CN117120442A - 用于治疗癌症、自身免疫性病症和炎性病症的三环化合物 - Google Patents

Abstract

本申请涉及如本文所定义的式(I)化合物和其药学上可接受的盐。本申请还描述了包括式(I)化合物和其药学上可接受的盐的药物组合物，以及使用所述化合物和组合物治疗如癌症、自身免疫性病症和炎性病症等疾病的方法。

Description

用于治疗癌症、自身免疫性病症和炎性病症的三环化合物

技术领域

本申请涉及三环和其它多环化合物，其可用于治疗如癌症等增殖性病症，以及自身免疫性病症和炎性病症。

背景技术

MALT1(粘膜相关淋巴组织淋巴瘤易位蛋白1)是一种细胞内蛋白，其通过NF-κB的上游信号传导参与淋巴细胞增殖，以控制淋巴细胞的活化、存活、增殖和分化。与CARMA或CARD支架蛋白(例如，CARD11(胱天蛋白酶募集结构域家族成员11，也被称为CARMA1)、CARD14(胱天蛋白酶募集结构域家族成员14，也被称为CARMA2)、CARD10(胱天蛋白酶募集结构域家族成员10，也被称为CARMA3)或CARD9(胱天蛋白酶募集结构域家族成员9))和BCL10(B细胞CLL/淋巴瘤10)一起，MALT1是在细胞表面抗原受体活化时形成的CBM复合物的三个亚基之一。参见Jaworski等人,《细胞与分子生命科学(Cell Mol Life Science)》2016,73,459-473，以及Juilland和Thome.《免疫学前沿(Frontiers in Immunology)》2018,9,1927。已知MALT1通过至少两种机制介导NF-κB信号传导：首先，MALT1作为支架蛋白发挥作用，募集NF-κB信号传导蛋白，如TRAF6、TAB(例如，TAB1、TAB2、TAB3)、TAK1和NEMO-IKKα/β；并且其次，作为一种半胱氨酸蛋白酶，其切割和灭活NF-κB信号传导的负调节因子，如RelB、A20或CYLD。参见Rosebeck等人,《科学(Science)》,2011,331,468-472。

MALT1的蛋白酶活性已成为潜在的治疗靶标，尤其是在NF-κB和相关通路被认为发挥重要作用的情况下。活化的B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)是侵袭性淋巴瘤，其通常以NF-κB过度活化为特征，并且研究表明，MALT1蛋白酶抑制可以显著抑制高度侵袭性ABC型DLBCL的生长并促进其细胞凋亡。参见Ferch U等人,《实验医学杂志(J Exp Med)》2009,206,2313-2320；还参见Hailfinger S等人,《美国国家科学院院刊(Proc Natl AcadSci USA)》2009,106,19946-19951。MALT1或融合蛋白API2-MALT1的已知肽底物包含A20、CYLD、BCL10、RelB、regnase-1、roquin-1、NIK和LIMA la。参见Rebeaud等人,《自然免疫学(Nat Immunol)》2008,9,272-281；另参见Coornaert等人,《自然免疫学》20008,9,263-271；Staal等人,《欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J)》2011,30,1742-1752；Hailfinger等人,《美国国家科学院院刊(PNAS)》2011,108,14596-14601；Jeltsch等人,《自然免疫学》2014,15,1079-1089；Uehata等人,《细胞(Cell)》2013,153,1036-1049；Nie等人,《自然通讯(NatCommun)》2015,6,5908；以及Baens等人,《公共科学图书馆-综合(PLoS ONE)》2014,9,e103774。MALT1底物的一种一般概况描述于以下文献中：Kasperkiewicz等人《科学报告(Scientific Reports)》8.1(2018):1-10。

另外地，已在ABC-DLBCL中鉴定出几种导致生成组成型活性MALT1的染色体易位，并且关于MALT1融合蛋白API2-MALT1/IgH-MALT1导致独立于上游刺激的NF-κB活化的鉴定进一步突出了这种蛋白质在癌症和各种疾病中的重要性。参见Farinha等人,《临床肿瘤学杂志(J Clinical Oncology)》2005,23,6370-6378。进一步地，MALT1已被证明与几种不同类型的癌症有关，例如血液恶性肿瘤(如套细胞淋巴瘤)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和实体瘤(如肺腺癌、乳腺癌、胰腺癌和胶质母细胞瘤)。参见Jiang等人,《癌症研究(CancerResearch)》2011,71,2183-2192；还参见Pan等人,《分子癌症研究(Mol Cancer Res)》2016,14,93-102，Penas等人,《血液(Blood)》2010,115,2214-2219以及《分子与细胞医学杂志JCell Mol Med.》2020年7月；24(13):7550-7562。MALT1作为一种免疫调节蛋白，也参与先天性和适应性免疫，并且可能对若干种炎性病症产生影响，例如，牛皮癣、多发性硬化症、类风湿性关节炎、干燥综合征(Sjogren′ssyndrome)、溃疡性结肠炎和由慢性炎症引起的不同类型的过敏性病症。参见Afofina等人,《欧洲生化学会联合会杂志(FEBS Journal)》2015,DOI:10.1 111/febs.13325；还参见Lowes等人,《免疫学年鉴(Ann Review Immunology)》2014,32,227-255；Jabara等人,《变态反应与临床免疫学杂志(J Allergy ClinImmunology)》2013,132,151-158；Streubel等人,《临床癌症研究(Clin CancerResearch)》2004,10,476-480；以及Liu等人,《肿瘤靶标(Oncotarget)》2016,1-14。最近，研究结果还表明了MALT1在控制调节性T细胞(Treg)功能和体内平衡中的重要性。正在进行研究以确认MALT1抑制剂单独或与免疫检查点机制联合治疗实体瘤患者的潜力。然而，目前尚无MALT1抑制剂被批准用于治疗用途。

发明内容

因此，本文提供了一种式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中X、Y、Z、Q、n、R^X、R¹、R²、R³、m和R⁴如本文所定义。

在一些实施例中，式(I)化合物具有以下结构：

或其药学上可接受的盐，其中X、Y、Z、Q、n、R¹、R²、R³、m和R⁴如本文所定义。

本文还提供了一种药物组合物，其包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

还提供了用于治疗有需要的受试者的CBM复合物通路相关癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

(a)将所述癌症鉴定为CBM复合物通路相关癌症；以及

(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

向被鉴定为患有CBM复合物通路相关癌症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗受试者的MALT1相关癌症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关癌症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述癌症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于抑制受试者的转移的方法，所述受试者需要此类治疗，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的自身免疫性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的CBM复合物通路相关疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括：

(a)将所述疾病或病症鉴定为CBM复合物通路相关疾病或病症；以及

(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括：

向所述受试者向被鉴定为患有CBM复合物通路相关疾病或病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的自身免疫性病症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述自身免疫性病症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向被确定为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的炎性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的炎性病症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述炎性病症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于治疗有需要的受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包括向被确定为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或如本文所描述的药物组合物。

还提供了用于抑制哺乳动物细胞的CBM复合物通路活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。

还提供了用于抑制哺乳动物细胞的MALT1蛋白酶活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。

还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗CBM复合物通路相关疾病或病症的用途。

还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗CBM复合物通路相关疾病或病症的药物。

还提供了治疗患有MALT1相关癌症的个体的方法，所述方法包含在施用其它抗癌药(例如，第一MALT1抑制剂或另一种MALT1抑制剂)之前、期间或之后，施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本文还提供了一种用于制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法。

本文还提供了一种通过如本文所定义的制备化合物的方法获得的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

除非另有定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语都具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。本文描述了用于本公开的方法和材料；也可以使用本领域已知的其它合适的方法和材料。这些材料、方法和实例仅是说明性的，并且不旨在是限制性的。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献均通过引用整体并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包含定义)为准。

本公开的其它特征以及优点通过以下详细描述以及权利要求将会变得显而易见。

具体实施方式

如本文所使用的，术语“化合物”旨在包含所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素富集的变体。除非另外说明，否则本文按名称或结构确定为一种特定互变异构形式的化合物旨在包含其它互变异构形式。

如本文所使用的，术语“互变异构体”是指其结构在原子排列上明显不同，但是以容易且快速的平衡存在的化合物，并且应理解，本文提供的化合物可以描绘为不同的互变异构体，并且当化合物具有互变异构体形式时，所有互变异构体形式都意图在本公开的范围内，并且化合物的命名不排除任何互变异构体。以下是包含的互变异构形式的实例：

应当理解，本文提供的某些化合物可以含有一个或多个不对称中心，并且因此可以以异构体的混合物(如外消旋混合物)或对映异构体纯的形式进行制备和分离。

术语“卤基”是指元素周期表第17族的卤素之一。具体地，此术语是指氟、氯、溴和碘。优选地，此术语是指氟或氯。

术语“C1-C6烷基”是指含有1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子的直链或支链烃链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。类似地，C1-C3烷基是含有1个、2个或3个碳原子的直链或支链烃链。

术语“C1-C6卤代烷基”是指被至少一个在每次出现时独立选择的卤素原子(例如氟、氯、溴和碘)取代的烃链。卤素原子可以存在于烃链上的任何位置。类似地，C1-C3卤代烷基是含有被至少一个卤素原子取代的1个、2个或3个碳原子的直链或支链烃链。例如，C1-C3卤代烷基可以指氯甲基、氟甲基、三氟甲基、氯乙基(例如1-氯乙基和2-氯乙基)、三氯乙基(例如1,2,2-三氯乙基、2,2,2-三氯乙基)、氟乙基(例如1-氟甲基和2-氟乙基)、三氟乙基(例如1,2,2-三氟乙基和2,2,2-三氟乙基)、氯丙基、三氯丙基、氟丙基、三氟丙基。

术语“C1-C6烷氧基”是指通过氧与分子连接的C1-C6烷基。这包含烷基部分可以是直链或支链的部分，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。

术语“C1-C6卤代烷氧基”是指C1-C6烷基，其通过氧与分子连接并且其中烷基的至少一个氢原子被卤素替换。这包含烷基部分可以是直链或支链的部分，如氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基或三氟丙氧基。

在化合价允许时，表示单键或双键。例如，

如本文所使用的，术语“氰基”是指-CN基团。

如本文所使用的，术语“羟基”是指-OH基团。

如本文所使用的，术语“氨基”是指-NH₂基团。

如本文所使用的，术语“芳基”是指6-10个全碳单环或双环基团，其中系统中的至少一个环是芳香族的。芳基的非限制性实例包含苯基、萘基、四氢萘基。在其中只有一个环是芳香族的双环系统中，非芳香族环可以是如本文所定义的环烷基。

如本文所使用的，术语“杂芳基”是指5-10元单环或双环基团，其中系统中的至少一个环是芳香族的；其中系统中至少一个环中的一个或多个碳原子被独立地选自N、O和S的杂原子替换。杂芳基包含其中一个或多个基团被氧化的环(例如，碳、氮和硫)，如吡啶酮部分。杂芳基的非限制性实例包含吡啶、嘧啶、吡咯、咪唑和吲哚。在其中只有一个环是芳香族的双环系统中，非芳香族环可以是如本文所定义的环烷基或杂环基。

如本文所使用的，术语“环烷氧基”是指通过氧基(即，-O-)连接的饱和或部分不饱和的3-10个单环或双环烃基；其中双环系统包含稠环系统、螺环系统(任选地被称为“螺环烷基”基团)和桥环系统。环烷氧基的非限制性实例包含环丙氧基、环己氧基、螺[2.3]己氧基和双环[1.1.1]戊氧基。

如本文所使用的，术语“环烷基”是指饱和或部分不饱和的3-10个单环或双环烃基；其中双环系统包含稠环系统、螺环系统(任选地被称为“螺环烷基”基团)和桥环系统。环烷基的非限制性实例包含环丙基、环己基、螺[2.3]己基和双环[1.1.1]戊基。

术语“杂环基”是指饱和或部分不饱和的3-12元烃单环或双环系统，其不是芳香族的，在环内具有至少一个选自N、O和S的杂原子。双环杂环基包含稠环系统、螺环系统(任选地被称为“螺杂环基”基团)和桥环系统。杂环基环系统可以在一个或多个C、N或S环成员处包含氧基取代。杂环基可以表示为例如“5-10元杂环基”，其是含有5个、6个、7个、8个、9个或10个原子的环系统，其中至少一个原子是杂原子。例如，可以存在1个、2个或3个杂原子，任选地1个或2个。杂环基可以通过任何碳原子或通过如氮等杂原子与分子的其余部分键合。示例性杂环基包含但不限于哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、2-氮杂螺[3.3]庚烷基、吡咯烷-2-酮、环丁砜、异噻唑啉S,S-二氧化物和十氢萘基。

如本文所使用的，术语“成对”是指与分子中的相同原子连接的取代基原子或基团。

如本文所使用的，术语“邻位”是指与分子中的相邻原子连接的取代基原子或基团。取代基原子或基团之间的立体化学关系可以是顺式、反式、未定义或未解析的。

如本文所使用的，术语“氧基”是指连接至碳原子的“＝O”基团。

如本文所使用的，符号描绘了原子或部分与分子其余部分中的指定原子或基团的连接点。

应当理解，式(I)化合物中包括原子X、Y和Z的环不包含多于两个相邻的氮原子。

式(I)化合物包含其药学上可接受的盐。另外，式(I)化合物还包含此类化合物的其它盐，其不一定是药学上可接受的盐，并且可以用作用于制备和/或纯化式(I)化合物和/或用于分离式(I)化合物的对映异构体的中间体。式(I)化合物的药学上可接受的盐的非限制性实例包含三氟乙酸盐和盐酸盐。

将进一步理解，可以以溶剂化物的形式分离式(I)化合物或其盐，并且因此任何此类溶剂化物都包含在本公开的范围内。例如，式(I)化合物及其盐可以与药学上可接受的溶剂(如水、乙醇等)一起以未溶剂化形式和溶剂化形式存在。

在一些实施例中，式(I)化合物包含实例1-203的化合物及其立体异构体和药学上可接受的盐。在一些实施例中，式(I)化合物包含实例1-203的化合物及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，实例1-203的化合物呈游离碱形式。在一些实施例中，实例1-203的化合物呈药学上可接受的盐的形式。

术语“药学上可接受的”表示此化合物或其盐或组合物在化学和/或毒理学上与构成调配物的其它成分和/或用所述调配物治疗的受试者相容。

保护基团可以是保护潜在反应性官能团免受不期望的化学转化影响的临时取代基。所使用的特定保护基团的选择完全在本领域普通技术人员的技能范围内。许多考虑因素可以决定保护基团的选择，包含但不限于被保护的官能团、分子中存在的其它官能团、合成序列每个步骤的反应条件、分子中存在的其它保护基团、官能团对去除保护基团所需的条件的耐受性，以及本文提供的化合物热分解的反应条件。已经对保护基化学领域进行了回顾(Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.《有机合成中的保护基(Protective Groups in OrganicSynthesis)》,第2版,编者：Wiley:纽约,1991)。

氮保护基团可以是保护胺部分免受不期望的化学转化影响的任何临时取代基。当此类保护基团与胺键合时形成的部分的实例包含但不限于烯丙胺、苄胺(例如，苄胺、对甲氧基苄胺、2,4-二甲氧基苄胺和三苯甲胺)、乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、戊-4-烯酰胺、邻苯二甲酰亚胺、氨基甲酸酯(例如，氨基甲酸甲酯、氨基甲酸叔丁酯、氨基甲酸苄酯、氨基甲酸烯丙酯、氨基甲酸2,2,2-三氯乙基酯和氨基甲酸9-芴基甲酯)、亚胺和磺酰胺(例如，苯磺酰胺、对甲苯磺酰胺和对硝基苯磺酰胺)。

氧保护基团可以是保护羟基部分免受不期望的化学转化影响的任何临时取代基。当此类保护基团与羟基键合时形成的部分的实例包含但不限于酯(例如，乙酰基、叔丁基羰基和苯甲酰基)、苄基(例如，苄基、对甲氧基苄基和2,4-二甲氧基苄基和三苯甲基)、碳酸酯(例如，碳酸甲酯、碳酸烯丙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯和碳酸苄酯)缩酮、缩醛和醚。

本文提供的化合物还可以在构成此类化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。也就是说，原子(尤其是当关于式(I)化合物提及时)包括此原子的所有同位素和同位素混合物，这些同位素或同位素混合物是天然存在的或合成产生的，具有天然丰度或呈同位素富集的形式。例如，除非另有明确说明，否则当提及氢时，应理解为是指¹H、²H、³H或其混合物；当提及碳时，应理解为是指¹¹C、¹²C、¹³C、¹⁴C或其混合物；当提及氮时，应理解为是指¹³N、¹⁴N、¹⁵N或其混合物；当提及氧时，应理解为是指¹⁴O、¹⁵O、¹⁶O、¹⁷O、¹⁸O或其混合物；并且当提及氟时，应理解为是指¹⁸F、¹⁹F或其混合物。例如，在氘烷基和氘烷氧基中，一个或多个氢原子被氘(²H)特异性地替换。由于一些上述同位素是放射性的，因此本文提供的化合物还包括具有一个或多个原子的一个或多个同位素及其混合物的化合物，包含放射性化合物，其中一个或多个非放射性原子已被其富放射性同位素之一替换。放射性标记的化合物可用作治疗剂，例如癌症治疗剂、研究试剂(例如，测定试剂)和诊断剂(例如，体内显像剂)。本文提供的化合物的所有同位素变化，不论是放射性的还是非放射性的，均旨在涵盖在本公开的范围内。

出于说明性目的，本文提供了用于制备化合物的一般方法以及关键中间体。有关各个反应步骤的详细说明，请参见下文的实例部分。本领域技术人员将理解，可以使用其它合成途径来合成本发明的化合物。尽管在方案中描述了特定的起始材料和试剂，并在下文进行了讨论，但也可以轻松取代其它起始材料和试剂，以提供多种衍生物和/或反应条件。另外，根据本公开，可以使用本领域技术人员熟知的常规化学方法进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。

所选化合物充当MALT1抑制剂的能力可以通过本文所述的生物学测定法来证明。IC₅₀值在表A和B中示出。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗可以用MALT1抑制剂治疗的疾病和病症，如MALT1相关癌症，包含血液癌症和实体瘤、MALT1相关自身免疫性病症以及MALT1相关炎性病症。

如本文所使用的，术语“治疗(treat或treatment)”是指治疗性或减缓性措施。有益或期望的临床结果包含但不限于完全或部分地缓解与疾病或病症或病状相关的症状、减轻疾病程度、稳定疾病状态(即，不恶化)、延迟或减慢疾病的进展、改善或减轻疾病状态(例如，一种或多种疾病症状)以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以意味着与未接受治疗的情况下的预期生存期相比，生存期延长。

如本文所使用的，术语“受试者”是指任何动物，包含哺乳动物，如人。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，受试者已经经历和/或表现出待治疗和/或预防的疾病或病症的至少一种症状。

如本文所使用的，术语“儿科受试者”是指在诊断或治疗时未满21岁的受试者。术语“儿科”可以进一步分为各种亚群，包含：新生儿(从出生到生命的第一个月)；婴儿(1个月到两岁)；儿童(两岁到12岁)；和青少年(12岁到21岁(至多但不包含二十二岁生日))。Berhman RE、Kliegman R、Arvin AM、Nelson WE.《尼尔森儿科教科书(Nelson Textbook ofPediatrics)》,第15版,费城:W.B.桑德斯出版公司(W.B.Saunders Company),1996；Rudolph AM等人《鲁道夫儿科学(Rudolph's Pediatrics)》,第21版,纽约:麦格劳-希尔出版社(McGraw-Hill),2002；以及Avery MD、First LR.《儿科医学(Pediatric Medicine)》,第2版,巴尔的摩:威廉斯和威尔金斯出版公司(Williams&Wilkins)；1994。在一些实施例中，儿科受试者的年龄为从出生到生命的前28天、从29天到两岁以下、从两岁到12岁以下或从12岁到21岁(至多但不包含二十二岁生日)。在一些实施例中，儿科受试者的年龄为从出生到生命的前28天、从29天到1岁以下、从一个月到四个月以下、从三个月到七个月以下、从六个月到1岁以下、从1岁到2岁以下、从2岁到3岁以下、从2岁到七岁以下、从3岁到5岁以下、从5岁到10岁以下、从6岁到13岁以下、从10岁到15岁以下或从15岁到22岁以下。

在某些实施例中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可用于预防本文所定义的疾病和病症(例如，自身免疫性病症、炎性病症和癌症)。如本文所使用的，术语“预防”是指完全或部分地预防本文所述的疾病或病状的发作、复发或扩散或其症状。

术语“监管机构”是指国家的机构，用于批准此国家药剂的医疗用途。例如，管理机构的非限制性实例是美国食品和药物管理局(FDA)。

通过NF-κB通路的信号传导与许多癌症有关。参见例如，Staudt,《冷泉港生物学展望(Cold Spring Harbor Perspectives in Biology)》2.6(2010):a000109，Xia等人《癌症免疫学研究(Cancer Immunol.Res.)》2.9(2014):823-830，Xia等人《肿瘤靶标与疗法(OncoTargets and Therapy)》11(2018):2063。NF-κB是一个转录因子家族，包含p50、p52、p65(RelA)、RelB和c-Rel，其可以作为各种同源和异源二聚体与kB增强子元件结合以诱导许多基因的转录。在某些细胞表面受体(例如，CD28、BCR、HER1(也被称为EGFR(表皮生长因子受体)和ERBB1)或HER2(也被称为HER2/neu或ERBB2))活化后，通过CARD或CARMA蛋白，可能是通过蛋白激酶C(例如，蛋白激酶Cβ或蛋白激酶Cθ)的磷酸化以及BCL10-MALT1复合物的募集形成CBM复合物。参见例如，Xia等人《肿瘤靶标与疗法》11(2018):2063,Shi和Sun.《分子免疫学(Mol.Immunol.)》68.2(2015):546-557，Xia等人《癌症免疫学研究)》2.9(2014):823-830，以及Pan,《分子癌症研究(Mol.Cancer Res.)》14.1(2016):93-102。

如上文所述，CBM复合物可以作为支架蛋白在NF-κB通路的活化中发挥作用。形成后，CBM复合物可以活化IKK复合物(例如，IKKγ(也被称为NEMO)、IKKα和IKKβ)，可能是通过MALT1的泛素化(例如，K63连接的泛素化)，其引起IKKγ的募集、泛素化(例如，K63连接的泛素化)和降解，从而释放IKKα和IKKβ以使IκB磷酸化，从而引起IκB的泛素化(例如，K48连接的泛素化)和降解，从而将NF-κB转录因子(通常是NF-κB1亚型：p50-RelA和p50-cRel)释放到细胞核。此级联反应可能由泛素连接酶TRAF6(肿瘤坏死因子受体(TNFR)相关因子6)介导。CBM复合物还可能通过另外的蛋白质复合物来影响NF-κB信号传导，如TAB1/2-TAK和线性泛素链组装复合物(LUBAC)。参见例如，《冷泉港生物学展望》2.3(2010):a000158，Xia等人《肿瘤靶标与疗法》11(2018):2063，Juilland,《免疫学前沿(Front.Immunol.)》9(2018):1927。MALT1还可以活化JNK通路(也被称为JNK/AP-1通路)，尽管对此领域的研究工作较少。参见例如，Juilland,《免疫学前沿》9(2018):1927，以及Wang等人,《肿瘤形成(Oncogenesis)》6.7(2017):e365-e365。

此外，MALT1具有半胱氨酸蛋白酶活性。野生型MALT1底物的非限制性实例包含BCL10、A20、CYLD、RelB、Regnase 1、roquin-1和HOIL1。此外，API2-MALT1(也被称为cIAP2；凋亡抑制剂2的氨基末端)融合蛋白也被证明可以切割NIK和LIMA1α。MALT1对BCL10的切割被认为会导致BCL10非依赖性NF-κB活化。通过切割A20(TNFα诱导蛋白3)，MALT1可以减少NF-κB通路的负调节，因为A20是一种去泛素化酶，其已被建议减少MALT1的泛素化，从而减少IKK复合物的募集和活化。CYLD(CYLD赖氨酸63去泛素酶)是一种去泛素化酶，并且通过切割此酶，据信MALT1通过NF-κB通路和/或JNK通路增加信号传导。RelB的切割通常会缓解NF-κB通路的负调节，因为RelB与RelA和c-Rel形成转录无活性的复合物。通过切割HOIL1(也被称为RBCK1)，据信NF-κB的负调节得到缓解，因为HOIL1被认为可以减少线性泛素化。MALT1还可以自动加工，通过一种尚未完全了解的机制促进通过NF-κB通路的信号传导。通过切割NIK(NF-κB诱导激酶)，API2-MALT1蛋白酶生成NIK的c端片段，所述片段对蛋白酶体降解具有抗性，从而增加非经典NF-κB信号传导。通过切割LIMA1α(LIM结构域和肌动蛋白结合蛋白1)，此蛋白的肿瘤抑制性质减轻，并且据信剩余的片段具有致癌性质并增强细胞增殖、集落形成和细胞粘附。Regnase 1(调节性RNase 1，也被称为MCPIP-1或Zc3h12a)和roquin-1(也被称为RC3H1)的切割被认为会导致mRNA的稳定，包含细胞因子、趋化因子和共刺激蛋白(如ICOS、OX40和TNF)的mRNA的稳定。这种活性可能独立于NF-κB和JNK通路中的MALT1活性。参见例如Afonina等人《欧洲生化学会联合会杂志(FEBS J.)》282.17(2015):3286-3297，Klein等人《自然通信》6.1(2015):1-17，Baens等人《公共科学图书馆-综合》9.8(2014):e103774，以及Juilland,《免疫学前沿》9(2018):1927。MALT1还参与依鲁替尼反应细胞系和活检样品中的致癌BCR信号传导，由MYD88、TLR9和BCR形成的多蛋白超复合物(以下称为My-T-BCR超复合物)协调。My-T-BCR超复合物与mTOR共定位在内溶酶体上，在此处，其驱动促生存的NF-κB和mTOR信号传导。参见Phelan等人,《自然(Nature)》2018年8月；560(7718):387-391。

因此，MALT1的抑制可以为与NF-κB通路或JNK通路中的异常信号传导相关的许多类型的病症提供有益效果。例如，抑制MALT1可以减少通过NF-κB或JNK通路的通量，所述通量由以下一项或多项引起：

(1)灭活的肿瘤抑制基因。可以被灭活的肿瘤抑制基因的非限制性实例包含BRCA1和p53(例如，p53 H61L或I123T)。参见例如，Sau等人《细胞干细胞(Cell Stem Cell)》19.1(2016):52-65，Xia等人《癌症免疫学研究研究》2.9(2014):823-830，Johansson等人《肿瘤靶标》7.38(2016):62627。

(2)失调的细胞表面受体。细胞表面受体的非限制性实例包含HER1和HER2。参见例如，Xia等人《癌症免疫学研究》2.9(2014):823-830和Pan,《分子癌症研究》14.1(2016):93-102。

(3)CBM复合物的一种或多种组分的失调。CBM复合物的组分的非限制性实例包含MALT1、CARD11、CARD14、CARD10、CARD9和BCL10。

(4)一种或多种MALT1蛋白酶底物的失调(例如，野生型MALT1蛋白酶或失调的MALT1蛋白酶)。MALT1蛋白酶底物的非限制性实例包含BCL10、A20、CYLD、RelB、Regnase 1、roquin-1、HOIL1、NIK和LIMA1α。

(5)CBM复合物下游的NF-κB通路的一种或多种组分的失调。CBM复合物下游的NF-κB通路的组分的非限制性实例包含TRAF6、IKKα、IKKβ、IKKγ(也被称为NEMO)、IkBα、p50、p52、p65(RelA)、RelB和c-Rel。

(6)CBM复合物下游的JNK通路的一种或多种组分的失调。CBM复合物下游的JNK通路的组分的非限制性实例包含JNK1(丝裂原活化的蛋白激酶8)、JNK2(丝裂原活化的蛋白激酶9)、JNK3(丝裂原活化的蛋白激酶10)或AP-1转录因子(例如，c-Fos、c-Jun、ATF或JDP家族中任一种的异二聚体)。

(7)MALT1基因染色体易位引起的一种或多种融合蛋白的失调。非限制性实例包含cIAP-MALT1融合蛋白。

(8)My-T-BCR超复合物的一种或多种组分的失调。My-T-BCR超复合物的组分的非限制性实例包含MYD88、TLR9和mTOR。

如本文相关的术语“CBM复合物通路”包含信号传导通路中的基因、转录物和蛋白质，所述信号传导通路包含CBM。例如，NF-κB通路的许多方面都是CBM复合物通路的一部分。CBM复合物通路可以包含，例如，细胞表面受体(例如，CD28、BCR、HER1和HER2)、细胞表面受体与CBM复合物(例如，蛋白激酶Cβ或蛋白激酶Cθ)之间的信号转导器、CBM复合物的组分(例如，MALT1、CARD11、CARD14、CARD10、CARD9或BCL10)、MALT1蛋白酶的底物(例如，BCL10、A20、CYLD、RelB、Regnase 1、roquin-1、HOIL1、NIK和LIMA1α)、CBM复合物下游的NF-κB通路的组分(例如，TAK1、TRAF6、TAB1、TAB2、TAB3、MKK7、IKKα、IKKβ、IKKγ、IkBα、p50、p65(RelA)或c-Rel)、CBM复合物下游的JNK通路的组分(例如，JNK1、JNK2、JNK3或AP-1转录因子)或My-T-BCR超复合物的组分(例如，MYD88、TLR9或mTOR)。

如本文所使用的，术语“CBM复合物通路相关疾病或病症”是指与CBM复合物通路中的基因、CBM复合物通路中的蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关联或具有失调(例如，如本文所述，CBM复合物通路中的基因、CBM复合物通路中的蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的疾病或病症。CBM复合物通路相关疾病或病症的非限制性实例包含，例如，CBM相关原发性免疫缺陷疾病、自身免疫性病症、多发性硬化症、结肠炎、牛皮癣和癌症。参见例如，McGuire等人《神经炎症杂志(J.Neuroinflamm.)》11.1(2014):1-12，Lu等人,《免疫学前沿》9(2018):2078，Jaworski等人,《欧洲分子生物学学会杂志》33.23(2014):2765-2781。CBM复合物通路相关疾病或病症的非限制性实例包含MALT1相关疾病或病症，如MALT1相关癌症、MALT1相关自身免疫性病症和MALT1相关炎性病症。

如本文所使用的，术语“CBM复合物通路相关自身免疫性病症”是指与CBM复合物通路基因、CBM复合物通路蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关联或具有失调(例如，本文所述的CBM复合物通路基因、CBM复合物通路蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。本文描述了CBM复合物通路相关自身免疫性病症的非限制性实例。

如本文所使用的，术语“CBM复合物通路相关炎性病症”是指与CBM复合物通路基因、CBM复合物通路蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关联或具有失调(例如，本文所述的CBM复合物通路基因、CBM复合物通路蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。本文描述了CBM复合物通路相关炎性病症的非限制性实例。

在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是CBM复合物通路相关癌症，如CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症(例如，CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症或HER2相关癌症)，与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症(例如，蛋白激酶Cβ(PKCβ)相关癌症或蛋白激酶Cθ(PCKθ)相关癌症)、CBM复合物相关癌症的组分(例如，MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、CARD10相关癌症、CARD9相关癌症或BCL10相关癌症)、MALT1蛋白酶底物相关癌症(例如，BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、Regnase 1相关癌症、roquin-1相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症或LIMA1α相关癌症)、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症(例如，TAK1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65(RelA)相关癌症或c-Rel相关癌症)、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症(例如，JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症或AP-1转录因子相关癌症)、MYD88相关癌症或其组合。

如本文所使用的，术语“CBM复合物通路相关癌症”是指与CBM复合物通路中的基因、CBM复合物通路中的蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关联或具有失调(例如，如本文所述，CBM复合物通路中的基因、CBM复合物通路中的蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)(例如，在诊断后或对先前疗法产生抗性后)的癌症。本文描述了CBM复合物通路相关癌症的非限制性实例。在一些实施例中，CBM复合物通路相关癌症可以是CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症(例如，CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症或HER2相关癌症)，与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症(例如，蛋白激酶Cβ(PKCβ)相关癌症或蛋白激酶Cθ(PCKθ)相关癌症)、CBM复合物相关癌症的组分(例如，MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、CARD10相关癌症、CARD9相关癌症或BCL10相关癌症)、MALT1蛋白酶底物相关癌症(例如，BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、Regnase 1相关癌症、roquin-1相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症或LIMA1α相关癌症)、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症(例如，TAK1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65(RelA)相关癌症或c-Rel相关癌症)、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症(例如，JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症或AP-1转录因子相关癌症)或其组合。

在一些实施例中，失调可以是导致基因、蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平异常活化的失调。活化可以通过任何适当的机制进行，包含但不限于基因扩增、活化突变、活化易位、转录活化、表观遗传改变和/或癌基因的蛋白质产物的过表达。在一些实施例中，失调可以是导致基因、蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平异常失活的失调。失活可以通过任何适当的机制进行，包含但不限于基因缺失、失活突变、失活易位、转录沉默、表观遗传改变和基因的mRNA和/或蛋白质产物的降解。通常，如本文所使用的，失调(无论是活化还是失活)是导致通过NF-κB或JNK信号传导通路的信号传导增加的失调。

术语“野生型”描述在不患有与核酸或蛋白质(例如，MALT1基因、MALT1 mRNA或MALT1蛋白)相关的疾病或病症(并且任选地也不具有患与核酸或蛋白质相关的疾病或病症的增加风险和/或未被怀疑患有与基因或蛋白质相关的疾病或病症)的受试者中发现，或在来自不患有与基因或蛋白质相关的疾病或病症(例如，MALT1相关癌症、自身免疫性病症或炎性病症)(并且任选地也不具有患与核酸或蛋白质相关的疾病或病症的增加风险和/或未被怀疑患有与核酸或蛋白质相关的疾病或病症)的受试者的细胞或组织中发现的核酸(例如，MALT1基因或MALT1 mRNA)或蛋白质(例如，MALT1蛋白)。

在一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调的癌症(CBM复合物通路相关癌症)(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒所确定的)。在一些实施例中，受试者患有对一种或多种先前疗法具有抗性的癌症。在一些实施例中，受试者患有针对CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒所确定的)。所述受试者可以是具有针对CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤的受试者(例如，使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒鉴定为阳性)。所述受试者可以是其肿瘤具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或二者的表达或活性或水平的失调的受试者(例如，在使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒鉴定肿瘤的情况下)。在一些实施例中，受试者患有对一种或多种先前疗法具有抗性的肿瘤。在一些实施例中，受试者疑似患有CBM复合物通路相关癌症。在一些实施例中，受试者患有疑似对一种或多种先前疗法具有抗性的肿瘤。在一些实施例中，受试者具有临床记录，所述临床记录表明所述受试者患有肿瘤，所述肿瘤具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调(并且任选地，所述临床记录表明应该用本文提供的任何组合物治疗所述受试者)。在一些实施例中，受试者是儿科受试者。在一些实施例中，受试者具有临床记录，所述临床记录表明所述受试者患有对一种或多种先前疗法具有抗性的肿瘤。在一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症，所述癌症基于组织学检查被确定为与CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关联(CBM复合物通路相关癌症)。

在一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调的自身免疫性病症(CBM复合物通路相关自身免疫性病症)(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒所确定的)。在一些实施例中，受试者患有针对CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒所确定的)。在一些实施例中，受试者疑似患有CBM复合物通路相关自身免疫性病症。在一些实施例中，受试者具有临床记录，所述临床记录表明所述受试者患有肿瘤，所述肿瘤具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调(并且任选地，所述临床记录表明应该用本文提供的任何组合物治疗所述受试者)。在一些实施例中，受试者是儿科受试者。在一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有自身免疫性病症，所述自身免疫性病症基于组织学检查被确定为与CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关联(CBM复合物通路相关自身免疫性病症)。

在一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调的炎性病症(CBM复合物通路相关炎性病症)(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒所确定的)。在一些实施例中，受试者患有针对CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤(例如，如使用监管机构批准(例如，FDA批准)的测定或试剂盒所确定的)。在一些实施例中，受试者疑似患有CBM复合物通路相关炎性病症。在一些实施例中，受试者具有临床记录，所述临床记录表明所述受试者患有肿瘤，所述肿瘤具有CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调(并且任选地，所述临床记录表明应该用本文提供的任何组合物治疗所述受试者)。在一些实施例中，受试者是儿科受试者。在一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有炎性病症，所述炎性病症基于组织学检查被确定为与CBM复合物通路相关基因(例如，MALT1基因)、CBM复合物通路相关蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关联(CBM复合物通路相关炎性病症)。

如本文所使用的，术语“CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症”是指与基因、蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关联或具有失调的癌症，所述失调与CBM复合物通路细胞表面受体相关。在一些实施例中，CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症选自由以下组成的组：CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症、HER2相关癌症及其组合。

如本文所使用的，术语“*相关癌症”是指与*基因、*蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关联或具有失调(例如，本文所述的*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症，其中“*”指本文所述的特定CBM复合物通路基因或蛋白质。在一些实施例中，*相关癌症选自由以下组成的组：CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症、HER2相关癌症、PKCβ相关癌症、PKCθ相关癌症、MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症、Regnase1相关癌症、LIMA1α相关癌症、roquin-1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAK1相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65相关癌症、c-Rel相关癌症、JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症、MYD88转录因子相关癌症和AP-1转录因子相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是CD28相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是BCR相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是HER1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是HER2相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是PKCβ相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是PKCθ相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是MALT1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是CARD11相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是CARD14相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是A20相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是CYLD相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是RelB相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是HOIL1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是NIK相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是Regnase 1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是LIMA1α相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是roquin-1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是TRAF6相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是TAK1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是TAB1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是TAB2相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是TAB3相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是MKK7相关癌症和IKKα相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是IKKβ相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是IKKγ相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是IkBα相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是p50相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是p65相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是c-Rel相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是JNK1相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是JNK2相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是JNK3相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是AP-1转录因子相关癌症。在一些实施例中，*相关癌症是MYD88转录因子相关癌症。

短语“*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的失调”(其中*是本文所述的特定CBM复合物通路基因或蛋白质)是指(例如，与对照非癌细胞相比)哺乳动物细胞中野生型*蛋白质的基因突变(例如，染色体易位，其引起包含*结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；*基因中的突变，其引起与野生型*蛋白质相比包含至少一个氨基酸缺失的*蛋白质的表达；*基因中的突变，其引起与野生型*蛋白质相比具有一个或多个点突变的*蛋白质的表达；*基因中的突变，其引起与野生型*蛋白质相比具有至少一个插入的氨基酸的*蛋白质的表达；基因重复，其引起细胞中*蛋白质水平升高；或调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其引起细胞中*蛋白质水平升高)；*mRNA的替代剪接形式，其引起与野生型*蛋白质相比在*蛋白质中具有至少一个氨基酸缺失的*蛋白质；或表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而引起的。作为另外的实例，增加的*基因拷贝数可以引起*蛋白质的过表达。例如，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位引起融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有*的第一部分和伴侣蛋白(即，并非*)的第二部分。在一些实例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个*基因与另一个非*基因的基因易位的结果。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平选自由以下组成的组：CD28、BCR、HER1、HER2、PKCβ、PKCθ、MALT1、CARD11、CARD14、A20、CYLD、RelB、HOIL1、NIK、Regnase 1、LIMA1α、roquin-1、TRAF6、TAK1、TAB1、TAB2、TAB3、MKK7、IKKα、IKKβ、IKKγ、IkBα、p50、p65、c-Rel、JNK1、JNK2、JNK3、MYD88和AP-1转录因子。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是CD28。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是BCR。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是HER1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是HER2。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是PKCβ。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是PKCθ。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是MALT1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是CARD11。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是CARD14。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是A20。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是CYLD。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是RelB。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是HOIL1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是NIK。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是Regnase 1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是LIMA1α。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是roquin-1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是TRAF6。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是TAK1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是TAB1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是TAB2。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是TAB3。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是MKK7。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是IKKα。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是IKKβ。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是IKKγ。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是IkBα。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是p50。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是p65。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是c-Rel。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是JNK1。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是JNK2。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是JNK3。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是MYD88转录因子。在一些实施例中，*基因或*蛋白质是AP-1转录因子。

在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码*蛋白质的*基因中的突变，所述*蛋白质是组成型活性的或与由不包含突变的*基因编码的蛋白质相比具有增加的活性。在一些实施例中，增加的*基因拷贝数可以引起*蛋白质的过表达。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是CD28。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是BCR。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是HER1。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是HER2。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是PKCβ。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是PKCθ。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是CARD14。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是CARD9。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是CARD10。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是CARD11。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是MALT1。

作为另一个实例，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码*蛋白质的*基因中的突变，所述*蛋白质是组成型失活的或与由不包含突变的*基因编码的蛋白质相比具有降低的活性。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是A20。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是CYLD。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平RelB。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是HOIL1。在一些实施例中，*基因、*蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平是NIK。

与本文所述的特定基因或蛋白质“相关”的疾病或病症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的疾病或病症。本文描述了此类疾病或病症的非限制性实例。同样，与本文所述的特定基因或蛋白质“相关”的癌症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了此类癌症的非限制性实例。

本文所描述的蛋白质的示例性序列如下所示。

人CD28的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:1(UniParc登录号UPI0000043F4D)

MLRLLLALNLFPSIQVTGNKILVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS

CD28基因或CD28蛋白失调的非限制性实例可以参见例如Rohr等人,《白血病(Leukemia)》30.5(2016):1062-1070，Yoo等人,《血液学(Haematologica)》101.6(2016):757-763以及Lee等人,《血液学》100.12(2015):e505。

人BCR的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:2(UniParc登录号UPI000016A088)

MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSVGDIEQELERCKASIRRLEQEVQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSVGDASRPPYRGRSSESSCGVDGDYEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGMMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDGEGAFHGDADGSFGTPPGYGCAADRAEEQRRHQDGLPYIDDSPSSSPHLSSKGRGSRDALVSGALESTKASELDLEKGLEMRKWVLSGILASEETYLSHLEALLLPMKPLKAAATTSQPVLTSQQIETIFFKVPELYEIHKEFYDGLFPRVQQWSHQQRVGDLFQKLASQLGVYRAFVDNYGVAMEMAEKCCQANAQFAEISENLRARSNKDAKDPTTKNSLETLLYKPVDRVTRSTLVLHDLLKHTPASHPDHPLLQDALRISQNFLSSINEEITPRRQSMTVKKGEHRQLLKDSFMVELVEGARKLRHVFLFTDLLLCTKLKKQSGGKTQQYDCKWYIPLTDLSFQMVDELEAVPNIPLVPDEELDALKIKISQIKNDIQREKRANKGSKATERLKKKLSEQESLLLLMSPSMAFRVHSRNGKSYTFLISSDYERAEWRENIREQQKKCFRSFSLTSVELQMLTNSCVKLQTVHSIPLTINKEDDESPGLYGFLNVIVHSATGFKQSSNLYCTLEVDSFGYFVNKAKTRVYRDTAEPNWNEEFEIELEGSQTLRILCYEKCYNKTKIPKEDGESTDRLMGKGQVQLDPQALQDRDWQRTVIAMNGIEVKLSVKFNSREFSLKRMPSRKQTGVFGVKIAVVTKRERSKVPYIVRQCVEEIERRGMEEVGIYRVSGVATDIQALKAAFDVNNKDVSVMMSEMDVNAIAGTLKLYFRELPEPLFTDEFYPNFAEGIALSDPVAKESCMLNLLLSLPEANLLTFLFLLDHLKRVAEKEAVNKMSLHNLATVFGPTLLRPSEKESKLPANPSQPITMTDSWSLEVMSQVQVLLYFLQLEAIPAPDSKRQSILFSTEV

BCR基因或BCR蛋白(例如，BCR-ABL融合体)失调的非限制性实例可以参见例如Yang和Fu,《肿瘤学/血液学关键评论(Crit.Rev.Oncol./Hematol.)》93.3(2015):277-292，Weisberg等人《自然综述：癌症(Nat.Rev.Cancer)》7.5(2007):345-356，以及Jabbour等人《癌症(Cancers)》117.9(2011):1800-1811。

人HER1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:3(UniParc登录号UPI000003E750)

MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDFQNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

HER1基因或HER1蛋白失调的非限制性实例可以参见例如Zhang等人,《肿瘤靶标》7.48(2016):78985，Ellison等人,《临床病理学杂志(Journal of Clinical Pathology)》66.2(2013):79-89，Midha等人,《美国癌症研究期刊(American Journal of CancerResearch)》5.9(2015):2892，以及Yamamoto等人,《肺癌(Lung Cancer)》63.3(2009):315-321。

人HER2的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:4(UniParc登录号UPI000003F55F)

MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKVKVLGSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENTSPKANKEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLTSTVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLLNWCMQIAKGMSYLEDVRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPIKWMALESILRRRFTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDSECRPRFRELVSEFSRMARDPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDAEEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEGAGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYVNQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLERPKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTPQGGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV

HER2基因或HER2蛋白失调的非限制性实例可以参见例如Petrelli,Fausto等人,《乳腺癌研究和治疗(Breast Cancer Research and Treatment)》166.2(2017):339-349，Yan等人,《癌症与转移评论(Cancer and Metastasis Reviews)》34.1(2015):157-164，Koshkin等人,《膀胱癌(Bladder Cancer)》5.1(2019):1-12，以及Connell等人,《欧洲肿瘤内科学会期刊(ESMO Open)》2.5(2017)。

如本文所使用的，术语“与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症”是指与基因、蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调的癌症，所述失调与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关。在一些实施例中，与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症选自由PKCβ相关癌症、PCKθ相关癌症及其组合组成的组。与本段中描述的特定基因或蛋白质“相关”的癌症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了此类癌症的非限制性实例。

人PKCβ的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:5(UniParc登录号UPI000012DF67)

MADPAAGPPPSEGEESTVRFARKGALRQKNVHEVKNHKFTARFFKQPTFCSHCTDFIWGFGKQGFQCQVCCFVVHKRCHEFVTFSCPGADKGPASDDPRSKHKFKIHTYSSPTFCDHCGSLLYGLIHQGMKCDTCMMNVHKRCVMNVPSLCGTDHTERRGRIYIQAHIDRDVLIVLVRDAKNLVPMDPNGLSDPYVKLKLIPDPKSESKQKTKTIKCSLNPEWNETFRFQLKESDKDRRLSVEIWDWDLTSRNDFMGSLSFGISELQKASVDGWFKLLSQEEGEYFNVPVPPEGSEANEELRQKFERAKISQGTKVPEEKTTNTVSKFDNNGNRDRMKLTDFNFLMVLGKGSFGKVMLSERKGTDELYAVKILKKDVVIQDDDVECTMVEKRVLALPGKPPFLTQLHSCFQTMDRLYFVMEYVNGGDLMYHIQQVGRFKEPHAVFYAAEIAIGLFFLQSKGIIYRDLKLDNVMLDSEGHIKIADFGMCKENIWDGVTTKTFCGTPDYIAPEIIAYQPYGKSVDWWAFGVLLYEMLAGQAPFEGEDEDELFQSIMEHNVAYPKSMSKEAVAICKGLMTKHPGKRLGCGPEGERDIKEHAFFRYIDWEKLERKEIQPPYKPKARDKRDTSNFDKEFTRQPVELTPTDKLFIMNLDQNEFAGFSYTNPEFVINV

人PKCθ的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:6(UniParc登录号UPI000012DF74)

MSPFLRIGLSNFDCGSCQSCQGEAVNPYCAVLVKEYVESENGQMYIQKKPTMYPPWDSTFDAHINKGRVMQIIVKGKNVDLISETTVELYSLAERCRKNNGKTEIWLELKPQGRMLMNARYFLEMSDTKDMNEFETEGFFALHQRRGAIKQAKVHHVKCHEFTATFFPQPTFCSVCHEFVWGLNKQGYQCRQCNAAIHKKCIDKVIAKCTGSAINSRETMFHKERFKIDMPHRFKVYNYKSPTFCEHCGTLLWGLARQGLKCDACGMNVHHRCQTKVANLCGINQKLMAEALAMIESTQQARCLRDTEQIFREGPVEIGLPCSIKNEARPPCLPTPGKREPQGISWESPLDEVDKMCHLPEPELNKERPSLQIKLKIEDFILHKMLGKGSFGKVFLAEFKKTNQFFAIKALKKDVVLMDDDVECTMVEKRVLSLAWEHPFLTHMFCTFQTKENLFFVMEYLNGGDLMYHIQSCHKFDLSRATFYAAEIILGLQFLHSKGIVYRDLKLDNILLDKDGHIKIADFGMCKENMLGDAKTNTFCGTPDYIAPEILLGQKYNHSVDWWSFGVLLYEMLIGQSPFHGQDEEELFHSIRMDNPFYPRWLEKEAKDLLVKLFVREPEKRLGVRGDIRQHPLFREINWEELERKEIDPPFRPKVKSPFDCSNFDKEFLNEKPRLSFADRALINSMDQNMFRNFSFMNPGMERLIS

如本文所使用的，术语“CBM复合物相关癌症的组分”是指与基因、蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调的癌症，所述失调与CBM复合物的组分相关。在一些实施例中，CBM复合物相关癌症的组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、CARD10相关癌症、CARD9相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。在一些实施例中，CBM复合物相关癌症选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。与本段中描述的特定基因或蛋白质“相关”的癌症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了此类癌症的非限制性实例。

如本文所使用的，术语“MALT1相关自身免疫性病症”是指与MALT1基因、MALT1蛋白(在本文中也被称为MALT1蛋白酶蛋白或MALT1蛋白酶)或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的MALT1基因、MALT1蛋白酶、MALT1蛋白酶结构域或三者中任一个的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。本文描述了MALT1相关自身免疫性病症的非限制性实例。

如本文所使用的，术语“MALT1相关炎性病症”是指与MALT1基因、MALT1蛋白(在本文中也被称为MALT1蛋白酶蛋白或MALT1蛋白酶)或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的MALT1基因、MALT1蛋白酶、MALT1蛋白酶结构域或三者中任一个的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。本文描述了MALT1相关炎性病症的非限制性实例。

如本文所使用的，术语“MALT1相关癌症”是指与MALT1基因、MALT1蛋白(在本文中也被称为MALT1蛋白酶蛋白或MALT1蛋白酶)或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的MALT1基因、MALT1蛋白、MALT1蛋白酶结构域或三者中任一个的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述MALT1相关癌症的非限制性实例。

短语“MALT1基因、MALT1蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调”是指(例如，与对照非癌细胞相比)哺乳动物细胞中野生型MALT1蛋白的基因突变(例如，染色体易位，其引起包含MALT1蛋白酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；MALT1基因中的突变，其引起与野生型MALT1蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的MALT1蛋白的表达；MALT1基因中的突变，其引起与野生型MALT1蛋白相比具有一个或多个点突变的MALT1蛋白的表达；MALT1基因中的突变，其引起与野生型MALT1蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的MALT1蛋白的表达；基因重复，其引起细胞中MALT1蛋白水平升高；或调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其引起细胞中MALT1蛋白水平升高)；MALT1 mRNA的替代剪接形式，其引起与野生型MALT1蛋白相比在MALT1蛋白中具有至少一个氨基酸缺失的MALT1蛋白；或表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而引起的。作为另一个实例，MALT1基因、MALT1蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码MALT1蛋白的MALT1基因中的突变，所述MALT1蛋白是组成型活性的或与由不包含突变的MALT1基因编码的蛋白质相比具有增加的活性。作为另外的实例，增加的MALT1基因拷贝数可以引起MALT1蛋白酶的过表达。例如，MALT1基因、MALT1蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位引起融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有MALT1的第一部分(此部分包含功能性蛋白酶结构域)和伴侣蛋白(即，并非MALT1)的第二部分。在一些实例中，MALT1基因、MALT1蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个MALT1基因与另一个非MALT1基因的基因易位的结果。

人MALT1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:7(UniParc登录号UPI000004D05E)

MSLLGDPLQALPPSAAPTGPLLAPPAGATLNRLREPLLRRLSELLDQAPEGRGWRRLAELAGSRGRLRLSCLDLEQCSLKVLEPEGSPSLCLLKLMGEKGCTVTELSDFLQAMEHTEVLQLLSPPGIKITVNPESKAVLAGQFVKLCCRATGHPFVQYQWFKMNKEIPNGNTSELIFNAVHVKDAGFYVCRVNNNFTFEFSQWSQLDVCDIPESFQRSVDGVSESKLQICVEPTSQKLMPGSTLVLQCVAVGSPIPHYQWFKNELPLTHETKKLYMVPYVDLEHQGTYWCHVYNDRDSQDSKKVEIIIGRTDEAVECTEDELNNLGHPDNKEQTTDQPLAKDKVALLIGNMNYREHPKLKAPLVDVYELTNLLRQLDFKVVSLLDLTEYEMRNAVDEFLLLLDKGVYGLLYYAGHGYENFGNSFMVPVDAPNPYRSENCLCVQNILKLMQEKETGLNVFLLDMCRKRNDYDDTIPILDALKVTANIVFGYATCQGAEAFEIQHSGLANGIFMKFLKDRLLEDKKITVLLDEVAEDMGKCHLTKGKQALEIRSSLSEKRALTDPIQGTEYSAESLVRNLQWAKAHELPESMCLKFDCGVQIQLGFAAEFSNVMIIYTSIVYKPPEIIMCDAYVTDFPLDLDIDPKDANKGTPEETGSYLVSKDLPKHCLYTRLSSLQKLKEHLVFTVCLSYQYSGLEDTVEDKQEVNVGKPLIAKLDMHRGLGRKTCFQTCLMSNGPYQSSAATSGGAGHYHSLQDPFHGVYHSHPGNPSNVTPADSCHCSRTPDAFISSFAHHASCHFSRSNVPVETTDEIPFSFSDRLRISEK

MALT1基因或MALT1蛋白失调的非限制性实例示出在下表B1中。

表B1.

¹美国专利US 10,711,036

²美国专利申请公开US20190160045A1

³美国专利申请公开US20130096021A1

⁴美国专利申请公开US20150320754A1

如本文所使用的，术语“CARD11相关自身免疫性病症”是指与CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。

如本文所使用的，术语“CARD11相关炎性病症”是指与CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。

如本文所使用的，术语“CARD11相关癌症”是指与CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了CARD11相关癌症的非限制性实例。

短语“CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调”是指(例如，与对照非癌细胞相比)哺乳动物细胞中野生型CARD11蛋白的基因突变(例如，染色体易位，其引起包含CARD11结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；CARD11基因中的突变，其引起与野生型CARD11蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的CARD11蛋白的表达；CARD11基因中的突变，其引起与野生型CARD11蛋白相比具有一个或多个点突变的CARD11蛋白的表达；CARD11基因中的突变，其引起与野生型CARD11蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的CARD11蛋白的表达；基因重复，其引起细胞中CARD11蛋白水平升高；或调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其引起细胞中CARD11蛋白水平升高)；CARD11 mRNA的替代剪接形式，其引起与野生型CARD11蛋白相比在CARD11蛋白中具有至少一个氨基酸缺失的CARD11蛋白；或表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而引起的。作为另一个实例，CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码CARD11蛋白的CARD11基因中的突变，所述CARD11蛋白是组成型活性的或与由不包含突变的CARD11基因编码的蛋白质相比具有增加的活性。作为另外的实例，增加的CARD11基因拷贝数可以引起CARD11蛋白的过表达。例如，CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位引起融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有CARD11的第一部分和伴侣蛋白(即，并非CARD11)的第二部分。在一些实例中，CARD11基因、CARD11蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个CARD11基因与另一个非CARD11基因的基因易位的结果。

人CARD11的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:8(UniParc登录号UPI00003FED38)

MPGGGPEMDDYMETLKDEEDALWENVECNRHMLSRYINPAKLTPYLRQCKVIDEQDEDEVLNAPMLPSKINRAGRLLDILHTKGQRGYVVFLESLEFYYPELYKLVTGKEPTRRFSTIVVEEGHEGLTHFLMNEVIKLQQQMKAKDLQRCELLARLRQLEDEKKQMTLTRVELLTFQERYYKMKEERDSYNDELVKVKDDNYNLAMRYAQLSEEKNMAVMRSRDLQLEIDQLKHRLNKMEEECKLERNQSLKLKNDIENRPKKEQVLELERENEMLKTKNQELQSIIQAGKRSLPDSDKAILDILEHDRKEALEDRQELVNRIYNLQEEARQAEELRDKYLEEKEDLELKCSTLGKDCEMYKHRMNTVMLQLEEVERERDQAFHSRDEAQTQYSQCLIEKDKYRKQIRELEEKNDEMRIEMVRREACIVNLESKLRRLSKDSNNLDQSLPRNLPVTIISQDFGDASPRTNGQEADDSSTSEESPEDSKYFLPYHPPQRRMNLKGIQLQRAKSPISLKRTSDFQAKGHEEEGTDASPSSCGSLPITNSFTKMQPPRSRSSIMSITAEPPGNDSIVRRYKEDAPHRSTVEEDNDSGGFDALDLDDDSHERYSFGPSSIHSSSSSHQSEGLDAYDLEQVNLMFRKFSLERPFRPSVTSVGHVRGPGPSVQHTTLNGDSLTSQLTLLGGNARGSFVHSVKPGSLAEKAGLREGHQLLLLEGCIRGERQSVPLDTCTKEEAHWTIQRCSGPVTLHYKVNHEGYRKLVKDMEDGLITSGDSFYIRLNLNISSQLDACTMSLKCDDVVHVRDTMYQDRHEWLCARVDPFTDHDLDMGTIPSYSRAQQLLLVKLQRLMHRGSREEVDGTHHTLRALRNTLQPEEALSTSDPRVSPRLSRASFLFGQLLQFVSRSENKYKRMNSNERVRIISGSPLGSLARSSLDATKLLTEKQEELDPESELGKNLSLIPYSLVRAFYCERRRPVLFTPTVLAKTLVQRLLNSGGAMEFTICKSDIVTRDEFLRRQKTETIIYSREKNPNAFECIAPANIEAVAAKNKHCLLEAGIGCTRDLIKSNIYPIVLFIRVCEKNIKRFRKLLPRPETEEEFLRVCRLKEKELEALPCLYATVEPDMWGSVEELLRVVKDKIGEEQRKTIWVDEDQL

CARD11基因或CARD11蛋白失调的非限制性实例示出在下表B2中。

表B2.

¹Wu等人,《肿瘤标靶》7.25(2016):38180。

²Watt等人《美国病理学杂志(The American Journal of Pathology)》185.9(2015):2354-2363。

如本文所使用的，术语“CARD14相关自身免疫性病症”是指与CARD14基因、CARD14蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD14基因、CARD14蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。

如本文所使用的，术语“CARD14相关炎性病症”是指与CARD14基因、CARD14蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD14基因、CARD14蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。

如本文所使用的，术语“CARD14相关癌症”是指与CARD14基因、CARD14蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD14基因、CARD14蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。

人CARD14的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:9(UniParc登录号UPI000013D81B)

MGELCRRDSALTALDEETLWEMMESHRHRIVRCICPSRLTPYLRQAKVLCQLDEEEVLHSPRLTNSAMRAGHLLDLLKTRGKNGAIAFLESLKFHNPDVYTLVTGLQPDVDFSNFSGLMETSKLTECLAGAIGSLQEELNQEKGQKEVLLRRCQQLQEHLGLAETRAEGLHQLEADHSRMKREVSAHFHEVLRLKDEMLSLSLHYSNALQEKELAASRCRSLQEELYLLKQELQRANMVSSCELELQEQSLRTASDQESGDEELNRLKEENEKLRSLTFSLAEKDILEQSLDEARGSRQELVERIHSLRERAVAAERQREQYWEEKEQTLLQFQKSKMACQLYREKVNALQAQVCELQKERDQAYSARDSAQREISQSLVEKDSLRRQVFELTDQVCELRTQLRQLQAEPPGVLKQEARTREPCPREKQRLVRMHAICPRDDSDCSLVSSTESQLLSDLSATSSRELVDSFRSSSPAPPSQQSLYKRVAEDFGEEPWSFSSCLEIPEGDPGALPGAKAGDPHLDYELLDTADLPQLESSLQPVSPGRLDVSESGVLMRRRPARRILSQVTMLAFQGDALLEQISVIGGNLTGIFIHRVTPGSAADQMALRPGTQIVMVDYEASEPLFKAVLEDTTLEEAVGLLRRVDGFCCLSVKVNTDGYKRLLQDLEAKVATSGDSFYIRVNLAMEGRAKGELQVHCNEVLHVTDTMFQGCGCWHAHRVNSYTMKDTAAHGTIPNYSRAQQQLIALIQDMTQQCTVTRKPSSGGPQKLVRIVSMDKAKASPLRLSFDRGQLDPSRMEGSSTCFWAESCLTLVPYTLVRPHRPARPRPVLLVPRAVGKILSEKLCLLQGFKKCLAEYLSQEEYEAWSQRGDIIQEGEVSGGRCWVTRHAVESLMEKNTHALLDVQLDSVCTLHRMDIFPIVIHVSVNEKMAKKLKKGLQRLGTSEEQLLEAARQEEGDLDRAPCLYSSLAPDGWSDLDGLLSCVRQAIADEQKKVVWTEQSPR

如本文所使用的，术语“CARD10相关自身免疫性病症”是指与CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。

如本文所使用的，术语“CARD10相关炎性病症”是指与CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。

如本文所使用的，术语“CARD10相关癌症”是指与CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。

短语“CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调”是指(例如，与对照非癌细胞相比)哺乳动物细胞中野生型CARD10蛋白的基因突变(例如，染色体易位，其引起包含CARD10结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；CARD10基因中的突变，其引起与野生型CARD10蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的CARD10蛋白的表达；CARD10基因中的突变，其引起与野生型CARD10蛋白相比具有一个或多个点突变的CARD10蛋白的表达；CARD10基因中的突变，其引起与野生型CARD10蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的CARD10蛋白的表达；基因重复，其引起细胞中CARD10蛋白水平升高；或调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其引起细胞中CARD10蛋白水平升高)；CARD10 mRNA的替代剪接形式，其引起与野生型CARD10蛋白相比在CARD10蛋白中具有至少一个氨基酸缺失的CARD10蛋白；或表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而引起的。作为另一个实例，CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码CARD10蛋白的CARD10基因中的突变，所述CARD10蛋白是组成型活性的或与由不包含突变的CARD10基因编码的蛋白质相比具有增加的活性。作为另外的实例，增加的CARD10基因拷贝数可以引起CARD10蛋白的过表达。例如，CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位引起融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有CARD10的第一部分和伴侣蛋白(即，并非CARD10)的第二部分。在一些实例中，CARD10基因、CARD10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个CARD10基因与另一个非CARD10基因的基因易位的结果。

人CARD10的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:10(UniParc登录号UPI0000044645)

MPGRAEAGEAEEEAGAGSGSEAEEDALWERIEGVRHRLARALNPAKLTPYLRQCRVIDEQDEEEVLSTYRFPCRVNRTGRLMDILRCRGKRGYEAFLEALEFYYPEHFTLLTGQEPAQRCSMILDEEGPEGLTQFLMTEVRRLREARKSQLQREQQLQARGRVLEEERAGLEQRLRDQQQAQERCQRLREDWEAGSLELLRLKDENYMIAMRLAQLSEEKNSAVLRSRDLQLAVDQLKLKVSRLEEECALLRRARGPPPGAEEKEKEKEKEKEPDNVDLVSELRAENQRLTASLRELQEGLQQEASRPGAPGSERILLDILEHDWREAQDSRQELCQKLHAVQGELQWAEELRDQYLQEMEDLRLKHRTLQKDCDLYKHRMATVLAQLEEIEKERDQAIQSRDRIQLQYSQSLIEKDQYRKQVRGLEAERDELLTTLTSLEGTKALLEVQLQRAQGGTCLKACASSHSLCSNLSSTWSLSEFPSPLGGPEATGEAAVMGGPEPHNSEEATDSEKEINRLSILPFPPSAGSILRRQREEDPAPPKRSFSSMSDITGSVTLKPWSPGLSSSSSSDSVWPLGKPEGLLARGCGLDFLNRSLAIRVSGRSPPGGPEPQDKGPDGLSFYGDRWSGAVVRRVLSGPGSARMEPREQRVEAAGLEGACLEAEAQQRTLLWNQGSTLPSLMDSKACQSFHEALEAWAKGPGAEPFYIRANLTLPERADPHALCVKAQEILRLVDSAYKRRQEWFCTRVDPLTLRDLDRGTVPNYQRAQQLLEVQEKCLPSSRHRGPRSNLKKRALDQLRLVRPKPVGAPAGDSPDQLLLEPCAEPERSLRPYSLVRPLLVSALRPVVLLPECLAPRLIRNLLDLPSSRLDFQVCPAESLSGEELCPSSAPGAPKAQPATPGLGSRIRAIQESVGKKHCLLELGARGVRELVQNEIYPIVIHVEVTEKNVREVRGLLGRPGWRDSELLRQCRGSEQVLWGLPCSWVQVPAHEWGHAEELAKVVRGRILQEQARLVWVECGSSRGCPSSSEA

如本文所使用的，术语“CARD9相关自身免疫性病症”是指与CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。

如本文所使用的，术语“CARD9相关炎性病症”是指与CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。

如本文所使用的，术语“CARD9相关癌症”是指与CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。

短语“CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调”是指(例如，与对照非癌细胞相比)哺乳动物细胞中野生型CARD9蛋白的基因突变(例如，染色体易位，其引起包含CARD9结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；CARD9基因中的突变，其引起与野生型CARD9蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的CARD9蛋白的表达；CARD9基因中的突变，其引起与野生型CARD9蛋白相比具有一个或多个点突变的CARD9蛋白的表达；CARD9基因中的突变，其引起与野生型CARD9蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的CARD9蛋白的表达；基因重复，其引起细胞中CARD9蛋白水平升高；或调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其引起细胞中CARD9蛋白水平升高)；CARD9 mRNA的替代剪接形式，其引起与野生型CARD9蛋白相比在CARD9蛋白中具有至少一个氨基酸缺失的CARD9蛋白；或表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而引起的。作为另一个实例，CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是编码CARD9蛋白的CARD9基因中的突变，所述CARD9蛋白是组成型活性的或与由不包含突变的CARD9基因编码的蛋白质相比具有增加的活性。作为另外的实例，增加的CARD9基因拷贝数可以引起CARD9蛋白的过表达。例如，CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位引起融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有CARD9的第一部分和伴侣蛋白(即，并非CARD9)的第二部分。在一些实例中，CARD9基因、CARD9蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个CARD9基因与另一个非CARD9基因的基因易位的结果。

人CARD9的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:11(UniParc登录号UPI000013E4EB)

MSDYENDDECWSVLEGFRVTLTSVIDPSRITPYLRQCKVLNPDDEEQVLSDPNLVIRKRKVGVLLDILQRTGHKGYVAFLESLELYYPQLYKKVTGKEPARVFSMIIDASGESGLTQLLMTEVMKLQKKVQDLTALLSSKDDFIKELRVKDSLLRKHQERVQRLKEECEAGSRELKRCKEENYDLAMRLAHQSEEKGAALMRNRDLQLEIDQLKHSLMKAEDDCKVERKHTLKLRHAMEQRPSQELLWELQQEKALLQARVQELEASVQEGKLDRSSPYIQVLEEDWRQALRDHQEQANTIFSLRKDLRQGEARRLRCMEEKEMFELQCLALRKDSKMYKDRIEAILLQMEEVAIERDQAIATREELHAQHARGLQEKDALRKQVRELGEKADELQLQVFQCEAQLLAVEGRLRRQQLETLVLSSDLEDGSPRRSQELSLPQDLEDTQLSDKGCLAGGGSPKQPFAALHQEQVLRNPHDAGLSSGEPPEKERRRLKESFENYRRKRALRKMQKGWRQGEEDRENTTGSDNTDTEGS

如本文所使用的，术语“BCL10相关自身免疫性病症”是指与BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的自身免疫性病症。

如本文所使用的，术语“BCL10相关炎性病症”是指与BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的炎性病症。

如本文所使用的，术语“BCL10相关癌症”是指与BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。

短语“BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调”是指(例如，与对照非癌细胞相比)哺乳动物细胞中野生型BCL10蛋白的基因突变(例如，染色体易位，其引起包含BCL10结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达；BCL10基因中的突变，其引起与野生型BCL10蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的BCL10蛋白的表达；BCL10基因中的突变，其引起与野生型BCL10蛋白相比具有一个或多个点突变的BCL10蛋白的表达；BCL10基因中的突变，其引起与野生型BCL10蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的BCL10蛋白的表达；基因重复，其引起细胞中BCL10蛋白水平升高；或调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变，其引起细胞中BCL10蛋白水平升高)；BCL10 mRNA的替代剪接形式，其引起与野生型BCL10蛋白相比在BCL10蛋白中具有至少一个氨基酸缺失的BCL10蛋白；或表达增加(例如，水平升高)，这是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导而引起的。例如，BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位引起融合蛋白的表达，所述融合蛋白含有BCL10的第一部分和伴侣蛋白(即，并非BCL10)的第二部分。在一些实例中，BCL10基因、BCL10蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以是一个BCL10基因与另一个非BCL10基因的基因易位的结果。

人BCL10的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:12(UniParc登录号UPI000012682F)

MEPTAPSLTEEDLTEVKKDALENLRVYLCEKIIAERHFDHLRAKKILSREDTEEISCRTSSRKRAGKLLDYLQENPKGLDTLVESIRREKTQNFLIQKITDEVLKLRNIKLEHLKGLKCSSCEPFPDGATNNLSRSNSDESNFSEKLRASTVMYHPEGESSTTPFFSTNSSLNLPVLEVGRTENTIFSSTTLPRPGDPGAPPLPPDLQLEEEGTCANSSEMFLPLRSRTVSRQ

BCL10基因或BCL10蛋白失调的非限制性实例示出在下表B3中。

表B3.

¹Willis等人《细胞(Cell)》96.1(1999):35-45。

²Zhang等人《自然遗传学》22.1(1999):63-68。

如本文所使用的，术语“MALT1蛋白酶底物相关癌症”是指与基因、蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调的癌症，所述失调与MALT1蛋白酶底物相关。在一些实施例中，MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、Regnase1相关癌症、roquin-1相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症、LIMA1α相关癌症及其组合。在一些实施例中，MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症及其组合。与本段中描述的特定基因或蛋白质“相关”的癌症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了此类癌症的非限制性实例。

人A20的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:13(UniParc登录号UPI000000D92D)

MAEQVLPQALYLSNMRKAVKIRERTPEDIFKPTNGIIHHFKTMHRYTLEMFRTCQFCPQFREIIHKALIDRNIQATLESQKKLNWCREVRKLVALKTNGDGNCLMHATSQYMWGVQDTDLVLRKALFSTLKETDTRNFKFRWQLESLKSQEFVETGLCYDTRNWNDEWDNLIKMASTDTPMARSGLQYNSLEEIHIFVLCNILRRPIIVISDKMLRSLESGSNFAPLKVGGIYLPLHWPAQECYRYPIVLGYDSHHFVPLVTLKDSGPEIRAVPLVNRDRGRFEDLKVHFLTDPENEMKEKLLKEYLMVIEIPVQGWDHGTTHLINAAKLDEANLPKEINLVDDYFELVQHEYKKWQENSEQGRREGHAQNPMEPSVPQLSLMDVKCETPNCPFFMSVNTQPLCHECSERRQKNQNKLPKLNSKPGPEGLPGMALGASRGEAYEPLAWNPEESTGGPHSAPPTAPSPFLFSETTAMKCRSPGCPFTLNVQHNGFCERCHNARQLHASHAPDHTRHLDPGKCQACLQDVTRTFNGICSTCFKRTTAEASSSLSTSLPPSCHQRSKSDPSRLVRSPSPHSCHRAGNDAPAGCLSQAARTPGDRTGTSKCRKAGCVYFGTPENKGFCTLCFIEYRENKHFAAASGKVSPTASRFQNTIPCLGRECGTLGSTMFEGYCQKCFIEAQNQRFHEAKRTEEQLRSSQRRDVPRTTQSTSRPKCARASCKNILACRSEELCMECQHPNQRMGPGAHRGEPAPEDPPKQRCRAPACDHFGNAKCNGYCNECFQFKQMYG

A20基因或A20蛋白失调的非限制性实例示出在下表B4中。

表B4.

¹Johansson等人《肿瘤靶标》7.38(2016):62627。

²Novak等人《血液》113.20(2009):4918-4921。

人CYLD的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:14(UniParc登录号UPI0000073A15)

MSSGLWSQEKVTSPYWEERIFYLLLQECSVTDKQTQKLLKVPKGSIGQYIQDRSVGHSRIPSAKGKKNQIGLKILEQPHAVLFVDEKDVVEINEKFTELLLAITNCEERFSLFKNRNRLSKGLQIDVGCPVKVQLRSGEEKFPGVVRFRGPLLAERTVSGIFFGVELLEEGRGQGFTDGVYQGKQLFQCDEDCGVFVALDKLELIEDDDTALESDYAGPGDTMQVELPPLEINSRVSLKVGETIESGTVIFCDVLPGKESLGYFVGVDMDNPIGNWDGRFDGVQLCSFACVESTILLHINDIIPALSESVTQERRPPKLAFMSRGVGDKGSSSHNKPKATGSTSDPGNRNRSELFYTLNGSSVDSQPQSKSKNTWYIDEVAEDPAKSLTEISTDFDRSSPPLQPPPVNSLTTENRFHSLPFSLTKMPNTNGSIGHSPLSLSAQSVMEELNTAPVQESPPLAMPPGNSHGLEVGSLAEVKENPPFYGVIRWIGQPPGLNEVLAGLELEDECAGCTDGTFRGTRYFTCALKKALFVKLKSCRPDSRFASLQPVSNQIERCNSLAFGGYLSEVVEENTPPKMEKEGLEIMIGKKKGIQGHYNSCYLDSTLFCLFAFSSVLDTVLLRPKEKNDVEYYSETQELLRTEIVNPLRIYGYVCATKIMKLRKILEKVEAASGFTSEEKDPEEFLNILFHHILRVEPLLKIRSAGQKVQDCYFYQIFMEKNEKVGVPTIQQLLEWSFINSNLKFAEAPSCLIIQMPRFGKDFKLFKKIFPSLELNITDLLEDTPRQCRICGGLAMYECRECYDDPDISAGKIKQFCKTCNTQVHLHPKRLNHKYNPVSLPKDLPDWDWRHGCIPCQNMELFAVLCIETSHYVAFVKYGKDDSAWLFFDSMADRDGGQNGFNIPQVTPCPEVGEYLKMSLEDLHSLDSRRIQGCARRLLCDAYMCMYQSPTMSLYK

CYLD基因或CYLD蛋白失调的非限制性实例可以参见例如Massoumi,《未来肿瘤学(Future Oncology)》7.2(2011):285-297，Alameda,J.P.等人,《癌基因(Oncogene)》29.50(2010):6522-6532，Williams等人,《现代病理学(Modern Pathology)》(2020):1-13，以及Courtois和Gilmore.《癌基因(Oncogene)》25.51(2006):6831-6843。

人RelB的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:15(UniParc登录号UPI00000012B7)

MLRSGPASGPSVPTGRAMPSRRVARPPAAPELGALGSPDLSSLSLAVSRSTDELEIIDEYIKENGFGLDGGQPGPGEGLPRLVSRGAASLSTVTLGPVAPPATPPPWGCPLGRLVSPAPGPGPQPHLVITEQPKQRGMRFRYECEGRSAGSILGESSTEASKTLPAIELRDCGGLREVEVTACLVWKDWPHRVHPHSLVGKDCTDGICRVRLRPHVSPRHSFNNLGIQCVRKKEIEAAIERKIQLGIDPYNAGSLKNHQEVDMNVVRICFQASYRDQQGQMRRMDPVLSEPVYDKKSTNTSELRICRINKESGPCTGGEELYLLCDKVQKEDISVVFSRASWEGRADFSQADVHRQIAIVFKTPPYEDLEIVEPVTVNVFLQRLTDGVCSEPLPFTYLPRDHDSYGVDKKRKRGMPDVLGELNSSDPHGIESKRRKKKPAILDHFLPNHGSGPFLPPSALLPDPDFFSGTVSLPGLEPPGGPDLLDDGFAYDPTAPTLFTMLDLLPPAPPHASAVVCSGGAGAVVGETPGPEPLTLDSYQAPGPGDGGTASLVGSNMFPNHYREAAFGGGLLSPGPEAT

人Regnase 1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:16(UniParc登录号UPI000004D30E)

MSGPCGEKPVLEASPTMSLWEFEDSHSRQGTPRPGQELAAEEASALELQMKVDFFRKLGYSSTEIHSVLQKLGVQADTNTVLGELVKHGTATERERQTSPDPCPQLPLVPRGGGTPKAPNLEPPLPEEEKEGSDLRPVVIDGSNVAMSHGNKEVFSCRGILLAVNWFLERGHTDITVFVPSWRKEQPRPDVPITDQHILRELEKKKILVFTPSRRVGGKRVVCYDDRFIVKLAYESDGIVVSNDTYRDLQGERQEWKRFIEERLLMYSFVNDKFMPPDDPLGRHGPSLDNFLRKKPLTLEHRKQPCPYGRKCTYGIKCRFFHPERPSCPQRSVADELRANALLSPPRAPSKDKNGRRPSPSSQSSSLLTESEQCSLDGKKLGAQASPGSRQEGLTQTYAPSGRSLAPSGGSGSSFGPTDWLPQTLDSLPYVSQDCLDSGIGSLESQMSELWGVRGGGPGEPGPPRAPYTGYSPYGSELPATAAFSAFGRAMGAGHFSVPADYPPAPPAFPPREYWSEPYPLPPPTSVLQEPPVQSPGAGRSPWGRAGSLAKEQASVYTKLCGVFPPHLVEAVMGRFPQLLDPQQLAAEILSYKSQHPSE

人roquin-1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:17(UniParc登录号UPI00001D7DA8)

MPVQAPQWTDFLSCPICTQTFDETIRKPISLGCGHTVCKMCLNKLHRKACPFDQTTINTDIELLPVNSALLQLVGAQVPEQQPITLCSGVEDTKHYEEAKKCVEELALYLKPLSSARGVGLNSTTQSVLSRPMQRKLVTLVHCQLVEEEGRIRAMRAARSLGERTVTELILQHQNPQQLSSNLWAAVRARGCQFLGPAMQEEALKLVLLALEDGSALSRKVLVLFVVQRLEPRFPQASKTSIGHVVQLLYRASCFKVTKRDEDSSLMQLKEEFRTYEALRREHDSQIVQIAMEAGLRIAPDQWSSLLYGDQSHKSHMQSIIDKLQTPASFAQSVQELTIALQRTGDPANLNRLRPHLELLANIDPSPDAPPPTWEQLENGLVAVRTVVHGLVDYIQNHSKKGADQQQPPQHSKYKTYMCRDMKQRGGCPRGASCTFAHSQEELEKFRKMNKRLVPRRPLSASLGQLNEVGLPSAAILPDEGAVDLPSRKPPALPNGIVSTGNTVTQLIPRGTDPSYDSSLKPGKIDHLSSSAPGSPPDLLESVPKSISALPVNPHSIPPRGPADLPPMPVTKPLQMVPRGSQLYPAQQTDVYYQDPRGAAPPFEPAPYQQGMYYTPPPQCVSRFVRPPPSAPEPAPPYLDHYPPYLQERVVNSQYGTQPQQYPPIYPSHYDGRRVYPAPSYTREEIFRESPIPIEIPPAAVPSYVPESRERYQQIESYYPVAPHPTQIRPSYLREPPYSRLPPPPQPHPSLDELHRRRKEIMAQLEERKVISPPPFAPSPTLPPTFHPEEFLDEDLKVAGKYKGNDYSQYSPWSCDTIGSYIGTKDAKPKDVVAAGSVEMMNVESKGMRDQRLDLQRRAAETSDDDLIPFGDRPTVSRFGAISRTSKTIYQGAGPMQAMAPQGAPTKSINISDYSPYGTHGGWGASPYSPHQNIPSQGHFSERERISMSEVASHGKPLPSAEREQLRLELQQLNHQISQQTQLRGLEAVSNRLVLQREANTLAGQSQPPPPPPPKWPGMISSEQLSLELHQVEREIGKRTRELSMENQCSLDMKSKLNTSKQAENGQPEPQNKVPAEDLTLTFSDVPNGSALTQENISLLSNKTSSLNLSEDPEGGGDNNDSQRSGVTPSSAP人HOIL1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:17(UniParc登录号UPI000006F045)

MDEKTKKAEEMALSLTRAVAGGDEQVAMKCAIWLAEQRVPLSVQLKPEVSPTQDIRLWVSVEDAQMHTVTIWLTVRPDMTVASLKDMVFLDYGFPPVLQQWVIGQRLARDQETLHSHGVRQNGDSAYLYLLSARNTSLNPQELQRERQLRMLEDLGFKDLTLQPRGPLEPGPPKPGVPQEPGRGQPDAVPEPPPVGWQCPGCTFINKPTRPGCEMCCRARPEAYQVPASYQPDEEERARLAGEEEALRQYQQRKQQQQEGNYLQHVQLDQRSLVLNTEPAECPVCYSVLAPGEAVVLRECLHTFCRECLQGTIRNSQEAEVSCPFIDNTYSCSGKLLEREIKALLTPEDYQRFLDLGISIAENRSAFSYHCKTPDCKGWCFFEDDVNEFTCPVCFHVNCLLCKAIHEQMNCKEYQEDLALRAQNDVAARQTTEMLKVMLQQGEAMRCPQCQIVVQKKDGCDWIRCTVCHTEICWVTKGPRWGPGGPGDTSGGCRCRVNGIPCHPSCQNCH

人NIK的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:18(UniParc登录号UPI0000074220)

MAVMEMACPGAPGSAVGQQKELPKAKEKTPPLGKKQSSVYKLEAVEKSPVFCGKWEILNDVITKGTAKEGSEAGPAAISIIAQAECENSQEFSPTFSERIFIAGSKQYSQSESLDQIPNNVAHATEGKMARVCWKGKRRSKARKKRKKKSSKSLAHAGVALAKPLPRTPEQESCTIPVQEDESPLGAPYVRNTPQFTKPLKEPGLGQLCFKQLGEGLRPALPRSELHKLISPLQCLNHVWKLHHPQDGGPLPLPTHPFPYSRLPHPFPFHPLQPWKPHPLESFLGKLACVDSQKPLPDPHLSKLACVDSPKPLPGPHLEPSCLSRGAHEKFSVEEYLVHALQGSVSSGQAHSLTSLAKTWAARGSRSREPSPKTEDNEGVLLTEKLKPVDYEYREEVHWATHQLRLGRGSFGEVHRMEDKQTGFQCAVKKVRLEVFRAEELMACAGLTSPRIVPLYGAVREGPWVNIFMELLEGGSLGQLVKEQGCLPEDRALYYLGQALEGLEYLHSRRILHGDVKADNVLLSSDGSHAALCDFGHAVCLQPDGLGKSLLTGDYIPGTETHMAPEVVLGRSCDAKVDVWSSCCMMLHMLNGCHPWTQFFRGPLCLKIASEPPPVREIPPSCAPLTAQAIQEGLRKEPIHRVSAAELGGKVNRALQQVGGLKSPWRGEYKEPRHPPPNQANYHQTLHAQPRELSPRAPGPRPAEETTGRAPKLQPPLPPEPPEPNKSPPLTLSKEESGMWEPLPLSSLEPAPARNPSSPERKATVPEQELQQLEIELFLNSLSQPFSLEEQEQILSCLSIDSLSLSDDSEKNPSKASQSSRDTLSSGVHSWSSQAEARSSSWNMVLARGRPTDTPSYFNGVKVQIQSLNGEHLHIREFHRVKVGDIATGISSQIPAAAFSLVTKDGQPVRYDMEVPDSGIDLQCTLAPDGSFAWSWRVKHGQLENRP

人LIMA1α的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:19(UniParc登录号UPI000002A906)

MENCLGESRHEVEKSEISENTDASGKIEKYNVPLNRLKMMFEKGEPTQTKILRAQSRSASGRKISENSYSLDDLEIGPGQLSSSTFDSEKNESRRNLELPRLSETSIKDRMAKYQAAVSKQSSSTNYTNELKASGGEIKIHKMEQKENVPPGPEVCITHQEGEKISANENSLAVRSTPAEDDSRDSQVKSEVQQPVHPKPLSPDSRASSLSESSPPKAMKKFQAPARETCVECQKTVYPMERLLANQQVFHISCFRCSYCNNKLSLGTYASLHGRIYCKPHFNQLFKSKGNYDEGFGHRPHKDLWASKNENEEILERPAQLANARETPHSPGVEDAPIAKVGVLAASMEAKASSQQEKEDKPAETKKLRIAWPPPTELGSSGSALEEGIKMSKPKWPPEDEISKPEVPEDVDLDLKKLRRSSSLKERSRPFTVAASFQSTSVKSPKTVSPPIRKGWSMSEQSEESVGGRVAERKQVENAKASKKNGNVGKTTWQNKESKGETGKRSKEGHSLEMENENLVENGADSDEDDNSFLKQQSPQEPKSLNWSSFVDNTFAEEFTTQNQKSQDVELWEGEVVKELSVEEQIKRNRYYDEDEDEE

如本文所使用的，术语“与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症”是指与基因、蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调的癌症，所述失调与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关。在一些实施例中，与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症选自由以下组成的组：TAK1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65(RelA)相关癌症、c-Rel相关癌症及其组合。在一些实施例中，与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症是IKKγ相关癌症。与本段中描述的特定基因或蛋白质“相关”的癌症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了此类癌症的非限制性实例。

人TAK1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:20(UniParc登录号UPI000012EAD6)

MSTASAASSSSSSSAGEMIEAPSQVLNFEEIDYKEIEVEEVVGRGAFGVVCKAKWRAKDVAIKQIESESERKAFIVELRQLSRVNHPNIVKLYGACLNPVCLVMEYAEGGSLYNVLHGAEPLPYYTAAHAMSWCLQCSQGVAYLHSMQPKALIHRDLKPPNLLLVAGGTVLKICDFGTACDIQTHMTNNKGSAAWMAPEVFEGSNYSEKCDVFSWGIILWEVITRRKPFDEIGGPAFRIMWAVHNGTRPPLIKNLPKPIESLMTRCWSKDPSQRPSMEEIVKIMTHLMRYFPGADEPLQYPCQYSDEGQSNSATSTGSFMDIASTNTSNKSDTNMEQVPATNDTIKRLESKLLKNQAKQQSESGRLSLGASRGSSVESLPPTSEGKRMSADMSEIEARIAATTAYSKPKRGHRKTASFGNILDVPEIVISGNGQPRRRSIQDLTVTGTEPGQVSSRSSSPSVRMITTSGPTSEKPTRSHPWTPDDSTDTNGSDNSIPMAYLTLDHQLQPLAPCPNSKESMAVFEQHCKMAQEYMKVQTEIALLLQRKQELVAELDQDEKDQQNTSRLVQEHKKLLDENKSLSTYYQQCKKQLEVIRSQQQKRQGTS

人TRAF6的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:21(UniParc登录号UPI000000D924)

MSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLAQAVHSLSVIPDSGYISEVRNFQETIHQLEGRLVRQDHQIRELTAKMETQSMYVSELKRTIRTLEDKVAEIEAQQCNGIYIWKIGNFGMHLKCQEEEKPVVIHSPGFYTGKPGYKLCMRLHLQLPTAQRCANYISLFVHTMQGEYDSHLPWPFQGTIRLTILDQSEAPVRQNHEEIMDAKPELLAFQRPTIPRNPKGFGYVTFMHLEALRQRTFIKDDTLLVRCEVSTRFDMGSLRREGFQPRSTDAGV

人TAB1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:22(UniParc登录号UPI0000136861)

MAAQRRSLLQSEQQPSWTDDLPLCHLSGVGSASNRSYSADGKGTESHPPEDSWLKFRSENNCFLYGVFNGYDGNRVTNFVAQRLSAELLLGQLNAEHAEADVRRVLLQAFDVVERSFLESIDDALAEKASLQSQLPEGVPQHQLPPQYQKILERLKTLEREISGGAMAVVAVLLNNKLYVANVGTNRALLCKSTVDGLQVTQLNVDHTTENEDELFRLSQLGLDAGKIKQVGIICGQESTRRIGDYKVKYGYTDIDLLSAAKSKPIIAEPEIHGAQPLDGVTGFLVLMSEGLYKALEAAHGPGQANQEIAAMIDTEFAKQTSLDAVAQAVVDRVKRIHSDTFASGGERARFCPRHEDMTLLVRNFGYPLGEMSQPTPSPAPAAGGRVYPVSVPYSSAQSTSKTSVTLSLVMPSQGQMVNGAHSASTLDEATPTLTNQSPTLTLQSTNTHTQSSSSSSDGGLFRSRPAHSLPPGEDGRVEPYVDFAEFYRLWSVDHGEQSVVTAP

人TAB2的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:23(UniParc登录号UPI0000073C75)

MAQGSHQIDFQVLHDLRQKFPEVPEVVVSRCMLQNNNNLDACCAVLSQESTRYLYGEGDLNFSDDSGISGLRNHMTSLNLDLQSQNIYHHGREGSRMNGSRTLTHSISDGQLQGGQSNSELFQQEPQTAPAQVPQGFNVFGMSSSSGASNSAPHLGFHLGSKGTSSLSQQTPRFNPIMVTLAPNIQTGRNTPTSLHIHGVPPPVLNSPQGNSIYIRPYITTPGGTTRQTQQHSGWVSQFNPMNPQQVYQPSQPGPWTTCPASNPLSHTSSQQPNQQGHQTSHVYMPISSPTTSQPPTIHSSGSSQSSAHSQYNIQNISTGPRKNQIEIKLEPPQRNNSSKLRSSGPRTSSTSSSVNSQTLNRNQPTVYIAASPPNTDELMSRSQPKVYISANAATGDEQVMRNQPTLFISTNSGASAASRNMSGQVSMGPAFIHHHPPKSRAIGNNSATSPRVVVTQPNTKYTFKITVSPNKPPAVSPGVVSPTFELTNLLNHPDHYVETENIQHLTDPTLAHVDRISETRKLSMGSDDAAYTQALLVHQKARMERLQRELEIQKKKLDKLKSEVNEMENNLTRRRLKRSNSISQIPSLEEMQQLRSCNRQLQIDIDCLTKEIDLFQARGPHFNPSAIHNFYDNIGFVGPVPPKPKDQRSIIKTPKTQDTEDDEGAQWNCTACTFLNHPALIRCEQCEMPRHF

人TAB3的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:24(UniParc登录号UPI0000071648)

MAQSSPQLDIQVLHDLRQRFPEIPEGVVSQCMLQNNNNLEACCRALSQESSKYLYMEYHSPDDNRMNRNRLLHINLGIHSPSSYHPGDGAQLNGGRTLVHSSSDGHIDPQHAAGKQLICLVQEPHSAPAVVAATPNYNPFFMNEQNRSAATPPSQPPQQPSSMQTGMNPSAMQGPSPPPPPPSYMHIPRYSTNPITVTVSQNLPSGQTVPRALQILPQIPSNLYGSPGSIYIRQTSQSSSGRQTPQSTPWQSSPQGPVPHYSQRPLPVYPHQQNYQPSQYSPKQQQIPQSAYHSPPPSQCPSPFSSPQHQVQPSQLGHIFMPPSPSTTPPHPYQQGPPSYQKQGSHSVAYLPYTASSLSKGSMKKIEITVEPSQRPGTAINRSPSPISNQPSPRNQHSLYTATTPPSSSPSRGISSQPKPPFSVNPVYITYTQPTGPSCTPSPSPRVIPNPTTVFKITVGRATTENLLNLVDQEERSAAPEPIQPISVIPGSGGEKGSHKYQRSSSSGSDDYAYTQALLLHQRARMERLAKQLKLEKEELERLKSEVNGMEHDLMQRRLRRVSCTTAIPTPEEMTRLRSMNRQLQINVDCTLKEVDLLQSRGNFDPKAMNNFYDNIEPGPVVPPKPSKKDSSDPCTIERKARRISVTSKVQADIHDTQAAAADEHRTGSTQSPRTQPRDEDYEGAPWNCDSCTFLNHPALNRCEQCEMPRYT

人MKK7的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:25(UniParc登录号UPI000012F494)

MAASSLEQKLSRLEAKLKQENREARRRIDLNLDISPQRPRPTLQLPLANDGGSRSPSSESSPQHPTPPARPRHMLGLPSTLFTPRSMESIEIDQKLQEIMKQTGYLTIGGQRYQAEINDLENLGEMGSGTCGQVWKMRFRKTGHVIAVKQMRRSGNKEENKRILMDLDVVLKSHDCPYIVQCFGTFITNTDVFIAMELMGTCAEKLKKRMQGPIPERILGKMTVAIVKALYYLKEKHGVIHRDVKPSNILLDERGQIKLCDFGISGRLVDSKAKTRSAGCAAYMAPERIDPPDPTKPDYDIRADVWSLGISLVELATGQFPYKNCKTDFEVLTKVLQEEPPLLPGHMGFSGDFQSFVKDCLTKDHRKRPKYNKLLEHSFIKRYETLEVDVASWFKDVMAKTESPRTSGVLSQPHLPFFR

人IKKα的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:26(UniParc登录号UPI000013D6C7)

MERPPGLRPGAGGPWEMRERLGTGGFGNVCLYQHRELDLKIAIKSCRLELSTKNRERWCHEIQIMKKLNHANVVKACDVPEELNILIHDVPLLAMEYCSGGDLRKLLNKPENCCGLKESQILSLLSDIGSGIRYLHENKIIHRDLKPENIVLQDVGGKIIHKIIDLGYAKDVDQGSLCTSFVGTLQYLAPELFENKPYTATVDYWSFGTMVFECIAGYRPFLHHLQPFTWHEKIKKKDPKCIFACEEMSGEVRFSSHLPQPNSLCSLVVEPMENWLQLMLNWDPQQRGGPVDLTLKQPRCFVLMDHILNLKIVHILNMTSAKIISFLLPPDESLHSLQSRIERETGINTGSQELLSETGISLDPRKPASQCVLDGVRGCDSYMVYLFDKSKTVYEGPFASRSLSDCVNYIVQDSKIQLPIIQLRKVWAEAVHYVSGLKEDYSRLFQGQRAAMLSLLRYNANLTKMKNTLISASQQLKAKLEFFHKSIQLDLERYSEQMTYGISSEKMLKAWKEMEEKAIHYAEVGVIGYLEDQIMSLHAEIMELQKSPYGRRQGDLMESLEQRAIDLYKQLKHRPSDHSYSDSTEMVKIIVHTVQSQDRVLKELFGHLSKLLGCKQKIIDLLPKVEVALSNIKEADNTVMFMQGKRQKEIWHLLKIACTQSSARSLVGSSLEGAVTPQTSAWLPPTSAEHDHSLSCVVTPQDGETSAQMIEENLNCLGHLSTIIHEANEEQGNSMMNLDWSWLTE

人IKKβ的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:27(UniParc登录号UPI0000033729)

MSWSPSLTTQTCGAWEMKERLGTGGFGNVIRWHNQETGEQIAIKQCRQELSPRNRERWCLEIQIMRRLTHPNVVAARDVPEGMQNLAPNDLPLLAMEYCQGGDLRKYLNQFENCCGLREGAILTLLSDIASALRYLHENRIIHRDLKPENIVLQQGEQRLIHKIIDLGYAKELDQGSLCTSFVGTLQYLAPELLEQQKYTVTVDYWSFGTLAFECITGFRPFLPNWQPVQWHSKVRQKSEVDIVVSEDLNGTVKFSSSLPYPNNLNSVLAERLEKWLQLMLMWHPRQRGTDPTYGPNGCFKALDDILNLKLVHILNMVTGTIHTYPVTEDESLQSLKARIQQDTGIPEEDQELLQEAGLALIPDKPATQCISDGKLNEGHTLDMDLVFLFDNSKITYETQISPRPQPESVSCILQEPKRNLAFFQLRKVWGQVWHSIQTLKEDCNRLQQGQRAAMMNLLRNNSCLSKMKNSMASMSQQLKAKLDFFKTSIQIDLEKYSEQTEFGITSDKLLLAWREMEQAVELCGRENEVKLLVERMMALQTDIVDLQRSPMGRKQGGTLDDLEEQARELYRRLREKPRDQRTEGDSQEMVRLLLQAIQSFEKKVRVIYTQLSKTVVCKQKALELLPKVEEVVSLMNEDEKTVVRLQEKRQKELWNLLKIACSKVRGPVSGSPDSMNASRLSQPGQLMSQPSTASNSLPEPAKKSEELVAEAHNLCTLLENAIQDTVREQDQSFTALDWSWLQTEEEEHSCLEQAS人IKKγ的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:28(UniParc登录号UPI0000000CC4)

MNRHLWKSQLCEMVQPSGGPAADQDVLGEESPLGKPAMLHLPSEQGAPETLQRCLEENQELRDAIRQSNQILRERCEELLHFQASQREEKEFLMCKFQEARKLVERLGLEKLDLKRQKEQALREVEHLKRCQQQMAEDKASVKAQVTSLLGELQESQSRLEAATKECQALEGRARAASEQARQLESEREALQQQHSVQVDQLRMQGQSVEAALRMERQAASEEKRKLAQLQVAYHQLFQEYDNHIKSSVVGSERKRGMQLEDLKQQLQQAEEALVAKQEVIDKLKEEAEQHKIVMETVPVLKAQADIYKADFQAERQAREKLAEKKELLQEQLEQLQREYSKLKASCQESARIEDMRKRHVEVSQAPLPPAPAYLSSPLALPSQRRSPPEEPPDFCCPKCQYQAPDMDTLQIHVMECIE

IKKγ基因或IKKγ蛋白失调的非限制性实例可以参见例如Courtois和Gilmore,《癌基因》25.51(2006):6831-6843。

人IkBα的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:29(UniParc登录号UPI000004F0A9)

MFQAAERPQEWAMEGPRDGLKKERLLDDRHDSGLDSMKDEEYEQMVKELQEIRLEPQEVPRGSEPWKQQLTEDGDSFLHLAIIHEEKALTMEVIRQVKGDLAFLNFQNNLQQTPLHLAVITNQPEIAEALLGAGCDPELRDFRGNTPLHLACEQGCLASVGVLTQSCTTPHLHSILKATNYNGHTCLHLASIHGYLGIVELLVSLGADVNAQEPCNGRTALHLAVDLQNPDLVSLLLKCGADVNRVTYQGYSPYQLTWGRPSTRIQQQLGQLTLENLQMLPESEDEESYDTESEFTEFTEDELPYDDCVFGGQRLTL

被加工成p50的人p105的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:30(UniParc登录号UPI000000D917)

MAEDDPYLGRPEQMFHLDPSLTHTIFNPEVFQPQMALPTDGPYLQILEQPKQRGFRFRYVCEGPSHGGLPGASSEKNKKSYPQVKICNYVGPAKVIVQLVTNGKNIHLHAHSLVGKHCEDGICTVTAGPKDMVVGFANLGILHVTKKKVFETLEARMTEACIRGYNPGLLVHPDLAYLQAEGGGDRQLGDREKELIRQAALQQTKEMDLSVVRLMFTAFLPDSTGSFTRRLEPVVSDAIYDSKAPNASNLKIVRMDRTAGCVTGGEEIYLLCDKVQKDDIQIRFYEEEENGGVWEGFGDFSPTDVHRQFAIVFKTPKYKDINITKPASVFVQLRRKSDLETSEPKPFLYYPEIKDKEEVQRKRQKLMPNFSDSFGGGSGAGAGGGGMFGSGGGGGGTGSTGPGYSFPHYGFPTYGGITFHPGTTKSNAGMKHGTMDTESKKDPEGCDKSDDKNTVNLFGKVIETTEQDQEPSEATVGNGEVTLTYATGTKEESAGVQDNLFLEKAMQLAKRHANALFDYAVTGDVKMLLAVQRHLTAVQDENGDSVLHLAIIHLHSQLVRDLLEVTSGLISDDIINMRNDLYQTPLHLAVITKQEDVVEDLLRAGADLSLLDRLGNSVLHLAAKEGHDKVLSILLKHKKAALLLDHPNGDGLNAIHLAMMSNSLPCLLLLVAAGADVNAQEQKSGRTALHLAVEHDNISLAGCLLLEGDAHVDSTTYDGTTPLHIAAGRGSTRLAALLKAAGADPLVENFEPLYDLDDSWENAGEDEGVVPGTTPLDMATSWQVFDILNGKPYEPEFTSDDLLAQGDMKQLAEDVKLQLYKLLEIPDPDKNWATLAQKLGLGILNNAFRLSPAPSKTLMDNYEVSGGTVRELVEALRQMGYTEAIEVIQAASSPVKTTSQAHSLPLSPASTRQQIDELRDSDSVCDSGVETSFRKLSFTESLTSGASLLTLNKMPHDYGQEGPLEGKI

人p65的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:31(UniParc登录号UPI000013ED68)

MDELFPLIFPAEPAQASGPYVEIIEQPKQRGMRFRYKCEGRSAGSIPGERSTDTTKTHPTIKINGYTGPGTVRISLVTKDPPHRPHPHELVGKDCRDGFYEAELCPDRCIHSFQNLGIQCVKKRDLEQAISQRIQTNNNPFQVPIEEQRGDYDLNAVRLCFQVTVRDPSGRPLRLPPVLSHPIFDNRAPNTAELKICRVNRNSGSCLGGDEIFLLCDKVQKEDIEVYFTGPGWEARGSFSQADVHRQVAIVFRTPPYADPSLQAPVRVSMQLRRPSDRELSEPMEFQYLPDTDDRHRIEEKRKRTYETFKSIMKKSPFSGPTDPRPPPRRIAVPSRSSASVPKPAPQPYPFTSSLSTINYDEFPTMVFPSGQISQASALAPAPPQVLPQAPAPAPAPAMVSALAQAPAPVPVLAPGPPQAVAPPAPKPTQAGEGTLSEALLQLQFDDEDLGALLGNSTDPAVFTDLASVDNSEFQQLLNQGIPVAPHTTEPMLMEYPEAITRLVTGAQRPPDPAPAPLGAPGLPNGLLSGDEDFSSIADMDFSALLSQISS

人c-Rel的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:32(UniParc登录号UPI000013367B)

MASGAYNPYIEIIEQPRQRGMRFRYKCEGRSAGSIPGEHSTDNNRTYPSIQIMNYYGKGKVRITLVTKNDPYKPHPHDLVGKDCRDGYYEAEFGQERRPLFFQNLGIRCVKKKEVKEAIITRIKAGINPFNVPEKQLNDIEDCDLNVVRLCFQVFLPDEHGNLTTALPPVVSNPIYDNRAPNTAELRICRVNKNCGSVRGGDEIFLLCDKVQKDDIEVRFVLNDWEAKGIFSQADVHRQVAIVFKTPPYCKAITEPVTVKMQLRRPSDQEVSESMDFRYLPDEKDTYGNKAKKQKTTLLFQKLCQDHVETGFRHVDQDGLELLTSGDPPTLASQSAGITVNFPERPRPGLLGSIGEGRYFKKEPNLFSHDAVVREMPTGVSSQAESYYPSPGPISSGLSHHASMAPLPSSSWSSVAHPTPRSGNTNPLSSFSTRTLPSNSQGIPPFLRIPVGNDLNASNACIYNNADDIVGMEASSMPSADLYGISDPNMLSNCSVNMMTTSSDSMGETDNPRLLSMNLENPSCNSVLDPRDLRQLHQMSSSSMSAGANSNTTVFVSQSDAFEGSDFSCADNSMINESGPSNSTNPNSHGFVQDSQYSGIGSMQNEQLSDSFPYEFFQV

如本文所使用的，术语“与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症”是指与基因、蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调的癌症，所述失调与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关。在一些实施例中，与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症选自由以下组成的组：JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症、MYD88转录因子相关癌症、AP-1转录因子相关癌症及其组合。与本段中描述的特定基因或蛋白质“相关”的癌症是指与特定基因、特定蛋白质或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平相关或具有失调(例如，本文所述的特定基因、特定蛋白质或其中任一者的表达或活性或水平的任何类型的失调)的癌症。本文描述了此类癌症的非限制性实例。

人JNK1的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:33(UniParc登录号UPI000012F17A)

MSRSKRDNNFYSVEIGDSTFTVLKRYQNLKPIGSGAQGIVCAAYDAILERNVAIKKLSRPFQNQTHAKRAYRELVLMKCVNHKNIIGLLNVFTPQKSLEEFQDVYIVMELMDANLCQVIQMELDHERMSYLLYQMLCGIKHLHSAGIIHRDLKPSNIVVKSDCTLKILDFGLARTAGTSFMMTPYVVTRYYRAPEVILGMGYKENVDLWSVGCIMGEMVCHKILFPGRDYIDQWNKVIEQLGTPCPEFMKKLQPTVRTYVENRPKYAGYSFEKLFPDVLFPADSEHNKLKASQARDLLSKMLVIDASKRISVDEALQHPYINVWYDPSEAEAPPPKIPDKQLDEREHTIEEWKELIYKEVMDLEERTKNGVIRGQPSPLGAAVINGSQHPSSSSSVNDVSSMSTDPTLASDTDSSLEAAAGPLGCCR

人JNK2的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:34(UniParc登录号UPI000006E3AD)

MSDSKCDSQFYSVQVADSTFTVLKRYQQLKPIGSGAQGIVCAAFDTVLGINVAVKKLSRPFQNQTHAKRAYRELVLLKCVNHKNIISLLNVFTPQKTLEEFQDVYLVMELMDANLCQVIHMELDHERMSYLLYQMLCGIKHLHSAGIIHRDLKPSNIVVKSDCTLKILDFGLARTACTNFMMTPYVVTRYYRAPEVILGMGYKENVDIWSVGCIMGELVKGCVIFQGTDHIDQWNKVIEQLGTPSAEFMKKLQPTVRNYVENRPKYPGIKFEELFPDWIFPSESERDKIKTSQARDLLSKMLVIDPDKRISVDEALRHPYITVWYDPAEAEAPPPQIYDAQLEEREHAIEEWKELIYKEVMDWEERSKNGVVKDQPSDAAVSSNATPSQSSSINDISSMSTEQTLASDTDSSLDASTGPLEGCR

人JNK3的示例性序列如下所示：

SEQ ID NO:35(UniParc登录号UPI0000049042)

MSLHFLYYCSEPTLDVKIAFCQGFDKQVDVSYIAKHYNMSKSKVDNQFYSVEVGDSTFTVLKRYQNLKPIGSGAQGIVCAAYDAVLDRNVAIKKLSRPFQNQTHAKRAYRELVLMKCVNHKNIISLLNVFTPQKTLEEFQDVYLVMELMDANLCQVIQMELDHERMSYLLYQMLCGIKHLHSAGIIHRDLKPSNIVVKSDCTLKILDFGLARTAGTSFMMTPYVVTRYYRAPEVILGMGYKENVDIWSVGCIMGEMVRHKILFPGRDYIDQWNKVIEQLGTPCPEFMKKLQPTVRNYVENRPKYAGLTFPKLFPDSLFPADSEHNKLKASQARDLLSKMLVIDPAKRISVDDALQHPYINVWYDPAEVEAPPPQIYDKQLDEREHTIEEWKELIYKEVMNSEEKTKNGVVKGQPSPSGAAVNSSESLPPSSSVNDISSMSTDQTLASDTDSSLEASAGPLGCCR

式(I)化合物

本文提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个为单键或双键；

Q为-CH₂-、O或NH；

X为N或C；

Y为N或C；

Z为N或CR⁵；

其中当X和Y中的一者为N时，X和Y中的另一者为C；

n为1、2、或3；

R^X为氢或卤素；

R¹为氢、卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^AR^B或任选地被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基；

R²为氢、卤素、氨基或C1-C3烷基；

每个R³独立地为氘、卤素、羟基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或C1-C3卤代烷基；或者两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧代基团、4-8元杂环基或C3-C8环烷基；

m为0、1、2或3；

R⁴为苯基或5-9元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1-3个独立地选自R⁶的取代基取代；

R⁵为氢、卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^CR^D或C1-C3烷基；并且

每个R⁶独立地选自：卤素；氰基；氨基；-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂；-S(＝O)_p(C1-C3烷基)；-(C＝O)NR^ER^F；C1-C3烷氧基；任选被羟基取代的C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3卤代烷基、4-6元杂环基或任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基；任选被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；3-8元杂环基；以及C3-C6环烷氧基；

p为1或2；并且

R^A、R^B、R^C、R^D、R^E和R^F独立地为氢、C1-C3烷基、C3-C6环烷基，或者R^A和R^B，或R^C和R^D，或R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成任选地被1-2个卤素取代的4-6元杂环基。

在一些实施例中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有以下结构：

其中：

每个为单键或双键；

Q为-CH₂-、O或NH；

X为N或C；

Y为N或C；

Z为N或CR⁵；

其中当X和Y中的一者为N时，X和Y中的另一者为C；

n为1、2、或3；

R¹为氢、卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^AR^B或任选地被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基；

R²为氢、卤素、氨基或C1-C3烷基；

每个R³独立地为氘、卤素、羟基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或C1-C3卤代烷基；或者两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧代基团、4-8元杂环基或C3-C8环烷基；

m为0、1、2或3；

R⁴为苯基或5-9元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1-3个独立地选自R⁶的取代基取代；

R⁵为氢、卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^CR^D或C1-C3烷基；并且

每个R⁶独立地选自：卤素；氰基；氨基；-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂；-S(＝O)_p(C1-C3烷基)；-(C＝O)NR^ER^F；C1-C3烷氧基；任选被羟基取代的C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3卤代烷基、4-6元杂环基或任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基；任选被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；3-8元杂环基；以及C3-C6环烷氧基；

p为1或2；并且

R^A、R^B、R^C、R^D、R^E和R^F独立地为氢、C1-C3烷基、C3-C6环烷基，或者R^A和R^B，或R^C和R^D，或R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成任选地被1-2个卤素取代的4-6元杂环基。

在一些实施例中，Q为-CH₂-。在一些实施例中，Q为O。在一些实施例中，Q为NH。

在一些实施例中，部分由X和Y形成的五元含氮环为杂芳环。

在一些实施例中，X为C并且Y为C。

在一些实施例中，X为N并且Y为C。

在一些实施例中，X为C并且Y为N。

在一些实施例中，Z为N。在一些实施例中，Z为CR⁵。

在一些实施例中，X为C；Y为C；并且Z为CR⁵。在一些实施例中，X为N；Y为C；并且Z为CR⁵。在一些实施例中，X为C；Y为N；并且Z为CR⁵。在一些实施例中，X为C；Y为C；并且Z为N。在一些实施例中，X为N；Y为C；并且Z为N。在一些实施例中，X为C；Y为N；并且Z为N。

在一些实施例中，R¹为卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^AR^B或任选地被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基。

在一些实施例中，R¹为卤素或氰基。在一些实施例中，R¹为氯或氰基。在一些实施例中，R¹为氢。在一些实施例中，R¹为卤素。在一些实施例中，R¹为氟。在一些实施例中，R¹为氯。在一些实施例中，R¹为氰基。在一些实施例中，R¹为羟基。

在一些实施例中，R¹为C1-C3烷氧基。在一些实施例中，R¹为甲氧基或乙氧基。

在一些实施例中，R¹为C1-C3卤代烷氧基。在一些实施例中，R¹为三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。

在一些实施例中，R¹为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R¹为二氟甲基、三氟甲基或2,2,2-三氟乙基。

在一些实施例中，R¹为-NR^AR^B。在一些实施例中，R^A和R^B独立地为氢或C1-C3烷基。在某些实施例中，R^A和R^B中的一者为氢并且R^A和R^B中的另一者为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^A和R^B中的一者为氢并且R^A和R^B中的另一者为甲基。在一些实施例中，R^A和R^B中的一者为氢并且R^A和R^B中的另一者为乙基。在某些实施例中，R^A和R^B两者均为氢。在某些实施例中，R^A和R^B两者均为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^A和R^B两者均为甲基。在一些实施例中，R^A和R^B中的一者为甲基并且R^A和R^B中的另一者为乙基。在一些实施例中，R^A和R^B两者均为乙基。

在一些实施例中，R^A和R^B与其所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基。在某些实施例中，R^A和R^B与其所连接的氮原子一起形成4元杂环基。在一些实施例中，R^A和R^B与其所连接的氮原子一起形成5元杂环基。在一些实施例中，R^A和R^B与其所连接的氮原子一起形成6元杂环基。

在一些实施例中，R¹为任选地被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基。在某些实施例中，R¹为任选地被1个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基。在这些实施例中的某些实施例中，R¹为任选地被1个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的甲基。在某些实施例中，R¹为任选地被1个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的乙基。在某些实施例中，R¹为任选地被羟基取代的C1-C3烷基。在某些实施例中，R¹为任选地被C1-C3烷氧基(例如，甲氧基)取代的C1-C3烷基。在一些实施例中，R¹为羟甲基或甲氧基乙基。

在一些实施例中，R¹为未经取代的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)。

在一些实施例中，R²为氢。在一些实施例中，R²为卤素。在一些实施例中，R²为氟。在一些实施例中，R²为氯。在一些实施例中，R²为氨基。在一些实施例中，R²为C1-C3烷基，如甲基。

在一些实施例中，n为1、2或3。在一些实施例中，n为1或2。在一些实施例中，n为2或3。在一些实施例中，n为1或3。在一些实施例中，n为1。在一些实施例中，n为2。在一些实施例中，n为3。

在一些实施例中，m为0、1、2或3。在一些实施例中，m为0、1或2。在一些实施例中，m为1、2或3。在一些实施例中，m为0、2或3。在一些实施例中，m为0、1或3。在一些实施例中，m为0或1。在一些实施例中，m为0或2。在一些实施例中，m为0或3。在一些实施例中，m为1或2。在一些实施例中，m为1或3。在一些实施例中，m为2或3。在一些实施例中，m为0。在一些实施例中，m为1。在一些实施例中，m为2。在一些实施例中，m为3。

在一些实施例中，每个R³独立地为氘、卤素、羟基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3卤代烷氧基。

在一些实施例中，每个R³为氘。

在一些实施例中，每个R³独立地为卤素。在一些实施例中，R³为氟。在一些实施例中，R³为氯。在一些实施例中，每个R³独立地为羟基。

在一些实施例中，每个R³独立地为C3-C6环烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或C1-C3卤代烷基。

在一些实施例中，每个R³独立地为C1-C3烷基。例如，R³为甲基或乙基。在一些实施例中，每个R³独立地为C1-C3烷氧基。例如，R³为甲氧基或乙氧基。在一些实施例中，每个R³独立地为C1-C3卤代烷氧基。例如，R³为三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。在一些实施例中，每个R³独立地为C1-C3卤代烷基。例如，每个R³为三氟甲基或2,2,2-三氟乙基。

在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为1，并且每个R³为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且每个R³为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且R³为C1-C3烷基，所述R³基团为偕位C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-并且每个R³独立地为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且R³基团是偕位的。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且每个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-并且R³基团为偕位C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，一个R³为C1-C3烷基并且另一个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，一个R³为C1-C3烷氧基并且另一个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，R³基团为偕位C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，一个R³为C1-C3烷基并且另一个R³为C3-C6环烷基。在一些实施例中，m为2，并且一个R³为三氟甲基并且另一个R³为乙氧基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，并且R³基团为偕位C1-C3烷基和C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且一个R³为C1-C3卤代烷基并且另一个R³为C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，并且R³基团为偕位C1-C3卤代烷基和C3-C6环烷基。

在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为1，并且每个R³为甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且每个R³为甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，每个R³为甲基，并且两个R³基团为偕位甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，每个R³独立地为甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且R³基团是偕位的。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且每个R³为三氟甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，并且R³基团为偕位三氟甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为三氟甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，并且R³基团为偕位甲基和三氟甲基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为环丙基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，并且R³基团为偕位甲基和环丙基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且一个R³为三氟甲基并且另一个R³为环丙基。在一些实施例中，Q为-CH₂-，并且R³基团为偕位三氟甲基和环丙基。

在一些实施例中，Q为-CH₂-，m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧代基团。在一些实施例中，m为2，并且两个R³与其所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基)。在一些实施例中，m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成环丙基或环丁基。

在一些实施例中，两个R³与其所连接的碳原子一起形成4-8元杂环基。在一些实施例中，m为2，并且两个R³与其所连接的碳原子一起形成4-8元杂环基。在一些实施例中，两个R³与其所连接的碳原子一起形成4-6元杂环基。在一些实施例中，两个R³与其所连接的碳原子一起形成4元杂环基，如氧杂环丁烷基或氮杂环丁烷基。在一些实施例中，两个R³与其所连接的碳原子一起形成5元杂环基。在一些实施例中，两个R³与其所连接的碳原子一起形成6元杂环基，如四氢吡喃基。在一些实施例中，m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷基或四氢吡喃基。

在一些实施例中，m为3，两个R³基团为甲基，并且一个R³选自由甲基和羟基组成的组。

在一些实施例中，Q为O，m为1，并且每个R³为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且每个R³为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且R³为C1-C3烷基，所述R³基团为偕位C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为O，并且每个R³独立地为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且R³基团是偕位的。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且每个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为O，m为2，一个R³为C1-C3烷基并且另一个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为O，R³基团为偕位C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为O，m为2，一个R³为C1-C3烷基并且另一个R³为C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位C1-C3烷基和C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且一个R³为C1-C3卤代烷基并且另一个R³为C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位C1-C3卤代烷基和C3-C6环烷基。

在一些实施例中，Q为O，m为1，并且每个R³为甲基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且每个R³为甲基。在一些实施例中，Q为O，m为2，每个R³为甲基，并且两个R³基团为偕位甲基。在一些实施例中，Q为O，每个R³独立地为甲基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且R³基团是偕位的。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且每个R³为三氟甲基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位三氟甲基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为三氟甲基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位甲基和三氟甲基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为环丙基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位甲基和环丙基。在一些实施例中，Q为O，m为2，并且一个R³为三氟甲基并且另一个R³为环丙基。在一些实施例中，Q为O，并且R³基团为偕位三氟甲基和环丙基。

在一些实施例中，Q为O，m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起与其所连接的碳原子一起形成氧代基团。在一些实施例中，m为2，并且两个R³与其所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基)。

在一些实施例中，Q为NH，m为1，并且每个R³为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且每个R³为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且R³为C1-C3烷基，所述R³基团为偕位C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为NH，并且每个R³独立地为C1-C3烷基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且R³基团是偕位的。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且每个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，一个R³为C1-C3烷基并且另一个R³为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为NH，R³基团为偕位C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，一个R³为C1-C3烷基并且另一个R³为C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位C1-C3烷基和C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且一个R³为C1-C3卤代烷基并且另一个R³为C3-C6环烷基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位C1-C3卤代烷基和C3-C6环烷基。

在一些实施例中，Q为NH，m为1，并且每个R³为甲基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且每个R³为甲基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，每个R³为甲基，并且两个R³基团为偕位甲基。在一些实施例中，Q为NH，每个R³独立地为甲基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且R³基团是偕位的。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且每个R³为三氟甲基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位三氟甲基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为三氟甲基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位甲基和三氟甲基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为环丙基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位甲基和环丙基。在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且一个R³为三氟甲基并且另一个R³为环丙基。在一些实施例中，Q为NH，并且R³基团为偕位三氟甲基和环丙基。

在一些实施例中，Q为NH，m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起与其所连接的碳原子一起形成氧代基团。在一些实施例中，m为2，并且两个R³与其所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基)。

在一些实施例中，R⁴为苯基或5-6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1-2个独立选择的R⁶取代。在一些实施例中，R⁴为苯基或5-6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被2-3个独立选择的R⁶取代。在一些实施例中，R⁴为苯基或5-6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1个或3个独立选择的R⁶取代。在一些实施例中，R⁴为苯基或5-6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1个独立选择的R⁶取代。在一些实施例中，R⁴为苯基或5-6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被2个独立选择的R⁶取代。在一些实施例中，R⁴为苯基或5-6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被3个独立选择的R⁶取代。

在一些实施例中，R⁴为苯基或5元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1-3个独立地选自R⁶的取代基取代。在一些实施例中，R⁴为苯基或6元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1-3个独立地选自R⁶的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为任选地被1-3个独立选择的R⁶取代的苯基。在某些实施例中，R⁴为任选地被1个R⁶取代的苯基。在某些实施例中，R⁴为任选地被2个独立选择的R⁶取代的苯基。在某些实施例中，R⁴为任选地被3个独立选择的R⁶取代的苯基。

在一些实施例中，R⁴为未经取代的苯基。

在一些实施例中，R⁴为被1-3个独立地选自R⁶的取代基的取代的苯基。在某些实施例中，R⁴为被R⁶取代的苯基。在某些实施例中，R⁴为被2个独立选择的R⁶取代的苯基。在一些实施例中，R⁴为被3个独立选择的R⁶取代的苯基。

在一些实施例中，R⁴为任选地被1-3个(例如，2个)独立地选自R⁶的取代基取代的5-6元杂芳基。在一些实施例中，R⁴为任选地被1-3个(例如，2个)独立地选自R⁶的取代基取代的6元杂芳基。

在一些实施例中，R⁴为未经取代的5-6元杂芳基。

在一些实施例中，R⁴为被1-3个独立地选自R⁶的取代基取代的5-6元杂芳基。

在一些实施例中，R⁴为任选地被1-3个(例如，1个或2个)独立选择的R⁶取代的5-9元杂芳基。在一些实施例中，R⁴为被1-3个(例如，2个)独立地选自R⁶的取代基取代的5-9元杂芳基。在一些实施例中，R⁴为任选地被1-3个(例如，2个)独立地选自R⁶的取代基取代的9元杂芳基。在一些实施例中，R⁴为被一个选自R⁶的取代基取代的9元杂芳基。在一些实施例中，R⁴为含有吡啶基的9元杂芳基。在一些实施例中，R⁴为其中环B为任选地被1-2个(例如，1个)选自R⁶的取代基取代的4-5元杂环基。在一些实施例中，R⁴为/>

在一些实施例中，R⁴为未经取代的5-6元杂芳基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为卤素。在一些实施例中，R6中的至少一个为氟。在一些实施例中，R6中的至少一个为氯。在一些实施例中，R⁶中的一个为卤素。在一些实施例中，R⁶中的一个为氟。在一些实施例中，R⁶中的一个为氯。在一些实施例中，R⁶中的两个为卤素。在一些实施例中，R⁶中的两个为氟。在一些实施例中，R⁶中的两个为氯。在一些实施例中，R⁶中的三个为卤素。在一些实施例中，R⁶中的三个为氟。在一些实施例中，R⁶中的三个为氯。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为氰基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为氨基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为-(C＝O)NR^ER^F。在一些实施例中，R^E和R^F独立地为氢或C1-C3烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为C3-C6环烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为C1-C3烷基并且R^E和R^F中的另一者为C3-C6环烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为甲基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为乙基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为环丙基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为甲基并且R^E和R^F中的另一者为环丙基。在某些实施例中，R^E和R^F两者均为氢。在某些实施例中，R^E和R^F两者均为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^E和R^F两者均为甲基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为甲基并且R^E和R^F中的另一者为乙基。在一些实施例中，R^E和R^F两者均为乙基。

在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基。在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成任选地被1-2个卤素取代的4-6元杂环基。在某些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成4元杂环基。在某些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成氮杂环丁烷-1-基或3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基。在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成5元杂环基。在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成6元杂环基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂。在一些实施例中，每个(C1-C3烷基)相同。在一些实施例中，每个(C1-C3烷基)不同。在一些实施例中，每个(C1-C3烷基)为甲基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为-S(＝O)_p(C1-C3烷基)。在一些实施例中，每个(C1-C3烷基)相同。在一些实施例中，每个(C1-C3烷基)不同。在一些实施例中，每个(C1-C3烷基)为甲基。

在一些实施例中，p为1。在一些实施例中，p为2。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为C1-C3烷氧基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为甲氧基或乙氧基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被羟基取代的C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为未经取代的C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为被羟基取代的C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为三氟甲基、2,2-二氟乙基或2,2,2-三氟乙基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为1-羟基-2,2-二氟乙基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为C1-C3卤代烷氧基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为三氟甲氧基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3卤代烷基、4-6元杂环基或任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基、氨基或C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R⁶为任选地被C1-C3烷基取代的5-6元杂芳基，所述C1-C3烷基任选地被羟基或-NR^ER^F取代。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、C1-C3卤代烷基或任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基。在一些实施例中，R⁶为被C1-C3烷基取代的5-6元杂芳基，所述C1-C3烷基被羟基或-NR^ER^F取代。在一些实施例中，R⁶为被以下取代的5-6元杂芳基：羟甲基、氨基甲基、羟乙基、氨基乙基、丙-2-醇或丙-2-胺。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被4-6元杂环基取代的5-6元杂芳基。

在某些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被以下取代的5元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3烷基、氨基或C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被以下取代的6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3卤代烷基或任选被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基。在一些实施例中，R⁶为被以下取代的5元杂芳基：羟甲基、氨基甲基、羟乙基、氨基乙基、丙-2-醇或丙-2-胺。在一些实施例中，R⁶为被以下取代的6元杂芳基：羟甲基、氨基甲基、羟乙基、氨基乙基、丙-2-醇或丙-2-胺。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的甲基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为羟甲基、2-氨基乙基或甲氧基乙基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为任选地被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的乙基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为1-羟乙基或2-羟基丙烷-2-基。

在一些实施例中，R^E和R^F独立地为氢或C1-C3烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为C3-C6环烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为C1-C3烷基并且R^E和R^F中的另一者为C3-C6环烷基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为甲基。在一些实施例中，RE和RF中的一者为氢并且RE和RF中的另一者为乙基。在一些实施例中，R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为环丙基。在一些实施例中，RE和RF中的一者为甲基并且RE和RF中的另一者为环丙基。在某些实施例中，R^E和R^F两者均为氢。在某些实施例中，R^E和R^F两者均为C1-C3烷基。在一些实施例中，RE和RF两者均为甲基。在一些实施例中，RE和RF中的一者为甲基并且RE和RF中的另一者为乙基。在一些实施例中，R^E和R^F两者均为乙基。

在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基。在某些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成4元杂环基。在某些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成氮杂环丁烷基或2-氧代氮杂环丁烷-1-基。在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成5元杂环基。在某些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成2-氧代吡咯烷-1-基。在一些实施例中，R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成6元杂环基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为3-8元杂环基。在某些实施例中，R⁶中的至少一个为3元杂环基。在某些实施例中，R⁶中的至少一个为4元杂环基。在某些实施例中，R⁶中的至少一个为5元杂环基。在某些实施例中，R⁶中的至少一个为6元杂环基。在某些实施例中，R⁶中的至少一个为7元杂环基。在某些实施例中，R⁶中的至少一个为8元杂环基。

在一些实施例中，R⁶中的至少一个为C3-C6环烷氧基。在一些实施例中，R⁶中的至少一个为环丙氧基或环丁氧基。

在一些实施例中，R⁴为吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡咯基或咪唑基；其中的每一者被2个R⁶取代：一个R⁶为三唑基、咪唑基、噁唑基、吡唑基或吡咯烷基；并且另一个R⁶为甲基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氯或氰基。在一些实施例中，R⁴为吡啶基、嘧啶基或吡嗪基；其中的每一者被2个R⁶取代：一个R⁶为三唑基、咪唑基、噁唑基、吡唑基或吡咯烷基；并且另一个R⁶为甲基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氯或氰基。在一些实施例中，R⁴为被2个R⁶取代的吡啶基：一个R⁶为三唑基、咪唑基或噁唑基；并且另一个R⁶为甲基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氯或氰基。

在一些实施例中，每个R⁶独立地选自：卤素；氰基；氨基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；C1-C3烷基；和C3-C6环烷氧基。

在一些实施例中，R⁴为被1-3个独立选择的R⁶取代的3-吡啶基或4-吡啶基。

在一些实施例中，R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，当R⁴为时，R⁶选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3卤代烷基和C1-C3烷氧基。/>

在一些实施例中，当R⁴为 时，R⁶选自由以下组成的组：氰基、卤素、任选地被羟基取代的C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基和C1-C3烷氧基。

在一些实施例中，当R⁴为时，R⁶选自由以下组成的组：氰基、氯、二氟甲基、三氟甲基、二氟甲氧基和甲氧基。例如，当R⁴为/> 时，R⁶为氯或三氟甲基(例如，氯)。

在一些实施例中，R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基；并且

R^6B选自由以下组成的组：任选地被以下取代的5-6元杂芳基：氰基、任选地被羟基取代的C1-C3烷基、4-6元杂环基或氨基；-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂；-(C＝O)NR^ER^F；C1-C3烷氧基；任选地被羟基取代的C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；氰基；C3-C6环烷氧基；以及任选地被羟基取代的C1-C3烷基。

在一些实施例中，当R⁴为时，R^6A选自由以下组成的组：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基；并且

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-4-酮-2-基、四唑-5-基、2-甲基-四唑-5-基、1-甲基-四唑-5-基、咪唑-1-基、1-甲基-咪唑-3-基、1-甲基-5-氨基-咪唑-3-基、3-甲基咪唑-2-酮-1-基、1-甲基-吡唑-3-基、1-甲基-吡唑-4-基、1-甲基-吡唑-5-基、吡咯-1-基、噻唑-2-基、异噻唑烷-2-基-1,1-二氧化物、吡咯烷-2-酮-1-基、噁唑-2-基、噁二唑-2-基、2-氨基-嘧啶-4-基、-(C＝O)4-甲基哌嗪-1-基、2-氧代氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、-(C＝O)N(CH₃)₂、-(C＝O)NHCH₃、-(C＝O)NHCH₂CH₃、-(C＝O)NH环丙基、-(C＝O)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)、2-羟基丙烷-2-基、1-羟乙基、二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、甲基、氰基。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氯、甲基和三氟甲基；并且

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基和1,2,4-三唑-4-酮-2-基。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A为氯；并且

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、1,2,3-三唑-1-基和1,2,4-三唑-4-酮-2-基。

在一些实施例中，R⁴为其中R^6A、R^6B和R^6C独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，R⁴为其中R^6A、R^6B和R^6C独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基；

R^6B选自由以下组成的组：任选地被氰基、C1-C3烷基或氨基取代的5-6元杂芳基；-(C＝O)NR^ER^F；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；氰基；和C1-C3烷基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基；

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-4-酮-2-基、四唑-5-基、2-甲基-四唑-5-基、1-甲基-四唑-5-基、咪唑-1-基、1-甲基-咪唑-3-基、1-甲基-5-氨基-咪唑-3-基、3-甲基咪唑-2-酮-1-基、1-甲基-吡唑-3-基、1-甲基-吡唑-5-基、吡咯-1-基、噻唑-2-基、异噻唑烷-2-基-1,1-二氧化物、吡咯烷-2-酮-1-基、噁唑-2-基、噁二唑-2-基、2-氨基-嘧啶-4-基、-(C＝O)4-甲基哌嗪-1-基、-(C＝O)N(CH₃)₂、-(C＝O)NHCH₃、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、甲基、氰基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、甲基和三氟甲基。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氯和三氟甲基；

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基和1,2,4-三唑-4-酮-2-基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、氯、甲基和三氟甲基。

在一些实施例中，当R⁴为时，

R^6A为氯；

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2基和1,2,4-三唑-4-酮-2-基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、氯、甲基和三氟甲基。

在一些实施例中，R⁵为氢。

在一些实施例中，R⁵为卤素。例如，R⁵为氟。例如，R⁵为氯。在一些实施例中，R⁵为氰基。在一些实施例中，R⁵为羟基。

在一些实施例中，R⁵为C1-C3烷氧基。在一些实施例中，R⁵为甲氧基或乙氧基。

在一些实施例中，R⁵为C1-C3卤代烷氧基。在一些实施例中，R⁵为三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。

在一些实施例中，R⁵为C1-C3卤代烷基。在一些实施例中，R⁵为三氟甲基或2,2,2-三氟乙基。

在一些实施例中，R⁵为-NR^CR^D。在一些实施例中，R^C和R^D独立地为氢或C1-C3烷基。在某些实施例中，R^C和R^D中的一者为氢并且R^C和R^D中的另一者为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^C和R^D中的一者为氢并且R^C和R^D中的另一者为甲基。在一些实施例中，R^C和R^D中的一者为氢并且R^C和R^D中的另一者为乙基。在某些实施例中，R^C和R^D两者均为氢。在某些实施例中，R^C和R^D两者均为C1-C3烷基。在一些实施例中，R^C和R^D两者均为甲基。在一些实施例中，R^C和R^D中的一者为甲基并且R^C和R^D中的另一者为乙基。在一些实施例中，R^C和R^D两者均为乙基。

在一些实施例中，R^C和R^D与其所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基。在某些实施例中，R^C和R^D与其所连接的氮原子一起形成4元杂环基。在一些实施例中，R^C和R^D与其所连接的氮原子一起形成5元杂环基。在一些实施例中，RC和RD与其所连接的氮原子一起形成6元杂环基。

在一些实施例中，R⁵为C1-C3烷基。在一些实施例中，R⁵为甲基或乙基。

在一些实施例中，R^X为氢。在一些实施例中，R^X为卤素。在一些实施例中，R^X为氟。在一些实施例中，R^X为氯。

在一些实施例中，所述化合物是选自表1的化合物或其药学上可接受的盐。

表1

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^*有关异构体分离的详细信息，请参见实验程序。

制备过程

本文提供了制备式(I)化合物(例如，本文所描述的任何化合物)的方法，所述方法包括：

使式(I-A)化合物

与R⁴-NH₂反应；

以形成式(I)化合物。

在一些实施例中，使式(I-A)化合物与R⁴-NH₂(例如，5-氯-6-(三唑基)吡啶-3-胺)反应在存在POCl₃和吡啶的情况下进行。

在一些实施例中，使式(I-A)化合物与R⁴-NH₂反应在存在六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基氯甲脒酯(TCFH)的情况下进行。

在一些实施例中，使式(I-A)化合物与R⁴-NH₂反应在存在N-甲基咪唑(NMI)的情况下进行。

在一些实施例中，式(I-A)化合物是由式(I-A-N)化合物制备的：

在一些实施例中(当式(I-A)化合物由式(I-A-N)化合物制备时)，所述方法包括使式(I-A-N-i)化合物

与式(I-A-N-ii)化合物反应

以形成式(I-A-N)化合物。

在某些实施例中，在存在酸的情况下进行式(I-A-N-i)化合物与式(I-A-N-ii)化合物的反应。

在这些实施例中的某些实施例中，所述酸选自由盐酸和乙酸组成的组。

本文提供了制备式(I)化合物(例如，本文所描述的任何化合物)的方法，所述方法包括：

使式(I-B)化合物

与R⁴-Hal反应，其中Hal选自由Cl、Br、I和OSO₂CF₃组成的组；

以形成式(I)化合物。

在一些实施例中，使式(I-B)化合物与R⁴-Hal反应在存在催化剂和配体的情况下进行。

在一些实施例中(当使式(I-B)化合物与R⁴-Hal反应在存在催化剂和配体的情况下进行时)，所述催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯(0)。

在一些实施例中(当使式(I-B)化合物与R⁴-Hal反应在存在催化剂和配体的情况下进行时)，所述配体为4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽。

在一些实施例中，式(I-B)化合物是由式(I-A-N)化合物制备的：

在一些实施例中，所述方法包括使式(I-A-N-i)化合物

与式(I-A-N-ii)化合物反应

以形成式(I-A-N)化合物。

在一些实施例中，在存在酸的情况下进行式(I-A-N-i)化合物与式(I-A-N-ii)化合物的反应。

在一些实施例中(当在存在酸的情况下进行式(I-A-N-i)化合物与式(I-A-N-ii)化合物的反应时)，所述酸选自由盐酸和乙酸组成的组。

治疗方法

一些实施例提供了治疗需要此类治疗的受试者的自身免疫性病症(例如，MALT1相关自身免疫性病症)的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。在一些实施例中，所述自身免疫性病症是类风湿性关节炎、多发性硬化或系统性红斑狼疮(SLE)。

一些实施例提供了治疗需要此类治疗的受试者的炎性病症(例如，MALT1相关炎性病症)的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。在一些实施例中，所述炎性病症是慢性移植物抗宿主病(cGVHD)。

一些实施例提供了治疗需要此类治疗的受试者的癌症(例如，MALT1相关癌症)的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。例如，本文提供了用于治疗需要此类治疗的受试者的MALT1相关癌症的方法，所述方法包括：a)在来自所述受试者的样品中检测MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调；以及b)施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调包含一个或多个融合蛋白。

在本文描述的任何方法或用途的一些实施例中，所述癌症(例如，MALT1相关癌症)是血液癌症。在本文描述的任何方法或用途的一些实施例中，所述癌症(例如，MALT1相关癌症)是实体瘤。在本文描述的任何方法或用途的一些实施例中，所述癌症(例如，MALT1相关癌症)是肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、甲状腺癌(例如，乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌(例如，散发性甲状腺髓样癌或遗传性甲状腺髓样癌)、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌或难治性分化型甲状腺癌)、甲状腺腺瘤、内分泌腺肿瘤、肺腺癌、细支气管肺癌、2A或2B型多发性内分泌肿瘤(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、乳腺癌、乳腺瘤、乳腺肿瘤、结直肠癌(例如，转移性结直肠癌)、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜神经节神经瘤病、炎性肌纤维母细胞瘤或子宫颈癌。在本文描述的任何方法或用途的一些实施例中，所述癌症(例如，MALT1相关癌症)选自由以下组成的组：急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、青少年癌症、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸形瘤/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干神经胶质瘤、脑瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、类癌瘤、未知的原发性癌、心脏肿瘤、子宫颈癌、儿童期癌症、脊索瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓增生性肿瘤、按部位分布的肿瘤、肿瘤、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、皮肤血管肉瘤、胆管癌、原位导管癌、胚胎肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、嗅神经母细胞瘤、尤文肉瘤(Ewing sarcoma)、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、输卵管癌、骨纤维组织细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞瘤、妊娠滋养细胞疾病、胶质瘤、毛细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、胸腔肿瘤、头颈肿瘤、CNS肿瘤、原发性CNS肿瘤、心脏病、肝细胞癌、组织细胞增生、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、卡波济肉瘤(Kaposi sarcoma)、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增多症(Langerhans cellhistiocytosis)、喉癌、白血病、嘴唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨癌、黑色素瘤、默克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、中线癌、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、按部位分布的肿瘤、肿瘤、骨髓性白血病、髓样白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、肺肿瘤、肺癌、肺部肿瘤、呼吸道肿瘤、支气管癌、支气管肿瘤、口癌、口腔癌、唇癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体癌、浆细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、与妊娠有关的乳腺癌、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性腹膜癌、前列腺癌、直肠癌、结肠癌、结肠肿瘤、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞扎里综合征(Sezary syndrome)、皮肤癌、斯皮茨瘤(Spitz tumor)、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、鳞状颈癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂的移行细胞癌、未知的原发性癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌和维尔姆斯氏瘤(Wilms'tumor)。

在一些实施例中，所述癌症是血液癌症，如白血病或淋巴瘤。在一些实施例中，血液癌症(例如，作为MALT1相关癌症的血液癌症)选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也被称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤，例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、急性早幼粒细胞性白血病(APL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性粒细胞性白血病(CMML)、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)、急性未分化的白血病(AUL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、淋巴细胞性白血病(PML)、青少年骨髓单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、伴有三系骨髓增生异常的AML(AML/TMDS)、混合谱系白血病(MLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生异常(MPD)和多发性骨髓瘤(MM)。血液癌症的另外的实例包含骨髓增生异常(MPD)，如真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板减少症(ET)和特发性原发性骨髓纤维化(IMF/IPF/PMF)。在一些实施例中，血液癌症(例如，作为MALT1相关癌症的血液癌症)是AML或CMML。

在一些实施例中，所述癌症是胶质母细胞瘤、慢性粒细胞白血病、粒细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。

在一些实施例中，所述癌症(例如，MALT1相关癌症)是实体瘤。实体瘤(例如，作为MALT1相关癌症的实体瘤)的实例包含例如，肺癌(例如，肺腺癌、小细胞肺癌)、胰腺癌、胰腺导管癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、成神经细胞瘤和黑色素瘤。参见例如，Jiang等人,《癌症研究》2011,71,2183-2192；还参见Pan等人,《分子癌症研究》2016,14,93-102和Penas等人,《血液》2010,115,2214-2219。

在一些实施例中，受试者是人。

式(I)化合物和其药学上可接受的盐也可用于治疗MALT1相关癌症。式(I)化合物和其药学上可接受的盐也可用于治疗MALT1相关自身免疫性病症。式(I)化合物和其药学上可接受的盐也可用于治疗MALT1相关炎性病症。

因此，本文还提供了一种用于治疗被诊断为患有或鉴定为患有MALT1相关癌症(例如，本文所公开的任何示例性MALT1相关癌症)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。

在本文所提供的方法中的任一种的一些实施例中，式(I)化合物选自实例1-168。

MALT1蛋白酶、MALT1基因或其中任一者(例如，一者或多者)的表达或活性或水平的失调可以有助于肿瘤发生。例如，与野生型MALT1蛋白相比，融合蛋白可以具有增加的蛋白酶活性，由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导，野生型MALT1蛋白酶在哺乳动物细胞中的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)，MALT1mRNA剪接变体也可能引起MALT1失调。

在一些方面，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包含向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种用于治疗有需要的受试者的CBM复合物通路相关癌症(如本文所公开的任何癌症)的方法，所述方法包含向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。还提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包含：(a)将所述癌症鉴定为CBM复合物通路相关癌症；以及(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

将受试者的癌症鉴定为CBM复合物通路相关癌症可以通过任何适当的方法进行。在一些实施例中，将受试者的癌症鉴定为CBM复合物通路相关癌症的步骤包含执行测定以在来自受试者的样品中检测CBM复合物通路相关基因、CBM复合物通路相关蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，所述方法进一步包含从受试者获得样品(例如，活检样品)。所述测定可以是任何适当的测定。在一些实施例中，所述测定选自由测序(例如，焦磷酸测序或下一代测序)、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定和荧光原位杂交(FISH)组成的组。

此外，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包含向所述受试者向被鉴定为患有CBM复合物通路相关癌症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本文还提供了一种治疗受试者的MALT1相关癌症的方法，所述方法包含向被鉴定或诊断为患有MALT1相关癌症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包含：(a)确定所述癌症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

确定所述癌症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调有关可以使用任何适当的方法进行。在一些实施例中，确定所述受试者的癌症是MALT1相关癌症的步骤包含执行测定以在来自受试者的样品中检测MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，所述方法进一步包含从受试者获得样品(例如，活检样品)。所述测定可以是任何适当的测定。在一些实施例中，所述测定选自由测序(例如，焦磷酸测序或下一代测序)、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定和荧光原位杂交(FISH)组成的组。

如本文所描述的，CBM复合物通路相关癌症可以是任何适当的CBM复合物通路相关癌症(如本文所描述的任何癌症)。在一些实施例中，CBM复合物通路相关癌症选自由以下组成的组：CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症、与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症、CBM复合物相关癌症的组分、MALT1蛋白酶底物相关癌症、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症和其组合。在一些实施例中，所述CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症选自由以下组成的组：CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症、HER2相关癌症和其组合。在一些实施例中，与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症是蛋白激酶Cβ(PKCβ)相关癌症、蛋白激酶Cθ(PCKθ)相关癌症或其组合。在一些实施例中，CBM复合物相关癌症的组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、CARD10相关癌症、CARD9相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。在一些实施例中，CBM复合物相关癌症的组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。有关MALT1、CARD11和BCL10中的示例性失调，参见例如表B1、B2和B3。在一些实施例中，MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、Regnase 1相关癌症、roquin-1相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症、LIMA1α相关癌症和其组合。在一些实施例中，MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症和其组合。有关BCL10和A20中的示例性失调，参见例如表B3和B4。在一些实施例中，与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症选自由以下组成的组：TAK1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65(RelA)相关癌症、c-Rel相关癌症和其组合。在一些实施例中，与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症是IKKγ相关癌症。在一些实施例中，与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症选自由以下组成的组：JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症、MYD88转录因子相关癌症、AP-1转录因子相关癌症和其组合。

在一些实施例中，CBM复合物通路相关癌症是MALT1相关癌症。MALT1相关癌症可以具有任何适当的失调，如本文所描述的失调中的任一种。在一些实施例中，MALT1相关癌症包括IAP2-MALT1融合物。在一些实施例中，MALT1相关癌症包括IGH-MALT1融合物。

本文还提供了治疗CBM复合物通路相关疾病或病症、自身免疫性病症和炎性病症的方法。因此，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的自身免疫性病症的方法，所述方法包含向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包含向被鉴定或诊断为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些情况下，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的自身免疫性病症的方法，所述方法包含：(a)确定所述自身免疫性病症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包含向被确定为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。此外，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的炎性病症的方法，所述方法包含向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些情况下，本文提供了一种治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包含向被鉴定或诊断为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种用于治疗有需要的受试者的炎性病症的方法，所述方法包含：(a)确定所述炎性病症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本文还提供了一种治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包含向被确定为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本文另外提供了一种用治疗有需要的受试者的CBM复合物通路相关疾病或病症的方法，所述方法包含向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。还提供了一种用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包含：(a)将所述癌症鉴定为CBM复合物通路相关疾病或病症；以及(b)向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。此外，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包含向所述受试者向被鉴定为患有CBM复合物通路相关疾病或病症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

CBM复合物通路相关疾病或病症可以是任何适当的CBM复合物通路相关疾病或病症，如本文所描述的任何疾病或病症。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是自身免疫性疾病。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是炎性病症。在一些实施例中，所述CBM复合物通路相关癌症选自由以下组成的组：CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症、与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的疾病或病症、CBM复合物相关癌症的组分、MALT1蛋白酶底物相关癌症、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的疾病或病症、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的疾病或病症及其组合。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是MALT1相关疾病或病症。

在一些情况下，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以用于抑制细胞过程，如抑制细胞增殖。因此，本文提供了一种用于抑制哺乳动物细胞增殖的方法，所述方法包含使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。本文还提供了一种用于抑制哺乳动物细胞的CBM复合物通路活性的方法，所述方法包含使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。本文还提供了一种抑制哺乳动物细胞的MALT1蛋白酶活性的方法，所述方法包含使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。在一些实施例中，所述接触在体内发生。在一些实施例中，所述接触在体外发生。哺乳动物细胞可以是任何适当的细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物免疫细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物癌细胞是哺乳动物CBM复合物通路相关癌细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物癌细胞是哺乳动物MALT1相关癌细胞。在一些实施例中，哺乳动物细胞具有MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调是IAP2-MALT1融合、IGH-MALT1融合或其组合。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐也可以用于制备药物。因此，本文提供了一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗CBM复合物通路相关疾病或病症的药物中的用途。CBM复合物通路相关疾病或病症可以是任何适当的CBM复合物通路相关疾病或病症，如本文所描述的疾病或病症。在一些实施例中，所述CBM复合物通路相关疾病或病症选自由以下组成的组：CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症、与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的疾病或病症、CBM复合物相关癌症的组分、MALT1蛋白酶底物相关癌症、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的疾病或病症、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的疾病或病症和其组合。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是CBM复合物通路相关自身免疫性病症。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是CBM复合物通路相关炎性病症。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是CBM复合物通路相关癌症。在一些实施例中，CBM复合物通路相关疾病或病症是MALT1相关疾病或病症。在一些实施例中，MALT1相关疾病或病症包括MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调是IAP2-MALT1融合、IGH-MALT1融合或其组合。

在一些实施例中，本文所提供的化合物表现出脑和/或中枢神经系统(CNS)渗透性。此类化合物能够穿过血脑屏障并抑制脑和/或其它CNS结构中的MALT1蛋白酶。在一些实施例中，本文提供的化合物能够以有效量穿过血脑屏障。例如，对患有癌症(例如，MALT1相关癌症，如MALT1相关脑癌或CNS癌症)的受试者的治疗可以包含向所述受试者施用(例如，口服施用)化合物。在一些此类实施例中，本文所提供的化合物可用于治疗原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤。例如，所述化合物可以用于治疗一种或多种神经胶质瘤，如胶质母细胞瘤(也被称为多形胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤和混合性胶质瘤、脑膜瘤、髓母细胞瘤、颅内节细胞胶质瘤、神经鞘瘤(schwannomas/neurilemmomas)和颅咽管瘤(参见例如以下文献中列出的肿瘤：Louis,D.N.等人《神经病学学报(ActaNeuropathol)》131(6),803-820(2016年6月))。在一些实施例中，脑肿瘤是原发性脑肿瘤。在一些实施例中，先前已经用另一种抗癌剂，例如，另一种蛋白酶抑制剂(例如，并非式(I)化合物的化合物)对受试者进行了治疗。在一些实施例中，脑肿瘤是转移性脑肿瘤。在一些实施例中，先前已经用另一种抗癌剂，例如，另一种蛋白酶抑制剂(例如，并非式(I)化合物的化合物)对受试者进行了治疗。

在本文描述的方法或用途中的任一种的一些实施例中，用于使用来自受试者的样品确定受试者是否具有基因(例如，MALT1基因)、或蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调的测定可以包含例如下一代测序、免疫组织化学、荧光显微镜、FISH分离分析、Southern印迹、蛋白质印迹、FACS分析、Northern印迹和基于PCR的扩增(例如，RT-PCR和定量实时RT-PCR)。如本领域众所周知的，通常用例如至少一个标记的核酸探针或至少一个标记的抗体或其抗原结合片段来进行所述测定。测定可以利用本领域已知的其它检测方法来检测基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，样品是来自受试者的生物样品或活检样品(例如，石蜡包埋的活检样品)。在一些实施例中，受试者是怀疑患有MALT1相关癌症的受试者、具有MALT1相关癌症的一种或多种症状的受试者和/或患MALT1相关癌症的风险增加的的受试者)。

在一些实施例中，可以使用液体活检(不同地被称为液体活检或液体相活检)来鉴定基因(例如，MALT1基因)、MALT1蛋白(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。液体活检方法可以用于检测总的肿瘤负荷和/或基因(例如，MALT1蛋白)、MALT1蛋白(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。可以对(例如，通过简单的抽血)相对容易从受试者获得的生物样品进行液体活检，并且与用于检测肿瘤负荷和/或和/或基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调的传统方法相比，所述液体活检侵入性较小。在一些实施例中，与传统方法相比，可以在更早的阶段使用液体活检来检测是否存在基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，用于液体活检的生物样品可以包含血液、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、痰、支气管肺泡灌洗液、胆汁、淋巴液、囊肿液、粪便、腹水和其组合。在一些实施例中，液体活检可以用于检测循环性肿瘤细胞(CTC)。在一些实施例中，液体活检可以用于检测无细胞DNA。在一些实施例中，使用液体活检检测到的无细胞DNA是循环性肿瘤DNA(ctDNA)，其源自肿瘤细胞。对ctDNA的分析(例如，使用敏感的检测技术，如但不限于下一代测序(NGS)、传统PCR、数字PCR或微阵列分析)可以用于鉴定基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。

在一些实施例中，可以使用液体活检来检测源自单个基因的ctDNA。在一些实施例中，可以使用液体活检来检测源自多个基因(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个或更多个基因，或者在这些数目之间的任何数目的基因)的ctDNA。在一些实施例中，可以使用多种市售测试面板(例如，被设计成检测基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调的市售测试面板)中的任何一种测试面板来检测源自多个基因的ctDNA。液体活检可以用于检测基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调，包含但不限于点突变或单核苷酸变体(SNV)、拷贝数变体(CNV)、基因融合(例如，易位或重排)、插入、缺失或其任何组合。在一些实施例中，液体活检可以用于检测种系突变。在一些实施例中，液体活检可以用于检测体细胞突变。在一些实施例中，液体活检可以用于检测原发性基因突变(例如，与疾病(例如，癌症)的初始发展相关的原发性突变或原发性融合)。在一些实施例中，在受试者中存在的癌细胞中(例如，在肿瘤中)也存在使用液体活检鉴定的基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，可以使用液体活检来检测本文所描述的基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调。在一些实施例中，通过液体活检鉴定的基因突变可以用于将受试者鉴定为特定治疗的候选者。例如，在受试者中检测到基因(例如，MALT1基因)、蛋白质(例如，MALT1蛋白)或其中任一者的表达或活性或水平的失调可以表明受试者将对包含施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐的治疗有应答。

可以在诊断过程、监测过程和/或治疗过程期间多次进行液体活检，以确定一个或多个临床相关参数，所述临床相关参数包含但不限于疾病的进展和/或治疗的功效。例如，在诊断过程、监测过程和/或治疗过程期间，可以在第一时间点进行第一次液体活检，并且可以在第二时间点进行第二次液体活检。在一些实施例中，第一时间点可以是在诊断患有疾病的受试者之前的时间点(例如，当受试者健康时)，而第二时间点可以是受试者患有疾病之后的时间点(例如，第二时间点可以用于诊断患有该疾病的受试者)。在一些实施例中，第一时间点可以是在诊断患有疾病的受试者之前的时间点(例如，当受试者健康时)，之后对此受试者进行监视，而第二时间点可以是在监视受试者之后的时间点。在一些实施例中，第一时间点可以是在诊断患有疾病的受试者之后的时间点，之后对此受试者施用治疗，而第二时间点可以是在施用治疗之后的时间点；在这种情况下，第二时间点可一用于评估治疗的功效(例如，在第一时间点检测到的一个或多个基因突变是否大量减少或无法检测到)。在一些实施例中，要向受试者施用的治疗可以包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

在一些实施例中，可以通过评估在不同时间点从受试者获得的cfDNA(例如，在第一时间点从受试者获得的cfDNA和在第二时间点从受试者获得的cfDNA)中基因(例如，MALT1基因)失调的等位基因频率来确定式(I)化合物或其药学上可接受的盐的功效，其中在第一时间点和第二时间点之间向受试者施用至少一个剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。这些方法的一些实施例可以进一步包含在第一时间点和第二时间点之间向受试者施用至少一个剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。例如，与在第一时间点从受试者获得的cfDNA中基因(例如，MALT1基因)失调的等位基因频率(AF)相比，在第二时间点从受试者获得的cfDNA中基因(例如，MALT1基因)失调的等位基因频率(AF)减少(例如，减少1％至约99％、减少1％至约95％、减少1％至约90％、减少1％至约85％、减少1％至约80％、减少1％至约75％、减少1％至减少约70％、减少1％至减少约65％、减少1％至减少约60％、减少1％至减少约55％、减少1％至减少约50％、减少1％至减少约45％、减少1％至减少约40％、减少1％至减少约35％、减少1％至减少约30％、减少1％至减少约25％、减少1％至减少约20％、减少1％至减少约15％、减少1％至减少约10％、减少1％至减少约5％、减少约5％至约99％、减少约10％至约99％、减少约15％至约99％、减少约20％至约99％、减少约25％至约99％、减少约30％至约99％、减少约35％至约99％、减少约40％至约99％、减少约45％至约99％、减少约50％至约99％、减少约55％至约99％、减少约60％至约99％、减少约65％至约99％、减少约70％至约99％、减少约75％至约95％、减少约80％至约99％、减少约90％至约99％、减少约95％至约99％、减少约5％至约10％、减少约5％至约25％、减少约10％至约30％、减少约20％至约40％、减少约25％至约50％、减少约35％至约55％、减少约40％至约60％、减少约50％至约75％、减少约60％至约80％或减少约65％至约85％)，这表明式(I)化合物或其药学上可接受的盐对受试者有效。在一些实施例中，减小AF，使得水平低于仪器的检测极限。可替代地，与在第一时间点从受试者获得的cfDNA中基因(例如，MALT1基因)失调的等位基因频率(AF)相比，在第二时间点从受试者获得的cfDNA中基因(例如，MALT1基因)失调的等位基因频率(AF)增加，这表明式(I)化合物或其药学上可接受的盐对受试者无效。这些方法的一些实施例可以进一步包含向其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐被确定为有效的受试者施用另外剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。这些方法的一些实施例可以进一步包含向其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐被确定为无效的受试者施用不同的治疗(例如，不包含作为单一疗法施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐的治疗)。

在这些方法的一些实例中，第一时间点和第二时间点之间的时间差可以为约1天至约1年、约1天至约11个月、约1天至约10个月、约1天至约9个月、约1天至约8个月、约1天至约7个月、约1天至约6个月、约1天至约5个月、约1天至约4个月、约1天至约3个月、约1天至约10周、约1天至约2个月、约1天至约6周、约1天至约1个月、约1天至约25天、约1天至约20天、约1天至约15天、约1天至约10天、约1天至约5天、约2天至约1年、约5天至约1年、约10天至约1年、约15天至约1年、约20天至约1年、约25天至约1年、约1个月至约1年、约6周至约1年、约2个月至约1年、约3个月至约1年、约4个月至约1年、约5个月至约1年、约6个月至约1年、约7个月至约1年、约8个月至约1年、约9个月至约1年、约10个月至约1年、约11个月至约1年、约1天至约7天、约1天至约14天、约5天至约10天、约5天至约20天、约10天至约20天、约15天至约1个月、约15天至约2个月、约1周至约1个月、约2周至约1个月、约1个月至约3个月、约3个月至约6个月、约4个月至约6个月、约5个月至约8个月或约7个月至约9个月。在这些方法的一些实施例中，受试者可以事先被鉴定为患有具有失调的基因(例如，本文所述的失调的基因的任何实例)(例如，MALT1基因)的癌症。在这些方法的一些实施例中，受试者可以事先被诊断患有本文所描述的任何类型的癌症。在这些方法的一些实施例中，受试者可以具有一种或多种转移(例如，一种或多种脑转移)。

在上述实施例中的一些实施例中，cfDNA包括ctDNA，如MALT1相关ctDNA。例如，cfDNA是ctDNA，如MALT1相关ctDNA。在一些实施例中，确定cfDNA的至少一部分是MALT1相关ctDNA，例如，确定测序和/或定量的量的总cfDNA具有MALT1融合和/或MALT1的过表达。

在医学肿瘤学领域，通常的实践是使用不同形式的治疗的组合来治疗每个患有癌症的受试者。在医学肿瘤学中，除本文提供的组合物外，此类联合治疗或疗法的一种或多种其它组分还可以是例如外科手术、放射疗法和化学治疗剂，如其它蛋白酶抑制剂、激酶抑制剂、信号转导抑制剂和/或单克隆抗体。

例如，外科手术可以是开放手术或微创手术。因此，式(I)化合物或其药学上可接受的盐也可以用作癌症治疗的佐剂，即，其可以与一种或多种另外的疗法或治疗剂(例如，通过相同或不同的作用机理起作用的化学治疗剂)组合使用。在一些实施例中，可以在施用另外的治疗剂或另外的疗法之前施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。例如，可以在一段时间内向有需要的受试者施用一个或多个剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，并且然后至少部分地切除肿瘤。在一些实施例中，在至少部分地切除肿瘤之前，用一个或多个剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐进行治疗可减少肿瘤的大小(例如，肿瘤负荷)。在一些实施例中，可以在一段时间内并在一轮或多轮放射疗法下向有需要的受试者施用一个或多个剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在进行一轮或多轮放射疗法之前，用一个或多个剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐进行治疗可减少肿瘤的大小(例如，肿瘤负荷)。

在一些实施例中，受试者患有难治的或对标准疗法(例如，施用化学治疗剂)，如第一MALT1抑制剂、激酶抑制剂、免疫疗法、细胞或基因疗法或放射法(例如，放射性碘)不耐受的癌症。在一些实施例中，受试者患有难治的或对先前疗法(例如，施用化学治疗剂，如第一MALT1抑制剂或另一种蛋白酶抑制剂、免疫疗法、细胞或基因疗法或放射法(例如，放射性碘)不耐受的癌症。在一些实施例中，受试者患有没有标准疗法的癌症(例如，局部晚期或转移性肿瘤)。在一些实施例中，受试者未使用过MALT1蛋白酶抑制剂。例如，受试者未用选择性MALT1蛋白酶抑制剂进行过治疗。在一些实施例中，受试者使用过MALT1蛋白酶抑制剂。

在本文所描述的方法中的任一种的一些实施例中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐与有效量的至少一种另外的治疗剂组合施用，所述至少一种另外的治疗剂选自一种或多种另外的疗法或治疗剂(例如，化学疗法或免疫调节剂)。另外的疗法或治疗剂可以是任何适当的另外的疗法或治疗剂，如本文所描述的任何另外的疗法或治疗剂。

另外的治疗剂的非限制性实例包含：其它MALT1靶向治疗剂(即第一或第二MALT1蛋白酶抑制剂，例如，JNJ-67856633或CTX-177)、其它蛋白酶抑制剂、激酶抑制剂(例如，受体酪氨酸激酶靶向治疗剂，如BTK或EGFR抑制剂)、信号转导通路抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡通路的调节剂(例如，维奈托克(venetoclax)或奥巴克拉(obataclax))；细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向剂(包含抗体和基于细胞的免疫疗法，以及抗体-药物缀合物)和放射疗法。

在一些实施例中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及另外的治疗剂以单独剂量同时施用。在一些实施例中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及另外的治疗剂以单独剂量按任何顺序依次施用。

在一些实施例中，其它MALT1靶向治疗剂是表现出MALT1抑制活性的另一种蛋白酶抑制剂。在一些实施例中，其它MALT1靶向治疗抑制剂对MALT1蛋白酶具有选择性。示例性MALT1蛋白酶抑制剂可以针对MALT1蛋白酶表现出小于约1000nM、小于约500nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文所描述的测定中所测量的。在一些实施例中，MALT1蛋白酶抑制剂可以针对MALT1蛋白酶表现出小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文所提供的测定中所测量的。

蛋白酶靶向治疗剂(例如，第一MALT1抑制剂或第二MALT1抑制剂)的非限制性实例包含JNJ-67856633和CTX-177。

多激酶抑制剂的非限制性实例包含：阿来替尼(alectinib)(9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基]-11-氧代-6,11-二氢-5H-苯并[b]咔唑-3-甲腈)；阿穆伐替尼(amuvatinib)(MP470，HPK56)(N-(1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基甲基)-4-([1]本并呋喃[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-碳硫酰胺)；阿帕替尼(apatinib)(YN968D1)(N-[4-(1-氰基环戊基)苯基-2-(4-皮考基)氨基-3-甲磺酸烟酰胺)；卡博替尼(cabozantinib)(CometriqXL-184)(N-(4-((6,7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯基)-N'-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；多韦替尼(dovitinib)(TKI258；GFKI-258；CHIR-258)((3Z)-4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,3-二氢苯并咪唑-2-亚基]喹啉-2-酮)；法米替尼(famitinib)(5-[2-(二乙基氨基)乙基]-2-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮)；费达拉替尼(fedratinib)(SAR302503，TG101348)(N-(2-甲基-2-丙酰基)-3-{[5-甲基-2-({4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基}氨基)-4-嘧啶基]氨基}苯磺酰胺)；福替尼(foretinib)(XL880，EXEL-2880，GSK1363089，GSK089)(N1'-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-(3-吗啉丙氧基)-4-喹啉基]氧基]苯基]-N1-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；福斯塔曼替尼(fostamantinib)(R788)(2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮，6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]-2,2-二甲基-4-[(磷酰氧基)甲基]-，钠盐(1:2))；伊洛司替布(ilorasertib)(ABT-348)(1-(4-(4-氨基-7-(1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基)噻吩并[3,2-c]吡啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲)；乐伐替尼(lenvatinib)(E7080，乐卫玛(Lenvima))(4-[3-氯-4-(环丙基氨基羰基)氨基苯氧基]-7-甲氧基-6-喹啉甲酰胺)；莫特塞尼(motesanib)(AMG 706)(N-(3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基)-2-[(吡啶-4-基甲基)氨基]吡啶-3-甲酰胺)；(nintedanib)(3-Z-[1-(4-(N-((4-甲基-哌嗪-1-基)-甲基羰基)-N-甲基-氨基)-苯胺基)-1-苯基-亚甲基]-6-甲氧基羰基-2-吲哚酮)；帕纳替尼(ponatinib)(AP24534)(3-(2-咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-[4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺)；PP242(托克尼(torkinib))(2-[4-氨基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]-1H-吲哚-5-醇)；奎扎替尼(quizartinib)(1-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-3-(4-(7-(2-吗啉乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲)；瑞戈非尼(regorafenib)(BAY 73-4506，斯蒂瓦尔加(stivarga))(4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺水合物)；RXDX-105(CEP-32496，阿吉拉芬尼(agerafenib))(1-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)-3-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)异噁唑-3-基)脲)；塞马沙尼(semaxanib)(SU5416)((3Z)-3-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亚甲基]-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮)；西曲伐替尼(sitravatinib)(MGCD516，MG516)(N-(3-氟-4-{[2-(5-{[(2-甲氧基乙基)氨基]甲基}-2-吡啶基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基]氧基}苯基)-N′-(4-氟苯基)-1,1-环丙烷二甲酰胺)；索拉非尼(sorafenib)(BAY 43-9006)(4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲酰胺)；伐地他尼(vandetanib)(N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺)；伐他尼(vatalanib)(PTK787，PTK/ZK，ZK222584)(N-(4-氯苯基)-4-(吡啶-4-基甲基)酞嗪-1-胺)；AD-57(N-[4-[4-氨基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-N′-[3-(三氟甲基)苯基]-脲)；AD-80(1-[4-(4-氨基-1-丙-2-基吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基]-3-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]脲)；AD-81(1-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲)；ALW-II-41-27(N-(5-((4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)-5-(噻吩-2-基)烟酰胺)；BPR1K871(1-(3-氯苯基)-3-(5-(2-((7-(3-(二甲基氨基)丙氧基)喹唑啉-4-基)氨基)乙基)噻唑-2-基)脲)；CLM3(1-苯乙基-N-(1-苯基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；EBI-907(N-(2-氯-3-(1-环丙基-8-甲氧基-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-7-基)-4-氟苯基)-3-氟丙烷-1-磺酰胺)；NVP-AST-487(N-[4-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]-N'-[4-[[6-(甲基氨基)-4-嘧啶基]氧基]苯基]-脲)；NVP-BBT594(BBT594)(5-((6-乙酰胺嘧啶-4-基)氧基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)吲哚啉-1-甲酰胺)；PD173955(6-(2,6-二氯苯基)-8-甲基-2-(3-甲基硫烷基苯胺)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮)；PP2(4-氨基-5-(4-氯苯基)-7-(二甲基乙基)吡唑并[3,4-d]嘧啶)；PZ-1(N-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺)；RPI-1(1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-H-吲哚-2-酮；(3E)-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-5,6-二甲氧基-1H-吲哚-2-酮)；SGI-7079(3-[2-[[3-氟-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-苯乙腈)；SPP86(1-异丙基-3-(苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；SU4984(4-[4-[(E)-(2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]苯基]哌嗪-1-甲醛)；苏尼替尼(sunitinb)(SU11248)(N-(2-二乙基氨基乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)；TG101209(N-叔丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺)；魏菲灵A(Withaferin A)((4β,5β,6β,22R)-4,27-二羟基-5,6:22,26-二环氧麦角甾-2,24-二烯-1,26-二酮)；XL-999((Z)-5-((1-乙基哌啶-4-基)氨基)-3-((3-氟苯基)(5-甲基-1H-咪唑-2-基)亚甲基)吲哚啉-2-酮)；BPR1J373(5-苯基噻唑-2-基胺-嘧啶衍生物)；CG-806(CG'806)；DCC-2157；GTX-186；HG-6-63-01((E)-3-(2-(4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烯基)-N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲酰胺)；SW-01(盐酸环苯扎林)；XMD15-44(N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-(吡啶-3-基乙炔基)苯甲酰胺(由结构生成))；ITRI-305(D0N5TB，DIB003599)；BLU-667((1S,4R)-N-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲氧基-4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺)；BLU6864；DS-5010；GSK3179106；GSK3352589；NMS-E668；TAS0286/HM05；TPX0046；以及N-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺。

受体酪氨酸激酶(例如，Trk)靶向治疗剂的非限制性实例包含阿法替尼(afatinib)、卡博替尼、西妥昔单抗(cetuximab)、克唑替尼(crizotinib)、达拉非尼(dabrafenib)、恩曲替尼(entrectinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、伊马替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来他替尼(lestaurtinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、帕尼单抗(panitumumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、舒尼替尼、曲妥珠单抗(trastuzumab)、l-((3S,4R)-4-(3-氟苯基)-l-(2-甲氧基乙基)吡咯烷-3-基)-3-(4-甲基-3-(2-甲基嘧啶-5-基)-l-苯基-lH-吡唑-5-基)脲、AG 879、AR-772、AR-786、AR-256、AR-618、AZ-23、AZ623、DS-6051、6976、GNF-5837、GTx-186、GW 441756、LOXO-101、MGCD516、PLX7486、RXDX101、VM-902A、TPX-0005、TSR-011、GNF-4256、N-[3-[[2,3-二氢-2-氧代-3-(1H-吡咯-2-基亚甲基)-1H-吲哚-6-基]氨基]-4-甲基苯基]-N'-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-脲、AZ623、AZ64、(S)-5-氯-N2-(1-(5-氟吡啶-2-基)乙基)-N4-(5-异丙氧基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺、AZD7451、CEP-751、CT327、舒尼替尼、GNF-8625以及(R)-1-(6-(6-(2-(3-氟苯基)吡咯烷-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-[2,4′-二吡啶]-2′-基)哌啶-4-醇。

在一些实施例中，另外的治疗剂是BRAF抑制剂。BRAF抑制剂的非限制性实例包含：达拉非尼、威罗非尼(vemurafenib)(也被称为RG7204或PLX4032)、对甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib tosylate)、PLX-4720、GDC-0879、BMS-908662(百时美施贵宝公司(Bristol-Meyers Squibb))、LGX818(诺华公司(Novartis))、PLX3603(豪夫迈罗氏公司(Hofmann-LaRoche))、RAF265(诺华公司)、RO5185426(豪夫迈罗氏公司)和GSK2118436(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))。BRAF抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

在一些实施例中，另外的治疗剂是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR)。例如，EGFR抑制剂可以包含奥希替尼(osimertinib)(merelectinib，Tagrisso)、厄洛替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、西妥昔单抗(Erbitux)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)(Portrazza)、来那替尼(neratinib)(Nerlynx)、拉帕替尼(Tykerb)、帕尼单抗(Vectibix)和凡德他尼(Caprelsa)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是Ras-Raf-MEK-ERK通路抑制剂(例如，比美替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、康奈非尼(encorafenib)、索拉非尼、曲美替尼(trametinib)和威罗非尼)、PI3K-Akt-mTOR-S6K通路抑制剂(例如，依维莫司(everolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、哌立福新(perifosine)、替西罗莫司(temsirolimus))和其它激酶抑制剂，如巴瑞替尼(baricitinib)、布加替尼(brigatinib)、卡马替尼(capmatinib)、达鲁色替(danusertib)、依鲁替尼(ibrutinib)、密西尼(milciclib)、槲皮素(quercetin)、瑞戈非尼、鲁索替尼(ruxolitinib)、司马沙尼、AP32788、BLU285、BLU554、INCB39110、INCB40093、INCB50465、INCB52793、INCB54828、MGCD265、NMS-088、NMS-1286937、PF 477736((R)-氨基-N-N-[5,6-二氢-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-氧代-1H吡咯并[4,3,2-ef][2,3]苯并二氮杂-8-基]-环己烷乙酰胺)、PLX3397、PLX7486、PLX8394、PLX9486、PRN1008、PRN1371、RXDX103、RXDX106、RXDX108和TG101209(N-叔丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是BTK抑制剂。BTK抑制剂的非限制性实例包含依鲁替尼、阿卡替尼(acalabrutinib)和泽布替尼(zanubrutinib)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是Bcl-2抑制剂。Bcl-2抑制剂的非限制性实例包含维奈托克、纳维托克(navitoclax)、奥利默森(oblimersen)、奥贝托克和AT-101。

在一些实施例中，另外的治疗剂是PI3K抑制剂。PI3K抑制剂的非限制性实例包含艾德拉尼(idelalisib)、库潘尼西(copanlisib)、杜韦利西布(duvelisib)、阿培利司(alpelisib)、塔西利司(taselisib)、布帕尼西(buparlisib)、厄布利塞(umbralisib)和库潘尼西。

在一些实施例中，另外的治疗剂是mTOR抑制剂。mTOR抑制剂的非限制性实例包含依维莫司、替西罗莫司和瑞达莫司(ridaforolimus)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是HDAC抑制剂。HDAC抑制剂的非限制性实例包含伏立诺他(vorinostat)、罗米地辛(romidepsin)、贝立司他(belinostat)、西达本胺(chidamide)、帕比司他(panobinostat)、CXD101和艾贝司他(abexinostat)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是检查点抑制剂。检查点抑制剂的非限制性实例包含伊匹木单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、纳武单抗(nivolumab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、MPDL3208A、MEDI4736、MSB0010718C、BMS-936559、BMS-956559、BMS-935559(MDX-1105)、AMP-224和派姆单抗(pembrolizumab)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是细胞毒性化学疗法。在一些实施例中，细胞毒性化学疗法包含三氧化二砷(arsenic trioxide)、博来霉素(bleomycin)、苯达莫司汀(bendamustine)、卡巴他赛(cabazitaxel)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、柔红霉素(daunorubicin)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、依托泊苷(etoposide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、吉西他滨、伊立替康(irinotecan)、洛莫司丁(lomustine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素C(mitomycin C)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、替莫唑胺(temozolomide)和长春新碱(vincristine)。

在一些实施例中，另外的治疗剂是血管生成靶向治疗剂。靶向血管生成的疗法的非限制性实例包含来那度胺(lenalidomide)、恩扎妥林(enzastaurine)、阿柏西普(aflibercept)和贝伐单抗(bevacizumab)。

在一些实施例中，另外的疗法或治疗剂可以包含组氨酰-tRNA合成酶(HRS)多肽或编码HRS多肽的可表达核苷酸。

术语“免疫疗法”是指调节免疫系统的药剂。在一些实施例中，免疫疗法可以增加免疫系统调节剂的表达和/或活性。在一些实施例中，免疫疗法可以降低免疫系统调节剂的表达和/或活性。在一些实施例中，免疫疗法可以募集和/或增强免疫细胞的活性。

在一些实施例中，免疫疗法是细胞免疫疗法(例如，过继T细胞疗法、树突状细胞疗法、自然杀伤细胞疗法)。在一些实施例中，细胞免疫疗法是sipuleucel-T(APC8015；Provenge^TM；Plosker(2011)《药物(Drugs)》71(1):101-108)。在一些实施例中，细胞免疫疗法包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞。在一些实施例中，细胞免疫疗法是CAR-T细胞疗法。在一些实施例中，CAR-T细胞疗法是替沙仑赛(tisagenlecleucel)(Kymria)。在一些实施例中，CAR-T细胞疗法是阿基仑赛(axicabtagene ciloleucel)(Yescarta)。在一些实施例中，CAR-T细胞疗法是布瑞基奥仑赛(brexucabtagene autoleucel)(Tecartus)。在一些实施例中，CAR-T细胞疗法是瑞基奥仑赛(relmacabtagene autoleucel)。在一些实施例中，CAR-T细胞疗法是ALLO-501。

在一些实施例中，免疫疗法是抗体疗法(例如，单克隆抗体、缀合抗体或双特异性抗体)。在一些实施例中，抗体疗法是贝伐单抗(Mvasti^TM，)、曲妥珠单抗阿维单抗(avelumab)/>利妥昔单抗(rituximab)(MabThera^TM，)、含有人透明质酸酶的利妥昔单抗(Rituxan Hycela^TM)、依决洛单抗(edrecolomab)(Panorex)、达雷妥尤单抗(daratumuab)/>奥拉单抗(olaratumab)(Lartruvo^TM)、奥法木单抗(ofatumumab)/>阿仑单抗(alemtuzumab)/>西妥昔单抗/>奥戈伏单抗(oregovomab)、派姆单抗地努妥昔单抗(dinutiximab)/>阿托珠单抗(obinutuzumab)曲美木单抗(CP-675、206)、雷莫芦单抗(ramucirumab)/>乌利妥昔单抗(ublituximab)(TG-1101)、帕尼单抗/>依洛珠单抗(elotuzumab)(Empliciti^TM)、阿维单抗(avelumab)/>耐昔妥珠单抗(Portrazza^TM)、西妥珠单抗(cirmtuzumab)(UC-961)、伊布单抗(ibritumomab)/>伊沙妥昔单抗)(isatuximab)(SAR650984)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、非苏木单抗(fresolimumab)(GC1008)、利瑞鲁单抗(lirilumab)(INN)、莫格利珠单抗(mogamulizumab)/>非克拉珠单抗(ficlatuzumab)(AV-299)、地舒单抗(denosumab)/>仑兹鲁单抗(lenzilumab)、阿维单抗、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、派姆单抗、乌托鲁单抗(utomilumab)、乌利妥昔单抗、博纳吐单抗(blinatumomab)、盖尼塔单抗(ganitumab)、乌瑞芦单抗(urelumab)、匹地利珠单抗、阿麦妥单抗(amatuximab)、莫舒尼妥珠单抗(mosunetuzumab)(BTCT4465A)、CD20-TCB、RO7082859、XmAb13676、格菲妥单抗(glofitamab)、CD20-TDB、奥尼妥单抗(odronextamab)(REGN1979)、IGM-2323、BTCT4465A、AMG-562或TTI-621。

在一些实施例中，免疫疗法是抗体-药物缀合物。在一些实施例中，抗体-药物缀合物是吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(Mylotarg^TM)、奥英妥珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)维汀-本妥昔单抗(brentuximab vedotin)恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)(TDM-1；/>)、索星-米妥昔单抗(mirvetuximab soravtansine)(IMGN853)、雷星-阿奈妥单抗(anetumabravtansine)、维汀-泊洛妥珠单抗(polatuzumab vedotine)、替朗妥昔单抗(loncastuximab tesirine)(ADCT-402)、替卡利尤单抗(camidanlumab tesirine)(ADCT-301)或恩星-那妥昔单抗(naratuximab emtansine)(Debio 1562)。

在一些实施例中，免疫疗法包含博纳吐单抗(AMG103；)或米哚妥林(midostaurin)(Rydapt)。

在一些实施例中，免疫疗法包含毒素。在一些实施例中，免疫疗法是地尼白介素(denileukin diftitox)

在一些实施例中，免疫疗法是细胞因子疗法。在一些实施例中，细胞因子疗法是白介素2(IL-2)疗法、干扰素α(IFNα)疗法、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)疗法、白介素12(IL-12)疗法、白介素疗法15(IL-15)疗法、白介素7(IL-7)疗法或促红细胞生成素α(EPO)疗法。在一些实施例中，IL-2疗法是阿地白介素(aldesleukin)在一些实施例中，IFNα疗法是/>在一些实施例中，G-CSF疗法是非格司亭(filgrastim)/>

在一些实施例中，免疫疗法是免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，免疫疗法包含一种或多种免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在一些实施例中，CTLA-4抑制剂是伊匹木单抗或曲美木单抗(CP-675、206)。在一些实施例中，PD-1抑制剂是派姆单抗/>或纳武单抗在一些实施例中，PD-L1抑制剂是阿妥珠单抗(atezolizumab)/>阿维单抗/>或德瓦鲁单抗(durvalumab)(Imfinzi^TM)。

在一些实施例中，免疫疗法是基于mRNA的免疫疗法。在一些实施例中，基于mRNA的免疫疗法是CV9104(参见例如，Rausch等人(2014)《人类疫苗与免疫疗法(Human VaccinImmunother)》10(11):3146-52；和Kubler等人(2015)《癌症免疫治疗杂志(J.ImmunotherCancer)》3:26)。

在一些实施例中，免疫疗法是卡介苗芽孢杆菌(bacillus Calmette-Guerin，BCG)疗法。

在一些实施例中，免疫疗法是溶瘤病毒疗法。在一些实施例中，溶瘤病毒疗法是拉他莫基(talimogene alherparepvec)(T-VEC；)。

在一些实施例中，免疫疗法是癌症疫苗。在一些实施例中，癌症疫苗是人乳头瘤病毒(HPV)疫苗。在一些实施例中，HPV疫苗是或/>在一些实施例中，癌症疫苗是乙型肝炎病毒(HBV)疫苗。在一些实施例中，HBV疫苗是/>Recombivax/>或GI-13020/>在一些实施例中，癌症疫苗是/>或在一些实施例中，癌症疫苗是/>GVAX、ADXS11-001、ALVAC-CEA、/>CimaVax-EGF、lapuleucel-T(APC8024；Neuvenge^TM)、GRNVAC1、GRNVAC2、GRN-1201、hepcortespenlisimut-L(Hepko-V5)、SCIB1、BMT CTN 1401、PrCa VBIR、PANVAC、/>DPX-Survivac或viagenpumatucel-L(HS-110)。

在一些实施例中，免疫疗法是肽疫苗。在一些实施例中，肽疫苗是nelipepimut-S(E75)(NeuVax^TM)、IMA901或SurVaxM(SVN53-67)。在一些实施例中，癌症疫苗是免疫原性的个人新抗原疫苗(参见例如，Ott等人(2017)《自然》547:217-221；Sahin等人(2017)《自然》547:222-226)。在一些实施例中，癌症疫苗是RGSH4K或NEO-PV-01。在一些实施例中，癌症疫苗是基于DNA的疫苗。在一些实施例中，基于DNA的疫苗是乳球蛋白-A DNA疫苗(参见例如，Kim等人(2016)《肿瘤免疫学(OncoImmunology)》5(2):e1069940)。

在一些实施例中，免疫靶向剂选自阿地白介素、干扰素α-2b、伊匹木单抗、兰洛利珠单抗(lambrolizumab)、纳武单抗、泼尼松(prednisone)和sipuleucel-T。

在一些实施例中，另外的疗法是放射疗法。放射疗法的非限制性实例包含放射性碘疗法、外束放射和镭223疗法。

在一些实施例中，另外的治疗剂是GSK-3368715、PF-06821497、塞拉色替(ceralasertib)；AZD6738、BI-894999、MAK-683、AZD-6738、塔米纳登(taminadenant)、TAK-981、MIK-665或丹伐特生(danvatirsen)。

另外的激酶抑制剂包含在以下专利中描述的那些：例如，美国专利第7,514,446号；第7,863,289号；第8,026,247号；第8,501,756号；第8,552,002号；第8,815,901号；第8,912,204号；第9,260,437号；第9,273,051号；美国公开第US2015/0018336号；国际公开第WO2007/002325号；第WO 2007/002433号；第WO 2008/080001号；第WO 2008/079906号；第WO2008/079903号；第WO 2008/079909号；第WO 2008/080015号；第WO 2009/007748号；第WO2009/012283号；第WO 2009/143018号；第WO 2009/143024号；第WO 2009/014637号；第2009/152083号；第WO 2010/111527号；第WO 2012/109075号；第WO 2014/194127号；第WO2015/112806号；第WO 2007/110344号；第WO 2009/071480号；第WO 2009/118411号；第WO2010/031816号；第WO 2010/145998号；第WO 2011/092120号；第WO 2012/101032号；第WO2012/139930号；第WO 2012/143248号；第WO 2012/152763号；第WO 2013/014039号；第WO2013/102059号；第WO 2013/050448号；第WO 2013/050446号；第WO 2014/019908号；第WO2014/072220号；第WO 2014/184069号；第WO 2016/075224号；第WO 2016/081450号；第WO2016/022569号；第WO 2016/011141号；第WO 2016/011144号；第WO 2016/011147号；第WO2015/191667号；第WO 2012/101029号；第WO 2012/113774号；第WO 2015/191666号；第WO2015/161277号；第WO 2015/161274号；第WO 2015/108992号；第WO 2015/061572号；第WO2015/058129号；第WO 2015/057873号；第WO 2015/017528号；第WO/2015/017533号；第WO2014/160521号；以及第WO 2014/011900号，所述专利中的每个专利特此通过引用整体并入本文。

在一些实施例中，受试者先前被施用一种或多种针对淋巴瘤的标准护理疗法。在一些实施例中，先前施用的标准护理疗法是维汀-泊洛妥珠单抗、塞利尼索(selinexor)、阿基仑赛(Yescarta)、替沙仑赛(Kymria)、苯达莫司汀与利妥昔单抗和维汀-泊洛妥珠单抗的组合、坦昔妥单抗(tafasitamab)与来那度胺的组合或利妥昔单抗与人透明质酸酶(Rituxan Hycela)的组合。

在一些实施例中，受试者同时接受针对淋巴瘤的标准护理疗法。在一些实施例中，标准护理疗法是维汀-泊洛妥珠单抗、塞利尼索、阿基仑赛(Yescarta)、替沙仑赛(Kymria)、苯达莫司汀与利妥昔单抗和维汀-泊洛妥珠单抗的组合、坦昔妥单抗与来那度胺的组合或利妥昔单抗与人透明质酸酶(Rituxan Hycela)的组合。

尽管在不同类型的癌症之间肿瘤发生的遗传基础可能有所不同，但对于所有实体瘤类型而言，转移所需的细胞和分子机制似乎是相似的。在转移性级联过程中，癌细胞失去生长抑制反应，发生粘附性改变，并产生可以降解细胞外基质成分的酶。这导致肿瘤细胞与原始肿瘤分离，通过新形成的脉管系统渗透到循环系统中，肿瘤细胞在可能形成菌落的有利的远端位点处发生迁移和外渗。

因此，本文还提供了一种用于抑制、预防、帮助预防或减轻有需要的受试者的癌症的转移症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。此类方法可以用于治疗本文所描述的一种或多种癌症。参见例如，美国公开第2013/0029925号；国际公开第WO 2014/083567号；以及美国专利第8,568,998号。还参见，例如，Hezam K等人,《神经科学评论(Rev Neurosci)》2018年1月26日；29:93-98；Gao L等人,《胰腺(Pancreas)》2015年1月；44:134-143；Ding K等人,《生物化学杂志》2014年6月6日；289:16057-71；以及Amit M等人,《癌基因》2017年6月8日；36:3232-3239。在一些实施例中，所述癌症是MALT1相关癌症。在一些实施例中，如本文所描述的，式(I)化合物或其药学上可接受的盐与另外的疗法或另一种治疗剂组合使用。例如，第一或第二MALT1蛋白酶抑制剂。

术语“转移”是本领域已知的术语，并且是指在受试者中远离原发性肿瘤的位点处形成另外的肿瘤(例如，实体瘤)，其中另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。

还提供了一种降低患有MALT1相关癌症的受试者发生转移或另外的转移的风险的方法，所述方法包含：选择、鉴定或诊断患有MALT1相关癌症的受试者，并向经选择、鉴定或诊断为患有MALT1相关癌症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。还提供了降低患有MALT1相关癌症的受试者发生转移或另外的转移的风险的方法，所述方法包含向患有MALT1相关癌症的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。可以将患有MALT1相关癌症的受试者发生转移或另外的转移的风险的降低与治疗前受试者发生转移或另外的转移的风险进行比较，或者与尚未接受任何治疗或接受不同治疗的患有相似或相同的MALT1相关癌症的受试者或受试者群体进行比较。

短语“发生转移的风险”意指患有原发性肿瘤的受试者在设定的时间段内在远离受试者中的原发性肿瘤的位点处出现另外的肿瘤(例如，实体瘤)的风险，其中所述另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。本文描述了用于降低患有癌症的受试者发生转移的风险的方法。

短语“发生另外的转移的风险”意指患有原发性肿瘤并在远离原发性肿瘤的位点处患有一种或多种另外的肿瘤(其中所述一种或多种另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞)的受试者将出现远离原发性肿瘤的一种或多种另外的肿瘤的风险，其中所述另外的肿瘤包含与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。本文描述了降低发生另外的转移的风险的方法。

本文所描述的一些实施例提供了治疗如类风湿性关节炎、多发性硬化症和SLE等自身免疫性病症(例如，MALT1相关自身免疫性病症)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本文所描述的一些实施例提供了治疗如慢性移植物抗宿主病等炎性病症(例如，MALT1相关自身免疫性病症)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

还提供了一种用于抑制哺乳动物细胞的MALT1蛋白酶活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物接触。在一些实施例中，所述接触是体外的。在一些实施例中，所述接触是体内的。在一些实施例中，所述接触是体内的，其中所述方法包括向具有具有MALT1蛋白酶活性的哺乳动物细胞的受试者施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物免疫细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物癌细胞是本文所描述的任何癌症。在一些实施例中，所述哺乳动物癌细胞是MALT1相关哺乳动物癌细胞。

还提供了一种用于抑制哺乳动物哺乳动物细胞的MALT1蛋白酶活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与式(I)化合物接触。在一些实施例中，所述接触是体外的。在一些实施例中，所述接触是体内的。在一些实施例中，所述接触是体内的，其中所述方法包括向具有具有MALT1蛋白酶活性的哺乳动物细胞的哺乳动物施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物免疫细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物癌细胞是本文所描述的任何癌症。在一些实施例中，所述哺乳动物癌细胞是MALT1相关哺乳动物癌细胞。在一些实施例中，所述哺乳动物细胞是胃肠道哺乳动物细胞。

如本文所使用的，术语“接触”是指使体外系统或体内系统中的指示部分在一起。例如，使MALT1蛋白酶与本文提供的化合物“接触”包含向具有MALT1蛋白酶的受试者(如人)施用本文提供的化合物，以及例如将本文提供的化合物引入到含有哺乳动物细胞或纯化制剂的样品中，所述制剂含有MALT1蛋白酶。

本文还提供了一种在体外或体内抑制哺乳动物细胞增殖的方法，所述方法包括使哺乳动物细胞与有效量的如本文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物接触。

如本文所定义的，“MALT1蛋白酶抑制剂”包含表现出MALT1抑制活性的任何化合物。在一些实施例中，MALT1蛋白酶抑制剂对MALT1蛋白酶具有选择性。示例性MALT1蛋白酶抑制剂可以针对MALT1蛋白酶表现出小于约1000nM、小于约500nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文所描述的测定中所测量的。在一些实施例中，MALT1蛋白酶抑制剂可以针对MALT1蛋白酶表现出小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM或小于约1nM的抑制活性(IC₅₀)，如本文提供的测定中所测量的。

如本文所使用的，“第一MALT1蛋白酶抑制剂”或“第一MALT1抑制剂”是如本文所定义的MALT1蛋白酶抑制剂，但其不包含如本文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。如本文所使用的，“第二MALT1蛋白酶抑制剂”或“第二MALT1抑制剂”是如本文所定义的MALT1蛋白酶抑制剂，但其不包含如本文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。当本文提供的方法中同时存在第一和第二MALT1抑制剂时，第一和第二MALT1蛋白酶抑制剂是不同的。

本文描述了示例性第一和第二MALT1蛋白酶抑制剂。在一些实施例中，第一或第二MALT1蛋白酶抑制剂可以是例如JNJ-67856633或CTX-177。

短语“有效量”是指当施用于需要此类治疗的受试者时足以(i)治疗MALT1相关疾病或病症(如MALT1相关癌症)；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病状或病症的一种或多种症状；或(iii)延迟本文所述特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作的化合物的量。对应于所述量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的量将根据如具体化合物、疾病状况及其严重程度、需要治疗的受试者的身份(例如，体重)等因素而变化，但仍然可以由本领域技术人员常规确定。

药物组合物

当用作药物时，式(I)化合物(包含其药学上可接受的盐)可以以药物组合物的形式施用。这些组合物可以按制药领域中熟知的方式制备，并且可以通过多种途径施用，取决于希望局部治疗还是全身性治疗并且取决于有待治疗的部位。施用可以是局部施用(包含经皮、表皮、眼科和粘膜施用，包含鼻内、阴道和直肠递送)、肺部施用(例如，通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包含通过雾化器；气管内或鼻内施用)、口服或肠胃外给药。口服施用可以包含被调配成用于每日一次或每日两次(BID)施用的剂型。肠胃外施用包含静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或注射或输注；或颅内，例如，鞘内或脑室内施用。肠胃外施用可以呈单次团注剂量的形式，或者可以例如通过连续的灌注泵进行。用于局部施用的药物组合物和调配物可以包含透皮贴剂、软膏、乳液、霜剂、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。常规的药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必要的或期望的。

本文还提供了药物组合物，所述药物组合物含有作为活性成分的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。例如，使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐制备的药物组合物。在一些实施例中，所述组合物适合用于口服施用。在制备本文提供的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合、用赋形剂稀释或封装在此类载体之内，所述载体呈例如胶囊、药袋(sachet)、纸或其它容器的形式。当赋形剂作为稀释剂时，其可以是固态、半固态或液态材料，所述材料可以作为活性成分的媒剂、载体或介质而起作用。因此，组合物可以呈片剂、丸剂、粉剂、锭剂、药袋、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如至多10重量％的活性化合物的软膏、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液以及无菌包装粉剂的形式。在一些实施例中，组合物被调配成用于口服施用。在一些实施例中，组合物是固体口服调配物。在一些实施例中，组合物被调配成片剂或胶囊。

本文进一步提供了含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。可以通过根据常规药物混合技术将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与药物载体充分混合来制备含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物。取决于期望的施用途径(例如，口服、肠胃外)，载体可以采取各种形式。在一些实施例中，组合物是固体口服组合物。

合适的药学上可接受的载体是本领域众所周知的。这些药学上可接受的载体中的一些载体的描述可以在《药物赋形剂手册(The Handbook of PharmaceuticalExcipients)》中找到，此手册由美国药学会和英国药学会出版。

调配药物组合物的方法已经在许多出版物中有所描述，如《药物剂型：片剂，第二版，修订和扩展(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets,Second Edition,Revised andExpanded)》,第1-3卷,Lieberman等人编辑；《药物剂型：肠胃外药物(PharmaceuticalDosage Forms:Parenteral Medications)》,第1-2卷,Avis等人编辑；以及《药物剂型：分散系统(Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems)》,第1-2卷,Lieberman等人编辑；马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,Inc)出版。

在制备呈口服剂型的组合物时，可以使用任何常规药物介质。因此，对于液体口服制剂(如混悬液、酏剂和溶液)，合适的载体和添加剂包含水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、着色剂等；对于固体口服制剂(如散剂、胶囊剂和片剂)，合适的载体和添加剂包含淀粉、糖、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。合适的粘合剂包含但不限于淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成的树胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或油酸钠)、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包含但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。固体口服制剂也可以用如糖等物质进行包衣或肠溶衣，从而调节吸收的主要位点。对于肠胃外施用，载体通常将由无菌水组成，并且可以添加其它成分以增加溶解性或保存性。也可以利用水性载体和适当的添加剂来制备可注射的混悬液或溶液。本文的药物组合物在每个剂量单位(例如，片剂、胶囊、粉末、注射剂、一茶匙等)中将含有递送本文所述的有效剂量所必需的一定量的活性成分。

可以将包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐的组合物配制成单位剂型，每个剂量含有约5至约1,000mg(1g)的活性成分，更通常为约100mg至约500mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为人类受试者和其它受试者的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位含有预定量的活性物质(即，式(I)化合物或其药学上可接受的盐)，经计算所述预定量的活性物质与合适的药物赋形剂一起产生期望的治疗效果。

在一些实施例中，本文提供的组合物含有约5mg至约50mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约5mg至约10mg、约10mg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg或约45mg至约50mg活性成分的化合物或组合物。

在一些实施例中，本文提供的组合物含有约50mg至约500mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约50mg至约100mg、约100mg至约150mg、约150mg至约200mg、约200mg至约250mg、约250mg至约300mg、约350mg至约400mg或约450mg至约500mg活性成分的化合物或组合物。在一些实施例中，本文提供的组合物含有约10mg、约20mg、约80mg或约160mg的活性成分。

在一些实施例中，本文提供的组合物含有约500mg至约1,000mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约500mg至约550mg、约550mg至约600mg、约600mg至约650mg、约650mg至约700mg、约700mg至约750mg、约750mg至约800mg、约800mg至约850mg、约850mg至约900mg、约900mg至约950mg或约950mg至约1,000mg活性成分的化合物或组合物。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐的日剂量可以在每成人每天1.0至10,000mg或更高的宽范围内或其中的任何范围内变化。对于口服施用，优选地以片剂形式提供组合物，所述片剂含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、160、200、250和500毫克的活性成分，用于对待治疗受试者的剂量进行对症调整。通常以每天约0.1mg/kg至约1000mg/kg体重(或其中的任何范围)的剂量水平提供有效量的药物。优选地，所述范围为每天约0.5至约500mg/kg体重，或其中的任何范围。更优选地，所述范围为每天约1.0至约250mg/kg体重，或其中的任何范围。更优选地，所述范围为每天约0.1至约100mg/kg体重，或其中的任何范围。在一实例中，所述范围可以为每天约0.1至约50.0mg/kg体重，或其中的任何量或范围。在另一个实例中，所述范围可以为每天约0.1至约15.0mg/kg体重，或其中的任何范围。在又一个实例中，所述范围可以为每天约0.5至约7.5mg/kg体重，或其中的任何量至范围。可以按照每天1-4次的方案或以单个日剂量施用含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

活性化合物可以在宽的剂量范围内有效，并且通常以药学有效量施用。本领域技术人员可以容易地确定待施用的最佳剂量。因此，应该理解，实际施用的化合物的量通常将由医生确定，并且将根据相关情况而变化，包含施用方式、实际施用的化合物、制剂的强度、待治疗的病状以及疾病状况的进展。另外，与正在治疗的特定受试者相关的因素，包含受试者反应、年龄、体重、饮食、施用时间和受试者症状的严重程度，将导致需要调整剂量。

在一些实施例中，可以以约1mg/kg至约100mg/kg范围内的量施用本文提供的化合物。在一些实施例中，可以以约1mg/kg至约20mg/kg、约5mg/kg至约50mg/kg、约10mg/kg至约40mg/kg、约15mg/kg至约45mg/kg、约20mg/kg至约60mg/kg或约40mg/kg至约70mg/kg的量施用本文提供的化合物。例如，约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg或约100mg/kg。

本领域技术人员将认识到，使用合适的、已知的和普遍接受的细胞和/或动物模型的体内和体外试验均预示了测试化合物治疗或预防给定病症的能力。

本领域的技术人员将进一步认识到，可以根据临床和医学领域中已知的方法完成在健康受试者和/或患有给定病症的受试者中的人类临床试验，包含首次人类试验、剂量范围试验和功效试验。

本文提供了可用于例如治疗MALT1相关疾病或病症(如癌症)的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含一个或多个容器，所述一个或多个容器含有包括有效量的本文提供的化合物的药物组合物。如将对本领域的技术人员显而易见的是，如果需要，此类试剂盒可以进一步包含各种常规药物试剂盒组件中的一个或多个，例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外的容器等。试剂盒中还可以包含指示待施用的组分的量的说明书(作为插入物或作为标签)、施用指南和/或用于混合组分的指南。

实例

材料和方法

本文提供的化合物(包含其盐)可以使用已知的有机合成技术制备并且可以根据多种可能的合成途径中的任一种途径合成。

用于制备本文提供的化合物的反应可以在合适的溶剂中进行，所述合适的溶剂可以由有机合成领域中的技术人员容易地选择。合适的溶剂可以在进行反应的温度(例如，范围可以为从溶剂的冻结温度到溶剂的沸腾温度的温度)下与起始材料(反应物)、中间体或产物基本上无反应性。给定的反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于特定的反应步骤，特定反应步骤的合适溶剂可以由技术人员选择。

本文提供的化合物的制备可以涉及各种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可以容易地确定保护和脱保护的需要以及适当保护基团的选择。保护基团的化学可以在例如以下文献中找到：《保护基团化学(Protecting Group Chemistry)》,第1版,牛津大学出版社(Oxford University Press),2000；《玛奇高等有机化学：反应、机理和结构(March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure)》,第5版,威利国际科学出版公司(Wiley-Interscience Publication),2001；以及Peturssion,S.等人,“碳水化合物化学中的保护基团(Protecting Groups in Carbohydrate Chemistry)”,《化学教育杂志(J.Chem.Educ.)》,74(11),1297(1997)。

对水分或空气敏感的反应在氮气或氩气下使用无水溶剂和试剂进行。通过通常用Sanpont预涂TLC板、硅胶GF-254、层厚0.25mm进行的分析薄层色谱(TLC)或液相色谱法-质谱法(LC-MS)确定反应进程。

通常，所使用的分析型LC-MS系统由Shimadzu LCMS-2020组成，带正离子检测模式的电喷雾电离，配备有20ADXR泵、SIL-20ACXR自动进样器、CTO-20AC柱温箱、M20A PDA检测器和LCMS2020MS检测器。色谱柱通常是HALO a C18 30*5.0mm，2.7μm。流动相A是含有0.05％TFA的水，并且流动相B是含有0.05％TFA的乙腈。梯度是在2.0分钟内从5％流动相B到100％，保持0.7分钟，然后在0.05分钟内恢复到5％流动相B，并保持0.25分钟。柱温箱(CTO-20AC)在40.0℃的温度下操作。流速为1.5毫升/分钟，并且进样体积为1μl。PDA(SPD-M20A)检测范围为190-400nm。MS检测器，其配置有电喷雾电离作为可电离源；采集模式：扫描；雾化气体流量：1.5升/分钟；干燥气体流量：15升/分钟；检测器电压：调谐电压±0.2kv；DL温度：250℃；加热块温度：250℃；扫描范围：90.00-900.00m/z。ELSD(Alltech 3300)检测器参数：漂移管温度：60±5℃；N₂流速：1.8±0.2升/分钟。流动相梯度针对单个化合物进行了优化。

GC-MS系统通常使用带有FID和MS检测器的Shimadzu GCMS-QP2010 Ultra进行。采集模式的MS检测器：开始时间：2.00分钟；结束时间：9.00分钟；ACQ模式：扫描；事件时间：0.30秒；扫描速度：2000；开始m/z：50.00；结束m/z：550.00；离子源温度：200.00℃；接口温度：250.00℃；溶剂切割时间：2.00分钟。

制备型HPLC纯化通常使用配备有2489UV检测器的Waters Auto纯化系统(2545-2767)进行。柱为Waters C18，19x150 mm，5μm。流动相由乙腈(5-95％)在含有0.1％FA的水中的混合物组成。流速保持在25毫升/分钟，进样体积为1200μL，并且UV检测器使用254nm和220nm两个通道。流动相梯度针对单个化合物进行了优化。

在以下之一上进行手性分析色谱法：Chiralpak AS、AD、Chiralcel OD、OJChiralpakIA、IB、IC、ID、IE、IF、IG、IH柱(大赛璐化学工业株式会社(Daicel ChemicalIndustries,Ltd.)；(R,R)-Whelk-O1、(S,S)-Whelk-O1色谱柱(瑞吉斯技术公司(Registechnologies,Inc.)；CHIRAL Cellulose-SB、SC、SA柱(YMC公司(YMC Co.,Ltd.))，在不同柱尺寸(50x4.6mm、100x4.6mm、150x4.6mm、250x4.6mm、50x3.0mm、100x3.0mm)下，其中乙醇/己烷(％Et/Hex)或异丙醇/己烷(％IPA/Hex)的标注百分比作为等度溶剂系统。

使用微波照射进行的反应通常使用由拜泰齐公司(Biotage)制造的引发剂(Initiator)进行。在旋转蒸发仪上在减压下浓缩溶液。快速柱色谱法通常使用拜泰齐快速色谱法设备(德纳维公司(Dyax Corp.))在硅胶(40-60μM，孔径)上在所述尺寸的预装盒中进行。除非另有说明，否则¹H NMR光谱在DMSO-d₆溶液中以400MHz光谱仪获得。化学位移以百万分率(ppm)为单位报告。在DMSO-d₆溶液中使用四甲基硅烷(TMS)作为内参，并且在CD₃OD溶液中使用残留的CH₃OH峰或TMS作为内部参考。耦合常数(J)以赫兹(Hz)为单位报告。手性分析色谱法在Chiralpak AS、Chiralpak AD、ChiralcelOD、Chiralcel IA或ChiralcelOJ柱(250x4.6mm)(大赛璐化学工业株式会社)之一上进行，其中乙醇/己烷(％Et/Hex)或异丙醇/庚烷(％IPA/Hep)的标注百分比作为等度溶剂系统。在以下之一上进行手性制备型色谱法：Chiralpak AS、AD、Chiralcel OD、OJ、Chiralpak IA、IB、IC、ID、IE、IF、IG、IH柱(大赛璐化学工业株式会社)；(R,R)-Whelk-O1、(S,S)-Whelk-O1柱(瑞吉斯技术公司)；CHIRALCellulose-SB、SC、SA柱(YMC公司)，在不同柱尺寸(250x20mm、250x30mm、250x50mm)下，其中在手性分析色谱上鉴定出期望的等度溶剂系统。

本文使用的缩写包含：-C(O)CH₃(Ac)；乙酸(AcOH)；-OC(O)CH₃(OAc)；水溶液(aq)；Cbz(苄氧羰基)；N,N-二异丙基乙胺(DIEA)；N；N-二甲基甲酰胺(DMF)；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)；EtOAc(EtOAc)；乙醚(乙醚或Et₂O)；PE(PE)；克(g)；小时(h或hr)；2-丙醇(IPA)；质谱图(ms或MS)；微升(μL)；毫克(mg)；毫升(mL)；毫摩尔(mmol)；分钟(min)；甲基叔丁基醚(MTBE)；六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷酯(PyBOP)；保留时间(R_t)；室温(rt或RT)；饱和氯化钠水溶液(盐水)；三氟乙酸(TFA)；四氢呋喃(THF)；快速色谱法(FC)；液相色谱法(LC)；液相色谱法-质谱法(LCMS或LC-MS)；超临界流体色谱法(SFC)；叔丁氧基羰基(Boc或BOC)；二乙氨基三氟化硫(DAST)；DCM(DCM)；二甲基乙酰胺(DMA；DMAC)；二甲基亚砜(DMSO)；1,3-双(二苯基膦)丙烷(DPPP)；乙酸(HOAc)；3-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)；甲基(Me)；甲醇(MeOH)；六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基氯甲脒酯(TCFH)；N-甲基咪唑(NMI)；N-溴琥珀酰胺(NBS)；薄层色谱法(TLC)。

以下是用于制备以下实例中使用的化合物的代表性程序，或者其可以替代以下实例中使用的可能无法商购的化合物。

方法A1

实例1和2：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：3-氯-5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶

将2,3-二氯-5-硝基吡啶(22.8g，118.2mmol，1.0当量)、CH₃CN(250mL)、2H-1,2,3-三唑(9.0g，130.0mmol，1.1当量)和K₂CO₃(21.2g，153.6mmol，1.3当量)放置到500mL烧瓶中。将所得混合物在40℃下搅拌15小时。使混合物冷却至25℃。将混合物倒入EtOAc(300mL)中。将有机层用水(2x300mL)、盐水(1x300mL)洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。向残余物中添加DCM(50mL)。将所得混合物过滤。将滤饼用CH₂Cl₂(2x10mL)洗涤并干燥，以得到呈灰白色固体的3-氯-5-硝基-2-(1,2,3-三唑-2-基)吡啶(6.8g，26％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.39(d,J＝2.4Hz,1H),8.14(d,J＝2.4Hz,1H),8.33(s,2H).LC-MS:m/z 226[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺

将3-氯-5-硝基-2-(1,2,3-三唑-2-基)吡啶(6.6g，29.3mmol，1.0当量)和EtOH(200mL)放置到1.0L烧瓶中。在0℃下添加HCl(50mL)，随后在0℃下以小部分添加SnCl₂.2H₂O(33.0g，146.3mmol，5.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于水(300mL)中，并使用3N NaOH水溶液将pH调节至9。将所得混合物用EtOAc(2x400mL)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的5-氯-6-(1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；5.4g，94％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.05(s,2H),7.83(d,J＝2.5Hz,1H),7.21(d,J＝2.5Hz,1H),6.19(s,2H).LC-MS:m/z 196[M+H]⁺。

步骤3：5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮

将2,2-二甲基环戊酮(2g，17.8mmol)于DMF-DMA(20mL)中的溶液在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将所得混合物在减压下浓缩。这得到呈黄色油的5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(方法A1步骤3；2g，粗产物)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。LCMS(ES,m/z):168[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在室温下向5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(1.5g，8.9mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-1H-吡唑-3-胺(1.5g，12.7mmol)和AcOH(2mL)。将所得混合物在95℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至6-7。将所得混合物用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:5)洗脱，以得到2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.4g，63.3％产率)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.56(s,1H),6.86(s,1H),2.88-3.03(m,2H),2.01-2.12(m,1H),1.27(s,3H).LC-MS(ES,m/z):222[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.4g，6.3mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(274mg，0.8mmol)、乙酰氧基铜(154mg，1.2mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(3g，9.4mmol)和TMSCN(3.1g，31.5mmol)。将反应在氮气下在室温下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加在硅胶柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:5)洗脱，以得到2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(方法A1步骤5；690mg，17.7％产率)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.74(s,1H),7.00(s,1H),4.71-4.76(m,1H),2.54-2.67(m,H),2.32-2.45(m,1H),1.63(s,3H),1.51(s,3H).LC-MS(ES,m/z):247[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将含2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(690mg，2.8mmol)的AcOH(6mL)和HCl(6mL)添加到30mL小瓶中。将所得混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。将溶剂在真空下浓缩，并将残余物用水(100mL)稀释，并用NaHCO₃将pH调节至5～6。将所得溶液用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；300mg，32.3％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.75(s,1H),8.63(s,1H),6.92(s,1H),4.26-4.29(m,1H),2.40-2.45(m,1H),2.28-2.33(m,1H),1.56(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS(ES,m/z):266[M+H]⁺。

步骤7：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(390mg，1.4mmol)于ACN(20mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(430.69mg，2.2mmol)、TCFH(1.65g，5.8mmol)和NMI(482.06mg，5.87mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物(200mg，60％产率)。LC-MS(ES,m/z):443[M+H]。

步骤8：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对200mg外消旋2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(CHIRALPAK IE，2x25cm，5um；流动相A：Hex(8mmol/L NH₃.MeOH)，流动相B：EtOH；流速：17毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：8.332；RT2：12.438；进样体积：1ml；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例1(74.3mg，11.4％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例2(69.6mg，10.6％产率)。

实例1：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(d,J＝2.4Hz,1H),8.55(s,1H),8.04(s,2H),6.72(s,1H),4.42-4.47(m,1H),2.62-2.70(m,1H),2.45-2.48(m,1H),1.76(s,3H),1.65(s,3H).LCMS(ES,m/z):443[M+H]⁺。

实例2：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(d,J＝2.4Hz,1H),8.55(s,1H),8.04(s,2H),6.73(s,1H),4.42-4.47(m,1H),2.62-2.66(m,1H),2.45-2.48(m,1H),1.76(s,3H),1.65(s,3H).LC-MS(ES,m/z):443[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法B1

实例3和4：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲腈

将3-氨基-1H-吡唑-5-甲腈(258mg，2.4mmol)和(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(方法A1步骤3；400mg，2.4mmol)于AcOH(1mL)和甲苯(10mL)中的溶液在氮气下在90℃下搅拌3小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用含0-50％EtOAc的PE洗脱，以得到呈棕色固体的8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲腈(220mg，43％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.71(s,1H),7.53(s,1H),3.09-2.98(m,2H),2.09-2.14(m,2H),1.52(s,6H).LC-MS:m/z 213[M+H]⁺。

步骤2：8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2,6-二甲腈

在室温下向8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲腈(220mg，1mmol)、N-(苯磺酰基)-N-氟-苯磺酰胺(490mg，1.6mmol)、(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(45.1mg，124.4μmol)和乙酰氧基铜(25mg，207.3μmol)于甲苯(10mL)中的搅拌溶液中分批添加三甲基硅基氰化物(514mg，5.2mmol)，并将所得混合物搅拌过夜。将混合物在真空下浓缩，用水(100mL)稀释，并且然后用DCM(3x100mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用含0-30％EtOAc的PE洗脱，以得到呈灰白色固体的8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2,6-二甲腈(130mg，53％产率)。LC-MS:m/z 238[M+H]⁺。

步骤3：2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

将8,8-二甲基-7,8-二氢-2,6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-二甲腈(130mg，547.9μmol)于HCl(1mL)和AcOH(3mL)中的溶液在室温下搅拌6小时。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物用水(2mL)稀释，并用NaHCO₃将pH调节至8-9。将所得混合物在真空下浓缩并通过HPLC纯化，以得到呈白色固体的2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，43％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.67(s,1H),7.70(s,1H),7.55(s,1H),7.21(s,1H),4.20-4.03(m,1H),2.41(dd,J＝13.2,9.1Hz,1H),2.22(dd,J＝13.2,6.3Hz,1H),1.59(s,3H),1.49(s,3H).LC-MS:m/z 256[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-溴-3-氯-2-(三唑-2-基)吡啶(60mg，235.0μmol)和2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，235.0μmol)于甲苯(1mL)中的搅拌混合物中添加(5-二苯基膦基-9,9-二甲基-氧杂蒽-4-基)-二苯基-磷烷(13mg，23.5μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(13mg，23.5μmol)和碳酸铯(114mg，352.6μmol)。在室温下在氮气下分批添加三氟甲磺酸铝(11mg，23.5μmol)。将所得混合物在氮气下在110℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温，用水(50mL)稀释，并且然后用DCM(3x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥，并在真空下浓缩。将粗产物(70mg)通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型OBD C18柱，19x250mm，5um；流动相A：水(0.05％TFA)，流动相B：ACN；流速：25毫升/分钟；梯度：46B至66B，在7分钟内；220nm；RT1：6.12；进样体积：1.5ml；运行次数：2)纯化，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(22mg，22％产率)。LC-MS:m/z434[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(22mg，50.4μmol)进行手性HPLC纯化(柱：Chiralpak ID-2，2*25cm，5um；流动相A：MTBE(2mM NH3-MEOH)，流动相B：EtOH；流速：17毫升/分钟；等度：30B；254/220nm；RT1：6.593；RT2：8.779；进样体积：1ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例3(7.3mg，33％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例4(6.2mg，28％产率)。

实例3：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.69(s,1H),8.63(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,2H),7.29(s,1H),4.48(dd,J＝9.2,6.8Hz,1H),2.71(dd,J＝13.2,9.2Hz,1H),2.48(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),1.75(s,3H),1.65(s,3H).LC-MS:m/z 434[M+H]⁺。

实例4：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.69(s,1H),8.63(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,2H),7.28(s,1H),4.48(dd,J＝9.2,6.8Hz,1H),2.71(dd,J＝13.2,9.2Hz,1H),2.47(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),1.75(s,3H),1.65(s,3H).LC-MS:m/z 434[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法C1

实例5和6：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在室温下向5-(二甲基氨基亚甲基)-2,2-二甲基-环戊烷-1-酮(方法A1步骤3；10g，59.8mmol)于甲苯(150mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-1H-吡唑-3-胺(11.6g，71.8mmol)和AcOH(15mL)。将所得混合物在90℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(200mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(3x200mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(4g，20％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.54(s,1H),6.93(s,1H),2.94-3.05(m,2H),2.07-2.12(m,2H),1.52(s,6H).LC-MS:m/z 266[M+H]⁺。

步骤2：2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

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向2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(440mg，1.65mmol)于甲苯(10mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(72mg，198.4μmol)、乙酰氧基铜(40mg，330.7μmol)、N-氟苯磺酰亚胺(782mg，2.5mmol)和TMSCN(820mg，8.3mmol)。将反应混合物在室温下在氮气下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(390mg，41％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.72(s,1H),7.06(s,1H),4.71-4.76(m,1H),2.54-2.64(m,H),2.35-2.47(m,1H),1.64(s,3H),1.51(s,3H).LC-MS:m/z 291[M+H]⁺。

步骤3：2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(370mg，1.3mmol)于二噁烷(4mL)中的混合物中添加2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼烷(638mg，2.5mmol)、Pd(dppf)Cl₂(93mg，127.1μmol)、K₂CO₃(351mg，2.5mmol，153.4μL)和H₂O(1mL)。将混合物在氮气下在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(50mL)稀释，用EtOAc(3x50mL)萃取，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(105mg，36％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.58(s,1H),6.63(s,1H),4.66-4.73(m,1H),2.55-2.62(m,1H),2.33-2.43(m,1H),1.65(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 227[M+H]⁺。

步骤4：2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(97mg，428.7μmol)于AcOH(2mL)和HCl(2mL)中的溶液在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。将混合物在真空下浓缩，并将残余物用水(50mL)稀释，并用NaHCO₃将pH调节至5-6。将所得溶液用EtOAc(3x50mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(10:1)洗脱，以得到2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(56mg，182.6μmol，43％产率)。LC-MS:m/z 246[M+H]⁺。

步骤5.N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(56mg，228.3μmol)于ACN(3mL)中的溶液中添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(67mg，342.5μmol)、TCFH(320mg，1.1mmol)和NMI(94mg，1.1mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EA/PE(1:1)洗脱，以得到粗产物。对粗产物进行HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，31％)。LC-MS:m/z 423[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对30mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Chiralpak ID-2，2*25cm，5um；流动相A：MTBE(2mM NH3-MEOH)，流动相B：EtOH；流速：14毫升/分钟；等度50B；254/220nm；RT1：11.394；RT2：17.177；进样体积：2ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例5(6mg，6.2％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例6(8.6mg，8.9％产率)。

实例5：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄):8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(d,J＝2.4Hz,1H),8.42(s,1H),8.04(s,2H),6.53(s,1H),4.41-4.87(m,1H),2.60-2.67(m,1H),2.54(s,3H),2.40-2.47(m,1H),1.80(s,3H),1.66(s,3H).LC-MS:m/z 423[M+H]⁺。

实例6：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄):8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(d,J＝2.4Hz,1H),8.42(s,1H),8.04(s,2H),6.53(s,1H),4.41-4.87(m,1H),2.60-2.67(m,1H),2.54(s,3H),2.40-2.47(m,1H),1.80(s,3H),1.66(s,3H).LC-MS:m/z 423[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

实例7：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-6,7,8,9-四氢吡唑并[1,5-a]喹唑啉-6-甲酰胺

以类似于实例1的方式使用方法A1，从2,2-二甲基环己酮开始制备标题化合物。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.98(s,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(d,J＝2.4Hz,1H),8.45(s,1H),8.16(s,2H),6.88(s,1H),4.11-4.16(m,1H),2.05-2.27(m,2H),1.87-1.99(m,1H),1.75-1.85(m,1H),1.64(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 457[M+H]⁺。

实例8和9：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-6,7,8,9-四氢吡唑并[1,5-a]喹唑啉-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-6,7,8,9-四氢吡唑并[1,5-a]喹唑啉-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

对100mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-6,7,8,9-四氢吡唑并[1,5-a]喹唑啉-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(CHIRALPAK IE，2x25cm，5um；流动相A：Hex(8mmol/L NH₃.MeOH)，流动相B：EtOH；流速：17毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：8.332；RT2：12.438；进样体积：1ml；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例8(34.6mg，35％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例9(31.1mg，31％产率)。

实例8：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.00(s,1H),8.71(d,J＝2.1Hz,1H),8.57(d,J＝2.1Hz,1H),8.46(s,1H),8.17(s,2H),6.89(s,1H),4.10-4.18(m,1H),2.04-2.32(m,2H),1.74-2.03(m,2H),1.65(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 457[M+H]⁺。

实例9：¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.00(s,1H),8.71(d,J＝2.1Hz,1H),8.57(d,J＝2.1Hz,1H),8.45(s,1H),8.17(s,2H),6.89(s,1H),4.10-4.18(m,1H),2.04-2.32(m,2H),1.74-2.03(m,2H),1.65(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 457[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法D1

实例10和11：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-胺

在N₂下向5,6-二氯吡啶-3-胺(1g，6.1mmol)于二噁烷(16mL)和H₂O(4mL)中的溶液中添加1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(1.2g，6.1mmol)、Pd(dppf)Cl₂(513mg，610μmol)、Na₂CO₃(2.6g，4mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(150mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x150mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-胺(1.2g，粗产物)。LC-MS:m/z 209[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；100mg，376.3μmol)于ACN(6mL)中的溶液中添加5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-胺(117mg，564.5μmol)、TCFH(422mg，1.5mmol)和NMI(123mg，1.5mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(10:1)洗脱。将获得的产物通过制备型HPLC进一步纯化，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(28.6mg，17％产率)。LC-MS:m/z456[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对28.6mg 2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：ChiralpakID-2，2*25cm，5um；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：15毫升/分钟；等度：50B；254/220nm；RT1：12.336；RT2：26.017；进样体积：1.5ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例10(7.8mg，27％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例11(7.2mg，27％产率)。

实例10：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.79(s,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.63(s,1H),8.34(d,J＝2.0Hz,1H),7.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.94(s,1H),6.72(d,J＝2.0Hz,1H),4.39-4.44(m,1H),3.92(s,3H),2.50-2.52(m,1H),2.27-2.33(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 456[M+H]⁺。

实例11：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.79(s,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.64(s,1H),8.34(d,J＝2.0Hz,1H),7.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.94(s,1H),6.72(d,J＝2.0Hz,1H),4.39-4.45(m,1H),3.92(s,3H),2.50-2.51(m,1H),2.28-2.35(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 456[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法E1

实例12和13：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：3-氯-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶

向2,3-二氯-5-硝基-吡啶(5g，25.9mmol)于MeCN(100mL)中的搅拌溶液中添加1H-吡唑(7g，28.5mmol)和K₂CO₃(2g，51.8mmol)。将所得混合物在40℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物过滤，并将收集的固体用EtOAc(3x50mL)洗涤。将所得溶液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈白色固体的3-氯-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶(4g，68％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:9.30(d,J＝2.4Hz,1H),9.00(d,J＝2.4Hz,1H),8.50-8.51(m,1H),7.67-7.68(m,1H),6.67-6.68(m,1H).LC-MS:m/z 225[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-胺

向3-氯-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶(2g，8.9mmol)于THF(33mL)和H₂O(33mL)中的搅拌溶液中添加氯化铵(3.8g，71.2mmol)。然后在80℃下将Fe(4.0g，71.2mmol)添加到混合物中，持续1小时。使混合物冷却至室温并通过硅藻土垫过滤，并且将所述垫用EtOAc(3x10mL)洗涤。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的5-氯-6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-胺(0.38g，22％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:7.87-7.90(m,2H),7.78(d,J＝1.8Hz,1H),7.15(d,J＝2.6Hz,1H),6.45-6.47(m,1H)4.50(s,2H).LC-MS:m/z 195[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；50mg，188.2μmol)于ACN(5mL)中的搅拌溶液中添加3-氯-5-硝基-2-(1H-吡唑-1-基)吡啶(55mg，282.3μmol)、TCFH(211mg，752.7μmol)和NMI(62mg，752.7μmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，84％产率)。LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对60mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：ChiralpakIA，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：18毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：7.267；RT2：12.331；进样体积：2ml；运行次数：4)。将含有第一洗脱异构体的级分浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例12(25.8mg，31％产率)。将含有第二洗脱异构体的级分浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例13(32.1mg，38％产率)。

实例12：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ:8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(d,J＝2.0Hz,1H),8.51(s,1H),8.13(d,J＝2.4Hz,1H),7.78(d,J＝1.2Hz,1H),6.70(s,1H),6.55-6.56(m,1H),4.38-4.41(m,1H),2.60-2.65(m,1H),2.40-2.43(m,1H),1.73(s,3H),1.62(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

实例13：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ:8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(d,J＝2.0Hz,1H),8.51(s,1H),8.13(d,J＝2.4Hz,1H),7.78(d,J＝1.2Hz,1H),6.70(s,1H),6.55-6.56(m,1H),4.38-4.41(m,1H),2.60-2.65(m,1H),2.40-2.43(m,1H),1.73(s,3H),1.62(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法F1

实例14和15：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：1-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈

将2,3-二氯-5-硝基-吡啶(3g，15.6mmol)、1H-吡唑-4-甲腈(1.59g，17.1mmol)和碳酸钾(6.45g，46.6mmol)于DMF(40mL)中的混合物在25℃下搅拌4小时。将所得混合物倒入冰/水(100mL)中。通过过滤收集沉淀的固体，并用水(5x20mL)洗涤。将所得固体在红外光下干燥。这得到呈黄色固体的1-(3-氯-5-硝基-2-吡啶基)吡唑-4-甲腈(3.4g，88％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.34(d,J＝2.4Hz,1H),9.30(s,1H),9.10(d,J＝2.4Hz,1H),8.51(s,1H).

步骤2：1-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈

向1-(3-氯-5-硝基-2-吡啶基)吡唑-4-甲腈(1g，4.0mmol)于EtOH(15mL)和H₂O(15mL)中的搅拌混合物中添加铁(940mg，16.8mmol)和氯化铵(900mg，16.8mmol)。将所得混合物在95℃下搅拌1小时。将混合物冷却至室温，过滤并在减压下浓缩以去除EtOH。将水层用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化并用DCM/MeOH(92:8)洗脱，以得到呈黄色固体的1-(5-氨基-3-氯-2-吡啶基)吡唑-4-甲腈(630mg，72％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.89(s,1H),8.26(s,1H),7.79(d,J＝2.4Hz,1H),7.18(d,J＝2.4Hz,1H),6.14(s,2H).LC-MS:m/z 220[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向1-(5-氨基-3-氯-2-吡啶基)吡唑-4-甲腈(100mg，0.46mmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；121mg，0.46mmol)于ACN(10mL)中的搅拌混合物中添加TCFH(383mg，1.37mmol)和NMI(187mg，2.28mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化并用EtOAc/PE(7:3)洗脱，以得到粗产物，对所述粗产物进行HPLC纯化。将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(34.3mg，16％产率)。LC-MS:m/z 467[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对30mg 2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：ChiralpakID-2，2x25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：18毫升/分钟；等度：50B；254/220nm；RT1：15.609；RT2：19.773；进样体积：0.7ml；运行次数：4)。将含有第一洗脱异构体的级分浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例14(5.7mg，19％产率)。将含有第二洗脱异构体的级分浓缩并冻干，以呈白色固体的实例15(5.6mg，19％产率)。

实例14：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.04(s,1H),9.10(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.54(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(s,1H),6.95(s,1H),4.42-4.48(m,1H),2.53-2.60(m,1H),2.29-2.37(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 467[M+H]⁺。

实例15：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.04(s,1H),9.10(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.54(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(s,1H),6.95(s,1H),4.42-4.48(m,1H),2.53-2.60(m,1H),2.29-2.37(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 467[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法G1

实例16和17：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：3-氯-5-硝基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶

向2,3-二氯-5-硝基-吡啶(2.00g，10.4mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加吡咯烷(884mg，12.4mmol)和K₂CO₃(1.43g，10.4mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物倒入水(50mL)中，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层用水(3x100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的3-氯-5-硝基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶(2.00g，85％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.90(d,J＝2.4Hz,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),3.85-3.91(m,4H),1.95-2.05(m,4H).LC-MS:m/z 228[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺

向5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺(500mg，2.2mmol)于H₂O(5mL)和EtOH(15mL)中的搅拌溶液中添加NH₄Cl(352mg，6.6mmol)和铁(613mg，11.0mmol)。将混合物在80℃下搅拌3小时。将所得混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩，以得到EtOH。将所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺(300mg，69％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.66(d,J＝2.4Hz,1H),7.03(d,J＝2.4Hz,1H),3.46-3.56(m,4H),3.31(br s,2H),1.84-1.95(m,4H).LC-MS:m/z 198[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺(100mg，505.9μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；134mg，505.9μmol)于ACN(10mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(426mg，1.5mmol)和NMI(208mg，2.53mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(63.6mg，28％产率)。LC-MS:m/z 445[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对63.6mg 2-氯-N-(5-氯-6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Chiralpak ID-2，2x25cm，5um；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH₃-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度：10B；254/220nm；RT1：11.691；RT2：21.128；进样体积：2ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例16(11.3mg，17％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例17(14.3mg，22％产率)。

实例16：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),8.59(s,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),6.93(s,1H),4.28-4.56(m,1H),3.49-3.57(m,4H),2.45-2.48(m,1H),2.25-2.52(m,1H),1.80-1.91(m,4H),1.63(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z445[M+H]⁺。

实例17：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),8.59(s,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),6.93(s,1H),4.28-4.56(m,1H),3.49-3.57(m,4H),2.45-2.48(m,1H),2.25-2.52(m,1H),1.80-1.91(m,4H),1.63(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z445[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法H1

实例18：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

步骤1：(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮

在室温下向DMF-DMA(20mL)的混合物中添加螺[2.4]庚烷-4-酮(2g，90.9mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色油的(Z)-5((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮(10g，粗产物)，其直接用于下一步。LC-MS:m/z 166[M+H]⁺。

步骤2：2-溴-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]

在室温下向(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮(5g，30.3mmol)于甲苯(50mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-1H-吡唑-3-胺(4.9g，30.3mmol)和AcOH(5mL)。将所得混合物在120℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(300mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(2x300mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈棕色固体的2-溴-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷](2.0g，两个步骤25％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.41(s,1H),6.80(s,1H),2.96-3.16(m,2H),2.14-3.23(m,2H),1.89-2.08(m,2H),1.05-1.07(m,2H).LC-MS:m/z 264[M+H]⁺。

步骤3：2-溴-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲腈

向2-溴-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷](2g，7.6mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(297mg，912μmol)、乙酰氧基铜(154mg，1.3mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(3.6g，11.4mmol)和TMSCN(3.8g，38mmol)。将反应在氮气下在室温下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈灰白色固体的2-溴-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲腈(150mg，7％产率)。LC-MS:m/z 289[M+H]⁺。

步骤4：2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲腈

向2-溴-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲腈(150mg，259.4μmol)于二噁烷(4mL)中的混合物中添加2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼烷(130mg，518.8μmol)、Pd(dppf)Cl₂(19mg，25.9μmol)、K₂CO₃(71mg，518.8μmol)和H₂O(1mL)。将混合物在氮气下在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(50mL)稀释，用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲腈(25mg，42％产率)。LC-MS:m/z 225[M+H]⁺。

步骤5：2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

将2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲腈(25mg，111.6μmol)添加到HCl(1mL)和AcOH(3mL)的溶液中。将反应溶液在室温下搅拌6小时。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物用水(2mL)稀释。用NaHCO₃(水溶液，饱和)将pH调节至8-9。将所得混合物在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(10mg，24％产率)。LC-MS:m/z 243[M+H]⁺。

步骤6：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺

在室温下在氮气下，向5-溴-3-氯-2-(三唑-2-基)吡啶(11mg，41.3μmol)和2-甲基-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(10mg，41.3μmol)于甲苯(1mL)中的搅拌混合物中添加(5-二苯基膦基-9,9-二甲基-氧杂蒽-4-基)-二苯基-磷烷(XantPhos)(3mg，4.1μmol)、Pd₂(dba)₃(3mg，4.1μmol)、碳酸铯(20mg，61.9μmol)和三氟甲磺酸铝(2mg，4.1μmol)。将所得混合物在氮气下在110℃下搅拌过夜。使混合物冷却至室温。将所得溶液用水(50mL)稀释，并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(1mg，5％产率)。

实例18：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ:8.69(d,J＝2.0Hz,1H),8.64(d,J＝2.0Hz,1H),8.35(s,1H),8.02(s,2H),6.42(s,1H),4.51(dd,J＝9.6,5.6Hz,1H),2.75(dd,J＝13.2,9.6Hz,1H),2.64(dd,J＝13.2,5.6Hz,1H),2.46-2.49(m,3H),2.39-2.45(m,1H),2.28-2.32(m,1H),1.10-1.25(m,2H).LC-MS:m/z 421[M+H]⁺。

方法I1

实例19：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：3-羟基-2,2-二甲基环戊烷-1-酮

在0℃下向2,2-二甲基环戊烷-1,3-二酮(7g，55.5mmol)于MeOH(150mL)中的溶液中以小部分添加硼氢化钠(525mg，13.9mmol)。将反应在0℃下搅拌2小时。将反应溶液用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭。在真空中去除甲醇后，将残余物用EtOAc(3x200mL)萃取。将组合的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脱，以得到呈黄色油的3-羟基-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(6g，75％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:4.92-4.97(m,1H),3.83(t,J＝5.6Hz,1H),1.96-2.30(m,3H),1.68-1.79(m,1H),0.90(s,3H),0.84(s,3H).LC-MS:m/z 129[M+H]⁺。

步骤2：3-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮

向3-羟基-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(12g，93.6mmol)于DCM(300mL)中的溶液中添加咪唑(12.7g，187.2mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.1g，9.4mmol)和叔丁基-氯-二苯基-硅烷(51.5g，187.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将所得溶液添加到水(300mL)中，用DCM(3x300mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的3-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(20g，23％产率)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.41-7.64(m,10H),4.06(t,J＝6.0Hz,1H),2.01-2.10(m,2H),1.77-1.91(m,2H),1.10(s,6H),0.96(s,9H).LC-MS:m/z 367[M+H]⁺。

步骤3：3-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮

将3-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(20g，54.5mmol)于DMF-DMA(200mL)中的溶液在100℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物冷却至室温。将所得混合物在真空下浓缩，以得到呈黄色油的3-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(20g，粗产物)。将粗物质直接用于下一步。LC-MS:m/z422[M+H]⁺。

步骤4：7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

向3-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(7g，16.6mmol)于甲苯(100mL)中的溶液中添加3-氯-1H-吡唑-5-胺(1.9g，16.6mmol)和AcOH(10mL)。将反应在90℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(200mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(5g，37％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.41(s,1H),7.58-7.74(m,5H),7.35-7.57(m,5H),6.84(s,1H),4.34-4.40(m,1H),2.87-3.18(m,2H),1.46(s,3H),1.42(s,3H),0.89(s,9H).LC-MS:m/z 476[M+H]⁺。

步骤5：7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(2g，4.2mmol)于甲苯(50mL)中的溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(183mg，504umol)、乙酰氧基铜(103mg，840.2umol)、N-(苯磺酰基)-N-氟-苯磺酰胺(2g，6.3mmol)和TMSCN(2.1g，21mmol)。将反应混合物在室温下在氮气下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(300mg，5％产率)。LC-MS:m/z 501[M+H]⁺。

步骤6：7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在室温下向4-[叔丁基(二苯基)硅基]氧基-11-氯-3,3-二甲基-1,8,12-三氮杂三环[7.3.0.02,6]十二碳-2(6),7,9,11-四烯-5-甲腈(500mg，997.8umol)于AcOH(5mL)中的溶液中添加浓盐酸(5mL)。将所得混合物搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(20mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(120mg，22％产率)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.38(s,1H),7.78(s,1H),7.60-7.78(m,5H),7.56-7.65(m,5H),6.89(s,1H),4.71(d,J＝5.6Hz,1H),4.10(d,J＝5.6Hz,1H),3.17(s,1H),1.38(s,3H),1.19(s,3H),1.07(s,9H).LC-MS:m/z 519[M+H]⁺。

步骤7：7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

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在室温下向7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(20mg，38.5μmol)于甲苯(1mL)中的溶液中添加5-溴-3-氯-2-(三唑-2-基)吡啶(20mg、77.1μmol)。将所得混合物在氮气下在110℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用EtOAc/PE(1:1)纯化，以得到呈黄色固体的7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(10mg，29％产率)。LC-MS:m/z 697[M+H]⁺。

步骤8：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(实例19)

在室温下向7-((叔丁基二苯基硅基)氧基)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(10mg，14.3μmol)于THF(1mL)中的溶液中添加四丁基氟化铵(1M,143.3μL)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(10mL)稀释，用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层用饱和NH₄Cl水溶液(3x10mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过制备型TLC用MeOH/DCM(1:10)纯化，以得到粗产物(5mg)。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(2mg，29％产率)。

实例19：¹H NMR(两种外消旋非对映异构体的约1:1混合物，400MHz，甲醇-d₄)δ:8.71-8.75(m,1H),8.66-8.67(m,1H),8.53-8.55(m,1H),8.03(s,2H),6.69(s,1H),4.59-4.60(m,1H),4.11-4.13(m,1H),1.64(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

方法J1

实例20和21：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(方法C1步骤2；800mg，2.8mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液中添加二乙基锌(509mg，4.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(178mg，0.3mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌3小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物用100ml水稀释。用NaHCO₃(水溶液，饱和)将pH调节至5-6。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(350mg，43％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.56(s,1H),6.64(s,1H),4.66(m,J＝8.9,5.9Hz,1H),2.81(m,J＝7.6Hz,2H),2.56(m,J＝13.2,8.8Hz,1H),2.34(m,J＝13.1,5.9Hz,1H),1.63(s,3H),1.51(s,3H),1.28(m,J＝7.6Hz,3H).LC-MS:m/z 241[M+H]⁺。

步骤2：2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

/>

将2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(350mg，1.4mmol)、AcOH(6mL)和HCl(6mL)添加到20mL小瓶中。将所得混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释，并用NaHCO₃(水溶液，饱和)将pH调节至5-6。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(10:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(150mg，39％产率)。LC-MS:m/z 260[M+H]⁺。

步骤3：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(150mg，578.4μmol)于ACN(10mL)中的溶液中添加5-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；113mg，578.4μmol)、TCFH(649mg，2.3mmol)和NMI(189mg，2.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(10:1)洗脱，以得到90mg(85％纯度)产物。对产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(20mg，11％产率)。LC-MS:m/z 437[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对20mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-乙基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：ChiralpakID-2，2*25cm，5um；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：15毫升/分钟；等度：50B；254/220nm；RT1：12.604；RT2：17.755；进样体积：1.5ml；运行次数：1)。将第一个洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例20(5.3mg，12％产率)。将第二个洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例21(4.5mg，11％产率)。

实例20：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.68(d,J＝2.1Hz,1H),8.64(d,J＝2.1Hz,1H),8.40(s,1H),8.02(s,2H),6.53(s,1H),4.36-4.42(m,1H),2.85-2.93(m,2H),2.57-2.64(m,1H),2.38-2.44(m,1H),1.76(s,3H),1.64(s,3H),1.28-1.42(m,3H).LC-MS:m/z437[M+H]⁺。

实例21：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.68(d,J＝2.1Hz,1H),8.64(d,J＝2.1Hz,1H),8.40(s,1H),8.02(s,2H),6.53(s,1H),4.36-4.42(m,1H),2.85-2.93(m,2H),2.57-2.64(m,1H),2.38-2.44(m,1H),1.76(s,3H),1.64(s,3H),1.28-1.42(m,3H).LC-MS:m/z437[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法K1

实例22和23：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下在氮气气氛下，在5分钟的时间段内向2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(方法N1步骤3；50.0mg，95.7μmol)于无水THF(5mL)中的溶液中添加MeMgBr(4M，47.8μL)。将反应混合物搅拌2小时并用饱和NH₄Cl水溶液(5ml)淬灭。将所得混合物用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(7.7mg，16％产率)。LC-MS:m/z 501[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对50mg 2-氯-N-(5-氯-6-(4-(2-羟基丙烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Chiralpak ID-2，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度：50B；254/220nm；RT1：7.8；RT2：13.072；进样体积：3ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例22(19.6mg，79％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例23(19.1mg，77％产率)。

实例22：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.63(s,1H),8.49(br,2H),7.88(s,2H),6.70(s,1H),4.27(t,J＝7.9Hz,1H),2.58(dd,J＝13.2,8.8Hz,1H),2.44(dd,J＝13.1,6.8Hz,1H),1.78(s,3H),1.71(s,6H),1.62(s,3H).LC-MS:m/z 501[M+H]⁺。

实例23：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.10(s,1H),8.53(d,J＝2.3Hz,1H),8.41(d,J＝2.3Hz,1H),8.35(s,1H),7.83(s,1H),6.65(s,1H),4.26(t,J＝7.8Hz,1H),3.52(s,1H),2.53-2.29(m,2H),1.73(s,3H),1.71-1.65(m,6H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 501[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法L1

实例24和25：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：(6-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)硼酸

向2-溴-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(方法C1步骤2；800mg，2.7mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2′-双(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(837mg，3.3mmol)于二噁烷(32mL)中的搅拌溶液中添加KOAc(809mg，8.2mmol)和Pd(dppf)Cl₂(448mg，549μmol)。将混合物在100℃下搅拌4小时。使混合物冷却至室温。将所得混合物用MeOH(80mL)稀释。将所得混合物过滤，并将滤饼用MeOH(3x20mL)洗涤。将滤液在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的(6-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)硼酸(600mg，85％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.62(s,1H),7.10(s,1H),4.66-4.75(m,1H),2.54-2.66(m,1H),2.30-2.42(m,1H),1.70(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 257[M+H]⁺。

步骤2：2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

/>

将(6-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)硼酸(600mg，2.3mmol)、Xantphos(406mg，702μmol)、氢醌(516mg，4.7mmol)、Pd₂(dba)₃(134mg，234μmol)和K₂CO₃(1.3g，9.4mmol)于ClF₂CH(50mL，2M于二噁烷中)中的混合物在110℃下在氮气气氛下搅拌15小时。冷却至室温后，通过添加水(50mL)将反应淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层合并，并且经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色固体的2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(500mg，75％产率)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.67(s,1H),6.84-7.15(m,2H),4.53-4.63(m,1H),2.59-2.78(m,1H),2.38-2.53(m,1H),1.74(s,3H),1.62(s,3H).LC-MS:m/z 263[M+H]⁺。

步骤3：2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将含2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(280mg，1.0mmol)的AcOH(2mL)和浓HCl(2mL)添加到30mL小瓶中。将所得混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。将溶剂在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(140mg，46％产率)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.66(s,1H),6.86-7.17(m,2H),4.41-4.51(m,1H),2.49-2.68(m,1H),2.28-2.43(m,1H),1.74(s,3H),1.62(s,3H).LC-MS:m/z 282[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(30mg，106μmol)于ACN(3mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；20mg，106μmol)、TCFH(89mg，319μmol)和NMI(43mg，533μmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物通过水(20mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(25mg，51％产率)。LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对25mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Chiralpak ID-2，2x25cm，5um；流动相A：MTBE(0.5％2M NH₃-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：14毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：6.349；RT2：9.554；进样体积：3ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到实例24(6.4mg，25％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到实例25(6.5mg，26％产率)。

实例24：¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:11.10(s,1H),8.70-8.76(m,2H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(s,2H),7.31(t,J＝54.3Hz,1H),7.09(s,1H),4.40-4.57(m,1H),2.53-2.66(m,1H),2.28-2.42(m,1H),1.67(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

实例25：¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:11.10(s,1H),8.70-8.76(m,2H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(s,2H),7.31(t,J＝54.3Hz,1H),7.09(s,1H),4.40-4.57(m,1H),2.53-2.66(m,1H),2.28-2.42(m,1H),1.67(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法M1

实例26、27、28和29：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-((S)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(R)-2-氯-N-(5-氯-6-((R)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(S)-2-氯-N-(5-氯-6-((S)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-((R)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：5-氯-6-(四氢呋喃-2-基)吡啶-3-胺

在氮气下向6-溴-5-氯吡啶-3-胺(400mg，1.9mmol)于无水THF(60mL)中的溶液中添加5,5′-二甲基-2,2′-联吡啶(71mg，385.6μmol)、双(4-甲氧基苯基)甲酮(93mg，385.6μmol)、碳酸钠(204mg，1.9mmol)和双(2,4-戊二酮)镍(99mg，385.6μmol)。在氮气下使用具有蓝色LED(365nm)的集成光反应器将反应混合物照射24小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到呈黄色固体的5-氯-6-(四氢呋喃-2-基)吡啶-3-胺(15mg，4％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:7.99(d,J＝2.4Hz,1H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),5.27-5.29(m,1H),4.09-4.17(m,1H),3.87-3.96(m,1H),3.77(br,2H),1.98-2.28(m,4H).LC-MS:m/z199[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(5-氯-6-(四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(20mg，75.1μmol)于ACN(3mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(四氢呋喃-2-基)吡啶-3-胺(15mg，75.1μmol)、TCFH(85mg，302.0μmol)和NMI(25mg，302.0μmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(4.7mg，14％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.46-8.49(m,2H),8.37(s,1H),7.59(s,1H),6.71(s,1H),5.35-5.40(m,1H)4.17-4.26(m,2H),3.95-4.00(m,1H),2.52-2.65(m,1H),2.35-2.48(m,2H),1.96-2.20(m,3H),1.77(s,3H),1.63(s,3H).LC-MS:m/z 446[M+H]。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-((S)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(R)-2-氯-N-(5-氯-6-((R)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(S)-2-氯-N-(5-氯-6-((S)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-((R)-四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对50mg 2-氯-N-(5-氯-6-(四氢呋喃-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Chiralpak ID-2，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：35毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：7.3；RT2：16.2；进样体积：1ml；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，然后进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例29(2.3mg，18％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，然后进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例28(2.8mg，22％产率)。将含有两种其它异构体的混合物的级分浓缩并进行手性HPLC纯化(CHIRALPAK IC，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2MNH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度：30B；220/254nm；RT1：9.805；RT2：12.846；进样体积：3ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例27(2.5mg，20％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例26(2.4mg，19％产率)。

实例26：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.63(br,1H),8.48(s,1H),8.44(s,1H),8.41(s,1H),6.66(s,1H),5.33-5.37(m,1H),4.17-4.29(m,2H),3.95-4.01(m,1H),2.35-2.51(m,3H),1.99-2.19(m,3H),1.75(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 446[M+H]⁺。

实例27：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.46(s,2H),8.36(s,1H),8.34(s,1H),6.67(s,1H),5.34-5.38(m,1H),4.17-4.26(m,2H),3.95-4.00(m,1H),2.49-2.55(m,1H),2.33-2.43(m,2H),2.01-2.15(m,3H),1.75(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 446[M+H]⁺。

实例28：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:10.66(s,1H),9.26(s,1H),9.18(s,1H),8.49(s,1H),6.67(s,1H),5.34(dd,J＝6.6,7.8Hz,1H),4.30-4.43(m,2H),3.96-4.04(m,1H),2.54-2.65(m,2H),2.41(dd,J＝6.6,13.2Hz,1H),1.89-2.11(m,3H),1.75(s,3H),1.61(s,3H).LC-MS:m/z 446[M+H]⁺。

实例29：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:10.38(s,1H),9.12(s,1H),8.97(s,1H),8.51(s,1H),6.68(s,1H),5.35(dd,J＝6.9,8.1Hz,1H),4.25-4.40(m,2H),3.96-4.04(m,1H),2.51-2.61(m,2H),2.43(dd,J＝6.9,13.2Hz,1H),1.92-2.10(m,3H),1.76(s,3H),1.60(s,3H).LC-MS:m/z 446[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法N1

实例30和31：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

向2,3-二氯-5-硝基吡啶(5g，25.9mmol)、1H-1,2,3-三唑-5-甲酸甲酯(3g，23.6mmol)于MeCN(60mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(9.8g，70.7mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。将所得混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩，以得到呈白色固体的粗产物2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(4.8g，66％产率)，其直接用于下一步。LC-MS:m/z 284[M+H]⁺。

步骤2：2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

向2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(1g，3.5mmol)和铁粉(984mg，17.6mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中添加NH₄Cl(943mg，17.6mmol)和水(10mL)。将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，并将所述垫用EtOAc(2x5mL)洗涤。将合并的滤液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用PE/EtOAc(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(330mg，35％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.30(s,1H),7.92(d,J＝2.5Hz,1H),7.17(d,J＝2.5Hz,1H),3.99(s,3H).LC-MS:m/z 254[M+H]⁺。

步骤3：2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

在25℃下，将2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(301mg，1.1mmol)、2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；200mg，752.7umol)、六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基氯甲脒酯(TCFH)(844.81mg，3.0mmol)和N-甲基咪唑(NMI)(247mg，3.0mmol)的溶液在ACN(2mL)中搅拌1小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用PE/EtOAc(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(300mg，76％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.74(s,1H),8.55-8.59(m,2H),8.36(s,1H),6.75(s,1H),4.36-4.40(m,1H),2.85(s,3H),2.46-2.63(m,2H),1.79(s,3H),1.64(s,3H).LC-MS:m/z 501[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(50mg，95,8μmol)于THF(5mL)中的搅拌溶液中缓慢添加LiAlH₄(4mg，114.9μmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。将所得混合物用NH₄Cl的饱和水溶液(5mL)淬灭，并用EtOAc(3x5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺[7.3.0.02,6]十二碳-2(6),7,9,11-四烯-5-甲酰胺(40mg，86％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.65(d,J＝2.0Hz,1H),8.48(s,1H),8.45(d,J＝2.3Hz,1H),7.92(s,1H),7.87(s,1H),6.70(s,1H),4.93(s,2H),4.18-4.32(m,1H),2.59(dd,J＝13.1,8.9Hz,1H),2.45(dd,J＝13.1,6.9Hz,1H),1.78(s,3H),1.62(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对40mg 2-氯-N-(5-氯-6-(4-(羟甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(CHIRALPAK ID，2*25cm(5um)；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：15毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：10.067；RT2：13.408；进样体积：1.5ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例30(6.5mg，32％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例31(6.3mg，32％产率)。

实例30：¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.68(d,J＝2.3Hz,1H),8.62(d,J＝2.3Hz,1H),8.52(s,1H),7.97(s,1H),6.70(s,1H),4.79(s,2H),4.42(dd,J＝9.1,6.6Hz,1H),2.63(dd,J＝13.2,9.1Hz,1H),2.42(dd,J＝13.2,6.7Hz,1H),1.73(s,3H),1.63(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

实例31：¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.68(d,J＝2.3Hz,1H),8.62(d,J＝2.2Hz,1H),8.52(s,1H),7.98(s,1H),6.70(s,1H),4.79(s,2H),4.42(dd,J＝9.1,6.7Hz,1H),2.63(dd,J＝13.2,9.1Hz,1H),2.42(dd,J＝13.2,6.7Hz,1H),1.73(s,3H),1.63(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法O1

实例32和33：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在室温下向5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(方法A1步骤3；7.45g，44.5mmol)于甲苯(150mL)中的搅拌溶液中添加3-氟-1H-吡唑-5-胺(3.75g，37.1mmol)和AcOH(15mL)。将所得混合物在氮气下在90℃下搅拌5小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(2x100mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(3g，39％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.37(s,1H),6.18(d,J＝4.8Hz,1H),3.00(t,J＝7.6Hz,2H),2.13(t,J＝7.6Hz,2H),1.58(s,6H).LC-MS:m/z 206[M+H]+。

步骤2：2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(3g，14.6mmol)于甲苯(60mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(636mg，1.8mmol)、乙酰氧基铜(359mg，2.9mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(6.91g，21.9mmol)和TMSCN(7.25g，73.1mmol)。将反应在氮气下在室温下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(方法O1步骤2；5.5g，33％产率)。LC-MS:m/z 231[M+H]⁺。

步骤3：2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将含2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(5.2g，22.6mmol)的AcOH(52mL)和HCl(52mL)添加到30mL小瓶中。将所得混合物在100℃下搅拌1.5小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物用水(300ml)稀释，并用NaHCO3(饱和，水溶液)将pH调节至5-6。将所得溶液用EtOAc(3x200mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(10:1)洗脱，以得到呈灰白色固体的2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；450mg，56％纯度)。LC-MS:m/z 250[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(400mg，1.6mmol)于ACN(5mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(250mg，1.3mmol)、TCFH(1.80g，6.4mmol)和NMI(525mg，6.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x20mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(83.4mg，12％产率)。LC-MS:m/z 427[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对83.4mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(CHIRALPAK ID，2*25cm(5um)；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：13毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：6.691；RT2：9.683；进样体积：3ml；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例32(33.6mg，41％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例33(37.8mg，47％产率)。

实例32：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.67(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(s,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(s,1H),7.94(s,2H),6.30(d,J＝4.8Hz,1H),4.29(dd,J＝8.8,7.2Hz,1H),2.58(dd,J＝13.2,8.8Hz,1H),2.47(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),1.77(s,3H),1.61(s,3H).LC-MS:m/z 427[M+H]⁺。

实例33：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.67(s,1H),8.58(s,1H),8.51(s,1H),8.09(s,1H),7.94(s,2H),6.31(d,J＝5.2Hz,1H),4.30(dd,J＝6.8,8.8Hz,1H),2.58(dd,J＝13.2,8.8Hz,1H),2.48(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),1.77(s,3H),1.61(s,3H).LC-MS:m/z 427[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法P1

实例34和35：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-胺

在氮气下，向6-溴-5-氯-吡啶-3-胺(200mg，964.1μmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加1-甲基-4-(三丁基甲锡烷基)-1H-咪唑(429mg，1.16mmol)和Pd(PPh₃)₄(111mg，96.3μmol)。将反应在120℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x5mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物用反相柱纯化，以得到呈淡黄色固体的5-氯-6-(1-甲基咪唑-4-基)吡啶-3-胺(120mg，51％产率)。HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.15(d,J＝1.4Hz,1H),8.20(d,J＝1.4Hz,1H),8.06(d,J＝2.4Hz,1H),7.17(d,J＝2.4Hz,1H),3.91(s,3H).LC-MS:m/z 209[M+H]⁺。

步骤2.2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

将5-氯-6-(1-甲基咪唑-4-基)吡啶-3-胺(111mg，451.7μmol)、2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(80mg，301.1μmol)、TCFH(338mg，1.2mmol)和NMI(97mg，1.2mmol)于ACN(5mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物在减压下浓缩。添加水(5mL)并将混合物用EtOAc(3x3mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩。将残余物用制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30.4mg，21％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.74(s,1H),8.61-8.72(m,2H),8.29(d,J＝2.2Hz,1H),7.72(s,1H),7.68(s,1H),6.95(s,1H),4.41(dd,J＝9.0,6.3Hz,1H),3.73(s,3H),2.51-2.62(m,1H),2.27-2.34(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 456[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对30mg 2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKIE，2*25cm，5um；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：17毫升/分钟；等度：50B；254/220nm；RT1：13.034；RT2：19.681；进样体积：1.8ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到实例34(5.3mg，18％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例35(5.8mg，20％产率)。

实例34：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.74(s,1H),8.61-8.72(m,2H),8.29(d,J＝2.2Hz,1H),7.69-7.73(m,2H),6.95(s,1H),4.41(dd,J＝9.0,6.4Hz,1H),3.73(s,3H),2.51-2.62(m,1H),2.35-2.40(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 456[M+H]⁺。

实例35：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.75(s,1H),8.61-8.72(m,2H),8.29(d,J＝2.2Hz,1H),7.68-7.73(m,2H),6.95(s,1H),4.42(dd,J＝9.0,6.3Hz,1H),3.73(s,3H),2.51-2.62(m,1H),2.28-2.34(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 456[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Q1

实例39、36、37和38：由含有(6S,8R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6R,8S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6S,8S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6R,8R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：三甲基((2-甲基环戊烷-1-烯-1-基)氧基)硅烷

将2-甲基环戊烷-1-酮(10g，101.9mmol)、TBAB(82.2g，254.7mmol)和(E)-N-(三甲基硅基)亚氨逐乙酸三甲基硅酯(24.9g，122.3mmol)的混合物在105℃下搅拌4小时。将混合物在减压下直接蒸馏而不进行任何后处理，以得到呈黄色油的三甲基((2-甲基环戊烷-1-烯-1-基)氧基)硅烷(15g，粗产物)，其直接用于下一步。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ2.18-2.29(m,4H),1.75-1.81(m,2H),1.51(s,3H),0.17(s,9H).

步骤2.2-甲基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮

在0℃下在氮气下，向三甲基((2-甲基环戊烷-1-烯-1-基)氧基)硅烷(5g，29.4mmol)于无水THF(185mL)中的溶液中添加n-BuLi(18.8mL，47.0mmol，2.5M于己烷中)。将二异丙胺(4.8g，47.0mmol)添加到溶液中，并在相同温度下将反应混合物搅拌另外20分钟。在-78℃下用套管将三氟碘甲烷(28.8g，146.8mmol)添加到反应混合物中，随后添加三乙基硼烷(1M，29.4mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸(18mL，5M于THF中)淬灭。将混合物用水(100mL)稀释，用Et₂O(3x200mL)萃取，并且经Na₂SO₄干燥。将所得混合物在真空下浓缩，以得到呈棕色油的2-甲基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(5g，粗产物)，其直接用于下一步。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ2.19-2.43(m,2H),1.99-2.17(m,2H),1.34-1.52(m,2H),0.89(s,3H)。

步骤3：(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2-甲基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮

将2-甲基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(5g，22.6mmol)于DMF-DMA(25mL)中的溶液在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2-甲基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(方法Q1，步骤3；400mg，6％产率)。LC-MS:m/z 222[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在室温下向(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2-甲基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(400mg，1.8mmol)于AcOH(10mL)中的溶液中添加3-氯-1H-吡唑-5-胺(427mg，3.6mmol)。将所得混合物在110℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(50mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(2x50mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(300mg，60％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.70(s,1H),7.01(s,1H),3.06-3.10(m,2H),2.62-2.68(m,1H),2.24-2.32(m,1H),1.84(s,3H).LC-MS:m/z 276[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(230mg，0.8mmol)于甲苯(15mL)中的搅拌溶液中添加双((R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基)甲烷(37mg，0.1mmol)、乙酰氧基铜(21mg，0.2mmol)、NFSI(396mg，2.0mmol)和TMSCN(414mg，4.0mmol)。将反应在氮气下在室温下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并且将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到粗产物。对产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(33mg，13％产率)。LC-MS:m/z 301[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将含2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(33mg，0.1mmol)的AcOH(1mL)和HCl(1mL)添加到8mL小瓶中。将所得混合物在100℃下搅拌1小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物用水(20mL)稀释，并用NaHCO₃(水溶液，饱和)将pH调节至5-6。将所得溶液用EtOAc(3x30mL)萃取，经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩，以得到呈黄色油的2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(30mg，粗产物)，其直接用于下一步。LC-MS:m/z 320[M+H]⁺。

步骤7：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(30mg，93.9μmol)于ACN(3mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1，步骤2；28mg，140.8μmol)、TCFH(120mg，375.6μmol)和NMI(525mg，375.6μmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物通过水(10mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x20mL)萃取，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈两对外消旋非对映体的混合物的呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。LC-MS:m/z 497[M+H]⁺。对此混合物进行制备型HPLC以获得非对映异构体A和非对映异构体B的分离的外消旋混合物。

步骤8：分离对映异构体以获得(6S,8R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6R,8S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6S,8S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6R,8R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对12mg非对映异构体A进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IF，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：13毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：12.603；RT2：16.474；进样体积：3ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例39(4.7mg，10％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例36(4.7mg，10％产率)。

对6mg非对映异构体B进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IF，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：13毫升/分钟；等度：50B；220/254nm；RT1：9.265；RT2：13.315；进样体积：2ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例37(2.4mg，4％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例38(2.5mg，4％产率)。

实例39：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.63-8.71(m,3H),8.02(s,2H),6.81(s,1H),4.50-4.55(m,1H),3.07-3.20(m,1H),2.50-2.58(m,1H),2.00(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

实例36：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.63-8.71(m,3H),8.02(s,2H),6.81(s,1H),4.50-4.55(m,1H),3.07-3.20(m,1H),2.50-2.58(m,1H),2.00(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

实例37：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.61-8.70(m,3H),8.02(s,2H),6.81(s,1H),4.49-4.51(m,1H),2.97-3.02(m,1H),2.77-2.81(m,1H),1.89(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

实例38：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ:8.61-8.70(m,3H),8.02(s,2H),6.81(s,1H),4.49-4.51(m,1H),2.97-3.02(m,1H),2.77-2.81(m,1H),1.89(s,3H).LC-MS:m/z 473[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法R1

步骤1：8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在室温下向5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(方法A1步骤3；4.98g，29.8mmol)于甲苯(100mL)中的搅拌溶液中添加3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-胺(4.5g，29.8mmol)和AcOH(10mL)。将所得混合物在80℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用水(200mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6-7。将所得溶液用EtOAc(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(2g，两个步骤26％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.49(s,1H),6.95(s,1H),3.05(t,J＝7.2Hz,2H),2.18(t,J＝7.2Hz,2H),1.62(s,6H).LC-MS:m/z 256[M+H]+。

步骤2：8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.9g，7.4mmol)于甲苯(38mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(324mg，893.3μmol)、乙酰氧基铜(182mg，1.5mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(3.5g，11.2mmol)和TMSCN(3.7g，37.2mmol)。将反应在氮气下在室温下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(1.9g，91％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.67(s,1H),7.10(s,1H),4.32(dd,J＝8.8,6.4Hz,1H),2.64(dd,J＝13.6,8.8Hz,1H),2.53(dd,J＝13.6,6.4Hz,1H),1.79(s,3H),1.64(s,3H).LC-MS:m/z 281[M+H]⁺。

步骤3：8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将含8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(900mg，3.2mmol)的AcOH(9mL)和HCl(9mL)添加到30mL小瓶中。将所得混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释，并用NaHCO₃(水溶液，饱和)将pH调节至5-6。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(10:1)洗脱，以得到呈黄色固体的8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(100mg，10％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.72(s,1H),7.02(s,1H),4.29(dd,J＝9.2,6.4Hz,1H),2.46-2.60(m,2H),1.72(s,3H),1.64(s,3H).LC-MS:m/z 300[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(100mg，334.2μmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1，步骤2；98mg，501.3μmol)、TCFH(375mg，1.3mmol)和NMI(110mg，1.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-2-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(40mg，25％产率)。

实例40：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.68(s,1H),8.63(s,1H),8.48(s,1H),7.94(s,2H),7.85(s,1H),7.05(s,1H),4.32(t,J＝8.0Hz,1H),2.63(dd,J＝13.2,9.2Hz,1H),2.49(dd,J＝13.2,7.2Hz,1H),1.81(s,3H),1.65(s,3H).LC-MS:m/z 477[M+H]⁺。

方法S1

实例41：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺

步骤1：1-氨基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-1-碘化盐

(氨基氧基)磺酸(113g，1.0mol)于H₂O(500mL)中的搅拌溶液中添加6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(360g，3.0mol)。将所得混合物在氮气气氛下在90℃下搅拌120分钟。将反应冷却至-5℃。在-5℃下，在10分钟内向上述混合物中分若干部分添加K₂CO₃(138g，1.0mol)。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用乙醇(450mL)稀释。将固体滤出。在-5℃下，在10分钟内向滤液中滴加氢碘酸(140mL，57％纯度)。将所得混合物在-5℃下搅拌20分钟。通过过滤收集固体，以得到呈黑色固体的1-氨基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-1-碘化盐(60g，22.68％产率)。LC-MS:m/z 135[M+H]⁺。

步骤2：2-氨基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈

在室温下，向丙二腈(1.0g，15.3mmol)于EtOH(150mL)中的搅拌溶液中分批添加1-氨基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-1-碘化盐(5g，19.1mmol，I)、K₂CO₃(2.6g，19.1mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在90℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温。将固体滤出，并从甲醇(100mL)和水(100mL)中再结晶，以得到呈黑色固体的2-氨基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(1.0g，22.4％产率)。LC-MS:m/z 199[M+H]⁺。

步骤3：N-[(叔丁氧基)羰基]-N-{10-氰基-1,12-二氮杂三环[7.3.0.02,6]十二碳-2(6),7,9,11-四烯-11-基}氨基甲酸叔丁酯

在室温下在氮气气氛下，向2-氨基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈(1.0g，5.1mmol)和三乙胺(1.5g，15.1mmol)于DCM(10mL)中的搅拌混合物中分批添加Boc₂O(3.3g，15.1mmol)。在室温下向上述混合物中分批添加DMAP(61.6mg，504.5μmol)。将所得混合物在室温下搅拌另外16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的N-[(叔丁氧基)羰基]-N-{10-氰基-1,12-二氮杂三环[7.3.0.02,6]十二碳-2(6),7,9,11-四烯-11-基}氨基甲酸叔丁酯(1.0g，23.9％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:7.78(d,J＝8.8Hz,1H),7.68(d,J＝8.8Hz,1H),3.24-3.32(m,2H),3.02-3.11(m,2H),2.21-2.34(m,2H),1.43(s,18H).LC-MS:m/z 399[M+H]⁺。

步骤4：(3-氰基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯

在室温下向N-[(叔丁氧基)羰基]-N-{10-氰基-1,12-二氮杂三环[7.3.0.02,6]十二碳-2(6),7,9,11-四烯-11-基}氨基甲酸叔丁酯(1.0g，2.5mmol)于甲醇(10mL)中的搅拌溶液中分批添加碳酸钾(345.8mg，2.5mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在40℃下搅拌过夜。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的(3-氰基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(675mg，90％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.21(s,1H),7.57(s,2H),3.22(t,J＝7.6Hz,2H),3.02(t,J＝7.4Hz,2H),2.24-2.27(m,2H),1.49(s,9H).LC-MS:m/z 299[M+H]⁺。

步骤5：(3-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯

在-20℃下在氮气气氛下，向(3-氰基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，1.0mmol)于THF(10mL)中的溶液中滴加二异丙胺锂(2.5mL，2M于THF中，5.0mmol)于THF中的溶液。将反应混合物在-20℃下搅拌0.5小时。然后，滴加碘甲烷(428.19mg，3.0mmol)于THF(0.5mL)中的溶液，并将混合物搅拌另外1小时。将反应用饱和NH₄Cl水溶液(100mL)淬灭，并将混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的(3-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，58.2％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.32(d,J＝8.8Hz,1H),7.06(s,1H),2.98(t,J＝7.2Hz,2H),2.14(t,J＝7.2Hz,2H),1.59(s,9H),1.56(s,6H).LC-MS:m/z 327[M+H]⁺。

步骤6：(3-氰基-8,8-二甲基-6-氧代-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯

向(3-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，306.4μmol)于DCM(10mL)和H₂O(10mL)中的搅拌溶液中添加oxone(188.3mg，306.4μmol)和溴化钾(36.5mg，306.4μmol)。将反应在25℃下在日光(20W)下搅拌16小时。将反应用饱和Na₂SO₃水溶液(50mL)淬灭，并将混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈棕色固体的(3-氰基-8,8-二甲基-6-氧代-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，66.4％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.56(s,1H),7.73(d,J＝9.0Hz,1H),7.66(d,J＝9.0Hz,1H),2.75(s,2H),1.62(s,6H),1.49(s,9H)；LC-MS:m/z 341[M+H]⁺。

步骤7：(3-氰基-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下在氮气气氛下，向(3-氰基-8,8-二甲基-6-氧代-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.2mmol)于MeOH(40mL)中的溶液中以若干部分添加硼氢化钠(88.9mg，2.4mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。将反应用水/冰(100mL)淬灭并用EtOAc(3x150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈淡黄色固体的(3-氰基-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，68.6％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.21(s,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),5.56(s,1H),5.16(s,1H),2.44(dd,J＝13.2,7.4Hz,1H),1.92(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),1.60(s,3H),1.50(s,9H),1.45(s,3H).LC-MS:m/z 343[M+H]⁺。

步骤8：(6-氯-3-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下在氮气气氛下，向(3-氰基-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，876.2μmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中滴加SOCl₂(202.3mg，1.7mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在25℃下搅拌30分钟。将所得混合物在真空下浓缩，以得到呈黄色油的(6-氯-3-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，粗产物)。产物无需进一步纯化即可直接用于下一步。LC-MS:m/z 361[M+H]⁺。

步骤9：(3,6-二氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下在氮气气氛下，向TMSCN(260.7mg，2.6mmol)和TBAF(2.6mL，1M于THF中，2.6mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中滴加含(6-氯-3-氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.6mmol)的THF(2mL)。将所得混合物在氮气气氛下在25℃下搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈棕色油的(3,6-二氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，42.2％产率)。¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δ:7.65(d,J＝8.8Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.07(s,1H),4.23(dd,J＝8.8,6.8Hz,1H),2.60(dd,J＝13.2,8.8Hz,1H),2.49(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),1.73(s,3H),1.60(s,9H),1.56(s,3H)；LC-MS:m/z 352[M+H]⁺。

步骤10：2-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸

向(3,6-二氰基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，284.6μmol)于水(3mL)中的搅拌溶液中添加H₂SO₄(3mL)。将反应在氮气气氛下在126℃下搅拌16小时。将反应混合物倒入50g的碎冰中，并用氢氧化钠水溶液(4M)将pH调节至6-7。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物用ACN(10mL)稀释。将固体滤出。将滤液在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸(30mg，42.81％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.28(d,J＝8.8Hz,1H),5.90(s,1H),4.14(dd,J＝8.8,6.2Hz,1H),2.48(qd,J＝13.2,7.6Hz,2H),1.67(s,3H),1.58(s,3H)；LC-MS:m/z 247[M+H]⁺。

步骤11：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺

在室温下向5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；28.6mg，146.2μmol)和2-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸(30mg，121.8μmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中分批添加TCFH(136.7mg，487.3μmol)和NMI(40mg，487.3μmol)。将所得混合物在室温下在氮气气氛下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到粗产物(10mg)。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈灰白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺(4.5mg，7.8％产率)。

实例41：¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.64(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,2H),7.24(d,J＝9.0Hz,1H),7.06(d,J＝9.0Hz,1H),4.19-4.24(m,1H),2.42-2.46(m,2H),1.73(s,3H),1.56(s,3H)；LC-MS:m/z 424[M+H]⁺

方法T1

步骤1：2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1，步骤6；600mg，2.3mmol)于DMF(10mL)中的搅拌混合物中添加NH₄Cl(305mg，5.6mmol)、HATU(1.29g，3.4mmol)和DIEA(583mg，4.5mmol)。将混合物在25℃下搅拌1小时。添加水(30mL)，并将混合物用乙酸乙酯(10mL x3)萃取。将有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下去除溶剂。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EtOAc(100:0至0:100)洗脱，以得到呈灰白色固体的2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(500mg，75％产率)。LC-MS:m/z 265[M+H]⁺。

步骤2：3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶甲酸甲酯

向5-溴-3-氯吡啶甲酸甲酯(100mg，399.2μmol)于甲苯(5mL)中的混合物中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(106mg，399.2μmol)、Pd₂(dba)₃(36mg，39.9μmol)、XantPhos(23mg，39.9μmol)和碳酸铯(260mg，798.5μmol)。将反应混合物在110℃下在氮气下搅拌1小时。使混合物冷却至室温，并添加碳酸氢钠(饱和水溶液)(3mL)。将混合物用EtOAc(3x2mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用EtOAc/PE(1:1)纯化，以得到呈淡黄色油的3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶甲酸甲酯(120mg，55％产率)。LC-MS:m/z 434[M+H]⁺。

步骤3：3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶甲酸

向3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶甲酸甲酯(100mg，184.2μmol)于EtOH(1mL)和水(0.5mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(9mg，368.4μmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用1N HCl中和，并将混合物用EtOAc(3x2mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶甲酸(80mg，99％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.53(br,1H),10.98(s,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.63(s,1H),8.38(d,J＝2.4Hz,1H),6.95(s,1H),4.43(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),2.55(dd,J＝9.2,13.2Hz,1H),2.31(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 420[M+H]⁺。

步骤4：3-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯

向3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶甲酸(30mg，68.5μmol)于乙腈(1mL)中的混合物中添加CDI(13mg，82.2μmol)，并将混合物在室温下在氮气下搅拌2.5小时。向混合物中添加3-乙氧基-3-氧代丙酸钾(13mg，78.8μmol)和MgCl₂(7mg，78.8μmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。然后，添加5％的柠檬酸水溶液(3mL)，并将混合物用EtOAc(3x2mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用EtOAc/PE(1:1)纯化，以得到呈灰白色固体的3-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(10mg，27％产率)。LC-MS:m/z 490[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-氯-6-(5-羟基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向3-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(10mg，18.3μmol)于AcOH(1mL)中的溶液中添加甲基盐酸肼(3.0mg，22.0μmol)。将混合物在80℃下搅拌2小时。将所得混合物用制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(5-羟基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(1.3mg，14％产率)。

实例42：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.78(s,1H),8.68(d,J＝2.1Hz,1H),8.63(s,1H),8.29(d,J＝2.1Hz,1H),6.94(s,1H),5.83(s,1H),4.41(dd,J＝9.0,6.3Hz,1H),3.57(s,3H),2.27-2.37(m,2H),1.64(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 472[M+H]⁺。

方法U1

实例43：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-3-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氨基-6-氯异烟酸甲酯

将2-氨基-6-氯异烟酸(20g，116.3mmol)于MeOH(200mL)和浓H₂SO₄(20mL)中的溶液在75℃下搅拌15小时。使混合物冷却至25℃。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物用冰水(400mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至7-8。将所得溶液用EtOAc(3x400mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氨基-6-氯异烟酸甲酯(13g，60％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:6.91(d,J＝1.2Hz,1H),6.83(d,J＝1.2Hz,1H),6.81(br,2H),3.85(s,3H).LC-MS:m/z 187[M+H]⁺。

步骤2：6-氨基-3-溴-2-氯异烟酸甲酯

向2-氨基-6-氯异烟酸甲酯(2.8g，15.2mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(2.7g，15.2mmol)。将混合物在50℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的6-氨基-3-溴-2-氯异烟酸甲酯(3.2g，80％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:6.92(br,2H),6.63(s,1H),3.87(s,3H).LC-MS:m/z 265[M+H]⁺。

步骤3：6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸

向6-氨基-3-溴-2-氯异烟酸甲酯(1.9g，7.2mmol)于MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加甲醇钠(5.8g，107.4mmol)。将混合物在150℃下搅拌15小时。使混合物冷却至25℃。将混合物在真空下浓缩。将残余物用水(20mL)稀释，并用HCl(1M)将pH调节至3-4。将所得溶液在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈棕色固体的6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸(1.2g，67％产率)。LC-MS:m/z 247[M+H]⁺。

步骤4：6-氨基-3-溴-N-2-二甲氧基-N-甲基异烟酰胺

在0℃下向6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸(6.5g，26.4mmol)于DMF(70mL)中的搅拌溶液中添加N,O-二甲基盐酸羟胺(3.8g，39.2mmol)、TEA(10.7g，105.7mmol)和BOP(12.9g，29.1mmol)。将混合物在25℃下搅拌15小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)淬灭，并用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x400mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的6-氨基-3-溴-N-2-二甲氧基-N-甲基异烟酰胺(6.9g，90％产率)。LC-MS:m/z 290[M+H]⁺。

步骤5：N-(5-溴-6-甲氧基-4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向6-氨基-3-溴-N-2-二甲氧基-N-甲基异烟酰胺(872mg，3.0mmol)于乙腈(25mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(800mg，3.0mmol)、TCFH(2.5g，9.1mmol)和NMI(743mg，9.1mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2.5小时。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的N-(5-溴-6-甲氧基-4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(1.2g，68％产率)。LC-MS:m/z 537[M+H]⁺。

步骤6：N-(5-溴-4-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在-30℃下向N-(5-溴-6-甲氧基-4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(800mg，1.5mmol)于THF(20mL)中的溶液中缓慢添加LiAlH₄(85mg，2.2mmol)。将反应混合物在-20℃下搅拌1.5小时。在搅拌的同时，添加H₂O(85mg)和NaOH水溶液(85mg，10％)，随后添加H₂O(85mg)。将混合物在25℃下搅拌10分钟，并将沉淀物滤出。将滤液在真空下浓缩并施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的N-(5-溴-4-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(330mg，46％产率)。LC-MS:m/z 478[M+H]⁺。

步骤7：N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向N-(5-溴-4-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(330mg，691.8μmol)于DCM(8mL)中的溶液中缓慢添加DAST(223mg，1.4mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，29％产率)。LC-MS:m/z 500[M+H]⁺。

步骤8：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-3-基)-吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(49mg，98.6μmol)和(1H-吡唑-3-基)硼酸(33mg，294.6μmol)于二噁烷(8mL)和H₂O(2mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(41mg，294.9μmol)和Pd(dppf)Cl₂(7mg，9.7μmol)。将混合物在氮气下在90℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:20)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-3-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(40mg，80％产率)。LC-MS:m/z 488[M+H]⁺。

步骤9：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-3-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]-嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-3-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(39mg，80.1μmol)于氯仿(6mL)中的搅拌溶液中添加三甲基碘硅烷(160mg，800.0μmol)。将所得混合物在50℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至25℃。将反应混合物用MeOH(10mL)淬灭并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-3-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(3.7mg，10％产率)。

实例43：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.07(br,1H),11.50(br,1H),10.82(br,1H),8.63(s,1H),7.83(s,2H),7.13(t,J＝51.2Hz,1H),6.94(s,1H),6.66(s,1H),4.51(s,1H),2.66-2.68(m,1H),2.28-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 474[M+H]⁺。

方法V1

实例44和45：由含有(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-3-(三氟甲基)吡啶

向2-氯-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶(2g，8.8mmol)于MeCN(40mL)中的搅拌溶液中添加2H-三唑(670mg，9.7mmol)和K₂CO₃(2.4g，51.8mmol)。将所得混合物在40℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物过滤，并将收集的固体用EtOAc(3x50mL)洗涤。将合并的有机层在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱色谱法上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈白色固体的5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-3-(三氟甲基)吡啶(1.2g，52％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:9.70(d,J＝4Hz,1H),9.17(d,J＝4Hz,1H),8.87(s,2H).LC-MS:m/z 260[M+H]⁺。

步骤2：6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺

在25℃下向5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-3-(三氟甲基)吡啶(1.2g，4.4mmol)的溶液中添加Pd/C(10％，236mg)。将烧瓶排空并用氮气冲洗三次，随后用氢气冲洗。将混合物在室温下在氢气气氛下搅拌1小时。将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱色谱法上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(方法V1步骤2，800mg，78％产率)。LC-MS:m/z 230[M+H]⁺。

步骤3：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(86mg，376.4μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；100mg，376.4μmol)于乙腈(5mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(421mg，1.5mmol)和NMI(123mg，1.5mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(70mg，39％产率)。LC-MS:m/z 477[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对70mg N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度50％B 21分钟；254/220nm；RT1：12.167；RT2：17.18；进样体积：1ml；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例44(21.6mg，31％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例45(15.2mg，22％产率)。

实例44：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.22(s,1H),9.03(d,J＝2.4Hz,1H),8.82(d,J＝2.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.20(s,2H),6.96(s,1H),4.49(dd,J＝6.3,9.3Hz,1H),2.59(dd,J＝9.3,13.2Hz,1H),2.37(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.66(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 477[M+H]⁺。

实例45：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.23(s,1H),9.03(d,J＝2.1Hz,1H),8.82(d,J＝2.1Hz,1H),8.68(s,1H),8.20(s,2H),6.96(s,1H),4.49(dd,J＝6.3,9.3Hz,1H),2.59(dd,J＝9.3,13.2Hz,1H),2.37(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.66(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 477[M+H]⁺

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法W1

实例46和47：由含有(R)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-溴-2-氯-3-(二氟甲基)吡啶

在0℃下向5-溴-2-氯烟醛(2.5g，11.3mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中滴加DAST(3.6g，22.6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。用饱和NaHCO₃水溶液将混合物的pH调节至8。将所得混合物用DCM(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈淡黄色油的5-溴-2-氯-3-(二氟甲基)吡啶(1.5g，55％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.55-8.59(m,1H),8.09-8.14(m,1H),6.87(t,J＝54.0Hz,1H).LC-MS:m/z 242[M+H]⁺。

步骤2：5-溴-3-(二氟甲基)-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶和5-溴-3-(二氟甲基)-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶

向5-溴-2-氯-3-(二氟甲基)吡啶(1.5g，6.2mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(1.7g，12.8mmol)和2H-1,2,3-三唑(512mg，7.4mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌4小时。将混合物倒入水(30mL)中并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的5-溴-3-(二氟甲基)-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶和5-溴-3-(二氟甲基)-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶的混合物(1.6g，94％产率)。LC-MS:m/z 275[M+H]⁺。

步骤3：(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯和(5-(二氟甲基)-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

向5-溴-3-(二氟甲基)-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶和5-溴-3-(二氟甲基)-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶的混合物(1.6g，5.8mmol)于二噁烷(160mL)中的搅拌溶液中添加氨基甲酸叔丁酯(1.02g，8.7mmol)、xantphos(1.01g，1.7mmol)、Pd₂(dba)₃(668mg，1.2mmol)和Cs₂CO₃(5.7g，17.4mmol)。将反应混合物在90℃下在N₂下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。将所得混合物过滤。将滤饼用EtOAc(3x100mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(700mg，38.7％产率)和呈黄色固体的(5-(二氟甲基)-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，33％产率)。

(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯：¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ:8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.04(s,2H),7.45(t,J＝54.8Hz,1H),1.55(s,9H).LC-MS:m/z 312[M+H]⁺

(5-(二氟甲基)-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ:8.72(d,J＝2.4Hz,1H),8.59(d,J＝1.2Hz,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),7.91(d,J＝1.2Hz,1H),7.60(t,J＝54.8Hz,1H),1.56(s,9H).LC-MS:m/z 312[M+H]⁺。

步骤4：5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺

向(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，643μmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加TFA(2.9g，25.7mmol)。将混合物在25下搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱色谱法上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(110mg，81％产率)。¹H NMR(300MHz,甲醇-d₄)δ:8.00(d,J＝2.7Hz,1H),7.96(s,2H),7.08(t,J＝55.2Hz,1H).LC-MS:m/z 212[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(110mg，520.9μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；138mg，520.9μmol)于乙腈(5mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(588mg，2.1mmol)和NMI(171mg，2.1mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，42％产率)。LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对100mg 2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度50％B 20分钟；254/220nm；RT1：7.229；RT2：13.27；进样体积：1ml；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例46(29.2mg，29％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例47(35.8mg，36％产率)。

实例46：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.06(s,1H),8.93(d,J＝2.4Hz,1H),8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.22(s,2H),7.35(t,J＝54.3Hz,1H),6.96(s,1H),4.47(dd,J＝6.3,9.3Hz,1H),2.58(dd,J＝9.3,13.2Hz,1H),2.36(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.65(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

实例47：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.06(s,1H),8.93(d,J＝2.4Hz,1H),8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.22(s,2H),7.35(t,J＝54.3Hz,1H),6.96(s,1H),4.47(dd,J＝6.3,9.3Hz,1H),2.58(dd,J＝9.3,13.2Hz,1H),2.36(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.66(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法X1

实例48：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(1H-咪唑-4-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在氮气下向N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(方法U1步骤7；80mg，159.7μmol)于二噁烷(9mL)和H₂O(3mL)中的溶液中添加(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)硼酸(170mg，479.3μmol)、Pd(dppf)Cl₂(12mg，15.9μmol)和K₂CO₃(22mg，159.7μmol)。将反应在90℃下搅拌2.5小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物浓缩，并且将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以获得呈白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(84mg，65％产率)。LC-MS:m/z 730[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(1H-咪唑-4-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(84mg，115.1μmol)于氯仿(5mL)中的溶液中添加三甲基碘硅烷(230mg，1.2mmol)。将所得混合物在50℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用MeOH(10mL)淬灭并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈浅黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(1H-咪唑-4-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(9.4mg，17％产率)。

实例48：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.39(br,2H),10.95(s,1H),8.69(br,1H),8.62(s,1H),7.67(s,1H),7.08-7.43(m,2H),6.93(s,1H),4.51(t,J＝8.4Hz,1H),2.51-2.57(m,1H),2.28-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 474[M+H]⁺。

方法Y1

实例49、50、51和52：由含有(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((R)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((R)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

将2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(6.5g，51.5mmol)、乙腈(150mL)、2,3-二氯-5-硝基吡啶(9.0g，46.9mmol)和K₂CO₃(8.4g，60.9mmol)放置到500mL烧瓶中。将反应混合物在40℃下搅拌15小时。将固体滤出。将滤液在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化法进行纯化，并将收集的级分浓缩，以得到呈白色固体的2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(4.9g，33.8％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:9.36(d,J＝2.3Hz,1H),8.83(d,J＝2.3Hz,1H),8.44(s,1H),4.05(s,3H).LC-MS:m/z284[M+H]⁺。

步骤2：2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

将2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(1.3g，4.6mmol)、四氢呋喃(20mL)、水(10mL)、NH₄Cl(1.2g，22.9mmol)和Fe(1.3g，22.9mmol)放置到250mL烧瓶中。将混合物在75℃下搅拌1小时。将反应冷却至25℃。将固体滤出。将滤液在真空下浓缩。将所得混合物用水(100mL)稀释。将所得混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用97％二氯甲烷和3％甲醇作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(844mg，72.8％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.30(s,1H),7.90(d,J＝2.6Hz,1H),7.16(d,J＝2.5Hz,1H),3.98(s,3H).LC-MS:m/z 254[M+H]⁺。

步骤3：2-[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氯-2-吡啶基]三唑-4-甲酸甲酯

将2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(844mg，3.3mmol)、二氯甲烷(20mL)、TEA(673.4mg，6.7mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(40.7mg，332.8μmol)放置到100mL烧瓶中。将反应冷却至0℃。然后，添加二碳酸二叔丁酯(1.5g，6.7mmol)。将反应温热至室温并搅拌15小时。将所得混合物用水(100mL)稀释。将所得混合物用二氯甲烷(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用65％石油醚和35％乙酸乙酯作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的2-[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氯-2-吡啶基]三唑-4-甲酸甲酯(912mg，60.4％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.36(s,1H),8.35(d,J＝2.2Hz,1H),7.83(d,J＝2.3Hz,1H),4.00(s,3H),1.45(s,18H).LC-MS:m/z 454[M+H]⁺。

步骤4：2-(5-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸

向2-(5-{双[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(1.8g，3.9mmol)于甲醇(10mL)和四氢呋喃(20mL)中的搅拌溶液中添加含LiOH(190mg，7.9mmol)的水(10mL)。将反应在25℃下搅拌1小时。将反应用水(50mL)稀释。用HCl(4M)将pH调节至4-5。将混合物用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，以得到呈白色固体的2-(5-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸(1.5g，94％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:13.02(s,1H),10.26(s,1H),8.59(d,J＝2.3Hz,1H),8.55(s,1H),8.35(d,J＝2.3Hz,1H),1.52(s,9H).LC-MS:m/z 340[M+H]⁺。

步骤5：(5-氯-6-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

向2-(5-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸(400mg，1.2mmol)于乙腈中的搅拌溶液中添加N,O-二甲基羟胺；盐酸盐(229mg，2.3mmol)、六氟磷酸N-(氯(二甲基氨基)亚甲基)-N-甲基甲胺酯(991mg，3.5mmol)和1-甲基-1H-咪唑(676mg，8.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用75％石油醚和25％乙酸乙酯作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的(5-氯-6-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，59％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.25(s,1H),8.57(d,J＝2.3Hz,1H),8.44(s,1H),8.33(d,J＝2.3Hz,1H),3.74(s,3H),2.67(s,3H),1.50(s,9H).LC-MS:m/z 383[M+H]⁺。

步骤6：(6-(4-乙酰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下在氮气气氛下，向(5-氯-6-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，731.1μmol)于四氢呋喃(20mL)中的搅拌溶液中滴加甲基溴化镁(0.5mL，1.5mmoL，3M于二乙醚中)。将反应在0℃下搅拌1小时。将反应用饱和NH₄Cl水溶液(50mL)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用70％石油醚和30％乙酸乙酯作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的(6-(4-乙酰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，61％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.27(s,1H),8.48-8.67(m,2H),8.34(d,J＝2.3Hz,1H),2.59(s,3H),1.50(s,9H).LC-MS:m/z 338[M+H]⁺。

步骤7：(5-氯-6-(4-(1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

/>

在0℃下，向(6-(4-乙酰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，414.5μmol)于甲醇(4mL)中的搅拌溶液中添加NaBH₄(19mg，497.4μmol)。将反应在0℃下搅拌1小时。在真空下去除溶剂。将残余物通过制备型TLC使用90％二氯甲烷和10％甲醇作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的(5-氯-6-(4-(1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，94％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.16(s,1H),8.53(d,J＝2.3Hz,1H),8.28(d,J＝2.3Hz,1H),7.98(s,1H),5.50(d,J＝5.1Hz,1H),4.88-4.94(m,1H),1.49(s,9H),1.43(d,J＝6.5Hz,3H).LC-MS:m/z340[M+H]⁺。

步骤8：1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇

向(5-氯-6-(4-(1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，220.2μmol)于乙酸乙酯(2mL)中的搅拌溶液中添加HCl(2.2mL，4M于乙酸乙酯中)。将反应在25℃下搅拌2小时。在真空下除去溶剂。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并通过饱和NaHCO₃水溶液(50mL)淬灭。将水层用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过制备型TLC使用95％二氯甲烷和5％甲醇作为洗脱剂进行纯化，以得到呈无色油的1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(方法Y1步骤8；38mg，54％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:7.87(s,1H),7.79(d,J＝2.5Hz,1H),7.17(d,J＝2.5Hz,1H),6.14(s,2H),5.43(s,1H),4.89(s,1H),1.42(d,J＝6.5Hz,3H).LC-MS:m/z 240[M+H]⁺。

步骤9：6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-胺

在0℃下向1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(50mg，208.6μmol)于二氯甲烷(7mL)中的搅拌溶液中添加三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅基酯(72mg，271.2μmol)和2,6-二甲基吡啶(63mg，625.9μmol)。将反应在25℃下搅拌1小时。在真空下去除溶剂。将残余物通过制备型TLC使用50％石油醚和50％甲醇作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-胺(40mg，51％产率)。LC-MS:m/z 354[M+H]⁺。

步骤10：N-(6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-胺(400mg，1.7mmol)于乙腈(15mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；453mg，1.7mmol)、TCFH(1.4g，5.1mmol)和NMI(420mg，5.1mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的N-(6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(500mg，66％产率)。LC-MS:m/z601[M+H]⁺。

步骤11：2-氯-N-(5-氯-6-(4-(1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向N-(6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(450mg，748.0μmol)于DCM(6mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将反应溶液在真空下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至7-8。将所得混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到370mg粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(4-(1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(200mg，46％产率)。LC-MS:m/z487[M+H]⁺。

步骤12：分离对映异构体以获得(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((R)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-((R)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对200mg 2-氯-N-(5-氯-6-(4-(1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，5*25cm，10μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度40％B 21.5分钟；220/254nm；RT1：12.594；RT2：14.454；进样体积：0.5ml；运行次数：9)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例49(27.8mg，14％产率)。将第三洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例52(20.1mg，10％产率)。将含有两种其它异构体的混合物的级分浓缩并进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IF，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2MNH₃-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：18毫升/分钟；等度40％B 21分钟；220/254nm；RT1：9.826；RT2：16.854；进样体积：4ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例50(30.4mg，15％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例51(38.5mg，19％产率)。

实例49：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(br,1H),8.72(d,J＝2.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(s,1H),6.95(s,1H),5.54(br,1H),4.93-4.97(m,1H),4.44-4.48(m,1H),2.50-2.60(m,1H),2.32-2.36(m,1H),1.65(s,3H),1.57(s,3H),1.47(d,J＝6.4Hz,3H).LC-MS:m/z 487[M+H]⁺。

实例50：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.06(br,1H),8.72(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.04(s,1H),6.95(s,1H),5.49(br,1H),4.92-4.97(m,1H),4.44-4.48(m,1H),2.51-2.60(m,1H),2.31-2.36(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H).LC-MS:m/z 487[M+H]⁺。

实例51：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.06(br,1H),8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(s,1H),6.95(s,1H),5.53(br,1H),4.92-4.97(m,1H),4.44-4.48(m,1H),2.57-2.68(m,1H),2.30-2.36(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H),1.46(d,J＝6.4Hz,3H).LC-MS:m/z 487[M+H]⁺。

实例52：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.06(br,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,1H),6.95(s,1H),5.54(br,1H),4.92-4.97(m,1H),4.44-4.48(m,1H),2.51-2.68(m,1H),2.31-2.36(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H).LC-MS:m/z 487[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Z1

实例53、54、55和56：由含有(6R,8R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6S,8S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6R,8S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

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向2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法Q1步骤6；160mg，501.6μmol)于乙腈(10mL)中的搅拌溶液中添加6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(138mg，601.9μmol)、TCFH(564mg，2.0mmol)和NMI(163mg，2.0mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x30mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈两对外消旋非对映体的混合物的呈白色固体的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。LC-MS:m/z531[M+H]⁺。对此混合物进行制备型HPLC以获得非对映异构体A和非对映异构体B的分离的外消旋混合物。

步骤8：分离对映异构体以获得(6R,8R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6S,8S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6R,8S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对60mg非对映异构体A进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度20％B20分钟；254/220nm；RT1：6.443；RT2：16.149；进样体积：1.5ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例53(23.8mg，9％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例54(30.6mg，12％产率)。

对40mg非对映异构体B进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度30％B19分钟；254/220nm；RT1：7.153；RT2：11.261；进样体积：2ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例55(7mg，3％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例56(18.4mg，7％产率)。

实例53：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.33(s,1H),9.02(d,J＝2.4Hz,1H),8.82(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.20(s,2H),7.09(s,1H),4.56-4.60(m,1H),3.08-3.13(m,1H),2.54-2.58(m,1H),1.94(s,3H).LC-MS:m/z 531[M+H]⁺。

实例54：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.33(s,1H),9.02(d,J＝2.4Hz,1H),8.82(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.20(s,2H),7.09(s,1H),4.56-4.60(m,1H),3.08-3.13(m,1H),2.54-2.58(m,1H),1.94(s,3H).LC-MS:m/z 531[M+H]⁺。

实例55：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.24(s,1H),9.03(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,2H),8.19(s,2H),7.09(s,1H),4.57-4.61(m,1H),2.91-2.94(m,1H),2.73-2.90(m,1H),1.84(s,3H).LC-MS:m/z 531[M+H]⁺。

实例56：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.23(s,1H),9.02(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,2H),8.20(s,2H),7.09(s,1H),4.57-4.61(m,1H),2.91-2.94(m,1H),2.73-2.90(m,1H),1.84(s,3H).LC-MS:m/z 531[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法A2

实例57和58：由含有(R)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(噁唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(方法U1步骤7；100mg，199.7μmol)于二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加2-(三丁基甲锡烷基)噁唑(71.5mg，199.7μmol)和Pd(PPh₃)₄(49.7mg，39.9μmol)。将所得混合物在氮气下在90℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到呈棕色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(噁唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(40mg，40％产率)。LC-MS:m/z 489[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(噁唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，204.5μmol)于氯仿(10mL)中的搅拌混合物中分批添加三甲基碘硅烷(409mg，2.1mmol)。将所得混合物在50℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃，用水(50mL)稀释，并且然后用DCM(3x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥，并在真空下浓缩。将粗产物(50mg)通过制备型HPLC进行纯化，以得到呈白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，22％产率)。LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对30mg外消旋2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-2-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.3％FA)，流动相B：EtOH；流速：16毫升/分钟；等度50％B 30分钟；220/254nm；RT1：11.977；RT2：24.831；进样体积：1ml；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈紫色固体的实例57(8.3mg，27.6％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈粉色固体的实例58(4.6mg，15.3％产率)。

实例57：¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.01(br,1H),11.47(br,1H),8.62(s,1H),8.30(s,1H),7.81(s,1H),7.46(s,1H),7.30(t,J＝56Hz,1H),6.93(s,1H),4.54-4.52(m,1H),2.51-2.68(m,1H),2.27-2.34(m,1H),1.63(s,3H),1.54(s,3H).LCMS(ES,m/z):475[M+H]⁺。

实例58：¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.01(br,1H),11.47(br,1H),8.62(s,1H),8.30(s,1H),7.80(s,1H),7.46(s,1H),7.31(t,J＝56Hz,1H),6.93(s,1H),4.54-4.51(m,1H),2.54-2.68(m,1H),2.27-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS(ES,m/z):475[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法B2

实例59：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-5-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

步骤1：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噁唑(70mg，359.5μmol)和N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(方法U1步骤7；60mg，119.8μmol)于二噁烷(4mL)中的搅拌混合物中添加Pd(dppf)Cl₂(18mg，23.9μmol)、K₂CO₃(50mg，359.5μmol)和H₂O(1mL)。将所得混合物在50℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将所得溶液用水(50mL)稀释，并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(3:1)洗脱，以得到呈浅黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(40mg，61％产率)。LC-MS:m/z489[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-5-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，61.5μmol)于氯仿(5mL)中的搅拌混合物中分批添加三甲基碘硅烷(41mg，0.6mmol)。将所得混合物在50℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(20mL)稀释，并且然后用DCM(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且并且在真空下浓缩。将粗产物(20mg)通过制备型HPLC进行纯化，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(噁唑-5-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(14mg，47％产率)。

实例59：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.91(br,1H),10.94(br,1H),8.63(s,1H),8.50(s,1H),7.97(s,1H),7.56(s,1H),7.28(t,J＝54Hz,1H),6.94(s,1H),4.44-4.58(m,1H),2.51-2.59(m,1H),2.32-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

方法C2

实例60：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(异噁唑-5-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

步骤1：N-(5-乙酰基-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向N-(5-溴-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(方法U1步骤7；200mg，399.4μmol)于DMF(5mL)中的搅拌混合物中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(288mg，798.8μmol)和Pd(PPh₃)₄(99mg，79.8μmol)。将所得混合物在80℃下在氮气下搅拌6小时。将混合物冷却至25℃。将残余物用HCl(50mL，2M)淬灭。将所得混合物用EtOAc(3x200mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到呈黄色固体的N-(5-乙酰基-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(180mg，74％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.21(br,1H),8.58(s,1H),8.00(s,1H),7.01(t,J＝54Hz,1H)6.80(s,1H),4.51-4.58(m,1H),3.78(s,3H),2.52-2.55(m,1H),2.52(s,3H),2.25-2.31(m,1H),1.62(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 464[M+H]⁺。

步骤2：(E)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向N-(5-乙酰基-4-(二氟甲基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(150mg，323.4μmol)于甲苯(10mL)中的搅拌混合物中添加DMF-DMA(192mg，1.6mmol)。将所得混合物在60℃下在氮气下搅拌48小时。将混合物冷却至25℃。将残余物在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到呈黄色固体的(E)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(20mg，10％产率)。LC-MS:m/z 519[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(异噁唑-5-基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向(E)-2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(35mg，67.4μmol)于乙醇(4mL)中的搅拌混合物中添加盐酸羟胺(7mg，101.2μmol)。将所得混合物在90℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将所得溶液用水(50mL)稀释，并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈灰白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(异噁唑-5-基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(15mg，45％产率)。LC-MS:m/z 489[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(异噁唑-5-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(异噁唑-5-基)-6-甲氧基吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(23mg，47.1μmol)于氯仿(6mL)中的搅拌混合物中分批添加三甲基碘硅烷(94mg，470.5mmol)。将所得混合物在50℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(15mL)稀释，并且然后用DCM(3x15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将粗产物(20mg)通过制备型HPLC进行纯化，以得到呈灰白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-5-(异噁唑-5-基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(9.5mg，42％产率)。

实例60：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.00(br,1H),11.06(s,1H),8.65-8.70(m,2H),7.24(t,J＝54Hz,1H),6.95(s,1H),6.90(bs,1H),4.51-4.60(m,1H),2.55-2.62(m,1H),2.29-2.33(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

方法D2

实例61：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

步骤1：6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸甲酯

向6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸(方法U1步骤3；10g，40.6mmol)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加碘甲烷(7.1g，50.2mmol)和K₂CO₃(11.2g，81.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌4小时。将所得混合物倒入水(400mL)中，并用EtOAc(3x400mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x400mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸甲酯(5g，47％产率)。LC-MS:m/z 261[M+H]⁺。

步骤2：6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸

向6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸甲酯(4.1g，15.7mmol)和2H-1,2,3-三唑(1.6g，25.6mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加2,2,6,6-四甲基庚烷-3,5-二酮(578mg，3.2mmol)、CuI(598mg，3.2mmol)和K₂CO₃(4.4g，31.4mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物倒入水(200mL)中，并用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层用水(3x500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到呈黄色固体的6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸(1g，27％产率)。LC-MS:m/z 236[M+H]⁺。

步骤3：6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯

向6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸(1g，4.3mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加碘甲烷(905mg，6.4mmol)和K₂CO₃(1.2g，8.5mmol)。将混合物在25℃下搅拌4小时。将所得混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层用水(3x200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯(340mg，32％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:7.90(s,2H),6.82(br,2H),6.41(s,1H),3.84(s,3H),3.50(s,3H).LC-MS:m/z 250[M+H]⁺。

步骤4：6-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯

向6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯(330mg，1.3mmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；492mg，1.8mmol)于乙腈(10mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(1.1g，3.9mmol)和NMI(326mg，3.9mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的6-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯(400mg，38％产率)。LC-MS:m/z 497[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(4-(羟甲基)-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在-40℃下向6-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯(230mg，463μmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加LiAlH₄(53mg，1.4mmol)。将反应混合物在-40℃下搅拌1小时。添加水(53mg)和NaOH(53mg，10％于水中)。将另一批次的水(53mg)添加到混合物中，并且将其搅拌5分钟。将固体滤出，并将滤液在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-(羟甲基)-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，36％产率)。LC-MS:m/z 469[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-N-(4-甲酰基-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-氯-N-(4-(羟甲基)-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，213μmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中缓慢添加戴斯-马丁过碘烷(Dess-Martin periodinane)(361mg，853μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将固体滤出体，并将滤液在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-甲酰基-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，30％产率)。LC-MS:m/z 467[M+H]⁺。

步骤7：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在-20℃下向2-氯-N-(4-甲酰基-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，64μmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中缓慢添加三氟化二乙氨基硫(20mg，128μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物倒入碎冰(10mL)中，并用DCM(3x10mL)萃取。将合并的有机层在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(8mg，16％产率)。LC-MS:m/z 489[M+H]⁺。

步骤8：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(8mg，16.2μmol)于氯仿(4mL)中的搅拌混合物中分批添加三甲基碘硅烷(33mg，162mmol)。将所得混合物在50℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(10mL)稀释，并且然后用DCM(3x10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将粗产物(6mg)通过制备型HPLC进行纯化，以得到呈灰白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(3mg，38％产率)。

实例61：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.91(br,1H),11.10(s,1H),8.65(s,1H),8.10(s,2H),7.65(br,1H),6.95(s,1H),6.59(t,J＝54Hz,1H),4.50-4.62(m,1H),2.50-2.58(m,1H),2.27-2.35(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

方法E2

实例62：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-1-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

步骤1：6-氨基-2-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)异烟酸甲酯

向6-氨基-3-溴-2-甲氧基异烟酸甲酯(方法D2步骤1；2g，7.6mmol)和1H-吡唑(782mg，17.5mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加2,2,6,6-四甲基庚烷-3,5-二酮(279mg，1.6mmol)、CuI(300mg，1.6mmol)和K₂CO₃(2.2g，16.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物倒入水(200mL)中，并用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层用水(3x500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈棕色固体的6-氨基-2-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)异烟酸甲酯(650mg，33％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:7.78(s,1H),7.54(s,1H),6.61(s,2H),6.31(br,2H),3.80(s,3H),3.52(s,3H).LC-MS:m/z 249[M+H]⁺。

步骤2：6-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-2-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)异烟酸甲酯

向6-氨基-2-甲氧基-3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)异烟酸甲酯(650mg，2.6mmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；984mg，3.6mmol)于乙腈(20mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(2.2g，7.8mmol)和NMI(652mg，7.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的6-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-2-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)异烟酸甲酯(500mg，34％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.19(br,1H),8.61(s,1H),8.05-7.95(m,2H),7.66(d,J＝1.8Hz,1H),6.95(s,1H),6.48(t,J＝2.1Hz,1H),4.53-4.56(m,1H),3.99(s,3H),3.55(s,3H),2.49-2.53(m,1H),2.23-2.36(m,1H),1.65(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 496[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(4-(羟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在-45℃下向6-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-2-甲氧基-3-(1H-吡唑-1-基)异烟酸甲酯(600mg，1.2mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加LiAlH₄(91mg，2.4mmol)。将反应混合物在-45℃下搅拌1小时。添加水(91mg)和NaOH(91mg，10％于水中)。将另一批次的水(91mg)添加到混合物中，并且将其搅拌5分钟。将固体滤出，并将滤液在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(10:1)洗脱，以得到呈浅黄色固体的2-氯-N-(4-(羟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(280mg，30％产率)。LC-MS:m/z 468[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-N-(4-甲酰基-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-氯-N-(4-(羟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(280mg，598μmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中缓慢添加戴斯-马丁过碘烷(380mg，897μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将固体滤出体，并将滤液在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-甲酰基-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(120mg，32％产率)。LC-MS:m/z 466[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在-20℃向2-氯-N-(4-甲酰基-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，214μmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中缓慢添加三氟化二乙氨基硫(69mg，428μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物倒入碎冰(15mL)中，并用DCM(3x15mL)萃取。将合并的有机层在真空下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(10mg，9％产率)。LC-MS:m/z488[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-1-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下在氮气下，向2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-甲氧基-5-(1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(10mg，20.4μmol)于氯仿(4mL)中的搅拌混合物中分批添加三甲基碘硅烷(40mg，204μmol)。将所得混合物在50℃下在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(12mL)稀释，并且然后用DCM(3x12mL)萃取。将有机层合并，用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将粗产物(7mg)通过制备型HPLC进行纯化，以得到呈白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-1-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(4mg，51％产率)。

实例62：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.89(br,1H),10.98(s,1H),8.65(s,1H),8.00(d,J＝2.1Hz,1H),7.90(br,1H),7.74(d,J＝2.1Hz,1H),6.96(s,1H),6.75(t,J＝54Hz,1H),6.50-6.51(m,1H),4.50-4.61(m,1H),2.50-2.59(m,1H),2.38-2.49(m,1H),1.65(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 474[M+H]⁺。

方法F2

实例63、64、65和66：由含有(6R,8S)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6S,8R)-2-氯-N-(5-(二氟-甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6R,8R)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8S)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

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向2-氯-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法Q1步骤6；50mg，156.7μmol)于乙腈(8mL)中的搅拌溶液中添加5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法W1步骤4；50mg，235.1μmol)、TCFH(176mg，627.0μmol)和NMI(51mg，627.0μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x30mL)萃取，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈两对外消旋非对映体的混合物的呈白色固体的2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。LC-MS:m/z 513[M+H]⁺。对此混合物进行制备型HPLC以获得非对映异构体A和非对映异构体B的分离的外消旋混合物。

步骤2：分离对映异构体以获得(6R,8S)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6S,8R)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺、(6R,8R)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8S)-2-氯-N-(5-(二氟甲基)-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对30mg非对映异构体A进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度30％B15分钟；254/220nm；RT1：7.109；RT2：11.874；进样体积：1.2ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例63(11.3mg，14％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例64(10.3mg，13％产率)。

对15mg非对映异构体B进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5um；流动相A：Hex(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度30％B19分钟；254/220nm；RT1：7.153；RT2：11.261；进样体积：2ml；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例65(6mg，11％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例66(5.4mg，10％产率)。

实例63：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.18(br,1H),8.93(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.23(s,2H),7.35(t,J＝54.4Hz,1H),7.09(s,1H),4.55-4.59(m,1H),3.08-3.14(m,1H),2.07-2.68(m,1H),1.94(s,3H).LC-MS:m/z 513[M+H]⁺。

实例64：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.22(br,1H),8.93(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.23(s,2H),7.36(t,J＝54.4Hz,1H),7.09(s,1H),4.55-4.59(m,1H),3.08-3.14(m,1H),2.07-2.68(m,1H),1.94(s,3H).LC-MS:m/z 513[M+H]⁺。

实例65：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.06(br,1H),8.93(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.67(d,J＝2.4Hz,1H),8.22(s,2H),7.35(t,J＝54Hz,1H),7.09(s,1H),4.56-4.59(m,1H),2.88-2.93(m,1H),2.75-2.79(m,1H),1.83(s,3H).LC-MS:m/z 513[M+H]⁺。

实例66：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.05(br,1H),8.93(d,J＝2.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.67(d,J＝2.4Hz,1H),8.22(s,2H),7.35(t,J＝54Hz,1H),7.09(s,1H),4.56-4.59(m,1H),2.88-2.93(m,1H),2.75-2.79(m,1H),1.83(s,3H).LC-MS:m/z 513[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法G2

实例67和68：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体。

步骤1：3-氯-2-(二氟甲氧基)-5-硝基-吡啶

在0℃下向3-氯-5-硝基-吡啶-2-醇(1g，5.7mmol)于乙腈(50mL)中的搅拌溶液中添加氢化钠(618mg，15.4mmol，60％于矿物油中)。将反应混合物在23℃下搅拌0.5小时。添加2,2-二氟-2-氟磺酰基-乙酸(1.7g，9.7mmol)，并将混合物在23℃下搅拌18小时。通过添加水(50mL)将反应淬灭，并将混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝6:1)纯化，以得到呈无色油的3-氯-2-(二氟甲氧基)-5-硝基-吡啶(260mg，18％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.98(d,J＝2.4Hz,1H),8.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.52(t,J＝71.2Hz,1H)。

步骤2：5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-胺

向3-氯-2-(二氟甲氧基)-5-硝基-吡啶(210mg，0.9mmol)于乙醇(7.5mL)和水(2.5mL)中的混合物中添加氯化铵(100mg，1.9mmol)和铁(313mg，5.6mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却并过滤，并在真空下去除乙醇。将残余物用EtOAc(3x10mL)萃取物，并将合并的有机层用饱和氯化铵水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用PE/EtOAc(3:1)洗脱，以得到呈无色油的5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-胺(140mg，50％产率)。LC-MS:m/z 195[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-胺(195mg，155μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；265mg，212μmol)于乙腈(10mL)中的搅拌混合物中添加TCFH(674mg，2.4mmol)和NMI(197mg，2.4mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释并且然后用DCM(3x100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将粗产物(150mg)通过制备型HPLC进行纯化，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(50mg，14％产率)。LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺。

对30mg 2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Reg-AD，3*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：45毫升/分钟；等度20％B 17分钟；220/254nm；RT1：11.229；RT2：13.438；进样体积：0.5ml；运行次数：10)。将含有第一洗脱异构体的级分浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例67(8mg，26％产率)。将含有第二洗脱异构体的级分浓缩并冻干，以获得呈白色固体的实例68(7mg，23％产率)。

实例67：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.15(br,1H),8.65(s,1H),8.44-8.48(m,2H),7.70(t,J＝72Hz,1H),6.94(s,1H),4.44-4.49(m,1H),2.51-2.58(m,1H),2.24-2.33(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

实例68：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.18(br,1H),8.66(s,1H),8.44-8.49(m,2H),7.70(t,J＝72Hz,1H),6.94(s,1H),4.49-4.53(m,1H),2.51-2.58(m,1H),2.26-2.37(m,1H),1.65(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法H2

实例69：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-酮

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(方法A1步骤4；2.0g，9.0mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(362mg，1.0mmol)、乙酰氧基铜(132mg，1.0mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(4.3g，13.5mmol)和TMSCN(4.5g，45.1mmol)。将反应在25℃下在氧气(气球)下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-酮(700mg，32％产率)。LC-MS(ES,m/z):236[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-8,8-二甲基-6-((三甲基硅基)氧基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-酮(200mg，0.8mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加4-甲基吗啉4-氧化物(1g，8.5mmol)和TMSCN(0.9g，8.5mol)。将反应在氮气下在25℃下搅拌16小时。在真空下去除溶剂，并将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到2-氯-8,8-二甲基-6-((三甲基硅基)氧基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(40mg，9％产率)。¹HNMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.62(s,1H),6.76(s,1H),2.74-2.91(m,1H),2.48-2.51(m,1H),1.73(d,J＝2.7Hz,6H),0.34(s,9H).LC-MS(ES,m/z):335[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸乙酯

将2-氯-8,8-二甲基-6-((三甲基硅基)氧基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(52mg，155μmol)于HCl(5mL，4M于乙醇中)中的溶液在25℃下搅拌4小时。将混合物冷却至25℃。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到2-氯-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸乙酯(45mg，66％产率)。LC-MS(ES,m/z):310[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-6-羟基-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸酯(16mg，53μmol)和5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；13mg，65μmol)于THF(5mL)中的搅拌溶液中添加叔丁醇钾(12mg，106mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用水(30mL)稀释并且然后用DCM(3x30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(90mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的2-氯-N-(4-(二氟甲基)-6-氧代-5-(1H-吡唑-1-基)-1,6-二氢吡啶-2-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(10.5mg，42％产率)。

实例69：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.93(br,1H),9.00(d,J＝2Hz,1H),8.72(d,J＝2Hz,1H),8.68(s,1H),8.17(s,2H),7.09(br,1H),7.01(s,1H),2.81(d,J＝14.0Hz,1H),2.33(d,J＝14.0Hz,1H),1.69(s,3H),1.64(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

方法I2

实例70和71：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-6,8-二氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-6,8-二氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2,3-二甲酸二乙酯

在0℃下向钠(1.0g，43.6mmol)于THF(100mL)中的搅拌混合物中添加2-羟基-2-甲基丙酸乙酯(9.6g，72.6mmol)和马来酸二乙酯(5.0g，29.0mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3小时。用H₂SO₄(2M)将pH调节至2-3。将所得混合物用DCM(100mL x2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，以得到呈黄色油的5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2,3-二甲酸二乙酯(8.0g，85％产率)，其无需进一步纯化即可直接使用。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:5.08(d,J＝9.2Hz,1H),4.28(q,J＝7.2Hz,4H),3.75(d,J＝9.2Hz,1H),1.37(s,3H),1.31(t,J＝7.2Hz,6H),1.30(s,3H)。

步骤2：5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酸

将5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2,3-二甲酸二乙酯(8.0g，31.0mmol)于H₂SO₄(120mL，2M)中的混合物在100℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(100mL)稀释，并用DCM(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，以得到呈黄色油的5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酸(3.0g，61％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:4.83(t,J＝8.4Hz,1H),2.94(dd,J＝18.8,8.4Hz,1H),2.81(dd,J＝18.8,8.0Hz,1H),1.37(s,3H),1.29(s,3H)。

步骤3：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺

向5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酸(1.2g，7.7mmol)和5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；1.0g，5.1mmol)于乙腈(30mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(5.7g，20.4mmol)和NMI(1.7g，20.4mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(93:7)洗脱，以得到呈黄色油的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(320mg，10％产率)。LC-MS:m/z 336[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-((二甲基氨基)亚甲基)-5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺

将N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(320mg，953.1μmol)于DMF-DMA(10mL)中的溶液在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。这得到呈黄色油的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-((二甲基氨基)亚甲基)-5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(300mg，37％产率)，其无需进一步纯化即可直接使用。LCMS(ES,m/z):391[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-6,8-二氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-((二甲基氨基)亚甲基)-5,5-二甲基-4-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(300mg，353.1μmol)和3-氯-1H-吡唑-5-胺(42mg，353.1μmol)于甲苯(4mL)中的搅拌溶液中添加AcOH(0.4mL)。将所得混合物在90℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到100mg粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-6,8-二氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(45mg，28％产率)。LC-MS:m/z 445[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-6,8-二氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-6,8-二氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对45mg N-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟-甲基)-7,8-二氢-6H-吡唑并[1,5-a]吡咯并[2,3-e]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IF，2*25cm，5um；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度，10％B，在11分钟内；220/254nm；RT1：7.523；RT2：8.35；进样体积：0.5ml；运行次数：15)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例70(10.1mg，22％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例71(7.9mg，17％产率)。

实例70：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.83(s,1H),8.75(s,1H),8.64(d,J＝2.4Hz,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),7.93(s,2H),6.78(s,1H),5.83(s,1H),2.04(s,3H),1.91(s,3H).LC-MS:m/z 445[M+H]⁺。

实例71：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.83(s,1H),8.75(s,1H),8.64(d,J＝2.4Hz,1H),8.50(d,J＝2.0Hz,1H),7.93(s,2H),6.78(s,1H),5.83(s,1H),2.04(s,3H),1.91(s,3H).LC-MS:m/z 445[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法J2

实例72和73：由含有(R)-2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)吡啶甲酸异丙酯

向5-氨基-3-(二氟甲基)吡啶甲酸异丙酯(300mg，1.3mmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；346mg，1.3mmol)于乙腈(10mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(1.46g，5.2mmol)和NMI(427mg，5.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(3:2)洗脱，以得到呈黄色固体的5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)吡啶甲酸异丙酯(400mg，44％产率)。LC-MS:m/z 478[M+H]⁺。

步骤2：5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)吡啶甲酸

在0℃下向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)吡啶甲酸异丙酯(390mg，816μmol)于四氢呋喃(10mL)和水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化钠(163mg，4.1mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。用HCl(1M)将pH调节至3。将混合物用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，以得到呈黄色固体的5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)吡啶甲酸(方法J2步骤2；300mg，84％产率)。LC-MS:m/z 436[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(二氟甲基)吡啶甲酸(240mg，550μmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中添加N-甲基环丙烷胺(39mg，550μmol)、EDCI(137mg，716μmol)、HOBt(96mg，716μmol)和DIEA(284mg，2.2mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，并将收集的级分冻干，以得到呈灰白色固体的2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(90mg，32％产率)。LC-MS:m/z 489[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对87mg 2-氯-N-(6-(环丙基(甲基)氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IF，5x25cm，5μm；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；梯度：25％B至25％B，在20分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：8.786；RT2(分钟)：13.978；样品溶剂：EtOH；进样体积：2ml；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例72(36.6mg，42％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例73(37.3mg，43％产率)。

实例72：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.91(s,1H),8.89(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),7.12(t,J＝54.8Hz,1H),6.94(s,1H),4.43(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),3.01(s,3H),2.79-2.86(m,1H),2.53-2.60(m,1H),2.29-2.36(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H),0.37-0.45(m,4H).LC-MS:m/z 489[M+H]⁺。

实例73：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.90(s,1H),8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.48(d,J＝2.0Hz,1H),7.12(t,J＝54.8Hz,1H),6.95(s,1H),4.43(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),3.01(s,3H),2.71-2.83(m,1H),2.55-2.60(m,1H),2.29-2.36(m,1H),1.65(s,3H),1.56(s,3H),0.39-0.44(m,4H).LC-MS:m/z 489[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法K2

实例74和75：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-氯-2-环丙氧基-5-硝基吡啶

在0℃下向环丙醇(1.9g，34.2mmol)于四氢呋喃(100mL)中的搅拌混合物中添加NaH(2.0g，51.3mmol，60％于矿物油中)。将反应混合物在40℃下搅拌1小时。将反应冷却至0℃。在0℃下向上述混合物中添加2,3-二氯-5-硝基吡啶(6.6g，34.2mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液。将反应在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(200mL)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色油的3-氯-2-环丙氧基-5-硝基吡啶(3.1g，21％产率)。LC-MS:m/z 215[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-胺

向3-氯-2-环丙氧基-5-硝基吡啶(2.6g，12.3mmol)于四氢呋喃(40mL)和甲醇(20mL)中的搅拌溶液中添加Fe(3.4g，61.9mmol)、NH₄Cl(3.3g，61.9mmol)和水(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在真空下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释，并将所得溶液用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-胺(400mg，16％产率)。LC-MS:m/z 185[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-胺(200mg，1.0mmol)于乙腈(20mL)中的搅拌溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；287mg，1.0mmol)、NMI(622mg，7.5mmol)和TCFH(1.2g，4.3mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物在真空下浓缩。将残余物用水(50mL)稀释，并将所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(4:6)洗脱，以得到150mg粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，12％产率)。LC-MS:m/z 432[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对58mg 2-氯-N-(5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：16毫升/分钟；等度50％B，20分钟；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.008；RT2(分钟)：14.76；样品溶剂：EtOH；进样体积：2.5mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例74(23.9mg，40％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例75(23.5mg，40％产率)。

实例74：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.56(br,1H),8.61(s,1H),8.33(d,J＝2.4Hz,1H),8.21(d,J＝2.4Hz,1H),6.93(s,1H),4.34-4.38(m,1H),4.27-4.31(m,1H),2.51-2.54(m,1H),2.27-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.54(s,3H),0.76-0.85(m,2H),0.68-0.74(m,2H).LC-MS:m/z 432[M+H]⁺。

实例75：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.56(br,1H),8.60(s,1H),8.33(d,J＝1.7Hz,1H),8.21(d,J＝1.7Hz,1H),6.93(s,1H),4.34-4.38(m,1H),4.27-4.31(m,1H),2.51-2.54(m,1H),2.27-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.54(s,3H),0.76-0.81(m,2H),0.68-0.75(m,2H).LC-MS:m/z 432[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法L2

实例76和77：由含有(R)-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；20mg，80.2μmol)和5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-胺(方法G2步骤2；16mg，80.2μmol)于乙腈(1mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(68mg，240.7μmol)和NMI(20mg，240.7μmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(26.3mg，76％产率)。LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对24mg N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度10％B，26分钟；波长：220/254nm；RT1(分钟)：13.67；RT2(分钟)：19.76；样品溶剂：EtOH；进样体积：0.8mL；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例76(4.5mg，18％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例77(6.2mg，25％产率)。

实例76：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.54(s,1H),8.31(s,1H),8.14(s,1H),7.49(s,1H),7.40(t,J＝72.4Hz,1H),6.30(d,J＝5.2Hz,1H),4.13-4.24(m,1H),2.38-2.61(m,2H),1.75(s,3H),1.61(s,3H).LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

实例77：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.56(s,1H),8.31(s,1H),8.15(s,1H),7.52(s,1H),7.40(t,J＝72.4Hz,1H),6.31(d,J＝5.2Hz,1H),4.13-4.25(m,1H),2.39-2.63(m,2H),1.76(s,3H),1.61(s,3H).LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法M2

实例78和79：由含有(R)-2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈

在氮气下向5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-胺(方法G2步骤2；100mg，513.9μmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液中添加Zn(CN)₂(66mg，565.3μmol)、Ruphos(24mg，51.4μmol)、Ruphos Pd G3(43mg，51.4μmol)和锌(2mg，25.7μmol)。将反应混合物在130℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至25℃。将固体滤出，并将滤液在真空下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈(方法M2步骤1；65mg，68％产率)。LC-MS:m/z 186[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈(方法M2步骤1；60mg，324.1μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；129mg，486.1μmol)于乙腈(10mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(272.8mg，972.2μmol)和NMI(133.0mg，1.6mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在真空下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(65mg，46％产率)。LC-MS:m/z 433[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对2-氯-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(65mg，148.8μmol)进行手性HPLC(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20毫升/分钟；等度20％B，10分钟；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.86；RT2(分钟)：8.27；样品溶剂：EtOH；进样体积：0.8mL；运行次数：6)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例78(20.9mg，34％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例79(22.3mg，36％产率)。

实例78：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.86(br,1H),8.68(d,J＝2.4Hz,1H),8.62(d,J＝3.2Hz,2H),7.74(t,J＝71.6Hz,1H),6.94(s,1H),4.37-4.42(m,1H),2.51-2.56(m,1H),2.27-2.34(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 433[M+H]⁺。

实例79：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.86(br,1H),8.68(d,J＝2.4Hz,1H),8.62(d,J＝2.8Hz,2H),7.73(t,J＝71.2Hz,1H),6.93(s,1H),4.36-4.42(m,1H),2.51-2.56(m,1H),2.27-2.33(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 433[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法N2

实例80和实例81：由含有(R)-N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-氯-2-环丙氧基-5-硝基吡啶

在0℃下向环丙醇(1.99g，34.2mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加NaH(2.05g，51.3mmol，60％与矿物油中)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。添加2,3-二氯-5-硝基吡啶(6.6g，34.2mmol)，并将反应在25℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(200mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用PE/EtOAc(5:1)洗脱，以得到呈黄色固体的3-氯-2-环丙氧基-5-硝基吡啶(5.9g，79％产率)。LC-MS:m/z 215[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-胺

向3-氯-2-环丙氧基-5-硝基吡啶(5.9g，27.5mmol)于甲醇(60mL)和水(30mL)中的搅拌溶液中添加Fe(7.7g，137.5mmol)和氯化铵(7.4g，137.5mmol)。将所得混合物在60 0℃下搅拌2小时。通过添加水(100mL)将反应混合物淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈浅棕色固体的5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-胺(4.9g，77％产率)。LC-MS:m/z 185[M+H]⁺。

步骤3：5-氨基-2-环丙氧基烟腈

在氮气氛下向5-氯-6-环丙氧基吡啶-3-胺(200mg，1.1mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的搅拌溶液中添加Zn(CN)₂(254mg，2.2mmol)、Xphos(155mg，325.6μmol)和XphosPd G3(183mg，325.6μmol)。将反应混合物在微波反应器中在140℃下加热0.5小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用PE/EtOAc(3:1)洗脱，以得到呈黄色固体的5-氨基-2-环丙氧基烟腈(60mg，24％产率)。LC-MS:m/z 176[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氨基-2-环丙氧基烟腈(50mg，284.1μmol)于乙腈(2mL)中的溶液中添加2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；71mg，284.1μmol)、TCFH(320mg，1.1mmol)和NMI(93mg，1.1mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(50mg，42％产率)。LC-MS:m/z 407[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对N-(5-氰基-6-环丙氧基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(45mg，110.6mmol)进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKIE，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：18毫升/分钟；等度50％B，在14分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：7.51；RT2(分钟)：9.37；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例80(14.3mg，31％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例81(12.8mg，28％产率)。

实例80：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.68(s,1H),8.60-8.63(m,2H),8.45(d,J＝2.4Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.34-4.39(m,2H),2.48-2.53(m,1H),2.27-2.32(m,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H),0.73-0.84(m,4H).LC-MS:m/z 407.2[M+H]⁺。

实例81：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.68(s,1H),8.60-8.63(m,2H),8.45(d,J＝2.8Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.34-4.39(m,2H),2.48-2.53(m,1H),2.27-2.32(m,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H),0.73-0.84(m,4H).LC-MS:m/z 407.2[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法O2

实例82：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

步骤1：5-溴-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸甲酯

向5-溴-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸(10g，45.9mmol)于MeOH(130mL)中的搅拌溶液中滴加二氯化亚硫(13.4g，112.6mmol)。将反应混合物在65℃下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc(50mL)和水(20mL)稀释。将沉淀的固体过滤并用2-甲氧基-2-甲基丙烷(50mL)研磨。将固体过滤并干燥，以得到呈白色固体的5-溴-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(9.5g，89％产率)。LC-MS:m/z 232[M+H]⁺。

步骤2：5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酸甲酯

在0℃下向5-溴-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(1.0g，4.3mmol)于乙腈(50mL)中的搅拌溶液中添加NaH(474mg，11.8mmol，60％于矿物油中)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。在0℃下添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(1.3g，7.3mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用PE/EtOAc(5:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酸甲酯(1.0g，82％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.48(d,J＝2.4Hz,1H),7.73(t,J＝71.7Hz,1H),3.87(s,3H).LC-MS:m/z 282[M+H]⁺。

步骤3：5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酸

向5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酸甲酯(1.0g，3.6mmol)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(255mg，10.6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。用HCl(12M)将pH调节至2。将所得溶液用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酸(900mg，94％产率)。LC-MS:m/z268[M+H]⁺。

步骤4：5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酰胺

在0℃下向5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酸(700mg，2.6mmol)于氯仿(10mL)中的搅拌溶液中添加二氯化亚硫(4mL)。将反应混合物在50℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物重新溶解于THF(5mL)中，并在0℃下将混合物添加到氢氧化铵溶液(10mL)中。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。在减压下去除有机溶剂。将沉淀的固体通过过滤收集，用水(50mL)洗涤，并干燥，以得到呈白色固体的5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酰胺(600mg，86％产率)。LC-MS:m/z 267[M+H]⁺。

步骤5：5-溴-2-(二氟甲氧基)烟腈

在0℃下向5-溴-2-(二氟甲氧基)烟酰胺(600mg，2.2mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加TEA(1.54g，15.2mmol)和三氟甲磺酸酐(1.2g，4.2mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物倒入碎冰(20mL)中，并用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用PE/EtOAc(3:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-溴-2-(二氟甲氧基)烟腈(300mg，53％产率)。¹H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ:8.57(d,J＝2.7Hz,1H),8.51(d,J＝2.4Hz,1H),7.60(d,J＝71.4Hz,1H)。

步骤6：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺

向2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(方法V2步骤4；30mg，96.2μmol)于甲苯(10mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-2-(二氟甲氧基)烟腈(48mg，192.5μmol)、Pd₂(dba)₃(9mg，9.6μmol)、XantPhos(6mg，9.6μmol)、Al(OTf)₃(5mg，9.6μmol)和碳酸铯(47mg，144.4μmol)。将反应混合物在110℃下搅拌4小时。将所得混合物用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(1.9mg，4％产率)。

实例82：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.92(s,1H),8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.62(d,J＝2.9Hz,1H),8.56(s,1H),7.74(t,J＝71.6Hz,1H),6.40-6.52(m,1H),4.44-4.53(m,1H),2.60-2.70(m,1H),2.53-2.55(m,1H),2.04-2.16(m,2H),1.14-1.25(m,2H).LC-MS:m/z415.2[M+H]⁺。

方法P2

实例83和84：由

含有(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈(方法M1步骤1；50mg，270μmol)于乙腈(1mL)中的搅拌溶液中添加2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；67.31mg，270μmol)、NMI(89mg，1.1mmol)和TCFH(303mg，1.1mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物用水(5mL)稀释，并将所得溶液用乙酸乙酯(3x5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(50mg，44％产率)。LC-MS:m/z 417[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对45mg N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度20％B，在10分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：7.45；RT2(分钟)：8.89；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.8mL；运行次数：8)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例83(14.9mg，66％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例84(8.5mg，37％产率)。

实例83：¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.88(s,1H),8.69(d,J＝2.7Hz,1H),8.60-8.64(m,2H),7.75(t,J＝72.0Hz,1H),6.56(d,J＝4.5Hz,1H),4.37-4.44(m,1H),2.51-2.62(m,1H),2.32-2.41(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 417.1[M+H]⁺。

实例84：¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.87(s,1H),8.69(d,J＝2.7Hz,1H),8.61-8.64(m,2H),7.75(t,J＝71.7Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.37-4.44(m,1H),2.51-2.61(m,1H),2.32-2.40(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 417.2[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Q2

实例85：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；100mg，401μmol)和2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲(HATU)(229mg，602μmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中添加盐酸氨(43mg，802μmol)和N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(156mg，1.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(方法Q2步骤1；80mg，73.9％产率)。LCMS(ES,m/z):249[M+H]⁺。

步骤2：4-溴-6-氯-哒嗪-3-醇

在25℃下向6-氯哒嗪-3-醇(20g，153.2mmol)和溴化钾(54.7g，459.7mmol)于水(170mL)中的搅拌混合物中添加乙酸钾(22.6g，229.8mmol)和溴(73.5g，459.7mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。通过在0℃下添加亚硫酸钠(饱和，水溶液)将反应淬灭。通过过滤收集沉淀的固体并用水(3x50mL)洗涤，以得到呈黄色固体的4-溴-6-氯-哒嗪-3-醇(16g，49％产率)。LCMS(ES,m/z):209[M+H]⁺。

步骤3：4-溴-6-氯-3-(二氟甲氧基)哒嗪

在0℃下向4-溴-6-氯-哒嗪-3-醇(14g，66.9mmol)于ACN(308mL)中的混合物中添加含氢氧化钾(75.0g，1.3mol)的水(300mL)。将混合物搅拌5分钟。在0℃下添加(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(53.6g，200.6mmol)，并将混合物在10℃下搅拌另外1小时。将反应混合物用水(600mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x400mL)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的4-溴-6-氯-3-(二氟甲氧基)哒嗪(2.5g，14％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.63(s,1H),7.85(t,J＝70.7Hz,1H).LCMS(ES,m/z):259[M+H]⁺。

步骤4：N-[6-氯-3-(二氟甲氧基)哒嗪-4-基]-1,1-二苯基-甲烷亚胺

向4-溴-6-氯-3-(二氟甲氧基)哒嗪(100mg，385μmol)于二噁烷(5mL)中的混合物中添加二苯基甲烷亚胺(56mg，308μmol)、Pd₂(dba)₃(35mg，38.6μmol)、XantPhos(45mg，77.1μmol)和碳酸铯(251mg，770.9μmol)。将反应混合物在100℃下在氮气下搅拌30分钟。使混合物冷却至室温，并添加水(20mL)。将混合物用乙酸乙酯(20mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用EtOAc/PE(1:3)纯化，以得到呈黄色油的N-[6-氯-3-(二氟甲氧基)哒嗪-4-基]-1,1-二苯基-甲烷亚胺(100mg，66％产率)。LCMS(ES,m/z):360[M+H]⁺。

步骤5：N-(6-(二氟甲氧基)-5-((二苯基亚甲基)氨基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

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向N-[6-氯-3-(二氟甲氧基)哒嗪-4-基]-1,1-二苯基-甲烷亚胺(100mg，277.9μmol)于甲苯(5mL)中的混合物中添加2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(76mg，305.8μmol)、Pd₂(dba)₃(26mg，27.8μmol)、XantPhos(32mg，55.6μmol)和碳酸铯(272mg，833.9μmol)。将反应混合物在110℃下在氮气下搅拌1小时。使混合物冷却至室温，并添加水(20mL)。将混合物用乙酸乙酯(20mL x3)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并且在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用PE/EtOAc(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的N-(6-(二氟甲氧基)-5-((二苯基亚甲基)氨基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，36％产率)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.4(s,1H),8.54(s,1H),7.47-7.76(m,12H),6.54(d,J＝6Hz,1H),4.45-4.50(m,1H),2.49-2.46(m,1H),2.20-2.26(m,1H),1.58(s,3H),1.51(s,3H).LCMS(ES,m/z):572[M+H]⁺。

步骤6：N-(5-氨基-6-(二氟甲氧基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向N-(6-(二氟甲氧基)-5-((二苯基亚甲基)氨基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，104.9μmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加盐酸羟胺(36mg，524.9μmol)和乙酸钠(43mg，524.9μmol)。将混合物在70℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用EtOAc/PE(1:1)纯化，以得到呈白色固体的N-(5-氨基-6-(二氟甲氧基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，64％产率)。LCMS(ES,m/z):408[M+H]⁺。

步骤7：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在50℃下向亚硝酸叔丁酯(6mg，61.4μmol)和氰化亚铜(5.5mg，61.2μmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中添加N-(5-氨基-6-(二氟甲氧基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(5mg，12.3μmol)于ACN(0.2mL)中的溶液。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(2x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用EtOAc/PE(1:1)纯化，以得到粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)哒嗪-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(0.8mg，15％产率)。

实例85：¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.97(s,1H),8.91(s,1H),8.56(s,1H),7.59(t,J＝70.5Hz,1H),6.33(d,J＝4.8Hz,1H),4.36-4.41(m,1H),2.58-2.66(m,1H),2.43-2.50(m,1H),1.76(s,3H),1.63(s,3H).LCMS(ES,m/z):418.0[M+H]⁺。

方法R2

实例86和实例87：由含有(R)-N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：6-溴-3-羟基吡嗪-2-甲酸甲酯

向3-羟基吡嗪-2-甲酸甲酯(9g，58.4mmol)于ACN(150mL)中的搅拌溶液中添加NBS(15.6g，87.6mmol)。将反应在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(200mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的6-溴-3-羟基吡嗪-2-甲酸甲酯(6g，39％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:11.20(br,1H),8.54(s,1H),4.10(s,3H).LC-MS:m/z 233[M+H]⁺。

步骤2：6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸甲酯

向6-溴-3-羟基-吡嗪-2-甲酸甲酯(1g，3.9mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加碳酸铯(3.8g，11.7mmol)和三氟甲磺酸二氟甲酯(3.1g，15.6mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌1小时。通过添加水(100mL)将反应混合物淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸甲酯(200mg，18％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.84(s,1H),7.70(t,J＝71.0Hz,1H),3.92(s,3H).LC-MS:m/z 283[M+H]⁺。

步骤3：6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸

向6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸甲酯(440mg，1.6mmol)于THF(10mL)和水(10mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(186mg，7.8mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。用HCl(2M)将pH调节至3-4。将混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸(400mg，74％产率)。LC-MS:m/z 269[M+H]⁺。

步骤4：6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酰胺

向6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸(400mg，1.5mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加NH₄Cl(576mg，4.5mmol)、DIEA(577mg，4.5mmol)和HATU(848mg，2.2mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。通过添加水(50mL)将反应混合物淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酰胺(180mg，45％产率)。LC-MS:m/z 268[M+H]⁺。

步骤5：6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲腈

在0℃下向6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲酰胺(180mg，671.6μmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加Et₃N(1.0g，10mmol)和2,2,2-三氟乙酸酐(2.3g，8.1mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。通过添加水(50mL)将反应混合物淬灭。将所得溶液用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲腈(107mg，63％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.72(t,J＝70.2Hz,1H)。

步骤6：3-(二氟甲氧基)-6-((二苯基亚甲基)氨基)吡嗪-2-甲腈

向甲基6-溴-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲腈(100mg，400.0μmol)于二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中添加二苯基甲烷亚胺(145mg，800.0μmol)、碳酸铯(261mg，800.0μmol)、Xantphos(46mg，80.0μmol)和Pd₂(dba)₃(83mg，80.0μmol)。将所得混合物在100℃下在氮气下搅拌5小时。通过添加水(50mL)将反应混合物淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的3-(二氟甲氧基)-6-((二苯基亚甲基)氨基)吡嗪-2-甲腈(80mg，45％产率)。LC-MS:m/z 351[M+H]⁺。

步骤7：6-氨基-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲腈

在0℃下向3-(二氟甲氧基)-6-((二苯基亚甲基)氨基)吡嗪-2-甲腈(63mg，179.8μmol)于THF(5mL)中的溶液中添加1M HCl(1mL)。将所得混合物在25℃下搅拌20分钟。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至7-8。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的6-氨基-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲腈(30mg，89％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.95(s,1H),7.55(t,J＝72.0Hz,1H),7.11(s,2H).LC-MS:m/z 187[M+H]⁺。

步骤8：N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；32mg，129μmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(102mg，1.3mmol)和三氯氧磷(82mg，537.3μmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时。添加6-氨基-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-甲腈(20mg，107.5μmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈白色固体的N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(17mg，38％产率)。LC-MS:m/z418[M+H]⁺。

步骤9：分离对映异构体以获得(R)-N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

将N-(6-氰基-5-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(15mg，35.9mmol)通过手性HPLC分离(柱：CHIRALART Cellulose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在11分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.68；RT2(分钟)：8.83；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例86(6.9mg，46％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例87(6.2mg，41％产率)。

实例86：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.7(s,1H),9.22(s,1H),8.59(s,1H),7.71(t,J＝70.8Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.48-4.52(m,1H),2.51-2.57(m,1H),2.27-2.32(m,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 418.0[M+H]⁺。

实例87：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.7(s,1H),9.22(s,1H),8.59(s,1H),7.71(t,J＝70.8Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.48-4.52(m,1H),2.51-2.57(m,1H),2.28-2.32(m,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 418.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法S2

实例88和89：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-氨基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)烟腈

在氮气气氛下，向5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；1.0g，5.1mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加Zn(CN)₂(660mg，5.6mmol)、RuPhos(239mg，513.8μmol)、RuPhos Pd G3(430mg，513.8μmol)和锌(16mg，256.9μmol)。将混合物在130℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将所得混合物过滤，并将滤饼用MeOH(3x10ml)洗涤。将滤液在减压下浓缩。添加水(100mL)，并将混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈白色固体的5-氨基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)烟腈(方法S2步骤1；200mg，21％产率)。LC-MS:m/z 187[M+H]⁺。

步骤2：N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氨基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)烟腈(89mg，481.4μmol)于ACN(1mL)中的溶液中添加2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；100mg，401.2μmol)、TCFH(337mg，1.2mmol)和NMI(164mg，2.0mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到粗产物。将残余物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(53mg，31％产率)。LC-MS:m/z418[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对50mg N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化。(柱：CHIRALART Amylose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在22分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：11.07；RT2(分钟)：16.29；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1mL)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例88(17.2mg，28％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例89(9.3mg，15％产率)。

实例88：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.14(s,1H),8.98(d,J＝2.8Hz,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.64(s,1H),8.29(s,2H),6.56(d,J＝5.2Hz,1H),4.43-4.47(m,1H),2.55-2.58(m,1H),2.31-2.36(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 418.0[M+H]⁺。

实例89：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.12(s,1H),8.98(d,J＝2.8Hz,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.64(s,1H),8.30(s,2H),6.57(d,J＝5.2Hz,1H),4.44-4.48(m,1H),2.55-2.59(m,1H),2.32-2.36(m,1H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 418.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法T2

实例90和91：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

在-20℃下向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；300mg，1.2mmol)于DCM(6mL)和MeOH(6mL)中的搅拌溶液中添加含selectfluor(852mg，2.4mmol)的DMF(2mL)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(4:1)洗脱，以得到呈黄色油的2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法T2步骤1；40mg，11％产率)。LC-MS:m/z 268[M+H]⁺。

步骤2：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(35mg，130.9μmol)于ACN(2mL)中的溶液中添加5-氨基-2-(二氟甲氧基)吡啶-3-甲腈(方法M2步骤1；24mg，130.9μmol)、TCFH(146mg，523.8μmol)和NMI(43mg，523.8μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用二氯甲烷(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，并将收集的级分冻干，以得到呈灰白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(2.3mg，4.％产率)。LC-MS:m/z 435[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对15mg N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化。(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：MtBE(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度70％B，在6.5分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：4.49；RT2(分钟)：6.064；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.6mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈黄色固体的实例90(1.7mg，11％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈黄色固体的实例91(2.2mg，14％产率)。

实例90：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.85(br,1H),8.60-8.67(m,3H),7.74(t,J＝71.2Hz,1H),4.37-4.41(m,1H),2.50-2.55(m,1H),2.26-2.32(m,1H),1.60(s,3H),1.52(s,3H)；LC-MS:m/z 435.1[M+H]⁺。

实例91：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.86(br,1H),8.60-8.67(m,3H),7.74(t,J＝71.4Hz,1H),4.37-4.42(m,1H),2.50-2.56(m,1H),2.26-2.32(m,1H),1.60(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS:m/z 435.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法U2

实例92和93：由含有(S)-2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-胺

向2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(5.0g，30.8mmol)于DCM(80mL)中的搅拌混合物中添加溴(4.9g，30.8mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌24小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用DCM(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(7.8g，83％产率)。LC-MS:m/z 241[M+H]⁺。

步骤2：5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-胺

向5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(7.6g，25.2mmol)于MeOH(100mL)中的搅拌混合物中添加溴化亚铜(2.2g，15.1mmol)、碳酸铯(16.4g，50.4mmol)和1,10-菲咯啉(1.4g，7.6mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌24小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(1.5g，22％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.99(s,1H),6.97(s,1H),6.20(br,2H),3.90(s,3H)。LC-MS:m/z 193[M+H]⁺。

步骤3：2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；73mg，292.6μmol)于DCM(2mL)中的混合物中添加三氯氧磷(224mg，1.5mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌30分钟。向上述反应混合物中添加5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(77mg，292.6μmol)和吡啶(278mg，3.5mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(32mg，25％产率)。LC-MS:m/z 424[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(S)-2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

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对30mg 2-氟-N-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度20％B，在10分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.34；RT2(分钟)：8.43；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例93(3.1mg，10％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例92(2.9mg，9％产率)。

实例92：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.35(s,1H),8.63(s,1H),8.57(s,1H),8.55(s,1H),6.54(d,J＝4.8Hz,1H),4.71(dd,J＝9.2,6.4Hz,1H),4.11(s,3H),2.52-2.56(m,1H),2.25(dd,J＝13.2,6.4Hz,1H),1.61(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS:m/z 424.1[M+H]⁺。

实例93：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.35(s,1H),8.63(s,1H),8.57(s,1H),8.55(s,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.72(dd,J＝8.8,6.0Hz,1H),4.11(s,3H),2.52-2.57(m,1H),2.25(dd,J＝13.2,6.4Hz,1H),1.61(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS:m/z 424.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法V2

实例94和95：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮

将螺[2.4]庚烷-4-酮(3.0g，27.2mmol)于1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(26.7g，224.1mmol)中的混合物在100℃下搅拌72小时。将反应混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮(4.5g，70％产率)。LC-MS:m/z166[M+H]⁺。

步骤2：2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]

将5-氟-1H-吡唑-3-胺(2.0g，19.8mmol)和5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮(3.9g，23.7mmol)于AcOH(60mL)中的混合物在100℃下搅拌20小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷](1.5g，37％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.44(s,1H),6.37(d,J＝4.8Hz,1H),3.09(t,J＝7.6Hz,2H),2.23-2.29(m,2H),1.99-2.04(m,2H),1.05-1.10(m,2H).LC-MS:m/z 204[M+H]⁺。

步骤3：2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲腈

向2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷](1.6g，7.9mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中添加(4R,4'R)-2,2'-(丙烷-2,2-二基)双(4-苄基-4,5-二氢噁唑)(428mg，1.2mmol)、乙酰氧基铜(193mg，1.6mmol)、N-氟-N-(苯基磺酰基)苯磺酰胺(3.7g，11.8mmol)和TMSCN(3.9g，39.4mmol)。将反应混合物在25℃下在氮气下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈白色固体的2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲腈(150mg，3％产率)。LC-MS:m/z 229[M+H]⁺。

步骤4：2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

将2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲腈(150mg，657.2μmol)于HCl(2mL)和AcOH(4mL)中的混合物在25℃下搅拌3小时。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至6-7。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺(方法V2步骤4；40mg，22％产率)。LC-MS:m/z 247[M+H]⁺。

步骤5：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺

向2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(方法V2步骤4；40mg，162.4μmol)于甲苯(1mL)中的搅拌溶液中添加XantPhos(19mg，32.5μmol)、Pd₂(dba)₃(30mg，32.5μmol)和碳酸铯(79mg，243.7μmol)、Al(OTf)₃(8mg，16.2μmol)以及5-溴-3-氯-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(42mg，162.4μmol)。将反应混合物在110℃下在氮气下搅拌4小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到粗产物。对粗产物进行制备型HPLC并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺(17mg，22％产率)。LC-MS:m/z 425[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺

对15mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：Chiral ARTCellulose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在18分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：8.26；RT2(分钟)：14.82；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例94(7.3mg，42％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例95(6.2mg，36％产率)。

实例94：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.10(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.59(s,1H),8.58(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(s,2H),6.49(d,J＝4.8Hz,1H),4.54(dd,J＝9.6,5.2Hz,1H),2.64-2.74(m,1H),2.52-2.60(m,1H),2.05-2.16(m,2H),1.16-1.27(m,2H).LC-MS:m/z425.1[M+H]⁺。

实例95：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.10(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.59(s,1H),8.58(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(s,2H),6.49(d,J＝5.2Hz,1H),4.54(dd,J＝9.6,5.2Hz,1H),2.65-2.73(m,1H),2.53-2.59(m,1H),2.05-2.17(m,2H),1.17-1.26(m,2H).LC-MS:m/z425.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法W2

实例96和97：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮

将螺[2.4]庚烷-4-酮(5g，45.4mmol)于DMF-DMA(20mL)中的溶液在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃。将所得混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色油的(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮(6g，粗产物)，其无需纯化即可用于下一步。LCMS(ES,m/z):166[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]

在25℃下向(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)螺[2.4]庚烷-4-酮(1g，6mmol)于AcOH(60mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-1H-吡唑-3-胺(0.9g，7.8mmol)。将所得混合物在95℃下搅拌1小时。使混合物冷却至25℃。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至6-7。将所得溶液用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷](500mg，37％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.45(s,1H),6.76(s,1H),3.08-3.13(m,2H),2.25-2.30(m,2H),2.03-2.07(m,2H),1.07-1.11(m,2H).LC-MS(ES,m/z):220[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲腈

向2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷](2g，9.1mmol)于甲苯(50mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(396mg，1.1mmol)、乙酰氧基铜(223mg，1.8mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(4.3g，13.6mmol)和TMSCN(4.5g，45.5mmol)。将反应在25℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲腈(500mg，22％产率)。LC-MS(ES,m/z):245[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺

将2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲腈(900mg，3.7mmol)于AcOH(10mL)和12M HCl(5mL)中的混合物在25℃下搅拌2小时。使混合物冷却至25℃。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用水(50mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至5-6。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(方法W2步骤4；160mg，16％产率)。LC-MS(ES,m/z):263[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺

在25℃下在氮气气氛下，向5-溴-3-氯-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(30mg，114μmol)于甲苯(5mL)中的搅拌混合物中添加2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺(30mg、114μmol)、XantPhos(13mg、23μmol)、Pd₂(dba)₃(21mg、22.9μmol)、Cs₂CO₃(55.8mg、171.3μmol)和Al(OTf)₃(5.4mg、11.4μmol)。将所得混合物在氮气气氛下在110℃下搅拌12小时。使混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(50mL)稀释。将所得溶液用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺(10mg，20％产率)。LC-MS:m/z 441.1[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-329yridinedin-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-',1′-环丙烷]-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-329yridinedin-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-′,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

对15mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-329yridinedin-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-',1'-环丙烷]-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALART Cellulose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％—)--HPLC，流动相B：E—H--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在31分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：11.02；RT2(分钟)：24.93；样品溶剂：E—H--HPLC；进样体积：3mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例96(3.6mg，23％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例97(3.5mg，23％产率)。

实例96：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.12(br,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.57-8.60(m,2H),8.17(s,2H),6.86(s,1H),4.50-4.57(m,1H),2.67-2.72(m,1H),2.54-2.58(m,1H),2.11-2.18(m,2H),1.20-1.23(m,2H).LC-MS:m/z 441.1[M+H]⁺。

实例97：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.16(br,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.58-8.60(m,2H),8.17(s,2H),6.86(s,1H),4.50-4.57(m,1H),2.66-2.72(m,1H),2.54-2.58(m,1H),2.11-2.17(m,2H),1.20-1.23(m,2H).LC-MS:m/z 441.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法X2

实例98和99：由含有(R)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：4,4-二氟-3-氧代丁腈

在0℃下向搅拌的t-BuOK(38.2g，340.7mmol)于THF(300mL)中的搅拌溶液中滴加2,2-二氟乙酸盐(28.2g，227.1mmol)和乙腈(13.9g，340.7mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物用水(300mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(2x300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的4,4-二氟-3-氧代丁腈(12.5g，粗产物)，其无需纯化即可用于下一步。LCMS(ES,m/z):120[M+H]⁺。

步骤2：5-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-胺

在室温下向4,4-二氟-3-氧代丁腈(42.0g，352.7mmol)于乙醇(500mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化肼溶液(44.2g，705.5mmol，80％于水中)。将所得混合物在90℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的5-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-胺(3.0g，5.1％产率)。LC-MS(ES,m/z):134[M+H]⁺。

步骤3：2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在室温下向(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2,2-二甲基环戊烷-1-酮(方法A1步骤3；3.7g，22.5mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加5-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-胺(3.0g，22.5mmol)和AcOH(2mL)。将所得混合物在95℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(200mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6～7。将所得溶液用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(3.0g，50％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.60(s,1H),7.30(t,J＝54.0Hz,1H),6.99(s,1H),3.02(t,J＝6.0Hz,2H),2.10(t,J＝6.0Hz,2H),1.53(s,6H).LC-MS(ES,m/z):238[M+H]⁺。

步骤4：2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(2.0g，8.4mmol)于甲苯(200mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(366mg，1.0mmol)、乙酰氧基铜(206mg，1.7mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(4g，12.6mmol)、TMSCN(4.2g，42.2mmol)。将反应在氮气下在室温下搅拌16小时。在减压下去除溶剂，并将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(1.2g，32％产率)。LC-MS(ES,m/z):263[M+H]⁺。

步骤5：2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(2.0g，4.6mmol)于AcOH(8mL)和12M HCl(8mL)中的混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。将溶剂在减压下浓缩，并且将残余物用300ml水稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(300mL x3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法X2步骤5；400mg，27％产率)。LC-MS(ES,m/z):282[M+H]⁺。

步骤6：2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(30mg，106μmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(84mg，1.0mmol)和三氯氧磷(49mg，320μmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。添加2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(17mg，106μmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈白色固体的2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(26mg，56％产率)。LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

步骤7：分离对映异构体以获得(R)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对60mg 2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度90％B，在13分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：7.597；RT2(分钟)：9.569；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：0.3mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例98(14.3mg，23％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例99(14mg，23％产率)。

实例98：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.08(br,1H),8.69(s,1H),8.64(d,J＝5.4Hz,1H),8.17(d,J＝1.5Hz,1H),7.82(dd,J＝1.5,5.4Hz,1H),7.30(t,J＝54.3Hz,1H),7.07(s,1H),4.44-4.49(m,1H),2.50-2.62(m,1H),2.28-2.35(m,1H),1.65(s,3H),1.58(s,3H).LCMS(ES,m/z):426.1[M+H]⁺。

实例99：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.08(br,1H),8.69(s,1H),8.64(d,J＝5.7Hz,1H),8.17(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(dd,J＝1.5,5.4Hz,1H),7.29(t,J＝54.0Hz,1H),7.08(s,1H),4.44-4.49(m,1H),2.50-2.63(m,1H),2.29-2.35(m,1H),1.66(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS(ES,m/z):426.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Y2

实例100和101：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-(2-甲基烯丙基)丙二酸二乙酯

在0℃下在氮气气氛下，向丙二酸二乙酯(20.0g，124.8mmol)于四氢呋喃(300mL)中的混合物中添加氢化钠(5.0g，124.8mmol，60％于矿物油中)。将混合物搅拌30分钟。添加3-溴-2-甲基丙-1-烯(25.0g，187.3mmol)，并且使混合物温热至25℃并搅拌1小时。将反应混合物用水(400mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈白色固体的2-(2-甲基烯丙基)丙二酸二乙酯(15.0g，粗产物)。LC-MS:m/z 215[M+H]⁺。

步骤2：2-(氰基甲基)-2-(2-甲基烯丙基)丙二酸二乙酯

在0℃下在氮气气氛下，向2-(2-甲基烯丙基)丙二酸二乙酯(25.0g，116.6mmol)于四氢呋喃(300mL)中的混合物中添加氢化钠(7.0g，175.0mmol，60％于矿物油中)。将混合物搅拌30分钟。添加2-溴乙腈(21.0g，175.0mmol)，并使混合物温热至25℃并搅拌1小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈白色油的2-(氰基甲基)-2-(2-甲基烯丙基)丙二酸二乙酯(18.0g，粗产物)。LC-MS:m/z 254[M+H]⁺。

步骤3：3,3-二甲基-4-氧代环戊烷-1,1-二甲酸二乙酯

在25℃下在氮气气氛下，向2-(氰基甲基)-2-(2-甲基烯丙基)丙二酸二乙酯(9g，31.4mmol)和(Z)-4-氧代戊-2-烯-2-醇铁(5.6g，15.8mmol)的搅拌混合物中添加含苯基硅烷(10.6g，97.8mmol)的乙酸乙酯(22mL)和1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(22mL)。将所得混合物在氮气气氛下在50℃下搅拌1小时。向上述混合物中添加氯化氢(2M，80mL)。将所得混合物在80℃下搅拌另外2小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物用水(400mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x400mL)萃取。将合并的有机层用盐水(400mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的3,3-二甲基-4-氧代环戊烷-1,1-二甲酸二乙酯(1.9g，粗产物)。LC-MS:m/z 257[M+H]⁺。

步骤4：(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-4,4-二甲基-3-氧代环戊烷-1,1-二甲酸二乙酯

将3,3-二甲基-4-氧代环戊烷-1,1-二甲酸二乙酯(2.8g，10.9mmol)于N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(30mL)中的溶液在70℃下搅拌6小时。使混合物冷却至室温。将所得混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色油的(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-4,4-二甲基-3-氧代环戊烷-1,1-二甲酸二乙酯(3.1g，粗产物)。粗产物无需任何进一步纯化立即用于下一步。LC-MS:m/z 312[M+H]⁺。

步骤5：3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6,6-二甲酸二乙酯

将(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-4,4-二甲基-3-氧代环戊烷-1,1-二甲酸二乙酯(874mg，2.8mmol)和4-氟-1H-吡唑-5-胺(110mg，935.2μmol)于乙酸(1mL)和甲苯(10mL)中的溶液在100℃下在氮气气氛下搅拌24小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物用水(40mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:3)洗脱，以得到呈黄色油的3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6,6-二甲酸二乙酯(240mg，64％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.60(s,1H),8.45(d,J＝3.0Hz,1H),4.19-4.26(m,4H),2.73(s,2H),1.57(s,6H),1.18-1.24(m,6H).LC-MS:m/z 350[M+H]⁺。

步骤6：3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

在室温下向3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6,6-二甲酸二乙酯(160mg，457.9μmol)于四氢呋喃(1mL)中的搅拌混合物中添加含氢氧化钠(91mg，2.2mmol)的水(1mL)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。用盐酸(1M)将pH值调节至6。将所得混合物用乙酸乙酯(3x25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(72mg，63％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.87(s,1H),8.57(s,1H),8.38(d,J＝3.2Hz,1H),4.25-4.28(m,1H),2.40-2.48(m,1H),2.28-2.33(m,1H),1.57(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 250[M+H]⁺。

步骤7：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(72mg，300.9μmol)于乙腈(2mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；88mg，451.3μmol)、TCFH(337mg，1.2mmol)和NMI(98mg，1.2mol)。将混合物在25℃下搅拌6小时。将反应混合物在减压下浓缩。对粗产物进行制备型HPLC并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(37mg，31％产率)。LC-MS:m/z 427[M+H]⁺。

步骤8：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对37mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTAmylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：16毫升/分钟；等度50％B，在25分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：13.22；RT2(分钟)：18.80；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体产率的实例100(11mg，29％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例101(9.5mg，25％产率)。

实例100：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.09(s,1H),8.74(d,J＝2.4Hz,1H),8.59-8.61(m,2H),8.41(d,J＝3.6Hz,1H),8.17(s,2H),4.44-4.48(m,1H),2.51-2.60(m,1H),2.32-2.37(m,1H),1.67(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 427.1[M+H]⁺。

实例101：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.09(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.58-8.61(m,2H),8.41(d,J＝3.6Hz,1H),8.18(s,2H),4.44-4.48(m,1H),2.51-2.60(m,1H),2.32-2.37(m,1H),1.67(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 427.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Z2

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实例102和103：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：(Z)-6-((二甲基氨基)亚甲基)螺[3.4]辛烷-5-酮

将螺[3.4]辛烷-5-酮(5g，40.3mmol)于DMF-DMA(20mL)中的溶液在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将所得混合物在减压下浓缩。这得到呈黄色油的(Z)-6-((二甲基氨基)亚甲基)螺[3.4]辛烷-5-酮(6g，粗产物)，其不经纯化即可用于下一步。LCMS(ES,m/z):180[M+H]⁺。

步骤2：2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]

在室温下向(Z)-6-((二甲基氨基)亚甲基)螺[3.4]辛烷-5-酮(1.0g，5.5mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-1H-吡唑-3-胺(670mg，6.6mmol)和AcOH(2mL)。将所得混合物在95℃下搅拌16小时。使混合物冷却至室温。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。用碳酸氢钠(饱和，水溶液)将pH调节至6～7。将所得溶液用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶](900mg，75％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.48(s,1H),6.46(d,J＝4.8Hz,1H),2.99-3.08(m,2H),2.87-2.98(m,2H),2.40-2.46(m,2H),1.9 -2.23(m,4H).LC-MS(ES,m/z):218[M+H]⁺。

步骤3：2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲腈

向2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶](2.5g，11.5mmol)于甲苯(300mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(500mg，1.3mmol)、乙酰氧基铜(282mg，2.3mmol)、N-氟苯磺酰亚胺(5.4g，17.3mmol)、TMSCN(5.8g，57.5mmol)。将反应在氮气下在25℃下搅拌16小时。在减压下去除溶剂，并将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲腈(方法Z2步骤3；1.1g，25％产率)。LC-MS(ES,m/z):243[M+H]⁺。

步骤4：2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酸

将2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲腈(100mg，206μmol)于AcOH(5mL)和HCl(5mL)中的混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至室温。将溶剂在减压下浓缩，并且将残余物用50ml水稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(50mL x3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酸(方法Z2步骤4；35mg，27％产率)。LC-MS(ES,m/z):262[M+H]⁺。

步骤5：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2′-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺

向2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酸(35mg，133μmol)于ACN(4mL)中的搅拌溶液中添加5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈(方法M2步骤1；30mg，160μmol)、TCFH(44mg，535μmol)和NMI(150mg，535μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(40mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(40mL x 3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺(30mg，52％产率)。LC-MS(ES,m/z):429[M+H]。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺，(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺

对30mg N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在8.5分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：5.69；RT2(分钟)：6.97；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.6mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例102(9.3mg，31％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例103(7.7mg，25％产率)。

实例102：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:10.86(br,1H),8.66(d,J＝2.7Hz,1H),8.60-8.63(m,2H),7.74(t,J＝71.4Hz,1H),6.59(d,J＝5.1Hz,1H),4.28-4.39(m,1H),3.07-3.18(m,2H),2.81-2.90(m,1H),2.62-2.71(m,1H),2.06-2.23(m,4H).LCMS(ES,m/z):429.1[M+H]⁺。

实例103：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:10.91(br,1H),8.67(d,J＝3.0Hz,1H),8.61-8.64(m,2H),7.74(t,J＝71.4Hz,1H),6.59(d,J＝4.8Hz,1H),4.30-4.49(m,1H),3.07-3.21(m,2H),2.81-2.90(m,1H),2.64-2.74(m,1H),2.02-2.23(m,4H).LC-MS(ES,m/z):429.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法A3

实例104和105：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)丙-2-醇

在0℃下向5-溴-3-氯吡啶甲酸甲酯(1g，4.0mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加甲基溴化镁(8.8mL，8.8mmol，1M于THF中)。将反应在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(4:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)丙-2-醇(500mg，50％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.51(d,J＝2.0Hz,1H),7.90(d,J＝1.9Hz,1H),4.78(br,1H),1.67(s,6H).LC-MS:m/z 250[M+H]⁺。

步骤2：2'-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

向2'-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲腈(方法Z2步骤3；600mg，1.2mmol)于12M氯化氢(6mL)中的溶液中添加乙酸(6mL)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(100mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至5-6。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈灰白色固体的2'-氟-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺(方法A3步骤2；250mg，77％产率)。LC-MS:m/z 261[M+H]⁺。

步骤3：N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

向2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺(40mg，153.7μmol)于二噁烷(2mL)中的搅拌混合物中添加2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)丙-2-醇(77mg，307.4μmol)、Cs₂CO₃(100mg，307.4μmol)、Xantphos(18mg，30.7μmol)和Pd₂(dba)₃(32mg，30.7μmol)。将混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(10mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺(24mg，36％产率)。LC-MS:m/z 430[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺

对22mg N-(5-氯-6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH-HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在8分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：4.29；RT2(分钟)：5.94；样品溶剂：EtOH-HPLC；进样体积：0.4mL；运行次数：7)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例104(8.1mg，37％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例105(7.9mg，35％产率)。

实例104：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.72(s,1H),8.60-8.62(m,2H),8.22(d,J＝2.0Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),5.35(s,1H),4.32-4.33(m,1H),3.09-3.17(m,2H),2.83-2.88(m,1H),2.65-2.69(m,1H),2.13-2.20(m,4H),1.56(s,6H).LC-MS:m/z 430.0[M+H]⁺。

实例105：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.72(s,1H),8.60-8.62(m,2H),8.22(d,J＝2.0Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),5.34(br,1H),4.32-4.35(m,1H),3.10-3.18(m,2H),2.83-2.89(m,1H),2.65-2.70(m,1H),2.10-2.22(m,4H),1.56(s,6H).LC-MS:m/z 430.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法B3

实例106和107：由含有(R)-2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氨基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)烟腈(方法S2步骤1；70mg，376.4μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；100mg，376.4μmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(317mg，1.1mmol)和NMI(93mg，1.1mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(50mg，30％产率)。LC-MS:m/z 434[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对50mg N2-氯-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTAmylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在9.5分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.28；RT2(分钟)：8.51；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：1mL；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例106(22.2mg，43％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例107(21.2mg，42％产率)。

实例106：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.90(d,J＝2.4Hz,1H),8.87(d,J＝2.4Hz,1H),8.72(s,1H),8.38(s,1H),8.01(s,2H),6.76(s,1H),4.38(dd,J＝6.8,8.8Hz,1H),2.62(dd,J＝9.2,13.2Hz,1H),2.54(dd,J＝6.8,13.2Hz,1H),1.82(s,3H),1.66(s,3H).LC-MS:m/z 434.0[M+H]⁺。

实例107：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.90(d,J＝2.4Hz,1H),8.87(d,J＝2.4Hz,1H),8.70(s,1H),8.38(s,1H),8.01(s,2H),6.75(s,1H),4.37(dd,J＝6.8,8.8Hz,1H),2.62(dd,J＝8.8,13.2Hz,1H),2.54(dd,J＝6.4,12.8Hz,1H),1.81(s,3H),1.66(s,3H).LC-MS:m/z 434.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法C3

实例108和109：由含有(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

向2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酸(方法Z2步骤4；120mg，459.5μmol)于ACN(10mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；90mg，459.5μmol)、TCFH(515mg，1.8mmol)和NMI(150mg，1.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺(60mg，30％产率)。LC-MS(ES,m/z):439[M+H]。

步骤2：分离对映异构体以获得(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺和(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2′-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

对58mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2'-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALART Cellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在16分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：11.11；RT2(分钟)：13.15；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：6)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例108(20.6mg，36％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例109(20.6mg，36％产率)。

实例108：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.64(s,1H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(s,2H),6.60(d,J＝4.8Hz,1H),4.37-4.42(m,1H),3.06-3.20(m,2H),2.82-2.93(m,1H),2.69-2.77(m,1H),2.08-2.24(m,4H).LCMS(ES,m/z):439.1[M+H]⁺。

实例109：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(s,1H),8.72(d,J＝2.1Hz,1H),8.65(s,1H),8.57(d,J＝2.1Hz,1H),8.18(s,2H),6.61(d,J＝5.1Hz,1H),4.34-4.42(m,1H),3.08-3.22(m,2H),2.86-2.93(m,1H),2.69-2.75(m,1H),2.18-2.28(m,4H).LC-MS(ES,m/z):439.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法D3

实例110和111：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-乙炔氧丁烷

在0℃下向(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(15.6g，81.3mmol)于MeOH(7.5mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(18.5g，133.6mmol)和氧杂环丁烷-3-甲醛(5g，58.1mmol)。将反应在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(15mL)淬灭。将所得溶液用DCM(2x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，以得到呈黄色油的3-乙炔氧丁烷(9.0g，粗产物)。¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δ:4.78-4.82(m,2H),4.70-4.75(m,2H),3.83-3.91(m,1H),2.36(d,J＝2.4Hz,1H)。

步骤2：4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑

/>

将3-乙炔氧丁烷(9g，109.6mmol)于叠氮三甲基硅烷(9mL)中的溶液在100℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈黄色油的4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑(200mg，1％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:7.71(s,1H),5.04-5.09(m,2H),4.83-4.87(m,2H),4.39-4.50(m,1H).LC-MS:m/z 126[M+H]⁺。

步骤3：3-氯-5-硝基-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶和3-氯-5-硝基-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶

向4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑(200mg，1.3mmol)和2,3-二氯-5-硝基吡啶(247mg，1.3mol)于ACN(10mL)中的溶液中添加K₂CO₃(530mg，3.8mmol)。将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(30mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的3-氯-5-硝基-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(200mg，55％产率)和呈黄色油的3-氯-5-硝基-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶(方法D3步骤3-i；100mg，27％产率)。LC-MS:m/z 282[M+H]⁺。

步骤4：5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺

向3-氯-5-硝基-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(200mg，710.1μmol)于EtOH(9mL)和水(3mL)中的溶液中添加Fe(198mg，3.6mmol)和氯化铵(114mg，2.1mmol)。将混合物在80℃下搅拌1小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(10mL)稀释，并将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈浅棕色固体的5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(160mg，89％产率)。LC-MS:m/z 252[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；105mg，397μmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加三氯氧磷(183mg，1.2mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。然后，添加5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(100mg，397μmol)和吡啶(314mg，4.0mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(18mg，9％产率)。LC-MS:m/z 499[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对18mg 2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在29分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：15.61；RT2(分钟)：25.30；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：3mL；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例110(5.1mg，28％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈浅黄色固体的实例111(3.4mg，19％产率)。

实例110：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(s,1H),8.72(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.57(d,J＝2.0Hz,1H),8.21(s,1H),6.95(s,1H),4.94-4.97(m,2H),4.73-4.76(m,2H),4.45-4.52(m,2H),2.54-2.60(m,1H),2.33-2.36(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 499.1[M+H]⁺。

实例111：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(s,1H),8.72(d,J＝1.6Hz,1H),8.66(s,1H),8.57(d,J＝1.6Hz,1H),8.21(s,1H),6.95(s,1H),4.94-4.97(m,2H),4.73-4.76(m,2H),4.43-4.52(m,2H),2.54-2.61(m,1H),2.33-2.36(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 499.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法E3

实例112：2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：5-((二苯基亚甲基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯

向5-溴-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(500mg，1.8mmol)于二噁烷(5mL)中的混合物中添加碳酸铯(1.2g，3.5mmol)、二苯基甲烷亚胺(638mg，3.5mmol)、XantPhos(204mg，352.1μmol)和Pd₂(dba)₃(180mg，176μmol)。将混合物在100℃下搅拌2小时。将反应溶液在减压下浓缩。将残余物用水(30mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-((二苯基亚甲基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(400mg，59％产率)。LC-MS:m/z 385[M+H]⁺。

步骤2：5-氨基-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯

向5-((二苯基亚甲基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(400mg，1.0mmol)于THF(5mL)中的混合物中添加1M HCl(4mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应溶液在减压下浓缩。将残余物用水(30mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至7-8。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的5-氨基-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(220mg，96％产率)。LC-MS:m/z 221[M+H]⁺。

步骤3：5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯

向5-氨基-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(200mg，908.5μmol)于ACN(2mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；241mg，908.5μmol)、NMI(302mg，3.6mmol)和TCFH(1.0g，3.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈浅黄色油的5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(400mg，75％产率)。LC-MS:m/z468[M+H]⁺。

步骤4：5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸

/>

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(500mg，855μmol)于THF(3.2mL)、水(0.8mL)和EtOH(0.8mL)中的溶液中添加氢氧化锂(205mg，8.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物用水(20mL)稀释。用1M HCl将pH调节至3-4。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(方法E3步骤4；150mg，31％产率)。LC-MS:m/z 454[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(30mg，66.1μmol)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加环丙胺(7.4mg，79.3μmol)、EDCI(19mg，99.2μmol)、HOBT(13.4mg，99.2μmol)和DIEA(12.8mg，99.2μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例112(2.2mg，7％产率)。

实例112：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:9.00(s,1H),8.51(s,1H),8.39-8.42(m,2H),7.71(d,J＝2.4Hz,1H),6.71(s,1H),4.31-4.36(m,1H),2.87-2.90(m,1H),2.56-2.63(m,1H),2.44-2.51(m,1H),1.80(s,3H),1.64(s,3H),0.85-0.94(m,2H),0.65-0.74(m,2H).LC-MS:m/z 493.2[M+H]⁺。

方法F3

实例113和114：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-溴-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(方法O1步骤2；370mg，1.6mmol)于DMF(3mL)中的搅拌溶液中添加NBS(372mg，2.1mmol)。将混合物在25℃下搅拌5小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。这得到呈黄色固体的3-溴-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(460mg，粗产物)，其无需进一步纯化即可用于下一步。LCMS(ES,m/z):309[M+H]⁺。

步骤2：2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向3-溴-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(120mg，0.39mmol)于二噁烷(5mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液中添加甲基硼酸(82.7mg，1.38mmol)、Pd(dppf)Cl₂(21.6mg，26.44μmol)和K₂CO₃(180mg，1.3mmol)。将反应混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌2小时。使混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色固体的2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(29mg，31％产率)。LC-MS:m/z 245[M+H]⁺。

步骤3：2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(69mg，282.5μmol)于AcOH(1mL)和12M HCl(1mL)中的混合物在100℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(30mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(72mg，96.8％产率)。LC-MS:m/z 264[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(72mg，273.5μmol)和5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；53mg，273.5μmol)于ACN(5mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(230mg，820.5μmol)和NMI(67mg，820.5μmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(45mg，37％产率)。LC-MS:m/z 441[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对42mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-3,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKIA，2*25cm，20μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在9分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：5.43；RT2(分钟)：7.63；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.8mL；运行次数：6)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例113(13.7mg，25％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例114(11.7mg，22％产率)。

实例113：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.08(br,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.58-8.59(m,2H),8.17(s,2H),4.41-4.45(m,1H),2.55-2.67(m,1H),2.32-2.35(m,1H),2.22(s,3H),1.62(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 441.1[M+H]⁺。

实例114：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.09(br,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.58-8.59(m,2H),8.18(s,2H),4.42-4.45(m,1H),2.54-2.57(m,1H),2.32-2.35(m,1H),2.22(s,3H),1.62(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 441.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法G3

实例115：2-氯-N-(6-(乙基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氯-N-(6-(乙基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(方法E3步骤4；37mg，66.1μmol)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加乙胺盐酸盐(6.5mg，79.3μmol)、EDCI(19mg，99.2μmol)、HOBT(13.4mg，99.2μmol)和DIEA(12.8mg，99.2μmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例115(3.5mg，11％产率)。

实例115：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.02(s,1H),8.99(d,J＝2.0Hz,1H),8.61-8.67(m,2H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),6.95(s,1H),4.40-4.49(m,1H),3.25-3.28(m,2H),2.54-2.65(m,1H),2.29-2.37(m,1H),1.63(s,3H),1.56(s,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H).LC-MS:m/z 481.1[M+H]⁺。

方法H3

实例116：(反式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酰胺(外消旋)

步骤1：6-氧杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯

在0℃下向环戊-3-烯-1-甲酸甲酯(25.0g，198.4mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加3-氯过氧苯甲酸(51.1g，297.6mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩，以得到呈无色油的6-氧杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(26g，92％产率)。LC-MS:m/z 143[M+H]⁺。

步骤2：3-(苄氧基)-4-羟基环戊烷-1-甲酸甲酯

在0℃下，向6-氧杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(26.0g，183.1mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加苯甲醇(29.6g，274.6mmol)和三氟化硼醚化物(2.6g，18.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用冰水(200mL)淬灭。将所得溶液用DCM(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈无色油的3-(苄氧基)-4-羟基环戊烷-1-甲酸甲酯(25g，54％产率)。LC-MS:m/z 251[M+H]⁺。

步骤3：3-(苄氧基)-4-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯

在0℃下向3-(苄氧基)-4-羟基环戊烷-1-甲酸甲酯(25.0g，100.0mmol)于DCM(500mL)中的搅拌溶液中分批添加戴斯-马丁过碘烷(106.1g，250.0mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将固体滤出，并将滤液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈无色油的3-(苄氧基)-4-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(20g，81％产率)。LC-MS:m/z 249[M+H]⁺。

步骤4：8-(苄氧基)-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯

在25℃下向甲基三甲基碘化亚砜(17.6g，80.3mmol)于t-BuOH(100mL)中的搅拌溶液中分批添加叔丁醇钾(9.3g，80.3mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌30分钟。然后，添加3-(苄氧基)-4-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(20.0g，80.3mmol)于t-BuOH(10mL)中的溶液。将反应混合物在50℃下搅拌72小时。将反应混合物用冰水(200mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈无色油的8-(苄氧基)-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(18g，81％产率)。LC-MS:m/z 277[M+H]⁺。

步骤5：8-羟基-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯

在25℃下，向8-(苄氧基)-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(18.0g，64.9mmol)于甲醇(200mL)中的搅拌溶液中添加Pd/C(9.0g，10％)。将反应混合物在25℃下在氢气气氛下搅拌16小时。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈无色油的8-羟基-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(10g，83％产率)。LC-MS:m/z 187[M+H]⁺。

步骤6：8-氧代-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯

在0℃下向8-羟基-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(10.0g，53.4mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中分批添加戴斯-马丁过碘烷(5.6g，133.6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈无色油的8-氧代-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(7g，71％产率)。¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δ4.69-4.74(m,1H),4.48-4.56(m,1H),3.73(s,3H),3.12-3.22(m,1H),2.76-2.86(m,1H),2.64-2.75(m,1H),2.50-2.64(m,3H),2.26-2.34(m,1H).LC-MS:m/z185[M+H]⁺。

步骤7：(Z)-7-((二甲基氨基)亚甲基)-8-氧代-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯

将8-氧代-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(7.0g，37.8mmol)于DMF-DMA(100mL)中的溶液在35℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃并浓缩，以得到呈黄色油的(Z)-7-((二甲基氨基)亚甲基)-8-氧代-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(6.0g，粗产物)，其无需纯化即可用于下一步。LC-MS:m/z 240[M+H]⁺。

步骤8：(反式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯和(顺式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯

向(Z)-7-((二甲基氨基)亚甲基)-8-氧代-1-氧杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸甲酯(6.0g，22.0mmol)于甲苯(30mL)和AcOH(3mL)中的搅拌溶液中添加3-氯-1H-吡唑-5-胺(2.5g，22.0mmol)。将所得混合物在95℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至6～7。将所得溶液用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的(反式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯(1.5g，23％产率)和呈白色固体的(顺式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯(方法H3步骤8-c；1.0g，14％产率)。LCMS(ES,m/z):294[M+H]⁺。

步骤9：(反式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酸

向(反式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯(1.5g，5.1mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加PBS缓冲液(40mL，pH＝7)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。然后，添加Novozym51032(1.5g)。将混合物在25℃下搅拌16小时。对反应混合物进行制备型HPLC纯化，并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的(反式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸(800mg，57％产率)。LCMS(ES,m/z):280[M+H]⁺。

步骤10：(反式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酰胺

向(反式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酸(200mg，716μmol)于ACN(10mL)中的溶液中添加6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(164mg，716μmol)、TCFH(784mg，2.8mmol)和NMI(229mg，2.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例116(4.0mg，1％产率)。

实例116：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.26(br,1H),8.99-9.03(m,1H),8.83-8.74(m,2H),8.18(s,2H),7.11(s,1H),4.96-5.04(m,1H),4.51-4.56(m,2H),3.38-3.52(m,1H),3.10-3.13(m,2H),2.89-2.93(m,1H).LC-MS:m/z 491.0[M+H]⁺。

方法I3

实例117：(顺式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酰胺(外消旋)

步骤1：(顺式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸

向(顺式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯(方法H3步骤8-c；1.0g，3.4mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加PBS缓冲液(40mL，pH＝7)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。然后，添加Novozym51032(1.0g)。将混合物在25℃下搅拌16小时。对反应混合物进行制备型HPLC纯化，并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的(顺式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸(400mg，42％产率)。LCMS(ES,m/z):280[M+H]⁺。

步骤2：(顺式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2′-氧杂环丁烷]-6-甲酰胺

向(顺式)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,2'-氧杂环丁烷]-6-甲酸(200mg，716μmol)于ACN(10mL)中的溶液中添加6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(164mg，716μmol)、TCFH(784mg，2.8mmol)和NMI(229mg，2.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例117(1.7mg，0.5％产率)。

实例117：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.27(s,1H),9.02(d,J＝2.4Hz,1H),8.80(d,J＝2.4Hz,1H),8.77(s,1H),8.20(s,2H),7.11(s,1H),5.01-5.06(m,1H),4.55-4.61(m,1H),4.32-4.36(m,1H),3.41-3.48(m,1H),3.03-3.17(m,2H),2.75-2.82(m,1H).LC-MS:m/z491.1[M+H]⁺。

方法J3

实例118：N-(6-(氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：N-(6-(氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(方法E3步骤4；30mg，66.1μmol)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加氮杂环丁烷氯化氢盐(7mg，79.3μmol)、EDCI(19mg，99.2μmol)、HOBT(13mg，99.2μmol)和DIEA(43mg，330.5μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例118(4.4mg，13％产率)。

实例118：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.03(s,1H),8.98(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.58(d,J＝2.0Hz,1H),6.95(s,1H),4.42-4.45(m,1H),3.97-4.08(m,4H),2.54-2.58(m,1H),2.27-2.35(m,3H),1.63(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 493.1[M+H]⁺。

方法K3

实例119：2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-胺

向3-氯-5-硝基-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶(方法D3步骤3-i；100mg，355.0μmol)于EtOH(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加Fe(99mg，1.8mmol)和氯化铵(57mg，1.1mmol)。将混合物在80℃下搅拌1小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(10mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈浅棕色固体的5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-胺(80mg，89％产率)。LC-MS:m/z 252[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(4-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-胺(10mg，39.7μmol)于ACN(1mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；11mg，39.7％μmol)、TCFH(17mg，59.6μmol)和NMI(10mg，119.2μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例119(1.3mg，6％产率)。

实例119：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.08(br,1H),8.75(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.58-8.60(m,2H),6.95(s,1H),4.91-4.97(m,2H),4.76-4.79(m,2H),4.44-4.52(m,2H),2.54-2.60(m,1H),2.31-2.36(m,1H),1.64(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 499.1[M+H]⁺。

方法L3

实例120：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：3-氯-5-硝基-2-(2H-四唑-2-基)吡啶

向2,3-二氯-5-硝基吡啶(1g，5.18mmol)于THF(15mL)中的搅拌混合物中添加2H-四唑(13.8mL，6.22mmol，0.45M于ACN中)和DIEA(2.0g，15.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌15小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的3-氯-5-硝基-2-(2H-四唑-2-基)吡啶(400mg，34％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.15(s,1H),9.44(s,1H),9.25(s,1H).LC-MS:m/z 227[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-(2H-四唑-2-基)吡啶-3-胺

向3-氯-5-硝基-2-(2H-四唑-2-基)吡啶(300mg，1.3mmol)于EtOH(10mL)和水(10mL)中的搅拌混合物中添加Fe(311mg，5.6mmol)和氯化铵(297mg，5.6mmol)。将所得混合物在95℃下搅拌1小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(10mL)稀释。将所得溶液用DCM/MeOH(10:1)(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的5-氯-6-(2H-四唑-2-基)吡啶-3-胺(200mg，77％产率)。LC-MS:m/z 197[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(2H-四唑-2-基)吡啶-3-胺(80mg，406.9μmol)于ACN(8mL)中的搅拌混合物中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；130mg，488.3μmol)、TCFH(343mg，1.2mmol)和NMI(167mg，2.0mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例120(19.0mg，10％产率)。

实例120：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.15(s,1H),10.02(s,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.64(d,J＝2.4Hz,1H),6.94-6.97(m,1H),4.41-4.52(m,1H),2.54-2.63(m,1H),2.41-2.29(1H),1.64(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 444.1[M+H]⁺。

方法M3

实例121和122：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法T2步骤1；100mg，374.2μmol)于ACN(2mL)中的溶液中添加5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；73mg，374.2μmol)、NMI(92mg，1.1mmol)和TCFH(157mg，561.3μmol)。将所得溶液在25℃下搅拌3小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(95mg，57％产率)。LC-MS:m/z 445[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对95mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在10分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：5.09；RT2(分钟)：7.97；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例121(13mg，13％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例122(14.8mg，15％产率)。

实例121：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.07(s,1H),8.72(d,J＝2.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.57(d,J＝2.1Hz,1H),8.17(s,2H),4.45(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.56(dd,J＝9.0,13.2Hz,1H),2.33(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.62(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 445.0[M+H]⁺。

实例122：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.07(s,1H),8.72(d,J＝2.1Hz,1H),8.68(s,1H),8.57(d,J＝2.1Hz,1H),8.17(s,2H),4.45(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.56(dd,J＝9.0,13.2Hz,1H),2.32(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.62(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 445.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法N3

实例123和124：2-氯-N-(5-氯-6-(2-(2-羟乙基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和2-氯-N-(5-氯-6-(1-(2-羟乙基)-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：3-氯-5-((二苯基亚甲基)氨基)吡啶甲腈

向5-溴-3-氯吡啶甲腈(10.0g，46.1mmol)和二苯基甲烷亚胺(16.6g，92.2mmol)于二噁烷(100mL)中的搅拌溶液中添加Cs₂CO₃(29.9g，92.2mmol)、XantPhos(5.3g，9.2mmol)和Pd₂(dba)₃(4.7g，4.6mmol)。将混合物在110℃下搅拌2小时。将反应冷却至25℃。将反应混合物用水(500mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的3-氯-5-((二苯基亚甲基)氨基)吡啶甲腈(11.5g，78％产率)。LC-MS:m/z 318[M+H]⁺。

步骤2：5-氨基-3-氯吡啶甲腈

向3-氯-5-((二苯基亚甲基)氨基)吡啶甲腈(11.5g，36.2mmol)于甲醇(100mL)中的搅拌溶液中添加盐酸羟胺(4.9g，72.4mmol)和乙酸钠(6.1g，72.4mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(500mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-氨基-3-氯吡啶甲腈(3.2g，58％产率)。LC-MS:m/z 154[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氨基-3-氯吡啶甲腈(3.2g，20.9mmol)于ACN(50mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；5.5g，20.9mmol)、TCFH(23.4g，83.6mmol)和NMI(6.8g，83.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(5.0g，60％产率)。LC-MS:m/z 401[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-N-(5-氯-6-氰基吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(5.0g，12.5mmol)和溴化锌(II)(2.8g，12.5mmol)于异丙醇(50mL)和水(5mL)中的搅拌溶液中添加叠氮化钠(2.4g，37.5mmol)。将混合物在100℃下搅拌16小时。将反应冷却至25℃。将反应混合物用水(200mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:5)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(2.0g，36％产率)。LC-MS:m/z 444[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-氯-6-(2-(2-羟乙基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和2-氯-N-(5-氯-6-(1-(2-羟乙基)-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-N-(5-氯-6-(2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(300mg，675.6μmol)于DMF(30mL)和ACN(3mL)中的搅拌溶液中添加2-溴乙-1-醇(253mg，2.0mmol)和K₂CO₃(280mg,2.0mmol)。将混合物在50℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x40mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈灰白色固体的实例123(1.0mg，0.3％产率)和呈灰白色固体的实例124(2.1mg，0.6％产率)。

实例123：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.99(s,1H),8.85(d,J＝2.1Hz,1H),8.65(s,1H),8.49(d,J＝2.1Hz,1H),6.94(s,1H),5.10(t,J＝5.5Hz,1H),4.80(t,J＝5.2Hz,2H),4.42-4.47(m,1H),3.94-3.99(m,2H),2.53-2.56(m,1H),2.29-2.39(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 488.1[M+H]⁺。

实例124：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.08(s,1H),8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.64(s,1H),8.52(d,J＝2.1Hz,1H),6.94(s,1H),4.89(t,J＝5.5Hz,1H),4.59(t,J＝5.2Hz,2H),4.42-4.48(m,1H),3.68-3.70(m,2H),2.53-2.56(m,1H),2.29-2.39(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 488.1[M+H]⁺。

未测定羟乙基在三唑部分上的位置。

方法O3

实例125和126：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法X2步骤5；100mg，355.5μmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(281mg，3.5mmol)和三氯氧磷(163mg，1.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后，添加5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈(方法M2步骤1；72mg，391.1μmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(15mg，9％产率)。LC-MS:m/z449[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对15mg N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKIG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在9.5分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：5.392；RT2(分钟)：6.994；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：2mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈灰白色固体的实例125(4.0mg，26％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈浅黄色固体的实例126(4.6mg，30％产率)。

实例125：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.88(br,1H),8.68-8.69(m,2H),8.63(d,J＝2.4Hz,1H),7.75(t,J＝71.2Hz,1H),7.30(t,J＝54.4Hz,1H),7.08(s,1H),4.42-4.46(m,1H),2.53-2.59(m,1H),2.31-2.36(m,1H),1.67(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 449.1[M+H]⁺。

实例126：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.88(br,1H),8.68-8.69(m,2H),8.63(d,J＝2.8Hz,1H),7.75(t,J＝71.2Hz,1H),7.30(t,J＝54.4Hz,1H),7.08(s,1H),4.42-4.46(m,1H),2.53-2.59(m,1H),2.31-2.36(m,1H),1.67(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 449.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法P3

实例127和128：由含有(R)-N-(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：(2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

向2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺(10g,50.9mmol)于THF(250mL)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁基酯(16.7g，76.3mmol)、三甲胺(12.9g，127.2mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.6g，5.1mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈白色固体的(2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5.2g，33％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.52(s,1H),7.89(d,J＝1.5Hz,1H),7.73(d,J＝1.8Hz,1H),1.50(s,9H)；LC-MS:m/z 297[M+H]⁺。

步骤2：(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

向(2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，2.0mmol)于二噁烷(12mL)中的搅拌溶液中添加亚氨基二甲基-λ⁶-砜(226mg，2.4mmol)、Pd₂(dba)₃(186mg，0.2mmol)、XantPhos(235mg，0.4mmol)、Cs₂CO₃(989mg，0.4mmol)。将所得混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌4小时。使混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，82％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:9.96(s,1H),7.45(d,J＝3.0Hz,1H),6.88(d,J＝3.0Hz,1H),3.38(s,6H),1.49(s,9H).LC-MS:m/z 354[M+H]⁺。

步骤3：((4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜

向(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，282.5μmol)于DCM(9.6mL)中的搅拌溶液中添加TFA(2.4mL)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将所得混合物在减压下浓缩。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至5-6。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的((4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(60mg，83％产率)。LC-MS:m/z254[M+H]⁺。

步骤4：N-(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

/>

在0℃下向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；35mg，140.6μmol)于DCM(8mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(111mg，1.4mmol)和三氯氧磷(65mg，421.8μmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后，添加((4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(47mg，182.3μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用DCM(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色油的N-(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(35mg，95％产率)。LC-MS:m/z 485[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(2-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对30mg N-(2-((二甲基(氧代)-l6-硫亚基)氨基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在15分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：5.972；RT2(分钟)：12.782；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：2mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例127(10.4mg，11％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例128(8.3mg，9％产率)。

实例127：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.78(s,1H),8.59(s,1H),7.54(d,J＝1.6Hz,1H),7.14(d,J＝1.2Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.35-4.39(m,1H),3.40(s,6H),2.52-2.56(m,1H),2.24-2.29(m,1H),1.60(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 485.1[M+H]⁺。

实例128：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.78(s,1H),8.59(s,1H),7.54(d,J＝1.6Hz,1H),7.14(d,J＝1.2Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.35-4.39(m,1H),3.40(s,6H),2.52-2.56(m,1H),2.24-2.29(m,1H),1.60(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 485.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Q3

实例129和130：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法X2步骤5；60mg，213.3μmol)于DCM(8mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(168mg，2.1mmol)和三氯氧磷(98mg，640.8μmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后，在0℃下添加5-氨基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)烟腈(方法S2步骤1；40mg，213.4μmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(62mg，65％产率)。LC-MS:m/z 450[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对60mg N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在20分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：13.43；RT2(分钟)：17.52；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.3mL；运行次数：7)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例129(18.3mg，30％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例130(20.6mg，33％产率)。

实例129：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.13(s,1H),8.99(d,J＝2.7Hz,1H),8.78(d,J＝2.7Hz,1H),8.72(s,1H),8.30(s,2H),7.30(t,J＝54.3Hz,1H),7.08(s,1H),4.47-4.52(m,1H),2.56-2.64(m,1H),2.33-2.40(m,1H),1.68(s,3H),1.60(s,3H).LCMS(ES,m/z):450.0[M+H]⁺。

实例130：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.13(s,1H),8.99(d,J＝2.7Hz,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.72(s,1H),8.29(s,2H),7.30(t,J＝54.3Hz,1H),7.08(s,1H),4.47-4.52(m,1H),2.56-2.63(m,1H),2.33-2.40(m,1H),1.68(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS(ES,m/z):450.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法R3

实例131和132：由含有(R)-N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：((3-氯-5-硝基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜

向2,3-二氯-5-硝基吡啶(600mg，3.1mmol)于二噁烷(12mL)中的搅拌溶液中添加亚氨基二甲基-λ⁶-砜(577mg，6.2mmol)、Pd₂(dba)₃(186mg，310μmol)、XantPhos(359mg，620μmol)和Cs₂CO₃(1.5g，4.7mmol)。将所得混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌15小时。使混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的((3-氯-5-硝基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(680mg，74％产率)。LC-MS:m/z 250[M+H]⁺。

步骤2：((5-氨基-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜

向((3-氯-5-硝基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(300mg，1.2mmol)于EtOH(7mL)和水(7mL)中的搅拌溶液中添加Fe(269mg，4.8mmol)和氯化铵(260mg，4.8mmol)。将混合物在80℃下搅拌2小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(10mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈白色固体的((5-氨基-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(60mg，83％产率)。LC-MS:m/z 220[M+H]⁺。

步骤3：N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向((5-氨基-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ⁶-砜(30mg，136μmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中添加2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；60mg，272μmol)、TCFH(114mg，408μmol)和NMI(100mg，1.1mmol)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，42％产率)。LC-MS:m/z 451[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对30mg N-(5-氯-6-((二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基)氨基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在15分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.196；RT2(分钟)：14.59；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：2mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例131(12.6mg，19％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例132(10.8mg，17％产率)。

实例131：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.40(s,1H),8.58(s,1H),8.24(d,J＝2.4Hz,1H),8.09(d,J＝2.4Hz,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.31-4.35(m,1H),3.40(s,6H),2.46-2.49(m,1H),2.26-2.31(m,1H)1.61(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS:m/z 451.1[M+H]⁺。

实例132：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.40(s,1H),8.58(s,1H),8.24(d,J＝2.4Hz,1H),8.09(d,J＝2.4Hz,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.31-4.35(m,1H),3.40(s,6H),2.46-2.49(m,1H),2.26-2.31(m,1H)1.61(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS:m/z 451.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法S3

实例133、134、135和136：由含有(R)-N-(5-氯-6-((R)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺、(R)-N-(5-氯-6-((S)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺、(S)-N-(5-氯-6-((R)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-((S)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二氟乙烷-1-酮

在-78℃下在氮气氛下，向2,5-二溴-3-氯-吡啶(1g，3.7mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中滴加n-BuLi(1.6mL，2.5N)。然后添加2,2-二氟乙酸甲酯(486mg，4.4mmol)。将反应混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈无色油的1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二氟乙烷-1-酮(500mg，50％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.92(d,J＝1.9Hz,1H),8.63(d,J＝1.9Hz,1H),7.13(t,J＝53.2Hz,1H).LC-MS:m/z 270[M+H]⁺。

步骤2：1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二氟乙-1-醇

向1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二氟乙-1-酮(600mg，2.2mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加NaBH₄(84mg，2.2mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈无色油的1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二氟乙-1-醇(300mg，49％产率)。LC-MS:m/z 272[M+H]⁺。

步骤3：N-(5-氯-6-(2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

向1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二氟乙-1-醇(209mg，768μmol)于二噁烷(5mL)中的搅拌混合物中添加2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺(方法A3步骤2；200mg，768.4μmol)、Cs₂CO₃(500mg，1.5mmol)、XantPhos(89mg，153.7μmol)和Pd₂(dba)₃(159mg，153.7μmol)。将混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将残余物用水(20mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺(120mg，34％产率)。LC-MS:m/z 452[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-((R)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺、(R)-N-(5-氯-6-((S)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺、(S)-N-(5-氯-6-((R)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-((S)-2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

对120mg N-(5-氯-6-(2,2-二氟-1-羟乙基)吡啶-3-基)-2'-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在16分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.10；RT2(分钟)：7.67；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：9)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例133(17.4mg，14％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例134(13.4mg，11％产率)。将含有两种其它异构体的混合物的级分浓缩并进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在28分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：9.91；RT2(分钟)：11.66；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例135(15.1mg，12％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例136(17.0mg，14％产率)。

实例133：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.82(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.61(s,1H),8.31(d,J＝2.0Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),6.14-6.44(m,2H),5.01-5.07(m,1H),4.33-4.36(m,1H),3.07-3.18(m,2H),2.83-2.89(m,1H),2.67-2.71(m,1H),2.08-2.23(m,4H).LC-MS:m/z 452.0[M+H]⁺。

实例134：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.83(s,1H),8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.31(d,J＝2.0Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),6.14-6.44(m,2H),5.01-5.07(m,1H),4.33-4.36(m,1H),3.07-3.18(m,2H),2.83-2.89(m,1H),2.66-2.70(m,1H),2.08-2.24(m,4H).LC-MS:m/z 452.0[M+H]⁺。

实例135：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.83(s,1H),8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.31(d,J＝2.0Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),6.14-6.44(m,2H),5.02-5.07(m,1H),4.33-4.36(m,1H),3.07-3.17(m,2H),2.84-2.90(m,1H),2.67-2.70(m,1H),2.06-2.24(m,4H).LC-MS:m/z 452.0[M+H]⁺。

实例136：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.83(s,1H),8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.31(d,J＝2.0Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),6.14-6.44(m,2H),5.02-5.07(m,1H),4.33-4.37(m,1H),3.08-3.17(m,2H),2.83-2.90(m,1H),2.66-2.74(m,1H),2.07-2.24(m,4H).LC-MS:m/z 452.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对和相对立体化学。

方法T3

实例137：2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯和1-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸甲酯的混合物

向2,3-二氯-5-硝基吡啶(5.0g，25.9mmol)于ACN(150mL)中的搅拌溶液中添加2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(3.6g，28.5mmol)和碳酸钾(10.7g，77.7mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。将所得混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色固体的2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯和1-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸甲酯的混合物(4.5g，33％产率)。LC-MS:m/z 284[M+H]⁺。

步骤2：2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

向2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯和1-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸甲酯的混合物(4.5g，15.9mmol)于THF(20mL)和水(10mL)中的搅拌溶液中添加Fe(4.4g，79.3mmol)和NH₄Cl(4.2g，79.3mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(600mg，30％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.30(s,1H),7.92(d,J＝2.7Hz,1H),7.17(d,J＝2.7Hz,1H),4.13(br,2H),3.99(s,3H).LC-MS:m/z254[M+H]⁺。

步骤3：2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯

向2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(300mg，1.2mmol)于ACN(5mL)中的混合物中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；314mg，1.2mmol)、TCFH(1.3g，4.7mmol)和NMI(388mg，4.7mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色油的2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(500mg，84％产率)。LC-MS:m/z 501[M+H]⁺。

步骤4：2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸

向2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(500mg，997μmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含LiOH(287mg，12.0mmol)的水(5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。用2M HCl将pH调节至5-6。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸(600mg，79％产率)。LC-MS:m/z 487[M+H]⁺。

步骤5：N-(6-(4-氨基甲酰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-(3-氯-5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酸(600mg，1.2mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加氯化铵(132mg，2.5mmol)、HATU(562mg，1.5mmol)和DIEA(477mg，3.7mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈白色固体的N-(6-(4-氨基甲酰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(50mg，8％产率)。LC-MS:m/z 486[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-N-(5-氯-6-(4-氰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

将N-(6-(4-氨基甲酰基-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(45mg，92.5μmol)于三氯氧磷(5mL)中的溶液在80℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(15mL)淬灭。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至7。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色固体的实例137(2mg，4％产率)。

实例137：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.21(d,J＝2.0Hz,1H),9.84(s,1H),8.72(s,1H),8.66(d,J＝2.0Hz,1H),6.97(s,1H),4.51-4.57(m,1H),2.60-2.69(m,1H),2.41-2.52(m,1H),1.67(s,3H),1.60(s,3H).LC-MS:m/z 468.1[M+H]⁺。

方法U3

实例138和139：由含有(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氯-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

在0℃下向2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(方法A1步骤5；2.0g，8.1mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中分批添加NaH(424mg，10.6mmol，60％于矿物油中)。将混合物在25℃下搅拌1小时。在0℃下滴加碘甲烷(1.2g，8.3mmol)，并将所得混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(800mg，37％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.54(s,1H),6.75(s,1H),2.81(d,J＝12Hz,1H),2.22(d,J＝12Hz,1H),1.87(s,3H)1.74(s,6H).LC-MS(ES,m/z):261[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

向2-氯-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(260mg，1.0mmol)于AcOH(6mL)中的搅拌溶液中添加12M HCl(6mL)。将所得混合物在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至25℃。将混合物在减压下浓缩，并将残余物用水(100ml)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈灰白色固体的2-氯-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(150mg，53％产率)。LC-MS(ES,m/z):280[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氯-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(130mg，464.3μmol)于ACN(10mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；90mg，464.5μmol)、TCFH(391mg，1.4mmol)和NMI(190mg，2.3mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(90mg，43％产率)。LC-MS(ES,m/z):457[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对90mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在21分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：12.93；RT2(分钟)：17.84；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：8)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例138(38.6mg，42％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例139(34.3mg，38％产率)。

实例138：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.15(s,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.72(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(s,2H),6.96(s,1H),2.70(d,J＝14.0Hz,1H),2.29(d,J＝14.0Hz,1H),1.78(s,3H),1.64(s,3H),1.53(s,3H).LCMS(ES,m/z):457.1[M+H]⁺。

实例139：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.14(s,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.72(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(s,2H),6.96(s,1H),2.71(d,J＝13.6Hz,1H),2.29(d,J＝13.6Hz,1H),1.78(s,3H),1.63(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS(ES,m/z):457.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法V3

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实例140和141：由含有(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-氯-2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)-5-硝基吡啶

向2,3-二氯-5-硝基吡啶(100mg，518.2μmol)于ACN(1mL)中的混合物中添加5-甲基-2H-四唑(52mg，621.8μmol)和K₂CO₃(214mg，1.5mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(10mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的3-氯-2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)-5-硝基吡啶(80mg，60％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:9.38(d,J＝2.4Hz,1H),8.86(d,J＝2.4Hz,1H),2.69(s,3H).LC-MS:m/z241[M+H]⁺。

步骤2：5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-胺

向3-氯-2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)-5-硝基吡啶(80mg，332.5μmol)和氯化铵(89mg，1.7mmol)于EtOH(3mL)和水(1mL)中的搅拌溶液中添加Fe(56mg，997.5μmol)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-胺(40mg，57％产率)。LC-MS:m/z 211[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-胺(40mg，189.9μmol)和2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；50mg，189.9μmol)于ACN(1mL)中的搅拌溶液中添加TCFH(160mg，569.7μmol)和NMI(47mg，569.7μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(36mg，41％产率)。LC-MS:m/z 458[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对34mg 2-氯-N-(5-氯-6-(5-甲基-2H-四唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKIG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度10％B，在25分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：12.80；RT2(分钟)：20.52；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.2mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例140(4.4mg，12％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例141(11.0mg，23％产率)。

实例140：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:9.09(s,1H),8.74(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(s,1H),6.72(s,1H),4.48(dd,J＝7.2,8.4Hz,1H),2.64(dd,J＝8.8,13.2Hz,1H),2.57(s,3H),2.51(dd,J＝6.8,13.2Hz,1H),1.80(s,3H),1.64(s,3H).LC-MS:m/z 458.0[M+H]⁺。

实例141：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:9.08(s,1H),8.74(d,J＝2.4Hz,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.58(s,1H),6.71(s,1H),4.47(dd,J＝6.8,8.8Hz,1H),2.64(dd,J＝9.2,13.2Hz,1H),2.57(s,3H),2.50(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.79(s,3H),1.64(s,3H).LC-MS:m/z 458.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法W3

实例142和143：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-溴-3-氯-2-(2H-四唑-5-基)吡啶

向5-溴-3-氯吡啶甲腈(10.0g，46.5mmol)和三乙胺盐酸盐(19.1g，139.5mmol)于甲苯(200mL)中的搅拌溶液中添加叠氮化钠(3.6g，56.0mmol)。将混合物在110℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至25℃并用水(200mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:5)洗脱，以得到呈黄色固体的5-溴-3-氯-2-(2H-四唑-5-基)吡啶(方法W3步骤1；9.0g，75％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.42(s,1H),8.73(d,J＝2.2Hz,1H),8.38(d,J＝2.2Hz,1H).LC-MS:m/z 260[M+H]⁺。

步骤2：5-溴-3-氯-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶和5-溴-3-氯-2-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶的混合物

向5-溴-3-氯-2-(2H-四唑-5-基)吡啶(4.0g，15.3mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加碘甲烷(4.3g，30.7mmol)和氢氧化钾(1.7g，30.7mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(200mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x400mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-溴-3-氯-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶和5-溴-3-氯-2-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶的混合物(3.6g，85％产率)。LC-MS:m/z274[M+H]⁺。

步骤3：N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺和N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺

向5-溴-3-氯-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶和5-溴-3-氯-2-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶的混合物(2.0g，7.3mmol)于二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中添加二苯基甲烷亚胺(2.6g，14.6mmol)、Cs₂CO₃(4.7g，14.6mmol)、XantPhos(843.8mg，1.5mmol)和Pd₂(dba)₃(755.5mg，0.7mmol)。将混合物在110℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至25℃并用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(1.7g，62％产率)和呈黄色固体的N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(方法W3步骤3-i；900mg，59％产率)。LC-MS:m/z 375[M+H]⁺。

步骤4：5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-胺

向N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(1.0g，2.6mmol)于MeOH(20mL)中的搅拌溶液中添加盐酸羟胺(358.8mg，5.2mmol)和乙酸钠(426.4mg，5.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-胺(400mg，73％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.01(d,J＝2.4Hz,1H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),6.12(s,2H),4.42(s,3H).LC-MS:m/z 211[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-胺(400mg，1.9mmol)于ACN(25mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；502.3mg，1.9mmol)、TCFH(2.1g，7.6mmol)和NMI(623.2mg，7.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，11％产率)。LC-MS:m/z 458[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对100mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKID，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：17毫升/分钟；等度50％B，在16分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：10.16；RT2(分钟)：12.68；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：12)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例142(38.2mg，38％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例143(29.8mg，30％产率)。

实例142：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.07(s,1H),8.91(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.55(d,J＝2.0Hz,1H),6.95(s,1H),4.46-4.48(m,1H),4.15(s,3H),2.52-2.58(m,1H),2.30-2.35(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 458.0[M+H]⁺。

实例143：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.07(s,1H),8.91(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.55(d,J＝2.0Hz,1H),6.95(s,1H),4.46-4.48(m,1H),4.14(s,3H),2.54-2.58(m,1H),2.30-2.35(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 458.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法X3

实例144和145：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-胺

向N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(方法W3步骤3-i；500mg，1.3mmol)于MeOH(10mL)中的搅拌溶液中添加盐酸羟胺(179mg，2.6mmol)和乙酸钠(213mg，2.6mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-胺(150mg，54％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.05(d,J＝2.4Hz,1H),7.17(d,J＝2.4Hz,1H),6.34(s,2H),4.08(s,3H).LC-MS:m/z 211[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-胺(150.0mg，0.7mmol)于ACN(15mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；185mg，0.7mmol)、TCFH(784mg，2.8mmol)和NMI(230mg，2.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(40mg，12％产率)。LC-MS:m/z 458[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对40mg 2-氯-N-(5-氯-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAKIA，2*25cm，20μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.1％TFA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在15分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：5.68；RT2(分钟)：9.69；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例144(6.2mg，15％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例145(5.3mg，13％产率)。

实例144：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.02(s,1H),8.84(d,J＝2.2Hz,1H),8.65(s,1H),8.50(d,J＝2.2Hz,1H),6.95(s,1H),4.47(s,3H),4.44-4.45(m,1H),2.56-2.67m,1H),2.30-2.35(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 458.0[M+H]⁺。

实例145：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),8.84(d,J＝2.2Hz,1H),8.65(s,1H),8.50(d,J＝2.2Hz,1H),6.95(s,1H),4.47(s,3H),4.44-4.45(m,1H),2.56-2.67(m,1H),2.30-2.35(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 458.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Y3

实例146和147：由含有(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2′,3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲酰胺和(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2′,3′,5′,6,6′,7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：4-(3-氯丙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯

在-78℃下向四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(10g，69.4mmol)于THF(150mL)中的溶液中滴加LiHMDS(70.0mL，1M于THF中)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后，在-78℃下滴加1-氯-3-碘丙烷(14.2g，69.4mmol)。将混合物温热至25℃，并在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用2-甲氧基-2-甲基丙烷(200mL)稀释。将所得混合物用硫代硫酸钠水溶液(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的4-(3-氯丙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(17g，89％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:3.74-3.81(m,2H),3.68(s,3H),3.33-3.46(m,4H),2.00-2.07(m,2H),1.75-1.84(m,1H),1.61-1.65(m,3H),1.42-1.52(m,2H)。

步骤2：4-(3-碘丙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯

将4-(3-氯丙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(15g，68.0mmol)和碘化钠(14.3g，95.2mmol)于丙酮(100mL)中的混合物在60℃下搅拌8小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用硫代硫酸钠水溶液(2x100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色油的4-(3-碘丙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(11.8g，56％产率)。LC-MS:m/z 313[M+H]⁺。

步骤3：8-氧杂螺[4.5]癸烷-1-酮

在-78℃下向4-(3-碘丙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(5g，16.0mmol)于THF(150mL)中的搅拌混合物中滴加叔丁基锂(12.8mL，2.5M于戊烷中)。将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。通过添加饱和氯化铵水溶液(20mL)将反应淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用硫代硫酸钠水溶液(2x100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈无色油的8-氧杂螺[4.5]癸烷-1-酮(2.4g，97％产率)。LC-MS:m/z 155[M+H]⁺。

步骤4：(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-8-氧杂螺[4.5]癸烷-1-酮

将8-氧杂螺[4.5]癸烷-1-酮(1g，6.5mmol)和1-叔丁氧基-N,N,N′,N'-四甲基甲二胺(2.3g，13.00mmol)于甲苯(10mL)中的混合物在60℃下搅拌8小时。使混合物冷却至25℃，并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-8-氧杂螺[4.5]癸烷-1-酮(1.2g，粗产物)。LC-MS:m/z 210[M+H]⁺。

步骤5：2-氟-2',3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]

向(E)-2-((二甲基氨基)亚甲基)-8-氧杂螺[4.5]癸烷-1-酮(1.1g，5.3mmol)于AcOH(2mL)和甲苯(20mL)中的溶液中添加5-氟-1H-吡唑-3-胺(531mg，5.3mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(3:2)洗脱，以得到900mg粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化，并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈白色固体的2-氟-2′,3',5',6,6′,7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃](0.48g，37％产率)。LC-MS:m/z 248[M+H]⁺。

步骤6：2-氟-2′,3′,5′,6,6′,7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲腈

向2-氟-2′,3′,5′,6,6′,7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃](300mg，1.2mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(53mg，145.6μmol)、乙酰氧基铜(30mg，242.6μmol)、N-氟苯磺酰亚胺(574mg，1.8mmol)、TMSCN(602mg，6.1mmol)。将所得混合物在25℃下在氮气下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(3:2)洗脱，以得到呈白色固体的2-氟-2′,3′,5′,6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲腈(105mg，27％产率)。LC-MS:m/z 273[M+H]⁺。

步骤7：2-氟-2',3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]-6-甲酸

向2-氟-2',3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]-6-甲腈(123mg，385.6μmol)于AcOH(10mL)中的搅拌溶液中添加12M HCl(10mL)。将所得混合物在90℃下搅拌3小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(50mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(50mL x3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的2-氟-2',3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲酸(105mg，79％产率)。LC-MS:m/z 292[M+H]⁺。

步骤8：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2′,3',5′,6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]-6-甲酰胺

向2-氟-2',3',5′,6,6′,7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]-6-甲酸(143mg，343.3μmol)于ACN(13mL)中的溶液中添加5-氨基-2-(二氟甲氧基)烟腈(方法M2步骤1；95mg，514.9μmol)、TCFH(289mg，1.0mmol)和NMI(225mg，2.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2',3′,5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]-6-甲酰胺(53mg，34％产率)。LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

步骤9：分离对映异构体以获得(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2',3′,5',6,6′,7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4'-吡喃]-6-甲酰胺和(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2′,3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲酰胺

对53mg N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-2',3',5',6,6',7-六氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,4′-吡喃]-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度40％B，在16分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.53；RT2(分钟)：13.91；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：2mL；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例146(6.3mg，12％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例147(7.5mg，14％产率)。

实例146：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.94(s,1H),8.68(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.62(d,J＝2.4Hz,1H),7.75(t,J＝71.6Hz,1H),6.59(d,J＝4.8Hz,1H),4.41-4.46(m,1H),3.89-3.99(m,2H),3.49-3.61(m,2H),2.82-2.92(m,1H),2.70-2.81(m,2H),2.46-2.49(m,1H),1.52-1.58(m,1H),1.41-1.46(m,1H).LC-MS:m/z 459.2[M+H]⁺。

实例147：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.91(s,1H),8.69(d,J＝2.7Hz,1H),8.66(s,1H),8.62(d,J＝2.7Hz,1H),7.74(t,J＝70.8Hz,1H),6.59(d,J＝5.2Hz,1H),4.39-4.46(m,1H),3.89-3.98(m,2H),3.51-3.62(m,2H),2.82-2.93(m,1H),2.68-2.78(m,2H),2.44-2.48(m,1H),1.53-1.58(m,1H),1.42-1.47(m,1H).LC-MS:m/z 459.2[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Z3

实例148和149：由含有(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺和(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

在25℃下向5-溴-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-3-(三氟甲基)吡啶(55.8mg，190μmol)和2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺(方法W2步骤4；50mg，190μmol)于甲苯(2mL)中的搅拌混合物中添加XantPhos(22mg，38μmol)、Pd₂(dba)₃(34.8mg，38μmol)、Cs₂CO₃(93mg，285.5μmol)和Al(OTf)₃(9mg，19μmol)。将所得混合物在110℃下在氮气气氛下搅拌12小时。使混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(50mL)稀释。将所得溶液用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺(11mg，13％产率)。LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺和(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1'-环丙烷]-6-甲酰胺

对10mg N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,1′-环丙烷]-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.1％TFA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度20％B，在9分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：5.93；RT2(分钟)：8.13；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例148(1mg，9％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例149(1.3mg，12.5％产率)。

实例148：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.25(br,1H),9.03(d,J＝2Hz,1H),8.81(d,J＝2.4Hz,1H),8.62(s,1H),8.19(s,2H),6.87(s,1H),4.55-4.59(m,1H),2.70-2.74(m,1H),2.67-2.68(m,1H),2.11-2.16(m,2H),1.23-1.26(m,2H).LC-MS:m/z 475.1[M+H]⁺。

实例149：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.23(br,1H),9.02(d,J＝2Hz,1H),8.81(d,J＝2.4Hz,1H),8.62(s,1H),8.19(s,2H),6.87(s,1H),4.55-4.59(m,1H),2.68-2.74(m,1H),2.56-2.60(m,1H),2.09-2.16(m,2H),1.19-1.26(m,2H).LC-MS:m/z 475.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法A4

实例150和151：由含有(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；300mg，1.2mmol)于ACN(20mL)中的搅拌溶液中添加6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(方法V1步骤2；276mg，1.2mmol)、TCFH(1.4g，4.8mmol)和NMI(396mg，4.8mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(103mg，18.6％产率)。LC-MS:m/z 461[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对100mg N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度40％B，在12分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：5.17；RT2(分钟)：8.61；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.2mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例150(36.6mg，36％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例151(34.2mg，34％产率)。

实例150：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.22(s,1H),9.04(s,1H),8.82(s,1H),8.67(s,1H),8.20(s,2H),6.58(d,J＝4.2Hz,1H),4.46-4.51(m,1H),2.57-2.62(m,1H),2.28-2.41(m,1H),1.64(s,3H),1.57(s,3H).LCMS(ES,m/z):461.1[M+H]⁺。

实例151：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.22(s,1H),9.04(s,1H),8.82(s,1H),8.67(s,1H),8.20(s,2H),6.58(d,J＝4.5Hz,1H),4.46-4.51(m,1H),2.57-2.62(m,1H),2.28-2.41(m,1H),1.64(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS(ES,m/z):461.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法B4

实例152和153：由含有(S)-2'-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺和(R)-2′-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-(5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)丙-2-醇

在0℃下向5-溴-3-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(2g，7.0mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中添加甲基溴化镁(15.5mL，1M于THF中)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(3:1)洗脱，以得到呈浅黄色油的2-(5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)丙-2-醇(1.4g，70％产率)。LC-MS:m/z 284[M+H]⁺。

步骤2：2'-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

向2'-氟-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺(方法A3步骤2；40mg，153.7μmol)于二噁烷(5mL)中的溶液中添加2-[5-溴-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]丙-2-醇(87mg，307.4μmol)、Cs₂CO₃(100mg，307.4μmol)、Xantphos(18mg，30.7μmol)和Pd₂(dba)₃(16mg，15.4μmol)。将所得混合物在100℃下在氮气下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2'-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺(14.6mg，20％产率)。LC-MS:m/z 464[M+H]⁺。

步骤3：分离对映异构体以获得(S)-2'-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(R)-2′-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

对12.5mg 2'-氟-N-(6-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度20％B，在17分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：8.73；RT2(分钟)：15.13；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例153(2.8mg，22％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例152(2.7mg，22％产率)。

实例152：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.79(s,1H),8.88(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.49(d,J＝2.4Hz,1H),6.59(d,J＝4.8Hz,1H),5.21(s,1H),4.30-4.38(m,1H),3.04-3.23(m,2H),2.79-2.93(m,1H),2.63-2.75(m,1H),2.06-2.29(m,4H),1.51(s,6H).LC-MS:m/z 464.2[M+H]⁺。

实例153：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.79(s,1H),8.88(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.49(d,J＝2.0Hz,1H),6.59(d,J＝4.8Hz,1H),5.20(s,1H),4.33-4.36(m,1H),3.03-3.24(m,2H),2.79-2.92(m,1H),2.63-2.74(m,1H),2.04-2.28(m,4H),1.51(s,6H).LC-MS:m/z 464.2[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法C4

实例154和155：由含有(R)-2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(方法E3步骤4；160mg，352.6μmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加甲胺盐酸盐(36mg，529μmol)、EDCI(101mg，529μmol)、HOBT(72mg，529μmol)和DIEA(68mg，528.9μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(60mg，36％产率)。LC-MS:m/z 467[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对60mg 2-氯-8,8-二甲基-N-(6-(甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALART Cellulose-SB，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度15％B，在22分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：15.369；RT2(分钟)：19.039；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.8mL；运行次数：6)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例154(19.2mg，32％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例155(19.3mg，32％产率)。

实例154：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.02(s,1H),9.00(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.57-8.61(m,2H),6.95(s,1H),4.42-4.46(m,1H),2.78(d,J＝4.4Hz,3H),2.53-2.58(m,1H),2.30-2.38(m,1H),1.63(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 467.0[M+H]⁺。

实例155：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.03(s,1H),9.00(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.57-8.60(m,2H),6.95(s,1H),4.42-4.46(m,1H),2.78(d,J＝4.8Hz,3H),2.53-2.58(m,1H),2.30-2.37(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 467.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法D4

实例156和157：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：(E)-1-(3-氨基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯

在0℃下向丙-2-炔酰胺(206.5g，3.0mol)和碳酸钠(186.4g，1.7mol)于水(3.0L)中的溶液中滴加2-氧代环戊烷甲酸甲酯(250g，1.7mol)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。通过过滤收集沉淀的固体，以得到呈灰白色固体的(E)-1-(3-氨基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(300g，80％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ6.72-6.73(m,1H),5.71-5.75(m,1H),3.42(s,3H),2.39-2.46(m,1H),2.10-2.16(m,1H),1.93-2.00(m,1H),1.74-1.81(m,1H),1.55-1.65(m,2H).LC-MS:m/z 212[M+H]⁺。

步骤2：1,5,6,7-四氢-2H-环戊熳并[b]吡啶-2-酮

将(E)-1-(3-氨基-3-氧代丙-1-烯-1-基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(130g，615.5mmol)于12M HCl(100mL)中的溶液在100℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。将残余物用水(600mL)稀释。用1M氢氧化钠溶液将pH调节至7～8。通过过滤收集沉淀的固体，以得到呈浅黄色固体的1,5,6,7-四氢-2H-环戊熳并[b]吡啶-2-酮(58g，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.71(br,1H),7.31-7.36(m,1H),6.07-6.11(m,1H),2.59-2.71(m,4H),1.97-2.04(m,2H).LC-MS:m/z 136[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶

将1,5,6,7-四氢-2H-环戊熳并[b]吡啶-2-酮(84g，621.5mmol)于三氯氧磷(400mL)中的混合物在110℃下搅拌36小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(1000mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x700mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(67g，70％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),2.92-3.01(m,2H),2.89-2.90(m,2H),2.05-2.19(m,2H).LC-MS:m/z 154[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-7-甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶

在-60℃下在氮气气氛下，向2-氯-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(50g，325.5mmol)于THF(1000mL)中的搅拌混合物中滴加LDA(410mL，820mmol，2N)。将混合物在-60℃下搅拌30分钟。然后，在-60℃下滴加碘甲烷(277.2g，1.95mol)于THF(100mL)中的溶液。将混合物在-60℃下搅拌1小时。将反应混合物用氯化铵溶液(1000mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x1000mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1000mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:9)洗脱，以得到呈黄色油的2-氯-7-甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(33g，60％产率)。LC-MS:m/z 168[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶

在0℃下在氮气气氛下，向2-氯-7-甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(80g，477.2mmol)于THF(4000mL)中的搅拌混合物中滴加LDA(715mL，1.43mol，2N)。将混合物在0℃下搅拌30分钟。然后，在0℃下滴加碘甲烷(203.2g，1.43mol)于THF(100mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌1小时。将反应混合物用氯化铵溶液(4000mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x3000mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3000mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:8)洗脱，以得到呈黄色油的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(33g，38％产率)。LC-MS:m/z 182[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶1-氧化物

在0℃下，向2-氯-7,7-二甲基-5,6-二氢环戊熳并[b]吡啶(38g，209.2mmol)于DCM(800mL)中的混合物中分批添加3-氯苯过氧酸(180.5g，1.1mol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(500mL)淬灭。将所得溶液用DCM(2x500mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈浅黄色固体的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶1-氧化物(32g，77％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.29-7.38(m,1H),7.00-7.04(m,1H),2.87-2.92(m,2H),2.02-2.07(m,2H),1.54(s,6H).LC-MS:m/z 198[M+H]⁺。

步骤7：2-氯-7,7-二甲基-4-硝基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶1-氧化物

在0℃下向2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶1-氧化物(32g，161.9mmol)于硫酸(64mL)中的混合物中滴加硝酸(64mL)和硫酸(64mL)的混合物。将所得混合物在90℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至25℃并用冰水(600mL)稀释。用4N氢氧化钠溶液将pH调节至7-8。将所得溶液用乙酸乙酯(3x800mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈浅黄色固体的2-氯-7,7-二甲基-4-硝基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶1-氧化物(12g，30％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.22(s,1H),3.39-3.45(m,2H),2.11-2.17(m,2H),1.55(s,6H).LC-MS:m/z 243[M+H]⁺。

步骤8：2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-4-胺

向2-氯-7,7-二甲基-4-硝基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶1-氧化物(4g，16.5mmol)于EtOH(30mL)和水(9mL)中的混合物中添加Fe(4.6g，82.4mmol)和氯化铵(4.4g，82.4mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌2小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释，并将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-4-胺(2.5g，71％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.39(s,1H),4.11(br,2H),2.58-2.63(m,2H),1.97-2.07(m,2H),1.27(s,6H).LC-MS:m/z 197[M+H]⁺。

步骤9：2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶

在0℃下向氟化氢于吡啶(200mL，70％)中的溶液中分批添加2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-4-胺(10.0g，50.8mmol)。将混合物在0℃下搅拌15分钟。然后，在0℃下分批添加亚硝酸钠(27.0g，391.4mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后在100℃下搅拌另外0.5小时。将反应混合物冷却至25℃，并用冰和0.5N氢氧化钠溶液(200mL)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3x300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(6.2g，57％产率)。LC-MS:m/z 200[M+H]⁺。

步骤10：5-溴-2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶

向2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(5.5g，27.5mmol)于1,2-二氯乙烷(50mL)中的搅拌溶液中添加NBS(5.4g，30.3mmol)和AIBN(452mg，2.8mmol)。将混合物在80℃下在氮气气氛下搅拌1小时。将混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的5-溴-2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(6.4g，83％产率)。LC-MS:m/z 278[M+H]⁺。

步骤11：2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-5-甲腈

向5-溴-2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(6.4g，23.0mmol)于THF(40mL)中的搅拌溶液中添加TMSCN(11.4g，114.9mmol)和TBAF(68.9mL，1M于THF中)。将混合物在0℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(80mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色油的2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-5-甲腈(3.2g，62％产率)。LC-MS:m/z 225[M+H]⁺。

步骤12：4-氟-7,7-二甲基-2-(2-氧代丙基)-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-5-甲腈

向2-氯-4-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-5-甲腈(2.0g，8.9mmol)于丙酮(50mL)中的溶液中添加磷酸钾(4.7g，22.2mmol)、Pd(OAc)₂(1.4g，1.8mmol)和S-Phos(1.5g，3.6mmol)。将混合物在90℃下在氮气气氛下搅拌2小时。冷却至25℃后，将固体滤出。将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的4-氟-7,7-二甲基-2-(2-氧代丙基)-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-5-甲腈(1.2g，55％产率)。LC-MS:m/z 247[M+H]⁺。

步骤13：5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈

在0℃下在氮气气氛下，向(E)-N-((三甲苯基磺酰基)氧基)乙酸乙酯(2.5g，8.8mmol)于二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中滴加高氯酸(1.7g，16.8mmol，70％)。将所得混合物在0℃下在氮气气氛下搅拌30分钟。然后在0℃下滴加水(12mL)。收集沉淀的固体并用DCM(50mL)稀释。将有机相用无水硫酸钠干燥，以得到混合物(M1)。在0℃在氮气气氛下，向4-氟-7,7-二甲基-2-(2-氧代丙基)-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-5-甲腈(1.2g，4.9mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中滴加所述混合物(M1)。将所得混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌1小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用MeOH(20mL)稀释。然后在0℃下分批添加K₂CO₃(2.4g，17.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将所得混合物用水(150mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x250mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈黄色油的5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(170mg，12％产率)。LC-MS:m/z 244[M+H]⁺。

步骤14：5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸

将5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(170mg，698.9μmol)于12M HCl(2mL)和AcOH(2mL)中的搅拌溶液在100℃下搅拌2小时。使混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(20mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈紫色固体的5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸(170mg，92％产率)。LC-MS:m/z263[M+H]⁺。

步骤15：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺

在0℃下向5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸(170mg，648.2μmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(512.7mg，6.5mmol)和三氯氧磷(298mg，1.9mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时。添加5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法A1步骤2；316.9mg，1.6mmol)，并将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺(50mg，17％产率)。LC-MS:m/z 440[M+H]⁺。

步骤16：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺

对50mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-5-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，20μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在6.5分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：4.17；RT2(分钟)：5.51；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.3mL；运行次数：6)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例156(10.0mg，20％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例157(11.5mg，23％产率)。

实例156：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.06(s,1H),8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(s,2H),7.31(d,J＝9.6Hz,1H),6.42(s,1H),4.35-4.39(m,1H),2.58-2.59(m,1H),2.41(s,3H),2.24-2.28(m,1H),1.65(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z440.0[M+H]⁺。

实例157：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.06(s,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.57(d,J＝2.0Hz,1H),8.16(s,2H),7.31(d,J＝9.6Hz,1H),6.42(s,1H),4.35-4.39(m,1H),2.58-2.60(m,1H),2.41(s,3H),2.24-2.28(m,1H),1.65(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z440.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法E4

实例158和159：由含有(S)-2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(R)-2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：(R)-1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇和(S)-1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇

对1.1g的1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(方法Y1步骤8)进行手性SFC纯化(柱：OptiChiral-C9-5，3*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：ACN:MEOH＝2:1(0.1％2M NH3.MEOH)；流速：70毫升/分钟；梯度：等度50％B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(分钟)：5.31；RT2(分钟)：9.03；样品溶剂：MeOH-----制备型；进样体积：4.8mL；运行次数：13)。将第一洗脱异构体浓缩，以得到呈浅黄色油的(R)-1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(方法E4步骤1-1；450mg)。LC-MS:m/z240[M+H]⁺。将第二洗脱异构体浓缩，以得到呈浅黄色油的(S)-1-(2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(方法E4步骤1-2；400mg)。LC-MS:m/z 240[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

步骤2：(Z)-6-((二甲基氨基)亚甲基)螺[3.4]辛烷-5-酮

将螺[3.4]辛烷-5-酮(5g，40.2mmol)于DMF-DMA(20mL)中的混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的(Z)-6-((二甲基氨基)亚甲基)螺[3.4]辛烷-5-酮(7g，粗产物)。LC-MS:m/z 180[M+H]⁺。

步骤3：2'-氯-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]

在25℃下向(Z)-6-((二甲基氨基)亚甲基)螺[3.4]辛烷-5-酮(1g，5.5mmol)于AcOH(20mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-1H-吡唑-3-胺(786mg，6.6mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌1小时。使混合物冷却至25℃。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2'-氯-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶](600mg，44％产率)。LC-MS:m/z 234[M+H]⁺。

步骤4：2′-氯-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲腈

向2'-氯-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶](1.0g，4.3mmol)于甲苯(200mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(230mg，641μmol)、乙酰氧基铜(100mg，855μmol)、N-(苯磺酰基)-N-氟-苯磺酰胺(2.2g，6.4mmol)和TMSCN(2.1g，21.2mmol)。将反应混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2′-氯-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲腈(320mg，30％产率)。LC-MS(ES,m/z):259[M+H]⁺。

步骤5：2'-氯-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酸

向2'-氯-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲腈(320mg，1.2mmol)于AcOH(2mL)中的搅拌溶液中添加12M HCl(2mL)。将所得混合物在100℃下搅拌1小时。使混合物冷却至25℃。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物用水(30mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2'-氯-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酸(150mg，45％产率)。LC-MS(ES,m/z):278[M+H]⁺。

步骤6：(S)-6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺

向(S)-1-(2-(5-氨基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(方法E4步骤1-2；240mg，0.6mmol)于DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加TBSCl(108mg，0.7mmol)和咪唑(204mg，3.0mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈浅黄色固体的(S)-6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(90mg，38％产率)。LC-MS:m/z 388[M+H]⁺。

步骤7：N-(6-(4-((S)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2′-氯-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

向(S)-6-(4-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(76mg，216.3μmol)于ACN(10mL)中的搅拌溶液中添加2'-氯-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酸(60mg，216.7μmol)、TCFH(242mg，0.8mmol)和NMI(106mg，1.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌4小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(6-(4-((S)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2′-氯-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺(100mg，62％产率)。LC-MS:m/z 613[M+H]⁺。

步骤8：2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺

向N-(6-(4-((S)-1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-氯吡啶-3-基)-2′-氯-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺(90mg，146.7μmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加TBAF(904μL，1M于THF中)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(100mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺(50mg，64％产率)。LC-MS:m/z 499[M+H]⁺。

步骤9：分离对映异构体以获得(S)-2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺和(R)-2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺

对50mg 2′-氯-N-(5-氯-6-(4-((S)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2MNH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在17分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：12.07；RT2(分钟)：15.37；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：1mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例158(7.6mg，15％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例159(9.9mg，19％产率)。

实例158：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.03(s,1H),8.70(d,J＝2.1Hz,1H),8.64(s,1H),8.54(d,J＝2.1Hz,1H),8.02(s,1H),6.97(s,1H),5.52(d,J＝5.1Hz,1H),4.92-4.96(m,1H),4.39(dd,J＝5.1,8.7Hz,1H),3.12-3.29(m,2H),2.90(dd,J＝8.4,13.2Hz,1H),2.70(dd,J＝5.4,13.5Hz,1H),2.00-2.30(m,4H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H).LC-MS:m/z499.1[M+H]⁺。

实例159：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.04(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.64(s,1H),8.54(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,1H),6.97(s,1H),5.52(d,J＝5.1Hz,1H),4.92-4.96(m,1H),4.39(dd,J＝5.1,8.7Hz,1H),3.12-3.21(m,2H),2.90(dd,J＝8.7,13.5Hz,1H),2.72(dd,J＝5.4,13.5Hz,1H),2.00-2.30(m,4H),1.46(d,J＝6.6Hz,3H).LC-MS:m/z499.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法F4

实例160和161：由含有(S)-2′-氯-N-(5-氯-6-(4-((R)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8′-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6′-甲酰胺和(R)-2'-氯-N-(5-氯-6-(4-((R)-1-羟乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6',7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

以类似于实例158和159的方式使用(R)-1-(2-(5-氨基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(方法E4步骤1-1)合成标题化合物。将最终化合物通过手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在16.5分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：11.46；RT2(分钟)：14.74；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.8mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例160(9.8mg，38.8％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例161(6mg，23.8％产率)。

实例160：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.05(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.54(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,1H),6.97(s,1H),5.53(br,1H),4.92-4.97(m,1H),4.40(dd,J＝5.2,8.8Hz,1H),3.10-3.21(m,2H),2.90(dd,J＝8.8,13.2Hz,1H),2.70(dd,J＝5.2,13.2Hz,1H),2.20-2.22(m,4H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).LC-MS:m/z 499.1[M+H]⁺。

实例161：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.05(s,1H),8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.54(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(s,1H),6.97(s,1H),5.53(br,1H),4.92-4.98(m,1H),4.40(dd,J＝5.2,8.8Hz,1H),3.10-3.21(m,2H),2.90(dd,J＝8.8,13.2Hz,1H),2.70(dd,J＝5.2,13.2Hz,1H),2.20-2.22(m,4H),1.45(d,J＝6.4Hz,3H).LC-MS:m/z 499.1[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法G4

实例162：2-氯-N-(5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：5-溴-3-氯-2-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶和5-溴-3-氯-2-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶的混合物

向5-溴-3-氯-2-(2H-四唑-5-基)吡啶(方法W3步骤1；1.0g，3.8mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加3-碘氧杂环丁烷(1.4g，7.6mmol)和K₂CO₃(1.1g，7.6mmol)。将混合物在90℃下搅拌2小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物用水(50mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用水(3x50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-溴-3-氯-2-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶和5-溴-3-氯-2-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶的混合物(600mg，50％产率)。LC-MS:m/z 316[M+H]⁺。

步骤2：N-(5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺和N-(5-氯-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺

向5-溴-3-氯-2-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶和5-溴-3-氯-2-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶的混合物(600mg，1.9mmol)于二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中添加二苯基甲烷亚胺(688mg，3.8mmol)、Cs₂CO₃(1.2g，3.8mmol)、XantPhos(439mg，0.8mmol)和Pd₂(dba)₃(393mg，0.4mmol)。将混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌2小时。将反应混合物冷却至25℃并用水(50mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色油的N-(5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(280mg，18％产率)和呈黄色油的N-(5-氯-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(方法G4步骤2-i；120mg，15％产率)。LC-MS:m/z 417[M+H]⁺。

步骤3：5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-胺

向N-(5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(280mg，671μmol)于MeOH(10mL)中的搅拌溶液中添加盐酸羟胺(93mg，1.3mmol)和乙酸钠(107mg，1.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-胺(100mg，59％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.02(d,J＝2.4Hz,1H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),6.18-6.25(m,1H),6.15(s,2H),5.05-5.13(m,2H),4.95-5.00(m,2H).LC-MS:m/z 253[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-N-(5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-氯-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-四唑-5-基)吡啶-3-胺(100mg，395μmol)于ACN(10mL)中的溶液中添加2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法A1步骤6；104mg，395μmol)、TCFH(442mg，1.6mmol)和NMI(131mg，1.6mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例162(2.4mg，1％产率)。

实例162：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.04(s,1H),8.88(d,J＝2.2Hz,1H),8.65(s,1H),8.53(d,J＝2.2Hz,1H),6.95(s,1H),6.26-6.53(m,1H),5.13-5.14(m,2H),4.99-5.01(m,2H),4.44-4.47(m,1H),2.58-2.67(m,1H),2.31-2.34(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 500.0[M+H]⁺。

方法H4

实例163：2-氯-N-(5-氯-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于实例162的方式使用N-(5-氯-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲烷亚胺(方法G4步骤2-i)合成标题化合物。

实例163：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.10(s,1H),8.89(d,J＝2.0Hz,1H),8.64(s,1H),8.53(d,J＝2.0Hz,1H),6.95(s,1H),5.85-5.90(m,1H),4.98-4.99(m,4H),4.44-4.48(m,1H),2.55-2.60(m,1H),2.11-2.34(m,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 500.0[M+H]⁺。

方法I4

实例164：2-氯-N-(6-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氯-N-(6-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(方法E3步骤4；30mg，66.1μmol)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加3,3-二氟氮杂环丁烷氯化氢盐(10mg，79.3μmol)、EDCI(19mg，99.2μmol)、HOBT(13mg，99.2μmol)和DIEA(43mg，330.5μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈黄色固体的实例164(4.1mg，12％产率)。

实例164：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.12(s,1H),9.01(d,J＝2.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.63(d,J＝2.0Hz,1H),6.95(s,1H),4.53-4.63(m,4H),4.45(dd,J＝6.0,9.2Hz,1H),2.52-2.59(m,1H),2.32(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z529.1[M+H]⁺。

方法J4

实例165：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,3'-氧杂环丁烷]-6-甲酰胺

步骤1：1-((苄氧基)甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯

在0℃下向2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(20g，140.8mmol)于THF(200mL)中的搅拌溶液中分批添加NaH(6.8g，169.1mmol，60％于矿物油中)。将混合物在25℃下搅拌1小时。在0℃下滴加((氯甲氧基)甲基)苯(26.4g，169.1mmol)，并且将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(500mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(600mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的1-((苄氧基)甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(15g，40％产率)。LC-MS(ES,m/z):263[M+H]⁺。

步骤2：2-((苄氧基)甲基)-2-(羟甲基)环戊烷-1-酮

在0℃下向1-((苄氧基)甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸甲酯(20g，76.3mmol)于THF(200mL)中的搅拌混合物中滴加LDA(45.8mL，91.6mmol，2M于THF中)，并将其在0℃下搅拌1小时。分批添加氢化锂铝(4.4g，115.8mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(500mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x500mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将合并的有机层用盐水(700mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色油的2-((苄氧基)甲基)-2-(羟甲基)环戊烷-1-酮(12g，67％产率)。LC-MS:m/z 235[M+H]⁺。

步骤3：2,2-双(羟甲基)环戊烷-1-酮

向2-((苄氧基)甲基)-2-(羟甲基)环戊烷-1-酮(12g，51.3mmol)于MeOH(350mL)中的混合物中添加碳上Pd(OH)₂(4g，10％)。将所得混合物在25℃下在氢气气氛下搅拌4小时。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈黄色油的2,2-双(羟甲基)环戊烷-1-酮(4g，54％产率)。LC-MS:m/z 145[M+H]⁺。

步骤4：2,2-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)环戊烷-1-酮

向2,2-双(羟甲基)环戊烷-1-酮(4g，27.8mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中添加TBSCl(10.5g，69.5mmol)和咪唑(5.7g，83.4mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(300mL)淬灭并用DCM(2x300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈浅黄色油的2,2-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)环戊烷-1-酮(7.5g，72％产率)。LC-MS:m/z 373[M+H]⁺。

步骤5：(E)-2,2-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-((二甲基氨基)亚甲基)环戊烷-1-酮

将2,2-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)环戊烷-1-酮(7.5g，20.1mmol)于DMF-DMA(60mL)中的溶液在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈黄色油的(E)-2,2-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-((二甲基氨基)亚甲基)环戊烷-1-酮(6g，70％产率)。LC-MS:m/z 428[M+H]⁺。

步骤6：8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

在25℃下向(E)-2,2-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-((二甲基氨基)亚甲基)环戊烷-1-酮(6g，14.1mmol)于甲苯(50mL)中的搅拌溶液中添加5-氯-1H-吡唑-3-胺(1.7g，14.1mmol)和AcOH(5mL)。将所得混合物在95℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色油的8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(5.3g，78％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.64(s,1H),6.94(s,1H),4.46(d,J＝9.6Hz,2H),3.89(d,J＝9.6Hz,2H),3.05-3.14(m,2H),2.43-2.51(m,2H),0.85(s,18H),0.05(s,6H),0.21(s,6H).LC-MS(ES,m/z):482[M+H]⁺。

步骤7：8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(5.3g，11.1mmol)于甲苯(300mL)中的搅拌溶液中添加(4R)-4-苄基-2-[1-[(4R)-4-苄基-4,5-二氢噁唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氢噁唑(L，470mg，1.3mmol)、乙酰氧基铜(283mg，2.3mmol)、N-氟-N-(苯基磺酰基)苯磺酰胺(5.3g，16.7mmol)和TMSCN(5.7g，55.6mmol)。将反应混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈浅黄色固体的8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(2.9g，52％产率)。LC-MS:m/z 507[M+H]⁺。

步骤8：8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(2g，3.9mmol)于DMSO(15mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(1.2g，7.8mmol)和H₂O₂(0.9g，7.8mmol，30％于水中)。将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(1.2g，58％产率)。LC-MS:m/z525[M+H]⁺。

步骤9：8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(300mg，571.2μmol)于甲苯(15mL)中的搅拌溶液中添加XantPhos(66mg，114.2μmol)、Pd₂(dba)₃(104mg，114.2μmol)、Cs₂CO₃(279mg，856.8μmol)、Al(OTf)₃(27mg，57.1μmol)和5-溴-3-氯-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(178mg，685.4μmol)。将反应混合物在110℃下在氮气气氛下搅拌4小时。将反应混合物用水(150mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x150mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到呈白色固体的8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(150mg，22％产率)。LC-MS:m/z 703[M+H]⁺。

步骤10：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-双(羟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向8,8-双(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(150mg，213.1μmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加TFA(2mL)。将反应混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌4小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭并且用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:10)洗脱，以得到呈灰白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-双(羟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(70mg，48％产率)。LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

步骤11：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-6,7-二氢螺[环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8,3′-氧杂环丁烷]-6-甲酰胺

向2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8,8-双(羟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(100mg，215.8μmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加三苯基磷烷(113mg，431.6μmol)、双((2-甲基丙烷硫代基)硫代)锌(L1，99mg，323.7μmol)和(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二乙酯(75mg，431.6μmol)。将反应混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将反应混合物用水(80mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x80mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:1)洗脱，以得到粗产物。对粗产物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例165(10mg，10％产率)。

实例165：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.11(br,1H),8.70(s,1H),8.69(d,J＝2.1Hz,1H),8.54(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(s,2H),7.03(s,1H),5.54(d,J＝6.0Hz,1H),5.39(d,J＝6.0Hz,1H),4.68(d,J＝6.0Hz,1H),4.60(d,J＝6.0Hz,1H),4.39-4.43(m,1H),2.92-3.06(m,2H).LC-MS:m/z 456.9[M+H]⁺。

方法K4

实例166：N-(7-(叔丁基)-5-氧代-5,7-二氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-基)-2′-氟-6′,7′-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

步骤1：1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙烷-1-醇

在-78℃下在氮气气氛下，向2,5-二溴-3-氯吡啶(5g，18.4mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中滴加n-BuLi(8.2mL，2.5N)。将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。在-78℃下滴加新戊醛(1.9g，22.1mmol)。将其在-78℃下搅拌1小时，然后温热至25℃并搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈无色油的1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙烷-1-醇(5.13g，62％产率)。LC-MS:m/z278[M+H]⁺。

步骤2：1-(3-氯-5-((二苯基亚甲基)氨基)吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙烷-1-醇

向1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙烷-1-醇(2g，7.2mmol)于二噁烷(40mL)中的搅拌混合物中添加二苯基甲烷亚胺(1.3g，7.2mmol)、Cs₂CO₃(4.7g，14.3mmol)、XantPhos(831mg，1.4mmol)和Pd₂(dba)₃(747mg，721.7μmol)。将混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃，用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:9)洗脱，以得到呈黄色油的1-(3-氯-5-((二苯基亚甲基)氨基)吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙烷-1-醇(1.9g，69％产率)。LC-MS:m/z 379[M+H]⁺。

步骤3：7-(叔丁基)-3-((二苯基亚甲基)氨基)呋喃并[3,4-b]吡啶-5(7H)-亚胺

向1-(3-氯-5-((二苯基亚甲基)氨基)吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙烷-1-醇(1.5g，4mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加Zn(CN)₂(512mg，4.3mmol)、Zn(13mg，198.4μmol)、RuPhos-Pd G2(332mg，396.8μmol)和RuPhos(185mg，396.8μmol)。将所得混合物在130℃下在氮气下搅拌1.2小时。将混合物冷却至25℃，用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的7-(叔丁基)-3-((二苯基亚甲基)氨基)呋喃并[3,4-b]吡啶-5(7H)-亚胺(380mg，26％产率)。LC-MS:m/z 370[M+H]⁺。

步骤4：7-(叔丁基)-5-亚氨基-5,7-二氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-胺

向7-(叔丁基)-3-((二苯基亚甲基)氨基)呋喃并[3,4-b]吡啶-5(7H)-亚胺(100mg，271μmol)于THF(5mL)中的搅拌溶液中添加2M HCl(300μL)。将混合物在25℃下搅拌10分钟。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的7-(叔丁基)-5-亚氨基-5,7-二氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-胺(35mg，63％产率)。LC-MS:m/z 206[M+H]⁺。

步骤5：N-(7-(叔丁基)-5-氧代-5,7-二氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-基)-2'-氟-6′,7'-二氢螺[环丁烷-1,8'-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶]-6'-甲酰胺

/>

以类似于方法Z2步骤5的方式获得呈白色固体的实例166(3mg，4％产率)。

实例166：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.95(s,1H),8.98(t,J＝2.4Hz,1H),8.62(d,J＝2.4Hz,1H),8.55(t,J＝2.4Hz,1H),6.58(d,J＝4.8Hz,1H),5.31(s,1H),4.37(dd,J＝5.2,8.8Hz,1H),3.07-3.18(m,2H),2.84-2.90(m,1H),2.66-2.72(m,1H),2.07-2.25(m,4H),0.99(s,9H).LC-MS:m/z 450[M+H]⁺。

方法L4

实例167和168：(顺式)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(反式)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：1,2-双((三甲基硅基)氧基)环戊烷-1-烯

在25℃下向钠(107.6g，4.6mol)于甲苯(3000mL)中的搅拌溶液中添加戊二酸二甲酯(150g，936.5mmol)和氯三甲基硅烷(508.7g，4.6mol)。将所得混合物在105℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃。将固体滤出。将滤液在减压下浓缩，以得到呈油的1,2-双((三甲基硅基)氧基)环戊烷-1-烯(180g，粗产物)。LC-MS:m/z 245[M+H]⁺。

步骤2：2-(苄氧基)环戊烷-1-酮

在0℃下向苯基甲醇(91.3g，845.0mmol)于HCl(112mL，4.0M与乙醚中)中的搅拌溶液中添加1,2-双((三甲基硅基)氧基)环戊烷-1-烯(180g，736.27mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌4小时。将混合物冷却至25℃。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色油的2-(苄氧基)环戊烷-1-酮(110g，78％产率)。LC-MS:m/z 191[M+H]⁺。

步骤3：2-(苄氧基)-1-(三氟甲基)环戊烷-1-醇

在0℃下向2-(苄氧基)环戊烷-1-酮(110g，578.2mmol)于THF(2000mL)中的搅拌溶液中分批添加三甲基(三氟甲基)硅烷(164.4g，1156.4mmol)和TBAF(2.9L，1M于THF中)。将反应混合物在25℃下搅拌4小时。将反应用水(2000mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x2000mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x2000mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:4)洗脱，以得到呈黄色油的2-(苄氧基)-1-(三氟甲基)环戊烷-1-醇(30g，11％产率)。LC-MS:m/z 261[M+H]⁺。

步骤4：(((2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊基)氧基)甲基)苯

在0℃下向2-(苄氧基)-1-(三氟甲基)环戊烷-1-醇(30g，115.2mmol)于DMF(400mL)中的搅拌混合物中添加NaH(9.2g，230mmol，60％于矿物油中)。将所得混合物在0℃下搅拌30分钟。然后，添加碘乙烷(53.9g，345.8mmol)。将混合物在25℃下搅拌4小时。将反应混合物用水(600mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x500mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:5)洗脱，以得到呈黄色油的(((2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊基)氧基)甲基)苯(30g，51％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:7.46-7.25(m,5H),4.75(d,J＝12Hz,1H),4.62(d,J＝12Hz,1H),4.01(t,J＝7.5Hz,1H),3.71-3.85(m,2H),2.01-2.15(m,2H),1.80-1.95(m,2H),1.48-1.64(m,1H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H),0.89-0.97(m,1H).LC-MS:m/z289[M+H]⁺。

步骤5：2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-醇

向(((2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊基)氧基)甲基)苯(30g，104.0mmol)于MeOH(500mL)中的搅拌溶液中添加碳上Pd(OH)₂(3.0g，10％)。将反应混合物在25℃下在氢气气氛下搅拌1小时。将固体滤出。将滤液在减压下浓缩，以得到呈黄色油的2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-醇(16g，54％产率)。¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ4.12-4.32(m,1H),3.78-3.86(m,2H),2.69(br,1H),2.04-2.17(m,1H),1.80-2.08(m,2H),1.55-1.71(m,2H),1.25(t,J＝6.9,3H),0.81-0.90(m,1H).LC-MS:m/z 199[M+H]⁺。

步骤6：2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮

向2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-醇(16g，80.7mmol)于DCM(300mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁过碘烷(68.5g，161.4mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将固体滤出。将滤液用DCM(300mL)稀释。将所得溶液用饱和亚硫酸氢钠水溶液(300mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:9)洗脱，以得到呈黄色油的2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(7.7g，35％产率)。LC-MS:m/z 197[M+H]⁺。

步骤7：(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮

将2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(7.7g，39.2mmol)于DMF-DMA(80mL)中的溶液在60℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃。将所得溶液在减压下浓缩，以得到呈黄色油的(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(10g，粗产物)。LC-MS:m/z 252[M+H]⁺。

步骤8：2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

向(Z)-5-((二甲基氨基)亚甲基)-2-乙氧基-2-(三氟甲基)环戊烷-1-酮(10g，39.8mmol)于甲苯(200mL)中的溶液中添加3-氯-1H-吡唑-5-胺(4.6g，39.8mmol)和AcOH(20mL)。将所得混合物在95℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(5g，38％产率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.74(s,1H),7.07(s,1H),3.55-3.67(m,1H),2.98-3.24(m,3H),2.50-2.72(m,2H),1.12(t,J＝6.9Hz,3H).LC-MS:m/z 306[M+H]⁺。

步骤9：2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-酮

向2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(5g，16.3mmol)于ACN(200mL)中的溶液中添加2-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(13.3g，81.7mmol)和叔丁基过氧化氢(31.5g，245.3mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌72小时。使混合物冷却至25℃，并在减压下浓缩。将残余物用水(100mL)稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-酮(1.4g，26％产率)。LC-MS:m/z320[M+H]⁺。

步骤10：2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-6-((三甲基硅基)氧基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

在25℃下向2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-酮(500mg，1.6mmol)于ACN(20mL)中的溶液中添加碘化锌(II)(2.5g，7.8mmol)和TMSCN(4.7g，46.9mmol)。将所得混合物在50℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至25℃，用水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈棕色固体的2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-6-((三甲基硅基)氧基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(500mg，粗产物)。LC-MS:m/z 419[M+H]⁺。

步骤11：2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

将2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-6-((三甲基硅基)氧基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(200mg，477μmol)于氢碘酸(5mL，57％于水中)中的溶液在90℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至25℃，用硫代硫酸钠水溶液(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用DCM/MeOH(5:1)洗脱，以得到呈棕色固体的2-氯-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(50mg，29％产率)。LC-MS:m/z 350[M+H]⁺。

步骤12：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于方法Z2步骤5的方式获得呈灰白色固体的标题化合物(5.1mg，3％产率)。LC-MS:m/z 527[M+H]⁺。

步骤13：(顺式)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(反式)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对4mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-乙氧基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行非手性SFC纯化(柱：DAICEL DCpak P4VP，2*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.1％2M NH3-MEOH)；流速：50毫升/分钟；等度37％B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：254nm；RT1(分钟)：2.84；RT2(分钟)：4.58；样品溶剂：MeOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈黄色固体的实例167(2mg，49％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈黄色固体的实例168(0.8mg，19％产率)。

实例167：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.26(s,1H),8.82(s,1H),8.73(d,J＝2Hz,1H),8.60(d,J＝2Hz,1H),8.18(s,2H),7.16(s,1H),4.46(t,J＝7.6Hz,1H),3.70-3.74(m,1H),3.12-3.18(m,1H),3.02-3.08(m,1H),2.86-2.96(m,1H),1.17(t,J＝6.8Hz,3H).LC-MS:m/z 527.0[M+H]⁺。

实例168：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.20(s,1H),8.85(s,1H),8.72(d,J＝2Hz,1H),8.56(d,J＝2Hz,1H),8.18(s,2H),7.16(s,1H),4.69(t,J＝7.6Hz,1H),3.57-3.61(m,1H),3.17-3.20(m,1H),3.02-3.08(m,1H),2.87-2.91(m,1H),1.11(t,J＝6.8Hz,3H).LC-MS:m/z 527.0[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的立体化学。

方法M4

实例169和170：由含有(R)-N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氯-5-(二氟甲氧基)-4-碘吡啶

向6-氯-4-碘吡啶-3-醇(2g，7.8mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加2-氯-2,2-二氟乙酸钠(2.4g，15.7mmol)和Cs₂CO₃(5.1g，15.7mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。将反应用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1/9)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-5-(二氟甲氧基)-4-碘吡啶(2g，83％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.26(s,1H),8.19(s,1H),7.35(t,J＝72.5Hz,1H).LC-MS:m/z 306[M+H]⁺。

步骤2：2-氯-5-(二氟甲氧基)异烟腈

向2-氯-5-(二氟甲氧基)-4-碘吡啶(1.8g，5.9mmol)于NMP(10mL)中的搅拌溶液中添加CuCN(1.1g，11.8mmol)。将所得混合物在120℃下搅拌16小时。将反应用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1/4)洗脱，以得到呈无色油的2-氯-5-(二氟甲氧基)异烟腈(900mg，75％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.56(s,1H),7.64(s,1H),6.73(t,J＝70.8Hz,1H).LC-MS:m/z 205[M+H]⁺。

步骤3：5-(二氟甲氧基)-2-((二苯基亚甲基)氨基)异烟腈

向2-氯-5-(二氟甲氧基)异烟腈(900mg，4.4mmol)于二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加二苯基甲烷亚胺(797mg，4.4mmol)、Cs₂CO₃(2.9g，8.8mmol)、Xantphos(509mg，879.9μmol)和Pd₂(dba)₃(911mg，880μmol)。将所得混合物在100℃下在氮气下搅拌3小时。将反应用水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色油的5-(二氟甲氧基)-2-((二苯基亚甲基)氨基)异烟腈(800mg，52％产率)。LC-MS:m/z 350[M+H]⁺。

步骤4：2-氨基-5-(二氟甲氧基)异烟腈

向5-(二氟甲氧基)-2-((二苯基亚甲基)氨基)异烟腈(400mg，1.2mmol)于MeOH(8mL)中的溶液中添加乙酸钠(234mg，2.9mmol)和盐酸羟胺(166mg，2.4mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌1小时。将反应用水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-氨基-5-(二氟甲氧基)异烟腈(80mg，37％产率)。LC-MS:m/z 186[M+H]⁺。

步骤5：N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在0℃下向2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(方法O1步骤3；39mg，156μmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(123mg，1.6mmol)和三氯氧磷(72mg，469.4μmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时。添加2-氨基-5-(二氟甲氧基)异烟腈(35mg，188μmol)，并将所得混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(30mg，46％产率)。LC-MS:m/z 417[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(R)-N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对36mg N-(4-氰基-5-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度40％B，在13分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：4.66；RT2(分钟)：10.80；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例169(17.8mg，49％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例170(11.0mg，30％产率)。

实例169：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.50(s,1H),8.63(s,1H),8.57(s,1H),8.46(s,1H),7.44(t,J＝72.0Hz,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.51(dd,J＝9.2,6.0Hz,1H),2.51-2.56(m,1H),2.26-2.31(m,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 417[M+H]⁺。

实例170：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.50(s,1H),8.63(s,1H),8.57(s,1H),8.46(s,1H),7.43(t,J＝72.0Hz,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.51(dd,J＝9.2,6.0Hz,1H),2.50-2.56(m,1H),2.26-2.31(m,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 417[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法N4

实例171：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺

步骤1：3,3-二甲基-2-氧代环戊烷-1-甲醛

在0℃下向钠(8g，348.0mmol，60％)于乙氧基乙烷(500mL)中的搅拌混合物中滴加2,2-二甲基环戊烷-1-酮(52g，463.6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。滴加甲酸乙酯(40g，540.0mmol)，并将其在25℃下搅拌24小时。将反应混合物用甲醇(200mL)淬灭。将固体滤出，并将滤液在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的3,3-二甲基-2-氧代环戊烷-1-甲醛(60g，粗产物)。LC-MS:m/z 141[M+H]⁺。

步骤2：2-羟基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲腈

向3,3-二甲基-2-氧代环戊烷-1-甲醛(62g，442.3mmol)于水(150mL)中的混合物中添加2-氰基乙酰胺(37.5g，446.0mmol)、哌啶(37.6g，442.3mmol)和AcOH(15mL)。将反应混合物在100℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至8。将所得混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的2-羟基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲腈(15g，18％产率)。LC-MS(ES,m/z):189[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲腈

将2-羟基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲腈(1g，5.3mmol)于三氯氧磷(50mL)中的混合物在110℃下搅拌2小时。将所得混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(100mL)中。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和盐水(100ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:10)洗脱，以得到呈黄色固体的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲腈(3.5g，63％产率)。LC-MS(ES,m/z):207[M+H]⁺。

步骤4：2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲酰胺

向搅拌的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲腈(6.9g，33.4mmol)于DMSO(78mL)中的搅拌溶液中添加过氧化氢(10.9g，320.5mmol)和碳酸钾(9.4g，68.0mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌0.5小时。将反应混合物用水(500mL)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲酰胺(7g，93％产率)。LC-MS(ES,m/z):225[M+H]⁺。

步骤5：2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-胺

向2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-甲酰胺(800mg，3.6mmol)于乙氧基乙烷(20mL)和水(10mL)中的混合物中添加氢氧化钠(570mg，14.2mmol)和次氯酸钠(1.1g，14.2mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌16小时。使混合物冷却至25℃，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈白色固体的2-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-3-胺(530mg，75％产率)。LC-MS(ES,m/z):197[M+H]⁺。

步骤6：2-氯-3-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶

以类似于方法D4步骤9的方式获得呈黄色油的2-氯-3-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶(2.5g，41％产率)。LC-MS(ES,m/z):200[M+H]⁺。

步骤7：1-(3-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-2-基)丙-2-酮

以类似于方法D4步骤12的方式获得呈无色油的1-(3-氟-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[b]吡啶-2-基)丙-2-酮(350mg，71％产率)。LC-MS(ES,m/z):222[M+H]⁺。

步骤8：4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶

以类似于方法D4步骤13的方式获得呈无色油的4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶(700mg，32％产率)。LC-MS(ES,m/z):219[M+H]⁺。

步骤9：4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈

以类似于方法A1步骤5的方式获得呈黄色油的4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(80mg，4％产率)。LC-MS(ES,m/z):244[M+H]⁺。

步骤10：4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸

以类似于方法A1步骤6的方式获得呈黄色固体的4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸(15mg，17％产率)。LC-MS(ES,m/z):263[M+H]⁺。

步骤11：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-2,8,8-三甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酰胺

以类似于方法M4步骤5的方式获得呈白色固体的实例171(6.6mg，31％产率)。

实例171：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.01(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.58(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(s,2H),7.14(d,J＝10.2Hz,1H),6.59(s,1H),4.29(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.51-2.56(m,1H),2.46(s,3H),2.35(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),1.65(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 440[M+H]⁺。

方法O4

实例172和173：由含有(R)-2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

向5-(2-氯-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺基)-3-(三氟甲基)吡啶甲酸(方法J2步骤2；50mg，115μmol)于ACN(1mL)中的搅拌混合物中添加环丙胺(10mg，172μmol)、NMI(28mg，344μmol)和TCFH(97mg，344μmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(6.8mg，12％产率)。LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对15mg 2-氯-N-(6-(环丙基氨基甲酰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度40％B，在12分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：8.973；RT2(分钟)：10.333；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例172(3.3mg，44％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例173(2.5mg，33％产率)。

实例172：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),8.96(d,J＝2.0Hz,1H),8.86(d,J＝4.8Hz,1H),8.65(s,1H),8.55(d,J＝2.0Hz,1H),7.89(t,J＝55.6Hz,1H),6.95(s,1H),4.44(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),2.86-2.94(m,1H),2.56(dd,J＝9.2,13.2Hz,1H),2.32(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.56(s,3H),0.65-0.73(m,4H).LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

实例173：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.02(s,1H),8.96(d,J＝2.4Hz,1H),8.86(d,J＝4.8Hz,1H),8.65(s,1H),8.55(d,J＝2.4Hz,1H),7.89(t,J＝55.2Hz,1H),6.95(s,1H),4.44(dd,J＝6.4,8.8Hz,1H),2.86-2.94(m,1H),2.56(dd,J＝9.2,12.8Hz,1H),2.33(dd,J＝6.4,12.8Hz,1H),1.63(s,3H),1.56(s,3H),0.65-0.73(m,4H).LC-MS:m/z 475[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法P4

实例174：2-氯-N-(6-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-氯-N-(6-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于方法O4步骤1的方式获得呈白色固体的实例174(18.4mg，31％产率)。

实例174：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),8.94(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.56(d,J＝2.0Hz,1H),7.57(t,J＝55.2Hz,1H),6.95(s,1H),4.85(t,J＝12.8Hz,2H),4.36-4.57(m,3H),2.57(dd,J＝9.2,13.2Hz,1H),2.33(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.64(s,3H),1.56(s,3H).LC-MS:m/z 511[M+H]⁺。

方法Q4

实例175：N-(5-氯-6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：1-(5-溴吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮

在25℃下向2,5-二溴吡啶(1.0g，4.2mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌混合物中添加吡咯烷-2-酮(360mg，4.2mmol)、XantPhos(492mg，851μmol)、Pd₂(dba)₃(440mg，425μmol)和Cs₂CO₃(2.8g，8.5mmol)。将所得混合物在110℃下在氮气气氛下搅拌12小时。使混合物冷却至25℃，用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:9)洗脱，以得到呈白色固体的1-(5-溴吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.7g，68％产率)。LC-MS:m/z 241[M+H]⁺。

步骤2：1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮

向1-(5-溴吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(650mg，2.7mmol)于DMF(10mL)中的搅拌混合物中添加NCS(1.1g，8.1mmol)和TsOH(51.5mg，27μmol)。将混合物在25℃下在氮气气氛下搅拌60小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(3:1)洗脱，以得到呈黄色固体的1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(200mg，27％产率)。LC-MS:m/z 275[M+H]⁺。

步骤3：N-(5-氯-6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

在25℃下向1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(55.5mg，201μmol)和2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(方法Q2步骤1；50mg，201μmol)于甲苯(5mL)中的搅拌混合物中添加XantPhos(23mg，40μmol)、Pd₂(dba)₃(37mg，40μmol)、Cs₂CO₃(98mg，302μmol)和Al(OTf)₃(9mg，20μmol)。将所得混合物在110℃下在氮气气氛下搅拌2小时。使混合物冷却至25℃，用水(30mL)稀释，并用DCM(3x30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的实例175(17.9mg，20％产率)。

实例175：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.81(s,1H),8.60-8.63(m,2H),8.34(d,J＝2.4Hz,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.39(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),3.79(t,J＝7.2Hz,2H),2.52(dd,J＝9.2,13.2Hz,1H),2.45(t,J＝8.0Hz,2H),2.30(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),2.11-2.18(m,2H),1.61(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 443[M+H]⁺。

方法R4

/>

实例176：N-(5-氯-6-(2-氧代氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于实例175的方式使用氮杂环丁烷-2-酮，获得呈白色固体的实例176(20mg，18％产率)。

实例176：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:10.73(s,1H),8.59(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.31(d,J＝2.1Hz,1H),6.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.38(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),3.80(t,J＝4.8Hz,2H),3.09(t,J＝4.8Hz,2H),2.51-2.54(m,1H),2.30(dd,J＝6.3,12.9Hz,1H),1.61(s,3H),1.53(s,3H).LC-MS:m/z 429[M+H]⁺。

方法S4

实例177：2-氟-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-胺

向6-氯-5-甲基吡啶-3-胺(400mg，2.8mmol)和1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(583mg，2.8mmol)于1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的搅拌溶液中添加1,1′-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(229mg，280.5μmol)和K₂CO₃(1.2g，8.4mmol)。将混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌1小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-胺(450mg，78％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ7.80(d,J＝2.4Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),6.76(d,J＝2.7Hz,1H),6.56(d,J＝2.1Hz,1H),5.25(s,2H),3.85(s,3H),2.44(s,3H).LC-MS:m/z 189[M+H]⁺。

步骤2：2-氟-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈白色固体的实例177(33mg，49％产率)。

实例177：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.54(s,1H),8.64(d,J＝2.4Hz,1H),8.60(s,1H),7.98(d,J＝2.0Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),6.73(d,J＝2.0Hz,1H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.39(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),3.91(s,3H),2.58(s,3H),2.52(dd,J＝9.2,12.8Hz,1H),2.30(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 420[M+H]⁺。

方法T4

实例178：2-氟-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于实例177的方式使用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑，获得呈白色固体的实例178(25.6mg，28％产率)。

实例178：¹H NMR(400Hz,DMSO-d₆)δ:10.50(s,1H),8.61(d,J＝2.4Hz,1H),8.60(s,1H),8.14(s,1H),7.95(d,J＝2.0Hz,1H),7.89(s,1H),6.56(d,J＝5.2Hz,1H),4.39(dd,J＝6.4,9.2Hz,1H),3.90(s,3H),2.51-2.55(m,1H),2.42(s,3H),2.30(dd,J＝6.4,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.54(s,3H).LC-MS:m/z 420[M+H]⁺。

方法U4

实例179：N-(6-(氮杂环丁烷-1-基)-5-甲基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

步骤1：2-(氮杂环丁烷-1-基)-3-甲基-5-硝基吡啶

向2-氯-3-甲基-5-硝基吡啶(700mg，4mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加氮杂环丁烷(347mg，6mmol)和Cs₂CO₃(3.9g，12.1mmol)。将混合物在100℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈白色固体的2-(氮杂环丁烷-1-基)-3-甲基-5-硝基吡啶(650mg，82％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.79(d,J＝2.7Hz,1H),7.96-7.98(m,1H),4.37(t,J＝7.8Hz,4H),2.25-2.38(m,5H).LC-MS:m/z 194[M+H]⁺。

步骤2：6-(氮杂环丁烷-1-基)-5-甲基吡啶-3-胺

向2-(氮杂环丁烷-1-基)-3-甲基-5-硝基吡啶(600mg，3.1mmol)于EtOH(9mL)和水(3ml)中的搅拌溶液中添加铁粉(520mg，9.3mmol)和NH₄Cl(830mg，15.5mmol)。将混合物在80℃下搅拌1小时。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化进行纯化并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈黄色油的6-(氮杂环丁烷-1-基)-5-甲基吡啶-3-胺(200mg，38％产率)。LC-MS:m/z 164[M+H]⁺。

步骤3：N-(6-(氮杂环丁烷-1-基)-5-甲基吡啶-3-基)-2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈白色固体的实例179(62.8mg，65％产率)。

实例179：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.13(s,1H),8.55(s,1H),8.15(d,J＝2.1Hz,1H),7.59(d,J＝2.1Hz,1H),6.54(d,J＝4.8Hz,1H),4.30(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),3.97(t,J＝7.5Hz,4H),2.45-2.55(m,1H),2.18-2.30(m,3H),2.11(s,3H),1.61(s,3H),1.52(s,3H).LC-MS:m/z 395[M+H]⁺。

方法V4

实例180和181：由含有(R)-2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-甲基-5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶

向2-氯-3-甲基-5-硝基吡啶(5g，28.9mmol)和2H-1,2,3-三唑(4g，57.9mmol)于DMA(50mL)中的搅拌溶液中添加Cs₂CO₃(25.5g，78.5mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌4小时。将反应混合物用水(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(3x250mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:1)洗脱，以得到呈黄色固体的3-甲基-5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(1g，16％产率)。LC-MS:m/z 206[M+H]⁺。

步骤2：5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺

向3-甲基-5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶(1g，4.9mmol)于乙醇(20mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg，10％)。将所得混合物在25℃下在氢气气氛下搅拌24小时。将固体滤出。将滤液在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺(方法V4步骤2；230mg，27％产率)。LC-MS:m/z 176[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈白色固体的2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(64mg，20％产率)。LC-MS:m/z 423[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对60mg 2-氯-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTAmylose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在7.5分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：4.164；RT2(分钟)：5.843；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.6mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例180(13.8mg，22％)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例181(16mg，26％)。

实例180：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.80(s,1H),8.63-8.66(m,2H),8.25(d,J＝1.8Hz,1H),8.11(s,2H),6.95(s,1H),4.45(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.57(dd,J＝9.0,13.2Hz,1H),2.33(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),2.20(s,3H),1.65(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z423[M+H]⁺。

实例181：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.80(s,1H),8.63-8.66(m,2H),8.25(d,J＝2.1Hz,1H),8.11(s,2H),6.95(s,1H),4.45(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.57(dd,J＝9.0,13.2Hz,1H),2.33(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),2.20(s,3H),1.65(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z423[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法W4

实例182和183：由含有(R)-2-氟-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(S)-2-氟-8,8-二甲基-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

以类似于实例180和181的方式使用2-氟-8,8-二甲基-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸制备标题化合物。将最终化合物通过手性HPLC纯化进行纯化(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2MNH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在9分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：4.213；RT2(分钟)：5.765；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.7mL；运行次数：5)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例182(5.7mg，51％)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例183(7.6mg，67％)。

实例182：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.82(s,1H),8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.63(s,1H),8.25(d,J＝2.1Hz,1H),8.11(s,2H),6.56(d,J＝4.8Hz,1H),4.44(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.55(dd,J＝9.0,13.2Hz,1H),2.33(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),2.20(s,3H),1.64(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 407[M+H]⁺。

实例183：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.81(s,1H),8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.63(s,1H),8.25(d,J＝1.8Hz,1H),8.09(s,2H),6.56(d,J＝5.1Hz,1H),4.44(dd,J＝6.3,9.0Hz,1H),2.56(dd,J＝9.0,13.2Hz,1H),2.33(dd,J＝6.3,13.2Hz,1H),2.20(s,3H),1.64(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 407[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法X4

实例184和185：由含有(6R,8S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

实例186和187：由含有(6R,8R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

以类似于方法Q1步骤4的方式获得呈黄色固体的2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶(2g，15％产率)。LC-MS(ES,m/z):260[M+H]⁺。

步骤2：2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

以类似于方法Q1步骤5的方式获得呈灰白色固体的2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(220mg，10％产率)。LC-MS:m/z 285[M+H]⁺。

步骤3：2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

以类似于方法Q1步骤6的方式获得呈黄色油的2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸(62mg，27％产率)。LC-MS:m/z 304[M+H]⁺。

步骤4：(顺式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得两者均呈白色固体的(顺式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(20mg，19％产率)和(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺(10mg，10％产率)。LC-MS:m/z 481[M+H]⁺和m/z 481[M+H]⁺。未测定分离的外消旋非对映异构体的相对立体化学。

步骤5：分离对映异构体以获得(6R,8S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对20mg(顺式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2x25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2MNH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度20％B，在12分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.921；RT2(分钟)：9.982；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：2.5mL；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例184(3.9mg，19％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例185(3.7mg，18％产率)。

实例184：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.20(s,1H),8.77(s,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(d,J＝2.0Hz,1H),8.19(s,2H),6.72(d,J＝5.2Hz,1H),4.56(t,J＝8.4Hz,1H),3.10(dd,J＝8.0,14.0Hz,1H),2.52-2.54(m,1H),1.92(s,3H).LC-MS:m/z 481[M+H]⁺。

实例185：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)11.19(s,1H),8.77(s,1H),8.74(d,J＝2.4Hz,1H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.19(s,2H),6.72(d,J＝5.2Hz,1H),4.56(t,J＝8.4Hz,1H),3.10(dd,J＝8.4,14.0Hz,1H),2.52-2.54(m,1H),1.92(s,3H).LC-MS:m/z 481[M+H]⁺。

步骤6：分离对映异构体以获得(6R,8R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺和(6S,8S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺

对10mg(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(三氟甲基)-7,8-二氢-6H-环戊熳并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度10％B，在12分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：7.28；RT2(分钟)：10.554；样品溶剂：EtOH—HPLC；进样体积：3.8mL；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例186(1.8mg，17％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例187(1.1mg，10％产率)。

实例186：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.14(s,1H),8.77(s,1H),8.74(d,J＝2.4Hz,1H),8.58(d,J＝2.0Hz,1H),8.18(s,2H),6.72(d,J＝5.2Hz,1H),4.57(dd,J＝5.2,10.0Hz,1H),2.89(dd,J＝5.2,14.0Hz,1H),2.74(dd,J＝9.6,14.0Hz,1H),1.81(s,3H).LC-MS:m/z481[M+H]⁺。

实例187：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.15(s,1H),8.77(s,1H),8.74(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(d,J＝1.6Hz,1H),8.18(s,2H),6.72(d,J＝5.2Hz,1H),4.57(dd,J＝5.2,9.6Hz,1H),2.89(dd,J＝5.2,14.4Hz,1H),2.74(dd,J＝9.6,14.4Hz,1H),1.81(s,3H).LC-MS:m/z481[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Y4

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实例188和189：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：((5,5-二甲基环戊烷-1-烯-1-基)氧基)三甲基硅烷

在0℃下向2,2-二甲基环戊烷-1-酮(55g，490.3mmol)于二氯甲烷(600mL)中的搅拌溶液中添加N,N-二乙基乙胺(198g，1.9mol)和三氟甲磺酸三甲基硅基酯(272g，1.2mol)。将所得混合物在0℃下搅拌3小时。通过在-10℃下添加冰水(500mL)将反应淬灭，并用乙酸乙酯(2x600mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x600mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的((5,5-二甲基环戊烷-1-烯-1-基)氧基)三甲基硅烷(59g，粗产物)。

步骤2：1,4-二氯-5,5-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪

将3,6-二氯-1,2,4,5-四嗪(3g，19.8mmol)和((5,5-二甲基环戊烷-1-烯-1-基)氧基)三甲基硅烷(4g，23.8mmol)于甲苯(40mL)中的混合物在120℃下搅拌1.5小时。使混合物冷却至25℃，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:9)洗脱，以得到呈黄色固体的1,4-二氯-5,5-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪(2.7g，62％产率)。LC-MS:m/z 217[M+H]⁺。

步骤3：4-氯-1-肼基-5,5-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪

将1,4-二氯-5,5-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪(2.4g，11.0mmol)于水合肼(40mL，80％)和乙醇(20mL)中的混合物在90℃下搅拌15小时。使混合物冷却至25℃，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:9)洗脱，以得到呈黄色固体的4-氯-1-肼基-5,5-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪(1.7g，70％产率)。LC-MS:m/z 213[M+H]⁺。

步骤4：1-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪

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在0℃下向4-氯-1-肼基-5,5-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪(1.7g，7.9mmol)于乙醇(20mL)和水(20mL)中的搅拌混合物中添加硫酸铜(6g，40.0mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌15小时。使混合物冷却至25℃。将反应混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(4:1)洗脱，以得到呈黄色固体的1-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪(800mg，59％产率)。LC-MS:m/z183[M+H]⁺。

步骤5：7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-1-胺

将1-氯-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪(3g，11.6mmol)于氢氧化铵(150mL)和乙醇(12mL)中的混合物在150℃下搅拌72小时。使混合物冷却至25℃，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:9)洗脱，以得到呈黄色固体的7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-1-胺(1.0g，35％产率)。LC-MS:m/z 164[M+H]⁺。

步骤6：N-叔丁氧基羰基-N-(5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下向7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-1-胺(1.7g，10.4mmol)于四氢呋喃(50mL)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(9g，41.6mmol)、N,N-二乙基乙胺(6g，62.4mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(127mg，1.0mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌15小时。将反应用水(80mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(2:3)洗脱，以得到呈黄色固体的N-叔丁氧基羰基-N-(5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，32％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.18(s,1H),2.99(t,J＝7.3Hz,2H),1.93(t,J＝7.3Hz,2H),1.37(s,18H),1.24(s,6H).LC-MS:m/z 364[M+H]⁺。

步骤7：N-(7-溴-5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯

向N-叔丁氧基羰基-N-(5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，2.7mmol)和过氧化苯甲酰(999mg，4.1mmol)于氯仿(15mL)中的搅拌混合物中添加N-溴琥珀酰亚胺(489mg，2.7mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌1.5小时。使混合物冷却至25℃，用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)淬灭，用水(20mL)稀释，并用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加在硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色固体的N-(7-溴-5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(640mg，49％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.37(s,1H),5.84-5.87(m,1H),2.71-2.66(m,1H),2.32-2.37(m,1H),1.43(s,3H),1.35-1.38(m,18H),1.27(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

步骤8：N-叔丁氧基羰基-N-(7-氰基-5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯

将三甲基硅基甲腈(403.7mg，4.07mmol)于四丁基氟化铵(1.1g，4.1mmol，4.1mL，1M于THF中)中的溶液在25℃下搅拌1小时。向上述混合物中添加N-(7-溴-5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(1.2g，2.7mmol)于ACN(10mL)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌15小时。将反应混合物在减压下浓缩，并通过反相柱色谱法纯化，以得到呈黄色固体的N-叔丁氧基羰基-N-(7-氰基-5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，34.2％产率)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:9.45(s,1H),4.85-4.91(m,1H),2.43-2.48(m,1H),2.22-2.29(m,1H),1.37(s,21H),1.22(s,3H).LC-MS:m/z 389[M+H]⁺。

步骤9：1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸

向N-叔丁氧基羰基-N-(7-氰基-5,5-二甲基-6,7-二氢环戊熳并[d]哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，643.6μmol)于AcOH(1.5mL)中的搅拌溶液中添加12M HCl(1mL)。将混合物在100℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过反相柱色谱法纯化，以得到呈黄色油的1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸(方法Y4步骤9；120mg，80％产率)。LC-MS:m/z 208[M+H]⁺。

步骤10：1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸甲酯

向1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸(400mg，1.9mmol)于MeOH(6mL)中的搅拌溶液中添加硫酸(300mg，3.1mmol)。将混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至25℃。用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节至7。将混合物通过反相柱色谱法纯化，以得到呈黄色油的1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸甲酯(方法Y4步骤10；250mg，54％产率)。LC-MS:m/z 222[M+H]⁺。

步骤11：2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯

向1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸甲酯(210mg，949.1μmol)于iPrOH(100mL)中的搅拌溶液中添加1-氯丙烷-2-酮(351.3mg，3.8mmol)和DIEA(428.5mg，3.3mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌14小时。将反应混合物冷却至25℃并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:3)洗脱，以得到呈黄色油的2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(46mg，18％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ:8.35(s,1H),7.77(s,1H),4.18-4.22(m,1H),3.81(s,3H),2.54(s,3H),2.36-2.48(m,2H),1.70(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 260[M+H]⁺。

步骤12：2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸

向2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(70mg，270μmol)于THF(9mL)和水(9mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(13mg，540μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用水(5mL)稀释。用1M HCl将pH调节至2～3。将混合物用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩。将粗产物通过反相柱纯化，并将收集的级分在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸(40mg，61％产率)。LC-MS:m/z 246[M+H]⁺。

步骤13：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

/>

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈白色固体的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(80mg，51％产率)。LC-MS:m/z 423[M+H]⁺。

步骤14：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对80mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,9,9-三甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH₃-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度20％B，在11分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：8.87；RT2(分钟)：10.21；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.4mL；运行次数：7)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例188(12.8mg，16％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例189(15.1mg，19％产率)。

实例188：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.08(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(s,1H),8.17(s,2H),8.14(s,1H),4.45(t,J＝7.6Hz,1H),2.61-2.62(m,1H),2.44(s,3H),2.29(dd,J＝7.2,13.2Hz,1H),1.62(s,3H),1.50(s,3H).LC-MS:m/z423[M+H]⁺。

实例189：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.50(s,1H),8.17(s,2H),8.09(s,1H),4.44(t,J＝8.0Hz,1H),2.57-2.58(m,1H),2.42(s,3H),2.29(dd,J＝7.2,13.2Hz,1H),1.62(s,3H),1.49(s,3H).LC-MS:m/z423[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法Z4

实例190和191：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：1-氨基-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈黄色油的1-氨基-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺(50mg，45％产率)。LC-MS:m/z 384[M+H]⁺。

步骤2：N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

向1-氨基-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺(50mg，130μmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加HATU(100mg，261μmol)、2-溴乙酸(36mg，261μmol)和N,N-二乙基乙胺(40mg，391μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。添加更多的N,N-二乙基乙胺，直到根据TLC反应完成为止。将反应混合物用水(20mL)淬灭并且用DCM(2x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:20)洗脱，以得到呈黄色油的N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(20mg，30％产率)。LC-MS:m/z424[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

向N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(40mg，94μmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中添加三氯氧磷(289mg，1.9mmol)。将混合物在80℃下搅拌4小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用MeOH/DCM(1:20)洗脱，以得到呈黄色油的2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(20mg，43％产率)。LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对20mg 2-氯-N-(5-氯-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)-HPLC，流动相B：EtOH-HPLC；流速：20毫升/分钟；等度15％B，在7.5分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：5.86；RT2(分钟)：6.82；样品溶剂：EtOH-HPLC；进样体积：0.5mL；运行次数：7)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例190(3.1mg，10％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例191(4.4mg，14％产率)。

实例190：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.37(s,1H),8.31(d,J＝2.4Hz,1H),8.14(d,J＝2.4Hz,1H),7.93(s,1H),7.44(s,1H),7.40(t,J＝72.3Hz,1H),4.24(t,J＝8.1Hz,1H),2.56(dd,J＝8.7,12.9Hz,1H),2.36(dd,J＝8.1,12.9Hz,1H),1.75(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

实例191：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.37(s,1H),8.31(d,J＝2.4Hz,1H),8.13(d,J＝2.4Hz,1H),7.93(s,1H),7.40(t,J＝72.3Hz,1H),7.38(s,1H),4.24(t,J＝8.1Hz,1H),2.56(dd,J＝8.7,12.9Hz,1H),2.36(dd,J＝8.1,12.9Hz,1H),1.74(s,3H),1.55(s,3H).LC-MS:m/z 442[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法A5

实例192和193：由含有(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈灰白色固体的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺(500mg，44％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.19(s,1H),9.02(d,J＝2.4Hz,1H),8.80(d,J＝2.4Hz,1H),8.54(s,1H),8.19(s,2H),6.15(s,2H),4.29-4.20(m,1H),2.29(m,1H),2.18(m,1H),1.44(s,3H),1.32(s,3H).LC-MS:m/z 419[M+H]⁺。

步骤2：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法Z4步骤2的方式获得呈黄色油的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(80mg，12％产率)。LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

步骤3：N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法Z4步骤3的方式获得呈白色固体的N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(22mg，27％产率)。LC-MS:m/z 477[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对22mg N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氯-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度30％B，在12.5分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：8.4；RT2(分钟)：10.32；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：2mL；运行次数：1)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例192(8.8mg，40％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例193(8.4mg，38％产率)。

实例192：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.85(s,2H),8.43(s,1H),8.08(s,1H),7.95(s,1H),7.94(s,2H),4.33-4.40(m,1H),2.60-2.66(m,1H),2.31-2.42(m,1H),1.78(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 477[M+H]⁺。

实例193：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.85(s,2H),8.44(s,1H),8.08(s,1H),7.96(s,1H),7.94(s,2H),4.35-4.41(m,1H),2.57-2.70(m,1H),2.39-2.47(m,1H),1.78(s,3H),1.59(s,3H).LC-MS:m/z 477[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法B5

实例194和195：由含有(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：1-氨基-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈白色固体的1-氨基-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酰胺(300mg，53.9％产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.07(s,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(d,J＝2.4Hz,1H),8.52(s,1H),8.18(s,2H),6.17(s,2H),4.21-4.25(m,1H),2.25-2.31(m,1H),2.13-2.18(m,1H),1.47(s,3H),1.32(s,3H).LC-MS:m/z 385[M+H]⁺。

步骤2：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法Z4步骤2的方式获得呈黄色油的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-2-氧代-2,7,8,9-四氢-3H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(60mg，15％产率)。LC-MS:m/z 425[M+H]⁺。

步骤3：2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法Z4步骤3的方式获得呈灰白色固体的2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(30mg，44.57％产率)。LC-MS:m/z 443[M+H]⁺。

步骤4：分离对映异构体以获得(R)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对30mg 2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2x25cm，5μm；流动相A：Hex(0.1％FA)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度50％B，在12分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：8.33；RT2(分钟)：10.53；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：1.5mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例194(13.1mg，43％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例195(13.0mg，43.1％产率)。

实例194：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.67(s,1H),8.50(s,1H),8.42(s,1H),7.99(s,1H),7.95(s,1H),7.94(s,2H),4.30-4.35(m,1H),2.56-2.63(m,1H),2.36-2.42(m,1H),1.76(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 443[M+H]⁺。

实例195：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ:8.68(s,1H),8.50(s,1H),8.42(s,1H),7.95(s,1H),7.94(s,2H),7.92(s,1H),4.25-4.40(m,1H),2.52-2.65(m,1H),2.32-2.46(m,1H),1.76(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 443[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法C5

实例196和197：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：3-溴-1,1-二氟丙烷-2-酮

在-78℃下向2,2-二氟乙酸甲酯(2.0g，16.0mmol)和二溴甲烷(5.6g，32.0mmol)于THF(60mL)中的混合物中滴加甲基锂(1.6M与乙醚中，20.0mL)。将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应用AcOH(3.5mL)淬灭，用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到呈黄色油的3-溴-1,1-二氟丙烷-2-酮(1.5g，54％产率)。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。

步骤2：2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯

向1-氨基-7,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊熳并[d]哒嗪-5-甲酸甲酯(100mg，451.9μmol)于二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中添加3-溴-1,1-二氟丙烷-2-酮(155mg，896.2μmol)和分子筛。将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应混合物冷却至25℃，过滤，并将滤液在减压下浓缩。将残余物施加到硅胶柱上并用EtOAc/PE(1:2)洗脱，以得到呈黄色油的2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸甲酯(60mg，38％产率)。LC-MS:m/z 296[M+H]⁺。

步骤3：2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸

以类似于方法Y4步骤12的方式获得呈白色固体的2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸(方法C5步骤3；30mg，48.3％产率)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.89(s,1H),8.63(s,2H),7.21(t,J＝54.7Hz,1H),4.27-4.33(m,1H),2.35-2.42(m,1H),2.23-2.29(m,1H),1.53(s,3H),1.48(s,3H).LC-MS:m/z282[M+H]⁺。

步骤4：N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈白色固体的N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(27mg，30％产率)。LC-MS:m/z 450[M+H]⁺。

步骤5：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对27mg N-(5-氰基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度10％B，在18分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：11.82；RT2(分钟)：16.93；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：1mL；运行次数：2)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例196(11.4mg，42％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例197(11.1mg，40％产率)。

实例196：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.12(s,1H),8.98(d,J＝2.4Hz,1H),8.78(d,J＝2.7Hz,1H),8.65-8.67(m,2H),8.30(s,2H),7.22(t,J＝54.6Hz,1H),4.49(dd,J＝7.2,9.0Hz,1H),2.55(dd,J＝9.0,12.9Hz,1H),2.29(dd,J＝7.2,12.9Hz,1H),1.63(s,3H),1.51(s,3H).LC-MS:m/z 450[M+H]⁺。

实例197：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.12(s,1H),8.98(d,J＝2.4Hz,1H),8.78(d,J＝2.7Hz,1H),8.65-8.67(m,2H),8.30(s,2H),7.22(t,J＝54.9Hz,1H),4.49(dd,J＝7.2,9.0Hz,1H),2.55(dd,J＝9.0,12.9Hz,1H),2.29(dd,J＝7.2,12.9Hz,1H),1.63(s,3H),1.51(s,3H).LC-MS:m/z 450[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法D5

实例198和199：由含有(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈灰白色固体的N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(50mg，48％产率)。LC-MS:m/z 449[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对60mg N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2*25cm，5μm；流动相A：Hex(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度15％B，在13分钟内；波长：254/220nm；RT1(分钟)：8.66；RT2(分钟)：10.87；样品溶剂：EtOH--HPLC；进样体积：0.6mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例198(21.8mg，35％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例199(21.5mg，35％产率)。

实例198：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.55(d,J＝2.7Hz,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.45(s,1H),8.23(s,1H),7.93(s,1H),7.44(t,J＝71.4Hz,1H),6.95(t,J＝54.9Hz,1H),4.34(t,J＝8.1Hz,1H),2.62(dd,J＝8.7,12.9Hz,1H),2.38(dd,J＝7.8,12.9Hz,1H),1.76(s,3H),1.58(s,3H).LC-MS:m/z 449[M+H]⁺。

实例199：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.55(d,J＝2.4Hz,1H),8.49(d,J＝2.4Hz,1H),8.43(s,1H),8.23(s,1H),7.85(s,1H),7.44(t,J＝71.4Hz,1H),6.94(t,J＝55.2Hz,1H),4.31(t,J＝8.4Hz,1H),2.61(dd,J＝8.4,12.9Hz,1H),2.37(dd,J＝7.8,12.9Hz,1H),1.76(s,3H),1.57(s,3H).LC-MS:m/z 449[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法E5

实例200和201：由含有(R)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1.2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

向2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酸(方法C5步骤3；50mg，177.8μmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(141mg，1.8mmol)。在0℃下添加三氯氧磷(82mg，533μmol)于DCM(0.2mL)中的溶液，并将混合物在0℃下搅拌1小时。在0℃下添加2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(35mg，213μmol)于DCM(0.3mL)中的溶液，并将其在25℃下搅拌1小时。将反应用水(20mL)淬灭，并用DCM(2x20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。对残余物进行制备型HPLC纯化并将收集的级分冻干，以得到呈白色固体的2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(30mg，39％产率)。LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

步骤2.分离对映异构体以获得(R)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

对30mg 2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ARTCellulose-SC，2x25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度5％B，在10分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：6.91；RT2(分钟)：8.67；样品溶剂：ETOH:DCM＝1:1；进样体积：0.5mL；运行次数：4)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例200(6.7mg，21％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例201(6.8mg，22.6％产率)。

实例200：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.08(s,1H),8.60-8.70(m,3H),8.18(d,J＝2.1Hz,1H),7.80-7.82(m,1H),7.21(t,J＝54.9Hz,1H),4.45(dd,J＝7.2,8.7Hz,1H),2.51-2.57(m,1H),2.24(dd,J＝7.2,13.2Hz,1H),1.60(s,3H),1.50(s,3H).LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

实例201：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.08(s,1H),8.64-8.65(m,3H),8.18(d,J＝2.1Hz,1H),7.80-7.86(m,1H),7.22(t,J＝54.6Hz,1H),4.45(dd,J＝7.2,9.0Hz,1H),2.57-2.66(m,1H),2.24(dd,J＝7.2,12.9Hz,1H),1.60(s,3H),1.50(s,3H).LC-MS:m/z 426[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

方法F5

实例202和203：由含有(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺的外消旋混合物获得的单一对映异构体

步骤1：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

以类似于方法G4步骤4的方式获得呈灰白色的N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺(20mg，24％产率)。LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

步骤2：分离对映异构体以获得(R)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺和(S)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺

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对22mg N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-(二氟甲基)-9,9-二甲基-8,9-二氢-7H-环戊熳并[d]咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲酰胺进行手性HPLC纯化(柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2x25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20毫升/分钟；等度10％B，在16分钟内；波长：220/254nm；RT1(分钟)：11.73；RT2(分钟)：14.82；样品溶剂：EtOH:DCM＝1:1；进样体积：1.1mL；运行次数：3)。将第一洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈浅黄色固体的实例202(8.2mg，36.7％产率)。将第二洗脱异构体浓缩并冻干，以得到呈白色固体的实例203(7.1mg，32.2％产率)。

实例202：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.09(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.66-8.67(m,2H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(s,2H),7.22(t,J＝54.9Hz,1H),4.48(dd,J＝7.5,9.0Hz,1H),2.54-2.58(m,1H),2.28(dd,J＝7.2,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.51(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

实例203：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:11.08(s,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.66-8.67(m,2H),8.59(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(s,2H),7.22(t,J＝54.9Hz,1H),4.48(dd,J＝7.2,9.0Hz,1H),2.54-2.58(m,1H),2.29(dd,J＝7.2,13.2Hz,1H),1.63(s,3H),1.51(s,3H).LC-MS:m/z 459[M+H]⁺。

未测定每种分离异构体的绝对立体化学。

生物测定

MALT1蛋白酶测定

使用四肽作为底物和从杆状病毒感染的昆虫细胞中纯化的全长MALT1蛋白His-MALT1(1-824)在体外测定中评估MALT1蛋白酶活性。四肽底物是Ac-LRSR-AMC(SM生化公司(SM Biochemicals)，其中在约100μM下测量K_m。

最终测定缓冲液包含1nM(测定2)或2nM(测定1)的MALT1全长蛋白、50μM Ac-LRSR-AMC底物、50mM Tris pH 7.5、600mM柠檬酸钠、1mM DTT、1mM EDTA和0.05％BSA，使用黑色微量滴定方形孔板(Optiplate 384-F，珀金埃尔默公司(Perkin Elmer))，采用384孔板格式。

将测试化合物以10mM的原液溶解在100％DMSO中，最终DMSO浓度为0.1％。将测试化合物与MALT1蛋白一起在室温下预温育2小时。预温育后添加底物，并在室温下温育8小时后，使用Envision在355nm激发和460nm发射处测量荧光信号。在此期间测定信号的增加是线性的并且与酶含量的增加成正比。

利用以下公式，通过使用高对照(HC，来自含有MALT1蛋白、底物和DMSO的孔的荧光信号的中值)和低对照(LC，来自仅含有底物的孔的荧光信号的中值)将荧光单位转换为剩余活性的百分比：

使用Graph Pad Prism(美国Graph Pad软件公司(Graph Pad software,Inc,USA))和非线性回归分析获得IC₅₀和希尔系数(Hill coefficient)。本文所描述的某些化合物的MALT1抑制IC₅₀值提供于下表A和B中。

人IL10分泌测定

IL10是通过活化NF-kB信号传导来调节的细胞因子之一。例如，在ABC-DLBCL细胞系中，活化的NF-kB信号传导导致IL10分泌增加。已显示，NF-kB信号传导的抑制导致IL10分泌减少。

测定1：在96孔圆底板(康宁3799，康宁公司(Corning))中以每孔3x10⁵个细胞将OCI-LY10细胞接种在补充有20％胎牛血清的IMEM中，从10mM开始，用100nL的3倍系列化合物稀释液进行处理。所有孔中的最终媒剂浓度为0.1％DMSO。温育24小时后，将细胞转移到96-PCR板(Axygen：PCR-96-FLT-C)并离心，然后将16μL细胞培养基转移到HTRF板中，并使用人IL-10测定试剂盒(Cisbio)使用HTRF格式测量IL10水平。通过使用高对照(HC，来自含有用DMSO处理的细胞的孔的信号的中值)和低对照(LC，来自没有细胞的孔的信号的中值)将信号转换为剩余活性的百分比。使用4参数曲线拟合确定IC50值(nM)，并使用Graph PadPrism(美国Graph Pad软件公司)和非线性回归分析获得希尔系数。

测定2：在96孔V型底细胞培养板(康宁，3894)中以每孔4.8x10⁵个细胞/160μL将OCI-LY10细胞接种在补充有20％胎牛血清的IMEM中，从4mM开始，用120nL的3倍系列化合物稀释液进行处理。所有孔中的最终媒剂浓度为0.075％DMSO。温育24小时后，将人IL-10预包被板(Meso Scale Discovery)用PBST洗涤3次，将50μL培养基吸入MSD板中，并在4℃下温育过夜。然后弃去上清液并用PBST将孔洗涤3次。根据中尺度方案(Meso Scale Protocol)将SULFO-TAG抗人IL-10抗体(50倍)稀释50倍，然后添加25μL的SULFO-TAG抗人IL-10抗体(1倍)。在室温下温育2小时后，弃去上清液并用PBST将孔洗涤3次。添加2倍读取缓冲液，并在MSD Sector S600上读取信号。相对于DMSO的影响，示出了特定化合物对IL10分泌的影响；设置为100％。使用4参数曲线拟合确定IC₅₀值(nM)。

使用上述测定的某些化合物的生物活性显示在表A和B中。MALT1 IC₅₀和IL10分泌细胞测定IC₅₀的范围如下：A表示IC₅₀<10nM；B表示10nM≤IC₅₀<100nM；C表示100nM≤IC₅₀<1000nM；D表示IC₅₀≥1000nM。NA表示此测定未确定特定化合物的值。

表A：使用测定1的所选式(I)化合物的IC₅₀值

/>

表B：使用测定2的所选式(I)化合物的IC₅₀值

/>

/>

/>

序列表

<110> 薛定谔公司（Schrodinger, Inc.）

<120> 用于治疗癌症、自身免疫性病症和炎性病症的三环化合物

<130> 17367-0104WO1

<150> 63/141,682

<151> 2021-01-26

<150> 63/145,344

<151> 2021-02-03

<150> 63/276,064

<151> 2021-11-05

<160> 36

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 220

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

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1 5 10 15

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

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<211> 1210

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

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<212> PRT

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<210> 14

<211> 956

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 14

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Lys Gln Thr Gln Lys Leu Leu Lys Val Pro Lys Gly Ser Ile Gly Gln

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Tyr Ile Gln Asp Arg Ser Val Gly His Ser Arg Ile Pro Ser Ala Lys

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Gly Lys Lys Asn Gln Ile Gly Leu Lys Ile Leu Glu Gln Pro His Ala

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Val Leu Phe Val Asp Glu Lys Asp Val Val Glu Ile Asn Glu Lys Phe

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Val Val Arg Phe Arg Gly Pro Leu Leu Ala Glu Arg Thr Val Ser Gly

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Ile Phe Phe Gly Val Glu Leu Leu Glu Glu Gly Arg Gly Gln Gly Phe

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Thr Asp Gly Val Tyr Gln Gly Lys Gln Leu Phe Gln Cys Asp Glu Asp

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Cys Gly Val Phe Val Ala Leu Asp Lys Leu Glu Leu Ile Glu Asp Asp

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<210> 15

<211> 579

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 15

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<210> 16

<211> 599

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 16

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1 5 10 15

Met Ser Leu Trp Glu Phe Glu Asp Ser His Ser Arg Gln Gly Thr Pro

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<210> 17

<211> 1133

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 17

Met Pro Val Gln Ala Pro Gln Trp Thr Asp Phe Leu Ser Cys Pro Ile

1 5 10 15

Cys Thr Gln Thr Phe Asp Glu Thr Ile Arg Lys Pro Ile Ser Leu Gly

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Cys Gly His Thr Val Cys Lys Met Cys Leu Asn Lys Leu His Arg Lys

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Leu Val Glu Glu Glu Gly Arg Ile Arg Ala Met Arg Ala Ala Arg Ser

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 18

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Arg Ala Val Ala Gly Gly Asp Glu Gln Val Ala Met Lys Cys Ala Ile

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Arg Glu Arg Gln Leu Arg Met Leu Glu Asp Leu Gly Phe Lys Asp Leu

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Thr Leu Gln Pro Arg Gly Pro Leu Glu Pro Gly Pro Pro Lys Pro Gly

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Gln Val Pro Ala Ser Tyr Gln Pro Asp Glu Glu Glu Arg Ala Arg Leu

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Gln Gln Glu Gly Asn Tyr Leu Gln His Val Gln Leu Asp Gln Arg Ser

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Leu Val Leu Asn Thr Glu Pro Ala Glu Cys Pro Val Cys Tyr Ser Val

275 280 285

Leu Ala Pro Gly Glu Ala Val Val Leu Arg Glu Cys Leu His Thr Phe

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Cys Arg Glu Cys Leu Gln Gly Thr Ile Arg Asn Ser Gln Glu Ala Glu

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Glu Met Leu Lys Val Met Leu Gln Gln Gly Glu Ala Met Arg Cys Pro

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<210> 19

<211> 947

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 19

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<210> 22

<211> 522

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 22

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

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Asn Ser Ser Lys Leu Arg Ser Ser Gly Pro Arg Thr Ser Ser Thr Ser

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435 440 445

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485 490 495

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Leu Lys Arg Ser Asn Ser Ile Ser Gln Ile Pro Ser Leu Glu Glu Met

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595 600 605

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<211> 712

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 25

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405 410 415

Cys Ile Glu

<210> 30

<211> 317

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 30

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Arg Asp Gly Leu Lys Lys Glu Arg Leu Leu Asp Asp Arg His Asp Ser

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

Val Asp Leu Gln Asn Pro Asp Leu Val Ser Leu Leu Leu Lys Cys Gly

225 230 235 240

Ala Asp Val Asn Arg Val Thr Tyr Gln Gly Tyr Ser Pro Tyr Gln Leu

245 250 255

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275 280 285

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305 310 315

<210> 31

<211> 968

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 31

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195 200 205

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Gly Gly Met Phe Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Ser Thr

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595 600 605

Ser Leu Leu Asp Arg Leu Gly Asn Ser Val Leu His Leu Ala Ala Lys

610 615 620

Glu Gly His Asp Lys Val Leu Ser Ile Leu Leu Lys His Lys Lys Ala

625 630 635 640

Ala Leu Leu Leu Asp His Pro Asn Gly Asp Gly Leu Asn Ala Ile His

645 650 655

Leu Ala Met Met Ser Asn Ser Leu Pro Cys Leu Leu Leu Leu Val Ala

660 665 670

Ala Gly Ala Asp Val Asn Ala Gln Glu Gln Lys Ser Gly Arg Thr Ala

675 680 685

Leu His Leu Ala Val Glu His Asp Asn Ile Ser Leu Ala Gly Cys Leu

690 695 700

Leu Leu Glu Gly Asp Ala His Val Asp Ser Thr Thr Tyr Asp Gly Thr

705 710 715 720

Thr Pro Leu His Ile Ala Ala Gly Arg Gly Ser Thr Arg Leu Ala Ala

725 730 735

Leu Leu Lys Ala Ala Gly Ala Asp Pro Leu Val Glu Asn Phe Glu Pro

740 745 750

Leu Tyr Asp Leu Asp Asp Ser Trp Glu Asn Ala Gly Glu Asp Glu Gly

755 760 765

Val Val Pro Gly Thr Thr Pro Leu Asp Met Ala Thr Ser Trp Gln Val

770 775 780

Phe Asp Ile Leu Asn Gly Lys Pro Tyr Glu Pro Glu Phe Thr Ser Asp

785 790 795 800

Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asp Met Lys Gln Leu Ala Glu Asp Val Lys

805 810 815

Leu Gln Leu Tyr Lys Leu Leu Glu Ile Pro Asp Pro Asp Lys Asn Trp

820 825 830

Ala Thr Leu Ala Gln Lys Leu Gly Leu Gly Ile Leu Asn Asn Ala Phe

835 840 845

Arg Leu Ser Pro Ala Pro Ser Lys Thr Leu Met Asp Asn Tyr Glu Val

850 855 860

Ser Gly Gly Thr Val Arg Glu Leu Val Glu Ala Leu Arg Gln Met Gly

865 870 875 880

Tyr Thr Glu Ala Ile Glu Val Ile Gln Ala Ala Ser Ser Pro Val Lys

885 890 895

Thr Thr Ser Gln Ala His Ser Leu Pro Leu Ser Pro Ala Ser Thr Arg

900 905 910

Gln Gln Ile Asp Glu Leu Arg Asp Ser Asp Ser Val Cys Asp Ser Gly

915 920 925

Val Glu Thr Ser Phe Arg Lys Leu Ser Phe Thr Glu Ser Leu Thr Ser

930 935 940

Gly Ala Ser Leu Leu Thr Leu Asn Lys Met Pro His Asp Tyr Gly Gln

945 950 955 960

Glu Gly Pro Leu Glu Gly Lys Ile

965

<210> 32

<211> 551

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 32

Met Asp Glu Leu Phe Pro Leu Ile Phe Pro Ala Glu Pro Ala Gln Ala

1 5 10 15

Ser Gly Pro Tyr Val Glu Ile Ile Glu Gln Pro Lys Gln Arg Gly Met

20 25 30

Arg Phe Arg Tyr Lys Cys Glu Gly Arg Ser Ala Gly Ser Ile Pro Gly

35 40 45

Glu Arg Ser Thr Asp Thr Thr Lys Thr His Pro Thr Ile Lys Ile Asn

50 55 60

Gly Tyr Thr Gly Pro Gly Thr Val Arg Ile Ser Leu Val Thr Lys Asp

65 70 75 80

Pro Pro His Arg Pro His Pro His Glu Leu Val Gly Lys Asp Cys Arg

85 90 95

Asp Gly Phe Tyr Glu Ala Glu Leu Cys Pro Asp Arg Cys Ile His Ser

100 105 110

Phe Gln Asn Leu Gly Ile Gln Cys Val Lys Lys Arg Asp Leu Glu Gln

115 120 125

Ala Ile Ser Gln Arg Ile Gln Thr Asn Asn Asn Pro Phe Gln Val Pro

130 135 140

Ile Glu Glu Gln Arg Gly Asp Tyr Asp Leu Asn Ala Val Arg Leu Cys

145 150 155 160

Phe Gln Val Thr Val Arg Asp Pro Ser Gly Arg Pro Leu Arg Leu Pro

165 170 175

Pro Val Leu Ser His Pro Ile Phe Asp Asn Arg Ala Pro Asn Thr Ala

180 185 190

Glu Leu Lys Ile Cys Arg Val Asn Arg Asn Ser Gly Ser Cys Leu Gly

195 200 205

Gly Asp Glu Ile Phe Leu Leu Cys Asp Lys Val Gln Lys Glu Asp Ile

210 215 220

Glu Val Tyr Phe Thr Gly Pro Gly Trp Glu Ala Arg Gly Ser Phe Ser

225 230 235 240

Gln Ala Asp Val His Arg Gln Val Ala Ile Val Phe Arg Thr Pro Pro

245 250 255

Tyr Ala Asp Pro Ser Leu Gln Ala Pro Val Arg Val Ser Met Gln Leu

260 265 270

Arg Arg Pro Ser Asp Arg Glu Leu Ser Glu Pro Met Glu Phe Gln Tyr

275 280 285

Leu Pro Asp Thr Asp Asp Arg His Arg Ile Glu Glu Lys Arg Lys Arg

290 295 300

Thr Tyr Glu Thr Phe Lys Ser Ile Met Lys Lys Ser Pro Phe Ser Gly

305 310 315 320

Pro Thr Asp Pro Arg Pro Pro Pro Arg Arg Ile Ala Val Pro Ser Arg

325 330 335

Ser Ser Ala Ser Val Pro Lys Pro Ala Pro Gln Pro Tyr Pro Phe Thr

340 345 350

Ser Ser Leu Ser Thr Ile Asn Tyr Asp Glu Phe Pro Thr Met Val Phe

355 360 365

Pro Ser Gly Gln Ile Ser Gln Ala Ser Ala Leu Ala Pro Ala Pro Pro

370 375 380

Gln Val Leu Pro Gln Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Met Val

385 390 395 400

Ser Ala Leu Ala Gln Ala Pro Ala Pro Val Pro Val Leu Ala Pro Gly

405 410 415

Pro Pro Gln Ala Val Ala Pro Pro Ala Pro Lys Pro Thr Gln Ala Gly

420 425 430

Glu Gly Thr Leu Ser Glu Ala Leu Leu Gln Leu Gln Phe Asp Asp Glu

435 440 445

Asp Leu Gly Ala Leu Leu Gly Asn Ser Thr Asp Pro Ala Val Phe Thr

450 455 460

Asp Leu Ala Ser Val Asp Asn Ser Glu Phe Gln Gln Leu Leu Asn Gln

465 470 475 480

Gly Ile Pro Val Ala Pro His Thr Thr Glu Pro Met Leu Met Glu Tyr

485 490 495

Pro Glu Ala Ile Thr Arg Leu Val Thr Gly Ala Gln Arg Pro Pro Asp

500 505 510

Pro Ala Pro Ala Pro Leu Gly Ala Pro Gly Leu Pro Asn Gly Leu Leu

515 520 525

Ser Gly Asp Glu Asp Phe Ser Ser Ile Ala Asp Met Asp Phe Ser Ala

530 535 540

Leu Leu Ser Gln Ile Ser Ser

545 550

<210> 33

<211> 619

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 33

Met Ala Ser Gly Ala Tyr Asn Pro Tyr Ile Glu Ile Ile Glu Gln Pro

1 5 10 15

Arg Gln Arg Gly Met Arg Phe Arg Tyr Lys Cys Glu Gly Arg Ser Ala

20 25 30

Gly Ser Ile Pro Gly Glu His Ser Thr Asp Asn Asn Arg Thr Tyr Pro

35 40 45

Ser Ile Gln Ile Met Asn Tyr Tyr Gly Lys Gly Lys Val Arg Ile Thr

50 55 60

Leu Val Thr Lys Asn Asp Pro Tyr Lys Pro His Pro His Asp Leu Val

65 70 75 80

Gly Lys Asp Cys Arg Asp Gly Tyr Tyr Glu Ala Glu Phe Gly Gln Glu

85 90 95

Arg Arg Pro Leu Phe Phe Gln Asn Leu Gly Ile Arg Cys Val Lys Lys

100 105 110

Lys Glu Val Lys Glu Ala Ile Ile Thr Arg Ile Lys Ala Gly Ile Asn

115 120 125

Pro Phe Asn Val Pro Glu Lys Gln Leu Asn Asp Ile Glu Asp Cys Asp

130 135 140

Leu Asn Val Val Arg Leu Cys Phe Gln Val Phe Leu Pro Asp Glu His

145 150 155 160

Gly Asn Leu Thr Thr Ala Leu Pro Pro Val Val Ser Asn Pro Ile Tyr

165 170 175

Asp Asn Arg Ala Pro Asn Thr Ala Glu Leu Arg Ile Cys Arg Val Asn

180 185 190

Lys Asn Cys Gly Ser Val Arg Gly Gly Asp Glu Ile Phe Leu Leu Cys

195 200 205

Asp Lys Val Gln Lys Asp Asp Ile Glu Val Arg Phe Val Leu Asn Asp

210 215 220

Trp Glu Ala Lys Gly Ile Phe Ser Gln Ala Asp Val His Arg Gln Val

225 230 235 240

Ala Ile Val Phe Lys Thr Pro Pro Tyr Cys Lys Ala Ile Thr Glu Pro

245 250 255

Val Thr Val Lys Met Gln Leu Arg Arg Pro Ser Asp Gln Glu Val Ser

260 265 270

Glu Ser Met Asp Phe Arg Tyr Leu Pro Asp Glu Lys Asp Thr Tyr Gly

275 280 285

Asn Lys Ala Lys Lys Gln Lys Thr Thr Leu Leu Phe Gln Lys Leu Cys

290 295 300

Gln Asp His Val Glu Thr Gly Phe Arg His Val Asp Gln Asp Gly Leu

305 310 315 320

Glu Leu Leu Thr Ser Gly Asp Pro Pro Thr Leu Ala Ser Gln Ser Ala

325 330 335

Gly Ile Thr Val Asn Phe Pro Glu Arg Pro Arg Pro Gly Leu Leu Gly

340 345 350

Ser Ile Gly Glu Gly Arg Tyr Phe Lys Lys Glu Pro Asn Leu Phe Ser

355 360 365

His Asp Ala Val Val Arg Glu Met Pro Thr Gly Val Ser Ser Gln Ala

370 375 380

Glu Ser Tyr Tyr Pro Ser Pro Gly Pro Ile Ser Ser Gly Leu Ser His

385 390 395 400

His Ala Ser Met Ala Pro Leu Pro Ser Ser Ser Trp Ser Ser Val Ala

405 410 415

His Pro Thr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Asn Pro Leu Ser Ser Phe Ser

420 425 430

Thr Arg Thr Leu Pro Ser Asn Ser Gln Gly Ile Pro Pro Phe Leu Arg

435 440 445

Ile Pro Val Gly Asn Asp Leu Asn Ala Ser Asn Ala Cys Ile Tyr Asn

450 455 460

Asn Ala Asp Asp Ile Val Gly Met Glu Ala Ser Ser Met Pro Ser Ala

465 470 475 480

Asp Leu Tyr Gly Ile Ser Asp Pro Asn Met Leu Ser Asn Cys Ser Val

485 490 495

Asn Met Met Thr Thr Ser Ser Asp Ser Met Gly Glu Thr Asp Asn Pro

500 505 510

Arg Leu Leu Ser Met Asn Leu Glu Asn Pro Ser Cys Asn Ser Val Leu

515 520 525

Asp Pro Arg Asp Leu Arg Gln Leu His Gln Met Ser Ser Ser Ser Met

530 535 540

Ser Ala Gly Ala Asn Ser Asn Thr Thr Val Phe Val Ser Gln Ser Asp

545 550 555 560

Ala Phe Glu Gly Ser Asp Phe Ser Cys Ala Asp Asn Ser Met Ile Asn

565 570 575

Glu Ser Gly Pro Ser Asn Ser Thr Asn Pro Asn Ser His Gly Phe Val

580 585 590

Gln Asp Ser Gln Tyr Ser Gly Ile Gly Ser Met Gln Asn Glu Gln Leu

595 600 605

Ser Asp Ser Phe Pro Tyr Glu Phe Phe Gln Val

610 615

<210> 34

<211> 427

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 34

Met Ser Arg Ser Lys Arg Asp Asn Asn Phe Tyr Ser Val Glu Ile Gly

1 5 10 15

Asp Ser Thr Phe Thr Val Leu Lys Arg Tyr Gln Asn Leu Lys Pro Ile

20 25 30

Gly Ser Gly Ala Gln Gly Ile Val Cys Ala Ala Tyr Asp Ala Ile Leu

35 40 45

Glu Arg Asn Val Ala Ile Lys Lys Leu Ser Arg Pro Phe Gln Asn Gln

50 55 60

Thr His Ala Lys Arg Ala Tyr Arg Glu Leu Val Leu Met Lys Cys Val

65 70 75 80

Asn His Lys Asn Ile Ile Gly Leu Leu Asn Val Phe Thr Pro Gln Lys

85 90 95

Ser Leu Glu Glu Phe Gln Asp Val Tyr Ile Val Met Glu Leu Met Asp

100 105 110

Ala Asn Leu Cys Gln Val Ile Gln Met Glu Leu Asp His Glu Arg Met

115 120 125

Ser Tyr Leu Leu Tyr Gln Met Leu Cys Gly Ile Lys His Leu His Ser

130 135 140

Ala Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Ser Asn Ile Val Val Lys

145 150 155 160

Ser Asp Cys Thr Leu Lys Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg Thr Ala

165 170 175

Gly Thr Ser Phe Met Met Thr Pro Tyr Val Val Thr Arg Tyr Tyr Arg

180 185 190

Ala Pro Glu Val Ile Leu Gly Met Gly Tyr Lys Glu Asn Val Asp Leu

195 200 205

Trp Ser Val Gly Cys Ile Met Gly Glu Met Val Cys His Lys Ile Leu

210 215 220

Phe Pro Gly Arg Asp Tyr Ile Asp Gln Trp Asn Lys Val Ile Glu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Thr Pro Cys Pro Glu Phe Met Lys Lys Leu Gln Pro Thr Val

245 250 255

Arg Thr Tyr Val Glu Asn Arg Pro Lys Tyr Ala Gly Tyr Ser Phe Glu

260 265 270

Lys Leu Phe Pro Asp Val Leu Phe Pro Ala Asp Ser Glu His Asn Lys

275 280 285

Leu Lys Ala Ser Gln Ala Arg Asp Leu Leu Ser Lys Met Leu Val Ile

290 295 300

Asp Ala Ser Lys Arg Ile Ser Val Asp Glu Ala Leu Gln His Pro Tyr

305 310 315 320

Ile Asn Val Trp Tyr Asp Pro Ser Glu Ala Glu Ala Pro Pro Pro Lys

325 330 335

Ile Pro Asp Lys Gln Leu Asp Glu Arg Glu His Thr Ile Glu Glu Trp

340 345 350

Lys Glu Leu Ile Tyr Lys Glu Val Met Asp Leu Glu Glu Arg Thr Lys

355 360 365

Asn Gly Val Ile Arg Gly Gln Pro Ser Pro Leu Gly Ala Ala Val Ile

370 375 380

Asn Gly Ser Gln His Pro Ser Ser Ser Ser Ser Val Asn Asp Val Ser

385 390 395 400

Ser Met Ser Thr Asp Pro Thr Leu Ala Ser Asp Thr Asp Ser Ser Leu

405 410 415

Glu Ala Ala Ala Gly Pro Leu Gly Cys Cys Arg

420 425

<210> 35

<211> 424

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 35

Met Ser Asp Ser Lys Cys Asp Ser Gln Phe Tyr Ser Val Gln Val Ala

1 5 10 15

Asp Ser Thr Phe Thr Val Leu Lys Arg Tyr Gln Gln Leu Lys Pro Ile

20 25 30

Gly Ser Gly Ala Gln Gly Ile Val Cys Ala Ala Phe Asp Thr Val Leu

35 40 45

Gly Ile Asn Val Ala Val Lys Lys Leu Ser Arg Pro Phe Gln Asn Gln

50 55 60

Thr His Ala Lys Arg Ala Tyr Arg Glu Leu Val Leu Leu Lys Cys Val

65 70 75 80

Asn His Lys Asn Ile Ile Ser Leu Leu Asn Val Phe Thr Pro Gln Lys

85 90 95

Thr Leu Glu Glu Phe Gln Asp Val Tyr Leu Val Met Glu Leu Met Asp

100 105 110

Ala Asn Leu Cys Gln Val Ile His Met Glu Leu Asp His Glu Arg Met

115 120 125

Ser Tyr Leu Leu Tyr Gln Met Leu Cys Gly Ile Lys His Leu His Ser

130 135 140

Ala Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Ser Asn Ile Val Val Lys

145 150 155 160

Ser Asp Cys Thr Leu Lys Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg Thr Ala

165 170 175

Cys Thr Asn Phe Met Met Thr Pro Tyr Val Val Thr Arg Tyr Tyr Arg

180 185 190

Ala Pro Glu Val Ile Leu Gly Met Gly Tyr Lys Glu Asn Val Asp Ile

195 200 205

Trp Ser Val Gly Cys Ile Met Gly Glu Leu Val Lys Gly Cys Val Ile

210 215 220

Phe Gln Gly Thr Asp His Ile Asp Gln Trp Asn Lys Val Ile Glu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Thr Pro Ser Ala Glu Phe Met Lys Lys Leu Gln Pro Thr Val

245 250 255

Arg Asn Tyr Val Glu Asn Arg Pro Lys Tyr Pro Gly Ile Lys Phe Glu

260 265 270

Glu Leu Phe Pro Asp Trp Ile Phe Pro Ser Glu Ser Glu Arg Asp Lys

275 280 285

Ile Lys Thr Ser Gln Ala Arg Asp Leu Leu Ser Lys Met Leu Val Ile

290 295 300

Asp Pro Asp Lys Arg Ile Ser Val Asp Glu Ala Leu Arg His Pro Tyr

305 310 315 320

Ile Thr Val Trp Tyr Asp Pro Ala Glu Ala Glu Ala Pro Pro Pro Gln

325 330 335

Ile Tyr Asp Ala Gln Leu Glu Glu Arg Glu His Ala Ile Glu Glu Trp

340 345 350

Lys Glu Leu Ile Tyr Lys Glu Val Met Asp Trp Glu Glu Arg Ser Lys

355 360 365

Asn Gly Val Val Lys Asp Gln Pro Ser Asp Ala Ala Val Ser Ser Asn

370 375 380

Ala Thr Pro Ser Gln Ser Ser Ser Ile Asn Asp Ile Ser Ser Met Ser

385 390 395 400

Thr Glu Gln Thr Leu Ala Ser Asp Thr Asp Ser Ser Leu Asp Ala Ser

405 410 415

Thr Gly Pro Leu Glu Gly Cys Arg

420

<210> 36

<211> 464

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 36

Met Ser Leu His Phe Leu Tyr Tyr Cys Ser Glu Pro Thr Leu Asp Val

1 5 10 15

Lys Ile Ala Phe Cys Gln Gly Phe Asp Lys Gln Val Asp Val Ser Tyr

20 25 30

Ile Ala Lys His Tyr Asn Met Ser Lys Ser Lys Val Asp Asn Gln Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Glu Val Gly Asp Ser Thr Phe Thr Val Leu Lys Arg Tyr

50 55 60

Gln Asn Leu Lys Pro Ile Gly Ser Gly Ala Gln Gly Ile Val Cys Ala

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ala Val Leu Asp Arg Asn Val Ala Ile Lys Lys Leu Ser

85 90 95

Arg Pro Phe Gln Asn Gln Thr His Ala Lys Arg Ala Tyr Arg Glu Leu

100 105 110

Val Leu Met Lys Cys Val Asn His Lys Asn Ile Ile Ser Leu Leu Asn

115 120 125

Val Phe Thr Pro Gln Lys Thr Leu Glu Glu Phe Gln Asp Val Tyr Leu

130 135 140

Val Met Glu Leu Met Asp Ala Asn Leu Cys Gln Val Ile Gln Met Glu

145 150 155 160

Leu Asp His Glu Arg Met Ser Tyr Leu Leu Tyr Gln Met Leu Cys Gly

165 170 175

Ile Lys His Leu His Ser Ala Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro

180 185 190

Ser Asn Ile Val Val Lys Ser Asp Cys Thr Leu Lys Ile Leu Asp Phe

195 200 205

Gly Leu Ala Arg Thr Ala Gly Thr Ser Phe Met Met Thr Pro Tyr Val

210 215 220

Val Thr Arg Tyr Tyr Arg Ala Pro Glu Val Ile Leu Gly Met Gly Tyr

225 230 235 240

Lys Glu Asn Val Asp Ile Trp Ser Val Gly Cys Ile Met Gly Glu Met

245 250 255

Val Arg His Lys Ile Leu Phe Pro Gly Arg Asp Tyr Ile Asp Gln Trp

260 265 270

Asn Lys Val Ile Glu Gln Leu Gly Thr Pro Cys Pro Glu Phe Met Lys

275 280 285

Lys Leu Gln Pro Thr Val Arg Asn Tyr Val Glu Asn Arg Pro Lys Tyr

290 295 300

Ala Gly Leu Thr Phe Pro Lys Leu Phe Pro Asp Ser Leu Phe Pro Ala

305 310 315 320

Asp Ser Glu His Asn Lys Leu Lys Ala Ser Gln Ala Arg Asp Leu Leu

325 330 335

Ser Lys Met Leu Val Ile Asp Pro Ala Lys Arg Ile Ser Val Asp Asp

340 345 350

Ala Leu Gln His Pro Tyr Ile Asn Val Trp Tyr Asp Pro Ala Glu Val

355 360 365

Glu Ala Pro Pro Pro Gln Ile Tyr Asp Lys Gln Leu Asp Glu Arg Glu

370 375 380

His Thr Ile Glu Glu Trp Lys Glu Leu Ile Tyr Lys Glu Val Met Asn

385 390 395 400

Ser Glu Glu Lys Thr Lys Asn Gly Val Val Lys Gly Gln Pro Ser Pro

405 410 415

Ser Gly Ala Ala Val Asn Ser Ser Glu Ser Leu Pro Pro Ser Ser Ser

420 425 430

Val Asn Asp Ile Ser Ser Met Ser Thr Asp Gln Thr Leu Ala Ser Asp

435 440 445

Thr Asp Ser Ser Leu Glu Ala Ser Ala Gly Pro Leu Gly Cys Cys Arg

450 455 460

Claims (206)

1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个为单键或双键；

Q为-CH₂-、O或NH；

X为N或C；

Y为N或C；

Z为N或CR⁵；

其中当X和Y中的一者为N时，X和Y中的另一者为C；

R^X为氢或卤素；

n为1、2、或3；

R¹为氢、卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^AR^B或任选地被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基；

R²为氢、卤素、氨基或C1-C3烷基；

每个R³独立地为氘、卤素、羟基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或C1-C3卤代烷基；或者两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧代基团、4-8元杂环基或C3-C8环烷基；

m为0、1、2或3；

R⁴为苯基或5-9元杂芳基；其中每个R⁴基团任选地被1-3个独立地选自R⁶的取代基取代；

R⁵为氢、卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、-NR^CR^D或C1-C3烷基；并且

每个R⁶独立地选自：卤素；氰基；氨基；-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂；-S(＝O)_p(C1-C3烷基)；-(C＝O)NR^ER^F；C1-C3烷氧基；任选被羟基取代的C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3卤代烷基、4-6元杂环基或任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基；任选被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；3-8元杂环基；以及C3-C6环烷氧基；

p为1或2；并且

R^A、R^B、R^C、R^D、R^E和R^F独立地为氢、C1-C3烷基、C3-C6环烷基，或者R^A和R^B，或R^C和R^D，或R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成任选地被1-2个卤素取代的4-6元杂环基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中X为C并且Y为C。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中X为N并且Y为C。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中X为C并且Y为N。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中Z为N。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中Z为CR⁵。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中Q为-CH₂-。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中Q为O。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中Q为NH。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为氢。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为卤素。

12.根据权利要求1至9和11中任一项所述的化合物，其中R¹为氯。

13.根据权利要求1至9和11中任一项所述的化合物，其中R¹为氟。

14.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为氰基。

15.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为羟基。

16.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为C1-C3烷氧基。

17.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为C1-C3卤代烷氧基。

18.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为C1-C3卤代烷基。

19.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为-NR^AR^B。

20.根据权利要求1或19中任一项所述的化合物，其中R^A和R^B独立地为氢或C1-C3烷基。

21.根据权利要求1或19至20中任一项所述的化合物，其中R^A和R^B中的一者为氢并且R^A和R^B中的另一者为C1-C3烷基。

22.根据权利要求1或19至20中任一项所述的化合物，其中R^A和R^B两者均为氢。

23.根据权利要求1或19至20中任一项所述的化合物，其中R^A和R^B两者均为C1-C3烷基。

24.根据权利要求1或19中任一项所述的化合物，其中R^A和R^B与其所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基。

25.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R¹为任选地被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基。

26.根据权利要求1至9或25中任一项所述的化合物，其中R¹为未经取代的C1-C3烷基。

27.根据权利要求1至9或25中任一项所述的化合物，其中R¹为被1-3个选自羟基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R²为氢。

29.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R²为卤素。

30.根据权利要求1至27或29中任一项所述的化合物，其中R²为氟或氯。

31.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R²为氨基。

32.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R²为C1-C3烷基。

33.根据权利要求1至27或32中任一项所述的化合物，其中R²为甲基。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的化合物，其中n为1。

35.根据权利要求1至33中任一项所述的化合物，其中n为2。

36.根据权利要求1至33中任一项所述的化合物，其中n为3。

37.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物，其中m为1。

38.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物，其中m为2。

39.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物，其中m为3。

40.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物，其中每个R³独立地为氘、卤素、羟基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3卤代烷氧基。

41.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物，其中m为1，并且R³为甲基、三氟甲基或环丙基。

42.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且每个R³为甲基。

43.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且每个R³为三氟甲基。

44.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为三氟甲基。

45.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为环丙基。

46.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且一个R³为三氟甲基并且另一个R³为环丙基。

47.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且一个R³为三氟甲基并且另一个R³为乙氧基。

48.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且一个R³为甲基并且另一个R³为甲氧基。

49.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且一个R³为环丙基并且另一个R³为甲氧基。

50.根据权利要求1至36、38或42至49中任一项所述的化合物，其中所述R³基团是偕位的。

51.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧代基团。

52.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成4-8元杂环基。

53.根据权利要求1至36或52中任一项所述的化合物，其中m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷基或四氢吡喃基。

54.根据权利要求1至36或38中任一项所述的化合物，其中m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基。

55.根据权利要求1至36或54中任一项所述的化合物，其中m为2，并且所述两个R³与其所连接的碳原子一起形成环丙基或环丁基。

56.根据权利要求1至36或39中任一项所述的化合物，其中m为3，两个R³为甲基，并且一个R³选自由甲基和羟基组成的组。

57.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物，其中m为0。

58.根据权利要求1至57中任一项所述的化合物，其中R⁴为任选地被1-3个独立选择的R⁶取代的苯基。

59.根据权利要求1至58中任一项所述的化合物，其中R⁴为被1-2个独立选择的R⁶取代的苯基。

60.根据权利要求1至57中任一项所述的化合物，其中R⁴为任选地被1-3个独立选择的R⁶取代的5-9元杂芳基。

61.根据权利要求1至57或60中任一项所述的化合物，其中R⁴为被1-3个独立选择的R⁶取代的5-9元杂芳基。

62.根据权利要求1至57或60至61中任一项所述的化合物，其中R⁴为被1-3个独立选择的R⁶取代的5-6元杂芳基。

63.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为卤素。

64.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为氰基。

65.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为氨基。

66.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为-(C＝O)NR^ER^F。

67.根据权利要求1至62或66中任一项所述的化合物，其中R^E和R^F独立地为氢、C1-C3烷基或C3-C6环烷基。

68.根据权利要求1至62或66至67中任一项所述的化合物，其中R^E和R^F中的一者为氢并且R^E和R^F中的另一者为C1-C3烷基或C3-C6环烷基。

69.根据权利要求1至62或66至67中任一项所述的化合物，其中R^E和R^F中的一者为C1-C3烷基并且R^E和R^F中的另一者为C3-C6环烷基。

70.根据权利要求1至62或66至67中任一项所述的化合物，其中R^E和R^F两者均为氢。

71.根据权利要求1至62或66至67中任一项所述的化合物，其中R^E和R^F两者均为C1-C3烷基。

72.根据权利要求1至62或66中任一项所述的化合物，其中R^E和R^F与其所连接的氮原子一起形成任选地被1-2个卤素取代的4-6元杂环基。

73.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂。

74.根据权利要求73所述的化合物，其中每个C1-C3烷基为甲基。

75.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为-S(＝O)_p(C1-C3烷基)。

76.根据权利要求1至62或75中任一项所述的化合物，其中p为1。

77.根据权利要求1至62或75中任一项所述的化合物，其中p为2。

78.根据权利要求75至77中任一项所述的化合物，其中所述C1-C3烷基为甲基。

79.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为C1-C3烷氧基。

80.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为任选地被羟基取代的C1-C3卤代烷基。

81.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为C1-C3卤代烷氧基。

82.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为任选地被以下取代的5-6元杂芳基：卤素、氰基、羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、任选地被羟基或-NR^ER^F取代的C1-C3烷基、氨基或C1-C3卤代烷基。

83.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为任选地被羟基、-NR^ER^F或C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基。

84.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为3-8元杂环基。

85.根据权利要求1至62中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为C3-C6环烷氧基。

86.根据权利要求1至62或85中任一项所述的化合物，其中R⁶中的至少一个为环丙氧基。

87.根据权利要求1至57或60至86中任一项所述的化合物，其中R⁴为被1-3个独立选择的R⁶取代的3-吡啶基或4-吡啶基。

88.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

89.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

90.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

91.根据权利要求87至90中任一项所述的化合物，其中R⁶选自由以下组成的组：氰基、卤素、任选地被羟基取代的C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基和C1-C3烷氧基。

92.根据权利要求87至91中任一项所述的化合物，其中R⁶选自由以下组成的组：氰基、氯、二氟甲基、三氟甲基、二氟甲氧基和甲氧基。

93.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

94.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

95.根据权利要求1至57或60至86中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

96.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中R^6A和R^6B独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

97.根据权利要求93至96中任一项所述的化合物，其中

R^6A选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基；并且

R^6B选自由以下组成的组：任选地被以下取代的5-6元杂芳基：氰基、任选地被羟基取代的C1-C3烷基、4-6元杂环基或氨基；-N＝(S＝O)(C1-C3烷基)₂；-(C＝O)NR^ER^F；

C1-C3烷氧基；任选地被羟基取代的C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；氰基；C3-C6环烷氧基；以及任选地被羟基取代的C1-C3烷基。

98.根据权利要求93至97中任一项所述的化合物，其中

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基；并

且

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-4-酮-2-基、四唑-5-基、2-甲基-四唑-5-基、1-甲基-四唑-5-基、咪唑-1-基、1-甲基-咪唑-3-基、1-甲基-5-氨基-咪唑-3-基、3-甲基咪唑-2-酮-1-基、1-甲基-吡唑-3-基、1-甲基-吡唑-4-基、1-甲基-吡唑-5-基、吡咯-1-基、噻唑-2-基、异噻唑烷-2-基-1,1-二氧化物、吡咯烷-2-酮-1-基、噁唑-2-基、噁二唑-2-基、2-氨基-嘧啶-4-基、-(C＝O)4-甲基哌嗪-1-基、2-氧代氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、-(C＝O)N(CH₃)₂、-(C＝O)NHCH₃、-(C＝O)NHCH₂CH₃、-(C＝O)NH环丙基、-(C＝O)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)、2-羟基丙烷-2-基、1-羟乙基、二甲基(氧代)-λ⁶-硫亚基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、甲基、氰基。

99.根据权利要求93至98中任一项所述的化合物，其中

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氯、甲基和三氟甲基；并且

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基和1,2,4-三唑-4-酮-2-基。

100.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中R^6A、R^6B和R^6C独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

101.根据权利要求1至57或60至87中任一项所述的化合物，其中R⁴为其中R^6A、R^6B和R^6C独立地选自R⁶，并且波浪线跨过连接至式(I)的-C(＝O)NH-部分的键。

102.根据权利要求100至101中任一项所述的化合物，其中

R^6A选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基；

R^6B选自由以下组成的组：任选地被氰基、C1-C3烷基或氨基取代的5-6元杂芳基；-(C＝O)NR^ER^F；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3卤代烷氧基；氰基；和

C1-C3烷基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基。

103.根据权利要求100至102中任一项所述的化合物，其中

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基；

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-4-酮-2-基、四唑-5-基、2-甲基-四唑-5-基、1-甲基-四唑-5-基、咪唑-1-基、1-甲基-咪唑-3-基、1-甲基-5-氨基-咪唑-3-基、3-甲基咪唑-2-酮-1-基、1-甲基-吡唑-3-基、1-甲基-吡唑-5-基、吡咯-1-基、噻唑-2-基、异噻唑烷-2-基-1,1-二氧化物、吡咯烷-2-酮-1-基、噁唑-2-基、噁二唑-2-基、2-氨基-嘧啶-4-基、-(C＝O)4-甲基哌嗪-1-基、-(C＝O)N(CH₃)₂、-(C＝O)NHCH₃、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、甲基、氰基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、甲基和三氟甲基。

104.根据权利要求100至103中任一项所述的化合物，其中

R^6A选自由以下组成的组：氰基、氯和三氟甲基；

R^6B选自由以下组成的组：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-氨基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-氨基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-氨基-1,2,4-三唑-3-基和1,2,4-三唑-4-酮-2-基；并且

R^6C选自由以下组成的组：氰基、氯、甲基和三氟甲基。

105.根据权利要求1至57中任一项所述的化合物，其中R⁴为未经取代的苯基。

106.根据权利要求1至57中任一项所述的化合物，其中R⁴为未经取代的5-6元杂芳基。

107.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为氢。

108.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为卤素。

109.根据权利要求1至106或108中任一项所述的化合物，其中R⁵为氟。

110.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为氰基。

111.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为羟基。

112.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为C1-C3烷氧基。

113.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为C1-C3卤代烷氧基。

114.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为C1-C3卤代烷基。

115.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为-NR^CR^D。

116.根据权利要求1至106或115中任一项所述的化合物，其中R^C和R^D独立地为氢或C1-C3烷基。

117.根据权利要求1至106或115至116中任一项所述的化合物，其中R^C和R^D中的一者为氢并且R^C和R^D中的另一者为C1-C3烷基。

118.根据权利要求1至106或115至116中任一项所述的化合物，其中R^C和R^D两者均为氢。

119.根据权利要求1至106或115至116中任一项所述的化合物，其中R^C和R^D两者均为C1-C3烷基。

120.根据权利要求1至106或115中任一项所述的化合物，其中R^C和R^D与其所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基。

121.根据权利要求1至106中任一项所述的化合物，其中R⁵为C1-C3烷基。

122.根据权利要求1至121中任一项所述的化合物，其中R^X为卤素。

123.根据权利要求1至122中任一项所述的化合物，其中R^X为氟。

124.根据权利要求1至121中任一项所述的化合物，其中R^X为氢。

125.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由表1中的化合物或其药学上可接受的盐组成的组。

126.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

127.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

128.一种用于治疗有需要的受试者的CBM复合物通路相关癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

129.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

(a)将所述癌症鉴定为CBM复合物通路相关癌症；以及

(b)向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

130.根据权利要求129所述的方法，其中将所述受试者的所述癌症鉴定为CBM复合物通路相关癌症的所述步骤包含执行测定以在来自所述受试者的样品中检测CBM复合物通路相关基因、CBM复合物通路相关蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。

131.根据权利要求129或130所述的方法，其进一步包括从所述受试者获得样品。

132.根据权利要求131所述的方法，其中所述样品是活检样品。

133.根据权利要求130至132中任一项所述的方法，其中所述测定选自由以下组成的组：测序、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定和荧光原位杂交(FISH)。

134.根据权利要求133所述的方法，其中所述测序是焦磷酸测序或下一代测序。

135.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

向所述受试者向被鉴定为患有CBM复合物通路相关癌症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

136.根据权利要求128至135中任一项所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关癌症选自由以下组成的组：CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症、与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症、CBM复合物相关癌症的组分、MALT1蛋白酶底物相关癌症、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症和其组合。

137.根据权利要求136所述的方法，其中所述CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症选自由以下组成的组：CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症、HER2相关癌症和其组合。

138.根据权利要求136所述的方法，其中与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的所述癌症是蛋白激酶Cβ(PKCβ)相关癌症、蛋白激酶Cθ(PCKθ)相关癌症或其组合。

139.根据权利要求136所述的方法，其中CBM复合物相关癌症的所述组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、CARD10相关癌症、CARD9相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。

140.根据权利要求136所述的方法，其中CBM复合物相关癌症的所述组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。

141.根据权利要求136所述的方法，其中所述MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、Regnase 1相关癌症、roquin-1相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症、LIMA1α相关癌症和其组合。

142.根据权利要求136所述的方法，其中所述MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症和其组合。

143.根据权利要求136所述的方法，其中与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的所述癌症选自由以下组成的组：TAK1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65(RelA)相关癌症、c-Rel相关癌症和其组合。

144.根据权利要求136所述的方法，其中与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的所述癌症是IKKγ相关癌症。

145.根据权利要求136所述的方法，其中与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的所述癌症选自由以下组成的组：JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症、MYD88转录因子相关癌症、AP-1转录因子相关癌症和其组合。

146.根据权利要求128至136中任一项所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关癌症是MALT1相关癌症。

147.根据权利要求146所述的方法，其中所述MALT1相关癌症包括IAP2-MALT1融合物。

148.根据权利要求146所述的方法，其中所述MALT1相关癌症包括IGH-MALT1融合物。

149.一种治疗受试者的MALT1相关癌症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关癌症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

150.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述癌症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

151.根据权利要求150所述的方法，其中确定所述受试者的所述癌症是MALT1相关癌症的所述步骤包含执行测定以在来自所述受试者的样品中检测MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。

152.根据权利要求150或151所述的方法，其进一步包括从所述受试者获得样品。

153.根据权利要求152所述的方法，其中所述样品是活检样品。

154.根据权利要求151至153中任一项所述的方法，其中所述测定选自由以下组成的组：测序、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定和荧光原位杂交(FISH)。

155.根据权利要求154所述的方法，其中所述测序是焦磷酸测序或下一代测序。

156.一种用于抑制受试者的转移的方法，所述受试者需要此类治疗，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

157.根据权利要求156所述的方法，其中所述癌症是CBM复合物通路相关癌症。

158.根据权利要求157所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关癌症选自由以下组成的组：CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症、与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的癌症、CBM复合物相关癌症的组分、MALT1蛋白酶底物相关癌症、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的癌症、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的癌症和其组合。

159.根据权利要求158所述的方法，其中所述CBM复合物通路细胞表面受体相关癌症选自由以下组成的组：CD28相关癌症、BCR相关癌症、HER1相关癌症、HER2相关癌症和其组合。

160.根据权利要求158所述的方法，其中与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的所述癌症是蛋白激酶Cβ(PKCβ)相关癌症、蛋白激酶Cθ(PCKθ)相关癌症或其组合。

161.根据权利要求158所述的方法，其中CBM复合物相关癌症的所述组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、CARD14相关癌症、CARD10相关癌症、CARD9相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。

162.根据权利要求158所述的方法，其中CBM复合物相关癌症的所述组分选自由以下组成的组：MALT1相关癌症、CARD11相关癌症、BCL10相关癌症和其组合。

163.根据权利要求158所述的方法，其中所述MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症、RelB相关癌症、Regnase 1相关癌症、roquin-1相关癌症、HOIL1相关癌症、NIK相关癌症、LIMA1α相关癌症和其组合。

164.根据权利要求158所述的方法，其中所述MALT1蛋白酶底物相关癌症选自由以下组成的组：BCL10相关癌症、A20相关癌症、CYLD相关癌症和其组合。

165.根据权利要求158所述的方法，其中与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的所述癌症选自由以下组成的组：TAK1相关癌症、TRAF6相关癌症、TAB1相关癌症、TAB2相关癌症、TAB3相关癌症、MKK7相关癌症、IKKα相关癌症、IKKβ相关癌症、IKKγ相关癌症、IkBα相关癌症、p50相关癌症、p65(RelA)相关癌症、c-Rel相关癌症和其组合。

166.根据权利要求158所述的方法，其中与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的所述癌症是IKKγ相关癌症。

167.根据权利要求158所述的方法，其中与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的所述癌症选自由以下组成的组：JNK1相关癌症、JNK2相关癌症、JNK3相关癌症、MYD88转录因子相关癌症、AP-1转录因子相关癌症和其组合。

168.根据权利要求157所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关癌症是MALT1相关癌症。

169.根据权利要求168所述的方法，其中所述MALT1相关癌症包括IAP2-MALT1融合物。

170.根据权利要求168所述的方法，其中所述MALT1相关癌症包括IGH-MALT1融合物。

171.根据权利要求127至170中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用另外的疗法或治疗剂。

172.根据权利要求171所述的方法，其中所述另外的疗法或治疗剂选自放射疗法、细胞毒性化学治疗剂、蛋白酶靶向治疗剂、激酶靶向治疗剂、细胞凋亡调节剂、信号转导抑制剂、免疫靶向疗法和血管生成靶向疗法。

173.根据权利要求171或172所述的方法，其中根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物以及所述另外的治疗剂以单独剂量同时施用。

174.根据权利要求171或172所述的方法，其中根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物以及所述另外的治疗剂以单独剂量按任何顺序依次施用。

175.一种用于治疗有需要的受试者的自身免疫性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

176.一种用于治疗有需要的受试者的CBM复合物通路相关疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

177.一种用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括：

(a)将所述疾病或病症鉴定为CBM复合物通路相关疾病或病症；以及

(b)向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

178.一种用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括：

向所述受试者向被鉴定为患有CBM复合物通路相关疾病或病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

179.根据权利要求176至178中任一项所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关疾病或病症是自身免疫性疾病。

180.根据权利要求176至178中任一项所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关疾病或病症是炎性疾病。

181.根据权利要求176至180中任一项所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关疾病或病症选自由以下组成的组：CBM复合物通路细胞表面受体相关疾病或病症、与细胞表面受体和CBM复合物之间的信号转导器相关的疾病或病症、CBM复合物相关疾病或病症的组分、MALT1蛋白酶底物相关疾病或病症、与CBM复合物下游的NF-κB通路的组分相关的疾病或病症、与CBM复合物下游的JNK通路的组分相关的疾病或病症和其组合。

182.根据权利要求176至180中任一项所述的方法，其中所述CBM复合物通路相关疾病或病症是MALT1相关疾病或病症。

183.一种治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

184.一种治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

185.一种用于治疗有需要的受试者的自身免疫性病症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述自身免疫性病症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

186.一种治疗受试者的MALT1相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向被确定为患有MALT1相关自身免疫性病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

187.一种用于治疗有需要的受试者的炎性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

188.一种治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

189.一种治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包括向被鉴定或诊断为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

190.一种用于治疗有需要的受试者的炎性病症的方法，所述方法包括：

(a)确定所述炎性病症与MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中任一者的表达或活性或水平的失调相关；以及

(b)向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

191.一种治疗受试者的MALT1相关炎性病症的方法，所述方法包括向被确定为患有MALT1相关炎性病症的受试者施用有效量的根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物。

192.根据权利要求175至191中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用另外的疗法或治疗剂。

193.根据权利要求192所述的方法，其中所述另外的疗法或治疗剂是免疫疗法。

194.根据权利要求192或193所述的方法，其中根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物以及所述另外的治疗剂以单独剂量同时施用。

195.根据权利要求192或193所述的方法，其中根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求126所述的药物组合物以及所述另外的治疗剂以单独剂量按任何顺序依次施用。

196.一种用于抑制哺乳动物细胞增殖的方法，所述方法包括使哺乳动物细胞与根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。

197.一种用于抑制哺乳动物细胞的CBM复合物通路活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。

198.一种用于抑制哺乳动物细胞的MALT1蛋白酶活性的方法，所述方法包括使所述哺乳动物细胞与根据权利要求1至125中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。

199.根据权利要求196至198中任一项所述的方法，其中所述接触在体内发生。

200.根据权利要求196至198中任一项所述的方法，其中所述接触在体外发生。

201.根据权利要求196至200中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是哺乳动物免疫细胞。

202.根据权利要求196至201中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。

203.根据权利要求202所述的方法，其中所述哺乳动物癌细胞是哺乳动物CBM复合物通路相关癌细胞。

204.根据权利要求202所述的方法，其中所述哺乳动物癌细胞是哺乳动物MALT1相关癌细胞。

205.根据权利要求196至204中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞具有MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的失调。

206.根据权利要求205所述的方法，其中MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中任一者的表达或活性或水平的所述失调是IAP2-MALT1融合物、IGH-MALT1融合物或其组合。