KR20010086355A - 비트로넥틴 수용체 길항제 - Google Patents

Abstract

비트로넥틴 수용체 길항제이고 골다공증 치료에 유용한 화학식 (I)의 화합물이 개시된다:

(I)

상기 식에서, Y는 CR'R' 또는 NR'C(O)이고; R¹은 C_0-6알킬-Het, -C_0-6알킬-Ar, H, -C_1-6알킬, -CN 또는 S(O)_kR^g이고; R²는 하기 구조식의 잔기이고;

W는 (CHR^g)_a-U-CHR^g)_b-이고; U는 존재하지 않거나 또는 CO, CR^g ₂, C(=CR^g ₂), S(O)_k, O, NR^g, CR^gOR^g, CR^g(OR^k)CR^g ₂, CR^g ₂CR^g(OR^k), C(O)CR^g ₂, CR^g ₂C(O), CONRⁱ, NRⁱCO,OC(O), C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR^g, NR^gC(S), S(O)₂NR^g, NR^gS(O)₂N=N, NR^gNR^g, NR^gCR^g ₂, CR^g ₂NR^g, CR^g ₂O, OCR^g ₂, C ≡C, CR^g=CR^g, Ar 또는 Het이고; G는 NRe, S 또는 O이고; R^g는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고; R^k는 R^g, -C(O)R^g, 또는 -C(O)OR^f이고; Rⁱ는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, Ar-C_0-6알킬, 또는 할로겐, CN, NR^g ₂, OR^g, SR^g, CO₂R^g, 및 CON(R^g)₂로부터 선택된 1개 내지 3개의 기에 의해 치환된 C_1-6알킬이고; R^f는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고; R^e는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, 또는 (CH₂)_kCO₂R^g이고; R^b및 R^c는 독립적으로 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬, 할로겐, CF₃, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, CH₂N(R^f)₂로부터 선택되거나, 또는 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이고; Q¹, Q², Q³및 Q⁴는 독립적으로 질소 또는 C-R^y이고, 단 Q¹, Q², Q³및 Q⁴중 1개 이하는 질소이고; R'은 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬이고; R"은 R', -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고; R^y는 수소, 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂, 또는 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR", -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂에 의해 임의로 치환된 C_1-6알킬이고; a는 0, 1 또는 2이고; b는 0, 1 또는 2이고; k는 0, 1 또는 2이고; r은 0, 1 또는 2이고; s는 0, 1 또는 2이고; u는 0 또는 1이고; v는 0 또는 1이다.

Description

비트로넥틴 수용체 길항제 {VITRONECTIN RECEPTOR ANTAGONISTS}

인테그린 (integrins)은 세포 부착 수용체의 초군이고, 이는 다양한 세포상에 발현되는 경막 당단백질이다. 이들 세포 표면 부착 수용체는 gpIIb/IIIa (피브리노겐 수용체) 및 α_vβ₃(비트로넥틴 수용체)를 포함한다. 피브리노겐 수용체 gpIIb/IIIa는 혈소판 표면상에 발현되고, 상처의 출혈 부위에서 혈소판 응집 및 지혈성 혈병 형성을 매개한다. 필립스 등,Blood,1988,71, 831. 비트로넥틴 수용체 α_vβ₃는 내피 세포, 평활근 세포, 파골 세포, 및 종양 세포를 포함한, 수많은 세포상에서 발현되고, 그로 인해, 다양한 기능을 갖는다. 파골 세포의 막에 발현된 α_vβ₃수용체는 골 재흡수 과정의 주요 단계인, 파골 세포가 골 매트릭스에 부착되는 것을 매개한다. 로스 등,J. Biol. Chem. 1987,262, 7703. 골다공증은 골 재흡수 과잉에 의해 특징화되는 질병이다. 인간 대동맥 평활근 세포상에 발현된 α_vβ₃수용체는 네오인티마 (neointima)로 이들 세포가 이동하는 것을 매개하고, 이과정은 관상 혈관 성형술 후 재발 협착증을 일으킬 수 있다. 브라운 등,Cardiovscular Res., 1994,28, 1815. 또한, 문헌 [브룩스 등,Cell,1994,79, 1157]은 α_vβ₃길항제가 맥관 혈관의 세포 소멸을 유도함으로써 종양의 퇴행을 증진시킬 수 있다는 것을 보여 주었다. 그러므로, 비트로넥틴 수용체를 차단하는 제제들은 골다공증, 재발 협착증 및 암과 같은, 질환을 치료하는 데 유용하다.

비트로넥틴 수용체는 α_vβ₁,α_vβ₃및 α_vβ₅수용체로 표시되는, 3개의 상이한 인테그린을 의미하는 것으로 현재 알려져 있다. 호튼 등,Int. J. exp. Pathol.,1990,71,741. α_vβ₃는 피브린, 피브리노겐, 라미닌, 트롬보스폰딘, 비트로넥틴, 본 빌레브렌드 인자 (von willebrand's factor), 오스테오폰틴 및 골 시알로프로테인 I을 포함한, 매우 다양한 리간드와 결합한다. α_vβ₅는 비트로넥틴과 결합한다. 비트로넥틴 수용체 α_vβ₅는 미세 혈관 내피 세포를 포함한, 다양한 세포 형태의 세포 부착에 포함되는 것으로 나타났고 (데이비스 등,J. Cell. Biol.,1993,51, 206), 맥관 형성에서의 그 역할이 확인되었다. 브룩스 등,Science,1994,264,569. 이 인테그린은 정상 피부가 아닌, 인간 상처 과립 조직의 혈관상에서 발현된다.

비트로넥틴 수용체는 트리-펩티드 Arg-Gly-Asp (또는 RGD) 모티프를 함유하는 골 매트릭스 단백질에 결합하는 것으로 알려져 있다. 그러므로, 문헌 [호튼 등,Exp. Cell Res.1991,195, 368]은 RGD-함유 펩티드 및 항-비트로넥틴 수용체항체 (23C6)가 파골 세포에 의한 상아질 재흡수 및 세포 확산을 억제함을 개시한다. 또한, 문헌 [사토 등,J. Cell Biol.,1990,11,1713]은 RGD 서열을 함유하는 사독 펩티드인, 에치스타틴 (echistatin)은 조직 배양에서 골 재흡수의 강력한 억제제이고 파골 세포가 골에 부착하는 것을 억제한다.

특정한 화합물이 α_vβ₃및 α_vβ₅수용체의 강력한 억제제임이 발견되었다. 특히, 이러한 화합물이 피브리노겐 수용체보다 비트로넥틴 수용체의 더욱 강력한 억제제임이 발견되었다.

발명의 요약

본 발명은 이후 기술되는 화학식 (I)의 화합물을 포함하고, 이 화합물은 비트로넥틴 수용체의 억제에 대해 약리학적 활성을 갖고 염증, 암 및 동맥 경화증 및 재발 협착증과 같은, 심혈관 질환, 및 골다공증과 같이 골 재흡수가 요인인 질병의 치료에 유용하다.

본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물 및 제약학적 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 비트로넥틴 수용체에 의해 매개되는 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 특정한 면에서, 본 발명의 화합물은 동맥 경화증, 재발 협착증, 염증, 암 및 골 다공증과 같이 골 재흡수가 요인인 질병의 치료에 유용하다.

본 발명은 비트로넥틴 수용체를 억제하고 염증, 암 및 동맥경화증 및 재발 협착증과 같은 심혈관 질환, 및 골다공증과 같이 골 재흡수가 요인인 질병의 치료에 유용한 제약학적 활성 화합물에 관한 것이다.

본 발명은 피브리노겐 수용체보다 비트로넥틴 수용체의 더욱 강력한 억제제인 신규한 화합물을 포함한다. 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염을 포함한다:

상기 식에서,

Y는 CR'R' 또는 NR'C(O)이고;

R¹은 C_0-6알킬-Het, -C_0-6알킬-Ar, H, -C_1-6알킬, -CN 또는 S(O)_kR^g이고;

R²는 하기 구조식의 잔기이고;

W는 (CHR^g)_a-U-(CHR^g)_b-이고

U는 존재하지 않거나 또는 CO, CR^g ₂, C(=CR^g ₂), S(O)_k, O, NR^g, CR^gOR^g,CR^g(OR^k)CR^g ₂, CR^g ₂CR^g(OR^k), C(O)CR^g ₂, CR^g ₂C(O), CONRⁱ, NRⁱCO, OC(O), C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR^g, NR^gC(S), S(O)₂NR^g, NR^gS(O)₂N=N, NR^gNR^g, NR^gCR^g ₂, CR^g ₂NR^g, CR^g ₂O, OCR^g ₂, C ≡C, CR^g=CR^g, Ar 또는 Het이고;

G는 NRe, S 또는 O이고;

R^g는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

R^k는 R^g, -C(O)R^g, 또는 -C(O)OR^f이고;

Rⁱ는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, Ar-C_0-6알킬, 또는 할로겐, CN, NR^g ₂, OR^g, SR^g, CO₂R^g, 및 CON(R^g)₂로부터 선택된 1개 내지 3개의 기에 의해 치환된 C_1-6알킬이고;

R^f는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

R^e는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, 또는 (CH₂)_kCO₂R^g이고;

R^b및 R^c는 독립적으로 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬, 할로겐, CF₃, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, CH₂N(R^f)₂로부터 선택되거나, 또는 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이고;

Q¹, Q², Q³및 Q⁴는 독립적으로 질소 또는 C-R^y이고 (단 Q¹, Q², Q³및 Q⁴중 1개 이하는 질소임);

R'은 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬이고;

R"은 R', -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고;

R^y는 수소, 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂, 또는 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR", -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂에 의해 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

a는 0, 1 또는 2이고;

b는 0, 1 또는 2이고;

k는 0, 1 또는 2이고;

r은 0, 1 또는 2이고;

s는 0, 1 또는 2이고;

u는 0 또는 1이고;

v는 0 또는 1이다.

본 발명에 또한 제약학적으로 허용되는 부가염 및 본 발명 화합물의 복합체가 포함된다. 본 발명의 화합물이 1개 이상의 부제 중심을 가질 수 있는 경우에, 구체화되지 않는 한, 본 발명은 통상의 방법에 의해 합성되고 분리될 수 있는 각각의 유일한 비라세미 화합물을 포함한다. 화합물이 탄소-탄소 이중 결합을 가지는 경우에, 시스 (Z) 및 트랜스 (E) 이성질체 모두가 본 발명의 범위에 포함된다. 화합물이와 같이, 케토-에놀 호변 이성질체와 같은, 호변 이성질체 형태로 존재할 수 있는 경우에, 각각의 호변 이성질체 형태는 평형 상태로 존재하든지 또는 R'으로 적절히 치환된 하나의 형태로 존재하든지간에 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 간주된다.

화학식 (I)의 화합물은 비트로넥틴 및 다른 RGD-함유 펩티드가 비트로넥틴 수용체에 결합하는 것을 억제한다. 파골 세포상의 비트로넥틴 수용체의 억제는 파골 세포 골 재흡수를 억제하여 골다공증 및 골관절염과 같은, 골 재흡수가 병리와 관련된 질병의 치료에 유용하다.

또다른 면에서, 본 발명은 오스테오칼신 방출 증가를 일으키는 화합물을 투여하는 것을 포함하는 골 형성을 자극시키기 위한 방법에 관한 것이다. 증가된 골 생성은 골절 치료 및 골절 예방과 같이, 미네랄화된 골 질량이 부족하고 골의 재형성이 필요한 질병에 명백한 잇점을 준다. 골 구조 손실을 초래하는 질병 또는 대사 이상은 이러한 치료로 또한 개선될 것이다. 예를 들면, 부갑상선 기능 항진증, 파제트병, 악성 종양의 과칼슘혈증, 골 전이에 의해 생성되는 골 용해성 병변, 부동화 또는 성호르몬 결핍에 의한 골 손실, 베세트병, 골연화증, 골과잉증 및 골화석증은 본 발명의 화합물을 투여함으로써 개선될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물이 상이한 형태의 수많은 세포상의 비트로넥틴 수용체를 억제하기 때문에, 상기 화합물들은 류마티스성 관절염 및 건선과 같은, 염증성 질환, 및 동맥 경화증 및 재발 협착증과 같은, 심혈관 질환의 치료에 유용할 것이다. 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 혈전 색전 질환, 천식, 알레르기, 성인 호흡 곤란 증후, 이식편대숙주 질환, 조직 이식 거부, 패혈성 쇼크, 습진, 접촉성 피부염, 염증성 장 질환, 및 다른 자가 면역 질환 등을 포함한 다른 질병의 치료 및 예방에 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 상처 치료에 유용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 혈관 형성성 질병의 예방을 포함한, 치료에 유용하다. 본원에 사용된 용어 혈관 형성성 질병은 비정상적인 혈관 신생을 포함한 상태를 포함한다. 새로운 혈관의 성장이 질병의 원인이거나, 또는 질병에 관련된 병리에 기여할 때, 혈관 형성의 억제는 조직에 혈액 공급을 감소시킬 것이고 이로 인해 혈액 공급 요건에 바탕을 둔 조직 질량 감소에 기여할 것이다. 예는 혈관 신생이종양이 성장하고 고형 종양이 전이되도록 하기 위한 지속적인 필요 조건인 종양 성장을 포함한다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 종양 조직 혈관 형성을 억제함으로써 종양 전이 및 종양 성장을 예방한다.

그러므로, 본 발명의 방법에 따라, 본 발명의 화합물을 사용한 혈관 형성 억제는 질병의 증상을 개선시킬 수 있고, 어떤 경우에는 질병을 치료할 수 있다.

본 발명 화합물의 또다른 치료 표적 질환은 혈관 신생에 의해 특징화된 안질환이다. 이러한 안질환은 각막 혈관 신생 질환, 포진성 각막염, 매독성 각막염, 콘택트 렌즈 이용과 관련된 익상편 및 혈관 신생성 파누스와 같은, 각막 혈관 신생성 질환을 포함한다. 추가적 안질환은 또한 연령 관련 반점성 퇴행, 예정된 안히스토플라스마증, 미숙아의 망막장애 및 혈관 신생성 녹내장을 포함한다.

본 발명은 추가로 화학식 (I)의 화합물 및 토포테칸 및 시스플라틴과 같은, 항종양제를 단계적으로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다.

화하식 (I)에 관하여:

적합하게는 R²는 하기 구조식의 잔기이고,

상기 식에서, Q¹, Q², 및 Q³는 각각 CR^y이고, Q⁴는 CR^y또는 질소이고 u는 0이고, 바람직하게는, 각각의 R'은 수소이고, R"은 수소 또는 C_1-6알킬이고, W는 -(CH₂)_1-4-이고, Q⁴는 CR^y이고 R^y는 수소이다.

선택적으로 R²는 하기 구조식의 잔기이고,

상기 식에서, Q¹, Q², 및 Q³는 각각 CH이고 u는 0이고, 바람직하게는, 각각의 R'은 수소이고, R"은 수소 또는 C_1-6알킬이고, W는 -(CH₂)_1-4-이고 v는 0이다.

선택적으로 R²는 하기 구조식의 잔기이고,

상기 식에서, G는 NH이고 R^b및 R^c는 각각 수소이고, 바람직하게는, W는 -(CH₂)_1-4-이다.

선택적으로 R²는 하기 구조식의 잔기이고,

상기 식에서, G는 NH이고 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이다. 바람직하게는, R^b및 R^c는 서로 결합하여 6원 방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고 W는 -(CH₂)_1-4-이다.

선택적으로 R²는 하기 구조식의 잔기이고,

상기 식에서, 각각의 R'은 수소이고, R"은 수소 또는 C_1-6알킬이고, R^g는 수소 또는 C_1-6알킬이고 s는 0, 1 또는 2이고, 바람직하게는, W는 -(CH₂)_1-4-이다.

화학식 (I)과 관련하여, 적합하게는 R¹은 페닐, 벤질, 피리딜, 이미다졸, 옥사졸릴 또는 티아졸릴이다. 바람직하게는, R¹은 페닐이다. 적합하게는, Y는 NHC(O)이다.

본 발명의 신규한 화합물의 대표적 예는 하기와 같다:

(±)-3-페닐-4-[4-[[[3-(피리딘-2-일)아미노-1-프로필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산;

(±)-3-페닐-4-[4-[[[2-(피리딘-2-일)아미노-1-에틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산;

(±)-3-페닐-4-[4-[[[4-(피리딘-2-일)아미노-1-부틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산; 및

(±)-3-페닐-4-[4-[[[5-(피리딘-2-일)아미노-1-펜필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산;

또는 제약학적으로 허용되는 그의 염.

본 발명의 화합물이 1개 이상의 부제 중심을 자질 수 있는 경우에, 구체화되지 않는 한, 본 발명은 통상의 기술에 의해 합성되고 분리될 수 있는 각각의 유일한 비라세미 화합물을 포함한다. 본 발명에 따르면, 화학식 (I) 화합물의 (S) 형태가 바람직하다.

화합물이 불포화 탄소-탄소 이중 결합을 가지는 경우에, 시스 (Z) 및 트랜스 (E) 이성질체 모두 본 발명의 범위 내에 있다. 어떤 경우에 하나의 치환기의 의미는 그 의미와 관계가 없거나, 또는 다른 경우에 다른 의미와 관계가 없다.

본 발명의 화합물의 약물 전구체 또한 본 발명에 포함된다. 약물 전구체는 화학식 (I)의 약물 모체를 생체내에서 방출시키는 공유 결합된 담체인 것으로 간주된다. 그러므로, 본 발명의 또다른 면은 신규한 약물 전구체에 관한 것이고, 이는 또한 화학식 (I) 화합물의 제조 중간체인 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염이다:

상기 식에서,

Y는 CR'R' 또는 NR'C(O)이고;

R¹은 C_0-6알킬-Het, -C_0-6알킬-Ar, 수소, -C_1-6알킬, -CN 또는 S(O)_kR^g이고;

R²는 하기 구조식의 잔기이고;

W는 (CHR^g)_a-U-(CHR^g)_b-이고

U는 존재하지 않거나 또는 CO, CR^g ₂, C(=CR^g ₂), S(O)_k, O, NR^g, CR^gOR^g, CR^g(OR^k)CR^g ₂, CR^g ₂CR^g(OR^k), C(O)CR^g ₂, CR^g ₂C(O), CONRⁱ, NRⁱCO, OC(O), C(O)O, C(S)O,OC(S), C(S)NR^g, NR^gC(S), S(O)₂NR^g, NR^gS(O)₂N=N, NR^gNR^g, NR^gCR^g ₂, CR^g ₂NR^g, CR^g ₂O, OCR^g ₂, C ≡C, CR^g=CR^g, Ar 또는 Het이고;

G는 NRe, S 또는 O이고;

R^g는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

R^k는 R^g, -C(O)R^g, 또는 -C(O)OR^f이고;

Rⁱ는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, Ar-C_0-6알킬, 또는 할로겐, CN, NR^g ₂, OR^g, SR^g, CO₂R^g, 및 CON(R^g)₂로부터 선택된 1개 내지 3개의 기에 의해 치환된 C_1-6알킬이고;

R^f는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

R^e는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, 또는 (CH₂)_kCO₂R^g이고;

R^b및 R^c는 독립적으로 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬, 할로겐, CF₃, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, CH₂N(R^f)₂로부터 선택되거나, 또는 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이고;

Q¹, Q², Q³및 Q⁴는 독립적으로 질소 또는 C-R^y이고 (단 Q¹, Q², Q³및 Q⁴중 1개 이하는 질소임);

R'은 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬이고;

R"은 R', -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고;

R^y는 수소, 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂, 또는 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR", -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂에 의해 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

a는 0, 1 또는 2이고;

b는 0, 1 또는 2이고;

k는 0, 1 또는 2이고;

r은 0, 1 또는 2이고;

s는 0, 1 또는 2이고;

u는 0 또는 1이고;

v는 0 또는 1이다.

펩티드 및 화학 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 약어 및 부호가 본 발명의 화합물을 설명하기 위해 본원에 사용된다. 일반적으로, 아미노산 약어는 문헌Eur. J. Biolchem., 158, 9 (1984)]에 기술된 생화학적 명명법에 관한 IUPAC-IUB 조인트 커미션을 따른다.

본원에 적용된 C_1-4알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자의 임의로 치환된 알킬기를 의미하고, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필 및 t-부틸을 포함한다. C_1-6알킬은 추가로 펜틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸 및 헥실 및 그의 간단한 지방족 이성질체를 포함한다. C_0-4알킬 및 C_0-6알킬은 추가로 알킬기가 존재할 필요가 없음을 나타낸다 (예를 들면 공유 결합이 존재함을 나타냄).

C_1-4알킬 또는 C_1-6알킬, C_2-6알케닐, C_2-6알키닐 또는 C_1-6옥소알킬은 임의로 R^x기에 의해 치환될 수 있고, 이는 안정한 구조를 이루는 탄소 원자상에 있을 수 있고 통상의 합성 기술에 의해 이용 가능하다. R^x의 적합한 기는 C_1-4알킬, OR', SR', C_1-4알킬설포닐, C_1-4알킬설폭실, -CN, N(R')₂, CH₂N(R')₂, -NO₂, -CF₃, -CO₂R', -CON(R')₂, -COR', -NR'C(O)R', F, Cl, Br, I, 또는 CF₃S(O)_r-이고, 여기서 r은 0, 1 또는 2이다.

할로겐 또는 할로는 F, Cl, Br 및 I를 의미한다.

본원에 사용된, Ar, 또는 아릴은 페닐 또는 나프틸, 또는 알킬, 특히 C_1-4알킬, C_1-4알콕시, C_1-4알크티오, CF₃, NH₂, OH, F, Cl, Br 또는 I에 대해 상기 정의된 것들과 같은, 1 내지 3개의 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 나프틸을 의미한다.

Het, 또는 헤테로사이클은 임의로 치환된 5 또는 6원 모노시클릭 고리, 또는 질소, 산소 및 황을 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하는 9 또는 10원 비시클릭 고리를 나타내고, 이들은 안정하고 통상의 화학 기술에 의해 이용 가능하다. 이 헤테로사이클의 예는 벤조푸릴, 벤지미다졸, 벤조피란, 벤조티오펜, 푸란, 이미다졸, 인돌린, 몰폴린, 피페리딘, 피페라진, 피롤, 피롤리딘, 테트라히드로피리딘, 피리딘, 티아졸, 옥사졸, 티오펜, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 및 테트라- 및 퍼히드로-퀴놀린 및 이소퀴놀린이다. 알킬에 대해 상기 정의된 것들과 같은, 화학 합성에 의해 이용 가능하고 안정한, Het 고리 상의 3개 이하의 치환체의 가능한 조합이 본 발명의 범위 내에 있다.

C_3-7시클로알킬은 3 내지 7개의 탄소 원자의 임의로 치환된 카르보시클릭계를 의미하고, 이는 2개 이하의 불포화 탄소-탄소 결합을 함유할 수 있다. 전형적인 C3-7시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐 및 시클로헵틸이다. 통상의 화학 합성에 의해 이용 가능하고 안정한 시클로알킬 고리 상의, 알킬에 대해 상기 정의된 것들과 같은, 3개 이하의 치환체의 조합이 본 발명의 범위 내에 있다.

R^b및 R^c가 서로 결합하여 R^b및 R_c가 결합된 고리에 융합된 5 또는 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성할 때, 이 형성된 고리는 일반적으로 Het에 대해 상기 열거된 것들로부터 선택된 5 또는 6원 헤테로사이클이거나, 또는 페닐, 시클로헥실 또는 시클로펜틸 고리일 것이다. 바람직하게는 R^b및 R^c는 D1 - D4가 독립적으로 CH, 질소 또는 C-R^x인 (단 D1 - D4 중 2개 이하가 질소임) -D1=D2=D3=D4일 것이다. 가장 바람직하게는, R^b및 R^c가 서로 결합할 때, 이들은 -CH=CH-CH=CH- 기를 형성한다.

특정한 라디칼기는 본원에 약어로 사용된다. t-Bu는 tertiary 부틸 라디칼을 의미하고, Boc은 t-부틸옥시카보닐 라디칼을 의미하고, Fmoc는 플루오레닐메톡시카보닐 라디칼을 의미하고, Bn은 벤질 라디칼을 의미하고, Me는 메틸을 의미하고, Et는 에틸을 의미하고, Ac는 아세틸을 의미하고, Alk는 C_1-4알킬을 의미하고, Nph는 1- 또는 2-나프틸을 의미하고 cHex는 시클로헥실을 의미한다. Tet는 5-테트라졸릴을 의미한다.

특정한 시약이 본원에 약어로 사용된다. DCC는 디시클로헥실카보디이미드를 의미하고, DMAP는 디메틸아미노피리딘을 의미하고, DIEA는 디이소프로필 아민을 의미하고, EDC는 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 염산을 의미한다.HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸을 의미하고, THF는 테트라히드로퓨란을 의미하고, DIEA는 디이소프로필에틸아민을 의미하고, DEAD는 디에틸 아조디카복실레이트를 의미하고, PPh₃는 트리페닐포스핀을 의미하고, DIAD는 디이소프로필 아조디카복실레이트를 의미하고, DME는 디메톡시에탄을 의미하고, DMF는 디메틸포름아미드를 의미하고, NBS는 N-브로모석시니미드를 의미하고, Pd/C는 타소상 팔라듐 촉매를 의미하고, PPA는 폴리인산을 의미하고, DPPA는 디페닐포스포릴 아지드를 의미하고, BOP는 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트를 의미하고, HF는 히드로플루오르산을 의미하고, TEA는 트리에틸아민을 의미하고, TFA는 트리플루오로아세트산을 의미하고, PCC는 피리드늄 클로로크로메이트를 의미한다.

화학식 (I)의 화합물은 일반적으로 하기 화학식 (III)의 화합물을 반응성 관능기가 보호된 하기 화학식 (IV)의 화합물과 반응시키고, 이후 보호기를 제거하고, 임의로 제약학적으로 허용되는 염을 형성함으로써 제조된다:

상기 식에서, R¹및 R²는 화학식 (I)에서 정의한 것과 같다.

화학식 (I)의 화합물은 반응식 I-II에 기술된 일반적인 방법에 의해 제조된다.

3-페닐글루타르산의 모노-에틸 에스테르 (I-1;J. Org. Chem.,1959,24,1290)를 예를 들면, EDC 및 HOBt, 또는 SOCl₂를 사용하여 산의 활성형으로 변환시키고 이 활성형은 DMF, CH₂Cl₂, 도는 CH₃CN과 같은 적합한 용매에서, 적합한 2-히드록시에틸아민, 예를 들면 세린 메틸 에스테르와 반응시켜 히드록시에틸아미드 I-2를 얻는다. 산 중화가 요구되는지 아닌지에 따라, 트리에틸아민 (Et₃N), 디이소프로필에틸아민 ((i-Pr)₂NEt), 또는 피리딘과 같은 부가 염기가 사용될 수 있다. 카르복실산을 아미드로 변환시키는 많은 추가의 방법이 알려져 있고, 문헌 ["Compendium of Organic Synthetic Methods," Vol. I - VI, Published by Springer-Verlag), 또는 [보단스키, "The Practice of Peptide Synthesis," Published by Springer-Verlag]과 같은, 통상적인 참고 도서에서 찾을 수 있다. 화합물 I-2를 통상적인 2 단계 방법을 통해 옥사졸 유도체로 변환시킨다. 우선, 화합물 I-2를 탈수 조건하에서, 바람직하게는 메이어스 (J. Org. Chem.,1996,61, 8207)에 의해 기술된 버게스 시약 (Org. Synth. Coll. Vol. VI 1988, 788)으로 고리화시켜 옥사졸린 유도체 I-3를 얻는다. 이후 배리쉬 (J. Org. CHem. 1993, 58, 4494)에 의해 개발된 일반적인 방법에 다른 산화에 의해 옥사졸 유도체 I-4를 얻는다. 옥사졸린으로부터의 옥사졸의 제조를 위한 다른 방법이 알려져 있고, 이 중 몇가지는 메이어스 (Teterahedron,1994,58, 4494)에 의한 최근 고찰에 기술되어 있다. I-4의 메틸 에스테르는 환류 피리딘 중 리튬 요다이드와 같은, 친핵성 조건을 사용하여 상응하는 카르복실산 (I-5)로 절단시킨다. 메틸 에스테르의 친핵성 절단을 위한 다른 방법은 문헌 [그린, "Protective Groups in Organic Synthesis," Published by Wiley-Interscience]와 같은, 통상적 참고 도서에서 찾을 수 있다. 에틸 에스테르의 동시 절단이 통상적인 비누화 조건하에서 예측되므로, 친핵성 조건은 이런 경우에 바람직할 수 있다. 화합물 I-5를 1,1'-카르보닐 디이미다졸을 사용하여 산의 활성형으로 변환시키고, 이 활성형을 적합한 아민, 예를 들면 2-[(3-아미노-1-프로필)아미노]피리딘 이염산과 반응시켜 아미드 유도체 I-6를 얻는다. 상기 논의된 바대로, 다양한 다른 방법들이 산 I-5를 아미드 I-6로 변환시키기 위해 사용될 수 있다. I-6의 에틸 에스테르를 수성 염기, 예를 들면, 수성 THF 중 LiOH 또는 수성 메탄올 또는 에탄올 중 NaOH를 사용하여 가수분해시키고, 중간체 카르복실레이트 염을 적합한 산, 예를 들면 TFA 또는 HCl로 산성화시켜 카르복실산 I-7을 얻는다. 선택적으로, 중간체 카르복실레이트 염이 분리될 수 있거나, 바람직하다면, 또는 유리 카르복실산의 염이 당업자에게 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다.

화합물 II-1의 카르복실산을 선택적으로 에틸 에스테르 존재 하에서 2 단계 방법에 의해 상응하는 알콜 (II-2)로 환원시킨다. 제 1 단계는 트리알킬아민 염기, 일반적으로 N-메틸몰폴린 (NMM) 존재 하에서, 에틸 클로로포르메이트와 같은, 알킬 클로로포르메이트를 사용하여, 혼합 산무수물을 형성하는 것을 포함한다. 반응은 통상적으로 THF와 같은, 극성, 비양자성 용매 중에서 수행된다. 혼합 산무수물을 일반적으로 분리해 내지 않고, 오히려 적합한 환원제, 바람직하게는 소듐보로히드리드 (NaBH₄)와 동일 반응계 내에서 반응시킨다. NaBH₄가 환원제로 사용될 때, 메탄올 및 에탄올과 같은 보조 용매가 NaBH₄를 용해시키기 위해 필요로된다. 알콜 II-2를 다우니 (Chem. Ind.,1966, 900)의 일반적인 방법에 따라, 트리페닐포스핀 (PPh₃)의 존재 하에서 카본 테트라브로마이드 (CBr₄)와 반응시켜 브로마이드 II-3으로 변환시킨다. 많은 추가의 방법들이 알콜을 상응하는 할로겐화물로의 변환을 위해 이용 가능하고, 문헌 ["Compendium of Organic Synthetic Methods," Published by Wiley-Interscience]과 같은, 통상적인 참고 도서에 나타난다. 브로마이드 II-3는 아세토니트릴과 같은 적합한 용매 중에서, 트리알킬- 또는 트리아릴포스핀, 예를 들면 트리페닐포스핀과 반응시켜 비티그 시약 II-4를 얻는다. 적합한 염기와 적합한 알데히드, 예를 들면 4-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-(피리딘-2-일)아미노]부타날을 반응시킬 때, II-4는 잘 알려진 비티그 반응을 하여 올레핀 II-5를 얻는다. 여기서, II-4의 II-5로의 변환은 에반스 (J. Am. Chem. Soc.,1992,114, 9434)에 의해 기술된 일반적인 방법에 따라 최적으로 확립된다. II-5의 tert-부톡시카르보닐 보호기를 1,4-디옥산 중의 4N HCl 또는 CH₂Cl₂중의 TFA와 같은, 산성 조건 하에서 제거시켜 II-6을 얻는다. tert-부톡시카르보닐기의 제거 조건은 당업자에게 잘 알려져 있고, 몇가지 유용한 방법이 문헌 [그린, "Protective Groups in Organic Synthesis"]과 같은 통상적인 참고 도서에 기술되어 있다. 올레핀 및 II-6의 N-옥사이드 잔기 둘다를 수소화 조건을 사용하여 동시에 환원시켜 II-7을 얻는다. 대체로, 이 반응은 팔라듐 촉매, 바람직하게는 활성 탄소상 팔라듐 금속에 의해 매개되고, 불활성 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 또는 2-프로파놀에서 일어난다. 시클로헥산, 1,4-시클로헥사디엔, 포름산, 및 포타슘 포르메이트 또는 암모늄 포르메이트와 같은 포름산 염이 이런 형태의 반응에서 수소 전이 시약으로서 통상적으로 사용된다. II-7의 에틸 에스테르를 반응식 I에 기술된 바대로 가수분해시켜 카르복실산 II-8을 얻는다.

본원에 사용된 아미드 커플링제는 펩티드 결합을 형성하기 위해 사용될 수 있는 시약을 의미한다. 전형적인 커플링 방법은 카르보디이미드, 활성화 산무수물 및 에스테르 및 아실 할로겐화물을 사용한다. EDC, DCC, DPPQ, BOP 시약, HOBt, N-부톡시석시니미드 및 옥살릴 클로라이드와 같은 시약이 전형적이다.

펩티드 결합을 형성하기 위한 커플링 방법은 일반적으로 당업계에 잘 알려져 있다. 문헌 [보단스키 등, The Practice of Peptide Synthesis, Spring-Verlag, 베를린, 1984, 알리등,J. Med. Chem., 29, 984, 1986 및J. Med. Chem., 30, 2291, 1987]에 일반적으로 나타나 있는 펩티드 합성 방법이 일반적으로 기술 설명적이고 참고로 본원에 혼입된다.

대체로, 아민 또는 아닐린은 그의 유리 아미노기를 통해 임의로 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt) 및 디메틸아미노 피리딘 (DMAP)과 같은 촉매 존재 하에서, N,N'-디시클로헥실 카르보디이미드 (DCC)와 같은, 적합한 카르보디이미드 커플링제를 사용하여 적합한 카르복실산 기질과 커플링시킨다. 적합하게 보호된 아미노산기질의 유리 카르복실의 활성 에스테르, 산무수물 또는 산 할로겐화물의 형성, 및 임의로 염기의 존재 하에서의, 이후 적합하게 보호된 아민의 유리 아민과의 반응과 같은 다른 방법이 또한 적합하다. 예를 들면, 보호된 Boc-아미노산 또는 Cbz-아미디노 벤조산을 메틸렌 클로라이드 또는 테트라히드로퓨란 (THF)와 같은, 무수 용매 중에서, N-메틸 몰폴린, DMAP 또는 트리알킬아민과 같은 염기 존재 하에서, 이소부틸 클로로포르메이트와 반응시켜 "활성화된 산무수물"을 형성시키고, 이를 이후 또 하나의 보호된 아미노산 또는 아닐린의 유리 아민과 반응시킨다.

R²가 벤지미다졸인 화학식 (I) 화합물의 유용한 중간체는 문헌 [네스터 등,J. Med. Chem., 1984,27, 320]에 개시된다. 본 발명의 중간체로서 유용한 벤지미다졸 화합물을 제조하기 위한 대표적 방법은 또한 당업계에서 통상적이고 예를 들면, EP-A 0 381 033에서 찾을 수 있다.

화합물의 산부가염을 모화합물 및 염산, 브롬산, 플루오르산, 황산, 인산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레산, 석신산 또는 메탄설폰산과 같은 과량의 산으로부터 적합한 용매 중에서 통상적인 방법으로 제조한다. 특정한 화합물은 허용될 수 있는 내부 염 또는 양성 이온을 형성한다. 양이온 염은 모화합물을 적합한 양이온을 함유하는, 히드록시드, 카보네이트 또는 알콕시드와 같은, 과량의 알칼리성 시약; 또는 적합한 유기 아민으로 처리함으로써 제조한다. Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺및 NH₄ ⁺와 같은 양이온은 제약학적으로 허용되는 염에 존재하는 양이온의구체적인 예이다.

본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 따라서, 화학식 (I)의 화합물은 의약 제조에 사용될 수 있다. 본원 이전에 기술된 바대로 제조된 화학식 (I)의 화합물의 제약 조성물은 용액으로서 제제화될 수 있고 비경구 투여를 위해 동결 건조 분말화될 수 있다. 분말은 사용하기 전에 적합한 희석제 또는 다른 제약학적으로 허용되는 담체를 부가하여 재구성될 수 있다. 약제는 완충성, 등장성, 수성 용액일 수 있다. 적합한 희석제의 예는 정상적인 등장 식염 용액, 수중의 통상적인 5% 덱스트로스 또는 완충 소듐 또는 암모늄 아세테이트 용액이다. 이러한 제제는 특히 비경구 투여를 위해 적합하지만, 또한 경구 투여에 사용되거나 흡입을 위해 측량된 투약 인할러 또는 네블라이저 내에 함유될 수 있다. 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, 히드록시 셀룰로즈, 아카시아, 폴리에틸렌 글리콜, 만니톨, 소듐 클로라이드 또는 소듐 시트레이트와 같은 부형제를 첨가하는 것이 바람직할 수 있다.

선택적으로, 이들 화합물은 경우 투여를 위해 캡슐화되고, 정제화되거나 또는 에멀젼 또 시럽으로 제조될 수 있다. 제약학적으로 허용되는 고체 또는 액체 담체가 조성물을 개선시키거나 안정화시키기 위해, 또는 조성물 제조를 용이하게 하기 위해 첨가될 수 있다. 고체 담체는 전분, 락토즈, 칼슘 설페이트 이수화물, 테라 알바, 마그네슘 스테아레이트 또는 스테아르산, 탈크, 팩틴, 아카시아, 한천 또는 젤라틴을 포함한다. 액체 담체는 시럽, 땅콩유, 올리브유, 식염수 및 물을 포함한다. 담체는 또한 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 서방형 물질을 단독으로 포함하거나 또는 이를 왁스와 함께 포함할 수 있다. 고체 담체의 양은 그러나, 바람직하게는 투약 단위 당 약 20 mg 내지 약 1 g일 것이다. 제약학적 제제는 정제를 위해, 필요할 때, 밀링 (milling), 혼합, 과립화, 및 압착; 또는 경질 젤라틴 캡슐 제형을 위해 밀링, 혼합 및 충전을 포함하는 약학 분야의 통상적인 기술에 따라 제조된다. 액체 담체가 사용될 때, 제제는 시럽, 엘릭실, 에멀젼 또는 수성 또는 비수성 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 액체 제제는 직접 경구로 투여되거나 또는 연질 젤라틴 캡슐 내에 충전될 수 있다.

직장 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 또한 코코아 버터, 글리세린, 젤라틴 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 부형제와 혼합될 수 있고 좌제로 성형될 수 있다.

본원에 기술된 화합물은 비트로넥틴 수용체의 길항제이고, 근본적인 병리가 비트로넥틴 수용체와 상호작용하는 리간드 또는 세포에서 유래하는 질병을 치료하는 데 유용하다. 예를 들면, 이들 화합물은 골 매트릭스의 손실이 병을 유발시키는 질병의 치료에 유용하다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 골다공증, 부갑상선 기능항진증, 파제트병, 악성 종양의 과칼슘혈증, 골 전이에 의해 생성되는 골 용해성 병변, 부동화 또는 성호르몬 결핍에 의한 골 손실의 치료에 유용하다. 본 발명의 화합물은 또한 항종양제, 항-혈관 형성제, 항염증제 및 항-전이제로서 유용성을 갖는 것으로 여겨지고, 동맥 경화증 및 재발 협착증의 치료에 유용하다.

화합물은 의약의 농도가 골 재흡수를 억제하기에 충분할 방식으로, 또는 이러한 다른 방식으로, 환자에게 경구 또는 비경구로 투여된다. 화합물을 함유하는 제약 조성물은 환자의 상태에 맞는 방식으로 약 0.1 내지 약 50 mg/kg의 경구 투약량으로 투여된다. 바람직하게는 경구 투약량은 약 0.5 내지 약 20 mg/kg일 것이다. 급성 치료를 위해서는, 비경구 투여가 바람직하다. 근육 내 볼러스 (bolus) 주사가 또한 유용하다 하더라도, 물 또는 정상적인 식염수 중 5% 덱스트로즈 중의 펩티드, 또는 적합한 부형제를 갖는 유사한 제제의 정맥 내 주입이 가장 효과적이다. 대체로, 비경구 투약량은 약 0.01 내지 약 100 mg/kg; 바람직하게는 0.1 내지 20 mg/kg일 것이다. 화합물은 총 1일 투약량이 약 0.4 내지 약 400 mg/kg/day이 되도록 1일 1 내지 4회 투여된다. 화합물이 투여되는 정확한 양 및 방법은 제제의 혈액 농도를 치료 효과를 갖기 위해 필요한 농도와 비교함으로써 당업자에게 용이하게 결정된다.

본 발명은 추가로 골다공증을 치료하거나 또는 화학식 (I)의 화합물 및 비스포스포네이트 (즉, 알렌드로네이트), 호르몬 대체 요법, 항-에스트로겐, 또는 칼시토닌과 같은, 골 재흡수의 다른 억제제를 단계적으로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 골 손실을 억제하기 위한 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은골 손실 예방 및/또는 골 질량 증가에 유용한, 본 발명의 화합물 및 골 모르포겐 단백질, 이소플라본과 같은, 아나볼릭 (anabolic) 제제를 사용하여 치료하는 방법을 제공한다.

추가로, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 항종양제를 단계적으로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장을 억제시키는 방법을 제공한다. 토포테칸, 이리노테칸 및 9-아미노캠토테신과 같은, 캠토테신류 화합물, 및 시스플라틴, 오르마플라틴 및 테트라플라틴과 같은 백금 결합 착체는 잘 알려진 항암제군이다. 캠토테신류의 화합물은 미국 특허 제5,004,758호, 제4,604,463호, 4,473,692호, 4,545,880호, 4,342,776호, 4,513,138호, 4,399,276호, 유럽 특허 출원 번호 제0 418 099호 및 제0 088 642호, 문헌 [와니 등,J. Med. Chem. 1986,29, 2358, 와니 등,J. Med. Chem.,1980,23,554, 와니 등,J. Med. Chem..1987,30, 1774, 및 니타 등,Proc. 14th International Congr. Chemotherapy.,1985,Anticancer Section 1, 28]에 기술되어 있고, 각각의 전체 개시가 본원에 참고로 혼입된다. 백금 결합 착체, 시스플라틴은 브리스톨 마이어스-스퀴브 코포레이션으로부터 플라티놀 (Platinol)이란 상품명으로 구입 가능하다. 시스플라틴의 유용한 제제는 미국 특허 제5,562,925호 및 제4,310,51호에 기술되어 있고, 이의 전체 개시가 본원에 참고로 혼입된다.

화학식 (I)의 화합물 및 항종양제를 단계적으로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종야 성장을 억제하는 방법에서, 백금 결합 화합물, 예를 들면 시스플라틴은 느린 정맥 내 주입을 사용하여 투여될 수 있다. 바람직한 담체는 만니톨을 함유하는 덱스트로즈/식염수 용액이다. 백금 결합 화합물의 투약량 조절은 처리 과정 당 체표면의 제곱 미터 당 (mg/m²) 약 1 및 약 500 mg을 기본으로 이루어질 수 있다. 백금 결합 화합물의 주입은 1주 1 내지 2회 이루어질 수 있고, 주 단위 치료가 수회 반복될 수 있다. 비경구 투여, 일반적으로 사용되는 치료 요법의 과정에서 캠토테신류 화합물은 약 연속 5일 동안 1일에 체표면 (m²) 당 약 1.0 내지 약 2.0 mg/m²이 사용된다. 바람직하게는 치료 요법 과정은 약 7일 내지 약 28일 간격으로 적어도 한 번 반복된다.

제약 조성물은 화학식 (I)의 화합물 및 항종양제 모두를 동일한 용기 내에 넣어 제제화될 수 있지만, 상이한 용기 내 제제가 바람직하다. 2개의 제제가 용액 형태로 제공될 때, 이들은 동시 투여를 위한 주입/주사 시스템으로 또는 직렬식 재배열로 함유될 수 있다.

동일하거나 상이한 시간에 화학식 (I)의 화합물 및 항종양제를 통상적 투여하기 위해, 상기 기술된 바대로, 비경구 투여를 위해 화학식 (I)의 화합물의 유효량, 및 상기 기술된 바대로, 비경구 투여를 위해 항종양제의 유효량을 각각 갖는 박스, 카톤 또는 다른 용기와 같은 단일 용기, 개별적 병, 백, 바이알 또는 다른 용기를 포함하는, 하나의 키트가 제조된다. 이러한 키트는 예를 들면, 임의로 플러그 동결 건조된, 분리된 용기들 또는 동일한 용기 내의 제약 제제, 및 재구성을 위한 용액의 용기 모두를 포함할 수 있다. 이것이 변화한 것에는 재구성을 위한 용액 및 단일 용기의 2개의 구획에 동결건조된 플러그를 포함하는 것이 있고, 이는 사용하기 전에 서로 혼합될 수 있다. 이러한 형태로, 항종양제 및 본 발명의 화합물은 개별적으로 2개의 용기 내에 포장될 수 있거나, 또는 분말로 함께 동결 건조되어 단일 용기로 제공될 수 있다.

2개의 제제가 용액 형태로 제공될 때, 이들은 동시 투여를 위해 주입/주사 시스템으로 또는 직렬식 배열로 함유될 수 있다. 예를 들면, 화학식 (I)의 화합물은 정맥 내 주사 가능한 형태로 있을 수 있거나, 또는 제2 주입백의 항종양제에 튜브를 통해 연결된 주입백 내에 있을 수 있다. 이러한 시스템을 사용하여, 환자에게 처음에 화학식 (I)의 화합물의 볼러스-형태 주사 또는 주입이 이루어지고 이어서 항종양제 주입이 이루어진다.

화합물은 주어진 약리 효과를 갖기 위해 요구되는 화합물의 농도를 결정하기 위해 몇몇 생물학적 분석법 중의 하나로 시험될 수 있다.

비트로넥틴 결합 억제

α _v β ₃ 에 대한 고체상 [ ³ H]-SK & F-107260 결합:완충제 T (2 mM CaCl₂및 1% 옥틸글루코시드 함유) 중 인간 태반 또는 인간 혈소판 α_vβ₃(0.1-0.3 mg/mL)를 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCl₂(완충제 A) 및 0.05% NaN₃를 함유하는 완충제 T로 희석시키고, 이후 96-웰 ELISA 플레이트 (뉴욕주, 뉴욕, 코닝)에 웰 당 0.1 mL를 즉시 첨가하였다. α_vβ₃0.1 - 0.2 ㎍을 웰 당 첨가하였다. 플레이트를 4^oC에서 밤새 배양시켰다. 실험 중 웰을 완충제 A로 1회 세척하고 실온에서 1시간 동안 동일한 완충제 중 3.5% 소 혈청 알부민 0.1 mL로 배양시켰다. 배양후 웰의 공기를 완전히 흡입하고 0.2 mL 완충제 A로 2회 세척하였다.

화합물을 100% DMSO에 용해시켜 2 mM 스톡 용액을 얻었고, 이를 결합 완충제 (15 mM 트리스-HCl (pH 7.4), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCl₂)로 최종 화합물 농도가 100 μM이 되도록 희석하였다. 다양한 농도 (0.001 - 100 μM)의 표시되지 않은 길항제를 웰에 3개씩 첨가하고, 이어서 5.0 nM의 [³H]-SK&F-107260 (65 - 86 Ci/mmol)를 첨가하였다.

플레이트를 실온에서 1시간 동안 배양시켰다. 배양후 웰의 공기를 완전히 흡입시키고 0.2 mL의 빙냉 완충제 A로 웰-to-웰 형태로 1회 세척하였다. 수용체를 0.1 mL의 1% SDS로 용해시키고 결합된 [³H]-SK&F-107260를 40% 유효성을 갖는, 벡크만 LS 액체 섬광 계수기에서 3 mL 레디 세이프의 첨가로 계수하는 액체 섬광에 의해 결정하였다. [³H]-SK&F-107260의 비특정 결합을 2 μM SK&F-107260 존재 하에서 결정하였고 총 방사 리간드 유입량의 1% 미만으로 일정하였다. IC₅₀( [³H]-SK&F-107260 결합을 50% 억제하기 위한 길항제의 농도)는 비선형, 최소 제곱 곡선-피팅 방법에 의해 결정하였고, 이는 LUNDON-2 프로그램으로부터 변화되었다. K_i(길항제의 해리 상수)는 하기 등식에 의해 계산하였다: K_i= IC₅₀/(1 + L/K_d), 여기서 L 및 K_d는 각각 농도 및 [³H]-SK&F-107260의 해리 상수이었다.

본 발명의 화합물은 약 2.0-0.2 미코몰의 농도 범위로 SK&F 107260에 대한 비트로넥틴 결합을 억제한다.

본 발명의 화합물은 또한 EP 528 587에 개시된 피트 형성 분석과 같은, 골 형성 억제를 평가하기 위해 당업계 통상적 분석법으로 시험관내 및 생체내 골 재흡수에 대해 시험되고, 이는 또한 쥐 파골 세포 대신 인간 파골 세포, 및 문헌 [륀스키 등,Cells and Materials, 1991, Sup. 1, 69-74]에 기술된, 난소 절제된 쥐 모델를 사용하여 수행될 수 있다.

혈관 평활근 이동 분석

쥐 또는 인간 동맥 평활근 세포를 사용하였다. 세포 이동은 8 um의 공극을 갖는 폴리카보네이트 막 (코스타)을 사용하여 트랜스웰 세포 배양 쳄버에서 관찰하였다. 여과기의 하부 표면을 비트로넥틴으로 코팅하였다. 세포를 0.2% 소 혈청 알부민으로 보충된 DMEM 중에서 2.5 - 5.0 x 10⁶cells/mL의 온도로 현탁시키고, 20^oC에서 20분 동안 다양한 농도의 시험 화합물로 예비 처리하였다. 용매만을 대조용으로 사용하였다. 세포 현탁액 0.2 mL를 쳄버의 상부 구획에 넣었다. 하부 구획은 0.2% 소 혈청 알부민으로 보충된 DMEM 0.6 mL를 함유하였다. 95% 공기/5% 이산화탄소의 대기 중에서 24시간 동안 37^oC에서 배양시켰다. 배양후, 여과기의 상부 표면상의 비이동 세포를 부드럽게 긁어내어 제거하였다. 여과기를 이후 메탄올 중에 넣고 10% 지엠사 염료로 염색하였다. 이동은 a) 여과기의 하부 표면으로 이동한 세포의 수를 계수함으로써 또는 b) 10% 아세트산으로 염색된 세포를 추출하고 이어서 600 nM에서 흡수를 관찰함으로써 측정하였다.

부갑상선 제거된 쥐 모델

각각의 실험 군은 5-6 마리의 성인 수컷 스프라그-달리 쥐 (250-400 g 체중)로 구성된다. 쥐를 사용하기 7일 전에 부갑상선을 제거한다 (벤도에 의해, 타코닉 팜스). 모든 쥐에게 매3일 마다 대체 용량의 티록신을 투여하였다. 쥐를 받은 후, 꼬리 정맥 주사로 전혈을 헤파린 처리된 시험관에 채취한 후 즉시 순환하는 이온화된 칼슘 농도를 측정하였다. 이온화된 칼슘 농도 (시바-코닝 모델 634 칼슘 pH 분석기로 측정됨)가 1.2 mM/L보다 작은 쥐를 사용한다. 각각의 쥐에게 각각 시험 물질 전달 및 혈액 채취를 위해 내재하는 정맥 및 동맥 카테터를 장치시킨다. 이후 쥐에게 칼슘 없는 음식 및 증류수 식이를 적용시킨다. 바탕선 칼슘 농도를 측정하고 각각의 쥐에게 외부 주사기 펌프를 이용하여 정맥 카테터를 통한 연속적 정맥 주입에 의해, 대조용 부형제 또는 인간 부갑상선 호르몬 1-34 펩티드 (hPTH1-34, 투약량, 식염수 중 1.25 ug/kg/h/0.1% 소 혈청 알부민, 바쳄, Ca) 또는 hPTH1-34 및 시험 물질의 혼합물을 투여한다. 각 쥐의 칼슘 반응은 6-8 시간의 주입 기간 중에 2시간 간격으로 특정한다.

인간 파골 세포 재흡수 및 부착 분석

피트 재흡수 및 부착 분석법이 개발되었고 파골 세포종 조직으로부터 유래된 정상적인 인간 파골 세포를 사용하여 표준화되었다. 분석법 1은 레이저 공초점 현미경에 의한 파골 세포 피트 용량 측정을 위해 개발되었다. 분석법 2는 콜라겐 단편 (재흡수 중 방출됨)이 경쟁적 ELISA에 의해 측정되는 처리 능력비가 더 큰 스크린으로서 개발되었다.

분석법 1 (레이저 공초점 현미경 사용)

인간 파골 세포로부터 유도된 세포 현탁액의 분액을 액체 질소 저장실에서 제거하고, 재빨리 37^oC로 가온하고 원심분리 (1000 rpm, 4^oC에서 5분)에 의해 RPMI-1640 매질에서 1회 세척한다.

매질에서 공기를 흡입시키고 쥐 항-HLA-DR 항체로 대체시키고 이어서 RPMI-1640 매질에서 1:3으로 희석시킨다. 현탁액을 빙조 상에서 30분 동안 배양시키고 자주 혼합시킨다.

세포를 차가운 RPMI-1640으로 2회 세척하고 원심분리 (1000 rpm, 4^oC에서 5분)하고 이후 세포를 멸균된 15 ml 원심분리 시험관으로 이동시킨다. 단핵 세포의 수를 개선된 뉴바우어 계수 쳄버에서 센다.

염소 항-쥐 IgG (뉴욕주, 그레이트 넥, 다이날)로 코팅된, 충분한 자기 비드 (5/단핵 세포)를 이들의 스톡 병에서 제거하고 깨끗한 매질 (이는 독성 아지드 보존제를 씻어냄) 5 ml에 넣는다. 이 매질은 자석 상의 비드를 고정시킴으로써 제거하고 깨끗한 매질로 대체시킨다.

비드를 세포와 혼합시키고 그 현탁액을 빙조 상에서 30분 동안 배양시킨다.

비드 코팅된 세포를 자석 상에 고정시키고 남아 있는 세포 (파골 세포가 풍부한 분획)를 멸균된 50 ml 원심분리 시험관에 따른다.

깨끗한 매질을 트랩된 파골 세포를 떼내기 위해 비드 코팅된 세포에 첨가한다. 이 세척 과정을 10회 반복한다. 비드 코딩된 세포를 버린다.

생존하는 파골 세포를 형광 디에테이트를 사용하여 계수 쳄버에서 살아 있는 세포를 표시하기 위해 센다. 샘플을 쳄버에 첨가하기 위해 큰 내경의 1회용 플라스틱 파스퇴르 파이펫을 사용한다.

파골 세포를 원심분리하여 펠렛화하고 밀도를 10% 소 태아 혈청 및 소듐 비카보네이트 1.7 g/liter로 보충된, EMEM 매질 중에서 적합한 숫자로 조정한다 (파골 세포의 수는 종양간에 다름).

세포 현탁액 3 ml 분액 (처리 화합물 당)을 15 ml 원심분리 시험관에 따른다. 세포를 원심분리에 의해 펠렛화한다.

각각의 시험관에, 적합한 처리 화합물 3 ml를 첨가한다 (EMEM 매질 중에서 50 uM으로 희석됨). 적합한 부형제 대조군, 양성 대조군 (100 ug/ml로 희석된 항-비트로넥틴 수용체 쥐 단핵 항체 [87MEM1]) 및 이형 대조군 (100 ug/ml로 희석된 IgG_2a)이 또한 시험관에 포함된다. 샘플을 37^oC에서 30분 동안 배양시킨다.

세포의 0.5 ml 분액을 48-웰 플레이트에 멸균된 상아질 슬라이스로 접종하고 37^oC에서 2시간 동안 배양시킨다. 각각의 처리가 4중으로 이루어진다.

슬라이스를 따뜻한 PBS (6-웰 플레이트에서 10 ml/well)를 6회 변화시켜 세척하고 이후 처리 화합물 및 대조용 샘플을 함유하는 깨끗한 매질에 넣었다. 샘플을 37^oC에서 48시간 동안 배양시킨다.

타르트레이트 내성 산 포스파타제 (TRAP) 방법 (파골 세포계 세포의 선택적 염색)

부착된 파골 세포를 함유하는 골 슬라이스를 포스페이트 완충 식염수로 세척하고 5분 동안 2% 글루테르알데히드 (0.2 M 소듐 카코딜레이트 중)에 고정시킨다.

이후 이들을 물에서 세척하고 37^oC에서 4분 동안 TRAP 완충제에서 배양 시키고 (N,N-디메틸포름아미드에 용해된 0.5 mg/ml 나프톨 AS-BI 포스페이트) 10 mM 소듐 타르트레이트르 함유하는, 0.25 M 시트레이트 완충액 (pH 4.5)과 혼합한다.

차가운 물에서 세척한 후 슬라이스를 1 mg/ml 패스트 레드 가넷 (fast red garnet)을 함유하는 차가운 아세테이트 완충제 (0.1 M, pH 6.2)에 담그고 4^oC에서 4분 동안 배양시킨다.

과잉의 완충제를 흡입시키고, 슬라이스를 물에서 세척한 후 공기 건조시킨다.

TRAP 양성 파골 세포 (붉은 벽돌색/자주색 침전)를 명시야 현미 기술에 의해 세고 이후 초음파로 상아질 표면으로부터 제거한다.

피트 용량을 니콘/레이저텍 ILM21W 공초점 현미경을 사용하여 측정한다.

분석법 2 (ELISA 판독 사용)

인간 파골 세포를 강화시키고 분석법 1의 처음 9 단계에 기술된 바대로 화합물을 스크린하기 위해 제조한다. 명확도를 위해, 이들 단계를 하기에 반복한다.

인간 파골 세포로부터 유도된 세포 현탁액의 분액을 액체 질소 저장실에서 제거하고, 재빨리 37^oC로 가온하고 원심분리 (1000 rpm, 4^oC에서 5분)에 의해 RPMI-1640 매질에서 1회 세척한다.

매질에서 공기를 흡입시키고 쥐 항-HLA-DR 항체로 대체시키고 이어서RPMI-1640 매질에서 1:3으로 희석시킨다. 현탁액을 빙조 상에서 30분 동안 배양시키고 자주 혼합시킨다.

세포를 차가운 RPMI-1640으로 2회 세척하고 원심분리 (1000 rpm, 4^oC에서 5분)하고 이후 세포를 멸균된 15 ml 원심분리 시험관으로 이동시킨다. 단핵 세포의 수를 개선된 뉴바우어 계수 쳄버에서 센다.

염소 항-쥐 IgG (뉴욕주, 그레이트 넥, 다이날)로 코팅된, 충분한 자기 비드 (5/단핵 세포)를 이들의 스톡 병에서 제거하고 깨끗한 매질 (이는 독성 아지드 보존제를 씻어냄) 5 ml에 넣는다. 이 매질은 자석 상의 비드를 고정시킴으로써 제거하고 깨끗한 매질로 대체시킨다.

비드를 세포와 혼합시키고 그 현탁액을 빙조 상에서 30분 동안 배양시킨다.

비드 코팅된 세포를 자석 상에 고정시키고 남아 있는 세포 (파골 세포가 풍부한 분획)를 멸균된 50 ml 원심분리 시험관에 따른다.

깨끗한 매질을 트랩된 파골 세포를 떼내기 위해 비드 코팅된 세포에 첨가한다. 이 세척 과정을 10회 반복한다. 비드 코딩된 세포를 버린다.

생존하는 파골 세포를 형광 디에테이트를 사용하여 계수 쳄버에서 살아 있는 세포를 표시하기 위해 센다. 샘플을 쳄버에 첨가하기 위해 큰 내경의 1회용 플라스틱 파스퇴르 파이펫을 사용한다.

파골 세포를 원심분리하여 펠렛화하고 밀도를 10% 소 태아 혈청 및 소듐비카보네이트 1.7 g/liter로 보충된, EMEM 매질 중에서 적합한 숫자로 조정한다 (파골 세포의 수는 종양간에 다름).

분석법 1에서 상기 기술된 방법과 대조적으로, IC₅₀를 얻기 위하여 하기 요약된 바대로, 화합물을 4개 투약량에서 스크린한다:

파골 세포 제제를 시험 화합물 (4개 투약량) 또는 대조군과 함께 37^oC에서 30분 동안 예비 배양시킨다.

이들은 이후 48-웰 조직 배양 플레이트의 웰에 소 표층 골 슬라이스에 접종하고 37^oC에서 2시간 더 배양한다.

골 슬라이스를 비부착성 세포를 제거하기 위해, 따뜻한 포스페이트 완충 식염수 (PBS)를 6회 변화시켜 세척하고, 이후 깨끗한 화합물 또는 대조군을 함유하는 48 웰 플레이트의 웰로 되돌아간다.

조직 배양 플레이트를 이후 37^oC에서 48시간 동안 배양시킨다.

각 웰의 상징액을 개별적 시험관에 흡입시키고 재흡수 과정 중에 방출되는 타입 I 콜라겐의 c-텔로펩티드를 검출하는 경쟁적 ELISA에서 스크린한다. 이는 타입 I 콜라겐의 a1-사슬의 카르복시-말단 텔로펩티드에 존재하는 8-아미노산 서열 (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Bly-Gly-Arg)과 특정하게 반응하는 토끼 항체를 함유하는 상업적으로 이용 가능한 ELISA (덴마크, 오스테오미터)이다. 결과는 부형제 대조군과 비교된 재흡수 억제%로서 표현한다.

인간 파골 세포 부착 분석

인간 파골 세포를 강화시키고 분석법 1의 처음 9 단계에 기술된 바대로 화합물을 스크린하기 위해 제조한다. 명확도를 위해, 이들 단계를 하기에 반복한다.

인간 파골 세포로부터 유도된 세포 현탁액의 분액을 액체 질소 저장실에서 제거하고, 재빨리 37^oC로 가온하고 원심분리 (1000 rpm, 4^oC에서 5분)에 의해 RPMI-1640 매질에서 1회 세척한다.

매질에서 공기를 흡입시키고 쥐 항-HLA-DR 항체로 대체시키고 이어서 RPMI-1640 매질에서 1:3으로 희석시킨다. 현탁액을 빙조 상에서 30분 동안 배양시키고 자주 혼합시킨다.

세포를 차가운 RPMI-1640으로 2회 세척하고 원심분리 (1000 rpm, 4^oC에서 5분)하고 이후 세포를 멸균된 15 ml 원심분리 시험관으로 이동시킨다. 단핵 세포의 수를 개선된 뉴바우어 계수 쳄버에서 센다.

염소 항-쥐 IgG (뉴욕주, 그레이트 넥, 다이날)로 코팅된, 충분한 자기 비드 (5/단핵 세포)를 이들의 스톡 병에서 제거하고 깨끗한 매질 (이는 독성 아지드 보존제를 씻어냄) 5 ml에 넣는다. 이 매질은 자석 상의 비드를 고정시킴으로써 제거하고 깨끗한 매질로 대체시킨다.

비드를 세포와 혼합시키고 그 현탁액을 빙조 상에서 30분 동안 배양시킨다.

비드 코팅된 세포를 자석 상에 고정시키고 남아 있는 세포 (파골 세포가 풍부한 분획)를 멸균된 50 ml 원심분리 시험관에 따른다.

깨끗한 매질을 트랩된 파골 세포를 떼내기 위해 비드 코팅된 세포에 첨가한다. 이 세척 과정을 10회 반복한다. 비드 코딩된 세포를 버린다.

생존하는 파골 세포를 형광 디에테이트를 사용하여 계수 쳄버에서 살아 있는 세포를 표시하기 위해 센다. 샘플을 쳄버에 첨가하기 위해 큰 내경의 1회용 플라스틱 파스퇴르 파이펫을 사용한다.

파골 세포를 원심분리하여 펠렛화하고 밀도를 10% 소 태아 혈청 및 소듐 비카보네이트 1.7 g/liter로 보충된, EMEM 매질 중에서 적합한 숫자로 조정한다 (파골 세포의 수는 종양간에 다름).

파골 세포종-유도 파골 세포를 37^oC에서 30분 동안 화합물 (4개 투약량) 또는 대조군과 예비 배양시킨다.

세포를 이후 오스테오폰틴-코팅 슬라이드 (인간 또는 쥐 오스테오폰틴, 2.5 ug/ml)에 접종시키고 37^oC에서 2시간 동안 배양시킨다.

비부착성 세포를 포스페이트 완충 식염수에서 격력하게 슬라이드를 세척함으로써 제거하고 슬라이드상에 남아 있는 세포를 아세톤에 고정시킨다.

파골 세포는 타르트레이트 내성 산 포스파타제 (TRAP), 이 표현형 세포를 위한 선택적 마커 (단계 15-17 참조)에 대해 염색하고, 광현미 기술에 의해 계수한다. 결과는 부형제 대조군과 비교되는 부착 억제%로서 표현된다.

세포 부착 분석

세포 및 세포 배양

인간 배아 신장 세포 (HEK293 세포)는 ATCC (카탈로그 번호 CRL 1573)로부터 얻었다. 세포를 얼스염 (Earl's salts), 10% 태아 소 혈청, 1% 글루타민 및 1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유하는 얼스 최소 필수 매질 (EMEM, Earl's minimal essential medium)에서 배양시켰다.

컨스트럭트 및 트랜스팩션 (Constructs and Transfections)

α_v서브유닛의 3.2 kb EcoRI-LpnI 단편 및 β₃서브유닛의 2.4 kb XbaI-XhoI 단편을 둔단 결합에 의해 CMV 프로모터 및 G418 선택 가능한 마커를 함유하는 pCDN 벡터 (아이야 등, 1994)의 EcoRI - EcoRI 클로닝 부위에 삽입시켰다. 안정한 발현을 위해, 80 x 10⁶HEK 293 세포를 유전자 플러서 (헨슬리 등, 1994)를 사용하여 α_v+ β₃컨스트럭트 (각 서브유닛의 20 ㎍ DNA)로 전기 변형시키고 100 mm 플레이트 (5 x 10⁵cells/plate)로 플레이트화하였다. 48시간 후, 성쟁 배지를 450 ㎍ /mL 제네티신 (G418 설페이트, GIBCO-BRL, 메릴랜드주, 베테스다)로 보충시켰다. 세포를 콜로니가 분석하기에 충분히 클 때까지 선택 배지에 유지시켰다.

트랜스팩션된 세포의 면역세포화학적 분석

HEK 293 트랜스펙탄트가 비트로넥틴 수용체를 발현시켰는지를 결정하기 위해, 세포를 원심분리에 의해 유리 현미경 슬라이드상에 고정시키고, 실온에서 2분동안 아세톤에 고정시키고 공기 건조시켰다. 23C6, α_vβ₃복합체에 대해 특정한 단핵 항체와의 특정한 반응성은 통상적인 간적 면역형광법을 사용하여 검토하였다.

세포 부착 연구

코닝 96-웰 ELISA 플레이트를 4^oC에서 0.1 mL 인간 비트로넥틴 (RPMI 매지 중 0.2 ㎍ /mL)으로 밤새 예비 코팅하였다. 실험 중, 플레이트를 RPMI 매질로 1회 세척하고 실온에서 1시간 동안 RPMI 매질 중 3.5% BSA로 차단시켰다. 트랜스팩션된 세포를 RPMI 매질 중에서 재현탁시키고, 0.5 x 10⁶cells/mL 밀도로 20 mM Hepes (pH 7.4) 및 0.1% BSA로 보충시켰다. 세포 현탁액 0.1 mL를 각 웰에 첨가하고 다양한 α_vβ₃길항제의 존재 또는 부재 하에서, 37^oC에서 1시간 동안 배양시켰다. 배양 후, 10% 포름알데히드 용액 0.025 mL (pH 7.4)를 첨가하고 세포를 실온에서 10분 동안 방치시켰다. 플레이트를 0.2 mL RPMI 용액으로 3회 세척하고 부착성 세포를 실온에서 20분 동안 0.5% 톨루이딘 블루 0.1 mL로 염색하였다.

과잉의 염료를 탈이온수로 강력하게 세척함으로써 제거하였다. 세포로 혼입된 톨루이딘 블루를 50 mM HCl을 함유하는 50% 에탄올 0.1 mL를 첨가하여 용출시켰다. 세포 부착은 마이크로타이터 플레이트 판독기 (버지니아주, 스털링, 타이터텍 멀티스칸 MC)상에서 600 nm 광학 밀도에서 정량화시켰다.

고체상 α _v β ₅ 결합 분석

비트로넥틴 수용체 α_vβ₅는 인간 태반으로부터 정제되었다. 수용체 제제를완충제 A (50 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCl₂)로 희석시키고 96-웰 ELISA 플레이트에 웰단 0.1 ml로 즉시 첨가하였다. α_vβ₃0.1-0.2 ㎍을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 4^oC에서 밤새 배양시켰다. 실험 중에, 웰을 완충제 A로 1회 세척하고 실온에서 1시간 동안 동일한 완충제 중의 3.5% 소 혈청 알부민 0.1 ml로 배양시켰다. 배양후 웰을 완전히 흡입시키고 0.2 ml 완충제 A로 2회 세척하였다.

[³H]-SK&F-107260 경쟁 분석에서, 다양한 농도의 표시되지 않은 길항제 (0.001-100 μM)를 웰에 첨가하고, 5.0 nM의 [³H]-SK&F-107260를 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 배양시켰다. 배양후, 웰을 완전히 흡입시키고 웰-to-웰 형태로 빙냉 완충제 A 0.2 ml로 1회 세척하였다. 수용체를 0.1 mL의 1% SDS로 용해시키고 결합된 [³H]-SK&F-107260를 40% 유효성을 갖는, 벡크만 LS 6800 액체 섬광 계수기에서 3 mL 레디 세이프의 첨가로 계수하는 액체 섬광법에 의해 결정하였다. [³H]-SK&F-107260의 비특정 결합을 2 μM SK&F-107260 존재 하에서 결정하였고 총 방사 리간드 유입량의 1% 미만으로 일정하였다. IC₅₀( [³H]-SK&F-107260 결합을 50% 억제하기 위한 길항제의 농도)는 비선형, 최소 제곱 곡선-피팅 방법에 의해 결정하였고, 이는 LUNDON-2 프로그램으로부터 변화되었다. K_i(길항제의 해리 상수)는 하기 등식에 의해 계산하였다: K_i= IC₅₀/(1 + L/K_d), 여기서 L 및 K_d는 각각 농도 및 [³H]-SK&F-107260의 해리 상수이었다.

RGD-매개 GPIIb-IIIa 결합 억제

GPIIb-IIIa의 정제

오래되고, 세척된 인간 혈소판의 10개 단위 (적십자에서 얻음)를 4^oC에서 2시간 동안 3% 옥틸그루코시드, 20 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 140 mM NaCl, 2 mM CaCl₂에서 부드럽게 교반함으로써 용해시켰다. 용해물을 100,000 g으로 1시간 동안 원심분리시켰다. 얻어진 상징액을 완충액 A (20 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl₂, 1% 옥틸글루코시드)로 예비 평형을 이룬 5 ml 렌틸 렉틴 세파로스 4B 컬럼 (E.Y. Labs)에 적용시켰다. 2시간 배양후, 칼럼을 차가운 완충제 A 50 mL로 세척하였다. 렉틴 보유 GPIIb-IIIa를 10% 덱스트로스를 함유하는 완충제 A로 용출시켰다. 모든 과정을 4^oC에서 수행하였다. 얻어진 GPIIb-IIIa는 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의해 나타난 바대로 95%보다 컸다.

리포좀에서의 GPIIb-IIIa의 혼입

포스파티딜세린 (70%) 및 포스파티딜콜린 (30%)의 혼합물 (아반티 극성 지방)을 질소 증기 하 유리 시험관의 벽에 건조시켰다. 정제된 GPIIb-IIIa를 최종 농도가 0.5 mg/mL가 되도록 희석하고 단백질 대 인지질의 비율이 1:3 (w:w)이 되도록 인지질과 혼합시켰다. 혼합물을 재현탁시키고 배스 초음파기에거 5분 동안 촘음파 분해시켰다. 혼합물을 이후 1000배 초과하는 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl₂(2회 변화시켜)에 대해 튜브로 연결된 12,000-14,000 분자량 절단 투석법을 사용하여 밤새 투석시켰다. 리포좀을 함유하는 GPIIb-IIIa를 12,000 g에서 15분 동안 윈심분리시키고 투석 완충제로 최종 단백질 농도가 대략 1 mg/mL가 되도록 재현탁시켰다. 리포좀을 필요로될 때까지 -70^oC에 저장하였다.

GPIIb-IIIa에의 경쟁적 결합

피브리노겐 수용체에의 결합을 RGD-타입 리간드로서 [³H]-SK&F-107260를 사용하여 간접 경쟁적 결합 방법에 의해 분석하였다. 결합 분석을 0.22 um 친핵성 이중 공극 막을 사용하여 96-웰 여과 플레이트 어셈블리 (매사추세츠, 베드포드, 밀리포어 코포레이션)에서 수행하였다. 웰을 비특정 결합을 차단하기 위해 실온에서 1시간 동안 10 ㎍/mL 폴리리신 (미주리주, 세인트 루이스, 시그마 케메컬 코포레이션) 0.2 mL로 예비 코팅시켰다. 다양한 농도의 표시되지 않은 벤즈아제핀을 4중으로 웰에 첨가하였다. [³H]-SK&F-107260를 최종 농도가 4.5 nM이 되도록 각 웰에 적용시키고, 정제된 혈소판 GPIIb-IIIa 함유 리포좀 1㎍을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 배양시켰다. GPIIb-IIIa 결합 [³H]-SK&F-107260을 밀리포어 여과 매니폴드를 사용하여 여과에 의해 결합되지 않은 것들로부터 제거하고, 빙냉 완충제로 세척 (2회, 각 0.2 mL)하였다. 여과기상에 남아 있는 결합 방사능을 40% 유효성을 갖는, 벡크만 액체 섬광 계수기 (모델 LS 6800)에서 1.5 mL 레디 솔브 (캘리포니아주, 플러튼, 벡크만 인스트루먼츠)에서 계수하였다. 비특정 결합을 2 μM 의 표시되지 않은 SK&K-107260의 존재 하에서 결정하고 이는 일관성 있게 샘플에 첨가된 총 방사능 0.14% 미만이었다. 모든 데이타는 4개 측정치의 평균이다.

경쟁 결합 데이타를 비선형 최소 제곱 곡선 피팅 방법에 의해 분석하였다. 이 방법은 길항제의 IC₅₀(평형 상태에서 [³H]-SK&F-107260의 특정 결합을 50%까지 억제하는 길항제의 농도)를 제공한다. IC₅₀은 쳉 앤 프러스오프 등식에 바탕을 둔 길항제의 평형 해리 상수 (K_i)에 관련된다: K_i= IC₅₀/(1 + L/K_d), 여기서 L은 경쟁적 결합 분석에 사용된 [H]-SK&F-107260의 농도 (4.5 nM)이고, K_d는 스캐차드 분석법에 의해 결정된 4.5 nM인 [³H]-SK&F-107260의 해리 상수이다.

본 발명의 바람직한 화합물은 10:1보다 더 큰 피브리노겐 수용체에 대한 비트로넥틴 수용체의 친화도를 갖는다. 가장 바람직한 화합물은 100:1보다 더 큰 활성비를 갖는다.

화학식 (I)의 화합물 단독 또는 항종양제와의 조합의 효능은 몇가지 이식 가능한 쥐 종양 모델을 사용하여 결정될 수 있다. 이들 모델에 대해 미국 특허 제5,004,758호 및 제5,633,016호를 참조.

하기 실시예는 본 발명의 제한하려는 것이 아니고 본 발명의 화합물을 제조하고 사용하는 방버을 설명하기 위해 제공된다. 많은 다른 실시 양태가 당업자에게 용이하게 명백할 것이다.

일반적 방법

수소 핵 자기 공명 (¹H NMR) 스페트럼은 300 MHz로 측정하였고 화학적 이동은 내부 표준 물질인 트리메틸 실란 (TMS0로부터 다운필드로 ppm (δ)으로 보고한다. NMR 데이타의 약어는 하기와 같다: s = 싱글렛, d = 더블렛, t = 트리플렛, q = 쿼르텟, m = 멀티플렛, dd = 더블렛 오브 더블렛, dt = 더블렛 오브 트리플렛, app = 명백함, br-브로드. J는 헤르츠로 측정된 NMR 커플링 상수를 나타낸다. CDCl₃는 이중수소 클로로폼, DMSO-d₆는 헥사이중수소디메틸설폭시드이고, CD₃OD는 테트라이중수소메탄올이다. 질량 스펙트럼은 엑렉트로스프레이 (ES) 이온화 기술을 사용하여 얻었다. 원소 분석을 퀀티터티브 테크놀로지 인코포레이티드 (뉴저지주, 하이트하우스)에 의해 수행하였다. 융점은 토마스-후버 융점 기구로 측정하고 보정되지 않는다. 모든 온도는 섭씨 온도로 보고한다. 아날테크 실리카겔 GF 및 이. 머크 실리카겔 60 F-254 박막 플레이트를 박막 크로마토그래피로 사용하였다. 플래쉬 크로마토그래피를 이. 머크 키에셀겔 60 (230-400 메쉬)상에서 수행하였다. 분석 및 제조용 HPLC를 벡크만 크로마토그래프상에서 수행하였다. ODS는 옥타데실실릴-유도체 실리카겔 크로마토그래프 지지대를 의미한다. YMC ODS-AQ는 ODS 크로마토그래프 지지대이고 이는 YMC 코포레이션 LTd. (일본, 교토)의 등록 상표이다. PRP-1은 중합체 (스티렌-디비닐벤젠) 크로마토그래프 지지대이고, 이는 해밀톤 코포레이션 (네바다주, 르노)의 등록 상표이다. C-18 메가 본드 엘루트는옥타데실 결합 실리카 소르번트를 함유하는 고체상 추출 칼럼이고, 바리안 어쏘이시에이츠 (캘리포니아주, 서니베일)의 등록 상표이다. 셀라이트는 산 세척된 규조질 실리카로 구성된 여과 보조 화합물이고, 매니빌 코포레이션 (콜로라도주, 덴버)의 등록 상표이다.

제조예 1

2-[(2-아미노-1-에틸)아미노]피리딘 이염산의 제조

a) 2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]-1-옥소피리딘

N-Boc-에틸렌디아민 (5.83 g, 36.39 mmol) 및 2-클로로피리딘-N-옥사이드 염산 (7.25 g, 43.67 mmol), NaHCO3 (15.29 g, 182 mmol), 및 tert-아밀 알콜 (36 mL)의 혼합물을 환류 가열하였다. 47시간 후, 암갈색 혼합물을 냉각시키고, CH₂Cl₂(100 mL)로 희석시키고, 흡입 여과하였다. 여액을 농축하고 잔사를 톨우엔으로부터 재농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피 (10% MeOH/CH₂Cl₂)하여 표제 화합물 (8.23 g, 89%)을 황색 고체로서 얻었다:¹H NMR (250 MHz, CDCl₃) δ8.16 (dd, J = 6.5, 1.3 Hz, 1H), 7.05-7.30 (m, 2H), 6.68 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.50-6.65 (m, 1H), 5.70-5.95 (m, 1h), 3.25-3.60 (m, 4H), 1.44 (s, 9H); MS (ES) m/e 254 (M + H)⁺.

b) 2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]피리딘

2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]-1-옥소피리딘 (7.00 g,27.64 mmol), 10% pd/C (5.88 g, 5.53 mmol), 시클로헥센 (28 mL, 276.4 mmol), 및 이소프로판올 (110 mL)의 혼합물을 환류 가열하였다. 17시간 후, 반응액을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축하였다. 황색 잔사를 톨루엔으로부터 재농축하겨, 이후 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다 (5% MeOH/CHCl₃). 표제 화합물 (5.09 g, 78%)을 황색 오일로서 얻었다:¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ8.05-8.12 (m, 1H), 7.37-7.46 (m, 1H), 6.53-6.61 (m, 1H), 6.41 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.12 (br s, 1H), 4.86 (br s, 1H), 3.26-3.51 (m, 4H), 1.44 (s, 9H); MS (ES) m/e 238 (M + H)⁺.

c) 2-[(2-아미노-1-에틸)아미노]피리딘 이염산

4 N HCl/디옥산 (54 mL)을 아르곤 기류하 0^oC에서 무수 CH₂Cl₂(54 mL) 중 2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]피리딘 (5.09 g, 21.45 mmol) 용액에 증기로 첨가하고, 이후 이 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후, 혼합물을 0^oC로 냉각시키고 흡입 여과하였다. 고체를 무수 에테르로 강력하게 세척하고 40^oC에서 고 진공 건조하여 표제 화합물 (4.27 g, 95%)을 백색, 다소 흡습성 고체로서 얻었다:¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ7.99-8.07 (m, 1H), 7.92-7.98 (m, 1H), 7.19 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.98-7.04 (m, 1H), 3.76 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.27(t, J = 6.2 Hz, 2H, 잔여 용매 시그널에 의해 부분적으로 모호함); MS (ES) m/e 138 (M + H)⁺.

제조예 2

2-[(3-아미노-1-프로필)아미노]피리딘 이염산

a) 2-[[[3-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-프로필]아미노]-1-옥소피리딘

N-Boc-에틸렌디아민을 N-Boc-프로필렌디아민 (3.33 g, 20 mmol)으로 대체하는 것을 제외하고, 제조예 1 (a)의 방법에 따라, 표제 화합물 (4.90 g, 92%)를 제조하였다: MS (ES) m/e 268 (M + H)⁺.

b) 2-[[[3-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-프로필]아미노]피리딘

2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]-1-옥소피리딘을 2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-프로필]아미노]-1-옥소피리딘 (4.90 g, 18.3 mmol)으로 대체하는 것을 제외하고 제조예 1 (b)의 방법에 따라, 표제 화합물 (3.46 g, 75%)를 제조하였다: MS (ES) m/e 252 (M + H)⁺.

c) 2-[(3-아미노-1-프로필)아미노]피리딘 이염산

2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]피리딘을 2-[[3-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-프로필]아미노]피리딘 (3.46 g, 13.8 mmol)으로 대체하는 것을 제외하고, 제조예 1 (c)의 방법에 따라, 표제 화합물 (2.88 g, 93%)을 제조하였다: MS (ES) m/e 152 (M + H)⁺.

제조예 3

2-[(4-아미노-1-부틸)아미노]피리딘의 제조

a) 2-[[4-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-부틸]아미노-1-옥소피리딘

N-Boc-에틸렌디아민을 N-Boc-부틸렌디아민 (0.57 mL, 2.98 mmol)로 대체하는 것을 제외하고, 제조예 1 (a)의 방법에 따라, 표제 화합물 (0.42 g, 50%)을 제조하였다: MS (ES) m/e 282 (M + H)⁺.

b) 2-[[4-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-부틸]아미노]피리딘

2-[[2-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-에틸]아미노]-1-옥소피리딘을 2-[[4-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-부틸]아미노]-1-옥소피리딘 (0.88 g, 3.13 mmol)으로 대체하는 것을 제외하고 제조예 1 (b)의 방법에 따라, 조 표제 화합물을 제조하였다. 이 물질을 정제 없이 사용하였다.

c) 2-[(4-아미노-1-부틸)아미노]피리딘

조 2-[[4-(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-부틸]아미노]피리딘 (3.13 mmol)을 CH₂Cl₂(10 mL)에서 TFA (10 mL)로 처리하였다. 2시간 후, 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 잔사를 1.0 N NaOH (20 mL)로 취하고 CHCl₃(4 x 50 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출믈을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (122 mg, 24%)을 황섹 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 166 (M + H)⁺.

제조예 4

4-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-(피리딘-2-일)아미노]부타날의 제조

a) 2-[(3-히드록시-1-부틸)아미노]피리딘-N-옥사이드

4-아미노-1-부타날 (2.0 mL, 21.7 mmol), 2-클로로피리딘-N-옥사이드 염산 (3.00 g, 18.0 mmol), NaHCO₃(7.56 g, 90.0 mmol), 및 tert-아밀 알콜 (22 mL)의 혼합물을 환류 가열하였다. 24시간 후, 혼합물을 냉각시키고 여과하고, 이후 여액을 감압하에서 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피 (10% MeOH/CHCl₃)하여 표제 화합물 (2.08 g, 635)을 황색 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 183 (M + H)⁺.

b) 2-[N-(3-히드록시-1-부틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥사이드

tert-부탄올 (5 mL) 중 2-[(3-히드록시-1-부틸)아미노]피리딘-N-옥사이드 (895 mg, 4.91 mmol) 현탁액에 디-tert-부틸 디마르보네이트 (1.18 g, 5.40 mmol)을 첨가하였다. 30시간 후, 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 상에서 크로마토그래피 (10% MeOH/CHCl₃)하여 표제 화합물 (1.34 g, 97%)을 황색 고체로서 얻었다: MS (ES) m/e 283 (M + H)⁺.

c) 4-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-(피리딘-2-일)아미노]부타날

-78^oC에서 CH₂Cl₂(5 mL) 중 DMSO (0.31 mL, 3.54 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.13 mL, 1.77 mmol)를 적가하였다. 10분 후, CH₂Cl₂(5 mL) 중 2-[N-(3-히드록시-1-부틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥사이드 (500 mg,1.77 mmol) 용액을 적가하였다. 30분 후, Et₃N (0.81 mL, 5.84 mmol)을 가하고, 혼합물을 실온으로 점차 가온하였다. 20분 후, 혼합물을 CH₂Cl₂(20 mL)로 희석하고 각 10 mL의 물, 10% HCl, 물, 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축하여 표제 화합물 (455 mg, 92%)를 무색 오일로서 얻었다. 이것을 정제 없이 사용하였다: MS (ES) m/e 281 (M + H)⁺.

제조예 5

에틸 (±)-4-(4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일)-3페닐부타노에이트의 제조

a) (±)-N-(4-에톡시카르보닐-3-페닐부타노일)세린 메틸 에스테르

무수 DMF (20 mL) 중 에틸 (±)-4-카르복시-3-페닐부타노에이트 (1.00 g, 4.23 mmol) 용액에 HOBt (686 mg, 5.08 mmol), Et₃N, (1.77 mL, 12.69 mmol), 및 EDC (974 mg, 5.08 mmol)을 첨가하였다. 30분 후, L-세린 메틸 에스테르 염산 (790 mg, 5.08 mmol)을 첨가하였다. 48시간 후, 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 잔사를 CH₂Cl₂(50 mL)에 녹이고 각 20 mL의 물, 포화 NaHCO₃, 및 물로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 상에서 크로마토그래피 (에틸아세테이트)하여 표제 화합물 (961 mg, 67%)을 황색 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 338 (M + H)⁺

b) 에틸 (±)-4-(4-메톡시카르보닐-1,3-옥사졸린-2-일)-3-페닐부타노에이트

무수 THF (10 mL) 중 (±)-N-(4-에톡시카르보닐-3-페닐부타노일) 세린 메틸 에스테르 (723 mg 2.14 mmol) 및 버게스 시약 (613 mg, 2.57 mmol)의 용액을 질소 기류 하에서 환류 가열하였다. 2시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (50% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (420 mg, 61%)을 무색 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 320 (M + H)⁺.

c) 에틸 (±)-4-(4-메톡시카르보닐-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트

탈기 (3배 진공/N₂)된 CH₂Cl₂(6 mL) 중 CuBr₂(1.17 g, 5.26 mmol)의 현탁액에 헥사메틸렌테트라민 (737 mg, 5.26 mmol) 및 DBU (0.78 mL, 5.26 mmol)을 첨가하였다. 5분 후, CH₂Cl₂(2 mL) 중 에틸 (±-4-(4-메톡시카르보닐-1,3-옥사졸린-2-일)-3-페닐부타노에이트 (420 mg, 1.32 mmol)을 적가하였다. 6시간 후, 혼합물을 실리카겔 패드를 통해 여과시키고 (EtOAc) 그 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (50% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (267 mg, 64%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (ES) m/e 318 (M + H)⁺.

d) 에틸 (±)-4-(4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트

피리딘 (5 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-메톡시카르보닐-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트 (267 mg, 0.84 mmol) 및 LiI (338 mg, 2.52 mmol)의 용액을 환류 가열하였다. 18시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 10% HCl (150 mL)에 붓고, 이러서 CH₂Cl₂(3 x 50 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출물을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물 (205 mg, 80%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (ES) m/e 304 (M + H)⁺.

제조예 6

[2-(3-에톡시카르보닐-2-페닐프로필)-1,3-옥사졸-4-일]메틸트리페닐포수포늄 브로마이드의 제조

a) 에틸 (±)-4-(4-히드록시메틸-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트

무수 THF (8 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트 (500 mg, 1.65 mmol) 용액에 4-메틸몰폴린 (0.22 mL, 1.99 mmol) 및 에틸 클로로포르메이트 (0.19 mL, 1.99 mmol)을 0^oC에서 첨가하였다. 10분 후, NaBH₄(249 mg, 6.59 mmol)를 한 번에 첨가하고, 이후 메탄올 (8 mL)을 적가하였다. 30분 후, 혼합물을 물 (20 mL)로 쿠엔칭하고 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (80% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (371 mg, 78%)을 황색 오일로서 얻었다: Ms (ES) m/e 290 (M + H)⁺.

b) 에틸 (±)-4-(4-브로보메틸-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트

무수 THF (20 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-히드록시메틸-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트 (1.3 g, 4.49 mmol) 용액에 PPh₃(1.41 g, 5.39 mmol) 및 CBr₄를 0^oC에서 첨가하였다. 20분 후, 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후, 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (20% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (1.38 g, 87%)을 무색 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 352 (M + H)⁺.

c) [2-(3-에톡시카르보닐-2-페닐프로필)-1,3-옥사졸-4-일]메틸트리포스포늄 브로마이드

무수 CH₃CN (10 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-브로모에틸-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐브타노에이트 (1.0 g, 2.84 mmol) 및 PPh₃(745 mg, 2.84 mmol) 용액을 질소 기류 하에서 가열하였다. 3시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 Et₂O (10 mL)로 처리하여 표제 화합물 (1.66 g, 95%)를 백색 분말로서 얻었다: MS (ES) m/e 535 (M + H)⁺.

실시예 1

(±)-3-페닐-4-[4-[[[3-(피리딘-2-일)아미노-1-프로필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산의 제조

a) 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[[[3-(피리딘-2-일)아미노-1-프로필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트

CH₂Cl₂(2 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일)-3-페닐부타노에이트 (100 mg, 0.33 mmol) 용액에 1,1-카르보닐디이미다졸 (80 mg, 0.49 mmol)을첨가하였다. 2시간 후, Et₃N (0.14 mL, 0.98 mmol) 및 2-[(3-아미노-1-프로필)아미노]피리딘 이염산 (110 mg, 0.49 mmol)을 첨가하였다. 4시간 후, 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (75% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (131 mg, 91%)을 황색 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 437 (M + H)⁺.

b) (±)-3-페닐-4-[4-[[[3-(피리딘-2-일)아미노-1-프로필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산

THF/H₂O) (1:1, 10 mL) 중 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[[[3-(피리딘-2-일)아미노-1-프로필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트 (131 mg, 0.30 mmol) 용액에 1 N LiOH (0.36 mL, 0.36 mmol)을 첨가하였다. 18시간 후, 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 물 (20 mL)에 녹이고 10% HCl을 사용하여 pH 6로 산성화시켰다. 생성되는 뿌연 용액을 CH₂Cl₂(3 x 75 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 Et₂O로 처리하고 여과하여 모아서 표제 화합물 (63 mg, 51%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (ES) m/e 409 (M + H)⁺. 원소 분석: 계산치: C₂₂H₂₄N₄O₄0.75H₂O, 1.5HCl: C, 55.44; H, 5.71; N, 11.75. 실측치: C, 55.49; H, 5.54; N, 11.63.

실시예 2

(±)-3-페닐-4-[4-[[[2-(피리딘-2-일)아미노-1-에틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산의 제조

a) 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[[[2-(피리딘-2-일)아미노-1-에틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트

2-[(3-아미노-1-프로필)아미노]피리딘 이염산을 2-[(2-아미노-1-에틸)아미노]피리딘 이염산 (129 mg, 0.74 mmol)로 대체하는 것을 제외하고, 실시예 1 (a)의 방법에 따라, 표제 화합물 (157 mg, 76%)을 제조하였다: MS (ES) m/e 423 (M + H)⁺.

b) (±)-3-페닐-4-[4-[[[2-(피리딘-2-일)아미노-1-에틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산

THF/H₂O) (1:1, 4 mL) 중 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[[[2-(피리딘-2-일)아미노-1-에틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트 (157 mg, 0.37 mmol) 용액에 1 N LiOH (0.56 mL, 0.56 mmol)을 첨가하였다. 24시간 후, 혼합물을 Et₂O (2 x 2 mL)로 세척하고, 수성 층의 pH를 10% HCl을 사용하여 pH 6로 산성화시켰다. 용액을 C-18메가 본드 엘루트±칼럼 (H2O 50 mL 이후 10% CH₃CN/H₂O) 50 mL)하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 동결 건조하여 표제 화합물 (48 mg, 33%)을 백색 분말로서 얻었다: MS (ES) m/e 395 (M + H)⁺. 원소 분석: 계산치: C₂₁H₂₂N₄O₄0.75H₂O, 1.5HCl: C, 59.80; H, 5.44; N, 13.28. 실측치: C, 59.89; H, 5.50; N, 12.98.

실시예 3

(±)-3-페닐-4-[4-[[[4-(피리딘-2-일)아미노-1-부틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산의 제조

a) 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[[[4-(피리딘-2-일)아미노-1-부틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트

2-[(3-아미노-1-프로필)아미노]피리딘 이염산을 2-[(4-아미노-1-부틸)아미노]피리딘 (122 mg, 0.74 mmol)로 대체하는 것을 제외하고, 실시예 1 (a)의 방법에 따라, 표제 화합물 (197 mg, 89%)을 제조하였다: MS (ES) m/e 451 (M + H)⁺.

b) (±)3-페닐-4-[4-[[[4-(피리딘-2-일)아미노-1-부틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산

THF/H₂O) (1:1, 4 mL) 중 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[[[4-(피리딘-2-일)아미노-1-부틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트 (197 mg, 0.44 mmol) 용액에 1 N LiOH (0.66 mL, 0.66 mmol)을 첨가하였다. 24시간 후, 혼합물을 Et₂O (2 x 2 mL)로 세척하고, 수성 층의 pH를 10% HCl을 사용하여 pH 6로 산성화시켰다. 용액을 C-18메가 본드 엘루트±칼럼 (H₂O 50 mL 이후 20% CH₃CN/H₂O) 50 mL)하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 동결 건조하여 표제 화합물 (154 mg, 83%)을 백색 분말로서 얻었다: MS (ES) m/e 423 (M + H)⁺. 원소 분석: 계산치: C₂₃H₂₆N₄O₄0.75H₂O: C, 63.36; H, 6.36; N, 12.85. 실측치: C, 63.55; H, 6.27; N, 12.50.

실시예 4

(±)-3-페닐-4-[4-[5-(피리딘-2-일)아미노-1-페닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산의 제조

a) 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-(5-[N-(1-옥소피리딘-2-일)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]-1-펜틸)-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트

무수 DMF (5 mL) 중 4-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-(피리딘-2-일)아미노]부타날 (140 mg, 0.5 mmol) 용액에 [2-(3-에톡시카르보닐-2-페닐프로필)-1,3-옥사졸-4-일]메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 (369 mg, 0.6 mmol) 및 KHMDS (1.2 mL, 0.6 mmol)을 0^oC에서 적가하였다. 3.5시간 후, 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 CH₂Cl₂(3 x 20 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출물을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (1:1 EtOAc/CHCl₃중 3% MeOH)하여 표제 화합물 (167 mg, 62%, E/Z 이성질체 혼합물)을 황색 오일로서 얻었다: MS (ES) m/e 536 (M + H)⁺.

b) 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[5-(피리딘-2-일)아미노-1-페닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트

에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[5-[N-(1-옥소피리딘-2-일)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]-1-펜틸]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트 (167 mg, 0.31 mmol)을 디옥산 (3 mL) 중 4 N HCl에 녹였다. 1.5시간 후, 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 포화 NaHCO₃(20 mL)에 녹이고 CH₂Cl₂(2 x 20 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출물을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 농축하였다.

상기 잔사를 이소프로파놀 (5 mL) 중 10% Pd/C (33 mg) 및 시클로헥산 (0.63 mL, 6.2 mmol)과 혼합하고, 혼합물을 질소 기류 하에서 가열하였다. 18시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각하고 셀라이트패드를 통하여 여과하고, 여액을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔상에서 크로마토그래피 (1:1 EtOAc/CHCl₃중 5% MeOH)하여 표제 화합물 (75 mg, a로부터 57%)을 얻었다: MS (ES) m/e 422 (M + H)⁺.

c) (±)-3-페닐-4-[4-[5-(피리딘-2-일)아미노-1-페닐]-1,3-옥사졸-2일]부타노산

THF/H₂O) (1:1, 2 mL) 중 에틸 (±)-3-페닐-4-[4-[5-(피리딘-2-일)아미노-1-펜틸]-1,3-옥사졸-2-일]부타노에이트 (75 mg, 0.18 mmol) 용액에 1 N LiOH (0.27 mL, 0.27 mmol)을 첨가하였다. 18시간 후, pH를 10% HCl을 사용하여 pH 6로 조정하고, 이후 용액을 감압 하에서 농축하여 THF를 제거하였다. 용액을 C-18 메가 본드 엘루트칼럼 (H₂O 50 mL 이후 0.1% TFA를 함유하는 20% CH₃CN/H₂O) 200 mL)하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 동결 건조하여 표제 화합물 (43 mg, 61%)을 황색 검으로서 얻었다: MS (ES) m/e 394 (M + H)⁺. 원소 분석: 계산치: C₂₃H₂₇N₃O₃0.098CF₃CO₂H: C, 68.85; H, 6.75; N, 10.38. 실측치: C, 69.23; H, 7.00; N, 9.98.

실시예 5

비경구 투약 단위 조성물

멸균된 건조 분말로서의 실시예 1의 화합물 20 mg을 함유하는 제제를 하기와 같이 제조한다: 화합물 20 mg을 증류수 15 mL에 녹인다. 용액을 멸균 조건 하에서 25 mL 복합-투약 앰플에 여과하고 동결 건조한다. 분말을 정맥내 및 근육내 주사를 위해 물 중 5% 덱스트로즈 20 mL를 첨가하여 재구성한다. 투약량은 주사 용량에 의해 결정한다. 이후 결정된 투약량 단위의 측량된 용량을 주사를 위해 또다른 용량의 D5W에 첨가하여 희석하거나, 또는 측량된 용량을 IV 드립 주입 또는 다른 주사-주입 시스템을 위한 병 또는 백으로서, 의약을 분배하기 위해 또다른 기전에 첨가할 수 있다.

실시예 6

경구 투약 단위 조성물

경구 투여 캡슐을 실시예 1의 화합물 50 mg을 락토즈 75 mg 및 마그네슘 스테아레이트 5 mg과 혼합하고 밀링함으로써 제조한다. 생성되는 분말을 스크린하고 경질 젤라틴 캡슐에 충전한다.

실시예 7

경구 투약 단위 조성물

경구 투여를 위한 정제는 서당 20 mg, 칼슘 설페이트 이수화물 150 mg 및 실시예 1 화합물 50 mg을 10% 젤라틴 용액과 혼합하고 과립화함으로써 제조한다. 젖은 과립을 스크린하고, 건조하고, 전분 10 mg, 탈크 5 mg 및 스테아르산 3 mg과 혼합하고, 이후 정제로 압착한다.

상기 설명은 본 발명의 제법 및 용도를 완전히 개시한다. 그러나, 본 발명은 상기 기술된 특정한 실시양태에만 제한되지 않고, 하기 청구범위내에 있는 모든 변화를 포함한다. 본원에 인용된 간행물, 특허 및 다른 출판물의 참고 문헌은 당업계의 기술을 포함하고 본원에 참고로 혼입된다.

Claims (48)

1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염:

   <화학식 I>

   상기 식에서,

   Y는 CR'R' 또는 NR'C(O)이고;

   R¹은 C_0-6알킬-Het, -C_0-6알킬-Ar, 수소, -C_1-6알킬, -CN 또는 S(O)_kR^g이고;

   R²는 하기 구조식의 잔기이고;

   W는 (CHR^g)_a-U-(CHR^g)_b-이고

   U는 존재하지 않거나 또는 CO, CR^g ₂, C(=CR^g ₂), S(O)_k, O, NR^g, CR^gOR^g, CR^g(OR^k)CR^g ₂, CR^g ₂CR^g(OR^k), C(O)CR^g ₂, CR^g ₂C(O), CONRⁱ, NRⁱCO, OC(O), C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR^g, NR^gC(S), S(O)₂NR^g, NR^gS(O)₂N=N, NR^gNR^g, NR^gCR^g ₂, CR^g ₂NR^g, CR^g ₂O, OCR^g ₂, C ≡C, CR^g=CR^g, Ar 또는 Het이고;

   G는 NRe, S 또는 O이고;

   R^g는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

   R^k는 R^g, -C(O)R^g, 또는 -C(O)OR^f이고;

   Rⁱ는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, Ar-C_0-6알킬, 또는 할로겐, CN, NR^g ₂, OR^g, SR^g, CO₂R^g, 및 CON(R^g)₂로부터 선택된 1개 내지 3개의 기에 의해 치환된 C_1-6알킬이고;

   R^f는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

   R^e는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬,또는 (CH₂)_kCO₂R^g이고;

   R^b및 R^c는 독립적으로 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬, 할로겐, CF₃, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, CH₂N(R^f)₂로부터 선택되거나, 또는 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이고;

   Q¹, Q², Q³및 Q⁴는 독립적으로 질소 또는 C-R^y이고 (단 Q¹, Q², Q³및 Q⁴중 1개 이하는 질소임);

   R'은 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬이고;

   R"은 R', -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고;

   R^y는 수소, 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂, 또는 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR", -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂에 의해 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

   a는 0, 1 또는 2이고;

   b는 0, 1 또는 2이고;

   k는 0, 1 또는 2이고;

   r은 0, 1 또는 2이고;

   s는 0, 1 또는 2이고;

   u는 0 또는 1이고;

   v는 0 또는 1이다.
2. 제1항에 있어서, R²가 하기 구조식의 잔기인 화합물:

   상기 식에서, Q¹, Q², 및 Q³는 각각 CR^y이고, Q⁴는 CR^y또는 질소이고 u는 0이다.
3. 제2항에 있어서, 각각의 R'은 수소이고, R"은 수소 또는 C_1-6알킬이고, W는 (CH₂)_1-4-이고, Q⁴는 CR^y이고 R^y는 수소인 화합물.
4. 제1항에 있어서, R²가 하기 구조식의 잔기인 화합물:

   상기 식에서, Q¹, Q², 및 Q³는 각각 CH이고 u는 0이다.
5. 제4항에 있어서, 각각의 R'은 수소이고, R"은 수소 또는 C_1-6알킬이고, v는 0이고 W는 -(CH₂)_1-4-인 화합물.
6. 제1항에 있어서, R²가 하기 구조식의 잔기인 화합물:

   상기 식에서, G는 NH이고 R^b및 R^c는 각각 수소이다.
7. 제6항에 있어서, W가 -(CH₂)_1-4-인 화합물.
8. 제1항에 있어서, R²가 하기 구조식의 잔기인 화합물:

   상기 식에서, G는 NH이고 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이다.
9. 제8항에 있어서, R^b및 R^c가 서로 결합하여 6원 방향족 카르보시클릭 고리를 형성하는 화합물.
10. 제9항에 있어서, W는 -(CH₂)_1-4-인 화합물.
11. 제8항에 있어서, R^b및 R^c가 서로 결합하여 6원 방향족 헤테로시클릭 고리를 형성하는 화합물.
12. 제11항에 있어서 W가 -(CH₂)_1-4-인 화합물.
13. 제1항에 있어서, R²가 하기 구조식의 잔기인 화합물:

    상기 식에서, 각각의 R'은 수소이고, R"은 수소 또는 C_1-6알킬이고, R^g는 수소 또는 C_1-6알킬이고 s는 0, 1 또는 2이다.
14. 제13항에 있어서, W가 -(CH₂)_1-4-인 화합물.
15. 제1항에 있어서, R¹은 페닐, 벤질, 피리딜, 이미다졸, 옥사졸릴 또는 티아졸릴인 화합물.
16. 제15항에 있어서, R¹이 페닐인 화합물.
17. 제1항에 있어서, Y가 NHC(O)인 화합물.
18. 제1항에 있어서, 하기의 화합물 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염:

    (±)-3-페닐-4-[4-[[[3-(피리딘-2-일)아미노-1-프로필]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산;

    (±)-3-페닐-4-[4-[[[2-(피리딘-2-일)아미노-1-에틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산;

    (±)-3-페닐-4-[4-[[[4-(피리딘-2-일)아미노-1-부틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산; 및

    (±)-3-페닐-4-[4-[[[5-(피리딘-2-일)아미노-1-펜틸]아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부타노산.
19. 제1항의 화합물 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
20. 제1항의 화합물, 항종양제 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
21. 제20항에 있어서, 항종양제가 토포테칸인 제약 조성물.
22. 제20항에 있어서, 항종양제가 시스플라틴인 제약 조성물.
23. 제1항의 화합물, 골 재흡수 억제제 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
24. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 α_vβ₃수용체의 길항 작용이 필요한 질환의 치료 방법.
25. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 α_vβ₅수용체의 길항 작용이 필요한 질환의 치료 방법.
26. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 골다공증 치료 방법.
27. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 혈관 형성 억제 방법.
28. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 또는 종양 전이 억제 방법.
29. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 동맥 경화증 또는 재발 협착증 치료 방법.
30. 환자에게 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 염증 치료 방법.
31. 제1항의 화합물 및 항종양제를 단계적으로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 억제 방법.
32. 제31항에 있어서, 항종양제가 토포테칸인 방법.
33. 제31항에 있어서, 항종양제가 시스플라틴인 방법.
34. 제1항의 화합물 및 골 재흡수 억제제를 단계적으로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 골다공증 치료 또는 골 손실 억제 방법.
35. 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염:

    <화학식 II>

    상기 식에서,

    Y는 CR'R' 또는 NR'C(O)이고;

    R¹은 C_0-6알킬-Het, -C_0-6알킬-Ar, 수소, -C_1-6알킬, -CN 또는 S(O)_kR^g이고;

    R²는 하기 구조식의 잔기이고;

    W는 (CHR^g)_a-U-(CHR^g)_b-이고

    U는 존재하지 않거나 또는 CO, CR^g ₂, C(=CR^g ₂), S(O)_k, O, NR^g, CR^gOR^g, CR^g(OR^k)CR^g ₂, CR^g ₂CR^g(OR^k), C(O)CR^g ₂, CR^g ₂C(O), CONRⁱ, NRⁱCO, OC(O), C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR^g, NR^gC(S), S(O)₂NR^g, NR^gS(O)₂N=N, NR^gNR^g, NR^gCR^g ₂, CR^g ₂NR^g, CR^g ₂O, OCR^g ₂, C ≡C, CR^g=CR^g, Ar 또는 Het이고;

    G는 NRe, S 또는 O이고;

    R^g는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

    R^k는 R^g, -C(O)R^g, 또는 -C(O)OR^f이고;

    Rⁱ는 수소, C_1-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, Ar-C_0-6알킬, 또는 할로겐, CN, NR^g ₂, OR^g, SR^g, CO₂R^g, 및 CON(R^g)₂로부터 선택된 1개 내지 3개의 기에 의해 치환된 C_1-6알킬이고;

    R^f는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬이고;

    R^e는 수소, C_1-6알킬 또는 Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, C_3-7시클로알킬-C_0-6알킬, 또는 (CH₂)_kCO₂R^g이고;

    R^b및 R^c는 독립적으로 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬, Het-C_0-6알킬, 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬, 할로겐, CF₃, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, CH₂N(R^f)₂로부터 선택되거나, 또는 R^b및 R^c는 서로 결합하여 할로겐, CF₃, C_1-4알킬, OR^f, S(O)_kR^f, COR^f, CO₂R^f, OH, NO₂, N(R^f)₂, CO(NR^f)₂, 및 CH₂N(R^f)₂로부터 선택된 3개 이하의 치환체에 의해 임의로 치환된, 5 내지 6원 방향족 또는 비방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하거나; 또는 메틸렌디옥시이고;

    Q¹, Q², Q³및 Q⁴는 독립적으로 질소 또는 C-R^y이고 (단 Q¹, Q², Q³및 Q⁴중 1개 이하는 질소임);

    R'은 수소, C_1-6알킬, Ar-C_0-6알킬 또는 C_3-6시클로알킬-C_0-6알킬이고;

    R"은 R', -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고;

    R^y는 수소, 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR^k, -NO₂, CF₃, CF₃S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂, 또는 할로, -OR^g, -SR^g, -CN, -NR^gR", -NO₂, -CF₃, R'S(O)_r-, -CO₂R^g, -COR^g또는 -CONR^g ₂에 의해 임의로 치환된 C_1-6알킬이고;

    a는 0, 1 또는 2이고;

    b는 0, 1 또는 2이고;

    k는 0, 1 또는 2이고;

    r은 0, 1 또는 2이고;

    s는 0, 1 또는 2이고;

    u는 0 또는 1이고;

    v는 0 또는 1이다.
36. 하기 화학식 (III)의 화합물을 반응성 관능기가 보호된 하기 화학식 (IV)의 화합물과 반응시키고, 이후 보호기를 제거하고, 임의로 제약학적으로 허용되는 염을 형성하는 것을 포함하는, 제1항에 정의된 화학식 (I)의 화합물을 제조하는 방법:

    <화학식 III>

    <화학식 IV>

    상기 식에서, R¹및 R²는 화학식 (I)에서 정의한 것과 같다.
37. 의약으로서의 용도를 위한 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 화합물.
38. α_vβ₃수용체의 길항 작용이 필요한 질환의 치료를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물의 용도.
39. α_vβ₅수용체의 길항 작용이 필요한 질환의 치료를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물의 용도.
40. 골다공증 치료를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물의 용도.
41. 혈관 형성 억제를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물의 용도.
42. 종양 성장 또는 종양 전이 억제를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물의 용도.
43. 동맥 경화증 또는 재발 협착증 치료를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I)의 화합물의 용도.
44. 염증 치료를 위한 의약 제조에서의 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물의 용도.
45. 종양 성장 억제를 위한 의약 제조에서의 물리적으로 조합되거나 또는 단계적 투여를 위한 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물 및 항종양제의 용도.
46. 제45항에 있어서, 항종양제가 토포테칸인 용도.
47. 제45항에 있어서, 항종양제가 시스플라틴인 용도.
48. 골다공증 치료를 위한 의약 제조에서의 물리적으로 조합되거나 또는 단계적 투여를 위한 제1항에 정의된 화학식 (I) 화합물 및 골 재흡수 억제제의 용도.