CN115927169B

CN115927169B - 用于扩增cd34+造血干细胞的培养液和体外扩增cd34+造血干细胞的方法

Info

Publication number: CN115927169B
Application number: CN202211240539.5A
Authority: CN
Inventors: 辛虎虎; 文学军; 王铮; 熊伟; 赵东来; 段威; 刘思存
Original assignee: Regenerative Medicine Technology Hangzhou Co ltd
Current assignee: Regenerative Medicine Technology Hangzhou Co ltd
Priority date: 2022-10-11
Filing date: 2022-10-11
Publication date: 2023-08-11
Anticipated expiration: 2042-10-11
Also published as: CN115927169A

Abstract

一种用于扩增CD34⁺造血干细胞的组合物、培养液和体外扩增CD34⁺造血干细胞的方法。组合物包括植物血凝素、SCF以及Flt‑3L；培养液包括基础培养液和前述的组合物；方法包括：将包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体与前述的组合物在适于细胞扩增的条件下进行接触处理，或将包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体在前述的培养液在适于细胞扩增的条件下进行培养处理。该组合物和培养液可于体外有效扩增CD34⁺造血干细胞，具有扩增时间短、成本低等优点；该方法将PBMC中CD34⁺造血干细胞进行扩增后，无需进行分选，可直接进行重编程得到iPS细胞。

Description

用于扩增CD34+造血干细胞的培养液和体外扩增CD34+造血干细胞的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，本发明涉及一种用于扩增CD34⁺造血干细胞的培养液和体外扩增CD34⁺造血干细胞的方法，更具体地，本发明涉及一种植物血凝素在制备药物中的用途、植物血凝素在制备组合物中的用途、组合物、培养液、试剂盒及其用途、体外扩增CD34⁺造血干细胞的方法和制备诱导性多能干细胞的方法。

背景技术

造血干细胞(hematopoietic stem cell，HSC)为血液系统中的成体干细胞，具有不断自我更新的能力，并可多向分化发育成血液系统中各种细胞类型，能长期重建各系造血和免疫功能。CD34⁺标志的造血干细胞(简称CD34⁺造血干细胞或CD34⁺细胞)约占骨髓单个核细胞的1.5％，而外周血中含量更少，约为单个核细胞的0.1％。一般造血干细胞来源于三个渠道：骨髓造血干细胞、外周造血干细胞、脐带血造血干细胞。外周血是最易获得动物体(如人体)细胞的途径。

诱导性多能干细胞(简称iPS细胞，)具有分化成各种组织器官的多种类型细胞的潜力，其能够应用于临床上器官组织移植和细胞治疗，也可以用来为研究疾病提供细胞模型，因此，iPS细胞在新药筛选，体外疾病模型的建立，细胞替代性治疗以及再生医学方面具有广泛的应用前景。但是，将动物体细胞中的CD34⁺细胞重编程为iPS细胞，需要较大的CD34⁺细胞数量和良好的CD34⁺细胞状态。

因此，亟需开发一种能够有效扩增CD34⁺细胞的培养液和方法。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供了一种用于扩增CD34⁺造血干细胞的培养液，该培养液可有效扩增CD34⁺造血干细胞。

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

目前公开了一种制备iPS细胞的方法(如专利CN114645023A)，该方法直接提取外周血单个核细胞(PBMC)进行重编程获得iPS细胞，无需对PBMC中的CD34⁺细胞进行扩增培养，但该方法的诱导效率较低。因此，目前常用的有效获得iPS细胞的方法为体外扩增人体细胞中的CD34⁺细胞，然后对CD34⁺细胞进行重编程，最终获得iPS细胞；例如常采用StemCell公司开发的一款培养液，采用该培养液对人体细胞中的CD34⁺细胞进行扩增，然后对获得CD34⁺细胞进行分选，并对分选后的CD34⁺细胞进行重编程，从而获得iPS细胞，但是该培养液成本较高，且CD34⁺细胞的扩增率较低、需要进一步对CD34⁺细胞进行分选，具有iPS细胞制备时间长、制备成本高等缺点。总之，目前现有的制备iPS细胞的方法普遍面临着效率低、制备时间长和制备成本高等缺点；并且，将动物体细胞中的CD34⁺细胞重编程为iPS细胞，需要较大的CD34⁺细胞数量和良好的CD34⁺细胞状态。

因此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种植物血凝素在制备药物中的用途，所述药物用于扩增CD34⁺造血干细胞。本发明的药物可于体内或体外有效扩增CD34⁺造血干细胞。

根据本发明的实施例，所述植物血凝素(简称PHA)为植物血凝素P(简称PHA-P)。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种植物血凝素在制备组合物中的用途，所述组合物用于扩增CD34⁺造血干细胞。本发明的组合物可于体内或体外有效扩增CD34⁺造血干细胞，尤其是于体外对CD34⁺造血干细胞进行扩增。

根据本发明的实施例，所述用途还可以进一步包括如下附加技术特征的至少之一：

根据本发明的实施例，所述植物血凝素为植物血凝素P。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述组合物进一步包括UM729、TPO、EPO、SCF、Flt-3L、IL-6、IL-3中的至少之一。

根据本发明的实施例，所述组合物包括植物血凝素、SCF以及Flt-3L，所述SCF、Flt-3L、植物血凝素的质量比为(10～300)ng：(100～300)ng：(1～20)μg。发明人经过试验发现，添加上述细胞因子或化学分子，可进一步提高CD34⁺细胞比例；并且，采用上述组合物能够维持CD34⁺细胞的干性，使CD34⁺细胞保持良好的状态，提高后续制备iPS细胞的重编程效率。

根据本发明的实施例，所述SCF、Flt-3L、植物血凝素的质量比为(100～240)ng：(100～240)ng：(2～10)μg，更优选为240ng：240ng：8μg。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-3以及TPO，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-3以及TPO的质量比为(2～10)μg：(50～150)ng：(50～150)ng：(1～20)ng：(10～30)ng。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-3以及TPO的质量比为(2～10)μg：100ng：100ng：10ng：20ng。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、IL-3，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6以及IL-3的质量比为(2～10)μg：(50～150)ng：(50～150)ng：(50～150)ng：(1～20)ng。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6以及IL-3的质量比为(2～10)μg：100ng：100ng：100ng：10ng。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括植物血凝素、SCF、Flt-3L和UM729，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L和UM729的质量摩尔比为(2～10)μg：(10～300)ng：(100～300)ng：(0.1～1)nmol。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729的质量摩尔比为(2～10)μg：(200～300)ng：(200～300)ng：(20～60)ng：(60～100)ng：(0.1～1)nmol。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729的质量摩尔比为(2～10)μg：240ng：240ng：40ng：80ng：0.5nmol，优选地为8μg：240ng：240ng：40ng：80ng：0.5nmol。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述组合物包括植物血凝素、SCF、Flt-3L、EPO以及UM729，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、EPO以及UM729的质量摩尔比为(2～10)μg：(150～250)ng：(50～150)ng：(50～150)ng：(0.1～1)nmol。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、EPO以及UM729的质量摩尔比为(2～10)μg：200ng：100ng：100ng：0.5nmol。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种组合物。根据本发明的实施例，所述组合物包括：植物血凝素、SCF以及Flt-3L。本发明的组合物可于体内或体外有效扩增CD34⁺造血干细胞，尤其是于体外对CD34⁺造血干细胞进行扩增。

示例性地，采用上述组合物扩增PBMC中的CD34⁺造血干细胞，可将CD34⁺造血干细胞含量从0.1％提高到9％以上，扩增后无需对细胞进行分选，可直接将PBMC中的CD34⁺细胞进行重编程，以便获得iPS细胞。

根据本发明的实施例，所述组合物还可以进一步包括如下附加技术特征的至少之一：

根据本发明的实施例，所述组合物进一步包括UM729、TPO、EPO、SCF、IL-6、IL-3中的至少之一。由此，可提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种培养液。根据本发明的实施例，所述培养液包括：基础培养液和前述的组合物。本发明的培养液可于体外有效扩增CD34⁺造血干细胞，尤其是采用上述培养液扩增PBMC中的CD34⁺造血干细胞，可将CD34⁺造血干细胞含量从0.1％提高到9％以上，扩增后无需对细胞进行分选，可直接对CD34⁺细胞进行重编程，从而获得iPS细胞。

根据本发明的实施例，所述植物血凝素P在所述培养液中的浓度为1～20μg/mL，优选为2～10μg/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述UM729在所述培养液中的浓度为100～1000nM，优选为400～600nM。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述TPO在所述培养液中的浓度为50～100ng/mL，优选为70～90ng/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述EPO在所述培养液中的浓度为50～150ng/mL，优选为80～120ng/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述SCF在所述培养液中的浓度为100～300ng/mL，优选为200～250ng/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述Flt-3L在所述培养液中的浓度为100～300ng/mL，优选为100～250ng/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述IL-6在所述培养液中的浓度为20～100ng/mL，优选为30～50ng/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述IL-3在所述培养液中的浓度为1～20ng/mL，优选为5～15ng/mL。由此，可进一步提高CD34⁺造血干细胞的扩增效果。

根据本发明的实施例，所述基础培养液为可用于培养CD34⁺造血干细胞的培养液即可，具体类型不受限制。

根据本发明的实施例，所述基础培养液包括选自SFEM培养液或者CD34⁺造血干细胞培养液。

示例性地，基础培养液包括但不限于StemCell公司的StemSpan SFEM或者LifeTechnologies的Stempro CD34⁺造血干细胞培养液。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括：前述的组合物或前述的培养液。本发明的试剂盒可于体外有效扩增CD34⁺造血干细胞。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种前述的组合物、前述的培养液或前述的试剂盒在扩增CD34⁺造血干细胞中的用途。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种体外扩增CD34⁺造血干细胞的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体与前述的组合物在适于细胞扩增的条件下进行接触处理；或将包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体在前述的培养液在适于细胞扩增的条件下进行培养处理。本发明的方法可于体外有效扩增CD34⁺造血干细胞，具有扩增时间短、成本低等优点，尤其是无需进行分选，可直接将扩增后的CD34⁺细胞进行重编程，以便获得iPS细胞，该方法缩短了扩增CD34⁺造血干细胞的时间(其他传统培养和扩增时间要10～15天，本发明的方法只需5～7天)，从而缩短了iPS细胞的整体制备时间，为以后方便临床应用和治疗奠定基础。

根据本发明的实施例，所述包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体来源于骨髓、肝脏、脾脏、外周血或脐带血。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种制备诱导性多能干细胞的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体与前述的组合物在适于细胞扩增的条件下进行接触处理，或将包含CD34⁺造血干细胞的细胞群体在前述的培养液在适于细胞扩增的条件下进行培养处理，得到细胞扩增液；将所述细胞扩增液进行诱导处理，以便获得诱导性多能干细胞。本发明的方法可于体外有效扩增CD34⁺造血干细胞，具有扩增时间短、成本低等优点，尤其是无需进行分选，可直接将扩增后的CD34⁺细胞进行重编程，以便获得iPS细胞，该方法缩短了扩增CD34⁺造血干细胞的时间，从而缩短了iPS细胞的整体制备时间，为以后方便临床应用和治疗奠定基础。该方法具有制备时间短、成本低等优点。

根据本发明的实施例，所述诱导处理采用本领域常规的方法进行。例如采用电转重编程因子质粒进行诱导处理。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1为本发明实施例1中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图2为本发明实施例2中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图3为本发明实施例3中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图4为本发明实施例4中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图5为本发明实施例1中PBMC诱导重编程后的电转明场和荧光图；

图6为本发明实施例2中PBMC诱导重编程后的电转明场和荧光图；

图7为本发明实施例4中PBMC诱导重编程后的电转明场和荧光图；

图8为本发明实施例5中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图9为本发明实施例6中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图10为本发明实施例7中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图；

图11为本发明实施例8中PBMC的CD34⁺扩增后的细胞图片和细胞流式表型图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

在本文中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

在本文中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1～4：扩增PBMC中CD34⁺细胞的比例

1、取PBMC完全培养液，将细胞因子和/或化学分子添加至PBMC完全培养液中，不同实施例中具体细胞因子细胞因子和/或化学分子的种类和添加量如表1所示。PBMC完全培养液为StemCell公司的StemSpan SFEM。

2、提取外周血PBMC，具体步骤如下：

2.1将30mL的外周血用含2％胎牛血清(FBS)的PBS按1:1比例稀释，此时得到60mL的稀释血液。在3支50mL离心管中分别加入20mL分离液，在分离液上方缓慢加入20mL稀释后的血液，使液面分层清晰；然后在800×g条件下离心1h(break off)。缓慢取出离心管，此时液面自上而下分四层，第二层白膜层为PBMC层，用枪头或吸管轻轻将白膜层液体吸到另一个新的15mL离心管中，加入5倍以上体积洗涤液(含2％FBS的PBS)，在250×g条件下离心10min。弃去上清，加入5mL洗涤液，在250×g条件下离心10min。弃去上清，加入5mL洗涤液，在120×g条件下离心15min(break off)。弃去上清，加入步骤S1制备的PBMC完全培养液重悬后，计数培养，重悬后的PBMC密度为8×10⁶个/mL。

2.2将步骤2.1提取后的PBMC按2mL/孔接种于6孔板中，在二氧化碳培养箱中，于37℃、5％CO₂条件下培养5天，收集PBMC。

2.3检测步骤2.2获得的PBMC中CD34⁺细胞的比例：将步骤2.2获得的PBMC用CD34抗体流式检测：将50万的PBMC细胞分装入试管或小孔中。通过离心使细胞沉淀下来，移除上清液。在100μl稀释的CD34一抗(抗CD34抗体，赛默飞MA1-10203，具体稀释浓度参见说明书)中重悬细胞中。在冰上避光孵育30分钟。用抗体稀释缓冲液(含有0.5％牛血清蛋白(BSA)的PBS缓冲液)进行离心洗涤。弃去上清液，重复清洗一次。在100μl稀释的荧光物质偶联的二抗(赛默飞12-4015-82，具体稀释浓度参见说明书)中重悬细胞。在冰上避光孵育30分钟。用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液，重复清洗一次。在200μl抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析，结果参见图1～4，实施例1中PBMC内CD34⁺细胞含量为1.25％、实施例2中PBMC内CD34⁺细胞含量为2.39％、实施例3中PBMC内CD34⁺细胞含量为5.35％、实施例4中PBMC内CD34⁺细胞含量为6.19％。

2.4取100万步骤2.3获得的PBMC细胞做iPS细胞诱导重编程(具体参见Liu J,Brzeszczynska J,Samuel K,Black J,Palakkan A,Anderson RA,Gallagher R,RossJA.Efficient episomal reprogramming of blood mononuclear cells anddifferentiation to hepatocytes with functional drug metabolism.Exp CellRes.2015Nov 1；338(2):203-13.doi:10.1016/j.yexcr.2015.08.004.Epub 2015Aug6.PMID:26256888.)，根据电转后荧光效率来判断经因子法培养后的电转效率，其中，实施例1中PBMC诱导重编程电转明场和荧光图参见图5、实施例2中PBMC诱导重编程电转明场和荧光图参见图6、实施例4中PBMC诱导重编程电转明场和荧光图参见图7。

表1：实施例1～4的PBMC完全培养液中细胞因子和/或化学分子的种类和添加量

由图1～4可知，相较于实施例1，实施例2～4中PBMC内CD34⁺细胞含量明显增加；进一步地，相较于实施例2～3，实施例4中PBMC内CD34⁺细胞含量明显增加。因此，发明人选择实施例4中的细胞因子和化学分子的组合进行后续实施例5～8的试验。

实施例5～8：扩增PBMC中CD34⁺细胞的比例

实施例5～8与实施例1的区别仅在于，PBMC完全培养液中细胞因子和/或化学分子的种类和添加量不同，具体参见表2所示。其中，实施例5～8中检测PBMC中步骤2.2获得的PBMC中CD34⁺细胞的比例结果参见图8～11和表3。

表2：实施例5～8的PBMC完全培养液中细胞因子和/或化学分子的种类和添加量

表3：实施例5～8中PBMC内CD34⁺细胞增长数量和CD34⁺细胞所占比例

由上可知，当实施例4中PBMC完全培养液中未添加PHA-P时，其PBMC内CD34⁺细胞含量为6.19％；而当实施例5～8中PBMC完全培养液中添加PHA-P时，其PBMC内CD34⁺细胞含量均显著提高，最高可达18.25％，远高于实施例4中CD34⁺细胞含量。因此，可进一步说明PHA-P可提高CD34⁺细胞扩增。

实施例9～11：扩增PBMC中CD34⁺细胞的比例

实施例9～11与实施例1的区别仅在于，PBMC完全培养液中细胞因子和/或化学分子的种类和添加量不同，具体参见表4所示。其中，实施例9～11中检测PBMC中步骤2.2获得的PBMC中CD34⁺细胞的比例结果均优于实施例1～4。

表4：实施例9～11的PBMC完全培养液中细胞因子和/或化学分子的种类和添加量

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物由植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729组成，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729的质量摩尔比为（2~10）μg：（200~300）ng：（200~300）ng：（20~60）ng：（60~100）ng：（0.1~1）nmol；

所述植物血凝素为植物血凝素P。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729的质量摩尔比为（2~10）μg：240ng：240ng：40ng：80ng：0.5nmol。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述植物血凝素、SCF、Flt-3L、IL-6、TPO以及UM729的质量摩尔比为8μg：240ng：240ng：40ng：80ng：0.5nmol。

4.一种培养液，其特征在于，包括：

基础培养液；和

权利要求1~3任一项所述的组合物。

5.根据权利要求4所述的培养液，其特征在于，所述植物血凝素P在所述培养液中的浓度为1~20μg/mL。

6.根据权利要求5所述的培养液，其特征在于，所述植物血凝素P在所述培养液中的浓度为2~10 μg/mL。

7.根据权利要求4所述的培养液，其特征在于，所述基础培养液包括SFEM培养液。

8.一种试剂盒，其特征在于，包括：

权利要求1~3任一项所述的组合物或权利要求4~7任一项所述的培养液。

9.权利要求1~3任一项所述的组合物、权利要求4~7任一项所述的培养液或权利要求8所述的试剂盒在体外扩增CD34^＋造血干细胞中的用途。

10.一种体外扩增CD34^＋造血干细胞的方法，其特征在于，包括：

将包含CD34^＋造血干细胞的细胞群体与权利要求1~3任一项所述的组合物在适于细胞扩增的条件下进行接触处理；或

将包含CD34^＋造血干细胞的细胞群体在权利要求4~7任一项所述的培养液在适于细胞扩增的条件下进行培养处理。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述包含CD34^＋造血干细胞的细胞群体来源于骨髓、肝脏、脾脏、外周血或脐带血。

12.一种制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于，包括：

将包含CD34^＋造血干细胞的细胞群体与权利要求1~3任一项所述的组合物在适于细胞扩增的条件下进行接触处理，或将包含CD34^＋造血干细胞的细胞群体在权利要求4~7任一项所述的培养液在适于细胞扩增的条件下进行培养处理，得到细胞扩增液；

将所述细胞扩增液进行诱导处理，以便获得诱导性多能干细胞。