CN116490507A

CN116490507A - 用于治疗癌症的杂环包缩合cdc7激酶抑制剂

Info

Publication number: CN116490507A
Application number: CN202180070764.6A
Authority: CN
Inventors: 黄贤海; 萨扬·蒙达尔; 帕尼·加纳科塔; 尼古拉斯·博伊尔斯; 利娅·弗莱; 亚当·利文森; 杰里米·罗伯特·格林伍德; 彼得·博斯; 萨蒂什·哈特; 阿列克谢·格拉舒托; 唐海峰
Original assignee: Schrodinger & Co
Current assignee: Schrodinger & Co
Priority date: 2020-09-10
Filing date: 2021-09-08
Publication date: 2023-07-25
Also published as: US20230365584A1; EP4211140A1; JP2023541047A; WO2022055963A1

Abstract

本申请涉及如本文所定义的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。本申请还描述了包含式(I)的化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，以及使用所述化合物和组合物来抑制激酶活性和治疗癌症的方法。

Description

用于治疗癌症的杂环包缩合CDC7激酶抑制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年9月10日提交的美国专利申请号63/076,721的权益，该专利申请以引用的方式整体并入本文。

技术领域

本申请涉及可用于治疗增殖性病症诸如癌症的三环和其他多环化合物。

背景技术

癌症的特征在于异常细胞生长和增殖。基因组不稳定性是癌细胞的标志，其中高突变率和基因组重排率会导致侵袭性和治疗耐受性肿瘤。参见Hanahan和Weinberg,Cell,144,第646-674页(2011)以及McGranahan和Swanton,Cell 168,第613-628页(2017)。DNA复制失调导致基因组不稳定性和肿瘤发生。真核细胞通过定向、高度调控的逐步进行的过程(称为细胞周期)来分裂。DNA复制是高度调控的逐步进行的细胞周期的重要部分，并且这种严格的调控确保DNA复制仅在S期期间发生一次，并且以高保真方式发生。

在G1晚期至S期期间，CDC7激酶(也称为DDK)通过结合至其调控蛋白DBF4(在真核生物中为ASK)而被活化，然后该激酶使负载染色质的微染色体维持(MCM)2、4和6蛋白在多个磷酸化位点发生磷酸化以启动DNA合成。参见Jiang等人,EMBO J.,18,第5703-5713页(1999),Cho等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,103,第11521-11526页(2006)以及Masai等人,J Biol Chem.,281,第39249-39261页(2006)。CDC7激酶在维持DNA复制叉和DNA损伤反应通路方面发挥重要作用。参见Yamada等人,Cell Cycle 13,第1859-1866页(2014)。

CDC7是一种从酵母到人高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶。已经证实，CDC7的敲低导致癌细胞的死亡，但是在p53依赖性通路使细胞周期停滞在G1期的正常细胞中，该敲低不会导致细胞死亡。CDC7剔除在癌细胞中诱导的细胞凋亡反应不是由p53介导的，而是由p38MAPK介导的。参见Montagnoli等人,Cancer Res.,64,第7110-7116页(2004)以及Im和Lee,J.Biol.Chem.,283,第25171-25177页(2008)。此外，CDC7上调与各种癌症类型的不良预后相关。参见，例如，Kulkarni等人,Clin.Cancer Res.,15,第2417-2425页(2009)；Choschzick等人,Hum.Pathol.,41,第358-365页(2010)；Datta等人,EMBO Rep.,18,第2030-2050页(2017)；Cheng等人,Cancer Lett.,337,218-225(2013)。

发明内容

现已发现，某些稠合化合物是CDC7激酶的抑制剂，并且可用于治疗疾病，诸如增殖性疾病，诸如癌症。

因此，本文提供了一种式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²、R³、R⁴、R^A、R^B、R^C、R^D、R^E、R^F、R^G、Y、m、p和环A如本文所定义。

本文还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

本文还提供了一种在体外或体内抑制哺乳动物细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物接触。

本文还提供了一种在体外或体内抑制哺乳动物细胞中的CDC7激酶活性的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物接触。

本文还提供了一种治疗需要治疗的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。

本文还提供了一种治疗需要治疗的受试者的CDC7相关性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。

本文还提供了一种治疗需要治疗的受试者的癌症和/或抑制与特定癌症相关的转移的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。

本文还提供了一种如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物，其用于治疗癌症。

本文还提供了一种如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物，其用于治疗CDC7相关性疾病或病症。

本文还提供了一种如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物，其用于治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的转移。

本文还提供了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于抑制CDC7激酶活性。

本文还提供了一种如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的转移的药物。

本文还提供了一种本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于抑制CDC7激酶活性的药物。

本文还提供了一种如本文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于治疗CDC7相关性疾病或病症的药物。

还提供了治疗患有CDC7相关性癌症的个体的方法，所述方法包括在施用一种或多种其他抗癌药物(例如，第一CDC7激酶抑制剂或另一种激酶抑制剂)之前、期间或之后，施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

本文还提供了一种用于制备式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的过程。

本文还提供了一种通过如本文定义的制备化合物的过程获得的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；还可以使用本领域已知的其他合适的方法和材料。这些材料、方法、和实例仅是说明性的并且不旨在是限制性的。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献均通过引用整体并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包含定义)为准。

本发明的其他特征以及优点通过以下详细描述以及权利要求将会变得显而易见。

具体实施方式

定义

如本文所用，术语“化合物”旨在包含所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素富集的变体。除非另外说明，否则本文按名称或结构确定为一种特定互变异构形式的化合物旨在包含其他互变异构形式。

如本文所用，术语“前体”是指第一化合物在一个或多个化学转化中发生反应以提供第二化合物，第一化合物是第二化合物的前体。

如本文所用，术语“互变异构体”是指其结构在原子排列上明显不同，但是以容易且快速的平衡存在的化合物，并且应理解，本文提供的化合物可描绘为不同的互变异构体，并且当化合物具有互变异构体形式时，所有互变异构体形式都意图在本发明的范围内，并且化合物的命名不排除任何互变异构体。互变异构体形式的实例包括以下实例：

应当理解，本文提供的某些化合物可以含有一个或多个不对称中心，并且因此可以以异构体的混合物(如外消旋混合物)或对映异构体纯的形式进行制备和分离。

术语“卤基”是指元素周期表第17族的卤素之一。具体地说，该术语是指氟、氯、溴和碘。优选地，该术语是指氟或氯。

术语“C0-C6烷基”是指含有0个、1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子的直链或支链饱和烃链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。如本文所用，“C0”烷基基团是指键，例如，R-(C0烷基)-R'是指R-R'。

如本文所定义，术语“C1-C6卤代烷基”是指被至少一个在每次出现时独立选择的卤素原子(例如氟、氯、溴和碘)取代的C1-C6烷基基团。卤素原子可以存在于烷基基团上的任何位置。例如，C1-C6卤代烷基可以指氯甲基、氟甲基、三氟甲基、氯乙基(例如1-氯乙基和2-氯乙基)、三氯乙基(例如1,2,2-三氯乙基、2,2,2-三氯乙基)、氟乙基(例如1-氟甲基和2-氟乙基)、三氟乙基(例如1,2,2-三氟乙基和2,2,2-三氟乙基)、氯丙基、三氯丙基、氟丙基、三氟丙基。

术语“C1-C6烷氧基”是指通过氧与分子连接的C1-C6烷基。这包含烷基部分可以是直链或支链的部分，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。

如本文所用，术语“氰基”是指-CN自由基。

如本文所用，术语“羟基”是指-OH自由基。

如本文所定义，术语“C1-C6羟烷基”是指被一个或多个羟基自由基取代的C1-C6烷基基团。一个或多个羟基自由基可以存在于烃链上的任何位置。例如，C1-C6羟烷基可以指羟甲基、羟乙基(例如，1-羟乙基或2-羟乙基)和2-羟基异丙基。

如本文所定义，术语“C1-C6烷氧基烷基”是指被一个或多个C1-C6烷氧基基团取代的C1-C6烷基基团，其中一个或多个烷氧基基团经由氧与烷基基团连接。这包括其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基的烷基部分可以独立地为直链或支链的部分，诸如甲氧基乙基、乙氧基乙基或1,3二甲氧基丙基。

如本文所用，术语“氨基”是指-NH₂自由基。

如本文所用，术语“芳基”是指6-10个全碳单环或双环基团，其中系统中的至少一个环是芳族的。芳基的非限制性实例包含苯基、萘基、四氢萘基。

如本文所用，术语“杂芳基”是指这样的5-10元单环或双环基团，其中系统中的至少一个环是芳族的；并且其中系统中的至少一个环中的一个或多个碳原子被独立地选自N、O和S的杂原子取代。杂芳基的非限制性实例包括呋喃、呋咱、噻吩、苯并噻吩、酞嗪、吡咯、噁唑、苯并噁唑、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、噻唑、1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、苯并噻唑、咪唑、苯并咪唑、吲哚、吲唑、吡唑、苯并吡唑、异噁唑、苯并异噁唑、异噻唑、三唑、苯并三唑、噻二唑、四唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、嘌呤、蝶啶、喹啉、异喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噌啉和三嗪。

如本文所用，术语“环烷基”是指具有3至10个碳原子的饱和的或部分不饱和的单环或双环碳基团。双环环烷基基团包括稠环、螺环和桥环系统。环烷基的非限制性实例包含环丙基、环己基、螺[2.3]己基和双环[1.1.1]戊基。

术语“杂环基”是指具有3至10个环原子的饱和的或部分不饱和烃单环或双环环系，它不是芳族的，环内具有至少一个选自N、O和S的杂原子。双环杂环基基团包括稠环、螺环和桥环系统。杂环基可以表示为例如“5至10元杂环基”，其是含有5个、6个、7个、8个、9个或10个原子的环系统，其中至少一个原子是杂原子。例如，可以存在1个、2个或3个杂原子，任选地1个或2个。杂环还可以含有一个或多个羰基或硫代羰基官能团，以使该定义包括氧代系统和硫代系统，诸如内酰胺、内酯、环状酰亚胺、环状硫代酰亚胺和环状氨基甲酸酯。杂环基可以通过任何碳原子或通过如氮等杂原子与分子的其余部分键合。示例性杂环基基团包括但不限于1,3-二氧戊环、1,4-二氧戊环、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、二氧代哌嗪、乙内酰脲、咪唑啉、咪唑烷、异噁唑啉、异噁唑烷、噁唑啉、噁唑烷、噁唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷、吗啉、环氧乙烷、哌啶N-氧化物、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吡咯烷酮、吡咯烷二酮、4-哌啶酮、吡唑啉、吡唑烷、2-氧代吡咯烷、四氢吡喃、4H-吡喃、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷和2-氮杂螺[3.3]庚基。

如本文所用，术语“成对”是指与分子中的相同原子连接的取代基原子或基团。

如本文所用，术语“邻位”是指与分子中的相邻原子连接的取代基原子或基团。取代基原子或基团之间的立体化学关系可以是顺式、反式、未定义或未解析的。

如本文所用，术语“氧基”是指连接至碳原子的“＝O”基团。

如本文所用，符号描绘了原子或部分与分子其余部分中的指定原子或基团的连接点。

式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)包括其药学上可接受的盐。此外，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)还包括此类化合物的其他盐，这些盐不一定是药学上可接受的盐，并且可用作制备和/或纯化式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)和/或用于分离式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)的对映异构体的中间体。式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)的药学上可接受的盐的非限制性实例包括三氟乙酸盐和盐酸盐。

将进一步理解，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其盐可以以溶剂化物的形式分离，并且因此任何此类溶剂化物都包括在本发明的范围内。例如，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)以及其盐可以以非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂(诸如水、乙醇等等)形成的溶剂化形式存在。

在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)包括实施例1-65的化合物以及其立体异构体和药学上可接受的盐和溶剂化物。在一些实施方案中，实施例1-65的化合物呈游离碱形式。在一些实施方案中，实施例1-65的化合物呈盐形式。

在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)被制备为药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是化合物的酸加成盐。药学上可接受的盐可以通过使化合物与无机酸反应来获得，所述无机酸诸如氢卤酸(例如，盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸和磷酸。药学上可接受的盐也可以通过使化合物与有机酸诸如脂族或芳族羧酸或磺酸反应获得，所述有机酸例如甲酸、乙酸、琥珀酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、烟酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸或萘磺酸。药学上可接受的盐也可以通过使化合物与碱反应形成盐来获得，所述盐诸如铵盐、碱金属盐(诸如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(诸如钙盐或镁盐)、有机碱(诸如二环己胺、N-甲基-D-葡糖胺、三(羟甲基)甲胺、C1-C7烷基胺、环己胺、三乙醇胺、乙二胺)的盐以及与氨基酸(诸如精氨酸和赖氨酸)的盐。

术语“药学上可接受的”表示该化合物或其盐或组合物在化学和/或毒理学上与构成调配物的其他成分和/或用所述调配物治疗的受试者相容。

保护基团可以是保护潜在反应性官能团免受不期望的化学转化影响的临时取代基。所使用的特定保护基团的选择完全在本领域普通技术人员的技能范围内。许多考虑因素可以决定保护基团的选择，包含但不限于被保护的官能团、分子中存在的其他官能团、合成序列每个步骤的反应条件、分子中存在的其他保护基团、官能团对去除保护基团所需的条件的耐受性，以及本文提供的化合物热分解的反应条件。保护基团化学领域已经有所综述(Greene,T.W.；Wuts,P.G.M.Protective Groups in Organic Synthesis,第2版；Wiley:New York,1991)。

氮保护基团可以是保护胺部分免受不期望的化学转化影响的任何临时取代基。当此类保护基团与胺键合时形成的部分的实例包含但不限于烯丙胺、苄胺(例如，苄胺、对甲氧基苄胺、2,4-二甲氧基苄胺和三苯甲胺)、乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、戊-4-烯酰胺、邻苯二甲酰亚胺、氨基甲酸酯(例如，氨基甲酸甲酯、氨基甲酸叔丁酯、氨基甲酸苄酯、氨基甲酸烯丙酯、氨基甲酸2,2,2-三氯乙基酯和氨基甲酸9-芴基甲酯)、亚胺和磺酰胺(例如，苯磺酰胺、对甲苯磺酰胺和对硝基苯磺酰胺)。

氧保护基团可以是保护羟基部分免受不期望的化学转化影响的任何临时取代基。当此类保护基团与羟基键合时形成的部分的实例包含但不限于酯(例如，乙酰基、叔丁基羰基和苯甲酰基)、苄基(例如，苄基、对甲氧基苄基和2,4-二甲氧基苄基和三苯甲基)、碳酸酯(例如，碳酸甲酯、碳酸烯丙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯和碳酸苄酯)缩酮、缩醛和醚。

本文提供的化合物还可以在构成此类化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。也就是说，原子(特别是当提及关于根据式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)时)包括该原子的所有同位素和同位素混合物，无论是天然存在的还是合成产生的，无论是具有天然丰度的还是呈同位素富集形式的。例如，当提及氢气时，应理解为是指¹H、²H、³H或它们的混合物；当提及碳时，应理解为是指¹¹C、¹²C、¹³C、¹⁴C或它们的混合物；当提及氮时，应理解为是指¹³N、¹⁴N、¹⁵N或它们的混合物；当提及氧气时，应理解为是指¹⁴O、¹⁵O、¹⁶O、¹⁷O、¹⁸O或它们的混合物；以及当提及氟时，应理解为是指¹⁸F、¹⁹F或它们的混合物；除非另外明确说明。例如，在氘烷基和氘烷氧基中，一个或多个氢原子被氘(²H)特异性地替换。由于一些上述同位素是放射性的，因此本文提供的化合物还包括具有一个或多个原子的一个或多个同位素及其混合物的化合物，包含放射性化合物，其中一个或多个非放射性原子已被其富放射性同位素之一替换。放射性标记的化合物可用作治疗剂，例如癌症治疗剂、研究试剂(例如，测定试剂)和诊断剂(例如，体内显像剂)。本文提供的化合物的所有同位素变化，不论是放射性的还是非放射性的，均旨在涵盖在本发明的范围内。

测试化合物充当CDC7抑制剂的能力可以通过本文所述的生物学和计算测定法来证明。IC₅₀值显示于表A-B中。

在一些实施方案中，本文提供的化合物表现出脑和/或中枢神经系统(CNS)渗透性。此类化合物能够穿过血脑屏障并抑制脑和/或其他CNS结构中的CDC7激酶活性。在一些实施方案中，本文提供的化合物能够以治疗有效量穿过血脑屏障。例如，对患有癌症(例如，CDC7相关性癌症，如CDC7相关性脑癌或CNS癌症)的受试者的治疗可以包括向所述受试者施用(例如，口服施用)化合物。在一些此类实施方案中，本文提供的化合物可用于治疗原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤。例如，CDC7相关性原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤。

在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐表现出高胃肠道吸收率、低清除率和低药物间相互作用潜力中的一者或多者。

式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐可用于治疗可用CDC7激酶抑制剂治疗的疾病和病症，诸如CDC7相关性癌症，包括血液癌症和实体瘤。

如本文所用，术语“治疗(treat或treatment)”是指治疗性或减缓性措施。有益或期望的临床结果包含但不限于完全或部分地缓解与疾病或病症或病状相关的症状、减轻疾病程度、稳定疾病状态(即，不恶化)、延迟或减慢疾病的进展、改善或减轻疾病状态(例如，一种或多种疾病症状)以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以意味着与未接受治疗的情况下的预期生存期相比，生存期延长。

如本文所用，术语“受试者”是指任何动物，包括哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马、灵长类动物和人。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者已经经历和/或表现出待治疗和/或预防的疾病或病症的至少一种症状。

在一些实施方案中，受试者已经被鉴定或诊断为患有CDC7基因、CDC7蛋白或者它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的癌症(CDC7相关性癌症)(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定法或试剂盒所确定)。在一些实施方案中，受试者患有CDC7基因、CDC7蛋白或者它们中的任一者的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤(例如，如使用监管机构批准的测定法或试剂盒所确定)。受试者可以是患有CDC7基因、CDC7蛋白或者它们中的任一者的表达或活性或水平的失调呈阳性(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定法或试剂盒鉴定为阳性)的一种或多种肿瘤的受试者。受试者可以是其肿瘤具有CDC7基因、CDC7蛋白或者它们的表达或活性或水平的失调(例如，其中肿瘤被使用监管机构批准(例如，FDA批准)的试剂盒或测定法鉴定为这样的肿瘤)的受试者。在一些实施方案中，受试者疑似患有CDC7相关性癌症。在一些实施方案中，受试者具有表明所述受试者患有肿瘤的临床记录，所述肿瘤具有CDC7基因、CDC7蛋白或者它们中的任一者的表达或活性或水平的失调(并且任选地，所述临床记录表明受试者应该用本文提供的组合物中的任一者治疗)。在一些实施方案中，受试者是儿童受试者。在一些实施方案中，受试者已经被鉴定或诊断为患有癌症，所述癌症基于组织学检查被确定为与CDC7基因、CDC7蛋白或者它们中的任一者的表达或活性或水平的失调相关(CDC7相关性癌症)。

如本文所用，术语“儿童受试者”是指在诊断或治疗时未满21岁的受试者。术语“儿童”可以被进一步分为多个亚群，包括：新生儿(从出生至生命的第一个月)；婴儿(1个月至两岁)；儿童(两岁至最大12岁)；和青少年(12岁至21岁(最大但不包括二十二岁生日))。Berhman RE,Kliegman R,Arvin AM,Nelson WE.Nelson Textbook of Pediatrics,第15版Philadelphia:W.B.Saunders Company,1996；Rudolph AM等人Rudolph’s Pediatrics,第21版New York:McGraw-Hill,2002；以及Avery MD,First LR.Pediatric Medicine,第2版Baltimore:Williams&Wilkins；1994。在一些实施方案中，儿童受试者的年龄为从出生至生命的前28天、从29天至两岁以下、从两岁至12岁以下或从12岁至21岁(至多但不包含二十二岁生日)。在一些实施方案中，儿童受试者的年龄为从出生至生命的前28天、从29天至1岁以下、从一个月至四个月以下、从三个月至七个月以下、从六个月至1岁以下、从1岁至2岁以下、从2岁至3岁以下、从2岁至七岁以下、从3岁至5岁以下、从5岁至10岁以下、从6岁至13岁以下、从10岁至15岁以下或从15岁至22岁以下。

在某些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐可用于预防如本文所定义的疾病和病症(例如，自身免疫性疾病、炎性疾病和癌症)。如本文所用，术语“预防”是指完全或部分地预防本文所述的疾病或病状的发作、复发或扩散或其症状。

如本文所用，术语“CDC7相关性癌症”是指与CDC7基因、CDC7激酶(本文也称为CDC7激酶蛋白)或者它们中的任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平的失调相关或者具有所述失调(例如，如本文所述，CDC7基因、CDC7激酶、CDC7激酶结构域或者它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的类型中的任一者)的癌症。本文描述了CDC7相关性癌症的非限制性实例。

短语“CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调”是指(例如，与对照非癌性细胞相比)哺乳动物细胞中野生型CDC7激酶的遗传突变(例如，染色体易位，其导致包含CDC7激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；CDC7基因中的突变，其导致与野生型CDC7蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的CDC7蛋白的表达；CDC7基因中的突变，其导致与野生型CDC7蛋白相比具有一个或多个点突变的CDC7蛋白的表达；CDC7基因中的突变，其导致与野生型CDC7蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的CDC7蛋白的表达；基因重复，其导致细胞中CDC7蛋白水平升高；或调控序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其导致细胞中CDC7蛋白水平升高)；CDC7 mRNA的可变剪接形式，其导致与野生型CDC7蛋白相比在CDC7蛋白中具有至少一个氨基酸缺失的CDC7蛋白)；或者表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而导致的。作为另一个实例，CDC7基因、CDC7蛋白或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码CDC7蛋白的CDC7基因中的突变，所述CDC7蛋白是组成型活性的或与由不包含突变的CDC7基因编码的蛋白质相比具有增加的活性。作为另外的实例，增加的CDC7基因拷贝数可导致CDC7激酶的过表达。例如，CDC7基因、CDC7蛋白或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有CDC7的第一部分(包含功能性激酶结构域)和伴侣蛋白(即，并非CDC7)的第二部分。在一些实例中，CDC7基因、CDC7蛋白或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个CDC7基因与另一个非CDC7基因的基因易位的结果。

术语“野生型”描述了在未患有CDC7相关性疾病(例如，CDC7相关性癌症)(并且任选地也不具有发展为CDC7相关性疾病的增加的风险和/或不被怀疑患有CDC7相关性疾病)的受试者中存在，或者在来自未患有CDC7相关性疾病(例如，CDC7相关性癌症)(并且任选地也不具有发展为CDC7相关性疾病的增加的风险和/或不被怀疑患有CDC7相关性疾病)的受试者的细胞或组织中存在的核酸(例如，CDC7基因或CDC7 mRNA)或蛋白质(例如，CDC7蛋白)。

术语“监管机构”是指一个国家的机构，用于批准该国药剂的医疗用途。例如，监管机构的非限制性实例是美国食品和药物管理局(FDA)。

本文提供了式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是5-10元杂芳基，任选地被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基；

Y是-S-或-S(＝O)-；

环A是C5-C7环烷基或5-7元杂环基；

每个R²独立地选自由以下各项组成的组：氢、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、-NR^BR^C、C1-C6烷氧基烷基、-C(＝O)NH-5-10元杂芳基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、任选地被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基；或者

两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成氧代基团；任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C3-C6环烷基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；或任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的3-6元杂环基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；

R³选自氢和任选地被1-4个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：

(i)羟基；

(ii)氰基；

(iii)卤素；

(iv)C3-C6环烷氧基；

(v)C(＝O)OR^F；

(vi)C1-C6烷氧基；

(vii)任选地被1-3个独立选择的卤素取代的4-10元杂环基氧基；

(viii)-NR^BR^C；

(ix)任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C6环烷基：羟基、氰基、卤素、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、-NR^BR^C、3-6元杂环基氧基以及任选地被1-3个C1-C6烷氧基取代的3-6元杂环基；

(x)任选地被1-4个独立地选自以下的取代基取代的3至10元杂环基：卤素、羟基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、-NR^BR^C、任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷氧基的取代基取代的C1-C6烷基以及任选地被卤素或羟基取代的C3-C6环烷基；

(xi)任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的5-6元杂芳基：氰基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、任选地被1-2个独立地选自氰基和羟基的取代基取代的C3-C6环烷基；以及任选地被1-3个独立选择的R^A取代的4-10元杂环基；以及

(xii)-C(＝O)-X；其中X是-NR^BR^C、C1-C6烷基、5-6元杂芳基、-NH-5-6元杂芳基、-OR^E或者任选地被羟基取代的3-6元杂环基；

每个R^A和R^E独立地是卤素、氰基、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷基氨基、4-6元杂环基或C3-C6环烷基；

每个R^B和R^C独立地是氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-C1-C6烷基、任选地被C1-C6烷基取代的-(C1-C6亚烷基)_p-C3-C8环烷基、氰基、卤素、羟基或C3-C6环烷基；任选地被C1-C6烷基取代的3至6元杂环基；-C(＝O)O-C1-C6烷基；或任选地被C1-C6烷氧基取代的苄基；或者

R^B和R^C连同它们所连接的原子一起接合在一起形成任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的4-10元杂环基：卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、-NR^FR^G、C3-C6环烷氧基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷氧基；

每个p独立为0或1；

m为0、1、2、3或4；

R⁴是氢或C1-C6烷基；

R^D是氢、C1-C6卤代烷基、任选地被1-3个独立选择的R^E取代的C1-C6烷基、任选地被1-3个独立选择的R^E取代的C3-C6环烷基、任选地被1-3个独立选择的R^E取代的4-10元杂环基、C6-C10芳基或者任选地被1-3个独立选择的R^E取代的5-10元杂芳基；以及

每个R^F和R^G独立地是氢或C1-C6烷基。

在一些实施方案中，Y是-S-。在一些实施方案中，Y是-S(＝O)-。

在一些实施方案中，环A是5-7元杂环基。在一些实施方案中，环A是6-7元单环杂环基。在一些实施方案中，环A包括一个氧原子。在一些实施方案中，环A包括一个氮原子。在一些实施方案中，环A包括一个氧原子和一个氮原子。在一些实施方案中，环A是包含一个氧原子的6元杂环基，所述氧原子键合至含Y的5元环。在一些实施方案中，环A是包含一个氧原子的7元杂环基，所述氧原子键合至含Y的5元环。在一些实施方案中，环A是四氢呋喃、四氢吡喃或氧杂环庚烷。

在一些实施方案中，环A是C5-C7环烷基。在一些实施方案中，环A是单环C5-C7环烷基，诸如环戊基、环己基或环庚基。

在一些实施方案中，R¹是5-10元杂芳基，任选地被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R¹是5-10元杂芳基，被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，R¹是5-6元杂芳基，任选地被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R¹是5-6元杂芳基，被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被一个选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被C1-C6烷基诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基取代。在一些实施方案中，R¹是被甲基取代的吡唑。在一些实施方案中，R¹是在一些实施方案中，R¹是吡啶或嘧啶；它们各自被甲基取代。在一些实施方案中，R¹是/>它们各自都被甲基取代。

在一些实施方案中，R¹是未取代的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，R¹是未取代的5-6元杂芳基。在一些实施方案中，R¹是吡唑。在一些实施方案中，R¹是在一些实施方案中，R¹是吡啶。在一些实施方案中，R¹是/>在一些实施方案中，R¹是嘧啶。

在一些实施方案中，R¹是

在一些实施方案中，每个R²独立地选自由以下各项组成的组：卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、-NR^BR^C、C1-C6烷氧基烷基、-C(＝O)NH-5-10元杂芳基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、任选地被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，每个R²独立地是-C(＝O)NH-5-10元杂芳基。在一些实施方案中，每个R²独立地是-C(＝O)NH-5元杂芳基。在一些实施方案中，每个R²独立地是-C(＝O)NH-6元杂芳基。在一些实施方案中，每个R²独立地是-C(＝O)NH-10元杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基基团选自呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、噻唑、1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、咪唑、异噁唑、异噻唑、噻二唑、吡啶、哒嗪、嘧啶和吡嗪。

在一些实施方案中，每个R²独立地是4-6元杂环基。在一些实施方案中，4-6元杂环基经由碳原子连接至式(I)。在一些实施方案中，4-6元杂环基经由氮原子连接至式(I)。在一些实施方案中，每个R²独立地选自吗啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吡咯烷酮、4-哌啶酮、氮杂环丁烷和氧杂环丁烷。

在一些实施方案中，每个R²独立地是5-10元杂芳基。在一些实施方案中，每个R²独立地是5元杂芳基。在一些实施方案中，每个R²独立地是6元杂芳基。在一些实施方案中，每个R²选自呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、噻唑、1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、咪唑、异噁唑、异噻唑、噻二唑、吡啶、哒嗪、嘧啶和吡嗪。

在一些实施方案中，每个R²独立地是任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。在一些实施方案中，每个R²独立地是被羟基取代的C3-C6环烷基。在一些实施方案中，每个R²独立地是C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，每个R²独立地是任选地被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，每个R²独立地是被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，每个R²独立地是被一个R^A取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，每个R²独立地是被2或3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基。

在一些实施方案中，每个R^A独立地选自由以下各项组成的组：卤素、氰基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基氨基、4-6元杂环基和C3-C6环烷基。在一些实施方案中，每个R^A独立地选自由以下各项组成的组：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3羟烷基、C1-C3烷基氨基、4-6元杂环基和C3-C6环烷基。在一些实施方案中，每个R^A独立地选自由以下各项组成的组：氟、甲基、甲氧基、三氟甲基、羟甲基或羟乙基。

在一些实施方案中，每个R²独立地是未取代的C1-C6烷基，诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，每个R²是甲基。

在一些实施方案中，每个R²独立地选自由以下各项组成的组：卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、-NR^BR^C和C1-C6烷氧基烷基。

在一些实施方案中，每个R²独立地是卤素。在一些实施方案中，每个R²是氟。

在一些实施方案中，每个R²独立地选自羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基和C1-C6烷氧基烷基。

在一些实施方案中，如本文所定义，每个R²独立地是-NR^BR^C。

在一些实施方案中，两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成氧代基团；任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C3-C6环烷基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；或任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的3-6元杂环基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

在一些实施方案中，两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成氧代基团。

在一些实施方案中，两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C3-C6环烷基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成未取代的C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的3-6元杂环基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成未取代的3-6元杂环基。

在一些实施方案中，m为1。在一些实施方案中，m为2。在一些实施方案中，m为3。在一些实施方案中，m为4。

在一些实施方案中，m为0。

在一些实施方案中，m为1，并且R²是未取代的C1-C6烷基，诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，m为1，并且R²是甲基。

在一些实施方案中，m为1，并且R²是卤素。在一些实施方案中，m为1，并且R²是氟。

在一些实施方案中，m为2，并且每个R²独立地是未取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，m为2，并且每个R²是甲基。

在一些实施方案中，m为2，并且每个R²独立地是卤素。在一些实施方案中，m为2，并且每个R²是氟。

在一些实施方案中，m为2，并且R²基团是成对的。在一些实施方案中，R²基团是成对的二甲基。在一些实施方案中，R²基团是成对的二氟。

在一些实施方案中，R³选自氢和任选地被1-4个独立地选自(i)-(xii)的取代基取代的C0-C6烷基：

(i)羟基；

(ii)氰基；

(iii)卤素；

(iv)C3-C6环烷氧基；

(v)C(＝O)OR^F；

(vi)C1-C6烷氧基；

(vii)任选地被1-3个独立选择的卤素取代的4-10元杂环基氧基；

(viii)-NR^BR^C；

在一些实施方案中，R³是氢。

在一些实施方案中，R³是未取代的C1-C6烷基。

在一些实施方案中，R³是取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是具有一个选自(i)-(xii)的取代基的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是具有两个独立地选自(i)-(xii)的取代基的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是具有三个独立地选自(i)-(xii)的取代基的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是具有四个独立地选自(i)-(xii)的取代基的C0-C6烷基。

在一些实施方案中，R³是任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：羟基、氰基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C6环烷基：羟基、氰基、卤素、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、-NR^BR^C、3-6元杂环基氧基以及任选地被1-3个C1-C6烷氧基取代的3-6元杂环基。在一些实施方案中，R³是任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：羟基、氰基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基、氰基、卤素、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、-NR^BR^C、3-6元杂环基氧基取代的C3-C6环烷基以及任选地被1-3个C1-C6烷氧基取代的3-6元杂环基。在一些实施方案中，R³是任选地被1或2个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：羟基、氰基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，R³是任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R³是任选地被1或2个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R³是任选地被1或2个独立地选自以下的取代基取代的C0-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及被羟基取代的C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，R³是未取代的C1-C6烷基，诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，R³是甲基。

在一些实施方案中，R³是被羟基取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是羟甲基、1-羟乙基、2-羟乙基、2-羟基-2-丙基、1-羟丙基、2-羟丙基或3-羟丙基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷基(任选地被羟基取代)取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷基(被羟基取代)取代的C0-C1烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被羟基和C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是甲基或乙基；它们各自被羟基和一个C3-C6环烷基取代。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷氧基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是甲基或乙基；它们各自被C3-C6环烷氧基取代。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被一个或两个C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是乙基或正丙基；它们各自被一个或两个C1-C2烷氧基取代。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被C(＝O)-OX¹取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，X¹是C1-C6烷基，诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，R³是甲基或乙基；它们各自被C(＝O)-OMe或C(＝O)-OEt取代。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基和3至10元杂环基，其中3至10元杂环基任选地被1-3个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。在一些实施方案中，R³是被1-3个独立地选自3至10元杂环基的基团取代的C1-C6烷基，其中3至10元杂环基任选地被1-3个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基(被羟基取代)取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基(被卤素取代)取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基(被甲基取代)取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，C1-C6烷基是甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，3至10元杂环基是4-6元杂环基。在一些实施方案中，杂环基基团包含一个或两个氮原子。在一些实施方案中，杂环基基团经由碳原子连接至R³的烷基基团。在一些实施方案中，杂环基基团经由氮原子连接至R³的烷基基团。

在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷、吡咯烷、吡咯烷酮或哌啶取代的C1-C6烷基；它们各自任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基、羟基和卤素的取代基取代。在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷、吡咯烷、吡咯烷酮或哌啶取代的C1-C6烷基；它们各自被2个独立地选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基或卤素。在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷、吡咯烷、吡咯烷酮或哌啶取代的C1-C6烷基；它们各自被C1-C6烷基、羟基或卤素取代。在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷、吡咯烷、吡咯烷酮或哌啶取代的C1-C6烷基。

在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷取代的C1-C3烷基。在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷(被甲基、氟或羟基取代)取代的C1-C3烷基。在一些实施方案中，R³是被吡咯烷取代的C1-C3烷基。在一些实施方案中，R³是被吡咯烷(被羟基、甲基或者1或2个氟取代)取代的C1-C3烷基。在一些实施方案中，R³是被吡咯烷酮取代的C1-C3烷基。在一些实施方案中，R³是被吡咯烷酮(被甲基或者1或2个氟取代)取代的C1-C3烷基。在一些实施方案中，R³是被哌啶取代的C1-C3烷基。

在一些实施方案中，R³是：在一些实施方案中，R³是：在一些实施方案中，R³是/>在一些实施方案中，R³是在一些实施方案中，R³是/>

在一些实施方案中，R³是被-NR^BR^C取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-O-C1-C6烷基或者被C1-C6烷氧基取代的苄基。在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或者C(＝O)-C1-C6烷基。

在一些实施方案中，R^B和R^C连同它们所连接的原子一起接合在一起形成任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的4-10元杂环基：卤素、羟基、氰基、C1-C6烷基、-NR^FR^G、C3-C6环烷氧基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，4-10元杂环基是双环稠合杂环基，诸如[5,5]、[5,6]或[6,6]稠环系统。

在一些实施方案中，R³是在一些实施方案中，R³是被NH₂取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是NH₂(即，当C0-C6烷基是C0烷基时)。

在一些实施方案中，每个R^F和R^G独立地是氢或C1-C6烷基。在一些实施方案中，每个R^F和R^G是相同的。在一些实施方案中，每个R^F和R^G是不同的。在一些实施方案中，R^F和R^G中的一者是氢，并且R^F和R^G中的另一者是C1-C6烷基。

在一些实施方案中，R³是-C(＝O)-X²，其中X²是C1-C6烷基或者任选地被羟基取代的3-6元杂环基。在一些实施方案中，3-6元杂环基是氮杂环丁烷、吗啉或吡咯烷。

在一些实施方案中，R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：氰基、羟基、卤素和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，R³是被1或2个独立地选自以下的取代基取代的C1-C2烷基：氰基、羟基、卤素和C1-C2烷氧基。在一些实施方案中，R³是被氰基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基和5-6元杂芳基。在一些实施方案中，R³是被1或2个独立地选自以下的取代基取代的C1-C3烷基：羟基、C1-C3烷氧基和5-6元杂芳基。在一些实施方案中，5-6元杂芳基任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代：氰基、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，5-6元杂芳基被1-3个独立地选自以下的取代基取代：氰基、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，5-6元杂芳基被1或2个独立地选自以下的取代基取代：氰基、羟基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基。在一些实施方案中，5-6元杂芳基是咪唑、吡唑或三唑。

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是被氰基取代的吡唑。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是吡唑。在一些实施方案中，R³是在一些实施方案中，R³是/>

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是咪唑。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是三唑。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被未取代的5-6元杂芳基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，5-6元杂芳基是咪唑。在一些实施方案中，5-6元杂芳基是三唑。在一些实施方案中，5-6元杂芳基是

在一些实施方案中，每个p为0。在一些实施方案中，每个p为1。在一些实施方案中，p出现两次，一次p为1，另一次p为0。

在一些实施方案中，R⁴是C1-C6烷基，诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，R⁴是甲基。在一些实施方案中，R⁴是氢。

在一些实施方案中，式(I)的化合物是式(Ia)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是5或6元杂芳基基团，任选地被C1-C6烷基取代；并且

R²独立地选自卤素和C1-C6烷基，并且m为1或2。

在一些实施方案中，式(I)的化合物是式(Ib)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是5或6元杂芳基基团，任选地被C1-C6烷基取代；并且

R²独立地选自卤素和C1-C6烷基，并且m为1或2。

在一些实施方案中，m为2，并且R²是成对的二氟。在一些实施方案中，m为2，并且R²是成对的二甲基。在一些实施方案中，m为1，并且R²是氟。在一些实施方案中，m为1，并且R²是甲基。

在一些实施方案中，式(I)的化合物是式(Ic)的化合物：

或前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被C1-C6烷基诸如甲基、乙基、正丙基或异丙基取代。在一些实施方案中，R¹是被甲基取代的吡唑。在一些实施方案中，R¹是被甲基取代的吡啶。在一些实施方案中，R¹是被甲基取代的嘧啶。

在一些实施方案中，R¹是吡唑、吡啶或嘧啶。在一些实施方案中，R¹是

在一些实施方案中，R³是任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R³是被以下取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基或者任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，R³是未取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，R³是甲基。

在一些实施方案中，R³是被羟基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷基(任选地被羟基取代)取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷基(被羟基取代)取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷基(被羟基取代)取代的甲基。在一些实施方案中，R³是(即，当C0-C6烷基是C0烷基时)。

在一些实施方案中，R³是被一个羟基和一个C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是甲基或乙基；它们各自被一个羟基和一个C3-C6环烷基取代。在一些实施方案中，R³是甲基或乙基；它们各自被一个羟基和环丙基或环丁基取代。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被C3-C6环烷氧基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被一个或两个C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是甲基、乙基或正丙基；它们各自被一个或两个C1-C6烷氧基取代。在一些实施方案中，R³是甲基、乙基或正丙基；它们各自被一个或两个甲氧基取代。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被C(＝O)-OX¹取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，X¹是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被1-3个3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，其中3至10元杂环基任选地被1-3个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基(被羟基取代)取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基(被卤素取代)取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是被3至10元杂环基(被甲基取代)取代的C1-C6烷基。

在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶取代的C1-C6烷基；它们各自任选地被C1-C6烷基、羟基或卤素取代。

在一些实施方案中，R³是被氮杂环丁烷取代的C1-C6烷基，所述氮杂环丁烷被1-3个独立地选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。在一些实施方案中，R³是被未取代的氮杂环丁烷取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是：

在一些实施方案中，R³是被未取代的哌啶取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被吡咯烷取代的C1-C6烷基，所述吡咯烷被1-3个独立地选自羟基和卤素的取代基取代。在一些实施方案中，R³是被未取代的吡咯烷取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被-NR^BR^C取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R^B和R^C各自独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或者C(＝O)-C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是在一些实施方案中，R³是被NH₂取代的C0-C6烷基。在一些实施方案中，R³是NH₂。

在一些实施方案中，R³是被氰基取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：C1-C6烷氧基和5-6元杂芳基。

在一些实施方案中，5-6元杂芳基任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代：氰基、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是咪唑、吡唑或三唑。

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是未取代的吡唑。在一些实施方案中，R³是在一些实施方案中，R³是/>

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是未取代的咪唑。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，5-6元杂芳基是未取代的三唑。在一些实施方案中，R³是

在一些实施方案中，所述化合物是选自表1的化合物或其药学上可接受的盐。

表1

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制备过程

出于说明性目的，本文提供了用于制备化合物的一般方法以及关键中间体。有关各个反应步骤的详细描述，请参见下文的“实施例”部分。本领域技术人员将理解，可以使用其他合成路线来合成本发明的化合物。尽管在方案中描述了特定的起始材料和试剂，并在下文进行了讨论，但也可以轻松取代其他起始材料和试剂，以提供多种衍生物和/或反应条件。另外，根据本公开，可以使用本领域技术人员熟知的常规化学方法进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。

本文提供了一种制备式(I)的化合物的方法，所述方法包括通过使式(I)前体与式(int-1)的化合物反应来形成吡啶酮环，所述式(I)前体包含式(I-iA)的部分：

其中

最接近*的碳原子和最接近**的碳原子各自为式(I)噻吩的环成员；并且

最接近*的碳原子键合至式(I)噻吩的硫环成员；

其中R³'是未取代的C1-C6烷基；

以形成包含式(I-iA')的部分的式(I)前体

以及

使包含式(I-iA')的部分的前体中的式(I-iA')的部分反应以形成式(I)的化合物的部分。

在一些实施方案中，包含式(I-iA)的部分的式(I)第一前体的反应在存在催化剂的情况下进行。在一些实施方案中，催化剂是铑催化剂。在一些实施方案中，催化剂是铑(II)催化剂。在一些实施方案中，铑催化剂选自Rh₂(OAc)₄、Rh₂(Oct)₄和(C₅(CH₃)₅RhCl)₂Cl₂。在一些实施方案中，铑催化剂是(C₅(CH₃)₅RhCl)₂Cl₂。在一些实施方案中，包含式(I-iA)的部分的式(I)第一前体的反应在存在碱的情况下进行。在一些实施方案中，碱是乙酸盐碱。在一些实施方案中，碱是乙酸铯。

在一些实施方案中，使包含式(I-iA')的部分的前体中的式(I-iA')的部分反应以形成式(I)的化合物的部分包括一个或多个将R³'转化为R³的化学转化(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个化学转化)。例如，使甲基基团溴化，随后用亲核试剂诸如胺来置换溴。

本文还提供了一种制备式(I)的化合物的方法，所述方法包括通过使式(I)前体在存在碱的情况下反应来形成吡啶酮环，所述式(I)前体包含式(I-iB)的部分：

其中

R^3’'是未取代的C1-C6烷基；

最接近*的碳原子和最接近**的碳原子各自为式(I)噻吩的环成员，

最接近*的碳原子键合至式(I)噻吩的硫环成员，并且

最接近****的碳原子为式(I)的化合物中的吡啶酮环的环成员；

从而形成包含式(I-iB')的部分的式(I)前体

以及

使包含式(I-iB')的部分的前体中的式(I-iB')的部分反应以形成式(I)的化合物的部分。

在一些实施方案中，碱是氢化物碱。在一些实施方案中，碱是氢化钠或氢化钾。在一些实施方案中，碱是氢化钠。

在一些实施方案中，使包含式(I-iB')的部分的式(I)前体反应以形成式(I)的化合物的部分包括从式(I-iB')的部分的环氮中除去2,4-二甲氧基苄基基团，然后将R³”转化为R³。在一些实施方案中，使包含式(I-iB')的部分的式(I)前体反应以形成式(I)的化合物的/>部分包括将R³”转化为R³，然后从环氮中除去2,4-二甲氧基苄基基团。在一些实施方案中，将R³”转化为R³包括一个或多个化学转化(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个化学转化)。在一些实施方案中(当将R³”转化为R³包括两个或更多个化学转化时)，使式(I-iB')的部分反应以形成式(I)的化合物的/>部分包括(i)进行将R³”转化为R³所需的两个或更多个化学转化中的至少一个化学转化但少于全部化学转化，(ii)从环氮中除去2,4-二甲氧基苄基基团，然后(iii)进行将R³”转化为R³所需的其余化学转化。

在制备式(I)的化合物的方法的一些实施方案中，式(I)的化合物是式(I')的化合物

其中

R¹、R²、R³和R⁴如本文所定义；

X¹是(i)任选地被0、1或2个R²取代的亚甲基；或(ii)任选地被m个R²取代的C2-C3亚烷基，并且其中C2-C3亚烷基的所有碳原子是环A的环成员；并且

所述方法还包括使包含式(I-iiA)的部分的前体与酸反应：

其中

最接近**的碳原子是噻吩的环成员，所述环成员(i)不直接键合至噻吩的硫环成员，并且(ii)也是式(I')的化合物中的吡啶酮环的环成员；

最接近***的碳原子是噻吩的环成员，所述环成员(i)不直接键合至噻吩的硫环成员，并且(ii)不是式(I')的化合物中的吡啶酮环的环成员；

最接近****的碳原子为式(I’)的化合物中的吡啶酮环的环成员；

Q是H或甲基；

X¹是(i)任选地被0、1或2个R²取代的亚甲基；或(ii)任选地被m个R²取代的C2-C3亚烷基，并且其中C2-C3亚烷基的所有碳原子是环A的环成员；

以形成式(I')的化合物的部分。

在一些实施方案中，Q是氢。在一些实施方案中，Q是甲基。

在一些实施方案中，酸选自HCl和HBr。在一些实施方案中，酸是水溶液。在这些实施方案的一些中，Q是甲基。在一些实施方案中，酸是HCl水溶液。在一些实施方案中，酸是HBr水溶液。在一些实施方案中，酸是约48％的HBr水溶液。

在一些实施方案中，酸是三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯。在这些实施方案的一些中，Q是氢。

在一些实施方案中，X¹是丙烯，并且m为0。在一些实施方案中，X¹是亚乙基，m为1，并且R²是甲基。

在制备式(I)的化合物的方法的一些实施方案中，式(I)的化合物是式(I”)的化合物

其中R¹、R²、R³、R⁴和m如本文所定义；

并且所述方法还包括使包含式(I-iiB)的部分的前体在存在钌催化剂的情况下反应：

其中

最接近**的碳原子是噻吩的环成员，所述环成员(i)不直接键合至噻吩的硫环成员，并且(ii)也是式(I”)的化合物中的吡啶酮环的环成员；

最接近***的碳原子是噻吩的环成员，所述环成员(i)不直接键合至噻吩的硫环成员，并且(ii)不是式(I”)的化合物中的吡啶酮环的环成员；

最接近****的碳原子是吡啶酮环的环成员；

以形成包含式(I-iiB')的部分的前体；

以及使包含式(I-iiB’)的部分的前体的式(I-iiB’)的部分反应以形成式(I”)的部分。

在一些实施方案中，钌催化剂是钌卡宾络合物。在一些实施方案中，钌卡宾络合物选自亚苄基-双(三环己基膦基)-二氯钌和1,3-双-(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基]二氯(苯基亚甲基)(三环己基膦基)钌、二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)(三环己基膦基)钌(II)和[1,3-双-(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基]二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)钌。在一些实施方案中，钌卡宾络合物是[1,3-双-(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基]二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)钌。

在一些实施方案中，使包含式(I-iiB')的部分的前体的式(I-iiB')的部分反应以形成式(I”)的部分包括使环A双键氧化，使环A双键还原或进行环A双键之间的加成(例如，HBr或Br₂的加成)。在一些实施方案中，使包含式(I-iiB')的部分的前体的式(I-iiB')的部分反应以形成式(I”)的/>部分还包括使环A双键的氧化、还原或加成的产物在一个或多个化学转化中反应以形成式(I”)的化合物。

在实施方案2的一些实施方案中，式(I)的化合物是式(I”’)的化合物

其中R¹、R³和R⁴如本文所定义；

并且所述方法还包括使包含式(I-iiC)的部分的前体在存在催化剂的情况下反应：

其中

最接近**的碳原子是噻吩的环成员，所述环成员(i)不直接键合至噻吩的硫环成员，并且(ii)也是式(I”’)的化合物中的吡啶酮环的环成员；

最接近***的碳原子是噻吩的环成员，所述环成员(i)不直接键合至噻吩的硫环成员，并且(ii)不是式(I”’)的化合物中的吡啶酮环的环成员；并且

Hal¹选自氯、溴和碘；

以形成包含式(I-iiC')的部分的前体

以及

使包含式(I-iiC')的部分的前体反应以形成包含式(I-iiC”)的部分的前体

在一些实施方案中，包含式(I-iiC”)的部分的前体是包含式(I-iB)的部分的式(I)前体。

在一些实施方案中，催化剂是钯催化剂。在一些实施方案中，钯催化剂是四三苯基膦钯(0)。

在一些实施方案中，使包含式(I-iiC)的部分的前体反应在存在碱的情况下进行。在一些实施方案中，碱是碳酸盐碱。在一些实施方案中，碳酸盐碱是碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯。在一些实施方案中，碳酸盐碱是碳酸钾。

在一些实施方案中，Hal是氯。在一些实施方案中，Hal是溴。在一些实施方案中，Hal是碘。

在制备式(I)、(I')、(I”)和(I”’)的化合物的方法的前述实施方案中的任一者中，所述方法还包括使包含式(I-iiiA)的部分的前体与式Z²-R¹的化合物反应：

(I-iiiA)

其中式(I-iiiA)的部分中与*****相邻的碳原子是式(I)、(I’)、(I”)或(I”’)噻吩的环成员，所述环成员键合至硫环成员，不键合至式(I)、(I’)、(I”)或(I”’)中的吡啶酮环的羰基所对应的碳；

其中Z¹和Z²中的一者是Hal²，并且Z¹和Z²中的另一者是M；

Hal²选自由以下各项组成的组：碘、溴、氯和三氟甲磺酸酯；

M选自由以下各项组成的组：三丁基锡、三甲基锡、-B(OH)₂、-MgCl、-MgBr、-MgI、-ZnCl、-ZnBr和-ZnI；并且

其中R¹如本文所定义；以形成式(I)、(I')、(I”)或(I”’)的化合物的部分。

在一些实施方案中，Z¹是Hal²，并且Z²是M。在一些实施方案中，Z¹是M，并且Z²是Hal²。

在一些实施方案中，包含式(I-iiiA)的部分的前体与式Z²-R¹的化合物的反应在存在催化剂、碱或盐以及任选的配体的情况下进行。

在一些实施方案中，催化剂是钯催化剂。在一些实施方案中，钯催化剂选自由以下各项组成的组：四(三苯基膦)钯(0)、(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)、(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)-二氯甲烷络合物、乙酸钯(II)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)。在一些实施方案中，钯催化剂是(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)或(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)-二氯甲烷络合物。在一些实施方案中，钯催化剂是(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)。

在一些实施方案中，配体选自由以下各项组成的组：三环己基膦、2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯、三叔丁基膦、三异丙基联苯(t-BuX-Phos)、二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]膦和外消旋-2-(二叔丁基膦)-1,1'-联萘。例如，配体是2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯。

在一些实施方案中，盐或碱选自由以下各项组成的组：碘化亚铜(I)、碳酸铯、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠和氟化铯。例如，盐或碱是碳酸钠。

在一些实施方案中，包含式(I-iiiA)的部分的前体与式Z²-R¹的化合物的反应在约40℃至约130℃的温度下进行。例如，包含式(I-iiiA)的部分的前体与式Z²-R¹的化合物的反应在约50℃至约130℃、约60℃至约130℃、70℃至约130℃、约80℃至约130℃、90℃至约130℃、约100℃至约130℃、约110℃至约130℃、约120℃至约130℃、约50℃至约120℃、约50℃至约110℃、约50℃至约100℃、约50℃至约90℃、约50℃至约80℃、约50℃至约70℃、约50℃至约60℃、约60℃至约120℃、约70℃至约110℃、约80℃至约100℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃、约90℃、约100℃、约120℃和约130℃的温度下进行。

在一些实施方案中，当反应的前体的任何部分包含一个或多个N-H和/或O-H键时，所述一个或多个N-H和/或O-H键的至少一个氢任选地被保护基团(例如，叔丁氧基羰基)替换。

应当理解，在本文的实施方案中的任一者中，没有暗示或排除特定的步骤顺序，除非另外说明或除非特定的步骤顺序是化学上不可行的。此外，除非另外说明或除非化学上不可行，否则任何前体都可以作为形成任何其他前体的中间体。

在一个非限制性示例性实施方案中，包含式(I-iA)的部分的前体是包含式(I-iA')的部分的前体的前体；它可以是包含式(I-iiA)的部分的前体的前体；它可以是包含式(I-iiiA)的部分的前体的前体。在另一个非限制性实例中，包含式(I-iiA)的部分的前体可以是包含式(I-iA)的部分的前体的前体，它是包含式(I-iA')的部分的前体的前体；它可以是包含式(I-iiiA)的部分的前体的前体。在另一个非限制性实例中，包含式(I-iiiA)的部分的前体可以是包含式(I-iA)的部分的前体的前体，它是包含式(I-iA')的部分的前体的前体；它可以是包含式(I-iiA)的部分的前体的前体。其他前体关系在本领域的普通技术人员的能力范围内。

治疗方法

本文提供了一种治疗需要治疗的受试者的癌症(例如，CDC7相关性癌症)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐或其药物组合物。例如，本文提供了用于治疗需要治疗的受试者中的CDC7相关性癌症的方法，所述方法包括a)在来自所述受试者的样品中检测CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调；以及b)施用治疗有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调包括一个或多个融合蛋白。

在本文描述的任何方法或用途的一些实施方案中，所述癌症(例如，CDC7相关性癌症)是血液癌症。在本文描述的任何方法或用途的一些实施方案中，所述癌症(例如，CDC7相关性癌症)是实体瘤。在本文描述的任何方法或用途的一些实施方案中，所述癌症(例如，CDC7相关性癌症)是肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、甲状腺癌(例如，乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌(例如，散发性甲状腺髓样癌或遗传性甲状腺髓样癌)、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌或难治性分化型甲状腺癌)、甲状腺腺瘤、内分泌腺肿瘤、肺腺癌、细支气管肺癌、2A或2B型多发性内分泌肿瘤(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、乳腺癌、乳腺瘤、乳腺肿瘤、结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜神经节神经瘤病、炎性肌纤维母细胞瘤或子宫颈癌。在本文所述的方法或用途中的任一者的一些实施方案中，所述癌症(例如，CDC7相关性癌症)选自由以下组成的组：急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、青少年癌症、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸形瘤/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干神经胶质瘤、脑瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、类癌瘤、未知的原发性癌、心脏肿瘤、子宫颈癌、儿童期癌症、脊索瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓增生性肿瘤、按部位分布的肿瘤、肿瘤、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、皮肤血管肉瘤、胆管癌、原位导管癌、胚胎肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、嗅神经母细胞瘤、尤文肉瘤(Ewing sarcoma)、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、输卵管癌、骨纤维组织细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞瘤、妊娠滋养细胞疾病、胶质瘤、毛细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、胸腔肿瘤、头颈肿瘤、CNS肿瘤、原发性CNS肿瘤、心脏病、肝细胞癌、组织细胞增生、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、下咽癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、卡波济肉瘤(Kaposi sarcoma)、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增多症(Langerhans cell histiocytosis)、喉癌、白血病、嘴唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨癌、黑素瘤、默克尔细胞癌(Merkel cellcarcinoma)、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、中线癌、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、按部位分布的肿瘤、肿瘤、骨髓性白血病、髓样白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、肺肿瘤、肺癌、肺部肿瘤、呼吸道肿瘤、支气管癌、支气管肿瘤、口癌、口腔癌、唇癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体癌、浆细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、与妊娠有关的乳腺癌、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性腹膜癌、前列腺癌、直肠癌、结肠癌、结肠肿瘤、肾细胞癌、CDC7 inoblastoma、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞泽里综合征(Sezary syndrome)、皮肤癌、斯皮茨瘤(Spitz tumor)、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、鳞状颈癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂的移行细胞癌和uCDC7er、未知的原发性癌、uCDC7hral癌症、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌和维耳姆斯瘤(Wilms'tumor)。

在一些实施方案中，血液癌症(例如，作为CDC7相关性癌症的血液癌症)选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也被称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤，例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、急性早幼粒细胞性白血病(APL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性粒细胞性白血病(CMML)、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)、急性未分化的白血病(AUL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、淋巴细胞性白血病(PML)、青少年骨髓单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、伴有三系骨髓增生异常的AML(AML/TMDS)、混合谱系白血病(MLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生异常(MPD)和多发性骨髓瘤(MM)。血液癌症的另外的实例包含骨髓增生异常(MPD)，如真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板减少症(ET)和特发性原发性骨髓纤维化(IMF/IPF/PMF)。在一些实施方案中，血液癌症(例如，作为CDC7相关性癌症的血液癌症)是AML或CMML。

在一些实施方案中，所述癌症(例如，CDC7相关性癌症)是实体瘤。实体瘤(例如，作为CDC7相关性癌症的实体瘤)的实例包括，例如，甲状腺癌(例如，乳头状甲状腺癌、髓样甲状腺癌)、肺癌(例如，肺腺癌、小细胞肺癌)、胰腺癌、胰管癌、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、头颈肿瘤、神经母细胞瘤和黑素瘤。参见，例如，Nature ReviewsCancer,2014,14,173-186。

在一些实施方案中，癌症选自由以下各项组成的组：肺癌、乳头状甲状腺癌、髓样甲状腺癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌、难治性分化型甲状腺癌、2A型或2B型多发性内分泌瘤(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、结肠直肠癌、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜的神经节细胞瘤和宫颈癌。

在一些实施方案中，受试者是人。

式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)以及其药学上可接受的盐和溶剂化物也可用于治疗CDC7相关性癌症。

因此，本文还提供了一种用于治疗被诊断患有或鉴定为患有CDC7相关性癌症，例如，本文公开的示例性CDC7相关性癌症中的任一者的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如本文所定义的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐或其药物组合物。在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)选自实施例1-65。

CDC7激酶、CDC7基因或它们中的任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平的失调可以有助于肿瘤发生。例如，与野生型CDC7蛋白相比，融合蛋白可以具有增加的激酶活性，由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导，野生型CDC7激酶在哺乳动物细胞中的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌性细胞相比)，CDC7 mRNA剪接变体也可以导致CDC7的失调。

在一些实施方案中，本文提供的化合物表现出脑和/或中枢神经系统(CNS)渗透性。此类化合物能够穿过血脑屏障并抑制脑和/或其他CNS结构中的CDC7激酶活性。在一些实施方案中，本文提供的化合物能够以有效量穿过血脑屏障。例如，对患有癌症(例如，CDC7相关性癌症，如CDC7相关性脑癌或CNS癌症)的受试者的治疗可以包括向所述受试者施用(例如，口服施用)化合物。在一些此类实施方案中，本文提供的化合物可用于治疗原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤。例如，所述化合物可用于治疗一种或多种神经胶质瘤，如胶质母细胞瘤(也被称为多形胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤和混合性胶质瘤、脑膜瘤、髓母细胞瘤、颅内节细胞胶质瘤、神经鞘瘤(schwannomas和neurilemmomas)和颅咽管瘤(参见例如以下文献中列出的肿瘤：Louis,D.N.等人Acta Neuropathol 131(6),803-820(2016年6月))。在一些实施方案中，脑肿瘤是原发性脑肿瘤。在一些实施方案中，受试者此前已经用另一种抗癌剂治疗，例如另一种CDC7抑制剂(例如，非通式(I)化合物的化合物)或多激酶抑制剂。在一些实施方案中，脑肿瘤是转移性脑肿瘤。在一些实施方案中，受试者此前已经用另一种抗癌剂治疗，例如另一种CDC7抑制剂(例如，非式(I)化合物的化合物)或多激酶抑制剂。

在本文所述的方法或用途中的任一者的一些实施方案中，用于使用来自受试者的样品确定受试者是否具有CDC7基因或CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的测定法可以包括例如下一代测序、免疫组织化学、荧光显微镜检查、分离FISH分析、DNA印迹、蛋白质印迹、FACS分析、RNA印迹和基于PCR的扩增(例如，RT-PCR和定量实时RT-PCR)。如本领域众所周知的，通常用例如至少一个经标记的核酸探针或至少一个经标记的抗体或其抗原结合片段来进行所述测定法。测定法可以利用本领域已知的其他检测方法来检测CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施方案中，样品是来自受试者的生物样品或活检样品(例如，石蜡包埋的活检样品)。在一些实施方案中，受试者是疑似患有CDC7相关性癌症的受试者、具有CDC7相关性癌症的一种或多种症状的受试者和/或患CDC7相关性癌症的风险增加的受试者)。

在一些实施方案中，CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调可以使用液体活检(不同地称为流体活检或流体相活检)来鉴定。液体活检方法可以用于检测总肿瘤负荷和/或CDC7基因、CDC7激酶或它们中任何一种的表达或活性或水平的失调。可以对相对容易从受试者获得(例如，经由简单采血)的生物样品进行液体活检，并且与用于检测肿瘤负荷和/或CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的传统方法相比，所述液体活检侵入性大致上较小。在一些实施方案中，液体活检可以用于在比传统方法更早的阶段检测CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的存在。在一些实施方案中，用于液体活检的生物样品可以包含血液、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、痰、支气管肺泡灌洗液、胆汁、淋巴液、囊肿液、粪便、腹水及其组合。在一些实施方案中，液体活检可用于检测循环性肿瘤细胞(CTC)。在一些实施方案中，液体活检可用于检测无细胞DNA。在一些实施方案中，使用液体活检检测到的无细胞DNA是循环性肿瘤DNA(ctDNA)，其源自肿瘤细胞。对ctDNA的分析(例如，使用灵敏检测技术，诸如但不限于，下一代测序(NGS)、传统PCR、数字PCR或微阵列分析)可以用于鉴定CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调。

在一些实施方案中，可以使用液体活检来检测源自单个基因的ctDNA。在一些实施方案中，可以使用液体活检来检测源自多个基因(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个或更多个基因，或者在这些数目之间的任何数目的基因)的ctDNA。在一些实施方案中，来源于多个基因的ctDNA可以使用多种市售测试套件(例如，被设计成检测CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的市售测试套件)中的任一种来检测。液体活检可以用于检测CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调，包括但不限于点突变或单核苷酸变体(SNV)、拷贝数变体(CNV)、遗传融合(例如，易位或重排)、插入、缺失或者它们的任何组合。在一些实施方案中，液体活检可用于检测种系突变。在一些实施方案中，液体活检可用于检测体细胞突变。在一些实施方案中，液体活检可用于检测原发性基因突变(例如，与疾病(例如，癌症)的初始发展相关的原发性突变或原发性融合)。在一些实施方案中，使用液体活检鉴定的CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调也存在于受试者中存在的癌细胞中(例如，肿瘤中)。在一些实施方案中，本文所述的CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调类型可以使用液体活检来检测。在一些实施方案中，通过液体活检鉴定的基因突变可用于将受试者鉴定为特定治疗的候选者。例如，受试者中的CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调的检测可以指示受试者将对包括施用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的治疗有反应。

可以在诊断过程、监测过程和/或治疗过程期间多次进行液体活检，以确定一个或多个临床相关参数，所述临床相关参数包含但不限于疾病的进展和/或治疗的功效。例如，在诊断过程、监测过程和/或治疗过程期间，可以在第一个时间点进行第一次液体活检，并且可以在第二个时间点进行第二次液体活检。在一些实施方案中，第一个时间点可以是在诊断患有疾病的受试者之前的时间点(例如，当受试者健康时)，而第二个时间点可以是受试者患有疾病之后的时间点(例如，第二个时间点可用于诊断患有该疾病的受试者)。在一些实施方案中，第一个时间点可以是在诊断患有疾病的受试者之前的时间点(例如，当受试者健康时)，之后对该受试者进行监视，而第二个时间点可以是在监视受试者之后的时间点。在一些实施方案中，第一时间点可以是诊断受试者患有疾病之后的时间点，在此之后将治疗施用于受试者，第二时间点可以是施用治疗之后的时间点；在此类情况下，第二时间点可以用于评估治疗的功效(例如，如果在第一时间点检测到的一个或多个遗传突变的丰度降低或者检测不到一个或多个遗传突变)。在一些实施方案中，待施用于受试者的治疗可以包括式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的功效可以通过评估在不同时间点从受试者获得的cfDNA，例如，在第一时间点从受试者获得的cfDNA和在第二时间点从受试者获得的cfDNA中的CDC7基因的失调的等位基因频率来确定，其中在第一时间点和第二时间点之间向受试者施用至少一个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。这些方法的一些实施方案还可以包括在第一时间点和第二时间点之间向受试者施用至少一个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。例如，与在第一个时间点从受试者获得的cfDNA中CDC7基因失调的等位基因频率(AF)相比，在第二个时间点从受试者获得的cfDNA中CDC7基因失调的等位基因频率(AF)减少(例如，减少1％至约99％、减少1％至约95％、减少1％至约90％、减少1％至约85％、减少1％至约80％、减少1％至约75％、减少1％至减少约70％、减少1％至减少约65％、减少1％至减少约60％、减少1％至减少约55％、减少1％至减少约50％、减少1％至减少约45％、减少1％至减少约40％、减少1％至减少约35％、减少1％至减少约30％、减少1％至减少约25％、减少1％至减少约20％、减少1％至减少约15％、减少1％至减少约10％、减少1％至减少约5％、减少约5％至约99％、减少约10％至约99％、减少约15％至约99％、减少约20％至约99％、减少约25％至约99％、减少约30％至约99％、减少约35％至约99％、减少约40％至约99％、减少约45％至约99％、减少约50％至约99％、减少约55％至约99％、减少约60％至约99％、减少约65％至约99％、减少约70％至约99％、减少约75％至约95％、减少约80％至约99％、减少约90％至约99％、减少约95％至约99％、减少约5％至约10％、减少约5％至约25％、减少约10％至约30％、减少约20％至约40％、减少约25％至约50％、减少约35％至约55％、减少约40％至约60％、减少约50％至约75％、减少约60％至约80％或减少约65％至约85％)，这表明式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐对受试者有效。在一些实施方案中，减小AF，使得水平低于仪器的检测极限。或者，与在第一时间点从受试者获得的cfDNA中的CDC7基因的失调的等位基因频率(AF)相比，在第二时间点从受试者获得的cfDNA中的CDC7基因的失调的等位基因频率(AF)的增加表明式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐对受试者无效。这些方法的一些实施方案还可以包括向其中式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐被确定为有效的受试者施用另外剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或药学上可接受的盐。这些方法的一些实施方案还可以包括向其中式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐被确定为无效的受试者施用不同的治疗(例如，不包括作为单药疗法施用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的治疗)。

在一些实施方案中，CDC7相关性癌症是高微卫星不稳定性(MSI-H)癌症。在其他实施方案中，CDC7相关性癌症不是高微卫星不稳定性(MSI-H)癌症。在一些实施方案中，MSI-H状态通过检测选自由以下各项组成的组的重复DNA序列来确定：单核苷酸重复标记、二核苷酸重复标记、准单态性标记或前述中的任一者的组合。

在一些实施方案中，与癌症相关的肿瘤包含选自由以下各项组成的组的表型：染色体不稳定性(CIN)、纺锤体检查点组装缺陷、有丝分裂缺陷、Gl/S检查点缺陷以及它们的组合。在一些实施方案中，与癌症相关的肿瘤包含Wnt信号传导通路突变。在一些实施方案中，Wnt信号传导通路突变选自由以下各项组成的组：腺瘤性结肠息肉病(APC)基因突变、FAT1突变、FAT4突变或前述中的任一者的组合。

在这些方法的一些实例中，第一个时间点和第二个时间点之间的时间差可以为约1天到约1年、约1天到约11个月、约1天到约10个月、约1天到约9个月、约1天到约8个月、约1天到约7个月、约1天到约6个月、约1天到约5个月、约1天到约4个月、约1天到约3个月、约1天到约10周、约1天到约2个月、约1天到约6周、约1天到约1个月、约1天到约25天、约1天到约20天、约1天到约15天、约1天到约10天、约1天到约5天、约2天到约1年、约5天到约1年、约10天到约1年、约15天到约1年、约20天到约1年、约25天到约1年、约1个月到约1年、约6周到约1年、约2个月到约1年、约3个月到约1年、约4个月到约1年、约5个月到约1年、约6个月到约1年、约7个月到约1年、约8个月到约1年、约9个月到约1年、约10个月到约1年、约11个月到约1年、约1天到约7天、约1天到约14天、约5天到约10天、约5天到约20天、约10天到约20天、约15天到约1个月、约15天到约2个月、约1周到约1个月、约2周到约1个月、约1个月到约3个月、约3个月到约6个月、约4个月到约6个月、约5个月到约8个月或约7个月到约9个月。在这些方法的一些实施方案中，受试者可以事先被鉴定为患有具有失调的CDC7基因(例如，本文所述的失调的CDC7基因的实例中的任一者)的癌症。在这些方法的一些实施方案中，受试者可以事先被诊断患有本文所述的任何类型的癌症。在这些方法的一些实施方案中，受试者可以具有一种或多种转移(例如，一种或多种脑转移)。

在上述实施方案中的一些中，cfDNA包括ctDNA，诸如CDC7相关性ctDNA。例如，cfDNA是ctDNA，诸如CDC7相关性ctDNA。在一些实施方案中，cfDNA的至少一部分被确定是CDC7相关性ctDNA，例如，已测序和/或已定量的量的总cfDNA被确定为具有CDC7融合和/或CDC7的过表达。

在医学肿瘤学领域，通常的实践是使用不同形式的治疗的组合来治疗每名患有癌症的受试者。在医学肿瘤学中，除本文提供的组合物之外，此类联合治疗或疗法的一个或多个其他部分还可以是例如外科手术、放射疗法和化学治疗剂，诸如其他激酶抑制剂、信号转导抑制剂和/或单克隆抗体。例如，外科手术可以是开放手术或微创手术。因此，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐也可以用作癌症治疗的佐剂，即，它们可以与一种或多种另外的疗法或治疗剂(例如，通过相同或不同的作用机理起作用的化学治疗剂)组合使用。在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐可以在施用另外的治疗剂或另外的疗法之前使用。例如，可以在一段时间内向有需要的受试者施用一个或多个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，然后至少部分地切除肿瘤。在一些实施方案中，在至少部分地切除肿瘤之前，用一个或多个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗可减小肿瘤的大小(例如，肿瘤负荷)。在一些实施方案中，可以在一段时间内并在一轮或多轮放射疗法下向有需要的受试者施用一个或多个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在一轮或多轮放射治疗之前，用一个或多个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗可减小肿瘤的大小(例如，肿瘤负荷)。

在一些实施方案中，受试者患有难治的或对标准疗法(例如，施用化学治疗剂，诸如第一CDC7抑制剂或多激酶抑制剂、免疫疗法或放射法(例如，放射性碘))不耐受的癌症(例如，局部晚期或转移性肿瘤)。在一些实施方案中，受试者患有难治的或对先前疗法(例如，施用化学治疗剂，诸如第一CDC7抑制剂或多激酶抑制剂、免疫疗法或放射法(例如，放射性碘))不耐受的癌症(例如，局部晚期或转移性肿瘤)。在一些实施方案中，受试者患有没有标准疗法的癌症(例如，局部晚期或转移性肿瘤)。在一些实施方案中，受试者未使用CDC7激酶抑制剂进行过治疗。例如，受试者未使用选择性CDC7激酶抑制剂进行过治疗。在一些实施方案中，受试者使用CDC7激酶抑制剂进行过治疗。

在一些实施方案中，受试者已经接受过先前疗法。在一些实施方案中，患有NSCLC(例如，CDC7相关性NSCLC)的受试者在用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗之前已经接受用基于铂的化学疗法、PD-1/PDL1免疫疗法或它们二者进行的治疗。在一些实施方案中，患有甲状腺癌(例如，CDC7相关性甲状腺癌)的受试者在用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗之前已经接受用索拉非尼、乐伐替尼和放射性碘进行的治疗。在一些实施方案中，患有结肠直肠癌(例如，CDC7相关性结肠直肠癌)的受试者在用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗之前已经在进行或不进行抗VEGF导向疗法或抗EGFR导向疗法的情况下接受用基于氟嘧啶的化学疗法进行的治疗。在一些实施方案中，患有胰腺癌(例如，CDC7相关性胰腺癌)的受试者在用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗之前已经接受用基于氟嘧啶的化学疗法、基于吉西他滨的化学疗法和S-1化学疗法中的一者或多者进行的治疗。在一些实施方案中，患有乳腺癌(例如，CDC7相关性乳腺癌)的受试者在用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗之前已经接受用蒽环霉素、紫杉烷HER2导向疗法和激素疗法中的一者或多者进行的治疗。在一些实施方案中，患有MTC(例如，CDC7相关性MTC癌症)的受试者在用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐进行治疗之前已经接受用卡博替尼和凡德他尼中的一者或多者进行的治疗。

在本文所述的方法中的任一者的一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，与有效量的至少一种另外的治疗剂组合施用，所述至少一种另外的治疗剂选自一种或多种另外的疗法或治疗剂(例如，化学治疗剂)。

另外的治疗剂的非限制性实例包括：其他CDC7靶向治疗剂(即第一或第二CDC7激酶抑制剂)、其他激酶抑制剂(例如，受体酪氨酸激酶靶向治疗剂(例如，Trk抑制剂或EGFR抑制剂))、信号转导通路抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡通路调节剂(例如，奥巴克拉(obataclax))；细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向药剂，包括免疫疗法和放射疗法。

在一些实施方案中，其他CDC7靶向治疗剂是表现出CDC7抑制活性的多激酶抑制剂。在一些实施方案中，其他CDC7靶向治疗抑制剂对CDC7激酶具有选择性。示例性CDC7激酶抑制剂可以针对CDC7激酶表现出小于约1000nM、小于约500nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文所述的测定法中所测量的。在一些实施方案中，CDC7激酶抑制剂可以针对CDC7激酶表现出小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文提供的测定法中所测量的。

激酶靶向治疗剂(例如，第一CDC7抑制剂或第二CDC7抑制剂)的非限制性实例包括TAK931、SRA141和PHA-767491。

多激酶抑制剂的非限制性实例包括阿来替尼(alectinib)(9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基]-11-氧代-6,11-二氢-5H-苯并[b]咔唑-3-腈)；阿姆伐替尼(amuvatinib)(MP470,HPK56)(N-(1,3-苯并二氧代l-5-基甲基)-4-([1]苯并氟[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺)；阿帕替尼(apatinib)(YN968D1)(N-[4-(1-氰基环戊基)苯基-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-烟酰胺甲磺酸酯)；卡博替尼(cabozantinib)(Cometriq XL-184)(N-(4-((6,7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯基)-N'-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；多维替尼(dovitinib)(TKI258；GFKI-258；CHIR-258)((3Z)-4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,3-二氢苯并咪唑-2-亚基]喹啉-2-酮)；法米替尼(famitinib)(5-[2-(二乙基氨基)乙基]-2-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮)；菲卓替尼(fedratinib)(SAR302503,TG101348)(N-(2-甲基-2-丙烷基)-3-{[5-甲基-2-({4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基}氨基)-4-嘧啶基]氨基}苯磺酰胺)；foCDC7inib(XL880,EXEL-2880,GSK1363089,GSK089)(N1'-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-(3-吗啉代丙氧基)-4-喹啉基]氧基]苯基]-N1-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；福坦替尼(fostamantinib)(R788)(2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮,6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]-2,2-二甲基-4-[(膦酰氧基)甲基]-,钠盐(1:2))；依洛赛替(ilorasertib)(ABT-348)(1-(4-(4-氨基-7-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)噻吩并[3,2-c]吡啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲)；乐伐替尼(lenvatinib)(E7080,乐卫玛(Lenvima))(4-[3-氯-4-(环丙基氨基羰基)氨基苯氧基]-7-甲氧基-6-喹啉甲酰胺)；莫特沙尼(motesanib)(AMG706)(N-(3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基)-2-[(吡啶-4-基甲基)氨基]吡啶-3-甲酰胺)；尼达尼布(nintedanib)(3-Z-[1-(4-(N-((4-甲基-哌嗪-1-基)-甲基羰基)-N-甲基-氨基)-苯胺基)-1-苯基-亚甲基]-6-甲氧羰基-2-吲哚啉酮)；普纳替尼(ponatinib)(AP24534)(3-(2-咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-[4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺)；PP242(拓克尼布(torkinib))(2-[4-氨基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]-1H-吲哚-5-醇)；奎扎替尼(quizartinib)(1-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-3-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲)；瑞戈非尼(regorafenib)(BAY73-4506,癌瑞格(stivarga))(4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺水合物)；RXDX-105(CEP-32496,阿戈拉非尼(agerafenib))(1-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)-3-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)异噁唑-3-基)脲)；塞马尼布(semaxanib)(SU5416)((3Z)-3-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亚甲基]-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮)；西曲伐替尼(sitravatinib)(MGCD516,MG516)(N-(3-氟-4-{[2-(5-{[(2-甲氧基乙基)氨基]甲基}-2-吡啶基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基]氧基}苯基)-N'-(4-氟苯基)-1,1-环丙烷二甲酰胺)；索拉非尼(sorafenib)(BAY43-9006)(4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲酰胺)；凡德他尼(vandetanib)(N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺)；瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787,PTK/ZK,ZK222584)(N-(4-氯苯基)-4-(吡啶-4-基甲基)酞嗪-1-胺)；AD-57(N-[4-[4-氨基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-N'-[3-(三氟甲基)苯基]-脲)；AD-80(1-[4-(4-氨基-1-丙-2-基吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基]-3-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]脲)；AD-81(1-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲)；ALW-II-41-27(N-(5-((4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)-5-(噻吩-2-基)烟酰胺)；BPR1K871(1-(3-氯苯基)-3-(5-(2-((7-(3-(二甲基氨基)丙氧基)喹唑啉-4-基)氨基)乙基)噻唑-2-基)脲)；CLM3(1-苯乙基-N-(1-苯乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；EBI-907(N-(2-氯-3-(1-环丙基-8-甲氧基-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-7-基)-4-氟苯基)-3-氟丙烷-1-磺胺)；NVP-AST-487(N-[4-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]-N'-[4-[[6-(甲基氨基)-4-嘧啶基]氧]苯基]-脲)；NVP-BBT594(BBT594)(5-((6-乙酰胺基嘧啶-4-基)氧基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)吲哚啉-1-甲酰胺)；PD173955(6-(2,6-二氯苯基)-8-甲基-2-(3-甲基硫基苯胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮)；PP2(4-氨基-5-(4-氯苯基)-7-(二甲基乙基)吡唑并[3,4-d]嘧啶)；PZ-1(N-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺)；RPI-1(1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟基苯基)亚甲基]-H-吲哚-2-酮；(3E)-3-[(4-羟基苯基)亚甲基]-5,6-二甲氧基-1H-吲哚-2-酮)；SGI-7079(3-[2-[[3-氟-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-苯乙腈)；SPP86(1-异丙基-3-(苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；SU4984(4-[4-[(E)-(2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]苯基]哌嗪-1-甲醛)；舒尼替尼(sunitinb)(SU11248)(N-(2-二乙基氨基乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)；TG101209(N-叔丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺)；醉茄素A(Withaferin A)((4β,5β,6β,22R)-4,27-二羟基-5,6:22,26-二环氧麦角-2,24-二烯-1,26-二酮)；XL-999((Z)-5-((1-乙基哌啶-4-基)氨基)-3-((3-氟苯基)(5-甲基-1H-咪唑-2-基)亚甲基)吲哚啉-2-酮)；BPR1J373(5-苯基噻唑-2-基胺-嘧啶衍生物)；CG-806(CG'806)；DCC-2157；GTX-186；HG-6-63-01((E)-3-(2-(4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烯基)-N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲酰胺)；SW-01(盐酸环苯扎林)；XMD15-44(N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-(吡啶-3-基乙炔基)苯酰胺(由结构产生))；Y078-DM1(抗体药物缀合物，由连接至细胞毒性剂美登素的衍生物的CDC7抗体(Y078)组成)；Y078-DM4(抗体药物缀合物，由连接至细胞毒性剂美登素的衍生物的CDC7抗体(Y078)组成)；ITRI-305(D0N5TB,DIB003599)；BLU-667((1S,4R)-N-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲氧基-4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺)；BLU6864；DS-5010；GSK3179106；GSK3352589；NMS-E668；TAS0286/HM05；TPX0046；和N-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺。

受体酪氨酸激酶(例如，Trk)靶向治疗剂的非限制性实例包括阿法替尼(afatinib)、卡博替尼、西妥昔单抗(cetuximab)、克唑替尼(crizotinib)、达拉非尼(dabrafenib)、恩曲替尼(entrectinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、伊马替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来他替尼(lestaurtinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、帕尼单抗(panitumumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、舒尼替尼、曲妥珠单抗(trastuzumab)、l-((3S,4R)-4-(3-氟苯基)-l-(2-甲氧基乙基)吡咯烷-3-基)-3-(4-甲基-3-(2-甲基嘧啶-5-基)-l-苯基-lH-吡唑-5-基)脲、AG 879、AR-772、AR-786、AR-256、AR-618、AZ-23、AZ623、DS-6051、6976、GNF-5837、GTx-186、GW 441756、LOXO-101、MGCD516、PLX7486、RXDX101、VM-902A、TPX-0005、TSR-011、GNF-4256、N-[3-[[2,3-二氢-2-氧代-3-(1H-吡咯-2-基亚甲基)-1H-吲哚-6-基]氨基]-4-甲基苯基]-N′-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-脲、AZ623、AZ64、(S)-5-Chloro-N2-(1-(5-氟吡啶-2-基)乙基)-N4-(5-异丙氧基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺、AZD7451、CEP-751、CT327、舒尼替尼、GNF-8625以及(R)-1-(6-(6-(2-(3-氟苯基)吡咯烷-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-[2,4'-联吡啶]-2'-基)哌啶-4-醇。

BRAF抑制剂的非限制性实例包括：达拉非尼、威罗非尼(vemurafenib)(也被称为RG7204或PLX4032)、对甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib tosylate)、PLX-4720、GDC-0879、BMS-908662(百时美施贵宝公司(Bristol-Meyers Squibb))、LGX818(诺华公司(Novartis))、PLX3603(豪夫迈罗氏公司(Hofmann-LaRoche))、RAF265(诺华公司)、RO5185426(豪夫迈罗氏公司)和GSK2118436(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))。BRAF抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

在一些实施方案中，受体酪氨酸激酶抑制剂是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR)。例如，EGFR抑制剂可以包括奥希替尼(osimertinib)(merelectinib，Tagrisso)、厄洛替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、西妥昔单抗(Erbitux)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)(Portrazza)、来那替尼(neratinib)(Nerlynx)、拉帕替尼(Tykerb)、帕尼单抗(Vectibix)和凡德他尼(Caprelsa)。

在一些实施方案中，信号转导途径抑制剂包括Ras-Raf-MEK-ERK途径抑制剂(例如，比美替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、康奈非尼(encorafenib)、索拉非尼、曲美替尼(trametinib)和威罗非尼)、PI3K-Akt-mTOR-S6K途径抑制剂(例如，依维莫司(everolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、哌立福新(perifosine)、替西罗莫司(temsirolimus))和其他激酶抑制剂，如巴瑞替尼(baricitinib)、布加替尼(brigatinib)、卡马替尼(capmatinib)、达鲁色替(danusertib)、依鲁替尼(ibrutinib)、密西尼(milciclib)、槲皮素(quercetin)、瑞戈非尼、鲁索替尼(ruxolitinib)、司马沙尼、AP32788、BLU285、BLU554、INCB39110、INCB40093、INCB50465、INCB52793、INCB54828、MGCD265、NMS-088、NMS-1286937、PF 477736((R)-氨基-N-[5,6-二氢-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-氧代-1H吡咯并[4,3,2-ef][2,3]苯并二氮杂-8-基]-环己烷乙酰胺)、PLX3397、PLX7486、PLX8394、PLX9486、PRN1008、PRN1371、RXDX103、RXDX106、RXDX108和TG101209(N-叔丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺)。

检查点抑制剂的非限制性实例包括伊匹木单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、纳武单抗(nivolumab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、MPDL3208A、MEDI4736、MSB0010718C、BMS-936559、BMS-956559、BMS-935559(MDX-1105)、AMP-224和派姆单抗(pembrolizumab)。

在一些实施方案中，细胞毒性化学治疗剂选自三氧化二砷(arsenic trioxide)、博来霉素(bleomycin)、卡巴他赛(cabazitaxel)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、柔红霉素(daunorubicin)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、依托泊苷(etoposide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、吉西他滨、伊立替康(irinotecan)、洛莫司丁(lomustine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素C(mitomycin C)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、替莫唑胺(temozolomide)和长春新碱(vincristine)。

靶向血管生成的疗法的非限制性实例包括阿柏西普(aflibercept)和贝伐单抗(bevacizumab)。

在一些实施方案中，另外的疗法或治疗剂可以包括组氨酰-tRNA合成酶(HRS)多肽或编码HRS多肽的可表达核苷酸。

术语“免疫疗法”是指调节免疫系统的药剂。在一些实施方案中，免疫疗法可以增加免疫系统调节剂的表达和/或活性。在一些实施方案中，免疫疗法可以降低免疫系统调节剂的表达和/或活性。在一些实施方案中，免疫疗法可以募集和/或增强免疫细胞的活性。

在一些实施方案中，免疫疗法是细胞免疫疗法(例如，过继T细胞疗法、树突状细胞疗法、自然杀伤细胞疗法)。在一些实施方案中，细胞免疫疗法是sipuleucel-T(APC8015；Provenge^TM；Plosker(2011)Drugs 71(1):101-108)。在一些实施方案中，细胞免疫疗法包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞。在一些实施方案中，细胞免疫疗法是CAR-T细胞疗法。在一些实施方案中，CAR-T细胞疗法是替沙仑赛(tisagenlecleucel)(Kymriah^TM)。

在一些实施方案中，免疫疗法是抗体疗法(例如，单克隆抗体、缀合抗体)。在一些实施方案中，抗体疗法是贝伐单抗(Mvasti^TM，)、曲妥珠单抗/>阿维单抗(avelumab)/>利妥昔单抗(rituximab)(MabThera^TM，/>)、依决洛单抗(edrecolomab)(Panorex)、达雷妥尤单抗(daratumuab)/>奥拉单抗(olaratumab)(Lartruvo^TM)、奥法木单抗(ofatumumab)/>阿仑单抗(alemtuzumab)/>西妥昔单抗/>奥戈伏单抗(oregovomab)、派姆单抗/>地努妥昔单抗(dinutiximab)/>阿托珠单抗(obinutuzumab)曲美木单抗(CP-675,206)、雷莫芦单抗(ramucirumab)/>乌利妥昔单抗(ublituximab)(TG-1101)、帕尼单抗/>依洛珠单抗(elotuzumab)(Empliciti^TM)、阿维单抗(avelumab)/>耐昔妥珠单抗(Portrazza^TM)、西妥珠单抗(cirmtuzumab)(UC-961)、伊布单抗(ibritumomab)/>伊沙妥昔单抗(isatuximab)(SAR650984)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、非苏木单抗(fresolimumab)(GC1008)、利瑞鲁单抗(lirilumab)(INN)、莫格利珠单抗(mogamulizumab)/>非克拉珠单抗(ficlatuzumab)(AV-299)、地舒单抗(denosumab)/>盖尼塔单抗(ganitumab)、乌瑞芦单抗(urelumab)、匹地利珠单抗或阿麦妥单抗(amatuximab)。

在一些实施方案中，免疫疗法是抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，抗体-药物缀合物是吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(Mylotarg^TM)、奥英妥珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)维汀-本妥昔单抗(brentuximab vedotin)恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)(TDM-1；/>)、索星-米妥昔单抗(mirvetuximab soravtansine)(IMGN853)或雷星-阿奈妥单抗(anetumabravtansine)。

在一些实施方案中，免疫疗法包括博纳吐单抗(AMG103；)或米哚妥林(midostaurin)(Rydapt)。

在一些实施方案中，免疫疗法包括毒素。在一些实施方案中，免疫疗法是地尼白介素(denileukin diftitox)

在一些实施方案中，免疫疗法是细胞因子疗法。在一些实施方案中，细胞因子疗法是白介素2(IL-2)疗法、干扰素α(IFNα)疗法、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)疗法、白介素12(IL-12)疗法、白介素疗法15(IL-15)疗法、白介素7(IL-7)疗法或促红细胞生成素α(EPO)疗法。在一些实施方案中，IL-2疗法是阿地白介素(aldesleukin)在一些实施方案中，IFNα疗法是/>(Roferon-/>)。在一些实施方案中，G-CSF疗法是非格司亭(filgrastim)/>

在一些实施方案中，免疫疗法是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫疗法包含一种或多种免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是伊匹木单抗或曲美木单抗(CP-675,206)。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是派姆单抗或纳武单抗/>在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是阿妥珠单抗(atezolizumab)/>阿维单抗/>或德瓦鲁单抗(durvalumab)(Imfinzi^TM)。

在一些实施方案中，免疫疗法是基于mRNA的免疫疗法。在一些实施方案中，基于mRNA的免疫疗法是CV9104(参见例如，Rausch等人(2014)Human Vaccin Immunother 10(11):3146-52；和Kubler等人(2015)J.Immunother Cancer 3:26)。

在一些实施方案中，免疫疗法是卡介苗芽孢杆菌(BCG)疗法。

在一些实施方案中，免疫疗法是溶瘤病毒疗法。在一些实施方案中，溶瘤病毒疗法是拉他莫基(talimogene alherparepvec)(T-VEC；)。

在一些实施方案中，免疫疗法是癌症疫苗。在一些实施方案中，癌症疫苗是人乳头瘤病毒(HPV)疫苗。在一些实施方案中，HPV疫苗是或/>在一些实施方案中，癌症疫苗是乙型肝炎病毒(HBV)疫苗。在一些实施方案中，HBV疫苗是Engerix-/>Recombivax/>或GI-13020/>在一些实施方案中，癌症疫苗是或/>在一些实施方案中，癌症疫苗是/>GVAX、ADXS11-001、ALVAC-CEA、/>CimaVax-EGF、lapuleucel-T(APC8024；Neuvenge^TM)、GRNVAC1、GRNVAC2、GRN-1201、hepcortespenlisimut-L(Hepko-V5)、/>SCIB1、BMT CTN 1401、PrCa VBIR、PANVAC、/>DPX-Survivac或viagenpumatucel-L(HS-110)。

在一些实施方案中，免疫疗法是肽疫苗。在一些实施方案中，肽疫苗是nelipepimut-S(E75)(NeuVax^TM)、IMA901或SurVaxM(SVN53-67)。在一些实施方案中，癌症疫苗是免疫原性的个人新抗原疫苗(参见例如，Ott等人(2017)Nature 547:217-221；Sahin等人(2017)Nature 547:222-226)。在一些实施方案中，癌症疫苗是RGSH4K或NEO-PV-01。在一些实施方案中，癌症疫苗是基于DNA的疫苗。在一些实施方案中，基于DNA的疫苗是乳球蛋白-A DNA疫苗(参见例如，Kim等人(2016)OncoImmunology 5(2):e1069940)。

在一些实施方案中，免疫靶向剂选自阿地白介素、干扰素α-2b、伊匹木单抗、兰洛利珠单抗(lambrolizumab)、纳武单抗、泼尼松(prednisone)和sipuleucel-T。

放射疗法的非限制性实例包括放射性碘疗法、外束放射和镭223疗法。

另外的激酶抑制剂包括在以下专利中描述的那些：例如，美国专利第7,514,446号；第7,863,289号；第8,026,247号；第8,501,756号；第8,552,002号；第8,815,901号；第8,912,204号；第9,260,437号；第9,273,051号；美国公开号US 2015/0018336；国际公开号WO2007/002325；WO 2007/002433；WO 2008/080001；WO 2008/079906；WO 2008/079903；WO2008/079909；WO 2008/080015；WO 2009/007748；WO 2009/012283；WO 2009/143018；WO2009/143024；WO 2009/014637；2009/152083；WO 2010/111527；WO 2012/109075；WO 2014/194127；WO 2015/112806；WO 2007/110344；WO 2009/071480；WO 2009/118411；WO 2010/031816；WO 2010/145998；WO 2011/092120；WO 2012/101032；WO 2012/139930；WO 2012/143248；WO 2012/152763；WO 2013/014039；WO 2013/102059；WO 2013/050448；WO 2013/050446；WO 2014/019908；WO 2014/072220；WO 2014/184069；WO 2016/075224；WO 2016/081450；WO 2016/022569；WO 2016/011141；WO 2016/011144；WO 2016/011147；WO 2015/191667；WO 2012/101029；WO 2012/113774；WO 2015/191666；WO 2015/161277；WO 2015/161274；WO 2015/108992；WO 2015/061572；WO 2015/058129；WO 2015/057873；WO 2015/017528；WO/2015/017533；WO 2014/160521；和WO 2014/011900，所述专利中的每个专利在此通过引用整体并入本文。

尽管在不同类型的癌症之间肿瘤发生的遗传基础可能有所不同，但对于所有实体瘤类型而言，转移所需的细胞和分子机制似乎是相似的。在转移性级联过程中，癌细胞失去生长抑制反应，发生粘附性改变，并产生可降解细胞外基质成分的酶。这导致肿瘤细胞与原始肿瘤分离，通过新形成的脉管系统渗透到循环系统中，肿瘤细胞在可能形成菌落的有利的远端位点处发生迁移和外渗。许多基因已经被鉴定为转移的启动子或抑制子。例如，神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及其CDC7受体酪氨酸激酶的过表达与癌症增殖和转移相关。参见，例如，Zeng等人,J.Int.Med.Res.(2008)36(4):656-64。

因此，本文还提供了用于抑制、预防、帮助预防或减轻有需要的受试者的癌症的转移症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐或其药物组合物。此类方法可用于治疗本文所述的一种或多种癌症。参见例如，美国公开号2013/0029925；国际公开号WO 2014/083567；和美国专利第8,568,998号。另见例如，Hezam K等人,Rev Neurosci 2018年1月26日；29:93-98；Gao L等人,Pancreas2015年1月；44:134-143；Ding K等人,J Biol Chem2014年6月6日；289:16057-71；以及Amit M等人,Oncogene 2017年6月8日；36:3232-3239。在一些实施方案中，所述癌症是CDC7相关性癌症。在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐与另一种疗法或另一种治疗剂，包括化学治疗剂，诸如激酶抑制剂组合使用。例如，第一或第二CDC7激酶抑制剂。在一些实施方案中，另一种治疗剂是克唑替尼。在一些实施方案中，另一种治疗剂是奥希替尼。在一些实施方案中，在施用药物组合物之前，已经向受试者施用一个或多个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，癌症是肺癌(例如，CDC7相关性肺癌)。在一些实施方案中，另一种治疗剂是PARP抑制剂(例如，奥拉帕尼(olaparib))。在一些实施方案中，另一种治疗剂是ATR抑制剂(例如，塞拉色替(ceralasertib))。在一些实施方案中，另一种治疗剂是Wee1抑制剂(例如，AZD-1775)。在一些实施方案中，另一种治疗剂是EGFR抑制剂(例如，拉帕替尼)。

术语“转移”是本领域已知的术语，并且是指在受试者中远离原发性肿瘤的位点处形成另外的肿瘤(例如，实体瘤)，其中另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。

还提供了降低患有CDC7相关性癌症的受试者中发生转移或另外的转移的风险的方法，所述方法包括：选择、鉴定或诊断患有CDC7相关性癌症的受试者，以及向被选择、鉴定或诊断为患有CDC7相关性癌症的受试者施用有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。还提供了降低患有CDC7相关性癌症的受试者中发生转移或另外的转移的风险的方法，所述方法包括向患有CDC7相关性癌症的受试者施用有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。可以将患有CDC7相关性癌症的受试者中发生转移或另外的转移的风险的降低与治疗前受试者中发生转移或另外的转移的风险进行比较，或者与尚未接受任何治疗或接受不同治疗的患有相似或相同的CDC7相关性癌症的受试者或受试者群体进行比较。在一些实施方案中，另一种治疗剂是克唑替尼。在一些实施方案中，另一种治疗剂是奥希替尼。在一些实施方案中，在施用药物组合物之前，已经向受试者施用一个或多个剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，癌症是肺癌(例如，CDC7相关性肺癌)。

短语“发生转移的风险”意指患有原发性肿瘤的受试者在设定的时间段内在远离受试者中的原发性肿瘤的位点处出现另外的肿瘤(例如，实体瘤)的风险，其中所述另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。本文描述了用于在患有癌症的受试者中降低发生转移的风险的方法。

短语“发生另外的转移的风险”意指患有原发性肿瘤并在远离原发性肿瘤的位点处患有一种或多种另外的肿瘤(其中所述一种或多种另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞)的受试者将出现远离原发性肿瘤的一种或多种另外的肿瘤的风险，其中所述另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。本文描述了降低发生另外的转移的风险的方法。

用多激酶抑制剂(MKI)或靶标特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂、RET抑制剂或RAS抑制剂)对患有癌症的受试者进行治疗可以导致癌症中的CDC7基因、CDC7激酶或它们的表达或活性或水平的失调，和/或对CDC7抑制剂的耐受性。参见，例如，Bhinge等人,Oncotarget 8:27155-27165,2017；Chang等人,Yonsei Med.J.58:9-18,2017；以及Lopez-Delisle等人,doi:10.1038/s41388-017-0039-5,Oncogene 2018。

用CDC7抑制剂与多激酶抑制剂或靶标特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂、RET抑制剂或RAS抑制剂)组合对患有癌症的受试者进行治疗，与用作为单药疗法的CDC7抑制剂或者作为单药疗法的多激酶抑制剂或靶标特异性激酶抑制剂对同一受试者或类似受试者进行治疗相比，可以具有增加的治疗功效。参见，例如，Tang等人,doi:10.1038/modpathol.2017.109,Mod.Pathol.2017；Andreucci等人,Oncotarget 7:80543-80553,2017；Nelson-Taylor等人,Mol.Cancer Ther.16:1623-1633,2017；以及Kato等人,Clin.Cancer Res.23:1988-1997,2017。

本文提供了治疗患有癌症(例如，本文所述的癌症中的任一者)并且此前施用过多激酶抑制剂(MKI)或靶标特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂、RET抑制剂或RAS抑制剂)(例如，作为单药疗法)的受试者的方法，所述方法包括：向所述受试者施用(i)作为单药疗法的有效剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，或者(ii)有效剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，以及有效剂量的此前施用的MKI或此前施用的靶标特异性激酶抑制剂。

本文提供了治疗患有癌症(例如，本文所述的癌症中的任一者)并且此前施用过MKI或靶标特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂、RET抑制剂或RAS抑制剂)(例如，作为单药疗法)的受试者的方法，所述方法包括：鉴定具有癌细胞的受试者，所述癌细胞具有CDC7基因、CDC7激酶或它们的表达或活性或水平的失调；以及向已鉴定的受试者施用(i)作为单药疗法的有效剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，或者(ii)有效剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，以及有效剂量的此前施用的MKI或此前施用的靶标特异性激酶抑制剂。

本文提供了治疗患有癌症(例如，本文所述的癌症中的任一者)的受试者的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的MKI或靶标特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂、RET抑制剂或RAS抑制剂)(例如，作为单药疗法)持续第一时间段；在该时间段后，鉴定具有癌细胞的受试者，所述癌细胞具有CDC7基因、CDC7激酶或它们的表达或活性或水平的失调；以及向已鉴定的受试者施用(i)作为单药疗法的有效剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，或者(ii)有效剂量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，以及有效剂量的此前施用的MKI或此前施用的靶标特异性激酶抑制剂。

还提供了一种用于抑制哺乳动物细胞中的CDC7激酶活性的方法，所述方法包括使哺乳动物细胞与式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)接触。在一些实施方案中，所述接触是体外的。在一些实施方案中，所述接触是体内的。在一些实施方案中，所述接触是体内的，其中所述方法包括将有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐施用于具有有CDC7激酶活性的哺乳动物细胞的受试者。在一些实施方案中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。在一些实施方案中，所述哺乳动物癌细胞是本文所述的任何癌症。在一些实施方案中，所述哺乳动物癌细胞是CDC7相关性哺乳动物癌细胞。

还提供了一种用于抑制哺乳动物哺乳动物细胞中的CDC7激酶活性的方法，所述方法包括使哺乳动物细胞与式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)接触。在一些实施方案中，所述接触是体外的。在一些实施方案中，所述接触是体内的。在一些实施方案中，所述接触是体内的，其中所述方法包括将有效量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐施用于具有有CDC7激酶活性的哺乳动物细胞的哺乳动物。在一些实施方案中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。在一些实施方案中，所述哺乳动物癌细胞是本文所述的任何癌症。在一些实施方案中，所述哺乳动物癌细胞是CDC7相关性哺乳动物癌细胞。

如本文所用，术语“接触”是指使体外系统或体内系统中的指示部分在一起。例如，使CDC7激酶与本文提供的化合物“接触”包括向具有CDC7激酶的受试者(诸如人)施用本文提供的化合物，以及例如将本文提供的化合物引入含有哺乳动物细胞或纯化制剂的样品中，所述制剂含有CDC7激酶。

本文还提供了一种在体外或体内抑制哺乳动物细胞增殖的方法，所述方法包括使哺乳动物细胞与有效量的如本文所定义的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐或其药物组合物接触。

如本文所定义，“CDC7激酶抑制剂”包括表现出CDC7抑制活性的任何化合物。在一些实施方案中，CDC7激酶抑制剂对CDC7激酶具有选择性。示例性CDC7激酶抑制剂可以针对CDC7激酶表现出小于约1000nM、小于约500nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文所述的测定法中所测量的。在一些实施方案中，CDC7激酶抑制剂可以针对CDC7激酶表现出小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文提供的测定法中所测量的。

如本文所用，“第一CDC7激酶抑制剂”或“第一CDC7抑制剂”是如本文所定义的CDC7激酶抑制剂，但它不包括如本文所定义的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。如本文所用，“第二CDC7激酶抑制剂”或“第二CDC7抑制剂”是如本文所定义的CDC7激酶抑制剂，但它不包括如本文所定义的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐。当本文提供的方法中同时存在第一和第二CDC7抑制剂时，第一和第二CDC7激酶抑制剂是不同的。

本文中描述了示例性第一和第二CDC7激酶抑制剂。在一些实施方案中，第一或第二CDC7激酶抑制剂可以选自由以下各项组成的组：TAK931、SRA141和PHA-767491。

短语“有效量”是指当施用于需要此类治疗的受试者时足以(i)治疗CDC7相关性疾病或病症(如CDC7相关性癌症)；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病状或病症的一种或多种症状；或(iii)延迟本文所述特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作的化合物的量。对应于该量的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的量将根据如具体化合物、疾病状况及其严重程度、需要治疗的受试者的身份(例如，体重)等因素而变化，但仍然可以由本领域技术人员常规确定。

当用作药物时，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)，包括其药学上可接受的盐，可以以药物组合物的形式施用。这些组合物可以按制药领域中熟知的方式制备，并且可以通过多种途径施用，取决于希望局部治疗还是全身性治疗并且取决于有待治疗的部位。施用可以是局部的(包括透皮、表皮、眼部和至粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺部的(例如，通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括通过雾化器；气管内或鼻内)、口服的或肠胃外的。口服施用可以包含被配制用于每天一次或每天两次(BID)施用的剂型。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内肌内或注射或输注；或颅内(例如，鞘内或脑室内)施用。肠胃外施用可以呈单次团注剂量的形式，或者可以例如通过连续的灌注泵进行。用于局部施用的药物组合物和调配物可以包含透皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体以及粉末。常规的药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必要的或希望的。

本文还提供了药物组合物，所述药物组合物含有作为活性成分的式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐，与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。例如，使用式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐制备的药物组合物。在一些实施方案中，所述组合物适合用于局部施用。在制备本文提供的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合、用赋形剂稀释或封装在此类载体之内，所述载体呈例如胶囊、药袋(sachet)、纸或其他容器的形式。当该赋形剂作为一种稀释剂时，它可以是一种固体、半固体或液体材料，该材料可以作为活性成分的媒剂、载体或介质而起作用。因此，组合物可以呈片剂、丸剂、粉剂、锭剂、药袋、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如至多10重量％的活性化合物的软膏、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液以及无菌包装粉剂的形式。在一些实施方案中，所述组合物被配制用于口服施用。在一些实施方案中，所述组合物是固体口服调配物。在一些实施方案中，所述组合物被配制成片剂或胶囊。

本文还提供了药物组合物，所述药物组合物含有式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。可以通过根据常规药物配混技术将式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐与药物载体充分混合来制备含有式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物。取决于期望的施用途径(例如，口服、肠胃外)，载体可以采取各种形式。在一些实施方案中，所述组合物是固体口服组合物。

合适的药学上可接受的载体是本领域众所周知的。这些药学上可接受的载体中的一些载体的描述可以在The Handbook of Pharmaceutical Excipients中找到，该手册由美国药学会和英国药学会出版。

配制药物组合物的方法已经在许多出版物中有所描述，如PharmaceuticalDosage Forms:Tablets,Second Edition,Revised and Expanded,第1-3卷,Lieberman等人编辑；Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications,第1-2卷,Avis等人编辑；以及Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems,第1-2卷,Lieberman等人编辑；由Marcel Dekker,Inc出版。

在制备呈口服剂型的组合物时，可以使用任何常规药物介质。因此对于液体口服制剂诸如混悬剂、酏剂和溶液剂，合适的载体和添加剂包括水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、着色剂等等；对于固体口服制剂诸如粉末剂、胶囊剂和片剂，合适的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等。合适的粘合剂包含但不限于淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成的树胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或油酸钠)、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包含但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。固体口服制剂也可以用如糖等物质进行包衣或肠溶衣，从而调节吸收的主要位点。对于肠胃外施用，载体通常将由无菌水组成，并且可以加入其他成分以增加溶解性或保存性。也可以利用水性载体和适当的添加剂来制备可注射的混悬液或溶液。本文的药物组合物在每个剂量单位(例如，片剂、胶囊、粉末、注射剂、一茶匙等)中将含有递送本文所述的有效剂量所必需的一定量的活性成分。

可以将包含式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的组合物配制成单位剂型，每个剂量含有约5至约1,000mg(1g)，更通常约100mg至约500mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为人受试者和其他受试者的整体剂量的物理上离散的单位，每个单位含有预定量的活性物质(即，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐)，经计算所述预定量的活性物质与合适的药物赋形剂一起产生期望的治疗效果。

在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约5mg至约50mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约5mg到约10mg、约10mg到约15mg、约15mg到约20mg、约20mg到约25mg、约25mg到约30mg、约30mg到约35mg、约35mg到约40mg、约40mg到约45mg或约45mg到约50mg活性成分的化合物或组合物。

在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约50mg至约500mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约50mg到约100mg、约100mg到约150mg、约150mg到约200mg、约200mg到约250mg、约250mg到约300mg、约350mg到约400mg或约450mg到约500mg活性成分的化合物或组合物。在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约10mg、约20mg、约80mg或约160mg的活性成分。

在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约500mg至约1,000mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约500mg到约550mg、约550mg到约600mg、约600mg到约650mg、约650mg到约700mg、约700mg到约750mg、约750mg到约800mg、约800mg到约850mg、约850mg到约900mg、约900mg到约950mg或约950mg到约1,000mg活性成分的化合物或组合物。

式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的日剂量可以在每成年人每天1.0至10,000mg或更高的宽范围内或其中的任何范围内变化。对于口服施用，优选地以片剂形式提供组合物，所述片剂含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、160、200、250和500毫克的活性成分，用于对待治疗受试者的剂量进行对症调整。通常以每天约0.1mg/kg到约1000mg/kg体重(或其中的任何范围)的剂量水平提供有效量的药物。优选地，所述范围为每天约0.5到约500mg/kg体重，或其中的任何范围。更优选地，所述范围为每天约1.0到约250mg/kg体重，或其中的任何范围。更优选地，所述范围为每天约0.1到约100mg/kg体重，或其中的任何范围。在一个实例中，所述范围可以为每天约0.1到约50.0mg/kg体重，或其中的任何量或范围。在另一个实例中，所述范围可以为每天约0.1到约15.0mg/kg体重，或其中的任何范围。在又一个实例中，所述范围可以为每天约0.5到约7.5mg/kg体重，或其中的任何范围。可以按照每天1-4次的方案或以单个日剂量施用含有式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的药物组合物。

活性化合物可以在宽的剂量范围内有效，并且通常以药学有效量施用。本领域技术人员可以容易地确定待施用的最佳剂量。因此，应该理解，实际施用的化合物的量通常将由医生确定，并且将根据相关情况而变化，包含施用方式、实际施用的化合物、制剂的强度、待治疗的病状以及疾病状况的进展。另外，与正在治疗的特定受试者相关的因素，包含患者反应、年龄、体重、饮食、施用时间和受试者症状的严重程度，将导致需要调整剂量。

在一些实施方案中，可以以约1mg/kg至约100mg/kg范围内的量施用本文提供的化合物。在一些实施方案中，可以以约1mg/kg至约20mg/kg、约5mg/kg至约50mg/kg、约10mg/kg至约40mg/kg、约15mg/kg至约45mg/kg、约20mg/kg至约60mg/kg或约40mg/kg至约70mg/kg的量施用本文提供的化合物。例如，约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg或约100mg/kg。在一些实施方案中，这种施用可以是每日一次或每日两次(BID)施用。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可以以约10mg每日两次(BID)、20mg BID、约40mg BID、约60mg BID、约80mg BID、约120mg BID、约160mg BID和约240mg BID的量施用。在一些实施方案中，每个剂量在前一剂量后至少六小时施用。在一些实施方案中，每个剂量在前一剂量后至少十二小时施用。

在一些实施方案中，式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐在较低pH值下表现出pH依赖性溶解度。因此，另外接受质子泵抑制剂(PPI)和/或抗酸剂的受试者可能需要调整式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的剂量(例如，增加式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的剂量)。在一些实施方案中，代谢式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的细胞色素P450(CYP)的同种型是CYP3A4。因此，另外接受抑制或诱导CYP3A4的药剂的受试者可能需要调整式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的剂量(例如，在CYP3A4诱导剂的情况下，增加式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的剂量，或者在CYP3A4抑制剂的情况下，减少式(I)的化合物(例如，式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)中的任一者)或其药学上可接受的盐的剂量)。

本领域技术人员将认识到，使用合适的、已知的和普遍接受的细胞和/或动物模型的体内和体外试验均预示了测试化合物治疗或预防给定病症的能力。

本领域的技术人员将进一步认识到，可以根据临床和医学领域中已知的方法完成在健康受试者和/或患有给定病症的受试者中的人临床试验，包含首次人试验、剂量范围试验和功效试验。

本文提供了可用于例如治疗CDC7相关性疾病或病症(如癌症)的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含一个或多个容器，所述一个或多个容器含有包括有效量的本文提供的化合物的药物组合物。如将对本领域的技术人员显而易见的是，如果需要，此类试剂盒可以进一步包含各种常规药物试剂盒组分中的一个或多个，如例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外的容器等。试剂盒中还可以包含指示待施用的组分的量的说明书(作为插入物或作为标签)、施用指南和/或用于混合组分的指南。

实施例

材料与方法

本文提供的化合物(包含其盐)可以使用已知的有机合成技术制备并且可以根据多种可能的合成途径中的任一种途径合成。

用于制备本文提供的化合物的反应可以在合适的溶剂中进行，所述合适的溶剂可以由有机合成领域中的技术人员容易地选择。合适的溶剂可以在进行反应的温度(例如，范围可以为从溶剂的冻结温度到溶剂的沸腾温度的温度)下与起始材料(反应物)、中间体或产物基本上无反应性。给定的反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于特定的反应步骤，特定反应步骤的合适溶剂可以由技术人员选择。

本文提供的化合物的制备可以涉及各种化学基团的保护和脱保护。保护和脱保护的需要以及适当的保护基团的选择可以由本领域技术人员容易地确定。保护基团的化学可见于例如Protecting Group Chemistry,第1版,Oxford University Press,2000；March’sAdvanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第5版,Wiley-Interscience Publication,2001；以及Peturssion,S.等人,“Protecting Groups inCarbohydrate Chemistry,”J.Chem.Educ.,74(11),1297(1997)。

反应可以根据本领域已知的任何合适的方法来监测。例如，产物形成可以通过光谱手段，诸如核磁共振光谱(例如，¹H或¹³C)、红外光谱、分光光度法(例如，紫外-可见)、质谱法，或者通过色谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LCMS)或薄层色谱法(TLC)来监测。本领域的技术人员可以通过多种方法来纯化化合物，包括高效液相色谱法(HPLC)(“Preparative LC-MS Purification:Improved Compound Specific MethodOptimization”K.F.Blom等人,J.Combi.Chem.6(6),874(2004)，正相二氧化硅色谱法和超临界流体色谱法(SFC)。

除非另外指明，否则所有溶剂和试剂均获自商业来源且无需进一步纯化即可使用。无水溶剂按原样购买和使用。反应通过薄层色谱法(TLC)来监测，用紫外灯(254nm)和KMnO₄染色来观察。NMR光谱是在工作频率为400MHz的Bruker Neo 400M光谱仪上获得的。化学位移以指定溶剂中的四甲基硅烷共振的百万分率(δ)为单位报告。使用Welch Biomate色谱柱(C18,2.7uM,4.6*50mm)或waters H-Class SQD2系统，利用Agilent 1260-6125B单四极质谱仪来获取LC-MS谱。检测通过DAD(254nm、210nm和280nm)来进行。手性HPLC在Watersacquity UPC2系统上在含碱的情况下在Daicel chiralpak AD-H(5um,4.6*250mm)、Daicelchiralpak OD-H(5u,4.6*250mm)、Daicel chiralpak IG-3(3um,4.6*150mm)、ChiralTechnologies Europe AD-3(3um,3.0*150mm)和Trefoil TM Technology Trefoil TMAMY1(2.5um,3.0*150mm)上进行。检测通过DAD(254nm)来进行。制备型HPLC在GILSONTrilution LC系统上使用Welch XB-C18色谱柱(5um,21.2*150mm)来进行。快速色谱法在Biotage Isolera Prime系统上使用Welch WelFlash快速色谱柱(40-63um)来进行。除非另外指明，否则合成的化合物的纯度均≥95％。

缩写

*＝表示“*”前的溶剂或试剂的量在技术中使用的次数等于“*”后的字数。

℃＝摄氏度

¹H NMR＝质子核磁共振谱

AcOH＝乙酸

Boc₂O＝叔丁氧基羰基酸酐

con.＝浓

d＝双重峰

DCM＝二氯甲烷

DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯

DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺

DMF＝N,N-二甲基甲酰胺

EA＝乙酸乙酯

ESI＝电喷雾电离

g＝克

h＝小时

HATU＝(1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐、氮杂苯并三唑四甲基脲六氟磷酸盐

HPLC＝高效液相色谱

LCMS＝液相色谱-质谱

M＝质量

m/z＝质荷比

MeCN＝乙腈

MeOH＝甲醇

MeONa＝甲醇钠

mg＝毫克

mL＝毫升

mmol＝毫摩尔

mol＝摩尔

MS＝质谱

NBS＝N-溴琥珀酰亚胺

obsd.＝实测值

PCy₃＝三环己基膦

Pd(AcO)₂＝乙酸钯(II)

Pd(dppf)Cl₂＝(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)

PE＝石油醚

ppm＝百万分率

PTSA＝对甲苯磺酸

rt＝室温

s＝单峰

t＝三重峰

TBAF＝四丁基氟化铵

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

TLC＝薄层色谱

Trixiephos＝外消旋-2-(二叔丁基膦)-1,1'-联萘

实施例1：5-甲基-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：4-甲氧基噻吩-2-甲酸

在0℃N₂下，向新制备的NaOMe(250mL,1M,2.2当量)的MeOH溶液中添加4-溴噻吩-2-甲酸甲酯(26g,117.6mmol,1当量)和NMP(30mL)。将反应加热至100℃并添加CuI(2.2g,11.8mmol,0.1当量)。然后将混合物在100℃下保持搅拌过夜。在消耗掉大部分4-甲氧基噻吩-2-甲酸甲酯后，将反应冷却至50℃并添加H₂O，然后再连续搅拌1小时。将混合物冷却至室温，浓缩并用Et₂O萃取以除去未反应的起始物料。将水层的pH调节至6～7并再次用EA萃取。在真空下除去溶剂，得到呈黄色油状物的粗化合物4-甲氧基噻吩-2-甲酸(18.0g)，无需进一步纯化即可用于下一步。

步骤B：4-甲氧基噻吩-2-甲酰胺

向粗化合物4-甲氧基噻吩-2-甲酸(18.0g,113.9mmol,1当量)在DCM(250mL)中的混合物中添加DIPEA(73.7g,570.0mmol,5.0当量)、HATU(56.4g,148.2mmol,1.3当量)。在室温下搅拌10分钟后，添加无水NH₄Cl(12.2g,228.0mmol,2当量)并在38℃下保持搅拌过夜。用H₂O淬灭反应并用DCM萃取。将有机层分离、浓缩并通过快速色谱法纯化，用在PE中的0-30％EA洗脱，得到呈白色固体的4-甲氧基噻吩-2-甲酰胺(17g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z157.8[(M+H)⁺]。

步骤C：3-甲氧基-5-甲基-7-氧代-6,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲酸乙酯

在N₂下向4-甲氧基噻吩-2-甲酰胺(300mg,1.9mmol,1.0当量)的DCE(4mL)溶液中添加CsOAc(183mg,0.950mmol,0.5当量)和(C₅(CH₃)₅RhCl)₂Cl₂(23.5mg,2％)。将混合物在室温下搅拌5分钟，然后在N₂下滴加2-重氮-3-氧代丁酸乙酯(0.4mL,2.85mmol,1.50当量)。在室温下搅拌30分钟后，将反应加热至100℃过夜。在完成后，将混合物冷却至室温，用DCM稀释，通过硅藻土垫过滤，并用DCM洗涤。将滤液浓缩并通过快速色谱柱纯化，用在PE中的0-50％EA洗脱，得到呈黄色固体的3-甲氧基-5-甲基-7-氧代-6,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲酸乙酯(116mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 268.1[(M+H)⁺]。

步骤D：7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲酸乙酯

/>

在N₂下将3-甲氧基-5-甲基-7-氧代-6,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲酸乙酯(30mg,0.11mmol,1.0当量)溶解于POCl₃(2mL)中，并在105℃下保持搅拌过夜。将反应用MeOH淬灭，过滤并用反相色谱柱纯化(MeOH/H₂O＝55％)，得到呈白色固体的7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲酸乙酯(20mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 286[(M+H)⁺]。

步骤F：(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)甲醇

在-78℃N₂下向7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲酸乙酯(100mg,0.35mmol,1.0当量)在无水THF(10mL)中的混合物中滴加LAH(1mL,1M,在THF中,2.00当量)。将反应立即加热至50℃并保持搅拌40分钟。在-78℃下用冰水(5滴)淬灭反应，并在搅拌的同时添加酒石酸钠-钾溶液(5mL)。将混合物过滤，用H₂O稀释，用DCM萃取。分离有机层，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩并用快速色谱柱纯化，用在PE中的0-40％EA洗脱，得到呈白色固体的(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)甲醇(25mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z244[(M+H)⁺]。

步骤G：7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲醛

向(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)甲醇(5mg,0.021mmol,1.0当量)在DCM(10mL)中的混合物中添加DMP(17.4mg,0.041mmol,2.00当量)。将反应保持搅拌并缓慢温热至室温2小时。将反应用硫代硫酸钠溶液(2mL)淬灭。将混合物过滤，用H₂O稀释，用EA萃取，并用无水硫酸钠干燥。浓缩有机层并通过制备型TLC(EA/PE＝20％)纯化，得到呈白色固体的7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲醛(3mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 242[(M+H)⁺]。

步骤H：(E)-3-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)丙烯酸乙酯

在-5℃下，将膦酰基乙酸三乙酯(51.0mg,0.23mmol,1.1当量)滴加到t-BuOK(27.8mg,0.25mmol,1.2当量)在无水THF(2mL)中的混合物中，然后搅拌30分钟。滴加7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲醛(50mg,0.21mmol,1.0当量)在另外2mL无水THF中的溶液并在-5℃下搅拌30分钟。在完成后，将反应混合物倒入冰水中，用EA萃取，将有机层用NaHCO₃、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过快速色谱柱纯化(EA，在PE中＝30％)，得到呈绿色固体的(E)-3-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)丙烯酸乙酯(20mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 312[(M+H)⁺]。

步骤I：3-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)丙-1-醇

向(E)-3-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)丙烯酸乙酯(86mg,0.28mmol,1当量)在PEG 400(5mL)中的混合物中添加NaBH₄(100mg,2.45mmol,9.0当量)。将反应混合物加热至80℃并搅拌2小时。将反应用1N HCl淬灭，然后用EA萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过制备型TLC(EA/PE＝1:1)纯化，得到呈白色固体的3-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)丙-1-醇(45mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 272[(M+H)⁺]。

步骤J：3-氯-5-甲基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁

将3-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)丙-1-醇(30mg,0.11mmol,1.0当量)添加至48％HBr水溶液(3mL)中并在50℃下保持搅拌过夜。将反应用NaHCO₃饱和水溶液淬灭，以将pH值调节至6～7。将混合物用EA萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过制备型TLC(EA/PE＝1:1)纯化，得到呈白色固体的3-氯-5-甲基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁(15mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 239.95[(M+H)⁺]。

步骤K：5-甲基-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向3-氯-5-甲基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁(56mg,0.23mmol,1.0当量)在80％AcOH水溶液(5mL)中的混合物中添加NH₄OAc(200mg,2.60mmol,11.1当量)。将反应密封在高压釜中并加热至210℃持续40分钟。在完成后，将反应冷却至室温。并倒入冰水(10mL)中，用EA(4*20mL)萃取。将有机层用NaHCO₃、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过制备型TLC(EA/PE＝50％)纯化，得到呈白色固体的5-甲基-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(30mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 221.8[(M+H)⁺]。

步骤L：1-溴-5-甲基-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在-2℃下向5-甲基-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(10mg,0.045mmol,1.0当量)在AcOH:DCM(1:1)(15mL)的混合物中添加NBS(6.4mg,0.036mmol,0.80当量)在AcOH:DCM(1:1)(5mL)中的溶液，并将反应在-2℃下保持搅拌24小时。将混合物倒入冰水中，用EA萃取，有机层用NaHCO₃洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过制备型TLC(EA/PE＝50％)纯化，得到呈黄色固体的1-溴-5-甲基-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(3mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 299.8[(M+H)⁺]。

步骤M：5-甲基-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将1-溴-5-甲基-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(10mg,0.033mmol,1.0当量)、吡啶-4-基硼酸(25.0mg,0.20mmol,6.00当量)、Pd(dppf)Cl₂(5.0mg,0.007mmol,0.20当量)、K₂CO₃(27.7mg,0.20mmol,6.00当量)溶解于二噁烷:H₂O(1:1)(5mL)中，并通过鼓泡N₂脱气5分钟。然后将反应密封在管中并在95℃下保持搅拌3小时。过滤并通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的5-甲基-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(5.0mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 298.8[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm:10.29(s,1H),8.65(s,2H),7.76(s,2H),4.28-4.45(m,2H),3.04-2.88(m,2H),2.37(s,3H),2.24-2.31(m,2H)。

实施例2：6-甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

步骤A：7-氯-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙烯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶

在-5℃下向t-BuOK(3.3g,29.8mmol,2.4当量)在无水THF(30mL)的混合物中添加(甲氧基亚甲基)三苯基膦(9.36g,27.3mmol,2.2当量)并搅拌30分钟。滴加7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲醛(3.0g,12.4mmol,1.0当量)在另外5mL无水THF中的溶液并在-5℃下搅拌30分钟。在完成后，将反应混合物倒入冰水中，用EA萃取，将有机层用饱和NaHCO₃水溶液、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过快速色谱柱纯化(0-15％EA，在PE中)，得到呈黄色固体的7-氯-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙烯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶(1.8g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 270[(M+H)⁺]。

步骤B：2-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醛

将7-氯-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙烯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶(1.0g,3.70mmol,1.0当量)添加至48％HBr水溶液(5mL)中，并在70℃下持续搅拌2h。LCMS显示反应完成，并用NaHCO₃饱和水溶液淬灭，以将pH值调节至6～7。将混合物用EA萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过快速色谱纯化，用在PE中的0-40％EA洗脱，得到呈黄色固体的2-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醛(550mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 256[(M+H)⁺]。

步骤C：2-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醇

在0℃下向2-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醛(550mg,2.15mmol,1.0当量)在MeOH(20mL)中的混合物中添加NaBH₄(163.3mg,4.30mmol,2.0当量)。将反应混合物缓慢升温至室温并保持搅拌40分钟。LCMS显示反应完成。将混合物过滤并用EA萃取。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过快速色谱柱纯化(EA，在PE中＝50％)，得到呈黄色固体的2-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醇(530mg)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 258[(M+H)⁺]。

步骤D：8-氯-6-甲基-4,5-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯

将2-(7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醇(530mg,2.05mmol,1.0当量)添加至48％HBr水溶液(5mL)中，并在70℃下保持搅拌18小时。LCMS显示反应完成，并用NaHCO₃饱和水溶液淬灭，以将pH值调节至6～7。将混合物用EA萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过快速色谱纯化，用在PE中的0-20％EA洗脱，得到呈黄色固体的8-氯-6-甲基-4,5-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯(450mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 226[(M+H)⁺]。

步骤E：6-甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

向8-氯-6-甲基-4,5-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊(40mg,0.18mmol,1.0当量)在80％AcOH水溶液(5mL)中的混合物中添加NH₄OAc(126.2mg,1.78mmol,10.0当量)。将反应密封在高压釜中并加热至210℃1.5小时。在完成后，将反应冷却至室温，倒入冰水中并萃取。将有机层用NaHCO₃、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩并通过制备型TLC(EA/PE＝50％)纯化，得到呈黄色固体的6-甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(30mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 208[(M+H)⁺]。

步骤F：2-溴-6-甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

向6-甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(50mg,0.24mmol,1当量)在DCM/MeOH(5mL,1:1)中的溶液添加CaCO₃(96mg,1mmol,4当量)和BTMABr₃(96mg,0.24mmol,1当量)。将管用铝箔覆盖避光并在-5℃下保持搅拌1小时。LCMS显示反应完成但含有一些二溴化副产物。将混合物用Na₂SO₃粉末淬灭并过滤。将有机滤液浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到呈白色晶体的2-溴-6-甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(17mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 286.0,288.0[(M+H)⁺]。

步骤G：6-甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

向2-溴-6-甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(16mg,0.05mmol,1当量)在二噁烷/H₂O(2mL,3:1)中的溶液中添加Na₂CO₃(18mg,0.17mmol,3当量)、Pd(dppf)Cl₂(8mg,0.01mmol,0.2当量)和吡啶-4-基硼酸(14mg,0.11mmol,2当量)。将混合物通过鼓泡N₂脱气10分钟。然后将反应密封在管中并用微波加热至105℃持续1小时。LCMS显示反应完成，将所得的混合物过滤并通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的6-甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(1.5mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 285.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),8.62(dd,J＝4.6,1.6Hz,2H),7.75(dd,J＝4.6,1.7Hz,2H),4.48(t,J＝5.6Hz,2H),2.83(t,J＝5.4Hz,1H),2.21(s,3H)。

以下化合物的制备方式与实施例2所示的通过铃木(Suzuki)反应从相应的溴化物的制备方式相似。

实施例7：(R)-4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

实施例8：(S)-4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

使(甲氧基甲基)三苯基溴化磷(3.85g,10mmol,0.1当量)在无水THF(100mL)中的溶液脱气并在-78℃下重新填充N₂三次。然后在30分钟内滴加t-BuOK(11mL,1.0M,11mmol,2.2当量)在THF中的溶液。然后将该混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后一次性添加7-氯-3-甲氧基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲醛(1.2g,5mmol,1当量)。将混合物在0℃下搅拌3小时，并温热至最高25℃持续另外3小时。在完成后，在0℃下添加饱和NH₄Cl溶液和EtOAc。将所得的混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝1:1洗脱)，得到呈黄色固体的7-氯-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙烯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶(807mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 270.0[(M+H)⁺]。

步骤B：2-(7-氯-3-羟基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醛

将7-氯-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙烯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶(807mg,3mmol,1当量)溶解于40％HBr水溶液(20mL)中，并在70℃下搅拌16小时。在完成后，将混合物在真空下浓缩。将粗产物用PE:EtOAc＝1:1重结晶，得到呈黄色固体的2-(7-氯-3-羟基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醛(482mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 242.0[(M+H)⁺]。

步骤C：7-氯-4-(2-羟丙基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-3-醇

使2-(7-氯-3-羟基-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-4-基)乙醛(482mg,2mmol,1当量)在无水THF(100mL)中的溶液在0℃下脱气并重新填充N₂三次。然后一次性添加CH₃MgBr(2.7mL,3.0M,8mmol,4当量)在THF中的溶液。然后将混合物在0℃下搅拌1小时。在完成后，在0℃下依次添加饱和NH₄Cl溶液和EtOAc。将所得的混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝1:1洗脱)，得到呈黄色固体的7-氯-4-(2-羟丙基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-3-醇(206mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 257.8[(M+H)⁺]。

步骤D：8-氯-4,6-二甲基-4,5-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯

在3分钟内在0℃下向7-氯-4-(2-羟丙基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶-3-醇(206mg,0.8mmol,1当量)在无水DCM(50mL)中的溶液中滴加TMSOTf(5mL)。然后将该混合物在40℃下搅拌16小时。在完成后，将混合物在真空下浓缩。残余物用H₂O稀释，在0℃下用饱和NaHCO₃溶液(pH＝8)碱化。将所得的混合物用EtOAc萃取。将合并的有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝1:1洗脱)，得到呈黄色固体的8-氯-4,6-二甲基-4,5-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯(143mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 239.8[(M+H)⁺]。

步骤E：4,6-二甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

在室温下连续向8-氯-4,6-二甲基-4,5-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯(143mg,0.6mmol,1当量)在AcOH(10mL)中的溶液中添加一滴水和NH₄OAc(231mg,3mmol,5当量)。然后将该混合物在200℃下搅拌0.5小时。在完成后，将混合物冷却至室温并在真空下浓缩。残余物用H₂O稀释，在0℃下用30重量％NH₄OH水溶液(pH＝8)碱化。将所得的混合物用DCM:MeOH＝1:1萃取。将合并的有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩，得到呈黄色固体的4,6-二甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(119mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 221.8[(M+H)⁺]。

步骤F：2-溴-4,6-二甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

在0℃下向4,6-二甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(119mg,0.54mmol,1当量)在DCM:MeOH＝1:1(24mL)中的溶液中添加少量BTMABr₃(210mg,0.54mmol,1当量)，置于用铝箔覆盖的管中以避光。然后将该混合物在黑暗中在25℃下搅拌16小时。在完成后，将混合物用H₂O稀释，在0℃下用饱和的Na₂SO₃溶液淬灭。将所得的混合物用DCM:MeOH＝1:1萃取。将合并的有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物用PE:EtOAc＝1:2重结晶，得到呈黄色固体的2-溴-4,6-二甲基-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(120mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 300.8[(M+H)⁺]。

步骤G：4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

使2-溴-6,6-二甲基-4,5,6,7-四氢-8H-3-氧杂-1-硫杂-5a,7-二氮杂苊烯-8-酮(30mg,0.1mmol,1当量)、(吡啶-4-基硼酸(24.4mg,0.2mmol,2当量)、Pd(dppf)Cl₂(7.3mg,0.01mmol,0.1当量)、碳酸钠(31.8mg,0.03mmol,3当量)在1,4-二噁烷/H₂O＝5/1(4mL)中的混合物脱气并重新填充N₂三次。然后将混合物用微波加热至110℃并保持搅拌1小时。将所得的混合物冷却至室温，用DCM/MeOH＝10/1稀释，通过硅藻土过滤，在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(用0％至30的MeCN水溶液、0.5％FA水溶液洗脱)，得到呈黄色固体的4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮(5.7mg,0.0191mmol)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 298.8[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.53(s,1H),8.62(d,J＝6.1Hz,2H),7.76(d,J＝6.1Hz,2H),4.36-4.58(m,1H),2.94(dd,J＝15.9,2.8Hz,1H),2.55-2.67(m,1H),2.19(s,3H),1.54(d,J＝6.2Hz,3H)。通过手性SFC拆分外消旋4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮，得到对映异构体纯(R)-4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮和(S)-4,6-二甲基-2-(吡啶-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮。这两种化合物的绝对立体化学是随机分配的。

实施例9：4,6-二甲基-2-(1H-吡唑-4-基)-5,7-二氢-3-氧杂-1-硫杂-7-氮杂苊烯-8(4H)-酮

实施例9的制备方式与实施例7和8所示的通过铃木反应从相应的溴化物的制备方式相似。MS obsd.(ESI+):m/z[(M+H)+]288。

实施例10：(S)-5-((3-羟基吡咯啉-1-基)甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：2-溴-7-(溴甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(100mg,452umol,1当量)在氯仿(15mL,99.8％,ACS试剂)中的溶液中添加溴(722mg,4.52mmol,231.5uL,10当量)。将混合物加热至室温并搅拌16小时。在完成后，将所得的混合物用冰/水稀释，在0℃下用饱和Na₂SO₃淬灭(pH＝8)。将反应在0℃下搅拌10分钟。将混合物用DCM萃取。含有粗制2-溴-7-(溴甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0⁴ ^,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(173.3mg)(在DCM和氯仿中)的合并有机溶液由于产物的不稳定性无需进一步纯化即可用于下一步。MS obsd.(ESI⁺):m/z 377.8[(M+H)⁺]。

步骤B：2-溴-7-(溴甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向(S)-吡咯啉-3-醇(362.2mg,4.16mmol,10当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加2-溴-7-(溴甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(157.5mg,0.41mmol,52.5mL)在DCM中的溶液。然后将混合物在25℃下搅拌16小时。在完成后，将混合物用水稀释，用DCM萃取。将合并的有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(用0％至30％的MeCN水溶液、0.5％FA水溶液洗脱)，得到呈黄色固体的(S)-1-溴-5-((3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(60mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 385.0[(M+H)⁺]。

步骤C：(S)-5-((3-羟基吡咯啉-1-基)甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将(S)-1-溴-5-((3-羟基吡咯啉-1-基)甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(63mg,164umol)、吡啶-4-基硼酸(60.4mg,491.5umol,3当量)、碳酸钠(86.82mg,819umol,3当量)、X-Phos(23.4mg,49.2umol,0.3当量)、Pd(dppf)Cl₂(36.0mg,49.2umol,0.3当量)在12mL 1,4-二噁烷/H₂O＝5/1中的混合物用氩气吹扫3次。然后在105℃M.W.下搅拌2.5小时。在完成后，将所得的混合物冷却至室温，在真空下浓缩。将粗产物通过二氧化硅制备型TLC纯化(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，得到粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进一步纯化(用0％至30％的MeCN水溶液、0.5％FA的水溶液洗脱)，得到呈黄色固体的(S)-5-((3-羟基吡咯啉-1-基)甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(7.5mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 354.2[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm:8.57(dd,J＝4.7,1.6Hz,2H),8.33(s,1H),7.89(dd,J＝4.7,1.6Hz,2H),4.42-4.49(m,2H),4.38-4.40(m,1H),3.75(s,2H),3.03-3.10(m,2H),2.89-2.98(m,1H),2.83(dd,J＝10.0,5.5Hz,1H),2.69(dd,J＝10.0,2.5Hz,1H),2.57(td,J＝8.7,6.0Hz,1H),2.16-2.33(m,3H),1.75-1.82(m,1H)。

实施例11：(S)-5-((3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向(S)-1-溴-5-((3-羟基吡咯啉-1-基)甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(56mg,0.15mmol,1当量)在二噁烷(10mL)的悬浮液中添加吡唑-4-硼酸(32.6mg,0.29mmol,2当量)、碳酸钾(80.6mg,0.58mmol,4当量)、Pd(dppf)Cl₂(27.8mg,0.038mmol,0.26当量)和水(2mL)。将混合物用N₂脱气2分钟。将混合物在105℃下在微波下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。用水和DCM稀释。将有机层浓缩，用MeOH稀释并通过制备型HPLC纯化，得到呈黄色固体的(S)-5-((3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(5.6mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z373.20[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ8.20(s,1H),8.03(s,2H),4.42(ddd,J＝16.4,8.4,4.2Hz,3H),3.86(d,J＝14.7Hz,2H),3.05(dd,J＝7.1,5.1Hz,3H),2.95(dd,J＝10.5,5.3Hz,1H),2.86-2.67(m,2H),2.28-2.16(m,3H),1.84(dt,J＝13.3,5.5Hz,1H)。

实施例12：5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例13：5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例12和13的制备方式与实施例10所示的通过铃木反应从相应的溴化物的制备方式相似。实施例12：MS obsd.(ESI⁺):m/z[(M+H)⁺]354。实施例13MS obsd.(ESI⁺):m/z[(M+H)⁺]343。

实施例14：((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯

步骤A：((1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下向氢氧化铵(900mg,28％,25.7mmol,40当量)在乙腈(10mL)的溶液中添加2-溴-7-(溴甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(240mg,0.63mmol,1当量)在CHCl₃和DCM中的溶液。然后将混合物温热至室温并搅拌16小时。将二碳酸二叔丁酯(2.76g,12.66mmol,20当量)添加至反应中。然后将混合物在室温下再搅拌3小时。在完成后，将所得的混合物用水稀释，用DCM萃取。将合并的有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝3:1洗脱)，得到呈黄色固体的N-[(2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(55mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 414.8[(M+H)⁺]。

步骤B：((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯

用氩气吹扫N-[(2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(55mg,0.1mmol,1当量)、吡啶-4-基硼酸(37.4mg,0.3mmol,3当量)、碳酸钠(53.28mg,0.5mmol,5当量)、X-Phos(14.36mg,0.3mmol,0.3当量)、Pd(dppf)Cl₂(22.1mg,0.03mmol,0.3当量)在1,4-二噁烷/H₂O＝5/1(12mL)中的混合物3次。然后在105℃M.W.下搅拌反应2.5小时。在完成后，将所得的混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅制备型TLC纯化(用DCM:MeOH＝15:1洗脱)，得到粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进一步纯化(用0％至30％的MeCN水溶液、0.5％FA水溶液洗脱)，得到呈黄色固体的((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(15mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 354.2[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:11.23(s,1H),8.63(dd,J＝4.6,1.6Hz,2H),7.77(dd,J＝4.6,1.6Hz,2H),7.19(s,1H),4.39(t,J＝5.8Hz,2H),4.13(d,J＝5.4Hz,2H),2.91-3.02(m,2H),2.12-2.18(m,2H),1.37(s,9H)。

实施例15：5-(氨基甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮；盐酸盐

在0℃下向((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(15mg,0.036mmol,1当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加氯化氢(4M,2mL)在1,4-二噁烷中的溶液。然后将混合物在室温下搅拌3小时。在完成后，将所得的混合物在真空下浓缩并将所得的混合物溶解于水中，用DCM洗涤。将水层冷冻干燥，得到呈黄色固体的5-(氨基甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮盐酸盐(12mg,0.0342mol)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 314.0[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm:8.73(s,2H),8.36(d,J＝5.5Hz,2H),4.54-4.62(m,2H),4.24(s,2H),3.15(dd,J＝7.2,4.9Hz,2H),2.37(dt,J＝11.5,5.8Hz,2H)。

实施例16：5-(((4-甲氧基苄基)氨基)甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：1-溴-5-(((4-甲氧基苄基)氨基)甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将来自先前步骤的1-溴-5-(溴甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮在CHCl₃(30ml)和DCM(60ml)中的溶液添加至(4-甲氧基苯基)甲胺(211mg,1.54mmol,2.0当量)中。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。然后将混合物在真空下浓缩并通过快速色谱柱纯化(DCM:MeOH＝100:3)，得到呈黄色油状物的1-溴-5-(((4-甲氧基苄基)氨基)甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(130mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 434.8,436.8[(M+H)⁺]。

步骤B：((1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯

向1-溴-5-(((4-甲氧基苄基)氨基)甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(120mg,0.28mmol,1.0当量)在DCM(5ml)的溶液中添加TEA(41.9mg,0.41mmol,1.5当量)和(Boc)₂O(90.5mg,0.41mmol,1.5当量)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。然后将混合物在真空下浓缩并通过快速色谱柱纯化，得到呈白色固体的((1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(70mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 535.0,537.0[(M+H)⁺]。

步骤C：(4-甲氧基苄基)((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯

向((1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(70mg,0.13mmol,1.0当量)在二噁烷/H₂O＝10:1(11ml)中的溶液中添加吡啶-4-基硼酸(32mg,0.26mmol,2.0当量)和K₂CO₃(54mg,0.39mmol,3.0当量)。将混合物用N₂脱气3次。然后将Pd(dppf)Cl₂(29mg,0.039mmol,0.3当量)添加至混合物中。将混合物在微波辐射下在80℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。然后向混合物中添加水并用EA萃取。将合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化，得到呈黄色固体的(4-甲氧基苄基)((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 534.1[(M+H)⁺]。

步骤D：5-(((4-甲氧基苄基)氨基)甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向(4-甲氧基苄基)((3-氧代-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.094mmol,1.0当量)在MeOH(5mL)中的溶液中添加4M HCl/二噁烷(2mL)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。然后将混合物在真空下浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的5-(((4-甲氧基苄基)氨基)甲基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(16.8mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 434.0[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.63(dd,J＝4.6,1.6Hz,2H),8.19(s,1H),7.77(dd,J＝4.6,1.6Hz,2H),7.25(d,J＝8.6Hz,2H),6.87(d,J＝8.6Hz,2H),4.41-4.34(m,2H),3.72(s,3H),3.64(d,J＝11.2Hz,4H),2.83(dd,J＝7.2,4.9Hz,2H),2.13(dd,J＝11.9,5.8Hz,2H)。

实施例17：7-(氨基甲基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

实施例17的制备方式与实施例15所示的相似。MS obsd.(ESI+):m/z[(M+H)+]303。

以下化合物的制备方式与实施例10所示的相似。

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实施例26：(S)-1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈

实施例27：(R)-1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈

步骤A：1-溴-5-(1-羟基乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-甲醛(170mg,0.54mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加CH₃MgBr(5.4mL,5.4mmol,1M)。将混合物在0℃下搅拌1小时。将反应用饱和NH₄Cl溶液淬灭并用EtOAc萃取。有机层通过无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到呈黄色固体的1-溴-5-(1-羟乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(166mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。MSobsd.(ESI⁺):m/z 332.3[(M+H)⁺]。

步骤B：1-溴-5-(1-氯乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向1-溴-5-(1-羟基乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(160mg,0.49mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加SOCl₂(577mg,4.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。在真空下浓缩混合物，得到呈黄色固体的1-溴-5-(1-氯乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(150mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。MS obsd.(ESI⁺):m/z 348.3[(M+H)⁺],350.3[(M+2+H)⁺]。

步骤C：1-(1-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-腈

向1-溴-5-(1-氯乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(150mg,0.43mmol)在MeCN(20mL)中的溶液中添加1H-吡唑-4-甲腈(400mg,4.30mmol)。将混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物在真空下浓缩，将残余物首先通过快速柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝20:1洗脱)，然后通过反相色谱法纯化(用0％至40％的MeCN水溶液、0.5％FA的水溶液洗脱)，得到呈白色固体的1-(1-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-腈(106mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 407.4[(M+H)⁺]。

步骤D：1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈

向1-(1-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈(20mg,49.4umol)在1,4-二噁烷:H₂O＝5:1(3.6mL)中的溶液中添加碳酸钠(16mg,148.0umol)、环戊基(二苯基)膦；二氯钯；铁(Pd(dppf)Cl₂-DCM)(8mg,9.9umol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(19mg,98.7umol)和二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]膦(7mg,14.8umol)。将悬浮液用N₂脱气10分钟。然后将混合物密封在管中并在N₂下用微波加热至105℃持续1.5小时。在完成后，向混合物中添加H₂O并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥并在真空下浓缩。粗产物首先通过二氧化硅制备型TLC纯化(用DCM:MeOH＝20:1洗脱)，然后通过制备型HPLC纯化(用0％至45％的MeCN水溶液、0.1％FA水溶液洗脱)，得到呈白色固体的1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈(2mg)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 393.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz)δppm:13.20(s,1H),10.97(s,1H),8.73(s,1H),8.23-7.79(m,3H),5.96(q,J＝6.6Hz,1H),4.32(dt,J＝11.9,5.8Hz,2H),3.01(dd,J＝12.8,5.9Hz,2H),2.15-2.09(m,2H),1.89(d,J＝6.9Hz,3H)。

1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈(35mg)通过手性HPLC拆分(色谱柱：AD-H，色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L，进样量：2ul，流动相：HEP:ETOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5ml，波长：UV 254nm，温度：25℃，在ETOH中的样品溶液)，得到呈白色固体的(S)-1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈(5.8mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 393.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:13.17(s,1H),10.95(s,1H),8.73(s,1H),8.01(d,J＝81.1Hz,3H),5.95(q,J＝6.9Hz,1H),4.37-4.27(m,2H),3.01(dd,J＝12.9,6.0Hz,2H),2.16-2.07(m,2H),1.89(d,J＝7.0Hz,3H)和(R)-1-(1-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙基)-1H-吡唑-4-甲腈(3.8mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 393.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:δ13.18(s,1H),10.96(s,1H),8.73(s,1H),8.25-7.82(m,3H),5.95(q,J＝6.9Hz,1H),4.38-4.28(m,2H),3.01(dd,J＝12.8,6.0Hz,2H),2.17-2.07(m,2H),1.89(d,J＝7.0Hz,3H)。这两种化合物的绝对立体化学是随机分配的。

实施例28：5-(2-羟基丙-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：5-乙酰基-1-溴-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向1-溴-5-(1-羟基乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(340mg,1.03mmol)在DCM(10mL)的溶液中分批添加Dess-Martin高碘烷(1.31g,3.09mmol)。然后将混合物在25℃下搅拌3小时。在完成后，将混合物用水(30mL)稀释，用饱和Na₂S₂O₃(30mL)淬灭，用DCM(30mL×3)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(用DCM:ⁱPrOH＝10:1洗脱)，得到呈白色固体的7-乙酰基-2-溴-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(210mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 328.0[(M+H)⁺]。

步骤B：5-乙酰基-1-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

用氩气吹扫5-乙酰基-1-溴-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(63mg,192.1umol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(125mg,384.1umol)、碳酸钠(61mg,576.2umol)、Xphos(28mg,57.6umol)、Pd(dppf)Cl₂(42mg,57.6umol)在1,4-二噁烷:H₂O＝5:1(12mL)中的混合物3次。然后在105℃M.W.下搅拌1小时。在完成后，将所得的混合物冷却至室温，在真空下浓缩。将粗产物通过二氧化硅柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，得到呈白色固体的7-乙酰基-2-[1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡唑-4-基]-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(21mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 446.2[(M+H)⁺]。

步骤C：5-(2-羟基丙-2-基)-1-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向5-乙酰基-1-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(60mg,134.6umol)在THF(15mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(3M,在乙醚中,2.69mmol,0.90mL)。在添加后，将混合物加热至室温并搅拌2小时。在完成后，将所得的混合物在0℃下用饱和NH₄Cl淬灭。将反应用EtOAc萃取。将合并的有机溶液干燥，浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，得到呈无色液体的7-(1-羟基-1-甲基-乙基)-2-[1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡唑-4-基]-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(33mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 462.2[(M+H)⁺]。

步骤D：5-(2-羟基丙-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向5-(2-羟基丙-2-基)-1-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(45mg,97.5umol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。将溶液在室温下搅拌1小时。在完成后，将混合物浓缩并用MeOH稀释。用30％NH₄OH溶液将pH调节至7左右。通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的7-(1-羟基-1-甲基-乙基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(11.2mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 331.9[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:13.18(s,1H),9.73(s,1H),8.19(s,1H),7.90(s,1H),6.12(s,1H),4.30(t,J＝6.8Hz,2H),3.10-2.91(m,2H),2.20-1.98(m,2H),1.56(s,6H)。

实施例29：5-(2-羟基丙-2-基)-1-(吡啶-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例29的制备方式与实施例28所示的通过铃木反应从相应的溴化物的制备方式相似。MS obsd.(ESI+):m/z[(M+H)+]343。

实施例30：(S)-5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例31：(R)-5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：5-(1-羟乙基)-1-(1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

用氩气吹扫1-溴-5-(1-羟基乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(30mg,90.8umol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-三苯甲基-1H-吡唑(79mg,181.7umol,2当量)、碳酸钠(39mg,363.4umol,4当量)、Xphos(13mg,27.3umol)、Pd(dppf)Cl₂(20mg,27.3umol)在1,4-二噁烷:H₂O＝5:1(6mL)中的混合物3次。然后在105℃M.W.下搅拌1小时。在完成后，将所得的混合物冷却至室温，在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，得到呈黄色固体的7-(1-羟基乙基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(34.7mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 560.2[(M+H)⁺]。

步骤B：5-乙酰基-1-(1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向7-(1-羟基乙基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(100mg,178.7umol)在DCM(10mL)中的溶液中分批添加Dess-Martin高碘烷(151.57mg,357.4umol)。然后将混合物在25℃下搅拌2小时。在完成后，将混合物用水稀释，用饱和Na₂S₂O₃淬灭，用DCM萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过二氧化硅制备型TLC纯化(DCM:ⁱPrOH＝10:1)，得到呈黄色固体的7-乙酰基-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(63mg)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 559.2[(M+H)⁺]。

步骤C：5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-(1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向7-乙酰基-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0⁴ ^,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(65mg,116.6umol)在MeOH(20mL)中的悬浮液中添加乙酸(14mg,233.1umol,2当量)、氮杂环丁烷(67mg,1.17mmol)，随后添加氰基硼氢化钠(22mg,349.7umol)。将混合物在室温下搅拌2小时。在完成后，将混合物浓缩，用水稀释并用DCM萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅制备型TLC纯化(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，得到呈白色固体的7-[1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基]-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(55mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z599.2[(M+H)⁺]。

步骤D：5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向7-[1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基]-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(55mg,91.9umol)在DCM(5mL)的溶液中添加TFA(2mL)。将溶液在室温下搅拌1小时。在完成后，将混合物浓缩并用MeOH稀释。用30％NH₄OH溶液将pH调节至8左右。将其通过制备型HPLC纯化，得到呈淡黄色固体的7-[1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基]-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(18mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 357.2[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm:8.19-8.09(m,1H),8.05(s,2H),4.40(d,J＝6.3Hz,2H),4.21-4.03(m,1H),3.64-3.45(m,4H),3.21-3.06(m,1H),3.06-2.94(m,1H),2.34-2.14(m,4H),1.30(d,J＝6.6Hz,3H)。7-[1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基]-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮经过SFC手性拆分得到(S)-5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮和(R)-5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮。这两种化合物的绝对立体化学是随机分配的。

实施例32和33使用来自实施例30的中间体并通过手性拆分来制备。

^#绝对立体化学是随机分配的。

实施例34：(5-(1-(环丁基氨基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例34的制备方式与实施例30所示的相似。MS obsd.(ESI+):m/z[(M+H)+]371。

实施例35：(S)-5-(2-甲氧基-1-(1H-吡唑-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例36：(R)-5-(2-甲氧基-1-(1H-吡唑-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：1-溴-5-(环氧乙烷-2-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将氢化钠(26mg,636.6umol,2当量,60％纯度)和三甲基碘化锍(195mg,954.9umol)在DMSO(5mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。然后分批添加溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(100mg,318.3umol)在DMSO(10mL)中的溶液。在室温下再搅拌3小时。在完成后，将混合物倒入水中并用DCM萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液在真空下浓缩，得到2-溴-7-(环氧乙烷-2-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(70mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 328.3[(M+H)⁺]。

步骤B：1-溴-5-(1-羟基-2-甲氧基乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将2-溴-7-(环氧乙烷-2-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(140mg,426.6umol)、NaOMe(5M,10mL)和DMSO(10mL)的混合物在室温下搅拌3小时。在完成后，将混合物倒入水中并萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液在真空下浓缩，将残余物通过反相色谱法纯化(用0％至30％的MeCN水溶液、0.5％FA水溶液洗脱)，得到呈灰白色固体的2-溴-7-(1-羟基-2-甲氧基-乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(80mg)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 360.0[(M+H)⁺]。

步骤C：1-溴-5-(1-氯-2-甲氧基乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下将氯化亚砜(105.69mg,888.3umol)添加至2-溴-7-(1-羟基-2-甲氧基-乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(32mg,88.8umol)在DCM(6mL)的溶液中。将混合物加热至室温并搅拌2小时。在完成后，将混合物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液在真空下浓缩，得到呈黄色固体的2-溴-7-(1-氯-2-甲氧基-乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(18mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 378.0[(M+H)⁺]。

步骤D：1-溴-5-(2-甲氧基-1-(1H-吡唑-1-基)乙基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将2-溴-7-(1-氯-2-甲氧基-乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(44mg,116.2umol)、碘化钾(97mg,581.0umol)、1H-吡唑(330mg,4.85mmol)、碳酸钾(110.0mg,795.9umol)和CH₃CN(20mL)在室温下搅拌16小时。在完成后，将混合物浓缩，用水稀释，用DCM萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液在真空下浓缩，将残余物通过反相色谱法纯化(用0％至30％的MeCN水溶液、0.5％FA水溶液洗脱)，得到呈白色固体的2-溴-7-(2-甲氧基-1-吡唑-1-基-乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(20mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 410.4[(M+H)⁺]。

步骤E：5-(2-甲氧基-1-(1H-吡唑-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

用氩气吹扫2-溴-7-(2-甲氧基-1-吡唑-1-基-乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(28mg,68.2umol)、1H-吡唑-4-基硼酸(16mg,136.5umol)、碳酸钠(29mg,273.0umol,4当量)、Xphos(10mg,20.5umol)、Pd(dppf)Cl₂(15mg,20.5umol)在1,4-二噁烷:H₂O＝5:1(6mL)中的混合物3次。然后在105℃M.W.下搅拌1小时。在完成后，将所得的混合物冷却至室温，在真空下浓缩。粗产物首先通过硅胶柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，然后通过反相色谱法纯化(用0％至25％的MeCN水溶液、0.5％FA水溶液洗脱)，得到呈灰白色固体的7-(2-甲氧基-1-吡唑-1-基-乙基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(6.8mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 398.1[(M+H)⁺]。该外消旋产物经过SFC手性拆分，得到(S)-5-(2-甲氧基-1-(1H-吡唑-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮和(R)-5-(2-甲氧基-1-(1H-吡唑-1-基)乙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮。这两种化合物的绝对立体化学是随机分配的。

这些化合物的制备方式与实施例35和36相似并通过手性拆分来制备。

^#绝对立体化学是随机分配的。

以下化合物的制备方式与实施例26和27相似。

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实施例43：10,10-二氟-7-甲基-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

步骤A：7-氯-3-甲氧基-5-甲基-4-乙烯基噻吩并[2,3-c]吡啶

在-78℃下向含有甲基(三苯基)溴化膦(7.79g,21.80mmol)在THF(100mL)中的溶液的三颈烧瓶中添加丁基锂(1.6M,15.0mL)。在0℃下搅拌1小时。然后，在-78℃下将7-氯-3-甲氧基-5-甲基-噻吩并[2,3-c]吡啶-4-甲醛(3.29g,10.90mmol)在THF(100mL)中的溶液添加至混合物中。然后温热至0℃，并在0℃下搅拌2小时。在完成后，用NH₄Cl水溶液淬灭，用水稀释，用EtOAc萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。将残余物通过快速柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝93:7洗脱)，得到呈白色固体的7-氯-3-甲氧基-5-甲基-4-乙烯基-噻吩并[2,3-c]吡啶(2.1g)。

步骤B：(S)-2-溴-7-(羟基甲基)-8-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-4,5,7,8-四氢-3-氧杂-1-硫杂-5a,8-二氮杂苯并[cd]薁-9(6H)-酮

在0℃下向含有7-氯-3-甲氧基-5-甲基-4-乙烯基-噻吩并[2,3-c]吡啶(2.1g,8.32mmol)在无水DCM(50mL)中的溶液的烧瓶中缓慢添加三溴硼烷(6.27g,25.03mmol,2.41mL)。在完成后，在0℃下用MeOH淬灭。将混合物在0℃下搅拌10分钟。然后，浓缩得到残余物。用EtOAc稀释，用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体的7-氯-5-甲基-4-乙烯基-噻吩并[2,3-c]吡啶-3-醇(1.6g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 226.3[(M+H)⁺],228.3[(M+2+H)⁺]。

步骤C：3-(烯丙氧基)-7-氯-5-甲基-4-乙烯基噻吩并[2,3-c]吡啶

在0℃下向含有7-氯-5-甲基-4-乙烯基-噻吩并[2,3-c]吡啶-3-醇(1.4g,5.83mmol)在DMF(20mL)中的溶液的烧瓶中添加碳酸钾(2.42g,17.49mmol)和3-溴丙-1-烯(705.4mg,5.83mmol,503.85uL)。并在室温下搅拌2小时。在完成后，用EtOAc稀释，用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法纯化(用0％至45％的MeCN水溶液、0.1％FA水溶液洗脱)，得到呈黄色固体的3-烯丙氧基-7-氯-5-甲基-4-乙烯基-噻吩并[2,3-c]吡啶(1.1g)。

步骤D：5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7,9-戊烯

向含有3-烯丙基氧基-7-氯-5-甲基-4-乙烯基-噻吩并[2,3-c]吡啶(400mg,1.51mmol)的烧瓶中添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(142mg,225.8umol)和无水DCM(300mL)。将混合物在N₂保护下在25℃下搅拌5小时。在完成后，浓缩并通过快速柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝94:6洗脱)，得到呈白色固体的5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7,9-五烯(290mg)。

步骤E：5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-9,10-二醇

在室温下向含有5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7,9-戊烯(300mg,1.26mmol)在叔丁醇(30mL)中的溶液的烧瓶中添加柠檬酸(485mg,2.52mmol)、4-甲基吗啉N-氧化物(296mg,2.52mmol)在H₂O(30mL)中的溶液和锇酸钾(VI)二水合物(23mg,63.1umol)。将混合物在60℃下搅拌16小时。在完成后，通过添加饱和Na₂SO₃溶液来淬灭反应混合物。在室温下搅拌20分钟。然后用DCM萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后，通过快速柱色谱纯化(用PE:EA＝30:70洗脱)，得到呈白色固体的5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-9,10-二醇(245mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 272.3[(M+H)⁺],274.3[(M+2+H)⁺]。

步骤F：5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-10-酮

向含有5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-9,10-二醇(230mg,846.5umol)的三颈烧瓶中添加对甲苯磺酸(73mg,423.2umol)的无水甲苯(16mL)溶液。将反应混合物加热回流4小时。在完成后，浓缩并通过快速柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝100:1洗脱)，得到呈淡黄色固体的5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-10-酮(175mg)。

步骤G：5-氯-10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯

在室温下向含有5-氯-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-10-酮(50mg,197.1umol)在DCM(10mL)中的溶液的塑料瓶中添加吗啉代三氟化硫(345mg,1.97mmol)。在室温下搅拌24小时。在完成后，用NaHCO₃水溶液中和至pH＝8，用DCM萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。然后，通过快速柱色谱法纯化(用PE:EtOAc＝20:1洗脱)，得到呈白色固体的5-氯-10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯(30mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z276.3[(M+H)⁺],278.3[(M+2+H)⁺]。

步骤H：10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在室温下向含有5-氯-10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯(52mg,188.6umol)在乙酸(10mL)中的溶液的烧瓶中添加乙酸铵(140mg,1.81mmol)和H₂O(0.1mL)。然后，加热至200℃。将反应在200℃下搅拌1小时。在完成后，冷却至室温并浓缩以除去乙酸。将残余物用H₂O和DCM稀释，用氢氧化铵碱化至pH＝10。用DCM:MeOH＝10:1萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到固体。然后，从PE:EA＝30:1中重结晶，过滤。收集滤饼得到呈黄色固体的10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(50mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 258.4[(M+H)⁺]。

步骤I：2-溴-10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向含有10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(50mg,194.4umol)在DCM(10mL)中的溶液的烧瓶中添加吡啶鎓三溴化物(311mg,971.8umol)。将反应混合物在25℃下搅拌24小时。在完成后，用DCM稀释，用饱和Na₂SO₃溶液淬灭，用NaHCO₃水溶液、盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。从PE:EA＝5:1重结晶得到呈黄色固体的2-溴-10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(50mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 336.3[(M+H)⁺],338.3[(M+2+H)⁺]。

步骤J：10,10-二氟-7-甲基-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

向2-溴-10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(45mg,133.9umol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(52.0mg,267.7umol)、二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]膦(19mg,40.2umol)、碳酸钠(43mg,401.6umol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(19.6mg,26.8umol)中添加水(1.6mL)和1,4-二噁烷(8mL)。然后，通过鼓泡N₂脱气2分钟。然后将反应密封在管中并在微波反应器中在105℃下搅拌2.5小时，通过LCMS监测。在完成后，用DCM稀释，用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。通过快速柱色谱法纯化(用DCM:MeOH＝80:1洗脱)得到粗产物。然后，通过反相色谱法再次纯化(用0％至36％的MeCN水溶液、0.1％FA水溶液洗脱)，得到呈白色固体的10,10-二氟-7-甲基-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(18mg)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 324[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:13.28(s,1H),11.50(s,1H),8.21-7.92(m,2H),4.55-4.48(t,J＝27.2Hz,2H),3.51-3.44(t,J＝31.2Hz,2H),2.23(s,3H)。

实施例44：7-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-10,10-二氟-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

步骤A：10,10-二氟-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛

在室温下向含有10,10-二氟-7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(75mg,291.5umol)的烧瓶中添加二氧化硒(308mg,2.77mmol)。然后将反应在130℃下搅拌6.5小时。在完成后，用水稀释，用EtOAc萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。首先通过C18色谱柱纯化(用0.1％FA水溶液、水:MeCN＝50:50洗脱)以除去1-甲基-2-吡咯烷酮。然后浓缩得到残余物，将残余物通过快速柱色谱法纯化两次(用DCM:MeOH＝30:1洗脱)，并通过二氧化硅制备型TLC纯化(用DCM:MeOH＝20:1洗脱)，得到呈黄色固体的10,10-二氟-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(24mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z272[(M+H)⁺]。

步骤B：2-溴-10,10-二氟-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛

在0℃下向含有10,10-二氟-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(60mg,221.2umol)在AcOH(6mL)中的溶液的烧瓶中添加液体溴化物(590mg,3.69mmol,189.45uL)。然后在室温下搅拌3小时。在完成后，用DCM稀释，添加至饱和亚硫酸钠溶液，用DCM:MeOH＝10:1萃取。将有机层用硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩，得到呈黄色固体的2-溴-10,10-二氟-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(60mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 350[(M+H)⁺],352[(M+2+H)⁺]。

步骤C：7-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-2-溴-10,10-二氟-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在20℃下，向含有2-溴-10,10-二氟-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(60mg,171.4umol)在1,2-二氯乙烷(8.5mL)中的溶液的烧瓶中添加氮杂环丁烷(39mg,685.4umol)。将混合物在20℃下搅拌1.5小时。然后，向混合物中添加氰基硼酸钠(24mg,377umol)。将反应在20℃下搅拌15小时。在完成后，用NaHCO₃水溶液在0℃下淬灭，用DCM萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。通过二氧化硅制备型TLC纯化(用DCM:MeOH＝20:1洗脱)，得到呈黄色固体的7-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-2-溴-10,10-二氟-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(38mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 391[(M+H)⁺],393[(M+2+H)⁺]。

步骤D：7-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-10,10-二氟-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在室温下向7-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-2-溴-10,10-二氟-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(44mg,102.2umol)、1H-吡唑-4-基硼酸(35mg,306.7umol)、Xphos(39mg,81.8umol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(37.4mg,51.1umol)、碳酸钠(44mg,409.0umol)中添加1,4-二噁烷:H₂O＝5:1(3mL)。然后通过鼓泡N₂脱气2分钟。然后将反应密封在管中，并在微波反应器中在105℃下搅拌1.5小时。在完成后，将反应用水稀释，用DCM萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。通过快速柱色谱法纯化两次(用DCM:MeOH＝10:1洗脱)，第三次通过C18色谱柱纯化(用0.1％FA水溶液、水:MeCN＝80:20洗脱)，得到呈白色固体的7-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-10,10-二氟-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(9mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 379[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:8.09(s,2H),4.57-4.50(t,J＝27.2Hz,2H),3.70-3.53(m,6H),3.23-3.19(t,J＝14Hz,2H),2.01-1.95(m,2H)。

以下化合物的制备方式与实施例28所示的通过铃木(Suzuki)反应从相应的溴化物的制备方式相似。

实施例46：(R)-2-(1H-吡唑-4-基)-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

实施例47：(S)-2-(1H-吡唑-4-基)-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

步骤A：3-氨基-4-羟基-噻吩-2-甲酸甲酯

向4-羟基-3-硝基-噻吩-2-甲酸甲酯(10.41g,49.17mmol,1.0当量)在CH₃COOH(300.0mL)中的溶液中添加铁粉(27.49g,491.70mmol,10.0当量)。将混合物在60℃下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。在减压下除去溶剂。将残余物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-10％)，得到呈淡黄色固体的3-氨基-4-羟基-噻吩-2-甲酸甲酯(7.40g)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 174.0[(M+H)⁺]。

步骤B：3-氨基-4-戊-4-烯氧基-噻吩-2-甲酸甲酯

向3-氨基-4-羟基-噻吩-2-甲酸甲酯(10.0g,57.57mmol,1.0当量)和5-溴戊-1-烯(14.73g,97.86mmol,1.7当量)在DMF(200.0mL)中的溶液中添加K₂CO₃(12.04g,86.35mmol,1.5当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。在真空下除去溶剂。将残余物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-3％)，得到呈黄色固体的3-氨基-4-戊-4-烯氧基-噻吩-2-甲酸甲酯(12.50g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 242.1[(M+H)⁺]。

步骤C：3-碘-4-戊-4-烯氧基-噻吩-2-甲酸甲酯

向3-氨基-4-戊-4-烯氧基-噻吩-2-甲酸甲酯(11.30g,45.42mmol,1.0当量)和CH₂I₂(24.59g,90.85mmol,2.0当量)在MeCN(22.0mL)中的溶液中添加亚硝酸戊酯(8.06g,68.14mmol,1.5当量)。将混合物在60℃下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。在真空下除去溶剂。将反应混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-3％)，得到呈黄色油状物的3-碘-4-戊-4-烯氧基-噻吩-2-甲酸甲酯(5.28g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 353.0[(M+H)⁺]。

步骤D：5-亚甲基-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-甲酸甲酯

向3-碘-4-戊-4-烯氧基-噻吩-2-甲酸甲酯(10.40g,28.94mmol,1.0当量)在DMF(200.0mL)中的溶液中添加Pd(PPh₃)₄(5.07g,4.34mmol,0.15当量)和K₂CO₃(6.05g,43.41mmol,1.5当量)。将反应烧瓶抽空并用氮气气氛支持填充。然后将混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS指示完全转化。在减压下除去溶剂。将残余物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-3％)，得到呈淡黄色固体的5-亚甲基-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧庚因-6-甲酸甲酯(3.40g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 225.1[(M+H)⁺]。

步骤E：5-亚甲基-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-甲酸

向5-亚甲基-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-甲酸甲酯(3.23g,14.13mmol,1.0当量)在H₂O(20.0mL)和MeOH(60.0mL)的混合溶剂中的溶液中添加LiOH(512mg,21.19mmol,1.0当量)。将混合物在80℃下搅拌3小时。LC-MS指示完全转化。在真空下除去溶剂。用1M HCl水溶液将残余物调节至pH＝2，并用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到呈白色固体的粗产物5-亚甲基-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂/>-6-甲酸(2.97g)，其不经进一步纯化即可直接用于下一步。MSobsd.(ESI⁺):m/z211.1[(M+H)⁺]。

步骤F：5-氧代-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-甲酸/>

在0℃下向5-亚甲基-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-甲酸(2.91g,13.70mmol,1.0当量)和RuCl₃(62mg,0.27mmol,0.02当量)在MeCN(90.0mL)中的溶液中添加NaIO₄(8.00g,37.0mmol,2.7当量)和H₂SO₄(2.71g,27.40mmol,2.0当量)在H₂O(90.0mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。LC-MS指示完全转化。将所得的混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到呈黄色固体的粗产物5-氧代-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂/>-6-甲酸(2.92g)，其不经进一步纯化即可直接用于下一步。MS obsd.(ESI⁺):m/z 213.1[(M+H)⁺]。

步骤G：2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基-(5-氧代-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-羰基)氨基]乙酸乙酯

在0℃下向5-氧代-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-甲酸(2.42g,10.26mmol,1.0当量)、2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基氨基]乙酸乙酯(3.22g,12.32mmol,1.0当量)和HATU(5.91g,15.39mmol,1.5当量)在DMF(65.0mL)中的溶液中添加DIPEA(2.68g,20.53mmol,2.0当量)。将混合物在室温下搅拌1小时。LC-MS指示完全转化。将所得的混合物在0℃下用水淬灭，用EA萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-50％)，得到呈黄色油状物的2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基-(5-氧代-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂/>-6-羰基)-氨基]乙酸乙酯(4.00g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 447.2[(M+H)⁺]。

步骤H：6-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯

在0℃下向2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基-(5-氧代-3,4-二氢-2H-噻吩并[3,4-b]氧杂-6-羰基)氨基]乙酸乙酯(3.50g,7.83mmol,1.0当量)在DMF(35.0mL)中的溶液中添加NaH(313mg,7.83mmol,纯度60％,1.0当量)。将混合物在室温下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。在0℃下将所得的混合物添加至柠檬酸水溶液(30.0％)中。将混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-50％)，得到呈黄色固体的6-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(2.15g)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 430.1[(M+H)⁺]。

步骤I：5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯

将6-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(2.15g,5.01mmol,1.0当量)在4M HCl/二噁烷(68.0mL,272.0mmol,54.0当量)中的溶液在80℃下搅拌3小时。LC-MS指示完全转化。在真空下除去溶剂。将混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(EA/DCM,梯度0-5％)，得到呈白色固体的5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(1.10g,3.94mmol,78.6％收率,100.0％纯度)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 280.0[(M+H)⁺]。

步骤J：2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯

在0℃下向5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(1.13g,3.85mmol,1.0当量)在DMF(85.0mL)中的溶液中添加NBS(822mg,4.62mmol,1.2当量)。将混合物在室温下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。将所得的混合物用EA萃取，合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-5％)，得到呈白色固体的2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(791mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 357.9[(M+H)⁺]。

步骤K：2-溴-7-(羟基甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在-60℃下向2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(1.97g,5.50mmol,1.0当量)在DCM(250mL)中的溶液中添加氢化二异丁基铝(10.51g,22.0mmol,4.0当量)。将混合物在-60℃下搅拌1小时。然后将混合物在室温下搅拌过夜。LC-MS指示完全转化。将反应混合物用水淬灭，用DCM萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-30％)，得到呈黄色固体的粗产物2-溴-7-(羟甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(667mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS obsd.(ESI⁺):m/z 317.2[(M+H)⁺]。

步骤L：2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛

向2-溴-7-(羟基甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(1.70g,5.38mmol,1.0当量)在DCM(150.0mL)中的溶液中添加Dess-Martin高碘烷(4.56g,10.75mmol,2.0当量)。将混合物在室温下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。将所得的混合物用水淬灭，用DCM萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-30％)，得到呈黄色固体的2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(368mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 313.1,315.1[(M+H)⁺]。

步骤M：2-溴-7-(1-羟基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(580mg,1.85mmol,1.0当量)在THF(50.0mL)中的溶液中缓慢添加MeMgBr(2.20g,18.46mmol,10.0当量)。将混合物在0℃下搅拌1小时。LC-MS指示完全转化。将反应混合物用饱和NH₄Cl溶液淬灭，用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到呈棕色固体的粗产物2-溴-7-(1-羟基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(470mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS obsd.(ESI⁺):m/z 330.0,332.0[(M+H)⁺]。

步骤N：2-溴-7-(1-氯乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在℃下向2-溴-7-(1-羟基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(360mg,1.09mmol,1.0当量)在DCM(50.0mL)中的溶液中添加SOCl₂(13.34g,109.00mmol,100当量)。将混合物在室温下搅拌2小时。LC-MS指示完全转化。在减压下除去溶剂。将残余物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到呈白色固体的粗产物2-溴-7-(1-氯乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(390mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS obsd.(ESI⁺):m/z 347.9,349.9[(M+H)⁺]。

步骤O：2-溴-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

向2-溴-7-(1-氯乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(150mg,0.43mmol,1.0当量)、1H-吡唑(75mg,1.08mmol,2.5当量)和K₂CO₃(224mg,1.62mmol,3.8当量)在ACN(15.0mL)中的溶液中添加KI(79mg,0.47mmol,1.1当量)。将混合物在室温下搅拌16小时。LC-MS指示完全转化。在减压下除去溶剂。将所得的混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-5％)，得到呈白色固体的2-溴-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(110mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 380.0,382.0[(M+H)⁺]。

步骤P：2-(1H-吡唑-4-基)-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

向2-溴-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(100mg,0.26mmol,1.0当量)和1H-吡唑-4-基硼酸(60mg,0.53mmol,2.0当量)在H₂O(2.5mL)和DMF(5.0mL)的混合溶剂中的溶液中添加Xphos(38mg,0.08mmol,0.3当量)、Na₂CO₃(84mg,0.08mmol,3.0当量)和Pd(dppf)Cl₂(65mg,0.08mmol,0.3当量)。在氮气气氛下，将混合物在微波反应器上以100℃照射2小时。LC-MS指示完全转化。在减压下除去溶剂。将所得的混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-5％)，得到呈白色固体的2-(1H-吡唑-4-基)-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(42mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 368.1[(M+H)⁺]。

将外消旋产物通过手性SFC拆分，得到呈白色固体的(R)-2-(1H-吡唑-4-基)-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮。

SFC条件：色谱柱-AD-H，色谱柱尺寸-0.46cm I.D.*15cm L，注射-2ul，流动相-HEP:EtOH(0.1％DEA)(60:40)，流速-0.5ml，波长-UV 254nm，T-25℃，EtOH溶液。MS obsd.(ESI⁺):m/z 368.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:13.17(s,1H),10.74(s,1H),8.04(s,1H),7.98(d,J＝2.4Hz,2H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),6.32(t,J＝2.1Hz,1H),5.91-5.96(m,1H),4.26-4.37(m,2H),3.04-3.11(m,1H),2.94-3.01(m,1H),2.07-2.15(m,2H),1.84(d,J＝7.1Hz,3H)；和

呈白色固体的(S)-2-(1H-吡唑-4-基)-7-(1-吡唑-1-基乙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮。

SFC条件：色谱柱-AD-H，色谱柱尺寸-0.46cm I.D.*15cm L，注射-2ul，流动相-HEP:EtOH(0.1％DEA)(60:40)，流速-0.5ml，波长-UV 254nm，T-25℃，EtOH溶液。MS obsd.(ESI⁺):m/z 368.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.17(s,1H),10.74(s,1H),8.18(s,1H),7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),6.32(t,J＝2.1Hz,1H),5.91-5.96(m,1H),4.26-4.37(m,2H),3.04-3.11(m,1H),2.94-3.01(m,1H),2.07-2.15(m,2H),1.84(d,J＝7.1Hz,3H)。这两种化合物的绝对立体化学是随机分配的。

以下化合物的制备方式与实施例26和27所示的相似。

^#绝对立体化学是随机分配的。

实施例51：2-(1H-吡唑-4-基)-7-(吡咯烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

步骤A：2-溴-7-(吡咯烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在室温下将2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(50mg,0.14mmol,1当量)溶解于吡咯烷(1.5mL)中。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物浓缩，用EA和H2O萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过柱色谱纯化(SiO₂，DCM:MeOH＝50:1至10:1)，得到呈白色固体的2-溴-7-(吡咯烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(47mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 383.0,385.0[(M+H)⁺]。

步骤B：2-(1H-吡唑-4-基)-7-(吡咯烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在N2、室温下向2-溴-7-(吡咯烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(42mg,0.11mmol,1.0当量)在DMF(3.0mL)和H₂O(0.6mL)的混合溶剂中的溶液中添加1H-吡唑-4-基硼酸(24mg,0.22mmol,2.0当量)、Pd(dppf)Cl₂(18mg,0.02mmol,0.2当量)、X-Phos(16mg,0.03mmol,0.3当量)、NaHCO₃(9mg,0.33mmol,3.0当量)。将混合物在105℃的微波反应器上照射1.5小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物浓缩，用EA萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液在真空中浓缩，残余物通过柱色谱纯化(SiO₂，DCM:MeOH＝50:1至10:1)，得到粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进一步纯化。将洗脱液在50℃下减压浓缩以除去有机溶剂。将残留的水溶液冻干，得到呈白色固体的2-(1H-吡唑-4-基)-7-(吡咯烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环-[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(20mg)。MS obsd.(ESI+):m/z371.1[(M+H)+]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:13.17(s,1H),11.67(s,1H),8.19(s,1H),7.90(s,1H),4.36(t,J＝5.6Hz,2H),3.44-3.43(m,2H),3.29-3.23(m,2H),2.51-2.50(m,2H),2.12-2.10(m,2H),1.89-1.83(m,4H)。

实施例52：7-(吗啉-4-羰基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

步骤A：2-溴-7-(吗啉-4-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

将2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(50mg,0.14mmol,1.0当量)在吗啉(2.0mL)中的悬浮液加热至100℃持续2小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物用EA萃取，将有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-40％)，得到呈黄色固体的7-(吗啉-4-羰基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(28mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 399.0,401.0[(M+H)⁺]。

步骤B：7-(吗啉-4-羰基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

将1H-吡唑-4-基硼酸(16mg,0.13mmol,2.0当量)、2-溴-7-(吗啉-4-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(28mg,0.07mmol,1.0当量)、NaHCO₃(17mg,0.20mmol,3.0当量)、Xphos(10mg,0.02mmol,0.3当量)、Pd(dppf)₂Cl₂(11mg,0.01mmol,0.2当量)在DMF(0.5mL)和H₂O(0.1mL)的混合溶剂中的混悬液在微波反应器上在105℃、氮气气氛下照射1.5小时。LCMS显示完全转化。除去溶剂。将残余物用EA萃取，用Na₂SO₄干燥和浓缩。将残余物通过快速柱色谱法纯化(EA/PE，梯度0-70％)，得到呈白色固体的7-(吗啉-4-羰基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(3mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 399.0,401.0[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm:13.17(s,1H),11.74(s,1H),8.19(s,1H),7.91(s,1H),4.34-4.36(m,2H),3.35-3.69(m,6H),3.26-3.28(m,2H),2.73-2.76(m,2H),2.09-2.15(m,2H)。

实施例53：5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：(1-溴-5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将氮杂环丁烷-3-醇(363mg,3.32mmol,25.0当量)和2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(50mg,0.13mmol,1.0当量)的溶液溶解于DBU(1.01g,6.63mmol,50.0当量)中。将混合物在80℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-10％)，得到呈白色固体的(1-溴-5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]-薁-3-酮(42mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 386[(M+H)⁺]。

步骤B：5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向2-溴-7-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环-[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(34mg,0.08mmol,1.0当量)、1H-吡唑-4-基硼酸(9mg,0.08mmol,1.0当量)、K₂CO₃(34mg,0.24mmol,3当量)、Pd(dppf)Cl₂(13mg,0.02mmol,0.2当量)和Xphos(12mg,0.02mmol,0.3当量)在DMF(2.5mL)中的溶液中添加H₂O(0.5mL)，将反应混合物在微波反应器上在120℃下照射1小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，得到呈棕色固体的5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(5mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 373.1[(M+H)+]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm13.16(s,1H),11.58(s,1H),8.14(s,H),7.94(s,H),5.85(d,J＝5.9Hz,1H),4.53(d,J＝5.8Hz,1H),4.35(t,J＝5.7Hz,2H),4.18-4.27(m,1H),4.13(t,J＝8.28Hz,1H),3.76(m,2H),2.83-2.85(m,2H),2.23-2.03(m,2H)。

实施例54：7-氨基-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0⁴ ^,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

步骤A：5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸

向5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(776mg,2.17mmol,1.0当量)在MeOH(15.0mL)中的溶液中添加NaOH(221mg,5.51mmol,2.0当量)和H₂O(5.0mL)。将混合物在60℃下搅拌4小时。LCMS指示完全转化。将混合物用3M HCl水溶液酸化。收集所形成的固体并干燥，得到呈白色固体的5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸(610mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 330.0,332.0[(M+H)⁺]。

步骤B：N-(5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)氨基甲酸叔丁酯

在室温下向5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸(100mg,0.30mmol,1.0当量)和DPPA(442mg,1.82mmol,4.0当量)在MeCN(45.0mL)和t-BuOH(45.0mL)的混合溶剂的溶液中滴加Et₃N(368mg,3.63mmol,6.0当量)。将混合物在80℃下搅拌72小时。LCMS指示80％转化。将混合物用EA萃取，用Na₂SO₄干燥，浓缩得到呈黄色油状物的N-(5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 401.1,403.1[(M+H)⁺]。

步骤C：7-氨基-2-溴-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在室温下向N-(2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)氨基甲酸叔丁酯(75mg,0.18mmol,1.0当量)在EA(5.0mL)中的溶液中添加HCl(4M,在1,4-二噁烷中,1.0mL,过量)。将混合物在60℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应完成。在真空下除去溶剂并将残余物用饱和K₂CO₃水溶液处理，用H₂O稀释，并用EA萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速色谱法纯化(SiO₂,PE:EA＝50:1至1:1)，得到呈白色固体的7-氨基-2-溴-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(50mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 301.0,303.0[(M+H)⁺]。

步骤D：7-氨基-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

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在N₂、室温下向7-氨基-2-溴-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(50mg,0.16mmol,1.0当量)在DMF(10.0mL)和H₂O(5.0mL)的混合溶剂中的溶液中添加1H-吡唑-4-基硼酸(35mg,0.32mmol,2.0当量)、Na₂CO₃(50mg,0.47mmol,3.0当量)、Pd(dppf)Cl₂(26mg,0.03mmol,0.2eq.)和X-Phos(21mg,0.05mmol,0.3当量)。将混合物在110℃的微波反应器上照射1.5小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物浓缩，用EA萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液在真空中浓缩，将残余物通过柱色谱法纯化(SiO₂,PE:EA＝50:1至1:1)得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC进一步纯化，得到呈黄色固体的氨基-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(5mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 289.0[(M+H)⁺]。¹HNMR(400MHz,DMSO)δppm:13.06(s,1H),10.72(s,1H),8.14-7.80(m,2H),5.40(s,2H),4.27(t,J＝5.2Hz,2H),2.64(t,J＝6.0Hz,2H),2.14-2.10(m,2H)。

实施例55：5-(环丁氧基甲基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：1-溴-5-(氯甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向2-溴-7-(羟基甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(55mg,0.17mmol,1.0当量)在DCM(5.0mL)的溶液中添加SOCl₂(207mg,1.74mmol,10.0当量)。将混合物在室温下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。在减压下除去溶剂，得到呈淡黄色固体的1-溴-5-(氯甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(54mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS obsd.(ESI+):m/z333.9,335.9[(M+H)⁺]

步骤B：1-溴-5-(环丁氧基甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在室温下向环丁醇(111mg,1.53mmol,10.0当量)在DMF(3.0mL)中的溶液中添加NaH(7mg,0.18mmol,1.2当量)并搅拌20分钟，将2-溴-7-(氯甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(54mg,0.15mmol,1.0当量)添加至其中。将混合物在室温下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-50％)，得到呈淡黄色固体的1-溴-5-(环丁氧基甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂-苯并[cd]薁-3-酮(26mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 370.0,372.0[(M+H)⁺]。

步骤C：5-(环丁氧基甲基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向2-溴-7-(环丁氧基甲基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(26mg,0.07mmol,1.0当量)、1H-吡唑-4-基硼酸(16mg,0.14mmol,2.0当量)、Xphos(33mg,0.07mmol,1.0当量)、Na₂CO₃(9mg,0.07mmol,1.0当量)、Pd(dppf)Cl₂(57mg,0.07mmol,1.0当量)在DMF(2.0mL)中的溶液中添加H₂O(1.0mL)。在氮气气氛下，将混合物在微波反应器上以105℃照射1.5小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物用EA萃取，合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-3％)，得到呈淡黄色固体的5-(环丁氧基甲基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并-[cd]薁-3-酮(11mg)。MS obsd.(ESI+):m/z358.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm 13.15(s,1H),11.33(s,1H),8.17(s,1H),7.90(s,1H),4.32(t,J＝5.72Hz,4H),4.30(s,1H),3.95-4.03(m,1H),2.90-2.93(m,2H),2.02-2.13(m,4H),1.85-1.87(m,2H),1.60-1.63(m,1H),1.40-1.45(m,1H)。

实施例56：N-甲基-N-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙酰胺

步骤A：3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-甲酸乙酯

将5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲酸乙酯(300mg,1.07mmol,1.0当量)在POCl₃(15.0mL)的溶液中在100℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物缓慢添加至水中，用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-15％)，得到呈白色固体的3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-甲酸乙酯(304mg)。MS obsd.(ESI+):m/z298.0[(M+H)⁺]。

步骤B：1-溴-3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-甲酸乙酯

向5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-甲酸乙酯(100mg,0.32mmol,1当量)在DMF(5.0mL)中的溶液中添加NBS(68mg,0.38mmol,1.2当量)。将混合物在室温下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物缓慢添加至水中，用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(MeOH/DCM,梯度0-3％)，得到呈白色固体的2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-甲酸乙酯(120mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 378.2[(M+H)⁺]。

步骤C：1-溴-3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-甲酸

向2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-甲酸乙酯(120mg,0.30mmol,1.0当量)在MeOH(6.0mL)和H₂O(2.0mL)的混合溶剂中的溶液中添加NaOH(24mg,0.61mmol,2.0当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将混合物用EA萃取，收集水相并用1.2M HCl酸化。收集所形成的固体并通过冻干干燥，得到呈白色固体的2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-甲酸(95mg)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS obsd.(ESI+):m/z 257.2[(M+H)⁺]。

步骤D：(1-溴-3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)氨基甲酸叔丁酯

向2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-甲酸(100mg,0.29mmol,1.0当量)、DPPA(210mg,0.86mmol,3.0当量)在t-BuOH(10.0mL)和MeCN(10.0mL)的混合溶剂中的溶液中滴加Et₃N(175mg,1.73mmol,6.0当量)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LCMS指示71.0％转化。将所得的混合物用EA萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-25％)，得到呈淡黄色固体的N-(5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)氨基甲酸叔丁酯(115mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 419[(M+H)⁺]。

步骤E：(1-溴-3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向N-(2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]-十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-基)氨基甲酸叔丁酯(115mg,0.25mmol,1.0当量)在DMF(5.0mL)中的溶液中添加NaH(14mg,0.37mmol,60.0％纯度,1.5当量)并搅拌20分钟。向其中添加MeI(70mg,0.49mmol,2.0当量)，并将混合物在室温下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-15％)，得到呈白色固体的(1-溴-3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(84mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 377.2,379.2[(M-56+H)⁺]。

步骤F：1-溴-3-氯-N-甲基-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-胺

在室温下向N-(2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(84mg,0.19mmol,1.0当量)在EA(3.0mL)中的溶液中添加4M HCl-二噁烷(1.5mL)。将混合物在室温下搅拌12小时。LCMS显示反应完成。在减压下除去溶剂。将残余物用饱和NaHCO₃水溶液碱化。将所得的混合物用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-25％)，得到呈白色固体的2-溴-5-氯-N-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-胺(64mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 333.0,335.0[(M+H)⁺]。

步骤G：N-(1-溴-3-氯-7,8-二氢-6H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)-N-甲基乙酰胺

将2-溴-5-氯-N-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-胺(64mg,0.18mmol,1.0当量)在乙酰乙酸酯(93mg,0.91mmol)中的溶液在70℃下加热4小时。LCMS显示反应完成。通过蒸发除去溶剂。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-15％)，得到呈淡黄色固体的N-(2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-基)-N-甲基-乙酰胺(50mg)。MS obsd,(ESI+):m/z 375.1,377.1[(M+H)⁺]。

步骤H：N-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)-N-甲基乙酰胺

在25℃下向N-(2-溴-5-氯-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),5,7-四烯-7-基)-N-甲基-乙酰胺(20mg,0.05mmol,1.0当量)在乙酸(3.0mL)中的溶液中添加H₂O(0.5mg,0.03mmol,0.5当量)和乙酸铵(21mg,0.25mmol,5.0当量)。将混合物在200℃的微波反应器上照射2小时。LCMS显示反应完成。通过蒸发除去溶剂。将残余物通过快速色谱法纯化(EA/PE，梯度0-50％)，得到呈白色固体的N-(2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)-N-甲基-乙酰胺(15mg)。MSobsd,(ESI+):m/z 357.2,359.2[(M+H)⁺]。

步骤I：N-甲基-N-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙酰胺

向N-(2-溴-5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基)-N-甲基-乙酰胺(30mg,0.08mmol,1.0当量)、1H-吡唑-4-基硼酸(19mg,0.17mmol,2.0当量)、Xphos(40mg,0.08mmol,1.0当量)、Na₂CO₃(11mg,0.08mmol,1.0当量)、Pd(dppf)Cl₂(69mg,0.08mmol,1.0当量)在DMF(1.0mL)中的溶液中添加H₂O(2.0mL)。然后在氮气气氛下，将混合物在微波反应器上以105℃照射1.5小时。LCMS显示反应完成。将所得的混合物用EA萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的N-甲基-N-[5-氧代-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-基]乙酰胺(11mg)。MS obsd.(ESI+):m/z 345.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO)δppm 13.23(s,1H),8.43(s,1H),8.05(s,2H),4.36(t,J＝5.5Hz,2H),3.04(s,3H),2.73(t,J＝5.8Hz,2H),2.10-2.14(m,2H),1.83(s,3H)。

实施例57：(S)-5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

实施例58：(R)-5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：2-溴-7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0⁴ ^,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向7-乙酰基-2-溴-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(100mg,304.7umol)在无水THF(20mL)中的溶液中，在0℃下将溴化乙基镁(1M,1.52mL)添加至混合物。在添加后，将混合物在25℃下搅拌2小时。在完成后，冷却至0℃并在0℃下添加饱和NH₄Cl(20mL)。将所得的混合物用EtOAc萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。通过快速柱色谱法纯化(用0-10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈黄色固体的2-溴-7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(30mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z358.2[M+H]⁺,360.2[M+2+H]⁺。

步骤B：7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环

[64.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

向2-溴-7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(100mg,279.1umol)在二噁烷:H₂O＝5:1(13mL)的溶液中添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-三苯甲基-吡唑(183mg,418.7umol)、碳酸钠(60mg,558.3umol)、Xphos(40mg,83.7umol)、Pd(dppf)Cl₂(62mg,83.7umol)。将反应在微波下在105℃下搅拌2.3小时。在完成后，冷却至25℃，用H₂O稀释。将所得的混合物用EtOAc萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。通过快速柱色谱法纯化(用0-10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈黄色油状物的7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(120mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 588.7[M+H]⁺。

步骤C：5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在0℃下向7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(240mg,408.4umol)在DCM(10mL)的溶液中添加TFA(233mg,2.04mmol)。将反应在25℃下搅拌2小时。LCMS显示约84％转化，然后冷却至0℃，在0℃下小心添加饱和NaHCO₃，调节至PH＝8。将所得的混合物用DCM萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到残余物。通过快速柱色谱法纯化(用0-10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈白色固体的5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(75mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 346.4[M+H]⁺。

(S)-5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮和(R)-5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

5-(2-羟基丁-2-基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮7-(1-羟基-1-甲基-丙基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮的对映异构体(27mg)使用以下方法通过手性HPLC分离：(色谱柱：AD-H，色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L，进样量：2ul，流动相：HEP:ETOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5ml，波长：UV 254nm，温度：25℃)，得到呈白色固体的7-[(1S)-1-羟基-1-甲基-丙基]-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(9mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 346.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.18(s,1H),9.70(s,1H),8.19(s,1H),7.90(s,1H),5.98(s,1H),4.32-4.28(m,2H),3.10-2.92(m,2H),2.20-2.05(m,2H),1.95-1.80(m,1H),1.75-1.60(m,1H),1.56(s,3H),0.78(t,J＝10.2Hz,3H)。呈白色固体的7-[(1R)-1-羟基-1-甲基-丙基]-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(8mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 346.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.18(s,1H),9.70(s,1H),8.19(s,1H),7.90(s,1H),5.98(s,1H),4.32-4.26(m,2H),3.10-2.92(m,2H),2.20-2.05(m,2H),1.95-1.80(m,1H),1.75-1.60(m,1H),1.56(s,3H),0.78(t,J＝10.2Hz,3H)。这两种化合物的绝对立体化学是随机分配的。

以下化合物的制备方式与实施例57和58所示的相似。

^#绝对立体化学是随机分配的。

以下化合物的制备方式与实施例26和27所示的相似。

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^#绝对立体化学是随机分配的。

以下化合物的制备方式与实施例57和58所示的相似。

^#绝对立体化学是随机分配的。

实施例75：2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈

步骤A：2-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈

向溴-5-(氯甲基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(150mg,0.448mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中添加NaCN(24mg,0.448mmol)。在添加后，将混合物在60℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，将合并的乙酸乙酯层用水进一步洗涤。将有机层用无水硫酸镁干燥并浓缩，并将所得的产物通过制备型TLC纯化(用10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈白色固体的2-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈(130mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 325.3[(M+H)⁺],327.3[(M+2+H)⁺]。

步骤B：2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈

向2-(1-溴-3-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈(130mg,0.4mmol)在二噁烷:H₂O＝5/1(10mL)中的溶液中添加Na₂CO₃(43mg,0.4mmol)、Pd(dppf)Cl₂(29mg,0.04mmol)、X-phos(95mg,0.08mmol)，并将悬浮液用N₂脱气3分钟。然后将混合物密封在管中并在N₂下用微波加热至110℃持续1小时。向混合物中添加H₂O并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥并在真空下浓缩，将残余物通过制备型TLC纯化(用10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈淡黄色固体的2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈(65mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 313.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.17(s,1H),11.59(s,1H),8.20(s,1H),7.91(s,1H),4.34(t,J＝5.2Hz,2H),3.97(s,2H),2.92(t,J＝5.6Hz,2H),2.17(t,J＝5.6Hz,2H)。

实施例76：2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙酸甲酯

将2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙腈(60mg,192.1umol)在4M HCl/MeOH(5mL)中的混合物在60℃下搅拌2小时。然后减压浓缩混合物，将残余物倒入饱和NaHCO₃溶液中，用EtOAc萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将该粗产物通过制备型TLC纯化(用10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈淡黄色固体的2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙酸甲酯(35mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z346.1[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.15(s,1H),11.37(s,1H),8.18(s,1H),7.89(s,1H),4.31(t,J＝5.2Hz,2H),3.76(s,2H),3.66(s,3H),2.80-2.77(m,2H),2.13-2.07(m,2H)。

实施例77：5-(2-羟基-2-甲基丙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

在冰浴下向2-(3-氧代-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-5-基)乙酸甲酯(72mg,183umol,88％纯度)在THF(10mL)中的溶液中缓慢添加MeLi(1.6M,0.9mL)。在添加后，将反应在60℃下搅拌1小时。在冰浴下将反应混合物缓慢倒入饱和NH₄Cl水溶液中。然后，通过DCM萃取。将有机层通过Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩得到粗产物，该粗产物通过制备型TLC板纯化(7％MeOH在DCM中的溶液)，然后通过C18色谱柱纯化(用0-30％MeCN的水溶液、0.1％FA洗脱)，得到呈淡黄色固体的产物5-(2-羟基-2-甲基丙基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮(2.9mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 346.3[(M+H)⁺]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.19(s,1H),10.72(s,1H),8.03(brs,2H),4.66(s,1H),4.31(t,J＝6.4Hz,2H),2.93-2.90(m,2H),2.71(s,2H),2.10-2.07(m,2H),1.16(s,6H)。

以下化合物的制备方式与实施例26和27所示的相似。

^#绝对立体化学是随机分配的。

实施例85：5-(1-羟基环戊基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

步骤A：5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛

在25℃下向7-甲基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(220mg,994.2umol)在1,4-二噁烷(70mL)的溶液中添加二氧化硒(441mg,3.98mmol)。在添加后，将混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤并在真空下浓缩得到粗产物。然后将粗产物通过快速柱色谱纯化(用0-2％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈黄色固体的5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(130mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 236.2[M+H]⁺。

步骤B：7-(1-羟基戊-4-烯基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向5-氧代-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-7-甲醛(100mg,425.1umol)在THF(10mL)中的溶液中缓慢添加烯丙基溴化镁(0.5M,8.50mL)。在添加后，将混合物在0℃下搅拌2小时。在冰浴下将反应混合物缓慢倒入饱和NH₄Cl水溶液中。然后，用EtOAc萃取。将有机层干燥并过滤和浓缩得到粗产物。通过快速柱色谱纯化(用0-3％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈黄色固体的7-(1-羟基戊-4-烯基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(90mg)。MSobsd.(ESI⁺):m/z 292.2[M+H]⁺。

步骤C：7-戊-4-烯酰基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向7-(1-羟基戊-4-烯基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(190mg,652.1umol)在DCM(12mL)中的溶液中缓慢添加Dess-Martin高碘烷(276mg,652.1umol)。在添加后，将反应在室温下搅拌3小时。将反应用饱和Na₂S₂O₃水溶液淬灭，在0℃下用NaHCO₃水溶液中和。将混合物用DCM萃取。然后干燥，过滤，浓缩并通过快速柱色谱纯化(用0-35％EtOAc在PE中的溶液洗脱)，得到呈白色固体的7-戊-4-烯酰基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(150mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 290.2[M+H]⁺。

步骤D：7-(1-羟基-1-乙烯基-戊-4-烯基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向7-戊-4-烯酰基-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(210mg,725.8umol)在THF(25mL)中的溶液中缓慢添加乙烯基溴化镁(1M,4mL)。在添加后，将混合物在室温下搅拌4小时。在冰浴下将反应混合物缓慢倒入饱和NH₄Cl溶液中。然后，将混合物用EtOAc萃取，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩得粗产物，将该粗产物通过快速柱色谱法纯化(用0-35％EtOAc在PE中的溶液洗脱)，得到呈淡黄色油状物的7-(1-羟基-1-乙烯基-戊-4-烯基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(150mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 318.2[M+H]⁺。

步骤E：7-(1-羟基环戊-3-烯-1-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

向含有7-(1-羟基-1-乙烯基-戊-4-烯基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(110mg,346.6umol)的烧瓶中添加Hoveyda-Grubbs第2代催化剂(33mg,52.0umol)在无水DCM(26mL)中的溶液。将混合物在室温下在N₂保护下搅拌3小时。将混合物浓缩并通过快速柱色谱法纯化(用0-7％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈棕色固体的7-(1-羟基环戊-3-烯-1-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(75mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 290.2[(M+H)⁺]。

步骤F：7-(1-羟基环戊基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在室温、N₂气氛下向7-(1-羟基环戊-2-烯-1-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(150mg,518.4umol)在EtOAc(25mL)中的溶液中添加Pd/C(20重量％,30mg)。然后，将混合物在室温H₂下搅拌36小时。过滤反应混合物，浓缩滤液得到呈棕色固体的7-(1-羟基环戊基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(146mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 292.2[M+H]⁺。

步骤G：2-溴-7-(1-羟基环戊基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮

在0℃下向7-(1-羟基环戊基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(65mg,223.1umol)在THF(18mL)中的溶液中添加NBS(55mg,312.3umol)。在添加后，将反应在室温下搅拌5小时。将反应用饱和Na₂SO₃溶液(5mL)淬灭，用EtOAc(15mL×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，在真空下过滤并浓缩滤液得到粗产物，将该粗产物通过快速柱色谱法纯化(用0-5％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈白色固体的2-溴-7-(1-羟基环戊基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(58mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 370.2[M+H]⁺,372.2[M+2+H]⁺。

步骤H：5-(1-羟基环戊基)-1-(1-三苯甲基-1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

向(1-三苯甲基吡唑-4-基)硼酸(143mg,405.1umol)在1,4-二噁烷:H₂O＝5:1(4mL)中的溶液中添加2-溴-7-(1-羟基环戊基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0⁴ ^,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(50mg,135.0umol)、Pd(dppf)Cl₂(20mg,27.0umol)、Na₂CO₃(43mg,405.1umol)、Xphos(26mg,54.0umol)。将反应在微波辐射下在105℃下搅拌1小时。将反应混合物过滤、浓缩得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱法纯化(用0-4％MeOH在DCM中的溶液洗脱)，得到呈白色固体的7-(1-羟基环戊基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(40mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 600.5[M+H]⁺。

步骤I：5-(1-羟基环戊基)-1-(1H-吡唑-4-基)-4,6,7,8-四氢-3H-9-氧杂-2-硫杂-4-氮杂苯并[cd]薁-3-酮

将7-(1-羟基环戊基)-2-(1-三苯甲基吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(20mg,33.35umol)、2,2,2-三氟乙酸(740mg,6.49mmol,0.2mL)和DCM(10mL)的混合物在室温下搅拌30分钟。在0℃下将混合物小心地用饱和NaHCO₃溶液调节至pH＝8。将混合物用DCM:MeOH＝10:1萃取，经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩。然后通过反向柱色谱法纯化(用0-25％CH₃CN水溶液(0.1％FA水溶液)洗脱)，得到呈白色固体的7-(1-羟基环戊基)-2-(1H-吡唑-4-基)-12-氧杂-3-硫杂-6-氮杂三环[6.4.1.0^4,13]十三碳-1,4(13),7-三烯-5-酮(5mg)。MS obsd.(ESI⁺):m/z 358.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.23(s,1H),9.80(s,1H),8.03(brs,2H),5.86(s,1H),4.30(t,J＝6.7Hz,2H),2.97-2.83(m,2H),2.14-2.02(m,4H),1.96-1.83(m,6H)。

生物测定

CDC7激酶生物化学测定方案：

与DBF4共表达的全长人CDC7蛋白购自SignalChem(China)。CDC7激酶活性使用PDKtide(SignalChem)作为底物并通过以下方式测定：使用ADP-Glo^TM激酶测定试剂盒(Promega)按照制造商的说明来测量ADP产生。使用以下条件进行激酶反应：缓冲液：40mMTris pH 7.5、20mM MgCl₂、0.1mg/ml BSA和50uM DTT。最终反应混合物含有0.1nM CDC7/DBF4、1uM ATP和10uM PDKtide。激酶反应时间为4小时。使用EnVision酶标仪(PerkinELmer)来测量ADP-Glo信号。

根据以下公式计算CDC7激酶活性的抑制百分比：

S_样品：化合物的信号

S_高对照：高对照的信号(DMSO)

S_低对照：低对照的信号(阳性对照CDC7抑制剂)

磷酸化MCM2 MSD电化学发光测定

使用以下方案来确定CDC7抑制剂对CDC7底物MCM2的细胞磷酸化的影响：

将100uL培养基(1640培养基+10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素)中的总共40,000个colo205细胞铺板到96孔细胞培养板中并使其贴壁6小时。在完全PBS中以25X终浓度制备测试化合物的3倍连续稀释液，并将每种测试化合物各4uL添加至细胞中，并在37℃、5％CO₂下温育20小时。每个浓度一式两份测试。在温育20小时后，将细胞用150uL PBS洗涤并用40uL MSD裂解缓冲液(从Meso Scale Diagnostics获得)裂解，该缓冲液提供1X完全ULTRA混合物抑制剂(从Roche获得)。为了检测MCM2 S53的磷酸化，将30μL捕获抗体溶液(从Abnova获得，产品目录号H00004171-M01，1:500)添加至MULTI-ARRAY 96孔高结合板的每个孔中，并温育过夜。除去抗体溶液，用BSA溶液封闭孔并洗涤板，随后每孔添加30ul细胞裂解物。在温育2小时后，洗涤平板。然后将30μL的1X检测抗体溶液(从Abcam获得，产品目录号ab109133，1:1000)添加至每个孔中并温育1小时。洗涤板并将30μL的1X二抗溶液(从MSD获得，产品目录号R32AB-1，1:5000)添加至每个孔中并温育1小时。洗涤板并将150μL的1X读板缓冲液T添加至MSD板的每个孔中。在MESO SECTOR S600酶标仪上测量电化学发光信号。根据以下公式计算剩余的磷酸化MCM2信号的百分比。

HC(高对照)：用DMSO处理的细胞

Cpds：用测试化合物处理的细胞

LC(低对照)：用阳性对照CDC7抑制剂处理的细胞

表A.CDC7激酶抑制

/>

A表示IC₅₀<1nM；B表示1nM≤IC₅₀<10nM；C表示IC₅₀≥10nM。

表B.电化学发光测定法

A表示IC₅₀<100nM；B表示100nM≤IC₅₀<1000nM；C表示IC₅₀≥1000nM。

Claims

1.一种式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

Y是-S-或-S(＝O)-；

环A是C5-C7环烷基或5-7元杂环基；

(i)羟基；

(ii)氰基；

(iii)卤素；

(iv)C3-C6环烷氧基；

(v)C(＝O)OR^F；

(vi)C1-C6烷氧基；

(vii)任选地被1-3个独立选择的卤素取代的4-10元杂环基氧基；

(viii)-NR^BR^C；

每个p独立为0或1；

m为0、1、2、3或4；

R⁴是氢或C1-C6烷基；

R^D是氢、C1-C6卤代烷基、任选地被1-3个独立选择的R^E取代的C1-C6烷基、任选地被1-3个独立选择的R^E取代的C3-C6环烷基、任选地被1-3个独立选择的R^E取代的4-10元杂环基、C6-C10芳基或者任选地被1-3个独立选择的R^E取代的5-10元杂芳基；并且

每个R^F和R^G独立地是氢或C1-C6烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中Y是-S-。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中Y是-S(＝O)-。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中环A是5-7元杂环基。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中环A是6-7元单环杂环基。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中环A包括一个氧原子。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中环A是C5-C7环烷基。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R¹是5-10元杂芳基，被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中R¹是5-6元杂芳基，被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被1-3个独立地选自由以下各项组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被C1-C6烷基取代。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中R¹是被甲基取代的吡唑。

13.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中R¹是吡啶或嘧啶；它们各自被甲基取代。

14.根据权利要求11和13中任一项所述的化合物，其中R¹是它们各自被一个甲基取代。

15.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R¹是未取代的5-10元杂芳基。

16.根据权利要求1至7或15中任一项所述的化合物，其中R¹是未取代的5-6元杂芳基。

17.根据权利要求1至7或15至16中任一项所述的化合物，其中R¹是吡唑。

18.根据权利要求1至7或15至17中任一项所述的化合物，其中R¹是

19.根据权利要求1至7或15至16中任一项所述的化合物，其中R¹是吡啶。

20.根据权利要求1至7、15至16或19中任一项所述的化合物，其中R¹是

21.根据权利要求1至7或15至16中任一项所述的化合物，其中R¹是嘧啶。

22.根据权利要求1至7、15至16或21中任一项所述的化合物，其中R¹是

23.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地选自由以下各项组成的组：卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、-NR^BR^C、C1-C6烷氧基烷基、-C(＝O)NH-5-10元杂芳基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、任选地被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是-C(＝O)NH-5-10元杂芳基。

25.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是4-6元杂环基。

26.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是5-10元杂芳基。

27.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。

28.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是任选地被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基。

29.根据权利要求1至23或28中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是被1-3个独立选择的R^A取代的C1-C6烷基。

30.根据权利要求1至23或28至29中任一项所述的化合物，其中每个R^A独立地选自由以下各项组成的组：卤素、氰基、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷基氨基、4-6元杂环基和C3-C6环烷基。

31.根据权利要求1至23或28中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是未取代的C1-C6烷基。

32.根据权利要求31所述的化合物，其中每个R²是甲基。

33.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地选自由以下各项组成的组：卤素、羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、-NR^BR^C和C1-C6烷氧基烷基。

34.根据权利要求1至23或33中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是卤素。

35.根据权利要求1至23或33至34中任一项所述的化合物，其中每个R²是氟。

36.根据权利要求1至23或33中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地选自羟基、氰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基和C1-C6烷氧基烷基。

37.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中每个R²独立地是-NR^BR^C。

38.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成氧代基团；任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C3-C6环烷基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；或任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的3-6元杂环基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

39.根据权利要求1至23或38中任一项所述的化合物，其中两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成氧代基团。

40.根据权利要求1至23或38中任一项所述的化合物，其中两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C3-C6环烷基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

41.根据权利要求40所述的化合物，其中两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成未取代的C3-C6环烷基。

42.根据权利要求1至23或38中任一项所述的化合物，其中两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的3-6元杂环基：卤素、氰基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

43.根据权利要求42所述的化合物，其中两个R²连同它们所连接的原子一起接合在一起形成未取代的3-6元杂环基。

44.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物，其中m为1。

45.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物，其中m为2。

46.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物，其中m为3。

47.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物，其中m为4。

48.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中m为0。

49.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中m为1，并且R²是未取代的C1-C6烷基。

50.根据权利要求1至22或49中任一项所述的化合物，其中m为1，并且R²是甲基。

51.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中m为1，并且R²是卤素。

52.根据权利要求1至22或51中任一项所述的化合物，其中m为1，并且R²是氟。

53.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中m为2，并且每个R²独立地是未取代的C1-C6烷基。

54.根据权利要求1至22或53中任一项所述的化合物，其中m为2，并且每个R²是甲基。

55.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中m为2，并且每个R²独立地是卤素。

56.根据权利要求1至22或55中任一项所述的化合物，其中m为2，并且每个R²是氟。

57.根据权利要求1至22或53至56中任一项所述的化合物，其中m为2，并且R²基团是成对的。

58.根据权利要求57所述的化合物，其中R²基团是成对的二甲基。

59.根据权利要求57所述的化合物，其中R²基团是成对的二氟。

60.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、氰基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基和C3-C6环烷基。

61.根据权利要求1至60中任一项所述的化合物，其中R³是甲基。

62.根据权利要求1至60中任一项所述的化合物，其中R³是被羟基取代的C1-C6烷基。

63.根据权利要求1至60中任一项所述的化合物，其中R³是被一个羟基和一个C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基。

64.根据权利要求1至60中任一项所述的化合物，其中R³是被C3-C6环烷氧基取代的C1-C6烷基。

65.根据权利要求1至60中任一项所述的化合物，其中R³是被一个或两个C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。

66.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是被C(＝O)-O-X取代的C1-C6烷基。

67.根据权利要求1至59或66中任一项所述的化合物，其中X是C1-C6烷基。

68.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基和3至10元杂环基，其中所述3至10元杂环基任选地被1-3个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基、卤素和氧代。

69.根据权利要求1至59或68中任一项所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基。

70.根据权利要求69所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，所述3至10元杂环基被羟基取代。

71.根据权利要求69所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，所述3至10元杂环基被卤素取代。

72.根据权利要求69中任一项所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，所述3至10元杂环基被甲基取代。

73.根据权利要求1至59或69中任一项所述的化合物，其中R³是被以下取代的C1-C6烷基：氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；它们各自任选地被C1-C6烷基、羟基或卤素取代。

74.根据权利要求1至59或73中任一项所述的化合物，其中R³是被氮杂环丁烷取代的C1-C6烷基，所述氮杂环丁烷被1-3个独立地选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。

75.根据权利要求1至59或73中任一项所述的化合物，其中R³是被未取代的氮杂环丁烷取代的C1-C6烷基。

76.根据权利要求1至59或73中任一项所述的化合物，其中R³是：

77.根据权利要求1至59或73中任一项所述的化合物，其中R³是被未取代的哌啶取代的C1-C6烷基。

78.根据权利要求1至59或73中任一项所述的化合物，其中R³是被吡咯烷取代的C1-C6烷基，所述吡咯烷被1-3个独立地选自羟基和卤素的取代基取代。

79.根据权利要求1至59或73中任一项所述的化合物，其中R³是被未取代的吡咯烷取代的C1-C6烷基。

80.根据权利要求1至59、73、78或79中任一项所述的化合物，其中R³是

81.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是被-NR^BR^C取代的C0-C6烷基。

82.根据权利要求81所述的化合物，其中R^B和R^C各自独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-O-C1-C6烷基或者被C1-C6烷氧基取代的苄基。

83.根据权利要求81或82所述的化合物，其中R³是被NH₂取代的C0-C6烷基。

84.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是-C(＝O)-X²，其中X²是C1-C6烷基或者任选地被羟基取代的3-6元杂环基。

85.根据权利要求84所述的化合物，其中所述3-6元杂环基是氮杂环丁烷、吗啉或吡咯烷。

86.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：氰基、羟基、卤素和C1-C6烷氧基。

87.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基和5-6元杂芳基。

88.根据权利要求87所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代：氰基、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

89.根据权利要求87或88所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是咪唑、吡唑或三唑。

90.根据权利要求87至89中任一项所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是被氰基取代的吡唑。

91.根据权利要求1至59中任一项所述的化合物，其中R³是被未取代的5-6元杂芳基取代的C1-C6烷基。

92.根据权利要求91所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是未取代的咪唑。

93.根据权利要求91所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是未取代的三唑。

94.根据权利要求87至89中任一项所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是

95.根据权利要求1至94中任一项所述的化合物，其中每个p为0。

96.根据权利要求1至94中任一项所述的化合物，其中每个p为1。

97.根据权利要求1至94中任一项所述的化合物，其中p出现两次，一次p为1，另一次p为0。

98.根据权利要求1至97中任一项所述的化合物，其中R⁴是C1-C6烷基。

99.根据权利要求1至98中任一项所述的化合物，其中R⁴是甲基。

100.根据权利要求1至97中任一项所述的化合物，其中R⁴是氢。

101.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(I)的化合物是式(Ia)的化合物：

其中

R¹是5或6元杂芳基基团，任选地被C1-C6烷基取代；并且

R²独立地选自卤素和C1-C6烷基，并且m为1或2。

102.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(I)的化合物是式(Ib)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是5或6元杂芳基基团，任选地被C1-C6烷基取代；并且

R²独立地选自卤素和C1-C6烷基，并且m为1或2。

103.根据权利要求101或102所述的化合物，其中m为2，并且R²是成对的二氟。

104.根据权利要求101或102所述的化合物，其中m为2，并且R²是成对的二甲基。

105.根据权利要求101或102所述的化合物，其中m为1，并且R²是氟。

106.根据权利要求101或102所述的化合物，其中m为1，并且R²是甲基。

107.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(I)的化合物是式(Ic)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

108.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(I)的化合物是式(Id)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

109.根据权利要求101至108中任一项所述的化合物，其中R¹是吡唑、吡啶或嘧啶；它们各自被C1-C6烷基取代。

110.根据权利要求101至109中任一项所述的化合物，其中R¹是被甲基取代的吡唑。

111.根据权利要求101至109中任一项所述的化合物，其中R¹是吡啶或嘧啶；它们各自被甲基取代。

112.根据权利要求101至108中任一项所述的化合物，其中R¹是吡唑、吡啶或嘧啶。

113.根据权利要求101至108或112中任一项所述的化合物，其中R¹是

114.根据权利要求101至113中任一项所述的化合物，其中R³是任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷氧基以及任选地被羟基取代的C3-C6环烷基。

115.根据权利要求101至114中任一项所述的化合物，其中R³是未取代的C1-C6烷基。

116.根据权利要求101至115中任一项所述的化合物，其中R³是甲基。

117.根据权利要求101至114中任一项所述的化合物，其中R³是被羟基取代的C1-C6烷基。

118.根据权利要求101至114和117中任一项所述的化合物，其中R³是

119.根据权利要求101至114中任一项所述的化合物，其中R³是被C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基，所述C3-C6环烷基任选地被羟基取代。

120.根据权利要求119所述的化合物，其中R³是

121.根据权利要求101至114中任一项所述的化合物，其中R³是被一个羟基和一个C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基。

122.根据权利要求121所述的化合物，其中R³是

123.根据权利要求101至114中任一项所述的化合物，其中R³是被C3-C6环烷氧基取代的C1-C6烷基。

124.根据权利要求123所述的化合物，其中R³是

125.根据权利要求101至114中任一项所述的化合物，其中R³是被一个或两个C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基。

126.根据权利要求125所述的化合物，其中R³是

127.根据权利要求101至113中任一项所述的化合物，其中R³是被C(＝O)-O-X取代的C1-C6烷基。

128.根据权利要求127所述的化合物，其中X是C1-C6烷基。

129.根据权利要求101至113或127至128中任一项所述的化合物，其中R³是

130.根据权利要求101至113中任一项所述的化合物，其中R³是被1-3个3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，其中所述3至10元杂环基任选地被1-3个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。

131.根据权利要求101至113或130中任一项所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基。

132.根据权利要求131所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，所述3至10元杂环基被羟基取代。

133.根据权利要求131所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，所述3至10元杂环基被卤素取代。

134.根据权利要求131中任一项所述的化合物，其中R³是被3至10元杂环基取代的C1-C6烷基，所述3至10元杂环基被甲基取代。

135.根据权利要求101至113或130至131中任一项所述的化合物，其中R³是被以下取代的C1-C6烷基：氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；它们各自任选地被C1-C6烷基、羟基或卤素取代。

136.根据权利要求135所述的化合物，其中R³是被氮杂环丁烷取代的C1-C6烷基，所述氮杂环丁烷被1-3个独立地选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、羟基和卤素。

137.根据权利要求135所述的化合物，其中R³是被未取代的氮杂环丁烷取代的C1-C6烷基。

138.根据权利要求101至113、130至131或135中任一项所述的化合物，其中R³是：

139.根据权利要求101至113、130至131或135中任一项所述的化合物，其中R³是被未取代的哌啶取代的C1-C6烷基。

140.根据权利要求139所述的化合物，其中R³是

141.根据权利要求101至113、130至131或135中任一项所述的化合物，其中R³是被吡咯烷取代的C1-C6烷基，所述吡咯烷被1-3个独立地选自羟基和卤素的取代基取代。

142.根据权利要求101至113、130至131或135中任一项所述的化合物，其中R³是被未取代的吡咯烷取代的C1-C6烷基。

143.根据权利要求101至113、130至131或135中任一项所述的化合物，其中R³是

144.根据权利要求101至113中任一项所述的化合物，其中R³是被-NR^BR^C取代的C0-C6烷基。

145.根据权利要求144所述的化合物，其中R^B和R^C各自独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或者C(＝O)-C1-C6烷基。

146.根据权利要求101至113和144至145中任一项所述的化合物，其中R³是

147.根据权利要求144或145所述的化合物，其中R³是被NH₂取代的C0-C6烷基。

148.根据权利要求147所述的化合物，其中R³是NH₂。

149.根据权利要求101至113中任一项所述的化合物，其中R³是被氰基取代的C1-C6烷基。

150.根据权利要求149所述的化合物，其中R³是

151.根据权利要求101至113中任一项所述的化合物，其中R³是被1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-C6烷基：C1-C6烷氧基和5-6元杂芳基。

152.根据权利要求151所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基任选地被1-3个独立地选自以下的取代基取代：氰基、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。

153.根据权利要求151或152所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是咪唑、吡唑或三唑。

154.根据权利要求151至153中任一项所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是未取代的吡唑。

155.根据权利要求154所述的化合物，其中R³是

156.根据权利要求154所述的化合物，其中R³是

157.根据权利要求101至113或151至153中任一项所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是被氰基取代的吡唑。

158.根据权利要求157所述的化合物，其中R³是

159.根据权利要求151至153中任一项所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是未取代的咪唑。

160.根据权利要求159所述的化合物，其中R³是

161.根据权利要求151至153中任一项所述的化合物，其中所述5-6元杂芳基是未取代的三唑。

162.根据权利要求161所述的化合物，其中R³是

163.一种选自由表1中的化合物组成的组的化合物，或其药学上可接受的盐。

164.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至163中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

165.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者根据权利要求164所述的药物组合物。

166.一种治疗受试者的CDC7相关性癌症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有CDC7相关性癌症的受试者施用有效量的根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者向所述受试者施用根据权利要求164所述的药物组合物。

167.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述癌症是否与CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)如果所述癌症被确定为与CDC7基因、CDC7激酶或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调相关，则向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者根据权利要求164所述的药物组合物。

168.根据权利要求167所述的方法，其中确定所述受试者的所述癌症是否是CDC7相关性癌症的步骤包括进行测定法以在来自所述受试者的样品中检测CDC7基因、CDC7激酶蛋白或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调。

169.根据权利要求167或168所述的方法，其还包括从所述受试者获得样品。

170.根据权利要求169所述的方法，其中所述样品是活检样品。

171.根据权利要求168至170中任一项所述的方法，其中所述测定法选自由以下组成的组：测序、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定法和荧光原位杂交(FISH)。

172.根据权利要求171所述的方法，其中所述测序是焦磷酸测序或下一代测序。

173.根据权利要求165至172中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用另外的疗法或治疗剂。

174.根据权利要求173所述的方法，其中所述另外的疗法或治疗剂选自放射疗法、细胞毒性化学治疗剂、激酶靶向治疗剂、细胞凋亡调节剂、信号转导抑制剂、免疫靶向疗法和血管生成靶向疗法。

175.根据权利要求173或174所述的方法，其中根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或者根据权利要求164所述的药物组合物，以及所述另外的治疗剂以单独剂量同时施用。

176.根据权利要求173或174所述的方法，其中根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者根据权利要求164所述的药物组合物，以及所述另外的治疗剂以单独剂量按任何顺序依次施用。

177.一种用于抑制哺乳动物细胞增殖的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。

178.一种用于抑制哺乳动物细胞中的CDC7激酶活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。

179.根据权利要求177或178所述的方法，其中所述接触在体内发生。

180.根据权利要求177或178所述的方法，其中所述接触在体外发生。

181.根据权利要求152至153中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。

182.根据权利要求156所述的方法，其中所述哺乳动物癌细胞是哺乳动物CDC7相关性癌细胞。

183.根据权利要求152至157中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞具有CDC7基因、CDC7激酶蛋白或它们中的任一者的表达或活性或水平的失调。

184.一种用于抑制需要治疗的患有特定癌症的受试者中的转移的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至163中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者根据权利要求164所述的药物组合物。