CN113801876A

CN113801876A - 核酸保存溶液及其制造和使用方法

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Publication number: CN113801876A
Application number: CN202110968028.4A
Authority: CN
Inventors: F.C.A.盖塔
Original assignee: Spectrum Solutions LLC
Current assignee: Spectrum Solutions LLC
Priority date: 2017-01-16
Filing date: 2018-01-16
Publication date: 2021-12-17
Also published as: US20180201977A1; LT3568475T; EP3568475A4; US10174362B2; EP3568475B1; WO2018132827A1; DK3568475T3; CN110072999A; CA3042088A1; US20230304071A1; HUE062204T2; FI3568475T3; EP4177342C0; EP4177342A1; US10774368B2; US11655495B2; EP4177342B1; PT3568475T; PL3568475T3; JP2020058396A

Abstract

公开的是核酸保护组合物及其制造和使用方法。组合物包括载体、离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸和粘液溶解剂。作为水溶液的组合物可包括水作为载体。优选的实施方案包括水、硫氰酸胍、Tris、EDTA、SLS、SDA 3C、HCl和N‑乙酰基‑L‑半胱氨酸。一些实施方案包括着色染料作为视觉指示剂。制造方法包括将组分混合成混合物，例如水溶液。使用方法包括提供包含核酸的生物样品并使生物样品与组合物接触。试剂盒包括置于生物样品收集装置的一部分中的组合物。

Description

核酸保存溶液及其制造和使用方法

本申请是基于申请日为2018年1月16日，优先权日为2017年1月16日，申请号为201880005081.0，发明名称为：“核酸保存溶液及其制造和使用方法” 的专利申请的分案申请。

背景

1.技术领域

本公开涉及保存核酸。具体地，本公开涉及用于在生物样品中保存人核酸用于进一步分析的组合物和方法。

2.相关技术

可以从包括细胞和/或无细胞核酸的生物样品中提取核酸。提取的核酸可用于多种分析目的，包括谱系分析。从唾液中提取核酸可能特别有用，因为唾液样品收集是相对非侵入性的。

含核酸的生物样品通常需要适当处理以进行特定类型的核酸分析。例如，诸如核酸测序(例如，下一代测序(NGS))的分析技术可能需要依赖于要使用的特定平台的特定处理或预处理步骤。在一些情况下，可能需要处理含核酸的生物样品以稳定样品或其核酸。通常将稳定溶液添加到含核酸的生物样品中以确保一部分核酸的存活，直到可以进行分析。

现有的稳定溶液对于某些类型的分析技术或用于执行该分析技术的设备可能不是最佳的。例如，配制用于在某个下一代测序仪中进行最佳或合适分析的稳定溶液可能不是最佳的或不适合于在其他下一代测序仪中进行分析。在一些情况下，不适当的制剂可能产生或导致分析伪影、高背景信号(或噪音)、微生物核酸的污染和/或保留和/或降低人核酸的总潜在产量。

现有的稳定溶液也可能在控制微生物的寿命方面有缺陷。生物样品，例如唾液，通常包括和/或被一种或多种微生物(例如，细菌、真菌等)污染。这些微生物含有可以与宿主或生物样品的来源的核酸一起干扰或被检测的核酸。保存溶液可能无意中稳定微生物核酸或甚至允许微生物的生长。

因此，与现有产品相比，仍然需要适用于各种分析技术和装置的通用核酸稳定溶液和/或提供更好的核酸总产量和样品质量的溶液。

发明内容

本公开的实施方案解决了在本领域中一个或多个上述或其它问题，其中一种或多种实施方案包含核酸保存、稳定、和/或制备组合物，包含其的试剂盒，和其制造和使用方法。例如，本公开的一些实施方案包括用于保存、稳定和/或制备生物样品中的核酸的组合物。该组合物可适用于各种分析技术和装置。该组合物可以产生大量的核酸用于后续分析。例如，组合物可以产生大量的人核酸(例如DNA)，优选地和/或任选地具有少量的微生物(例如细菌)核酸(例如 DNA)，用于后续分析。该组合物可包含溶液或水基(例如水性)液体，任选地 (浅)蓝色，适用于稳定人核酸(DNA)和防止细菌污染和长期储存。

本公开的一个实施方案包括核酸保存组合物，其包含水性载体、离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸；和粘液溶解剂。实施方案还可以包括视觉指示剂。在一些实施方案中，水性载体可以是或包括水，优选为过滤水、纯化水、蒸馏水、和/或去离子水。在一些实施方案中，离液剂可以是或包括胍和/或硫氰酸盐，优选硫氰酸胍。在一些实施方案中，缓冲剂可以是或包括三 (羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，优选为Tris-HCl，更优选

碱。在一些实施方案中，螯合剂可以是或包括乙二胺四乙酸(EDTA)，优选为EDTA二钠盐，更优选为EDTA二钠(盐)二水合物。在一些实施方案中，表面活性剂可以是或包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)。在一些实施方案中，醇可以是或者包括特殊变性醇 (SDA)或乙醇与异丙醇的混合物，优选为约95％乙醇v/v和约5％异丙醇v/v的混合物，或SDA 3C。在一些实施方案中，酸可以是或包括盐酸。在一些实施方案中，粘液溶解剂可以是或包括N-乙酰基-L-半胱氨酸。在一些实施方案中，视觉指示剂可以是或包含着色剂，例如染料(例如，FD&C蓝1号)。

本公开的一个实施方案包括人核酸保存组合物，其包含约43.92％离液剂 (例如硫氰酸胍)，w/w，约2.65％缓冲剂(例如Tris)，w/w，约0.81％螯合剂(例如EDTA二钠二水合物)，w/w，约0.279％的表面活性(例如SLS)，w/w，约 17.73％醇(例如SDA 3C)，w/w，约0.093％粘液溶解剂(例如，N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w，约0.4％酸(例如盐酸)，w/w或足量至约pH8.0的酸；和/或约 34.12％载体(例如水性载体，包含过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水)或足量至100％的载体。一个实施方案还可以包括约0.00037％，w/w视觉指示剂(例如，FD&C蓝1号)或其等价物(例如0.185％w/w的、0.2％w/w的视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。

一个或多个实施方案可包括43.92％离液剂(例如胍硫氰酸盐)，w/w，±10％，2.65％缓冲剂(例如Tris)，w/w，±10％，0.81％螯合剂(例如EDTA或EDTA二钠 (盐)二水合物)，w/w，±10％，0.279％表面活性剂(例如SLS)，w/w，±10％， 17.73％醇(例如SDA 3C或95％乙醇，v/v，±10％和5％异丙醇，v/v，±10％的混合物)，w/w，±10％，0.093％粘液溶解剂(例如N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w， ±10％，和/或足量至pH8.0酸(例如盐酸)±10％，与足量至100％的载体(例如，水性载体，优选过滤水、纯化水、蒸馏谁和/或去离子水)。一个实施方案还可以包括0.00037％，w/w，±10％视觉指示剂(例如，FD&C蓝1号)或其等价物(例如，0.185％w/w±10％的、0.2％w/w±10％的视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。在一些实施方案中，各组分的量，±10％，进一步是(限于所列举的量)±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选±5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。

一个或多个实施方案可包括20-50％离液剂，w/w，0.1-5％缓冲剂，w/w， 0.05-2.5％螯合剂，w/w，0.01-5％表面活性剂，w/w，5-25％醇，w/w，0.005- 0.25％粘液溶解剂，w/w，0.005-5％酸或足量至pH 6.5-9.5的酸，和/或10-60％的载体或足量至100％的载体。一个实施方案可包括0.00005-0.5％，w/w，视觉指示剂(或0.01-2.5％，w/w，0.05-5％，w/w，视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。

(例如，除了或除非醇、离液剂、表面活性剂/洗涤剂和/或粘液溶解剂之外) 一个或多个实施方案可以是(基本上)不含(额外的或任何的)抗微生物剂(例如，杀菌和/或抑菌剂)。(例如，除了或除非离液剂之外)一个或多个实施方案可以 (基本上)不含(另外的或任何的)核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂。一个或多个实施方案可以是(基本上)不含(任何)蛋白酶。

一些实施方案包括稳定核酸的方法。该方法可包括提供含有核酸的生物样品，并将本公开的组合物与生物样品组合。该方法还可以包括本领域已知的其他处理步骤。本公开的一个实施方案包括稳定核酸(例如，人核酸，如人DNA) 的方法。一个实施方案包括使含有核酸的生物样品与本发明的组合物接触。在一个实施方案中，生物样品包含人唾液。

一些实施方案包括生物样品保存用试剂盒。试剂盒可包含样品收集装置和核酸保存组合物。样品收集装置可包括溶液隔室。核酸保存组合物可以置于溶液隔室中。本公开的一个实施方案包括试剂盒，其包括设置在样品收集装置的一部分中的本发明的组合物。

一些实施方案包括制备本公开的组合物的方法。该方法可以包括组合本公开的组分。该方法还可以包括本领域已知的其他制造步骤。本公开的一个实施方案包括一种制造核酸稳定化组合物的方法。一个实施方案包括获得载体并将所述载体加入本发明的组合物的组分或成分中。

本公开的示例性实施方案的附加特征和优点将在随后的描述中阐述，并且部分地将从描述中显而易见，或者可以通过这些示例性实施方案的实践来学习。借助于所附权利要求中特别指出的仪器和组合，可以实现和获得这些实施方案的特征和优点。根据以下描述和所附权利要求，这些和其他特征将变得更加明显，或者可以通过实践下文阐述的这种示例性实施方案来学习。

本发明包括以下内容：

实施方案1.一种人核酸保存组合物，包括：

43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；

2.65％三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，w/w，±10％；

0.81％乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；

0.279％月桂酰基肌氨酸钠(SLS)，w/w，±10％；

17.73％醇，w/w，±10％，所述醇包含约95％乙醇，v/v，±10％和约5％异丙醇，v/v，±10％的混合物；

0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；

足量至约pH8.0，±10％的盐酸；和

足量至100％的水性载体，其包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

实施方案2.根据实施方案1所述的组合物，还包括约0.00037％FD&C蓝 1号，w/w，±10％。

实施方案3.根据实施方案1或实施方案2所述的组合物，其中以±10％的各组分的量进一步是±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选±5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。

实施方案4.一种稳定人核酸的方法，所述方法包括使含有所述人核酸的生物样品与实施方案1至实施方案3中任一项所述的组合物接触。

实施方案5.根据实施方案4所述的方法，其中所述生物样品包含人唾液。

实施方案6.一种生物样品保存试剂盒，其包含设置在样品收集装置的一部分中的实施方案1至实施方案3中任一项所述的组合物。

实施方案7.一种制造实施方案1所述的组合物的方法，所述方法包括：

获得所述水性载体；和

添加下述到所述载体至最终量：

43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；

2.65％三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，w/w，±10％；

0.279％月桂酰基肌氨酸钠(SLS)，w/w，±10％；

0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；和

足量至约pH8.0，±10％的盐酸。

实施方案8.根据实施方案7所述的方法，还包括添加视觉上合适量的着色剂到所述载体。

实施方案9.根据实施方案8所述的方法，其中所述着色剂包含FD&C蓝1 号，其量为所述组合物的0.00037％，w/w，±10％。

实施方案10.一种核酸保存组合物，包括：

水性载体；

离液剂；

缓冲剂；

螯合剂；

表面活性剂；

醇；

酸；和

粘液溶解剂。

实施方案11.根据实施方案10所述的组合物，包含：

43.92％，w/w，±10％的所述离液剂；

2.65％，w/w，±10％的所述缓冲剂；

0.81％，w/w，±10％的所述螯合剂；

0.279％，w/w，±10％的所述表面活性剂；

17.73％，w/w，±10％的所述醇；

0.093％，w/w，±10％的粘液溶解剂；和/或

足量至约pH8.0，±10％的所述酸，

所述水性载体足量至100％。

实施方案12.根据实施方案11所述的组合物，其中以±10％的各组分的量进一步是±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选± 5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。

实施方案13.根据实施方案10至12中任一项所述的组合物，其中：

所述水性载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水；

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)，优选EDTA二钠盐，更优选EDTA 二钠(盐)二水合物；

所述表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述醇包括约乙醇和第二种化学品的混合物，其中第二种化学品优选是异丙醇；

所述酸包括盐酸；和/或

所述粘液溶解剂包含N-乙酰基-L-半胱氨酸。

实施方案14.根据实施方案10至实施方案13中任一项所述的组合物，还包含视觉上合适量的视觉指示剂，优选着色剂，更优选有色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号。

实施方案15.根据实施方案14所述的组合物，其中所述视觉指示剂以约0.00037％，w/w，±10％的量包含在所述组合物中。

实施方案16.一种核酸保存组合物，包括：

载体，优选液体载体，更优选溶剂，还更优选水，最优选过滤水、纯化水、蒸馏和/或去离子水；

离液剂，优选硫氰酸胍；

缓冲剂，优选三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

螯合剂，优选乙二胺四乙酸(EDTA)，更优选EDTA二钠盐，最优选EDTA 二钠(盐)二水合物；

表面活性剂，优选月桂酰基肌氨酸钠(SLS)；

醇，优选特殊变性醇(SDA)，更优选约95％乙醇v/v，±10％和约5％异丙醇v/v，±10％的混合物(SDA 3C)；

酸，优选盐酸；和

粘液溶解剂，优选N-乙酰基-L-半胱氨酸。

实施方案17.根据实施方案16所述的组合物，其中所述组合物是水溶液。

实施方案18.根据实施方案16或实施方案17所述的组合物，其中所述载体包括过滤水、纯净水、蒸馏水或去离子水。

实施方案19.根据实施方案16至实施方案18中任一项所述的组合物，其还包含视觉指示剂，优选着色剂，更优选有色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号。

实施方案20.根据实施方案16至实施方案18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：

43.92％，w/w，±10％的所述离液剂；

2.65％，w/w，±10％的所述缓冲剂；

0.81％，w/w，±10％的所述螯合剂；

0.279％，w/w，±10％的所述表面活性剂；

17.73％，w/w，±10％的所述醇；

0.093％，w/w，±10％的粘液溶解剂；和/或

足量至约pH8.0，±10％的所述酸，

所述性载体足量至100％。

实施方案21.根据实施方案16至实施方案18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：

43.92％，w/w，±10％的所述离液剂；

2.65％，w/w，±10％的所述缓冲剂；

0.81％，w/w，±10％的所述螯合剂；

0.279％，w/w，±10％的所述表面活性剂；

17.73％，w/w，±10％的所述醇；

0.093％，w/w，±10％的粘液溶解剂；

视觉合适量的视觉指示剂，优选为着色剂，更优选为着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝1号；和/或

足量至约pH8.0，±10％的所述酸，

所述性载体足量至100％。

实施方案22.根据实施方案16至实施方案18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：

43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；

2.65％Tris，w/w，±10％；

0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；

0.279％SLS，w/w，±10％；

17.73％SDA 3C，w/w，±10％；

0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；和/或

1.08％，w/w，±10％的在溶剂中的盐酸37％，v/v，±10％，或足量至pH 为约8.0，±10％的盐酸，

水足量至100％，w/w。

实施方案23.根据实施方案16至实施方案18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：

43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；

2.65％Tris，w/w，±10％；

0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；

0.279％SLS，w/w，±10％；

17.73％SDA 3C，w/w，±10％；

0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；

水足量至100％，w/w。

实施方案24.根据实施方案16至实施方案18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：

32.602％水，w/w，±10％；

43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；

2.65％Tris，w/w，±10％；

0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；

0.279％SLS，w/w，±10％；

17.73％SDA 3C，w/w，±10％；

1.08％的盐酸37％，w/w，±10％；

0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；和

0.00037％，w/w，±10％的视觉指示剂，优选为着色剂，更优选为着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝1号。

实施方案25.一种稳定核酸的方法，包括：

获得含有所述核酸的生物样品；和

使所述生物样品与组合物接触，所述组合物包含：

水性载体；

离液剂；

缓冲剂；

螯合剂；

表面活性剂；

醇；

酸；和

粘液溶解剂。

实施方案26.根据实施方案25所述的方法，其中所述组合物包括：

约43.92％w/w的所述离液剂；

约2.65％w/w的所述缓冲剂；

约0.81％w/w的所述螯合剂；

约0.279％w/w的所述表面活性剂；

约17.73％w/w的所述醇；

约0.093％w/w的所述粘液溶解剂；

所述酸足量至约pH8.0；和/或

所述水性载体足量至100％。

实施方案27.根据实施方案25或实施方案26所述的方法，其中：

所述水性载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水；

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述酸包括盐酸；和/或

所述粘液溶解剂包含N-乙酰基-L-半胱氨酸。

实施方案28.根据实施方案25至实施方案27中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含视觉上合适量的视觉指示剂，优选着色剂，更优选有色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号。

实施方案29.根据实施方案28所述的方法，其中所述视觉指示剂以约 0.00037％，w/w的量包含。

实施方案30.根据实施方案25至实施方案29中任一项所述的方法，其中所述生物样品包含人唾液。

实施方案31.一种制备核酸保存组合物的方法，所述方法包括：

获得载体，其包含包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水；和

添加下述到所述载体：

离液剂；

缓冲剂；

螯合剂；

表面活性剂；

醇；

酸；和

粘液溶解剂。

实施方案32.根据实施方案31所述的方法，其中

所述离液剂被添加到约43.92％w/w；

所述缓冲剂被添加到约2.65％w/w；

所述螯合剂被添加到约0.81％w/w；

所述表面活性剂被添加到约0.279％w/w；

所述醇被添加约17.73％w/w；

所述酸被添加至pH约8.0；和

所述粘液溶解剂被添加到约0.093％w/w。

实施方案33.根据实施方案31或实施方案32所述的方法，其中：

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述酸包括盐酸；和/或

所述粘液溶解剂包含N-乙酰基-L-半胱氨酸。

实施方案34.根据实施方案31至实施方案33中任一项所述的方法，还包括向所述载体中加入视觉上合适量的视觉指示剂，优选着色剂，更优选有色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号。

实施方案35.根据实施方案34所述的方法，其中所述视觉指示剂被添加至约0.00037％w/w的量。

实施方案36.一种生物样品保存试剂盒，包括：

包括溶液隔室的样品收集装置；和

核酸保存组合物，其置于所述溶液隔室中，所述组合物包含水溶液，其包含：

水性载体；

离液剂；

缓冲剂；

螯合剂；

表面活性剂；

醇；

酸；和

粘液溶解剂。

实施方案37.根据实施方案36所述的试剂盒，其中所述水溶液包含：

约43.92％w/w的所述离液剂；

约2.65％w/w的所述缓冲剂；

约0.81％w/w的所述螯合剂；

约0.279％w/w的所述表面活性剂；

约17.73％w/w的所述醇；

约0.093％w/w的所述粘液溶解剂；

所述酸足量至约pH8.0；和/或

所述水性载体足量至100％。

实施方案38.根据实施方案36或实施方案37所述的试剂盒，其中：

所述水性载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水；

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述酸包括盐酸；和/或

所述粘液溶解剂包含N-乙酰基-L-半胱氨酸。

实施方案39.根据实施方案36至实施方案38中任一项所述的试剂盒，其中所述水溶液还包含视觉指示剂，优选着色剂，更优选着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号，所述视觉指示剂优选地以可见量包含，优选以所述组合物的约0.00037％w/w的量包含。

实施方案40.一种核酸保存组合物，包括：

20-50％离液剂，w/w；

1-5％缓冲剂，w/w；

0.05-2.5％螯合剂，w/w；

0.05-2.5％表面活性剂，w/w；

5-25％醇，w/w；

0.005-0.25％粘液溶解剂，w/w；

足量至pH7.5-9.5的酸；和

足量至100％的载体。

实施方案41.根据实施方案40所述的组合物，进一步包括0.00005- 0.5％w/w的视觉指示剂。

实施方案42.一种核酸保存组合物，包括：

20-50％硫氰酸胍，w/w；

1-5％三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，w/w；

0.05-2.5％乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w；

0.05-2.5％月桂酰基肌氨酸钠(SLS)，w/w；

5-25％醇，w/w，所述醇包含50-99％乙醇v/v和约1-50％异丙醇v/v的混合物；

0.005-0.25％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w；

足量至pH 7.5-9.5的盐酸；和

足量至100％的载体，其包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

实施方案43.根据实施方案40所述的组合物，进一步包括0.00005- 0.5％w/w的FD&C蓝1号。

实施方案44.一种稳定人核酸的方法，所述方法包括使含有所述人核酸的生物样品与实施方案40至实施方案43中任一项所述的组合物接触。

实施方案45.根据实施方案44所述的方法，其中所述生物样品包含人唾液。

实施方案46.一种生物样品保存试剂盒，其包含设置在样品收集装置的一部分中的实施方案40至实施方案43中任一项所述的组合物。

实施方案47.任何前述实施方案，其中所述组合物：

(i)基本上不含或没有除了或除非N-乙酰基-L-半胱氨酸以外的一种、另外的或任何的粘液溶解剂；

(ii)基本上不含或没有除了或除非所述醇、离液剂、表面活性剂/洗涤剂和/ 或粘液溶解剂以外的另外的或任何的抗微生物剂、杀细菌剂和/或抑菌剂；

(iii)基本上不含或没有除了或除非所述离液剂以外的另外的或任何的核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂，所述组合物优选地基本上不含肝素、硫酸乙酰肝素、低聚(乙烯基磺酸)、聚(乙烯基磺酸)、低聚(乙烯基膦酸)和/或聚 (乙烯基磺酸)或其盐)；

(iv)基本上不含或没有一种或任何的蛋白酶；

(v)基本上不含或没有抗坏血酸、连二亚硫酸盐、赤藓糖酸盐、二硫苏糖醇、 2-巯基乙醇、赤藓糖醇、树脂负载的硫醇、树脂负载的膦、维生素E、和/或 trolox或其盐；

(vi)基本上不含或没有微生物和/或微生物污染；和/或

(vii)每克所述组合物的所述一种或多种微生物的菌落形成单位(cfu)小于或等于约100、99、98、97、96、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、 45、40、35、30、25、20、15、10或5(cfu/g)。

附图说明

为了描述可以获得本公开的上述和其他优点和特征的方式，将通过参考在附图中示出的其特定实施方案来呈现上面简要描述的实施方案的更具体的描述。为了更好地理解，在整个附图中，相同的元件由相同的附图标记表示。应理解，这些附图仅描绘了本发明的典型实施方案，因此不应认为是对其范围的限制，将通过使用附图以附加特性和细节来描述和解释本公开，在附图中：

图1A是根据本发明的一个实施方案使用组合物保存的具有高分子量DNA 的凝胶的图像；和

图1B是具有Bionexus通用HI-LO DNA标记物的凝胶的图像。

具体实施方式

在详细描述本公开的各种实施方案之前，应理解，本公开不限于特定示例的系统、方法和/或产品的具体参数和描述，其可在一个实施方案到下一个实施方案变化。因此，尽管对本公开的某些实施方案进行详细地描述，参考具体的特征(例如，配置、参数、性质、步骤、组分、成分、构件、元件、部件、和/ 或部分等)，但该描述是说明性的，不应解释为限制本公开和/或要求保护的发明的范围。另外，这里使用的术语是为了描述实施方案，并不一定是为了限制本公开和/或要求保护的发明的范围。

虽然详细说明被分成章节，每个章节内的段标题和内容不旨在是自包含的描述和实施方案。而是，详细描述中的每个章节的内容旨在被阅读和理解为总体性整体，其中一个章节的元素可以属于和/或预示其他章节。因此，在一个章节内具体公开的实施方案还可以涉及和/或用作具有相同和/或类似系统、装置、方法和/或术语的另一章节中的附加和/或替代实施方案。

已定义术语的缩略列表

为了帮助理解前述和即将出现的书面描述和所附权利要求的范围和内容，下面直接定义选择的几个术语。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

如本文所用，过渡短语“基本上由......组成”是指权利要求的范围应被解释为包含权利要求中所述的特定材料或步骤，以及要求保护的发明的不会实质上影响基本和新颖特征的那些。参见In re Herz,537F.2d 549,551-52,190U.S.P.Q. 461,463(CCPA1976)(原文中强调)；也参见MPEP§2111.03。因此，当在本公开的权利要求中使用时，术语“基本上由......组成”并不旨在被解释为等同于“包含”。

如本文所用的术语“核酸”是指天然存在的或合成的寡核苷酸或多核苷酸，无论是DNA还是RNA或DNA-RNA杂合体、单链或双链、有义或反义，其能够与互补核酸通过Watson-Crick碱基配对杂交。本发明的核酸还可包括核苷酸类似物(例如，BrdU、dUTP、7-脱氮-dGTP)和非磷酸二酯核苷间键(例如，肽核酸(PNA)或硫代二酯键)。特别地，核酸可包括但不限于DNA、RNA、cDNA、 gDNA、ssDNA、dsDNA或其任何组合。

术语“样品”、“生物样品”等是指动物；来自动物的组织或器官；细胞(在受试者体内、直接取自受试者、或保持在培养物中的或来自培养细胞系的细胞)；细胞裂解物(或裂解物部分)或细胞提取物；含有一种或多种衍生自细胞、细胞材料或病毒材料(例如多肽或核酸)的分子的溶液；或含有天然或非天然存在的核酸的溶液，其被或可以如本文所述进行测定。样品也可以是含有一种或多种细胞、细胞组分或核酸的任何体液或排泄物，包括但不限于细胞、核或无细胞核酸。

“体液”是指天然存在的流体，包括但不限于来自动物(例如人或非人动物) 的液体、半固体、充气液体、液体-气体混合物等。此类体液可包括但不限于唾液、痰液、血清、血浆、血液、尿液、粘液、汗液、眼泪或其他眼部液体、耳部液体、脸(例如，来自水疱或疮)、胃液或胃汁、粪便液、胰液或汁、精液、哺乳或测定产物、脊髓液、液体骨髓或淋巴液。

“痰”是指包含在哺乳动物的鼻腔或口腔中或从其排出的粘液物质。如本文所使用的，痰通常包括唾液并从呼吸通道(包括肺)排出。

“唾液”是指来自任何唾液腺的分泌物或分泌物的组合，包括腮腺、颌下腺和舌下腺，任选地与来自颊腺的分泌物混合。

“粘液”是指含有粘蛋白的任何体液。

“粘蛋白”是指任何提高分泌细胞周围培养基粘度的粘蛋白。

如本文中所使用的，术语“约”对于一个值，表示由此表示的所述值或量的 +/-10％。例如，在整个本公开中，术语“约”与组分或成分的百分比浓度或组成一起使用(例如，在混合物中，例如流体或液体混合物、含水混合物、溶液等，任选地或优选地以w/w百分比、w/v百分比、v/v百分比等测量)。在这种情况下，术语“约”和/或术语“+/-10％”暗示和/或包括所述数值的+/-10％，而不是所述百分比的+/-10个百分点。举例来说，当20％w/w的组分或成分反映每100mL 总混合物20g组分或成分时，术语“约”和/或术语“+/-10％”暗示和/或包括18g至 22g的陈述范围(即，18％w/w至22％w/w)，而不是10％w/w至30％w/w的范围。所谓的“大约”值和/或+/-10％的替代物包括所述值的+/-1％、+/-2％、+/-3％、 ±4％、±5％、+/-6％、+/-7％、+/-8％、或+/-9％，每一个都被认为是术语“约”或在此使用+/-10％的合适替代术语或替代。

如本文中所使用的，术语“大约”和“基本上”表示或暗示接近所述数量的(例如，仍执行期望的功能或实现(期望的或预期的)结果)的(或任何)量。例如，术语“大约”和“基本上”可以指在陈述量的10％、5％、1％、0.1％、0.01％或其他百分比之内或之下的量。如本文中所使用的，术语“基本上不含”是指(1)不可检测或不可量化的量，(2)小于或低于通常被本领域的技术人员认为反映可检测或量化的量的量，和/或(3)小于或低于通常被本领域的技术人员认为起作用或能够实现(期望的或预期的)结果的量(例如，小于10％、5％、1％、0.1％、0.01％或其他百分比)。

“足量(Quantum satisf)”(也称为“q.s.”或“qs”)是指足够的量。因此，组分或成分“qs 100％”、“以qs 100％提供”或“qs至100％”表示提供或包含的组分或成分的量足以完成组合物或使总量(所有组分，无论是否提及)为100％。然而，应注意，(最终)组分或成分“qs 100％”、“以qs 100％提供”或“qs至100％”并不表示该混合物由、基本上由或仅包含紧接在“qs 100％”组分之前列出或陈述的组分。换句话说，“qs 100％”和类似术语是指开放式表达式，表示剩余部分的来源，无论剩余部分是什么。

“醇”是指含有羟基的水混溶性有机化合物，包括含羟基的有机化合物的水混溶性混合物。

“水性”是指含有30％或更多水(按体积或按重量计)的介质或物质。

“水溶液”是指含有30体积％或更多水的溶液或悬浮液。

“变性剂”是指改变其所加入的物质的天然状态的物质。

“离液剂”是指发挥离液活性的分子。如本领域技术人员所理解的，发挥离液活性的分子可破坏水分子之间的氢键网络，从而通过削弱疏水效应影响(溶液中)其他分子，主要是大分子(蛋白质、核酸)的天然状态的稳定性。因此，发挥离液活性的分子可具有蛋白质变性活性(或是蛋白质变性剂)。

“抗微生物剂”是指与不存在它们的生物体的生长速率相比，降低生物体生长速率的物质或物质组。生物体生长速率的降低可以是至少5％，更期望地，至少10％，甚至更期望地，至少20％、50％或75％，并且最理想的是90％或者更多。该定义还扩展到影响生物体的活力、毒力或致病性的物质。抗微生物剂可以是天然的(例如，衍生自细菌或其他来源)、合成的或重组的。抗微生物剂可以是抑菌剂、杀菌剂或两者。如果抑制细胞分裂而不影响抑制细胞的活力，则抗菌剂是抑菌剂。如果抗菌剂导致细胞死亡，则它是杀菌剂。通常通过在液体生长培养基中不存在细胞生长(例如，没有浊度)或在固体表面上(例如，在琼脂上不存在集落形成)来检测细胞死亡。本领域技术人员知道，在给定浓度下具有抑菌作用的物质或物质组可以在较高浓度下杀菌。某些抑菌物质在任何浓度下都不会杀菌。

如本文中所使用的，“乙酰半胱氨酸”或“N-乙酰半胱氨酸”(NAC)，包括任何形式的乙酰半胱氨酸，包括N-乙酰基-L-半胱氨酸、N-乙酰基-D-半胱氨酸和外消旋N-乙酰基半胱氨酸或N-乙酰基-L-半胱氨酸和N-乙酰基-D-半胱氨酸的 (外消旋)混合物)。提及一种形式的乙酰基半胱氨酸支持对任何形式的乙酰基半胱氨酸的具体提及。

如本文所用，术语“组合物”包括产品、配方和混合物，以及装置、设备、组件、试剂盒等。类似地，术语“方法”包括工艺、过程、步骤等。

可以参考一个或多个本质上是示例性的实施方案或执行方案来说明本公开的各个方面，包括系统、方法和/或产品。如本文所使用的，术语“实施方案”和 “执行方案”意味着“用作示例、实例或说明”，并且不应被解释为比本文公开的其他方面更优选或更具优势。另外，对本公开或发明的“执行方案”的引用包括对其一个或多个实施方案的具体引用，反之亦然，并且旨在提供说明性示例而不限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求而不是其说明书指示。

如本文所用，本文公开的“特征”或本文公开的实施方案涉及随后主题的性质、组分、成分、要素、部件、部分、(方法)步骤或其他方面。

如贯穿本公开所使用的，词语“可”和“可以”以允许的意义使用(即，意味着可能)，而不是强制意义(即，意义着必须)。另外，术语“包括”、“具有”、“涉及”、“含有”、“特征在于”、其变体以及本文(包括权利要求)所用的类似术语应具有包容性和/或开放性，与“包含”及其变体的含义相同，并且例如，不排除其他未陈述的元素或方法步骤。

这里使用的词语“或”表示特定列表中的任何一个成员，并且还包括该列表的成员的任何组合。

如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”、“一个”和“该” 均考虑、包括并具体地公开单数和复数指示物，除非上下文另有明确说明。例如，提及“蛋白质”考虑并具体地公开了一种蛋白质以及两种或多种蛋白质。类似地，除非上下文另有明确规定，否则复数指示物的使用不一定需要多个这样的指示物，而是包括和具体地公开了一种和两种或多种这种指示物。

应注意，本公开的实施方案可包括本文描述的两个或更多个特征的一个或多个组合。如本文所使用的，“特征”和类似的术语可包括例如组合物、成分、组件、元件、构件、部件、部分、系统、方法、配置、参数、性质等等。实施方案可以包括在本公开的其他地方阐述的(包括在本公开的其他方面或实施方案中的)任何特征、选项和/或可能性。还应注意，本文描述的前述、后续和/或其他特征中的每一个代表本公开的不同实施方案。特征还可以以任何合适的组合和/或顺序与另一个或多个其他特征组合和/或组合，其中包括或不包括一个或多个附加特征，或者在其间执行，以形成独特的实施方案，每个实施方案都在本公开中。这些特征中的任何两个或更多个的组合代表本公开的不同实施方案。因此，本公开不限于本文详述的示例性实施方案的具体组合，并且相对于本公开的特定实施方案的某些特征的公开不应被解释为限制所述特征应用或包含到该特定实施方案。

另外，除非在特定实施方案中描述了特征为必需的，否则在各个实施方案中描述的特征可以是可选的，并且可以不包括在本公开的其他实施方案中。此外，除非将特征描述为需要与其组合的另一特征，否则本文的任何特征可与本文公开的相同或不同实施方案的任何其他特征组合。同样，本文中所描述和/或权利要求中陈述的任何方法中所述的任何步骤可以以任何合适的顺序来执行，并且不必限于所描述和/或陈述的顺序，除非另有说明(明确地或隐含地)。然而，在本公开的某些实施方案中，还可以要求以特定顺序执行这些步骤。

也应当理解，在公开或陈述了两个或多个值或值范围(例如小于、大于、至少和/或至多某个值，和/或在两个列举的值之间)的情况，同样具体地公开和考虑了落入所公开的值或值范围内的任何特定值或值范围。因此，小于或等于约 10个单位或0到10个单位的说明性测量(例如，长度、宽度、厚度等)的公开说明性地包括以下具体公开：(i)9个单位、5个单位、1个单位或0到10个单位之间的任何其他值的测量，包括0个单位和/或10个单位；和/或(ii)9个单位和 1个单位之间、8个单位和2个单位之间、6个单位和4个单位、和/或0到10 个单位之间的任何其他值范围之间的测量。

为了便于理解，在可能的情况下，已经使用类似的参考(即，组件和/或元件的类似命名)来指定与本公开的不同实施方案共同的相同元件。类似地，在可能的情况下，类似的组件或具有相同功能的组件将被提供有类似的参考标记。这里将使用特定语言来描述示例性实施方案。然而，应该理解，不打算由此限制本公开的范围。而是，应理解，用于描述示例性实施方案的语言仅是说明性的，不应被解释为限制本公开的范围(除非这种语言在本文中明确地描述为必要的)。

说明性实施方案

以下对实施方案的描述包括与本公开的一个或多个实施方案相关的公开。因此，一些实施方案可以包括在以下实施例中公开的特征而不脱离本公开的范围。换句话说，以下实施例中公开的特征可以包括和/或并入本文公开的任何一个或多个实施方案中。

组合物

本公开的一些实施方案包括组合物。组合物可以呈现痰或唾液作为用于纯化和分析的核酸的可行源。该组合物提供了核酸化学稳定化和抑制核酸酶(包括脱氧核糖核酸酶)和微生物生长的有利特性。在唾液样品中合适的化学稳定化可以通过使用缓冲剂、酸、螯合剂、粘液溶解剂、离液剂、表面活性剂和醇来实现。

当与生物样品(例如含有粘蛋白的体液)混合时，本公开的组合物可以在室温下在环境条件下长时间保存核酸。样品也可以冷藏，但不需要在核酸回收和纯化之前冷冻样品。本公开的某些组合物的性质是它(a)化学稳定核酸，(b)抑制可能存在于唾液中的核酸酶，和(c)与蛋白水解酶和用于纯化/扩增寡核苷酸或多核苷酸的其他试剂相容。

载体

在至少一个实施方案中，组合物可包含载体。优选地，载体可以是液体载体或溶剂，更优选含水载体或溶剂，还更优选水。最优选地，载体可以是或包括纯化水、过滤(例如0.2微米过滤的)水、蒸馏水和/或去离子水。因此，组合物可以包括载体。载体可以是或包括水，如过滤水、纯净水、蒸馏水、或去离子水。

在一些实施方案中，组合物可包含足量至100％的载体。在一些实施方案中，组合物可包括10-60％，优选15-55％，更优选20-50％，还更优选25-45％，还更优选28-40％，还更优选30-35％，还更优选31-34％，还更优选32-33％的载体，w/w或其间的任何值或值的范围。最优选地，组合物可以包括(约)32.602％的水，w/w。

离液剂

该组合物可以包括一种或多种离液剂。在一个或多个实施方案中，离液剂可以是蛋白质变性剂。在一些实施方案中，离液剂可以选自：氯化胍和/或硫氰酸胍。因此，在至少一个实施方案中，组合物可包括离液剂。优选地，离液剂可以是或包含胍(或胍阳离子)或其合适的盐。更优选地，离液剂可以是或包含硫氰酸胍。在至少一个实施方案中，离液剂可以是或包含硫氰酸盐。在至少一个实施方案中，离液剂可以是或包含异硫氰酸胍、氯化胍、盐酸胍、碘化胍等。

在一些实施方案中，离液剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，离液剂可具有至少、至多和/或约90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、 99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如 CoA测量)。在一些实施方案中，离液剂可包含或是(提供为)具有任何合适浓度的储备溶液(例如，在水中)的形式。在一些实施方案中，离液剂可具有基本上对应于溶液中离液剂浓度的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

在一些实施方案中，组合物可以包括20-50％，优选25-49％，更优选30- 48％，还更优选35-47％，还更优选40-46％，还更优选42-45％，还更优选43- 44％的离液剂(例如硫氰酸胍)，w/w，或其间的任何值或值范围。最优选地，组合物可以包括(约)43.92％硫氰酸胍，w/w。离液剂(例如硫氰酸胍)可在约 43.92％w/w，或在约35％至约50％，优选约40％至约46％，更优选约42％至约 45％，还更优选约43％至约44％w/w的范围内被包括在所述组合物中。

缓冲剂

组合物可包含一种或多种缓冲剂(或缓冲液、pH缓冲液等)。缓冲剂的实例包括但不限于三(羟甲基)氨基甲烷(也称为Tris；Tris碱，2-氨基-2-(羟甲基)-1,3- 丙二醇，THAM，氨丁三醇)或其合适的制剂(例如，三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐，或Tris-HCl)，

碱(例如，在水中的Tris40％(w/w)储备溶液)，HEPES， BES，MOPS，HEPES，TAE，TBE，磷酸盐缓冲液，硼酸钠缓冲液，二甲胂酸钠缓冲液，等等。优选地，所述缓冲剂可以是或包括三(羟甲基)氨基甲烷 (TRIS)。更优选地，缓冲剂可以是或包含Tris-HCl。最优选地，缓冲剂可以是或包括

碱。

在一些实施方案中，缓冲剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，缓冲剂可具有至少、至多和/或约90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、 99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如 CoA测量)。在一些实施方案中，缓冲剂可以包括或者是(提供为)具有任何合适浓度的储备溶液的形式(例如在水中的Tris～40％(w/w)储备溶液)。在一些实施方案中，缓冲剂可具有基本上对应于溶液中缓冲剂浓度的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

缓冲剂可以以约2.65％％w/w，或在约0.1％至约5％，优选约0.5％至约 4.5％，更优选约0.75％至约4％，更优选约1％至约3.5％，还更优选约1.5％至约3.25％，还更优选约2％至约3％，还更优选约2.5％至约2.8％，w/w的范围内被包括在所述组合物中。一些实施方案中，组合物可包括1-5％，优选1.25- 4.5％，更优选1.5-4％，仍更优选1.75-3.75％，还更优选2-3.5％，还更优选 2.25-3％，还更优选2.5-2.75％的缓冲剂(例如Tris)，w/w，或其间的任何值或值范围。最优选地，该组合物可包含(约)2.65％Tris，w/w。

螯合剂

在至少一个实施方案中，组合物可包含螯合剂(或螯合物)。优选地，螯合剂可以是或包含乙二胺四乙酸(EDTA)或其合适的盐和/或水合物。更优选地，螯合剂可以是或包含EDTA二钠盐，或者作为EDTA二钠盐提供。还更优选地，螯合剂可以是或包含EDTA二钠(盐)二水合物或作为其提供。在至少一个实施方案中，螯合剂可以是或包含乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸 (EGTA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺(或1,2-二氨基乙烷)等等。在一些实施方案中，所述螯合剂包括、包含或者具有抗衡离子(例如钠)。在至少一个实施方案中，螯合剂包含、包括或提供为水合物(例如，二水合物)。

组合物可包含一种或多种螯合剂。该组合物的螯合剂可选自：乙二胺四乙酸(EDTA)、环己烷二胺四乙酸(CDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、四氮杂环十二烷四乙酸(DOTA)、四氮杂环十四烷四乙酸(TETA)、去铁氧嘧啶、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺(或1,2-二氨基乙烷)，或其各自螯合剂类似物、盐和/ 或水合物。优选地，所述螯合剂可以是或包括EDTA(例如，如EDTA二钠盐，优选地如EDTA二钠(盐)二水合物)。在一些实施方案中，螯合剂包含、包括或提供具有抗衡离子(例如钠)。在至少一个实施方案中，螯合剂包含、包括或提供为水合物(例如，二水合物)。

在一些实施方案中，螯合剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，螯合剂可具有至少、至多和/或约90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、 99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如 CoA测量)。在一些实施方案中，螯合剂可包含或是(提供为)具有任何合适浓度的储备溶液(例如，在水中)的形式。在一些实施方案中，螯合剂可具有基本上对应于溶液中螯合剂浓度的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

螯合剂(例如EDTA)可以以约0.81％w/w，或约0.05％至约2.5％，优选约 0.1％至约2％，更优选约0.5％至约1％，更优选约0.75％至约0.9％w/w的范围包括在组合物中。在一些实施方案中，组合物可包含0.05-2.5％，优选0.1- 2.25％，更优选0.25-2％，还更优选0.5-1.75％，还更优选为0.6-1.5％，仍更优选0.7-1.25％，仍然更优选0.75-1％螯合剂(例如EDTA)，w/w，或其间的任何值或值的范围。最优选地，组合物可以包括(约)0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w。

表面活性剂

在至少一个实施方案中，组合物可包括表面活性剂或洗涤剂。优选地，表面活性剂可以是或包含月桂酰肌氨酸盐。更优选地，表面活性剂可以是或包含月桂酰肌氨酸钠(SLS)。在至少一个实施方案中，表面活性剂可以是或包含一种或多种选自以下的组分：十二烷基硫酸钠(SDS)、聚山梨醇酯(Tween^TM)、十二烷基二甲基氧化胺、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、聚乙氧基化醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇、辛苯聚醇(Triton X100^TM)、N,N-二甲基十二烷基胺-N-氧化物、十六烷基三甲基溴化铵(HTAB)、聚乙二醇10月桂基醚、胆盐(脱氧胆酸钠、胆酸钠)、聚乙二醇蓖麻油(Cremophor^TM)、壬基酚乙氧基化物(Tergitol^TM)、环糊精、卵磷脂、甲基苯扎氯铵(Hyamine^TM)等。该组合物可以包括表面活性剂或洗涤剂，如尿素、高氯酸盐、十二烷基硫酸(钠)(SDS)和/或月桂酰肌氨酸(钠)(SLS)，优选月桂酰基肌氨酸钠(SLS)。在一些实施方案中，SLS可以比SDS或其它(较不可溶)的表面活性剂优选。

在一些实施方案中，表面活性剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，表面活性剂可具有至少、至多和/或约90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、 99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。在一些实施方案中，表面活性剂可包含或是(提供为)具有任何合适浓度的储备溶液(例如在水中)的形式(例如约10％、15％、20％、25％、28％、 29％、30％、32％、35％、40％或45％w/w水溶液(例如在水中))。在一些实施方案中，表面活性剂可具有基本上对应于溶液中表面活性剂浓度的纯度(例如，约 30％，w/w)(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

在一些实施方案中，表面活性剂(例如，SLS)可以以约0.279％，w/w包括在组合物中。在一些实施方案中，表面活性剂可以以约0.01％至约5％，w/w，优选约0.025％至约2.5％，w/w，更优选约0.05％至约2％，w/w，更优选约 0.075％至约1.5％，w/w，还更优选约0.1％至约1％，w/w，还更优选约0.15％至约0.5％，w/w，仍更优选约0.2％至约0.4％，w/w，还更优选约0.25％至约 0.3％w/w的范围包括在所述组合物中。一些实施方案包括0.01％至5％，w/w，优选0.025％至2.5％，w/w，更优选0.05％至2％，w/w，还更优选0.075％至1.5％，w/w，仍然更优选0.1％至1％，w/w，还更优选0.15％至0.5％，w/w，还更优选0.2％至0.4％，w/w，还更优选0.25％至0.3％，w/w，最优选0.279％，w/w的表面活性剂或SLS。在至少一个实施方案中，表面活性剂(例如，SLS)可以以约0.93％w/w的约30％储备(水)溶液或其等价物包括在组合物中。

醇

在至少一个实施方案中，组合物可以包括醇。优选地，所述醇可以是或包括乙醇。更优选地，醇可以是或包括乙醇和一种或多种另外的化学品或组分的混合物。在至少一个实施方案中，一种或多种另外的化学品或组分可以是或包含异丙醇。仍然更优选地，醇可以是或包括乙醇和异丙醇的混合物。在至少一个实施方案中，一种或多种另外的化学品或组分可以是或包含甲醇、丙醇、丁醇、异丁醇等。在至少一个实施方案中，醇可以是或者包括特殊变性醇(SDA)。更优选地，醇可以是或包括SDA 3C，如为本领域技术人员的技术人员已知的，其包含约95％的乙醇v/v和大约5％的异丙醇v/v的混合物。组合物可以包括醇，如乙醇、甲醇、丙醇和/或异丙醇，优选特殊变性醇(SDA)或乙醇和另一种醇如甲醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、三氟乙醇、苯酚或2,6-二-叔丁基-4-甲基苯酚的混合物，更优选乙醇和异丙醇的混合物，还更优选乙醇和一种或多种另外的化学品或组分例如异丙醇的混合物。

在一些实施方案中，表面活性剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，醇可以以液体、水性和/或溶液形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，醇可包含或是(提供为) 具有任何合适浓度的醇(例如，在水中)的储备溶液(例如，在水中)的形式。在一些实施方案中，醇可以是基本上纯的，或基本上纯的醇的混合物。在一些实施方案中，醇可具有至少、至多和/或约90％、95％、96％、97％、98％、99％、 99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％(或纯的乙醇，200标准强度)的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

在一些实施方案中，醇可以是或包含约95％v/v乙醇和约5％v/v异丙醇的混合物或储备溶液或包含其的混合物或储备溶液。在一些实施方案中，醇可以是或包含90-99％v/v乙醇和约1-10％v/v异丙醇的混合物或储备溶液或包含其的混合物或储备溶液。在某些实施方案中，醇可包含50-99％乙醇v/v和1-50％异丙醇v/v的混合物。更优选地，醇可包含60-98％乙醇v/v和2-40％异丙醇v/v 的混合物。还更优选地，醇可包含75-97％乙醇v/v和3-25％异丙醇v/v的混合物。还更优选地，醇可包含80-96％乙醇v/v和4-20％异丙醇v/v的混合物。还更优选地，醇可包含85-95％乙醇v/v和5-15％异丙醇v/v的混合物。还更优选地，醇可包含90-95％乙醇v/v和5-10％异丙醇v/v的混合物。还更优选地，醇可包含92-95％乙醇v/v和5-8％异丙醇v/v的混合物。还更优选地，醇可包含 95％乙醇v/v和5％异丙醇v/v的混合物。最优选地，醇可以是或包含SDA 3C。

醇(例如SDA 3C)可以以约17.73％w/w，或约10％至约25％、优选约12％至约22％、更优选约15％至约20％、还更优选约16％至约19％、还更优选约 17％至约18％w/w的范围包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物中包含的醇的量可以比典型的、传统的或现有的核酸保存溶液少(例如，少约20％、 25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％)，(例如，使组合物更易于运输或运送)。在一些实施方案中，组合物可包括5-25％，优选10-22％，更优选12-20％，还更优选15-19％，还更优选16-18.5％，更优选为17-18.25％，还更优选17.5-18％醇，w/w，或其间的任何值或值范围。

优选地，醇包括乙醇和一种或多种另外的化学品或组分的混合物，例如异丙醇，更优选约95％乙醇，v/v和约5％异丙醇，v/v的混合物。更优选地，醇是特殊变性醇(SDA)，还更优选SDA 3C(即，～95％乙醇和～5％异丙醇v/v的混合物)。最优选地，组合物可以包括(约)17.73％SDA 3C，w/w。在一些实施方案中，醇(例如，SDA 3C)可以以约16.84％w/w的乙醇或范围为约10％至约25％，优选约12％至约22％，更优选约15％至约20％，还更优选约16％至约18％，还更优选约16.5％至约17％，w/w的乙醇，和约0.89％w/w的异丙醇或范围为约0.05％至约2.5％，优选约0.1％至约2％，更优选约0.5％至约1.5％，还更优选约0.75％至约1.25％，更优选约0.8％至约1％w/w的异丙醇包含在组合物中。

在一些实施方案中，组合物中包含的醇的量可以比典型的、传统的或现有的核酸保存溶液更少(例如少约50％)(例如，使组合物更易于运输或运送)。

酸

在至少一个实施方案中，组合物可包括酸。优选地，所述酸可以是或包括盐酸(HCl)。在至少一个实施方案中，酸可以是或包含氢溴酸(HBr)、高氯酸 (HClO₄)、硝酸(HNO₃)或硫酸(H₂SO₄)。在至少一个实施方案中，酸可以是或包含碳酸(H₂CO₃)或乙酸(CH₃COOH)。在至少一个实施方案中，酸可以是或包含磷酸(H₃PO₄)、硼酸(H₃BO₃)或祖母绿安全酸(Emerald Safe acid)(ESA)等。

在一些实施方案中，酸可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，酸可具有至少、至多和/或约90％、 95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。在一些实施方案中，酸可包含或是(提供为)具有任何合适浓度的储备溶液(例如在水中)的形式(例如约10％、15％、20％、25％、30％、32％、35％、37％、38％、 40％或45％w/w水溶液(例如在水中))。在一些实施方案中，酸可具有基本上对应于溶液中酸浓度的纯度(例如，约37％，w/w)(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

在一些实施方案中，组合物可包括酸(例如，盐酸)，其足量至pH约8.0，或pH 7.5-9.5，pH6.5-9.5，pH值7-9，pH值7.2-8.8，pH值7.4-8.6，pH值7.5- 8.5，pH值7.6-8.4，或pH7.8-8.2(或其间任何值或值的范围)。在一些实施方案中，组合物的pH可大于约5和小于约12，优选的pH范围为约6至约11，更优选pH范围为约6至约10，还更优选在约7至约9的pH范围，更优选在约 7.5至约8.5的pH范围，最优选pH约8.0。

在一些实施方案中，酸(例如HCl)可以以约0.4％w/w，或约0.01％至约5％，优选约0.025％至约2.5％，更优选约0.05％至约2％，更优选约0.1％至约1.5％，更优选约0.25％至约1％，更优选约0.5％至约0.75％，更优选约0.3％至约0.5％， w/w的范围包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可包含0.005-5％，优选0.01-2.5％，更优选0.025-1.5％，还更优选0.05-1％，还更优选0.1-0.75％，还更优选0.25-0.5％酸(例如，盐酸)，w/w。在至少一个实施方案中，酸(例如HCl) 可以约1.08％，w/w，～37％，w/w或～12M储备(水)溶液或其等同物包含在组合物中。最优选地，该组合物可包括(约)1.08％盐酸37％，w/w或其等价物，或足量至pH(约)8.0的盐酸。

不受任何理论束缚，应注意，并且本领域技术人员将理解，不同的酸具有不同的“强度”或酸失去质子(H⁺)的能力或趋势。强酸是在溶液中完全电离(离解) 的酸(只要有足够的溶剂)。例如，在水中，1摩尔强酸HA溶解，产生1摩尔 H⁺(如水合氢离子H₃O⁺和更高聚集体)和1摩尔共轭碱A^-。基本上，没有非离子酸HA残留。强酸的一些实例是盐酸(HCl)、氢碘酸(HI)、氢溴酸(HBr)、高氯酸 (HClO₄)、硝酸(HNO₃)和硫酸(H₂SO₄)。在水溶液中，这些中的每一种基本上电离100％。相反，弱酸仅部分解离。水中的实例包括碳酸(H₂CO₃)和乙酸(CH₃COOH)。在平衡时，酸和共轭碱都存在于溶液中。与弱酸相比，更强的酸具有更大的酸解离常数(Ka)和更小的对数常数(pKa＝-logKa)。酸越强，它就越容易失去质子H+。有助于易于去质子化的两个关键因素是H-A键的极性和原子A的大小，这决定了H-A键的强度。酸强度还取决于缀合物碱的稳定性。

鉴于上述情况，使组合物的pH达到所需水平所需的每种酸的w/w量是不同的。例如，(约)1.08％盐酸37％w/w(在水中)可足以使本公开的某些实施方案达到pH(约)8.0,而1.08％乙酸37％，w/w(在水中)可能太弱而不能使类似的实施方案达到pH(约)8.0,1.08％硫酸37％，w/w(在水中)可能太强而不能使实施方案达到pH(约)8.0，1.08％硝酸37％，w/w(在水中)可以氧化醇，等等。不受任何理论束缚，通过进一步的实验，即使本领域普通技术人员也不能确定哪些酸适合于本公开的一个或多个实施方案。

粘液溶解剂

在至少一个实施方案中，组合物可以包括粘液溶解剂。在一个或多个实施方案中，粘液溶解剂可以是或包含还原剂。优选地，所述粘液溶解剂可以是或包括乙酰半胱氨酸(即，N-乙酰半胱氨酸(NAC)，包括任何形式的乙酰半胱氨酸，包括N-乙酰基-L-半胱氨酸、N-乙酰基-D-半胱氨酸和外消旋N-乙酰基半胱氨酸或N-乙酰基-L-半胱氨酸和N-乙酰基-D-半胱氨酸的(外消旋)混合物)。更优选地，粘液溶解剂可以是或包含N-乙酰基-L-半胱氨酸。在至少一个实施方案中，粘液溶解剂可以是或包括N-乙酰半胱氨酸(N-乙酰基-L-半胱氨酸)、抗坏血酸、连二亚硫酸盐、赤藓糖酸盐(erythiorbate)、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、 2-巯基乙醇、二赤藓糖醇、树脂负载的硫醇、树脂负载的膦、维生素E和/或trolox或它们的盐、柠檬酸钠、柠檬酸钾、碘化钾、氯化铵、愈创木酚甘油醚 (或愈创甘油醚)、塔鲁香脂、Vasaka、氨溴索、羧甲半胱氨酸、厄多司坦、美司坦、阿法链道酶等。该组合物可以包括一种或多种粘液溶解剂。优选地，粘液溶解剂是抗坏血酸、赤藓糖酸盐、N-乙酰半胱氨酸、二硫苏糖醇或2-巯基乙醇，最优选地，粘液溶解剂是N-乙酰半胱氨酸。

在一个或多个实施方案中，组合物不含抗坏血酸、连二亚硫酸盐、赤藓糖酸盐、二硫苏糖醇、2-巯基乙醇、赤藓糖醇、树脂负载的硫醇、树脂负载的膦、维生素E、trolox和/或其盐。至少一个实施方案是(基本上)不含抗坏血酸、连二亚硫酸盐、赤藓糖酸盐、二硫苏糖醇、2-巯基乙醇、赤藓糖醇、树脂负载的硫醇、树脂负载的膦、维生素E、trolox和/或其盐。除了N-乙酰基-L-半胱氨酸之外，至少一个实施方案(基本上)不含粘液溶解剂。

在一些实施方案中，粘液溶解剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，粘液溶解剂可具有至少、至多和/或约90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、 99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。在一些实施方案中，粘液溶解剂可包含或是(提供为)具有任何合适浓度的储备溶液(例如，在水中)的形式。在一些实施方案中，粘液溶解剂可具有基本上对应于溶液中粘液溶解剂浓度的纯度(通过合适的材料测定法例如 CoA测量)。

粘液溶解剂(例如，N-乙酰半胱氨酸)可以以约0.093％w/w，或约0.01％至约0.5％，优选约0.025％至约0.25％，更优选约0.05％至约0.2％，还更优选约 0.075％至约0.15％，还更优选约0.08％至约0.1％w/w的范围包括在所述组合物中。

在一些实施方案中，组合物可包括0.005-0.25％，优选0.005-0.2％，更优选0.01-0.2％，还更优选为0.025-0.175％，还更优选0.05-0.165％，还更优选为 0.075-0.15％，还更优选0.08-0.125％，仍更优选0.09-0.1％的粘液溶解剂(例如， N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w，或其间的任何值或值范围。最优选地，组合物可以包括(约)0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w。

视觉指示剂

至少一个实施方案可以包括视觉指示剂。优选地，所述视觉指示剂可以是或包括着色剂。更优选地，视觉指示剂可以是或包括染料或着色染料。仍然更优选地，视觉指示剂可以是或包括蓝色染料。最优选地，视觉指示剂可以是或包括FD&C蓝1号。该组合物可以包括视觉指示剂，优选着色剂，更优选着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝1号。

在一些实施方案中，视觉指示剂可以以干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒形式存在、具有、包含或提供。在一些实施方案中，视觉指示剂可具有至少、至多和/或约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、 99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的纯度(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。在一些实施方案中，视觉指示剂可包含或是(提供为)具有任何合适浓度的储备 (溶液(例如，在水中))的形式(例如约0.01％、0.05％、0.075％、0.1％、0.125％、 0.15％、0.175％、0.2％、0.25％、0.3％或0.5％,w/w水溶液(例如在水中))。在一些实施方案中，储备溶液可以使用干燥、固体、粉末、无水和/或颗粒材料制备。在一些实施方案中，视觉指示剂可具有基本上对应于溶液中酸浓度的纯度(例如，约0.2％，w/w)(通过合适的材料测定法例如CoA测量)。

视觉指示剂(例如FD&C蓝1号)可以以任何视觉上合适量包含在组合物中，如约0.00037％w/w，或在约0.00005％至约0.001％，优选约0.0001％至约 0.00075％，更优选约0.0002％至约0.0005％，w/w，还更优选约0.0003％至约 0.0004％w/w的范围。在一些实施方案中，组合物可包括可见(或视觉合适)量的视觉指示剂，优选为着色剂，更优选为着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝1号。最优选地，组合物可以包括(约)0.00037％w/w的FD&C蓝1 号。

在至少一个实施方案中，视觉指示剂(例如FD&C蓝1号)可以作为浓缩物加入该组合物。在一些实施方案中，浓缩物可以是水性或水基浓缩物。在一些实施方案中，组合物可包括0.01-2.5％，w/w、0.01-5％，w/w的(在水中)的视觉指示剂浓缩物。优选地，组合物可包括0.05-1％w/w、0.05-1％w/w(在水中)的视觉指示剂浓缩物。更优选地，组合物可包括0.075-0.5％w/w、0.075-0.5％w/w(在水中)的视觉指示剂浓缩物。仍然更优选地，组合物可包括0.1-0.25％w/w、0.1- 0.25％w/w的(在水中)视觉指示剂浓缩物。仍更优选地，组合物可包括 (约)0.185％w/w、(约)0.2％w/w的(在水中)视觉指示剂浓缩。在至少一个实施方案中，视觉指示剂(例如，FD&C蓝1号)可以以约0.185％w/w、～0.2％的储备 (水)溶液或其等同物包含在组合物中。最优选地，组合物可以包括 (约)0.185％w/w、(约)0.2％w/w(在水中)FD&C蓝1号浓缩物。

抗菌剂

在一些实施方案中，组合物可包含抗微生物剂。在一些实施方案中，一种或多种前述组分可以表现出抗微生物活性。例如，在一些实施方案中，醇、离液剂、表面活性剂和/或粘液溶解剂可以是抗微生物的或表现出抗微生物活性。因此，某些实施方案不需要包括单独的抗微生物剂(例如，杀菌和/或抑菌)剂。在一个或多个实施方案中，醇(例如，SDA3C)的抗微生物特性即使在本公开的所述实施方案中提供醇的较低浓度下仍然存在(例如，约17.73％，w/w，或5- 25％，10-22％，10-20％，15-19％，16-18.5％，17-18.25％，或17.5-18％，w/w，或其间的任何值或值范围)。

核糖核酸酶抑制剂

一些实施方案包括核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂，例如肝素、硫酸乙酰肝素、低聚(乙烯基磺酸)、聚(乙烯基磺酸)、低聚(乙烯基膦酸)和聚(乙烯基磺酸)，或其盐。在某些(例如，优选的)实施方案中，组合物不包括核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂，或(基本上)缺乏一种或多种(例如，任何)核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂(例如，除了离液剂，例如硫氰酸胍，其可具有内在的RNA酶抑制活性)。因此，至少一个实施方案(基本上)缺乏一种或多种(任何)核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂。一个或多个实施方案 (基本上)不含任何核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂(例如，除了离液剂，例如硫氰酸胍)。

蛋白酶

一些实施方案包括蛋白酶。在某些(例如，优选的)实施方案中，组合物不包含蛋白酶，或(基本上)不含一种或多种(例如，任何)蛋白酶。因此，至少一个实施方案(基本上)缺乏一种或多种(任何)蛋白酶。不受任何理论束缚，蛋白酶 (或蛋白水解酶、肽酶或蛋白酶)是一种通过水解破坏一个或多个肽键的酶，从而将蛋白质转化为较小的蛋白质片段(或肽)或单个蛋白质亚基(或氨基酸)。

蛋白质变性剂

一些实施方案包括一种或多种蛋白质变性剂。例如，在至少一个实施方案中，(i)离液剂可以是、包含或起蛋白质变性剂(或变性蛋白质或具有或表现出蛋白质变性活性)的功能。在至少一个实施方案中，(ii)表面活性剂/清洁剂可以是、包含或起蛋白质变性剂(或变性蛋白质或具有或表现出蛋白质变性活性)的功能。在至少一个实施方案中，(iii)醇可以是、包含或起蛋白质变性剂(或变性蛋白质或具有或表现出蛋白质变性活性)的功能。在至少一个实施方案中，(iv)粘液溶解剂可以是、包含或起蛋白质变性剂(或变性蛋白质或具有或表现出蛋白质变性活性)的功能，例如当蛋白质含有可接近的二硫键或桥接时。在一些实施方案中， (i)离液剂、(ii)表面活性剂/清洁剂、(iii)醇和(iv)粘液溶解剂中的两种或更多种可以是、包含或起蛋白质变性剂(或变性蛋白质或具有或表现出蛋白质变性活性) 的功能。在一些实施方案中，(i)离液剂、(ii)表面活性剂/清洁剂、(iii)醇和(iv)粘液溶解剂中的每一种或全部可以是、包含或起蛋白质变性剂(或变性蛋白质或具有或表现出蛋白质变性活性)的功能。

不受任何理论束缚，一种或多种前述组分或成分的蛋白质变性活性可以是浓度和/或时间依赖性的。

制剂

本公开的一个实施方案包括核酸保存组合物(或制剂)，其包含载体、离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸；和粘液溶解剂。实施方案还包括可选的视觉指示剂。实施方案可包括20-50％离液剂，w/w，1-5％缓冲剂，w/w， 0.05-2.5％螯合剂，w/w，0.05-2.5％表面活性剂，w/w，5-25％醇，w/w，0.005- 0.25％粘液溶解剂，w/w，足量至pH 6.5-9.5的酸，和足量至100％的载体。一个实施方案可进一步包括0.005-2.5％，w/w的视觉指示剂。

在至少一个实施方案中，组合物包括约43.92％w/w的所述离液剂，约 2.65％w/w的所述缓冲剂，约0.81％w/w的所述螯合剂，约0.279％w/w的所述表面活性剂，约17.73％w/w的醇，约0.093％w/w的粘液溶解剂；足量至pH为约8.0的酸(例如，37％酸溶液或它们的等价物的约1.08％)，和足量至100％的载体。所述组合物可以包括约0.00037％w/w的所述视觉指示剂。

在一些实施方案中，载体可以是或包含含水载体，例如水，优选为过滤水、纯化水、蒸馏水、和/或去离子水。在一些实施方案中，离液剂可以是或包括胍和/或硫氰酸盐，优选硫氰酸胍。在一些实施方案中，缓冲剂可以是或包括三 (羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，优选为Tris-HCl，更优选

碱。在一些实施方案中，螯合剂可以是或包括乙二胺四乙酸(EDTA)，优选为EDTA二钠(盐)二水合物。在一些实施方案中，表面活性剂可以是或包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)。在一些实施方案中，醇可以是或者包括特殊变性醇(SDA)或乙醇与异丙醇的混合物，优选为约95％乙醇v/v和约5％异丙醇v/v的混合物，或SDA 3C。在一些实施方案中，酸可以是或包括盐酸。在一些实施方案中，粘液溶解剂可以是或包括N-乙酰基-L-半胱氨酸。

本公开的一个实施方案包括核酸稳定和/或保存组合物，其包含约43.92％离液剂(例如硫氰酸胍)，w/w，约2.65％缓冲剂(例如Tris)，w/w，约0.81％螯合剂(例如EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物)，w/w，约0.279％的表面活性(例如 SLS)，w/w，约17.73％醇(例如SDA 3C)，w/w，约0.093％粘液溶解剂(例如， N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w，足量至约pH8.0的酸(例如盐酸)；和/或足量至 100％的载体(例如水性载体，包含过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水)或。一个实施方案还可以包括约0.00037％，w/w的视觉指示剂(例如FD&C蓝1号)。

本公开的一个或多个实施方案包括43.92％离液剂(例如胍硫氰酸盐)，w/w， ±10％，2.65％缓冲剂(例如Tris)，w/w，±10％，0.81％螯合剂(例如EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物)，w/w，±10％，0.279％表面活性剂(例如SLS)，w/w， ±10％，17.73％醇(例如SDA3C或95％乙醇，v/v，±10％和5％异丙醇，v/v， ±10％的混合物)，w/w，±10％，0.093％粘液溶解剂(例如N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w，±10％，和/或足量至pH8.0酸(例如盐酸)±10％，与足量至100％的载体(例如，水性载体，优选过滤水、纯化水、蒸馏谁和/或去离子水)。一个实施方案还包括0.00037％，w/w，±10％视觉指示剂(例如，FD&C蓝1号)或其等价物(例如，0.185％w/w±10％的、0.2％w/w±10％的视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。在一个实施方案中，各组分的量，±10％，进一步是(限于所列举的量)±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选±5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。

在至少一个实施方案中，组合物包括约43.92％硫氰酸胍，w/w，约 2.65％TRIS，w/w，约0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，约 0.279％SLS，w/w，约17.73％SDA 3C，w/w，约0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸， w/w，约1.08％盐酸37％，w/w，或它们的等价物，或足量至pH约8.0的盐酸，和足量至100％，w/w的水。该组合物可包含约0.00037％w/w的FD&C蓝1号 (或0.185％w/w、0.2％w/w的(在水中)其浓缩物)，和约32.602％的水，w/w。

在一些实施方案中，组合物可以基本上不含或没有微生物(例如，细菌、真菌和/或病毒)污染。在一些实施方案中，组合物可具有小于或等于(约)100cfu/g 的细菌或细菌污染物。在一些实施方案中，组合物可具有小于或等于(约)99、 98、97、96、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、 25、20、15、10或5cfu/g的细菌或细菌污染。在一些实施方案中，组合物可具有小于或等于(约)100cfu/g的真菌(或多个真菌，例如酵母和/或霉菌)或真菌污染。在一些实施方案中，组合物可具有小于或等于(约)99、98、97、96、95、 90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或 5cfu/g的真菌(或多种真菌，如酵母和/或霉菌)或真菌污染。如本文所用，“cfu/g” 是指每克((最终和/或液体)组合物的菌落形成单位(一种或多种微生物))。

本公开的说明性实施方案呈现于下表1中。表1描述了说明性组合物的成分，以及所述成分的用途、功能和/或活性。

表1 表1.1给出了本发明组合物的另一种说明性制剂。

成分	％w/w
		净化水	34.12
硫氰酸胍	43.92
		Tris/Trizma碱	2.65
EDTA(二水合二钠盐)	0.81
		SLS	0.279
SDA 3C	17.73
		FDC蓝色1号	0.00037
HCl	0.4
		N-乙酰基-L-半胱氨酸	0.093
批次总计	100％

表1.1

本公开的其他特征可以从美国专利序列号7,482,116中获知，其全部内容通过引用并入本文。

试剂盒

一些实施方案包括试剂盒，例如生物样品保存试剂盒。特别地，在一个或多个实施方案中，本发明的组合物可以并入试剂盒中。试剂盒可包括例如本文公开和/或描述的组合物和样品收集装置。在至少一个实施方案中，组合物可以置于样品收集装置的一部分中。说明性的样品收集装置可包括具有样品收集部分的容器或小瓶(例如管)。例如，容器可包括至少部分地界定内部隔室的外壁。内部隔室可含有可向其添加生物样品的组合物。或者，可以将样品添加到隔室中，并将组合物添加到收集后的样品中。例如，该装置可包括组合物分配器，用于在样品收集前或样品收集后将组合物添加到隔室中。在至少一个实施方案中，分配器可包括用于封闭或密封设备的开口的帽。开口可以通向隔室或与隔室流体连通。盖子可以具有用于保持组合物的隔室，直到它被添加到容器的隔室中。

一些实施方案可包括试剂盒，其包含生物样品收集装置(或容器)和本公开的组合物。在至少一个实施方案中，组合物可以置于装置的一部分中。例如，在一些实施方案中，组合物可以设置在装置的盖子或盖子的一部分中。收集装置(或容器)可以配置成接收生物样品(例如，在其内部隔室中)并且将组合物添加到其中。

在一些实施方案中，试剂盒中的组合物可以基本上不含或不含微生物污染 (如上所述)。

在以下申请中描述了各种样品收集装置，其全部内容通过具体参考并入本文：2015年11月25日提交的美国申请序列号14/952,712；2016年8月3日提交的美国临时申请序列号62/370,630；2017年2月1日提交的美国临时申请序列号62/453,459；2017年5月23日提交的美国临时申请序列号62/510,174； 2017年5月30日提交的美国临时申请序列号62/512,594；2017年5月31日提交的美国临时申请序列号62/513,235；2017年7月6日提交的美国临时申请序列号62/529,355；2017年8月2日提交的美国申请序列号15/667,228；2017年 8月3日提交的国际申请序列号PCT/US2017/045352；2017年8月31日提交的美国申请序列号15/692,259；2017年11月22日提交的美国临时申请序列号 62/590,165。

本公开的组合物可以结合到任何前述申请中描述的装置中。本公开的实施方案可包括试剂盒，其包含本文公开和/或描述的组合物，以及任何前述申请中描述的样品收集装置。

制造方法

一些实施方案包括制备本公开的组合物的方法。实施方案可包括提供或获得载体，如本文所述。实施方案可包括向载体中加入适量的一种或多种本文所述的组分或成分(例如，至本文所述的最终浓度)。实施方案可包括向载体中加入所述量的本文所述的一种或多种组分或成分的储备溶液。

至少一个实施方案包括向载体添加离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸、和/或粘液溶解剂。一个或多个实施方案可包括向载体添加视觉指示剂。至少一个实施方案包括向(液体)载体添加离液剂至终浓度为20-50％w/w，缓冲剂至终浓度为0.1-5％w/w，螯合剂至终浓度为0.01-5％w/w，表面活性剂至终浓度为0.01-5％w/w，醇至终浓度为5-25％w/w，酸至pH 6.5-9.5或等效量，和 /或粘液溶解剂至终浓度为0.005-0.25％w/w。至少一个实施方案包括向(液体)载体添加视觉指示剂至终浓度为0.00005-0.5％w/w。载体可以以qs至100％被包含。

至少一个实施方案包括向(液体)载体添加离液剂至终浓度为(约)43.92％w/w，缓冲剂至终浓度为(约)2.65％w/w，螯合剂至终浓度为(约)0.81％w/w，表面活性剂至终浓度为(约)0.279％w/w，醇至终浓度为(约)17.73％w/w，酸至pH(约)6.5- 9.5或至终浓度为(约)0.4％w/w，和/或粘液溶解剂至终浓度为(约)0.093％w/w。至少一个实施方案包括向(液体)载体添加视觉指示剂至终浓度为 (约)0.00037％w/w。载体可以以(约)34.12％或qs至100％被包含。

在一些实施方案中，离液剂可以是或包括胍和/或硫氰酸盐，缓冲剂可以是或包括Tris或Trizma碱，螯合剂可以是或包含EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，表面活性剂可以是或包括SLS，所述醇可以是或包括乙醇和/或异丙醇(例如，SDA 3C)，粘液溶解剂可以是或包括N-乙酰基-L-半胱氨酸，所述酸可以是或包括盐酸，所述载体可以是或包含水，和/或可选的视觉指示剂可以是或包含 FD&C蓝色1号。

制备核酸稳定化和/或保存组合物的方法可包括将载体添加到容器中(例如，向混合罐中加入(过滤的、去离子的)水。在一些实施方案中，载体的最终浓度可为组合物的约34.12％w/w或足量至100％。

在一些实施方案中，可以在将一种或多种另外的组分或成分添加到载体之前启动混合器。在一些实施方案中，可以在将一种或多种另外的组分或成分添加到载体后启动混合器。在一些实施方案中，混合器可以设定为2-8的速度设定，优选3-7，更优选4-6，更优选5，和/或2-8的扫描设定，优选3-7，更优选4-6，更优选5。在一些实施方案中，在将一种或多种另外的组分或成分添加到载体之前，可以将载体加热至合适的混合温度。在一些实施方案中，在将一种或多种另外的组分或成分添加到载体后，可以将载体加热至合适的混合温度。在一些实施方案中，合适的混合温度可以是(约)55-95±5°F，优选60-90±5°F，更优选65-85±5°F，还更优选70-80±5°F，最优选75±5°F。

在一些实施方案中，可以将合适量的离液剂(例如，硫氰酸胍)添加到载体中(例如，至最终浓度为组合物的约43.92％w/w)。在一些实施方案中，离液剂可以被混合一段时间(例如，30-300分钟，优选60-240分钟，更优选120-180 分钟，更优选140-160分钟，最优选150分钟，或直到离液剂溶解在载体中的 (溶液中)。

在一些实施方案中，可以将合适量的缓冲剂(例如，Tris或Trizma碱)添加至载体(例如，至最终浓度为组合物的约2.65％w/w)。在一些实施方案中，缓冲剂可以被混合一段时间(例如，1-90分钟，优选5-60分钟，更优选10-45，还更优选12-30分钟，还更优选15-25分钟，最优选(约)20分钟，或直至缓冲剂溶解在载体中的(溶液中)。

在一些实施方案中，可以将合适量的螯合剂(例如，EDTA、EDTA二钠盐、 EDTA二钠(盐)二水合物)添加到载体中(例如，至最终浓度为组合物的约 0.81％w/w)。在一些实施方案中，螯合剂可以被混合一段时间(例如，1-90分钟，优选5-60分钟，更优选10-45，还更优选12-30分钟，还更优选15-25分钟，最优选(约)20分钟，或直至螯合剂溶解在载体中的(溶液中)。在至少一个实施方案中，缓冲剂和螯合剂可以(大约)同时、同期、伴随和/或(基本上)并行(或同时)一起添加到载体中，有或没有预先混合在一起。在一些实施方案中，缓冲剂和螯合剂可以分别加入载体中。

在一些实施方案中，可以将合适量的表面活性剂(例如，SLS)添加到载体中 (例如，至最终浓度为组合物的约0.279％w/w)。在一些实施方案中，表面活性剂可以混合一段时间(例如，1-90分钟，优选5-60分钟，更优选10-45，还更优选15-35分钟，还更优选20-30分钟，最优选(约)25分钟，或直到表面活性剂溶解在载体中的(溶液中)。

在一些实施方案中，可以将合适量的醇(例如，乙醇，乙醇和另一种化学品例如异丙醇的混合物，或SDA，优选SDA 3C)添加到载体中(例如，至终浓度为组合物的约17.73％，w/w)。在一些实施方案中，醇可以被混合一段时间(例如，5-90分钟，优选10-75分钟，更优选15-60，还更优选25-45分钟，还更优选30-40分钟，最优选(约)35分钟，或直至醇溶解在载体中(的溶液中)。

在一些实施方案中，可以向载体中添加适量的任选的视觉指示剂(例如，着色剂、染料，优选蓝色染料，例如FD&C蓝1号)(例如，到最终浓度为组合物的约0.00037％w/w)。在一些实施方案中，视觉指示剂可以被混合一段时间(例如，5-90分钟，优选10-60分钟，更优选15-45，还更优选10-30分钟，还更优选15-25分钟，最优选(约)20分钟，或直到醇溶解在载体中(的溶液中)。

在一些实施方案中，可以将合适量的酸(例如，盐酸)添加到载体中(例如，至最终浓度为组合物的约0.4％w/w或组合物的pH为8.0)。在一些实施方案中，酸可以被混合一段时间(例如，5-90分钟，优选10-60分钟，更优选15-45，还更优选10-30分钟，还更优选15-25分钟，最优选(约)20分钟，或直至酸溶解 (在溶液中)在载体中和/或混合物在所需pH下平衡。

在一些实施方案中，合适量的粘液溶解剂(或还原剂)(例如，N-乙酰半胱氨酸，N-乙酰基-L-半胱氨酸)可被加入到载体中(例如，至最终浓度为组合物的约 0.093％w/w)。在一些实施方案中，酸可以被混合一段时间(例如，5-90分钟，优选10-60分钟，更优选15-45，还更优选10-30分钟，还更优选15-25分钟，最优选(约)20分钟，或直到酸溶解(在溶液中)在载体和/或所述混合物在所需的 pH达到平衡。

表3中列出了一系列说明性的制造批次程序。

表3

质量控制测试可以在制造期间的任何合适的点进行。例如，在完成每批的批量生产过程后，使用清洁和消毒，批准和适当的工具无菌地从散装混合罐中获得两(2)个样品(每个约4盎司)，以获得以下各位置的样品：靠近罐中心的批料顶面、靠近罐壁侧面的批料顶面、罐中心附近的批料中间、罐侧壁附近的批料中间、罐中心附近的批料底部和罐侧壁附近的批料底部。将每个样品置于无菌杯中并标记。

测试每个样品的正确外观、比重和pH。此外，进行测定以测试螯合剂、醇和粘液溶解剂的协调和/或有效性。此外，通过测量总需氧平板计数、酵母和霉菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌测试污染(微生物限度)。表4列出了各种质量控制措施的测试规范。

测试	方法	规格
			表观	SOP 403	可与标准媲美
25℃下比重	SOP 405	仅报告
			pH	STM M403	7.9-8.3
测定-EDTA二钠	Cornerstone	0.73–0.89％
			测定-SDA醇3C	Cornerstone	15.96–19.50％
测定-N-乙酰半胱氨酸	Cornerstone	0.084–0.102％
			微生物限度	STM M429	低于100cfu/g
酵母和霉菌	STM M429	低于100cfu/g
			金黄色葡萄球菌	STM M429	缺乏
铜绿假单胞菌	STM M429	缺乏

表4

在一些实施方案中，该方法可包括将组合物密封在合适的储存容器或样品收集装置的一部分(例如，容器或小瓶(例如，管)的组合物储存部分中)。还在储存容器和样品收集装置中对样品进行受控室温(CRT)和加速(ACC)稳定性测试。

在一些实施方案中，该方法可以产生或得到可以基本上不含或不含微生物污染的组合物(如上所述)。

使用方法

一些实施方案包括保存和/或稳定核酸的方法。该方法可以包括：提供含有核酸的生物样品，并将本公开的组合物与生物样品组合。在至少一个实施方案中，生物样品可以是含粘蛋白的体液或组织，例如痰或唾液。该方法可包括降低含粘蛋白的体液或组织的粘度(例如，通过用粘液溶解剂或还原剂还原粘蛋白固有的二硫键)。

在至少一个实施方案中，核酸是DNA。在一些实施方案中，组合物可稳定核酸或DNA(例如，抗降解)。在一些实施方案中，组合物可以使核酸或DNA 稳定第一段时间。在一些实施方案中，第一时间段可以大于或等于约14天、 30天、60天、90天、120天、240天、300天或365天。在一些实施方案中，该组合物可在室温下、-20℃至50℃或其它合适的温度或温度范围稳定核酸或 DNA所述第一段时间。在一些实施方案中，组合物可以稳定第二段时间。在一些实施方案中，第二时间段可以大于或等于约12个月、18个月、24个月、30 个月或36个月。在一些实施方案中，该组合物可在室温下、-20℃至50℃或其它合适的温度或温度范围稳定所述第二段时间。

至少一个实施方案包括从痰中回收核酸的方法，包括：i)从受试者获得痰， ii)使痰与本公开的组合物接触以形成样品混合物，iii)任选地使所述混合物与蛋白酶接触，和iv)从混合物中回收核酸。

在一些实施方案中，当以合适的量添加至生物样品时，所述组合物不显著抑制或干扰随后的核酸分析，例如DNA扩增(通过PCR)、(下一代)测序等。

样品采集

本公开的一些实施方案包括获得、提供和/或收集生物样品(例如，来自受试者，例如人受试者)。在一些实施方案中，生物样品可以是或包含(人)唾液。可以无菌收集(人)样品(以避免(微生物)污染)。在一个或多个实施方案中，可以将样品收集到样品收集装置或其样品容器中。在一些实施方案中，样品收集装置或容器可以是试剂盒的一部分和/或可以包括本公开的组合物。实施方案可包括使样品与本公开的组合物接触。

DNA提取和分析：

本公开的一些实施方案包括从生物样品中提取核酸。以下是可以适合与本公开的组合物一起使用的各种提取模式或提取方法的非详尽列表或描述。

提取化学

有机-苯酚氯仿提取仍然是研究和临床实验室中使用的一种机制，并且在组织来源方面取决于样品类型。将进行手工苯酚/氯仿提取，然后进行氯仿反萃取以帮助除去任何有机溶剂污染物以提取高分子量基因组DNA。

盐析-家庭酿造和商业盐析化学品广泛用于高分子量核酸提取。该方法需要向唾液样品中加入高浓度的盐，以便在加入乙醇的情况下使核酸崩解。在分析之前，进行一系列洗涤以从样品中除去过量的盐。

固相-各种技术提供商都提供旋转柱和真空歧管解决方案，用于将DNA 与用于核酸纯化的固体支持物结合。一旦将DNA连接到支持物上，就进行一系列洗涤。最终，DNA以小体积从固体支持物上洗脱下来进行分析。旋转柱化学常用于研究和临床实验室。

基于珠子-珠子或(对)磁珠用各种结合部分或通过电荷制备以结合高分子量DNA。通过磁场捕获珠子，因此作为纯化过程的一部分，可以将未结合珠子的任何物质洗掉。洗涤完成后，用溶解DNA的溶液从珠子洗脱核酸，留下珠子，然后通过重新施加磁场除去珠子。在研究和临床环境中，这种方法有小批量和大批量自动化解决方案。

说明性提取

先前从含有本公开组合物的唾液收集试剂盒中提取的10个DNA样品和来自现有唾液收集试剂盒的多达6个样品用于测试。使用本发明的唾液收集试剂盒新收集另外23个样品。23个样品中的每一个一式两份地提取700μl等分试样。进行标准QC以评估DNA的质量。

提取23/23个样品，每个样品重复两次。所有样品的UV分光光度法 (Nanodrop)的平均组合产率为20.4ug(2.8-111.4)。20/23提取物具有高于期望值 1.7的260/280比率，尽管低于1.7的三个样品可能在下游分析中表现良好。所有样品都具有高分子量DNA，如图1A所示。

使用用于MSM1(Chemagen)提取系统的Perkin Elmer试剂提取700ul的唾液样品溶液。通过UV分光光度法(Nanodrop)测定所有样品的浓度。通过测量 A260/A280吸光度比，用UV分光光度法测定纯度的估计值。另外，在琼脂糖凝胶上分析样品以显现样品完整性。每个凝胶上包括分子量施胶梯(L)和大于 50kb的对照样品(C)。用于定性凝胶的Bionexus通用HI-LO DNA标记物(见图 1B)。

分析方法

一些实施方案包括分析提取的核酸。有几种方法可用于分析提取的核酸。以下是用于分析可能适合与本公开的组合物一起使用的提取的核酸的各种方法的非详尽列表或描述。

PCR

聚合酶链式反应(PCR)分析是评估DNA模板的保真度和清洁度的快速且经济的方法。将从所有DNA模板产生一系列PCR反应(不同大小的扩增子)，并通过电泳解析正确大小的扩增产物。PCR扩增子大小的范围将提供有关所有 DNA提取产物的保真度的信息。

qPCR

定量PCR(qPCR)使用双标记的荧光探针来定量PCR扩增子。利用Taqman 化学的等位基因鉴别将用于确定在所有提取方法中收集和提取的所有DNA的特定基因型。将测量每个受试者的基因型，以确定所分析的所有变量的一致性。所有定量测量将一式三份进行。

dPCR

数字PCR(dPCR)是一种新兴技术，用于以限制量和/或限制质量对样品中的基因型进行灵敏检测。将使用相同的Taqman测定来确定提取的每个DNA样品的绝对灵敏度。鉴于dPCR的敏感性，我们将能够确定所分析的每种变体的最终灵敏度。

微阵列

当涉及单个DNA样品的发现和临床分类时，同时测量数十万或数百万个 SNP具有巨大的意义。灵敏度和特异性要求与基于QPCR的分析完全不同，并且SNP检测的方法也不同，因为该分析方法使用基于杂交的机制来鉴定DNA 变体。使用不同DNA提取化学物质处理的供体的呼叫率和SNP一致性将是关键的分析终点。

桑格测序

变体分析的金标准将用于本研究中的所有样品。用于分析的目标区域将覆盖相同的QPCR、dPCR和微阵列扩增子，以跨所有其他分析方法交叉验证基因型。制备高质量桑格碱基调用(以及因此变体)的能力高度依赖于核酸的质量。该方法经常用于临床分析。

NextGen测序

如本文所用，“下一代测序”(NGS)，也称为高通量测序，是指基于非 Sanger的高通量DNA测序技术。通过NGS，数百万甚至数十亿的DNA链可以并行测序，产生显著更高的通量，并最大限度地减少对基因组Sanger测序中常用的片段克隆方法的需求。NGS是用于描述许多不同的现代测序技术或平台的全能术语，包括例如焦磷酸测序、合成测序、连接测序、离子半导体测序和本领域已知的其他测序。

如本领域技术人员所理解的，NGS通常允许比桑格测序更快速且更经济地测序大量DNA和RNA。在NGS中，大量短读取在一次中测序。为此，首先可以将输入样本切割成短片段。这些部分的长度取决于所用的特定测序机制。特定NGS技术的说明性实例包括例如

(Solexa)测序、Roche 454^TM测序、Ion torrent^TM：Proton/PGM测序、SOLiD测序等。

在Illumina测序中，使用100-150bp的读数。将更长一些的片段连接到通用衔接子并使用衔接子退火到载玻片。进行PCR以扩增每次读数，产生具有相同读数的许多拷贝的斑点。然后将它们分成单链进行测序。载玻片充满核苷酸和DNA聚合酶。这些核苷酸被荧光标记，颜色对应于碱基。它们还有一个终止子，因此一次只能添加一个碱基。拍摄载玻片的图像。在每个读取位置，将有一个荧光信号指示已添加的碱基。然后准备载玻片用于下一个循环。移除终止子，允许添加下一个碱基，并去除荧光信号，防止信号污染下一个图像。重复该过程，一次添加一个核苷酸并在其间成像。然后使用计算机检测每个图像中每个位置的碱基，并将这些用于构建序列。所有序列读数的长度相同，因为读取长度取决于所执行的循环次数。

罗氏454^TM测序通常可以测序比

更长的读数。与

一样，它通过在添加碱基时读取光学信号一次对多个读数进行测序来实现此目的。与

一样，DNA或RNA被分段为较短的读数，在这种情况下可达1kb。将通用衔接子添加到末端，并将它们与珠子退火，每个珠子一个DNA片段。然后使用衔接子特异性引物通过PCR扩增片段。然后将每个珠子置于载玻片的单个孔中。因此，每个孔将包含单个珠子，覆盖在单个序列的许多PCR拷贝中。这些孔还含有DNA聚合酶和测序缓冲液。载玻片充满了四种NTP物种中的一种。当该核苷酸在序列中接下来时，将其添加到序列读数中。如果单个碱基重复，则会添加更多碱基。因此，如果我们用鸟嘌呤碱基充满，并且序列中的下一个是G，则将添加一个G，但是如果序列的下一部分是GGGG，则将添加四个G。每个核苷酸的添加释放光信号。检测这些信号位置并用于确定核苷酸添加到哪些珠子中。将这种NTP混合物洗掉。现在添加下一个NTP混合物，并重复该过程，循环通过四个NTP。这种测序产生每个序列读数的图，显示每个核苷酸洗涤的信号密度。然后可以根据每次洗涤中的信号密度计算确定序列。我们从454获得的所有序列读数将是不同的长度，因为每个循环将添加不同数量的碱基。

与

和Roche 454^TM不同，Ion torrent^TM和Ion质子测序不使用光学信号。相反，它们利用了向DNA聚合物中添加dNTP释放H+离子的事实。与其他种类的NGS一样，输入的DNA或RNA是片段化的，这次约为200bp。添加衔接子并将一个分子置于珠子上。通过乳液PCR在珠子上扩增分子。将每个珠子放入载玻片的单个孔中。与Roche 454^TM一样，载玻片上充满了单一种类的dNTP，以及缓冲液和聚合酶，一次一个NTP。每个孔检测pH，因为释放的每个H+离子将降低pH。pH的变化使我们能够确定是否将该碱基及其数量添加到序列读数中。dNTP被洗掉，并且该过程重复循环通过不同的dNTP物质。如果有的话，pH变化用于确定每个循环加入多少碱(如果有的话)。

另外或可替代地，测序可以更一般地通过基于荧光的测序技术和/或任何基于电流的测序技术来执行。基于荧光的测序技术的说明性实例包括掺入与荧光团缀合的核苷酸的任何技术，例如使用基于

的测序方法和系统进行测序。基于电流的测序技术的说明性实例包括任何测序技术(包括链测序方法)，其测量多核苷酸在穿过插入带电膜的孔中时的电流或以其他方式特异性地破坏传感器的电流和/或带电膜。基于电流的测序技术的非限制性实例包括 Nanopore DNA测序系统和Oxford NanoPore Technologies的方法。

Strand测序系统，例如Oxford NanoPore

提供的那些，在确定核酸的拷贝数变异时提供了一些优势，特别是可能含有来自肿瘤和/或癌细胞的DNA(或其他核酸)的样品的拷贝数变异。例如，在链测序技术中，基因组的单个部分被连续测序，这允许直接分析拷贝数变异而不是在分析由将样品核酸切成小片段用于测序的其他测序方法提供的测序数据时可能发生的拷贝数变异的隐含分析。当序列覆盖率低时，这对于实施方案可能是特别有利的。也就是说，在一些实施方案中，低序列覆盖率运行可以返回不完整的基因组数据集。除了每个测序区域的隐含拷贝数之外，还可以从序列数据推断基因组区域的存在和/或不存在。然而，在链测序方法中，产生的长序列读数可以允许更准确地评估拷贝数变异，特别是对于重复或缺失的区域。如果由于测序运行的覆盖率低而无法获得完整序列，则与基于统计学概率(即随机抽样)不表示基因组的哪些部分相比，可能难以确定基因组的哪些部分被缺失(拷贝数变异的形式)。

作为说明性实例，生成具有0.5X覆盖率的数据的测序运行理论上将使一半样品不被表示。使用将核酸“切碎”成小片段以进行测序的测序方法，最终产物可以是代表总参考基因组的约一半的序列文库，其中对齐的参考基因组中散布着一些较小的核酸匹配。另一方面，使用链测序方法，再次在低覆盖度(例如 0.5X)下，结果可以是序列文库，再次表示总参考基因组的约一半。然而，当与参考基因组比对时，匹配部分更长并且可以提供更确定的信息，例如什么序列已被缺失、复制、插入等。这也可能证明是有问题的。虽然基因组的较长的连续部分可以通过链测序方法来表示，但基因组的长连续部分也是未知的。因此，尽管链测序方法可以允许基因组部分的更高清晰度视图，但较小的测序读数具有提供整个基因组的更全局图像的潜力。在这种和其他方式中，链测序可以提供用于分析拷贝数变异的稳健模型。

尽管前述说明了已知的测序技术及其在本文公开的发明方法和系统中的应用，但应该理解，这并不排除尚未发现或未公开的测序方法在本发明的范围内应用。也就是说，在许多实施方案中，测序方法本身不是必需的创造性步骤(除非，例如，通过使用特定测序技术对方法和/或系统进行改进)；相反，由测序方法提供的测序数据和/或如何应用这些数据所做的事情通常包括创造性步骤。因此，应当理解，如果用作所公开的方法或系统中的工具，未来的测序技术(以及本文未明确列出的那些测序技术)包括在本申请的范围内。

另外，任何前述测序技术可以以任何数量或容量使用，并且可以使用任何数量的流动池或其他类似的输入，其影响为每个测序反应/运行提供的测序读数的总数。

新一代测序可能最终成为分析DNA和RNA靶标的标准。通过标准文库制备过程为所有DNA样品创建包括qPCR、dPCR和基于阵列的靶标所覆盖的基因组区域的靶向组。样品在NextGen平台上进行条形码编码和多路复用，以进行变异分析。对数据进行解复用和分析，以便跨所有其他平台直接比较基因型调用。

测试了几种上述和其他基于DNA的下游方法，以评估从使用含有本公开的核酸保存组合物的2mL唾液收集试剂盒收集的样品中提取的DNA的质量和可用性。另外，从两种现有产品中提取的少量DNA样品用于一些下游方法的比较。以下是几种下游测试方法的非详尽列表或描述，包括使用

格式(n＝120SNP/样本)检测单核苷酸多态性(SNP)的

化学，使用

化学(CYP2D6基因)的拷贝数变异(CNV)，全外显子组新一代测序 (WES)(Thermo Fisher)和染色体微阵列分析(CMA)(Affymetrix CytoScanHD)。选择这些方法以包括分子遗传学实验室中使用的各种常用方法。除下游分析外，使用定量PCR(qPCR)测定法测量细菌DNA含量占总DNA的百分比。不受任何理论束缚，已知唾液样品具有高浓度的细菌DNA，其可能是某些方法的干扰物质。

SNP基因分型：

使用

基因分型测定法完成单核苷酸多态性的基因分型。

分析是使用PCR扩增和一对靶向SNP的荧光染料检测器的等位基因鉴别分析。将一种荧光染料附着在检测器上，与第一个等位基因完全匹配 (例如“A”核苷酸)，将不同的荧光染料附着在检测器上，与第二个等位基因完美匹配(例如“C”核苷酸)。在PCR期间，聚合酶将荧光探针释放到溶液中，在 Life Technologies，Inc.中使用终点分析检测荧光探针。具体而言，

技术是用于低体积溶液相反应的纳升流体平台。

技术使用带有 3,072个通孔的显微镜载玻片尺寸的板。每个通孔的直径为300μm和300μm 深，并且用亲水性和疏水性涂层处理。用于单次测定的

化学品在每个通孔中预加载并干燥。

是通过Life Technologies设计和制造获得的。使用Life Technologies的Taqman Genotyper v1.0.1软件测定基因型。

在118-120个SNP/样品上的44个样品上测定总共5234个基因型。44个样品包括从本发明和现有试剂盒中提取的3个样品的重复。来自本发明试剂盒的样品的基因分型非常成功并且超过了对这种类型的测定的已知性能预期。不受任何理论束缚，Taqman基因分型有望成功地对超过99％的样品进行基因分型。在该实验中，99.75％的样品产生基因型(5221/5234)。本发明的溶液DNA提取物和现有提取物之间的基因分型率没有显著差异，分别为99.74％和99.87％。在本发明的溶液DNA提取物和现有提取物中重复的6个样品中，所有基因型都是一致的。

拷贝数变异检测：

拷贝数测定(CYP2D6-Hs00010001_cn)用于检测CYP2D6基因的拷贝数，CYP2D6基因是在药物遗传学中评估的充分表征的CNV。

拷贝数测定采用

MGB探针化学方法评估基因组DNA靶标的拷贝数。该测定使用Applied

7900HT实时PCR仪器和拷贝调用软件来确定拷贝数。将每个样品扩增三次并相对于标准曲线作图以确定拷贝数。

分析33个本发明提取的DNA样品和5个现有提取的样品，以获得 CYP2D6基因中充分表征的拷贝数变体。30/33本发明溶液提取的DNA样品产生CNV结果。5/5竞争者提取样品产生CNV结果。未产生CNV结果的3个样品均来自同一天收集的3个独立样品的同一个人(“B”)。来自同一个体的样品在不同的日子收集并从现有的唾液试剂盒中提取，确实产生了正常的CNV结果，排除了潜在的干扰突变。

全外显子组测序(WES)：

使用Ion AmpliSeq^TM外显子试剂盒制备外显子组文库。该文库试剂盒与 Ampliseq外显子组启动子库结合使用，该库包含12个引物库中约294,000个引物对。然后用试剂处理靶向的所得扩增子以部分消化引物并使扩增子磷酸化。然后将扩增子用条形码连接到离子衔接子并纯化。完成外显子组文库制备后，通过实时PCR定量纯化的富含外显子的文库。然后将定量的文库稀释至 100pM并用于制备模板化的Ion PI^TM Ion Sphere^TM颗粒(ISP)用于测序。然后使用Ion PI^TM Chip v3在Ion Proton System上对样品进行测序。IonHi-Q测序200 V2化学用于测序多达200个碱基对的平均插入文库。

用全部外显子文库制备物(AmpliSeq Exome，Thermo Fisher)评估四个样品，从本发明的唾液试剂盒中提取的3个样品和从现有的唾液试剂盒中提取的一个样品，然后在Ion Proton仪器(Thermo Fisher)上进行下一代测序。通常预期结果是>3000万读数，平均覆盖深度大于80X和>80％的碱基覆盖在≥20X的深度。四个样品中有三个符合这些标准。有一种创造性的唾液试剂盒提取样品不符合三种QC指标中的两种，其具有<3000万读数且小于80X平均深度覆盖。值得注意的是，表现不佳的样品是也没有成功进行CNV分析的相同样品之一。检查DNA QC谱确实表明该样品有任何异常。所有QC指标均已满足。尽管表现不佳，但仍可获得足够的外显子组测序结果用于评估。

染色体微阵列(CMA)：

使用Affymetrix CytoScan HD测定按照制造商的方案进行CMA分析。在 GenomeAnalyzer 3000上扫描样品。染色体微阵列用于以比核型分析更高的分辨率检测染色体畸变。该测定由以下组成：DNA制备，然后与CytoScan HD芯片杂交，该芯片在基因组中含有约270万个CNV。使用Affymetrix ChAS软件评估样品。

从Spectrum唾液试剂盒提取的DNA中选择一个样品。它在染色体微阵列(Affymetrix，CytoScan HD)上成功评估。样品的MAPD值≤0.25(0.18)，SNPQC 值≥15(16.47)，波度值≤0.12(0.09)，QC调用率≥95％(96.8％)。

使用qPCR测定法测定细菌DNA含量：

使用文献中描述的修改方案测定样品中的细菌DNA含量。简而言之，使用连续稀释的大肠杆菌产生标准曲线，以与产生的实时PCR数据进行比较。 PCR引物选自16S rRNA基因的区域，已知其在多种微生物中是保守的，并且在真核生物DNA中未发现。使用拷贝调用软件在ThermoFisher 7900HT仪器上使用实时qPCR测试DNA是否存在16S rRNA基因。

已经认为细菌DNA含量，作为来自唾液收集样品的DNA总量的百分比，可能抑制或降低下游分析的成功率。从本发明的唾液试剂盒中提取的33个 DNA样品和从现有唾液试剂盒中提取的5个DNA样品测试存在的细菌DNA 的百分比。来自竞争者的先前数据估计细菌DNA的百分比约为13％。本发明的唾液试剂盒提取物的平均细菌含量为5.5％(1.1-14.3％)。竞争者唾液试剂盒提取物的平均细菌含量为26％(2.1-96.2％)-14.31％)。

进行一系列上述和/或其他实验测试以支持510K考虑的FDA提交文件，以获得批准在使用多种可用化学方法中的任何一种的核酸提取收集装置中使用本公开的制剂，可用化学方法包括有机、固相、珠粒和盐析提取，以及各种目前使用的分子分析中的任何一种，包括PCR、qPCR、dPCR、微阵列、桑格测序等等，以及所谓的下一代(或NextGen)测序(NGS)，如下表5所示。

表5

结果总结

在所有重复样中从所有样品中成功提取DNA。通常，提取的DNA的大小 (和产率)高。退化的证据很少。来自样品的重复样在产率方面非常可比。此外，假设为同一个体的产量表现相似。SNP的基因分型产生了高质量的结果并达到了预期的产量。来自一个个体的样品，4个单独收集的样品，不符合CNV(n＝ 3)或NGS(n＝1)的QC指标。在本发明的唾液试剂盒DNA提取中，细菌DNA 含量占总DNA的百分比相对较低。

在表6和7中呈现的另一个实例中，使用100个样品来测试本公开的核酸保存组合物(“本发明”)和两个现有产品(“现有1”和“现有2”)的性能。如表6中所示，本发明的“本发明”核酸保存组合物产生了比“现有”产品中更高的DNA平均浓度和更高的总DNA量(产率)。

表6

如表7中进一步所示，用本公开的“本发明”核酸保存组合物处理的样品具有比“现有”产品中的任一种显著更低的非人DNA平均量。

表7

因此，本发明的组合物令人惊讶地显著优于现有的DNA保存产品。特别地，令人惊讶和出乎意料的是，本公开的组合物发挥得很好(例如，产生大量 (人)核酸(DNA)和/或具有或表现出低水平的微生物污染)。令人惊讶和出乎意料的是，本公开的组合物在一些实施方案中提供低量醇的情况下发挥得很好。例如，在一些实施方案中，组合物中包含的醇的量可以比典型的、传统的或现有的核酸保存溶液少(例如，少约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％)。此外，较低量的醇更经济和/或使组合物更易于运输或运输(例如，通过更容易地遵守运输要求和规定，降低挥发性等)。

结论

应当理解，某些实施方案(例如，组合物、试剂盒、方法等)可包括、并入或以其他方式包含在本文公开和/或描述的其他实施方案中描述的特征(例如性质、组分、成分、元素、部件、部分、步骤等)。因此，一个实施方案的各种特征可以与本公开的其他实施方案兼容、组合、包括在其中和/或并入本公开的其他实施方案中。相对于本公开的一个实施方案的某些特征的公开不应被解释为限制所述特征应用或包含到该特定实施方案。而是，应当理解，其他实施方案也可以包括所述特征而不必脱离本公开的范围。此外，除非将特征描述为需要与其组合的另一特征，否则本文所述的任何特征可与本文公开的相同或不同实施方案的任何其他特征组合。

描述的实施方案在所有方面都应被视为仅是说明性的而非限制性的。因此，本发明的范围由所附权利要求而不是前面的描述表示。在权利要求的含义和等同范围内的所有变化都包含在其范围内。在不脱离权利要求限定的本发明的精神和范围的情况下，可以对所示实施方案进行本领域技术人员想到并具有本公开内容的本文所示特征的各种改变和/或修改以及另外应用，并且认为所述各种改变和/或修改以及另外应用在本公开的范围内。虽然本文已经公开了各种特征和实施方案，但是可以考虑其他特征和实施方案。例如，这里没有特别详细地描述众所周知的特征和实施方式，以避免模糊所描述的实施方案的各方面。然而，本文也考虑这些特征和实施方案。

Claims

1.核酸保存组合物，其包含：

载体；

20-50％，w/w，的离液剂；

1-5％，w/w，的缓冲剂；

0.05-2.5％，w/w，的螯合剂；

0.05-2.5％，w/w，的洗涤剂或表面活性剂；

5-25％，w/w，的醇；和

0.005-0.25％，w/w，的粘液溶解剂或还原剂，

其中所述组合物具有7.2-8.8的pH。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中：

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物；

所述洗涤剂或表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述醇包括乙醇和任选地异丙醇；

所述粘液溶解剂或还原剂包括N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)；和/或

所述载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：

39.528％-48.312％，w/w，的所述离液剂；

2.385％-2.915％，w/w，的所述缓冲剂；

0.729％-0.891％，w/w，的所述螯合剂；

0.2511％-0.3069％，w/w，的所述洗涤剂或表面活性剂；

15.957％-19.503％，w/w，的所述醇；和

0.0837％-0.1023％，w/w，的所述粘液溶解剂或还原剂。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中：

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物；

所述洗涤剂或表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述醇包括乙醇和任选地异丙醇；

所述载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：

41.724％-46.116％，w/w，的所述离液剂；

2.5175％-2.7825％，w/w，的所述缓冲剂；

0.7695％-0.8505％，w/w，的所述螯合剂；

0.26505％-0.29295％，w/w，的所述洗涤剂或表面活性剂；

16.8435％-18.6165％，w/w，的所述醇；

0.08835％-0.09765，w/w，的所述粘液溶解剂或还原剂。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中：

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物；

所述洗涤剂或表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述醇包括乙醇和任选地异丙醇；

所述载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：

43.4808％-44.3592％，w/w，的所述离液剂；

2.6235％-2.6765％，w/w，的所述缓冲剂；

0.8019％-0.8181％，w/w，的所述螯合剂；

0.27621％-0.28179％，w/w，的所述洗涤剂或表面活性剂；

17.5527％-17.9073％，w/w，的所述醇；和

0.09207％-0.09393％，w/w，的所述粘液溶解剂或还原剂。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中：

所述离液剂包括硫氰酸胍；

所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物；

所述洗涤剂或表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；

所述醇包括乙醇和任选地异丙醇；

所述载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述醇包括乙醇和任选地异丙醇。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述醇包括约95％乙醇，v/v和约5％异丙醇，v/v的混合物。

11.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其进一步包含足量至7.2-8.8的pH的酸。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述酸包括盐酸。

13.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有7.5-8.5的pH。

14.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有7.5-8.5的pH。

15.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上不含或没有除了所述离液剂、所述洗涤剂或表面活性剂和所述醇以外的抗微生物剂、杀细菌剂和/或抑菌剂。

16.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上不含或没有除了所述离液剂、所述洗涤剂或表面活性剂和所述醇以外的核糖核酸酶的抑制剂。

17.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上不含或没有蛋白酶。

18.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含或没有除了N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)以外的粘液溶解剂和/或还原剂。

19.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其进一步包含染料或着色剂。

20.核酸保存试剂盒，其包含：

包括溶液隔室的样品收集装置；和

根据权利要求1-8中任一项的核酸保存组合物，其置于所述溶液隔室中。

21.稳定核酸的方法，所述方法包括使含有所述核酸的生物样品与权利要求1-8中任一项所述的组合物接触。