CN1168500C - 从合成的rna转录物制备双rna病毒的方法 - Google Patents

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Abstract

利用起源于克隆的DNA的合成转录物已经开发了制备活的双RNA病毒如感染性的囊病病毒(IBDV)，一种双RNA病毒家族的形成区段的双链(ds)RNA病毒的系统。构建了独立的全长cDNA克隆，它们分别含有IBDV的RNA A和B区段的整个编码和非编码区。利用T7 RNA聚合酶对线性化质粒体外转录产生两个区段的合成RNA。利用合并的两区段的正意义转录物转染非洲绿猴肾细胞，在早至转染后36小时产生感染性病毒。dsRNA病毒的反遗传系统的开发将大大简化病毒基因表达的调节和病理的研究和产生新的活和失活疫苗的设计。

Description

从合成的RNA转录物制备双RNA病毒的方法
发明背景
感染性囊病病毒(IBDV)，一个双RNA病毒家族的成员，是小鸡中高免疫抑制疾病的成因剂(Kibenge，F.S.B.等人，病毒遗传杂志，69，1757-1775(1988))。感染性囊病(IBD)或传染性粘液囊病的特征是破坏法氏囊中的淋巴滤泡。在3-6周龄的完全敏感的鸡群中，该临床疾病引起严重的免疫抑制，导致由于妨碍生长，饲料的效率降低和死亡等引起的损失。小于3周龄的敏感鸡群没有显示该疾病外在的临床症状，但具有明显的感染特征，囊受到损害。
与该疾病的症状相关的病毒称为感染性囊病病毒(IBDV)。IBDV是对国家和世界家禽业有主要经济重要性影响的致病原。它通过破坏法氏囊中的产生抗体的B细胞的前体，在小鸡中引起严重的免疫缺陷。免疫抑制引起对其它疾病的敏感性增加，并干扰抗新城鸡瘟病、马立克氏病和感染性支气管炎病毒的有效接种。
已知的IBDV血清型有两种。血清型I病毒是鸡的致病原，而血清型II病毒感染鸡和火鸡。火鸡的感染的临床意义目前还是未知。
IBDV属于称为双RNA病毒的病毒组类，该组类包括其它双区段RNA病毒，如感染性胰坏死病毒(鱼)，tellina病毒和蚝病毒(双壳类软体动物)和果蝇X病毒(果蝇)。这些病毒都含有高分子量(MW)的双链RNA基因组。
IBDV病毒粒子的外壳由几个结构蛋白质组成。已经报道了9个之多的结构蛋白质，但有证据表明它们中的一些可能有前体—产物的关系(Kibenge，F.S.B.等人，病毒遗传杂志，69，1757-1775(1988))。病毒蛋白质(VP)的命名和分子量表示如下。
病毒蛋白                   分子量
VP1                      90千道尔顿
VP2                      41千道尔顿
VP3                      32千道尔顿
VP4                      28千道尔顿
VP5                      17千道尔顿
鉴定了IBDV的基因组中双链RNA的两区段。IBDV基因组由在核苷酸碱基对2827(区段B)到3261(区段A)之间变化的双链(ds)RNA的两个区段组成(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995))。较大的区段A编码聚蛋白，这种蛋白质通过自我蛋白水解形成成熟的病毒蛋白质VP2、VP3和VP4(Hudson，P.J.等人，核酸研究，14，5001-5012(1986))。VP2和VP3是病毒粒子的主要结构蛋白。VP2是IBDV的主要的宿主保护性免疫原，含有导致诱导中和抗体的抗原区(Azad，等人，病毒学，161，145-152(1987))。在聚蛋白基因前面和与之部分重迭的第二个开放读码框架(ORF)，编码存在于IBDV感染的细胞中的功能未知的蛋白质(VP5)(Mundt，E.等人，病毒遗传杂志，76，437-443(1995))。较小的区段B编码VP1，VP1是具有聚合酶和加帽酶活性的90千道尔顿多功能蛋白质(Spies，U.等人，病毒研究，8，127-140(1987)；Spies，U.，等人，病毒遗传杂志，71，977-981(1990))。
已经证明VP2蛋白质是IBDV的主要的宿主保护性免疫原，含有导致诱导中和抗体的抗原区。已经证明含有中和位点的区域是高度构型依赖的。已经有人认为VP3蛋白质是特异于基团的抗原，因为抗来自血清型I和II病毒的抗原的单克隆抗体能够识别该抗原。VP4蛋白质似乎是病毒编码的蛋白酶，参与加工VP2、VP3和VP4蛋白质的前体聚蛋白的加工。
虽然已经公开了各种IBDV毒株的基因组区段A和B的核苷酸序列，只是在最近才确定了两区段的完全的5’和3’非编码序列。IBDV区段A和B的5’非编码区含有32个核苷酸的共有序列，而两区段的3’非编码末端序列是不相关的，但在相同血清型的IBDV毒株中是保守的(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995))。正如在其它含有dsRNA的病毒如哺乳动物和植物呼肠病毒和轮状病毒中所证明的，这些末端可能含有在包装和调节IBDV基因表达中很重要的序列(Anzola，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，8301-8305(1987)；Zou，S.等人，病毒学，186，377-388(1992)；Gorziglia，M.I.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89，5784-5788(1992))。
在最近几年，利用依赖DNA的RNA聚合酶产生的转录物已经从克隆的cDNA产生出许多感染性动物RNA病毒(Boyer，J.C.，等人，病毒学，198，415-426(1994))。例如，脊髓灰质炎病毒，正链RNA病毒，流感病毒，区段化的负链RNA病毒，狂犬病毒，非区段化的负链RNA病毒；所有这些是从它们各自的基因组的克隆cDNA得到的(van derWerf，S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83，2330-2334(1986)，Enaml，M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，3802-3805(1990)；Schnell，M.J.等人，EMBO杂志，13，4195-4205(1994))。对于呼肠病毒，发现当与来自不同血清型的辅助病毒互补时，用SSRNA、dsRNA和体外翻译的呼肠病毒产物联合转染细胞产生感染性呼肠病毒(Roner，M.R.，等人，病毒学，179，845-852(1990))。但是，至今，没有报道只来自合成RNA的区段化的dsRNA基因组感染性病毒。
发明概要
本发明涉及感染性囊病病毒(IBDV)，它与小鸡的传染性粘液囊病相关。更具体地说，本发明涉及利用起源于克隆的cDNA的合成转录物制备感染性囊病病毒(IBDV)的系统。本发明将有助于病毒基因表达的调节和病理的研究和设计产生新的活和失活的疫苗。
本发明的详细说明
在开发IBDV的反遗传系统的尝试中，分别构建了三个含有血清型I毒株D78或血清型II毒株23/82的区段A和血清型I毒株P2的区段B的独立的全长cDNA克隆。利用T7 RNA聚合酶通过线性质粒的体外转录反应产生区段A和B的合成的RNA。通过转染非洲绿猴肾细胞评估未用DNase或RNase处理或已处理的这些区段的转录物的感染性病毒的生产。
本发明人已经证明源于相应于区段化的dsRNA动物病毒的整个基因组的克隆DNA的合成转录物能够产生复制病毒。在利用起源于含有dsRNA基因组的病毒(IBDV)的克隆cDNA的合成的正意义RNA转染细胞后回收感染性病毒，完成了产生RNA病毒的反感染系统的探索。许多研究者已经从克隆的cDNA产生动物感染性RNA病毒(Boyer，J.C.，等人，病毒学，198，415-426(1994))。Van der Werf等人是第一个利用T7 RNA聚合酶在克隆的eDNA模板上产生的合成RNA生产脊髓灰质炎病毒，一种正链RNA病毒(van der Werf，S.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83，2330-2334(1986))。后来，从它们各自的基因组的克隆cDNA，Enami等人获得了流感病毒，一种区段化的负链RNA病毒(Enami，M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，3802-3805(1990))；和Schnell等人制得了狂犬病毒，一种非区段化的负链RNA病毒(Schnell，M.J.等人，EMBO杂志，13，4195-4205(1994))。通过合成的ssRNA、dsRNA、体外翻译的呼肠病毒产物转染细胞，Roner等人开发了区段化的dsRNA呼肠病毒的感染性系统，并与不同血清型的辅助病毒互补(Roner，M.R.等人，病毒学，179，845-852(1990))。通过噬菌斑测试，将得到的病毒与辅助病毒区别开来。但是，在这一系统中，使用辅助病毒是必要的。相反，现在叙述的IBDV反遗传系统不需要辅助病毒或其它病毒蛋白。利用两区段的正意义RNA转染细胞足以产生感染性病毒(IBDV)。在区段A的3’末端分别转录的另外一个或四个核苷酸的结局没有确定。但是，这并不阻止病毒dsRNA的复制。不同的研究者观察到正链RNA病毒有同样的效果(Boyer，J.C.，等人，病毒学，198，415-426(1994))。
用两个区段的正意义RNA转染同一细胞对于成功地恢复IBDV是必要的。通过细胞的翻译机制将两个区段的转染RNA翻译。假定区段A的聚蛋白加工成VP2、VP3和VP4蛋白质，它们形成病毒的外壳。自区段B翻译出蛋白质VP1可能起依赖于RNA的RNA聚合酶的作用，从两个区段的合成正链转录负链，反应产物形成dsRNA。最近，Dobos报道了感染性胰坏死病毒(IPNV)，双RNA病毒家族中的一个原型病毒，通过依赖于病毒粒子RNA的RNA聚合酶在体外的转录是由VP1引导的，然后通过不对称、半保守、链替代机制进行加工，在病毒基因组的复制过程中只合成正链(Dobos，P.，病毒学，208，10-25(1995))。本发明系统显示负链的合成在正链的合成之前。得到的转录负链RNA是否用作为正链转录的模板仍然是进一步研究的主题。
为了证明转染细胞的上清液中含有的感染性IBDV确实起源于合成的转录物，生产了含有血清型II毒株的区段A和血清型I毒株的区段B的人工嵌合体。序列分析证实了这一基因组联合。该结果同样表明Mundt和Muller描述的终端序列基元可能导致病毒基因组的复制，分类和包装(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995))。血清型特异性终端序列的存在显然不阻止在血清型I区段B的依赖RNA的RNA聚合酶VP1的作用下，适当复制血清型II A区段。产生重组病毒的能力将大大帮助分析血清型特异的和血清型共同的终端序列的准确功能。
感染性IBDV的回收证实只有两区段的正链RNA才足以启动dsRNA的复制。所以，该结果与呼肠病毒和轮状病毒复制的一般特征一致，其中正链RNA的作用是作为合成子代负链的模板以便产生dsRNA(Schonberg，M.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Patton，J.T.，病毒研究，6，217-233(1986)；Chen，D.，等人，病毒学杂志，68，7030-7039(1994))。但是，Spies等人和Dobos建议的半保守、链替代机制不能排除在外(Spies，U.等人，病毒研究，8，127-140(1987)；Dobos，P.，病毒学，208，10-25(1995))。IBDV反遗传系统的开发将大大简化将来基因表达和病理的研究，和辅助产生新的活和失活IBDV疫苗的设计。
如本申请书所用，如用于核酸的术语“合成的”指这是人制造的核酸，与天然存在的核酸不同。对于制造方法，该术语的含义没有限制，可以是化学或生物的，只要制造方法包括人的干预即可。
术语“cDNA”是指含有区段A和B和区段A和B的5’和3’非编码区的任何cDNA。
术语“感染性”如用于病毒，表明病毒具有再生能力。该病毒可以是致病原或非致病原，并且仍然是感染性的。
本发明提供了利用合成RNA转录物产生感染性囊病病毒的系统。这一系统可以用于病毒基因表达的调节和病理的研究和产生新的活和失活IBDV疫苗的设计。
本发明提供含有至少一个拷贝的本发明的cDNA的重组载体。重组载体也可以含有其它必需序列，如本领域已知的表达控制序列、标记、扩增基因、信号序列、启动子和诸如此类。为了这一目的的有用载体是质粒，病毒如杆状病毒、疱疹病毒(HVT)和痘病毒，例如，家禽痘病毒和诸如此类。
本文还提供了利用本发明的重组载体转化的宿主细胞或利用本发明的合成RNA转染的宿主细胞。宿主细胞可以是原核或真核宿主细胞。适当的例子有大肠杆菌、昆虫细胞系如Sf-9、鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肾细胞(CEK)、非洲绿猴肾细胞Vero和诸如此类。
同样是本发明的一部分的是含有家禽保护量的重组产生的病毒或病毒一部分的IBDV家禽疫苗，其中病毒是失活或经修饰的，以致它不再具有毒力。
通过化学或物理方法可以失活病毒。例如用酶、甲醛、β-丙酸内酯、环乙亚胺、或其衍生物、有机溶剂(如卤代烃)和/或去垢剂处理病毒可以达到化学失活。如果需要，在病毒已经失活后，可以中和失活的物质。通过将病毒进行如UV光照射、X-放射、或γ辐射可以进行物理失活。
通过已知方法包括在生产感染性病毒之前或之后进行连续传代、缺失核酸序列和位点特异诱变，可以将病毒减毒以产生保留足够的抗原性但毒力减弱的病毒。
用于家禽接种的生理可接受载体是本领域已知的，不需要在本文进一步叙述。除了对家禽是生理可接受的，该载体必须不干扰疫苗引发的免疫应答和/或不干扰它的多肽产物的表达。
其它添加剂如助剂和稳定剂等也可以本领域已知的量包含在疫苗中。优选地，助剂如氢氧化铝、磷酸铝、植物和动物油和诸如此类可以足以增强对IBDV的免疫应答的量与疫苗一起给药。加入疫苗的助剂的量将根据助剂的特性而变化，通常范围在IBDV重量的约0.1到约100倍，优选地为IBDV重量的约1到约10倍。
本发明的疫苗也可以含有各种稳定剂。任何适当的稳定剂都可以利用，包括碳水化合物如山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、糊精或葡萄糖；蛋白质如白蛋白或酪蛋白；和缓冲液如碱性金属磷酸盐和诸如此类。当通过冷冻制备干燥疫苗制剂时稳定剂是特别有利的。
疫苗可以通过任何适当的已知接种家禽的方法给药，包括经鼻的、眼的、通过注射、在饮用中、在饲料中、通过接触等诸如此类。优选地，将疫苗通过大量给药技术给药，如将疫苗放入饮用水中，或通过喷洒动物所处的环境。当通过注射给药时，优选地将疫苗经皮给药。如本文所用的非肠道给药指通过静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内注射给药。
将本发明的疫苗在孵化之前或之后对家禽给药以便在任何时候防止IBD。优选地，疫苗是在出生的时间之前，和动物约6周龄之后给药。家禽定义包括，但不限于鸡、公鸡、母鸡、焙烤小鸡、繁殖的鸡、生蛋的鸡、火鸡和鸭。
疫苗可以在无菌包装中以单位形式或以其它量提供。优选地，将它冷冻储藏，在低于-20℃，更优选地，在低于-70℃储藏。在使用之前解冻，然后可以立即再冷冻。对于家禽给药，可以将重组生产的病毒悬浮于载体中，量为104到107pfu/毫升，更优选地，在载体如盐溶液中为105到106pfu/毫升。失活的疫苗可以含有悬浮于载体中的104到107pfu/毫升的抗原等价物。如本领域已知，其它载体也可以利用。药学可接受载体的例子是稀释剂和本领域已知的惰性药学载体。优选地，载体或稀释剂是与大量给药技术给药疫苗相容的。但是，载体或稀释剂也可以与其它给药方法如注射、滴眼、滴鼻等诸如此类相容。
本发明也可以用于产生与IBDV物质联合的疫苗。IBDV物质可以与新城鸡瘟病病毒感染性支气管炎病毒、呼肠病毒、腺病毒和/或马立克氏病毒的抗原物质联合。
本发明前面的实施方案将进一步在下面的实施例中阐述。但是，本发明不限于这些实施例。对本领域技术人员而言，不离开本发明的范围的变化将是显然的。
附图的简要描述
图1是用于合成含有T7 RNA聚合酶的IBDV正意义ssRNA的cDNA构建体的图解说明。构建体pUC19FLAD78含有IBDV毒株D78的区段A的cDNA，重组质粒pUC18FLA23含有IBDV毒株23/82的区段A的全长cDNA。IBDV的区段A编码聚蛋白质(VP2-VP4-VP3)和最近鉴定的VP5蛋白质。质粒pUC18FLBP2含有毒株P2的区段B的cDNA，它编码依赖于RNA的RNA聚合酶(VP1)。病毒特异性序列下面划线，T7启动子序列是斜体。鉴定了限制位点并用黑体表示。用垂直的箭头表示线性质粒的切割位点。用水平箭头表示转录方向。
图2显示用于转染非洲绿猴肾细胞株细胞的转录反应产物的琼脂糖凝胶分析。在体外利用T7 RNA聚合酶和线性质粒pUC19FLAD78转录的合成RNA(泳道2，4和6)，含有IBDV毒株D78的区段A的cDNA；pUC18FLBP2(泳道1，3和5)含有毒株P2的区段B的cDNA。在转录后，反应混合物利用DNase(泳道1和2)，RNase(泳道3和4)处理或仍然未处理(泳道5和6)。在1％的琼脂糖凝胶上分析2微升反应产物。将HindIII/EcoR I消化的λDNA用作分子量标记(泳道M)。
图3显示了来自嵌合体IBDV毒株23A/P2B的区段A和B的克隆的RT-PCR片断的核苷酸序列(黑体)分别与血清型II毒株23/82和血清型I毒株P2的区段A和B的已知序列的比较。相同的核苷酸以冒号表示。
图4显示了pUC18FLA23的DNA序列。
图5显示了pUC19FLAD78的DNA序列。
图6显示了pUC18FLBP2的DNA序列。
实施例
病毒和细胞将两个IBDV血清型I毒株(来自德国的减毒P2毒株和疫苗毒株D78(intervet international))和一个血清型II毒株(apathogenic23/82毒株)在鸡胚细胞(CEC)中繁殖并纯化(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995)；Vakharia，V.N.等人，病毒研究，31，265-273(1994))。在用5％胎牛血清(FCS)补充的M199培养基中生长非洲绿猴肾细胞并用于转染实验。在非洲绿猴肾细胞中进行进一步繁殖恢复的病毒和免疫荧光研究(Mundt，E.等人，病毒遗传杂志，76，437-443(1995))。对于噬菌斑测试，制备和使用了第二代CEC的单层(Muller，H.，等人，病毒研究，4，297-309(1986))。
构建IBDV基因组的全长cDNA克隆  单独制备了全长IBDV区段A和B的cDNA克隆。利用标准克隆程序和各种方法制备了含有毒株D78的RNA区段A的整个编码区的cDNA克隆(Vakharia，V.N.，等人，病毒研究，31，265-273(1994))。将D78末端序列与最近公开的其它IBDV毒株的末端序列比较(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995))，观察到D78 cDNA克隆在5’和3’末端分别缺乏保守的起始的17和最后10个核苷酸。所以，为了构建区段A的全长cDNA的克隆，合成了两个引物对(A5’-D78，A5-IPD78和A3’-IPD78)，并用于PCR扩增(表1)。根据供应商的方案(新英格兰生物实验室)，利用“Deep Vent聚合酶”(高保真，耐热DNA聚合酶)扩增该DNA区段。将扩增的片断克隆到pCRII载体(Invitrogen公司)的EcoR I位点，以便分别得到质粒pCRD78A5’和pCRD78A3’。利用EcoR I和Sal I消化各个质粒，将得到的片断连接到EcoR I消化的pUC19上以便得到质粒pUC19FLAD78(SEQ ID NO：27和29)，该质粒含有编码所有结构蛋白(VP2，VP4和VP3，SEQ ID NO：30)以及非结构VP5蛋白(SEQ ID NO：28)的区段A的全长cDNA拷贝(图1)。
将两个引物对(A5’-23，A5IP23和A3’-23，A3-IP23；参见表1)用于毒株23/82的病毒基因组dsRNA的逆转录(RT)，该逆转录利用了“SuperScript RT II”(RNA指导的DNA聚合酶，其RNase H的活性减弱，GIBCO/BRL)。通过酚/氯仿提取和乙醇沉淀纯化RT反应产物。为了得到引物对A5’-23、A5-IP23，和A3’-23、A3-IP23，分别连接的两个cDNA片断，通过PCR，利用“Deep Vent聚合酶”扩增RT反应产物。根据供应商的方案进行RT和PCR。将得到的PCR片断末端平齐化，并连接进入Sma I切割的pUC18载体以便得到pUC23A5’和pUC23A3’。将质粒pUC23A3’中含有的区段A的3’末端连接进入Hind III-BstB I切割的质粒pUC23A5’以便建立毒株23/82的区段A的全长cDNA。将得到的质粒命名为pUC18FLA23(SEQ ID NO：31和33)(图1)，它编码结构蛋白VP2、VP3和VP4(SEQ ID NO：32)和非结构蛋白质VP5(SEQ ID NO：34)。
为了得到P2毒株的区段B的cDNA克隆，根据公开的序列设计两个引物对(B5’-P2，B5-IPP2和B3’-P2，B3-IPP2)，用于RT-PCR扩增(参见表1)。利用基因组dsRNA作为模板，根据供应商的方案合成和扩增cDNA片断(Perkin-Elmer Cetus)。将扩增的片断末端平齐化，连接进入Sma I切割的pBS载体(Stratagene)以便得到克隆pBSP2B5’和pBSP2B3’。为了构建区段B的全长克隆，首先在pUC18载体的EcoRI和Pst I位点之间亚克隆质粒pBSP2B5’的5’末端片断以便得到pUCP2B5’。然后，将质粒pBSP2B3’的3’末端片断插入在质粒pUCP2B5’的唯一的Bgl II和Pst I位点以便得到全长的质粒pUC18FLBP2(SEQ ID NO：25)，该质粒编码VP1蛋白质(SEQ IDNO：26)(图1)。利用“序列酶”DNA测序系统(美国生化)可以对质粒pUC18FLBP2、pUC18FLA23和pUC19FLAD78完全测序，利用“DNASIS”(Pharmacia)或“PC/Gene”(Intelligenetics)软件分析序列数据。利用T7 RNA聚合酶(Promega)体外转录和体外翻译偶联网织红细胞裂解液系统以测试全长构建体的完整性。
合成RNA的转录和转染  分别利用BsrG I、Nsi I和Pst I酶消化质粒pUC19FLAD78、pUC18FLA23和pUC18FLBP2，并用作T7 RNA聚合酶(Promega)体外翻译的模板。简要地说，将限制酶切割测试调节到0.5％SDS，并与蛋白酶K(0.5毫克/毫升)在37℃，温育1小时。在乙醇沉淀后，回收线性DNA模板(约3微克)，并分别加入转录反应混合物(50微升)，转录混合物含有40毫摩尔浓度Tris-HCl(pH7.9)、10毫摩尔浓度的NaCl、6毫摩尔浓度的MgCl2、2毫摩尔浓度的亚精胺、各0.5毫摩尔浓度的ATP、CTP和UTP、0.1毫摩尔浓度GTP、0.25毫摩尔浓度的帽子类似物[m7G(5’)PPP(5’)G]、120单位“RNasin”(核糖核酸酶抑制剂)和150单位T7 RNA聚合酶(Promega)，在37℃温育1小时。通过酚/氯仿提取和乙醇沉淀纯化合成的RNA转录物。作为对照，利用DNase或RNase(Promega)在纯化步骤之前处理转录产物。
在60毫米培养皿中将非洲绿猴肾细胞株系生长至80％汇合，并且用磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤一次。将3毫升的“OPTI-MEMI”(该培养基是含有HEPES缓冲液、碳酸氢钠、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、微量元素、生长因子和酚红的还原血清培养基；从GIBCO/BRL获得)加入到该单层，在二氧化碳培养箱，于37℃将细胞培养1小时。同时，将0.15毫升的“OPTI-MEMI”与1.25微克的“脂质转染”试剂(N-(1-(2，3-二油酰氧)丙基)-N，N，N-三甲基铵氯和二油酰磷脂酰乙醇胺，GIBCO/BRL)一起在室温下的聚苯乙烯试管中保温45分钟。将悬浮于0.15毫升的焦碳酸二乙酯处理的水中的合成的RNA转录物的两个区段加入到OPTI-MEM脂质转染剂混合物，缓慢混合，置于冰上保温5分钟。在从60毫米的培养皿的单层去除“OPTI-MEM”并且用新鲜的1.5毫升的“OPTI-MEM”替代之后，将含有核酸的混合物逐滴加入到非洲绿猴肾细胞株系细胞并且缓慢涡动。在37℃保温2小时之后，用含有5％FCS(没有浸洗细胞)的M199培养基(氯化钙(无水)、9水硝酸铁、氯化钾、硫酸镁(无水)、氯化钠、一水磷酸二氢钠、碳酸氢钠、L-丙氨酸、L-盐酸精氨酸、L-天冬氨酸、一水盐酸L-半胱氨酸、2盐酸L-半胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、一水盐酸L-组氨酸、L-羟基脯氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、盐酸L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、2水L-酪氨酸2钠、L-缬氨酸、α维生素E磷酸2钠、抗坏血酸、生物素、维生素D2、D-泛酸钙、绿化胆碱、叶酸、I-肌醇、3水二甲萘醌亚硫酸氢钠、烟酸、烟酰胺、对-氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素、乙酸维生素A、硫酸腺嘌呤、腺苷酸、ATP、Na2、胆固醇、2-脱氧-D-核糖、D-葡萄糖、谷胱甘肽、盐酸鸟嘌呤、次黄嘌呤钠、酚红钠、核糖、乙酸钠(无水)、胸腺嘧啶、吐温80、尿嘧啶和黄嘌呤钠；从Mediatech公司获得)替换混合物，以所需的时间间隔进一步在37℃将细胞保温。
产生的IBDV的鉴定
用从由pUC18FLA23和pUC18FLP2B转录物转染的非洲绿猴肾细胞系细胞过滤(0.2微米)得的上清液感染CEC。感染后16小时，分离整个细胞的核酸(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995))。根据公开的序列设计引物，将RT-PCR片段扩增，克隆和测序(Mundt，E.等人，病毒学，209，10-18(1995))。通过利用“DNASIS”软件分析序列数据。
免疫荧光测定
用从感染的非洲绿猴肾细胞系细胞获得的上清液(在冰冻和冻融之后)感染在盖玻片上生长到80％汇合的非洲绿猴肾细胞系细胞，在37℃保温2天。然后洗涤细胞，用丙酮固定并且多克隆兔抗-IBDV血清处理，洗涤之后将细胞用荧光素标记的山羊抗兔抗体(Kirkegaard&Perry实验室)处理并用荧光显微镜检查。
噬菌斑测试
在60毫米培养皿中生长的次代CEC的单层用来自于转染的非洲绿猴肾细胞系细胞的上清液接种。在感染1小时之后，用PBS将细胞洗涤一次和用含有10％磷酸胰蛋白胨肉汤、2％FCS、0.112％碳酸氢钠、103单位的青霉素、103微克/毫升的链霉素、0.25微克/毫升的两性霉素、0.005％中性红、0.0015％酚红的0.8％纯净琼脂(Difco)覆盖。将细胞在37℃保温2-3天直到能够观察到噬菌斑并且计数(Muller，H.等人，病毒研究，4，297-309(1986))。
IBDV基因组的全长cDNA克隆的构建
为了研制用于dsRNA病毒IBDV的反遗传系统，构建两个独立的cDNA克隆，它们含有毒株D78的区段A和毒株P2的区段B(附图1)。各个质粒或者编码结构蛋白质的前体(VP2，VP4，VP3)和VP5或仅编码VP1蛋白质(依赖于RNA的RNA聚合酶)。用PstI消化质粒pUC18FLBP2并且由T7 RNA聚合酶体外转录以产生含有正确的5’-和3’-末端的RNA。基于用BsrG I消化和转录，质粒pUC19FLAD78产生含有正确的5’-末端但是在3’末端具有另外的4个核苷酸的RNA。在兔网状细胞系统中将上述质粒的转录和转译偶合产生蛋白质产物，该产物是经正确地加工过的并且在SDS-聚丙烯酰胺凝胶和自动自显影分离之后与标记物IBDV蛋白质一起共迁移(数据未显示)。
感染性病毒的转录，转染和繁殖
利用线性化的全长cDNA质粒作为模板，用T7 RNA聚合酶体外分别合成IBDV区段A和B的正意义转录物(参见附图2)。虽然在中性凝胶上对于区段B(泳道1和5)观察到两个种类的RNA转录物，在变性凝胶上分离这些样品仅产生一个特异于转录物的谱带(数据未显示)。为了显示两个区段的正意义RNA转录物需要制备感染性病毒，用不同的核酸酶保温转录混合物，如附图2所示。在用DNA酶(泳道1+2)、RNA酶(泳道3+4)处理转录产物之后或没有处理(泳道5+6)之后回收的合成的RNA用于转染非洲绿猴肾细胞株系细胞。作为模拟对照，仅使用脂质转染试剂，在转染之后5天，仅在用未处理的或DNA酶处理的转录产物转染的非洲绿猴肾细胞系细胞中观察到细胞毒性作用(CPE)，但是在用RNA酶处理的转录混合物或模拟物转染的对照没有观察到。另外，当仅用区段A或B的RNA转染非洲绿猴肾细胞系细胞时(数据没有显示)，没有检测到CPE。这些结果证实在用IBDV的两个区段的正意义ssRNA转染非洲绿猴肾细胞系细胞之后确保IBDV的复制。为了验证导致非洲绿猴肾细胞系细胞中CPE的因子的确是IBDV，将转染的非洲绿猴肾细胞系细胞冷冻—冻融，并且通过离心使上清液澄清，并且用于感染CEC或非洲绿猴肾细胞系细胞。用来自未处理或DNA酶处理的转录混合物感染的非洲绿猴肾细胞系细胞的上清液感染CEC，在接种一天后即表现出CPE(表2)。但是，用来自于RNA酶处理的转录混合物、未处理的区段A或B转录混合物感染的非洲绿猴肾细胞系细胞，和模拟物转染的非洲绿猴肾细胞系细胞的上清液感染CEC，甚至在5天之后也没有检测到CPE。类似地当用类似于上面描述的上清液感染盖玻片上的非洲绿猴肾细胞系细胞并且在免疫荧光染色之后2天检查，仅来自于未处理的或DNA酶处理的转录混合物转染的非洲绿猴肾细胞系细胞的上清液获得阳性免疫荧光信号(表2)。
转染病毒的回收
为了测定感染性病毒的回收的时间点，用区段A和B结合的RNA转录物转染非洲绿猴肾细胞系细胞。在转染之后4、8、16、24、36和48小时时，通过感染状态和噬菌斑测试检查上清液中转染性病毒的存在，如表3所示。我们的结果表明，可以早至转染之后36小时回收病毒。病毒效价是2.3×102pfu/毫升，表明在晚于转染之后48小时获得的样品中效价有所下降。
嵌合病毒的制备
为了证明IBDV的两个区段的正意义ssRNA足于恢复成感染性病毒，制备嵌合IBDV。通过Nsi I消化将含有血清型II毒株的区段A的全长序列的质粒pUC18FLA23线性化，利用T7 RNA聚合酶体外合成ssRNA。ssRNA转录物限定了正确的5’末端但是在3’末端含有一个额外的残基(附图1)。用血清型II毒株23/82的区段A的ssRNA和血清型I毒株P2的区段B的ssRNA转染非洲绿猴肾细胞系细胞。转染5天之后，当CPE显示时，澄清上清液(在冷冻—冻融之后)并且用于感染CEC。在CEC中第二次传代之后，通过RT-PCR分析病毒的基因组RNA并且对PCR产物进行测序。将区段A的引物设计为特异于仅扩增来自于血清型II毒株的区段A的序列。对于区段B的引物与两种血清型的序列均结合。克隆该扩增的片段并且测序。获得的区段A的序列显示与血清型II毒株23/82的已知区段A序列良好地匹配，而区段B序列显示与出版的血清型I毒株的区段B序列则完全同源(附图3)。
表1用于构建IBDV基因组区段A和B的全长cDNA克隆的寡聚核苷酸
核苷酸序列                                                                                                               方向               名称                核苷酸编号
TAATACGACTCACTATA GGATACGATCGGTCTGACCCCGGGGGAGTCA     (+)   A5′-D78     1-31
AGAGAATTCTAATACGACTCACTATA GGATACGATCGGTCTGAC     (+)   A5′23     1-48
TGTAC AGGGGACCCGCGAACGGATCCAATT     (-)   A3′-D78     3237-3261
CGGCGAATTCATGCAT AGGGGACCCGCGAACGGATC (-) A3′-23 3242-3261
CGTCGACTACGGGATTCTGG     (-)   A5-IPD78     1711-1730
CAGAGGCAGTACTCCGTCTG     (-)   A5-IP23     1971-1990
AGTCGACGGGATTCTTGCTT     (+)   A3-IPD78     1723-1742
GAAGGTGTGCGAGAGGAC     (+)   A3-IP23     1883-1900
AGAGAATTCTAATACGACTCACTATA GGATACGATGGGTCTGAC     (+)   B5′-P2     1-18
CGATCTGCTGCA GGGGGCCCCCGCAGGCGAAGG     (-)   B3′-P2     2807-2827
CTTGAGACTCTTGTTCTCTACTCC     (-)   B5-IPP2     1915-1938
ATACAGCAAAGATCTCGGG     (+)   B3-IPP2     1839-1857
用于克隆的寡聚核苷酸引物的组成和定位。用斜体字标记T7启动子序列，底下划线的为病毒特异性序列，用黑体字标记限制性位点。用有意义(+)和反义(-)显示了引物中的病毒特异性序列的定向。引物结合的位置(核苷酸编号)是根据出版的P2毒株(2)序列确定的。
表2从区段A和B的合成的RNA制备感染性IBDV
  转染的物质                                           CPE                               免疫荧光测定
    ssRNA A+B，DNA酶处理的   +   +
    ssRNA A+B，RNA酶处理的   -   -
    ssRNA A+B，未处理的   +   +
    ssRNA A，未处理的   -   -
    ssRNA B，未处理的   -   -
    仅脂质转染剂   -   -
用来自于转录反应的区段A和B的合成的RNA转染非洲绿猴肾细胞系细胞，所述RNA未用或已用DNA酶或RNA酶处理。在5天之后，收集上清液，通过离心澄清，分析病毒的存在。根据接种1-2天之后胞毒作用(CPE)的出现在CEC中测定所回收病毒的感染性。用兔抗一IBDV血清，通过对感染的非洲绿猴肾细胞系细胞的免疫荧光染色测定回收的病毒的特异性。
     表3转染后不同的时间回收的病毒转染后的时间(小时)               CPE                          免疫荧光测定                 pfu/毫升
    4   -   -     0
    8   -   -     0
    16   -   -     0
    24   -   -     0
    36   +   +     2.3×102
    48   +   +     6.0×101
如描述的，用区段A和B的合成的RNA转染非洲绿猴肾细胞系细胞。在CEC中通过CPE和在非洲绿猴肾细胞系细胞中进行免疫荧光染色测定来分别检测回收的病毒的感染性和特异性。在用来自于转染的非洲绿猴肾细胞系细胞的上清液接种细胞之后，将次代CEC的单层用于噬菌斑测试。计算病毒的近似效价，以每升的噬菌斑形成单位表示(pfu/毫升)。
                     序列表
(1)总的资料：
(i)申请人：VAKHARIA，Vikram N.；MUNDT，Egbert
(ii)发明创造名称：从合成的RNA转录物制备双RNA病毒的方法
(iii)序列数目：34
(iv)通信地址：
    (A)联系人：NIKAIDO，MARMELSTEIN，MURRAY & ORAM LLP
    (B)街道：655，15大街，N.W.，Suite 330-G Street Lobby
    (C)城市：华盛顿
    (D)州：DC
    (E)国家：美国
    (F)邮编：20005-5701
(v)计算机可读方式：
    (A)媒介类型：软盘
    (B)计算机：IBM PC兼容机
    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
    (D)软件程序：PatentIn Release#1.0，版本#1.30
(vi)当前申请数据：
    (A)申请号：US
    (B)申请日期：
    (C)分类：
(viii)代理人/代理信息：
    (A)姓名：KITTS，Monica C.
    (B)登记号：36,105
    (C)案卷/卷宗号：P8172-6002
(ix)通讯信息：
    (A)电话：202/638-5000
    (B)传真：202/638-4810
(2)SEQ ID NO：1：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：46个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：环状
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：1：的序列描述
GAATTCGGCT TTAATACGAC TCACTATAGG ATACGATCGG TCTGAC                 46
(2)SEQ ID NO：2：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：41个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：环状
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：2：的序列描述
AATTGGATCC GTTCGCGGGT CCCCTGTACA AAGCCGAATT C                      41
(2)SEQ ID NO：3：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：环状
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：3：的序列描述
CGGCGAATTC ATGCTAGGG GACCCGCGAA CGGATC                             36
(2)SEQ ID NO：4：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：44个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：环状
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：4：的序列描述
GTCAGACCGA TCGTATCCTA TAGTGAGTCG TATTAGAATT CTCT                   44
(2)SEQ ID NO：5：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：33个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：环状
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：5：的序列描述
TTGCATGCCT GCAGGGGGCC CCCGCAGGCG AAG                                 33
(2)SEQ ID NO：6：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：31个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：环状
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：6：的序列描述
TCGTATCCTA TAGTGAGTCG TATTAGAATT C                                   31
(2)SEQ ID NO：7：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：120个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：7：的序列描述
GGAAGCCTGA GTGAGTTGAC TGACTACAGC TACAACGGGC TGATGTCAGC CACTGCGAAC     60
ATCAACGACA AGATCGGGAA CGTTCTAGTT GGAGAAGGGG TGACTGTTTT CAGTCTACCG    120
(2)SEQ ID NO：8：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：120个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：8：的序列描述
GGAAGCCTGA GTGAGTTGAC TGACTACAGC TACAACGGGC TGATGTCAGC CACTGCGAAC    60
ATCAACGACA AGATCGGGAA CGTTCTAGTT GGAGAAGGGG TGACTGTTCT CAGTCTACC    119
(2)SEQ ID NO：9：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：120个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：9：的序列描述
GGAAGCCTGA GTGAACTGAC AGATGTTAGC TACAATGGGT TGATGTCTGC AACAGCCAAC   60
ATCAACGACA AAATTGGGAA CGTCCTAGTA GGGGAAGGGG TCACCGTCCT CAGCTTACCC  120
(2)SEQ ID NO：10：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：120个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：10：的序列描述
TTTTCAATAG TCCACAGGCG CGAACGAAGA TCTCAGCAGC GTTCGGCATA AAGCCTACTG    60
CTGGACAAGA CGTGGAAGAA CTCTTGATCC CCAAAGTCTG GGTGCCACCT GAGGATCCGC   120
(2)SEQ ID NO：11：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：120个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：11：的序列描述
TTTTCAACAG TCCACAGGCG CGAAGCACGA TCTCAGCAGC GTTCGGCATA AAGCCTACTG    60
CTGGACAAGA CGTGGAAGAA CTCTTGATCC CTAAAGTTTG GGTGCCACCT GAGGATCCGC   120
(2)SEQ ID NO：12：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：120个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：12：的序列描述
TTTTCAACAG TCCACAGGCG CGAAGCACGA TCTCAGCAGC GTTCGGCATA AAGCCTACTG    60
CTGGACAAGA CGTGGAAGAA CTCTTGATCC CTAAAGTTTG GGTGCCACCT GAGGATCCGC   120
(2)SEQ ID NO：13：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：48个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：13：的序列描述
TAATACGACT CACTATAGGA TACGATCGGT CTGACCCCGG GGGAGTCA                48
(2)SEQ ID NO：14：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：44个碱基对
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    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：14：的序列描述
AGAGAATTCT AATACGACTC ACTATAGGAT ACGATCGGTC TGAC                    44
(2)SEQ ID NO：15：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：30个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：15：的序列描述
TGTACAGGGG ACCCGCGAAC GGATCCAATT                                    30
(2)SEQ ID NO：16：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：16：的序列描述
CGGCGAATTC ATGCATAGGG GACCCGCGAA CGGATC                             36
(2)SEQ ID NO：17：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：17：的序列描述
CGTCGACTAC GGGATTCTGG                                               20
(2)SEQ ID NO：18：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：18：的序列描述
CAGAGGCAGT ACTCCGTCTG                                              20
(2)SEQ ID NO：19：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：19：的序列描述
AGTCGACGGG ATTCTTGCTT                                              20
(2)SEQ ID NO：20：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：20：的序列描述
GAAGGTGTGC GAGAGGAC                                                18
(2)SEQ ID NO：21：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：44个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：21：的序列描述
AGAGAATTCT AATACGACTC ACTATAGGAT ACGATGGGTC TGAC                   44
(2)SEQ ID NO：22：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：33个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：22：的序列描述
CGATCTGCTG CAGGGGGCCC CCGCAGGCGA AGG                              33
(2)SEQ ID NO：23：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：24个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：23：的序列描述
CTTGAGACTC TTGTTCTCTA CTCC                                        24
(2)SEQ ID NO：24：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：19个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：24：的序列描述
ATACAGCAAA GATCTCGGG                                              19
(2)SEQ ID NO：25：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：2827个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：环形
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/KEY：CDS
    (B)位置：112..2745
(xi)SEQ ID NO：25：的序列描述
GGATACGATG GGTCTGACCC TCTGGGAGTC ACGAATTAAC GTGGCTACTA GGGGCGATAC   60
CCGCCGCTGG CCGCCACGTT AGTGGCTCCT CTTCTTGATG ATTCTGCCAC C ATG AGT   117
                                                         Met Ser
                                                           1
GAC ATT TTC AAC AGT CCA CAG GCG CGA AGC ACG ATC TCA GCA GCG TTC    165
Asp Ile Phe Asn Ser Pro Gln Ala Arg Ser Thr Ile Ser Ala Ala Phe
          5                  10                  15
GGC ATA AAG CCT ACT GCT GGA CAA GAC GTG GAA GAA CTC TTG ATC CCT    213
Gly Ile Lys Pro Thr Ala Gly Gln Asp Val Glu Glu Leu Leu Ile Pro
     20                  25                  30
AAA GTT TGG GTG CCA CCT GAG GAT CCG CTT GCC AGC CCT AGT CGA CTG    261
Lys Val Trp Val Pro Pro Glu Asp Pro Leu Ala Ser Pro Ser Arg Leu
 35                  40                  45                  50
GCA AAG TTC CTC AGA GAG AAC GGC TAC AAA GTT TTG CAG CCA CGG TCT    309
Ala Lys Phe Leu Arg Glu Asn Gly Tyr Lys Val Leu Gln Pro Arg Ser
                 55                  60                  65
CTG CCC GAG AAT GAG GAG TAT GAG ACC GAC CAA ATA CTC CCA GAC TTA    357
Leu Pro Glu Asn Glu Glu Tyr Glu Thr Asp Gln Ile Leu Pro Asp Leu
             70                  75                  80
GCA TGG ATG CGA CAG ATA GAA GGG GCT GTT TTA AAA CCC ACT CTA TCT    425
Ala Trp Met Arg Gln Ile Glu Gly Ala Val Leu Lys Pro Thr Leu Ser
         85                  90                  95
CTC CCT ATT GGA GAT CAG GAG TAC TTC CCA AAG TAC TAC CCA ACA CAT    453
Leu Pro Ile Gly Asp Gln Glu Tyr Phe Pro Lys Tyr Tyr Pro Thr His
    100                 105                 110
CGC CCT AGC AAG GAG AAG CCC AAT GCG TAC CCG CCA GAC ATC GCA CTA    501
Arg Pro Ser Lys Glu Lys Pro Asn Ala Tyr Pro Pro Asp Ile Ala Leu
115                 120                 125                 130
CTC AAG CAG ATG ATT TAC CTG TTT CTC CAG GTT CCA GAG GCC AAC GAG    549
Leu Lys Gln Met Ile Tyr Leu Phe Leu Gln Val Pro Glu Ala Asn Glu
                135                 140                 145
GGC CTA AAG GAT GAA GTA ACC CTC TTG ACC CAA AAC ATA AGG GAC AAG    597
Gly Leu Lys Asp Glu Val Thr Leu Leu Thr Gln Asn Ile Arg Asp Lys
            150                 155                 160
GCC TAT GGA AGT GGG ACC TAC ATG GGA CAA GCA AAT CGA CTT GTG GCC    645
Ala Tyr Gly Ser Gly Thr Tyr Met Gly Gln Ala Asn Arg Leu Val Ala
        165                 170                 175
ATG AAG GAG GTC GCC ACT GGA AGA AAC CCA AAC AAG GAT CCT CTA AAG    693
Met Lys Glu Val Ala Thr Gly Arg Asn Pro Asn Lys Asp Pro Leu Lys
    180                 185                 190
CTT GGG TAC ACT TTT GAG AGC ATC GCG CAG CTA CTT GAC ATC ACA CTA    741
Leu Gly Tyr Thr Phe Glu Ser Ile Ala Gln Leu Leu Asp Ile Thr Leu
195                 200                 205                 210
CCG GTA GGC CCA CCC GGT GAG GAT GAC AAG CCC TGG GTG CCA CTC ACA    789
Pro Val Gly Pro Pro Gly Glu Asp Asp Lys Pro Trp Val Pro Leu Thr
                215                 220                 225
AGA GTG CCG TCA CGG ATG TTG GTG CTG ACG GGA GAC GTA GAT GGC GAC    837
Arg Val Pro Ser Arg Met Leu Val Leu Thr Gly Asp Val Asp Gly Asp
            230                 235                 240
TTT GAG GTT GAA GAT TAC CTT CCC AAA ATC AAC CTC AAG TCA TCA AGT    885
Phe Glu Val Glu Asp Tyr Leu Pro Lys Ile Asn Leu Lys Ser Ser Ser
        245                 250                 255
GGA CTA CCA TAT GTA GGT CGC ACC AAA GGA GAG ACA ATT GGC GAG ATG    933
Gly Leu Pro Tyr Val Gly Arg Thr Lys Gly Glu Thr Ile Gly Glu Met
    260                 265                 270
ATA GCT ATC TCA AAC CAG TTT CTC AGA GAG CTA TCA ACA CTG TTG AAG    981
Ile Ala Ile Ser Asn Gln Phe Leu Arg Glu Leu Ser Thr Leu Leu Lys
275                 280                 285                 290
CAA GGT GCA GGG ACA AAG GGG TCA AAC AAG AAG AAG CTA CTC AGC ATG    1029
Gln Gly Ala Gly Thr Lys Gly Ser Asn Lys Lys Lys Leu Leu Ser Met
                295                 300                 305
TTA AGT GAC TAT TGG TAC TTA TCA TGC GGG CTT TTG TTT CCA AAG GCT    1077
Leu Ser Asp Tyr Trp Tyr Leu Ser Cys Gly Leu Leu Phe Pro Lys Ala
            310                 315                 320
GAA AGG TAC GAC AAA AGT ACA TGG CTC ACC AAG ACC CGG AAC ATA TGG    1125
Glu Arg Tyr Asp Lys Ser Thr Trp Leu Thr Lys Thr Arg Asn Ile Trp
        325                 330                 335
TCA GCT CCA TCC CCA ACA CAC CTC ATG ATC TCT ATG ATC ACC TGG CCC    1173
Ser Ala Pro Ser Pro Thr His Leu Met Ile Ser Met Ile Thr Trp Pro
    340                 345                 350
GTG ATG TCC AAC AGC CCA AAT AAC GTG TTG AAC ATT GAA GGG TGT CCA    1221
Val Met Ser Asn Ser Pro Asn Asn Val Leu Asn Ile Glu Gly Cys Pro
355                 360                 365                 370
TCA CTC TAC AAA TTC AAC CCG TTC AGA GGA GGG TTG AAC AGG ATC GTC    1269
Ser Leu Tyr Lys Phe Asn Pro Phe Arg Gly Gly Leu Asn Arg Ile Val
                375                 380                 385
GAG TGG ATA TTG GCC CCG GAA GAA CCC AAG GCT CTT GTA TAT GCG GAC    1317
Glu Trp Ile Leu Ala Pro Glu Glu Pro Lys Ala Leu Val Tyr Ala Asp
            390                 395                 400
AAC ATA TAC ATT GTC CAC TCA AAC ACG TGG TAC TCA ATT GAC CTA GAG    1365
Asn Ile Tyr Ile Val His Ser Asn Thr Trp Tyr Ser Ile Asp Leu Glu
        405                 410                 415
AAG GGT GAG GCA AAC TGC ACT CGC CAA CAC ATG CAA GCC GCA ATG TAC    1413
Lys Gly Glu Ala Asn Cys Thr Arg Gln His Met Gln Ala Ala Met Tyr
    420                 425                 430
TAC ATA CTC ACC AGA GGG TGG TCA GAC AAC GGC GAC CCA ATG TTC AAT    1461
Tyr Ile Leu Thr Arg Gly Trp Ser Asp Asn Gly Asp Pro Met Phe Asn
435                 440                 445                 450
CAA ACA TGG GCC ACC TTT GCC ATG AAC ATT GCC CCT GCT CTA GTG GTG    1509
Gln Thr Trp Ala Thr Phe Ala Met Asn Ile Ala Pro Ala Leu Val Val
                455                 460                 465
GAC TCA TCG TGC CTG ATA ATG AAC CTG CAA ATT AAG ACC TAT GGT CAA    1557
Asp Ser Ser Cys Leu Ile Met Asn Leu Gln Ile Lys Thr Tyr Gly Gln
            470                 475                 480
GGC AGC GGG AAT GCA GCC ACG TTC ATC AAC AAC CAC CTC TTG AGC ACA    1605
Gly Ser Gly Asn Ala Ala Thr Phe Ile Asn Asn His Leu Leu Ser Thr
        485                 490                 495
CTA GTG CTT GAC CAG TGG AAC CTG ATG AGA CAG CCC AGA CCA GAC AGC    1653
Leu Val Leu Asp Gln Trp Asn Leu Met Arg Gln Pro Arg Pro Asp Ser
    500                 505                 510
GAG GAG TTC AAA TCA ATT GAG GAC AAG CTA GGT ATC AAC TTT AAG ATT    1701
Glu Glu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Lys Leu Gly Ile Asn Phe Lys Ile
515                 520                 525                 530
GAG AGG TCC ATT GAT GAT ATC AGG GGC AAG CTG AGA CAG CTT GTC CTC    1749
Glu Arg Ser Ile Asp Asp Ile Arg Gly Lys Leu Arg Gln Leu Val Leu
                535                 540                 545
CTT GCA CAA CCA GGG TAC CTG AGT GGG GGG GTT GAA CCA GAA CAA TCC    1797
Leu Ala Gln Pro Gly Tyr Leu Ser Gly Gly Val Glu Pro Glu Gln Ser
            550                 555                 560
AGC CCA ACT GTT GAG CTT GAC CTA CTA GGG TGG TCA GCT ACA TAC AGC    1845
Ser Pro Thr Val Glu Leu Asp Leu Leu Gly Trp Ser Ala Thr Tyr Ser
        565                 570                 575
AAA GAT CTC GGG ATC TAT GTG CCG GTG CTT GAC AAG GAA CGC CTA TTT    1893
Lys Asp Leu Gly Ile Tyr Val Pro Val Leu Asp Lys Glu Arg Leu Phe
    580                 585                 590
TGT TCT GCT GCG TAT CCC AAG GGA GTA GAG AAC AAG AGT CTC AAG TCC    1941
Cys Ser Ala Ala Tyr Pro Lys Gly Val Glu Asn Lys Ser Leu Lys Ser
595                 600                 605                 610
AAA GTC GGG ATC GAG CAG GCA TAC AAG GTA GTC AGG TAT GAG GCG TTG    1989
Lys Val Gly Ile Glu Gln Ala Tyr Lys Val Val Arg Tyr Glu Ala Leu
                615                 620                 625
AGG TTG GTA GGT GGT TGG AAC TAC CCA CTC CTG AAC AAA GCC TGC AAG    2037
Arg Leu Val Gly Gly Trp Asn Tyr Pro Leu Leu Asn Lys Ala Cys Lys
            630                 635                 640
AAT AAC GCA GGC GCC GCT CGG CGG CAT CTG GAG GCC AAG GGG TTC CCA    2085
Asn Asn Ala Gly Ala Ala Arg Arg His Leu Glu Ala Lys Gly Phe Pro
        645                 650                 655
CTC GAC GAG TTC CTA GCC GAG TGG TCT GAG CTG TCA GAG TTC GGT GAG    2133
Leu Asp Glu Phe Leu Ala Glu Trp Ser Glu Leu Ser Glu Phe Gly Glu
    660                 665                 670
GCC TTC GAA GGC TTC AAT ATC AAG CTG ACC GTA ACA TCT GAG AGC CTA    2181
Ala Phe Glu Gly Phe Asn Ile Lys Ieu Thr Val Thr Ser Glu Ser Leu
675                 680                 685                 690
GCC GAA CTG AAC AAG CCA GTA CCC CCC AAG CCC CCA AAT GTC AAC AGA    2229
Ala Glu Leu Asn Lys Pro Val Pro Pro Lys Pro Pro Asn Val Asn Arg
                695                 700                 705
CCA GTC AAC ACT GGG GGA CTC AAG GCA GTC AGC AAC GCC CTC AAG ACC    2277
Pro Val Asn Thr Gly Gly Leu Lys Ala Val Ser Asn Ala Leu Lys Thr
            710                 715                 720
GGT CGG TAC AGG AAC GAA GCC GGA CTG AGT GGT CTC GTC CTT CTA GCC    2325
Gly Arg Tyr Arg Asn Glu Ala Gly Leu Ser Gly Leu Val Leu Leu Ala
        725                 730                 735
ACA GCA AGA AGC CGT CTG CAA GAT GCA GTT AAG GCC AAG GCA GAA GCC    2373
Thr Ala Arg Ser Arg Leu Gln Asp Ala Val Lys Ala Lys Ala Glu Ala
    740                 745                 750
GAG AAA CTC CAC AAG TCC AAG CCA GAC GAC CCC GAT GCA GAC TGG TTC    2421
Glu Lys Leu His Lys Ser Lys Pro Asp Asp Pro Asp Ala Asp Trp Phe
755                 760                 765                 770
GAA AGA TCA GAA ACT CTG TCA GAC CTT CTG GAG AAA GCC GAC ATC GCC    2469
Glu Arg Ser Glu Thr Leu Ser Asp Leu Leu Glu Lys Ala Asp Ile Ala
                775                 780                 785
AGC AAG GTC GCC CAC TCA GCA CTC GTG GAA ACA AGC GAC GCC CTT GAA    2517
Ser Lys Val Ala His Ser Ala Leu Val Glu Thr Ser Asp Ala Leu Glu
            790                 795                 800
GCA GTT CAG TCG ACT TCC GTG TAC ACC CCC AAG TAC CCA GAA GTC AAG    2565
Ala Val Gln Ser Thr Ser Val Tyr Thr Pro Lys Tyr Pro Glu Val Lys
        805                 810                 815
AAC CCA CAG ACC GCC TCC AAC CCC GTT GTT GGG CTC CAC CTG CCC GCC    2613
Asn Pro Gln Thr Ala Ser Asn Pro Val Val Gly Leu His Leu Pro Ala
    820                 825                 830
AAG AGA GCC ACC GGT GTC CAG GCC GCT CTT CTC GGA GCA GGA ACG AGC    2661
Lys Arg Ala Thr Gly Val Gln Ala Ala Leu Leu Gly Ala Gly Thr Ser
835                 840                 845                 850
AGA CCA ATG GGG ATG GAG GCC CCA ACA CGG TCC AAG AAC GCC GTG AAA    2709
Arg Pro Met Gly Met Glu Ala Pro Thr Arg Ser Lys Asn Ala Val Lys
                855                 860                 865
ATG GCC AAA CGG CGG CAA CGC CAA AAG GAG AGC CGC TAACAGCCAT         2755
Met Ala Lys Arg Arg Gln Arg Gln Lys Glu Ser Arg
            870                 875
GATGGGAACC ACTCAAGAAG AGGACACTAA TCCCAGACCC CGTATCCCCG GCCTTCGCCT  2815
GCGGGGGCCC CC                                                      2827
(2)SEQ ID NO：26：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：878个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：26：的序列描述
Met Ser Asp Ile Phe Asn Ser Pro Gln Ala Arg Ser Thr Ile Ser Ala
  1               5                  10                  15
Ala Phe Gly Ile Lys Pro Thr Ala Gly Gln Asp Val Glu Glu Leu Leu
             20                  25                  30
Ile Pro Lys Val Trp Val Pro Pro Glu Asp Pro Leu Ala Ser Pro Ser
         35                  40                  45
Arg Leu Ala Lys Phe Leu Arg Glu Asn Gly Tyr Lys Val Leu Gln Pro
     50                  55                  60
Arg Ser Leu Pro Glu Asn Glu Glu Tyr Glu Thr Asp Gln Ile Leu Pro
 65                  70                  75                  80
Asp Leu Ala Trp Met Arg Gln Ile Glu Gly Ala Val Leu Lys Pro Thr
                 85                  90                  95
Leu Ser Leu Pro Ile Gly Asp Gln Glu Tyr Phe Pro Lys Tyr Tyr Pro
            100                 105                 110
Thr His Arg Pro Ser Lys Glu Lys Pro Asn Ala Tyr Pro Pro Asp Ile
        115                 120                 125
Ala Leu Leu Lys Gln Met Ile Tyr Leu Phe Leu Gln Val Pro Glu Ala
    130                 135                 140
Asn Glu Gly Leu Lys Asp Glu Val Thr Leu Leu Thr Gln Asn Ile Arg
145                 150                 155                 160
Asp Lys Ala Tyr Gly Ser Gly Thr Tyr Met Gly Gln Ala Asn Arg Leu
                165                 170                 175
Val Ala Met Lys Glu Val Ala Thr Gly Arg Asn Pro Asn Lys Asp Pro
            180                 185                 190
Leu Lys Leu Gly Tyr Thr Phe Glu Ser Ile Ala Gln Leu Leu Asp Ile
        195                 200                 205
Thr Leu Pro Val Gly Pro Pro Gly Glu Asp Asp Lys Pro Trp Val Pro
    210                 215                 220
Leu Thr Arg Val Pro Ser Arg Met Leu Val Leu Thr Gly Asp Val Asp
225                 230                 235                 240
Gly Asp Phe Glu Val Glu Asp Tyr Leu Pro Lys Ile Asn Leu Lys Ser
                245                 250                 255
Ser Ser Gly Leu Pro Tyr Val Gly Arg Thr Lys Gly Glu Thr Ile Gly
            260                 265                 270
Glu Met Ile Ala Ile Ser Asn Gln Phe Leu Arg Glu Leu Ser Thr Leu
        275                 280                 285
Leu Lys Gln Gly Ala Gly Thr Lys Gly Ser Asn Lys Lys Lys Leu Leu
    290                 295                 300
Ser Met Leu Ser Asp Tyr Trp Tyr Leu Ser Cys Gly Leu Leu Phe Pro
305                 310                 315                 320
Lys Ala Glu Arg Tyr Asp Lys Ser Thr Trp Leu Thr Lys Thr Arg Asn
                325                 330                 335
Ile Trp Ser Ala Pro Ser Pro Thr His Leu Met Ile Ser Met Ile Thr
            340                 345                 350
Trp Pro Val Met Ser Asn Ser Pro Asn Asn Val Leu Asn Ile Glu Gly
        355                 360                 365
Cys Pro Ser Leu Tyr Lys Phe Asn Pro Phe Arg Gly Gly Leu Asn Arg
    370                 375                 380
Ile Val Glu Trp Ile Leu Ala Pro Glu Glu Pro Lys Ala Leu Val Tyr
385                 390                 395                 400
Ala Asp Asn Ile Tyr Ile Val His Ser Asn Thr Trp Tyr Ser Ile Asp
                405                 410                 415
Leu Glu Lys Gly Glu Ala Asn Cys Thr Arg Gln His Met Gln Ala Ala
            420                 425                 430
Met Tyr Tyr Ile Leu Thr Arg Gly Trp Ser Asp Asn Gly Asp Pro Met
        435                 440                 445
Phe Asn Gln Thr Trp Ala Thr Phe Ala Met Asn Ile Ala Pro Ala Leu
    450                 455                 460
Val Val Asp Ser Ser Cys Leu Ile Met Asn Leu Gln Ile Lys Thr Tyr
465                 470                 475                 480
Gly Gln Gly Ser Gly Asn Ala Ala Thr Phe Ile Asn Asn His Leu Leu
                485                 490                 495
Ser Thr Leu Val Leu Asp Gln Trp Asn Leu Met Arg Gln Pro Arg Pro
            500                 505                 510
Asp Ser Glu Glu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Lye Leu Gly Ile Asn Phe
        515                 520                 525
Lys Ile Glu Arg Ser Ile Asp Asp Ile Arg Gly Lys Leu Arg Gln Leu
    530                 535                 540
Val Leu Leu Ala Gln Pro Gly Tyr Leu Ser Gly Gly Val Glu Pro Glu
545                 550                 555                 560
Gln Ser Ser Pro Thr Val Glu Leu Asp Leu Leu Gly Trp Ser Ala Thr
                565                 570                 575
Tyr Ser Lys Asp Leu Gly Ile Tyr Val Pro Val Leu Asp Lys Glu Arg
            580                 585                 590
Leu Phe Cys Ser Ala Ala Tyr Pro Lys Gly Val Glu Asn Lys Ser Leu
        595                 600                 605
Lys Ser Lys Val Gly Ile Glu Gln Ala Tyr Lys Val Val Arg Tyr Glu
    610                 615                 620
Ala Leu Arg Leu Val Gly Gly Trp Asn Tyr Pro Leu Leu Asn Lys Ala
625                 630                 635                 640
Cys Lys Asn Asn Ala Gly Ala Ala Arg Arg His Leu Glu Ala Lys Gly
                645                 650                 655
Phe Pro Leu Asp Glu Phe Leu Ala Glu Trp Ser Glu Leu Ser Glu Phe
            660                 665                 670
Gly Glu Ala Phe Glu Gly Phe Asn Ile Lys Leu Thr Val Thr Ser Glu
        675                 680                 685
Ser Leu Ala Glu Leu Asn Lys Pro Val Pro Pro Lys Pro Pro Asn Val
    690                 695                 700
Asn Arg Pro Val Asn Thr Gly Gly Leu Lys Ala Val Ser Asn Ala Leu
705                 710                 715                 720
Lys Thr Gly Arg Tyr Arg Asn Glu Ala Gly Leu Ser Gly Leu Val Leu
                725                 730                 735
Leu Ala Thr Ala Arg Ser Arg Leu Gln Asp Ala Val Lys Ala Lys Ala
            740                 745                 750
Glu Ala Glu Lys Leu His Lys Ser Lys Pro Asp Asp Pro Asp Ala Asp
        755                 760                 765
Trp Phe Glu Arg Ser Glu Thr Leu Ser Asp Leu Leu Glu Lys Ala Asp
    770                 775                 780
Ile Ala Ser Lys Val Ala His Ser Ala Leu Val Glu Thr Ser Asp Ala
785                 790                 795                 800
Leu Glu Ala Val Gln Ser Thr Ser Val Tyr Thr Pro Lys Tyr Pro Glu
                805                 810                 815
Val Lys Asn Pro Gln Thr Ala Ser Asn Pro Val Val Gly Leu His Leu
            820                 825                 830
Pro Ala Lys Arg Ala Thr Gly Val Gln Ala Ala Leu Leu Gly Ala Gly
        835                 840                 845
Thr Ser Arg Pro Met Gly Met Glu Ala Pro Thr Arg Ser Lys Asn Ala
    850                 855                 860
Val Lys Met Ala Lys Arg Arg Gln Arg Gln Lys Glu Ser Arg
865                 870                 875
(2)SEQ ID NO：27：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3261个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：环形
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征
    (A)名称/KEY：CDS
    (B)位置：97..531
(xi)SEQ ID NO：27：的序列描述
(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：27：
GGATACGATC GGTCTGACCC CGGGGGAGTC ACCCGGGGAC AGGCCGTCAA GGCCTTGTTC   60
CAGGATGGGA CTCCTCCTTC TACAACGCTA TCATTG ATG GTT AGT AGA GAT CAG    114
                                        Met Val Ser Arg Asp Gln
                                            880
ACA AAC GAT CGC AGC GAT GAC AAA CCT GCA AGA TCA AAC CCA ACA GAT    162
Thr Asn Asp Arg Ser Asp Asp Lys Pro Ala Arg Ser Asn Pro Thr Asp
885                 890                 895                 900
TGT TCC GTT CAT ACG GAG CCT TCT GAT GCC AAC AAC CGG ACC GGC GTC    210
Cys Ser Val His Thr Glu Pro Ser Asp Ala Asn Asn Arg Thr Gly Val
                905                 910                 915
CAT TCC GGA CGA CAC CCT GGA GAA GCA CAC TCT CAG GTC AGA GAC CTC    258
His Ser Gly Arg His Pro Gly Glu Ala His Ser Gln Val Arg Asp Leu
            920                 925                 930
GAC CTA CAA TTT GAC TGT GGG GGA CAC AGG GTC AGG GCT AAT TGT CTT    306
Asp Leu Gln Phe Asp Cys Gly Gly His Arg Val Arg Ala Asn Cys Leu
        935                 940                 945
TTT CCC TGG ATT CCC TGG CTC AAT TGT GGG TGC TCA CTA CAC ACT GCA    354
Phe Pro Trp Ile Pro Trp Leu Asn Cys Gly Cys Ser Leu His Thr Ala
    950                 955                 960
GGG CAA TGG GAA CTA CAA GTT CGA TCA GAT GCT CCT GAC TGC CCA GAA     402
Gly Gln Trp Glu Leu Gln Val Arg Ser Asp Ala Pro Asp Cys Pro Glu
965                 970                  975                980
CCT ACC GGC CAG TTA CAA CTA CTG CAG GCT AGT GAG TCG GAG TCT CAC     450
Pro Thr Gly Gln Leu Gln Leu Leu Gln Ala Ser Glu Ser Glu Ser His
                985                 990                 995
AGT GAG GTC AAG CAC ACT TCC TGG TGG CGT TTA TGC ACT AAA CGG CAC     498
Ser Glu Val Lys His Thr Ser Trp Trp Arg Leu Cys Thr Lys Arg His
            1000                1005                1010
CAT AAA CGC CGT GAC CTT CCA AGG AAG CCT GAG TGAACTGACA GATGTTAGCT   551
His Lys Arg Arg Asp Leu Pro Arg Lys Pro Glu
        1015                1020
ACAATGGGTT GATGTCTGCA ACAGCCAACA TCAACGACAA AATTGGGAAC GTCCTAGTAG   611
GGGAAGGGGT CACCGTCCTC AGCTTACCCA CATCATATGA TCTTGGGTAT GTGAGGCTTG   671
GTGACCCCAT TCCCGCAATA GGGCTTGACC CAAAAATGGT AGCCACATGT GACAGCAGTG   731
ACAGGCCCAG AGTCTACACC ATAACTGCAG CCGATGATTA CCAATTCTCA TCACAGTACC   791
AACCAGGTGG GGTAACAATC ACACTGTTCT CAGCCAACAT TGATGCCATC ACAAGCCTCA   851
GCGTTGGGGG AGAGCTCGTG TTTCAAACAA GCGTCCACGG CCTTGTACTG GGCGCCACCA   911
TCTACCTCAT AGGCTTTGAT GGGACAACGG TAATCACCAG GGCTGTGGCC GCAAACAATG   971
GGCTGACGAC CGGCACCGAC AACCTTATGC CATTCAATCT TGTGATTCCA ACAAACGAGA  1031
TAACCCAGCC AATCACATCC ATCAAACTGG AGAAAGTGAC CTCCAAAAGT GGTGGTCAGG  1091
CAGGGGATCA GATGTCATGG TCGGCAAGAG GGAGCCTAGC AGTGACGATC CATGGTGGCA  1151
ACTATCCAGG GGCCCTCCGT CCCGTCACGC TAGTGGCCTA CGAAAGAGTG GCAACAGGAT  1211
CCGTCGTTAC GGTCGCTGGG GTGAGCAACT TCGAGCTGAT CCCAAATCCT GAACTAGCAA  1271
AGAACCTGGT TACAGAATAC GGCCGATTTG ACCCAAGAGC CATGAACTAC ACAAAATTGA  1331
TACTGAGTGA GAGGGACCGT CTTGGCATCA AGACCGTCTG GCCAACAAGG GAGTACACTG  1391
ACTTTCGTGA ATACTTCATG GAGGTGGCCG ACCTCAACTC TCCCCTGAAG ATTGCAGGAG  1451
CATTCGGCTT CAAAGACATA ATCCGGGCCA TAAGGAGGAT AGCTGTGCCG GTGGTCTCCA  1511
CATTGTTCCC ACCTGCCGCT CCCCTAGCCC ATGCAATTGG GGAAGGTGTA GACTACCTGC  1571
TGGGCGATGA GGCACAGGCT GCTTCAGGAA CTGCTCGAGC CGCGTCAGGA AAAGCAAGAG  1631
CTGCCTCAGG CCGCATAAGG CAGCTGACTC TCGCCGCCGA CAAGGGGTAC GAGGTAGTCG  1691
CGAATCTATT CCAGGTGCCC CAGAATCCCG TAGTCGACGG GATTCTTGCT TCACCTGGGG  1751
TACTCCGCGG TGCACACAAC CTCGACTGCG TGTTAAGAGA GGGTGCCACG CTATTCCCTG  1811
TGGTTATTAC GACAGTGGAA GACGCCATGA CACCCAAAGC ATTGAACAGC AAAATGTTTG  1871
CTGTCATTGA AGGCGTGCGA GAAGACCTCC AACCTCCATC TCAAAGAGGA TCCTTCATAC  1931
GAACTCTCTC TGGACACAGA GTCTATGGAT ATGCTCCAGA TGGGGTACTT CCACTGGAGA  1991
CTGGGAGAGA CTACACCGTT GTCCCAATAG ATGATGTCTG GGACGACAGC ATTATGCTGT  2051
CCAAAGATCC CATACCTCCT ATTGTGGGAA ACAGTGGAAA TCTAGCCATA GCTTACATGG  2111
ATGTGTTTCG ACCCAAAGTC CCAATCCATG TGGCTATGAC GGGAGCCCTC AATGCTTGTG  2171
GCGAGATTGA GAAAGTAAGC TTTAGAAGCA CCAAGCTCGC CACTGCACAC CGACTTGGCC  2231
TTAGGTTGGC TGGTCCCGGA GCATTCGATG TAAACACCGG GCCCAACTGG GCAACGTTCA  2291
TCAAACGTTT CCCTCACAAT CCACGCGACT GGGACAGGCT CCCCTACCTC AACCTACCAT  2351
ACCTTCCACC CAATGCAGGA CGCCAGTACC ACCTTGCCAT GGCTGCATCA GAGTTCAAAG  2411
AGACCCCCGA ACTCGAGAGT GCCGTCAGAG CAATGGAAGC AGCAGCCAAC GTGGACCCAC  2471
TATTCCAATC TGCACTCAGT GTGTTCATGT GGCTGGAAGA GAATGGGATT GTGACTGACA  2531
TGGCCAACTT CGCACTCAGC GACCCGAACG CCCATCGGAT GCGAAATTTT CTTGCAAACG  2591
CACCACAAGC AGGCAGCAAG TCGCAAAGGG CCAAGTACGG GACAGCAGGC TACGGAGTGG  2651
AGGCTCGGGG CCCCACACCA GAGGAAGCAC AGAGGGAAAA AGACACACGG ATCTCAAAGA  2711
AGATGGAGAC CATGGGCATC TACTTTGCAA CACCAGAATG GGTAGCACTC AATGGGCACC  2771
GAGGGCCAAG CCCCGGCCAG CTAAAGTACT GGCAGAACAC ACGAGAAATA CCGGACCCAA  2831
ACGAGGACTA TCTAGACTAC GTGCATGCAG AGAAGAGCCG GTTGGCATCA GAAGAACAAA  2891
TTCTAAGGGC AGCTACGTCG ATCTACGGGG CTCCAGGACA GGCAGAGCCA CCCCAAGCTT  2951
TCATAGACGA AGTTGCCAAA GTCTATGAAA TCAACCATGG ACGTGGCCCA AACCAAGAAC  3011
AGATGAAAGA TCTGCTCTTG ACTGCGATGG AGATGAAGCA TCGCAATCCC AGGCGGGCTC  3071
TACCAAAGCC CAAGCCAAAA CCCAATGCTC CAACACAGAG ACCCCCTGGT CGGCTGGGCC  3131
GCTGGATCAG GACCGTCTCT GATGAGGACC TTGAGTGAGG CTCCTGGGAG TCTCCCGACA  3191
CCACCCGCGC AGGTGTGGAC ACCAATTCGG CCTTACAACA TCCCAAATTG GATCCGTTCG  3251
CGGGTCCCCT                                                         3261
(2)SEQ ID NO：28：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：145氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：28：的序列描述
Met Val Ser Arg Asp Gln Thr Asn Asp Arg Ser Asp Asp Lys Pro Ala
  1               5                  10                  15
Arg Ser Asn Pro Thr Asp Cys Ser Val His Thr Glu Pro Ser Asp Ala
             20                  25                  30
Asn Asn Arg Thr Gly Val His Ser Gly Arg His Pro Gly Glu Ala His
         35                  40                  45
Ser Gln Val Arg Asp Leu Asp Leu Gln Phe Asp Cys Gly Gly His Arg
     50                  55                  60
Val Arg Ala Asn Cys Leu Phe Pro Trp Ile Pro Trp Leu Asn Cys Gly
 65                  70                  75                  80
Cys Ser Leu His Thr Ala Gly Gln Trp Glu Leu Gln Val Arg ser Asp
                 85                  90                  95
Ala Pro Asp Cys Pro Glu Pro Thr Gly Gln Leu Gln Leu Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Ser Glu Ser Glu Ser His Ser Glu Val Lys His Thr Ser Trp Trp Arg
        115                 120                 125
Leu Cys Thr Lys Arg His His Lys Arg Arg Asp Leu Pro Arg Lys Pro
    130                 135                 140
Glu
145
(2)SEQ ID NO：29：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3261个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：环形
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/KEY：CDS
    (B)位置：131..3166
(xi)SEQ ID NO：29：的序列描述
GGATACGATC GGTCTGACCC CGGGGGAGTC ACCCGGGGAC AGGCCGTCAA GGCCTTGTTC   60
CAGGATGGGA CTCCTCCTTC TACAACGCTA TCATTGATGG TTAGTAGAGA TCAGACAAAC  120
GATCGCAGCG ATG ACA AAC CTG CAA GAT CAA ACC CAA CAG ATT GTT CCG     169
           Met Thr Asn Leu Gln Asp Gln Thr Gln Gln Ile Val Pro
                           150                 155
TTC ATA CGG AGC CTT CTG ATG CCA ACA ACC GGA CCG GCG TCC ATT CCG    217
Phe Ile Arg Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro
    160                 165                 170
GAC GAC ACC CTG GAG AAG CAC ACT CTC AGG TCA GAG ACC TCG ACC TAC    265
Asp Asp Thr Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr
175                 180                 185                 190
AAT TTG ACT GTG GGG GAC ACA GGG TCA GGG CTA ATT GTC TTT TTC CCT    313
Asn Leu Thr Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro
                195                 200                 205
GGA TTC CCT GGC TCA ATT GTG GGT GCT CAC TAC ACA CTG CAG GGC AAT    361
Gly Phe Pro Gly Ser Ile Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Gly Asn
            210                 215                 220
GGG AAC TAC AAG TTC GAT CAG ATG CTC CTG ACT GCC CAG AAC CTA CCG    409
Gly Asn Tyr Lys Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro
        225                 230                 235
GCC AGT TAC AAC TAC TGC AGG CTA GTG AGT CGG AGT CTC ACA GTG AGG    457
Ala Ser Tyr Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg
    240                 245                 250
TCA AGC ACA CTT CCT GGT GGC GTT TAT GCA CTA AAC GGC ACC ATA AAC    505
Ser Ser Thr Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn
255                 260                 265                 270
GCC GTG ACC TTC CAA GGA AGC CTG AGT GAA CTG ACA GAT GTT AGC TAC    553
Ala Val Thr Phe Gln Gly Ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Val Ser Tyr
                275                 280                 285
AAT GGG TTG ATG TCT GCA ACA GCC AAC ATC AAC GAC AAA ATT GGG AAC    601
Asn Gly Leu Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn
            290                 295                 300
GTC CTA GTA GGG GAA GGG GTC ACC GTC CTC AGC TTA CCC ACA TCA TAT    649
Val Leu Val Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr
        305                 310                 315
GAT CTT GGG TAT GTG AGG CTT GGT GAC CCC ATT CCC GCA ATA GGG CTT    697
Asp Leu Gly Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ile Gly Leu
    320                 325                 330
GAC CCA AAA ATG GTA GCC ACA TGT GAC AGC AGT GAC AGG CCC AGA GTC    745
Asp Pro Lys Met Val Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val
335                 340                 345                 350
TAC ACC ATA ACT GCA GCC GAT GAT TAC CAA TTC TCA TCA CAG TAC CAA    793
Tyr Thr Ile Thr Ala Ala Asp Asp Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Tyr Gln
                355                 360                 365
CCA GGT GGG GTA ACA ATC ACA CTG TTC TCA GCC AAC ATT GAT GCC ATC    841
Pro Gly Gly Val Thr Ile Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile
            370                 375                 380
ACA AGC CTC AGC GTT GGG GGA GAG CTC GTG TTT CAA ACA AGC GTC CAC    889
Thr Ser Leu Ser Val Gly Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val His
        385                 390                 395
GGC CTT GTA CTG GGC GCC ACC ATC TAC CTC ATA GGC TTT GAT GGG ACA    937
Gly Leu Val Leu Gly Ala Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr
    400                 405                 410
ACG GTA ATC ACC AGG GCT GTG GCC GCA AAC AAT GGG CTG ACG ACC GGC    985
Thr Val Ile Thr Arg Ala Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly
415                 420                 425                 430
ACC GAC AAC CTT ATG CCA TTC AAT CTT GTG ATT CCA ACA AAC GAG ATA    1033
Thr Asp Asn Leu Met Pro Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile
                435                 440                 445
ACC CAG CCA ATC ACA TCC ATC AAA CTG GAG ATA GTG ACC TCC AAA AGT    1081
Thr Gln Pro Ile Thr Ser Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser
            450                 455                 460
GGT GGT CAG GCA GGG GAT CAG ATG TCA TGG TCG GCA AGA GGG AGC CTA    1129
Gly Gly Gln Ala Gly Asp Gln Met Ser Trp Ser Ala Arg Gly Ser Leu
        465                 470                 475
GCA GTG ACG ATC CAT GGT GGC AAC TAT CCA GGG GCC CTC CGT CCC GTC    1177
Ala Val Thr Ile His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val
    480                 485                 490
ACG CTA GTG GCC TAC GAA AGA GTG GCA ACA GGA TCC GTC GTT ACG GTC    1225
Thr Leu Val Ala Tyr Glu Arg Val Ala Thr Gly Ser Val Val Thr Val
495                 500                 505                 510
GCT GGG GTG AGC AAC TTC GAG CTG ATC CCA AAT CCT GAA CTA GCA AAG    1273
Ala Gly Val Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys
                515                 520                 525
AAC CTG GTT ACA GAA TAC GGC CGA TTT GAC CCA GGA GCC ATG AAC TAC    1321
Asn Leu Val Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr
            530                 535                 540
ACA AAA TTG ATA CTG AGT GAG AGG GAC CGT CTT GGC ATC AAG ACC GTC    1369
Thr Lys Leu Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val
        545                 550                 555
TGG CCA ACA AGG GAG TAC ACT GAC TTT CGT GAA TAC TTC ATG GAG GTG    1417
Trp Pro Thr Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val
    560                 565                 570
GCC GAC CTC AAC TCT CCC CTG AAG ATT GCA GGA GCA TTC GGC TTC AAA    1465
Ala Asp Leu Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys
575                 580                 585                 590
GAC ATA ATC CGG GCC ATA AGG AGG ATA GCT GTG CCG GTG GTC TCC ACA    1513
Asp Ile Ile Arg Ala Ile Arg Arg Ile Ala Val Pro Val Val Ser Thr
                595                 600                 605
TTG TTC CCA CCT GCC GCT CCC CTA GCC CAT GCA ATT GGG GAA GGT GTA    1561
Leu Phe Pro Pro Ala Ala Pro Leu Ala His Ala Ile Gly Glu Gly Val
            610                 615                 620
GAC TAC CTG CTG GGC GAT GAG GCA CAG GCT GCT TCA GGA ACT GCT CGA    1609
Asp Tyr Leu Leu Gly Asp Glu Ala Gln Ala Ala Ser Gly Thr Ala Arg
        625                 630                 635
GCC GCG TCA GGA AAA GCA AGA GCT GCC TCA GGC CGC ATA AGG CAG CTG    1657
Ala Ala Ser Gly Lys Ala Arg Ala Ala Ser Gly Arg Ile Arg Gln Leu
    640                 645                 650
ACT CTC GCC GCC GAC AAG GGG TAC GAG GTA GTC GCG AAT CTA TTC CAG    1705
Thr Leu Ala Ala Asp Lys Gly Tyr Glu Val Val Ala Asn Leu Phe Gln
655                 660                 665                 670
GTG CCC CAG AAT CCC GTA GTC GAC GGG ATT CTT GCT TCA CCT GGG GTA    1753
Val Pro Gln Asn Pro Val Val Asp Gly Ile Leu Ala Ser Pro Gly Val
                675                 680                 685
CTC CGC GGT GCA CAC AAC CTC GAC TGC GTG TTA AGA GAG GGT GCC ACG    1801
Leu Arg Gly Ala His Asn Leu Asp Cys Val Leu Arg Glu Gly Ala Thr
            690                 695                 700
CTA TTC CCT GTG GTT ATT ACG ACA GTG GAA GAC GCC ATG ACA CCC AAA    1849
Leu Phe Pro ValVal  Ile Thr Thr Val Glu Asp Ala Met Thr Pro Lys
        705                 710                 715
GCA TTG AAC AGC AAA ATG TTT GCT GTC ATT GAA GGC GTG CGA GAA GAC    1897
Ala Leu Asn Ser Lys Met Phe Ala Val Ile Glu Gly Val Arg Glu Asp
    720                 725                 730
CTC CAA CCT CCA TCT CAA AGA GGA TCC TTC ATA CGA ACT CTC TCT GGA    1945
Leu Gln Pro Pro Ser Gln Arg Gly Ser Phe Ile Arg Thr Leu Ser Gly
735                 740                 745                 750
CAC AGA GTC TAT GGA TAT GCT CCA GAT GGG GTA CTT CCA CTG GAG ACT    1993
His Arg Val Tyr Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Leu Pro Leu Glu Thr
                755                 760                 765
GGG AGA GAC TAC ACC GTT GTC CCA ATA GAT GAT GTC TGG GAC GAC AGC    2041
Gly Arg Asp Tyr Thr Val Val Pro Ile Asp Asp Val Trp Asp Asp Ser
            770                 775                 780
ATT ATG CTG TCC AAA GAT CCC ATA CCT CCT ATT GTG GGA AAC AGT GGA    2089
Ile Met Leu Ser Lys Asp Pro Ile Pro Pro Ile Val Gly Asn Ser Gly
        785                 790                 795
AAT CTA GCC ATA GCT TAC ATG GAT GTG TTT CGA CCC AAA GTC CCA ATC    2137
Asn Leu Ala Ile Ala Tyr Met Asp Val Phe Arg Pro Lys Val Pro Ile
    800                 805                 810
CAT GTG GCT ATG ACG GGA GCC CTC AAT GCT TGT GGC GAG ATT GAG AAA    2185
His Val Ala Met Thr Gly Ala Leu Asn Ala Cys Gly Glu Ile Glu Lys
815                 820                 825                 830
GTA AGC TTT AGA AGC ACC AAG CTC GCC ACT GCA CAC CGA CTT GGC CTT    2233
Val Ser Phe Arg Ser Thr Lys Leu Ala Thr Ala His Arg Leu Gly Leu
                835                 840                 845
AGG TTG GCT GGT CCC GGA GCA TTC GAT GTA AAC ACC GGG CCC AAC TGG    2281
Arg Leu Ala Gly Pro Gly Ala Phe Asp Val Asn Thr Gly Pro Asn Trp
            850                 855                 860
GCA ACG TTC ATC AAA CGT TTC CCT CAC AAT CCA CGC GAC TGG GAC AGG    2329
Ala Thr Phe Ile Lys Arg Phe Pro His Asn Pro Arg Asp Trp Asp Arg
        865                 870                 875
CTC CCC TAC CTC AAC CTA CCA TAC CTT CCA CCC AAT GCA GGA CGC CAG    2377
Leu Pro Tyr Leu Asn Leu Pro Tyr Leu Pro Pro Asn Ala Gly Arg Gln
    880                 885                 890
TAC CAC CTT GCC ATG GCT GCA TCA GAG TTC AAA GAG ACC CCC GAA CTC    2425
Tyr His Leu Ala Met Ala Ala Ser Glu Phe Lys Glu Thr Pro Glu Leu
895                 900                 905                 910
GAG AGT GCC GTC AGA GCA ATG GAA GCA GCA GCC AAC GTG GAC CCA CTA    2473
Glu Ser Ala Val Arg Ala Met Glu Ala Ala Ala Asn Val Asp Pro Leu
                915                 920                 925
TTC CAA TCT GCA CTC AGT GTG TTC ATG TGG CTG GAA GAG AAT GGG ATT    2521
Phe Gln Ser Ala Leu Ser Val Phe Met Trp Leu Glu Glu Asn Gly Ile
            930                 935                 940
GTG ACT GAC ATG GCC AAC TTC GCA CTC AGC GAC CCG AAC GCC CAT CGG    2569
Val Thr Asp Met Ala Asn Phe Ala Leu Ser Asp Pro Asn Ala His Arg
        945                 950                 955
ATG CGA AAT TTT CTT GCA AAC GCA CCA CAA GCA GGC AGC AAG TCG CAA    2617
Met Arg Asn Phe Leu Ala Asn Ala Pro Gln Ala Gly Ser Lys Ser Gln
    960                 965                 970
AGG GCC AAG TAC GGG ACA GCA GGC TAC GGA GTG GAG GCT CGG GGC CCC    2665
Arg Ala Lys Tyr Gly Thr Ala Gly Tyr Gly Val Glu Ala Arg Gly Pro
975                 980                 985                 990
ACA CCA GAG GAA GCA CAG AGG GAA AAA GAC ACA CGG ATC TCA AAG AAG    2713
Thr Pro Glu Glu Ala Gln Arg Glu Lys Asp Thr Arg Ile Ser Lys Lys
                995                 1000                1005
ATG GAG ACC ATG GGC ATC TAC TTT GCA ACA CCA GAA TGG GTA GCA CTC    2761
Met Glu Thr Met Gly Ile Tyr Phe Ala Thr Pro Glu Trp Val Ala Leu
            1010                1015                1020
AAT GGG CAC CGA GGG CCA AGC CCC GGC CAG CTA AAG TAC TGG CAG AAC    2809
Asn Gly His Arg Gly Pro Ser Pro Gly Gln Leu Lys Tyr Trp Gln Asn
        1025                1030                1035
ACA CGA GAA ATA CCG GAC CCA AAC GAG GAC TAT CTA GAC TAC GTG CAT    2857
Thr Arg Glu Ile Pro Asp Pro Asn Glu Asp Tyr Leu Asp Tyr Val His
    1040                1045                1050
GCA GAG AAG AGC CGG TTG GCA TCA GAA GAA CAA ATC CTA AGG GCA GCT    2905
Ala Glu Lys Ser Arg Leu Ala Ser Glu Glu Gln Ile Leu Arg Ala Ala
1055                1060                1065                1070
ACG TCG ATC TAC GGG GCT CCA GGA CAG GCA GAG CCA CCC CAA GCT TTC    2953
Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Ala Glu Pro Pro Gln Ala Phe
                1075                1080                1085
ATA GAC GAA GTT GCC AAA GTC TAT GAA ATC AAC CAT GGA CGT GGC CCA    3001
Ile Asp Glu Val Ala Lys Val Tyr Glu Ile Asn His Gly Arg Gly Pro
            1090                1095                1100
AAC CAA GAA CAG ATG AAA GAT CTG CTC TTG ACT GCG ATG GAG ATG AAG    3049
Asn Gln Glu Gln Met Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Met Glu Met Lys
        1105                1110                1115
CAT CGC AAT CCC AGG CGG GCT CTA CCA AAG CCC AAG CCA AAA CCC AAT    3097
His Arg Asn Pro Arg Arg Ala Leu Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Asn
    1120                1125                1130
GCT CCA ACA CAG AGA CCC CCT GGT CGG CTG GGC CGC TGG ATC AGG ACC    3145
Ala Pro Thr Gln Arg Pro Pro Gly Arg Leu Gly Arg Trp Ile Arg Thr
1135                1140                1145                1150
GTC TCT GAT GAG GAC CTT GAG TGAGGCTCCT GGGAGTCTCC  CGACACCACC      3196
Val Ser Asp Glu Asp Leu Glu
                1155
CGCGCAGGTG TGGACACCAA TTCGGCCTTA CAACATCCCA AATTGGATCC GTTCGCGGGT  3256
CCCCT                                                              3261
(2)SEQ ID NO：30：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1012个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：30：的序列描述
Met Thr Asn Leu Gln Asp Gln Thr Gln Gln Ile Val Pro Phe Ile Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Cly Pro Ala Ser Ile Pro Asp Asp Thr
             20                  25                  30
Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr Asn Leu Thr
         35                  40                  45
Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro Gly Phe Pro
     50                  55                  60
Gly Ser Ile Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Gly Asn Gly Asn Tyr
65                   70                  75                  80
Lys Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro Ala Ser Tyr
                 85                  90                  95
Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg Ser Ser Thr
            100                 105                 110
Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn Ala Val Thr
        115                 120                 125
Phe Gln Gly ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Val Ser Tyr Asn Gly Leu
    130                 135                 140
Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn Val Leu Val
145                 150                 155                 160
Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr Asp Leu Gly
                165                 170                 175
Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ile Gly Leu Asp Pro Lys
            180                 185                 190
Met Val Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val Tyr Thr Ile
        195                 200                 205
Thr Ala Ala Asp Asp Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Tyr Gln Pro Gly Gly
    210                 215                 220
Val Thr Ile Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu
225                 230                 235                 240
Ser Val Gly Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val His Gly Leu Val
                245                 250                 255
Leu Gly Ala Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Thr Val Ile
            260                 265                 270
Thr Arg Ala Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn
        275                 280                 285
Leu Met Pro Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln Pro
    290                 295                 300
Ile Thr Ser Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln
305                 310                 315                 320
Ala Gly Asp Gln Met Ser Trp Ser Ala Arg Gly Ser Leu Ala Val Thr
                325                 330                 335
Ile His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val Thr Leu Val
            340                 345                 350
Ala Tyr Glu Arg Val Ala Thr Gly Ser Val Val Thr Val Ala Gly Val
        355                 360                 365
Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys Asn Leu Val
    370                 375                 380
Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr Thr Lys Leu
385                 390                 395                 400
Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val Trp Pro Thr
                405                 410                 415
Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val Ala Asp Leu
            420                 425                 430
Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys Asp Ile Ile
        435                 440                 445
Arg Ala Ile Arg Arg Ile Ala Val Pro Val Val Ser Thr Leu Phe Pro
    450                 455                 460
Pro Ala Ala Pro Leu Ala His Ala Ile Gly Glu Gly Val Asp Tyr Leu
465                 470                 475                 480
Leu Gly Asp Glu Ala Gln Ala Ala Ser Gly Thr Ala Arg Ala Ala Ser
                485                 490                 495
Gly Lys Ala Arg Ala Ala Ser Gly Arg Ile Arg Gln Leu Thr Leu Ala
            500                 505                 510
Ala Asp Lys Gly Tyr Glu Val Val Ala Asn Leu Phe Gln Val Pro Gln
        515                 520                 525
Asn Pro Val Val Asp Gly Ile Leu Ala Ser Pro Gly Val Leu Arg Gly
    530                 535                 540
Ala His Asn Leu Asp Cys Val Leu Arg Glu Gly Ala Thr Leu Phe Pro
545                 550                 555                 560
Val Val Ile Thr Thr Val Glu Asp Ala Met Thr Pro Lys Ala Leu Asn
                565                 570                 575
Ser Lys Met Phe Ala Val Ile Glu Gly Val Arg Glu Asp Leu Gln Pro
            580                 585                 590
Pro Ser Gln Arg Gly Ser Phe Ile Arg Thr Leu Ser Gly His Arg Val
        595                 600                 605
Tyr Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Leu Pro Leu Glu Thr Gly Arg Asp
    610                 615                 620
Tyr Thr Val Val Pro Ile Asp Asp Val Trp Asp Asp Ser Ile Met Leu
625                 630                 635                 640
Ser Lys Asp Pro Ile Pro Pro Ile Val Gly Asn Ser Gly Asn Leu Ala
                645                 650                 655
Ile Ala Tyr Met Asp Val Phe Arg Pro Lys Val Pro Ile His Val Ala
            660                 665                 670
Met Thr Gly Ala Leu Asn Ala Cys Gly Glu Ile Glu Lys Val Ser Phe
        675                 680                 685
Arg Ser Thr Lys Leu Ala Thr Ala His Arg Leu Gly Leu Arg Leu Ala
    690                 695                 700
Gly Pro Gly Ala Phe Asp Val Asn Thr Gly Pro Asn Trp Ala Thr Phe
705                 710                 715                 720
Ile Lys Arg Phe Pro His Asn Pro Arg Asp Trp Asp Arg Leu Pro Tyr
                725                 730                 735
Leu Asn Leu Pro Tyr Leu Pro Pro Asn Ala Gly Arg Gln Tyr His Leu
            740                 745                 750
Ala Met Ala Ala Ser Glu Phe Lys Glu Thr Pro Glu Leu Glu Ser Ala
        755                 760                 765
Val Arg Ala Met Glu Ala Ala Ala Asn Val Asp Pro Leu Phe Gln Ser
    770                 775                 780
Ala Leu Ser Val Phe Met Trp Leu Glu Glu Asn Gly Ile Val Thr Asp
785                 790                 795                 800
Met Ala Asn Phe Ala Leu Ser Asp Pro Asn Ala His Arg Met Arg Asn
                805                 810                 815
Phe Leu Ala Asn Ala Pro Gln Ala Gly Ser Lys Ser Gln Arg Ala Lys
            820                 825                 830
Tyr Gly Thr Ala Gly Tyr Gly Val Glu Ala Arg Gly Pro Thr Pro Glu
        835                 840                 845
Glu Ala Gln Arg Glu Lys Asp Thr Arg Ile Ser Lys Lys Met Glu Thr
    850                 855                 860
Met Gly Ile Tyr Phe Ala Thr Pro Glu Trp Val Ala Leu Asn Gly His
865                 870                 875                 880
Arg Gly Pro Ser Pro Gly Gln Leu Lys Tyr Trp Gln Asn Thr Arg Glu
                885                 890                 895
Ile Pro Asp Pro Asn Glu Asp Tyr Leu Asp Tyr Val His Ala Glu Lys
            900                 905                 910
Ser Arg Leu Ala Ser Glu Glu Gln Ile Leu Arg Ala Ala Thr Ser Ile
        915                 920                 925
Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Ala Glu Pro Pro Gln Ala Phe Ile Asp Glu
    930                 935                 940
Val Ala Lys Val Tyr Glu Ile Asn His Gly Arg Gly Pro Asn Gln Glu
945                 950                 955                 960
Gln Met Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Met Glu Met Lys His Arg Asn
                965                 970                 975
Pro Arg Arg Ala Leu Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Asn Ala Pro Thr
            980                 985                 990
Gln Arg Pro Pro Gly Arg Leu Gly Arg Trp Ile Arg Thr Val Ser Asp
        995                 1000                1005
Glu Asp Leu Glu
    1010
(2)SEQ ID NO：31：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3264个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：环形
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/KEY：CDS
    (B)位置：97..531
(xi)SEQ ID NO：31：的序列描述
GGATACGATC GGTCTGACCC CGGGGGAGTC ACCCGGGGAC AGGCCATCAC TGCCTTGTTC   60
CTGGTTGGAA CTCCTCTTTC TGCTGTACTA TCGTTG ATG GTG AGT AGA GAT CAG    114
                                        Met Val Ser Arg Asp Gln
                                                1015
ACA AAC GAT CGC AGC GAT GAC AAA CCT GAT GGA TCA CAC CCA ACA GAT    162
Thr Asn Asp Arg Ser Asp Asp Lys Pro Asp Gly Ser His Pro Thr Asp
    1020                1025                1030
TGT TCC GTT CAT ACG GAG CCT TCT GAT GCC AAC GAC CGG ACC GGC GTC    210
Cys Ser Val His Thr Glu Pro Ser Asp Ala Asn Asp Arg Thr Gly Val
1035                1040                1045                1050
CAT TCC GGA CGA CAC CCT GGA GAA GCA CAC ACT CAG GTC CGA AAC CTC    258
His Ser Gly Arg His Pro Gly Glu Ala His Thr Gln Val Arg Asn Leu
                1055                1060                1065
GAC TTA CAA CTT GAC TGT AGG GGA TAC AGG GTC AGG ACT AAT TGT CTT    306
Asp Leu Gln Leu Asp Cys Arg Gly Tyr Arg Val Arg Thr Asn Cy6 Leu
            1070                1075                1080
TTT CCC TGG ATT CCC TGG TTC AGT TGT AGG TGC TCA CTA CAC ACT GCA    354
Phe Pro Trp Ile Pro Trp Phe Ser Cys Arg Cys Ser Leu His Thr Ala
        1085                1090                1095
GAG CAG TGG GAA CTA CCA ATT CGA CCA GAT GCT CCT GAC AGC GCA GAA    402
Glu Gln Trp Glu Leu Pro Ile Arg Pro Asp Ala Pro Asp Ser Ala Glu
    1100                1105                1110
CCT GCC TGC CAG CTA CAA CTA CTG CAG GCT AGT GAG CAG GAG TCT AAC    450
Pro Ala Cys Gln Leu Gln Leu Leu Gln Ala Ser Glu Gln Glu Ser Asn
1115                1120                1125                1130
CGT ACG GTC AAG CAC ACT CCC TGG TGG CGT TTA TGC ACT AAA CGG AAC    498
Arg Thr Val Lys His Thr Pro Trp Trp Arg Leu Cys Thr Lys Arg Asn
                1135                1140                1145
CAT AAA CGC AGT GAC CTT CCA CGG AAG CCT GAG TGAGTTGACT GACTACAGCT  551
His Lys Arg Ser Asp Leu Pro Arg Lys Pro Glu
            1150                1155
ACAACGGGCT GATGTCAGCC ACTGCGAACA TCAACGACAA GATCGGGAAC GTTCTAGTTG   611
GAGAAGGGGT GACTGTTCTC AGTCTACCGA CTTCATATGA CCTTAGTTAT GTGAGACTCG   671
GTGACCCCAT CCCCGCAGCA GGACTCGACC CGAAGTTGAT GGCCACGTGC GACAGTAGTG   731
ACAGACCCAG AGTCTACACC ATAACAGCTG CAGATGAATA CCAATTCTCG TCACAACTCA   791
TCCCGAGTGG CGTGAAGACC ACACTGTTCT CCGCCAACAT CGATGCTCTC ACCAGCTTCA   851
GCGTTGGTGG TGAGCTTGTC TTCAGCCAAG TAACGATCCA AAGCATTGAA GTGGACGTCA   911
CCATTCACTT CATTGGGTTT GACGGGACAG ACGTAGCAGT CAAGGCAGTT GCAACAGACT   971
TTGGGCTGAC AACTGGGACA AACAACCTTG TGCCATTCAA CCTGGTGGTC CCAACAAATG  1031
AGATCACCCA GCCCATCACT TCCATGAAAC TAGAGGTTGT GACCTACAAG ATTGGCGGCA  1091
CCGCTGGTGA CCCAATATCA TGGACAGTGA GTGGTACACT AGCTGTGACG GTGCACGGAG  1151
GCAACTACCC TGGGGCTCTC CGTCCTGTCA CCCTGGTGGC CTATGAACGA GTGGCTGCAG  1211
GATCTGTTGT CACAGTTGCA GGGGTGAGCA ACTTCGAGCT AATCCCCAAC CCTGAGCTTG  1271
CAAAGAACCT AGTTACAGAG TATGGCCGCT TTGACCCCGG AGCAATGAAC TACACCAAAC  1331
TAATACTGAG TGAGAGAGAT CGTCTAGGCA TCAAGACAGT CTGGCCCACC AGGGAGTACA  1391
CCGATTTCAG GGAGTACTTC ATGGAGGTTG CAGATCTCAA CTCACCCCTA AAGATTGCAG  1451
GAGCATTTGG CTTTAAGGAC ATAATCCGAG CCATTCGGAA GATTGCGGTG CCAGTGGTAT  1511
CCACACTCTT CCCTCCAGCT GCACCCCTAG CACATGCAAT CGGAGAAGGT GTAGACTACC  1571
TCCTGGGCGA CGAGGCCCAA GCAGCCTCAG GGACAGCTCG AGCCGCGTCA GGAAAAGCTA  1631
GAGCTGCCTC AGGACGAATA AGGCAGCTAA CTCTCGCAGC TGACAAGGGG TGCGAGGTAG  1691
TCGCCAACAT GTTCCAGGTG CCCCAGAATC CCATTGTTGA TGGCATTCTG GCATCCCCAG  1751
GAATCCTGCG TGGCGCACAC AACCTCGACT GCGTGCTATG GGAGGGAGCC ACTCTTTTCC  1811
CTGTTGTCAT TACGACACTC GAGGATGAGC TGACCCCCAA GGCACTGAAC AGCAAAATGT  1871
TTGCTGTCAT TGAAGGTGTG CGAGAGGACC TCCAGCCTCC ATCCCAACGG GGATCCTTCA  1931
TTCGAACTCT CTCTGGCCAT AGAGTCTATG GCTATGCCCC AGACGGAGTA CTGCCTCTGG  1991
AGACCGGGAG AGACTACACC GTTGTCCCAA TTGATGATGT GTGGGACGAT AGCATAATGC  2051
TGTCGCAGGA CCCCATACCT CCAATCATAG GGAACAGCGG CAACCTAGCC ATAGCATACA  2111
TGGATGTCTT CAGGCCCAAG GTCCCCATCC ACGTGGCTAT GACAGGGGCC CTCAATGCCC  2171
GCGGTGAGAT CGAGAGTGTT ACGTTCCGCA GCACCAAACT CGCCACAGCC CACCGACTTG  2231
GCATGAAGTT AGCTGGTCCT GGAGCCTATG ACATTAATAC AGGACCTAAC TGGGCAACGT  2291
TCGTCAAACG TTTCCCTCAC AATCCCCGAG ACTGGGACAG GTTGCCCTAC CTCAACCTTC  2351
CTTATCTCCC ACCAACAGCA GGACGTCAGT TCCATCTAGC CCTGGCTGCC TCCGAGTTCA  2411
AAGAGACCCC AGAACTCGAA GACGCTGTGC GCGCAATGGA TGCCGCTGCA AATGCCGACC  2471
CATTGTTCCG CTCAGCTCTC CAGGTCTTCA TGTGGTTGGA AGAAAACGGG ATTGTGACCG  2531
ACATGGCTAA CTTCGCCCTC AGCGACCCAA ACGCGCATAG GATGAAAAAC TTCCTAGCAA  2591
ACGCACCCCA GGCTGGAAGC AAGTCGCAGA GGGCCAAGTA TGGCACGGCA GGCTACGGAG  2651
TGGAGGCTCG AGGCCCCACA CCAGAAGAGG CACAGAGGGA AAAAGACACA CGGATCTCCA  2711
AGAAGATGGA AACAATGGGC ATCTACTTCG CGACACCGGA ATGGGTGGCT CTCAACGGGC  2771
ACCGAGGCCC AAGCCCCGGC CAACTCAAGT ACTGGCAAAA CACAAGAGAA ATACCAGAGC  2821
CCAATGAGGA CTACCCAGAC TATGTGCACG CGGAGAAGAG CCGGTTGGCG TCAGAAGAAC  2891
AGATCCTACG GGCAGCCACG TCGATCTACG GGGCTCCAGG ACAGGCTGAA CCACCCCAGG  2951
CCTTCATAGA CGAGGTCGCC AGGGTCTATG AAATCAACCA TGGGCGTGGT CCAAACCAGG  3011
AGCAGATGAA GGACCTGCTC CTGACTGCGA TGGAGATGAA GCATCGCAAT CCCAGGCGGG    3071
CTCCACCAAA GCCAAAGCCA AAACCCAATG CTCCATCACA GAGACCCCCT GGACGGCTGG    3131
GCCGCTGGAT CAGGACGGTC TCCGACGAGG ACTTGGAGTG AGGCTCCTGG GAGTCTCCCG    3191
ACACTACCCG CGCAGGTGTG GACACCAATT CGGCCTTCTA CCATCCCAAA TTGGATCCGT    3251
TCGCGGGTCC CCT                                                       3264
(2)SEQ ID NO：32：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：145个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：32：的序列描述
Met Val Ser Arg Asp Gln Thr Asn Asp Arg Ser Asp Asp Lys Pro Asp
  1               5                  10                  15
Gly Ser His Pro Thr Asp Cys Ser Val His Thr Glu Pro Ser Asp Ala
             20                  25                  30
Asn Asp Arg Thr Gly Val His Ser Gly Arg His Pro Gly Glu Ala His
         35                  40                  45
Thr Gln Val Arg Asn Leu Asp Leu Gln Leu Asp Cys Arg Gly Tyr Arg
     50                  55                  60
Val Arg Thr Asn Cys Leu Phe Pro Trp Ile Pro Trp Phe Ser Cys Arg
 65                  70                  75                  80
Cys Ser Leu His Thr Ala Glu Gln Trp Glu Leu Pro Ile Arg Pro Asp
                 85                  90                  95
Ala Pro Asp Ser Ala Glu Pro Ala Cys Gln Leu Gln Leu Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Ser Glu Gln Glu Ser Asn Arg Thr Val Lys His Thr Pro Trp Trp Arg
        115                 120                 125
Leu Cys Thr Lys Arg Asn His Lys Arg Ser Asp Leu Pro Arg Lys Pro
    130                 135                 140
Glu
145
(2)SEQ ID NO：33：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3264个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：环形
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/KEY：CDS
    (B)位置：131..3169
(xi)SEQ ID NO：33：的序列描述
GGATACGATC GGTCTGACCC CGGGGGAGTC ACCCGGGGAC AGGCCATCAC TGCCTTGTTC   60
CTGGTTGGAA CTCCTCTTTC TGCTGTACTA TCGTTGATGG TGAGTAGAGA TCAGACAAAC  120
GATCGCAGCG ATG ACA AAC CTG ATG GAT CAC ACC CAA CAG ATT GTT CCG     169
           Met Thr Asn Leu Met Asp His Thr Gln Gln Ile Val Pro
                           150                 155
TTC ATA CGG AGC CTT CTG ATG CCA ACG ACC GGA CCG GCG TCC ATT CCG    217
Phe Ile Arg Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro
    160                 165                 170
GAC GAC ACC CTG GAG AAG CAC ACA CTC AGG TCC GAA ACC TCG ACT TAC    265
Asp Asp Thr Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr
175                 180                 185                 190
AAC TTG ACT GTA GGG GAT ACA GGG TCA GGA CTA ATT GTC TTT TTC CCT    313
Asn Leu Thr Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro
                195                 200                 205
GGA TTC CCT GGT TCA GTT GTA GGT GCT CAC TAC ACA CTG CAG AGC AGT    361
Gly Phe Pro Gly Ser Val Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Ser Ser
            210                 215                 220
GGG AAC TAC CAA TTC GAC CAG ATG CTC CTG ACA GCG CAG AAC CTG CCT    409
Gly Asn Tyr Gln Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro
        225                 230                 235
GCC AGC TAC AAC TAC TGC AGG CTA GTG AGC AGG AGT CTA ACC GTA CGG    457
Ala Ser Tyr Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg
    240                 245                 250
TCA AGC ACA CTC CCT GGT GGC GTT TAT GCA CTA AAC GGA ACC ATA AAC    505
Ser Ser Thr Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn
255                 260                 265                 270
GCA GTG ACC TTC CAC GGA AGC CTG AGT GAG TTG ACT GAC TAC AGC TAC    553
Ala Val Thr Phe His Gly Ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Tyr Ser Tyr
                275                 280                 285
AAC GGG CTG ATG TCA GCC ACT GCG AAC ATC AAC GAC AAG ATC GGG AAC    601
Asn Gly Leu Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn
            290                 295                 300
GTT CTA GTT GGA GAA GGG GTG ACT GTT CTC AGT CTA CCG ACT TCA TAT    649
Val Leu Val Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr
        305                 310                 315
GAC CTT AGT TAT GTG AGA CTC GGT GAC CCC ATC CCC GCA GCA GGA CTC    697
Asp Leu Ser Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ala Gly Leu
    320                 325                 330
GAC CCG AAG TTG ATG GCC ACG TGC GAC AGT AGT GAC AGA CCC AGA GTC    745
Asp Pro Lys Leu Met Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val
335                 340                 345                 350
TAC ACC ATA ACA GCT GCA GAT GAA TAC CAA TTC TCG TCA CAA CTC ATC    793
Tyr Thr Ile Thr Ala Ala Asp Glu Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Leu Ile
                355                 360                 365
CCG AGT GGC GTG AAG ACC ACA CTG TTC TCC GCC AAC ATC GAT GCT CTC    841
Pro Ser Gly Val Lys Thr Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Leu
            370                 375                 380
ACC AGC TTC AGC GTT GGT GGT GAG CTT GTC TTC AGC CAA GTA ACG ATC    889
Thr Ser Phe Ser Val Gly Gly Glu Leu Val Phe Ser Gln Val Thr Ile
        385                 390                 395
CAA AGC ATT GAA GTG GAC GTC ACC ATT CAC TTC ATT GGG TTT GAC GGG    937
Gln Ser Ile Glu Val Asp Val Thr Ile His Phe Ile Gly Phe Asp Gly
    400                 405                 410
ACA GAC GTA GCA GTC AAG GCA GTT GCA ACA GAC TTT GGG CTG ACA ACT    985
Thr Asp Val Ala Val Lys Ala Val Ala Thr Asp Phe Gly Leu Thr Thr
415                 420                 425                 430
GGG ACA AAC AAC CTT GTG CCA TTC AAC CTG GTG GTC CCA ACA AAT GAG    1033
Gly Thr Asn Asn Leu Val Pro Phe Asn Leu Val Val Pro Thr Asn Glu
                435                 440                 445
ATC ACC CAG CCC ATC ACT TCC ATG AAA CTA GAG GTT GTG ACC TAC AAG    1081
Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser Met Lys Leu Glu Val Val Thr Tyr Lys
            450                 455                 460
ATT GGC GGC ACC GCT GGT GAC CCA ATA TCA TGG ACA GTG AGT GGT ACA    1129
Ile Gly Gly Thr Ala Gly Asp Pro Ile Ser Trp Thr Val Ser Gly Thr
        465                 470                 475
CTA GCT GTG ACG GTG CAC GGA GGC AAC TAC CCT GGG GCT CTC CGT CCT    1177
Leu Ala Val Thr Val His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro
    480                 485                 490
GTC ACC CTG GTG GCC TAT GAA CGA GTG GCT GCA GGA TCT GTT GTC ACA    1225
Val Thr Leu Val Ala Tyr Glu Arg Val Ala Ala Gly Ser Val Val Thr
495                 500                 505                 510
GTT GCA GGG GTG AGC AAC TTC GAG CTA ATC CCC AAC CCT GAG CTT GCA    1273
Val Ala Gly Val Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala
                515                 520                 525
AAG AAC CTA GTT ACA GAG TAT GGC CGC TTT GAC CCC GGA GCA ATG AAC    1321
Lys Asn Leu Val Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn
            530                 535                 540
TAC ACC AAA CTA ATA CTG AGT GAG AGA GAT CGT CTA GGC ATC AAG ACA    1369
Tyr Thr Lys Leu Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr
        545                 550                 555
GTC TGG CCC ACC AGG GAG TAC ACC GAT TTC AGG GAG TAC TTC ATG GAG    1417
Val Trp Pro Thr Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu
    560                 565                 570
GTT GCA GAT CTC AAC TCA CCC CTA AAG ATT GCA GGA GCA TTT GGC TTT    1465
Val Ala Asp Leu Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe
575                 580                 585                 590
AAG GAC ATA ATC CGA GCC ATT CGG AAG ATT GCG GTG CCA GTG GTA TCC    1513
Lys Asp Ile Ile Arg Ala Ile Arg Lys Ile Ala Val Pro Val Val Ser
                595                 600                 605
ACA CTC TTC CCT CCA GCT GCA CCC CTA GCA CAT GCA ATC GGA GAA GGT    1561
Thr Leu Phe Pro Pro Ala Ala Pro Leu Ala His Ala Ile Gly Glu Gly
            610                 615                 620
GTA GAC TAC CTC CTG GGC GAC GAG GCC CAA GCA GCC TCA GGG ACA GCT    1609
Val Asp Tyr Leu Leu Gly Asp Glu Ala Gln Ala Ala Ser Gly Thr Ala
        625                 630                 635
CGA GCC GCG TCA GGA AAA GCT AGA GCT GCC TCA GGA CGA ATA AGG CAG    1657
Arg Ala Ala Ser Gly Lys Ala Arg Ala Ala Ser Gly Arg Ile Arg Gln
    640                 645                 650
CTA ACT CTC GCA GCT GAC AAG GGG TGC GAG GTA GTC GCC AAC ATG TTC    1705
Leu Thr Leu Ala Ala Asp Lys Gly Cys Glu Val Val Ala Asn Met Phe
655                 660                 665                 670
CAG GTG CCC CAG AAT CCC ATT GTT GAT GGC ATT CTG GCA TCC CCA GGA    1753
Gln Val Pro Gln Asn Pro Ile Val Asp Gly Ile Leu Ala Ser Pro Gly
                675                 680                 685
ATC CTG CGT GGC GCA CAC AAC CTC GAC TGC GTG CTA TGG GAG GGA GCC    1801
Ile Leu Arg Gly Ala His Asn Leu Asp Cys Val Leu Trp Glu Gly Ala
            690                 695                 700
ACT CTT TTC CCT GTT GTC ATT ACG ACA CTC GAG GAT GAG CTG ACC CCC    1849
Thr Leu Phe Pro Val Val Ile Thr Thr Leu Glu Asp Glu Leu Thr Pro
        705                 710                 715
AAG GCA CTG AAC AGC AAA ATG TTT GCT GTC ATT GAA GGT GTG CGA GAG    1897
Lys Ala Leu Asn Ser Lys Met Phe Ala Val Ile Glu Gly Val Arg Glu
    720                 725                 730
GAC CTC CAG CCT CCA TCC CAA CGG GGA TCC TTC ATT CGA ACT CTC TCT    1945
Asp Leu Gln Pro Pro Ser Gln Arg Gly Ser Phe Ile Arg Thr Leu Ser
735                 740                 745                 750
GGC CAT AGA GTC TAT GGC TAT GCC CCA GAC GGA GTA CTG CCT CTG GAG    1993
Gly His Arg Val Tyr Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Leu Pro Leu Glu
                755                 760                 765
ACC GGG AGA GAC TAC ACC GTT GTC CCA ATT GAT GAT GTG TGG GAC GAT    2041
Thr Gly Arg Asp Tyr Thr Val Val Pro Ile Asp Asp Val Trp Asp Asp
            770                 775                 780
AGC ATA ATG CTG TCG CAG GAC CCC ATA CCT CCA ATC ATA GGG AAC AGC    2089
Ser Ile Met Leu Ser Gln Asp Pro Ile Pro Pro Ile Ile Gly Asn Ser
        785                 790                 795
GGC AAC CTA GCC ATA GCA TAC ATG GAT GTC TTC AGG CCC AAG GTC CCC    2137
Gly Asn Leu Ala Ile Ala Tyr Met Asp Val Phe Arg Pro Lys Val Pro
    800                 805                 810
ATC CAC GTG GCT ATG ACA GGG GCC CTC AAT GCC CGC GGT GAG ATC GAG    2185
Ile His Val Ala Met Thr Gly Ala Leu Asn Ala Arg Gly Glu Ile Glu
815                 820                 825                 830
AGT GTT ACG TTC CGC AGC ACC AAA CTC GCC ACA GCC CAC CGA CTT GGC    2233
Ser Val Thr Phe Arg Ser Thr Lys Leu Ala Thr Ala His Arg Leu Gly
                835                 840                 845
ATG AAG TTA GCT GGT CCT GGA GCC TAT GAC ATT AAT ACA GGA CCT AAC    2281
Met Lys Leu Ala Gly Pro Gly Ala Tyr Asp Ile Asn Thr Gly Pro Asn
            850                 855                 860
TGG GCA ACG TTC GTC AAA CGT TTC CCT CAC AAT CCC CGA GAC TGG GAC    2329
Trp Ala Thr Phe Val Lys Arg Phe Pro His Asn Pro Arg Asp Trp Asp
        865                 870                 875
AGG TTG CCC TAC CTC AAC CTT CCT TAT CTC CCA CCA ACA GCA GGA CGT    2377
Arg Leu Pro Tyr Leu Asn Leu Pro Tyr Leu Pro Pro Thr Ala Gly Arg
    880                 885                 890
CAG TTC CAT CTA GCC CTG GCT GCC TCC GAG TTC AAA GAG ACC CCA GAA    2425
Gln Phe His Leu Ala Leu Ala Ala Ser Glu Phe Lys Glu Thr Pro Glu
895                 900                 905                 910
CTC GAA GAC GCT GTG CGC GCA ATG GAT GCC GCT GCA AAT GCC GAC CCA    2473
Leu Glu Asp Ala Val Arg Ala Met Asp Ala Ala Ala Asn Ala Asp pro
                915                 920                 925
TTG TTC CGC TCA GCT CTC CAG GTC TTC ATG TGG TTG GAA GAA AAC GGG    2521
Leu Phe Arg Ser Ala Leu Gln Val phe Met Trp Leu Glu Glu Asn Gly
            930                 935                 940
ATT GTG ACC GAC ATG GCT AAC TTC GCC CTC AGC GAC CCA AAC GCG CAT    2569
Ile Val Thr Asp Met Ala Asn Phe Ala Leu Ser Asp Pro Asn Ala His
        945                 950                 955
AGG ATG AAA AAC TTC CTA GCA AAC GCA CCC CAG GCT GGA AGC AAG TCG    2617
Arg Met Lys Asn Phe Leu Ala Asn Ala Pro Gln Ala Gly Ser Lys Ser
    960                 965                 970
CAG AGG GCC AAG TAT GGC ACG GCA GGC TAC GGA GTG GAG GCT CGA GGC    2665
Gln Arg Ala Lys Tyr Gly Thr Ala Gly Tyr Gly Val Glu Ala Arg Gly
975                 980                 985                 990
CCC ACA CCA GAA GAG GCA CAG AGG GAA AAA GAC ACA CGG ATC TCC AAG    2713
Pro Thr Pro Glu Glu Ala Gln Arg Glu Lys Asp Thr Arg Ile Ser Lys
                995                 1000                1005
AAG ATG GAA ACA ATG GGC ATC TAC TTC GCG ACA CCG GAA TGG GTG GCT    2761
Lys Met Glu Thr Met Gly Ile Tyr Phe Ala Thr Pro Glu Trp Val Ala
            1010                1015                1020
CTC AAC GGG CAC CGA GGC CCA AGC CCC GGC CAA CTC AAG TAC TGG CAA    2809
Leu Asn Gly His Arg Gly Pro Ser Pro Gly Gln Leu Lys Tyr Trp Gln
        1025                1030                1035
AAC ACA AGA GAA ATA CCA GAG CCC AAT GAG GAC TAC CCA GAC TAT GTG    2857
Asn Thr Arg Glu Ile Pro Glu Pro Asn Glu Asp Tyr Pro Asp Tyr Val
    1040                1045                1050
CAC GCG GAG AAG AGC CGG TTG GCG TCA GAA GAA CAG ATC CTA CGG GCA    2905
His Ala Glu Lys Ser Arg Leu Ala Ser Glu Glu Gln Ile Leu Arg Ala
1055                1060                1065                1070
GCC ACG TCG ATC TAC GGG GCT CCA GGA CAG GCT GAA CCA CCC CAG GCC    2953
Ala Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Ala Glu Pro Pro Gln Ala
                1075                1080                1085
TTC ATA GAC GAG GTC GCC AGG GTC TAT GAA ATC AAC CAT GGG CGT GGT    3001
Phe Ile Asp Glu Val Ala Arg Val Tyr Glu Ile Asn His Gly Arg Gly
            1090                1095                1100
CCA AAC CAG GAG CAG ATG AAG GAC CTG CTC CTG ACT GCG ATG GAG ATG    3049
Pro Asn Gln Glu Gln Met Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Met Glu Met
        1105                1110                1115
AAG CAT CGC AAT CCC AGG CGG GCT CCA CCA AAG CCA AAG CCA AAA CCC    3097
Lys His Arg Asn Pro Arg Arg Ala Pro Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro
    1120                1125                1130
AAT GCT CCA TCA CAG AGA CCC CCT GGA CGG CTG GGC CGC TGG ATC AGG    3145
Asn Ala Pro Ser Gln Arg Pro Pro Gly Arg Leu Gly Arg Trp Ile Arg
1135                1140                1145                1150
ACG GTC TCC GAC GAG GAC TTG GAG TGAGGCTCCT GGGAGTCTCC CGACACTACC   3199
Thr Val Ser Asp Glu Asp Leu Glu
                1155
CGCGCAGGTG TGGACACCAA TTCGGCCTTC TACCATCCCA AATTGGATCC GTTCGCGGGT  3259
CCCCT                                                              3264
(2)SEQ ID NO：34：的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1013个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：34：的序列描述
Met Thr Asn Leu Met Asp His Thr Gln Gln Ile Val Pro Phe Ile Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro Asp Asp Thr
             20                  25                  30
Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr Asn Leu Thr
         35                 40                   45
Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro Gly Phe Pro
     50                  55                  60
Gly Ser Val Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Ser Ser Gly Asn Tyr
65                   70                  75                  80
Gln Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro Ala Ser Tyr
                 85                  90                  95
Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg Ser Ser Thr
            100                 105                 110
Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn Ala Val Thr
        115                 120                 125
Phe His Gly Ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Tyr Ser Tyr Asn Gly Leu
    130                 135                 140
Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn Val Leu Val
145                 150                 155                 160
Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr Asp Leu Ser
                165                 170                 175
Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ala Gly Leu Asp Pro Lys
            180                 185                 190
Leu Met Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val Tyr Thr Ile
        195                 200                 205
Thr Ala Ala Asp Glu Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Leu Ile Pro Ser Gly
    210                 215                 220
Val Lys Thr Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Leu Thr Ser Phe
225                 230                 235                 240
Ser Val Gly Gly Glu Leu Val Phe Ser Gln Val Thr Ile Gln Ser Ile
                245                 250                 255
Glu Val Asp Val Thr Ile His Phe Ile Gly Phe Asp Gly Thr Asp Val
            260                 265                 270
Ala Val Lys Ala Val Ala Thr Asp Phe Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asn
        275                 280                 285
Asn Leu Va1 Pro Phe Asn Leu Val Val Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln
    290                 295                 300
Pro Ile Thr Ser Met Lys Leu Glu Val Val Thr Tyr Lys Ile Gly Gly
305                 310                 315                 320
Thr Ala Gly Asp Pro Ile Ser Trp Thr Val Ser Gly Thr Leu Ala Val
                325                 330                 335
Thr Val His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val Thr Leu
            340                 345                 350
Val Ala Tyr Glu Arg Val Ala Ala Gly Ser Val Val Thr Val Ala Gly
        355                 360                 365
Val Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys Asn Leu
    370                 375                 380
Val Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr Thr Lys
385                 390                 395                 400
Leu Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val Trp Pro
                405                 410                 415
Thr Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val Ala Asp
            420                 425                 430
Leu Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys Asp Ile
        435                 440                 445
Ile Arg Ala Ile Arg Lys Ile Ala Val Pro Val Val Ser Thr Leu Phe
    450                 455                 460
Pro Pro Ala Ala Pro Leu Ala His Ala Ile Gly Glu Gly Val Asp Tyr
465                 470                 475                 480
Leu Leu Gly Asp Glu Ala Gln Ala Ala Ser Gly Thr Ala Arg Ala Ala
                485                 490                 495
Ser Gly Lys Ala Arg Ala Ala Ser Gly Arg Ile Arg Gln Leu Thr Leu
            500                 505                 510
Ala Ala Asp Lys Gly Cys Glu Val Val Ala Asn Met Phe Gln Val Pro
        515                 520                 525
Gln Asn Pro Ile Val Asp Gly Ile Leu Ala Ser Pro Gly Ile Leu Arg
    530                 535                 540
Gly Ala His Asn Leu Asp Cys Val Leu Trp Glu Gly Ala Thr Leu Phe
545                 550                 555                 560
Pro Val Val Ile Thr Thr Leu Glu Asp Glu Leu Thr Pro Lys Ala Leu
                565                 570                 575
Asn Ser Lys Met Phe Ala Val Ile Glu Gly Val Arg Glu Asp Leu Gln
            580                 585                 590
Pro Pro Ser Gln Arg Gly Ser Phe Ile Arg Thr Leu Ser Gly His Arg
        595                 600                 605
Val Tyr Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Leu Pro Leu Glu Thr Gly Arg
    610                 615                 620
Asp Tyr Thr Val Val Pro Ile Asp Asp Val Trp Asp Asp Ser Ile Met
625                 630                 635                 640
Leu Ser Gln Asp Pro Ile Pro Pro Ile Ile Gly Asn Ser Gly Asn Leu
                645                 650                 655
Ala Ile Ala Tyr Met Asp Val Phe Arg Pro Lys Val Pro Ile His Val
            660                 665                 670
Ala Met Thr Gly Ala Leu Asn Ala Arg Gly Glu Ile Glu Ser Val Thr
        675                 680                 685
Phe Arg Ser Thr Lys Leu Ala Thr Ala His Arg Leu Gly Met Lys Leu
    690                 695                 700
Ala Gly Pro Gly Ala Tyr Asp Ile Asn Thr Gly Pro Asn Trp Ala Thr
705                 710                 715                 720
Phe Val Lys Arg Phe Pro His Asn Pro Arg Asp Trp Asp Arg Leu Pro
                725                 730                 735
Tyr Leu Asn Leu Pro Tyr Leu Pro Pro Thr Ala Gly Arg Gln Phe His
            740                 745                 750
Leu Ala Leu Ala Ala Ser Glu Phe Lys Glu Thr Pro Glu Leu Glu Asp
        755                 760                 765
Ala Val Arg Ala Met Asp Ala Ala Ala Asn Ala Asp Pro Leu Phe Arg
    770                 775                 780
Ser Ala Leu Gln Val Phe Met Trp Leu Glu Glu Asn Gly Ile Val Thr
785                 790                 795                 800
Asp Met Ala Asn Phe Ala Leu Ser Asp Pro Asn Ala His Arg Met Lys
                805                 810                 815
Asn Phe Leu Ala Asn Ala Pro Gln Ala Gly Ser Lys Ser Gln Arg Ala
            820                 825                 830
Lys Tyr Gly Thr Ala Gly Tyr Gly Val Glu Ala Arg Gly Pro Thr Pro
        835                 840                 845
Glu Glu Ala Gln Arg Glu Lys Asp Thr Arg Ile Ser Lys Lys Met Glu
    850                 855                 860
Thr Met Gly Ile Tyr Phe Ala Thr Pro Glu Trp Val Ala Leu Asn Gly
865                 870                 875                 880
His Arg Gly Pro Ser Pro Gly Gln Leu Lys Tyr Trp Gln Asn Thr Arg
                885                 890                 895
Glu Ile Pro Glu Pro Asn Glu Asp Tyr Pro Asp Tyr Val His Ala Glu
            900                 905                 910
Lys Ser Arg Leu Ala Ser Glu Glu Gln Ile Leu Arg Ala Ala Thr Ser
        915                 920                 925
Ile Tyr Gly Ala pro Gly Gln Ala Glu pro Pro Gln Ala Phe Ile Asp
    930                 935                 940
Glu Val Ala Arg Val Tyr Glu Ile Asn His Gly Arg Gly Pro Asn Gln
945                 950                 955                 960
Glu Gln Met Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Met Glu Met Lys His Arg
                965                 970                 975
Asn Pro Arg Arg Ala Pro Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Asn Ala Pro
            980                 985                 990
Ser Gln Arg Pro Pro Gly Arg Leu Gly Arg Trp Ile Arg Thr Val Ser
        995                 1000                1005
Asp Glu Asp Leu Glu
    1010

Claims (14)

1.用于制备活的双RNA病毒的方法，包括下列步骤：
制备双RNA病毒基因组区段A和B的一个或多个cDNA，
将所述的一个或多个cDNA转录以产生合成的RNA转录物，其中所述的RNA转录物是所述的区段A和B的正意义RNA转录物，
用所述的合成的RNA转录物转染宿主细胞，
在培养基中培养所述的宿主细胞，和
从所述的培养基中分离活的感染性双RNA病毒。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的双RNA病毒是感染性囊病病毒(IBDV)。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的宿主细胞是非洲绿猴肾细胞系细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的双RNA病毒基因组区段A和B是独立地从不同的双RNA病毒毒株制备的。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述的区段A存在于质粒pUC19FLAD78或pUC18FLA23上。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述的区段B存在于pUC18FLBP2上。
7.活的嵌合双RNA病毒，其中所述的双RNA病毒是通过一种方法制备的，该方法包括步骤：
制备双RNA病毒基因组区段A和B的一个或多个cDNA，其中所述的cDNA来自于一个以上的双RNA病毒毒株，
将所述的一个或多个cDNA转录以产生合成的RNA转录物，其中所述的RNA转录物是所述的区段A和B的正意义RNA转录物，
用所述的合成的RNA转录物转染宿主细胞，
在培养基中培养所述的宿主细胞，和
从所述的培养基中分离活的嵌合的双RNA病毒。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述的双RNA病毒是感染性囊病病毒(IBDV)。
9.一种质粒，选自由pUC19FLAD78，pUC18FLA23和pUC19FLBP2组成的组。
10.包含权利要求7所述的活的嵌合双RNA病毒的疫苗，其中所述的活的嵌合双RNA病毒在给药之前是失活的。
11.根据权利要求10所述的疫苗，其中所述双RNA病毒是感染性囊病病毒(IBDV)。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述的宿主细胞是家禽细胞。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述的家禽细胞是鸡或火鸡细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述的家禽细胞是鸡胚成纤维细胞或鸡胚肾细胞。
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