TW202417445A

TW202417445A - 環狀化合物及其使用方法

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Publication number: TW202417445A
Application number: TW112127390A
Authority: TW
Inventors: 謝爾比埃勒里; 馮書路; 郭佳葉; 戈蘭克里洛夫; 聶喆; 安德魯普拉切克; 邁克爾特佐斯; 安娜內格里; 馬茨斯文森; 羅伯特佩爾蒂埃
Original assignee: 美商薛定諤公司
Priority date: 2022-07-22
Filing date: 2023-07-21
Publication date: 2024-05-01

Abstract

本申請案係關於如本文中所定義之式（I）化合物及其醫藥學上可接受之鹽。本申請案亦描述包含式（I）化合物及其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物，及使用該等化合物及組合物治療諸如癌症、自體免疫病症及發炎病症之疾病的方法。

Description

環狀化合物及其使用方法

本申請案係關於可用於治療增生性病症諸如癌症以及自體免疫病症及發炎病症之三環物質。

黏膜相關淋巴組織淋巴瘤易位蛋白1（MALT1）為經由NF-κB之上游信號傳導參與淋巴細胞增殖以控制淋巴細胞活化、存活、增殖及分化的細胞內蛋白。與CARMA或CARD支架蛋白（例如CARD11（凋亡蛋白酶募集域家族成員11，亦稱為CARMA1）、CARD14（凋亡蛋白酶募集域家族成員14，亦稱為CARMA2）、CARD10（凋亡蛋白酶募集域家族成員10，亦稱為CARMA3）或CARD9（凋亡蛋白酶募集域家族成員9））及BCL10（B細胞CLL/淋巴瘤10）一起，MALT1為在細胞表面抗原受體活化時形成之CBM複合體的三個次單元之一。參見Jaworski等人，《細胞分子生命科學（Cell Mol Life Science）》2016年，73，459-473，及Juilland及Thome《免疫學前沿（Frontiers in Immunology）》2018年，9，1927。已知MALT1藉由至少兩種機制介導NF-κB信號傳導：首先，MALT1充當支架蛋白，募集NF-κB信號傳導蛋白，諸如TRAF6、TAB（例如TAB1、TAB2、TAB3）、TAK1及NEMO-IKKβ；且其次，充當半胱胺酸蛋白酶，其使NF-κB信號傳導之負調節因子諸如RelB、A20或CYLD裂解且去活化。參見Rosebeck等人，《科學（Science）》，2011，331，468-472。

MALT1之蛋白酶活性已成為潛在治療目標，尤其在咸信NF-κB及相關路徑起重要作用之情況下。活化B細胞樣瀰漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）為侵襲性淋巴瘤，其通常以NF-κB過度活化為特徵，且已顯示MALT1蛋白酶抑制可顯著抑制高度侵襲性ABC型DLBCL之生長且促進其凋亡。參見Ferch U等人，《實驗醫學雜誌（J Exp Med）》2009，206，2313-2320；亦參見Hailfinger S等人，《美國國家科學院院刊（Proc Natl Acad Sci USA）》2009，106，19946-19951。MALT1或融合蛋白API2-MALT1之已知肽受質包括A20、CYLD、BCL10、RelB、regnase-1、roquin-1、NIK及LIMA la。參見Rebeaud等人，《自然-免疫學（Nat Immunol）》2008, 9, 272-281；亦參見Coornaert等人，《自然-免疫學》20008, 9, 263-271; Staal等人，《歐洲分子生物學學會雜誌（EMBO J）》2011, 30, 1742-1752; Hailfinger等人，《美國國家科學院院刊（PNAS）》2011, 108, 14596-14601; Jeltsch等人，《自然-免疫學》2014, 15, 1079-1089; Uehata等人，《細胞（Cell）》2013, 153, 1036-1049; Nie等人，《自然-通訊（Nat Commun）》2015, 6, 5908；及Baens等人，公共科學圖書館·綜合（PLoS ONE）2014, 9, e103774。MALT1受質之一個一般概況描述於Kasperkiewicz等人，《科學報導（Scientific Reports）》8.1（2018）：1-10中。

另外，已在ABC-DLBCL中鑑別出導致產生組成型活性MALT1的若干染色體易位，且不依賴於上游刺激導致NF-κB活化之MALT1融合蛋白API2-MALT1/IgH-MALT1之鑑別進一步突出了此蛋白在癌症及各種疾病中之重要性。參見Farinha等人，《臨床腫瘤學雜誌（J Clinical Oncology）》2005，23，6370-6378。此外，已顯示MALT1與若干不同類型之癌症有關，例如血液惡性病，諸如套細胞淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病（CLL），及實體腫瘤，諸如肺腺癌、乳癌、胰臟癌及神經膠母細胞瘤。參見Jiang等人，《癌症研究（Cancer Research）》2011，71，2183-2192；亦參見Pan等人，《分子癌症研究（Mol Cancer Res）》2016，14，93-102，Penas等人，《血液（Blood）》2010，115，2214-2219，及《細胞與分子醫學雜誌（J Cell Mol Med.）》2020年7月；24（13）：7550-7562。MALT1作為免疫調節蛋白，亦參與先天性免疫及後天性免疫，且可對若干發炎病症具有影響，例如牛皮癬、多發性硬化症、類風濕性關節炎、休格倫氏症候群（Sjogren's syndrome）、潰瘍性結腸炎及由慢性發炎引起之不同類型的過敏性病症。參見Afofina等人，《歐洲生化學會聯合會雜誌（FEBS Journal）》2015, DOI: 10.1 111/febs. 13325；亦參見Lowes等人，《免疫學年度評論（Ann Review Immunology）》2014, 32, 227-255; Jabara等人，《過敏與臨床免疫學雜誌（J Allergy Clin Immunology）》2013, 132, 151-158; Streubel等人，《臨床癌症研究（Clin Cancer Research）》2004, 10, 476-480；及Liu等人，《腫瘤標靶（Oncotarget）》2016, 1-14。近來，研究結果亦表明MALT1在控制調節T細胞（Treg）功能及恆定性中的重要性。正在進行研究以確認MALT1抑制劑單獨或與免疫檢查點機制組合用於治療患有實體腫瘤之患者的潛力。然而，目前尚無MALT1抑制劑經批准用於治療用途。

因此，本文提供一種式（I）化合物：（I）或其醫藥學上可接受之鹽，其中X、Y、Z、Q、n、R ^X、R ¹、R ²、R ³、m、R ⁴及R ⁵如本文所定義。

本文中亦提供一種醫藥組合物，其包含式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。

亦提供用於治療有需要之個體之CBM複合體路徑相關癌症之方法，其包含向該個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於治療有需要之個體之癌症的方法，其包含：（a）將該癌症鑑別為CBM複合體路徑相關癌症；及（b）向個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於治療有需要之個體之癌症的方法，其包含：向經鑑別為患有CBM複合體路徑相關癌症之個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療個體之MALT1相關癌症的方法，其包含向鑑別或診斷為患有MALT1相關癌症之個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於治療有需要之個體之癌症的方法，其包含：（a）確定該癌症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關；及（b）向個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於抑制需要此類治療之患有癌症之個體中之轉移的方法，其包含向該個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於治療有需要之個體之自體免疫病症的方法，其包含向該個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於治療有需要之個體之CBM複合體路徑相關疾病或病症的方法，其包含向該個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療有需要之個體之疾病或病症的方法，其包含：（a）將該疾病或病症鑑別為CBM複合體路徑相關疾病或病症；及（b）向個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療有需要之個體之疾病或病症的方法，其包含：對於經鑑別為患有CBM複合體路徑相關疾病或病症之個體，向該個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供用於治療個體之MALT1相關自體免疫病症的方法，其包含向經鑑別或診斷為患有MALT1相關自體免疫病症的個體投與有效量之如本文所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療有需要之個體之自體免疫病症的方法，其包含：（a）確定該自體免疫病症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關；及（b）向個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療個體之MALT1相關自體免疫病症的方法，其包含向患有MALT1相關自體免疫病症之個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療有需要之個體之發炎病症的方法，其包含向個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療個體之MALT1相關發炎病症的方法，其包含向鑑別或診斷為患有MALT1相關發炎病症的個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療有需要之個體之發炎病症的方法，其包含：（a）確定該發炎病症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關；及（b）向個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供治療個體之MALT1相關發炎病症的方法，其包含向確定為患有MALT1相關發炎病症的個體投與有效量之如本文中所描述之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物。

亦提供抑制哺乳動物細胞中CBM複合體路徑活性的方法，其包含使哺乳動物細胞與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。

亦提供抑制哺乳動物細胞中MALT1蛋白酶活性的方法，其包含使哺乳動物細胞與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。

亦提供式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於治療CBM複合體路徑相關疾病或病症。

亦提供式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製造用於治療CBM複合體路徑相關疾病或病症之藥劑。

亦提供治療患有MALT1相關癌症之個體的方法，其包括在投與其他抗癌藥物（例如，第一MALT1抑制劑或另一MALT1抑制劑）之前、期間或之後投與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

本文亦提供一種製備式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽的製程。

本文亦提供藉由如本文所定義之化合物製備製程獲得的式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解相同的含義。本文描述用於本發明之方法及材料；亦可使用此項技術中已知之其他適合方法及材料。材料、方法及實施例僅為說明性的，且並不意欲為限制性的。本文提及的所有出版物、專利申請案、專利、序列、資料庫條目及其他參考文獻均以全文引用的方式併入。在有矛盾的情況下，將以本發明（包括定義）為準。

本發明之其他特徵及優勢將自以下實施方式及申請專利範圍顯而易見。

相關申請案之交互參考

本申請案主張2022年7月22日申請之美國臨時申請案第63/391,548號之權益，該臨時申請案以全文引用之方式併入本文中。

如本文所用，術語「化合物」意謂包括所描繪結構之所有立體異構物、幾何異構物、互變異構物及同位素富集之變體。除非另外規定，否則在本文中藉由名稱或結構鑑別為一種特定互變異構形式之化合物意欲包括其他互變異構形式。

如本文所用，術語「互變異構物」係指其結構因原子之排列而顯著不同，但以容易且快速之平衡存在的化合物，且應理解，本文所提供之化合物可描繪為不同的互變異構物，且當化合物具有互變異構形式時，所有互變異構形式意欲在本發明之範疇內，且化合物之命名不排除任何互變異構物。以下為所包括互變異構形式之實例：。

應瞭解，本文所提供的某些化合物可以含有一個或多個不對稱中心且因此可以異構物混合物（諸如外消旋混合物）或者以鏡像異構性純形式製備及分離。

術語「鹵基或鹵素」係指元素週期表之第17族，鹵素之一。特定言之，該術語係指氟、氯、溴及碘。較佳地，該術語係指氟或氯。

術語「C1-C6烷基」係指含有1、2、3、4、5或6個碳原子之直鏈或分支鏈烴鏈，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基及正己基。類似地，C1-C3烷基為含有1、2或3個碳原子之直鏈或分支鏈烴鏈。

術語「C1-C6鹵烷基」係指在各次出現時經獨立選擇之至少一個鹵素原子取代的烴鏈，例如氟、氯、溴及碘。鹵素原子可存在於烴鏈上之任何位置處。類似地，C1-C3鹵烷基為含有經至少一個鹵素原子取代的1、2或3個碳原子之直鏈或分支鏈烴鏈。舉例而言，C1-C3鹵烷基可指氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯乙基（例如，1-氯乙基及2-氯乙基）、三氯乙基（例如，1,2,2-三氯乙基、2,2,2-三氯乙基）、氟乙基（例如，1-氟甲基及2-氟乙基）、三氟乙基（例如，1,2,2-三氟乙基及2,2,2-三氟乙基）、氯丙基、三氯丙基、氟丙基、三氟丙基。

術語「C1-C3烷氧基」係指經由氧連接至分子之C1-C3烷基。此包括烷基部分可為直鏈或分支鏈之部分，諸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基及異丙氧基。

術語「C1-C3鹵烷氧基」係指經由氧連接至分子且其中烷基之至少一個氫原子經鹵素置換的C1-C3烷基。此包括烷基部分可為直鏈或分支鏈之部分，諸如氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基或三氟丙氧基。

在價數准許之情況下，表示單鍵或雙鍵。舉例而言：

如本文所用，術語「氰基」係指-CN基團。

如本文所用，術語「羥基」係指-OH基團。

如本文所用，術語「胺基」係指-NH ₂基團。

如本文所用，術語「芳基」係指6至10個全碳單環或雙環基團，其中系統中之至少一個環為芳族的。芳基之非限制性實例包括苯基、萘基、四氫萘基。在其中僅一個環為芳族的雙環系統中，非芳族環可為如本文中所定義之環烷基。

如本文所用，術語「雜芳基」係指5員至10員或5員至9員單環或雙環基團，其中該系統中之至少一個環為芳族的；其中該系統中之至少一個環的一個或多個碳原子經獨立地選自N、O及S之雜原子置換。雜芳基包括其中一個或多個原子經氧化（例如碳、氮及硫）之環，諸如吡啶酮部分。雜芳基之非限制性實例包括吡啶、嘧啶、嗒、嘧啶酮、吡咯、吡唑、咪唑、三唑、噻唑及吲哚。在其中僅一個環為芳族的雙環系統中，非芳族環可為如本文中所定義之環烷基或雜環基。

如本文所用，術語「環烷基」係指飽和或部分不飽和3-10或3-7單環或雙環烴基，或3員-6員單環烴基；其中雙環系統包括稠合、螺（視情況稱為「螺環烷基」）及橋連環系統。環烷基之非限制性實例包括環丙基、環己基、螺[2.3]己基及雙環[1.1.1]戊基。

術語「雜環基」係指在環內具有選自N、O及S之至少一個雜原子的不為芳族的飽和或部分不飽和3員至12員、3員至8員或4員至6員烴單環或雙環系統。雙環雜環基包括稠合、螺（視情況稱為「螺雜環基」）及橋連環系統。雜環基環系統可包括在一個或多個C、N或S環成員處之側氧取代。雜環基可表示為例如「5員至10員雜環基」，其為含有5、6、7、8、9或10個原子的環系統，其中之至少一個原子為雜原子。舉例而言，可存在1、2或3個雜原子，視情況存在1或2個雜原子。雜環基可經由任何碳原子或經由諸如氮之雜原子鍵合至分子的其餘部分。例示性雜環基包括但不限於哌啶基、哌基、啉基（morpholino）、四氫哌喃基、吖呾基、氧環丁基、2-氮雜螺[3.3]庚基、吡咯啶-2-酮、環丁碸、S,S-二氧化異噻唑啉及十氫萘基。

如本文所用，術語「側氧基」係指連接至碳原子之「=O」基團。

如本文所用，符號描繪原子或部分與分子之其餘部分中的指定原子或基團之連接點。

應理解，包含原子X、Y及Z之式（I）化合物中的環不含多於兩個相鄰氮原子。

式（I）化合物包括其醫藥學上可接受之鹽。另外，式（I）化合物亦包括此類化合物之其他鹽，其未必為醫藥學上可接受之鹽且其可用作用於製備及/或純化式（I）化合物及/或分離式（I）化合物之鏡像異構物的中間物。式（I）化合物之醫藥學上可接受之鹽之非限制性實例包括三氟乙酸及鹽酸鹽。

應進一步瞭解，式（I）化合物或其鹽可以溶劑合物形式分離，且因此，任何此類溶劑合物均包括在本發明之範疇內。舉例而言，式（I）化合物及其鹽可以非溶合形式以及與醫藥學上可接受之溶劑（諸如水、乙醇及其類似物）之溶合形式存在。

在一些實施例中，式（I）化合物包括實例1至196之化合物及其立體異構物及醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，式（I）化合物包括實例1至196之化合物及其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，實例1至196之化合物呈游離鹼形式。在一些實施例中，實例1至196之化合物呈醫藥學上可接受之鹽形式。

術語「醫藥學上可接受」表示化合物或其鹽或組合物在化學上及/或毒理學上與包含調配物的其他成分及/或用其治療的個體相容。

保護基可為保護潛在反應性官能基免於非所要化學轉化的暫時性取代基。所採用之具體保護基之選擇完全在一般熟習此項技術者之技術範圍內。數個考慮因素可決定保護基之選擇，包括但不限於受保護之官能基、分子中存在的其他官能基、合成序列的之各步驟的反應條件、分子中存在的其他保護基、對移除保護基所需之條件的官能基耐受性，及本文中所提供之化合物之熱分解的反應條件。已綜述保護基化學作用之領域（Greene, T. W.及Wuts, P. G. M.《有機合成中之保護基（ Protective Groups in Organic Synthesis）》，第2增補版Wiley: New York, 1991）。

氮保護基可為保護胺部分不受非所要化學轉化之任何暫時性取代基。此類保護基與胺鍵合時形成之部分之實例包括但不限於烯丙胺、苯甲胺（例如苯甲胺、對甲氧基苯甲胺、2,4-二甲氧基苯甲胺及三苯甲胺）、乙醯胺、三氯乙醯胺、三氟乙醯胺、戊-4-烯醯胺、鄰苯二甲醯亞胺、胺基甲酸酯（例如胺基甲酸甲酯、胺基甲酸三級丁酯、胺基甲酸苯甲酯、胺基甲酸烯丙酯、胺基甲酸2,2,2-三氯乙酯及胺基甲酸9-茀基甲酯）、亞胺及磺醯胺（例如苯磺醯胺、對甲苯磺醯胺及對硝基苯磺醯胺）。

氧保護基可為保護羥基部分不受非所要化學轉化之任何暫時性取代基。當此類保護基與羥基鍵合時形成之部分之實例包括但不限於酯（例如乙醯基、三級丁基羰基及苯甲醯基）、苯甲基（例如苯甲基、對甲氧基苯甲基及2,4-二甲氧基苯甲基及三苯甲基）、碳酸酯（例如碳酸甲酯、碳酸烯丙酯、2,2,2-三氯乙基碳酸酯及碳酸苯甲酯）縮酮，及縮醛，及醚。

本文所提供之化合物亦可在構成此類化合物的一個或多個原子處含有非天然比之原子同位素。亦即，尤其當相對於根據式（I）之化合物提及時，原子包含具有天然豐度或呈同位素富集形式的該原子之所有同位素及同位素混合物（天然存在或以合成方式產生）。舉例而言，當提及氫時，應理解，其係指 ¹H、 ²H、 ³H或其混合物；當提及碳時，應理解，其係指 ¹¹C、 ¹²C、 ¹³C、 ¹⁴C或其混合物；當提及氮時，應理解，其係指 ¹³N、 ¹⁴N、 ¹⁵N或其混合物；當提及氧時，應理解，其係指 ¹⁴O、 ¹⁵O、 ¹⁶O、 ¹⁷O、 ¹⁸O或其混合物；且當提及氟時，應理解，其係指 ¹⁸F、 ¹⁹F或其混合物；除非另有明確說明。舉例而言，在氘代烷基及氘代烷氧基中，一個或多個氫原子特定性地經氘（ ²H）置換。由於前述同位素中之一些為放射性的，因此本文中所提供之化合物亦包含具有一個或多個原子之一種或多種同位素的化合物以及其混合物，包括放射性化合物，其中一個或多個非放射性原子已經其放射性富集同位素中之一者置換。放射性標記化合物可用作治療劑，例如癌症治療劑、研究試劑（例如分析試劑）及診斷劑（例如體內成像劑）。本文所提供之化合物的所有同位素變異體無論是否具放射性均意欲涵蓋於本發明之範圍內。

出於說明性目的，本文中提供用於製備化合物的一般方法以及關鍵中間物。關於個別反應步驟之更詳細描述，參見下文實例部分。熟習此項技術者將瞭解，其他合成途徑亦可用於合成本發明化合物。儘管特定起始材料及試劑描繪於流程中且在下文論述，但可容易用其他起始材料及試劑取代以提供多種衍生物及/或反應條件。另外，藉由下述方法製備的許多化合物可根據本發明使用熟習此項技術者熟知的習知化學方法進一步修飾。

所選化合物充當MALT1抑制劑之能力可藉由本文中所描述的生物分析來證明。IC ₅₀值展示於表A中。

式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽適用於治療可用MALT1抑制劑治療之疾病及病症，諸如MALT1相關癌症（包括血液癌症及實體腫瘤）、MALT1相關自體免疫病症及MALT1相關發炎病症。

如本文所用，術語「治療（treat）」或「治療（treatment）」係指治療性或姑息性措施。有利或所要臨床結果包括但不限於與疾病或病症或病狀相關之症狀的完全或部分緩解、疾病程度之減輕、疾病病況穩定化（亦即不惡化）、疾病進展延遲或減緩、疾病病況（例如疾病之一種或多種症狀）之改善或緩和，以及緩解（無論部分或全部），無論可偵測或不可偵測。「治療」亦可意謂與在未接受治療之情況下的預期存活期相比，存活期延長。

如本文所用，術語「個體」係指任何動物，包括哺乳動物，諸如人類。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體已經歷且/或展現待治療及/或預防的疾病或病症的至少一種症狀。

如本文所用，術語「兒科個體」係指在診斷或治療時，年齡小於21歲之個體。術語「兒科」可進一步分成多個亞群，包括：新生兒（自出生至生命第一個月）；嬰兒（1個月直至兩歲）；兒童（兩歲直至12歲）；及青少年（12歲至21歲（直至但不包括第二十二個生日））。Berhman RE, Kliegman R, Arvin AM, Nelson WE. Nelson《兒科學教科書（ Textbook of Pediatrics）》，第15版，Philadelphia: W.B. Saunders公司, 1996；Rudolph AM等人，《魯道夫氏兒科學（ Rudolph ' s Pediatrics）》，第21版，New York: McGraw-Hill, 2002；及Avery MD，第一LR.《兒科醫學（ Pediatric Medicine）》，第2版，Baltimore: Williams & Wilkins; 1994。在一些實施例中，兒科個體為出生至生命的前28天、29日齡至小於兩歲、兩歲至小於12歲，或12歲至21歲（直至但不包括第二十二個生日）。在一些實施例中，兒科個體為自出生至生命的前28天、29日齡至小於1歲、一月齡至小於四月齡、三月齡至小於七月齡、六月齡至小於1歲、1歲至小於2歲、2歲至小於3歲、2歲至小於七歲、3歲至小於5歲、5歲至小於10歲、6歲至小於13歲、10歲至小於15歲，或15歲至小於22歲。

在某些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽適用於預防如本文中所定義之疾病及病症（例如自體免疫病症、發炎病症及癌症）。如本文所用，術語「預防」意謂完全或部分預防如本文所述之疾病或病狀或其症狀之發作、復發或擴散。

術語「監管機構」係指國家之批准醫藥劑之醫療用途的國家機構。舉例而言，監管機構的非限制性實例為美國食品與藥物管理局（FDA）。

經由NF-κB路徑之信號傳導已牽涉到許多癌症。參見例如Staudt，《冷泉港生物學展望（Cold Spring Harbor Perspectives in Biology）》2.6（2010）：a000109，Xia等人，《癌症免疫學研究（Cancer Immunol.Res.）》2.9（2014）：823-830，Xia等人，《腫瘤標靶及療法（OncoTargets and Therapy）》11（2018）：2063。NF-κB為轉錄因子之家族，包括p50、p52、p65（RelA）、RelB及c-Rel，其可作為各種同二聚體及異二聚體與kB強化子元件結合以誘導數個基因之轉錄。在某些細胞表面受體（例如CD28、BCR、HER1（亦稱為EGFR（表皮生長因子受體）及ERBB1）或HER2（亦稱為HER2/neu或ERBB2））活化之後，經由CARD或CARMA蛋白之磷酸化，可能藉由蛋白激酶C（例如蛋白激酶C β或蛋白激酶C θ）及BCL10-MALT1複合體之募集形成CBM複合體。參見例如Xia等人，《腫瘤標靶及療法》11（2018）：2063，Shi及Sun《分子免疫學（Mol. Immunol.）》68.2（2015）：546-557，Xia等人，《癌症免疫學研究》2.9（2014）：823-830，及Pan《分子癌症研究》14.1（2016）：93-102。

如上文所提及，CBM複合體可在NF-κB路徑之活化中充當支架蛋白。當形成時，CBM複合體可活化IKK複合體（例如IKKγ（亦稱為NEMO）、IKKα及IKKβ），可能藉由MALT1之泛素化（例如K63連接之泛素化），此引起IKKγ之募集、泛素化（例如K63連接之泛素化）及降解，從而將IKKα及IKKβ釋放至磷酸化IκB，引起IκB之泛素化（例如K48連接之泛素化）及降解，從而將NF-κB轉錄因子（通常為NF-κB1亞型：p50-RelA及p50-cRel）釋放至細胞核。此級聯可能由泛素連接酶TRAF6（腫瘤壞死因子受體（TNFR）相關因子6）介導。CBM複合體亦可經由額外蛋白質複合體（諸如TAB1/2-TAK及線性泛素鏈組裝複合體（LUBAC））影響NF-κB信號傳導。參見例如Israël《冷泉港生物學展望》2.3（2010）：a000158，Xia等人，《腫瘤標靶及療法》11（2018）：2063，Juilland《免疫學前沿》9（2018）：1927。MALT1亦可活化JNK路徑（亦稱為JNK/AP-1路徑），儘管研究此領域的工作較少。參見例如Juilland《免疫學前沿》9（2018）：1927，及Wang等人，《瘤形成（Oncogenesis）》6.7（2017）：e365-e365。

此外，MALT1具有半胱胺酸蛋白酶活性。野生型MALT1之受質之非限制性實例包括BCL10、A20、CYLD、RelB、Regnase 1、roquin-1及HOIL1。另外，API2-MALT1（亦稱為cIAP2；細胞凋亡抑制因子2之胺基末端）融合蛋白亦已展示裂解NIK及LIMA1α。咸信由MALT1進行之BCL10裂解引起非BCL10依賴性NF-κB活化。藉由裂解A20（TNF α誘導之蛋白3），MALT1可減少NF-κB路徑之負調節，此係由於A20為已建議減少MALT1之泛素化且因此減少IKK複合體之募集及活化的去泛素化酶。CYLD（CYLD離胺酸63去泛素化酶）為一去泛素化酶，且藉由此酶之裂解，咸信MALT1增加經由NF-κB路徑及/或JNK路徑之信號傳導。RelB之裂解通常引起NF-κB路徑負調節之緩解，此係由於RelB與RelA及c-Rel形成無轉錄活性的複合體。藉由裂解HOIL1（亦稱為RBCK1），咸信NF-κB之負調節經緩解，此係由於認為HOIL1減少線性泛素化。MALT1亦可自加工，其經由未完全理解的機制促進經由NF-κB路徑之信號傳導。藉由裂解NIK（NF-κB誘導激酶），API2-MALT1蛋白酶產生NIK之c端片段，其對蛋白酶體降解具有抗性且從而增加非典型NF-κB信號傳導。藉由裂解LIMA1α（LIM域及肌動蛋白結合蛋白1），此蛋白之腫瘤抑制特性減弱，且咸信剩餘片段具有致癌特性並增強細胞增殖、群落形成及細胞黏附。咸信Regnase 1（調節RNA酶1，亦稱為MCPIP-1或Zc3h12a）及roquin-1（亦稱為RC3H1）之裂解導致mRNA之穩定化，包括細胞介素、趨化因子及共刺激蛋白（諸如ICOS、OX40及TNF）之mRNA。此活性可能與NF-κB及JNK路徑中之MALT1活性無關。參見例如Afonina等人，《歐洲生化學會聯合會雜誌》282.17（2015）：3286-3297，Klein等人，《自然通訊（Nat.Comm.）》6.1（2015）：1-17，Baens等人，公共科學圖書館·綜合9.8（2014）：e103774，及Juilland《免疫學前沿》9（2018）：1927。MALT1亦涉及依魯替尼（ibrutinib）反應性細胞株及生檢樣品中之致癌BCR信號傳導，藉由由MYD88、TLR9及BCR形成之多蛋白超複合體（下文稱為My-T-BCR超複合體）協調。My-T-BCR超複合體與mTOR共定位於內溶酶體上，在內溶酶體處其驅動促存活NF-κB及mTOR信號傳導。參見Phelan等人，《自然（Nature）》2018年8月；560（7718）：387-391。

因此，MALT1之抑制可為與NF-κB路徑或JNK路徑中之異常信號傳導相關的許多類型之病症提供有益效應。舉例而言，MALT1之抑制可減少經由NF-κB或JNK路徑的通量，該等NF-κB或JNK路徑由以下中之一者或多者引起：（1）不活化腫瘤抑制基因。可不活化之腫瘤抑制基因之非限制性實例包括BRCA1及p53（例如p53 H61L或I123T）。參見例如Sau等人，《細胞幹細胞（Cell Stem Cell）》19.1（2016）：52-65，Xia等人，《癌症免疫學研究》2.9（2014）：823-830，Johansson等人，《腫瘤標靶》7.38（2016）：62627。（2）失調細胞表面受體。細胞表面受體之非限制性實例包括HER1及HER2。參見例如Xia等人，《癌症免疫學研究》2.9（2014）：823-830及Pan《分子癌症研究》14.1（2016）：93-102。（3）CBM複合體之一種或多種組分之失調。CBM複合體之組分之非限制性實例包括MALT1、CARD11、CARD14、CARD10、CARD9及BCL10。（4）MALT1蛋白酶（例如野生型MALT1蛋白酶或失調MALT1蛋白酶）之一種或多種受質之失調。MALT1蛋白酶之受質之非限制性實例包括BCL10、A20、CYLD、RelB、Regnase 1、roquin-1、HOIL1、NIK及LIMA1α。（5）CBM複合體下游之NF-κB路徑的一種或多種組分之失調。CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分之非限制性實例包括TRAF6、IKKα、IKKβ、IKKγ（亦稱為NEMO）、IkBα、p50、p52、p65（RelA）、RelB及c-Rel。（6）CBM複合體下游之JNK路徑的一種或多種組分之失調。CBM複合體下游之JNK路徑的組分之非限制性實例包括JNK1（促分裂原活化蛋白激酶8）、JNK2（促分裂原活化蛋白激酶9）、JNK3（促分裂原活化蛋白激酶10）或AP-1轉錄因子（例如c-Fos、c-Jun、ATF或JDP家族中之任一者之異二聚體）。（7）由MALT1基因之染色體易位引起之一個或多個融合蛋白之失調非限制性實例包括cIAP-MALT1融合蛋白。（8）My-T-BCR超複合體之一種或多種組分之失調。My-T-BCR超複合體之組分之非限制性實例包括MYD88、TLR9及mTOR。

如本文相關的術語「CBM複合體路徑」包括信號傳導路徑（包括CBM）中之基因、轉錄物及蛋白。舉例而言，NF-κB路徑之許多範疇為CBM複合體路徑之部分。CBM複合體路徑可包括例如細胞表面受體（例如CD28、BCR、HER1及HER2），細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子（例如蛋白激酶C β或蛋白激酶C θ），CBM複合體之組分（例如MALT1、CARD11、CARD14、CARD10、CARD9或BCL10），MALT1蛋白酶之受質（例如BCL10、A20、CYLD、RelB、Regnase 1、roquin-1、HOIL1、NIK及LIMA1α），CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分（例如TAK1、TRAF6、TAB1、TAB2、TAB3、MKK7、IKKα、IKKβ、IKKγ、IkBα、p50、p65（RelA）或c-Rel），CBM複合體下游之JNK路徑的組分（例如JNK1、JNK2、JNK3或AP-1轉錄因子），或My-T-BCR超複合體之組分（例如MYD88、TLR9或mTOR）。

如本文所用，術語「CBM複合體路徑相關疾病或病症」係指與CBM複合體路徑中之基因、CBM複合體路徑中之蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如CBM複合體路徑中之基因、CBM複合體路徑中之蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者，如本文中所描述）相關或具有該失調的疾病或病症。CBM複合體路徑相關疾病或病症之非限制性實例包括例如CBM相關原發性免疫缺陷疾病、自體免疫病症、多發性硬化症、結腸炎、牛皮癬及癌症。參見例如McGuire等人，《神經炎症雜誌（J.Neuroinflamm.）》11.1（2014）：1-12，Lu等人，《免疫學前沿》9（2018）：2078，Jaworski等人，《歐洲分子生物學學會雜誌》33.23（2014）：2765-2781。CBM複合體路徑相關疾病或病症之非限制性實例包括MALT1相關疾病或病症，諸如MALT1相關癌症、MALT1相關自體免疫病症及MALT1相關發炎病症。

如本文所用，術語「CBM複合體路徑相關自體免疫病症」係指與CBM複合體路徑基因、CBM複合體路徑蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之CBM複合體路徑基因、CBM複合體路徑蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的自體免疫病症。CBM複合體路徑相關自體免疫病症之非限制性實例描述於本文中。

如本文所用，術語「CBM複合體路徑相關發炎病症」係指與CBM複合體路徑基因、CBM複合體路徑蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之CBM複合體路徑基因、CBM複合體路徑蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的發炎病症。CBM複合體路徑相關發炎病症之非限制性實例描述於本文中。

在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為CBM複合體路徑相關癌症，諸如CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症（例如CD28相關癌症、BCR相關癌症、HER1相關癌症或HER2相關癌症）、與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的癌症（例如蛋白激酶C β（PKCβ）相關癌症或蛋白激酶C θ（PCKθ）相關癌症）、CBM複合體之組分相關癌症（例如MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、CARD14相關癌症、CARD10相關癌症、CARD9相關癌症或BCL10相關癌症）、MALT1蛋白酶受質相關癌症（例如BCL10相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症、RelB相關癌症、Regnase 1相關癌症、roquin-1相關癌症、HOIL1相關癌症、NIK相關癌症或LIMA1α相關癌症）、與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症（例如TAK1相關癌症、TRAF6相關癌症、TAB1相關癌症、TAB2相關癌症、TAB3相關癌症、MKK7相關癌症、IKKα相關癌症、IKKβ相關癌症、IKKγ相關癌症、IkBα相關癌症、p50相關癌症、p65（RelA）相關癌症或c-Rel相關癌症）、與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的癌症（例如JNK1相關癌症、JNK2相關癌症、JNK3相關癌症或AP-1轉錄因子相關癌症）、MYD88相關癌症，或其組合。

如本文所用，術語「CBM複合體路徑相關癌症」係指與CBM複合體路徑中之基因、CBM複合體路徑中之蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（依本文中所描述，例如CBM複合體路徑中之基因、CBM複合體路徑中之蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調（例如診斷時或產生對先前療法的抗性之後）的癌症。CBM複合體路徑相關癌症之非限制性實例描述於本文中。在一些實施例中，CBM路徑相關癌症可為CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症（例如CD28相關癌症、BCR相關癌症、HER1相關癌症或HER2相關癌症）、與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的癌症（例如蛋白激酶C β（PKCβ）相關癌症或蛋白激酶C θ（PCKθ）相關癌症、CBM複合體之組分相關癌症（例如MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、CARD14相關癌症、CARD10相關癌症、CARD9相關癌症或BCL10相關癌症）、MALT1蛋白酶受質相關癌症（例如BCL10相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症、RelB相關癌症、Regnase 1相關癌症、roquin-1相關癌症、HOIL1相關癌症、NIK相關癌症或LIMA1α相關癌症）、與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症（例如TAK1相關癌症、TRAF6相關癌症、TAB1相關癌症、TAB2相關癌症、TAB3相關癌症、MKK7相關癌症、IKKα相關癌症、IKKβ相關癌症、IKKγ相關癌症、IkBα相關癌症、p50相關癌症、p65（RelA）相關癌症或c-Rel相關癌症）、與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的癌症（例如JNK1相關癌症、JNK2相關癌症、JNK3相關癌症或AP-1轉錄因子相關癌症），或其組合。

在一些實施例中，失調可為導致基因、蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之異常活化的失調。活化可係經由任何適當機制，包括但不限於基因擴增、活化突變、活化易位、轉錄活化、表觀遺傳改變及/或癌基因之蛋白質產物的過度表現。在一些實施例中，失調可為導致基因、蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之異常失活的失調。失活可係經由任何適當機制，包括但不限於基因缺失、失活突變、失活易位、轉錄沉默、表觀遺傳改變及基因之mRNA及/或蛋白質產物的降解。通常，如本文所用，失調（無論係活化抑或失活）為導致經由NF-κB或JNK信號傳導路徑之信號傳導增加的失調。

術語「野生型」描述在未患有與核酸或蛋白（例如MALT1基因、MALT1 mRNA或MALT1蛋白）相關的疾病或病症（且視情況亦未具有增加之罹患與核酸或蛋白相關的疾病或病症的風險及/或未懷疑患有與基因或蛋白相關的疾病或病症）的個體中發現，或在來自未患有與基因或蛋白相關的疾病或病症（例如MALT1相關癌症、自體免疫病症或發炎病症）（且視情況亦未具有增加之罹患與核酸或蛋白相關的疾病或病症的風險及/或未懷疑患有與核酸或蛋白相關的疾病或病症的個體之細胞或組織中發現之核酸（例如MALT1基因或MALT1 mRNA）或蛋白（例如MALT1蛋白）。

在一些實施例中，個體已鑑別或診斷為患有具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調的癌症（CBM複合體路徑相關相關癌症）（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組所測定）。在一些實施例中，個體患有對一種或多種先前療法具有抗性之癌症。在一些實施例中，個體患有對於CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調呈陽性之腫瘤（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組所測定）。個體可為患有對於CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調呈陽性之腫瘤（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組鑑別為陽性）的個體。個體可為腫瘤具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其表現或活性或含量之失調（例如，其中腫瘤使用監管機構批准（例如，FDA批准）之套組或分析鑑別為如此）的個體。在一些實施例中，個體患有對一種或多種先前療法具有抗性之腫瘤。在一些實施例中，個體疑似患有CBM複合體路徑相關相關癌症。在一些實施例中，個體患有懷疑對一種或多種先前療法具有抗性之腫瘤。在一些實施例中，個體之臨床記錄指示個體患有具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調的腫瘤（且視情況臨床記錄指示個體應用本文所提供之組合物中之任一者治療）。在一些實施例中，個體為兒科個體。在一些實施例中，個體具有指示該個體患有對一種或多種先前療法具有抗性之腫瘤的臨床記錄。在一些實施例中，基於組織學檢查，個體已鑑別或診斷為患有癌症，該癌症經確定與CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調相關（CBM複合體路徑相關相關癌症）。

在一些實施例中，個體已鑑別或診斷為患有具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調的自體免疫病症（CBM複合體路徑相關相關自體免疫病症）（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組所測定）。在一些實施例中，個體患有對於CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調呈陽性之腫瘤（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組所測定）。在一些實施例中，個體疑似患有CBM複合體路徑相關相關自體免疫病症。在一些實施例中，個體之臨床記錄指示個體患有具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調的腫瘤（且視情況臨床記錄指示個體應用本文所提供之組合物中之任一者治療）。在一些實施例中，個體為兒科個體。在一些實施例中，基於組織學檢查，個體已鑑別或診斷為患有自體免疫病症，該自體免疫病症經確定與CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調相關（CBM複合體路徑相關相關自體免疫病症）。

在一些實施例中，個體已鑑別或診斷為患有具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調的發炎病症（CBM複合體路徑相關相關發炎病症）（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組所測定）。在一些實施例中，個體患有對於CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調呈陽性之腫瘤（例如，使用監管機構批准（例如，FDA批准）之分析或套組所測定）。在一些實施例中，個體疑似患有CBM複合體路徑相關相關自體發炎病症。在一些實施例中，個體之臨床記錄指示個體患有具有CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調的腫瘤（且視情況臨床記錄指示個體應用本文所提供之組合物中之任一者治療）。在一些實施例中，個體為兒科個體。在一些實施例中，基於組織學檢查，個體已鑑別或診斷為患有發炎病症，該發炎病症經確定與CBM複合體路徑相關基因（例如MALT1基因）、CBM複合體路徑相關蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中任何者之表現或活性或含量之失調相關（CBM複合體路徑相關相關發炎病症）。

如本文所用，術語「CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症」係指與（與CBM複合體路徑細胞表面受體相關之）基因、蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調相關或具有該失調的癌症。在一些實施例中，CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症係選自由以下組成之群：CD28相關癌症、BCR相關癌症、HER1相關癌症、HER2相關癌症及其組合。

如本文所用，術語「*相關癌症」係指與*基因、*蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症，其中「*」係指本文中所描述之特定CBM複合體路徑基因或蛋白。在一些實施例中，*相關癌症選自由以下組成之群：CD28相關癌症、BCR相關癌症、HER1相關癌症、HER2相關癌症、PKCβ相關癌症、PKCθ相關癌症、MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、CARD14相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症、RelB相關癌症、HOIL1相關癌症、NIK相關癌症、Regnase 1相關癌症、LIMA1α相關癌症、roquin-1相關癌症、TRAF6相關癌症、TAK1相關癌症、TAB1相關癌症、TAB2相關癌症、TAB3相關癌症、MKK7相關癌症、IKKα相關癌症、IKKβ相關癌症、IKKγ相關癌症、IkBα相關癌症、p50相關癌症、p65相關癌症、c-Rel相關癌症、JNK1相關癌症、JNK2相關癌症、JNK3相關癌症、MYD88轉錄因子相關癌症及AP-1轉錄因子相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為CD28相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為BCR相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為HER1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為HER2相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為PKCβ相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為PKCθ相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為MALT1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為CARD11相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為CARD14相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為A20相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為CYLD相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為RelB相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為HOIL1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為NIK相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為Regnase 1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為LIMA1α相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為roquin-1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為TRAF6相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為TAK1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為TAB1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為TAB2相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為TAB3相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為MKK7相關癌症及IKKα相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為IKKβ相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為IKKγ相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為IkBα相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為p50相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為p65相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為c-Rel相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為JNK1相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為JNK2相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為JNK3相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為AP-1轉錄因子相關癌症。在一些實施例中，*相關癌症為MYD88轉錄因子相關癌症。

片語「*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調」（其中*為本文所描述之特定CBM複合體路徑基因或蛋白質）係指基因突變（例如導致包括*域及融合搭配物之融合蛋白的表現之染色體易位、導致與野生型*蛋白相比包括至少一個胺基酸缺失的*蛋白的表現之*基因中之突變、導致與野生型*蛋白相比具有一個或多個點突變的*蛋白的表現之*基因中之突變、導致與野生型*蛋白相比具有至少一個插入胺基酸的*蛋白的表現之*基因中之突變、導致細胞中*蛋白含量增加之基因複製，或導致細胞中*蛋白含量增加之調節序列（例如啟動子及/或強化子）中之突變）、導致與野生型*蛋白相比在*蛋白中具有至少一個胺基酸缺失的*蛋白之* mRNA之替代性剪接形式，或由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型*蛋白質的表現增加（例如含量增加）。作為另一實例，*基因之拷貝數增加可導致*蛋白之過度表現。舉例而言，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為導致融合蛋白表現的基因或染色體易位之結果，該融合蛋白含有*之第一部分及搭配物蛋白（亦即，不為*）之第二部分。在一些實例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為一個*基因與另一非*基因之基因易位的結果。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量選自由以下組成之群：CD28、BCR、HER1、HER2、PKCβ、PKCθ、MALT1、CARD11、CARD14、A20、CYLD、RelB、HOIL1、NIK、Regnase 1、LIMA1α、roquin-1、TRAF6、TAK1、TAB1、TAB2、TAB3、MKK7、IKKα、IKKβ、IKKγ、IkBα、p50、p65、c-Rel、JNK1、JNK2、JNK3、MYD88及AP-1轉錄因子。在一些實施例中，*基因或*蛋白為CD28。在一些實施例中，*基因或*蛋白為BCR。在一些實施例中，*基因或*蛋白為HER1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為HER2。在一些實施例中，*基因或*蛋白為PKCβ。在一些實施例中，*基因或*蛋白為PKCθ。在一些實施例中，*基因或*蛋白為MALT1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為CARD11。在一些實施例中，*基因或*蛋白為CARD14。在一些實施例中，*基因或*蛋白為A20。在一些實施例中，*基因或*蛋白為CYLD。在一些實施例中，*基因或*蛋白為RelB。在一些實施例中，*基因或*蛋白為HOIL1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為NIK。在一些實施例中，*基因或*蛋白為Regnase 1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為LIMA1α。在一些實施例中，*基因或*蛋白為roquin-1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為TRAF6。在一些實施例中，*基因或*蛋白為TAK1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為TAB1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為TAB2。在一些實施例中，*基因或*蛋白為TAB3。在一些實施例中，*基因或*蛋白為MKK7。在一些實施例中，*基因或*蛋白為IKKα。在一些實施例中，*基因或*蛋白為IKKβ。在一些實施例中，*基因或*蛋白為IKKγ。在一些實施例中，*基因或*蛋白為IkBα。在一些實施例中，*基因或*蛋白為p50。在一些實施例中，*基因或*蛋白為p65。在一些實施例中，*基因或*蛋白為c-Rel。在一些實施例中，*基因或*蛋白為JNK1。在一些實施例中，*基因或*蛋白為JNK2。在一些實施例中，*基因或*蛋白為JNK3。在一些實施例中，*基因或*蛋白為MYD88轉錄因子。在一些實施例中，*基因或*蛋白為AP-1轉錄因子。

在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為編碼*蛋白的*基因中之突變，該*蛋白與由未包括突變之*基因編碼的蛋白相比係組成性活性的或具有增加之活性。在一些實施例中，*基因之拷貝數增加可導致*蛋白之過度表現。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為CD28。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為BCR。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為HER1。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為HER2。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為PKCβ。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為PKCθ。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為CARD14。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為CARD9。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為CARD10。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為CARD11。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為MALT1。

作為另一實例，*基因、*蛋白或其中任何者之表現或活性或含量之失調可為*基因中之突變，該*基因編碼與由未包括突變之*基因編碼的蛋白相比係組成性非活性的或具有減少之活性的*蛋白。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為A20。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為CYLD。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為RelB。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為HOIL1。在一些實施例中，*基因、*蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量為NIK。

與本文中所描述之特定基因或蛋白「相關」的疾病或病症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的疾病或病症。此類疾病或病症之非限制性實例描述於本文中。同樣，與本文中所描述之特定基因或蛋白「相關」的癌症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。此類癌症之非限制性實例描述於本文中。

以下展示本文中所描述之蛋白之例示性序列。

以下展示人類CD28之例示性序列： SEQ ID NO: 1（UniParc登錄號UPI0000043F4D） MLRLLLALNLFPSIQVTGNKILVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLD SAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKIEVMYPP PYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVR SKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS

CD28基因或CD28蛋白之失調之非限制性實例可見於例如Rohr等人，《白血病（Leukemia）》30.5（2016）：1062-1070，Yoo等人，《血液學（Haematologica）》101.6（2016）：757-763，及Lee等人，《血液學》100.12（2015）：e505。

以下展示人類BCR之例示性序列： SEQ ID NO: 2（UniParc登錄號UPI000016A088） MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSVGDIEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQ TLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGE GSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNV EFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSVGDASRPPYRGRSSESSC GVDGDYEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGMMEGEGKGPLLRSQ STSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTY RMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDGEG AFHGDADGSFGTPPGYGCAADRAEEQRRHQDGLPYIDDSPSSSPHLSSKGRGSRDALVSG ALESTKASELDLEKGLEMRKWVLSGILASEETYLSHLEALLLPMKPLKAAATTSQPVLTS QQIETIFFKVPELYEIHKEFYDGLFPRVQQWSHQQRVGDLFQKLASQLGVYRAFVDNYGV AMEMAEKCCQANAQFAEISENLRARSNKDAKDPTTKNSLETLLYKPVDRVTRSTLVLHDL LKHTPASHPDHPLLQDALRISQNFLSSINEEITPRRQSMTVKKGEHRQLLKDSFMVELVE GARKLRHVFLFTDLLLCTKLKKQSGGKTQQYDCKWYIPLTDLSFQMVDELEAVPNIPLVP DEELDALKIKISQIKNDIQREKRANKGSKATERLKKKLSEQESLLLLMSPSMAFRVHSRN GKSYTFLISSDYERAEWRENIREQQKKCFRSFSLTSVELQMLTNSCVKLQTVHSIPLTIN KEDDESPGLYGFLNVIVHSATGFKQSSNLYCTLEVDSFGYFVNKAKTRVYRDTAEPNWNE EFEIELEGSQTLRILCYEKCYNKTKIPKEDGESTDRLMGKGQVQLDPQALQDRDWQRTVI AMNGIEVKLSVKFNSREFSLKRMPSRKQTGVFGVKIAVVTKRERSKVPYIVRQCVEEIER RGMEEVGIYRVSGVATDIQALKAAFDVNNKDVSVMMSEMDVNAIAGTLKLYFRELPEPLF TDEFYPNFAEGIALSDPVAKESCMLNLLLSLPEANLLTFLFLLDHLKRVAEKEAVNKMSL HNLATVFGPTLLRPSEKESKLPANPSQPITMTDSWSLEVMSQVQVLLYFLQLEAIPAPDS KRQSILFSTEV

BCR基因或BCR蛋白（例如BCR-ABL融合物）之失調之非限制性實例可見於例如Yang及Fu，《腫瘤學/血液學評論（Crit.Rev.Oncol./Hematol.）》93.3（2015）：277-292，Weisberg等人，《自然癌症評論（Nat.Rev.Cancer）》7.5（2007）：345-356，及Jabbour等人，《癌症（Cancer）》117.9（2011）：1800-1811。

以下展示人類HER1之例示性序列： SEQ ID NO: 3（UniParc登錄號UPI000003E750） MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEV VLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALA VLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDF QNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGC TGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYV VTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFK NCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAF ENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKL FGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCN LLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVM GENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVV ALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGS GAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGI CLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAA RNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSY GVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPK FRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQ QGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTED SIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLN TVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRV APQSSEFIGA

HER1基因或HER1蛋白之失調之非限制性實例可見於例如Zhang等人，《腫瘤標靶》7.48（2016）：78985，Ellison等人，《臨床病理學雜誌（Journal of Clinical Pathology）》66.2（2013）：79-89，Midha等人，《美國癌症研究雜誌（American Journal of Cancer Research）》5.9（2015）：2892，及Yamamoto等人，《肺癌（Lung Cancer）》63.3（2009）：315-321。

以下展示人類HER2之例示性序列： SEQ ID NO: 4（UniParc登錄號UPI000003F55F） MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNL ELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNG DPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLA LTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQC AAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACP YNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSAN IQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLP DLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTV PWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQEC VEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARC PSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVG ILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETEL RKVKVLGSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENTSPKANKEILDEAYVMAGVGSP YVSRLLGICLTSTVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLLNWCMQIAKGMSYLEDVR LVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPIKWMALESILRRRFT HQSDVWSYGVTVWELMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWM IDSECRPRFRELVSEFSRMARDPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDA EEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEG AGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYV NQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLERPKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTPQ GGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV

HER2基因或HER2蛋白之失調之非限制性實例可見於例如Petrelli、Fausto等人，《乳癌研究及治療（Breast Cancer Research and Treatment）》166.2（2017）：339-349，Yan等人，《癌症及轉移評論（Cancer and Metastasis Reviews）》34.1（2015）：157-164，Koshkin等人，《膀胱癌（Bladder Cancer）》5.1（2019）：1-12，及Connell等人，《歐洲腫瘤內科學會開放（ESMO Open）》2.5（2017）。

如本文所用，術語「與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的癌症」係指與（與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關之）基因、蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調相關或具有該失調的癌症。在一些實施例中，與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的癌症係選自由以下組成之群：PKCβ相關癌症、PCKθ相關癌症及其組合。與此段落中所描述之特定基因或蛋白「相關」的癌症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。此類癌症之非限制性實例描述於本文中。

以下展示人類PKCβ之例示性序列： SEQ ID NO: 5（UniParc登錄號UPI000012DF67） MADPAAGPPPSEGEESTVRFARKGALRQKNVHEVKNHKFTARFFKQPTFCSHCTDFIWGF GKQGFQCQVCCFVVHKRCHEFVTFSCPGADKGPASDDPRSKHKFKIHTYSSPTFCDHCGS LLYGLIHQGMKCDTCMMNVHKRCVMNVPSLCGTDHTERRGRIYIQAHIDRDVLIVLVRDA KNLVPMDPNGLSDPYVKLKLIPDPKSESKQKTKTIKCSLNPEWNETFRFQLKESDKDRRL SVEIWDWDLTSRNDFMGSLSFGISELQKASVDGWFKLLSQEEGEYFNVPVPPEGSEANEE LRQKFERAKISQGTKVPEEKTTNTVSKFDNNGNRDRMKLTDFNFLMVLGKGSFGKVMLSE RKGTDELYAVKILKKDVVIQDDDVECTMVEKRVLALPGKPPFLTQLHSCFQTMDRLYFVM EYVNGGDLMYHIQQVGRFKEPHAVFYAAEIAIGLFFLQSKGIIYRDLKLDNVMLDSEGHI KIADFGMCKENIWDGVTTKTFCGTPDYIAPEIIAYQPYGKSVDWWAFGVLLYEMLAGQAP FEGEDEDELFQSIMEHNVAYPKSMSKEAVAICKGLMTKHPGKRLGCGPEGERDIKEHAFF RYIDWEKLERKEIQPPYKPKARDKRDTSNFDKEFTRQPVELTPTDKLFIMNLDQNEFAGF SYTNPEFVINV

以下展示人類PKCθ之例示性序列： SEQ ID NO: 6（UniParc登錄號UPI000012DF74） MSPFLRIGLSNFDCGSCQSCQGEAVNPYCAVLVKEYVESENGQMYIQKKPTMYPPWDSTF DAHINKGRVMQIIVKGKNVDLISETTVELYSLAERCRKNNGKTEIWLELKPQGRMLMNAR YFLEMSDTKDMNEFETEGFFALHQRRGAIKQAKVHHVKCHEFTATFFPQPTFCSVCHEFV WGLNKQGYQCRQCNAAIHKKCIDKVIAKCTGSAINSRETMFHKERFKIDMPHRFKVYNYK SPTFCEHCGTLLWGLARQGLKCDACGMNVHHRCQTKVANLCGINQKLMAEALAMIESTQQ ARCLRDTEQIFREGPVEIGLPCSIKNEARPPCLPTPGKREPQGISWESPLDEVDKMCHLP EPELNKERPSLQIKLKIEDFILHKMLGKGSFGKVFLAEFKKTNQFFAIKALKKDVVLMDD DVECTMVEKRVLSLAWEHPFLTHMFCTFQTKENLFFVMEYLNGGDLMYHIQSCHKFDLSR ATFYAAEIILGLQFLHSKGIVYRDLKLDNILLDKDGHIKIADFGMCKENMLGDAKTNTFC GTPDYIAPEILLGQKYNHSVDWWSFGVLLYEMLIGQSPFHGQDEEELFHSIRMDNPFYPR WLEKEAKDLLVKLFVREPEKRLGVRGDIRQHPLFREINWEELERKEIDPPFRPKVKSPFD CSNFDKEFLNEKPRLSFADRALINSMDQNMFRNFSFMNPGMERLIS

如本文所用，術語「CBM複合體之組分相關癌症」係指與（與CBM複合體之組分相關之）基因、蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調相關或具有該失調的癌症。在一些實施例中，CBM複合體之組分相關癌症係選自由以下組成之群：MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、CARD14相關癌症、CARD10相關癌症、CARD9相關癌症、BCL10相關癌症及其組合。在一些實施例中，CBM複合體相關癌症係選自由以下組成之群：MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、BCL10相關癌症及其組合。與此段落中所描述之特定基因或蛋白「相關」的癌症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。此類癌症之非限制性實例描述於本文中。

如本文所用，術語「MALT1相關自體免疫病症」係指與MALT1基因、MALT1蛋白（本文中亦稱為MALT1蛋白酶蛋白或MALT1蛋白酶）或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之MALT1基因、MALT1蛋白酶、MALT1蛋白酶域或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的自體免疫病症。MALT1相關自體免疫病症之非限制性實例描述於本文中。

如本文所用，術語「MALT1相關發炎病症」係指與MALT1基因、MALT1蛋白（本文中亦稱為MALT1蛋白酶蛋白或MALT1蛋白酶）或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之MALT1基因、MALT1蛋白酶、MALT1蛋白酶域或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的發炎病症。MALT1相關發炎病症之非限制性實例描述於本文中。

如本文所用，術語「MALT1相關癌症」係指與MALT1基因、MALT1蛋白（本文中亦稱為MALT1蛋白酶蛋白或MALT1蛋白酶）或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之MALT1基因、MALT1蛋白、MALT1蛋白酶域或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。MALT1相關癌症之非限制性實例描述於本文中。

片語「MALT1基因、MALT1蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調」係指基因突變（例如導致包括MALT1蛋白酶域及融合搭配物之融合蛋白的表現之染色體易位、導致與野生型MALT1蛋白相比包括至少一個胺基酸缺失的MALT1蛋白的表現之MALT1基因中之突變、導致與野生型MALT1蛋白相比具有一個或多個點突變的MALT1蛋白的表現之MALT1基因中之突變、導致與野生型MALT1蛋白相比具有至少一個插入胺基酸的MALT1蛋白的表現之MALT1基因中之突變、導致細胞中MALT1蛋白含量增加之基因複製，或導致細胞中MALT1蛋白含量增加之調節序列（例如啟動子及/或強化子）中之突變）、導致與野生型MALT1蛋白相比在MALT1蛋白中具有至少一個胺基酸缺失的MALT1蛋白之MALT1 mRNA之替代性剪接形式，或由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型MALT1蛋白質的表現增加（例如含量增加）。作為另一實例，MALT1基因、MALT1蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為編碼MALT1蛋白的MALT1基因中之突變，該MALT1蛋白與由未包括突變之MALT1基因編碼的蛋白相比係組成性活性的或具有增加之活性。作為另一實例，MALT1基因之拷貝數增加可導致MALT1蛋白酶之過度表現。舉例而言，MALT1基因、MALT1蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為導致融合蛋白表現的基因或染色體易位之結果，該融合蛋白含有包括功能性蛋白酶域的MALT1之第一部分及搭配物蛋白（亦即，不係MALT1）之第二部分。在一些實例中，MALT1基因、MALT1蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為一個MALT1基因與另一非MALT1基因之基因易位的結果。

以下展示人類MALT1之例示性序列： SEQ ID NO: 7（UniParc登錄號UPI000004D05E） MSLLGDPLQALPPSAAPTGPLLAPPAGATLNRLREPLLRRLSELLDQAPEGRGWRRLAEL AGSRGRLRLSCLDLEQCSLKVLEPEGSPSLCLLKLMGEKGCTVTELSDFLQAMEHTEVLQ LLSPPGIKITVNPESKAVLAGQFVKLCCRATGHPFVQYQWFKMNKEIPNGNTSELIFNAV HVKDAGFYVCRVNNNFTFEFSQWSQLDVCDIPESFQRSVDGVSESKLQICVEPTSQKLMP GSTLVLQCVAVGSPIPHYQWFKNELPLTHETKKLYMVPYVDLEHQGTYWCHVYNDRDSQD SKKVEIIIGRTDEAVECTEDELNNLGHPDNKEQTTDQPLAKDKVALLIGNMNYREHPKLK APLVDVYELTNLLRQLDFKVVSLLDLTEYEMRNAVDEFLLLLDKGVYGLLYYAGHGYENF GNSFMVPVDAPNPYRSENCLCVQNILKLMQEKETGLNVFLLDMCRKRNDYDDTIPILDAL KVTANIVFGYATCQGAEAFEIQHSGLANGIFMKFLKDRLLEDKKITVLLDEVAEDMGKCH LTKGKQALEIRSSLSEKRALTDPIQGTEYSAESLVRNLQWAKAHELPESMCLKFDCGVQI QLGFAAEFSNVMIIYTSIVYKPPEIIMCDAYVTDFPLDLDIDPKDANKGTPEETGSYLVS KDLPKHCLYTRLSSLQKLKEHLVFTVCLSYQYSGLEDTVEDKQEVNVGKPLIAKLDMHRG LGRKTCFQTCLMSNGPYQSSAATSGGAGHYHSLQDPFHGVYHSHPGNPSNVTPADSCHCS RTPDAFISSFAHHASCHFSRSNVPVETTDEIPFSFSDRLRISEK

下表B1中展示MALT1基因或MALT1蛋白之失調之非限制性實例。表 B1.

MALT1 蛋白胺基酸取代 / 插入 / 缺失
胺基酸位置	非限制性例示性突變	非限制性例示性MALT1 相關癌症
717	M717I ⁴
MALT 融合搭配物
融合搭配物	非限制性例示性MALT1 相關癌症
BIRC3（亦稱為IAP2；CIAP2；及API2） ¹	瀰漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL） ¹；結外低級別MALT淋巴瘤 ²
IGH	ABC-DLBCL ²
SEC11C	乳癌 ³

¹美國專利US 10,711,036 ²美國專利申請公開案US20190160045A1 ³美國專利申請公開案US20130096021A1 ⁴美國專利申請公開案US20150320754A1

如本文所用，術語「CARD11相關自體免疫病症」係指與CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的自體免疫病症。

如本文所用，術語「CARD11相關發炎病症」係指與CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的發炎病症。

如本文所用，術語「CARD11相關癌症」係指與CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。CARD11相關癌症之非限制性實例描述於本文中。

片語「CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調」係指基因突變（例如導致包括CARD11域及融合搭配物之融合蛋白的表現之染色體易位、導致與野生型CARD11蛋白相比包括至少一個胺基酸缺失的CARD11蛋白的表現之CARD11基因中之突變、導致與野生型CARD11蛋白相比具有一個或多個點突變的CARD11蛋白的表現之CARD11基因中之突變、導致與野生型CARD11蛋白相比具有至少一個插入胺基酸的CARD11蛋白的表現之CARD11基因中之突變、導致細胞中CARD11蛋白含量增加之基因複製，或導致細胞中CARD11蛋白含量增加之調節序列（例如啟動子及/或強化子）中之突變）、導致與野生型CARD11蛋白相比在CARD11蛋白中具有至少一個胺基酸缺失的CARD11蛋白之CARD11 mRNA之替代性剪接形式，或由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型CARD11蛋白的表現增加（例如含量增加）。作為另一實例，CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為編碼CARD11蛋白的CARD11基因中之突變，該CARD11蛋白與由未包括突變之CARD11基因編碼的蛋白相比係組成性活性的或具有增加之活性。作為另一實例，CARD11基因之拷貝數增加可導致CARD11蛋白之過度表現。舉例而言，CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為導致融合蛋白表現的基因或染色體易位之結果，該融合蛋白含有CARD11之第一部分及搭配物蛋白（亦即，不為CARD11）之第二部分。在一些實例中，CARD11基因、CARD11蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為一個CARD11基因與另一非CARD11基因之基因易位的結果。

以下展示人類CARD11之例示性序列： SEQ ID NO: 8（UniParc登錄號UPI00003FED38） MPGGGPEMDDYMETLKDEEDALWENVECNRHMLSRYINPAKLTPYLRQCKVIDEQDEDEV LNAPMLPSKINRAGRLLDILHTKGQRGYVVFLESLEFYYPELYKLVTGKEPTRRFSTIVV EEGHEGLTHFLMNEVIKLQQQMKAKDLQRCELLARLRQLEDEKKQMTLTRVELLTFQERY YKMKEERDSYNDELVKVKDDNYNLAMRYAQLSEEKNMAVMRSRDLQLEIDQLKHRLNKME EECKLERNQSLKLKNDIENRPKKEQVLELERENEMLKTKNQELQSIIQAGKRSLPDSDKA ILDILEHDRKEALEDRQELVNRIYNLQEEARQAEELRDKYLEEKEDLELKCSTLGKDCEM YKHRMNTVMLQLEEVERERDQAFHSRDEAQTQYSQCLIEKDKYRKQIRELEEKNDEMRIE MVRREACIVNLESKLRRLSKDSNNLDQSLPRNLPVTIISQDFGDASPRTNGQEADDSSTS EESPEDSKYFLPYHPPQRRMNLKGIQLQRAKSPISLKRTSDFQAKGHEEEGTDASPSSCG SLPITNSFTKMQPPRSRSSIMSITAEPPGNDSIVRRYKEDAPHRSTVEEDNDSGGFDALD LDDDSHERYSFGPSSIHSSSSSHQSEGLDAYDLEQVNLMFRKFSLERPFRPSVTSVGHVR GPGPSVQHTTLNGDSLTSQLTLLGGNARGSFVHSVKPGSLAEKAGLREGHQLLLLEGCIR GERQSVPLDTCTKEEAHWTIQRCSGPVTLHYKVNHEGYRKLVKDMEDGLITSGDSFYIRL NLNISSQLDACTMSLKCDDVVHVRDTMYQDRHEWLCARVDPFTDHDLDMGTIPSYSRAQQ LLLVKLQRLMHRGSREEVDGTHHTLRALRNTLQPEEALSTSDPRVSPRLSRASFLFGQLL QFVSRSENKYKRMNSNERVRIISGSPLGSLARSSLDATKLLTEKQEELDPESELGKNLSL IPYSLVRAFYCERRRPVLFTPTVLAKTLVQRLLNSGGAMEFTICKSDIVTRDEFLRRQKT ETIIYSREKNPNAFECIAPANIEAVAAKNKHCLLEAGIGCTRDLIKSNIYPIVLFIRVCE KNIKRFRKLLPRPETEEEFLRVCRLKEKELEALPCLYATVEPDMWGSVEELLRVVKDKIG EEQRKTIWVDEDQL

下表B2中展示CARD11基因或CARD11蛋白之失調之非限制性實例。表 B2.

CARD11 蛋白胺基酸取代/ 插入/ 缺失
胺基酸位置	非限制性例示性突變	非限制性例示性CARD11 相關癌症
47	R47C ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
123	G123S ¹	淋巴瘤 ¹
126	G126D ¹	淋巴瘤 ¹
130	F130V ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
167	T167M ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
215	K215M, K215N ¹	淋巴瘤 ¹
230	D230N ¹	淋巴瘤 ¹
357	D357E ¹	淋巴瘤 ¹
360	M360V ¹	淋巴瘤 ¹
361	Y361C ¹	淋巴瘤 ¹
368	V368I ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
737	H737L ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
750	H750R ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
833	P833L ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
900	L900F ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
1015	L1015F ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
1016	R1016L ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
1085	R1085S ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²
1086	F1086S ²	皮膚鱗狀細胞癌 ²

¹Wu等人，《腫瘤標靶》7.25（2016）: 38180。 ²Watt等人，《美國病理學雜誌（The American Journal of Pathology）》185.9（2015）：2354-2363。

如本文所用，術語「CARD14相關自體免疫病症」係指與CARD14基因、CARD14蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD14基因、CARD14蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之自體免疫病症。

如本文所用，術語「CARD14相關發炎病症」係指與CARD14基因、CARD14蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD14基因、CARD14蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之發炎病症。

如本文所用，術語「CARD14相關癌症」係指與CARD14基因、CARD14蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD14基因、CARD14蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之癌症。

以下展示人類CARD14之例示性序列： SEQ ID NO: 9（UniParc登錄號UPI000013D81B） MGELCRRDSALTALDEETLWEMMESHRHRIVRCICPSRLTPYLRQAKVLCQLDEEEVLHS PRLTNSAMRAGHLLDLLKTRGKNGAIAFLESLKFHNPDVYTLVTGLQPDVDFSNFSGLME TSKLTECLAGAIGSLQEELNQEKGQKEVLLRRCQQLQEHLGLAETRAEGLHQLEADHSRM KREVSAHFHEVLRLKDEMLSLSLHYSNALQEKELAASRCRSLQEELYLLKQELQRANMVS SCELELQEQSLRTASDQESGDEELNRLKEENEKLRSLTFSLAEKDILEQSLDEARGSRQE LVERIHSLRERAVAAERQREQYWEEKEQTLLQFQKSKMACQLYREKVNALQAQVCELQKE RDQAYSARDSAQREISQSLVEKDSLRRQVFELTDQVCELRTQLRQLQAEPPGVLKQEART REPCPREKQRLVRMHAICPRDDSDCSLVSSTESQLLSDLSATSSRELVDSFRSSSPAPPS QQSLYKRVAEDFGEEPWSFSSCLEIPEGDPGALPGAKAGDPHLDYELLDTADLPQLESSL QPVSPGRLDVSESGVLMRRRPARRILSQVTMLAFQGDALLEQISVIGGNLTGIFIHRVTP GSAADQMALRPGTQIVMVDYEASEPLFKAVLEDTTLEEAVGLLRRVDGFCCLSVKVNTDG YKRLLQDLEAKVATSGDSFYIRVNLAMEGRAKGELQVHCNEVLHVTDTMFQGCGCWHAHR VNSYTMKDTAAHGTIPNYSRAQQQLIALIQDMTQQCTVTRKPSSGGPQKLVRIVSMDKAK ASPLRLSFDRGQLDPSRMEGSSTCFWAESCLTLVPYTLVRPHRPARPRPVLLVPRAVGKI LSEKLCLLQGFKKCLAEYLSQEEYEAWSQRGDIIQEGEVSGGRCWVTRHAVESLMEKNTH ALLDVQLDSVCTLHRMDIFPIVIHVSVNEKMAKKLKKGLQRLGTSEEQLLEAARQEEGDL DRAPCLYSSLAPDGWSDLDGLLSCVRQAIADEQKKVVWTEQSPR

如本文所用，術語「CARD10相關自體免疫病症」係指與CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之自體免疫病症。

如本文所用，術語「CARD10相關發炎病症」係指與CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之發炎病症。

如本文所用，術語「CARD10相關癌症」係指與CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之癌症。

片語「CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調」係指基因突變（例如導致包括CARD10域及融合搭配物之融合蛋白的表現之染色體易位、導致與野生型CARD10蛋白相比包括至少一個胺基酸缺失的CARD10蛋白的表現之CARD10基因中之突變、導致與野生型CARD10蛋白相比具有一個或多個點突變的CARD10蛋白的表現之CARD10基因中之突變、導致與野生型CARD10蛋白相比具有至少一個插入胺基酸的CARD10蛋白的表現之CARD10基因中之突變、導致細胞中CARD10蛋白含量增加之基因複製，或導致細胞中CARD10蛋白含量增加之調節序列（例如啟動子及/或強化子）中之突變）、導致與野生型CARD10蛋白相比在CARD10蛋白中具有至少一個胺基酸缺失的CARD10蛋白之CARD10 mRNA之替代性剪接形式，或由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型CARD10蛋白質的表現增加（例如含量增加）。作為另一實例，CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為編碼CARD10蛋白的CARD10基因中之突變，該CARD10蛋白與由未包括突變之CARD10基因編碼的蛋白相比係組成性活性的或具有增加之活性。作為另一實例，CARD10基因之拷貝數增加可導致CARD10蛋白之過度表現。舉例而言，CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為導致融合蛋白表現的基因或染色體易位之結果，該融合蛋白含有CARD10之第一部分及搭配物蛋白（亦即，不為CARD10）之第二部分。在一些實例中，CARD10基因、CARD10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為一個CARD10基因與另一非CARD10基因之基因易位的結果。

以下展示人類CARD10之例示性序列： SEQ ID NO: 10（UniParc登錄號UPI0000044645） MPGRAEAGEAEEEAGAGSGSEAEEDALWERIEGVRHRLARALNPAKLTPYLRQCRVIDEQ DEEEVLSTYRFPCRVNRTGRLMDILRCRGKRGYEAFLEALEFYYPEHFTLLTGQEPAQRC SMILDEEGPEGLTQFLMTEVRRLREARKSQLQREQQLQARGRVLEEERAGLEQRLRDQQQ AQERCQRLREDWEAGSLELLRLKDENYMIAMRLAQLSEEKNSAVLRSRDLQLAVDQLKLK VSRLEEECALLRRARGPPPGAEEKEKEKEKEKEPDNVDLVSELRAENQRLTASLRELQEG LQQEASRPGAPGSERILLDILEHDWREAQDSRQELCQKLHAVQGELQWAEELRDQYLQEM EDLRLKHRTLQKDCDLYKHRMATVLAQLEEIEKERDQAIQSRDRIQLQYSQSLIEKDQYR KQVRGLEAERDELLTTLTSLEGTKALLEVQLQRAQGGTCLKACASSHSLCSNLSSTWSLS EFPSPLGGPEATGEAAVMGGPEPHNSEEATDSEKEINRLSILPFPPSAGSILRRQREEDP APPKRSFSSMSDITGSVTLKPWSPGLSSSSSSDSVWPLGKPEGLLARGCGLDFLNRSLAI RVSGRSPPGGPEPQDKGPDGLSFYGDRWSGAVVRRVLSGPGSARMEPREQRVEAAGLEGA CLEAEAQQRTLLWNQGSTLPSLMDSKACQSFHEALEAWAKGPGAEPFYIRANLTLPERAD PHALCVKAQEILRLVDSAYKRRQEWFCTRVDPLTLRDLDRGTVPNYQRAQQLLEVQEKCL PSSRHRGPRSNLKKRALDQLRLVRPKPVGAPAGDSPDQLLLEPCAEPERSLRPYSLVRPL LVSALRPVVLLPECLAPRLIRNLLDLPSSRLDFQVCPAESLSGEELCPSSAPGAPKAQPA TPGLGSRIRAIQESVGKKHCLLELGARGVRELVQNEIYPIVIHVEVTEKNVREVRGLLGR PGWRDSELLRQCRGSEQVLWGLPCSWVQVPAHEWGHAEELAKVVRGRILQEQARLVWVEC GSSRGCPSSSEA

如本文所用，術語「CARD9相關自體免疫病症」係指與CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之自體免疫病症。

如本文所用，術語「CARD9相關發炎病症」係指與CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之發炎病症。

如本文所用，術語「CARD9相關癌症」係指與CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之癌症。

片語「CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調」係指基因突變（例如導致包括CARD9域及融合搭配物之融合蛋白的表現之染色體易位、導致與野生型CARD9蛋白相比包括至少一個胺基酸缺失的CARD9蛋白的表現之CARD9基因中之突變、導致與野生型CARD9蛋白相比具有一個或多個點突變的CARD9蛋白的表現之CARD9基因中之突變、導致與野生型CARD9蛋白相比具有至少一個插入胺基酸的CARD9蛋白的表現之CARD9基因中之突變、導致細胞中CARD9蛋白含量增加之基因複製，或導致細胞中CARD9蛋白含量增加之調節序列（例如啟動子及/或強化子）中之突變）、導致與野生型CARD9蛋白相比在CARD9蛋白中具有至少一個胺基酸缺失的CARD9蛋白之CARD9 mRNA之替代性剪接形式，或由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型CARD9蛋白質的表現增加（例如含量增加）。作為另一實例，CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為編碼CARD9蛋白的CARD9基因中之突變，該CARD9蛋白與由未包括突變之CARD9基因編碼的蛋白相比係組成性活性的或具有增加之活性。作為另一實例，CARD9基因之拷貝數增加可導致CARD9蛋白之過度表現。舉例而言，CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為導致融合蛋白表現的基因或染色體易位之結果，該融合蛋白含有CARD9之第一部分及搭配物蛋白（亦即，不為CARD9）之第二部分。在一些實例中，CARD9基因、CARD9蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為一個CARD9基因與另一非CARD9基因之基因易位的結果。

以下展示人類CARD9之例示性序列： SEQ ID NO: 11（UniParc登錄號UPI000013E4EB） MSDYENDDECWSVLEGFRVTLTSVIDPSRITPYLRQCKVLNPDDEEQVLSDPNLVIRKRK VGVLLDILQRTGHKGYVAFLESLELYYPQLYKKVTGKEPARVFSMIIDASGESGLTQLLM TEVMKLQKKVQDLTALLSSKDDFIKELRVKDSLLRKHQERVQRLKEECEAGSRELKRCKE ENYDLAMRLAHQSEEKGAALMRNRDLQLEIDQLKHSLMKAEDDCKVERKHTLKLRHAMEQ RPSQELLWELQQEKALLQARVQELEASVQEGKLDRSSPYIQVLEEDWRQALRDHQEQANT IFSLRKDLRQGEARRLRCMEEKEMFELQCLALRKDSKMYKDRIEAILLQMEEVAIERDQA IATREELHAQHARGLQEKDALRKQVRELGEKADELQLQVFQCEAQLLAVEGRLRRQQLET LVLSSDLEDGSPRRSQELSLPQDLEDTQLSDKGCLAGGGSPKQPFAALHQEQVLRNPHDA GLSSGEPPEKERRRLKESFENYRRKRALRKMQKGWRQGEEDRENTTGSDNTDTEGS

如本文所用，術語「BCL10相關自體免疫病症」係指與BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之自體免疫病症。

如本文所用，術語「BCL10相關發炎病症」係指與BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之發炎病症。

如本文所用，術語「BCL10相關癌症」係指與BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如，本文中所描述之BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者）相關或具有該失調之癌症。

片語「BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調」係指基因突變（例如導致包括BCL10域及融合搭配物之融合蛋白的表現之染色體易位、導致與野生型BCL10蛋白相比包括至少一個胺基酸缺失的BCL10蛋白的表現之BCL10基因中之突變、導致與野生型BCL10蛋白相比具有一個或多個點突變的BCL10蛋白的表現之BCL10基因中之突變、導致與野生型BCL10蛋白相比具有至少一個插入胺基酸的BCL10蛋白的表現之BCL10基因中之突變、導致細胞中BCL10蛋白含量增加之基因複製，或導致細胞中BCL10蛋白含量增加之調節序列（例如啟動子及/或強化子）中之突變）、導致與野生型BCL10蛋白相比在BCL10蛋白中具有至少一個胺基酸缺失的BCL10蛋白之BCL10 mRNA之替代性剪接形式，或由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型BCL10蛋白質的表現增加（例如含量增加）。舉例而言，BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為導致融合蛋白表現的基因或染色體易位之結果，該融合蛋白含有BCL10之第一部分及搭配物蛋白（亦即，不為BCL10）之第二部分。在一些實例中，BCL10基因、BCL10蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可為一個BCL10基因與另一非BCL10基因之基因易位的結果。

以下展示人類BCL10之例示性序列： SEQ ID NO: 12（UniParc登錄號UPI000012682F） MEPTAPSLTEEDLTEVKKDALENLRVYLCEKIIAERHFDHLRAKKILSREDTEEISCRTS SRKRAGKLLDYLQENPKGLDTLVESIRREKTQNFLIQKITDEVLKLRNIKLEHLKGLKCS SCEPFPDGATNNLSRSNSDESNFSEKLRASTVMYHPEGESSTTPFFSTNSSLNLPVLEVG RTENTIFSSTTLPRPGDPGAPPLPPDLQLEEEGTCANSSEMFLPLRSRTVSRQ

下表B3中展示BCL10基因或BCL10蛋白之失調之非限制性實例。表 B3.

BCL10 蛋白胺基酸取代 / 插入 / 缺失
胺基酸位置	非限制性例示性突變	非限制性例示性BCL10 相關癌症
5	A5S ²	淋巴瘤 ²
16	V16E ²	淋巴瘤 ²
20	A20T ¹	生殖細胞腫瘤 ¹
31	K31E	淋巴瘤 ²
32	I32V ¹	淋巴瘤 ¹
43	A43* ²	淋巴瘤 ²
46	I46* ¹	T-ALL ¹，大腸癌 ¹
49	R49G ¹	淋巴瘤 ¹
52	T52I ¹	間皮瘤 ¹
55	I55* ¹	淋巴瘤 ¹
57	C57R ²	淋巴瘤 ²
58	R58G ¹, R58* ¹	生殖細胞腫瘤 ¹
64	R64K ²	淋巴瘤 ²
77	K77* ¹	淋巴瘤 ¹
80	D80N	淋巴瘤 ¹
91	T91* ¹	生殖細胞腫瘤 ¹
100	T100S ¹	淋巴瘤 ¹
101	D101E ²	淋巴瘤 ²
115	K115* ¹	淋巴瘤 ¹
116-126	剪接突變 ¹	淋巴瘤 ¹
116-121	剪接突變 ²	淋巴瘤 ²
116-120	剪接突變 ¹	間皮瘤 ¹
133	L133* ¹	淋巴瘤 ¹
134	S134P ²	淋巴瘤 ²
137	N137* ¹	淋巴瘤 ¹
143	F143* ¹	淋巴瘤 ¹
152	V152* ²	淋巴瘤 ²
165	F165* ²	淋巴瘤 ²
167	S167* ¹	淋巴瘤 ¹
168	T168A ²	淋巴瘤 ²
170-180	del S170-G180 ¹	淋巴瘤 ¹
175-181	del P175-G180 ¹	淋巴瘤 ¹
210	del 210 ¹	淋巴瘤 ¹
213	G213E	淋巴瘤 ²
218	S218F ¹	生殖細胞腫瘤 ¹
230	V230I ²	淋巴瘤 ²
終點	終點-＞R	淋巴瘤 ²

¹Willis等人，《細胞》96.1（1999）：35-45。 ²Zhang等人，《自然遺傳學（Nature Genetics）》22.1（1999）：63-68。

如本文所用，術語「MALT1蛋白酶受質相關癌症」係指與（與MALT1蛋白酶受質相關之）基因、蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調相關或具有該失調的癌症。在一些實施例中，MALT1蛋白酶受質相關癌症係選自由以下組成之群：BCL10相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症、RelB相關癌症、Regnase 1相關癌症、roquin-1相關癌症、HOIL1相關癌症、NIK相關癌症、LIMA1α相關癌症及其組合。在一些實施例中，MALT1蛋白酶受質相關癌症係選自由以下組成之群：BCL10相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症及其組合。與此段落中所描述之特定基因或蛋白「相關」的癌症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。此類癌症之非限制性實例描述於本文中。

以下展示人類A20之例示性序列： SEQ ID NO: 13（UniParc登錄號UPI000000D92D） MAEQVLPQALYLSNMRKAVKIRERTPEDIFKPTNGIIHHFKTMHRYTLEMFRTCQFCPQF REIIHKALIDRNIQATLESQKKLNWCREVRKLVALKTNGDGNCLMHATSQYMWGVQDTDL VLRKALFSTLKETDTRNFKFRWQLESLKSQEFVETGLCYDTRNWNDEWDNLIKMASTDTP MARSGLQYNSLEEIHIFVLCNILRRPIIVISDKMLRSLESGSNFAPLKVGGIYLPLHWPA QECYRYPIVLGYDSHHFVPLVTLKDSGPEIRAVPLVNRDRGRFEDLKVHFLTDPENEMKE KLLKEYLMVIEIPVQGWDHGTTHLINAAKLDEANLPKEINLVDDYFELVQHEYKKWQENS EQGRREGHAQNPMEPSVPQLSLMDVKCETPNCPFFMSVNTQPLCHECSERRQKNQNKLPK LNSKPGPEGLPGMALGASRGEAYEPLAWNPEESTGGPHSAPPTAPSPFLFSETTAMKCRS PGCPFTLNVQHNGFCERCHNARQLHASHAPDHTRHLDPGKCQACLQDVTRTFNGICSTCF KRTTAEASSSLSTSLPPSCHQRSKSDPSRLVRSPSPHSCHRAGNDAPAGCLSQAARTPGD RTGTSKCRKAGCVYFGTPENKGFCTLCFIEYRENKHFAAASGKVSPTASRFQNTIPCLGR ECGTLGSTMFEGYCQKCFIEAQNQRFHEAKRTEEQLRSSQRRDVPRTTQSTSRPKCARAS CKNILACRSEELCMECQHPNQRMGPGAHRGEPAPEDPPKQRCRAPACDHFGNAKCNGYCN ECFQFKQMYG

下表B4中展示A20基因或A20蛋白之失調之非限制性實例。表 B4.

A20 蛋白胺基酸取代 / 插入 / 缺失
胺基酸位置	非限制性例示性突變	非限制性例示性A20 相關癌症
100	D100* ²	結外邊緣區淋巴瘤 ²
162	R162* ²	結內邊緣區淋巴瘤 ²
183	R183X ¹	淋巴瘤 ¹
271	R271X ¹	淋巴瘤 ¹
278	R278* ²	結內邊緣區淋巴瘤 ²
288	V288* ²	脾邊緣區淋巴瘤 ²
491	H491* ²	結內邊緣區淋巴瘤 ²
633	E633* ²	結外邊緣區淋巴瘤 ²

¹Johansson等人，《腫瘤標靶》7.38（2016）：62627。 ²Novak等人，《血液》113.20（2009）：4918-4921。

以下展示人類CYLD之例示性序列： SEQ ID NO: 14（UniParc登錄號UPI0000073A15） MSSGLWSQEKVTSPYWEERIFYLLLQECSVTDKQTQKLLKVPKGSIGQYIQDRSVGHSRI PSAKGKKNQIGLKILEQPHAVLFVDEKDVVEINEKFTELLLAITNCEERFSLFKNRNRLS KGLQIDVGCPVKVQLRSGEEKFPGVVRFRGPLLAERTVSGIFFGVELLEEGRGQGFTDGV YQGKQLFQCDEDCGVFVALDKLELIEDDDTALESDYAGPGDTMQVELPPLEINSRVSLKV GETIESGTVIFCDVLPGKESLGYFVGVDMDNPIGNWDGRFDGVQLCSFACVESTILLHIN DIIPALSESVTQERRPPKLAFMSRGVGDKGSSSHNKPKATGSTSDPGNRNRSELFYTLNG SSVDSQPQSKSKNTWYIDEVAEDPAKSLTEISTDFDRSSPPLQPPPVNSLTTENRFHSLP FSLTKMPNTNGSIGHSPLSLSAQSVMEELNTAPVQESPPLAMPPGNSHGLEVGSLAEVKE NPPFYGVIRWIGQPPGLNEVLAGLELEDECAGCTDGTFRGTRYFTCALKKALFVKLKSCR PDSRFASLQPVSNQIERCNSLAFGGYLSEVVEENTPPKMEKEGLEIMIGKKKGIQGHYNS CYLDSTLFCLFAFSSVLDTVLLRPKEKNDVEYYSETQELLRTEIVNPLRIYGYVCATKIM KLRKILEKVEAASGFTSEEKDPEEFLNILFHHILRVEPLLKIRSAGQKVQDCYFYQIFME KNEKVGVPTIQQLLEWSFINSNLKFAEAPSCLIIQMPRFGKDFKLFKKIFPSLELNITDL LEDTPRQCRICGGLAMYECRECYDDPDISAGKIKQFCKTCNTQVHLHPKRLNHKYNPVSL PKDLPDWDWRHGCIPCQNMELFAVLCIETSHYVAFVKYGKDDSAWLFFDSMADRDGGQNG FNIPQVTPCPEVGEYLKMSLEDLHSLDSRRIQGCARRLLCDAYMCMYQSPTMSLYK

CYLD基因或CYLD蛋白之失調之非限制性實例可見於例如Massoumi，《未來腫瘤學（Future Oncology）》7.2（2011）：285-297，Alameda、J. P.等人，《癌基因（Oncogene）》29.50（2010）：6522-6532，Williams等人，《現代病理學（Modern Pathology）》（2020）：1-13，及Courtois及Gilmore，《癌基因》25.51（2006）：6831-6843。

以下展示人類RelB之例示性序列： SEQ ID NO: 15（UniParc登錄號UPI00000012B7） MLRSGPASGPSVPTGRAMPSRRVARPPAAPELGALGSPDLSSLSLAVSRSTDELEIIDEY IKENGFGLDGGQPGPGEGLPRLVSRGAASLSTVTLGPVAPPATPPPWGCPLGRLVSPAPG PGPQPHLVITEQPKQRGMRFRYECEGRSAGSILGESSTEASKTLPAIELRDCGGLREVEV TACLVWKDWPHRVHPHSLVGKDCTDGICRVRLRPHVSPRHSFNNLGIQCVRKKEIEAAIE RKIQLGIDPYNAGSLKNHQEVDMNVVRICFQASYRDQQGQMRRMDPVLSEPVYDKKSTNT SELRICRINKESGPCTGGEELYLLCDKVQKEDISVVFSRASWEGRADFSQADVHRQIAIV FKTPPYEDLEIVEPVTVNVFLQRLTDGVCSEPLPFTYLPRDHDSYGVDKKRKRGMPDVLG ELNSSDPHGIESKRRKKKPAILDHFLPNHGSGPFLPPSALLPDPDFFSGTVSLPGLEPPG GPDLLDDGFAYDPTAPTLFTMLDLLPPAPPHASAVVCSGGAGAVVGETPGPEPLTLDSYQ APGPGDGGTASLVGSNMFPNHYREAAFGGGLLSPGPEAT

以下展示人類Regnase 1之例示性序列： SEQ ID NO: 16（UniParc登錄號UPI000004D30E） MSGPCGEKPVLEASPTMSLWEFEDSHSRQGTPRPGQELAAEEASALELQMKVDFFRKLGY SSTEIHSVLQKLGVQADTNTVLGELVKHGTATERERQTSPDPCPQLPLVPRGGGTPKAPN LEPPLPEEEKEGSDLRPVVIDGSNVAMSHGNKEVFSCRGILLAVNWFLERGHTDITVFVP SWRKEQPRPDVPITDQHILRELEKKKILVFTPSRRVGGKRVVCYDDRFIVKLAYESDGIV VSNDTYRDLQGERQEWKRFIEERLLMYSFVNDKFMPPDDPLGRHGPSLDNFLRKKPLTLE HRKQPCPYGRKCTYGIKCRFFHPERPSCPQRSVADELRANALLSPPRAPSKDKNGRRPSP SSQSSSLLTESEQCSLDGKKLGAQASPGSRQEGLTQTYAPSGRSLAPSGGSGSSFGPTDW LPQTLDSLPYVSQDCLDSGIGSLESQMSELWGVRGGGPGEPGPPRAPYTGYSPYGSELPA TAAFSAFGRAMGAGHFSVPADYPPAPPAFPPREYWSEPYPLPPPTSVLQEPPVQSPGAGR SPWGRAGSLAKEQASVYTKLCGVFPPHLVEAVMGRFPQLLDPQQLAAEILSYKSQHPSE

以下展示人類roquin-1之例示性序列： SEQ ID NO: 17（UniParc登錄號UPI00001D7DA8） MPVQAPQWTDFLSCPICTQTFDETIRKPISLGCGHTVCKMCLNKLHRKACPFDQTTINTD IELLPVNSALLQLVGAQVPEQQPITLCSGVEDTKHYEEAKKCVEELALYLKPLSSARGVG LNSTTQSVLSRPMQRKLVTLVHCQLVEEEGRIRAMRAARSLGERTVTELILQHQNPQQLS SNLWAAVRARGCQFLGPAMQEEALKLVLLALEDGSALSRKVLVLFVVQRLEPRFPQASKT SIGHVVQLLYRASCFKVTKRDEDSSLMQLKEEFRTYEALRREHDSQIVQIAMEAGLRIAP DQWSSLLYGDQSHKSHMQSIIDKLQTPASFAQSVQELTIALQRTGDPANLNRLRPHLELL ANIDPSPDAPPPTWEQLENGLVAVRTVVHGLVDYIQNHSKKGADQQQPPQHSKYKTYMCR DMKQRGGCPRGASCTFAHSQEELEKFRKMNKRLVPRRPLSASLGQLNEVGLPSAAILPDE GAVDLPSRKPPALPNGIVSTGNTVTQLIPRGTDPSYDSSLKPGKIDHLSSSAPGSPPDLL ESVPKSISALPVNPHSIPPRGPADLPPMPVTKPLQMVPRGSQLYPAQQTDVYYQDPRGAA PPFEPAPYQQGMYYTPPPQCVSRFVRPPPSAPEPAPPYLDHYPPYLQERVVNSQYGTQPQ QYPPIYPSHYDGRRVYPAPSYTREEIFRESPIPIEIPPAAVPSYVPESRERYQQIESYYP VAPHPTQIRPSYLREPPYSRLPPPPQPHPSLDELHRRRKEIMAQLEERKVISPPPFAPSP TLPPTFHPEEFLDEDLKVAGKYKGNDYSQYSPWSCDTIGSYIGTKDAKPKDVVAAGSVEM MNVESKGMRDQRLDLQRRAAETSDDDLIPFGDRPTVSRFGAISRTSKTIYQGAGPMQAMA PQGAPTKSINISDYSPYGTHGGWGASPYSPHQNIPSQGHFSERERISMSEVASHGKPLPS AEREQLRLELQQLNHQISQQTQLRGLEAVSNRLVLQREANTLAGQSQPPPPPPPKWPGMI SSEQLSLELHQVEREIGKRTRELSMENQCSLDMKSKLNTSKQAENGQPEPQNKVPAEDLT LTFSDVPNGSALTQENISLLSNKTSSLNLSEDPEGGGDNNDSQRSGVTPSSAP

以下展示人類HOIL1之例示性序列： SEQ ID NO: 18（UniParc登錄號UPI000006F045） MDEKTKKAEEMALSLTRAVAGGDEQVAMKCAIWLAEQRVPLSVQLKPEVSPTQDIRLWVS VEDAQMHTVTIWLTVRPDMTVASLKDMVFLDYGFPPVLQQWVIGQRLARDQETLHSHGVR QNGDSAYLYLLSARNTSLNPQELQRERQLRMLEDLGFKDLTLQPRGPLEPGPPKPGVPQE PGRGQPDAVPEPPPVGWQCPGCTFINKPTRPGCEMCCRARPEAYQVPASYQPDEEERARL AGEEEALRQYQQRKQQQQEGNYLQHVQLDQRSLVLNTEPAECPVCYSVLAPGEAVVLREC LHTFCRECLQGTIRNSQEAEVSCPFIDNTYSCSGKLLEREIKALLTPEDYQRFLDLGISI AENRSAFSYHCKTPDCKGWCFFEDDVNEFTCPVCFHVNCLLCKAIHEQMNCKEYQEDLAL RAQNDVAARQTTEMLKVMLQQGEAMRCPQCQIVVQKKDGCDWIRCTVCHTEICWVTKGPR WGPGGPGDTSGGCRCRVNGIPCHPSCQNCH

以下展示人類NIK之例示性序列： SEQ ID NO: 19（UniParc登錄號UPI0000074220） MAVMEMACPGAPGSAVGQQKELPKAKEKTPPLGKKQSSVYKLEAVEKSPVFCGKWEILND VITKGTAKEGSEAGPAAISIIAQAECENSQEFSPTFSERIFIAGSKQYSQSESLDQIPNN VAHATEGKMARVCWKGKRRSKARKKRKKKSSKSLAHAGVALAKPLPRTPEQESCTIPVQE DESPLGAPYVRNTPQFTKPLKEPGLGQLCFKQLGEGLRPALPRSELHKLISPLQCLNHVW KLHHPQDGGPLPLPTHPFPYSRLPHPFPFHPLQPWKPHPLESFLGKLACVDSQKPLPDPH LSKLACVDSPKPLPGPHLEPSCLSRGAHEKFSVEEYLVHALQGSVSSGQAHSLTSLAKTW AARGSRSREPSPKTEDNEGVLLTEKLKPVDYEYREEVHWATHQLRLGRGSFGEVHRMEDK QTGFQCAVKKVRLEVFRAEELMACAGLTSPRIVPLYGAVREGPWVNIFMELLEGGSLGQL VKEQGCLPEDRALYYLGQALEGLEYLHSRRILHGDVKADNVLLSSDGSHAALCDFGHAVC LQPDGLGKSLLTGDYIPGTETHMAPEVVLGRSCDAKVDVWSSCCMMLHMLNGCHPWTQFF RGPLCLKIASEPPPVREIPPSCAPLTAQAIQEGLRKEPIHRVSAAELGGKVNRALQQVGG LKSPWRGEYKEPRHPPPNQANYHQTLHAQPRELSPRAPGPRPAEETTGRAPKLQPPLPPE PPEPNKSPPLTLSKEESGMWEPLPLSSLEPAPARNPSSPERKATVPEQELQQLEIELFLN SLSQPFSLEEQEQILSCLSIDSLSLSDDSEKNPSKASQSSRDTLSSGVHSWSSQAEARSS SWNMVLARGRPTDTPSYFNGVKVQIQSLNGEHLHIREFHRVKVGDIATGISSQIPAAAFS LVTKDGQPVRYDMEVPDSGIDLQCTLAPDGSFAWSWRVKHGQLENRP

以下展示人類LIMA1α之例示性序列： SEQ ID NO: 20（UniParc登錄號UPI000002A906） MENCLGESRHEVEKSEISENTDASGKIEKYNVPLNRLKMMFEKGEPTQTKILRAQSRSAS GRKISENSYSLDDLEIGPGQLSSSTFDSEKNESRRNLELPRLSETSIKDRMAKYQAAVSK QSSSTNYTNELKASGGEIKIHKMEQKENVPPGPEVCITHQEGEKISANENSLAVRSTPAE DDSRDSQVKSEVQQPVHPKPLSPDSRASSLSESSPPKAMKKFQAPARETCVECQKTVYPM ERLLANQQVFHISCFRCSYCNNKLSLGTYASLHGRIYCKPHFNQLFKSKGNYDEGFGHRP HKDLWASKNENEEILERPAQLANARETPHSPGVEDAPIAKVGVLAASMEAKASSQQEKED KPAETKKLRIAWPPPTELGSSGSALEEGIKMSKPKWPPEDEISKPEVPEDVDLDLKKLRR SSSLKERSRPFTVAASFQSTSVKSPKTVSPPIRKGWSMSEQSEESVGGRVAERKQVENAK ASKKNGNVGKTTWQNKESKGETGKRSKEGHSLEMENENLVENGADSDEDDNSFLKQQSPQ EPKSLNWSSFVDNTFAEEFTTQNQKSQDVELWEGEVVKELSVEEQIKRNRYYDEDEDEE

如本文所用，術語「與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症」係指與（與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關之）基因、蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調相關或具有該失調的癌症。在一些實施例中，與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症係選自由以下組成之群：TAK1相關癌症、TRAF6相關癌症、TAB1相關癌症、TAB2相關癌症、TAB3相關癌症、MKK7相關癌症、IKKα相關癌症、IKKβ相關癌症、IKKγ相關癌症、IkBα相關癌症、p50相關癌症、p65（RelA）相關癌症、c-Rel相關癌症及其組合。在一些實施例中，與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症為IKKγ相關癌症。與此段落中所描述之特定基因或蛋白「相關」的癌症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。此類癌症之非限制性實例描述於本文中。

以下展示人類TAK1之例示性序列： SEQ ID NO: 21（UniParc登錄號UPI000012EAD6） MSTASAASSSSSSSAGEMIEAPSQVLNFEEIDYKEIEVEEVVGRGAFGVVCKAKWRAKDV AIKQIESESERKAFIVELRQLSRVNHPNIVKLYGACLNPVCLVMEYAEGGSLYNVLHGAE PLPYYTAAHAMSWCLQCSQGVAYLHSMQPKALIHRDLKPPNLLLVAGGTVLKICDFGTAC DIQTHMTNNKGSAAWMAPEVFEGSNYSEKCDVFSWGIILWEVITRRKPFDEIGGPAFRIM WAVHNGTRPPLIKNLPKPIESLMTRCWSKDPSQRPSMEEIVKIMTHLMRYFPGADEPLQY PCQYSDEGQSNSATSTGSFMDIASTNTSNKSDTNMEQVPATNDTIKRLESKLLKNQAKQQ SESGRLSLGASRGSSVESLPPTSEGKRMSADMSEIEARIAATTAYSKPKRGHRKTASFGN ILDVPEIVISGNGQPRRRSIQDLTVTGTEPGQVSSRSSSPSVRMITTSGPTSEKPTRSHP WTPDDSTDTNGSDNSIPMAYLTLDHQLQPLAPCPNSKESMAVFEQHCKMAQEYMKVQTEI ALLLQRKQELVAELDQDEKDQQNTSRLVQEHKKLLDENKSLSTYYQQCKKQLEVIRSQQQ KRQGTS

以下展示人類TRAF6之例示性序列： SEQ ID NO: 22（UniParc登錄號UPI000000D924） MSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEF DPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPD NFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILK DCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPI PCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLAQAVHSLSVIPDSGYISEVRNFQETIH QLEGRLVRQDHQIRELTAKMETQSMYVSELKRTIRTLEDKVAEIEAQQCNGIYIWKIGNF GMHLKCQEEEKPVVIHSPGFYTGKPGYKLCMRLHLQLPTAQRCANYISLFVHTMQGEYDS HLPWPFQGTIRLTILDQSEAPVRQNHEEIMDAKPELLAFQRPTIPRNPKGFGYVTFMHLE ALRQRTFIKDDTLLVRCEVSTRFDMGSLRREGFQPRSTDAGV

以下展示人類TAB1之例示性序列： SEQ ID NO: 23（UniParc登錄號UPI0000136861） MAAQRRSLLQSEQQPSWTDDLPLCHLSGVGSASNRSYSADGKGTESHPPEDSWLKFRSEN NCFLYGVFNGYDGNRVTNFVAQRLSAELLLGQLNAEHAEADVRRVLLQAFDVVERSFLES IDDALAEKASLQSQLPEGVPQHQLPPQYQKILERLKTLEREISGGAMAVVAVLLNNKLYV ANVGTNRALLCKSTVDGLQVTQLNVDHTTENEDELFRLSQLGLDAGKIKQVGIICGQEST RRIGDYKVKYGYTDIDLLSAAKSKPIIAEPEIHGAQPLDGVTGFLVLMSEGLYKALEAAH GPGQANQEIAAMIDTEFAKQTSLDAVAQAVVDRVKRIHSDTFASGGERARFCPRHEDMTL LVRNFGYPLGEMSQPTPSPAPAAGGRVYPVSVPYSSAQSTSKTSVTLSLVMPSQGQMVNG AHSASTLDEATPTLTNQSPTLTLQSTNTHTQSSSSSSDGGLFRSRPAHSLPPGEDGRVEP YVDFAEFYRLWSVDHGEQSVVTAP

以下展示人類TAB2之例示性序列： SEQ ID NO: 24（UniParc登錄號UPI0000073C75） MAQGSHQIDFQVLHDLRQKFPEVPEVVVSRCMLQNNNNLDACCAVLSQESTRYLYGEGDL NFSDDSGISGLRNHMTSLNLDLQSQNIYHHGREGSRMNGSRTLTHSISDGQLQGGQSNSE LFQQEPQTAPAQVPQGFNVFGMSSSSGASNSAPHLGFHLGSKGTSSLSQQTPRFNPIMVT LAPNIQTGRNTPTSLHIHGVPPPVLNSPQGNSIYIRPYITTPGGTTRQTQQHSGWVSQFN PMNPQQVYQPSQPGPWTTCPASNPLSHTSSQQPNQQGHQTSHVYMPISSPTTSQPPTIHS SGSSQSSAHSQYNIQNISTGPRKNQIEIKLEPPQRNNSSKLRSSGPRTSSTSSSVNSQTL NRNQPTVYIAASPPNTDELMSRSQPKVYISANAATGDEQVMRNQPTLFISTNSGASAASR NMSGQVSMGPAFIHHHPPKSRAIGNNSATSPRVVVTQPNTKYTFKITVSPNKPPAVSPGV VSPTFELTNLLNHPDHYVETENIQHLTDPTLAHVDRISETRKLSMGSDDAAYTQALLVHQ KARMERLQRELEIQKKKLDKLKSEVNEMENNLTRRRLKRSNSISQIPSLEEMQQLRSCNR QLQIDIDCLTKEIDLFQARGPHFNPSAIHNFYDNIGFVGPVPPKPKDQRSIIKTPKTQDT EDDEGAQWNCTACTFLNHPALIRCEQCEMPRHF

以下展示人類TAB3之例示性序列： SEQ ID NO: 25（UniParc登錄號UPI0000071648） MAQSSPQLDIQVLHDLRQRFPEIPEGVVSQCMLQNNNNLEACCRALSQESSKYLYMEYHS PDDNRMNRNRLLHINLGIHSPSSYHPGDGAQLNGGRTLVHSSSDGHIDPQHAAGKQLICL VQEPHSAPAVVAATPNYNPFFMNEQNRSAATPPSQPPQQPSSMQTGMNPSAMQGPSPPPP PPSYMHIPRYSTNPITVTVSQNLPSGQTVPRALQILPQIPSNLYGSPGSIYIRQTSQSSS GRQTPQSTPWQSSPQGPVPHYSQRPLPVYPHQQNYQPSQYSPKQQQIPQSAYHSPPPSQC PSPFSSPQHQVQPSQLGHIFMPPSPSTTPPHPYQQGPPSYQKQGSHSVAYLPYTASSLSK GSMKKIEITVEPSQRPGTAINRSPSPISNQPSPRNQHSLYTATTPPSSSPSRGISSQPKP PFSVNPVYITYTQPTGPSCTPSPSPRVIPNPTTVFKITVGRATTENLLNLVDQEERSAAP EPIQPISVIPGSGGEKGSHKYQRSSSSGSDDYAYTQALLLHQRARMERLAKQLKLEKEEL ERLKSEVNGMEHDLMQRRLRRVSCTTAIPTPEEMTRLRSMNRQLQINVDCTLKEVDLLQS RGNFDPKAMNNFYDNIEPGPVVPPKPSKKDSSDPCTIERKARRISVTSKVQADIHDTQAA AADEHRTGSTQSPRTQPRDEDYEGAPWNCDSCTFLNHPALNRCEQCEMPRYT

以下展示人類MKK7之例示性序列： SEQ ID NO: 26（UniParc登錄號UPI000012F494） MAASSLEQKLSRLEAKLKQENREARRRIDLNLDISPQRPRPTLQLPLANDGGSRSPSSES SPQHPTPPARPRHMLGLPSTLFTPRSMESIEIDQKLQEIMKQTGYLTIGGQRYQAEINDL ENLGEMGSGTCGQVWKMRFRKTGHVIAVKQMRRSGNKEENKRILMDLDVVLKSHDCPYIV QCFGTFITNTDVFIAMELMGTCAEKLKKRMQGPIPERILGKMTVAIVKALYYLKEKHGVI HRDVKPSNILLDERGQIKLCDFGISGRLVDSKAKTRSAGCAAYMAPERIDPPDPTKPDYD IRADVWSLGISLVELATGQFPYKNCKTDFEVLTKVLQEEPPLLPGHMGFSGDFQSFVKDC LTKDHRKRPKYNKLLEHSFIKRYETLEVDVASWFKDVMAKTESPRTSGVLSQPHLPFFR

以下展示人類IKKα之例示性序列： SEQ ID NO: 27（UniParc登錄號UPI000013D6C7） MERPPGLRPGAGGPWEMRERLGTGGFGNVCLYQHRELDLKIAIKSCRLELSTKNRERWCH EIQIMKKLNHANVVKACDVPEELNILIHDVPLLAMEYCSGGDLRKLLNKPENCCGLKESQ ILSLLSDIGSGIRYLHENKIIHRDLKPENIVLQDVGGKIIHKIIDLGYAKDVDQGSLCTS FVGTLQYLAPELFENKPYTATVDYWSFGTMVFECIAGYRPFLHHLQPFTWHEKIKKKDPK CIFACEEMSGEVRFSSHLPQPNSLCSLVVEPMENWLQLMLNWDPQQRGGPVDLTLKQPRC FVLMDHILNLKIVHILNMTSAKIISFLLPPDESLHSLQSRIERETGINTGSQELLSETGI SLDPRKPASQCVLDGVRGCDSYMVYLFDKSKTVYEGPFASRSLSDCVNYIVQDSKIQLPI IQLRKVWAEAVHYVSGLKEDYSRLFQGQRAAMLSLLRYNANLTKMKNTLISASQQLKAKL EFFHKSIQLDLERYSEQMTYGISSEKMLKAWKEMEEKAIHYAEVGVIGYLEDQIMSLHAE IMELQKSPYGRRQGDLMESLEQRAIDLYKQLKHRPSDHSYSDSTEMVKIIVHTVQSQDRV LKELFGHLSKLLGCKQKIIDLLPKVEVALSNIKEADNTVMFMQGKRQKEIWHLLKIACTQ SSARSLVGSSLEGAVTPQTSAWLPPTSAEHDHSLSCVVTPQDGETSAQMIEENLNCLGHL STIIHEANEEQGNSMMNLDWSWLTE

以下展示人類IKKβ之例示性序列： SEQ ID NO: 28（UniParc登錄號UPI0000033729） MSWSPSLTTQTCGAWEMKERLGTGGFGNVIRWHNQETGEQIAIKQCRQELSPRNRERWCL EIQIMRRLTHPNVVAARDVPEGMQNLAPNDLPLLAMEYCQGGDLRKYLNQFENCCGLREG AILTLLSDIASALRYLHENRIIHRDLKPENIVLQQGEQRLIHKIIDLGYAKELDQGSLCT SFVGTLQYLAPELLEQQKYTVTVDYWSFGTLAFECITGFRPFLPNWQPVQWHSKVRQKSE VDIVVSEDLNGTVKFSSSLPYPNNLNSVLAERLEKWLQLMLMWHPRQRGTDPTYGPNGCF KALDDILNLKLVHILNMVTGTIHTYPVTEDESLQSLKARIQQDTGIPEEDQELLQEAGLA LIPDKPATQCISDGKLNEGHTLDMDLVFLFDNSKITYETQISPRPQPESVSCILQEPKRN LAFFQLRKVWGQVWHSIQTLKEDCNRLQQGQRAAMMNLLRNNSCLSKMKNSMASMSQQLK AKLDFFKTSIQIDLEKYSEQTEFGITSDKLLLAWREMEQAVELCGRENEVKLLVERMMAL QTDIVDLQRSPMGRKQGGTLDDLEEQARELYRRLREKPRDQRTEGDSQEMVRLLLQAIQS FEKKVRVIYTQLSKTVVCKQKALELLPKVEEVVSLMNEDEKTVVRLQEKRQKELWNLLKI ACSKVRGPVSGSPDSMNASRLSQPGQLMSQPSTASNSLPEPAKKSEELVAEAHNLCTLLE NAIQDTVREQDQSFTALDWSWLQTEEEEHSCLEQAS

以下展示人類IKKγ之例示性序列： SEQ ID NO: 29（UniParc登錄號UPI0000000CC4） MNRHLWKSQLCEMVQPSGGPAADQDVLGEESPLGKPAMLHLPSEQGAPETLQRCLEENQE LRDAIRQSNQILRERCEELLHFQASQREEKEFLMCKFQEARKLVERLGLEKLDLKRQKEQ ALREVEHLKRCQQQMAEDKASVKAQVTSLLGELQESQSRLEAATKECQALEGRARAASEQ ARQLESEREALQQQHSVQVDQLRMQGQSVEAALRMERQAASEEKRKLAQLQVAYHQLFQE YDNHIKSSVVGSERKRGMQLEDLKQQLQQAEEALVAKQEVIDKLKEEAEQHKIVMETVPV LKAQADIYKADFQAERQAREKLAEKKELLQEQLEQLQREYSKLKASCQESARIEDMRKRH VEVSQAPLPPAPAYLSSPLALPSQRRSPPEEPPDFCCPKCQYQAPDMDTLQIHVMECIE

IKKγ基因或IKKγ蛋白之失調之非限制性實例描述於例如Courtois及Gilmore，《癌基因》25.51（2006）：6831-6843中。

以下展示人類IkBα之例示性序列： SEQ ID NO: 30（UniParc登錄號UPI000004F0A9） MFQAAERPQEWAMEGPRDGLKKERLLDDRHDSGLDSMKDEEYEQMVKELQEIRLEPQEVP RGSEPWKQQLTEDGDSFLHLAIIHEEKALTMEVIRQVKGDLAFLNFQNNLQQTPLHLAVI TNQPEIAEALLGAGCDPELRDFRGNTPLHLACEQGCLASVGVLTQSCTTPHLHSILKATN YNGHTCLHLASIHGYLGIVELLVSLGADVNAQEPCNGRTALHLAVDLQNPDLVSLLLKCG ADVNRVTYQGYSPYQLTWGRPSTRIQQQLGQLTLENLQMLPESEDEESYDTESEFTEFTE DELPYDDCVFGGQRLTL

以下展示加工成p50之人類p105之例示性序列： SEQ ID NO: 31（UniParc登錄號UPI000000D917） MAEDDPYLGRPEQMFHLDPSLTHTIFNPEVFQPQMALPTDGPYLQILEQPKQRGFRFRYV CEGPSHGGLPGASSEKNKKSYPQVKICNYVGPAKVIVQLVTNGKNIHLHAHSLVGKHCED GICTVTAGPKDMVVGFANLGILHVTKKKVFETLEARMTEACIRGYNPGLLVHPDLAYLQA EGGGDRQLGDREKELIRQAALQQTKEMDLSVVRLMFTAFLPDSTGSFTRRLEPVVSDAIY DSKAPNASNLKIVRMDRTAGCVTGGEEIYLLCDKVQKDDIQIRFYEEEENGGVWEGFGDF SPTDVHRQFAIVFKTPKYKDINITKPASVFVQLRRKSDLETSEPKPFLYYPEIKDKEEVQ RKRQKLMPNFSDSFGGGSGAGAGGGGMFGSGGGGGGTGSTGPGYSFPHYGFPTYGGITFH PGTTKSNAGMKHGTMDTESKKDPEGCDKSDDKNTVNLFGKVIETTEQDQEPSEATVGNGE VTLTYATGTKEESAGVQDNLFLEKAMQLAKRHANALFDYAVTGDVKMLLAVQRHLTAVQD ENGDSVLHLAIIHLHSQLVRDLLEVTSGLISDDIINMRNDLYQTPLHLAVITKQEDVVED LLRAGADLSLLDRLGNSVLHLAAKEGHDKVLSILLKHKKAALLLDHPNGDGLNAIHLAMM SNSLPCLLLLVAAGADVNAQEQKSGRTALHLAVEHDNISLAGCLLLEGDAHVDSTTYDGT TPLHIAAGRGSTRLAALLKAAGADPLVENFEPLYDLDDSWENAGEDEGVVPGTTPLDMAT SWQVFDILNGKPYEPEFTSDDLLAQGDMKQLAEDVKLQLYKLLEIPDPDKNWATLAQKLG LGILNNAFRLSPAPSKTLMDNYEVSGGTVRELVEALRQMGYTEAIEVIQAASSPVKTTSQ AHSLPLSPASTRQQIDELRDSDSVCDSGVETSFRKLSFTESLTSGASLLTLNKMPHDYGQ EGPLEGKI

以下展示人類p65之例示性序列： SEQ ID NO: 32（UniParc登錄號UPI000013ED68） MDELFPLIFPAEPAQASGPYVEIIEQPKQRGMRFRYKCEGRSAGSIPGERSTDTTKTHPT IKINGYTGPGTVRISLVTKDPPHRPHPHELVGKDCRDGFYEAELCPDRCIHSFQNLGIQC VKKRDLEQAISQRIQTNNNPFQVPIEEQRGDYDLNAVRLCFQVTVRDPSGRPLRLPPVLS HPIFDNRAPNTAELKICRVNRNSGSCLGGDEIFLLCDKVQKEDIEVYFTGPGWEARGSFS QADVHRQVAIVFRTPPYADPSLQAPVRVSMQLRRPSDRELSEPMEFQYLPDTDDRHRIEE KRKRTYETFKSIMKKSPFSGPTDPRPPPRRIAVPSRSSASVPKPAPQPYPFTSSLSTINY DEFPTMVFPSGQISQASALAPAPPQVLPQAPAPAPAPAMVSALAQAPAPVPVLAPGPPQA VAPPAPKPTQAGEGTLSEALLQLQFDDEDLGALLGNSTDPAVFTDLASVDNSEFQQLLNQ GIPVAPHTTEPMLMEYPEAITRLVTGAQRPPDPAPAPLGAPGLPNGLLSGDEDFSSIADM DFSALLSQISS

以下展示人類c-Rel之例示性序列： SEQ ID NO: 33（UniParc登錄號UPI000013367B） MASGAYNPYIEIIEQPRQRGMRFRYKCEGRSAGSIPGEHSTDNNRTYPSIQIMNYYGKGK VRITLVTKNDPYKPHPHDLVGKDCRDGYYEAEFGQERRPLFFQNLGIRCVKKKEVKEAII TRIKAGINPFNVPEKQLNDIEDCDLNVVRLCFQVFLPDEHGNLTTALPPVVSNPIYDNRA PNTAELRICRVNKNCGSVRGGDEIFLLCDKVQKDDIEVRFVLNDWEAKGIFSQADVHRQV AIVFKTPPYCKAITEPVTVKMQLRRPSDQEVSESMDFRYLPDEKDTYGNKAKKQKTTLLF QKLCQDHVETGFRHVDQDGLELLTSGDPPTLASQSAGITVNFPERPRPGLLGSIGEGRYF KKEPNLFSHDAVVREMPTGVSSQAESYYPSPGPISSGLSHHASMAPLPSSSWSSVAHPTP RSGNTNPLSSFSTRTLPSNSQGIPPFLRIPVGNDLNASNACIYNNADDIVGMEASSMPSA DLYGISDPNMLSNCSVNMMTTSSDSMGETDNPRLLSMNLENPSCNSVLDPRDLRQLHQMS SSSMSAGANSNTTVFVSQSDAFEGSDFSCADNSMINESGPSNSTNPNSHGFVQDSQYSGI GSMQNEQLSDSFPYEFFQV

如本文所用，術語「與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的癌症」係指與（與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關之）基因、蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調相關或具有該失調的癌症。在一些實施例中，與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的癌症係選自由以下組成之群：JNK1相關癌症、JNK2相關癌症、JNK3相關癌症、MYD88轉錄因子相關癌症、AP-1轉錄因子相關癌症及其組合。與此段落中所描述之特定基因或蛋白「相關」的癌症係指與特定基因、特定蛋白或其中之任何者（例如一者或多者）之表現或活性或含量之失調（例如本文中所描述之特定基因、特定蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調之類型中之任一者）相關或具有該失調的癌症。此類癌症之非限制性實例描述於本文中。

以下展示人類JNK1之例示性序列： SEQ ID NO: 34（UniParc登錄號UPI000012F17A） MSRSKRDNNFYSVEIGDSTFTVLKRYQNLKPIGSGAQGIVCAAYDAILERNVAIKKLSRP FQNQTHAKRAYRELVLMKCVNHKNIIGLLNVFTPQKSLEEFQDVYIVMELMDANLCQVIQ MELDHERMSYLLYQMLCGIKHLHSAGIIHRDLKPSNIVVKSDCTLKILDFGLARTAGTSF MMTPYVVTRYYRAPEVILGMGYKENVDLWSVGCIMGEMVCHKILFPGRDYIDQWNKVIEQ LGTPCPEFMKKLQPTVRTYVENRPKYAGYSFEKLFPDVLFPADSEHNKLKASQARDLLSK MLVIDASKRISVDEALQHPYINVWYDPSEAEAPPPKIPDKQLDEREHTIEEWKELIYKEV MDLEERTKNGVIRGQPSPLGAAVINGSQHPSSSSSVNDVSSMSTDPTLASDTDSSLEAAA GPLGCCR

以下展示人類JNK2之例示性序列： SEQ ID NO: 35（UniParc登錄號UPI000006E3AD） MSDSKCDSQFYSVQVADSTFTVLKRYQQLKPIGSGAQGIVCAAFDTVLGINVAVKKLSRP FQNQTHAKRAYRELVLLKCVNHKNIISLLNVFTPQKTLEEFQDVYLVMELMDANLCQVIH MELDHERMSYLLYQMLCGIKHLHSAGIIHRDLKPSNIVVKSDCTLKILDFGLARTACTNF MMTPYVVTRYYRAPEVILGMGYKENVDIWSVGCIMGELVKGCVIFQGTDHIDQWNKVIEQ LGTPSAEFMKKLQPTVRNYVENRPKYPGIKFEELFPDWIFPSESERDKIKTSQARDLLSK MLVIDPDKRISVDEALRHPYITVWYDPAEAEAPPPQIYDAQLEEREHAIEEWKELIYKEV MDWEERSKNGVVKDQPSDAAVSSNATPSQSSSINDISSMSTEQTLASDTDSSLDASTGPL EGCR

以下展示人類JNK3之例示性序列： SEQ ID NO: 36（UniParc登錄號UPI0000049042） MSLHFLYYCSEPTLDVKIAFCQGFDKQVDVSYIAKHYNMSKSKVDNQFYSVEVGDSTFTV LKRYQNLKPIGSGAQGIVCAAYDAVLDRNVAIKKLSRPFQNQTHAKRAYRELVLMKCVNH KNIISLLNVFTPQKTLEEFQDVYLVMELMDANLCQVIQMELDHERMSYLLYQMLCGIKHL HSAGIIHRDLKPSNIVVKSDCTLKILDFGLARTAGTSFMMTPYVVTRYYRAPEVILGMGY KENVDIWSVGCIMGEMVRHKILFPGRDYIDQWNKVIEQLGTPCPEFMKKLQPTVRNYVEN RPKYAGLTFPKLFPDSLFPADSEHNKLKASQARDLLSKMLVIDPAKRISVDDALQHPYIN VWYDPAEVEAPPPQIYDKQLDEREHTIEEWKELIYKEVMNSEEKTKNGVVKGQPSPSGAA VNSSESLPPSSSVNDISSMSTDQTLASDTDSSLEASAGPLGCCR 式（I）化合物

本文中提供式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（I）其中：各為單鍵或雙鍵； Q為-CH ₂-、O或NH； X為N或C； Y為N或C； Z為N或CR ⁶；其中當X及Y中之一者為N時，X及Y中之另一者為C； n為1、2或3； R ^X為氫或鹵素； R ¹為氫、鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^AR ^B或視情況經1個至3個選自羥基及C1-C3烷氧基之取代基取代之C1-C3烷基； R ²為氫、鹵素、胺基或C1-C3烷基；各R ³獨立地為氘、鹵素、C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基或C1-C3鹵烷基； m為0、1、2或3； R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員至10員雜芳基； R ⁵為苯基或5員至9員雜芳基，其中各R ⁵基團視情況經1個至3個獨立地選自R ⁸之取代基取代； R ⁶為氫、鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^CR ^D及C1-C3烷基；各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、氧環丁基、-NR ^CR ^D、視情況經一個環丙基取代之C1-C3烷基；及視情況經一個C1-C3烷基取代之C3-C7環烷基；各R ⁸獨立地選自：鹵素；氰基；胺基；-N=(S=O)(C1-C3烷基) ₂；-S(=O) _p(C1-C3烷基)；1-氧化1-亞胺基-1-λ ⁶-硫環丁基、-(C=O)NR ^ER ^F；C1-C3烷氧基；視情況經羥基取代之C1-C3鹵烷基；C1-C3鹵烷氧基；視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、胺基、C1-C3鹵烷基、4員至6員雜環基或視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基；視情況經羥基、-NR ^ER ^F或C1-C3烷氧基取代之C1-C4烷基；3員至8員雜環基；及C3-C6環烷氧基； p為1或2；及 R ^A、R ^B、R ^C、R ^D、R ^E及R ^F獨立地為氫、C1-C3烷基、C3-C6環烷基，或R ^A及R ^B、或R ^C及R ^D、或R ^E及R ^F與其所連接之氮原子一起形成視情況經1個至2個鹵素取代之4員至6員雜環基。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（Ia）。

在一些實施例中，Q為-CH ₂-。在一些實施例中，Q為O。在一些實施例中，Q為NH。

在一些實施例中，部分地由X及Y形成之五員含氮環為雜芳環。

在一些實施例中，X為C且Y為C。

在一些實施例中，X為N且Y為C。

在一些實施例中，X為C且Y為N。

在一些實施例中，Z為N。在一些實施例中，Z為CR ⁶。在一些實施例中，Z為CR ⁶，其中R ⁶為氫。

在一些實施例中，X為C；Y為C；且Z為CR ⁶。在一些實施例中，X為N；Y為C；且Z為CR ⁶。在一些實施例中，X為C；Y為N；且Z為CR ⁶。在一些實施例中，X為C；Y為N；且Z為CR ⁶，其中R ⁶為氫。在一些實施例中，X為C；Y為C；且Z為N。在一些實施例中，X為N；Y為C；且Z為N。在一些實施例中，X為C；Y為N；且Z為N。

在一些實施例中，R ⁶為氫。

在一些實施例中，R ⁶為鹵素。舉例而言，R ⁶為氟。舉例而言，R ⁶為氯。在一些實施例中，R ⁶為氰基。在一些實施例中，R ⁶為羥基。

在一些實施例中，R ⁶為C1-C3烷氧基。在一些實施例中，R ⁶為甲氧基或乙氧基。

在一些實施例中，R ⁶為C1-C3鹵烷氧基。在一些實施例中，R ⁶為三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。

在一些實施例中，R ⁶為C1-C3鹵烷基。在一些實施例中，R ⁶為三氟甲基或2,2,2-三氟乙基。

在一些實施例中，R ¹為鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^AR ^B或視情況經1個至3個選自羥基及C1-C3烷氧基之取代基取代之C1-C3烷基。

在一些實施例中，R ¹為鹵素或氰基。在一些實施例中，R ¹為氯或氰基。在一些實施例中，R ¹為氫。在一些實施例中，R ¹為鹵素。在一些實施例中，R ¹為氟或氯。在一些實施例中，R ¹為氟。在一些實施例中，R ¹為氯。在一些實施例中，R ¹為氰基。在一些實施例中，R ¹為羥基。

在一些實施例中，R ¹為C1-C3烷氧基。在一些實施例中，R ¹為甲氧基或乙氧基。

在一些實施例中，R ¹為C1-C3鹵烷氧基。在一些實施例中，R ¹為三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。

在一些實施例中，R ¹為C1-C3鹵烷基。在一些實施例中，R ¹為二氟甲基、三氟甲基或2,2,2-三氟乙基。

在一些實施例中，R ¹為視情況經1個至3個選自羥基及C1-C3烷氧基之取代基取代之C1-C3烷基。

在一些實施例中，R ²為氫。在一些實施例中，R ²為鹵素。在一些實施例中，R ²為氟基。在一些實施例中，R ²為氯基。在一些實施例中，R ²為胺基。在一些實施例中，R ²為C1-C3烷基，諸如甲基。

在一些實施例中，n為1、2或3。在一些實施例中，n為1或2。在一些實施例中，n為2或3。在一些實施例中，n為1或3。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。

在一些實施例中，m為0、1、2或3。在一些實施例中，m為0、1或2。在一些實施例中，m為1、2或3。在一些實施例中，m為0、2或3。在一些實施例中，m為0、1或3。在一些實施例中，m為0或1。在一些實施例中，m為0或2。在一些實施例中，m為0或3。在一些實施例中，m為1或2。在一些實施例中，m為1或3。在一些實施例中，m為2或3。在一些實施例中，m為0。在一些實施例中，m為1。在一些實施例中，m為2。在一些實施例中，m為3。

在一些實施例中，各R ³獨立地為氘、鹵素、C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3鹵烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3鹵烷氧基。

在一些實施例中，各R ³獨立地為鹵素。在一些實施例中，R ³為氟。在一些實施例中，R ³為氯。在一些實施例中，各R ³獨立地為羥基。

在一些實施例中，各R ³獨立地為C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基或C1-C3鹵烷基。

在一些實施例中，各R ³獨立地為C1-C3烷基。舉例而言，R ³為甲基或乙基。在一些實施例中，各R ³獨立地為C1-C3烷氧基。舉例而言，R ³為甲氧基或乙氧基。在一些實施例中，各R ³獨立地為C1-C3鹵烷氧基。舉例而言，R ³為三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。在一些實施例中，各R ³獨立地為C1-C3鹵烷基。舉例而言，各R ³為三氟甲基或2,2,2-三氟乙基。

在一些實施例中，m為1且R ³為甲基或三氟甲基。

在一些實施例中，R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員或6員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之6員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之4H-吡唑基、3H-吡唑基或噻唑基。

在一些實施例中，R ⁴未經取代。舉例而言，R ⁴為未經取代之4H-吡唑基、3H-吡唑基或噻唑基。

在一些實施例中，R ⁴為經一或三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員或6員雜芳基。在其他實施例中，R ⁴為經一個選自R ⁷之取代基取代的5員或6員雜芳基。

在一些實施例中，各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：C1-C3鹵烷基、C1-C3烷基及環烷基。在一些實施例中，R ⁷為甲基、乙基、環丙基或二氟甲基。

在一些實施例中，各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：視情況經一個環丙基取代之C1-C3烷基。

在一些實施例中，各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：視情況經一個C1-C3烷基取代之C3-C7環烷基。在一些實施例中，C3-C7烷基為環丙基。

在一些實施例中，R ⁴為：。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（Ib）。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（Ic）。

在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員至6員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經1個至2個獨立選擇之R ⁸取代。在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員至6員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經2個至3個獨立選擇之R ⁸取代。在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員至6員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代。在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員至6員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經1個R ⁸取代。在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員至6員雜芳基；其中各R ⁸基團視情況經2個獨立選擇之R ⁸取代。在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員至6員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經3個獨立選擇之R ⁸取代。

在一些實施例中，R ⁵為苯基或5員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經1個至3個獨立地選自R ⁸之取代基取代。在一些實施例中，R ⁵為苯基或6員雜芳基；其中各R ⁵基團視情況經1個至3個獨立地選自R ⁸之取代基取代。

在一些實施例中，R ⁵為視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之苯基。在某些實施例中，R ⁵為視情況經1個R ⁸取代之苯基。在某些實施例中，R ⁵為視情況經2個獨立選擇之R ⁸取代之苯基。在某些實施例中，R ⁵為視情況經3個獨立選擇之R ⁸取代之苯基。

在一些實施例中，R ⁵為未經取代之苯基。

在一些實施例中，R ⁵為視情況經1個至3個（例如2個）獨立地選自R ⁸之取代基取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁵為視情況經1個至3個（例如2個）獨立地選自R ⁸之取代基取代之6員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁵為未經取代之5員至6員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁵為經1個至3個獨立地選自R ⁸之取代基取代之5員至6員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁵為未經取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為鹵素。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為氟。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為氯。在一些實施例中，R ⁸中之一者為鹵素。在一些實施例中，R ⁸中之一者為氟。在一些實施例中，R ⁸中之一者為氯。在一些實施例中，R ⁸中之兩者為鹵素。在一些實施例中，R ⁸中之兩者為氟。在一些實施例中，R ⁸中之兩者為氯。在一些實施例中，R ⁸中之三者為鹵素。在一些實施例中，R ⁸中之三者為氟。在一些實施例中，R ⁸中之三者為氯。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為氰基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為胺基。

在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為C1-C3烷氧基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為甲氧基或乙氧基。

在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為視情況經羥基取代之C1-C3鹵烷基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為未經取代之C1-C3鹵烷基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為經羥基取代之C1-C3鹵烷基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為三氟甲基、2,2-二氟乙基或2,2,2-三氟乙基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為1-羥基-2,2-二氟乙基。

在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為C1-C3鹵烷氧基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為三氟甲氧基。

在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、胺基、C1-C3鹵烷基、4員至6員雜環基或視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基、胺基或C1-C3鹵烷基取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸為視情況經視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、C1-C3鹵烷基或視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸為經被羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸為經羥基甲基、胺基甲基、羥基乙基、胺基乙基、丙-2-醇或丙-2-胺取代之5員至6員雜芳基。在一些實施例中，R ⁸中之至少一者為視情況經4員至6員雜環基取代之5員至6員雜芳基。

在一些實施例中，R ⁵為吡啶基、嘧啶基、吡基、吡咯基或咪唑基；其中之各者經兩個R ⁸取代：一個R ⁸為三唑基、咪唑基、唑基、吡唑基或吡咯啶基；且另一R ⁸為甲基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氯或氰基。在一些實施例中，R ⁵為吡啶基、嘧啶基或吡基；其中之各者經兩個R ⁸取代：一個R ⁸為三唑基、咪唑基、唑基、吡唑基或吡咯啶基；且另一R ⁸為甲基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氯或氰基。在一些實施例中，R ⁵為經兩個R ⁸取代之吡啶基，一個R ⁸為三唑基、咪唑基或唑基；且另一R ⁸為甲基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氯或氰基。

在一些實施例中，R ⁵為經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代的3-吡啶基或4-吡啶基。

在一些實施例中，R ⁵經兩個R ⁸取代，其中一個R ⁸選自由以下組成之群：氰基、氟、氯、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基，且另一R8選自由以下組成之群：1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1,2,3-三唑-1-基、4-胺基-1,2,3-三唑-2-基、5-氰基-1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-1-基、3-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-甲基-1,2,4-三唑-1-基、5-胺基-1,2,4-三唑-1-基、1-甲基-5-胺基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-4-酮-2-基、四唑-5-基、2-甲基-四唑-5-基、1-甲基-四唑-5-基、咪唑-1-基、1-甲基-咪唑-3-基、1-甲基-5-胺基-咪唑-3-基、3-甲基咪唑-2-酮-1-基、1-甲基-吡唑-3-基、1-甲基-吡唑-4-基、1-甲基-吡唑-5-基、吡咯-1-基、噻唑-2-基、異噻唑啶-2-基-1,1-二氧化物、吡咯啶-2-酮-1-基、唑-2-基、二唑-2-基、2-胺基-嘧啶-4-基、-(C=O)4-甲基哌 -1-基、2-側氧基吖呾-1-基、吖呾-1-基、-(C=O)N(CH ₃) ₂、-(C=O)NHCH ₃、-(C=O)NHCH ₂CH ₃、-(C=O)NH環丙基、-(C=O)(3,3-二氟吖呾-1-基)、2-羥基丙-2-基、1-羥基乙基、二甲基(側氧基)-λ ⁶-硫烷亞基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、甲基、氰基。

在一些實施例中，R ⁵為：。

在一些實施例中，R ^X為氫。在一些實施例中，R ^X為鹵素。在一些實施例中，R ^X為氟基。在一些實施例中，R ^X為氯。

在一些實施例中，R ^A、R ^B、R ^C、R ^D、R ^E及R ^F獨立地為氫或C1-C3烷基。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（Id）。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（Ie）。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（If）。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：（Ig）。表 1.代表性實例包括以下：

實例編號	結構
1（第一溶離異構物）* 2（第二溶離異構物）*
3
4（第一溶離異構物）* 5（第二溶離異構物）*
6（第一溶離異構物）* 7（第二溶離異構物）*
8（第二溶離異構物）* 9（第一溶離異構物）*
10（第一溶離異構物）* 11（第二溶離異構物）*
12（第二溶離異構物）* 13（第一溶離異構物）*
14（第二溶離異構物）* 15（第一溶離異構物）*
16（第二溶離異構物）* 17（第一溶離異構物）*
18（第一溶離異構物）* 19（第二溶離異構物）*
20（第二溶離異構物）* 21（第一溶離異構物）*
22（第二溶離異構物）* 23（第一溶離異構物）*
24（第二溶離異構物）* 25（第一溶離異構物）*
26（第二溶離異構物）* 27（第一溶離異構物）*
28（第二溶離異構物）* 29（第一溶離異構物）*
30（第二溶離異構物）* 31（第一溶離異構物）*
32（第二溶離異構物）* 33（第一溶離異構物）*
34（第一溶離異構物）* 35（第二溶離異構物）*
36（第二溶離異構物）* 37（第一溶離異構物）*
38（第一溶離異構物）* 39（第二溶離異構物）*
40（第二溶離異構物）* 41（第一溶離異構物）*
42（第二溶離異構物）* 43（第一溶離異構物）*
44（第二溶離異構物）* 45（第一溶離異構物）*
46（第一溶離異構物）* 47（第二溶離異構物）*
48（第二溶離異構物）* 49（第一溶離異構物）*
50（第二溶離異構物）* 51（第一溶離異構物）*
52（第二溶離異構物）* 53（第一溶離異構物）*
54（第二溶離異構物）* 55（第一溶離異構物）*
56（第二溶離異構物）* 57（第一溶離異構物）*
58（第二溶離異構物）* 59（第一溶離異構物）*
60（第二溶離異構物）* 61（第一溶離異構物）*
62（第一溶離異構物）* 63（第二溶離異構物）*
64（第二溶離異構物）* 65（第一溶離異構物）*
66（第二溶離異構物）* 67（第一溶離異構物）*
68（第二溶離異構物）* 69（第一溶離異構物）*
70（第二溶離異構物）* 71（第一溶離異構物）*
72（第二溶離異構物）* 73（第一溶離異構物）*
74（第一溶離異構物）* 75（第二溶離異構物）*
76（第二溶離異構物）* 77（第一溶離異構物）*
78（第一溶離異構物）* 79（第二溶離異構物）*
80（第二溶離異構物）* 81（第一溶離異構物）*
82（第二溶離異構物）* 83（第一溶離異構物）*
84（第二溶離異構物）* 85（第一溶離異構物）*
86（第二溶離異構物）* 87（第一溶離異構物）*
88（第二溶離異構物）* 89（第一溶離異構物）*
90（第二溶離異構物）* 91（第一溶離異構物）*
92（第二溶離異構物）* 93（第一溶離異構物）*
94（第二溶離異構物）* 95（第一溶離異構物）*
96及 97
98（第二溶離異構物）* 99（第一溶離異構物）*
100（第二溶離異構物）* 101（第一溶離異構物）*
102（第二溶離異構物）* 103（第一溶離異構物）*
104（第二溶離異構物）* 105（第一溶離異構物）*
106、 107、 108及 109（多重分離方法）*
110（第二溶離異構物）* 111（第一溶離異構物）*
112（第二溶離異構物）* 113（第一溶離異構物）*
114及 115
116及 117
118（第一溶離異構物）* 119（第二溶離異構物）*
120（第一溶離異構物）* 121（第二溶離異構物）*
122（第一溶離異構物）* 123（第二溶離異構物）*
124（第一溶離異構物）* 125（第二溶離異構物）*
126（第二溶離異構物）* 127（第一溶離異構物）*
128（第二溶離異構物）* 129（第一溶離異構物）*
130（第一溶離異構物）* 131（第二溶離異構物）*
132及 133
134及 135
136（第二溶離異構物）* 137（第一溶離異構物）*
138（第一溶離異構物）* 139（第二溶離異構物）*
140（第二溶離異構物）* 141（第一溶離異構物）*
142（第二溶離異構物）* 143（第一溶離異構物）*
144（第二溶離異構物）* 145（第一溶離異構物）*
146（第一溶離異構物）* 147（第二溶離異構物）*
148（第二溶離異構物）* 149（第一溶離異構物）*
150（第一溶離異構物）* 151（第二溶離異構物）*
152（第二溶離異構物）* 153（第一溶離異構物）*
154（第一溶離異構物）* 155（第二溶離異構物）*
156（第二溶離異構物）* 157（第一溶離異構物）*
158（第二溶離異構物）* 159（第一溶離異構物）*
160（第一溶離異構物）* 161（第二溶離異構物）*
162及 163
164（第二溶離異構物）* 165（第一溶離異構物）*
166（第二溶離異構物）* 167（第一溶離異構物）*
168（第二溶離異構物）* 169（第一溶離異構物）*
170
171（第二溶離異構物）* 172（第一溶離異構物）*
173（第二溶離異構物）* 174（第一溶離異構物）*
175（第二溶離異構物）* 176（第一溶離異構物）*
177（第二溶離異構物）* 178（第一溶離異構物）*
179（第一溶離異構物）* 180（第二溶離異構物）*
181（第一溶離異構物）* 182（第二溶離異構物）*
183及 184
185（第二溶離異構物）* 186（第一溶離異構物）*
187（第二溶離異構物）* 188（第一溶離異構物）*
189（第二溶離異構物）* 190（第一溶離異構物）*
191（第一溶離異構物）* 192（第二溶離異構物）*
193及 194
195及 196

*關於異構物分離細節參見實驗程序。各分離異構物之絕對立體化學未確定。製備製程

本文中提供一種製備式（I）化合物（例如，本文中所描述之任何化合物）的製程，其包含：使式（Ih）化合物：（Ih）與R ⁵-NH ₂反應；以形成該式（I）化合物。

在一些實施例中，式（Ih）化合物與R ⁵-NH ₂（例如5-氯-6-(三唑基)吡啶-3-胺）之反應係在POCl ₃及吡啶存在下進行。

在一些實施例中，式（Ih）化合物與R ⁵-NH ₂之反應係在六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基氯甲脒（TCFH）存在下進行。

在一些實施例中，式（Ih）化合物與R ⁵-NH ₂之反應係在N-甲基咪唑（NMI）存在下進行。

在一些實施例中，式（Ih）化合物係由式（Ih-N）化合物製備：。

在一些實施例中（當式（Ih）化合物由式（Ih-N）化合物製備時），該製程包含使式（Ih-N-i）化合物：與式（Ih-N-ii）化合物反應：以形成式（Ih-N）化合物。

在某些實施例中，式（Ih-N-i）化合物與式（Ih-N-ii）化合物之反應係在酸存在下進行。

在某些此等實施例中，酸係選自由鹽酸及乙酸組成之群。

本文中提供一種製備式（I）化合物（例如，本文中所描述之任何化合物）的製程，其包含：使式（Ij）化合物：；與R ⁵-Hal反應，其中Hal選自由以下組成之群：Cl、Br、I及OSO ₂CF ₃；以形成該式（I）化合物。

在一些實施例中，式（Ij）化合物與R ⁵-Hal之反應係在催化劑及配位體存在下進行。

在一些實施例中（當式（Ij）化合物與R ⁵-Hal之反應係在催化劑及配位體存在下進行時），催化劑為參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)。

在一些實施例中（當式（Ij）化合物與R ⁵-Hal之反應係在催化劑及配位體存在下進行時），配位體為4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基。

在一些實施例中，式（Ij）化合物係由式（Ih-N）化合物製備：。

在一些實施例中，製程包含使式（Ih-N-i）化合物：與式（Ih-N-ii）化合物反應：以形成式（Ih-N）化合物。

在一些實施例中，式（Ih-N-i）化合物與式（Ih-N-ii）化合物之反應係在酸存在下進行。

在一些實施例中（當式（Ih-N-i）化合物與式（Ih-N-ii）化合物之反應係在酸存在下進行時），酸係選自由鹽酸及乙酸組成之群。治療方法

一些實施例提供一種治療需要此類治療之個體之自體免疫病症（例如，MALT1相關自體免疫病症）的方法，該方法包含向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物。在一些實施例中，自體免疫病症為類風濕性關節炎、多發性硬化症或全身性紅斑狼瘡（SLE）。

一些實施例提供一種治療需要此類治療之個體之發炎病症（例如，MALT1相關發炎病症）的方法，該方法包含向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物。在一些實施例中，發炎病症為慢性移植體對抗宿主疾病（cGVHD）。

一些實施例提供一種治療需要此類治療之個體之癌症（例如，MALT1相關癌症）的方法，該方法包含向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物。舉例而言，本文中提供治療需要此類治療之個體之MALT1相關癌症的方法，該方法包含a）偵測來自個體之樣品中之MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調；及b）投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調包括一種或多種融合蛋白。

在本文中所描述的方法或用途中之任一者的一些實施例中，癌症（例如，MALT1相關癌症）為血液癌症。在本文中所描述的方法或用途中之任一者的一些實施例中，癌症（例如，MALT1相關癌症）為實體腫瘤。在本文中所描述的方法或用途中之任一者的一些實施例中，癌症（例如，MALT1相關癌症）為肺癌（例如，小細胞肺癌或非小細胞肺癌）、甲狀腺癌（例如，乳頭狀甲狀腺癌、髓質甲狀腺癌（例如，偶發性髓質甲狀腺癌或遺傳性髓質甲狀腺癌）、分化甲狀腺癌、復發性甲狀腺癌或難治性分化甲狀腺癌）、甲狀腺腺瘤、內分泌腺贅瘤、肺腺癌、細支氣管肺細胞癌瘤、2A或2B型多發性內分泌瘤（分別為MEN2A或MEN2B）、嗜鉻細胞瘤、副甲狀腺增生、乳癌、乳房癌、乳房癌瘤、乳房贅瘤、大腸直腸癌（colorectal cancer）（例如，轉移性大腸直腸癌）、乳頭狀腎細胞癌、胃腸黏膜之神經節瘤病、發炎性肌纖維母細胞瘤，或子宮頸癌。在本文中所描述的方法或用途中之任一者的一些實施例中，癌症（例如，MALT1相關癌症）係選自以下群：急性淋巴母細胞性白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、青少年癌症、腎上腺皮質癌、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、非典型畸胎樣/橫紋肌樣腫瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦幹神經膠質瘤、腦腫瘤、乳癌、支氣管腫瘤、伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma）、類癌瘤、未知原發癌、心臟腫瘤、子宮頸癌、幼年期癌症、脊索瘤、慢性淋巴球性白血病（CLL）、慢性骨髓性白血病（CML）、慢性骨髓增生性贅瘤、贅瘤部位、贅瘤、大腸癌、大腸直腸癌、顱咽管瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、皮膚血管肉瘤、膽管癌、乳腺管原位癌、胚胎腫瘤、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、敏感性神經胚細胞瘤、尤文氏肉瘤（Ewing sarcoma）、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、肝外膽管癌、眼癌、輸卵管癌、骨骼纖維組織細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸類癌瘤、胃腸基質腫瘤（GIST）、生殖細胞腫瘤、妊娠期滋養細胞疾病、神經膠質瘤、毛細胞腫瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、胸部贅瘤、頭頸部贅瘤、CNS腫瘤、原發CNS腫瘤、心臟癌、肝細胞癌、組織細胞增多症、霍奇金氏淋巴瘤（Hodgkin's lymphoma）、下咽癌、眼內黑色素瘤、胰島細胞瘤、胰臟神經內分泌腫瘤、卡波西肉瘤（Kaposi sarcoma）、腎癌、蘭格漢氏細胞組織細胞增多症（Langerhans cell histiocytosis）、喉癌、白血病、唇及口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、骨骼惡性纖維組織細胞瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌（Merkel cell carcinoma）、間皮瘤、轉移性鱗狀頸癌、中線癌、口腔癌、多發性內分泌瘤症候群、多發性骨髓瘤、蕈樣黴菌病、骨髓發育不良症候群、骨髓發育不良/骨髓增生性贅瘤、贅瘤部位、贅瘤、骨髓性白血病、骨髓白血病、多發性骨髓瘤、骨髓增生性贅瘤、鼻腔及鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphoma）、非小細胞肺癌、肺贅瘤、肺癌、肺贅瘤、呼吸道贅瘤、支氣管癌、支氣管贅瘤、口癌、口腔癌、唇癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳頭狀瘤症、副神經節瘤、副鼻竇及鼻腔癌、副甲狀腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、腦垂體癌、漿細胞贅瘤、胸膜肺母細胞瘤、妊娠相關乳癌、原發中樞神經系統淋巴瘤、原發性腹膜癌、前列腺癌、直腸癌、大腸癌、大腸贅瘤、腎細胞癌、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞紮萊症候群（Sezary syndrome）、皮膚癌、施皮茨腫瘤（Spitz tumors）、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、鱗狀頸癌、胃癌、T細胞淋巴瘤、睪丸癌、咽喉癌、胸腺瘤及胸腺癌、甲狀腺癌、腎盂之移行細胞癌症、未知原發癌瘤、尿道癌、子宮癌、子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌及威爾姆斯氏腫瘤（Wilms' tumor）。

在一些實施例中，癌症為血液癌症，諸如白血病或淋巴瘤。在一些實施例中，血液癌症（例如，為MALT1相關癌症之血液癌症）係選自由以下組成之群：白血病、淋巴瘤（非霍奇金氏淋巴瘤）、霍奇金氏疾病（亦稱為霍奇金氏淋巴瘤）及骨髓瘤，例如急性淋巴球性白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、急性前髓細胞性白血病（APL）、慢性淋巴球性白血病（CLL）、慢性骨髓性白血病（CML）、慢性骨髓單核球性白血病（CMML）、慢性嗜中性白血球性白血病（CNL）、急性未分化白血病（AUL）、多形性大細胞淋巴瘤（ALCL）、前淋巴球性白血病（PML）、青少年骨髓單核球性白血病（JMML）、成年T細胞ALL、AML伴三系骨髓發育不良（AML/TMDS）、混合系白血病（MLL）、骨髓發育不良症候群（MDS）、骨髓增生病症（MPD）及多發性骨髓瘤（MM）。血液癌症之額外實例包括骨髓增生病症（MPD），諸如真性紅血球增多症（PV）、原發血小板減少症（ET）及特發性原發骨髓纖維化（IMF/IPF/PMF）。在一些實施例中，血液癌症（例如，為MALT1相關癌症之血液癌症）為AML或CMML。

在一些實施例中，癌症為神經膠母細胞瘤、慢性骨髓性白血病、骨髓白血病或非霍奇金氏淋巴瘤。

在一些實施例中，癌症為非霍奇金氏淋巴瘤。在其他實施例中，癌症為瀰漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）。在其他實施例中，癌症為活化B細胞瀰漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）。在其他實施例中，癌症為套細胞淋巴瘤（MCL）。在其他實施例中，癌症為邊緣區淋巴瘤（MZL）。在其他實施例中，癌症為慢性淋巴性白血病（CLL）。在其他實施例中，癌症為成熟B細胞贅瘤。

在一些實施例中，癌症為T細胞急性淋巴母細胞白血病。

在一些實施例中，癌症（例如，MALT1相關癌症）為實體腫瘤。實體腫瘤（例如，為MALT1相關癌症之實體腫瘤）之實例包括例如肺癌（例如，肺腺癌瘤、小細胞肺癌瘤）、胰臟癌、胰管癌瘤、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、前列腺癌、腎細胞癌瘤、神經母細胞瘤及黑色素瘤。參見例如Jiang等人，《癌症研究》2011年，71，2183-2192；亦參見Pan等人，《分子癌症研究》2016年，14，93-102及Penas等人，《血液》2010年，115，2214-2219。

在一些實施例中，個體為人類。

式（I）化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可用於治療MALT1相關癌症。式（I）化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可用於治療MALT1相關自體免疫病症。式（I）化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可用於治療MALT1相關發炎疾病。

因此，本文中亦提供一種用於治療經診斷患有或鑑別為患有MALT1相關癌症（例如，本文中所揭示之例示性MALT1相關癌症中之任一者）之個體的方法，其包含向個體投與有效量之如本文中所定義之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物。

在本文所提供之方法中之任一者之一些實施例中，式（I）化合物選自實例1-196。

MALT1蛋白酶、MALT1基因或其中之任何者（例如，一者或多者）之表現或活性或含量之失調可能造成腫瘤發生。舉例而言，與野生型MALT1蛋白相比，融合蛋白可具有增加之蛋白酶活性，由於異常細胞信號傳導及/或失調之自分泌/旁分泌信號傳導（例如，與對照非癌細胞相比），哺乳動物細胞中野生型MALT1蛋白酶的表現增加（例如，含量增加），MALT1 mRNA剪接變異體亦可導致MALT1失調。

在一些範疇中，本文中提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包括向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文中亦提供一種治療有需要之個體之CBM複合體路徑相關癌症（諸如本文中所揭示的CBM複合體路徑相關癌症中之任一者）的方法，其包括向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。亦提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包括（a）將該癌症鑑別為CBM複合體路徑相關癌症；及（b）向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

將個體之癌症鑑別為癌症鑑別為CBM複合體路徑相關癌症可藉由任何適當方法進行。在一些實施例中，將個體之癌症鑑別為CBM複合體路徑相關癌症的步驟包括進行分析以偵測來自個體之樣品中之CBM複合體路徑相關基因、CBM複合體路徑相關蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，該方法進一步包括獲得來自個體之樣品（例如生檢樣品）。分析可為任何適當分析。在一些實施例中，分析係選自由以下組成之群：定序（例如焦磷酸定序或次世代定序）、免疫組織化學、酶聯免疫吸附分析及螢光原位雜交（FISH）。

本文中亦提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包括向個體向鑑別為患有CBM複合體路徑相關癌症的個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

本文亦提供一種治療個體中之MALT1相關癌症之方法，其包括向經鑑別或診斷為患有MALT1相關癌症之個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文中亦提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包括：（a）確定該癌症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關；及（b）向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

確定該癌症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關可使用任何適當方法來進行。在一些實施例中，確定個體之癌症為MALT1相關癌症之步驟包括：進行分析以偵測來自個體之樣品中之MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，該方法進一步包括獲得來自個體之樣品（例如生檢樣品）。分析可為任何適當分析。在一些實施例中，分析係選自由以下組成之群：定序（例如焦磷酸定序或次世代定序）、免疫組織化學、酶聯免疫吸附分析及螢光原位雜交（FISH）。

如本文中所描述，CBM複合體路徑相關癌症可為任何適當CBM複合體路徑相關癌症（諸如本文中所描述之CBM複合體路徑相關癌症中之任一者）。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關癌症係選自由以下組成之群：CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症、與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的癌症、CBM複合體之組分相關癌症、MALT1蛋白酶受質相關癌症、與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症、與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的癌症，及其組合。在一些實施例中，CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症係選自由以下組成之群：CD28相關癌症、BCR相關癌症、HER1相關癌症、HER2相關癌症及其組合。在一些實施例中，與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的癌症為蛋白激酶C β（PKCβ）相關癌症、蛋白激酶C θ（PCKθ）相關癌症，或其組合。在一些實施例中，CBM複合體之組分相關癌症係選自由以下組成之群：MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、CARD14相關癌症、CARD10相關癌症、CARD9相關癌症、BCL10相關癌症，及其組合。在一些實施例中，CBM複合體之組分相關癌症係選自由以下組成之群：MALT1相關癌症、CARD11相關癌症、BCL10相關癌症，及其組合。關於MALT1、CARD11及BCL10之例示性失調參見例如表B1、表B2及表B3。在一些實施例中，MALT1蛋白酶受質相關癌症係選自由以下組成之群：BCL10相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症、RelB相關癌症、Regnase 1相關癌症、roquin-1相關癌症、HOIL1相關癌症、NIK相關癌症、LIMA1α相關癌症及其組合。在一些實施例中，MALT1蛋白酶受質相關癌症係選自由以下組成之群：BCL10相關癌症、A20相關癌症、CYLD相關癌症，及其組合。關於BCL10及A20之例示性失調參見例如表B3及表B4。在一些實施例中，與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症係選自由以下組成之群：TAK1相關癌症、TRAF6相關癌症、TAB1相關癌症、TAB2相關癌症、TAB3相關癌症、MKK7相關癌症、IKKα相關癌症、IKKβ相關癌症、IKKγ相關癌症、IkBα相關癌症、p50相關癌症、p65（RelA）相關癌症、c-Rel相關癌症及其組合。在一些實施例中，與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的癌症為IKKγ相關癌症。在一些實施例中，與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的癌症係選自由以下組成之群：JNK1相關癌症、JNK2相關癌症、JNK3相關癌症、MYD88轉錄因子相關癌症、AP-1轉錄因子相關癌症及其組合。

在一些實施例中，CBM複合體路徑相關癌症為MALT1相關癌症。MALT1相關癌症可具有任何適當失調，諸如本文中所描述之失調中之任一者。在一些實施例中，MALT1相關癌症包含IAP2-MALT1融合。在一些實施例中，MALT1相關癌症包含IGH-MALT1融合。

本文中亦提供治療CBM複合體路徑相關疾病或病症、自體免疫病症及發炎病症的方法。因此，本文中提供一種治療有需要之個體之自體免疫病症的方法，其包括向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文中亦提供一種治療個體之MALT1相關自體免疫病症的方法，其包括向鑑別或診斷為患有MALT1相關自體免疫病症的個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些情況下，本文中提供一種治療有需要之個體之自體免疫病症的方法，其包括：（a）確定該自體免疫病症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關；及（b）向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文中亦提供一種治療個體之MALT1相關自體免疫病症的方法，其包括向確定為患有MALT1相關自體免疫病症的個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。此外，本文中提供一種治療有需要之個體之發炎病症的方法，其包括向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些情況下，本文中提供一種治療個體之MALT1相關發炎病症的方法，其包括向鑑別或診斷為患有MALT1相關發炎病症的個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文中亦提供一種治療有需要之個體之發炎病症的方法，其包括：（a）確定該發炎病症與MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調相關；及（b）向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本文中亦提供一種治療個體之MALT1相關發炎病症的方法，其包括向確定為患有MALT1相關發炎病症的個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

另外本文中提供一種治療有需要之個體之CBM複合體路徑相關疾病或病症的方法，其包括向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。亦提供一種治療有需要之個體之疾病或病症的方法，其包括：（a）將該癌症鑑別為CBM複合體路徑相關疾病或病症；及（b）向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。此外，本文中提供一種治療有需要之個體之疾病或病症的方法，其包括：向個體向鑑別為患有CBM複合體路徑相關疾病或病症的個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

CBM複合體路徑相關疾病或病症可為任何適當CBM複合體路徑相關疾病或病症，諸如本文中所描述之CBM複合體路徑相關疾病或病症中之任一者。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為自體免疫疾病。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為發炎疾病。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關癌症係選自由以下組成之群：CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症、與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的疾病或病症、CBM複合體之組分相關癌症、MALT1蛋白酶受質相關癌症、與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的疾病或病症、與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的疾病或病症，及其組合。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為MALT1相關疾病或病症。

在一些情況下，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用於抑制細胞之過程，諸如抑制細胞之增殖。因此，本文中提供一種抑制哺乳動物細胞增殖的方法，其包括使哺乳動物細胞與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。本文中亦提供一種抑制哺乳動物細胞中CBM複合體路徑活性的方法，其包括使哺乳動物細胞與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。本文中亦提供一種抑制哺乳動物細胞中MALT1蛋白酶活性的方法，其包括使哺乳動物細胞與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。在一些實施例中，接觸在活體內進行。在一些實施例中，接觸在活體外進行。哺乳動物細胞可為任何適當細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為哺乳動物CBM複合體路徑相關癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為哺乳動物MALT1相關癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞具有MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調為IAP2-MALT1融合、IGH-MALT1融合，或其組合。

式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可用於藥劑之製造。因此，本文中提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽在用於治療CBM複合體路徑相關疾病或病症之藥劑之製造中之用途。CBM複合體路徑相關疾病或病症可為任何適當CBM複合體路徑相關疾病或病症，諸如本文中所描述之CBM複合體路徑相關疾病或病症。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症係選自由以下組成之群：CBM複合體路徑細胞表面受體相關癌症、與細胞表面受體與CBM複合體之間的信號轉導子相關的疾病或病症、CBM複合體之組分相關癌症、MALT1蛋白酶受質相關癌症、與CBM複合體下游之NF-κB路徑的組分相關的疾病或病症、與CBM複合體下游之JNK路徑的組分相關的疾病或病症，及其組合。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為CBM複合體路徑相關自體免疫病症。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為CBM複合體路徑相關發炎病症。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為CBM複合體路徑相關癌症。在一些實施例中，CBM複合體路徑相關疾病或病症為MALT1相關疾病或病症。在一些實施例中，MALT1相關疾病或病症包含MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調為IAP2-MALT1融合、IGH-MALT1融合，或其組合。

在一些實施例中，本文中所提供之化合物呈現腦及/或中樞神經系統（CNS）通透性。此類化合物能夠穿越血腦障壁且抑制腦及/或其他CNS結構中之MALT1蛋白酶。在一些實施例中，本文中所提供之化合物能夠以有效量穿越血腦障壁。舉例而言，治療患有癌症（例如，MALT1相關癌症，諸如MALT1相關腦或CNS癌症）之個體可包括向個體投與（例如，經口投與）化合物。在一些此類實施例中，本文中所提供之化合物適用於治療原發性腦腫瘤或轉移性腦腫瘤。舉例而言，化合物可用於治療以下中之一者或多者：神經膠質瘤，諸如神經膠母細胞瘤（亦稱為多形性神經膠母細胞瘤）、星形細胞瘤、寡突神經膠質細胞瘤、室管膜瘤，及混合型神經膠質瘤、腦膜瘤、神經管胚細胞瘤、神經節神經膠質瘤、許旺細胞瘤（schwannomas）（神經鞘瘤），及顱咽管瘤（參見例如Louis, D.N.等人，《神經病理學學報（ Acta Neuropathol）》131（6），803-820（2016年6月）中所列舉的腫瘤）。在一些實施例中，腦腫瘤為原發性腦腫瘤。在一些實施例中，個體先前已用另一抗癌劑（例如，另一蛋白酶抑制劑（例如，不為式（I）化合物之化合物））治療。在一些實施例中，腦腫瘤為轉移性腦腫瘤。在一些實施例中，個體先前已用另一抗癌劑（例如，另一蛋白酶抑制劑（例如，不為式（I）化合物之化合物））治療。

在本文中所描述的方法或用途中之任一者之一些實施例中，使用來自個體之樣品的用於確定個體是否具有基因（例如MALT1基因）或蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的分析可包括例如次世代定序、免疫組織化學、螢光顯微法、分離FISH分析、南方墨點法（Southern blotting）、西方墨點法（Western blotting）、FACS分析、北方墨點法（Northern blotting）及基於PCR之擴增（例如，RT-PCR及定量即時RT-PCR）。如此項技術中熟知的，通常用例如至少一種經標記之核酸探針或至少一種經標記之抗體或其抗原結合片段進行分析法。分析可利用此項技術中已知之其他偵測方法來偵測基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，樣品為來自個體之生物樣品或生檢樣品（例如，石蠟包埋之生檢樣品）。在一些實施例中，個體為懷疑患有MALT1相關癌症的個體、具有MALT1相關癌症之一種或多種症狀的個體，及/或具有增加之罹患MALT1相關癌症的風險的個體）。

在一些實施例中，可使用液體生檢（不同地稱為流體生檢或流體相生檢）來鑑別基因（例如MALT1基因）、MALT1蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。液體生檢方法可用於偵測總腫瘤負荷及/或基因（例如MALT1蛋白質）、MALT1蛋白質（例如MALT 1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。液體生檢可以對相對容易地自個體獲得（例如經由簡單抽血）的生物樣品執行且侵入性通常小於用以偵測腫瘤負荷及/或基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的傳統方法。在一些實施例中，液體生檢可用於在比傳統方法更早的階段偵測基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的存在。在一些實施例中，用於液體生檢之生物樣品可包括血液、血漿、尿液、腦脊髓液、唾液、痰液、支氣管肺泡灌洗物、膽汁、淋巴液、囊內液、糞便、腹水及其組合。在一些實施例中，液體生檢可用於偵測循環腫瘤細胞（CTC）。在一些實施例中，液體生檢可用於偵測游離DNA。在一些實施例中，使用液體生檢偵測的游離DNA為來源於腫瘤細胞之循環腫瘤DNA（ctDNA）。ctDNA之分析（例如，使用靈敏偵測技術，諸如但不限於次世代定序（NGS）、傳統PCR、數位PCR或微陣列分析）可用於鑑別基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。

在一些實施例中，可使用液體生檢偵測到來源於單一基因的ctDNA。在一些實施例中，可使用液體生檢偵測到來源於複數個基因（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多個，或此等數目之間的任何數目個基因）的ctDNA。在一些實施例中，可使用各種可商購測試小組（例如，經設計以偵測基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的可商購測試小組）中之任一者來偵測到來源於複數個基因的ctDNA。液體生檢可用於偵測基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調，包括但不限於點突變或單核苷酸變異體（SNV）、拷貝數變異體（CNV）、基因融合物（例如，易位或重排）、插入、缺失或其任何組合。在一些實施例中，液體生檢可用於偵測生殖系突變。在一些實施例中，液體生檢可用於偵測體細胞突變。在一些實施例中，液體生檢可用於偵測原發基因突變（例如，與疾病（例如癌症）之初始產生相關的原發突變或原發融合體）。在一些實施例中，使用液體生檢來鑑別之基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調亦存在於癌細胞中（例如，腫瘤中），該癌細胞存在於個體中。在一些實施例中，可使用液體生檢來偵測本文所描述之基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調的類型中之任一者。在一些實施例中，經由液體生檢鑑別的基因突變可用於鑑別個體為特定治療之候選者。舉例而言，偵測到個體中基因（例如MALT1基因）、蛋白質（例如MALT1蛋白質）或其中之任何者之表現或活性或含量之失調可指示個體將對包括投與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽之治療有反應。

液體生檢可在診斷過程、監測過程及/或治療過程期間多次進行，以測定一個或多個臨床相關參數，包括但不限於疾病之進展及/或治療之功效。舉例而言，在診斷過程、監測過程及/或治療過程期間，可在第一時間點進行第一液體生檢且可在第二時間點進行第二液體生檢。在一些實施例中，第一時間點可為診斷個體患有疾病之前的時間點（例如當個體健康時），且第二時間點可為個體已出現疾病之後的時間點（例如第二時間點可用於診斷個體患有疾病）。在一些實施例中，第一時間點可為診斷個體患有疾病之前的時間點（例如當個體健康時），此後監測個體，且第二時間點可為監測個體之後的時間點。在一些實施例中，第一時間點可為診斷個體患有疾病之後的時間點，其後向個體投與治療，且第二時間點可為在投與治療之後的時間點；在此類情況下，第二時間點可用於評估治療功效（例如在第一時間點偵測到之基因突變的豐度是否降低或不可偵測）。在一些實施例中，待向個體投與之治療可包括式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽之功效可藉由評估在不同時間點自個體獲得之cfDNA（例如在第一時間點自個體獲得之cfDNA及在第二時間點自個體獲得之cfDNA）中基因（例如MALT1基因）之失調的對偶基因頻率來確定，其中在第一時間點與第二時間點之間向該個體投與至少一次劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。此等方法之一些實施例可進一步包括在第一時間點與第二時間點之間向個體投與至少一次劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。舉例而言，與在第一時間點自個體獲得之cfDNA中基因（例如MALT1基因）之失調的對偶基因頻率（AF）相比，在第二時間點自個體獲得之cfDNA中基因（例如MALT1基因）之失調的對偶基因頻率（AF）之降低（例如1%至約99%之降低、1%至約95%之降低、1%至約90%之降低、1%至約85%之降低、1%至約80%之降低、1%至約75%之降低、1%之降低至約70%之降低、1%之降低至約65%之降低、1%之降低至約60%之降低、1%之降低至約55%之降低、1%之降低至約50%之降低、1%之降低至約45%之降低、1%之降低至約40%之降低、1%之降低至約35%之降低、1%之降低至約30%之降低、1%之降低至約25%之降低、1%之降低至約20%之降低、1%之降低至約15%之降低、1%之降低至約10%之降低、1%至約5%之降低、約5%至約99%之降低、約10%至約99%之降低、約15%至約99%之降低、約20%至約99%之降低、約25%至約99%之降低、約30%至約99%之降低、約35%至約99%之降低、約40%至約99%之降低、約45%至約99%之降低、約50%至約99%之降低、約55%至約99%之降低、約60%至約99%之降低、約65%至約99%之降低、約70%至約99%之降低、約75%至約95%之降低、約80%至約99%之降低、約90%之降低至約99%之降低、約95%至約99%之降低、約5%至約10%之降低、約5%至約25%之降低、約10%至約30%之降低、約20%至約40%之降低、約25%至約50%之降低、約35%至約55%之降低、約40%至約60%之降低、約50%之降低至約75%之降低、約60%之降低至約80%之降低，或約65%至約85%之降低）指示式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽在個體中有效。在一些實施例中，AF降低使得含量低於儀器之偵測極限。替代地，與在第一時間點自個體獲得之cfDNA中基因（例如MALT1基因）之失調的對偶基因頻率（AF）相比，在第二時間點自個體獲得之cfDNA中基因（例如MALT1基因）之失調的對偶基因頻率（AF）之增加指示式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽在個體中無效。此等方法之一些實施例可進一步包括向式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽確定為有效之個體投與額外劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。此等方法之一些實施例可進一步包括向式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽確定為無效之個體投與不同治療（例如不包括式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽之投與的治療，作為單一療法）。

在此等方法之一些實例中，第一時間點與第二時間點之間的時差可為約1天至約1年、約1天至約11個月、約1天至約10個月、約1天至約9個月、約1天至約8個月、約1天至約7個月、約1天至約6個月、約1天至約5個月、約1天至約4個月、約1天至約3個月、約1天至約10週、約1天至約2個月、約1天至約6週、約1天至約1個月、約1天至約25天、約1天至約20天、約1天至約15天、約1天至約10天、約1天至約5天、約2天至約1年、約5天至約1年、約10天至約1年、約15天至約1年、約20天至約1年、約25天至約1年、約1個月至約1年、約6週至約1年、約2個月至約1年、約3個月至約1年、約4個月至約1年、約5個月至約1年、約6個月至約1年、約7個月至約1年、約8個月至約1年、約9個月至約1年、約10個月至約1年、約11個月至約1年、約1天至約7天、約1天至約14天、約5天至約10天、約5天至約20天、約10天至約20天、約15天至約1個月、約15天至約2個月、約1週至約1個月、約2週至約1個月、約1個月至約3個月、約3個月至約6個月、約4個月至約6個月、約5個月至約8個月，或約7個月至約9個月。在此等方法之一些實施例中，個體可先前鑑別為患有具有失調基因（例如，本文所描述之失調基因之實例中之任一者）（例如，MALT1基因）之癌症。在此等方法之一些實施例中，個體可先前已診斷為患有本文中所描述的癌症之類型中之任一者。在此等方法之一些實施例中，個體可具有一個或多個轉移（例如一個或多個腦轉移）。

在上述實施例中之一些中，cfDNA包含ctDNA，諸如MALT1相關ctDNA。舉例而言，cfDNA為ctDNA，諸如MALT1相關ctDNA。在一些實施例中，cfDNA之至少某一部分確定為MALT1相關ctDNA，例如經定序及/或經定量之量的總cfDNA確定為具有MALT1融合物及/或MALT1之過度表現。

儘管腫瘤發生之基因基礎可因不同癌症類型而異，但轉移所需之細胞及分子機制對於所有實體腫瘤類型而言似乎類似。在轉移性級聯期間，癌細胞失去生長抑制反應，經歷黏著性之變化且產生可使細胞外基質組分降解的酶。此引起腫瘤細胞脫離原始腫瘤，經由新形成之脈管滲入循環系統中，腫瘤細胞遷移且外滲於有利的遠端部位，在此處其可形成群落。

因此，本文中亦提供抑制、預防、輔助預防或減少有需要之個體之癌症的轉移之症狀的方法，該方法包含向個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物。此類方法可以用於治療本文所述的一種或多種癌症。參見例如美國公開案第2013/0029925號；國際公開案第WO 2014/083567號；及美國專利第8,568,998號。亦參見例如Hezam K等人，《神經科學評論（ Rev Neurosci）》2018年1月26日；29：93-98；Gao L等人，《胰臟（ Pancreas）》2015年1月；44：134-143；Ding K等人，《生物化學雜誌（ J Biol Chem）》2014年6月6日；289：16057-71；及Amit M等人，《癌基因》2017年6月8日；36：3232-3239。在一些實施例中，癌症為MALT1相關癌症。在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽係與額外療法或另一治療劑組合使用，如本文中所描述。舉例而言，第一或第二MALT1蛋白酶抑制劑。

術語「轉移」為此項技術已知之術語且意謂在個體之遠離原發腫瘤之部位形成額外腫瘤（例如實體腫瘤），其中該額外腫瘤包括與原發腫瘤相同或類似之癌細胞。

亦提供降低患有MALT1相關癌症之個體發生轉移或額外轉移之風險的方法，該方法包括：將個體選擇、鑑別或診斷為患有MALT1相關癌症，及向選擇、鑑別或診斷為患有MALT1相關癌症之個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。亦提供降低患有MALT1相關癌症之個體發生轉移或額外轉移之風險的方法，其包括向患有MALT1相關癌症之個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。可將患有MALT1相關癌症之個體中出現轉移或額外轉移之風險的降低與個體在治療之前出現轉移或額外轉移之風險進行比較，或與尚未接受治療或已接受不同治療之患有類似或相同MALT1相關癌症之個體或個體群體進行比較。

片語「出現轉移之風險」意謂患有原發腫瘤之個體將在設定的時間段期間在個體之遠離原發腫瘤之部位出現額外腫瘤（例如實體腫瘤）的風險，其中該額外腫瘤包括與原發腫瘤相同或類似的癌細胞。本文中描述降低患有癌症之個體出現轉移之風險的方法。

片語「出現額外轉移之風險」意謂患有原發腫瘤及患有在遠離原發腫瘤之部位的一個或多個額外腫瘤（其中該一個或多個額外腫瘤包括與原發腫瘤相同或類似的癌細胞）之個體將出現一個或多個遠離原發腫瘤之其他腫瘤的風險，其中該等其他腫瘤包括與原發腫瘤相同或類似的癌細胞。本文描述使產生額外轉移之風險降低的方法。

本文中所描述的一些實施例提供治療諸如類風濕性關節炎、多發性硬化症及SLE之自體免疫病症（例如MALT1相關自體免疫病症）的方法，該方法包含向有需要之個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

本文中所描述的一些實施例提供治療諸如慢性移植體對抗宿主疾病之發炎病症（例如MALT1相關自體免疫病症）的方法，該方法包含向有需要之個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

亦提供一種抑制哺乳動物細胞中之MALT1蛋白酶活性的方法，其包含使哺乳動物細胞與式（I）化合物接觸。在一些實施例中，接觸為活體外。在一些實施例中，接觸為活體內的。在一些實施例中，接觸為活體內的，其中該方法包含向具有哺乳動物細胞（其具有MALT1蛋白酶活性）之個體投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為如本文中所描述之任何癌症。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為MALT1相關哺乳動物癌細胞。

亦提供一種抑制哺乳動物哺乳動物細胞中之MALT1蛋白酶活性的方法，其包含使哺乳動物細胞與式（I）化合物接觸。在一些實施例中，接觸為活體外。在一些實施例中，接觸為活體內的。在一些實施例中，接觸為活體內的，其中該方法包含向具有哺乳動物細胞（其具有MALT1蛋白酶活性）之哺乳動物投與有效量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為如本文中所描述之任何癌症。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為MALT1相關哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為胃腸哺乳動物細胞。

如本文所用，術語「接觸」係指使指定部分在活體外系統或活體內系統中聚集在一起。舉例而言，使MALT1蛋白酶與本文中所提供之化合物「接觸」包括向具有MALT1蛋白酶之個體（諸如人類）投與本文中所提供之化合物，以及例如將本文中所提供之化合物引入至含有哺乳動物細胞或純化製備物之樣品中，該哺乳動物細胞或純化製備物含有MALT1蛋白酶。

本文中亦提供一種在體外或體內抑制哺乳動物細胞增殖的方法該方法包含使哺乳動物細胞與有效量之如本文中所定義之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物接觸。

如本文中所定義之「MALT1蛋白酶抑制劑」包括展現MALT1抑制活性之任何化合物。在一些實施例中，MALT1蛋白酶抑制劑對MALT1蛋白酶具有選擇性。例示性MALT1蛋白酶抑制劑可展現如在本文中所描述的分析中量測之小於約1000 nM、小於約500 nM、小於約200 nM、小於約100 nM、小於約50 nM、小於約25 nM、小於約10 nM或小於約1 nM之針對MALT1蛋白酶的抑制活性（IC ₅₀）。在一些實施例中，MALT1蛋白酶抑制劑可展現如在本文中所提供的分析中量測之小於約25 nM、小於約10 nM、小於約5 nM或小於約1 nM之針對MALT1蛋白酶的抑制活性（IC ₅₀）。

如本文所用，「第一MALT1蛋白酶抑制劑」或「第一MALT1抑制劑」為如本文中所定義之MALT1蛋白酶抑制劑，但其未包括如本文中所定義之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。如本文所用，「第二MALT1蛋白酶抑制劑」或「第二MALT1抑制劑」為如本文中所定義之MALT1蛋白酶抑制劑，但其未包括如本文中所定義之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。當本文中所提供之方法中存在第一及第二MALT1抑制劑兩者時，第一及第二MALT1蛋白酶抑制劑係不同的。

本文中描述例示性第一及第二MALT1蛋白酶抑制劑。在一些實施例中，第一或第二MALT1蛋白酶抑制劑可為例如JNJ-67856633或CTX-177（ONO-7018）

片語「有效量」意謂當向需要此類治療之個體投與時足以（i）治療MALT1相關疾病或病症（諸如MALT1相關癌症），（ii）減弱、改善或消除特定疾病、病狀或病症之一種或多種症狀，或（iii）延遲本文中所描述的特定疾病、病狀或病症之一種或多種症狀之發作的化合物的量。將對應於此量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽之量將視諸如特定化合物、疾病病狀及其嚴重程度、需要治療之個體的屬性（例如體重）之因素而變化，但仍可由熟習此項技術者常規地確定。

另一實施例之特徵在於式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物用作藥劑。

另一實施例之特徵在於一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制個體中之MALT1之方法中。

另一實施例之特徵在於一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療癌症、自體免疫病症或發炎病症之方法中。

其他實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之自體免疫病症（例如MALT1相關自體免疫病症）之方法中。在一些實施例中，自體免疫病症為類風濕性關節炎、多發性硬化症或全身性紅斑狼瘡（SLE）。

一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之發炎病症（例如MALT1相關發炎病症）之方法中。在一些實施例中，發炎病症為慢性移植體對抗宿主疾病（cGVHD）。

一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之癌症（例如MALT1相關癌症）的方法中。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調包括一種或多種融合蛋白。

因此，本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療經診斷患有或鑑別為患有MALT1相關癌症，例如本文所揭示之例示性MALT1相關癌症中之任一者之個體的方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥組合物之醫藥學上可接受之鹽，其用於治療瀰漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、活化B細胞瀰漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）、套細胞淋巴瘤（MCL）、邊緣區淋巴瘤（MZL）、慢性淋巴性白血病（CLL）或成熟B細胞贅瘤之方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥組合物之醫藥學上可接受之鹽，其用於治療T細胞急性淋巴母細胞白血病之方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之CBM複合體路徑相關癌症（諸如本文所揭示者中之任一者）的方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療鑑別為患有CBM複合體路徑相關癌症之個體之癌症的方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之MALT1相關癌症之方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之CBM複合體路徑相關疾病或病症、自體免疫病症及發炎病症之方法中。

因此，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之自體免疫病症之方法中。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之MALT1相關自體免疫病症之方法中。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之MALT1相關自體免疫病症之方法中。

此外，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之發炎病症之方法中。在一些情況下，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療經鑑別或診斷為患有MALT1相關發炎病症之個體的MALT1相關發炎病症之方法中。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療經確定患有MALT1相關發炎病症之個體的MALT1相關發炎病症之方法中。

本文另外提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之CBM複合體路徑相關疾病或病症之方法中。此外，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療鑑別為患有CBM複合體路徑相關疾病或病症之個體之疾病或病症的方法中。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制哺乳動物細胞增殖之方法中。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制哺乳動物細胞中之CBM複合體路徑活性之方法中。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制哺乳動物細胞中之MALT1蛋白酶活性之方法中。哺乳動物細胞可為任何適當細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為哺乳動物CBM複合體路徑相關癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為哺乳動物MALT1相關癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞具有MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調為IAP2-MALT1融合、IGH-MALT1融合，或其組合。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制、預防、輔助預防或減少個體之癌症轉移之症狀的方法中。此類方法可以用於治療本文所述的一種或多種癌症。參見例如美國公開案第2013/0029925號；國際公開案第WO 2014/083567號；及美國專利第8,568,998號。亦參見例如Hezam K等人，《神經科學評論》2018年1月26日；29：93-98；Gao L等人，《胰臟》2015年1月；44：134-143；Ding K等人，《生物化學雜誌》2014年6月6日；289：16057-71；及Amit M等人，《癌基因》2017年6月8日；36：3232-3239。在一些實施例中，癌症為MALT1相關癌症。在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽係與額外療法或另一治療劑組合使用，如本文中所描述。舉例而言，第一或第二MALT1蛋白酶抑制劑。

亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於降低在患有MALT1相關癌症之個體中產生轉移或額外轉移之風險的方法中。可將患有MALT1相關癌症之個體中出現轉移或額外轉移之風險的降低與個體在治療之前出現轉移或額外轉移之風險進行比較，或與尚未接受治療或已接受不同治療之患有類似或相同MALT1相關癌症之個體或個體群體進行比較。

本文所描述之一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之自體免疫病症（例如MALT1相關自體免疫病症），諸如類風濕性關節炎、多發性硬化症及SLE之方法中。

本文所描述之一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於治療個體之發炎病症（例如MALT1相關自體免疫病症），諸如慢性移植體對抗宿主疾病之方法中。

亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制哺乳動物細胞中之MALT1蛋白酶活性之方法中。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為如本文中所描述之任何癌症。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為MALT1相關哺乳動物癌細胞。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於抑制哺乳動物細胞增殖之方法中。

在另一範疇中，本發明之特徵在於一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物，其用於其中該個體用一種或多種額外治療劑治療之方法中，該一種或多種額外治療劑係在用有效量之該化合物、醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物治療的同時、之前或之後投與。

在另一範疇中，本發明提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造藥劑。

在另一範疇中，本發明提供一種式（I）化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制個體中之MALT1的藥劑。

在又一範疇中，本發明提供一種式（I）化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之癌症、自體免疫病症或發炎病症之藥劑。

一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之自體免疫病症（例如MALT1相關自體免疫病症）之藥劑。在一些實施例中，自體免疫病症為類風濕性關節炎、多發性硬化症或全身性紅斑狼瘡（SLE）。

一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之發炎病症（例如MALT1相關發炎病症）之藥劑。在一些實施例中，發炎病症為慢性移植體對抗宿主疾病（cGVHD）。

一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之癌症（例如MALT1相關癌症）之藥劑。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶或其中之任何者之表現或活性或含量之失調包括一種或多種融合蛋白。

因此，本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療經診斷患有或經鑑別患有MALT1相關癌症，例如本文所揭示之例示性MALT1相關癌症中之任一者之個體的藥劑。

因此，本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療患有瀰漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、活化B細胞瀰漫性大B細胞淋巴瘤（ABC-DLBCL）、套細胞淋巴瘤（MCL）、邊緣區淋巴瘤（MZL）、慢性淋巴性白血病（CLL）或成熟B細胞贅瘤之個體的藥劑。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥組合物之醫藥學上可接受之鹽，其用於製造用於治療患有T細胞急性淋巴母細胞之個體的藥劑

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之CBM複合體路徑相關癌症（諸如本文所揭示者中之任一者）之藥劑。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療經鑑別為患有CBM複合體路徑相關癌症之個體之癌症的藥劑。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之MALT1相關癌症之藥劑。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之CBM複合體路徑相關疾病或病症、自體免疫病症及發炎病症之藥劑。因此，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之自體免疫病症之藥劑。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之MALT1相關自體免疫病症的藥劑。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之MALT1相關自體免疫病症的藥劑。此外，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之發炎病症之藥劑。在一些情況下，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療經鑑別或診斷為患有MALT1相關發炎病症之個體的MALT1相關發炎病症的藥劑。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療經確定患有MALT1相關發炎病症之個體之MALT1相關發炎病症的藥劑。

本文另外提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之CBM複合體路徑相關疾病或病症之藥劑。此外，本文提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療經鑑別為患有CBM複合體路徑相關疾病或病症之個體之疾病或病症的藥劑。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制哺乳動物細胞增殖之藥劑。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制哺乳動物細胞中之CBM複合體路徑活性之藥劑。本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制哺乳動物細胞中之MALT1蛋白酶活性之藥劑。哺乳動物細胞可為任何適當細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為哺乳動物CBM複合體路徑相關癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為哺乳動物MALT1相關癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞具有MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調。在一些實施例中，MALT1基因、MALT1蛋白酶蛋白或其中之任何者之表現或活性或含量之失調為IAP2-MALT1融合、IGH-MALT1融合，或其組合。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制、預防、輔助預防或減少個體之癌症轉移之症狀的藥劑。在一些實施例中，癌症為MALT1相關癌症。在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽係與額外療法或另一治療劑組合使用，如本文中所描述。舉例而言，第一或第二MALT1蛋白酶抑制劑。

亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於降低在患有MALT1相關癌症之個體中產生轉移或額外轉移之風險的藥劑。可將患有MALT1相關癌症之個體中出現轉移或額外轉移之風險的降低與個體在治療之前出現轉移或額外轉移之風險進行比較，或與尚未接受治療或已接受不同治療之患有類似或相同MALT1相關癌症之個體或個體群體進行比較。

本文所描述之一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之自體免疫病症（例如MALT1相關自體免疫病症），諸如類風濕性關節炎、多發性硬化症及SLE之藥劑。

本文所描述之一些實施例提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療個體之發炎病症（例如MALT1相關自體免疫病症），諸如慢性移植體對抗宿主疾病之藥劑。

亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制哺乳動物細胞中之MALT1蛋白酶活性之藥劑。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物免疫細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為哺乳動物癌細胞。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為如本文中所描述之任何癌症。在一些實施例中，哺乳動物癌細胞為MALT1相關哺乳動物癌細胞。

本文亦提供一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽或醫藥組合物之用途，其用於製造用於抑制哺乳動物細胞增殖之藥劑。

在又一範疇中，本發明提供一種式（I）化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物之用途，其用於製造用於與一種或多種額外治療劑組合之藥劑，該一種或多種額外治療劑係在用該化合物或醫藥組合物治療的同時、之前或之後投與。

在醫學腫瘤學領域中，常規實踐為使用不同形式之治療之組合來治療各患有癌症之個體。在醫學腫瘤學中，除本文中所提供之組合物之外，此類聯合治療或療法之其他組分可為例如手術、放射線療法及化學治療劑，諸如其他蛋白酶抑制劑、激酶抑制劑、信號轉導抑制劑及/或單株抗體。

例如，手術可為開放手術或最低限度侵入性手術。因此，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可用作癌症治療之佐劑，亦即，其可與一種或多種額外療法或治療劑組合使用，例如藉由相同或不同作用機制起作用之化學治療劑。在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽可在投與額外治療劑或額外療法之前使用。舉例而言，可在一段時間內向有需要之個體投與一或多次劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽，且接著進行腫瘤之至少部分切除。在一些實施例中，在腫瘤之至少部分切除之前，用一或多次劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽進行之治療減小腫瘤大小（例如腫瘤負荷）。在一些實施例中，可在一段時間內且在一或多輪放射療法下向有需要之個體投與一或多次劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，在一或多輪放射療法之前，用一或多次劑量之式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽進行之治療減小腫瘤大小（例如腫瘤負荷）。

在一些實施例中，個體所患有之癌症（例如，局部晚期或轉移性腫瘤）對於標準療法（例如，投與化學治療劑）係難治性或不耐受的，該標準療法諸如第一MALT1抑制劑、激酶抑制劑、免疫療法、細胞或基因療法，或放射（例如，放射性碘）。在一些實施例中，個體所患有之癌症（例如局部晚期或轉移性腫瘤）對於先前療法（例如投與化學治療劑）係難治性或不耐受的，該先前療法諸如第一MALT1抑制劑或另一蛋白酶抑制劑、免疫療法、細胞或基因療法，或放射（例如放射性碘）。在一些實施例中，個體患有尚無標準療法之癌症（例如，局部晚期或轉移性腫瘤）。在一些實施例中，個體先前未使用過（naïve）MALT1蛋白酶抑制劑。舉例而言，個體先前未使用過選擇性MALT1蛋白酶抑制劑治療。在一些實施例中，個體先前使用過MALT1蛋白酶抑制劑。

在本文中所描述的方法中之任一者之一些實施例中，與有效量之選自一種或多種額外療法或治療（例如化學治療或免疫調節）劑之至少一種額外治療劑組合投與式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽。額外療法或治療劑可為任何適當額外療法或治療劑，諸如本文中所描述之額外療法或治療劑中之任一者。

額外治療劑之非限制性實例包括：其他MALT1靶向治療劑（亦即第一或第二MALT1蛋白酶抑制劑，例如JNJ-67856633或CTX-177（ONO-7018））、其他蛋白酶抑制劑、激酶抑制劑（例如受體酪胺酸激酶靶向治療劑，諸如BTK或EGFR抑制劑）、信號轉導路徑抑制劑、檢查點抑制劑、細胞凋亡路徑之調節劑（例如維奈托克（venetoclax）或奧巴塔拉（obataclax））；細胞毒性化學治療劑、血管生成靶向療法、免疫靶向劑（包括抗體及基於細胞之免疫療法，及抗體-藥物結合物）及放射線療法。

在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽及額外治療劑作為單獨的劑量同時投與。在一些實施例中，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽與額外治療劑係以單獨劑量以任何順序依序投與。

在一些實施例中，另一MALT1靶向治療劑為展現MALT1抑制活性之另一蛋白酶抑制劑。在一些實施例中，另一MALT1靶向治療抑制劑對MALT1蛋白酶具有選擇性。例示性MALT1蛋白酶抑制劑可展現如在本文中所描述的分析中量測之小於約1000 nM、小於約500 nM、小於約200 nM、小於約100 nM、小於約50 nM、小於約25 nM、小於約10 nM或小於約1 nM之針對MALT1蛋白酶的抑制活性（IC ₅₀）。在一些實施例中，MALT1蛋白酶抑制劑可展現如在本文中所提供的分析中量測之小於約25 nM、小於約10 nM、小於約5 nM或小於約1 nM之針對MALT1蛋白酶的抑制活性（IC ₅₀）。

蛋白酶靶向治療劑（例如第一MALT1抑制劑或第二MALT1抑制劑）之非限制性實例包括JNJ-67856633及CTX-177（ONO-7018）。

多激酶抑制劑之非限制性實例包括阿來替尼（alectinib）（9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-( 啉-4-基)哌啶-1-基]-11-側氧基-6,11-二氫-5H-苯并[b]咔唑-3-甲腈）；阿姆替尼（amuvatinib）（MP470，HPK56）（N-(1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基甲基)-4-([1]苯并呋喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌 -1-硫代碳醯胺）；阿帕替尼（apatinib）（YN968D1）（甲磺酸N-[4-(1-氰基環戊基)苯基-2-(4-吡啶甲基)胺基-3-菸鹼醯胺）；卡博替尼（cabozantinib）（考美曲克（Cometriq）XL-184）（N-(4-((6,7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯基)-N'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺）；多韋替尼（dovitinib）（TKI258；GFKI-258；CHIR-258）（(3Z)-4-胺基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌 -1-基)-1,3-二氫苯并咪唑-2-亞基]喹啉-2-酮）；法米替尼（famitinib）（5-[2-(二乙基胺基)乙基]-2-[(Z)-(5-氟-2-側氧基-1H-吲哚-3-亞基)甲基]-3-甲基-6,7-二氫-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮）；非達替尼（fedratinib）（SAR302503，TG101348）（N-(2-甲基-2-丙烷基)-3-{[5-甲基-2-({4-[2-(1-吡咯啶基)乙氧基]苯基}胺基)-4-嘧啶基]胺基}苯磺醯胺）；弗雷替尼（foretinib）（XL880，EXEL-2880，GSK1363089，GSK089）（N1'-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-(3- 啉基丙氧基)-4-喹啉基]氧基]苯基]-N1-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺）；福塔曼替尼（fostamantinib）（R788）（6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)胺基]-4-嘧啶基]胺基]-2,2-二甲基-4-[(膦酸基氧基)甲基]-2H-吡啶并[3,2-b]-1,4- -3(4H)-酮鈉鹽（1:2））；伊洛塞替布（ilorasertib）（ABT-348）（1-(4-(4-胺基-7-(1-(2-羥基乙基)-1H-吡唑-4-基)噻吩并[3,2-c]吡啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲）；樂伐替尼（lenvatinib）（E7080，樂衛瑪（Lenvima））（4-[3-氯-4-(環丙胺基羰基)胺基苯氧基]-7-甲氧基-6-喹啉甲醯胺）；莫替沙尼（motesanib）（AMG 706）（N-(3,3-二甲基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基)-2-[(吡啶-4-基甲基)胺基]吡啶-3-甲醯胺）；尼達尼布（nintedanib）（3-Z-[1-(4-(N-((4-甲基-哌 -1-基)-甲基羰基)-N-甲基-胺基)-苯胺基)-1-苯基-亞甲基]-6-甲氧基羰基-2-吲哚啉酮）；普納替尼（ponatinib）（AP24534）（3-(2-咪唑并[1,2-b]嗒 -3-基乙炔基)-4-甲基-N-[4-[(4-甲基哌 -1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺）；PP242（托克尼布（torkinib））（2-[4-胺基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]-1H-吲哚-5-醇）；奎紮替尼（quizartinib）（1-(5-(三級丁基)異唑-3-基)-3-(4-(7-(2- 啉基乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲）；瑞戈非尼（regorafenib）（BAY 73-4506，癌瑞格（stivarga））（水合4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]胺甲醯基}胺基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲醯胺）；RXDX-105（CEP-32496，格拉芬尼（agerafenib））（1-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)-3-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)異唑-3-基)脲）；司馬沙尼（semaxanib）（SU5416）（(3Z)-3-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)甲亞基]-1,3-二氫-2H-吲哚-2-酮）；斯特替尼（sitravatinib）（MGCD516，MG516）（N-(3-氟-4-{[2-(5-{[(2-甲氧基乙基)胺基]甲基}-2-吡啶基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基]氧基}苯基)-N'-(4-氟苯基)-1,1-環丙烷二甲醯胺）；索拉非尼（sorafenib）（BAY 43-9006）（4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]胺基]羰基]胺基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲醯胺）；凡德他尼（vandetanib）（N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺）；瓦他拉尼（vatalanib）（PTK787，PTK/ZK，ZK222584）（N-(4-氯苯基)-4-(吡啶-4-基甲基)呔 -1-胺）；AD-57（N-[4-[4-胺基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-N'-[3-(三氟甲基)苯基]-脲）；AD-80（1-[4-(4-胺基-1-丙-2-基吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基]-3-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]脲）；AD-81（1-(4-(4-胺基-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲）；ALW-II-41-27（N-(5-((4-((4-乙基哌 -1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)胺甲醯基)-2-甲基苯基)-5-(噻吩-2-基)菸鹼醯胺）；BPR1K871（1-(3-氯苯基)-3-(5-(2-((7-(3-(二甲基胺基)丙氧基)喹唑啉-4-基)胺基)乙基)噻唑-2-基)脲）；CLM3（1-苯乙基-N-(1-苯基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺）；EBI-907（N-(2-氯-3-(1-環丙基-8-甲氧基-3H-吡唑并[3,4-c]異喹啉-7-基)-4-氟苯基)-3-氟丙烷-1-磺醯胺）；NVP-AST-487（N-[4-[(4-乙基-1-哌基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]-N'-[4-[[6-(甲基胺基)-4-嘧啶基]氧基]苯基]-脲）；NVP-BBT594（BBT594）（5-((6-乙醯胺基嘧啶-4-基)氧基)-N-(4-((4-甲基哌 -1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)吲哚啉-1-甲醯胺）；PD173955（6-(2,6-二氯苯基)-8-甲基-2-(3-甲基硫基苯胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮）；PP2（4-胺基-5-(4-氯苯基)-7-(二甲基乙基)吡唑并[3,4-d]嘧啶）；PZ-1（N-(5-(三級丁基)異唑-3-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙醯胺）；RPI-1（1,3-二氫-5,6-二甲氧基-3-[(4-羥基苯基)亞甲基]-H-吲哚-2-酮；(3E)-3-[(4-羥基苯基)甲亞基]-5,6-二甲氧基-1H-吲哚-2-酮）；SGI-7079（3-[2-[[3-氟-4-(4-甲基-1-哌基)苯基]胺基]-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-苯乙腈）；SPP86（1-異丙基-3-(苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺）；SU4984（4-[4-[(E)-(2-側氧基-1H-吲哚-3-亞基)甲基]苯基]哌 -1-甲醛）；舒尼替尼（sunitinb）（SU11248）（N-(2-二乙基胺基乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-側氧基-1H-吲哚-3-亞基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲醯胺）；TG101209（N-三級丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌 -1-基)苯基胺基)嘧啶-4-基胺基)苯磺醯胺）；醉茄素（Withaferin）A（(4β,5β,6β,22R)-4,27-二羥基-5,6:22,26-二乙氧基麥角甾-2,24-二烯-1,26-二酮）；XL-999（(Z)-5-((1-乙基哌啶-4-基)胺基)-3-((3-氟苯基)(5-甲基-1H-咪唑-2-基)亞甲基)吲哚啉-2-酮）；BPR1J373（5-苯基噻唑-2-基胺-嘧奈德（pyriminide）衍生物）；CG-806（CG'806）；DCC-2157；GTX-186；HG-6-63-01（(E)-3-(2-(4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烯基)-N-(4-((4-乙基哌 -1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲醯胺）；SW-01（環苯紮平（Cyclobenzaprine）鹽酸鹽）；XMD15-44（N-(4-((4-乙基哌 -1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-(吡啶-3-基乙炔基)苯甲醯胺（由結構產生））；ITRI-305（D0N5TB，DIB003599）；BLU-667（(1S,4R)-N-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲氧基-4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)環己烷-1-甲醯胺）；BLU6864；DS-5010；GSK3179106；GSK3352589；NMS-E668；TAS0286/HM05；TPX0046；及N-(3-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺。

受體酪胺酸激酶（例如Trk）靶向治療劑之非限制性實例包括：阿法替尼（afatinib）、卡博替尼、西妥昔單抗（cetuximab）、克卓替尼（crizotinib）、達拉非尼（dabrafenib）、恩曲替尼（entrectinib）、厄洛替尼（erlotinib）、吉非替尼（gefitinib）、伊馬替尼（imatinib）、拉帕替尼（lapatinib）、來他替尼（lestaurtinib）、尼羅替尼（nilotinib）、帕佐泮尼（pazopanib）、帕尼單抗（panitumumab）、帕妥株單抗（pertuzumab）、舒尼替尼（sunitinib）、曲妥珠單抗（trastuzumab）、l-((3S,4R)-4-(3-氟苯基)-l-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-3-基)-3-(4-甲基-3-(2-甲基嘧啶-5-基)-l-苯基-lH-吡唑-5-基)脲、AG 879、AR-772、AR-786、AR-256、AR-618、AZ-23、AZ623、DS-6051、Gö 6976、GNF-5837、GTx-186、GW 441756、LOXO-101、MGCD516、PLX7486、RXDX101、VM-902A、TPX-0005、TSR-011、GNF-4256、N-[3-[[2,3-二氫-2-側氧基-3-(1H-吡咯-2-基亞甲基)-1H-吲哚-6-基]胺基]-4-甲基苯基]-N'-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-脲、AZ623、AZ64、(S)-5-氯-N2-(1-(5-氟吡啶-2-基)乙基)-N4-(5-異丙氧基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺、AZD7451、CEP-751、CT327、舒尼替尼、GNF-8625及(R)-1-(6-(6-(2-(3-氟苯基)吡咯啶-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒 -3-基)-[2,4'-聯吡啶]-2'-基)哌啶-4-醇。

在一些實施例中，額外治療劑為BRAF抑制劑。BRAF抑制劑之非限制性實例包括達拉非尼、維羅非尼（vemurafenib）（亦稱為RG7204或PLX4032）、甲苯磺酸索拉非尼（sorafenib tosylate）、PLX-4720、GDC-0879、BMS-908662（Bristol-Meyers Squibb）、LGX818（Novartis）、PLX3603（Hofmann-LaRoche）、RAF265（Novartis）、RO5185426（Hofmann-LaRoche）及GSK2118436（GlaxoSmithKline）。BRAF抑制劑之額外實例為此項技術中已知的。

在一些實施例中，額外治療劑為表皮生長因子受體酪胺酸激酶抑制劑（EGFR）。舉例而言，EGFR抑制劑可包括奧希替尼（osimertinib）（默來替尼（merelectinib），泰格莎（Tagrisso））、厄洛替尼（得舒緩（Tarceva））、吉非替尼（艾瑞莎（Iressa））、西妥昔單抗（爾必得舒（Erbitux））、耐昔妥珠（necitumumab）（泊特納（Portrazza））、來那替尼（neratinib）（樂寧克斯（Nerlynx））、拉帕替尼（泰嘉錠（Tykerb））、帕尼單抗（維必施（Vectibix））及凡德他尼（佳瑞莎（Caprelsa））。

在一些實施例中，額外治療劑為Ras-Raf-MEK-ERK路徑抑制劑（例如畢尼替尼（binimetinib）、司美替尼（selumetinib）、恩拉菲尼（encorafinib）、索拉非尼、曲美替尼（trametinib）及維羅非尼）、PI3K-Akt-mTOR-S6K路徑抑制劑（例如依維莫司（everolimus）、雷帕黴素（rapamycin）、哌立福新（perifosine）、坦羅莫司（temsirolimus）），及其他激酶抑制劑，諸如巴瑞替尼（baricitinib）、布加替尼（brigatinib）、卡普尼布（capmatinib）、達魯舍替（danusertib）、依魯替尼、米西西尼（milciclib）、槲皮素（quercetin）、瑞戈非尼、盧佐替尼（ruxolitinib）、司馬沙尼、AP32788、BLU285、BLU554、INCB39110、INCB40093、INCB50465、INCB52793、INCB54828、MGCD265、NMS-088、NMS-1286937、PF 477736（(R)-胺基-N-[5,6-二氫-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-側氧基-1H吡咯并[4,3,2-ef][2,3]苯并二氮呯-8-基]-環己烷乙醯胺）、PLX3397、PLX7486、PLX8394、PLX9486、PRN1008、PRN1371、RXDX103、RXDX106、RXDX108及TG101209（N-三級丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌 -1-基)苯基胺基)嘧啶-4-基胺基)苯磺醯胺）。

在一些實施例中，額外治療劑為BTK抑制劑。BTK抑制劑之非限制性實例包括依魯替尼、阿卡替尼（acalabrutinib）、贊布替尼（zanubrutinib）、吡托布替尼（pirtobrutinib）及NX-2127。

在一些實施例中，額外治療劑為Bcl-2抑制劑。Bcl-2抑制劑之非限制性實例包括維奈托克、納維托克（navitoclax）、奧利默森（oblimersen）、奧布托克（obatoclax）及AT-101。

在一些實施例中，額外治療劑為PI3K抑制劑。PI3K抑制劑之非限制性實例包括艾德昔布（idelalisib）、考班昔布（copanlisib）、杜維昔布（duvelisib）、艾培昔布（alpelisib）、泰尼昔布（taselisib）、布帕昔布（buparlisib）、溫布昔布（umbralisib）及考班昔布。

在一些實施例中，額外治療劑為mTOR抑制劑。mTOR抑制劑之非限制性實例包括依維莫司、坦羅莫司及地磷莫司（ridaforolimus）。

在一些實施例中，額外治療劑為HDAC抑制劑。HDAC抑制劑之非限制性實例包括伏立諾他（vorinostat）、羅米地辛（romidepsin）、貝林諾他（belinostat）、西達本胺（chidamide）、帕比諾他（panobinostat）、CXD101及阿貝司他（abexinostat）。

在一些實施例中，額外治療劑為檢查點抑制劑。檢查點抑制劑之非限制性實例包括伊匹單抗（ipilimumab）、曲美單抗（tremelimumab）、納武單抗（nivolumab）、皮立珠單抗（pidilizumab）、MPDL3208A、MEDI4736、MSB0010718C、BMS-936559、BMS-956559、BMS-935559（MDX-1105）、AMP-224及派立珠單抗（pembrolizumab）。

在一些實施例中，額外治療劑為細胞毒性化學治療劑。細胞毒性化學治療劑之非限制性實例包括三氧化二砷、博萊黴素（bleomycin）、苯達莫司汀（bendamustine）、卡巴利他索（cabazitaxel）、卡培他濱（capecitabine）、卡鉑（carboplatin）、順鉑（cisplatin）、環磷醯胺（cyclophosphamide）、阿糖胞苷（cytarabine）、達卡巴嗪（dacarbazine）、道諾黴素（daunorubicin）、多西他賽（docetaxel）、小紅莓（doxorubicin）、依託泊苷（etoposide）、氟尿嘧啶（fluorouracil）、吉西他濱（gemcitabine）、伊立替康（irinotecan）、洛莫司汀（lomustine）、甲胺喋呤（methotrexate）、絲裂黴素C（mitomycin C）、奧沙利鉑（oxaliplatin）、太平洋紫杉醇（paclitaxel）、培美曲塞（pemetrexed）、替莫唑胺（temozolomide）及長春新鹼（vincristine）。

在一些實施例中，額外治療劑為血管生成靶向治療劑。血管生成靶向療法之非限制性實例包括來那度胺、恩紮妥林（enzastaurine）、阿柏西普（aflibercept）及貝伐單抗（bevacizumab）。

在一些實施例中，額外療法或治療劑可包括組胺醯基-tRNA合成酶（HRS）多肽或編碼HRS多肽之可表現之核苷酸。

術語「免疫療法」係指調節免疫系統之藥劑。在一些實施例中，免疫療法可以增加免疫系統的調控因子的表現及/或活性。在一些實施例中，免疫療法可減少免疫系統之調節因子之表現及/或活性。在一些實施例中，免疫療法可以募集及/或增強免疫細胞之活性。

在一些實施例中，免疫療法為細胞免疫療法（例如授受性T細胞療法、樹突狀細胞療法、自然殺手細胞療法）。在一些實施例中，細胞免疫療法為西普亮塞-T（sipuleucel-T）（APC8015；Provenge™；Plosker（2011）《藥物（Drugs）》71（1）：101-108）。在一些實施例中，細胞免疫療法包括表現嵌合抗原受體（CAR）的細胞。在一些實施例中，細胞免疫療法為CAR-T細胞療法。在一些實施例中，CAR-T細胞療法為替沙津魯（tisagenlecleucel）（祈萊亞（Kymria））。在一些實施例中，CAR-T細胞療法為阿基侖賽（axicabtagene ciloleucel）（奕凱達（Yescarta））。在一些實施例中，CAR-T細胞療法為布萊奧妥（brexucabtagene autoleucel）（特卡圖斯（Tecartus））。在一些實施例中，CAR-T細胞療法為利馬奧妥（relmacabtagene autoleucel）。在一些實施例中，CAR-T細胞療法為ALLO-501。

在一些實施例中，免疫療法為抗體療法（例如單株抗體、結合抗體或雙特異性抗體）。在一些實施例中，抗體療法為貝伐單抗（Mvasti™，Avastin®）、曲妥珠單抗（Herceptin®）、阿維魯單抗（avelumab）（Bavencio®）、利妥昔單抗（rituximab）（MabThera™，Rituxan®）、利妥昔單抗以及人類玻尿酸酶（Rituxan Hycela ^TM）、依決洛單抗（edrecolomab）（帕諾雷克斯（Panorex））、達拉單抗（daratumuab）（Darzalex®）、奧拉單抗（olaratumab）（Lartruvo™）、奧伐木單抗（ofatumumab）（Arzerra®）、阿倫珠單抗（alemtuzumab）（Campath®）、西妥昔單抗（Erbitux®）、奧戈伏單抗（oregovomab）、派立珠單抗（Keytruda®）、迪盧替單抗（dinutiximab）（Unituxin®）、奧比珠單抗（obinutuzumab）（Gazyva®）、曲美單抗（CP-675,206）、雷莫蘆單抗（ramucirumab）（Cyramza®）、烏妥昔單抗（ublituximab）（TG-1101）、帕尼單抗（Vectibix®）、埃羅妥珠單抗（elotuzumab）（Empliciti™）、阿維魯單抗（Bavencio®）、耐昔妥珠（Portrazza™）、瑟吐珠單抗（cirmtuzumab）（UC-961）、替伊莫單抗（ibritumomab）（Zevalin®）、艾薩妥昔單抗（isatuximab）（SAR650984）、尼妥組單抗（nimotuzumab）、非蘇木單抗（fresolimumab）（GC1008）、利瑞魯單抗（lirilumab）（INN）、莫格利珠單抗（mogamulizumab）（Poteligeo®）、芬克妥珠單抗（ficlatuzumab）（AV-299）、德諾單抗（denosumab）（Xgeva®）、侖茲魯單抗（lenzilumab）、阿維魯單抗、斯巴達珠單抗（spartalizumab）、派立珠單抗、烏托米單抗（utomilumab）、烏妥昔單抗、博納吐單抗（blinatumomab）加尼妥單抗（ganitumab）、烏瑞蘆單抗（urelumab）、皮立珠單抗（pidilizumab）、阿麥妥單抗（amatuximab）、莫遜圖單抗（mosunetuzumab）（BTCT4465A）、CD20-TCB、RO7082859、XmAb13676、格菲妥單抗（glofitamab）、CD20-TDB、奧尼妥單抗（odronextamab）（REGN1979）、IGM-2323、BTCT4465A、AMG-562或TTI-621。

在一些實施例中，免疫療法為抗體-藥物結合物。在一些實施例中，抗體-藥物結合物為吉妥珠單抗奧佐米星（gemtuzumab ozogamicin）（Mylotarg™）、英妥珠單抗奧佐米星（inotuzumab ozogamicin）（Besponsa®）、本妥昔單抗維多汀（brentuximab vedotin）（Adcetris®）、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物（ado-trastuzumab emtansine）（TDM-1；Kadcyla®）、米妥昔單抗索星（mirvetuximab soravtansine）（IMGN853）、拉安土單抗拉夫坦辛（anetumab ravtansine）、泊洛妥珠單抗維多汀（polatuzumab vedotine）、朗妥昔單抗特林（loncastuximab tesirine）（ADCT-402）、卡米丹魯單抗特林（camidanlumab tesirine）（ADCT-301）或那妥昔單抗恩他新（naratuximab emtansine）（Debio 1562）。

在一些實施例中，免疫療法包括博納吐單抗（AMG103；Blincyto®）或米哚妥林（midostaurin）（療德妥（Rydapt））。

在一些實施例中，免疫療法包括毒素。在一些實施例中，免疫療法為地尼白介素（denileukin diftitox）（Ontak®）。

在一些實施例中，免疫療法為細胞介素療法。在一些實施例中，細胞介素療法為介白素2（IL-2）療法、干擾素α（IFNα）療法、粒細胞群落刺激因子（G-CSF）療法、介白素12（IL-12）療法、介白素15（IL-15）療法、介白素7（IL-7）療法或紅血球生成素-α（EPO）療法。在一些實施例中，IL-2療法為阿地介白素（aldesleukin）（Proleukin®）。在一些實施例中，IFNα療法為IntronA®（Roferon-A®）。在一些實施例中，G-CSF療法為非格司亭（filgrastim）（Neupogen®）。

在一些實施例中，免疫療法為免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫療法包括一種或多種免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑為CTLA-4抑制劑、PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4抑制劑為伊匹單抗（Yervoy®）或曲美單抗（CP-675,206）。在一些實施例中，PD-1抑制劑為派立珠單抗（Keytruda®）或納武單抗（Opdivo®）。在一些實施例中，PD-L1抑制劑為阿特珠單抗（atezolizumab）（Tecentriq®）、阿維魯單抗（Bavencio®）或德瓦魯單抗（durvalumab）（Imfinzi™）。

在一些實施例中，免疫療法為基於mRNA之免疫療法。在一些實施例中，基於mRNA之免疫療法為CV9104（參見例如Rausch等人（2014）《人類疫苗免疫療法（Human Vaccin Immunother）》10（11）：3146-52；及Kubler等人（2015）《癌症免疫療法雜誌（J. Immunother Cancer）》3：26）。

在一些實施例中，免疫療法為卡介苗（bacillus Calmette-Guerin；BCG）療法。

在一些實施例中，免疫療法為溶瘤病毒療法。在一些實施例中，溶瘤病毒療法為塔利赫帕（talimogene alherparepvec）（T-VEC；Imlygic®）。

在一些實施例中，免疫療法為癌症疫苗。在一些實施例中，癌症疫苗為人類乳突狀瘤病毒（HPV）疫苗。在一些實施例中，HPV疫苗為Gardasil®、Gardasil9®或Cervarix®。在一些實施例中，癌症疫苗為B型肝炎病毒（HBV）疫苗。在一些實施例中，HBV疫苗為Engerix-B®、Recombivax HB®或GI-13020（Tarmogen®）。在一些實施例中，癌症疫苗為Twinrix®或Pediarix®。在一些實施例中，癌症疫苗為BiovaxID®、Oncophage®、GVAX、ADXS11-001、ALVAC-CEA、PROSTVAC®、Rindopepimut®、CimaVax-EGF、拉普亮賽-T（lapuleucel-T）（APC8024；Neuvenge™）、GRNVAC1、GRNVAC2、GRN-1201、赫普考朋-L（hepcortespenlisimut-L）（赫普可（Hepko）-V5）、DCVAX®、SCIB1、BMT CTN 1401、PrCa VBIR、PANVAC、ProstAtak®、DPX-Survivac或韋津普瑪-L（viagenpumatucel-L）（HS-110）。

在一些實施例中，免疫療法為肽疫苗。在一些實施例中，肽疫苗為萊尼哌嗎-S（nelipepimut-S）（E75）（NeuVax™）、IMA901或SurVaxM（SVN53-67）。在一些實施例中，癌症疫苗為免疫原性個人新抗原疫苗（參見例如Ott等人（2017）《自然》547：217-221；Sahin等人（2017）《自然》547：222-226）。在一些實施例中，癌症疫苗為RGSH4K或NEO-PV-01。在一些實施例中，癌症疫苗為基於DNA之疫苗。在一些實施例中，基於DNA之疫苗為乳腺球蛋白-A DNA疫苗（參見例如Kim等人（2016）《腫瘤免疫學（OncoImmunology）》5（2）：e1069940）。

在一些實施例中，免疫靶向劑係選自阿地介白素、干擾素α-2b、伊匹單抗、蘭利珠單抗（lambrolizumab）、納武單抗、普賴松（prednisone）及西普亮塞-T。

在一些實施例中，額外療法為放射線療法。放射線療法之非限制性實例包括放射性碘療法、外束放射及鐳223療法。

在一些實施例中，額外治療劑為GSK-3368715、PF-06821497、塞拉賽替（ceralasertib）；AZD6738、BI-894999、MAK-683、AZD-6738、塔那地南（taminadenant）、TAK-981、MIK-665或丹伐特生（danvatirsen）。

額外激酶抑制劑包括描述於例如美國專利第7,514,446號；第7,863,289號；第8,026,247號；第8,501,756號；第8,552,002號；第8,815,901號；第8,912,204號；第9,260,437號；第9,273,051號；美國公開案第US 2015/0018336號；國際公開案第WO 2007/002325號；第WO 2007/002433號；第WO 2008/080001號；第WO 2008/079906號；第WO 2008/079903號；第WO 2008/079909號；第WO 2008/080015號；第WO 2009/007748號；第WO 2009/012283號；第WO 2009/143018號；第WO 2009/143024號；第WO 2009/014637號；第2009/152083號；第WO 2010/111527號；第WO 2012/109075號；第WO 2014/194127號；第WO 2015/112806號；第WO 2007/110344號；第WO 2009/071480號；第WO 2009/118411號；第WO 2010/031816號；第WO 2010/145998號；第WO 2011/092120號；第WO 2012/101032號；第WO 2012/139930號；第WO 2012/143248號；第WO 2012/152763號；第WO 2013/014039號；第WO 2013/102059號；第WO 2013/050448號；第WO 2013/050446號；第WO 2014/019908號；第WO 2014/072220號；第WO 2014/184069號；第WO 2016/075224號；第WO 2016/081450號；第WO 2016/022569號；第WO 2016/011141號；第WO 2016/011144號；第WO 2016/011147號；第WO 2015/191667號；第WO 2012/101029號；第WO 2012/113774號；第WO 2015/191666號；第WO 2015/161277號；第WO 2015/161274號；第WO 2015/108992號；第WO 2015/061572號；第WO 2015/058129號；第WO 2015/057873號；第WO 2015/017528號；第WO/2015/017533號；第WO 2014/160521號；及第WO 2014/011900號中之激酶抑制劑，該等文獻中之各者以全文引用之方式併入本文中。

在一些實施例中，個體先前投與了一種或多種淋巴瘤之標準護理療法。在一些實施例中，先前投與之標準護理療法為泊洛妥珠單抗維多汀、塞利尼索（selinexor）、阿基侖賽（奕凱達）、替沙津魯（祈萊亞（Kymriah））、苯達莫司汀與利妥昔單抗及泊洛妥珠單抗維多汀的組合、他法單抗（tafasitamab）與來那度胺（lenalidomide）的組合，或具有人類玻尿酸酶之利妥昔單抗（Rituxan Hycela）。

在一些實施例中，個體同時接受淋巴瘤之標準護理療法。在一些實施例中，標準護理療法為泊洛妥珠單抗維多汀、西林俄、阿基侖賽（奕凱達）、替沙津魯（祈萊亞）、苯達莫司汀與利妥昔單抗及泊洛妥珠單抗維多汀的組合、他法單抗與來那度胺的組合，或具有人類玻尿酸酶之利妥昔單抗（Rituxan Hycela）。醫藥組合物

當用作藥品時，式（I）化合物（包括其醫藥學上可接受之鹽）可以醫藥組合物形式投與。此等組合物可以醫藥技術熟知之方式製備，且可藉由多種途徑投與，此根據需要局部或全身治療及所治療之區域而定。投與可為局部（包括經皮、表皮、經眼及黏膜，包括鼻內、經陰道及直腸遞送）、經肺（例如藉由吸入或吹入粉末或氣溶膠，包括藉由霧化器；氣管內或鼻內）、經口或非經腸。經口投與可包括經調配用於每日一次或每日兩次（BID）投與的劑型。非經腸投與包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌肉內注射或輸注；或顱內（例如，鞘內或室內）投與。非經腸投與可呈單次推注劑量形式，或可為例如連續灌注泵浦。用於局部投藥之醫藥組合物及調配物可包括經皮貼片、軟膏、乳劑、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體及粉末。習知醫藥載劑、水性、散劑或油性基劑、增稠劑及其類似物可為必需或合需要的。

本文中亦提供醫藥組合物，其含有式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為活性成分，以及一種或多種醫藥學上可接受之賦形劑。舉例而言，醫藥組合物使用式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽製備。在一些實施例中，組合物適合於局部投與。製備本文提供的組合物時，通常將活性成分與賦形劑混合，用賦形劑稀釋或封閉於呈例如膠囊、藥囊、紙或其他容器形式的此類載劑中。當賦形劑充當稀釋劑時，其可為固體、半固體或液體材料，其充當活性成分的媒劑、載劑或介質。因此，組合物可呈以下形式：錠劑、丸劑、散劑、口含錠、藥囊、扁囊劑、酏劑、懸浮液、乳液、溶液、糖漿、氣霧劑（呈固體形式或於液體介質中）、含有例如高達10重量%之活性化合物之軟膏、軟及硬明膠膠囊、栓劑、無菌可注射溶液及無菌封裝散劑。在一些實施例中，組合物經調配用於經口投與。在一些實施例中，組合物為固體口服調配物。在一些實施例中，組合物調配為錠劑或膠囊。

本文中進一步提供醫藥組合物，其含有式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑。含有式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為活性成分的醫藥組合物可根據習知醫藥混配技術藉由使式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽與醫藥學載劑均勻混合來製備。載劑可視所要投與途徑（例如，經口、非經腸）而呈各種形式。在一些實施例中，組合物為固體口服組合物。

適合的醫藥學上可接受之載劑為此項技術中所熟知。一些此等醫藥學上可接受之載劑之描述可見於美國醫藥協會（American Pharmaceutical Association）及英國醫藥學會（Pharmaceutical Society of Great Britain）所出版之《醫藥賦形劑手冊（ The Handbook of Pharmaceutical Excipients）》中。

調配醫藥組合物之方法已描述於眾多出版物中，諸如Lieberman等人編輯的《醫藥劑型：錠劑（ Pharmaceutical Dosage Forms : Tablets）》，經修訂及擴增的第二版，第1-3卷；Avis等人編輯的《醫藥劑型：非經腸藥品（ Pharmaceutical Dosage Forms : Parenteral Medications）》，第1-2卷；及Lieberman等人編輯的《醫藥劑型：分散系統（ Pharmaceutical Dosage Forms : Disperse Systems）》，第1-2卷；Marcel Dekker公司出版。

在製備口服劑型的組合物時，可使用常用醫藥介質中之任一者。因此，對於液體口服製劑（諸如懸浮液、酏劑及溶液）而言，適合載劑及添加劑包括水、二醇、油、醇、調味劑、防腐劑、穩定劑、著色劑及其類似物；對於固體口服製劑（諸如散劑、膠囊及錠劑）而言，適合載劑及添加劑包括澱粉、糖、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑及其類似物。適合的黏合劑包括但不限於澱粉、明膠、天然糖（諸如葡萄糖或β-乳糖）、玉米甜味劑、天然及合成樹膠（諸如阿拉伯膠、黃蓍膠）或油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉及其類似者。崩解劑包括但不限於澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似者。固體口服製劑亦可用諸如糖之物質塗佈或可包覆腸溶包衣以調節主要吸收部位。對於非經腸投藥而言，載劑通常由無菌水組成，且可添加其他成分以增加溶解度或保藏性。可注射懸浮液或溶液亦可利用水性載劑以及適合的添加劑製備。本文中之醫藥組合物每個劑量單元（例如錠劑、膠囊、散劑、注射劑、一茶匙量及其類似者）將含有一定量的活性成分，其為遞送如本文中所描述之有效劑量所必需的。

包含式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽的組合物可調配成單位劑型，各劑量含有約5至約1,000 mg（1 g），更通常約100 mg至約500 mg活性成分。術語「單位劑型」係指適合作為單位劑量用於人類個體及其他個體的物理離散單元，各單元含有經計算以產生所要治療效果的預定量之活性材料（亦即，式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽）以及適合之醫藥賦形劑。

在一些實施例中，本文提供的組合物含有約5 mg至約50 mg的活性成分。一般熟習此項技術者將瞭解，此體現化合物或組合物含有約5 mg至約10 mg、約10 mg至約15 mg、約15 mg至約20 mg、約20 mg至約25 mg、約25 mg至約30 mg、約30 mg至約35 mg、約35 mg至約40 mg、約40 mg至約45 mg，或約45 mg至約50 mg活性成分。

在一些實施例中，本文中提供之組合物含有約50 mg至約500 mg活性成分。一般熟習此項技術者將瞭解，此表示化合物或組合物含有約50 mg至約100 mg、約100 mg至約150 mg、約150 mg至約200 mg、約200 mg至約250 mg、約250 mg至約300 mg、約350 mg至約400 mg，或約450 mg至約500 mg活性成分。在一些實施例中，本文中提供之組合物含有約10 mg、約20 mg、約80 mg或約160 mg活性成分。

在一些實施例中，本文中提供之組合物含有約500 mg至約1,000 mg活性成分。一般熟習此項技術者將瞭解，此表示化合物或組合物含有約500 mg至約550 mg、約550 mg至約600 mg、約600 mg至約650 mg、約650 mg至約700 mg、約700 mg至約750 mg、約750 mg至約800 mg、約800 mg至約850 mg、約850 mg至約900 mg、約900 mg至約950 mg，或約950 mg至約1,000 mg活性成分。

式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽之日劑量可在每個成人每天1.0至10,000 mg或更高的廣泛範圍或其中任何範圍內變化。對於經口投與，組合物較佳地以含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、160、200、250及500毫克活性成分之錠劑形式提供，用於對待治療個體進行劑量之症狀性調整。有效量之藥物通常以每公斤體重每天約0.1 mg至約1000 mg的劑量水平或其中之任何範圍供應。較佳地，範圍為每公斤體重每天約0.5至約500 mg或其中之任何範圍。更佳為每公斤體重每天約1.0至約250 mg，或其中之任何範圍。更佳為每公斤體重每天約0.1至約100 mg或其中之任何範圍。在一個實例中，範圍可為每公斤體重每天約0.1至約50.0 mg，或其中之任何量或範圍。在另一實例中，範圍可為每公斤體重每天約0.1至約15.0 mg，或其中之任何範圍。在另一實例中，範圍可為每公斤體重每天約0.5至約7.5 mg或其中之任何量至範圍。含有式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物可以每天1至4次之方案或以單次日劑量投與。

活性化合物可在寬劑量範圍內有效，且通常以醫藥學上有效量投與。待投與的最佳劑量可由熟習此項技術者容易地確定。因此應瞭解，化合物之實際投藥量通常由醫師確定，且根據相關情形改變，包括投藥模式、所投與之實際化合物、製劑強度、所治療之病狀及疾病病狀之進展。此外，與所治療特定個體相關的因素，包括個體反應、年齡、體重、飲食、投與時間及個體症狀的嚴重程度，將導致需要調節劑量。

在一些實施例中，本文中所提供之化合物可以約1 mg/kg至約100 mg/kg範圍內的量投與。在一些實施例中，本文提供的化合物可以約1 mg/kg至約20 mg/kg、約5 mg/kg至約50 mg/kg、約10 mg/kg至約40 mg/kg、約15 mg/kg至約45 mg/kg、約20 mg/kg至約60 mg/kg或約40 mg/kg至約70 mg/kg的量投與。舉例而言，約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg或約100 mg/kg。

熟習此項技術者將認識到，使用適合的、已知的及公認的細胞及/或動物模型進行之活體內及活體外試驗皆預測測試化合物治療或預防既定病症之能力。

熟習此項技術者將進一步認識到，可根據臨床及醫學技術中熟知的方法完成人類臨床試驗，包括在健康個體及/或罹患既定病症之個體中進行之首次用於人類的劑量範圍及功效試驗。

本文中提供醫藥套組，其適用於例如治療MALT1相關疾病或病症，諸如癌症，該等套組包括一個或多個含有包含有效量之本文中所提供之化合物的醫藥組合物的容器。若需要，則此類套組可進一步包括各種習知醫藥套組組分中之一者或多者，諸如具有一種或多種醫藥學上可接受之載劑之容器、另外的容器等，如對於熟習此項技術者而言為顯而易見的。套組中亦可包括呈插頁或呈標籤形式之說明書，其指示待投與組分之量、投與指南及/或用於混合組分之指南。額外實施例

實施例1. 一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽，（I）其中：各為單鍵或雙鍵； Q為-CH ₂-、O或NH； X為N或C； Y為N或C； Z為N或CR ⁶；其中當X及Y中之一者為N時，X及Y中之另一者為C； n為1、2或3； R ^X為氫或鹵素； R ¹為氫、鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^AR ^B或視情況經1個至3個選自羥基及C1-C3烷氧基之取代基取代之C1-C3烷基； R ²為氫、鹵素、胺基或C1-C3烷基；各R ³獨立地為氘、鹵素、羥基、C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基或C1-C3鹵烷基； m為0、1、2或3； R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員至10員雜芳基； R ⁵為苯基或5員至9員雜芳基，其中各R ⁵基團視情況經1個至3個獨立地選自R ⁸之取代基取代； R ⁶為氫、鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^CR ^D及C1-C3烷基；各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、氧環丁基、-NR ^CR ^D、C1-C3烷基及C3-C7環烷基；各R ⁸獨立地選自：鹵素；氰基；胺基；-N=(S=O)(C1-C3烷基) ₂；-S(=O) _p(C1-C3烷基)；-(C=O)NR ^ER ^F；C1-C3烷氧基；視情況經羥基取代之C1-C3鹵烷基；C1-C3鹵烷氧基；視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、胺基、C1-C3鹵烷基、4員至6員雜環基或視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基；視情況經羥基、-NR ^ER ^F或C1-C3烷氧基取代之C1-C4烷基；3員至8員雜環基；及C3-C6環烷氧基； p為1或2；及 R ^A、R ^B、R ^C、R ^D、R ^E及R ^F獨立地為氫、C1-C3烷基、C3-C6環烷基，或R ^A及R ^B、或R ^C及R ^D、或R ^E及R ^F與其所連接之氮原子一起形成視情況經1個至2個鹵素取代之4員至6員雜環基。

實施例2. 如實施例1之化合物，其中X為N且Y為C。

實施例3. 如實施例1或2之化合物，其中Z為N。

實施例4. 如實施例1至3中任一項之化合物，其中R ^X為氫。

實施例5. 如實施例1至4中任一項之化合物，其中Q為-CH ₂-。

實施例6. 如實施例1至5中任一項之化合物，其中R ¹為氫。

實施例7. 如實施例1至5中任一項之化合物，其中R ¹為鹵素。

實施例8. 如實施例1至7中任一項之化合物，其中R ²為氫。

實施例9. 如實施例1至7中任一項之化合物，其中R ²為鹵素。

實施例10. 如實施例1至9中任一項之化合物，其中n為1。

實施例11. 如實施例1至10中任一項之化合物，其中m為1。

實施例12. 如實施例1至11中任一項之化合物，其中各R ³獨立地為氘、鹵素、羥基、C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3鹵烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3鹵烷氧基。

實施例13. 如實施例1至12中任一項之化合物，其中m為1且R ³為甲基或三氟甲基。

實施例14. 如實施例1至13中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員或6員雜芳基。

實施例15. 如實施例1至13中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之6員雜芳基。

實施例16. 如實施例1至13中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員雜芳基。

實施例17. 如實施例1至13中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之4H-吡唑基、3H-吡唑基或噻唑基。

實施例18. 如實施例1至13中任一項之化合物，其中R ⁴未經取代。

實施例19. 如實施例1至13中任一項之化合物，其中各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：C1-C3鹵烷基、C1-C3烷基及環烷基。

實施例20. 如實施例1至19中任一項之化合物，其中R ⁵為視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之5員至9員雜芳基。

實施例21. 如實施例1至19中任一項之化合物，其中R ⁵為經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之5員至6員雜芳基。

實施例22. 如實施例1至21中任一項之化合物，其中R ⁵為視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之3-吡啶基或4-吡啶基。

實施例23. 如實施例1至21中任一項之化合物，其中R ⁸中之至少一者為鹵素。

實施例24. 如實施例1至21中任一項之化合物，其中R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基、胺基或C1-C3鹵烷基取代之5員至6員雜芳基。

實施例25. 如實施例1至21中任一項之化合物，其中R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基、胺基或C1-C3鹵烷基取代之5員雜芳基。

實施例26. 如實施例1至25中任一項之化合物，其為根據式（Ib）之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（Ib）。

實施例27. 一種醫藥組合物，其包含如實施例1至26中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及一種或多種醫藥學上可接受之賦形劑。

實施例28. 一種用於治療有需要之個體之癌症的方法，其包含向該個體投與有效量的如實施例1至26中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如實施例27之醫藥組合物。

實施例29. 如實施例28之方法，其中該癌症為MALT1相關癌症。

實施例30. 如實施例28或29之方法，其中該癌症為淋巴瘤。

實施例31. 如實施例30之方法，其中該淋巴瘤為非霍奇金氏淋巴瘤、DLBCL、難治性DLBCL、(ABC)亞型之DLBCL、套細胞淋巴瘤（MCL）或邊緣區淋巴瘤（MZL）。

實施例32. 如實施例28或29之方法，其中該癌症為白血病。

實施例33. 如實施例32之方法，其中該白血病為慢性淋巴球性白血病（CLL）。

實施例34. 如實施例28或29之方法，其中該癌症為實體腫瘤。

實施例35. 一種治療有需要之個體之自體免疫病症的方法，其包含向該個體投與有效量的如實施例1至26中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如實施例27之醫藥組合物。

實施例36. 如實施例35之方法，其中該自體免疫病症為慢性移植體對抗宿主疾病。

實施例37. 如實施例30至36中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與額外療法或治療劑。實例材料及方法

本文中所提供之化合物（包括其鹽）可使用已知有機合成技術製備且可根據許多可能的合成途徑中之任一者合成。

用於製備本文中所提供之化合物的反應可在適合之溶劑中進行，該等溶劑可由熟習有機合成技術者容易地選擇。在進行反應之溫度（例如可在溶劑結冰溫度至溶劑沸騰溫度範圍內之溫度）下，適合溶劑可實質上與起始材料（反應物）、中間物或產物無反應性。指定反應可在一種溶劑或超過一種溶劑之混合物中進行。視特定反應步驟而定，適用於特定反應步驟之溶劑可藉由熟習此項技術者選擇。

本文中所提供之化合物的製備可涉及各種化學基團之保護及去除保護基。是否需要保護及去除保護基，以及選擇適當保護基可由熟習此項技術者容易地確定。保護基之化學作用可例如在《保護基化學（ Protecting Group Chemistry）》第1版，Oxford University Press，2000；《馬奇氏高階有機化學：反應、機制及結構（ March ' s Advanced Organic Chemistry : Reactions , Mechanisms , and Structure）》第5版，Wiley-Interscience Publication，2001；及Peturssion,S.等人，「碳水化合物化學中之保護基（ Protecting Groups in Carbohydrate Chemistry）」，《化學教育雜誌（ J . Chem . Educ .）》74（11），1297（1997）中找到。

使用無水溶劑及試劑，在氮氣或氬氣下進行對水或空氣敏感之反應。藉由通常以Sanpont預塗TLC盤、矽膠GF-254、層厚度0.25 mm進行的分析型薄層層析（TLC）或液相層析-質譜分析（LC-MS）來確定反應進程。

通常，所使用之分析型LC-MS系統係由在正離子偵測模式下利用電噴霧電離之Shimadzu LCMS-2020，以及20ADXR泵、SIL-20ACXR自動取樣器、CTO-20AC管柱烘箱、M20A PDA偵測器及LCMS 2020 MS偵測器組成。該管柱通常為HALO a C18 30*5.0 mm，2.7 µm。移動相A為含有0.05% TFA之水，且移動相B為含有0.05% TFA之乙腈。梯度係在2.0分鐘內自5%移動相B至100%，保持0.7分鐘，隨後在0.05分鐘內恢復至5%移動相B且維持0.25分鐘。管柱烘箱（CTO-20AC）在40.0℃之溫度下操作。流動速率為1.5 mL/min，且注入體積為1 µl。PDA（SPD-M20A）偵測範圍為190 nm至400 nm。MS偵測器，其經組態利用電噴霧電離作為可電離源；採集模式：掃描；霧化氣流：1.5 L/min；乾燥氣流：15 L/min；偵測器電壓：調諧電壓±0.2 kv；DL溫度：250℃；加熱塊溫度：250℃；掃描範圍：90.00至900.00 m/z。ELSD（Alltech 3300）偵測器參數：漂移管溫度：60 ± 5℃；N ₂流動速率：1.8 ± 0.2 L/分鐘。針對個別化合物最佳化移動相梯度。

GC-MS系統通常用具有FID及MS偵測器之Shimadzu GCMS-QP2010 Ultra進行。採集模式之MS偵測器：開始時間：2.00分鐘；結束時間：9.00分鐘；ACQ模式：掃描；事件時間：0.30秒；掃描速度：2000；開始m/z：50.00；結束m/z：550.00；離子源溫度：200.00℃；界面溫度：250.00℃；溶劑截止時間（Solvent Cut Time）：2.00分鐘。

製備型HPLC純化通常用具有2489 UV偵測器的Waters自動純化系統（2545-2767）進行。管柱為Waters C18，19 ×150 mm，5 μm。移動相由乙腈（5%至95%）於含有0.1% FA之水中之混合物組成。流動速率保持在25 mL/min，注入體積為1200 μL，且UV偵測器使用兩個通道254 nm及220 nm。針對個別化合物最佳化移動相梯度。

手性分析型層析在以下中之一者上進行：Chiralpak AS、AD、Chiralcel OD、OJ Chiralpak IA、IB、IC、ID、IE、IF、IG、IH管柱（Daicel Chemical Industries有限公司）；( R , R)-Whelk-O1、( S , S)-Whelk-O1管柱（Regis technologies公司）；CHIRAL Cellulose-SB、SC、SA管柱（YMC有限公司），其具有不同管柱大小（50×4.6mm、100×4.6mm、150×4.6mm、250×4.6mm、50×3.0mm、100×3.0mm），利用指定百分比之乙醇/己烷（%Et/Hex）或異丙醇/己烷（%IPA/Hex）作為等度溶劑系統。

使用微波照射進行的反應通常使用由Biotage製造的引發劑進行。在減壓下在旋轉式汽化器上進行溶液濃縮。通常使用Biotage急驟層析設備（Dyax公司）在具有指定大小的預裝填濾筒中之矽膠（40至60 μM，60Å孔隙大小）上進行急驟管柱層析。除非另外說明，否則光譜儀在400 MHz下在DMSO-d ₆溶液中採集 ¹H NMR光譜。以百萬分率（ppm）報導化學位移。將四甲基矽烷（TMS）用作DMSO-d ₆溶液中之內部參考物，且將殘餘CH ₃OH峰或TMS用作CD ₃OD溶液中之內部參考物。以赫茲（Hz）為單位報導偶合常數（J）。手性分析型層析在以下中之一者上進行：Chiralpak AS、Chiralpak AD、Chiralcel OD、Chiralcel IA或Chiralcel OJ管柱（250×4.6 mm）（Daicel Chemical Industries有限公司），利用指定百分比之乙醇/己烷（%Et/Hex）或異丙醇/庚烷（%IPA/Hep）作為等度溶劑系統。手性製備型層析在以下中之一者上進行：Chiralpak AS、AD、Chiralcel OD、OJ、Chiralpak IA、IB、IC、ID、IE、IF、IG、IH管柱（Daicel Chemical Industries有限公司）；( R , R)-Whelk-O1、( S , S)-Whelk-O1管柱（Regis technologies公司）；CHIRAL Cellulose-SB、SC、SA管柱（YMC有限公司），其具有不同管柱大小（250×20mm、250×30mm、250×50mm），利用手性分析型層析上鑑別出之所要等度溶劑系統。

本文所使用的縮寫包括：-C(O)CH ₃（Ac）；乙酸（AcOH）；-OC(O)CH ₃（OAc）；水性（aq）；Cbz（苯甲氧羰基）； N, N-二異丙基乙胺（DIEA）； N; N-二甲基甲醯胺（DMF）；1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺（EDCI）；EtOAc（EtOAc）；二乙醚（乙醚或Et ₂O）；PE（PE）；公克（g）；小時（h或hr）；2-丙醇（IPA）；質譜（ms或MS）；微升（µL）；毫克（mg）；毫升（mL）；毫莫耳（mmol）；分鐘（min）；甲基三級丁基醚（MTBE）；六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯啶基-鏻（PyBOP）；滯留時間（R _t）；rt（rt或RT）；飽和水性氯化鈉溶液（鹽水）；三氟乙酸（TFA）；四氫呋喃（THF）；急驟層析（FC）；液相層析（LC）；液相層析-質譜分析（LCMS或LC-MS）；超臨界流體層析（SFC）；三級丁氧基羰基（Boc或BOC）；三氟化二乙基胺基硫（DAST）；DCM（DCM）；二甲基乙醯胺（DMA；DMAC）；二甲亞碸（DMSO）；1,3-雙(二苯膦基)丙烷（DPPP）；乙酸（HOAc）；3-氯過氧苯甲酸（m-CPBA）；甲基（Me）；甲醇（MeOH）；六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基氯甲脒（TCFH）；N-甲基咪唑（NMI）；N-溴丁二醯胺（NBS）；薄層層析（TLC）。

以下為製備在以下實例中所使用的化合物之代表性程序，或該等化合物可代替在以下實例中所使用的化合物，其可能並非可商購的。方法 A1 實例 1 、 2 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 3 ： ( 順式 )-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-醇

在-78℃下向4-碘-1-甲基-吡唑（48 g，231.8 mmol）於Et ₂O（2 L）中之溶液中添加正丁基鋰（14.8 g，231.8 mmol，2.5 M於己烷中）。在-78℃下，在氮氣下，攪拌反應混合物30分鐘。向上述混合物中添加6-氧雜雙環[3.1.0]己烷（15 g，178.3 mmol）及三氟化硼合二乙醚（32.9 g，231.8 mmol）。在-78℃下，在氮氣下，攪拌反應混合物30分鐘。反應混合物用飽和氯化銨水溶液（500 mL）淬滅。所得混合物用乙酸乙酯（3×500 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用DCM/MeOH（10:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（8 g，21%產率）。1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.37 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.99-4.07 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.79-2.88 (m, 1H), 2.00-2.21 (m, 2H), 1.56-1.92 (m, 4H). LC-MS: m/z 167 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

向2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-醇（5 g，30 mmol）於乙酸乙酯（250 mL）中之攪拌溶液中添加IBX（27.4 g，45.1 mmol，46%純度）。在80℃下攪拌所得混合物16小時。使混合物冷卻至25℃。反應物用飽和NaHSO ₃水溶液（200 mL）淬滅。所得混合物用乙酸乙酯（3×200 mL）萃取。合併之有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液（200 mL）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（1.6 g，32%產率）。LC-MS: m/z 165 [M+H] ⁺。步驟3：2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（ A1-3）

在25℃下向2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（3.9 g，23.7 mmol）於 t-BuOH（60 mL）中之攪拌溶液中逐份添加2-甲基丙-2-醇鉀（2.9 g，26.1 mmol）。在40℃下攪拌所得混合物0.5小時。在40℃下逐滴添加碘甲烷（3.4 g，23.7 mmol）且在40℃下攪拌所得混合物2小時。用水（200 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×200 mL）萃取混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用THF/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（ A1-3，3.9 g，82%產率）。LC-MS: m/z 179 [M+H] ⁺。步驟4：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（ A1-4）

2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（5.5 g，30.8 mmol）於1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺（70 mL）中之溶液在100℃下攪拌24小時。使混合物冷卻至25℃且隨後在減壓下濃縮，得到呈紅色油狀之粗標題化合物（ A1-4，5.5 g）。LC-MS: m/z 234 [M+H] ⁺。步驟5：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

向5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（2 g，8.5 mmol）於甲苯（20 mL）中之攪拌溶液中添加3-氟-1H-吡唑-5-胺（1 g，10.3 mmol）及AcOH（2 mL）。在110℃下攪拌所得混合物16小時。使混合物冷卻至25℃。反應混合物在減壓下濃縮。殘餘物用水（100 mL）稀釋。所得溶液用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈淺黃色固體狀之標題化合物（2 g，60%產率）。1H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.60 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 6.47 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.97-3.21 (m, 2H), 2.39-2.57 (m, 1H), 2.28-2.32 (m, 1H), 1.88 (s, 3H). LC-MS: m/z 272 [M+H] ⁺。步驟6：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（2 g，7.4 mmol）於甲苯（80 mL）中之攪拌溶液中添加(4 R)-4-苯甲基-2-[1-[(4 R)-4-苯甲基-4,5-二氫唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氫唑（641 mg，1.8 mmol）、乙醯氧銅（181 mg，1.5 mmol）、N-氟苯磺醯亞胺（3.4 g，11.1 mmol）及TMSCN（3.7 g，36.9 mmol）。在25℃下，在氮氣下，攪拌反應物16小時。在減壓下移除溶劑，且將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到粗產物。粗產物藉由製備型HPLC進一步純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（100 mg，4%產率）。LC-MS (ES, m/z): 297[M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7）

2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（130 mg，0.44 mmol）於AcOH（2 mL）及HCl（12M，2 mL）中之溶液在100℃下攪拌2小時。使混合物冷卻至25℃。在減壓下濃縮混合物且用水（50 ml）稀釋殘餘物。所得混合物用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物（ A1-7，130 mg，90%產率）。LC-MS: m/z 316 [M+H] ⁺。步驟8：實例 3及反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

向2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（165 mg，523 μmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（123 mg，628 μmol）於ACN（10 mL）中之攪拌溶液中添加TCFH（587 mg，2.1 mmol）及NMI（215 mg，2.6 mmol）。在25℃下攪拌反應混合物1小時。反應混合物在減壓下濃縮。殘餘物用水（100 mL）稀釋。所得混合物用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用DCM/MeOH（10:1）溶離，得到粗產物。粗產物藉由製備型HPLC進一步純化，得到呈白色固體狀之實例 3（順式-外消旋混合物，80 mg，29%產率，）及呈白色固體狀之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺之外消旋混合物（120 mg，44%產率）。實例 3： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.10 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.68-2.84 (m, 2H), 1.88 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。步驟9：分離鏡像異構物以獲得實例 1及實例 2

120 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；等度：25分鐘內50% B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：10.008；RT2（分鐘）：19.257；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：3）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 1（40.7 mg，33%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 2（33.9 mg，28%產率）。實例 1： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.07 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.85-2.98 (m, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 1.97 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。實例 2： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.07 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.85-2.98 (m, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 1.97 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。方法 A2 實例 4 、 5 ： (6 R,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 S,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 6 、 7 ： (6 R,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 S,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7，128 mg，405.9 μmol）及6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（93 mg，405.9 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（65 mg，30%產率），LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（60 mg，28%產率），LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 4及實例 5

65 mg之反式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；等度：20分鐘內50% B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：7.514；RT2（分鐘）：19.166；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 4（17 mg，26%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 5（24.6 mg，37%產率）。實例 4： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.21 (s, 1H), 9.02 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.83 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.20 (s, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53-4.58 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.88-2.99 (m, 1H), 2.51-2.58 (m, 1H), 1.97 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。實例 5： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.21 (s, 1H), 9.02 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.83 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.20 (s, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53-4.58 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.88-2.95 (m, 1H), 2.50-2.58 (m, 1H), 1.97 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 6及實例 7

60 mg之順式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；等度：13分鐘內25% B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：8.968；RT2（分鐘）：11.575；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.5 mL；運行次數：8）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 6（23 mg，38%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 7（24.6 mg，41%產率）。實例 6： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.20 (s, 1H), 9.03 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.19 (s, 2H) ,7.62 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.54-4.57 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.69-2.88 (m, 2H), 1.87 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。實例 7： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.21 (s, 1H), 9.03 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.62 (s, 1H),7.34 (s, 1H), 6.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.54-4.57 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.69-2.88 (m, 2H), 1.87 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。方法 A3 實例 8 、 9 ： (6 S,8 R)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 10 、 11 ： (6 S,8 S)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

向5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（ A1-4，2.2 g，9.43 mmol）於甲苯（15 mL）中之攪拌溶液中添加3-氯-1H-吡唑-5-胺（1.3 g，11.3 mmol）及AcOH（1.5 mL）。在110℃下攪拌所得混合物24小時。使混合物冷卻至25℃。反應混合物在減壓下濃縮，且將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（10:1）溶離，得到呈淺黃色固體狀之2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.5 g，44%產率）。LC-MS: m/z 288 [M+H] ⁺。步驟2：2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.1 g，3.82mmol）於甲苯（40 mL）中之攪拌溶液中添加(4 R)-4-苯甲基-2-[1-[(4 R)-4-苯甲基-4,5-二氫唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氫唑（1.4 g，3.8 mmol）、乙醯氧銅（94 mg，764 μmol）、N-氟苯磺醯亞胺（1.8 g，5.7mmol）及TMSCN（1.9 g，19.1 mmol）。在25℃下，在氮氣下，攪拌反應物24小時。減壓移除溶劑。殘餘物用水（100 mL）稀釋。所得混合物用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到粗產物，其藉由HPLC進一步純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（240 mg，17%產率）。LC-MS (ES, m/z): 313[M+H] ⁺。步驟3：2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A3-3）

類似於方法 A1 步驟 7但使用2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（240 mg，0.77 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（ A3-3，235 mg，94%產率）。LC-MS: m/z 332 [M+H] ⁺。步驟4：反式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（120 mg，362 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（141 mg，723 μmol）且在25℃下攪拌24小時，獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（25 mg，13%產率），LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（15 mg，8%產率），LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 8及實例 9

25 mg之反式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：13.764；RT2（分鐘）：19.041；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 8（8.9 mg，43%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 9（8.4 mg，40%產率）。實例 8： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.10 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.51-4.57 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.86-2.93 (m, 1H), 2.50-2.51 (m, 1H), 1.99 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。實例 9： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.10 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.50-4.54 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.86-2.93 (m, 1H), 2.50-2.51 (m, 1H), 1.99 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。步驟6：分離鏡像異構物以獲得實例 10及實例 11

15 mg之順式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：14.519；RT2（分鐘）：26.523；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 10（2.4 mg，15%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 11（1.7 mg，11%產率）。實例 10： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.09 (s, 1H), 8.70-8.72 (m, 2H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.66-2.88 (m, 2H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。實例 11： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.09 (s, 1H), 8.70-8.72 (m, 2H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.67-2.88 (m, 2H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。方法 A4 實例 12 、 13 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2,3- 二氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2,3- 二氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 14 、 15 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2,3- 二氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2,3- 二氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2,3-二氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

向2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7，592 mg，1.88 mmol）於DCM（18 mL）及MeOH（18 mL）中之溶液中添加於DMF（6 mL）中之Selectfluor氟化試劑（2.0 g，5.63 mmol）。在25℃下，在氮氣下，攪拌反應物16小時。在減壓下濃縮溶劑且用水（50 ml）稀釋殘餘物。所得溶液用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（130 mg，12%產率）。LC-MS: m/z 334 [M+H] ⁺。步驟2：反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2,3-二氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（124 mg，372 μmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（109 mg，557 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（50 mg，25%產率），LC-MS: m/z 511 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（25 mg，13%產率），LC-MS: m/z 511 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 12及實例 13

50 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.925；RT2（分鐘）：16.35；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：6）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 12（22.5 mg，43%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 13（11.6 mg，23%產率）。實例 12： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.08 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 4.53 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.87-2.93 (m, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 1.93 (s, 3H). LC-MS: m/z 511 [M+H] ⁺。實例 13： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.08 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 4.53 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.87-2.93 (m, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 1.93 (s, 3H). LC-MS: m/z 511 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 14及實例 15

25 mg之順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2,3-二氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.465；RT2（分鐘）：13.025；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 14（9.8 mg，38%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 15（6.4 mg，25%產率）。實例 14： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.09 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.52-4.56 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.81-2.87 (m, 1H), 2.66-2.71 (m, 1H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 511 [M+H] ⁺。實例 15： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.08 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.52-4.56 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.81-2.87 (m, 1H), 2.66-2.71 (m, 1H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 511 [M+H] ⁺。方法 A5 實例 16 、 17 ： (6 S,8 R)-3- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-3- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 18 、 19 ： (6 S,8 S)-3- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-3- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-氯-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

向2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7，100 mg，317 μmol）於DMF（10 mL）中之溶液中添加NCS（85 mg，634 μmol）。在60℃下，在氮氣下，攪拌反應物2小時。使反應物冷卻至25℃。用水（50 ml）稀釋反應物，且用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取所得混合物。合併之有機層用鹽水（3×50 mL）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。殘餘物藉由HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（100 mg，81%產率）。LC-MS: m/z 350 [M+H] ⁺。步驟2：反式-3-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-3-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用3-氯-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（130 mg，372 μmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（110 mg，556 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（35 mg，17%產率），LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（25 mg，12%產率），LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 16及實例 17

35 mg之反式-3-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：12.633；RT2（分鐘）：17.731；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.5 mL；運行次數：6）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 16（7.1 mg，19%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 17（11.5 mg，31%產率）。實例 16： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.17 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.56 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.90-2.95 (m, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。實例 17： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.22 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.55 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.90-2.95 (m, 1H), 2.50-2.56 (m, 1H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 18及實例 19

25 mg之順式-3-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：8.045；RT2（分鐘）：9.61；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.5 mL；運行次數：6）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 18（4.1 mg，15%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 19（5.5 mg，21%產率）。實例 18： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.52-4.58 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.82-2.94 (m, 1H), 2.67-2.72 (m, 1H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。實例 19： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 11.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.53-4.58 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.82-2.94 (m, 1H), 2.67-2.72 (m, 1H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。方法 A6 實例 20 、 21 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 乙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 乙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 22 、 23 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 乙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 ， (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 乙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：4-碘-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑

在0℃下向4-碘-1H-吡唑（100 g，515.5 mmol）於THF（1.2 L）中之攪拌溶液中添加NaH（30.9 g，773.3 mmol，60%於礦物油中）。在0℃下攪拌混合物30分鐘。在0℃下逐滴添加2-(氯甲氧基)乙基-三甲基-矽烷（128.9 g，773.3 mmol），且在25℃下攪拌混合物2小時。將反應混合物傾入冰水（2500 mL）中且用乙酸乙酯（3×2500 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:3）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（130 g，73%產率）。LC-MS: m/z 325 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-醇

在-90℃下在氮氣下向4-碘-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑（50.1 g，154.6 mmol）於Et ₂O（800 mL）中之攪拌混合物中添加正丁基鋰（61.8 mL，2.5M於己烷中）。在-90℃下，在氮氣下，攪拌反應混合物1小時。在-90℃下添加6-氧雜雙環[3.1.0]己烷（10 g，118.9 mmol）及三氟化硼合二乙醚（21.9 g，154.6 mmol），且在氮氣下在-78℃下攪拌混合物1小時。用飽和氯化銨水溶液（100 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×200 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（2:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（9.6 g，25%產率）。LC-MS: m/z 283 [M+H] ⁺。步驟3：2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 2但使用2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-醇（9.6 g，34.0 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（6.5 g，61%產率）。LC-MS: m/z 281 [M+H] ⁺。步驟4：2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（ A6-4）

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（6.5 g，23.2 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（ A6-4，3.4 g，44%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.73 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 3.43-3.55 (m, 2H), 2.24-2.34 (m, 3H), 1.76-2.01 (m, 3H), 1.25 (s, 3H), 0.78-0.83 (m, 2H), -0.06 (s, 9H). LC-MS: m/z 295 [M+H] ⁺。步驟5：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（4.63 mL，22.4 mmol）中之2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（3.3 g，11.2 mmol）且在100℃下攪拌1小時，粗標題化合物呈棕色油狀獲得（4.5 g）且其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 350 [M+H] ⁺。步驟6：2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（ A6-6）

向5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（3.9 g，8.9 mmol）於甲苯（60 mL）中之攪拌溶液中添加3-氟-1H-吡唑-5-胺（1.8 g，17.9 mmol）及AcOH（6 mL）。所得混合物在90℃下攪拌16小時。使混合物冷卻至25℃且在減壓下濃縮。殘餘物用水（200 mL）稀釋。所得混合物用乙酸乙酯（2×200 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離。所得產物藉由製備型HPLC進一步純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（ A6-6），3 g，79%產率）。 ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.44 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.20 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.31 (s, 2H), 3.50-3.55 (m, 2H), 3.04-3.21 (m, 2H), 2.61-2.69 (m, 1H), 2.34-2.44 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 0.84-0.90 (m, 2H), 0.05 (s, 9H). LC-MS: m/z 388 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（4 g，10.3 mmol）於甲苯（20 mL）中之攪拌溶液中添加(4 R)-4-苯甲基-2-[1-[(4 R)-4-苯甲基-4,5-二氫唑-2-基]-1-甲基-乙基]-4,5-二氫唑（449 mg，1.2 mmol）、乙醯氧銅（255 mg，2.1 mmol）、N-氟苯磺醯亞胺（4.9 g，15.5 mmol）及TMSCN（5.1 g，51.6 mmol）。在25℃下，在氮氣下，攪拌混合物16小時。藉由添加水（100 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（2×100 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（1.5 g，26%產率）。LC-MS: m/z 413 [M+H] ⁺。步驟8：2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（400 mg，969 μmol）於AcOH（3 mL）及HCl（12M，3 mL）中之溶液在90℃下攪拌15分鐘。使混合物冷卻至25℃。藉由小心添加2 N氫氧化鈉將pH調節至約6。混合物隨後直接藉由逆相急驟層析純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（300 mg，77%產率）。LC-MS: m/z 302 [M+H] ⁺。步驟9：2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A6-9）

向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（600 mg，1.9 mmol）於MeOH（10 mL）中之攪拌溶液中添加兩滴濃H ₂SO ₄。在80℃下攪拌混合物1小時。用水（100 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（ A6-9，400 mg，51%產率）。LC-MS: m/z 316 [M+H] ⁺。步驟10：8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（200 mg，634 μmol）於ACN（5 mL）中之攪拌溶液中添加碳酸銫（1.0 g，3.2 mmol）及碘乙烷（495 mg，3.2 mmol）。在25℃下攪拌混合物1小時。用水（20 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（120 mg，49%產率）。LC-MS: m/z 344 [M+H] ⁺。步驟11：8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

向8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（120 mg，349 μmol）於MeOH（2 mL）及THF（2 mL）中之攪拌溶液中添加於水（2 mL）中之LiOH（42 mg，1.8 mmol）。在25℃下攪拌混合物1小時。用2 M HCl將pH調節至約5。用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（100 mg，78%產率）。LC-MS: m/z 330 [M+H] ⁺。步驟12：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（100 mg，304 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（57 mg，293 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（60 mg，37%產率），LC-MS: m/z 507 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（40 mg，24%產率），LC-MS: m/z 507 [M+H] ⁺。步驟13：分離鏡像異構物以獲得實例 20及實例 21

60 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRALPAK IA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：10.081；RT2（分鐘）：18.654；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 20（25.7 mg，42%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 21（22.6 mg，37%產率）。實例 20： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 9.07 (br, 1H), 9.73 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.89-7.94 (m, 3H), 7.76 (s, 1H), 6.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.42-4.58 (m, 1H), 4.20-4.28 (m, 2H), 3.06-3.22 (m, 1H), 2.58-2.69 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.52 (t, J = 6.9Hz, 3H). LC-MS: m/z 507 [M+H] ⁺。實例 21： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 9.08 (br, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.90-7.94 (m, 3H), 7.77 (s, 1H), 6.29 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.43-4.58 (m, 1H), 4.20-4.28 (m, 2H), 3.05-3.22 (m, 1H), 2.58-2.69 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.52 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LC-MS: m/z 507 [M+H] ⁺。步驟14：分離鏡像異構物以獲得實例 22及實例 23

40 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：13.051；RT2（分鐘）：20.088；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 22（14.1 mg，35%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 23（15.7 mg，39%產率）。實例 22： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.58 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.82 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.30 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.34-4.42 (m, 1H), 4.08-4.17 (m, 2H), 2.83-3.03 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.43 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LC-MS: m/z 507 [M+H] ⁺。實例 23： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.58 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.92 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.37-4.43 (m, 1H), 4.08-4.18 (m, 2H), 2.83-3.03 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.44 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LC-MS: m/z 507 [M+H] ⁺。方法 A7 實例 24 、 25 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 26 、 27 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 及 (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

在0℃下向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A6-9，200 mg，634 μmol）於ACN（6 mL）中之攪拌溶液中添加碳酸銫（620 mg，1.9 mmol）。在0℃下攪拌混合物20分鐘，且添加2-溴-2,2-二氟-乙酸甲酯（599.3 mg，3.2 mmol）於ACN（0.5 mL）中之溶液。在25℃下攪拌混合物16小時。用水（20 mL）淬滅反應物。用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（120 mg，46%產率）。LC-MS (ES, m/z): 366[M+H] ⁺。步驟2：8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2）

向8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（120 mg，328 μmol）於MeOH（2 mL）及THF（2 mL）中之攪拌溶液中添加於水（2 mL）中之LiOH（39 mg，1.6 mmol）。在25℃下攪拌混合物1小時。用1 M HCl將pH調節至約4。用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（ A7-2，100 mg，78%產率）。LC-MS (ES, m/z): 352[M+H] ⁺。步驟3：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（100 mg，285 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（210 mg，1.1 mmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（50 mg，31%產率），LC-MS (ES, m/z): 529[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（50 mg，31%產率），LC-MS (ES, m/z): 529[M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 24及實例 25

50 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.29；RT2（分鐘）：13.952；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.2 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 24（17.3 mg，34%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 25（14.5 mg，29%產率）。實例 24： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.56-8.70 (m, 4H), 7.93 (s, 2H), 7.86 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.12 (t, J = 60.6 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.39-4.48 (m, 1H), 3.02-3.06 (m, 1H), 2.73-2.79 (m, 1H), 2.13 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 529[M+H] ⁺。實例 25： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.69 (s, 1H), 8.46-8.62 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.94 (s, 2H), 7.83 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.13 (t, J = 60.6 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.32-4.42 (m, 1H), 3.00-3.05 (m, 1H), 2.73-2.77 (m, 1H), 2.13 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 529[M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 26及實例 27

50 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.026；RT2（分鐘）：15.277；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 26（10.6 mg，21%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 27（13.6 mg，27%產率）。實例 26： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.60 (s, 2H), 8.42 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.13 (t, J = 60.3 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.37-4.42 (m, 1H), 2.97-3.03 (m, 1H), 2.82-2.90 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 529[M+H] ⁺。實例 27： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.61 (s, 2H), 8.42 (s, 1H), 7.89-7.93 (m, 4H), 7.78 (s, 1H), 7.13 (t, J = 60.6 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.36-4.42 (m, 1H), 2.98-3.03 (m, 1H), 2.84-2.91 (m, 1H), 2.01 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 529[M+H] ⁺。方法 A8 實例 28 、 29 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 30 、 31 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 及 (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A6-9，250 mg，793 μmol）於二烷（10 mL）中之攪拌溶液中添加環丙基硼酸（cyclopropylboronic acid）（136 mg，1.6 mmol）、DMAP（387 mg，3.2 mmol）、乙醯氧銅（158 mg，793 μmol）及碳酸銫（646 mg，2.0 mmol）。在90℃下在氧氣氛圍下攪拌混合物1小時。用水（30 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×30 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（120 mg，36%產率）。LC-MS: m/z 356 [M+H] ⁺。步驟2：8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A8-2）

類似於方法 A7 步驟 2但使用8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（120 mg，338 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（ A8-2，100 mg）。LC-MS: m/z 342 [M+H] ⁺。步驟3：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（100 mg，293 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（57 mg，293 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（20 mg，13%產率），LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（13 mg，8%產率），LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 28及實例 29

20 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：19 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：7.427；RT2（分鐘）：13.024；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.5 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 28（4.7 mg，23%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 29（5.5 mg，27%產率）。實例 28： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 9.13 (br, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.73 (s, 1H), 6.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.45-4.50 (m, 1H), 3.52-3.60 (m, 1H), 3.09-3.16 (m, 1H), 2.63-2.76 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.00-1.11 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。實例 29： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 9.11 (br, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.61-7.71 (m, 2H), 6.29 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.43-4.49 (m, 1H), 3.51-3.57 (m, 1H), 3.07-3.14 (m, 1H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.00-1.10 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 30及實例 31

13 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：19 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：5.137；RT2（分鐘）：8.122；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.8 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 30（2.1 mg，16%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 31（2.5 mg，18%產率）。實例 30： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.59 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.30-8.42 (m, 2H), 7.92 (s, 2H), 7.59-7.66 (m, 2H), 6.28 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.39-4.45 (m, 1H), 3.52-3.58 (m, 1H), 2.82-3.03 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 0.99-1.12 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。實例 31： ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.59 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.56-7.64 (m, 2H), 6.30 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.38-4.45 (m, 1H), 3.51-3.56 (m, 1H), 2.85-3.02 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 0.93-1.09 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。方法 A9 實例 32 、 33 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 34 、 35 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-碘-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑

類似於方法 A6 步驟 1但使用3-碘-1H-吡唑（100 g，515.5 mmol），標題化合物呈白色固體狀獲得（130 g，74%產率）。LC-MS: m/z 325 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-醇

在-90℃下在氮氣下向3-碘-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑（231.3 g，713.3 mmol）於Et ₂O（4.5 L）中之攪拌混合物中添加正丁基鋰（310 mL，2.5M於己烷中）。在-90℃下，在氮氣下，攪拌反應混合物30分鐘。在-90℃下添加6-氧雜雙環[3.1.0]己烷（50 g，594.4 mmol）及三氟化硼合二乙醚（109 g，772.7 mmol）。在-90℃下，在氮氣下，攪拌反應混合物1小時。反應混合物用飽和氯化銨水溶液（1000 mL）淬滅，且所得混合物用乙酸乙酯（3×2.0 L）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（60 g，35%產率）。LC-MS: m/z 283 [M+H] ⁺。步驟3：2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 2但使用2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-醇（60 g，212.4 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（30 g，31%純度）。LC-MS: m/z 281 [M+H] ⁺。步驟4：2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（ A9-4）

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（23 g，49.2 mmol）且在藉由製備型HPLC純化產物之後，標題化合物呈黃色油狀獲得（ A9-4，4.7 g，32%產率）。LC-MS: m/z 295 [M+H] ⁺。步驟5：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（ A9-5）

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（8.3 g，47.7 mmol）中之2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（4.7 g，15.9 mmol）且在100℃下攪拌2小時，粗標題化合物呈黃色油狀獲得（ A9-5，4.7 g）且其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 350 [M+H] ⁺。步驟6：2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A6 步驟 6但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（4 g，11.4 mmol）且在110℃下攪拌16小時，標題化合物呈黃色油狀獲得（2 g，45%產率）。LC-MS: m/z 388 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A6 步驟 7但使用2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（2 g，5.1 mmol）且在25℃下攪拌24小時，呈黃色油狀之標題化合物呈黃色油狀獲得（420 mg，11%產率）。LC-MS: m/z 413 [M+H] ⁺。步驟8：2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（700 mg，1.7 mmol）於AcOH（2.5 mL）及HCl（12M，2.5 mL）中之溶液在100℃下攪拌15分鐘。使混合物冷卻至25℃。用水（10 mL）稀釋反應混合物且用飽和碳酸氫鈉水溶液將pH調節至約7。所得混合物用乙酸乙酯（3×15 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（30 mL）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。混合物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（160 mg，26%產率）。LC-MS: m/z 302 [M+H] ⁺。步驟9：2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A9-9）

類似於方法 A6 步驟 9但使用2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（330 mg，33.2 mmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（ A9-9，100 mg）。LC-MS: m/z 316 [M+H] ⁺。步驟10：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A6 步驟 10但使用粗2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（80 mg）且不經最終純化，粗標題化合物呈黃色油狀獲得（50 mg）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.67 (s, 1H), 7.55 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.30-4.46 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.67(s, 3H), 2.83-2.88 (m, 1H), 2.60-2.66 (m, 1H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 330 [M+H] ⁺。步驟11：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A9-11）

類似於方法 A6 步驟 11但使用粗2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（50 mg，142 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（ A9-11，40 mg）。LC-MS: m/z 316 [M+H] ⁺。步驟12：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A9-11，40 mg，127 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（24 mg，127 μmmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（23 mg，37%產率），LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（14 mg，22%產率），LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。步驟13：分離鏡像異構物以獲得實例 32及實例 33

23 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：25 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：28.444；RT2（分鐘）：33.535；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.5 mL；運行次數：12）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 32（4 mg，20%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 33（2.9 mg，14%產率）。實例 32： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.14 (s, 1H), 8.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.00-3.33 (m, 1H), 2.50-2.51 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。實例 33： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.14 (br), 8.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.52-4.56 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.00-3.33 (m, 1H), 2.47-2.50 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。步驟14：分離鏡像異構物以獲得實例 34及實例 35

14 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRALPAK AS-H，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.135；RT2（分鐘）：20.036；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.6 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 34（2.0 mg，14%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 35（1.7 mg，12%產率）。實例 34： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.04 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.56 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.51-4.55 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.88-2.92 (m, 1H), 2.74-2.79 (m, 1H), 1.87 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。實例 35： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.02 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.56 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.51-4.55 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.88-2.93 (m, 1H), 2.74-2.79 (m, 1H), 1.87 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。方法 A10 實例 36 、 37 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-( 噻唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-( 噻唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 38 、 39 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-( 噻唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺及 (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-( 噻唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(噻唑-5-基)環戊-1-醇

類似於方法 A1 步驟 1但使用5-溴噻唑（11.65 g，71 mmol），標題化合物呈棕色油狀獲得（2 g，20%產率）。LC-MS: m/z 170 [M+H] ⁺。步驟2：2-(噻唑-5-基)環戊-1-酮

在25℃下向2-(噻唑-5-基)環戊-1-醇（1 g，5.9 mmol）於DCM（100 mL）中之攪拌溶液中添加Dess-Martin高碘烷（3.76 g，8.8 mmol）。在25℃下攪拌所得混合物0.5小時。反應物用飽和NaHSO ₃水溶液（200 mL）淬滅，且所得混合物用DCM（3×100 mL）萃取。合併之有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液（200 mL）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（1 g)。LC-MS: m/z 168 [M+H] ⁺。步驟3：2-甲基-2-(噻唑-5-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(噻唑-5-基)環戊-1-酮（1.5 g，5.3 mmol）且藉由用PE/EA（1:1）溶離之矽膠管柱層析純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（270 mg，28%產率）。LC-MS: m/z 182 [M+H] ⁺。步驟4：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(噻唑-5-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（8 mL）中之2-甲基-2-(噻唑-5-基)環戊-1-酮（530 mg，2.9 mmol）且在110℃下攪拌1.5小時，粗標題化合物呈黃色油狀獲得（230 mg，粗）。LC-MS: m/z 237 [M+H] ⁺。步驟5：5-(2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8-基)噻唑

在室溫下向5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(噻唑-5-基)環戊-1-酮（520 mg，2.2 mmol）於甲苯（10 mL）中之攪拌溶液中添加5-氟-1H-吡唑-3-胺（445 mg，4.4 mmol）及AcOH（1 mL）。在100℃下攪拌所得混合物16小時。使混合物冷卻至25℃。在減壓下濃縮反應混合物，且用水（50 mL）稀釋殘餘物。用飽和碳酸氫鈉水溶液將pH調節至約7。所得混合物用乙酸乙酯（2×60 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱層析且用EA/PE（3:7）溶離，得到呈黃色固體狀之標題化合物（430 mg，71%產率）。LC-MS: m/z 275 [M+H] ⁺。步驟6：2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用5-(2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-8-基)噻唑（430 mg，1.6 mmol），標題化合物呈白色固體狀獲得（70 mg，15%產率）。LC-MS: m/z 300 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A1 步驟 7但使用2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（70 mg，234 μmol）且在90℃下攪拌1小時，標題化合物呈白色固體狀獲得（55 mg，74%產率）。LC-MS: m/z 319 [M+H] ⁺。步驟8：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（50 mg，157 µmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（31 mg，157 µmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈灰白色固體狀之反式異構物（35 mg，44%產率），LC-MS: m/z 496 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（25 mg，31%產率），LC-MS: m/z 496 [M+H] ⁺。步驟9：分離鏡像異構物以獲得實例 36及實例 37

35 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：19.03；RT2（分鐘）：41.07；樣品溶劑：Hex(0.1% FA)--HPLC；注入體積：1.1 mL；運行次數：20）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 36（5 mg，28%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 37（6.7 mg，38%產率）。實例 36： ¹HNMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.19 (br, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.84 (s, 1H), 6.63 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.58-4.65 (m, 1H), 2.96-3.01 (m, 1H), 2.68-2.80 (m, 1H), 2.12 (s, 3H). LC-MS: m/z 496 [M+H] ⁺。實例 37： ¹HNMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.20 (br, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.84 (s, 1H), 6.63 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.58-4.65 (m, 1H), 2.96-3.01 (m, 1H), 2.68-2.78 (m, 1H), 2.12 (s, 3H). LC-MS: m/z 496 [M+H] ⁺。步驟10：分離鏡像異構物以獲得實例 38及實例 39

25 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(噻唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：10.14；RT2（分鐘）：12.47；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.4 mL；運行次數：3）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 38（4.2 mg，33%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 39（4.7 mg，37%產率）。實例 38： ¹HNMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.22 (br, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.82 (s, 1H), 6.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.58-4.64 (m, 1H), 2.95-3.02 (m, 1H), 2.74-2.81 (m, 1H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 496 [M+H] ⁺。實例 39： ¹HNMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.22 (br, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.82 (s, 1H), 6.61 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.58-4.64 (m, 1H), 2.95-3.01 (m, 1H), 2.74-2.82 (m, 1H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 496 [M+H] ⁺。方法 A11 實例 40 、 41 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 42 、 43 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（90 mg，285 μmol）及5-胺基-2-(二氟甲氧基)菸鹼腈（53 mg，285 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（18 mg，13%產率），LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（12.4 mg，9%產率），LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 40及實例 41

18 mg之反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：10.614；RT2（分鐘）：20.977；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：3 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 40（4.7 mg，26%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 41（2.8 mg 15%產率）。實例 40： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.89 (s, 1H), 8.69 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.63-8.65 (m, 2H), 7.75 (t, J = 71.7 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.41 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.49-4.52 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.84-2.86 (m, 1H), 2.47-2.53 (m, 1H), 1.96 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。實例 41： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.89 (s, 1H), 8.69 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.63-8.64 (m, 2H), 7.75 (t, J = 71.7 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.41 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.46-4.52 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.84-2.91 (m, 1H), 2.47-2.53 (m, 1H), 1.96 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 42及實例 43

12.4 mg之順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.371；RT2（分鐘）：18.431；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.5 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 42（5.4 mg，28產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 43（2.6 mg，13產率）。實例 42： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.86 (s, 1H), 8.68 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 71.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.33 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.46-4.51 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.66-2.80 (m, 2H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。實例 43： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.89 (s, 1H), 8.68 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 71.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.33 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.46-4.49 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.69-2.79 (m, 2H), 1.86 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。方法 A12 實例 44 、 45 ： (6 S,8 R)-2- 氯 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(2-( 三氟甲基 ) 吡啶 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-2- 氯 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(2-( 三氟甲基 ) 吡啶 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 46 、 47 ： (6 S,8 S)-2- 氯 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(2-( 三氟甲基 ) 吡啶 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-2- 氯 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(2-( 三氟甲基 ) 吡啶 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

在氮氣氛圍下向2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A3-3，90 mg，211 μmol）於DCM（15 mL）中之攪拌溶液中添加吡啶（139 mg，1.7 mmol）及磷醯三氯（178 mg，1.2 mmol）。在25℃下攪拌反應混合物1小時。添加2-(三氟甲基)吡啶-4-胺（69 mg，423 μmol），且在0℃下攪拌混合物3小時。在減壓下濃縮反應混合物，且用水（10 mL）稀釋殘餘物。所得混合物用乙酸乙酯（3×10 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用DCM/MeOH（10:1）溶離，得到粗產物，其藉由製備型HPLC進一步純化，得到標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（19 mg 14%產率），LC-MS: m/z 476 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（11 mg，8%產率），LC-MS: m/z 476 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 44及實例 45

10 mg之反式-2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.391；RT2（分鐘）：12.872；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 44（3.7 mg，36%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 45（3.1 mg，30%產率）。實例 44： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.12 (s, 1H), 8.67 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.19 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.80-7.83 (m, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.49-4.55 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.85-2.92 (m, 1H), 2.47-2.52 (m, 1H), 1.98 (s, 3H). LC-MS: m/z 476 [M+H] ⁺。實例 45： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.11 (s, 1H), 8.67 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80-7.83 (m, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.49-4.52 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.85-2.92 (m, 1H), 2.48-2.54 (m, 1H), 1.98 (s, 3H). LC-MS: m/z 476 [M+H] ⁺。步驟10：分離鏡像異構物以獲得實例 46及實例 47

10 mg之順式-2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度20%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：6.723；RT2（分鐘）：10.474；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：5）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 46（3.7 mg，36%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 47（4.5 mg，44%產率）。實例 46： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.12 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.65 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.82-7.84 (m, 1H), 7.59 (s, 1H) ,7.31 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 6.93(s, 1H), 4.49-4.56 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.80-2.87 (m, 1H), 2.62-2.69 (m, 1H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 476 [M+H] ⁺。實例 47： ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.14 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.65 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.81-7.84 (m, 1H), 7.59 (s, 1H) ,7.31 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 6.93(s, 1H), 4.51-4.53 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.80-2.84 (m, 1H), 2.62-2.69 (m, 1H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 476 [M+H] ⁺。方法 A13 實例 48 、 49 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8-(1- 異丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8-(1- 異丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 50 、 51 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8-(1- 異丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8-(1- 異丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

在0℃下向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A6-9，180 mg，571 μmol）於ACN（5 mL）中之攪拌溶液中添加碳酸銫（372 mg，1.1 mmol）。在0℃下攪拌混合物20分鐘。添加於ACN（0.5 mL）中之2-碘丙烷（1.9 g，11.4 mmol），且在25℃下攪拌混合物5小時。用水（20 mL）淬滅反應物。用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用DCM/MeOH（10:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（80 mg，27%產率）。LC-MS (ES, m/z): 358[M+H] ⁺。步驟2：2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A6 步驟 11但使用2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（75 mg，210 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（80 mg，70%產率）。LC-MS (ES, m/z): 344[M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（75 mg，218 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（64 mg，328 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（13.9 mg，11%產率），LC-MS (ES, m/z): 521[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（6.7 mg，5%產率），LC-MS (ES, m/z): 521[M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 48及實例 49

12.8 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：11.401；RT2（分鐘）：17.85；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 48（2.6 mg，20%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 49（2.0 mg，15%產率）。實例 48： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.55-8.77 (m, 4H), 7.94-8.00 (m, 3H), 7.83 (s, 1H), 6.32 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.48-4.68 (m, 2H), 3.20-3.33 (m, 1H), 2.60-2.72 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.56-1.59 (m, 6H). LC-MS (ES, m/z): 521[M+H] ⁺。實例 49： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.64-8.86 (m, 2H), 8.52-8.67 (m, 2H), 7.96 (s, 2H), 7.67-7.90 (m, 2H), 6.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.43-4.64 (m, 2H), 3.15-3.28 (m, 1H), 2.59-2.74 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.51-1.61 (m, 6H). LC-MS (ES, m/z): 521[M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 50及實例 51

5.6 mg之順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：7.898；RT2（分鐘）：14.194；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 50（1.0 mg，17%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 51（1.9 mg，31%產率）。實例 50： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.46-8.71 (m, 3H), 7.72-7.99 (m, 4H), 6.32 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.51-4.74 (m, 2H), 2.83-3.10 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.53-1.56 (m, 6H). LC-MS (ES, m/z): 521[M+H] ⁺。實例 51： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.29-9.05 (m, 4H), 7.64-7.99 (m, 4H), 6.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.49-4.70 (m, 2H), 2.85-3.08 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 6H). LC-MS (ES, m/z): 521[M+H] ⁺。方法 A14 實例 52 、 53 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 三氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 三氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 54 、 55 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 三氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 三氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-氯-5-硝基-2-(三氟甲氧基)吡啶

在100℃下向3-氯-5-硝基吡啶-2-醇（3 g，17.2 mmol）於MeNO ₂（30 mL）中之混合物中逐份添加1-(三氟甲基)-1l3-苯并[d][1,2]碘唑-3(1H)-酮（10.9 g，34.4 mmol）。在100℃下攪拌混合物1小時。將混合物冷卻至室溫且隨後傾入水（200 mL）中。混合物用EtOAc（3×200 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:15）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（1.3 g，26%產率）。LC-MS: m/z 243 [M+H] ⁺。步驟2：5-氯-6-(三氟甲氧基)吡啶-3-胺

向3-氯-5-硝基-2-(三氟甲氧基)吡啶（900 mg，3.7 mmol）於EtOH/H ₂O（3:1，20 mL）中之攪拌溶液中添加鐵（1.04 g，18.5 mmol）及NH ₄Cl（6.35 g，118.7 mmol）。在70℃下攪拌所得混合物1小時。過濾混合物，用水（100 mL）稀釋濾液，且用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之粗標題化合物（330 mg，41%產率）。LC-MS: m/z 213 [M+H] ⁺。步驟3：5-胺基-2-(三氟甲氧基)菸鹼腈

向5-氯-6-(三氟甲氧基)吡啶-3-胺（200 mg，0.9 mmol）於DMF（8 mL）中之攪拌溶液中添加Zn(CN) ₂（221 mg，1.9 mmol）、Zn（6.1 mg，94 μmol）、RuPhos-Pd G3（43.9 mg，94 µmol）及RuPhos（76.8 mg，94 µmol）。在130℃下，在氮氣下，攪拌所得混合物1.2小時。將混合物冷卻至25℃，且添加水（100 mL）。所得混合物用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:3）溶離，得到呈黃色固體狀之標題化合物（110 mg，57%產率）。LC-MS: m/z 204 [M+H] ⁺。步驟4：反式-N-(5-氰基-6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氰基-6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7，72.4 mg，229 µmol）及5-胺基-2-(三氟甲氧基)菸鹼腈（56 mg，275 µmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈灰白色固體狀之反式異構物（25 mg，21%產率），LC-MS: m/z 501 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（25 mg，21%產率），LC-MS: m/z 501 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 52及實例 53

20 mg之反式-N-(5-氰基-6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：6.674；RT2（分鐘）：18.161；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 52（12.6 mg，62%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 53（5.7 mg，28%產率）。實例 52： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.06 (s, 1H), 8.74-8.76 (m, 2H), 8.62 s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.56 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.48-4.52 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.84-2.89 (m, 1H), 2.48-2.49 (m, 1H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 501 [M+H] ⁺。實例 53： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.07 (s, 1H), 8.75-8.76 (m, 2H), 8.62 s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.56 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.48-4.53 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.84-2.89 (m, 1H), 2.48-2.49 (m, 1H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 501 [M+H] ⁺。步驟6：分離鏡像異構物以獲得實例 54及實例 55

20 mg之順式-N-(5-氰基-6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：4.92；RT2（分鐘）：11.085；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 54（2.3 mg，11%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 55（2.9 mg，14%產率）。實例 54： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.08 (s, 1H), 8.72-8.76 (m, 2H), 8.67 s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48-4.52 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.77-2.83 (m, 1H), 2.64-2.69 (m, 1H), 1.85 (s, 3H). LC-MS: m/z 501 [M+H] ⁺。實例 55： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.03 (s, 1H), 8.71-8.75 (m, 2H), 8.67 s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48-4.51 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.78-2.84 (m, 1H), 2.65-2.70 (m, 1H), 1.85 (s, 3H). LC-MS: m/z 501 [M+H] ⁺。方法 A15 實例 56 、 57 ： (6 S,8 R)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(5- 甲基 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(5- 甲基 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 58 、 59 ： (6 S,8 S)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(5- 甲基 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-N-(5- 甲基 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-甲基-5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶

向2-氯-3-甲基-5-硝基吡啶（10.0 g，57.9 mmol）及2H-1,2,3-三唑（4.8 g，69.5 mmol）於乙腈（100 mL）中之攪拌混合物中添加K ₂CO ₃（16.0 g，115.9 mmol）。在25℃下攪拌反應混合物24小時。減壓濃縮所得混合物。添加水（100 mL），且用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取所得混合物。合併之有機層用水（3×100 mL）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（5:1）溶離，得到呈黃色固體狀之標題化合物（10.0 g，84%產率）。LC-MS: m/z 206 [M+H] ⁺。步驟2：5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺

向3-甲基-5-硝基-2-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶（10.0 g，48.7 mmol）於甲醇（50 mL）中之攪拌溶液中添加Pd/C（11.8 g，97.4 mmol）。使反應混合物脫氣且隨後在25℃下在氫氣下攪拌72小時。過濾反應混合物，且在減壓下濃縮濾液。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（4.0 g，46%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.00 (s, 2H), 7.71 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 2.8, 1H), 5.75 (s, 2H), 1.96 (s, 3H). LC-MS: m/z 176 [M+H] ⁺。步驟3：反式-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7，80 mg，254 μmol）及5-甲基-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（44 mg，254 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（26 mg，16%產率），LC-MS: m/z 473 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（22 mg，15%產率），LC-MS: m/z 473 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 56及實例 57

26 mg之反式-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：MtBE(0.5% 2M NH3-MeOH)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：17 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.155；RT2（分鐘）：17.671；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 56（6.4 mg，24%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 57（6.7 mg，25.5%產率）。實例 56： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ10.82 (s, 1H), 8.65 (s, 2H), 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.12 (s, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.88-2.93 (m, 1H), 2.50-2.52 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.96 (s, 3H). LC-MS: m/z 473 [M+H] ⁺。實例 57： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ10.82 (s, 1H), 8.65 (s, 2H), 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.12 (s, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.88-2.93 (m, 1H), 2.50-2.52 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.96 (s, 3H). LC-MS: m/z 473 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 58及實例 59

22 mg之順式-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(5-甲基-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：MtBE(0.5% 2M NH3-MeOH)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：17 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：7.783；RT2（分鐘）：16.654；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 58（5.0 mg，22%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 59（3.2 mg，14%產率）。實例 58： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ10.83 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.57 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.49-4.53 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.79-2.85 (m, 1H), 2.66-2.71 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.87 (s, 3H). LC-MS: m/z 473 [M+H] ⁺。實例 59： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ10.82 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.57 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.49-4.53 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.79-2.85 (m, 1H), 2.66-2.71 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.87 (s, 3H). LC-MS: m/z 473 [M+H] ⁺。方法 A16 實例 60 、 61 ： (6 S,8 R)-N-(6-( 二氟甲氧基 )-5- 甲基吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(6-( 二氟甲氧基 )-5- 甲基吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 62 、 63 ： (6 S,8 S)-N-(6-( 二氟甲氧基 )-5- 甲基吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(6-( 二氟甲氧基 )-5- 甲基吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(二氟甲氧基)-3-甲基-5-硝基吡啶

在0℃下向3-甲基-5-硝基吡啶-2-醇（1 g，6.5 mmol）於ACN（20 mL）中之攪拌溶液中逐份添加NaH（700 mg，17.5 mmol，60%於礦物油中）。在25℃下攪拌混合物1小時。在0℃下逐滴添加2,2-二氟-2-(氟磺醯基)乙酸（2.1 g，11.7 mmol），且在25℃下攪拌所得混合物18小時。用水（20 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層用鹽水（60 mL）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:5）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（800 mg，60%產率）。 ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) δ 8.92 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.36-8.34 (m, 1H), 7.55 (t, J = 71.7 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 205 [M+H] ⁺。步驟2：6-(二氟甲氧基)-5-甲基吡啶-3-胺

向2-(二氟甲氧基)-3-甲基-5-硝基吡啶（700 mg，3.4 mmol）於EtOH（15 mL）及水（5 mL）中之攪拌溶液中添加Fe（1.2 g，20.6 mmol）及NH ₄Cl（366.9 mg，6.9 mmol）。在80℃下攪拌反應混合物2小時。過濾反應混合物，且在減壓下濃縮濾液。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:3）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（500 mg，83%產率）。LC-MS: m/z 175 [M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(6-(二氟甲氧基)-5-甲基吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(6-(二氟甲氧基)-5-甲基吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A1-7，70 mg，222 µmol）及6-(二氟甲氧基)-5-甲基吡啶-3-胺（58 mg，333 µmol）且在25℃下攪拌4小時，獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（45 mg，42%產率），LC-MS: m/z 472 [M+H] ⁺；呈淺粉色固體狀之順式-異構物（25 mg，23%產率），LC-MS: m/z 472 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 60及實例 61

30 mg之反式-N-(6-(二氟甲氧基)-5-甲基吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：5.792；RT2（分鐘）：8.757；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.6 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 60（7.1 mg，23%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 61（9.0 mg，29%產率）。實例 60： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.51 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 73.2 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.55 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.43-4.48 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.83-2.89 (m, 1H), 2.44-2.52 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 472 [M+H] ⁺。實例 61： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.51 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 73.2 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.55 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.43-4.48 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.83-2.89 (m, 1H), 2.44-2.52 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 472 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 62及實例 63

20 mg之順式-N-(6-(二氟甲氧基)-5-甲基吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.5% 2M NH3-MeOH)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：220/254 nm；RT1（分鐘）：9.608；RT2（分鐘）：11.131；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.3 mL；運行次數：4）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 62（2.8 mg，13%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 63（2.6 mg，12%產率）。實例 62： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.51 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 73.2 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.53 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.42-4.47 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.75-2.81 (m, 1H), 2.63-2.68 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.85 (s, 3H). LC-MS: m/z 472 [M+H] ⁺。實例 63： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.51 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 73.2 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.53 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.42-4.47 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.75-2.81 (m, 1H), 2.63-2.68 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.85 (s, 3H). LC-MS: m/z 472 [M+H] ⁺。方法 A17 實例 64 、 65 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 66 、 67 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-醇

類似於方法 A6 步驟 2但使用5-碘-1-甲基-1H-吡唑（10 g，48.0 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（3.7 g，46%產率）。 ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 7.38 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.23 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.02 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 1.94-1.59 (m, 4H). LC-MS: m/z 167 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-酮

類似於方法 A10 步驟 2但使用2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-醇（7.5 g，45.1 mmol），攪拌16小時，且藉由用EtOAc/PE（3:2）溶離之矽膠管柱層析純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（6 g，80%產率）。LC-MS: m/z 165 [M+H] ⁺。步驟3：2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-酮

在0℃下向2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-酮（4.6 g，28.0 mmol）於THF（20 mL）中之攪拌溶液中逐份添加NaH（1.3 g，56.0 mmol，60%於礦物油中）。在0℃下攪拌混合物10分鐘。在0℃下逐滴添加碘甲烷（2.7 g，19.6 mmol），且在80℃下攪拌所得混合物16小時。用水（50 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（3:2）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（4 g，80%產率）。LC-MS: m/z 179 [M+H] ⁺。步驟4：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（8.8 g，50.5 mmol）中之2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-酮（4.5 g，25.2 mmol）且攪拌在100℃下攪拌16小時，粗標題化合物呈紅色油狀獲得（5.5 g，93%產率）。LC-MS: m/z 234 [M+H] ⁺。步驟5：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)環戊-1-酮（5.5 g，23.5 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（1.8 g，28%產率）。LC-MS: m/z 272[M+H] ⁺。步驟6：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（150 mL）中之2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.5 g，5.5 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（1.5 g，91%產率）。LC-MS: m/z 297 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A1 步驟 7但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（1.5 g，5.0 mmol），在100℃下攪拌3小時，且藉由製備型HPLC純化產物，標題化合物呈黃色固體狀獲得（380 mg，23%產率）。LC-MS: m/z 316 [M+H] ⁺。步驟8：反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（200 mg，634 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（124 mg，634 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（50 mg，31%產率），LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（70 mg，44%產率），LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。步驟9：分離鏡像異構物以獲得實例 64及實例 65

50 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：7.592；RT2（分鐘）：11.79；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 64（21.2 mg，83%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 65（17.0 mg，66%產率）。實例 64： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.18 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.93-2.99 (m, 1H), 2.62-2.67 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。實例 65： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.16 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.93-2.99 (m, 1H), 2.62-2.67 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。步驟10：分離鏡像異構物以獲得實例 66及實例 67

70 mg之順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF 2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：6.883；RT2（分鐘）：9.78；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 66（20.7 mg，59%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 67（15.8 mg，45%產率）。實例 66： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.22 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 2.72-2.81 (m, 2H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。實例 67： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.22 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 2.72-2.81 (m, 2H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 493 [M+H] ⁺。方法 A18 實例 68 、 69 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 70 、 71 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A9-11，80 mg，254 μmol）及5-胺基-2-(二氟甲氧基)吡啶-3-甲腈（94 mg，507 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（15 mg，11%產率），LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（40 mg，32%產率），LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 68及實例 69

40 mg之反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IE 2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=1:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：5.063；RT2（分鐘）：6.557；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.5 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 68（8.0 mg，19%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 69（10.7 mg，26%產率）。實例 68： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 8.59 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.54- 8.51 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 7.45 (t, J = 71 Hz, 1 H), 7.32 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.64 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.25 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.61 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.44-3.49 (m, 1H), 2.48-2.54 (m, 1H), 2.11 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。實例 69： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 8.60 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.54-8.51 (m, 2H), 8.39 (s, 1H), 7.45 (t, J= 72 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 2 Hz, 1H), 6.25 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.45-3.50 (m, 1H), 2.48-2.54 (m, 1H), 2.09 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 70及實例 71

15 mg之順式-(6S,8R)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC 2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度20%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：8.977；RT2（分鐘）：14.167；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 70（4.7 mg，31%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 71（3.9 mg，25%產率）。實例 70： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 10.65 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.47 (s, 2H), 7.42 (t, 72 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.73 (d, J= 2 Hz, 1H), 6.26 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.47-4.51 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.16-3.21 (m, 1H), 2.81-2.87 (m, 1H), 2.07 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。實例 71： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 10.65 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.48 (s, 2H), 7.43 (t, J= 68 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.74 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.27 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.48-4.51 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.16-3.20 (m, 1H), 2.82-2.88 (m, 1H), 2.07 (s, 3H). LC-MS: m/z 483 [M+H] ⁺。方法 A19 實例 72 、 73 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 74 、 75 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A8-2，50 mg，146 μmol）及5-胺基-2-(二氟甲氧基)吡啶-3-甲腈（27 mg，146 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（20 mg，26%產率），LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（10 mg，13%產率），LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 72及實例 73

20 mg之反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=1:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.331；RT2（分鐘）：5.782；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2.）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 72（9.3 mg，37%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 73（11.4 mg，45%產率）。實例 72： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.61 (s, 1H), 8.62-8.67 (m, 2H), 8.53 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.41 (t, J= 71.6Hz, 1H), 6.29 (d, J= 4.8Hz, 1H), 4.57-4.59 (m, 1H), 3.62-3.63 (m, 1H), 3.29-3.30 (m, 1H), 2.58-2.64 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.14-1.17 (m, 4H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。實例 73： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.32 (s, 1H), 8.60-8.64 (m, 2H), 8.52 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.42 (t, J= 71.6Hz, 1H), 6.29 (d, J= 4.8Hz, 1H), 4.52-4.54 (m, 1H), 3.57-3.59 (m, 1H), 3.18-3.20 (m, 1H), 2.60-2.65 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.09-1.13 (m, 4H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 74及實例 75

10 mg之順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=1:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：6.881；RT2（分鐘）：16.445；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 74（3.2 mg，31%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 75（2.3 mg，22%產率）。實例 74： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.57 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.60-7.64 (m, 2H), 7.40 (t, J= 71.6Hz, 1H), 6.28 (d, J= 5.2Hz, 1H), 4.40-4.42 (m, 1H), 3.53-3.56 (m, 1H), 2.95-2.98 (m, 1H), 2.82-2.88 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.00-1.11 (m, 4H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。實例 75： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.62 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.38-8.42 (m, 2H), 7.70-7.74 (m, 2H), 7.39 (t, J= 71.6Hz, 1H), 6.27 (d, J= 4.8Hz, 1H), 4.48-4.50 (m, 1H), 3.59-3.60 (m, 1H), 2.86-2.99 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.08-1.12 (m, 4H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。方法 A20 實例 76 、 77 ： (6 S,8 S)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 78 、 79 ： (6 S,8 R)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-2- 氯 -N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-醇

在-90℃下在氮氣下向3-碘-1-甲基-1H-吡唑（16.07 g，77.27 mmol）於Et ₂O（500 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加正丁基鋰（2.5 M，30.9 mL）。在-90℃下，在氮氣下，攪拌反應混合物1小時。在氮氣下在-90℃下逐滴添加6-氧雜雙環[3.1.0]己烷（5 g，59.44 mmol），且在-90℃下攪拌混合物0.5小時。在-90℃下逐滴添加三氟化硼合二乙醚（10.97 g，77.27 mmol），且在氮氣下在-90℃下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用飽和氯化銨水溶液（500 mL）淬滅。所得混合物用乙酸乙酯（3×500 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（6 g，61%產率）。LC-MS: m/z 167 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-2-烯-1-酮

類似於方法 A1 步驟 2但使用2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-醇（15 g，53.1 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（6 g，36%產率）。LC-MS: m/z 163 [M+H] ⁺。步驟3：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

向2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-2-烯-1-酮（6 g，36.9 mmol）於MeOH（300 mL）中之攪拌溶液中添加Pd/C（3.0 g，2.5 mmol，10%）。使混合物脫氣且隨後在25℃下在氫氣氛圍下攪拌5小時。過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（6 g）。LC-MS: m/z 165 [M+H] ⁺。步驟4：2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（5.9 g，25.2 mmol）且在藉由製備型HPLC純化產物之後，標題化合物呈黃色油狀獲得（3.3 g，62%產率）。 ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 7.28 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.18 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.55-2.66 (m, 1H), 2.29-2.49 (m, 2H), 1.86-2.08 (m, 3H), 1.40 (s, 3H). LC-MS: m/z 179 [M+H] ⁺。步驟5：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（6.6 g，38.2 mmol）中之2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（3.4 g，19.1 mmol）且在110℃下攪拌1小時，粗標題化合物呈黃色油狀獲得（4.2 g）。LC-MS: m/z 234 [M+H] ⁺。步驟6：2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（5.9 g，25.3 mmol）及3-氯-1H-吡唑-5-胺（3.6 g，30.4 mmol）且在藉由製備型HPLC純化產物之後，標題化合物呈黃色固體狀獲得（2.5 g，33%產率）。LC-MS: m/z 288 [M+H] ⁺。步驟7：2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（250 mL）中之2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.5 g，5.2 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（800 mg，49%產率）。LC-MS: m/z 313 [M+H] ⁺。步驟8：2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A1 步驟 7但使用2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（1.1 g，3.5 mmol）且在藉由製備型HPLC純化產物之後，標題化合物呈黃色固體狀獲得（800 mg，68%產率）。LC-MS: m/z 332 [M+H] ⁺。步驟9：反式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氯-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（100 mg，301 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（59 mg，301 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（30.5 mg，83%產率），LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（9.9 mg，6%產率），LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。步驟10：分離鏡像異構物以獲得實例 76及實例 77

29 mg之反式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=1:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.935；RT2（分鐘）：12.65；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 76（8.3 mg，28%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 77（8.4 mg，28%產率）。實例 76： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.77 (s, 1H), 8.70 (d, J= 2Hz, 1H), 8.57-8.60 (m, 2H), 7.94 (s, 2H), 7.36 (d, J= 2Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.69-4.73 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.50-3.59 (m, 1H), 2.52-2.58 (m, 1H), 2.14 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。實例 77： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.70 (d, J= 2Hz, 1H), 8.49-8.54 (m, 3H), 7.94 (s, 2H), 7.29 (d, J= 2.4Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.59 (d, J= 2.4Hz, 1H), 4.60-4.64 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.43-3.48 (m, 1H), 2.51-2.56 (m, 1H), 2.14 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。步驟11：c 實例 78及實例 79

9 mg之順式-2-氯-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=1:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度7%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.355；RT2（分鐘）：9.769；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：3）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 78（1.8 mg，19%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 79（2.1 mg，23%產率）。實例 78： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 10.70 (s, 1H), 8.55-8.62 (m, 3H), 7.92 (s, 2H), 7.40 (d, J= 1.6Hz, 1H), 6.75 (d, J= 2.4Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.51-4.54 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.26-3.30 (m, 1H), 2.83-2.89 (m, 1H), 2.11 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。實例 79： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 10.71 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.62-8.67 (m, 2H), 7.91 (s, 2H), 7.48 (s, 1H), 6.77 (d, J= 2.4Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.54-4.56 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.21-3.27 (m, 1H), 2.89-2.94 (m, 1H), 2.08 (s, 3H). LC-MS: m/z 509 [M+H] ⁺。方法 A21 實例 80 、 81 ： (6 S,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 82 、 83 ： (6 S,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2，230 mg，655 μmol）及6-(三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（225 mg，982 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈黃色固體狀之反式異構物（180 mg，48%產率），LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺；呈黃色固體狀之順式-異構物（120 mg，32%產率），LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 80及實例 81

180 mg之反式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.2% TFA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.605；RT2（分鐘）：13.295；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.4 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈淺黃色固體狀之實例 80（35.9 mg，19%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 81（18.4 mg，10%產率）。實例 80： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.22 (s, 1H), 9.02 (d, J= 2Hz, 1H), 8.83 (d, J= 2.4Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2Hz, 1H), 6.60 (d, J= 4.8Hz, 1H), 4.58 (t, J= 8Hz, 1H), 2.92-2.95 (m, 1H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。實例 81： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.22 (s, 1H), 9.02 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.83 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2Hz, 1H), 6.60 (d, J= 4.8Hz, 1H), 4.58 (t, J= 8Hz, 1H), 2.92-2.95 (m, 1H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 82及實例 83

120 mg之順式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG 2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220NM nm；RT1（分鐘）：9.392；RT2（分鐘）：10.063；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.4 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 82（21.4 mg，17%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 83（12.9 mg，10%產率）。實例 82： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, 1H), 9.01 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.76-8.79 (m, 2H), 8.18-8.19 (m, 3H), 7.77 (s, 1H), 7.72 (t, J = 59.2Hz, 1H), 6.58 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.59-4.61 (m, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 2.74-2.80 (m, 1H), 1.91 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。實例 83： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.20 (s, 1H), 9.01 (d, J= 2Hz, 1H), 8.76-8.79 (m, 2H), 8.18-8.19 (m, 3H), 7.77 (s, 1H), 7.72 (t, J = 59.2Hz, 1H), 6.58 (d, J= 5.2Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 2.74-2.80 (m, 1H), 1.91 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。方法 A22 實例 84 、 85 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 86 、 87 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A6-9，225 mg，711 μmol）於ACN（10 mL）中之攪拌溶液中添加碳酸銫（1 g，3.0 mmol）及三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯（330 mg，1.4 mmol）。在25℃下攪拌反應混合物1小時。用水（20 mL）淬滅反應物，且用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用90% DCM及10% MeOH作為溶離劑純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（170 mg，54%產率）。LC-MS: m/z 398 [M+H] ⁺。步驟2：2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

向2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（170 mg，428 μmol）於THF（1.5 mL）中之攪拌溶液中添加於水（0.5 mL）中之LiOH（103 mg，4.3 mmol）。在25℃下攪拌反應混合物1小時。用1 M HCl將pH調節至約6，且用乙酸乙酯（3×10 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用90% DCM及10% MeOH作為溶離劑純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（140 mg，68%產率）。LC-MS: m/z 384[M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（130 mg，339 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（80 mg，407 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（57 mg，29%產率），LC-MS: m/z 561[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（37 mg，19%產率），LC-MS: m/z 561[M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 84及實例 85

50 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA 2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220NM nm；RT1（分鐘）：10.463；RT2（分鐘）：15.53；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：3 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 84（8.1 mg，16%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 85（8.6 mg，17%產率）。實例 84： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.45 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.67-8.70 (m, 2H), 7.91 (s, 2H), 7.68-7.72 (m, 2H), 6.40 (d, J = 4.4Hz, 1H), 4.64-4.70 (m, 3H), 3.08-3.12 (m, 1H), 2.83-2.88 (m, 1H), 2.14 (s, 3H). LC-MS: m/z 561[M+H] ⁺。實例 85： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.46 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.67-8.74 (m, 2H), 7.92 (s, 2H), 7.68-7.72 (m, 2H), 6.42 (d, J = 4.4Hz, 1H), 4.66-4.71 (m, 3H), 3.08-3.11 (m, 1H), 2.83-2.90 (m, 1H), 2.15 (s, 3H). LC-MS: m/z 561[M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 86及實例 87

30 mg之順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA 2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220NM nm；RT1（分鐘）：7.245；RT2（分鐘）：8.763；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.5 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 86（4.8 mg，15%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 87（4.2 mg，13%產率）。實例 86： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.06-9.19 (m, 2H), 8.60-8.68 (m, 2H), 7.90 (s, 2H), 7.78-7.82 (m, 2H), 6.43 (d, J = 5.2Hz, 1H), 4.63-4.70 (m, 3H), 3.14-3.21 (m, 1H), 2.82-2.92 (m, 1H), 2.02 (s, 3H). LC-MS: m/z 561[M+H] ⁺。實例 87： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.90 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.91 (s, 2H), 7.73-7.75 (m, 2H), 6.38 (d, J = 5.2Hz, 1H), 4.63-4.69 (m, 2H), 4.50-4.54 (m, 1H), 3.10-3.14 (m, 1H), 2.85-2.90 (m, 1H), 2.01 (s, 3H). LC-MS: m/z 561[M+H] ⁺。方法 A23 實例 88 、 89 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 90 、 91 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A9-9，500 mg，1.6 mmol）於丙酮（15 mL）中之攪拌溶液中添加碳酸銫（1.6 g，4.7 mmol）及2-溴-2,2-二氟乙酸甲酯（1.5 g，7.9 mmol）。在40℃下攪拌混合物16小時。用水（40 mL）淬滅反應物。所得混合物用乙酸乙酯（3×40 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（90 mg，13%產率）。LC-MS: m/z 366 [M+H] ⁺。步驟2：8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A23-2）

類似於方法 A7 步驟 2但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（90 mg，246 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（ A23-2，50 mg，46%產率）。LC-MS: m/z 352 [M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（150 mg，427 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（100 mg，512 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（120 mg，53%產率），LC-MS: m/z 529 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（40 mg，18%產率），LC-MS: m/z 529 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 88及實例 89

120 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.826；RT2（分鐘）：9.373；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.2 mL；運行次數：5.）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 88（21.4 mg，35%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 89（20.9 mg，34%產率）。實例 88： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.74 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.96 (s, 2H), 7.76 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 60.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 6.33 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.58 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 3.41-3.46 (m, 1H), 2.67-2.61 (m, 1H), 2.17 (s, 3H). LC-MS: m/z 529 [M+H] ⁺。實例 89： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.74 (d, J= 1.6 Hz, 2H), 8.61 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.96 (s, 2H), 7.76 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 60.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.35 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 4.61 (d, J= 8 Hz, 1H), 3.40-3.45 (m, 1H), 2.66-2.71 (m, 1H), 2.18 (s, 3H). LC-MS: m/z 529 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 90及實例 91

40 mg之順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度20%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.144；RT2（分鐘）：13.369；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：3.）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 90（14.2 mg，71%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 91（8.9 mg，44%產率）。實例 90： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 9.43 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.50-8.52 (m, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.94 (s, 2H), 7.83 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.84-7.15 (m, 2H), 6.32 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.54-4.58 (m, 1H), 3.36-3.41 (m, 1H), 2.86-2.93 (m, 1H), 2.15 (s, 3H). LC-MS: m/z 529 [M+H] ⁺。實例 91： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 9.41 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.52-8.67 (m, 2H), 7.95 (s, 2H), 7.83 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.84-7.15 (m, 2H), 6.32 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.54-4.57 (m, 1H), 3.36-3.41 (m, 1H), 2.86-2.92 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS: m/z 529 [M+H] ⁺。方法 A24 實例 92 、 93 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 94 、 95 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2，240 mg，683 μmol）及5-胺基-2-(二氟甲氧基)吡啶-3-甲腈（190 mg，1.0 mmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（60 mg，16%產率），LC-MS: m/z 519[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（40 mg，11%產率），LC-MS: m/z 519[M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 92及實例 93

60 mg之反式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.269；RT2（分鐘）：7.473；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 92（15.0 mg，24%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 93（19.4 mg，32%產率）。實例 92： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.88(s, 1H), 8.63-8.68 (m, 3H), 8.20 (s, 1H), 7.57-7.93 (m, 3H), 6.59 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.48-4.52 (m, 1H), 2.87-2.90 (m, 1H), 2.57-2.60 (m, 1H), 1.98 (s, 3H). LC-MS: m/z 519[M+H] ⁺。實例 93： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.89(s, 1H), 8.63-8.68 (m, 3H), 8.20 (s, 1H), 7.57-7.93 (m, 3H), 6.59 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.48-4.52 (m, 1H), 2.85-2.92 (m, 1H), 2.54-2.60 (m, 1H), 1.98 (s, 3H). LC-MS: m/z 519[M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 94及實例 95

40 mg之順式-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.168；RT2（分鐘）：5.831；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.9 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 94（10.1 mg，25%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 95（12.1 mg，26%產率）。實例 94： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.88 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.66 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.59 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.56-7.92 (m, 3H), 6.57 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.49-4.52 (m, 1H), 2.80-2.85 (m, 1H), 2.66-2.72 (m, 1H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 519[M+H] ⁺。實例 95： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.88 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.66 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.59 (d, J= 2.4Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.56-7.92 (m, 3H), 6.57 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.49-4.51 (m, 1H), 2.80-2.85 (m, 1H), 2.68-2.72 (m, 1H), 1.89 (s, 3H). LC-MS: m/z 519[M+H] ⁺。方法 A25 實例 96 、 97 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-((1- 氧代 -1λ ⁶- 硫環丁 -1- 亞基 ) 胺基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-((1- 氧代 -1λ ⁶- 硫環丁 -1- 亞基 ) 胺基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：( S)-2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（ A25-1-P1）及( R)-2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（ A25-1-P2）

3 g之2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（ A6-6）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：daicel chiral pakia，250*50 mm，10 μm；移動相A：CO2，移動相B：IPA（0.1% NH3H2O）；流動速率：200 g/min；梯度：等度25%移動相B；波長：220 nm；管柱溫度（℃）：40；系統背壓100巴。RT1（分鐘）：3.68；RT2（分鐘）：6.71，樣品溶劑：IPA---製備型；注入體積：8.5 mL。運行次數：6）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈淺黃色油狀之 A25-1-P1（1.3 g），LC-Ms：m/z 388 [M+H] ⁺。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈淺黃色油狀之 A25-1-P2（1.32 g），LC-Ms：m/z 388 [M+H] ⁺。步驟2：(8 R)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

使用( R)-2-氟-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（ A25-1-P2），且依序遵循方法 A6 步驟 7、步驟 8及步驟 9中所描述之反應條件，標題化合物呈黃色油狀獲得。步驟3：(8 R)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A25-3-P2）

使用(8 R)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯，且依序遵循方法 A7 步驟 1及步驟 2中所描述之反應條件，標題化合物（ A25-3-P2）呈黃色油狀獲得。步驟4：1-氧化1-((3-氯-5-硝基吡啶-2-基)亞胺基)-1λ ⁶-硫環丁烷

在氮氣氛圍下向2,3-二氯-5-硝基吡啶（200 mg，1.0 mmol）及1-氧化1-亞胺基-1λ ⁶-硫環丁烷（109 mg，1.0 mmol）於二烷（6 mL）中之攪拌溶液中添加Pd ₂(dba) ₃（95 mg，104 µmol）、XantPhos（120 mg，207 µmol）及Cs ₂CO ₃（1.0 g，3.1 mmol）。在110℃下攪拌所得混合物12小時。使混合物冷卻至25℃。藉由添加水（20 mL）淬滅反應混合物。用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用50%石油醚及50%乙酸乙酯作為溶離劑純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（140 mg，51%產率）。LC-MS: m/z 262 [M+H] ⁺。步驟5：1-氧化1-((5-胺基-3-氯吡啶-2-基)亞胺基)-1λ ⁶-硫環丁烷

向1-氧化1-((3-氯-5-硝基吡啶-2-基)亞胺基)-1λ ⁶-硫環丁烷（120 mg，459 μmol）於乙醇（7 mL）及水（2 mL）中之溶液中添加Fe（128 mg，2.3 mmol）及NH ₄Cl（123 mg，2.3 mmol）。在80℃下攪拌所得混合物2小時。將固體過濾出。濾液用水（10 mL）稀釋且用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈棕色固體狀之標題化合物（75 mg，70%產率）。LC-MS: m/z 232[M+H] ⁺。步驟6：實例 96及實例 97

類似於方法 A1 步驟 8但使用(8 R)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A25-3-P2，75.8 mg，215.8 µmol）及1-氧化1-((5-胺基-3-氯吡啶-2-基)亞胺基)-1λ ⁶-硫環丁烷（50 mg，215.8 µmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈灰白色固體狀之反式異構物實例 96（3.1 mg，2.5%產率）及呈白色固體狀之順式-異構物實例 97（3.4 mg，2.8%產率）。實例 96： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.45 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.72 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.28-4.46 (m, 5H), 2.85-2.88 (m, 1H),2.50-2.55 (m, 1H), 2.23-2.39 (m, 2H), 1.98 (s, 3H). LC-MS: m/z 565 [M+H] ⁺。實例 97： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.44 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.73 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.31-4.47 (m, 5H), 2.77-2.83 (m, 1H), 2.65-2.70 (m, 1H), 2.23-2.35 (m, 2H), 1.98 (s, 3H). LC-MS: m/z 565 [M+H] ⁺。方法 A26 實例 98 、 99 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 100 、 101 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A6 步驟 10但使用2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A6-9，225 mg，711 μmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（135 mg，36%產率）。LC-MS (ES, m/z): 370[M+H] ⁺。步驟2：8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A7 步驟 2但使用8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（170 mg，460 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（100 mg，57%產率）。LC-MS (ES, m/z): 356[M+H] ⁺。步驟3：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（100 mg，281 μmol）及5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺（55 mg，281 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（48 mg，30%產率），LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（37 mg，23%產率），LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 98及實例 99

40 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：MtBE(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：14 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.463；RT2（分鐘）：12.304；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.5 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 98（8.0 mg，19%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 99（8.2 mg，19%產率）。實例 98： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.74 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.88-8.23 (m, 2H), 7.96 (s, 2H), 6.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.56-4.66 (m, 1H), 4.04-4.19 (m, 2H), 3.22-3.43 (m, 1H), 2.61-2.71 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.30-1.37 (m, 1H), 0.70-0.76 (m, 2H), 0.44-0.49 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。實例 99： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.74 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.90-8.26 (m, 2H), 7.96 (s, 2H), 6.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.55-4.70 (m, 1H), 4.04-4.20 (m, 2H), 3.28-3.40 (m, 1H), 2.61-2.71 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.30-1.39 (m, 1H), 0.70-0.76 (m, 2H), 0.45-0.49 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 100及實例 101

30 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：MtBE(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：14 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：6.303；RT2（分鐘）：12.389；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 100（4.1 mg，13%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 101（4.2 mg，13%產率）。實例 100： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.62 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.37-8.48 (m, 2H), 7.94 (s, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.29 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.45-4.52 (m, 1H), 3.93-4.08 (m, 2H), 2.99-3.07 (m, 1H), 2.85-2.95 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.20-1.30 (m, 1H), 0.58-0.68 (m, 2H), 0.32-0.41 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533 [M+H] ⁺。實例 101： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.80 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.46-8.56 (m, 2H), 7.94 (s, 2H), 7.81-7.86 (m, 2H), 6.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53-4.58 (m, 1H), 4.03-4.10 (m, 2H), 2.87-3.07 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.28 (s, 1H), 0.63-0.70 (m, 2H), 0.37-0.43 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533 [M+H] ⁺。方法 A27 實例 102 、 103 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-( 三氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-( 三氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 104 、 105 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-( 三氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-( 三氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

向2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（1.0 g，3.2 mmol）於DCM（20 mL）中之攪拌溶液中添加雙((三氟甲基)磺醯基)醯胺鋰（91 mg，317 μmol）及1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺醯基)甲磺醯胺（892 mg，3.2 mmol），接著逐份添加3,3-二甲基-1-(三氟甲基)-1,3-二氫-1λ ³-苯并[d][1,2]碘唑（1.1 g，3.2 mmol）。在40℃下攪拌反應混合物2小時。用水（20 mL）淬滅反應物。所得混合物用DCM（3×20 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（1:1）溶離，得到呈黃色固體狀之標題化合物（200 mg，16%產率）。LC-MS: m/z 384 [M+H] ⁺。步驟2：2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A7 步驟 2但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（210 mg，547.8 µmol），呈黃色固體狀之粗標題化合物呈黃色油狀獲得（90 mg）。LC-MS: m/z 370 [M+H] ⁺。步驟3：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（90 mg，244 µmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（48 mg，244 µmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈灰白色固體狀之反式異構物（13.5 mg，10%產率），LC-MS: m/z 547 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（9.9 mg，7.4%產率），LC-MS: m/z 547 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 102及實例 103

13 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.891；RT2（分鐘）：6.658；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 103（3.0 mg，23%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 102（2.4 mg，18%產率）。實例 102： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.12 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 8.00 (s, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.55-4.59 (m, 1H), 2.90-2.96 (m, 1H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 547 [M+H] ⁺。實例 103： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.11 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 8.00 (s, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.55-4.59 (m, 1H), 2.90-2.96 (m, 1H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 547 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 104及實例 105

9 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度20%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.175；RT2（分鐘）：4.838；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 105（1.1 mg，12%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 104（2.9 mg，32%產率）。實例 104： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.09 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.55-4.59 (m, 1H), 2.83-2.88 (m, 1H), 2.72-2.77 (m, 1H), 1.91 (s, 3H). LC-MS: m/z 547 [M+H] ⁺。實例 105： ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.09 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.55-4.58 (m, 1H), 2.83-2.88 (m, 1H), 2.72-2.77 (m, 1H), 1.91 (s, 3H). LC-MS: m/z 547 [M+H] ⁺。方法 A28 實例 106 、 107 、 108 、 109 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：4-碘-1-(丙-1-烯-2-基)-1H-吡唑

向4-碘-1H-吡唑（20 g，103.1 mmol）於DCE（70 mL）中之攪拌溶液中添加二乙醯氧銅（18.73 g，103.1 mmol）、2,2'-聯吡啶（32.2 g，206.2 mmol）、碳酸鈉（21.9 g，206.2 mmol）及三氟(丙-1-烯-2-基)硼酸鉀（30.5 g，206.2 mmol）。在70℃下在氧氣氛圍下攪拌混合物2小時。用水（350 mL）淬滅反應物。用DCM（2×350 mL）萃取所得溶液。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用PE/EtOAc（3:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（16.6 g，61%產率）。LC-MS (ES, m/z): 235[M+H] ⁺。步驟2：4-碘-1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑

在0℃下在氮氣下向2,2,2-三氟乙酸（36.5 g，320.4 mmol）於DCE（200 mL）中之溶液中添加二乙基鋅之溶液（1M，320 mL）。在0℃下攪拌混合物20分鐘。添加二碘甲烷（85.8 g，320.4 mmol）於DCE（200 mL）中之溶液，且在0℃下在氮氣下攪拌混合物20分鐘。添加4-碘-1-(丙-1-烯-2-基)-1H-吡唑（15 g，64.1 mmol）於DCE（200 mL）中之溶液，且在25℃下在氮氣下攪拌混合物16小時。用水（50 mL）淬滅反應物。所得混合物用DCM（2×30 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用PE/EtOAc（3:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（7.5 g，47%產率）。LC-MS (ES, m/z): 249[M+H] ⁺。步驟3：2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-醇

類似於方法 A6 步驟 2但使用4-碘-1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑（7.9 g，31.8 mmol），呈黃色油狀之標題化合物呈黃色油狀獲得（0.9 g，13%產率）。LC-MS: m/z 207 [M+H] ⁺。步驟4：2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A10 步驟 2但使用2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-醇（1.8 g，8.7 mmol），藉由製備型HPLC純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（880 mg，49%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 7.61 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 3.20-3.25 (m, 1H), 2.13-2.38 (m, 3H), 1.78-2.01 (m, 3H), 1.52 (s, 3H), 1.10-1.14 (m, 2H), 0.82-0.88 (m, 2H). LC-MS: m/z 205 [M+H] ⁺。步驟5：2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（830 mg，4.1 mmol），且藉由用PE/EA（1:1）溶離之矽膠管柱層析純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（500 mg，39%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 7.61 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 2.19-2.35 (m, 3H), 1.79-2.01 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.08-1.16 (m, 2H), 0.81-0.87 (m, 2H). LC-MS: m/z 219 [M+H] ⁺。步驟6：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（719 mg，4.2 mmol）中之2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（450 mg，2.1 mmol）且在100℃下攪拌1，粗標題化合物呈黃色油狀獲得（500 mg，88%產率），其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 274 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（500 mg，1.8 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（480 mg，84%產率）。 ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.28 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.12 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.89-3.02 (m, 2H), 2.47-2.61 (m, 1H), 2.19-2.33 (m, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.16-1.25 (m, 2H), 0.82-0.90 (m, 2H). LC-MS: m/z 312 [M+H] ⁺。步驟8：2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（50 mL）中之2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（520 mg，1.7 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（150 mg，17%產率）。LC-MS: m/z 337 [M+H] ⁺。步驟9：2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A9 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（90 mg，268 μmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（80 mg，84%產率）。LC-MS: m/z 356 [M+H] ⁺。步驟10：N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（60 mg，169 μmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（40 mg，203 μmol），標題化合物的所有立體異構物之混合物（27 mg，30%產率）呈白色固體狀獲得。LC-MS: m/z 533 [M+H] ⁺。步驟11：分離鏡像異構物以獲得實例 106、實例 107、實例 108及實例 109

27 mg之N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.153；RT2（分鐘）：7.491；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：3）。將第四溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 106（7.1 mg，26%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 109（1.2 mg，4%產率）。將第三溶離異構物及第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到混合物，其經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度70%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.131；RT2（分鐘）：5.522；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 107（4.7 mg，17%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 108（1.2 mg，4%產率）。實例 106： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ: 8.84 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.95 (s, 2H), 6.32 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.69-4.84 (m, 1H), 3.38-3.66 (m, 1H), 2.52-2.63 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.35-1.39 (m, 2H), 1.10-1.25 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。實例 107： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ: 9.05 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.50-8.56 (m, 2H), 7.95 (s, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.29 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.38-4.43 (m, 1H), 3.00-3.04 (m, 1H), 2.65-2.72 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.12-1.23 (m, 2H), 0.82-0.94 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。實例 108： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ: 8.35-8.67 (m, 4H), 7.94 (s, 2H), 7.69-7.81 (m, 2H), 6.31 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.50-4.56 (m, 1H), 2.74-3.21 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.25-1.30 (m, 2H), 0.90-0.98 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。實例 109： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ: 8.66 (s, 1H), 8.52-8.56 (m, 2H), 7.79-7.99 (m, 3H), 7.75 (s, 1H), 6.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.50-4.56 (m, 1H), 2.82-3.06 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.61 (s, 3H), 1.20-1.33 (m, 2H), 0.94-1.01 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 533[M+H] ⁺。方法 A29 實例 110 、 111 ：獲自含有 (6 S,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺之外消旋混合物的單一鏡像異構物 實例 112, 113 ：獲自含有 (6 S,8 R)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氰基 -6-( 二氟甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺之外消旋混合物的單一鏡像異構物

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：(反式)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（110 mg，313 μmol）及5-胺基-2-(二氟甲氧基)菸鹼腈（116 mg，626 mmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（35 mg，21%產率），LC-MS (ES, m/z): 519[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（20 mg，10%產率），LC-MS (ES, m/z): 519[M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 110及實例 111

35 mg之(反式)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：3.654；RT2（分鐘）：4.387；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.5 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 110（11.4 mg，37%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 111（14.9 mg，47%產率）。實例 110： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.59-8.62 (m, 2H), 8.54 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 71.6 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.50-4.56 (m, 1H), 3.39-3.44 (m, 1H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 519[M+H] ⁺。實例 111： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.53 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 71.6 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.48-4.53 (m, 1H), 3.39-3.45 (m, 1H), 2.57-2.62 (m 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 519[M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 112及實例 113

20 mg之(順式)-N-(5-氰基-6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.302；RT2（分鐘）：5.481；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.6 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 112（6.7 mg，33%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 113（6.2 mg，30%產率）。實例 112： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.52 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.39-8.40 (m, 1H), 8.35-8.36 (m, 1H), 7.80 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 71.6 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.96 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.52-4.55 (m, 1H), 3.33-3.38 (m, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 2.15 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 519[M+H] ⁺。實例 113： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.52 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.39-8.40 (m, 1H), 8.35-8.36 (m, 1H), 7.80 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 71.6 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.96 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.52-4.55 (m, 1H), 3.33-3.38 (m, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 2.15 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 519[M+H] ⁺。方法 A30 實例 114 、 115 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(2-溴烯丙基)丙二酸二乙酯

在20℃下向NaH（1.25 g，32.5 mmol，60%於礦物油中）於THF（35.0 mL）中之混合物中添加丙二酸二乙酯（6.0 g，37.5 mmol），且在20℃下攪拌混合物1小時。將混合物冷卻至0℃，且添加2,3-二溴丙-1-烯（5.0 g，25.0 mmol）。在50℃下攪拌混合物16小時。將混合物傾入飽和NH ₄Cl（50 mL）中，且其用EtOAc（2×30 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（20 mL）洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾且在減壓下濃縮。殘餘物藉由管柱層析（SiO ₂，石油醚/乙酸乙酯= 100/1至10/1）純化，得到呈無色油狀之標題化合物（2.00 g，7.17 mmol）。步驟2：2-(2-溴烯丙基)-2-(氰基甲基)丙二酸二乙酯

在20℃下向2-(2-溴烯丙基)丙二酸二乙酯（10.0 g，35.8 mmol）於THF（70.0 mL）中之溶液中添加 t-BuOK（4.82 g，42.9 mmol）且在20℃下攪拌混合物0.5小時。添加2-溴乙腈（5.16 g，42.9 mmol）且在75℃下攪拌混合物5小時。將混合物傾入H ₂O（100 mL）中，且其用EtOAc（2×50 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（50 mL）洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾且在減壓下濃縮。殘餘物藉由管柱層析（SiO ₂，石油醚/乙酸乙酯= 100/1至5/1）純化，得到呈無色油狀之標題化合物（8.90 g，27.9 mmol）。步驟3：2-(氰基甲基)-2-[2-(1-四氫哌喃-2-基吡唑-3-基)烯丙基]丙二酸二乙酯

在N ₂下向2-(2-溴烯丙基)-2-(氰基甲基)丙二酸二乙酯（10.0 g，31.4 mmol）及1-四氫哌喃-2-基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼 -2-基)吡唑（17.4 g，62.8 mmol）於二烷（80.0 mL）及H ₂O（20.0 mL）中之混合物中添加Pd(dppf)Cl ₂（2.30 g，3.14 mmol）及K ₂CO ₃（8.69 g，62.8 mmol）。在100℃下，在N ₂下，攪拌混合物16小時。將混合物傾入H ₂O（100 mL）中，且其用EtOAc（2×100 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（100 mL）洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾且在減壓下濃縮。殘餘物藉由管柱層析（SiO2，石油醚/乙酸乙酯=30/1至1/1）純化，得到呈無色油狀之標題化合物（2.30 g，5.91 mmol，18.7%產率）。LC-MS: m/z 390 [M+H] ⁺。步驟4：3-甲基-4-側氧基-3-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯

在N ₂下將PhSiH ₃（3.75 g，34.6 mmol）於HFIP（22.5 mL）及EtOH（22.5 mL）中之溶液添加至含有2-(氰基甲基)-2-(2-(1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)烯丙基)丙二酸二乙酯（4.50 g，11.5 mmol）及Fe(acac) ₃（2.04 g，5.78 mmol）之燒瓶。在50℃下，在N ₂下，攪拌反應混合物1小時。添加HCl（2M，45 mL），且在75℃下在N ₂下攪拌反應混合物1小時。將反應混合物傾入H ₂O（10 mL）中，且其用EtOAc（2×30 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（20 mL）洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由管柱層析（SiO2，石油醚/乙酸乙酯=100/1至0/1）純化，得到呈黃色油狀之標題化合物之外消旋混合物（1.20 g）。LC-MS: m/z 309 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得( S)-3-甲基-4-側氧基-3-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯（ A30-5-P1）及( R)-3-甲基-4-側氧基-3-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯（ A30-5-P2）

3-甲基-4-側氧基-3-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯（1.20 g）經提供以經歷手性SFC（管柱：DAICEL CHIRALCEL OJ(250mm*30mm，10 μm)；移動相：A：CO ₂且B：IPA(0.1%NH ₃H ₂O)；梯度：等度25%移動相B；流動速率：54g/min；波長：220nm；管柱溫度：35℃，系統背壓100巴。RT1（分鐘）3.7；RT2（分鐘）5.3。樣品溶劑：IPA-製備型；注入體積：2 mL；運行次數：40）。第一溶離異構物經凍乾，得到呈黃色油狀之 A30-5-P1（430 mg），LC-MS: m/z 309 [M+H] ⁺。第二溶離異構物經凍乾，得到呈黃色油狀之 A30-5-P2（440 mg），LC-MS: m/z 309 [M+H] ⁺。步驟6：( R)-2-((二甲基胺基)亞甲基)-4-甲基-3-側氧基-4-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯

( R)-3-甲基-4-側氧基-3-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯（ A30-5-P2，3.80 g，12.3 mmol）於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基甲烷二胺（6.44 g，36.9 mmol）中之溶液在50℃下攪拌6小時。反應混合物在減壓下濃縮，得到粗標題化合物（4.60 g），其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 364 [M+H] ⁺。步驟7：( S)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6,6-二甲酸二乙酯

向( R)-2-((二甲基胺基)亞甲基)-4-甲基-3-側氧基-4-(1H-吡唑-3-基)環戊烷-1,1-二甲酸二乙酯（4.60 g，12.6 mmol）於AcOH（5 mL）及甲苯（50 mL）中之溶液中添加3-氟-1H-吡唑-5-胺（1.54 g，15.1 mmol）。在50℃下攪拌混合物6小時。添加冰水（50 mL）且用EtOAc（2×30 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（50 mL）洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥且在減壓下濃縮。添加AcOH（50 mL），且將其在120℃下攪拌16小時。在減壓下濃縮反應混合物，直至AcOH之剩餘體積為大約5 mL。標題化合物於AcOH中之此粗溶液（約5 mL）直接用於下一步驟中。LC-MS: m/z 402 [M+H] ⁺。步驟8：(8 S)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

在25℃下向獲自先前步驟7之( S)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6,6-二甲酸二乙酯於AcOH中之溶液（約5 mL）中添加HCl（6M，50 mL）。在100℃下攪拌反應混合物3小時。冷卻混合物且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（3.30 g），其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 302 [M+H] ⁺。步驟9：(8 S)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

使用粗(8 S)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（3.30 g）且遵循方法 A9 步驟 9中所描述之反應條件，粗標題化合物（3.00 g）呈黃色油狀獲得，其不經純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 316 [M+H] ⁺。步驟10：甲基(8 S)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A30-10-P2）

使用(8 S)-2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯，且依序遵循方法 A23 步驟 1及步驟 2中所描述之反應條件，標題化合物（ A30-10-P2）呈黃色油狀獲得。LC-MS: m/z 352 [M+H] ⁺。步驟11：5-氟-2-(三丁基錫烷基)嘧啶（ A30-11）

向2-溴-5-氟嘧啶（4.9 g，27.6 mmol）於甲苯（85 mL）中之攪拌溶液中添加1,1,1,2,2,2-六丁基二錫烷（32 g，55.2 mmol）及Pd(PPh ₃) ₄（3.2 g，2.8 mmol）。在110℃下攪拌所得混合物24小時。用水（50 mL）淬滅反應物。所得混合物用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用85%石油醚及15%乙酸乙酯作為溶離劑純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（ A30-11，4.6 g，35%產率）。LC-MS: m/z 389 [M+H] ⁺。步驟12：2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-5-氟嘧啶

向5-氟-2-(三丁基錫烷基)嘧啶（1.7 g，4.4 mmol）於DMF（16 mL）中之攪拌溶液中添加2,3-二氯-5-硝基吡啶（932 mg，4.8 mmol）、PdCl ₂(PPh ₃) ₂（616 mg，878 μmol）及CuI（167 mg，878 μmol）。所得混合物在60℃下在氮氣氛圍下攪拌0.5小時。使混合物冷卻至25℃且用水（30 mL）淬滅。所得混合物用乙酸乙酯（3×30 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用50%石油醚及50%乙酸乙酯作為溶離劑純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（340 mg，24%產率）。LC-MS: m/z 255 [M+H] ⁺。步驟13：5-氯-6-(5-氟嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（ A30-13）

向2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-5-氟嘧啶（300 mg，1.2 mmol）於EtOH（5 mL）及水（1 mL）中之攪拌混合物中添加Fe（197 mg，3.5 mmol）及NH ₄Cl（315 mg，5.9 mmol）。在80℃下攪拌所得混合物1小時。將固體過濾出。濾液用水（20 mL）稀釋且用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相急驟層析純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（ A30-13，80 mg，28%產率）。LC-MS: m/z 225 [M+H] ⁺。步驟14：實例 114及實例 115

類似於方法 A1 步驟 8但使用(8 S)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A30-10-P2，41 mg，116 μmol）及5-氯-6-(5-氟嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（39 mg，174 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈白色固體狀之反式異構物實例 114（2.8 mg，4%產率）及呈白色固體狀之順式-異構物實例 115（1.1 mg，2%產率）。實例 114： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48-4.54 (m, 1H), 3.00-3.07 (m, 1H), 2.49-2.60 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺。實例 115： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.93 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 8.78 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.71 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.55-4.59 (m, 1H), 2.82-2.87 (m, 2H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺。方法 A31 實例 116 、 117 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -N-(6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -N-(6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：5-氟-2-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶

類似於方法 A30 步驟 12但使用2-氯-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶（966 mg，4.3 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（451 mg，34%產率）。LC-MS: m/z 289[M+H] ⁺。步驟2：6-(5-氟嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A31-2）

類似於方法 A30 步驟 13但使用5-氟-2-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶（190 mg，659 μmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（ A31-2，95 mg，53%產率）。LC-MS: m/z 259 [M+H] ⁺。步驟3：實例 116及實例 117

類似於方法 A1 步驟 8但使用(8 S)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A30-10-P2，40 mg，114 μmol）及6-(5-氟嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（35 mg，136 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈白色固體狀之反式異構物實例 116（7.6 mg，11%產率）及呈白色固體狀之順式-異構物實例 117（5.2 mg，8%產率）。實例 116： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.14 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 9.07 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.51-4.56 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.00-3.08 (m, 1H), 2.57-2.63 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。實例 117： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.05 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 9.05 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.69 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 2.90-2.95 (m, 1H), 2.81-2.86 (m, 1H), 1.93 (s, 3H). LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。方法 A32 實例 118 、 119 ： (6 S,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -N-(6-(5- 氟嘧啶 -4- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -N-(6-(5- 氟嘧啶 -4- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：5-氟-4-(三甲基錫烷基)嘧啶（ A32-1）

向4-氯-5-氟-嘧啶（1 g，7.6 mmol）於二烷（15 mL）中之攪拌混合物中添加Pd(PPh ₃) ₄（875 mg，757 μmol）及1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷（3.7 g，11.3 mmol）。所得混合物在110℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。使混合物冷卻至25℃。濾出固體且在減壓下濃縮濾液，得到粗標題化合物（ A32-1，1 g）。LC-MS: m/z 263 [M+H] ⁺。步驟2：5-氟-4-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶

向2-氯-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶（2 g，8.8 mmol）於二烷（10 mL）中之攪拌混合物中添加5-氟-4-(三甲基錫烷基)嘧啶（1 g，3.8 mmol）、PdCl ₂(PPh ₃) ₂（532 mg，758 μmol）及CuI（144 mg，756 μmol）。在110℃下在氮氣氛圍下攪拌所得混合物1小時。使混合物冷卻至25℃。將固體過濾出。用水（20 mL）淬滅反應物。用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用80%石油醚及20%乙酸乙酯作為溶離劑純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（400 mg，31%產率）。LC-MS: m/z 289 [M+H] ⁺。步驟3：6-(5-氟嘧啶-4-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺

類似於方法 A30 步驟 13但使用5-氟-4-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶（0.2 g，694 μmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（150 mg，77%產率）。LC-MS: m/z 259 [M+H] ⁺。步驟4：(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-N-(6-(5-氟嘧啶-4-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-N-(6-(5-氟嘧啶-4-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2，100 mg，285 μmol）及6-(5-氟嘧啶-4-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（88 mg，341 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（13.6 mg，8%產率），LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（6.9 mg，4%產率），LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 118及實例 119

13 mg之(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-N-(6-(5-氟嘧啶-4-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：3.421；RT2（分鐘）：6.738；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.2 mL；運行次數：1）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 118（2.7 mg，22%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 119（3.8 mg，32%產率）。實例 118： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.23 (s, 1H), 9.22 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 9.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.13 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.04 (dd, J = 12.8, 8.4 Hz, 1H), 2.60 (dd, J = 12.8, 7.6 Hz, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。實例 119： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.23 (s, 1H), 9.22 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 9.16 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 9.13 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.04 (dd, J = 13.0, 8.4 Hz, 1H), 2.60 (dd, J = 13.0, 7.9 Hz, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。方法 A33 實例 120 、 121 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 122 、 123 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-甲基-2-(1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮

2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（ A6-4，2 g，6.8 mmol）於HCl（200 mL，4M於MeOH中)中之溶液在80℃下攪拌1小時。將混合物冷卻至室溫，且用飽和碳酸氫鈉水溶液將pH調節至7至8。所得混合物用乙酸乙酯（3×10 mL）萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物（1 g，6.1 mmol）。LC-MS: m/z 165 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-(2-溴-1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-甲基環戊-1-酮

在-20℃下向2-甲基-2-(1H-吡唑-4-基)環戊-1-酮（2 g，12.2 mmol）及2,3,4,6,7,8,9,10-八氫嘧啶並[1,2-a]吖呯（1.9 g，12.2 mmol）於THF（200 mL）中之攪拌溶液中緩慢添加2-溴-1,1-二氟乙烷（1.7 g，12.2 mmol）。在-20℃下攪拌反應混合物3小時。用水（200 mL）淬滅反應物。所得混合物用乙酸乙酯（3×200 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EtOAc/PE（4:1）溶離，得到呈無色油狀之標題化合物（900 mg，24%產率）。LC-MS: m/z 307 [M+H] ⁺。步驟3：2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-甲基環戊-1-酮

向2-(1-(2-溴-1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-甲基環戊-1-酮（900 mg，2.9 mmol）於EtOH（20 mL）及AcOH（1 mL）中之溶液中添加Pd/C（125 mg，10%）。使反應混合物脫氣且隨後在100℃下在氫氣氛圍下攪拌16小時。濾出固體且在減壓下濃縮濾液。殘餘物藉由逆相層析純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（600 mg，89%產率）。LC-MS: m/z 229 [M+H] ⁺。步驟4：2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（1.4 g，7.9 mmol）中之2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-甲基環戊-1-酮（600 mg，2.6 mmol）且在100℃下攪拌1，粗標題化合物呈紅色油狀獲得（600 mg）。LC-MS: m/z 284 [M+H] ⁺。步驟5：8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基環戊-1-酮（600 mg，2.1 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（600 mg，75%產率）。LC-MS: m/z 322 [M+H] ⁺。步驟6：8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（60 mL）中之8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（600 mg，1.9 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（320 mg，44%產率）。LC-MS: m/z 347 [M+H] ⁺。步驟7：8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

在25℃下向8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（300 mg，866 μmol）及K ₂CO ₃（359 mg，2.6 mmol）於DMSO（7 mL）中之攪拌混合物中逐滴添加H ₂O ₂（7 mL，30%於水中）。在25℃下攪拌混合物30分鐘。反應物用飽和硫代硫酸鈉溶液（10 mL）淬滅且用水（30 mL）稀釋。所得混合物用乙酸乙酯（2×30 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相層析純化且收集之溶離份在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物（180 mg，48%產率）。LC-MS: m/z 365 [M+H] ⁺。步驟8：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

向8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（170 mg，467 μmol）於二烷（20 mL）中之攪拌溶液中添加5-溴-3-氯-2-(三唑-2-基)吡啶（121 mg，467 μmol）、Pd ₂(dba) ₃（48 mg，47 μmol）、Xantphos（54 mg，93 μmol）及Cs ₂CO ₃（456 mg，1.4 mmol）。在110℃下，在氮氣氛圍下，攪拌混合物1小時。用水（100 mL）淬滅反應物。所得混合物用乙酸乙酯（2×100 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相管柱層析純化。所得產物藉由製備型非手性SFC進一步純化，得到標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（50 mg，18%產率），LC-MS: m/z 543 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（30 mg，11%產率），LC-MS: m/z 543 [M+H] ⁺。步驟9：分離鏡像異構物以獲得實例 120及實例 121

反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（50 mg，92 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.436；RT2（分鐘）：18.731；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 120（18.4 mg，36%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 121（21.1 mg，42%產率）。實例 120： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.70 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.96 (s, 2H), 7.83 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.34 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.40-4.45 (m, 1H), 3.01-3.06 (m, 1H), 2.73-2.78 (m, 1H), 2.26 (t, J= 16.0 Hz, 3H), 2.15 (s, 3H). LC-MS: m/z 543 [M+H] ⁺。實例 121： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.71 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.95 (s, 2H), 7.85 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.43-4.49 (m, 1H), 3.01-3.08 (m, 1H), 2.74-2.82 (m, 1H), 2.25 (t, J = 16.0 Hz, 3H), 2.15 (s, 3H). LC-MS: m/z 543 [M+H] ⁺。步驟10：分離鏡像異構物以獲得實例 122及實例 123

順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（30 mg，55 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.855；RT2（分鐘）：11.409；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.2 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 122（14.3 mg，46%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 123（11.8 mg，39%產率）。實例 122： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.72 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.94-7.98 (m, 4H), 7.75 (s, 1H), 6.37 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.43-4.47 (m, 1H), 3.04-3.08 (m, 1H), 2.88-2.94 (m, 1H), 2.25 (t, J = 16.0 Hz, 3H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 543 [M+H] ⁺。實例 123： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.68 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.90-7.96 (m, 4H), 7.75 (s, 1H), 6.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.40-4.46 (m, 1H), 3.02-3.08 (m, 1H), 2.87-2.94 (m, 1H), 2.25 (t, J = 16.0 Hz, 3H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 543 [M+H] ⁺。方法 A34 實例 124 、 125 ： (6 S,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 126 、 127 ： (6 S,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 S,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：(反式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A23-2，70 mg，199 μmol）及6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（68.5 mg，299 mmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（30 mg，26%產率），LC-MS (ES, m/z): 563[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（20 mg，16%產率），LC-MS (ES, m/z): 563[M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 124及實例 125

30 mg之(反式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.954；RT2（分鐘）：13.761；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 124（10.0 mg，33%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 125（12.6 mg，40%產率）。實例 124： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.28 (s, 1H), 9.03 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.83 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.20 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 8.19 (s, 2H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.02-3.07 (m, 1H), 2.57-2.62 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。實例 125： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.28 (s, 1H), 9.03 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.20 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 8.19 (s, 2H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.02-3.07 (m, 1H), 2.57-2.62 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 126及實例 127

20 mg之(順式)-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：MeOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度20%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.056；RT2（分鐘）：8.952；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 126（4.7 mg，23%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 127（6.2 mg，30%產率）。實例 126： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H), 9.00 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 8.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.58-4.62 (m, 1H), 2.91-2.96 (m, 1H), 2.80-2.86 (m, 1H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。實例 127： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H), 9.00 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 8.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.58-4.62 (m, 1H), 2.91-2.96 (m, 1H), 2.80-2.86 (m, 1H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 563 [M+H] ⁺。方法 A35 實例 128 、 129 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 130 、 131 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(3-氯-5-硝基-2-吡啶基)嘧啶

向2,3-二氯-5-硝基-吡啶（600 mg，3.1 mmol）及三丁基(嘧啶-2-基)錫烷（1.3 g，3.4 mmol）於DMF（10 mL）中之攪拌混合物中添加碘化亞銅（118 mg，622 μmol）及氯化雙(三苯基膦)鈀(II)（436 mg，622 μmol）。所得混合物在120℃下在氮氣氛圍下攪拌16小時。反應混合物在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相層析純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（410 mg，55%產率）。LC-MS: m/z 237 [M+H] ⁺。步驟2：5-氯-6-嘧啶-2-基-吡啶-3-胺（ A35-2）

類似於方法 A30 步驟 13但使用2-(3-氯-5-硝基-2-吡啶基)嘧啶（390 mg，1.6 mmol），呈黃色固體狀之標題化合物呈黃色固體狀獲得（ A35-2，100 mg，29%產率）。LC-MS: m/z 207 [M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用5-氯-6-嘧啶-2-基-吡啶-3-胺（ A35-2，80 mg，387 μmol）及8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2，136 mg，387 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（20 mg，16%產率），LC-MS: m/z 540 [M+H] ⁺；順式-異構物（20 mg，16%產率），LC-MS: m/z 540 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 128及實例 129

反式-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（20 mg，37 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.83；RT2（分鐘）：9.43；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 128（6.0 mg，29%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 129（4.3 mg，21%產率）。實例 128： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.96 (s, 1H), 8.98 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.46 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.92-2.98 (m, 1H), 2.55-2.60 (m, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 540 [M+H] ⁺。實例 129： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.94 (s, 1H), 8.98 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.92-2.98 (m, 1H), 2.55-2.60 (m, 1H), 2.00 (s, 3H).. LC-MS: m/z 540 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 130及實例 131

順式-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（20 mg，37 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：9.18；RT2（分鐘）：19.56；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.8 mL；運行次數：1）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 130（2.0 mg，10%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 131（2.0 mg，10%產率）。實例 130： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.98 (s, 1H), 8.98 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.74 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53-4.58 (m, 1H), 2.82-2.90 (m, 1H), 2.71-2.78 (m, 1H), 1.91 (s, 3H). LC-MS: m/z 540 [M+H] ⁺。實例 131： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.94 (s, 1H), 8.98 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.74 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53-4.58 (m, 1H), 2.82-2.90 (m, 1H), 2.71-2.78 (m, 1H), 1.91 (s, 3H). LC-MS: m/z 540 [M+H] ⁺。方法 A36 實例 132 、 133 ： (6 S,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -N-(6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -N-(6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：實例 132及實例 133

類似於方法 A1 步驟 8但使用6-(5-氟嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A31-2，80 mg，310 μmol）及(8 R)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A25-3-P2，91 mg，259 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈白色固體狀之反式異構物實例 132（11.5 mg，7%產率）及呈白色固體狀之順式-異構物實例 133（15.7 mg，10%產率）。實例 132： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.11 (s, 1H), 9.08 (s, 3H), 8.71-8.73 (m, 2H), 8.21 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.92-2.98 (m, 1H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.01 (s, 3H). LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。實例 133： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.10 (s, 1H), 9.08 (s, 3H), 8.77 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (t, J = 58.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 2.75-2.80 (m, 1H), 1.92 (s, 3H).LC-MS: m/z 592 [M+H] ⁺。方法 A37 實例 134 、 135 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺， (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(5- 氟嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：實例 134及實例 135

類似於方法 A1 步驟 8但使用5-氯-6-(5-氟嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（ A30-13，90 mg，401 μmol）及(8 R)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A25-3-P2，94 mg，267 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈灰白色固體狀之反式異構物實例 134（5.9 mg，4%產率）及呈灰白色固體狀之順式-異構物實例 135（4.8 mg，3%產率）。實例 134： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 10.98 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.43 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.74 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.57 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.83-2.89 (m, 1H), 2.72-2.78 (m, 1H), 1.91 (s, 3H).LC-MS: m/z558 [M+H] ⁺。實例 135： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.05 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 8.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.57 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.91-2.98 (m, 1H), 2.55-2.61 (m, 1H), 2.00 (s, 3H).LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺。方法 A38 實例 136 、 137 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺， (6 R,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 138 、 139 ： (6 S,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺， (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶

類似於方法 A35 步驟 1但使用2-氯-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶（1.2 g，5.2 mmol）且在120℃下攪拌3小時，標題化合物呈黃色固體狀獲得（740 mg，47%產率）。LC-MS (ES, m/z): 271 [M+H] ⁺。步驟2：6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2）

向2-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶（900 mg，3.3 mmol）之混合物於EtOH（45 mL）及水（45 mL）中之攪拌溶液中添加Fe（744 mg，13.3 mmol）及NH ₄Cl（713 mg，13.3 mmol）。在70℃下攪拌反應混合物2小時。過濾反應混合物，且在減壓下濃縮濾液。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（ A38-2，580 mg，71%產率）。LC-MS: m/z 241 [M+H] ⁺。步驟3：(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A23-2，150 mg，427 μmol）及6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2，123 mg，512 mmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（30 mg，11%產率），LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（20 mg，7%產率），LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 136及實例 137

30 mg之(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度70%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.369；RT2（分鐘）：6.209；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.9 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 136（10.2 mg，32%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 137（13.3 mg，42%產率）。實例 136： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.20 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.96 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.65 (s, 1H), 7.74 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.44 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.41-3.46 (m, 1H), 2.64-2.69 (m, 1H), 2.17 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。實例 137： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.00 (s, 1H), 8.95 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.85 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.42-3.47 (m, 1H), 2.60-2.66 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 138及實例 139

20 mg之(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：11.491；RT2（分鐘）：16.05；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.8 mL；運行次數：3）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 138（5.5 mg，27%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 139（4.7 mg，23%產率）。實例 138： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.62 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.99 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.58-4.61 (m, 1H), 3.38-3.43 (m, 1H), 2.87-2.94 (m, 1H), 2.15 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。實例 139： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 10.09 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.96 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.82 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 7.80 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.44 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.62-4.66 (m, 1H), 3.38-3.42 (m, 1H), 2.88-2.94 (m, 1H), 2.12 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。方法 A39 實例 140 、 141 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 142 、 143 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：(反式)-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A23-2，150 mg，427 μmol）及6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A35-2，132 mg，640 mmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（45 mg，19%產率），LC-MS (ES, m/z): 540[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（10 mg，4%產率），LC-MS (ES, m/z): 540[M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 140及實例 141

45 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度60%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：4.274；RT2（分鐘）：6.805；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.8 mL；運行次數：5）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 140（8.2 mg，17%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 141（10.1 mg，20%產率）。實例 140： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.97 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.76 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.44-3.45 (m, 1H), 2.59-2.64 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 540[M+H] ⁺。實例 141： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.97 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.40-3.46 (m, 1H), 2.59-2.65 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 540[M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 142及實例 143

20 mg之(順式)-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.321；RT2（分鐘）：10.659；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 142（2.8 mg，27%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 143（2.4 mg，23%產率）。實例 142： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.57 (s, 1H), 8.96 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.69 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.81 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.54-4.60 (m, 1H), 3.35-3.40 (m, 1H), 2.86-2.92 (m, 1H), 2.13 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 540[M+H] ⁺。實例 143： ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 10.23 (s, 1H), 8.92-8.99 (m, 3H), 8.78 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.59-4.66 (m, 1H), 3.34-3.38 (m, 1H), 2.88-2.94 (m, 1H), 2.10 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 540[M+H] ⁺。方法 A40 實例 144 、 145 ： (6 S,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺， (6 R,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 146 、 147 ： (6 S,8 R)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A9-11，85 mg，270 μmol）及6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（124 mg，539 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（20 mg，14%產率），LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（6 mg，4%產率），LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 144及實例 145

20 mg之反式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.22；RT2（分鐘）：7.789；樣品溶劑：EtOH--HPLC；樣品濃度：mg/mL；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 144（7.6 mg，38%產率）。將第一第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 145（6.6 mg，33%產率）。實例 144： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 8.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.97 (s, 2H), 7.31 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.65 (t, J= 8.6 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.47-3.52 (m, 1H), 2.54-2.59 (m, 1H), 2.14 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。實例 145： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 8.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.97 (s, 2H), 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.64-4.68 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.47-3.52 (m, 1H), 2.54-2.69 (m, 1H), 2.14 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 146及實例 147

6 mg之順式-N-(6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-氟-8-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度10%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.881；RT2（分鐘）：11.324；樣品溶劑：EtOH--HPLC；樣品濃度：mg/mL；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 146（2.4 mg，39%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 147（2.1 mg，35%產率）。實例 146： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 10.80 (s, 1H), 8.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.94 (s, 2H), 7.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.29 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.55-4.58 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.27-3.32 (m, 1H), 2.85-2.91 (m, 1H), 2.13 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。實例 147： ¹H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ 10.80 (s, 1H), 8.87 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.94 (s, 2H), 7.39 (d, J = 2 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.55-4.58 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.28-3.30 (m, 1H), 2.84-2.91 (m, 1H), 2.13 (s, 3H). LC-MS: m/z 527 [M+H] ⁺。方法 A41 實例 148 、 149 ： (6 S,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 150 、 151 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：反式-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2，120 mg，342 μmol）及6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2，123 mg，512 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈灰白色固體狀之反式異構物（20 mg，10%產率），LC-MS: m/z 574 [M+H] ⁺；呈灰白色固體狀之順式-異構物（18 mg，9%產率），LC-MS: m/z 574 [M+H] ⁺。步驟2：分離鏡像異構物以獲得實例 148及實例 149

17 mg之反式-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.34；RT2（分鐘）：14.14；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.55 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 148（2.6 mg，15%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 149（2.0 mg，11%產率）。實例 148： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.12 (s, 1H), 9.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.97 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 8.73 (s, 1H), 8.71 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 13.2, 8.0 Hz, 1H), 2.61 (dd, J= 13.2, 8.0 Hz, 1H), 2.00 (s, 3H). LC-MS: m/z 574 [M+H] ⁺。實例 149： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.16 (s, 1H), 9.07 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.73 (s, 1H), 8.71 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 13.2, 8.0 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 13.2, 8.0 Hz, 1H), 2.01 (s, 3H). LC-MS: m/z 574 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 150及實例 151

18 mg之順式-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.44；RT2（分鐘）：10.21；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.9 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 150（2.2 mg，12%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 151（2.3 mg，12%產率）。實例 150： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.09 (s, 1H), 9.06 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.67 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.55-4.60 (m, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 2.74-2.80 (m, 1H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 574 [M+H] ⁺。實例 151： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.09 (s, 1H), 9.06 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.66 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.73 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 2.84-2.88 (m, 1H), 2.74-2.80 (m, 1H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 574 [M+H] ⁺。方法 A42 實例 152 、 153 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 154 、 155 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1- 環丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A8 步驟 1但使用2-氟-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（ A9-9，280 mg，622 μmol），標題化合物呈白色固體狀獲得（90 mg，41%產率）。LC-MS: m/z 356 [M+H] ⁺。步驟2：8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A7 步驟 2但使用8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（90 mg，253 μmol），粗標題化合物呈白色固體狀獲得（75 mg，86%產率）。LC-MS: m/z 342 [M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（75 mg，131.8 mmol）及5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺（31 mg，158 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（40 mg，58%產率），LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（20 mg，29%產率），LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 152及實例 153

40 mg之反式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：18ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.56；RT2（分鐘）：12.048；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 152（17.2 mg，43%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 153（17.3 mg，43%產率）。實例 152： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.13 (s, 1H), 8.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.50-4.54 (m, 1H), 3.52-3.62 (m, 1H), 3.01-3.10 (m, 1H), 2.43-2.51 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 0.82-0.97 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。實例 153： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.13 (s, 1H), 8.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.48-4.57 (m, 1H), 3.52-3.62 (m, 1H), 3.00-3.11 (m, 1H), 2.43-2.52 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 0.82-0.97 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 154及實例 155

20 mg之順式-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-環丙基-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.556；RT2（分鐘）：10.156；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.7 mL；運行次數：5）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 154（5.8 mg，29%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 155（4.5 mg，22%產率）。實例 154： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.96 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.51-4.55 (m, 1H), 3.47-3.57 (m, 1H), 2.95-3.05 (m, 1H), 2.70-2.80 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 0.72-0.88 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。實例 155： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.96 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.49-4.57 (m, 1H), 3.47-3.58 (m, 1H), 2.95-3.04 (m, 1H), 2.70-2.80 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 0.72-0.89 (m, 4H). LC-MS: m/z 519 [M+H] ⁺。方法 A43 實例 156 、 157 ： (6 S,8 R)-N-(5- 氯 -6-(5- 氟嘧啶 -4- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(5- 氯 -6-(5- 氟嘧啶 -4- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：4-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-5-氟嘧啶

類似於方法 A32 步驟 2但使用於二烷（20 mL）中之2,3-二氯-5-硝基吡啶（3.4 g，17.6 mmol）及5-氟-4-(三甲基錫烷基)嘧啶（ A32-1，2 g，7.7 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（1.3 g，61%產率）。LC-MS: m/z 255 [M+H] ⁺。步驟2：5-氯-6-(5-氟嘧啶-4-基)吡啶-3-胺

類似於方法 A30 步驟 13但使用4-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)-5-氟嘧啶（0.2 g，785 μmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（150 mg，79%產率）。LC-MS: m/z 225 [M+H] ⁺。步驟3：反式-N-(5-氯-6-(5-氟嘧啶-4-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及順式-N-(5-氯-6-(5-氟嘧啶-4-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A7-2，90 mg，256 μmol）及5-氯-6-(5-氟嘧啶-4-基)吡啶-3-胺（69 mg，307 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（8.5 mg，5%產率），LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（2.8 mg，2%產率），LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 156及實例 157

7 mg之反式-N-(5-氯-6-(5-氟嘧啶-4-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：8.17；RT2（分鐘）：9.948；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.4 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 156（2.5 mg，33%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 157（2.2 mg，31%產率）。實例 156： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.09 (s, 1H), 9.24 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 9.13 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.53 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.1 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.00-3.06 (m, 1H), 2.55-2.60 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺。實例 157： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.09 (s, 1H), 9.24 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 9.13 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.53 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.1 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.00-3.06 (m, 1H), 2.55-2.61 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 558 [M+H] ⁺。方法 A44 實例 158 、 159 ： (6 S,8 S)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 160 、 161 ： (6 S,8 R)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-2- 氟 -8- 甲基 -8-(1-(1- 甲基環丙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-碘-1-(丙-1-烯-2-基)-1H-吡唑

類似於方法 A28 步驟 1但使用3-碘-1H-吡唑（20 g，103.1 mmol）且在70℃下攪拌16小時，標題化合物呈黃色油狀獲得（7.3 g，30%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.02 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.71-4.76 (m, 1H), 2.18-2.23 (m, 3H). LC-MS (ES, m/z): 235[M+H] ⁺。步驟2：3-碘-1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑

類似於方法 A28 步驟 2但使用3-碘-1-(丙-1-烯-2-基)-1H-吡唑（7.3 g，31.2 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（4.3 g，55%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.71 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 1.53 (s, 3H), 1.12-1.17 (m, 2H), 0.86-0.91 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 249[M+H] ⁺。步驟3：2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-醇

類似於方法 A6 步驟 2但使用3-碘-1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑（4.3 g，17.3 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（0.6 g，18%產率）。LC-MS: m/z 207 [M+H] ⁺。步驟4：2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

在氮氣下在-78℃下向乙二醯氯（2.1 g，17.0 mmol）於DCM（15 mL）中之攪拌溶液中添加於DCM（15 mL）中之DMSO（2.6 g，33.9 mmol）。所得混合物在-78℃下攪拌0.5小時。在-78℃下在氮氣下緩慢添加2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-醇（1.8 g，8.5 mmol）於DCM（15 mL）中之溶液，且其在-78℃下攪拌30分鐘。三乙胺（4.3 g，42.4 mmol）在-78℃下在氮氣下逐滴添加。使混合物升溫至25℃且攪拌16小時。反應物用水（30 mL）淬滅，且所得混合物用DCM（3×30 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之粗標題化合物（1.8 g），其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 205 [M+H] ⁺。步驟5：2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（370 mg，1.8 mmol）且藉由逆相管柱層析純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（220 mg，55%產率）。LC-MS: m/z 219 [M+H] ⁺。步驟6：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（1.9 g，11.0 mmol）中之2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（1.2 g，5.5 mmol）且在100℃下攪拌1，粗標題化合物呈黃色油狀獲得（1.2 g，79%產率），其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 274 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（1.2 g，4.4 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（1 g，73%產率）。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.59 (s, 1H), 7.64 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.01-3.10 (m, 2H), 2.58-2.69 (m, 1H), 2.20-2.32 (m, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.01-1.06 (m, 2H), 0.75-0.83 (m, 2H). LC-MS: m/z 312 [M+H] ⁺。步驟8：2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（125 mL）中之2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.2 g，3.8 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（340 mg，13%產率）。LC-MS: m/z 337 [M+H] ⁺。步驟9：2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A9 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（340 mg，505 µmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（160 mg，82%產率）。LC-MS: m/z 356 [M+H] ⁺。步驟10：(反式)-2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（150 mg，422 µmol）及6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2，112 mg，464 µmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈灰白色固體狀之反式異構物（75 mg，30%產率），LC-MS: m/z 578 [M+H] ⁺；呈灰白色固體狀之順式-異構物（30 mg，12%產率），LC-MS: m/z 578 [M+H] ⁺。步驟11：分離鏡像異構物以獲得實例 158及實例 159

27 mg之(反式)-2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度60%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：4.753；RT2（分鐘）：7.829；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.2 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 158（22.5 mg，29%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 159（30.2 mg，40%產率）。實例 158： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ: 11.11 (s, 1H), 9.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 7.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 12.4, 8.0 Hz, 1H), 2.52-2.55 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.01-1.12 (m, 2H), 0.78-0.88 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 578 [M+H] ⁺。實例 159： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ: 11.11 (s, 1H), 9.10 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 7.71 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 12.4, 8.0 Hz, 1H), 2.52-2.55 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.01-1.12 (m, 2H), 0.78-0.88 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 578 [M+H] ⁺。步驟12：分離鏡像異構物以獲得實例 160及實例 161

30 mg之(順式)-2-氟-8-甲基-8-(1-(1-甲基環丙基)-1H-吡唑-3-基)-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SZ，3*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：MeOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：9.733；RT2（分鐘）：14.084；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 160（11.7 mg，38%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 161（6.8 mg，22%產率）。實例 160： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ: 10.93 (s, 1H), 9.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.62-7.65 (m, 2H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.54 (dd, J = 9.2, 4.8 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 13.2, 5.2 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 13.2, 9.6 Hz, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.88-1.01 (m, 2H), 0.58-0.70 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 578 [M+H] ⁺。實例 161： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ: 10.94 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.98 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.72 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.60-7.67 (m, 2H), 6.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.54 (dd, J = 9.2, 5.2 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 12.8, 4.8 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 13.2, 9.6 Hz, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.88-1.01 (m, 2H), 0.58-0.70 (m, 2H). LC-MS (ES, m/z): 578 [M+H] ⁺。方法 A45 實例 162 、 163 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嗒 -3- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嗒 -3- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-(三丁基錫烷基)嗒

在-30℃下向2,2,6,6-四甲基哌啶（1.94 g，13.7 mmol，2.32 mL）於THF（80 mL）中之溶液中添加正丁基鋰（5.5 mL，2.5 M於己烷中）。在0℃下攪拌混合物30分鐘。在-78℃下同時添加嗒（1 g，12.5 mmol）於THF（20 mL）中之溶液及三丁基氯錫烷（4.1 g，12.5 mmol）於THF（20 mL）中之溶液，且在-78℃下攪拌混合物4小時。使混合物升溫至25℃且用飽和氯化銨水溶液（20 ml）淬滅。混合物用水（200 mL）稀釋且用DCM（3×200 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用EA/PE（1:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（2.1 g，45%產率）。LC-MS (ES, m/z): 371 [M+H] ⁺。步驟2：3-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嗒

類似於方法 A30 步驟 12但使用3-(三丁基錫烷基)嗒（1 g，2.7 mmol）及2-氯-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶（614 mg，2.7 mmol）且在120℃下攪拌1小時，標題化合物呈黃色油狀獲得（120 mg，16%產率）。LC-MS (ES, m/z): 271 [M+H] ⁺。步驟3：6-(嗒 -3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺

類似於方法 A30 步驟 13但使用3-(5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嗒（110 mg，407 μmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（45 mg，46%產率）。LC-MS (ES, m/z): 241 [M+H] ⁺。步驟4：實例 162及實例 163

類似於方法 A1 步驟 8但使用(8 S)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A30-10-P2，44 mg，125 μmol）及6-(嗒 -3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（30 mg，125 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈白色固體狀之反式異構物實例 162（14.0 mg，19%產率）及呈白色固體狀之順式-異構物實例 163（6.0 mg，8%產率）。實例 162： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (s, 1H), 9.31-9.37 (m, 1H), 9.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.02-8.06 (m, 1H), 7.86-7.92 (m, 1H), 7.71 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.50-4.58 (m, J = 8.0 Hz, 1H), 3.00-3.09 (m, 1H), 2.55-2.65 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。實例 163： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.07 (s, 1H), 9.31-9.37 (m, 1H), 9.11 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 8.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.00-8.06 (m, 1H), 7.86-7.93 (m, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.54-4.63 (m, 1H), 2.79-2.96 (m, 2H), 1.93 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 574[M+H] ⁺。方法 A46 實例 164 、 165 ： (6 S,8 S)-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 166 、 167 ： (6 S,8 R)-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-甲基-2-(1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮

類似於方法 A33 步驟 1但使用2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（ A9-4，31.0 g，105 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（9.0 g，52%產率）。LC-MS: m/z 165 [M+H] ⁺。步驟2：2-(1-(2-溴-1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-甲基環戊-1-酮

在-40℃下向2-甲基-2-(1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（4.5 g，27 mmol）於THF（200 mL）中之攪拌溶液中添加DBU（8.3 g，54 mmol）及2-溴-1,1-二氟乙烷（50.0 g，349 mmol）。使反應混合物升溫至50℃且攪拌16小時。用水（100 mL）淬滅反應物。所得混合物用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取。合併之有機層用鹽水（100 ml）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相管柱純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（2.3 g，27%產率）。LC-MS: m/z 307[M+H] ⁺。步驟3：2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-甲基環戊-1-酮

向2-(1-(2-溴-1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-甲基環戊-1-酮（4.5 g，14 mmol）於EtOH（200 mL）中之溶液中添加Pd(OH) ₂/C（4.1 g，1 mmol，10%）及Pd/C（3.5 g，1 mmol，10%）。使混合物脫氣且隨後在120℃下在氫氣壓力[30 atm]下攪拌48小時。濾出固體，且在減壓下濃縮濾液。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用PE/EtOAc（10:1）溶離，得到呈黃色油狀之標題化合物（1.8 g，37%產率）。 ¹H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.67-2.76 (m, 1H), 2.34-2.44 (m, 1H), 2.26 (t, J = 16.0 Hz, 3H), 1.92-2.12 (m, 4H), 1.43 (s, 3H). LC-MS: m/z 229 [M+H] ⁺。步驟4：2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲烷二胺（382 mg，2.2 mmol）中之2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-甲基環戊-1-酮（100 mg，440 μmol）且在100℃下攪拌1小時，粗標題化合物呈紅色油狀獲得（100 mg）。LC-MS: m/z 284 [M+H] ⁺。步驟5：8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用於EtOH（5 mL）及HCl（0.5 mL，4M於二烷中）中之2-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基環戊-1-酮（100 mg，353 μmol）及3-氟-1H-吡唑-5-胺（36 mg，353 μmol）且在100℃下攪拌1小時，標題化合物呈黃色固體狀獲得（50 mg，44%產率）。LC-MS: m/z 322 [M+H] ⁺。步驟6：8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（40 mL）中之8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（400 mg，1.2 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（200 mg，23%產率）。LC-MS: m/z 347 [M+H] ⁺。步驟7：8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（ A46-7）

類似於方法 A33 步驟 7但使用8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（65 mg，187 μmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（ A46-7，30 mg，44%產率）。LC-MS: m/z 365 [M+H] ⁺。步驟8：2-(5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶

在0℃下向6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2，260 mg，1.1 mmol）於HBr（2 mL，33%於乙酸中）中之攪拌混合物中逐滴添加NaNO ₂（224 mg，3.3 mmol）於水（2mL）中之溶液，且其在0℃下攪拌30分鐘。在0℃下添加CuBr（202 mg，1.4 mmol），且在0℃下攪拌反應混合物1小時。用水（20 mL）稀釋混合物且用DCM（3×20 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物施加於矽膠管柱上且用PE/EtOAc（3:1）溶離，得到呈黃色固體狀之標題化合物（210 mg，64%產率）。LC-MS: m/z 304 [M+H] ⁺。步驟9：(反式)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A33 步驟 8但使用8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（30 mg，82 μmol）及2-(5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)嘧啶（30 mg，98 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（12 mg，21%產率），LC-MS: m/z 588 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（6 mg，10%產率），LC-MS: m/z 588 [M+H] ⁺。步驟10：分離鏡像異構物以獲得實例 164及實例 165

25 mg之(反式)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.47；RT2（分鐘）：10.61；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.3 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 164（5.4 mg，21%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈淺黃色固體狀之實例 165（11.6 mg，44%產率）。實例 164： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.13(s, 1H), 9.08 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.57-6.59 (m, 2H), 4.55 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.05-3.11 (m, 1H), 2.56-2.61 (m, 1H), 2.20 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 588 [M+H] ⁺。實例 165： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.10(s, 1H), 9.08 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.57-6.59 (m, 2H), 4.55 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.05-3.11 (m, 1H), 2.56-2.61 (m, 1H), 2.21 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 588 [M+H] ⁺。步驟11：分離鏡像異構物以獲得實例 166及實例 167

23 mg之(順式)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.17；RT2（分鐘）：10.41；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.6 mL；運行次數：4）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 166（2.7 mg，11%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 167（1.3 mg，5%產率）。實例 166： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.00 (s, 1H), 9.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.73 (s, 1H), 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 2.99-3.03 (m, 1H), 2.78-2.85 (m, 1H), 2.09 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 1.93 (s, 3H). LC-MS: m/z 588 [M+H] ⁺。實例 167： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 11.01 (s, 1H), 9.05 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.73 (s, 1H), 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 2.99-3.03 (m, 1H), 2.78-2.85 (m, 1H), 2.09 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 1.93 (s, 3H). LC-MS: m/z 588 [M+H] ⁺。方法 A47 實例 168 、 169 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺， (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 170 ： ( 順式 )-N-(5- 氯 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)嘧啶

類似於方法 A46 步驟 8但使用5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（ A35-2，120 mg，581 μmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（110 mg，70%產率）。LC-MS: m/z 270 [M+H] ⁺。步驟2：(反式)-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及實例 170

類似於方法 A33 步驟 8但使用8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（ A46-7，30 mg，82 μmol）及2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)嘧啶（26.7 mg，98 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（1.3 mg，2%產率），LC-MS: m/z 554 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之實例 170（1.2 mg，2%產率）。實例 170： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.89(s, 1H), 8.97 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.54-4.58 (m, 1H), 2.93-2.98 (m, 1H), 2.78-2.84 (m, 1H), 2.12 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 554 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 168及實例 169

5.8 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(1,1-二氟乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化。（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度60%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：6.138；RT2（分鐘）：12.152；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.5 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 168（1.8 mg，31%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 169（1.3 mg，22%產率）。實例 168： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.97 (s, 1H), 8.98 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.56-6.59 (m, 2H), 4.51-4.55 (m, 1H), 3.05-3.10 (m, 1H), 2.56-2.67 (m, 1H), 2.20 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 554 [M+H] ⁺。實例 169： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ: 10.97(s, 1H), 8.98 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.46 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.56-6.59 (m, 2H), 4.51-4.55 (m, 1H), 3.04-3.10 (m, 1H), 2.56-2.67 (m, 1H), 2.20 (t, J = 16.4 Hz, 3H), 2.03 (s, 3H). LC-MS: m/z 554 [M+H] ⁺。方法 A48 實例 171 、 172 ： (6 S,8 S)-2- 氯 -8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-2- 氯 -8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 173 、 174 ： (6 S,8 R)-2- 氯 -8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-2- 氯 -8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-8- 甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-氯-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A6 步驟 6但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（6 g，17 mmol）及3-氯-1H-吡唑-5-胺（2 g，17 mmol），在110℃下攪拌1小時，標題化合物呈紅色固體狀獲得（2.9 g，41%產率）。LC-MS: m/z 404 [M+H] ⁺。步驟2：2-氯-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A6 步驟 7但使用於氯苯（20 mL）中之2-氯-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.1 g，3 mmol），呈黃色油狀之標題化合物呈黃色油狀獲得（200 mg，17%產率）。LC-MS: m/z 429 [M+H] ⁺。步驟3：2-氯-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

2-氯-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（400 mg，932 μmol）於HCl（10 mL，4M於MeOH中）中之溶液在80℃下攪拌2小時。混合物在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物（200 mg，65%產率），其直接用於下一步驟中。LC-MS: m/z 332 [M+H] ⁺。步驟4：2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A23 步驟 1但使用2-氯-8-甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（200 mg，602 μmol）且在60℃下攪拌16小時，標題化合物呈黃色油狀獲得（200 mg，87%產率）。LC-MS: m/z 382 [M+H] ⁺。步驟5：2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A7 步驟 2但使用於THF（10 mL）中之2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（200 mg，524 μmol）且藉由逆相管柱層析純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（130 mg，67%產率）。LC-MS: m/z 368 [M+H] ⁺。步驟6：(反式)-2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（120 mg，326 μmol）及6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2，78 mg，326 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈粉紅色固體狀之反式異構物（24 mg，25%產率），LC-MS: m/z 590[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（19 mg，19%產率），LC-MS: m/z 590[M+H] ⁺。步驟7：分離鏡像異構物以獲得實例 171及實例 172

(反式)-2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（24 mg，40 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.732；RT2（分鐘）：13.43；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈粉紅色固體狀之實例 171（5 mg，40%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈黃色固體狀之實例 172（9 mg，72%產率）。實例 171： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.13 (s, 1H), 9.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.76 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 59.2 Hz ,1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 3.01-3.08 (m, 1H), 2.55-2.63 (m, 1H), 2.07 (s, 3H). LC-MS: m/z 590[M+H] ⁺。實例 172： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.12 (s, 1H), 9.07 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.76 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 59.2 Hz ,1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.51-4.57 (m, 1H), 3.00-3.08 (m, 1H), 2.55-2.63 (m, 1H), 2.07 (s, 3H). LC-MS: m/z 590[M+H] ⁺。步驟8：分離鏡像異構物以獲得實例 173及實例 174

(順式)-2-氯-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-8-甲基-N-(6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（19 mg，32 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：12.948；RT2（分鐘）：18.039；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.2 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 173（6 mg，63%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 174（5 mg，8 μmol，52%產率，）。實例 173： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.03 (s, 1H), 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.66 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.69 (t, J = 59.2 Hz ,1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.48 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.56-4.62 (m, 1H), 2.81-2.97 (m, 2H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 590[M+H] ⁺。實例 174： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 11.02 (s, 1H), 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 4.8Hz, 2H), 8.77 (s, 1H), 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz ,1H), 7.64 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.48 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.57-4.62 (m, 1H), 2.81-2.95 (m, 2H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 590[M+H] ⁺。方法 A49 實例 175 、 176 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 177 、 178 ： (6 S,8 S)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(2-( 二氟甲基 )-2H-1,2,3- 三唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(5- 氯 -6-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8-(2-( 二氟甲基 )-2H-1,2,3- 三唑 -4- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑

類似於方法 A6 步驟 1但使用2H-三唑（30 g，434.4 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（46 g，45%產率）。LC-MS: m/z 200 [M+H] ⁺。步驟2：2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-醇

類似於方法 A1 步驟 1但使用2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑（50 g，250.9 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（33.5 g，42%產率）。LC-MS: m/z 284 [M+H] ⁺。步驟3：2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A10 步驟 2但使用2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-醇（15 g，52.9 mmol）且在藉由逆相管柱層析純化之後，標題化合物呈黃色油狀獲得（15 g，90%產率）。LC-MS: m/z 282 [M+H] ⁺。步驟4：2-甲基-2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 3但使用2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-酮（10 g，35.5 mmol），標題化合物呈無色油狀獲得（4.1 g，36%產率）。LC-MS: m/z 296 [M+H] ⁺。步驟5：5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-酮

類似於方法 A1 步驟 4但使用於1-三級丁氧基-N,N,N',N'-四甲基甲烷二胺（4.6 g，26.4 mmol）中之2-甲基-2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-酮（3.9 g，13.2 mmol）且在100℃下攪拌1小時，粗標題化合物呈棕色油狀獲得（4.2 g）且其不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 351 [M+H] ⁺。步驟6：2-氟-8-甲基-8-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A1 步驟 5但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)環戊-1-酮（1 g，2.9 mmol）且在藉由逆相管柱層析純化之後，標題化合物呈黃色油狀獲得（250 mg，23%產率）。LC-MS: m/z 389 [M+H] ⁺。步驟7：2-氟-8-甲基-8-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A6 步驟 7但使用於氯苯（20 mL）中之2-氟-8-甲基-8-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（1 g，2.6 mmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（90 mg，8%產率）。LC-MS: m/z 414 [M+H] ⁺。步驟8：2-氟-8-甲基-8-(2H-1,2,3-三唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A48 步驟 3但使用2-氟-8-甲基-8-(2-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（90 mg，185 μmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（50 mg，85%產率）。LC-MS: m/z 317 [M+H] ⁺。步驟9：8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯及8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A23 步驟 1但使用2-氟-8-甲基-8-(2H-1,2,3-三唑-4-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸酯（50 mg，158 μmol）且在60℃下攪拌1小時，且藉由製備型HPLC純化之後，8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（35 mg，60%產率），LC-MS: m/z 367 [M+H] ⁺及8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（20 mg，35%產率），LC-MS: m/z 367 [M+H] ⁺均呈白色固體狀獲得。步驟10：8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A7 步驟 2但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸酯（33 mg，90.1 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（28 mg，88%產率）。LC-MS: m/z 353 [M+H] ⁺。步驟11：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（26 mg，74 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（10.4 mg，26%產率）；呈白色固體狀之順式-異構物（5.6 mg，14%產率）。順式異構物： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.25 (t, J = 58.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 2H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.82-2.97 (m, 2H), 1.95 (s, 3H). LC-MS: m/z 530 [M+H] ⁺。步驟12：分離鏡像異構物以獲得實例 175及實例 176

9 mg之(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（9 mg，17 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：9.704；RT2（分鐘）：12.258；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：0.6 mL；運行次數：3）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 175（2.8 mg，31%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 176（3.9 mg，43%產率）。實例 175： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 11.27 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.76 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.23 (t, J = 58.0, 1H), 8.18 (s, 2H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.68 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.01-3.09 (m, 1H), 2.64-2.69 (m, 1H), 2.07 (s, 3H). LC-MS: m/z 530 [M+H] ⁺。實例 176： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 11.20 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.23 (t, J = 58.0, 1H), 8.18 (s, 2H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.67 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.00-3.10 (m, 1H), 2.61-2.69 (m, 1H), 2.07 (s, 3H). LC-MS: m/z 530 [M+H] ⁺。步驟13：8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A7 步驟 2但使用8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（30 mg，82 μmol），粗標題化合物呈黃色油狀獲得（20 mg，69%產率）。LC-MS (ES, m/z): 353[M+H] ⁺。步驟14：(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（15 mg，43 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（7 mg，31%產率）；呈白色固體狀之順式-異構物（3 mg，13%產率）。順式異構物： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.15 (br, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.72 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.18 (s, 2H), 8.07 (t, J = 57.6 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.83-2.93 (m, 2H), 1.97 (s, 3H). LC-MS: m/z 530 [M+H] ⁺。步驟15：分離鏡像異構物以獲得實例 177及實例 178

(反式)-N-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-8-(2-(二氟甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺（7 mg，13 μmol）經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：6.412；RT2（分鐘）：10.459；注入體積：2 mL；運行次數：1）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 177（2.2 mg，31%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 178（2.8 mg，37%產率）。實例 177： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.18 (s, 2H), 8.07 (t, J = 57.2 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.54-4.63 (m, 1H), 2.97-3.06 (m, 1H), 2.66-2.72 (m, 1H), 2.09 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 530[M+H] ⁺。實例 178： ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.18 (s, 2H), 8.07 (t, J = 57.2 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.51-4.64 (m, 1H), 2.97-3.10 (m, 1H), 2.66-2.72 (m, 1H), 2.09 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 530[M+H] ⁺。方法 A50 實例 179 、 180 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -N-(5- 甲氧基 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -N-(5- 甲氧基 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 181 、 182 ： (6 S,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -N-(5- 甲氧基 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -N-(5- 甲氧基 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(3-甲氧基-5-硝基吡啶-2-基)嘧啶

類似於方法 A35 步驟 1但使用2-氯-3-甲氧基-5-硝基-吡啶（1 g，5.3 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（520 mg，42%產率）。LC-MS: m/z 233 [M+H] ⁺。步驟2：5-甲氧基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺

類似於方法 A15 步驟 2但使用2-(3-甲氧基-5-硝基吡啶-2-基)嘧啶（150 mg，581 μmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（83 mg，71%產率）。LC-MS: m/z 203 [M+H] ⁺。步驟3：(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-N-(5-甲氧基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-N-(5-甲氧基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（55 mg，157 μmol）及5-甲氧基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（38 mg，188 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈灰白色固體狀之反式異構物（23 mg，26%產率），LC-MS: m/z 536 [M+H] ⁺；呈灰白色固體狀之順式-異構物（15 mg，17%產率），LC-MS: m/z 536 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 179及實例 180

23 mg之(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-N-(5-甲氧基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度70%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：5.344；RT2（分鐘）：10.928；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：1）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 179（6.1 mg，26%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 180（4.8 mg，21%產率）。實例 179： ¹HNMR (400 MHz, CDCL3) δ: 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.73 (br, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.60 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.37-3.47 (m, 1H), 2.59-2.69 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS: m/z 536 [M+H] ⁺。實例 180： ¹HNMR (400 MHz, CDCL3) δ: 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.65 (br, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.74 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.38-3.47 (m, 1H), 2.60-2.66 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS: m/z 536 [M+H] ⁺。步驟5：分離鏡像異構物以獲得實例 181及實例 182

15 mg之(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-N-(5-甲氧基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRAL ART Cellulose-SC，2*25 cm，5 μm；移動相A：Hex--HPLC，移動相B：IPA：DCM=1:1--HPLC；流動速率：20ML/MIN mL/min；梯度：等度80%移動相B；波長：254/220nm nm；RT1（分鐘）：7.973；RT2（分鐘）：11.305；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈淺粉色固體狀之實例 181（3.5 mg，24%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 182（2.6 mg，18%產率）。實例 181： ¹HNMR (400 MHz, CDCL3) δ: 9.47 (s, 1H), 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.68 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.81 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.52-4.60 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.35-3.45 (m, 1H), 2.84-2.94 (m, 1H), 2.12 (s, 3H). LC-MS: m/z 536 [M+H] ⁺。實例 182： ¹HNMR (400 MHz, CDCL3) δ: 9.86 (s, 1H), 8.95 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.68 (s, 1H), 8.42-8.46 (m, 2H), 7.80 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.03 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.58-4.65 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.35-3.45 (m, 1H), 2.85-2.96 (m, 1H), 2.11 (s, 3H). LC-MS: m/z 536 [M+H] ⁺。方法 A51 實例 183 、實例 184 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(5- 甲基 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(5- 甲基 -6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-(3-甲基-5-硝基吡啶-2-基)嘧啶

類似於方法 A30 步驟 12但使用2-(三丁基錫烷基)嘧啶（2.6 g，6.9 mmol）及2-氯-3-甲基-5-硝基吡啶（1 g，5.8 mmol）且在120℃下攪拌1小時，標題化合物呈白色固體狀獲得（600 mg，45%產率）。LC-MS: m/z 217 [M+H] ⁺。步驟2：5-甲基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺

類似於方法 A15 步驟 2但使用2-(3-甲基-5-硝基吡啶-2-基)嘧啶（500 mg，2.3 mmol）且不經進一步純化，粗標題化合物呈棕色固體狀獲得（435 mg）。LC-MS: m/z 187 [M+H] ⁺。步驟3：實例 183及實例 184

類似於方法 A1 步驟 8但使用(8 S)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A30-10-P2，50 mg，142 μmol）及5-甲基-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（32 mg，169.7 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈淺粉色固體狀之反式異構物實例 183（16.5 mg，41%產率）及呈淺粉色固體狀之順式-異構物實例 184（10.2 mg，24%產率）。實例 183： ¹HNMR (400 MHz, CDCL3) δ:9.00 (br, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.90 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.73 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.35-3.45 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.63-2.68 (m, 1H), 2.16 (s, 3H). LC-MS: m/z 520 [M+H] ⁺。實例 184： ¹HNMR (400 MHz, CDCL3) δ: 9.38 (s, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.68 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.54-4.58 (m, 1H), 3.34-3.42 (m, 1H), 2.84-2.92 (m, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.12 (s, 3H). LC-MS: m/z 520 [M+H] ⁺。方法 A52 實例 185 、 186 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(4-( 嘧啶 -2- 基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(4-( 嘧啶 -2- 基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 187 、 188 ： (6 S,8 R)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(4-( 嘧啶 -2- 基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -N-(4-( 嘧啶 -2- 基 )-3-( 三氟甲基 ) 苯基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：4-(嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)苯胺

在25℃下在氮氣氛圍下向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼 -2-基)-3-(三氟甲基)苯胺（220 mg，766 μmol）於1.4-二烷（10 mL）及水（2 mL）中之攪拌混合物中添加2-氯嘧啶（105 mg，919 μmol）、Pd(PPh ₃) ₄（88 mg，77 μmol）及磷酸三鉀（487 mg，2.3 mmol）。在80℃下在氮氣氛圍下攪拌所得混合物4小時。使混合物冷卻至25℃，用水（50 mL）淬滅，且用乙酸乙酯（3×50 mL）萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相管柱純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（150 mg，75%產率）。LC-MS (ES, m/z): 240[M+H] ⁺。步驟2：(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(4-(嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)苯基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(4-(嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)苯基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A23-2，50 mg，142 μmol）及4-(嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)苯胺（37 mg，156 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（25 mg，29%產率），LC-MS (ES, m/z): 573[M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（15 mg，17%產率），LC-MS (ES, m/z): 573[M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 185及實例 186

25 mg之(反式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(4-(嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)苯基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1-HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度50%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：3.573；RT2（分鐘）：6.164；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.1 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 185（8.5 mg，32%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 186（12.1 mg，46%產率）。實例 185： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.87 (s, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.71 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.98-8.01 (m, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.53-7.56 (m, 1H), 6.62 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.49 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.99-3.05 (m, 1H), 2.53-2.58 (m, 1H), 2.03 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 573 [M+H] ⁺。實例 186： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.88 (s, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.71 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.98-8.02 (m, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.53-7.56 (m, 1H), 6.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.99-3.06 (m, 1H), 2.53-2.59 (m, 1H), 2.03 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 573 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 187及實例 188

15 mg之(順式)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-N-(4-(嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)苯基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度30%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：7.104；RT2（分鐘）：9.999；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：1.4 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 187（4.4 mg，29%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 188（4.0 mg，25%產率）。實例 187： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.81 (s, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.72 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.96-7.99 (m, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.91 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 573 [M+H] ⁺。實例 188： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.81 (s, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.72 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.96-7.98 (m, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.91 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 573 [M+H] ⁺。方法 A53 實例 189 、 190 ： (6 S,8 S)-N-(3- 氯 -4-( 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 R)-N-(3- 氯 -4-( 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺 實例 191 、 192 ： (6 S,8 R)-N-(3- 氯 -4-( 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-N-(3- 氯 -4-( 嘧啶 -2- 基 ) 苯基 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：3-氯-4-(嘧啶-2-基)苯胺

類似於方法 A52 步驟 1但使用3-氯-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼 -2-基)苯胺（520 mg，2.1 mmol），標題化合物呈黃色固體狀獲得（290 mg，64%產率）。LC-MS (ES, m/z): 206[M+H] ⁺。步驟2：(反式)-N-(3-氯-4-(嘧啶-2-基)苯基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺及(順式)-N-(3-氯-4-(嘧啶-2-基)苯基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A23-2，50 mg，142 μmol）及3-氯-4-(嘧啶-2-基)苯胺（32 mg，156 μmol），獲得標題化合物之外消旋混合物：呈白色固體狀之反式異構物（35 mg，43%產率），LC-MS (ES, m/z): 539 [M+H] ⁺；呈白色固體狀之順式-異構物（20 mg，24%產率），LC-MS (ES, m/z): 539 [M+H] ⁺。步驟3：分離鏡像異構物以獲得實例 189及實例 190

30 mg之(反式)-N-(3-氯-4-(嘧啶-2-基)苯基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1-HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度60%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：3.846；RT2（分鐘）：6.992；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：3.0 mL；運行次數：2）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 189（10.5 mg，33%產率）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之實例 190（15.2 mg，48%產率）。實例 189： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.74 (s, 1H), 8.95 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.69 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.67-7.70 (m, 1H), 7.52 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.97-3.04 (m, 1H), 2.52-2.61 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 539 [M+H] ⁺。實例 190： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.74 (s, 1H), 8.95 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.69 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.67-7.70 (m, 1H), 7.52 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.97-3.05 (m, 1H), 2.51-2.61 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 539 [M+H] ⁺。步驟4：分離鏡像異構物以獲得實例 191及實例 192

20 mg之(順式)-N-(3-氯-4-(嘧啶-2-基)苯基)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲醯胺經提供以經歷手性HPLC純化（管柱：CHIRALPAK IG，2×25 cm，5 μm；移動相A：Hex(0.1% FA)--HPLC，移動相B：EtOH:DCM=1:1--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：等度40%移動相B；波長：254/220 nm；RT1（分鐘）：6.883；RT2（分鐘）：9.731；樣品溶劑：EtOH--HPLC；注入體積：2.0 mL；運行次數：2）。將第一溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 191（5.2 mg，26%產率）。將第二溶離異構物濃縮且凍乾，得到呈白色固體狀之實例 192（5.0 mg，24%產率）。實例 191： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.68 (s, 1H), 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.71 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.64-7.68 (m, 1H), 7.51 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.79-2.84 (m, 2H), 1.91 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 539 [M+H] ⁺。實例 192： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.68 (s, 1H), 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.71 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 59.2 Hz, 1H), 7.64-7.69 (m, 1H), 7.51 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.79-2.84 (m, 2H), 1.91 (s, 3H). LC-MS (ES, m/z): 539 [M+H] ⁺。方法 A54 實例 193 、 194 ： (6 S,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-N-(5-( 二氟甲基 )-6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； (6 R,8 S)-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-N-(5-( 二氟甲基 )-6-( 嘧啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2- 氟 -8- 甲基 -7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：N-(6-氯-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲亞胺

向5-溴-2-氯-3-(二氟甲基)吡啶（1 g，4.1 mmol）於1,4-二烷（10 mL）中之溶液中添加二苯基甲亞胺（822 mg，4.5 mmol）、碳酸銫（2.7 g，8.3 mmol）、Xantphos（477 mg，825 µmol）及Pd ₂(dba) ₃（755 mg，825 µmol）。在100℃下，在氮氣下，攪拌反應物2小時。將反應物冷卻至25℃且用水（10 mL）稀釋。所得混合物用乙酸乙酯（2×10 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由用PE:EA（9:1）溶離之矽膠管柱層析純化，得到呈黃色油狀之標題化合物（420 mg，28%產率）。LC-MS: m/z 343 [M+H] ⁺。步驟2：N-(5-(二氟甲基)-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲亞胺

類似於方法 A32 步驟 2但使用N-(6-氯-5-(二氟甲基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲亞胺（400 mg，1.2 mmol）及2-(三丁基錫烷基)嘧啶（2.2 g，5.8 mmol）且在120℃下攪拌16小時，標題化合物呈黃色油狀獲得（130 mg，28%產率）。LC-MS: m/z 387 [M+H] ⁺。步驟3：5-(二氟甲基)-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺

向N-(5-(二氟甲基)-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-基)-1,1-二苯基甲亞胺（120 mg，311 µmol）於MeOH（10 mL）中之溶液中添加羥胺鹽酸鹽（108 mg，1.6 mmol）及乙酸鈉（127 mg，1.6 mmol）。在25℃下攪拌反應物2小時。反應混合物在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相管柱純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物（25 mg，36%產率）。LC-MS: m/z 223 [M+H] ⁺。步驟4：實例 193及實例 194

類似於方法 A1 步驟 8但使用(8 S)-8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟-8-甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（ A30-10-P2，71 mg，202.5 μmol）及5-(二氟甲基)-6-(嘧啶-2-基)吡啶-3-胺（45 mg，202 μmol），獲得非鏡像異構標題化合物：呈白色固體狀之反式異構物實例 193（6.1 mg，5%產率），呈白色固體狀之順式-異構物實例 194（13.2 mg，11%產率）。實例 193： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ: 11.03 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.99 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.44-7.88 (m, 3H), 6.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.00-3.08 (m, 1H), 2.54-2.62 (m, 1H), 2.04 (s, 3H). LC-MS: m/z 556 [M+H] ⁺。實例 194： ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ: 10.95 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.99 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.75 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.44-7.87 (m, 3H), 6.56 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.79-2.93 (m, 2H), 1.92 (s, 3H). LC-MS: m/z 556 [M+H] ⁺。方法 A55 實例 195 、 196 ： ( 反式 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2,8- 二甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺； ( 順式 )-8-(1-( 二氟甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-2,8- 二甲基 -N-(6-( 嘧啶 -2- 基 )-5-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-7,8- 二氫 -6H- 環戊并 [e] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -6- 甲醯胺

各實例之相對及絕對立體化學未確定。步驟1：2-溴-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶

類似於方法 A6 步驟 6但使用5-((二甲基胺基)亞甲基)-2-甲基-2-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)環戊-1-酮（5.5 g，15.7 mmol）及3-溴-1H-吡唑-5-胺（2.6 g，15.7 mmol）且在110℃下攪拌16小時，標題化合物呈棕色油狀獲得（4.2 g，45%產率）。LC-MS: m/z 448[M+H] ⁺。步驟2：2-溴-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

類似於方法 A1 步驟 6但使用於氯苯（400 mL）中之2-溴-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶（4.2 g，9.4 mmol），標題化合物呈淺黃色油狀獲得（2.6 g，35%產率）。LC-MS: m/z 473[M+H] ⁺。步驟3：2,8-二甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈

向2-溴-8-甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（2.5 g，5.3 mmol）於二烷（80 mL）及水（20 mL）中之攪拌溶液中添加2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼環己烷（994 mg，7.9 mmol）、Pd(dppf)Cl ₂.CH ₂Cl ₂（431 mg，528 μmol）及碳酸鉀（2.2 g，15.8 mmol）。在100℃下，在氮氣氛圍下，攪拌反應混合物4小時。將混合物冷卻至25℃且在減壓下濃縮。殘餘物用水（100 mL）稀釋，且其用乙酸乙酯（3×100 mL）萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由逆相管柱純化，得到呈棕色油狀之標題化合物（1.1 g，37%產率）。LC-MS: m/z 409[M+H] ⁺。步驟4：2,8-二甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A48 步驟 3但使用2,8-二甲基-8-(1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈（1.1 g，2.6 mmol）且藉由逆相管柱層析純化產物，標題化合物呈黃色油狀獲得（250 mg，26%產率）。LC-MS: m/z 312[M+H] ⁺。步驟5：8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2,8-二甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯

類似於方法 A23 步驟 1但使用2,8-二甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（230 mg，739 μmol）且在60℃下攪拌2小時，標題化合物呈黃色油狀獲得（80 mg，24%產率）。LC-MS: m/z 362[M+H] ⁺。步驟6：8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2,8-二甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸

類似於方法 A22 步驟 2但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2,8-二甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸甲酯（80 mg，221 μmol），標題化合物呈黃色油狀獲得（40 mg，41%產率）。LC-MS: m/z 348[M+H] ⁺。步驟7：實例 195及實例 196

類似於方法 A1 步驟 8但使用8-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-基)-2,8-二甲基-7,8-二氫-6H-環戊并[e]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲酸（40 mg，115 μmol）及6-(嘧啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-胺（ A38-2，33 mg，138 μmol），標題化合物作為外消旋混合物獲得：呈灰白色固體狀之反式異構物實例 195（3.2 mg，21%產率）及呈灰白色固體狀之順式-異構物實例 196（1.6 mg，10.4%產率）。實例 195： ¹HNMR (400 MHz, CDCl ₃) δ: 9.20 (s, 1H), 8.95 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.84-8.92 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.42 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 60.4 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.70-4.79 (m, 1H), 3.36-3.46 (m, 1H), 2.78-2.86 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.26 (s, 3H). LCMS (ES, m/z): 570 [M+H] ⁺。實例 196： ¹HNMR (400 MHz, CDCl ₃) δ: 9.40 (s, 1H), 8.88-8.96 (m, 3H), 8.58 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.79 (d, J=2.8 Hz, 1H), 7.39-7.42 (m, 1H), 7.03 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 60.8 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.52-4.58 (m, 1H), 3.38-3.45 (m, 1H), 2.83-2.93 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.19 (s, 3H). LCMS (ES, m/z): 570 [M+H] ⁺。生物學分析 MALT1 蛋白酶分析

在活體外分析中使用四肽作為受質及自經桿狀病毒感染之昆蟲細胞純化之全長MALT1蛋白His-MALT1(1-824)評估MALT1蛋白酶活性。四肽受質為Ac-LRSR-AMC（SM Biochemicals），其K _m經量測為約25 μM。

最終分析緩衝液包括1 nM MALT1全長蛋白質、25 μM Ac-LRSR-AMC受質、50 mM Tris pH 7.5、600 mM檸檬酸鈉、1 mM DTT、1 mM EDTA及0.05% BSA，呈使用黑色微量滴定方孔盤（Optiplate 384-F，Perkin Elmer）之384孔盤形式。

將測試化合物溶解於10 mM之100% DMSO儲備液中，最終DMSO濃度為0.1%。將測試化合物與MALT1蛋白一起在室溫下預培育2小時。在預培育之後添加受質，且在室溫下培育8小時之後，使用Envision在激發355 nm及發射460 nm下量測螢光信號。分析信號的增加在此時段內為線性的且與酶含量的增加成比例。

藉由下式使用高對照（HC，來自含有MALT1蛋白、受質及DMSO之孔的螢光信號之中值）及低對照（LC，來自僅具有受質之孔的螢光信號之中值），將螢光單位轉換為剩餘活性百分比：

使用Graph Pad Prism（Graph Pad software公司，USA）藉由非線性回歸分析獲得IC ₅₀及希爾係數（Hill coefficient）。在以下表A及表B中提供本文中所描述之某些化合物的MALT1抑制IC ₅₀值。人類 IL10 分泌分析

IL10為經由NF-kB信號傳導活化來調節之細胞介素之一。舉例而言，在ABC-DLBCL細胞株中，活化的NF-kB信號傳導引起IL10分泌增加。抑制NF-kB信號傳導已展示引起IL10分泌減少。

OCI-LY10細胞以4.8×10 ⁵個細胞/160 µL/孔接種於96孔V形底細胞培養盤（corning，3894）中補充有20%胎牛血清之IMEM中，以120 nL之以4 mM開始的3倍連續化合物稀釋液處理。最終媒劑濃度在所有孔中為0.075% DMSO。在24小時培育之後，用PBST洗滌人類IL-10預塗盤（Meso Scale Discovery）3次，且將50 µL培養基抽吸至MSD盤中，且在4℃下培育隔夜。隨後丟棄上清液，且用PBST洗滌孔3次。根據Meso Scale方案將SULFO-TAG抗人類IL-10抗體（50×）稀釋50倍，隨後添加25 µL SULFO-TAG抗人類IL-10抗體（1×）。在室溫下培育2小時之後，丟棄上清液，且用PBST洗滌孔3次。添加2×讀取緩衝液且在MSD Sector S600上讀取信號。相對於設定為100%的DMSO之作用，展示特定化合物對IL10分泌之作用。使用4參數曲線擬合確定IC ₅₀值（nM）。

使用上文所描述之分析的某些化合物之生物活性展示於表A及表B中。MALT1 IC ₅₀及IL10分泌細胞分析IC ₅₀範圍如下：A表示IC ₅₀＜ 10 nM；B表示10 nM ≤ IC ₅₀＜ 100 nM；C表示100 nM ≤ IC ₅₀＜ 1000 nM；D表示IC ₅₀≥ 1000 nM。NA表示值未經該分析針對指定化合物確定。表 A.所選式（I）化合物之IC ₅₀值

實例編號	MALT1 IC ₅₀[nM]	IL-10 分泌 IC ₅₀[nM]
1	A	C
2	D	NA
3	C	NA
4	D	NA
5	A	B
6	C	NA
7	C	NA
8	A	B
9	D	NA
10	C	NA
11	C	NA
12	A	C
13	D	NA
14	C	NA
15	C	NA
16	C	NA
17	D	NA
18	D	NA
19	D	NA
20	A	B
21	D	NA
22	B	NA
23	C	NA
24	A	B
25	D	NA
26	B	NA
27	D	NA
28	A	B
29	D	NA
30	B	NA
31	D	NA
32	A	C
33	D	NA
34	C	NA
35	C	NA
36	A	NA
37	D	NA
38	B	NA
39	B	NA
40	A	B
41	D	NA
42	C	NA
43	C	NA
44	B	NA
45	D	NA
46	C	NA
47	D	NA
48	A	NA
49	D	NA
50	B	NA
51	C	NA
52	B	NA
53	D	NA
54	C	NA
55	C	NA
56	B	NA
57	D	NA
58	D	NA
59	D	NA
60	B	NA
61	D	NA
62	D	NA
63	D	NA
64	B	NA
65	D	NA
66	C	NA
67	D	NA
68	A	C
69	D	NA
70	C	NA
71	D	NA
72	A	NA
73	D	NA
74	B	NA
75	C	NA
76	A	NA
77	D	NA
78	C	NA
79	C	NA
80	A	NA
81	D	NA
82	B	NA
83	C	NA
84	A	NA
85	D	NA
86	B	NA
87	C	NA
88	A	B
89	D	NA
90	B	NA
91	C	NA
92	A	C
93	D	NA
94	B	NA
95	C	NA
96	B	NA
97	D	NA
98	A	NA
99	D	NA
100	B	NA
101	C	NA
102	B	NA
103	D	NA
104	C	NA
105	C	NA
106	A	B
107	D	NA
108	C	NA
109	C	NA
110	A	B
111	D	NA
112	C	NA
113	C	NA
114	B	NA
115	C	NA
116	A	C
117	C	NA
118	B	NA
119	D	NA
120	A	B
121	D	NA
122	C	NA
123	C	NA
124	A	B
125	D	NA
126	B	NA
127	B	NA
128	B	NA
129	D	NA
130	C	NA
131	D	NA
132	B	NA
133	C	NA
134	B	NA
135	C	NA
136	A	B
137	D	NA
138	C	NA
139	C	NA
140	A	B
141	D	NA
142	D	NA
143	D	NA
144	A	C
145	D	NA
146	C	NA
147	C	NA
148	B	C
149	D	NA
150	C	NA
151	C	NA
152	A	NA
153	D	NA
154	C	NA
155	D	NA
156	B	NA
157	D	NA
158	B	NA
159	D	NA
160	C	NA
161	D	NA
162	B	NA
163	D	NA
164	A	NA
165	D	NA
166	C	NA
167	C	NA
168	B	NA
169	D	NA
170	C	NA
171	A	NA
172	D	NA
173	B	NA
174	C	NA
175	B	NA
176	D	NA
177	A	NA
178	C	NA
179	D	NA
180	C	NA
181	D	NA
182	D	NA
183	B	NA
184	D	NA
185	A	NA
186	D	NA
187	B	NA
188	C	NA
189	B	NA
190	D	NA
191	D	NA
192	C	NA
193	B	NA
194	D	NA
195	B	NA
196	C	NA

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Claims

一種式（I）化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（I）其中：各為單鍵或雙鍵； Q為-CH ₂-、O或NH； X為N或C； Y為N或C； Z為N或CR ⁶；其中當X及Y中之一者為N時，X及Y中之另一者為C； n為1、2或3； R ^X為氫或鹵素； R ¹為氫、鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^AR ^B或視情況經1個至3個選自羥基及C1-C3烷氧基之取代基取代之C1-C3烷基； R ²為氫、鹵素、胺基或C1-C3烷基；各R ³獨立地為氘、鹵素、C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基或C1-C3鹵烷基； m為0、1、2或3； R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員至10員雜芳基； R ⁵為苯基或5員至9員雜芳基，其中各R ⁵基團視情況經1個至3個獨立地選自R ⁸之取代基取代； R ⁶為氫、鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、-NR ^CR ^D及C1-C3烷基；各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、C1-C3鹵烷基、氧環丁基、-NR ^CR ^D、視情況經一個環丙基取代之C1-C3烷基；及視情況經一個C1-C3烷基取代之C3-C7環烷基；各R ⁸獨立地選自鹵素；氰基；胺基；-N=(S=O)(C1-C3烷基) ₂；-S(=O) _p(C1-C3烷基)；1-氧化1-亞胺基-1-λ ⁶-硫環丁基、-(C=O)NR ^ER ^F；C1-C3烷氧基；視情況經羥基取代之C1-C3鹵烷基；C1-C3鹵烷氧基；視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、胺基、C1-C3鹵烷基、4員至6員雜環基或視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基取代之5員至6員雜芳基；視情況經羥基、-NR ^ER ^F或C1-C3烷氧基取代之C1-C4烷基；3員至8員雜環基；及C3-C6環烷氧基； p為1或2；及 R ^A、R ^B、R ^C、R ^D、R ^E及R ^F獨立地為氫、C1-C3烷基、C3-C6環烷基，或R ^A及R ^B、或R ^C及R ^D、或R ^E及R ^F與其所連接之氮原子一起形成視情況經1個至2個鹵素取代之4員至6員雜環基。
如請求項1之化合物，其中X為N且Y為C。
如請求項1或2之化合物，其中Z為N。
如請求項1至3中任一項之化合物，其中R ^X為氫。
如請求項1至4中任一項之化合物，其中Q為-CH ₂-。
如請求項1至5中任一項之化合物，其中R ¹為鹵素。
如請求項1至6中任一項之化合物，其中R ²為氫。
如請求項1至7中任一項之化合物，其中n為1。
如請求項1至8中任一項之化合物，其中m為1。
如請求項1至9中任一項之化合物，其中各R ³獨立地為鹵素、C3-C6環烷基、C1-C3烷基、C1-C3鹵烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3鹵烷氧基。
如請求項1至10中任一項之化合物，其中m為1且R ³為甲基或三氟甲基。
如請求項1至11中任一項之化合物，其為根據式（Ic）之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（Ic）。
如請求項1至12中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員或6員雜芳基。
如請求項1至13中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之6員雜芳基。
如請求項1至13中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之5員雜芳基。
如請求項1至13及15中任一項之化合物，其中R ⁴為視情況經一個至三個各自獨立地選自R ⁷之取代基取代之4H-吡唑基、3H-吡唑基、三唑基或噻唑基。
如請求項1至16中任一項之化合物，其中各R ⁷獨立地選自由以下組成之群：C1-C3鹵烷基、視情況經一個環丙基取代之C1-C3烷基及視情況經一個C1-C3烷基取代之C3-C7環烷基。
如請求項1至13及15至17中任一項之化合物，其中R ⁴為：。
如請求項1至13及15至18中任一項之化合物，其中R ⁴為：。
如請求項1至13及15至18中任一項之化合物，其中R ⁴為：。
如請求項1至13及15至18中任一項之化合物，其中R ⁴為：。
如請求項1至13、15至18及20中任一項之化合物，其中R ⁴為：。
如請求項1至22中任一項之化合物，其中R ⁵為視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之苯基。
如請求項1至22中任一項之化合物，其中R ⁵為視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之5員至9員雜芳基。
如請求項1至22及24中任一項之化合物，其中R ⁵為經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之5員至6員雜芳基。
如請求項1至22、24及25中任一項之化合物，其中R ⁵為視情況經1個至3個獨立選擇之R ⁸取代之3-吡啶基或4-吡啶基。
如請求項1至26中任一項之化合物，其中R ⁸中之至少一者為鹵素。
如請求項1至27中任一項之化合物，其中R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基、胺基或C1-C3鹵烷基取代之5員至6員雜芳基。
如請求項1至28中任一項之化合物，其中R ⁸中之至少一者為視情況經鹵素、氰基、羥基、C1-C3烷氧基、C1-C3鹵烷氧基、視情況經羥基或-NR ^ER ^F取代之C1-C3烷基、胺基或C1-C3鹵烷基取代之5員雜芳基。
如請求項1至26中任一項之化合物，其中R ⁵為：。
如請求項1至26及30中任一項之化合物，其中R ⁵為：。
如請求項1至26及30中任一項之化合物，其中R ⁵為：。
如請求項1至26及30中任一項之化合物，其中R ⁵為：。
如請求項1至26及30中任一項之化合物，其中R ⁵為：。
如請求項1至34中任一項之化合物，其為根據式（Id）之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（Id）。
如請求項1至34中任一項之化合物，其為根據式（Ie）之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（Ie）。
如請求項1至34中任一項之化合物，其為根據式（If）之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（If）。
如請求項1至34中任一項之化合物，其為根據式（Ig）之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：（Ig）。
如請求項1之化合物，其選自表1，或其醫藥學上可接受之鹽。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及一種或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
一種用於治療有需要之個體之癌症的方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項1至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項40之醫藥組合物。
如請求項41之方法，其中該癌症為MALT1相關癌症。
如請求項41或42之方法，其中該癌症為淋巴瘤。
如請求項43之方法，其中該淋巴瘤為非霍奇金氏淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma）、DLBCL、難治性DLBCL、(ABC)亞型之DLBCL、套細胞淋巴瘤（MCL）或邊緣區淋巴瘤（MZL）。
如請求項41或42之方法，其中該癌症為白血病。
如請求項45之方法，其中該白血病為慢性淋巴球性白血病（CLL）。
如請求項41或42之方法，其中該癌症為實體腫瘤。
一種治療有需要之個體之自體免疫病症的方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項1至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項40之醫藥組合物。
如請求項48之方法，其中該自體免疫病症為慢性移植體對抗宿主疾病。
如請求項41至49中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與額外療法或治療劑。