separarea prin HPLC a enantiomerilor (±) -8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil
a)(R)-(+)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatdemetilși(S)(-)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil (±)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil se separă prin rezoluție în enantiomerii săi prin HPLC chirală utilizând următoarele condiții: coloană Diacel Chiralpak AS® (21,2 x 250 mm), fază mobilă CH3CN, viteză de curgere de 15 ml/min, detecție UV la 254 nm, 500 mg injectate; tR pentru (R)-(+)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil - 10,2 minute; tR pentru (S)-(-)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil - 19,0 min.
Prepararea 9. Demetilarea (S)-(-)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil
a) (S)-(-)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție de 15,0 g (0,057 moli) de (S)-(-)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil în 160 ml de CHCI3 se adaugă prin picurare timp de 30 min la o soluție de 20,53 ml (0,217) de tribromură de bor în 160 ml de CHCI3, la -8“C sub argon, menținând temperatura între -5’C și 0°C. Amestecul de reacție se agită la circa -8°C timp de 30 de min și apoi se adaugă 200 ml de MeOH, pentru început prin picurare, menținându-se temperatura la circa 0°C. Amestecul de reacție este concentrat pentru a se obține un ulei vâscos care este reconcentrat din 100 ml de MeOH. Uleiul se dizolvă în H2O/ MeOH și prin filtrare se îndepărtează o cantitate mică dintr-un solid închis la culoarerHItratnl este
RO 119881 Β1 neutralizat (până la pH 7) cu hidroxid de sodiu 50%, depunându-se un solid alb. pH-ul sus- 1 pensiei este adus la 4,5 prin adăugarea unei cantități mici de acid acetic și solidul este colectat și uscat la vid pentru a se obține 9,7 g (68%) compus din titlu. Produsului i se testează 3 puritatea chirală prin HPLC: coloană de Chiralpak AS®(4,6 x 50 mm), fază mobilă 100%
EtOH, viteză de curgere 0,5 ml/min, detectarea UV la 215 nm; tR = 7,5 min (S-enantiomer, 5 99%); tR = 4,4 min (R-enantiomer, 1%).
Prepararea 10. Preparea 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]-4,6-dimetilpiridin-N-oxidului 1 a) 2-[(3-hidroxi-1 -propil)amino]-4,6-dimetilpiridin-N-oxid
Conform procedeului de la prepararea 4, cu excepția substituirii cu 2-clor-4,6-dimetil- 9 piridin-N-oxidului (vezi Brown, E.V.J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79,3565) a clorhidratului de 2-clorpiridin-N-oxid, compusul se prepară sub forma unui ulei limpede: MS (ES) m/e 197,2 11 (M+H)+.
Prepararea 11. Prepararea de 6-(metilamino)-2-piridiletanolului 13
a) 2-(tert-butoxicarbonilamino)-6-picolină
La o soluție sub agitare constituită din 4,33 g (40 mmoli) de 2-amino-6-picolină 6,2 ml 15 (40 mmoli) de Et3N și 50 ml de CH2CI2 la 0’C se adaugă 9,6 g (44 mmoli) de dicarbonat de di-oxo-butil. După agitarea la temperatura camerei pe timpul nopții, amestecul de reacție 17 este concentrat în vid, diluat cu H2O și extras cu 2 x 50 ml de CH2CI2. După uscare pe MgSO4 și concentrare rezultă compusul din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 19 209 (M+H)+.
b) 2-[(tert-butoxicarbonil)metilamino]-6-picolină 21
La o suspensie de 0,44 g (11 mmoli) de NaH (dispersie 60% în ulei mineral) în 20 ml de DMF la 0°C se adaugă o soluție din 2,1 g (10 mmoli) de 2-(-oxo-butoxicarbonilamino)- 6- 23 picolină în 30 ml de DMF. Reacția se agită la 0°C timp de 15 min; apoi se adaugă 1,6 g (11 mmoli) de iodură de metil. Amestecul de reacție se concentrează în vid, se diluează cu H2O, 25 și se extrage cu 3 x 50 ml de CH2CI2. După uscare pe MgSO4 și concentrare se obține compusul din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 223 (M + H)+. 27
c) 6-[(terț-butoxicarbonil)metilamÎno]-2-piridilacetat de etil
Se prepară LDA (18 mmoli) în 30 ml de THF, se răcește la -78°C și se adaugă 2 g 29 (9 mmoli) de 2-[(terț -butoxicarboni!)metilamino]-6-picolină, formând o soluție roșu închis. După 15 minute, se adaugă 18 ml (15 mmoli) de dietilcarbonat. Soluția de culoare bordo se 31 agită la -78’C timp de încă 15 min, după care reacția se stinge cu soluție saturată de NH4CI. Amestecul este încălzit la temperatura camerei și este extras cu 3 x 30 ml de AcOEt. 33 Straturile organice combinate se spală cu saramură, se usucă pe MgSO4, se filtrează și se concentrează. Cromatografia pe silicagel dă compusul din titlu sub forma unui ulei incolor: 35
MS (ES) m/e 294 (M+H)+.
d) 6-(metilamino)-2-piridilacetat de etil37
O soluție din 0,6 g (2 mmoli) de 6 -f(-oxo-butoxicarbonil)metilamino]-2-piridilacetat de etil și 5ml (20 mmoli) de HCI 4M / dioxan se agită la temperatura camerei pe timpul nopții,39 după care se concentrează. Reconcentrarea din toluen dă compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 195 (M+H)+.41
e) 6-(metilamino)-2-piridiletanol
La o soluție agitată mecanic constituită din LiAIH4 în THF (1,0 M, 20 ml, 20,4 mmoli) 43 se adaugă prin picurare o soluție din 0,38 g (2 mmoli) de 2-(metilamino)-6-piridilacetat de etil în 10 ml de THF. După ce se termină adăugarea, amestecul de reacție este încălzit la 45
0’C și se stinge cu soluție NaOH 10%. Solidele se îndepărtează prin filtrare și filtratul este concentrat sub vid. Reziduul este dizolvat în CH2CI2 și soluția este uscată pe MgSO4 și con- 47 centrată. în urma reconcentrării de 3 ori din toluen rezultă compusul din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e = 153 (M+H). 49
RO 119881 Β1
Prepararea 12. Prepararea de 3-[(terț-butoxicarbonil)amino]-1-propanol
a) 3-[(terț-butoxicarbonil)amino]-1-propanol
O soluție de 10,91 g (50 mmoli) de dicarbonat de di-oxo-butil în 50 ml de CH2CI2 se adaugă prin picurare la o soluție din 11,5 ml (150 mmoli) de 3-amino-1-propanol în 250 ml de CH2CI2la 0°C. Soluția tulbure este încălzită până la temperatura camerei și este agitată timp de 1 h, după care se concentrează într-un evaporator rotativ. Reziduul este reluat în 100 ml de H2O și este extras cu Et2O (3 x 100 ml). După uscare cu MgSO4 și concentrare rămâne compusul din titlu sub forma unui ulei incolor:
Ή RMN (250 MHz, CDCI3) δ 4,80 (br s, 1H), 3,50-3,80 (m, 2H), 3,13-3,42 (m, 2H), 3,03 (brt, 1H), 1,55-1,80 (m, 2H), 1,45 (s, 9H); MS (ES) m/e 198 (M+H)+.
Prepararea 13. Prepararea de 3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino)-1-propanol
a) 3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino)-1-propanol
La o soluție agitată sub argon la temperatura camerei constituită din 0,77g (1,1 mmoli) de 3-amino-1-propanol și 2,85 ml (7 mmoli) de trietilamină în 5 ml de THF se adaugă o suspensie de 2 g (1 mmoli) de cloroformiat de 4-nitrobenzil în 20 ml de THF. Amestecul care rezultă este lăsat să se agite la temperatura camerei pe perioada week-endului, după care se concentrează. Reziduul este purificat prin cromătografie pe silicagel (0%2% MeOH/CH2CI2) pentru a se obține 0,80 g (34%) compus din titlu sub forma unui ulei galben deschis: MS (ES) m/e 254,3 (M+H)*.
Prepararea 14. Preparare de 2-[N-(3-hidroxi-1 -propil)-N-(tert-butoxicarbonil) amino] piridin-N-oxid
a) 2-[N-(3-hidroxi-1 -propil)-N-(tert-butoxicarbonil)amino]piridin-N-oxid
O soluție constituită din 8,0 g (47,6 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]piridin-Noxid în 80 ml de terț-BuOH este tratată cu 11,4 g (55,3 mmoli) de dicarbonat de d/-tert-butil. După 18 ore, soluția este concentrată și reziduul este triturat cu hexan. Solidul care rezultă este uscat în vid pentru a se obține 12,5 g (98%) compus din titlu sub forma unui solid aproape alb: MS (ES) m/e 269,3 (M+H)+.
Prepararea 15. Preparare de (±)-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N -(-oxo-butoxicarbonil) amino]-1 -propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de etil
a) (±)-8-[3-[N-( 1-oxopiridin-2-il)-N-(-oxo-butoxicarbonil)amino]-1'propiloxi]-3-oxo-2,3, 4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedeului din exemplul 1(a), cu excepția substituirii cu 2-[N-(3-hidroxi-1propil)-N-(te/1-butoxicarbonil)amino]piridin-N-oxid a 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]piridin-Noxid, compusul din titlu este preparat sub forma unei spume portocaliu deschis: MS (ES) m/e 500,4 (M+H)+.
Prepararea 16. Preparare de 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]-4-metilpiridin-N -oxid
Un amestec de 12,1 g (0,068 moli) de 2-clor-4-metilpiridin-N-oxid (Brown, E.V., J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79,3565), 10,33 ml (0,14 moli) de 3-amino-1-propanol, 28 g (0,34 moli) de NaHCO3 și 70 ml de alcool -oxo-amilic este încălzit la reflux. După 16 h, reacția este răcită, diluată cu 300 ml de CH2CI2, și este filtrată prin aspirare pentru a îndepărta materialele care nu sunt solubile. în urma recristalizării din CHjCI^E^O rezultă 10,87 g (88%) compusul din titlu sub forma unui solid galben: CSS (15% MeOH/ CH2CI2) R( 0,44;
Ή RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,92 (d, J = 6,7, 1H), 7,28 (br t, 1H), 6,43 (s, 1 H),6,33 (dd, J = 6,6, 2,1 Hz, 1H), 3,73 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,47(q, H = 6,3 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,821,88 (m, 2H); MS (ES) m/e 183 (M+H)+.
RO 119881 Β1
Prepararea 17. Preparare de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-[4-(trifluorrnetil)benzil]-2,3,4,5- 1 tetrahidro-1H-2- benzazepin-4-acetat de metil prin alchilarea (S)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil 3
a) (S)-3-oxo-8-[4-(trifluormetil)benziloxi)-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-
H-2-benzazepin-4-acetat de metil 5
La o soluție din 0,31 g (1,24 mmoli) de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-2-1Hbenzazepin-4-acetat de metil și 0,89 g (3,72 mmoli) de bromură de 4-(trifluormetil)benzil în 7 10 ml de DMF se adaugă 0,11 g (2,75 mmoli) NaH (60% suspensie în ulei). După agitarea la temperatura camerei timp de 4 h, majoritatea cantității de DMF este îndepărtată sub vid. 9 Reziduul este repartizat între NaHCO3 saturat și AcOEt. Faza apoasă se extrage cu AcOEt și extractele organice combinate se spală cu NaCI saturat, se usucă pe Na2SO4 și se 11 concentrează pentru a obține 0,90 dintr-un ulei limpede. Cromatografia radială (5% acetonă/ CH2Cl2> silicagel, placă de 6 m) duce la compusul din titlu (0,53 g) sub forma unei spume 13 albe: MS (ES) m/e 566,1 (M+H)+.
b) (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-2-benzazepin-4-15 acetat de metil
Un balon Parr de hidrogenare se încarcă cu 0,78 g (1,38 mmoli) de (S)-3-oxo-8-[4-17 (trifluormetil)benziloxi]-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 20 mg de catalizator Pearlman în 20 ml de MeOH. După hidrogenare la presiune19 de 3,4 x 105 Pa, timp de 24 h, vasul de reacție este aerisit și catalizatorul este îndepărtat prin filtrare. îndepărtarea solventului dă 0,60 g dintr-o spumă albă. Cromatografia radială (5%21 acetonă/CH2CI2, silicagel, placă de 6 m) dă 0,42 g de compus din titlu sub forma unei spume albe.23 1H RMN (250 MHz, CDCI3) δ 7,50 (d, J = 8,5, 2H), 7,23 (d, J=8,5 Hz, 2H), 6,90 (d, J=7,5 Hz, 1H), 6,67 (dd, J=7,5, 3,4 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 3,4,2,1 Hz, 1H), 5,05 (m, 2H), 4,3525 (d, J=15,4 Hz, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,60 (m, 1H), 2,95 (m, 4H), 2,45 (dd, J=17,1, 5,1 Hz, 1H).27
Prepararea 18. Prepararea (S)-(-)-8-hidroxi-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil prin sinteză enantioselectivă29
a) 4-brom-3-brom-metilanisol
La o soluție sub agitare de 100 g (497 mmoli) de 4-brom-3-metilanisol în 500 ml de 31 diclormetan anhidru se adaugă 97 g (545 mmoli) de N-bromsuccinimidă, urmată de 6 g (25 mmoli) de peroxid de benzoil. Reacția este refluxată ușor sub o lampă de 150 W cu 33 reflectorul plasat la aproximativ 30 mm de balonul de reacție. După 24 h, reacția este concentrată în evaporator rotativ la jumătate din volumul său și este lăsată să stea timp de 35
h. Precipitatul alb care se formează este îndepărtat prin filtrare și se spală cu un volum mic de diclormetan. Filtratul este concentrat la sec și solidul rămas este triturat cu hexani și este 37 filtrat. Uscarea la vid dă 100,25 g (72%) compus din titlu sub formă de ace albe: GC tR=6,56 min (coloană cu metilsiliciu HP 539 pm x 20 m, debit purtător de He de 20 ml/min, 39 temperatură inițială lOO’C, timp inițial 1 minut, viteză 10*C/min, temperatură finală 200°C, timp final 1 min); 41 ’H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,44 (d, J=10 Hz, 1H), 6,99 (d, J=3 Hz, 1H), 6,73 (dd,
1H), 4,55 (s, 2H), 3,80 (s, 3H). 43
b) 3-[N-(4-trifluormetilbenzil)aminometil]-4-bromanisol
La o soluție sub agitare de 35 g (125 mmoli) de 4-brom-3-brom-metilanisol în 50 ml 45 de DMSO anhidru și 50 ml THF anhidru se adaugă 30 g (171 mmoli) de 4-trifluormetilbenzilamină, urmată de 18 ml (129 mmoli) de trietilamină. După agitare timp de 18 h la 47
RO 119881 Β1 temperatura camerei, reacția se concentrează, se diluează cu 250 ml de NaOH 1N și se extrage cu 2 x 250 ml de Et2O. Straturile organice combinate se spală cu saramură, se usucă pe Na2SO4 și se concentrează la sec. Reziduul care rămâne se purifică prin cromatografie rapidă pe silicagel pentru a da compusul din titlu (34,179; 73%); CSS 10 la 20%
AcOEt/CHCI3; R, 0,63;
’HRMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,59 (d, J=8,2 Hz, 2H), 7,49 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,43(d, J=8,6 Hz, 1H), 6,96 (d, J=3,1 Hz, 1H), 6,70 (dd, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 1,75 (brs, 1H).
c) 3-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminometil]-4-bromanisol
La o soluție sub agitare de 34,17 g (91 mmoli) de 3-[N-(4-trifluormetilbenzil) aminometil]-4-bromanisol în 100 ml de THF anhidru se adaugă 22 g (101 mmoli) de dicarbonat de <#tert-butil. Reacția se agită sub argon timp de 18 h (se observă degajare puternică de gaz). Concentrarea și cromatografia pe silicagel (5 la 10% AcOEt/hexani) pentru a da compusul din titlu (41,09 g, 95%) ca un ulei limpede; CSS (silice, 20% EtOAc/hexan); Rf 0,44;
Ή RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,57 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,40 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,397,33 (m, 2H), 6,83 și 6,72 (2 s, 1H), 6,71 (dd, 1H), 4,54 și 4,50 (2s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).
d) 2-[N-(terț-butoxicarbonH)-N-(4-trifluormetHbenzil)aminometil]-4-metoxicinamatde metil
O soluție constituită din 37,08 g (78 mmoli) de 3-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminometil]-4-bromanisol, 35 ml (390 mmoli) de acrilat de metil, 0,88 g (3,9 mmoli) de acetat de paladiu, 2,38 g (7,8 moli) de tri-o-tolilfosfină și 31 ml (178 (mmoli) de diizopropiletilamină în 200 ml de acetonitril se deoxigenează (3 cicluri de purjare cu argon/evacuare), apoi se încălzește la reflux sub argon (baie de ulei fixată la 80°C). După 6 h se mai adaugă 0,88 g (3,9 mmoli) de acetat de paladiu și 2,38 g (7,8 mmoli) de tri-otolilfosfină și reacția se agită la reflux timp de încă 18 h. Reacția se concentrează la sec și reziduul se reia în 300 ml de Et2O/eter de petrol 1:1 și este lăsat să stea timp de 4 h. Se îndepărtează prin filtrare un precipitat de culoare gri, care se formează și se spală cu un volum mic -100 ml de Et2O/eter de petrol 1:1. Filtratul de culoare roșu-portocaliu se concentrează și se purifică prin cromatografie rapidă pe silicagel (15% acetat de etil/hexani). Reziduul rezultat se reia în hexan și amestecul este lăsat să stea mai multe ore, apoi se filtrează pentru a îndepărta un precipitat galben. Concentrarea filtratului dă compusul din titlu (34,52 g, 92%) ca un ulei galben vâscos. CSS (silice, 20% AcOEt/hexani) Rf 0,45;
1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,80 (br s, 2H), 7,57 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,53 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,29 (br s, 2H), 6,83 (dd, 1H), 6,72 (br s, 1H), 6,23 (d, J=15,7 Hz, 1H), 4,58 și 4,53 (2br s, 2H), 4,46 și 4,37 (2 br s, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 1,49 (s,9H).
e) 2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminometil]-4- metoxidihidrocinamat metil
La 5 g (4,7 mmoli) de Pd/C 10% (preumectat cu DMF) se adaugă o soluție din 34,52 g (72 mmoli) de 2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminometil]-4-metoxicinamat metil în 100 ml de metanol. Amestecul se agită sub presiune de 3,4 x 105 Pa hidrogen într-un aparat Parr timp de 14 h și apoi este filtrat printr-un strat de celită® pentru a îndepărta catalizatorul. Filtratul este concentrat pentru a se obține 34,15 (98%) compus din titlu sub forma unui ulei incolor:
1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,58 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,31 (br s, 2H), 7,09 (d, J=8,4
Hz, 1H), 6,76 (dd, 1H), 6,66 (s, 1H), 4,47 (br s, 2H), 4,40 (br s, 2H),3,76 (s, 3H), 3,63 (s,
ΌΗ), 2,79 (brs, 2H), 2,47 (t, 2H), 1,48 (s,9H).
RO 119881 Β1
f) Acid2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminometill-4-metoxidihidro- 1 cinamic
La o soluție sub agitare de 34,15 g (71 mmoli) de acid 2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4 3 -trifluormetilbenzil)aminometil]-4-metoxidihidrocinamicîn 150 ml de dioxan se adaugă 85 ml (85 mmoli) de 1 N NaOH. Reacția tulbure se agită la temperatura camerei timp de 4 h. 5 Soluția omogenă care rezultă este neutralizată cu 85 ml HC11N (85 mmoli) și se extrage de x 250 ml cu acetat de etil. Straturile organice combinate se spală cu 250 ml de saramură, 7 se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a rezulta 34,60 g (100%) compus din titlu sub forma unui ulei limpede vâscos: CSS (95:4:1 CHCL/MeOH/HOAc) Rf 0,49; 9 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,30 (br s, 2H), 7,09 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,65 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 4,47 (br s, 2H), 4,42 (brs, 2H), 3,76 (s, 3H),11
2,81 (brs, 2H), 2,53 (t, 2H), 1,47 (s, 9H).
g) 2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminornetil]-4-metoxidihidrocina-13 midă de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil
La o soluție sub agitare de 34,60 g (71 mmoli) de acid 2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4-15 trifluormetilbenzil)aminometil]-4-metoxidihidrocinamic și 6,9 ml (85 mmoli) de piridină în 200 ml de diclormetan anhidru sub argon se adaugă 4,4 ml (48 mmoli) de fluorură cianurică17 prin intermediul unei seringi. Reacția se agită timp de 4 h la temperatura camerei. Suspensia groasă care rezultă este filtrată printr-un strat de celită® și este spălată cu un volum mic 19 (50 ml) de diclormetan anhidru. Filtratul limpede este turnat într-o pâlnie separatoare și spălat cu 500 ml apă răcită cu gheață. în urma uscării pe MgSO4 și a concentrării rezultă 21 34,70 g (100%) fluorură acidă brută care este folosită fără altă purificare.
La o soluție sub agitare din 13,8 g (78 mmoli) de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonă în 23 300 ml de THF ahhidru sub argon la -78°C se adaugă prin intermediul unei seringi 30 ml (2M, 75 mmoli) de n-BuLi în hexani. Reacția se agită la -78’0 timp de 15 min, apoi se 25 adaugă prin intermediul unei seringi o soluție din 34,70 g (71 mmoli) din fluorură acidă de mai sus și 100 ml de THF anhidru. Reacția se agită timp de 1 h la -78°C și apoi este stinsă 27 cu NH4CI saturat și este extrasă cu 2 x 200 ml de acetat de etil. Straturile organice combinate se spală cu 400 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează până la us- 29 care. Purificarea prin cromatografie rapidă pe silicagel (20% acetat de etil/hexani) are ca rezultat 40,34 g (90%) compus din titlu sub forma unui ulei vâscos limpede: CSS (20% EtOAc/ 31 hexan) Rf 0,21;
1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,33 - 7,26 (m, 5H), 7,16 (m,33
3H), 6,77 (dd, 1H), 6,67 (d, J= 2,5Hz, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,60 - 4,40 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,27 (dd, 1H),3,21 - 3,10 (m, 2H), 2,88 (br s, 2H), 2,72 (dd, 1H), 1,48 (s,9H).35
h) (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil-2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)ami- nometil]-4-metoxifenil]-2(S)-metoxicarbonilmetil-propionamidă37
La o soluție sub agitare de 40,30 g (64 mmoli) de 2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(4trifluormetilbenzil)aminometil]-4-metoxidihidrocinamidă de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil în39
300 ml de THE la -78’C se adaugă prin intermediul, unei seringi o soluție din 70 ml litiu bis (trimetilsilil)amidă (1M în THF, 70 mmoli). După 30 min, se adaugă prin intermediul unei se- 41 ringi 30 ml (317 mmoli) de bromacetat de metil. După alte 30 min la -78°C, reacția este lăsată să se încălzească la -20°C și este agitată timp de încă 6 h. Reacția este stinsă cu 43
400 ml de NH4CI saturat și este extrasă cu 2 x 200 ml de acetat de etil. Straturile organice combinate se spală cu 300 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează până 45 la uscare. Purificarea prin cromatografie rapidă pe silica gel (20% acetat de etil/hexani) dă
38,62 g (86%) compus din titlu sub forma unui solid alb; HPLC (Altex Ultrasphere™ - Si 5u, 47
RO 119881 Β1
20% acetat de etil/hexan) a arătat că aproximativ 20% din materialul brut nealchilat era încă prezent. Analiza HPLC a amestecului de reacție brut a dat randament de 90% al reacției;
’H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,40-7,11 (m, 8H), 6,71 (dd, 1H), 6,63 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,57-4,34 (m, 6H), 4,03 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,85 (t, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,61 (s, 3H), 3,28 (dd, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,86-2,71 (m, 2H), 2,70 (dd, 1H), 2,44 (m, 1H), 1,48 și 1,46 (2s, 9H).
i) (S)-8-metoxi-3-oxo-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-4acetat de metil
La o soluție sub agitare constituită din 38,0 g (54 mmoli) de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil-3-2-[N-(fert-butoxicarbonil)-N-(4-trifluormetilbenzil)aminometil]-4-metoxifenil]-2(S)metoxicarbonilmetil-propionamidă în 300 ml de THF și 100 ml de apă se adaugă prin picurare la O’C timp de 30 min, 18,9 ml soluție de H2O2 30% și 2,3g (55 mmoli) de LiOH · H2O în 62 ml de apă. Soluția tulbure este agitată timp de încă 1 h la O’C. Soluția omogenă care rezultă este tratată încet cu o soluție din 34,3g (272 mmoli) de sulfit de sodiu în 175 ml de apă la O’C și apoi se acidulează cu o soluție răcită cu gheață, de 35 ml de HCI în 150 ml de apă. Reacția se extrage cu 2 x 200 ml de acetat de etil și straturile organice combinate se spală cu 400 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează până la uscare. Reziduul care rezultă se tratează cu HCI 4,0 M în 400 ml de dioxan cu agitare la temperatura camerei (se observă o degajare lentă de gaz). După 1 h, reacția este concentrată și de 2 ori reconcentrată din CHCI3/toluen 1:1, apoi cele 37,65 g de reziduu se reiau în 400 ml de DMF. La această soluție se adaugă cu agitare sub argon la O’C într-un vas Dewar, 15,3 ml (109 mmoli) de trietilamină și 22,9 g (273 mmoli) de NaHCO3, urmate de 13 ml (60 mmoli) de difenilfosforii azidă. După agitarea timp de 24 de h la O’C, reacția este concentrată până la uscare. Reziduul este reluat în 400 ml de acetat de etil și este spălat pe rând cu 300 ml de apă și 300 ml de saramură. Uscarea pe MgSO4, concentrarea și cromatografia rapidă pe silicagel (35% acetat de etil/hexani) dă 16,87 g (74%) compus din titlu sub forma unui ulei limpede vâscos: CSS (40% EtOAc/ hexan) Rf 0,50; MS (ES) m/e 422,3 (M + H)+;
1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,52 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,29 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,02 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,75 (dd, 1H), 6,36 (d, J=2,7Hz, 1H), 5,18 (d, J=16,5 Hz, 1H), 4,96 (d, J=15,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,74 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,08 (dd, 1H), 3,02 (dd, 1H), 2,95 (dd, 1H), 2,48 (dd, 1H).
j) (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil
O soluție de 160 ml (1,0 M, 160 mmoli) de tribromură de bor se adaugă prin picurare timp de 30 min la o soluție din 16,67g (39,6 mmoli) de (S)-8-metoxi-3-oxo-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat metil în 150 ml de CH2CI2 la -20’C sub argon. După încă 1,5 h la -15’C până la 20’C, reacția este din nou răcită la -20°C și este stinsă prin adăugarea cu precauție prin picurare a 160 ml de MeOH. Reacția este agitată la -10°C până la O’C timp de 1 h, după care se concentrează în evaporator rotativ. Reziduul este reconcentrat din MeOH (2x). Purificarea prin cromatografie rapidă pe silicagel (50 până la 100% EtOAc/ hexan) are ca rezultat 14,87 g (92%) compus din titlu sub forma unui solid alb: [a]D -81,8’ (c, 1,0, MeOH); CSS (silice, 50% EtOAc/ hexan) R( 0,54; MS (ES) m/e 408,2 (M + H)+:
Ή RMN (400 CDCI3 + 2% DMSO-d6) δ 7,53 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz,
2H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,70 (dd, 1H), 6,41 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 16,4 Hz,
1H), 5,01 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 4,39 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,73 (d, J= 16,4 Hz,
1H), 3,71 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,4Τ(ύ3ΠΗ)Τ
RO 119881 Β1
Prepararea 19. Separarea prin HPLC a enantiomerilor (±)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2- 1 trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatului de metil
a)(R)-(+)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-ace- 3 tat de metil și (S)-(-)8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4acetat de metil 5 (±)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatulde metil se separă prin rezoluție în enantiomerii săi prin HPLC chiral folosind următoarele con- 7 diții: coloană Diacel Chiralcel OJ® (21,2 x 250 mm), fază mobilă de metanol, viteză de curgere de 15 ml/ min, detecție UV la 295 nm, injectare 400 mg; tR pentru (R)-(+)-8-metoxi- 9
3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatde metil = 4,9 min; tR pentru (S)-(-)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetat de 11 metil - 6,6 min.
Prepararea 20. Separarea prin HPLC a enantiomerilor (±)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-13 trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatului de metil
a) (R)-(+)-8 hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetat15 demetilși(S)-(-)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetat de metil17 (±)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatulde metil se separă prin rezoluție în enantiomerii săi prin HPLC chirală folosind următoarele 19 condiții: coloană Diacel Chiralcel OJ® (21,2 x 250 mm), fază mobilă de etanol 20% în hexan, 10 ml/ min, detecție UV la 254 nm, injectare 100 mg; tB pentru (R)-(+)-8-hidroxi-3-oxo-2- 21 (2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetat de metil = 14,4 min; tR pentru (S)(-)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetat de metil =23
18,5 min.
Prepararea 21. Prepararea (S)-(-)8-hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetra-25 hidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil prin sinteză enantioselectivă
a) 4-brom-3-brommetilanisol27
La o soluție sub agitare din 100 g (497 mmoli) de 4-brom-3-metilanisol în 500 ml de diclormetan anhidru se adaugă 97 g (545 mmoli) de N-bromsuccinimidă, urmată de 6 g 29 (25 mmoli) de peroxid de benzoil. Reacția este refluxată încet sub o lampă de 150 watt cu reflector plasat la aproximativ 300 mm de vasul de reacție. După 24 h, reacția este concen- 31 trată în evaporator rotativ până la jumătate din volumul său și este lăsată să stea timp de 4 h. Precipitatul alb care se formează este îndepărtat prin filtrare și spălat cu o cantitate mică 33 de diclormetan. Filtratul este concentrat până la uscare și solidul care rămâne este triturat cu hexani și filtrat. Uscarea sub vid are ca rezultat 100,25 g (72%) compus din titlu sub 35 forma unor ace albe: GC tR = 6,56 min (coloană cu metilsiliciu HP 530 pm x 20 m, debit purtător de He de 20 ml/min, temperatură inițială 100°C, timp inițial 1 min, viteză 10°/min, tem- 37 peratură finală 200°C, timp final 1 minut);
1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,44 (d, J=10 Hz, 1H), 6,99 (d, J=3 Hz, 1H), 6,73 (dd, 39 1H), 4,55 (s, 2H), 3,80 (s, 3H).
b) 3-[N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-bromanisol 41
O cantitate de 24 g (242 mmoli) de 2,2,2- trifluoretilamină se adaugă rapid la o soluție sub agitare de 33,6 g (120 mmoli) de 4-brom-3-brommetilanisol în 125 ml de DMSO anhidru 43 la temperatura camerei. Reacția se încălzește până la aproximativ 3O...35°C. După agitare timp de 18 h, reacția este diluată cu 200 ml de NaOH 1N răcit cu gheață și se extrage cu 45 x 300 ml Et2O. Straturile organice combinate se spală cu 300 ml de saramură, se usucă pe MgSO4, și se concentrează pentru a rezulta 41,35 g (96%) compus din titlu sub forma 47 unui ulei galben deschis: CSS (toluen) Rf 0,32;
RO 119881 Β1 ’H RMN (400, CDCI3) δ 7,43 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,97 (d, J=3 Hz, 1H), 6,71 (dd, 1H),
3,93 (brs, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 1,86 (brs, 1H).
c) 3-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-bromanisol
La 41,35 g (137 mmoli) de 3-[N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-bromanisol se adaugă 36 g (165 mmoli) de dicarbonat de di-oxo-butil lichefiat prin încălzirea într-o baie cu apă fierbinte). Amestecul de reacție se spală cu o cantitate mică de diclormetan (~20 ml) și se agită sub argon într-o baie de ulei de 50°C timp de 18 h (se observă o degajare ușoară de gaz). După concentrarea în evaporator rotativ sub vid, reziduul care rezultă este diluat cu 100 ml de hexani și în soluție se adaugă o cantitate mică din produsul solid pur (obținut dintr-o reacție anterioară prin cromatografie pe silicagel folosind 10% AcOEt/ hexani ca eluant). Amestecul este lăsat să stea la temperatura camerei timp de câteva ore, după care este introdus într-un frigider pe timpul nopții. Produsul este colectat prin filtrare cu aspirare și este spălat cu hexani. Uscarea sub vid are ca rezultat 48,54 g (88%) compus din titlu sub forma unui solid incolor: CSS (EtOAc/toluen 10%) Rt 0,52;
’H RMN (400, CDCI3) δ 7,44 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,75 (dd, 1H), 6,71 (s, 1H), 4,65 și 4,58 (2s, 2H), 3,90 și 3,78 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 1,51 și 1,42 (2s, 9H).
d) 2-[N-(tefț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-metoxicinamat de metil O soluție constitutită din 48,19 g (121 mmoli) de 3-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2,2,2- trifluoretil)-aminometil]-4-bromanisol, 55 ml (605 mmoli) acrilat de metil, 1,36 g (6,1 mmoli) de acetat de paladiu, 3,69 g (12 moli) de tri-o-tolilfosfină și 49 ml (278 mmoli) de diizopropiletilamină în 200 ml de acetonitril este deoxigenată (3 x cicluri de evacuare/purjare cu argon), este apoi încălzită la reflux sub argon într-o baie de ulei fixată la 80’0. După 6 h se mai adaugă 1,36 g (6,1 mmoli) de acetat de paladiu și 3,69 g (12 mmoli) de trAo-tolilfosfină și reacția este agitată la reflux încă 18 ore. Reacția este concentrată până la uscare și reziduul este reluat în 300 ml de Et2O/ eter de petrol 1:1 și este lăsată să stea timp de 4 h. Se îndepărtează prin filtrare un precipitat gri și se spală cu un volum mic de -100 ml de Et2O/ eter de petrol 1:1. Filtratul roșu-portocaliu este concentrat și purificat prin cromatografie rapidă pe silicagel (15% acetat de etil/ hexani). Reziduul care rezultă este reluat în hexan, și amestecul este lăsat să stea timp de 2 ore, după care este filtrat pentru a îndepărta precipitatul galben. Concentrarea filtratului dă 45,85 g (94%) compus din titlu sub forma unui ulei galben: CSS (EtOAc/hexan 20%) R( 0,50;
’H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,84 (d, J = 16 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 9Hz, 1H), 6,86 (dd, 1H), 6,74 și 6,72 (2s, 1H), 6,26 (d, J= 16 Hz, 1H), 4,74 și 4,70 (2s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,80 și 3,66 (2m, 2H), 1,51 și 1,45 (2s, 9H).
e) 2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifloretil)-aminometil]-4-metoxidihidrocinamat de metil
La 5g (4,7 mmoli, preumectat cu DMF) de Pd/C 10% se adaugă o soluție din 45,85 g (113mmoli)de2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-amino]-metil-4-metoxicinamat de metil în 100 ml de metanol. Amestecul este agitat sub presiune de 3,4 x 105 Pa de hidrogen într-un aparat Parr timp de 6 h, și este filtrat apoi printr-un strat de celită® pentru a îndepărta catalizatorul. Filtratul este concentrat pentru a se obține 43,71 g (95%) compus din titlu sub forma unui ulei incolor:
’H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,11 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,65 (s, 1H), 4,63 și 4,60 (2s, 2H), 3,84 și 3,70 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 2,86 (t, 2H), 2,53 (t, 2H), 1,50 și 1,44 (2s, 9H).
f) Acid 2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-metoxidihidrocinamic
La o soluție sub agitare din 43,71 g (108 mmoli) de 2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(2,2,2trifluoretil)-aminometil]-4-metoxidihidrocinamat de metil în 200 ml de dioxan se adaugă
130 ml de NaOH 1N (130 mmoli). Amestecul de reacție tulbure se agită la temperatura
RO 119881 Β1 camerei timp de 4 h. Soluția omogenă care rezultă este neutralizată cu 130 ml (130 mmoli) 1 de HC11N și este extrasă cu 2 x 250 ml de acetat de etil. Straturile organice combinate se spală cu 250 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a rezulta 3
45,01 g (100%) compus din titlu sub forma unui ulei limpede vâscos: CSS (95:4:1 CHCI3,
MeOH, HOAc); R( 0,49. 5
g) 2-[N-(tert-butixocarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-metoxidihidrocinamidă de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil 7
La o soluție sub agitatre, constituită din 45,Og (108 mmoli) de acid 2-[N-(tertbutoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-metoxidihidrocinamicși 10 ml (124 mmoli) 9 de piridină în 400 ml de diclormetan anhidru sub argon se adaugă 6,8 ml (74 mmoli) de fluorură cianurică prin intermediul unei seringi. Reacția este agitată la temperatura camerei timp 11 de 4 h. Suspensia groasă care rezultă se filtrează printr-un strat de celită® și stratul filtrului este clătit cu o cantitate mică de diclormetan anhidru (50 ml). Filtratul limpede se toarnă într- 13 o pâlnie separatoare și se spală cu 750 ml de apă rece gheață. Uscarea pe MgSO4 și concentrarea dau 43,32 g (100%) fluorură acidă brută care este folosită fără a mai fi purificată. 15
La o soluție sub agitare, de 21 g (119 mmoli) de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonă în 400 ml de THF anhidru sub argon la -78’C se adaugă prin intermediul unei seringi o soluție 17 de nBuLi în hexani (2,5 M, 113 mmoli). Reacția se agită la -78°C timp de 15 min, după care se adaugă prin intermediul unei seringi 43,32 g (108 mmoli) din fluorură acidă de mai sus 19 în 100 ml de THF anhidru. Reacția se agită timp de 1 h la -78°C după care se stinge cu NH4CI saturată și se extrage cu 2 x 250 ml de acetat de etil. Straturile organice combinate 21 se spală cu 500 ml de saramură, se usucă pe MgSO4, și se concentrează până la uscare. Purificarea prin cromatografie rapidă pe silicagel (20% acetat de etil/hexani) dă (55,27 g, 23 91%) compus din titlu sub forma unui ulei limpede vâscos: CSS (silice, 20% acetat de etil/ hexani) Rf 0,24; 25 ’H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,34-7,26 (m, 3H), 7,19-7,16 (m, 3H), 6,78 (dd, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,68-4,63 (m, 3H), 4,21-4,11 (m, 2H), 3,87 și 3,74 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,28 27 (dd, 1H), 3,17 (m,2H), 2,93 (m, 2H), 2,75 (dd, 1H), 1,50 și 1,45 (2s, 9H).
h) (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil-3-2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-ami- 29 nometil]-4-metoxifenil]-2-(S)-metoxicarbonilmetil-propionamidă
La o soluție sub agitare de 55,2 g (100 mmoli) de 2-[N-(te/î-butoxicarbonil)-N-(2,2,2 31 -trifluoretil)-aminometil]-4-metoxidihidrocinamat de (R)-4-benzil-oxazolidinonil în 300 ml de THF anhidru la -78’C se adaugă o soluție din 115 ml (1M în THF, 115 mmoli) de litiu bis 33 (trimetilsilil)amidă prin intermediul unei seringi. După 30 min se adaugă 47 ml (497 mmoli) de bromacetat de metil prin intermediul unei seringi. După alte 30 de min la -78’C reacția 35 este lăsată să se încălzească la -20'C și este agitată încă 6 h. Reacția este stinsă cu 400 ml de NH4CI saturată și este extrasă cu 2 x 250 ml de acetat de etil. Straturile organice combi- 37 nate se spală cu 400 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează până la uscare. Purificarea prin cromatografie rapidă pe silicagel (20% acetat de etil/hexani) dă 39 (52,44 g, 75%) compus din titlu sub forma unui solid alb: HPLC (Altex Ultrasphere™Si 5u, acetat de etil/hexan 20%) indică prezența a circa 6...7% din materialul brut nealchilat. 41 Analiza HPLC a amestecului brut de reacție dă o conversie de 86% pentru reacție;
1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,35-7,13 (m, 6H), 6,73 (dd, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,69-4,53 43 (m, 4H), 4,04 (d, 1H), 3,87 (t, 1H), 3,85-3,72 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,31 (dd, 1H), 2,95 (dd, 1H), 2,92-2,71 (m, 2H), 2,71 (dd, 1H), 2,50 (m, 1H), 1,50 și 1,47 (2 br s, 9H). 45
i) (S)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil 47
La o soluție sub agitare, constituită din 52,40 g (75 mmoli) de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonil-3-[2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2,2,2-trifluoretil)-aminometil]-4-metoxifenil]-2(S)- 49 metoxicarbonil-metil-propionamidă în 300 ml de THF și 100 ml de apă se adaugă prin
RO 119881 Β1 picurare la 0’ C, timp 30 min, o soluție din 26 ml de H2O2 30% și 3,2 g (75 mmoli) de LiOH H2O în 85 ml de apă. Soluția tulbure se agită timp de încă 1 h la O’C. Soluția omogenă care rezultă este tratată lent cu o soluție din 46 g (365 mmoli) de sulfit de sodiu în 240 ml de apă la O’C, după care se acidulează cu o soluție concentrată, rece-gheață, de 45 ml HCI în 200 ml de apă. Reacția se extrage cu 2 x 300 ml acetat de etil și straturile organice combinate se spală cu 600 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează până la uscare. Reziduul care rezultă este tratat cu HCI 4,OM în 500 ml de dioxan cu agitare la temperatura camerei (se observă o degajare ușoară de gaz). După 1 h, reacția este concentrată și reconcentrată de 2 ori din CHCI3/toluen 1:1, după care cele 48,89 g de reziduu sunt reluate în 500 ml de DMF anhidu. La această soluție cu agitare sub argon la O’C într-un vas Dewar se adaugă 21 ml (150 mmoli) de trietilamină și 31,5g (375 mmoli) de NaHCO3, urmate de 18 ml (83,5 mmoli) de difenilfosforil azidă. După agitare timp de 24 h la O’C, amestecul de reacție este concentrat până la uscare. Reziduul este reluat în 500 ml de acetat de etil și este spălat succesiv cu 400 ml de apă și 400 ml de saramură. Uscarea pe MgSO4, concentrarea și cromatografia rapidă pe silicagel (30% acetat de etil/hexan) dă 21,81 g (84%) compus din titlu sub forma unui solid alb: [a]0 -132,6’ (c, 1,0, MeOH); CSS (40% EtOAc/hexan) R( 0,56; HPLC chirală (Chiracel OD, EtOAc/hexan 20%) k' = 2,05; enantiomerul opus dintr-un racemic standard are k1 = 1,86 (nu a fost detectat); MS (ES) m/e 346,2 (M + H)+;
’H RMN (400, CDCI3) δ 7,03 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,79 (dd, 1H), 6,61 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,35 (d,J = 16,7 Hz, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,99 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s,3H), 3,01 (m,2H), 2,91 (dd, 1H), 2,47 (dd, 1H).
Anal. Calc, pentru C16H18F3NO4: C 55,65; H 5,25; N 4,06.
Găsit: C 55,62; H 5,27; N 4,04.
j) (S)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil 250 ml de soluție 1M din dibromură de bor (250 mmoli) în CH2CI2 se adaugă prin picurare în 30 de min la o soluție din 21,5 g (62,3 mmoli) de (S)-8-metoxi-3-oxo-2-(2,2,2trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 230 ml de CH2CI2 la -20’C sub argon. După încă 1,5 h la -15°C până la -20’C, reacția este răcită din nou la -20’C și este stinsă prin adăugare cu atenție a 250 ml de MeOH. Amestecul de reacție este agită la -10’C până la O’C timp de 1 h, după care se concentrează în evaporator rotativ. Reziduul este reconcentrat de 2 ori din MeOH. Purificarea prin cromatografie rapidă pe silicagel (50% acetat de etil/hexani) dă 19,38 g (94%) compus din titlu sub forma unui solid alb: [a]D -130,5’ (c, 1,0, MeOH) CSS (silice, 40% acetat de etil/hexani) R( 0,40; MS(ES) m/e 332,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, CDCI3 + 2% DMSO-de) δ 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,71 (dd, 1H), 6,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 4,21-3,98 (m, 2H), 3,96 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,98 (dd, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,83 (dd, 1H), 2,46 (dd, 1H).
Anal. Calc, pentru C,5H16F3NO4: C 54,38; H 4,87; N 4,23.
Găsit: C 54,40; H 4,96; N 4,22.
Prepararea 22. Prepararea (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetatului de metil prin sinteză enantioselectivă
a) 3-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2-feniletil)-amino]-metil-4-bromanisol
19,0 ml (150 mmoli) de 2-feniletilamină se adaugă dintr-o dată la o soluție din 14,0 g (50 mmoli) de 4-brom-3-brommetilanisol în 200 ml de THF anhidru la temperatura camerei. După 18 h amestecul este concentrat. Reziduul este dizolvat în 300 ml de NaOH 2M și este extras cu 3 x 200 ml de CH2CI2. Straturile combinate de CH2CI2, se usucă pe MgSO4 și se concentrează. Materia brută se filtrează printr-un strat de silicagel folosind ca eluant 50% AcOEt/hexani. Filtratul este concentrat la presiune redusă pentru a da un ulei galben: MS (ES) m/e 320 (M + H)+.
RO 119881 Β1
Uleiul galben de mai sus se dizolvă în 200 ml de THF anhidru și 13,0 g (60,0 mmoli) 1 de dicarbonat de di-oxo-butil se adaugă dintr-o dată la temperatura camerei. După 1 h soluția se concentrează. Cromatografia rapidă pe silicagel (10% AcOEt/hexani) dă 20,8 g 3 (100%) compus din titlu sub forma unui solid apropape alb (din 4-brom-3-brommetilanisol):
Ή RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,51-7,10 (m, 6H), 6,85-6,60 (m, 2H), 4,52-4,33 (m, 5
2H), 3,71 (s, 3H), 3,52-3,31 (m, 2H), 2,92-2,73 (m, 2H), 1,61-1,33 (m, 9H).
b) Acid 4-[2-[N-(terț-butoxicarbonil)-N-(2-feniletil)-amino]-metil-4-metoxifenil]-pro- 7 pionic
O soluție constituită din 20,0 g (48,0 mmoli) de 3-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2-fenil- 9 etil)-amino]-metil-bromanisol, 23,0 g (144 mmoli) acrilat de benzii, 540 mg (2,40 mmoli) acetat de paladiu, 1,46 g (4,80 mmoli) de frio-tolilfosfină și 17,0 ml (96,0 mmoli) de diizo- 11 propiletilamină în 250 ml de propionitril este deoxigenată (3 x cicluri de evacuare/ purjare cu argon), după care este încălzită la reflux sub argon. După 48 h, amestecul de reacție este 13 răcit la temperatura camerei, este filtrat printr-un strat de celită® și este concentrat. Cromatografia rapidă pe silicagel (10% AcOEt/hexani) dă un ulei galben, care este dizolvat în 15 100 ml de 10% AcOEt/hexani și este lăsat la 4’C timp de 72 h. Precipitatul galben este îndepărtat prin filtrare, după care soluția este concentrată pentru a da 14,98 g (62%) dintr-un ulei 17 galben pal:
1H RMN (250 MHz, CDCI3) δ 8,00-7,85 (m, 1H), 7,61-7,01 (m, 11H), 6,85-6,76 (m, 19
2H), 6,75-6,67 (m, 1H), 6,32 (m, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,60-4,41 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,52-3,20 (m, 2H), 2,93-2,71 (m, 2H), 1,55-1,33 (m, 9H). 21
Uleiul de mai sus este dizolvat în 150 ml de MeOH și se adaugă la O’C 6,40 g (6,00 mmoli) de Pd/C 10%. Amestecul este încălzit la temperatura camerei, se agită sub 23 presiune de 3,4 x 105 Pa, de hidrogen timp de 7 h, după care este filtrat printr-un strat de celită® pentru a îndepărta catalizatorul. Filtratul este concentrat la presiune redusă pentru 25 a da 10,35 g (83%) compus din titlu sub forma unui ulei galben vâscos:
1H RMN (250 MHz, CDCI3) δ 7,35-7,02 (m, 6H), 6,85-6,76 (m, 2H), 6,75-6,73 (m,27
1H), 6,69-6,68 (m, 1H), 4,42-4,25 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,44-3,25 (m, 2H), 2,92-2,73 (m, 4H), 2,59-2,50 (m, 2H), 1,60-1,33 (m, 9H).29
c) [[5-metoxi-2-[3-oxo-3-[2-oxo-4-(fenilmetil)-3-oxazolidinil]propil]fenil]metil]-(2-fenil- etil)-carbamat de (R)-1,1-dimetiletil31
La o soluție de 10,35 g (25,0 mmoli) de acid 4-[2-[N-(tert-butoxicarbonil)-N-(2feniletil)-amino]-metil-4-metoxifenil]propionic în 125 ml de CH2CI2 se adaugă 2,4 ml (30,033 mmoli) de piridină și apoi 1,4 ml (15,0 mmoli) de fluorură cianurică la temperatura camerei.
După 2 ore, amestecul se filtrează printr-un strat de celită®, se spală cu 100 ml de H2O rece 35 și apoi cu 100 ml de saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează.
La o soluție din 5,30 g (30,0 mmoli) de (R)-4-benzil-2-oxazolidinonă în 125 ml de THF37 anhidru se adaugă 11,0 ml (soluție 2,5 M în hexani, 27,5 mmoli) de n-BuLi la -78’C. După min se adaugă prin picurare fluorură acidă de mai sus în 25 ml de THF anhidru, timp de 39 5 min. După 1 h amestecul se toarnă în 300 ml de H2O și se extrage cu 3 x 200 ml de AcOEt. Straturile combinate de AcOEt se usucă pe MgSO4 și se concentrează. Cromato- 41 grafia rapidă pe silicagel (30% AcOEt/hexani) dă 12,12 g (85%) compus din titlu sub forma unui ulei vâscos: 43
Ή RMN (250 MHz, CDCI3) δ 7,41-7,12 (m, 11H), 6,65 (m, 1H), 6,60 (m, 1H), 4,704,62 (m, 1H), 4,50-4,35(m, 2H), 4,21-4,10 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,50-2,61 (m, 10H), 1,55- 45
1,41 (m, 9H).
d) fi-[[4-metoxi-2-[[[(1,1-dimetiletoxi)-carbonil]-(2-feniletil)-amino]metil]fenil]metil]-y- 47 oxo-4-(fenilmetil)-3-oxazolidinbutanoat de [R-(R*,S*)]-metil
La o soluție din 12,12 g (21,0 mmoli) de [[5-metoxi-2-[3-oxo-3-[2-oxo-4-(fenilmetil)-3- 49 oxazolidinil]propil]fenil]metil]-(2-feniletil)-carbamat de (R)-1,1-dimetiletil în 100 ml de THF
RO 119881 Β1 anhidru se adaugă 22,0 ml (1M în THF, 22,0 mmoli) de litiu bis (trimetilsilil) amidă la -78’0. După 15 min se adaugă 9,9 ml (105 mmoli) de bromacetat de metil, după care amestecul se încălzește la 20”C. După 3 h, amestecul se toarnă în 200 ml de H2O și se extrage cu 3 x 500 ml de AcOEt. Straturile combinate de AcOEt se usucă cu MgSO4 și se concentrează. Cromatografia rapidă pe silicagel (25% AcOEt/hexani) dă 9,91 g dintr-un amestec 3:2 (HPLC, 20% AcOEt/hexani) din compusul din titlu și respectiv, [[5-metoxi-2-[3-oxo-3-[2-oxo4-(fenilmetil)-3-oxazolidinil]propil]fenil]metil]-(2-feniletil)-carbamat de (R)-1,1-dimetiletil. Acest amestec este folosit fără altă purificare: MS (ES) m/e 667 (M + Na)+.
e) (S)-8-metoxi-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
La o soluție din 9,91 g (15,4 mmoli) de 3-[[4-metoxi-2-[[[(1,1-dimetiletoxi)-carbonil]-(2feniletil)-amino]metil]fenil]metil]-Y-oxo-4-(fenilmetil)-3-oxazolidinbutanoat de [R-(R*,S*)]-metil în 75 ml de THF se adaugă o soluție din 646 mg (15,4 mmoli) de monohidrat de hidroxid de litiu și 5,2 ml (30% în H2O2 46,2 mmoli) de H2O2 în 25 ml de H2O la 0”C timp de 10 min. După
1,5 h se adaugă o soluție din 9,7 g (77 mmoli) de Na2SO3 în 100 ml de H2O. Amestecul se acidulează până la pH 4 folosind HCI 2M și se extrage cu 3 x 200 ml de AcOEt. Straturile combinate de AcOEt se usucă pe MgSO4 și se concentrează. Reziduul care rezultă este dizolvat în 75 ml de HCI 4M în dioxan. După 45 min, amestecul este concentrat și apoi reconcentrat din 200 ml de toluen.
Reziduul de mai sus se dizolvă în 75 ml de DMF anhidru. La această soluție se adaugă 6,50 g (77,0 mmoli) de NaHCO3 și 4,3 ml (30,8 mmoli) trietilamină la temperatura camerei. Amestecul se răcește la 0°C și se adaugă 5 ml (23,1 mmoli) de difenilfosforil azidă. După 16 h amestecul este concentrat. Pasta care rezultă se dizolvă în 500 ml de AcOEt, se spală cu 2 x 300 ml de H2O, se usucă cu MgSO4 și se concentrează. Cromatografia rapidă pe silicagel (40% AcOEt/hexani) dă 2,61 g de compus din titlu (33% din p-[[4-metoxi-2[[[(1,1-dimetiletoxi)-carbonil]-(2-feniletil)-amino]metil]fenil]metil]-Y-oxo-4-(fenilmetil)-3oxazolidinbutanoat de [R-(R*,S*)]-metil sub forma unui ulei limpede: MS (ES) m/e 390 (M + Na)+.
f) (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
La o soluție de 2,61 g (7,1 mmoli) de (S)-8-metoxi-3-oxo2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 40 ml de CH2CI2 se adaugă 21,3 ml (1M în CH2CI2, 21,3 mmoli) de BBr3 la -20°C. După 45 de min, amestecul este stins cu 200 ml de MeOH și este concentrat. Reziduul este filtrat printr-un strat de silicagel folosind 50% AcOEt/hexani ca eluant. Solidul portocaliu care rezultă este recristalizat din MeOH/H2O pentru a da 2,16 g (81%) compus din titlu sub forma unui solid aproape alb: MS (ES) m/e 376 (M + Na)+.
Exemplul 1. Prepararea acidului (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a)(±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție de 1,4 g (8 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-1-propil)-amino]-piridin-N-oxid în 8 ml de DMF anhidru se adaugă prin picurare la o soluție constituită din 1,7 g (7 mmoli) de (±)-8hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 2,76 g (11 mmoli) de trifenilfosfină și 2,33 ml (14 mmoli) de dietil azodicarboxilat în 4 ml de DMF anhidru și 10 ml de THF uscat la temperatura camerei sub argon. Soluția care rezultă este agitată timp de 18 h, apoi este concentrată sub vid. Cromatografia pe silicagel (2%-10% CH3OH/ CH2CI2) dă 1,2 g de compus din titlu: MS (ES) m/e 400,2 (M + H)+. Se recuperează de asemenea 0,4 g de (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,54etrafiîcliOrlH-2-benzazepin-4-acetat de metil.
RO 119881 Β1
b) (±)-8-[3[2-(2-piridilamino)]-1-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-4- 1 acetat de etil
Un amestec constituit din 1,2 g (3 mmoli) de (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]- 3 propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 1,2 g de paladiu 10% pe cărbune, 3 ml (15 mmoli) de ciclohexenă și 20 ml de etanol este încălzit la reflux timp de 5 18 h. Amestecul este filtrat și filtratul este concentrat. Reziduul este purificat prin cromatografie pe silicagel (2%-5% CH3OH/ CH2CI2) pentru a da 0,72 g (64%) compus din titlu sub 7 forma unei spume albe: MS (ES) m/e 398,2 (M + H)+.
c) Acid (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi)-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4- 9 acetic
Un amestec constituit din 0,7 g (2 mmoli) de (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo- 11
2.3.4.5- tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de etil, 0,12 g (3 mmoli) de monohidrat de hidroxid de litiu, 5 ml de THF, 5 ml de H2O și 2 ml de MeOH se agită la temperatura camerei 13 timp de 18 h, după care se concentrează. Reziduul este repartizat între acetat de etil și apă și straturile se separă. Faza apoasă este adusă cu precauție la pH 4 cu HCI 3N și este lăsată15 să stea. Cristalele care rezultă sunt colectate prin filtrare și uscate pentru a da 0,4 g (65%) compus din titlu sub forma unui solid închis la culoare: MS (ES) m/e 370,4 (M + H)\17
Anal. Calc pentru C^H^N^ · 0,25 H2O: C 64,25; H 6,34; N 11,24.
Găsit: C 64,02; H 6,37; N 11,20.19
Exemplul 2. Prepararea acidului (±)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-
2.3.4.5- tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic21
a) (±)-8-[3-[2-(4-nitro-N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-lH-2- benzazepin-4-acetat de metil23
Conform procedurii din exemplul 1(a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-1propil)amino]nitropiridin-N-oxid, a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]piridin-N-oxidului, se prepară25 compusul din titlu sub forma unei spume portocalii: MS (ES) m/e 445,2 (M + H)+.
b) (±)-8-[3-[2-(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benz-27 azepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[2-(4-nitro-N-29 oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatului31 de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 399,3 (M + H)+.33
c) Acid (±)8-[3-[(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2-(2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2- benzazepin-4-acetic35
Conform procedurii din exemplul 1(c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[(4-amino-2piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)8-37 [3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, compusul din titlu se prepară sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 385,4 (M + H)+.39
Anal. Calc pentru C20H24N4O4 · 1,25 H2O: C 59,03; H 6,56; N 13,76.
Găsit: C 58,80; H 6,49; N 13,62.41
Exemplul 3. Prepararea acidului(±)-8-[3-(4-metoxi-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-
2.3.4.5- tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic43
a)(±)-8-[3-[2-(4-metoxi-N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil45
Conform procedurii din exemplul 1(a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-propil)amino]-4-metoxipiridin-N-oxid a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]piridin-N-oxidului, se prepară 47 compusul din titlu sub forma unui ulei bicolor: MS (ES) m/e 430,3 (M + H)+. !
RO 119881 Β1
b) (±)8-[3-(4-metoxi-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[2-(4-metoxiN-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetatului de metil, compusul din titlu se prepară sub forma unui ulei galben pal: MS (ES) m/e 414,4 (M + H)+.
c) Acidul (±)-8-[3-[(4-metoxi-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1(c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3(4metoxi-2piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatde metil a (±)-8[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, compusul din titlu se prepară sub forma unui solid aproape alb: MS (ES) m/e 400,3 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C21H25N3O5 · 0,75 H2O: C 61,08; H 6,47; N 10,18.
Găsit: C 61,15; H 6,20; N 10,12.
Exemplul 4. Prepararea acidului (±)-8-[3-(2piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-8-[3-(2-(N-oxopiridil)-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro- 1H -2benzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 252,3 mg (1,5 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridinN-oxid și 0,24 ml (1,5 mmoli) de dietil azodicarboxilat în 7,5 ml de DMF anhidru se adaugă prin picurare la o soluție din 197,5 mg (0,75 mmoli) de (±)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 413,1 mg (1,58 mmoli) de trifenilfosfină în
7.5 ml de DMF anhidru la temperatura camerei. Adăgarea necesită 15 min și este ușor exotermică. După 2 h, amestecul de reacție este concentrat și reziduul este reconcentrat din xileni. Cromatografia pe silicagel (AcOEt/ CHCiy MeOH 2:2:1) dă un produs cu R( 0,48 (CSS în AcOEt/ CHCI2 / MeOH 2:2:1) sub forma unui ulei tulbure, aproape incolor. Acesta este recromatografiat pe silicagel (EtOH absolut) pentru a da 243,9 mg (79%) compus din titlu sub forma unei spume albe: CSS (EtOH absolut) R( 0,33;
Ή RMN (250, CDCI3) δ 8,12 (app dd, 1H), 7,10-7,23 (m, 1H), 6,90-7,10 (m, 2H), 6,78 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H), 6,45-6,72 (m, 3H), 5,28 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 3,95 - 4,25 (m, 2H), 3,60-3,90 (m, 1H), 3,76 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,51 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 2,73-3,15 (m, 3H), 3,04 (s, 3H), 2,41 (dd, J = 16,7, 5,4 Hz, 1H), 2,05-2,28 (m, 2H); MS (ES) m/e 414 (M + H)+.
b) (±)8-[3-(2-pindilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin4-acetat de metil
Un amestec constituit din 243,9 mg (0,59 mmoli) de (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 0,60 ml (5,9 mmoli) de ciclohexenă, și 63 mg (0,06 mmoli) de Pd/C 10% în 6 ml de 2-propanol este încălzit la reflux. După 21,5 h, reacția este răcită la temperatura camerei și este filtrată prin celită®. Filtratul este concentrat și reziduul este reconcentrat din toluen. Cromatografia pe silicagel (5% MeOH în AcOEt/CHCI3, 1:1) dă 212,8 mg (91%) compus din titlu sub forma unui ulei incolor: CSS (5% MeOH în AcOEt/CHCI, 1:1) R( 0,39;
Ή RMN (250, CDCI3) δ 8,03-8,13 (m, 1H), 7,35-7,48 (m, 1H), 7,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,52-6,62 (m, 1H), 6,40 (d, J =
8.5 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 4,62-4,82 (m, 1H), 3,95-4,20 (m, 2H), 3,60-3,90(m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,50 (q, J = 6,3 Hz, 2H), 2,75-3,15 (m, 3H), 3,03 (s, 3H), 2,40 (dd, J = 16,7, 5,3 Hz, 1H), 2,00-2,22 (m, 2H); MS (ES)m/e 398(M + H)'.
RO 119881 Β1
c) Acid (±)8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benz- 1 azepin-4-acetic
0,80 ml (0,80 mmoli) de LiOH 1,0 N se adaugă la o soluție din 207,5 mg (0,52 mmoli) 3 de(±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil în 2,6 ml de THF și 18,0 ml de H2O la temperatura camerei. Soluția tulbure 5 inițială devine omogenă în 1 minut. După 18 h, reacția este acidulată cu 0,12 ml (1,56 mmoli) de TFA și se concentrează. Cromatografia ODS (20% CH3CN/ H2O care conține 0,1 % TFA), 7 concentrarea și liofilizarea dau 252,4 mg (83%) compus din titlu sub forma unui solid galben deschis higroscopic: HPLC (PRP-1®, 20% CH3CN/ H2O care conține 0,1% TFA) K' = 2,4; 9 1H RMN (400 MHz, CDOD3) δ 7,83-7,93 (m, 1H), 7,76-7,83 (m, 1H), 7,00-7,11 (m, 2H), 6,83-6,91 (m, 1H), 6,80 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,30 (d, J =11
16,5 Hz, 1H), 4,05-4,18 (m, 2H), 3,94 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,77-3,90 (m, 1H), 3,57 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,03 (dd, J = 17,0, 4,2 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,83 (dd, J = 17,0, 9,1 Hz, 1H),13
2,72 (dd, J = 17,0,13,5 Hz, 1H), 2,44 (dd, J = 17,0, 4,7 Hz, 1H), 2,11-2,23 (m, 2H); MS (ES) m/e 384 (M + H)+.15
Anal.Calc. pentru C21H25N3O4 · 1,5 CF3CO2H · 1,5 H2O; C 49,57; H 5,11; N 7,23.
Găsit: C 49,65; H 4,95; N 7,15.17
Exemplul 5. Prepararea acidului (±)-8-[3-(2-imidazolilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-2,3,
4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic19
Compusul din titlu este preparat în general conform procedurilor prezentate detaliat în Exemplele 1-4.21
Exemplul 6. Prepararea acidului (±)-8-[3-[2-( 1,4,5,6-tetrahidropirimidinil)-amino]propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic23
a) (±)8-[3-(terț-butoxicarbonilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benz- azepin-4-acetat de metil25
O soluție constituită din 0,14 g (0,8 mmoli) [3-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propanol și 0,13 ml (0,8 mmoli) de azodicarboxilat de dietil în 2 ml de DMF anhidru se adaugă prin 27 picurare la o soluție din 0,10 g (0,4 mmoli) de (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil și 0,21 g (0,8 mmoli) de trifenilfosfină în 1,4 ml de DMF anhidru 29 și 2 ml de THF anhidru, la temperatura camerei sub argon. Soluția care rezultă este agitată timp de 18 h și apoi este concentrată sub vid. Cromatografia pe silicagel (1%-3% 31
MeOH/CH2CI2) dă 0,11 g de compus din titlu: MS (ES) m/e 407,3 (M + H)+
b) Sare trifluoracetat de (±)-8-(3-amino-propiloxi)-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benz- 33 azepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 0,70 g de (±)-8-[3-('-oxo-butoxicarbonilamino)-propiloxi]-3- 35 oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 7 ml de CH2CI2 și 2 ml de TFA este agitată sub argon la 0’C timp de 1 oră, după care este concentrată pentru a da 0,75 g 37 (100%) compus din titlu sub forma unei sticle incolore: MS (ES) m/e 321,4 (M + H)+
c) (±)-8-[3(pirimidin-2-il-amino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4- 39 acetat de metil
Un amestec constituit din 0,75g (2 mmoli) de sare trifluoracetat de (±)-8-(3-amino- 41 propiloxi)-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 0,5g (3 mmoli) de 2brompirimidină, 1,4 g (17 mmoli) de NaHCO3 și 10 ml de EtOH este încălzit la reflux. După 43 24 h, amestecul este filtrat și materialul insolubil este spălat cu MeOH. Filtratul și soluțiile de spălare sunt combinate și concentrate și reziduul este purificat prin cromatografie pe 45 silicagel (1% - 6% MeO/CH2CI2) pentru a da 0,54 g (82%) compus din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 385,5 (M + H)+. 47
RO 119881 Β1
d) Acid (±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-tetrahidropirimidin-2-il)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Un amestec constituit din 0,36 g (0,94 mmoli) de (±)-8-[3(pirimidin-2-il-amino)propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatde metil, în 0,25 ml (1 mmoli) HCI 4M dioxan, 0,24 g (0,24 mmoli) de paladiu pe cărbune 10% și 5 ml de MeOH se agită sub un balon cu hidrogen. După 18 ore, amestecul este filtrat și filtratul este concentrat. Reziduul este repartizat între AcOEt și K2CO3 apos. A precipitat un solid, care este colectat prin filtrare și uscat pentru a da compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e
375,4 (M + H)+.
Anal. Calc, pentru C19H26N4O4 · 2,5 H2O: C 54,40; H 7,45; N 13,35.
Găsit: C 54,68; H 7,12; N 13,39.
Exemplul 7. Prepararea acidului (±)-8-[3-[6-amino-2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Compusul din titlu este preparat în general conform procedurilor prezentate detaliat în exemplele 1 - 4.
Exemplul 8. Prepararea acidului (±)-8-[2-[6-(metilamino)-piridil]etoxi]-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro -1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (a), cu excepția înlocuirii cu 6-(metilamino)-2piridiletanol a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 384 (Μ + H)4.
b) Acid (±)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8-[3-(2piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 370 (M + H)+.
Exemplul 9. Prepararea acidului (±)-8-[2-(2-benzimidazolil)-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-8-[2-(benzimidazol-2-il)-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (a), cu excepția înlocuirii cu 2-(benzimidazol-2-il)etanol a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxid, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid aproape alb: MS (ES) m/e 394,4 (M + H)4, 416,3 (M + Na)+.
b) Acid (±)-8-[2-(benzimidazol-2-il)-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[2-(benzimidazol)-2-il]-etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8-[3-(2piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin*4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 380,4 (M + H)4, 402,3 (M + Na)4.
Exemplul 10. Prepararea acidului (±)-8-[2-(4-aza-2-benzimidazoli)etoxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Se prepară compusul din titlu în general conform procedurilor detaliate în exemplul 9.
RO 119881 Β1
Exemplul 11. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-il-amino)-propiloxi]-2- 1 (2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-3-oxo-8-[3-(1-oxo-piridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetra- 3 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 252,3 mg (1,5 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin- 5 N-oxid și 0,24 ml (1,5 mmoli) de azodicarboxilat de dietil în 7,5 ml de DMF anhidru se adaugă prin picurare 3...4 min la o soluție constituită din 248,5 mg (0,75 mmoli) de (±)-8- 7 hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 413,1 mg (1,58 mmoli) de trifenilfosfină în 7,5 ml de DMF anhidru la temperatura camerei.9
După 17 h, reacția este concentrată și reziduul este reconcentrat din xileni/CHCI3. Cromatografia pe silicagel (gradient: AcOEt (500 ml) apoi 5% MeOH/CHCI3) dă 253,6 mg (70%) corn- 11 pus din titlu sub forma unei spume aproape albe.
1H RMN (250, CDCI3) δ 8,11 (dd, J = 6,1,1,4 Hz, 1H), 7,10-7,23 (m, 1H), 6,93-7,1013 (m, 2H), 6,81 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H), 6,45-6,70 (m, 3H), 5,34 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,754,30 (m, 6H), 3,71 (s, 3H), 3,51 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 2,80-3,15 (m, 3H), 2,46 (dd, J =16,8, 5,515
Hz, 1H), 2,07 -2,28 (m, 2H); MS (ES) m/e 482,2 (M + H)+.
b) (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretH)-2,3,4,5-tetrahidro-17
H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Un amestec constituit din 253,6 g (0,53 mmoli) de (±)-3-oxo-8-[3-(1-oxopiridin-2-il-19 amino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 0,54 ml (5,3 mmoli) de ciclohexenă, 11,3 mg (0,11 mmoli) negru de paladiu și 5,3 ml de 21 izopropanol este încălzit la reflux. După 0,5 h, se adaugă 28,2 mg (0,03 mmoli) de Pd/C 10%, și după 14,5 h se adaugă 11,3 mg (0,11 mmoli) negru de Pd și 0,27 ml (2,65 mmoli) 23 de ciclohexenă. După încă 48 h, reacția este filtrată fierbinte printr-un strat de celită®, și stratul de pe filtru se spală cu amestec fierbinte MeOH/ CHCI3, 1:1. Concentrarea și 25 reconcentrarea din xileni dă un ulei galben. Cromatografia pe silicagel (5% MeOH în AcOEt/MeOH 1:1) dă 194,0 mg (79%) compus din titlu sub forma unui ulei galben deschis: 27
CSS (5% MeOH în AcOEt/CHCI31: 1); R( 0,53;
1H RMN (250, CDCI3) δ 8,08 (dd, J = 5,0,1,0 Hz, 1H), 7,37-7,48 (m, 1H), 7,02 (d, J29 = 8,4 Hz, 1H), 6,79 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,52-6,62 (m, 1H), 6,40 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 4,60-4,80 (m, 1H), 3,75-4,30 (m, 6H),31
3,71 (s, 3H), 3,50 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 2,80-3,15 (m, 3H), 2,46 (dd, J = 16,8, 5,4 Hz, 1H), 2,00-2,25 (m, 2H); MS (ES) m/e 466 (M + H)+.33
c) Acid (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro- 1 H-2-benzazepin-4-acetic35
0,44 ml de LiOH 1,0 N (0,44 mmoli) se adaugă la o soluție constituită din 159,5 mg (0,34 mmoli) de (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetra-37 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 1,7 ml de THF și 13,0 ml de H2O la temperatura camerei. Reacția galbenă, tulbure devine omogenă în 10 min. După 24 h, reacția este 39 concentrată la sec și reziduul galben este dizolvat în 4 ml de H2O. Soluția este filtrată, după care este neutralizată, cu precauție (pH ~ 7) cu HCI 0,1 N. Precipitatul este colectat, spălat 41 cu mult H2O și uscat sub vid la 40 - 45’C pentru a da 130,0 mg (83%) compus din titlu sub forma unui solid aproape alb: HPLC (PRP -1®, 25% CH3CN/ H2O care conține 0,1 % TFA) 43 K' = 3,1;
Ή RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,91 -8,00 (m, 1H), 7,28 -7,40 (m, 1H), 7,02 (d, J = 45
9,2 Hz;1H), 6,76-6,87 (m, 2H), 6,51-6,60 (m, 1H), 6,39-6,50 (m, 2H),5,30 (d, J = 16,6 Hz,
1H), 4,10-4,30 (m, 3H), 4,02 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,70-3,82 (m, 1H), 3,20-3,45 (m, 2H, parțial 47
RO 119881 Β1 acoperit de către semnalul solventului rezidual), 2,99 (dd, 1H), 2,59-2,74 (m, 2H), 2,39 (dd,
J = 16,9, 4,8 Hz, 1H), 1,90-2,03 (m, 2H); MS (ES) m/e 452 (M + H)+.
Anal.Calc, pentru C22H24F3N3O4 · 0,5 H2O: C 57,39; H 5,47; N9,13.
Găsit: C 57,39; H5.18; N 9,00.
Exemplul 12. Prepararea acidului (±)-8-[3-(4,6-dimetilpiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4 -acetic
a) (±) -8[3-(4,6-dimetilpiridin-1 -oxo-piridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil-3- oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-propil] amino]-4,6-dimetilpiridin-N-oxid a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 442,3 (M + H)+.
b) (±)-8-[3-(4,6-dimetHpiridin-2-H-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-
2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-(4,6-dimetil-1 oxo-piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat demetila(±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid galben pal: MS (ES) m/e 426,3 (M + H)+.
c) Acid (±)-8-[3-(4,6-dimetilpiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[(4,6-dimetilpiridin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatde metila(±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 412,2 (M+ H)+.
Anal. Calc, pentru C23H29N3O4 · 0,5 HCI · 0,25 H2O: C 63,62; H 6,96; N 9,68.
Găsit: C 63,62; H 6,96; N 9,69.
Exemplul 13. Prepararea acidului (±)-8-[2-(2-aminotiazol-4-il)-etoxi]-2-metil-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-8-[2-(2-aminotiazol-4-il)-etoxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (a), cu excepția înlocuirii cu 2-(2-aminotiazol-4-ilJetanol (WO/95/32710) a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 390 (M + H)+.
b) Acid (±)8-[2-(2-aminotiazol-4-il)-etoxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[2-(2-aminotiazol4-il)-etoxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)8-[3-(2piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 376 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C18H21N3O4 · 1,3 CF3CO3H · 0,36 H2O: C 46,62; H4.38; N7,93.
Găsit: C 46,45; H 4,57; N 8,27.
Exemplul 14. Prepararea acidului (±)-8-[3-(4-aminopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a)(±)-8-[3-(4-nitro-1-oxopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1(a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-propil)amino]-4-nitropiridin4^OXid'a2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului, și a înlocuirii cu
RO 119881 Β1 (±)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8- 1 hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil se prepară compusul din titlu: MS (ES) m/e 459 (M + H)+. 3
b) (±)-8-[3-(4-aminopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2- benzazepin-4-acetat de metil5
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-(4-nitro-1oxopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat7 de metil a (±)-8-[3-(4-nitro-N-oxopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe:9
MS (ES) m/e 413 (M + H)+.
c) Acid (±)-8-[3-(4-aminopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-11
H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1(c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-(4-amino-13 piridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-aceta-15 tului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 399 (M + H)+.17
Anal. Calc pentru C21H26N4O4· 1,5 CF3CO2H · 0,125 H2O: C 50,62; H 4,91; N 9,83.
Găsit: C 50,63; H 5,26; N 9,90.19
Exemplul 15. Prepararea acidului (±)-8-[3-(pirimidin-2-il-amino)-propiloxi]-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic21
Un amestec constituit din 0,071 g (0,18 mmoli) de (±)-8-[3(4-pirimidin-2-il-amino)propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,009 g (2 mmoli) 23 de hidroxid de litiu monohidrat în 5 ml de THF și 2 ml de H2O se agită la temperatura camerei timp de18 h, după care se concentrează. Reziduul este dizolvat în H2O și pH-ul este 25 ajustat până la 4 cu HCI 3N. Solidul care rezultă este colectat prin filtrare și este uscat pentru a da 0,05 g (73%) compus din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 371,4 (M + H)+. 27
Anal. Calc pentru C^H^N^ · 0,5 H2O: C 60,15; H 6,11; N 14,77.
Găsit: C 60,14; H 6,06; N 14,71.29
Exemplul 16. Prepararea acidului(R)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)amino]-propiloxi]-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepir>-4-acetic31
a) (R)-8-[3-[2-(4-nitro-1 -oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-2- benzazepin-4-acetat de metil33
Conform procedurii din exemplul 1 (a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-propil)amino]-4-nitropiridin-N-oxid a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului se prepară corn-35 pusul din titlu sub forma unei spume portocalii: MS (ES) m/e 445,3 (M + H)+.
b) (R)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benz-37 azepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (R)-8-[3-[2-(4-amino-39
N-oxopiridil)amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-41 acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e
399,4 (M + H)+.43
c) Acid (R)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-2benzazepin-4-acetic 45
Conform procedurii din exemplul 1(c),cu excepția înlocuirii cu (R)-8-[3-[(4-amino-2piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8- 47
RO 119881 Β1 [3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxQ-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid aproape alb: [a]D 23 + 74,97° (c 1,45,
MeOH); MS (ES) m/e 385,4 (M + H)+.
Anal. Calc, pentru C20H24N4O4 · HCI · 1,5 H2O: C 53,63; H 6,30; N 12,50.
Găsit: C 53,87; H6,13; N 12,42.
Exemplul 17. Prepararea acidului (S)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)amino]-propiloxi]-3-oxo-
2.3.4.5- tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-8-[3-[2-(4-nitro-N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-propil)amino]-4-nitropiridin-N-oxid, a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume portocalii: MS (ES) m/e 445,3 (M + H)+.
b) (S)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (S)-8-[3-[2-(4-amino-Noxopiridil)amino]-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS(ES) m/e 399,4 (M + H)+.
c) Acid (S)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-2benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1(c), cu excepția înlocuirii cu (S)-8-[3-[(4-amino-2piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatde metil, a (±)-8[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid aproape alb:[a]D 23 77,5° (c 1,45, MeOH); MS (ES) m/e 385,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C20H24N4O4 1,125 H2O: C 59,36; H 6,54; N 13,84.
Găsit: C 59,31; H 6,74; N 13,73.
Exemplul 18. Prepararea (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de etil
a)(±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de etil
O soluție constituită din 0,27 g (0,7 mmoli) de acid (±)-8-[3-[(4-amino-2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic și 0,2 ml (8 mmoli) de HCI 4M în dioxan, în 10 ml de etanol este încălzită la reflux. După 72 h, amestecul de reacție este concentrat și reziduul este repartizat între AcOEt și K2CO3 apos. Faza organică se spală cu saramură, se usucă pe MgSO4 și se concentrează. Reziduul este dizolvat în 5 ml de toluen și 0,35 ml (2,5 mmoli) de trietilamină și soluția care rezultă este încălzită la reflux. După 18 h, reacția este concentrată sub vid pentru a da 0,20 g (6%) compus din titlu sub forma unei spume închise la culoare: MS (ES) m/e 413,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C22H28N4O4 · 0,25 H2O: C 63,37; H 6,89; N 13,44.
Găsit: C 63,32; H7.17; N 13,05.
Exemplul 19. Prepararea acidului(±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-il)amino]-propiloxi]-2-metil-
3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) Prepararea a (±)-8-[3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino]-propiloxi)-2-metil-3-oxo-
2.3.4.5- tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1(a), cu excepția înlocuirii cu 3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino)-1 -propanol a 2-[(3-hidroxi-1 -propil)-amino]-piridin-N-oxidului, și a înlocuirii cu
RO 119881 Β1 (±)-8-hidroxi-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8-hi- 1 droxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatuiui de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 500,3 (M + H)+. 3
b) (±)-8-[3-amino-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil 5
Un amestec constituit din 1,4 g (3 mmoli) de (±)-8-[3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino]propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, (0,55 g, 7 0,6 mmoli) de paladiu pe cărbune 10%, și 20 ml de EtOH se agită la temperatura camerei sub un balon cu hidrogen. După 18 h, amestecul este filtrat și filtratul este concentrat pentru 9 a da 0,89 g (99%) compus din titlu sub forma unui solid închis la culoare: MS (ES) m/e 321,4 (M + H)+. 11
c) (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-il)-amino]-propHoxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4l5-tetrahidro-1H-2- benzazepin-4-acetat de metil 13
Un amestec constituit din 0,3 g (1 mmoli) de (±)-8-[3-amino-propiloxi]-2-metil-3-oxo-
2.3.4.5- tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 0,46 g (2 mmoli) de 2-metiltioimida- 15 zolină, 0,42 ml (2 mmoli) de diizopropiletilamină și 3 ml de dimetilacetamidă este încălzit la
100°C sub argon. După 2 h, amestecul de reacție este concentrat sub vid și reziduul este 17 repartizat sub vid între CHCI3 și H2O. Faza organică este uscată pe MgSO4 și este concentrată și reziduul este purificat prin HPLC preparativă pentru a da 0,24 g (51%) compus din 19 titlu sub forma unui ulei galben: MS (ES) m/e 389,4 (M + H)+.
d) Acid(±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-21
H-2-benzazepin-4-acetic (±)-8-[3-[(2-lmidazolin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-23 benzazepin-4-acetatul de metil este saponificat conform procedurii din exemplul 1(c). Purificarea prin HPLC preparativă dă compusul din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) 25 m/e 375,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C21H26N4O4 · 1,96 CF3CO2H: C 46,08; H 4,73; N 9,39.27
Găsit: C 46,37; H 4,53; N9,01.
Exemplul 20. Prepararea acidului (±)-8-[3-[(4,5,6,7-tetrahidro-1H-2-diazepin-2-il)29 amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-8-[3-[(2-diazepin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-31 benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 19(c) cu excepția înlocuirii cu 2-metiltio-1,3-diaze- 33 pină a 2-metiltioimidazolinei, se prepară compusul din titlu: MS (ES) m/e 417,4 (M + H)+.
b) Acid (±)-8-[3-[(2-diazepin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro- 35 1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 19(d), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[(2-diazepin-37
2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-[(2-imidazolin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-39 benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu: MS (ES) m/e 403,4 (M + H)+.
Exemplul 21. Prepararea acidului(±)-3-oxo-8-[3-[(4-metilpiridin-2-il-amino)-propiloxi]-41
2-(2,2,2-trifluoretil-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-3-oxo-8-[3-[(4-metil-1 -oxopiridin-2-il-amino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,43
4.5- tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1(a), cu excepția înlocuirii cu 2-[(3-hidroxi-propil)- 45 amino]-4-metilpiridin-N-oxid a 2-[(3-hidroxi-propil)-amino]-piridin-N-oxidului, și a înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-hidroxi-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil 47 a (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 496,3 (M + H)+. 49
RO 119881 Β1
b) (±)3-oxo-8-[3-[(4-metilpiridin-2-ilamino)-propHoxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-(4-metil1-oxopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil a (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxc>-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu: MS (ES) m/e 480,2 (M + H)+.
c) Acid (±)-3-oxo-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetatului de etil, se prepară compusul din titlu; MS (ES) m/e 466,2 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C23H26F3N3O4 · 0,5 H2O: C 58,22; H 5,74; N 8,86.
Găsit: C 58,54; H 5,58; N 8,64.
Exemplul 22. Prepararea acidului(±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[N-(1 -oxipiridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil, a (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 484,4 (M + H)+.
b) Acid(±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c) cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[N-(piridin-2-il)N-(-oxo-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unei pulberi albe: MS(ES) m/e
470,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C25H30NaN3O6 · 3,25 H2O: C 54,59; H 6,69; N 7,64.
Găsit: C 54,47; H 6,32; N 7,95.
Exemplul 23. Prepararea acidului(±)-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil) amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) Acid (±)-8-[3-[N-( 1 -oxopiridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unei pulberi albe:
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 6,6-8,3 (m, 8H), 3,7-4,6 (m, 3H), 3,3-3,6 (m, 5H), 1,80-3,0 (m, 5H), 1,6 (s, 6H), 1,3 (s, 3H); MS (ES) m/e 486,4 (M + H)+.
Exemplul 24. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-[tert-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a)(±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 0,4 g (0,8 mmoli) de 8-[3-[N-(1-oxipiridin-2-il)-N-(teȚ-butoxicarbonil)-amino-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidr0-1 H-2-benzazepin-4-acetatde metil în 5 ml
RO 119881 Β1 de DMF se răcește la -20’C (CCI4/ baie de gheață uscată) și se adaugă prin picurare 0,9 ml 1 (soluție 1,0 M, 0,9 mmoli) de (TMS)2 NLi. După 10 min se adaugă o soluție constituită din
0,211 g (0,88 mmoli) de bromură de 4-trifluormetilbenzil în 0,5 ml de DMF. Soluția este agi- 3 tată sub atmosferă de argon la -20°C timp de 10 min și apoi la temperatura camerei timp de
h. Soluția este concentrată și reziduul este reluat în AcOEt și este spălat succesiv cu 5
NaHCO3 5% (2 x), H2O (1 x), acid citric 5% (2 x), H2O (1 x), și saramură (1 x). Straturile AcOEt se usucă pe MgSO4 și se concentrează pentru a da 0,42 g (80%) compus din titlu:7
MS (ES) m/e 658,3 (M + H)+.
b) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluor-9 metilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1 -11 oxipiridin-2-il)-N-(te/ț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3- 13 oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4 acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unui ulei limpede: MS (ES) m/e 642,3 (M + H)+. 15
c) Acid (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4 trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic17
Conform procedurii din exemplul 1(c),cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetra-19 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu sub forma unui21 solid aproape alb; MS (ES) m/e 628,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru Ο^Η^Ν-,Οθ · 0,5 H2O: C 62,25; H 5,86; N 6,60.23
Găsit: C 62,01; H 5,92; N6,81.
Exemplul 25. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-[(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-25 trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) Acid (±)-3-oxo-8-[3-[(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-27 tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
O cantitate de 0,158 g (0,25 mmoli) de acid (±)-3-oxo-8-[3-[N(piridin-2-il)-N-(te/ț-29 butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-
4-acetic se tratează cu HCI 4M în 3 ml de dioxan la temperatura camerei timp de 1 h, după 31 care soluția este concentrată. Cromatografia ODS (gradient 5 - 60% CH3CN/H2O care conține 0,1% TFA timp de 1 oră), concentrarea și liofilizarea dau 0,117 g (82%) compus din 33 titlu: MS (ES) m/e 528,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C28H28N3O4 · 1 CF3CO2H · 1,5 H2O: C 53,89; H 4,82; N 6,28.35
Găsit: C 53,55; H 4,55; N 6,04.
Exemplul 26. Prepararea acidului (±)-2-metil-3-oxo-8-[3-[N(piridin2-il)-N-(metil)-ami-37 no)]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a)(±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-N-(metil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-39 metilbenzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 1,5 g (3,8 mmoli) de (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-pro- 41 piloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 100 ml de DMF este răcită la -20°C sub o atmosferă de argon și se adaugă prin picurare 8ml (1,0 M în soluție de 43
THF 8 mmoli) de (TMS)2NLi. Reacția este agitată la -20’C timp de 30 min, după care se adaugă 0,5 ml (7,6 mmoli) de CH3I. Soluția este agitată la temperatura camerei timp de 45 h, după care este concentrată. Cromatografia pe silicagel (10% MeOH/CH2CI2) dă 1 g (62%) compus din titlu: MS (ES) m/e 428,4 (M + H)+. --47*
RO 119881 Β1
b) (±)2-metil-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(metil)-amino)]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)8-[3-[2-(N-oxipiridil)N-(metil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-metil-benzazepin-4-acetat de metil, a(±)-8-[3-(2-piridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 0,7 g (73%) compus din titlu; MS (ES) m/e 412,4 (M + H)+.
c) Acid (±)-2-metil-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(metil)-amino)]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 -H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-2-metil-3-oxo-8-[3[N-(piridin-2-il)-N-(metil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu brut. Purificarea prin cromatografie ODS (5-60% CH3CN/H2O care conține 0,1% TFA timp de 1 h), concentrarea și liofilizarea dau compusul din titlu; MS (ES) m/e 398,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C22H27N3O4 · 1,5 CF3CO2H · 0,25 H2O: C 52,40; H 5,10; N 7,33.
Găsit: C 52,09; H 5,26; N 7,20.
Exemplul 27. Prepararea acidului (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 -H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-2-benzil-3-oxo-8[3-[N-( 1 -oxopiridin-2-il)-N-(-oxo-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24 (a), cu excepția înlocuirii cu bromură de benzii a bromurii de 4-trifluormetilbenzil, se prepară 0,105 g (20%) compus din titlu: MS (ES) m/e
590,4 (M + H)+.
b) (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi)-
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-2-benzil-3-oxo-8[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(fert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil, a (±)3-oxo-8-[3-[N-(1-oxipiridin-2-il)-N-(tezț-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatuluide metil, se prepară 0,045 g (44%) compus din titlu: MS (ES) m/e 574,4 (M + H)+.
c) Acid (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3[N-(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil, a (±)8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5- tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară 0,044 g compus din titlu (cantitativ); MS (ES) m/e 560,3 (M + H)+.
d) Acid (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 25 (a) cu excepția înlocuirii cu acid (±)-2-benzil-3oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic, a acidulului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino] -propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic, se prepară 0,014 g (40%) compus din titlu: MS (ES) m/e 460,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C27H29N3O4 · CF3CO2H · 2 H2O: C 57,14; H 5,62; N 6,89.
Găsit: C 57,44; H 5,32; N 6,87.
RO 119881 Β1
Exemplul 28. Prepararea acidului(±)-2-(carboximetil-3-oxo-8-[3-(piridin-2-Hamino)- 1 propiloxi] 2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-2-(terț-butoxicarbonilmetil)-3-oxo-8[3-[N-(1 -oxopiridin-2-il)-N-(terf-butoxicarbo-3 nil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24 (a), cu excepția înlocuirii cu bromacetat de 5 terțbutii a bromurii de 4-trifluormetilbenzil, se prepară 1,0 g (80%) compus din titlu: MS (ES) m/e 614,4 (M + H)+.7
b) (±)-2-(tefț-butoxicarbonilmetil)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxi-carbonil)- amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil9
Conform procedurii din exemplul 24 (b), cu excepția înlocuirii cu (±)-2-(tert-butoxicarbonilmetil)-3-oxo-8-[3-[N-(1 -oxo-piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-1 -propiloxi]-11
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-13 benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 0,72 g (77%) compus din titlu: MS (ES) m/e
598,4 (M + H)+.15
c) (±)-2-(carboximetil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetetrahidro-1H-
2-benzazepin-4-acetat de metil17
Conform procedurii din exemplul 25(a) cu excepția înlocuirii cu acid (±)-2-(terțbutoxicarbonil-metil)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-19
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatde metil, a acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2il)-N-(te/f-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-21 benzazepin-4-acetic, se prepară 0,57 g compus din titlu (cantitativ): MS (ES) m/e 442,3 (M + H)+.23
d) Acid (±)-2-(carboximetil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-
1H-2-benzazepin-4-acetic25
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-2-(carboximetil)-3oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil,27 a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară 0,30 (56%) compus din titlu: MS (ES) m/e 428,4 (M + H)+.29
Anal. Calc pentru C22H25N3O6 · 2 H2O: C 57,01; H 6,31; N 9,07.
Găsit: C 57,27; H 6,24; N 8,86.31
Exemplul 29. Prepararea acidului (±)-2-(4-aminobenzil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2ilamino)-propiloxi] 2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic33
a) (±)-2-(4-nitrobenzil)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]- propiloxi]-2,3,4,5-tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil35
Conform procedurii din exemplul 24(a), cu excepția înlocuirii cu bromură de 4nitrobenzil, a bromurii de 4-trifluormetilbenzil, se prepară 0,284 g (69%) compus din titlu: MS 37 (ES) m/e 635,3 (M + H)+.
b) (±)-2-(4-aminobenzil)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-39 amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24(b), cu excepția înlocuirii cu (±)2-(4-nitrobenzil)-3-41 oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(te/ț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxi- 43 carbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetatului de metil, se prepară 0,104 g (40%) compus din titlu: MS (ES) m/e 589,3 (M + H)+. 45
c) Acid (±)-2-(4-aminobenzil)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)amino]propiloxi]-2,3,4,5- tetrahidro-1 -H-2-benzazepin-4-acetic 47
Conform procedurii din exemplul 1 (c),cu excepția înlocuirii cu (±)-2-(4-aminobenzil)-3oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H- 49
RO 119881 Β1
2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxc>-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară 0,08 g (79%) compus din titlu: MS (ES) m/e
575,4 (M + H)+.
d) Acid (±)-2-(4-aminobenzil)-3-oxo-8-[3-(piridirh2-il-amino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 25(a) cu excepția înlocuirii cu acid (±)-2-(4-aminobenzil)-3-ox<?-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic, a acidulului (±)3-oxo-8-[3-[N(piridin2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic, se prepară 0,029 g (44%) compus din titlu: MS (ES) m/e 475,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C27H30N4O4 · 2 CF3CO2H 1,5 H2O: C 51,03; H 4,83; N 7,68.
Găsit: C 50,92; H 4,78; N 7,64.
Exemplul 30. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(benzoil)-aminoJpropiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-3-oxo-8-[3-(1 -oxo-piridin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 25(a) cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic, se prepară 1,9 g (90%) compus din titlu: MS (ES) m/e 558,3 (M + H)+.
b) (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-il)amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24(b), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-(1 oxopiridin-2-il)-amino-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil, a (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 0,40 g (88%) compus din titlu: MS (ES) m/e 542,3 (M + H)+.
c) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(benzoil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetil-benzil)-
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
0,094 ml (0,8 mmoli) de clorură de benzoil se adaugă prin picurare la o soluție constituită din 0,4 g (0,74 mmoli) de (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-il)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,5 ml (2,9 mmoli) de diizopropiletilamină în 10 ml de CH2CI2. După 18 h, soluția este concentrată și reziduul este purificat prin cromatografie pe silicagel (AcOEt/ hexan 1:1) pentru a da 0,293 g (61%) compus din titlu: MS (ES) m/e 646,2 (M + H)+.
d) Acid(±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(benzoil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 -H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1(c), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N(piridin-2-il)-N-(benzoil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul brut din titlu. Purificarea prin cromatografie ODS (10 - 80% CH3CN/H2O care conține 0,1 % TFA timp de 1 oră), concentrarea și liofilizarea dau 0,025 g (10%) compus din titlu: MS (ES) m/e 632,4 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C35H32F3N3O5 · 0,85 CF3CO2H: C 60,50; H 4,54; N 5,74.
Găsit: --- C 60,22; H 4,35; N 5,77.
RO 119881 Β1
Exemplul 31. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butilacetil) 1 amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxopiridin-2-il)-N-(terț-butilacetil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluor- 3 metilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 0,228 ml (1,2 mmoli) de acid te/ț-butil acetic în 10 ml de 5 CH2CI2 este tratată cu 1 ml (11,4 mmoli) de clorură de oxalil, urmată de 0,0005 ml (0,06 mmoli) de DMF. Reacția este agitată la temperatura camerei timp de 1,5 h, după care este 7 concentrată. Reziduul este reluat în 5 ml deCH2CI2 și este adăugat prin picurare la o soluție constituită din 0,35 g (0,6 mmoli) de (±)-3-oxo-8-[3-(1 -oxo-piridin-2-il)-amino-propiloxi]-2-(4-9 trifluormetilbenzil)-2,3,5,6-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,5 ml (2,4 mmoli) de Et3N în 10 ml de CH2CI2. După 18 h soluția se spală succesiv cu H2O (1 x), NaHCO3 5%11 (2 x), H2O (1 x), acid citric 5% (2 x), H2O (1 x) și NaCI saturată (1 x). Stratul organic se concentrează pentru a da 0,4 g (97%) compus din titlu: MS (ES) m/e 656,4 (M+H)+.13
b) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butilacetil)-amino]-propHoxi]-2-(4-trifluormetil- benzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil15
Conform procedurii din exemplul 24(b), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1oxo-piridin-2-il)-N-(ferf--butilacetil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-17 tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatde metil, a (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-19
4-acetatul de metil, se prepară 0,22 g (56%) compus din titlu: MS (ES) m/e 642,3 (M + H)+.
c) Acid(±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butilacetil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluor-21 metilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 1(c),cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N-23 (piridin-2-il)-N-(ter(-butilacetil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-25
H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul din titlu brut. Purificarea prin cromătografie ODS (10-80% CH3CN/H2O care conține 0,1 % TFA timp de 1 h), concentrarea 27 și liofilizarea dau 0,022 g (10%) compus din titlu: MS (ES) m/e 626,4 (M + H)+.
Anal.Calc pentru C^H^NgOg · 1 H2O: C 63,44; H 6,26; N 6,53.29
Găsit: C 63,24; H 5,96; N 6,39.
Exemplul 32. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(izobutoxicarbonil-31 amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(izobutoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-33 trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 30(c), cu excepția înlocuirii cu clorformiat de izobutil35 a clorurii de benzoil, se obțin 0,47 g (80%) compus din titlu: MS (ES) m/e 658,3 (M + H)+.
b) (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin2-il)-N-(izobutoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluor- 37 metilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24(b), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1 -39 oxopiridin-2-il)-N-(izobutoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(tert-41 butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetatului de metil, se prepară 0,4 g (63%) compus din titlu: MS(ES) m/e 642,3 (M + H)+.43
c) Acid (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(izobutoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic 45
Conform procedurii din exemplul 1 (c), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N(pîridîrb2-il)-N-(izobutoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro- 47
RO 119881 Β1
H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4)5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de etil, se prepară compusul brut din titlu. Purificarea prin cromatografie ODS (10-80% CH3CN/H2O care conține 0,1% TFA timp de 1 h), concentrarea și liofilizarea dau 0,008 g (20%) compus din titlu: MS (ES) m/e 628,3 (M + H)+. Anal. Calc pentru C33H36F3N3O6 · 0,25 CF3CO2H · 0,5 H2O: C 60,49; H 5,64; N 6,32. Găsit: C 60,78; H 5,50; N 6,28.
Exemplul 33. Prepararea acidului (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi-2-(4trifluormetilbenzil-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxo-piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-1-propiloxi]-
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1(a), cu excepția înlocuirii cu (S)-8-hidroxi-3-oxo-
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 3,0 g (83%) compus din titlu: MS (ES) m/e 500,3 (M + H)+.
b) (S)-3-oxo-8-[3-[N-( 1 -oxo-piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]- 1-propiloxi]-2(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24(a), cu excepția înlocuirii cu (S)-3-oxo-8-[3-[N-(1oxo-piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-1propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetat de metil, a (±)-3-oxo8-[3-[N-(1-oxo-piridin2-il)-N-(fert-butoxicarbonil)-amino]1 propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 2,3 g (72%) compus din titlu: MS (ES) m/e 658,2 (M + H)+.
c) (S)-3-oxo-8[-3-[N-(piridin2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 24(b), cu excepția înlocuirii cu (S)-3-oxo-8-[3-[N-(1 oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetil-benzil)-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1-oxipiridin2-il)-N-(tertbutoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetatului de metil, se prepară 1,1 g (50%) compus din titlu: MS (ES) m/e 642,1 (M + H)+.
d) Acid(S)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-1-propiloxi]-2-(4trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 24(c) cu excepția înlocuirii cu (S)-3-oxo-8-[3-[N(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4- acetatului de metil, se prepară 0,8 g (60%) din compusul din titlu: MS (ES) m/e 628,1 (M + H)+.
e) Acid (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 25(a) cu excepția înlocuirii cu acid (S)-3-oxo8-[3[N-(piridin-2-il)-N-(fert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic, a acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin2-il)-N-(tert-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetic, se prepară compusul brut din titlu. Purificarea prin cromatografie ODS (30% CH3CN/H2O care conține 0,1% TFA timp de 1 h), concentrarea și liofilizarea dau 0,657 g (72%) compus din titlu a|D) -42’ (c 1,0, MeOH): MS (ES) m/e 528,1 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C28H28F3N3O4 · 2 CF3CO2H · 3,75 H2O: C 46,69; H 4,59; N 5,10.
Găsit: C 46,47; H 4,58; N5,48?
RO 119881 Β1
Exemplul 34. Prepararea (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetra- 1 hidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil
a) (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4- 3 acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 1(b), cu excepția substituirii cu izopropanol a 5 etanolului, se prepară 0,35 g (76%) compus din titlu: MS (ES) m/e 384,4 (M + H)+.
Exemplul 35. Prepararea acidului (S)-3-oxo-8-[3-( 1,4,5,6-tetrahidropirimid-2-ilamino)- 7 propiloxi]-2-[4-(trifluormeti)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-8-[3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)-benzil]- 9
2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
La 0,14 g (0,34 mmoli) de (S)-hidroxi-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5-tetra- 11 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,13 g (0,50 mmoli) de Ph3P în 2 ml de CH2CI2 la O’C se adaugă prin picurare o soluție constituită din 0,13 g (0,51 mmoli) de 3-(4- 13 nitrobenziloxicarbonilamino)-1-propanol și 0,08 ml (0,50 ml) de dietilazodicarboxilat. Atunci când adăugarea este completă, baia de gheață este îndepărtată și reacția este agitată la 15 temperatura camerei. După 18 h, solventul este îndepărtat și produsul este izolat prin cromatografie rapidă pe silicagel (100% CHCI3 până la 5% MeOH/CHCI3) pentru a da 0,12 17 g de compus din titlu sub forma unui ulei limpede:
1H RMN (400 MHz,CDCI3) δ 8,18 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,65 (m, 1H), 7,50 (m, 5H), 7,4019 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,23 (m, 3H), 4,95 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,95 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,4521 (m, 2H), 3,15-2,90 (m, 3H), 2,50 (dd, J = 19,2, 5,5 Hz, 1H), 1,95 (m, 2H).
b) (S)-8-(3-amino-propiloxi)-3-oxo-2-[4-(trifluormetH)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-2-23 benzazepin-4-acetat de metil
La 0,12 g (0,19 mmoli) de (S)-8-[3-(4-nitrobenziloxicarbonilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-25 [4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 2 ml de MeOH se adaugă 20 mg de Pd/C 10%. Vasul de reacție este purjat cu hidrogen și apoi la 27 acesta se montează un balon umplut cu hidrogen. După 4,5 h, hidrogenul este evacuat și catalizatorul este îndepărtat prin filtrarea prin celită®. îndepărtarea solventului dă 0,09 g 29 compus din titlu sub forma unui reziduu galben pal. Acest material este folosit fără nici o altă purificare: MS (ES) m/e 465,3 (M + H)+. 31
c) (S)-3-oxo-8-[3-(pirimidin-2-il-amino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5- tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil 33
O soluție constituită din 0,09 g (0,19 mmoli) de (S)-8-(3-amino-propiloxi)-3-oxo-2-[4(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 0,09 g (0,57 35 mmoli) de 2-brompirimidină și 0,17 ml (0,98 mmoli) de diizopropiletilamină în 2 ml de DMF este încălzită la 80’C timp de 18 h. Reacția este lăsată să se răcească până la temperatura 37 camerei și este concentrată pentru a da un reziduu galben. Cromatografia rapidă pe silicagel (2%, MeOH/AcOEt) dă 42 mg din compusul din titlu sub forma unui ulei limpede. MS (ES) 39 m/e 543,1 (M + H)+.
d) (S)-3-oxo-8-[3-(3,4,5,6-tetrahidropirimid-2-ilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormeti)]- 41 benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Un aparat de hidrogenare Parr este încărcat cu 42 mg (0,08 mmoli) de (S)-3-oxo8- 43 [3-(pirimidin-2-ilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil, 2 ml de acid acetic glacial, 0,2 ml de HCI concentrat și 10 mg 45 de Pd/C 10%. Amestecul este agitat prin scuturare sub presiune de 2,8 x 105 Pa de hidrogen timp de 5 h, după care hidrogenul este evacuat și catalizatorul este îndepărtat prin filtrarea 47 pe celită®. Evaporarea solvenților dau produsul brut (52 mg) sub forma unui reziduu închis la culoare. Acesta este folosit fără altă purificare. MS (ES) m/e 547,2 (M + H)+. 49
RO 119881 Β1
e) Acid (S)-3-oxo-8-[3-(3,4,5,6-tetrahidropirimid-2-ilamino)-propHoxi]-2-[4-(trifluormeti)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
La (S)-3-oxo-8-[3-(3,4,5,6-tetrahidropirimid-2-ilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatul de metil brut rezultat din exemplul 35(d) în 1 ml de EtOH se adaugă 0,25 ml (0,25 mmoli) de NaOH 1N. După agitarea la temperatura camerei timp de 8,5 h, reacția este stinsă prin adăugarea a 0,25 ml (0,25 mmoli) de HCI1N. îndepărtarea solventului dă un solid galben deschis. HPLC preparativă cu fază inversă (Hamilton PRP-1®, 30% CH3CN/H2O care conține 0,1% TFA) dă 18,1 g din compusul din titlu sub forma unei pulberi albe; MS (ES) m/e 533,3 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C27H31F3N4O4 · 2 CF3CO2H · 2 H2O: C 46,74; H 4,68; N 7,03.
Găsit: C 46,34; H 4,31; N 6,82.
Exemplul 36. Prepararea acidului (±)-3-oxo-8-[3-(N-(piridin-2-il)-N-(metilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (±)-3-oxo-8-[3-[(N-(1-oxopiridin2-il)-N-(metil)-amino)]-propiloxi]-2-[4-(trifluormeti)Jbenzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 25(a) cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-[N-(1oxopiridin-2-il)-N-(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5tetetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatde metil, a acidului (±)-3-oxo-8-[3-[N-(piridin-2-il)-N(terț-butoxicarbonil)-amino]-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic, se prepară sarea clorhidrat. Acest material este transformat în bază liberă prin repartizarea între AcOEt și 5% NaHCO3. Stratul de AcOEt se separă și se concentrează pentru a da 4,1 g (100%) compus din titlu: MS (ES) m/e 558,3 (M + H)+.
b) (±)-3-oxo-8-[3-(N-( 1 -oxopiridin-2-il)-N-(metil)-amino]-propiloxi]-2-(4-(trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 26(a) cu excepția înlocuirii cu acidul (±)-3-oxo-8-[3[(N-(1-oxopiridin-2-il)-N-(metilamino)]-propiloxi]-2-[4-(trifluormeti)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic, a (±)-8-[3-[2-(N-oxopiridil)-amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 3,0 g (94%) compus din titlu: MS (ES) m/e 572,3 (M + H)+.
c) (±)-3-oxo-8-[3-(N-(piridin-2-il)-N-(metilamino)-1-propiloxi]-2-(4-(trifluormetHbenzH)-
2.3.4.5- tetetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Conform procedurii din exemplul 4(b), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-(N-(1oxopiridin-il)-N-(metilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetilbenzil)]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil, a (±)8-[3-(2-(N-oxopiridil)-amino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-
2.3.4.5- tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 0,32 g (60%) din compusul din titlu: MS (ES) m/e 556,2 (M + H)+.
d) Acid (±)-3-oxo-8-[3-(N-(piridin-2-il)-N-(metilamino)-propiloxi]-2-[4-(trifluormetil)benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform procedurii din exemplul 4(c), cu excepția înlocuirii cu (±)-3-oxo-8-[3-(N(piridin-2-il)-N-(metilamino)-propiloxi]-2-(4-(trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil, a (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară 0,02 g (15%) compus din titlu: MS (ES) m/e 542,1 (M + H)+.
Anal. Calc pentru Ο^Η^ΝΑ ‘ CF3CO2H · H2O: C 55,28; H 4,94; N 6,24.
Găsit: C 55,45; H 4,68; N 6,14.
RO 119881 Β1
Exemplul 37. Prepararea acidului (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2- 1 (2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-3-oxo-8-[3-(1-oxopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetra- 3 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
La o soluție sub agitare constituită din 19 g (57,4 mmoli) de (S)-8-hidroxi-2-metil-3- 5 oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 400 ml de THF anhidru și 200 ml de DMF anhidru, sub argon, se adaugă 11,6 g (69 mmoli) de 2-(3-hidroxipropilamino)- 7 piridină-N-oxid și 18,0 g (69 mmoli) de trifenilfosfină. După ce toate solidele s-au dizolvat complet (~ 30 min), reacția este răcită la O’C pe o baie de gheață și se adaugă prin inter- 9 mediul unei seringi 14,3 ml (69 mmoli) de azodicarboxilat de diizopropil. Reacția este lăsată să se încălzească ușor până la temperatura camerei și este agitată timp de 18 h. 11 Concentrarea și cromatografia rapidă pe silicagel (CHCIg/AcOEt/ EtOH 8:2:1) dau 20,83 g (75%) de compus din titlu sub forma unei spume solide. Se mai pot obține 5,73 g de produs 13 prin recircularea materiei brute recuperate din reacția de mai sus pentru a da un total de 26,56 g (96%) din compusul din titlu; MS (ES) m/e 482,2 (M + H)+. 15
Ή RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,09 (dd, J = 6,5,1,3 Hz, 1H), 7,29 (t, 1H), 7,18 (t,
5H), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,84-6,79 (m, 3H), 6,59 (t, 1H), 5,32 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,28-17
4,14 (m, 2H), 4,16 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,02 (t, 2H), 3,84 (m, 1H), 3,58 (s,3H), 3,40 (dd, 2H),
3,01 (dd, 1H), 2,73 (dd, 1H), 2,70 (dd, 1H), 2,52 (dd, 1H), 2,02 (ddd, 2H).19
b) (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propHoxi]-2-(2,2,2-trifluoretH)-2,3,4,5-tetrahidro-
H-2-benzazepin-4-acetat de metil21
La o soluție sub agitare constituită din 26,56 g (55 mmoli) de (S)-3-oxo-8-[3-(1oxopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-23 acetat de metil în 500 ml de izopropanol se adaugă 8 g (7,5 mmoli, preumectat cu precauție în izopropanol sub argon) de paladiu 10% pe cărbune și 55,7 ml (550 mmoli) de ciclohexan. 25 Reacția este apoi încălzită la reflux sub argon pe o baie de ulei de 90*C. După 6 h se adaugă încă o cantitate 8 g (7,5 mmoli, preumectat cu precauție în izopropanol sub argon) 27 de paladiu pe cărbune 10% și 55,7 ml (550 mmoli) de ciclohexenă. După încă 18 h, reacția este filtrată la cald prin celită®, și stratul de filtrat este spălat cu 400 ml de MeOH/CHCI, 1:1.29
Filtratul este concentrat sub vid și reziduul este purificat prin cromatografie rapidă pe silicagel (CHCI2 / MeOH 95:5) pentru a da 19,50 g (76%) compus din titlu sub forma unei 31 spume albe tari: CSS (silice, 5% MeOH în CHCI3) R( 0,52; MS (ES) m/e 466,3 (M + H)+ 1H RMN (400 MHz, DMSOdJ δ 7,94 (dd, 1H), 7,34 (t, 1H), 7,02 (d,J = 9,2 Hz, 1H),33
6,81 (m, 2H), 6,54 (t, 1H), 6,46 (m, 2H), 5,31 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,23-4,13 (m, 2H), 4,17 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,02 (t, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,36 (m, 2H), 3,01 (dd, 1H), 2,7235 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,50 (dd, 1H), 1,96 (ddd, 2H).
c) Acid(S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetra-37 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
La o soluție sub agitare constituită din 19,50 g (42 mmoli) de (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-39 ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatde metil în 150 ml de dioxan se adaugă 75 ml (75 mmoli) de NaOH 1N apos. Reacția tulbure se agită 41 la temperatura camerei timp de 2 h, după care soluția omogenă care rezultă este neutralizată cu 75 ml (75 mmoli) de HCI 1N. Soluția este concentrată până la uscare pe 43 evaporator rotativ pentru a precipita produsul. Supernatantul este îndepărtat prin decantare și solidul cu aspect de gumă care rezultă este redizolvat în metanol. Soluția limpede este 45 apoi reconcentrată pe un evaporator rotativ. Solidul care rămâne este triturat cu o cantitate mică de apă, filtrat și uscat sub vid pentru a da 16,38 g (86%) compus din titlu. HPLC 47 (Hamilton PRP-1®, 25% CH3CN/ H2O care conține 0,1% TFA). K' = 3,1 [a]D 112,3’ (c, 1,0,
MeOH); MS (ES) m/e 452,3 (M + H)+; 49
RO 119881 Β1 ’H RMN (400, DMSO-d6) δ 7,95 (dd, 1 Η), 7,34 (dt, 1 Η), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,81 (m, 2H), 6,58 (t, 1H), 6,47 (m, 2H), 5,30 (d, J=16,5 Hz, 1H), 4,27-4,13 (m, 2H), 4,15 (d, J =
16,5 Hz, 1H), 4,02 (t, 1H),3,78 (m, 1H),3,37 (m,2H),3,00 (dd, 1H),2,69 (dd, 1H),2,65 (dd,
1H), 2,41 (dd, 1H), 1,96 (ddd, 2H).
Anal. Calc pentru C22H24F3N3O4: C 58,53; H 5,36; N9,31.
Găsit: C 58,37; H 5,42; N 9,20
Exemplul 38. Prepararea acidului (R)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
a) (R)-3-oxo-8-[3-(1-oxopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 0,33 g (2 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-1-propil)-amino]-piridin-Noxid și 0,3 ml (2 mmoli) de dietil azodicarboxilat în 10 ml de DMF anhidru se adaugă încet prin picurare la o soluție constituită din 0,3 g (1 mmoli) de (R)-8-hidroxi-3-oxo-8-2-(2,2,2trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,485 g (26 mmoli) de trifenilfosfină în 10 ml de CH2CI2 anhidră la temperatura camerei. După 17 h, reacția este concentrată. Cromatografia pe silicagel (gradient 0,5%-5% MeOH/CH2CI2) dă 0,35 g (80%) compus din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 482,3 (M + H)+.
b) (R)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propHoxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Un amestec constituit din 0,35 g (0,7 mmoli) de (R)-3-oxo-8-[3-(1-oxopiridin-2ilamino)-propiloxi]-2-(2l2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatde metil, 0,75 ml (7 mmoli) de ciclohexenă, 88 mg (0,07 mmoli) de Pd/C 10%, și 9 ml de izopropanol este încălzit la reflux sub argon. După 18 h, se mai adaugă 36 mg (0,03 mmoli) de Pd/C 10% și 0,75 ml (7 mmoli) de ciclohexenă. După 36 h, reacția este filtrată la cald prin celită®, și stratul de pe filtru este spălat cu AcOEt fierbinte. în urma concentrării rămâne un ulei galben. Cromatografia pe silicagel (1 %-5% MeOH în CH2CI2) dă 0,26 g (77%) compus din titlu sub forma unui ulei incolor: MS (ES) m/e 466,2 (M + H)+.
c) Acid (R)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro- 1 -H-2-benzazepin-4-acetic mg (0,6 mmoli) de LiOH · H2O se adaugă la o soluție constituită din 0,25 g (0,54 mmoli)de(R)-8-[3-(piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil în 5 ml de THF și 2 ml de H2O, la temperatura camerei. După 18 h, reacția este concentrată până la sec și reziduul este dizolvat în 4 ml de H2O. Soluția este adusă cu precauție la pH=4 cu 3,0 N HCI. Precipitatul este colectat și uscat sub vid înalt la 40-45°C pentru a da 0,15 g (62%) din compusul din titlu sub forma unui solid aproape alb: MS (ES) m/e 452,1 (M + H)+
Anal. Calc pentru C22H24F3N3O4 · 0,5 H2O: C 57,38; H 5,47; N9,12.
Găsit: C 57,72; H 5,24; N 8,92.
Exemplul 39. Prepararea acidului (S)-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-
2- (2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-8-[3-(4-metil-1-oxopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,
4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
O soluție constituită din 0,60 g (3,6 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-1-propil)-amino]-4-metilpiridin-N-oxid și 0,6 ml (3,6 mmoli) de dietil azodicarboxilat în 12 ml de CH2CI2 se adaugă prin picurare timp de 3...4 min la o soluție constituită din 0,60 g (1,8 mmoli) de (S)-8-hidroxi-
3- oxo-2-(272^=trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,95 g
RO 119881 Β1 (3,6 mmoli) de trifenilfosfină în 6 ml de CH2CI2 anhidru, la temperatura camerei. După 17 h, 1 reacția este concentrată. Cromatografia pe silicagel (gradient 1 %-5% MeOH / CH2CI2) dă
0,45g (49%) compus din titlu sub forma unei spume aproape albe: MS (ES) m/e 496,3 3 (M + H)+.
b) (S)-8-/3-('4-mef//p/ridin-2-/7-am/no)-prop/7oxi/-3-oxo-2-(2,2,2-fnî/uoret//)-2,3,4,5-tetra- 5 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
Un amestec constituit din 0,45 g (0,9 mmoli) de (S)-8-[3-(4-metil-1 -oxopiridin-2- 7 ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetatde metil, 0,93 ml (9 mmoli) ciclohexenă, 0,2 g (0,18 mmoli) de Pd/C 10% și 9 ml de izopropanol 9 este încălzit la reflux sub argon. După 18 h, se mai adaugă 0,2 g (0,18 mmoli) de Pd/C 10% și 0,27 ml (2,65 mmoli) de ciclohexenă. După 36 h, reacția este filtrată la cald prin celită® 11 și stratul de filtru este spălat cu AcOEt fierbinte. în urma concentrării rămâne un ulei galben. Cromatografia pe silicagel (1 % - 3% MeOH în CH2CI2) dă 0,32 g (74%) compus din titlu sub 13 forma unei spume albe: MS (ES) m/e 480,2 (M + H)+.
c) Acid(S)-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propHoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5- 15 tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic mg (0,79 mmoli) de LiOH · H2O se adaugă la o soluție constituită din 0,32 g (0,67 17 mmoli)de(S)-8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 5 ml de THF și 2 ml de H2O la temperatura ca- 19 merei. După 18 h, reacția este concentrată până la sec și reziduul este dizolvat în 4ml de H2O. Soluția se extrage cu acetat de etil, după care este adusă cu precauție la pH 5 cu HCI 21
3,0 N. Precipitatul este colectat și uscat sub vid la 40-45’C pentru a da 0,22 g (71%) din compusul din titlu sub forma unui solid aproape alb: MS (ES) m/e 466,1 (M + H)+23
Anal. Calc pentru C23H26F3N3O4: C 59,35; H 5,63; N 9,03.
Găsit: C 58,97; H 5,55; N 8,73.25
Exemplul 40. Prepararea acidului (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-ilJ- 1-etoxi]-3-oxo-
2- (2,2,2)-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic27
a) (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5- tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil29
Conform procedurii din exemplul 37(a), cu excepția înlocuirii cu 6-(metilamino)-2piridiletanol, a 2-[(3-hidroxi-1 -propil)-amino]-piridin-N-oxidului, și a substituirii cu (S)-8-hidroxi-31
3- oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil a (R)-8hidroxi-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, 33 este preparat compusul din titlu sub forma unui ulei incolor alb: MS (ES) m/e 466,2 (M + H)+.
b) Acid (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-ilJ-1 -etoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-35 tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
Conform metodei din exemplul 37(c), cu excepția înlocuirii cu (S)-8-[2-[6-(metil-37 amino)-piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetat de metil a (R)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetra- 39 hidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatului de metil, se prepară compusul din titlu sub forma unui solid alb MS (ES) m/e 452,2 (M + H)+ 41
Anal. Calc pentru C22H24F3N3O4 · 0,7 H2O: C 56,94; H 5,52; N 9,05.
Găsit: C 56,80; H5,19; N 8,85.43
Exemplul 41. Prepararea acidului (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic45
a)(S)-3-oxo-8-[3-(1-oxopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil47
O soluție constituită din 336 mg (2,0 mmoli) de 2-[(3-hidroxi-1 -propil)-amino]-piridinN-oxid și 0,3 ml (2,0 mmoli) de azodicarboxilat de dietil în 10 ml de DMF se adaugă la o 49
RO 119881 Β1 soluție constituită din 350 mg (1,0 mmoli) de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 525 mg (2,0 mmoli) de trifenilfosfină în 10 ml de DMF anhidră la temperatura camerei. După 24 de h amestecul este concentrat. Cromatografia rapidă pe silicagel (gradient 500 ml de AcOEt apoi 5% MeOH / CHCI) dă 288 mg (57%) compus din titlu sub forma unei spume portocalii: MS (ES) m/e 504 (M + H)+.
b) (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil
Un amestec constituit din 288 mg (0,57 mmoli) de (S)-3-oxo-8-[3-(1-oxopiridin-2ilamino)-propiloxi]-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetatde metil, 0,6 ml (5,8 mmoli) de ciclohexenă, 62 mg (0,58 mmoli) de Pd/C 10% și 6 ml de propanol este încălzit la reflux sub argon. După 31 h reacția este filtrată la cald printr-un strat de celită®, și stratul de filtru este spălat cu 200 ml de MeOH/ CHCI3 fierbinte și filtratul este concentrat. Cromatografia rapidă pe silicagel (5% MeOH /CHCI3), urmată de o a doua cromatografie rapidă pe silicagel (50% THF/ciclohexan) dă 133 mg (48%) compus din titlu sub forma unei spume aproape albe: MS (ES) m/e 488 (M + H)+.
c) Acid (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H2-benzazepin-4-acetic
0,3 ml (0,3 mmoli) de LiOH 1,0 N se adaugă la o soluție constituită din 133 mg (0,27 mmoli)de(S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetat de metil în 1,5 ml de THF și 1,2 ml de H2O la 0”C. Amestecul este lăsat să se încălzească la temperatura camerei timp de 18 h. Amestecul se spală cu 2 x 5 ml de Et2O după care sub vid se îndepărtează solvenții organici reziduali. Stratul apos este trecut printr-un filtru de 0,45 um Acrodisk, după care este acidulat cu precauție până la pH 6 folosind HC110% în H2O la 0°C. Precipitatul este colectat, spălat cu H2O și este uscat sub vid la 50’C pentru a da 62 mg (48%) compus din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 474 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C28H31N3O4 · 0,75 H2O: C 69,05; H 6,75; N 8,63.
Găsit: C 69,05; H 6,66; N 8,55.
Exemplul 42. Prepararea acidului(S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil
0,3 ml (1,5 mmoli) de diizopropil azodicarboxilat se adaugă la o soluție de 350 mg (1,0 mmoli) de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil, 228 mg (1,5 mmoli) de 6-(metilamino)-2-piridiletanol și 393 mg (1,5 mmoli) de trifenilfosfină în 10 ml de THF anhidru la 10’C. Amestecul este lăsat să se încălzească la temperatura camerei timp de 72 h, după care este concentrat. Cromatografia rapidă pe silicagel (50% AcOEt /hexani), urmată de o a doua cromatografie rapidă pe silicagel (25% AcOEt/hexani) dă 250 mg (51%) compus din titlu sub forma unei spume albe: MS (ES) m/e 488 (M + H)+.
b) Acid (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic
0,62 ml (0,62 mmoli) de 1,0 N LiOH se adaugă la o soluție constituită de 250 g (0,51 mmoli) de (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil în 2,5 ml de THF și 1,9 ml de H2O la 0’C și reacția este lăsată sub agitare la temperatura camerei timp de 18 ore. Amestecul este spălat cu 2 x 5ml de Et2O după care sub vid se îndepărtează solvenții organici reziduali. Stratul apos este
RO 119881 Β1 trecut printr-un filtru Acrodisk de 0,45 pm, după care este acidulat cu precauție până la pH 1 folosind HC110% în H2O la 0‘C. Precipitatul este colectat, spălat cu H2O, și uscat sub vid la 50*C pentru a da 134 mg (55%) compus din titlu sub forma unui solid alb: MS (ES) m/e 3
474 (M + H)\
Anal. Calc pentru C28H31N3O4 · 0,75 H2O: C 69,05; H 6,73; N 8,63. 5
Găsit: C 69,23; H 6,59; N 8,55.
Exemplul 43. Prepararea acidului (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-1 -etoxi]-3-oxo- 7
2-[4-(trifluormetilbenzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic
a) (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-1-etoxi]-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5- 9 tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil
La o soluție constituită de 0,18 g (0,44 mmoli) de (S)-8-hidroxi-3-oxo2-[4 (trifluor- 11 metil)benzil]-2,3,4,5-tetetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetat de metil și 0,23g (0,88 mmoli) de Ph3P în 2 ml de CH2CI2 se adaugă o soluție constituită de 0,13g (0,88 mmoli) de 6- 13 (metilamino)-2-piridiletanol și 0,14 ml (0,89 mmoli) de dietilazodicarboxilat în 2 ml de CH2CI2. După 2 zile la temperatura camerei, solventul este îndepărtat la presiune redusă. Cromato-15 grafia radială pe silicagel (placă de 6 mm, 5% MeOH/CHCI2) dă 0,63 g dintr-un ulei limpede care conține un amestec constituit din compusul din titlu împreună cu (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-17 [4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil nereacționat.
Acest material este purificat mai departe prin cromatografie radială pe silicagel (placă de 619 mm, 5% AcOEt/hexam) pentru a da 0,12 g compus din titlu sub forma unui ulei limpede: MS (ES) m/e 542,3 (M + H)+.21
b) Acid (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-il]-1 -etoxi]-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)-benzil]-
2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic23
La o soluție constituită de 0,12 g (0,22 mmoli) de (S)-8-[2-[6-(metilamino)-piridin-2-ilj1 -etoxi]-3-oxo-2-[4-(trifluormetil)-benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetat de metil25 în 2 ml de EtOH se adaugă 0,50 ml de NaOH 1N. După 3,5 h la temperatura camerei, majoritatea solventului este îndepărtată la presiune redusă pentru a da un reziduu alb. 27 Acesta este dizolvat în apă și soluția este neutralizată la pH = 7 cu HC11N. Precipitatul care rezultă este colectat și uscat sub vid pentru a da 28,1 mg compus din titlu sub forma unui 29 solid alb: [a]0 -74,0 ° (c 0,05, EtOH); MS (ES) m/e 528,3 (M + H)+.
Anal. Calc pentru C28H28F3N3O4 · 0,5 H2O: C 62,68; H 5,45; N 7,83. 31
Găsit: C 62,60; H 5,35; N 7,66.
Exemplul 44. Compoziția unității de dozare parenterală 33
Se prepară un preparat care conține 20 mg de compus din exemplul 1 sub forma unei pulberi uscate sterile după cum urmează: 20 mg de compus se dizolvă în 15ml de apă 35 distilată. Soluția este filtrată în condiții sterile într-o fiolă de 25 ml cu doze multiple și este liofilizată. Pulberea este reconstituită prin adăugarea a 20 ml de dextroză 5% în apă (D5W) 37 pentru injectare intravenoasă sau intramusculară. Dozajul este apoi determinat prin volumul de injectare. Ulterior se poate dilua, prin adăugarea unui volum măsurat din această unitate 39 de dozare la alt volum de injectare D5W, sau se poate adăuga o doză măsurată la un alt mecanism pentru eliberarea medicamentului, cum ar fi o sticlă sau un pungă pentru infuzie 41 IV prin picurare sau un alt sistem de injectare-infuzie.
Exemplul 45. Compoziția unității de dozare orală 43
O capsulă pentru administrarea orală se prepară pnn amestecarea și măcinarea a mg de compus din exemplul 1 cu 75 mg de lactoză și 5 mg de stearat de magneziu. 45 Pulberea care rezultă este cernută și este introdusă într-o capsulă de gelatină tare.
RO 119881 Β1
Exemplul 46. Compoziția unității de dozare orală
O tabletă pentru administrare orală este preparată prin amestecarea și granularea a 20 mg de zaharoză, 150 mg de dihidrat de sulfat de calciu și 50 mg de compus din exemplul 1 cu o soluție de gelatină 10%. Granulele umede sunt cernute, uscate, amestecate cu 10 mg de amidon, 5 mg de talc și 3 mg de acid stearic și sunt comprimate sub formă de tabletă.

Claims (9)

  1. Revendicări
    1. Derivați de benzazepină cu formula I:
    în care:
    ,H (0
    R1 este H, alchil C16, Ar-alchil C0.6, Het-alchil Ο0.θ, cicloalchil C3^-alchil C0.6, -CH2CF3, -(CHJ^-CÎCOOR’, sau -(CH2)2OR’;
    R2 este:
    (?K>
    sau
    R“ în care:
    Q1, Q2 și Q3 sunt fiecare CRy și Q4 este CRy sau N;
    W este -CH2-CH2-;
    R9 este H, alchil Cw Het-alchil Ο0_θ, cicloalchil C3.7-alchil Co^ sau
    Ar-alchil C0_6;
    Rk este R9, -C(O)R9, sau -C(O)OR';
    R' este H, alchil CV6 sau Ar- alchil C0.6;
    R’ este H, alchil C,_g, Ar-alchil C0.6 sau cicloalchil C3.6-alchil C0,6;
    R”este R’, -C(O)R’ sau -C(O)OR’;
    Ryeste H, halogen, -OR9, -SR9, -CN, -NR9Rk, -NO2, -CF3, CF3S(O)r, -CO2R9, -COR9, -CONR9 sau alchil C16;
    r este 0, 1 sau 2;
    s este 0, 1 sau 2;
    u este 0 sau 1;
    v este 0 sau 1;
    Ar este fenil sau naftil care poate fi substituit cu unul până la trei substituenți selectați dintre alchil ClJt, alcoxi C,^, tioalchil C1J(, CF3, NH2, OH, F, CI, Br sau I; și
    RO 119881 Β1
    Het este un monociclu cu cinci sau șase atomi în ciclu, sau un biciclu cu nouă sau 1 zece atomi în ciclu, care conține unul până la trei heteroatomi aleși din grupul azot, oxigen și sulf, opțional substituit cu unul până la trei substituenți selectați dintre alchil C,OR’, SR’, 3 sulfonilalchil C,.4, sulfoxilalchil C14, -CN, N(R’)2, CH2N(R')2, -NO2, -CF3,
    -CO2R’-CON(R’)2, -COR’, -NR’C(O)R’, F, CI, Br, I, sau CF3S(O)02; 5 sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic a acestora.
  2. 2. Derivați de benzazepină conform revendicării 1, care sunt selectați dintre:7 acid(±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4acetic;9 acid (±)-8-[3-(4-amino-2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;11 acid (±)-8-[3-(4-metoxi-2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin-4-acetic;13 acid (±)-8-[3-(2-piridilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;15 acid (±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-tetrahidropiridil)amino]-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H2-benzazepin-4-acetic;17 acid (±)-8-[3-(6-amino-2-piridilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;19 acid (±)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1 -etoxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 Η-2-benzazepin-4-acetic;21 acid (±)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino]-propiloxi)-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H2-benzazepin-4-acetic;23 acid(R)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3l4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic;25 acid (S)-8-[3-(4-aminopiridin-2-ilamino)-propiloxi]-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-4-acetic;27 acid (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-trifluornnetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic;29 acid (±)-2-benzil-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;31 acid (±)2-(carboximetil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H2-benzazepin-4-acetic;33 acid (±)-2-(4-aminobenzil)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2l3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic;35 acid (±)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic;37 acid (±) 8-(3-(4,6-dimetilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic;39 acid (±) 8-(3-(4,5,6,7-tetrahidro-1 H-1,3-diazepin-2-ilamino)-propiloxi]-2-metil-3-oxo2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic; 41 acid (S)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-trifluormetilbenzil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic; 43 acid (±)-3-oxo8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetic; 45 acid (R)-3-oxo-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic; 47
    RO 119881 Β1 acid (S)-3-oxo8-[3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-propiloxi]-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5tetrahidro-lH-2-benzazepin-4-acetic;
    acid(S)-3-oxo-8-[3-(1,4,5,6-tetrahidropirimid-2-ilamino)-propiloxi]-2-(4-(trifluormetil) benzil]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
    acid(S)-3-oxo-2-(2-feniletil)-8-[3-(piridin-2-ilamino)-propiloxi]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2benzazepin-4-acetic;
    acid(S)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2-(2-feniletil)-2,3,4,5-tetrahidro1 H-2-benzazepin-4-acetic; sau acid (S)-8-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il)]-etoxi]-3-oxo-2-[4-trifluormetil)benzil]-2,3,4,5tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic;
    sau sarea acceptabilă din punct de vedere farmaceutic a acestora.
  3. 3. Derivați de benzazepină conform revendicării 1, care includ acidul (S)-8-[3-(piridin2-ilamino)-propiloxi-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetic sau sarea acceptabilă din punct de vedere farmaceutic a acestuia.
  4. 4. Derivați de benzazepină conform revendicării 1, care includ acidul (S)-8-[2-[6(metilamino)-piridin-2-il]-etoxi]-3-oxo-2-(2,2,2-trifluoretil)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin4-acetic sau sarea acceptabilă din punct de vedere farmaceutic a acestuia.
  5. 5. Derivați de benzazepină conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 4, pentru utilizare ca medicament.
  6. 6. Procedeu pentru prepararea derivaților de benzazepină cu formula I, definiți în revendicarea 1, caracterizat prin aceea că acesta cuprinde reacția unui compus cu formula IV cu un compus cu formula V:
    (IV) (V) în care R1 și R2 sunt definiți în formula I, cu oricare grupări reactive funcționale protejate, și L1 este OH sau halogen;
    și apoi înlăturarea oricărei grupări protectoare și formarea, opțional, a sării acceptabile din punct de vedere farmaceutic.
  7. 7. Compoziție farmaceutică ce cuprinde derivați de benzazepină conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 4 și un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
  8. 8. Utilizare a derivaților de benzazepină conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 4, pentru fabricarea unui medicament pentru tratamentul osteoporozei.
  9. 9. Utilizare a derivaților de benzazepină conform oricăreia dintre revendicările de la
    1 la 4, pentru fabricarea unui medicament pentru inhibarea angiogenezei.
RO99-00353A 1996-10-02 1997-10-01 Derivaţi de benzazepină, procedeu de preparare, compoziţie farmaceutică care îi cuprinde şi utilizarea acestora RO119881B1 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2732096P 1996-10-02 1996-10-02
US4377697P 1997-04-11 1997-04-11
PCT/US1997/018001 WO1998014192A1 (en) 1996-10-02 1997-10-01 Vitronectin receptor antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO119881B1 true RO119881B1 (ro) 2005-05-30

Family

ID=26702318

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RO99-00353A RO119881B1 (ro) 1996-10-02 1997-10-01 Derivaţi de benzazepină, procedeu de preparare, compoziţie farmaceutică care îi cuprinde şi utilizarea acestora

Country Status (37)

Country Link
EP (1) EP0957917B1 (ro)
JP (2) JP4491072B2 (ro)
KR (1) KR100589578B1 (ro)
CN (1) CN1114403C (ro)
AP (1) AP1463A (ro)
AR (1) AR008878A1 (ro)
AT (1) ATE312089T1 (ro)
AU (1) AU733417B2 (ro)
BG (1) BG64581B1 (ro)
BR (1) BR9712248B1 (ro)
CA (1) CA2267224C (ro)
CO (1) CO4900046A1 (ro)
CY (1) CY2576B1 (ro)
CZ (1) CZ299076B6 (ro)
DE (1) DE69734833T2 (ro)
DK (1) DK0957917T3 (ro)
DZ (1) DZ2320A1 (ro)
EA (1) EA002419B1 (ro)
ES (1) ES2252775T3 (ro)
HK (1) HK1023730A1 (ro)
HU (1) HU229221B1 (ro)
ID (1) ID19623A (ro)
IL (1) IL129243A (ro)
MA (1) MA24361A1 (ro)
MY (1) MY137606A (ro)
NO (1) NO320194B1 (ro)
NZ (1) NZ334953A (ro)
PE (1) PE10499A1 (ro)
PL (1) PL190859B1 (ro)
RO (1) RO119881B1 (ro)
SA (1) SA98180936B1 (ro)
SK (1) SK285029B6 (ro)
TR (1) TR199900737T2 (ro)
TW (1) TW487702B (ro)
UA (1) UA60311C2 (ro)
UY (2) UY24735A1 (ro)
WO (1) WO1998014192A1 (ro)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA60311C2 (uk) * 1996-10-02 2003-10-15 Смітклайн Бічам Корпорейшн Антагоністи рецептора вітронектину, спосіб одержання цих сполук та фармацевтична композиція
TW527355B (en) 1997-07-02 2003-04-11 Bristol Myers Squibb Co Inhibitors of farnesyl protein transferase
IL135188A0 (en) * 1997-09-24 2001-05-20 Smithkline Beecham Corp Vitronectin receptor antagonist
TR200000792T2 (tr) * 1997-09-24 2000-09-21 Smithkline Beecham Corporation Vitronektin reseptör antagonistleri.
US6372719B1 (en) 1998-03-04 2002-04-16 Jay Cunningham ανβ3 integrin antagonists in combination with chemotherapeutic agents
DE19842415A1 (de) 1998-09-16 2000-03-23 Merck Patent Gmbh Pharmazeutische Zubereitung
WO2000038730A2 (en) * 1998-12-23 2000-07-06 G.D. Searle & Co. Use of a cyclooxygenase-2 inhibitor and one or more antineoplastic agents for combination therapy in neoplasia
WO2000046215A1 (en) * 1999-02-03 2000-08-10 Merck & Co., Inc. Benzazepine derivatives as alpha-v integrin receptor antagonists
DE60007960T2 (de) * 1999-04-30 2004-10-21 Univ Michigan Ann Arbor Therapeutische Anwendungen von pro-apoptotischen Benzodiazepinen
AU6523200A (en) * 1999-08-06 2001-03-05 Smithkline Beecham Corporation Vitronectin receptor antagonists useful for the treatment of strokes
US6514964B1 (en) 1999-09-27 2003-02-04 Amgen Inc. Fused cycloheptane and fused azacycloheptane compounds and their methods of use
DE10028575A1 (de) 2000-06-14 2002-03-14 Basf Ag Integrinliganden
DE10027514A1 (de) * 2000-06-06 2002-01-03 Basf Ag Liganden von Integrinrezeptoren
FR2806082B1 (fr) * 2000-03-07 2002-05-17 Adir Nouveaux composes bicycliques antagonistes des recepteurs de la vitronectine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CA2436130A1 (en) 2001-01-29 2002-08-08 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoles and their use as integrin antagonists
OA12505A (en) * 2001-04-10 2006-05-29 Smithkline Beecham Corp Method of inhibiting adhesion formation.
SE0101386D0 (sv) 2001-04-20 2001-04-20 Astrazeneca Ab New compounds
WO2002090325A2 (en) * 2001-05-03 2002-11-14 Merck & Co., Inc. Benzazepinone alpha v integrin receptor antagonists
WO2003059251A2 (en) 2001-10-22 2003-07-24 The Scripps Research Institute Antibody targeting compounds
GB0215867D0 (en) * 2002-07-09 2002-08-14 Glaxosmithkline Spa Novel method and compounds
US7368566B2 (en) * 2003-04-04 2008-05-06 Smithkline Beecham Corporation Process and intermediates for preparing benzazepines
CN1964740A (zh) * 2004-04-02 2007-05-16 加利福尼亚大学董事会 治疗和预防与αVβ5整联蛋白有关的疾病的方法和组合物
AU2012216372B2 (en) * 2004-04-02 2015-01-22 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for treating and preventing disease associated with alphaVbeta5 integrin
UA87854C2 (en) 2004-06-07 2009-08-25 Мерк Энд Ко., Инк. N-(2-benzyl)-2-phenylbutanamides as androgen receptor modulators
WO2006069079A2 (en) * 2004-12-21 2006-06-29 Smithkline Beecham Corporation Methods and formulations
WO2007064752A2 (en) * 2005-11-29 2007-06-07 Smithkline Beecham Corporation Treatment of ocular neovascular disorders such as macular degeneration, angiod streaks, uveitis and macular edema
ES2457822T3 (es) 2007-11-08 2014-04-29 The General Hospital Corporation Procedimientos y composiciones de tratamiento de enfermedades proteinúricas
AU2008321770B2 (en) * 2007-11-16 2012-09-06 Ube Industries, Ltd. Benzazepinone compound
US8076475B2 (en) * 2008-03-06 2011-12-13 Glaxosmithkline Llc Process
WO2010093706A2 (en) 2009-02-10 2010-08-19 The Scripps Research Institute Chemically programmed vaccination
EP2415474B1 (en) * 2009-03-30 2013-08-28 Ube Industries, Ltd. Pharmaceutical composition for treatment or prevention of ophthalmic diseases
JP5572996B2 (ja) * 2009-05-15 2014-08-20 宇部興産株式会社 ベンズアゼピノン化合物を有効成分として含有する医薬
BR112012001463A2 (pt) 2009-07-24 2016-03-15 Univ California métodos e composições para tratar e prevenir doença associada à integrina alfavbeta5
CA2915237C (en) 2009-11-17 2017-10-10 The Regents Of The University Of Michigan 1,4-benzodiazepine-2,5-diones and related compounds with therapeutic properties
EP2325194A1 (en) * 2009-11-24 2011-05-25 Glycotope GmbH Process for the purification of glycoproteins
WO2015181676A1 (en) 2014-05-30 2015-12-03 Pfizer Inc. Carbonitrile derivatives as selective androgen receptor modulators
AU2021262281A1 (en) * 2020-04-26 2022-11-24 Jiangsu Nhwa Pharmaceutical Co., Ltd. 1,5-dihydro-2,4-benzodiazepine-3-one derivative and application thereof
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1041921C (zh) * 1992-12-21 1999-02-03 史密丝克莱恩比彻姆公司 双环血纤维蛋白原拮抗剂
JPH10504808A (ja) * 1994-06-29 1998-05-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ビトロネクチン受容体拮抗物質
JPH10504807A (ja) * 1994-06-29 1998-05-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ビトロネクチン受容体拮抗剤
US6008214A (en) * 1994-08-22 1999-12-28 Smithkline Beecham Corporation Bicyclic compounds
WO1996026190A1 (en) * 1995-02-22 1996-08-29 Smithkline Beecham Corporation Integrin receptor antagonists
UA60311C2 (uk) * 1996-10-02 2003-10-15 Смітклайн Бічам Корпорейшн Антагоністи рецептора вітронектину, спосіб одержання цих сполук та фармацевтична композиція

Also Published As

Publication number Publication date
PE10499A1 (es) 1999-03-27
AU4746297A (en) 1998-04-24
JP2010006838A (ja) 2010-01-14
AR008878A1 (es) 2000-02-23
KR100589578B1 (ko) 2006-06-15
JP4491072B2 (ja) 2010-06-30
AU733417B2 (en) 2001-05-17
CZ299076B6 (cs) 2008-04-16
SK285029B6 (sk) 2006-04-06
HU229221B1 (en) 2013-09-30
BG64581B1 (bg) 2005-08-31
MY137606A (en) 2009-02-27
ID19623A (id) 1998-07-23
IL129243A (en) 2004-07-25
EP0957917B1 (en) 2005-12-07
CA2267224C (en) 2007-03-13
MA24361A1 (fr) 1998-07-01
CA2267224A1 (en) 1998-04-09
HUP9903769A3 (en) 2000-07-28
AP9901493A0 (en) 1999-03-31
HK1023730A1 (en) 2000-09-22
TR199900737T2 (xx) 1999-07-21
DZ2320A1 (fr) 2002-12-28
BR9712248A (pt) 1999-08-24
EP0957917A4 (en) 2002-05-15
EA002419B1 (ru) 2002-04-25
BR9712248B1 (pt) 2010-06-29
DE69734833T2 (de) 2006-07-13
NZ334953A (en) 2000-01-28
KR20000048816A (ko) 2000-07-25
CO4900046A1 (es) 2000-03-27
CN1238689A (zh) 1999-12-15
UY24735A1 (es) 1998-03-30
BG103299A (en) 2000-01-31
UA60311C2 (uk) 2003-10-15
ES2252775T3 (es) 2006-05-16
EP0957917A1 (en) 1999-11-24
TW487702B (en) 2002-05-21
IL129243A0 (en) 2000-02-17
JP2001501936A (ja) 2001-02-13
DK0957917T3 (da) 2006-04-18
CZ113299A3 (cs) 2000-03-15
SA98180936B1 (ar) 2006-05-30
PL332674A1 (en) 1999-09-27
ATE312089T1 (de) 2005-12-15
WO1998014192A1 (en) 1998-04-09
CN1114403C (zh) 2003-07-16
SK42599A3 (en) 1999-12-10
NO320194B1 (no) 2005-11-14
EA199900356A1 (ru) 2000-02-28
NO991590L (no) 1999-05-31
CY2576B1 (en) 2008-07-02
HUP9903769A2 (hu) 2000-03-28
NO991590D0 (no) 1999-03-31
AP1463A (en) 2005-09-10
UY24935A1 (es) 2001-07-31
DE69734833D1 (de) 2006-01-12
PL190859B1 (pl) 2006-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO119881B1 (ro) Derivaţi de benzazepină, procedeu de preparare, compoziţie farmaceutică care îi cuprinde şi utilizarea acestora
KR20010024247A (ko) 비트로넥틴 수용체 길항제
CA2304000A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
US6825188B2 (en) Vitronectin receptor antagonists
US20020019387A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
KR20010086355A (ko) 비트로넥틴 수용체 길항제
US20020128257A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
MXPA01001386A (en) Vitronectin receptor antagonists
MXPA00002896A (en) Vitronectin receptor antagonist
MXPA00002895A (en) Vitronectin receptor antagonist
CZ20001060A3 (cs) Antagonista receptoru vitronektinu