CN113702647B - 人生长分化因子15即时检测试剂盒、其制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种人生长分化因子15即时检测试剂盒、其制备方法及其应用,其中,即时检测试剂盒包括碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液、羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液、发光底物工作液和工作清洗液;碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第一表面活性剂和第一抗体稳定剂;羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第二表面活性剂和第二抗体稳定剂。第一抗体稳定剂和第二抗体稳定剂分别使得酶保存液和磁珠保存液在低温下呈固态形式,使得工作液在运输过程中,被保存的更好,从而提高了检测的准确性。第一表面活性剂和第二表面活性剂使得检测的灵敏度较高。
Description
技术领域
本发明涉及试剂盒技术领域,尤其涉及一种人生长分化因子15即时检测试剂盒、其制备方法及其应用。
背景技术
心血管疾病是严重威胁人民生命健康的头号杀手,其致死率比肿瘤及其他疾病还高。近年来,越来越多的研究表明,生长分化因子15(growth differentiation factor,GDF-15)与心血管疾病密切相关,是心血管系统的保护因子。另外,生长分化因子15还与骨缺损、脑梗死、肿瘤与妊娠特发疾病如子痫前期等多种疾病密切相关。生长分化因子15作为转化生长因子β超家族的成员,以分泌蛋白的形式存在。其主要参与调节多种器官的生长分化及组织修复等生物学过程。正常生理状态下,血清中的生长分化因子15含量很低。在多种病理情况下,血清中的生长分化因子15含量会明显升高。人们可以通过试剂盒检测血清中的生长分化因子15含量来对心血管疾病进行诊断。
目前,使用传统的生长分化因子15检测试剂盒对血清中的生长分化因子15含量进行检测时,检测结果的准确性较低。
发明内容
为解决使用传统的生长分化因子15检测试剂盒对血清中的生长分化因子15含量进行检测时,检测结果的准确性较低的问题,本发明提供一种人生长分化因子15即时检测试剂盒、其制备方法及其应用。
为实现本发明目的提供的一种人生长分化因子15即时检测试剂盒,包括碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液、羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液、发光底物工作液和工作清洗液;
碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第一表面活性剂和第一抗体稳定剂;
羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第二表面活性剂和第二抗体稳定剂。
在其中一个具体实施例中,第一表面活性剂包括二乙二醇单月桂酸酯、2,5-二甲氧基四氢呋喃和山梨醇聚氧乙烯醚四油酸酯;
第一抗体稳定剂包括壳聚糖和氨基葡萄糖;
第二表面活性剂包括甲基葡萄糖苷倍半硬脂酸酪、聚乙二醇20000和吐温-20;
第二抗体稳定剂包括聚丙烯延胡索酸酯和Proclin300。
在其中一个具体实施例中,碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液包括碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液和碱性磷酸酶稀释液;
碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液和碱性磷酸酶稀释液按体积比值1:100进行混合。
在其中一个具体实施例中,碱性磷酸酶稀释液包括2.40-2.44g/L三羟甲基氨基甲烷、1.41%盐酸、8.50-9.50g/L氯化钠、9.5-10.5g/L牛血清白蛋白、0.05%Proclin300、1.4-1.6g/L壳聚糖、9.6-10.0g/L氨基葡萄糖和0.01g/L苋菜红。
在其中一个具体实施例中,羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液包括羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液和磁珠稀释液;
羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液和磁珠稀释液按体积比值1:20进行混合。
在其中一个具体实施例中,磁珠稀释液包括5.60-6.00g/L十二水合磷酸氢二钠、0.58-0.60g/L二水合磷酸二氢钠、8.50-9.50g/L氯化钠、9.5-10.5g/L牛血清白蛋白、95-105g/L蔗糖、45-55g/L乳糖、0.1%吐温-20、0.1%Proclin300、60-70g/L聚乙二醇20000和2.95-3.05g/L聚丙烯延胡索酸酯。
在其中一个具体实施例中,还包括人生长分化因子15校准品和质控品;
人生长分化因子15校准品包括浓度分别为1500pg/mL、750pg/mL、250pg/mL、50pg/mL、25pg/mL和0pg/mL的人生长分化因子15蛋白溶液;
质控品包括浓度分别为600pg/mL和200pg/mL的人生长分化因子15蛋白溶液。
在其中一个具体实施例中,工作清洗液包括1.15-1.25g/L三羟甲基氨基甲烷、0.07%盐酸、8.95-9.05g/L氯化钠、0.05%吐温-20、0.08-0.12g/L聚氧丙烯硬脂酸酯和0.1%Proclin300。
基于同一构思的一种上述任一具体实施例提供的人生长分化因子15即时检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
制备所述检测试剂盒的碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液:将碱性磷酸酶进行氧化;向氧化后的所述碱性磷酸酶的溶液中加入抗人生长分化因子15抗体,使氧化后的所述碱性磷酸酶标记所述抗人生长分化因子15抗体;将标记有所述碱性磷酸酶的所述抗人生长分化因子15抗体加入碱性磷酸酶稀释液中;
制备所述检测试剂盒的羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液:对磁珠进行清洗;将清洗完的所述磁珠进行活化;向活化后的所述磁珠中加入所述抗人生长分化因子15抗体,使所述磁珠包被所述抗人生长分化因子15抗体;对包被所述抗人生长分化因子15抗体的所述磁珠进行清洗;向清洗完的包被所述抗人生长分化因子15抗体的所述磁珠内加入磁珠稀释液。
基于同一构思的一种上述任一具体实施例提供的人生长分化因子15即时检测试剂盒的应用,同时将待检测样品和检测试剂盒的碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液加入到检测试剂盒的羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中,形成免疫复合物,反应时长为3-6min;再将工作清洗液滴入免疫复合物中进行清洗,清洗次数为3-5次;向清洗后的免疫复合物滴入检测试剂盒的发光底物工作液,整个反应时长为450-600s。
本发明的有益效果:本发明的即时检测试剂盒采用酶促化学发光-双抗体夹心法,分别使用碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液和羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液,加入样品后,通过抗原抗体的反应,形成免疫复合物,经过温育,洗涤去除未结合的物质后,加入发光底物工作液,免疫复合物上的碱性磷酸酶会催化发光底物反应产生光信号,发光值与样本中人生长分化因子15的浓度成正比,样本内人生长分化因子15的含量由仪器内所储存的校准曲线转换人生长分化因子15的浓度。其中,碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第一表面活性剂和第一抗体稳定剂。羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第二表面活性剂和第二抗体稳定剂。第一抗体稳定剂和第二抗体稳定剂分别使得碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液和羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液在2-8℃呈固态形式,进而使得工作液在运输途中不易吸附在封口膜上,使得工作液在运输过程中,保存的更好,从而提高了检测的准确性。无需在运输过程中再使用磁铁固定磁珠,避免了磁珠长时间聚集,从而避免了磁珠结块,从而提高了检测结果的准确性。在室温下,工作液会恢复成液态形式,以便于对样品进行检测。第一表面活性剂和第二表面活性剂使得检测的灵敏度较高。使用碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液和羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液检测样本中人生长分化因子15的浓度,重复性在3%以内,线性在[4.0~1600]pg/mL区间内,线性相关系数应不低于0.9990,且在线性区间[4.0-50]pg/mL内,绝对偏差应在±1.0ng/mL范围内;在线性区间[50-1600]pg/mL内,相对偏差应在±3%范围内,准确度为101.37%。2-8℃下可进行长期保持,能稳定2年,37℃老化试验,能稳定保存13天。
附图说明
图1是本发明一种人生长分化因子15即时检测试剂盒的校准曲线图;
图2是本发明一种人生长分化因子15即时检测试剂盒中试剂条一具体实施例的结构示意图。
具体实施方式
为了进一步地理解本发明,下面对本发明的优选实施方案进行描述,但是应当理解,这些描述只是为了进一步说明本发明的特征和优点,而不是对本发明权利要求的限制。
本发明的一种人生长分化因子15即时检测试剂盒包括碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液、羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液、发光底物工作液和工作清洗液。其中,碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第一表面活性剂和第一抗体稳定剂。羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第二表面活性剂和第二抗体稳定剂。
在此实施例中,采用酶促化学发光-双抗体夹心法,分别使用碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液和羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液,加入样品后,通过抗原抗体的反应,形成免疫复合物,经过温育,洗涤去除未结合的物质后,加入发光底物工作液,免疫复合物上的碱性磷酸酶会催化发光底物反应产生光信号,发光值与样本中人生长分化因子15的浓度成正比,样本内人生长分化因子15的含量由仪器内所储存的校准曲线转换人生长分化因子15的浓度。其中,碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第一表面活性剂和第一抗体稳定剂。羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第二表面活性剂和第二抗体稳定剂。第一表面活性剂包括二乙二醇单月桂酸酯、2,5-二甲氧基四氢呋喃和山梨醇聚氧乙烯醚四油酸酯,第一抗体稳定剂包括壳聚糖和氨基葡萄糖,第二表面活性剂包括甲基葡萄糖苷倍半硬脂酸酪、聚乙二醇20000和吐温-20,第二抗体稳定剂包括聚丙烯延胡索酸酯和Proclin300。第一抗体稳定剂和第二抗体稳定剂分别使得碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液和羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液在2-8℃呈固态形式,进而使得工作液在运输途中不易吸附在封口膜上,使得工作液在运输过程中,保存的更好,从而提高了检测的准确性。无需在运输过程中再使用磁铁固定磁珠,避免了磁珠长时间聚集,从而避免了磁珠结块,从而提高了检测结果的准确性。在室温下,工作液会恢复成液态形式,以便于对样品进行检测。第一表面活性剂和第二表面活性剂使得检测的灵敏度较高,可达4.0pg/mL。使用碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液和羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液检测样本中人生长分化因子15的浓度,重复性在3%以内,线性在[4.0~1600]pg/mL区间内,线性相关系数应不低于0.9990,且在线性区间[4.0-50]pg/mL内,绝对偏差应在±1.0ng/mL范围内;线性区间[50-1600]pg/mL内,相对偏差应在±3%范围内,准确度为101.37%。2-8℃下可进行长期保持,能稳定2年,37℃老化试验,能稳定保存13天。
需要指出的是,抗人生长分化因子15抗体购于Medix Biochemica公司, 浓度为4mg/mL。人生长分化因子15抗原购于近岸蛋白质科技有限公司,浓度为3mg/mL。碱性磷酸酶购于武汉全臻生物科技有限公司,浓度为18.45mg/mL。羧基磁珠购于英潍捷基(上海)贸易有限公司,浓度为10mg/mL。发光底物工作液购于湖州英创生物科技有限公司,发光底物工作液中含有发光增强剂球状牛血清白蛋白和Gemini表面活性剂。Gemini表面活性剂溶液表面上的排列更紧密,表面能更低,具有更高的表面活性,从而可增加碱性磷酸酶化学发光底物在水溶液中的溶解性,促进化学发光反应速率,并且具有更低的临界胶束浓度(cmc值),使用量低避免产生泡沫。将Gemini表面活性剂和牛血清白蛋白配合使用,显著地增强了发光信号,进而显著增强了检测的灵敏度。十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠、氯化钠、蔗糖、酪蛋白钠、肼黄、果绿、乳糖、吐温-20、曲拉通-100、甘油、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、2-(N-吗啉)乙磺酸、乙二醇、盐酸、高碘酸钠和硼氢化钠等常规化学试剂购于国药集团化学试剂有限公司。1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、牛血清白蛋白、Proclin-300、氨基葡萄糖(CAS:3416-24-8)、2,5-二甲氧基四氢呋喃(CAS:696-59-3)和聚乙二醇20000(CAS:25322-68-3)等购于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。苋菜红(标准溶液)购于天津市光复精细化工研究所。壳聚糖(CAS:9012-76-4)购于Macklin。山梨醇聚氧乙烯醚四油酸酯、甲基葡萄糖苷倍半硬脂酸脂(CAS:68936-95-8)、二乙二醇单月桂酸脂(CAS:141-20-8)和聚氧丙烯硬脂酸酯(CAS:25190-52-7)购于上海花王有限公司。聚丙烯延胡索酸酯采用了《吴永超、郑启新和郭晓东等。聚丙烯延胡索酸酯的合成、交联及生物力学、体外降解检测[J]。生物骨科材料与临床研究,2003。》该文章中的化合物。所用检测仪器为北京普朗新技术有限公司生产的普朗PHX-60化学发光免疫分析仪(京械注准20172400562)。
在本发明一具体实施例中,碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液包括碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液和碱性磷酸酶稀释液。碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液和所述碱性磷酸酶稀释液按体积比值1:100进行混合。在碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中碱性磷酸酶与抗人生长分化因子15抗体的浓度的比值为1:1。碱性磷酸酶稀释液包括2.40-2.44g/L三羟甲基氨基甲烷、1.41%盐酸、8.50-9.50g/L氯化钠、9.5-10.5g/L牛血清白蛋白、0.05%Proclin300、1.4-1.6g/L壳聚糖、9.6-10.0g/L氨基葡萄糖和0.01g/L苋菜红。此处,需要指出的是,1.41%盐酸是指盐酸在碱性磷酸酶稀释液中体积分数为1.41%,0.05%Proclin300是Proclin300在碱性磷酸酶稀释液中体积分数为0.05%。
50mM酶缓冲液的制备:加入0.079g碳酸钠、0.147g碳酸氢钠和0.5g二乙二醇单月桂酸脂,使用纯净水定容至50mL。
0.1M高碘酸钠缓冲液缓冲液的制备:加入0.2139g高碘酸钠、0.1mL2,5-二甲氧基四氢呋喃和0.05g山梨醇聚氧乙烯醚四油酸酯,使用纯净水定容至10mL。
碱性磷酸酶稀释液的制备:向容量瓶内加入2.40-2.44g三羟甲基氨基甲烷、1.41mL盐酸、8.50-9.50g/L氯化钠、9.5-10.5g牛血清白蛋白、0.5mLProclin300、1.4-1.6g壳聚糖、9.6-10.0g氨基葡萄糖和0.01g苋菜红,使用纯净水定容至1L。
在本发明一具体实施例中,羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液包括羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液和磁珠稀释液。羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液和磁珠稀释液按体积比值1:20进行混合。在羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中磁珠与抗人生长分化因子15抗体的浓度比值为20:1。磁珠稀释液包括5.60-6.00g/L十二水合磷酸氢二钠、0.58-0.60g/L二水合磷酸二氢钠、8.50-9.50g/L氯化钠、9.5-10.5g/L牛血清白蛋白、95-105g/L蔗糖、45-55g/L乳糖、0.1%吐温-20、0.1%Proclin300、60-70g/L聚乙二醇20000和2.95-3.05g/L聚丙烯延胡索酸酯。此处,需要指出的是,0.1%吐温-20是吐温-20在磁珠稀释液中体积分数为0.1%,0.1%Proclin300是Proclin300在磁珠稀释液中体积分数为0.1%。
磁珠包被缓冲液的制备:向容量瓶内加入9.762g 2-(N-吗啉)乙磺酸、0.1mL曲拉通-100和3.00g甲基葡萄糖苷倍半硬脂酸酪,使用纯净水定容至1L。
磁珠稀释液的制备:向容量瓶内加入5.60-6.00g十二水合磷酸氢二钠、0.58-0.60gg二水合磷酸二氢钠、8.50-9.50gg氯化钠、9.5-10.5g牛血清白蛋白、95-105g蔗糖、45-55g乳糖、1mL吐温-20、1mLProclin300、60-70gg聚乙二醇20000、2.95-3.05g聚丙烯延胡索酸酯,使用纯净水定容至1L。
在本发明一具体实施例中,还包括人生长分化因子15校准品和质控品。人生长分化因子15校准品包括浓度分别为1500pg/mL、750pg/mL、250pg/mL、50pg/mL、25pg/mL和0pg/mL的人生长分化因子15蛋白溶液。质控品包括浓度分别为600pg/mL和200pg/mL的人生长分化因子15蛋白溶液。工作清洗液包括1.15-1.25g/L三羟甲基氨基甲烷、0.07%盐酸、8.95-9.05g/L氯化钠、0.05%吐温-20、0.08-0.12g/L聚氧丙烯硬脂酸酯和0.1%Proclin300。此处,需要指出的是,0.07%盐酸是指盐酸在作清洗液中的体积分数为0.07%,0.05%吐温-20是吐温-20在工作清洗液中体积分数为0.05%,0.1%Proclin300是Proclin300在磁珠稀释液中体积分数为0.1%。
人生长分化因子15校准品的制备:取0.5uL人生长分化因子15抗原,加入999.5ul校准品稀释液,室温混匀,配制成1.5ug/mL母液。之后,使用校准品稀释液,依次倍比将母液稀释成1500pg/mL、750 pg/mL、250 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、0 pg/mL这6个浓度点的人生长分化因子15蛋白溶液,于2-8℃保存。
其中,校准品稀释液的制备过程如下:向容量瓶内加入5.80g十二水合磷酸氢二钠、0.59g二水合磷酸二氢钠、9.00g氯化钠、50.00g蔗糖、5.00g酪蛋白钠、5.00g肼黄、5.00g果绿、1mLProclin300,使用纯净水定容至1L。
质控品的制备:取0.5uL人生长分化因子15抗原,加入999.5ul质控品稀释液,室温混匀,配制成1.5ug/mL母液。之后,使用质控品稀释液,分别稀释母液成200pg/mL浓度的质控品水平1和600 pg/mL的质控品水平2,于2-8℃保存。
其中,质控品稀释液的制备过程如下:向容量瓶内加入5.80g十二水合磷酸氢二钠、0.59g二水合磷酸二氢钠、9.00g氯化钠、50.00g蔗糖、5.00g酪蛋白钠和1mLProclin300,使用纯净水定容至1L。
工作清洗液的制备:向容量瓶内加入1.15-1.25g三羟甲基氨基甲烷、0.70mL盐酸、8.95-9.05g氯化钠、0.5mL吐温-20、0.08-0.12g聚氧丙烯硬脂酸酯、1mLProclin300,使用纯净水定容至1L。
本发明还提供一种上述任一具体实施例提供的人生长分化因子15即时检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
制备碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液:
步骤(1)将碱性磷酸酶进行氧化:取5.00mg 碱性磷酸酶,加入250uL纯净水,再加入500uL 0.1M高碘酸钠缓冲液,30rpm/min,37℃,避光混匀30min形成碱性磷酸酶溶液。取20uL 乙二醇,加入1980uL纯净水中,使其充分混匀形成乙二醇溶液。取500uL乙二醇溶液,加入到碱性磷酸酶溶液中,30rpm/min,37℃,避光混匀10min,制得氧化后的碱性磷酸酶溶液;
步骤(2)碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体:向氧化后的碱性磷酸酶溶液中加入500uL 50mM酶缓冲液,加入5.00mg抗人生长分化因子15抗体,缓慢混匀后,再加入500uL 50mM酶缓冲液,30rpm/min,37℃,避光混匀5h。称取0.0010g硼氢化钠,加入100uL纯净水,待其充分溶液后,加入到氧化后的碱性磷酸酶溶液中,混匀后,于2-8℃,避光静置3h;
步骤(3)碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体的纯化和收集:将碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体溶液加入到G25脱盐纯化柱中,立即加入5mL 0.9%氯化钠溶液,待碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体溶液全部收集完成后,加入等体积的甘油,轻轻混匀,以形成碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液,于-20℃避光保存;
制备碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液:
取5mL碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液,加入495mL碱性磷酸酶稀释液,30rpm/min,2-8℃,避光混匀30min以形成碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液。将碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液置于2-8℃环境下进行避光保存。
制备羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液:
步骤(1)对磁珠进行清洗:取10mL磁珠(浓度为10mg/mL)放于磁力架上,待磁珠全部吸附后,弃上清,加入20mL磁珠包被缓冲液,30rpm/min,室温混匀10min后,将磁珠放于磁力架上,待磁珠全部吸附后,弃上清,如此重复清洗两次,并弃上清;
步骤(2)将磁珠进行活化:称量10.00mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,用1mL磁珠包被缓冲液溶解。待其充分溶解后,加入清洗完到磁珠中,同时加入49.00mL磁珠包被缓冲液,30rpm/min,室温混匀30min。之后,重复上述步骤步骤(1)操作,对活化后的磁珠进行再次清洗;
步骤(3)对磁珠进行标记:向活化后的磁珠中加入5mg抗人生长分化因子15抗体对磁珠进行标记,再加入50mL磁珠包被缓冲液,30rpm/min,室温混匀5h。之后,重复上述步骤步骤(1)操作,对标记后的磁珠进行再次清洗。
制备羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液:
向标记后的磁珠中加入500mL磁珠稀释液,30rpm/min,室温混匀30min,以形成羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液。将羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液置于2-8℃环境中保存。
本发明还提供一种上述任一具体实施例提供的人生长分化因子15即时检测试剂盒的应用,同时将待检测样品和所述检测试剂盒的碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液加入到所述检测试剂盒的羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中,形成免疫复合物,反应时长为3-6min;再将工作清洗液滴入所述免疫复合物中进行清洗,清洗次数为3-5次;向清洗后的免疫复合物滴入所述检测试剂盒的发光底物工作液,整个反应时长为450-600s。人生长分化因子15即时检测试剂盒采用的是试剂条形式,相对于酶联免疫法和荧光免疫层析法等其他方法,操作简单,直接加样后就能上机测试,且通过自主研发的碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液、羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液以及工作清洗液,加入样本后,碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液、羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液和样本的温育时间大大缩短,只需要6 分钟即可达到最佳反应时间,之后的清洗过程,只需要清洗3-5次,每次60秒,即可将未反应的杂质清除,整个测试大大缩短检测时间,达到了即使检测的目的,完全满足心血管疾病等时效性较强的疾病的诊治需要,为患有心血管疾病病人赢得宝贵的治疗时间。
在即时检测试剂盒设置有25个试剂条,每个试剂条的构造均如图2所示,在每个试剂条上设置有13个孔,从试剂条的左端至右端依次为第1号孔、第2号孔、第3号孔、第4号孔、第5号孔、第6号孔、第7号孔、第8号孔、第9号孔、第10号孔、第11号孔、第12号孔和第13号孔。
如图所示,对每个试剂条进行组装:将50μL碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液置于试剂条的第9号孔内,将50μL羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液置于第10孔内,将100μL发光底物工作液置于第11号孔内,将1200μL的工作清洗液等分成三份,分别置于第3孔内、第4孔内、第5孔内。使用时。第1孔可用于承装50μL的待测样品或50uL人生长分化因子15校准品。第13孔为发光杯,发光底物与磁珠在第13孔内反应发光。
校准曲线的建立:使用北京普朗新技术有限公司生产的普朗PHX-60化学发光免疫分析仪(京械注准20172400562),进入校准程序,设置测试参数:在37℃条件下,同时在第1孔吸取50uL人生长分化因子15校准品和第9孔吸取50uL碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液,加入第10孔内,混匀,反应6min。再分别使用第3孔内、第4孔内、第5孔内的工作清洗液清洗第10孔内的磁珠三次,然后,对磁珠进行收集。同时,吸取第11孔内的发光底物工作液加入到第13孔中,反应1min后,读取发光值。根据发光值和人生长分化因子15校准品浓度,建立校准曲线。
样本测试过程如下:使用北京普朗新技术有限公司生产的普朗PHX-60化学发光免疫分析仪(京械注准20172400562),进入样品检测程序,设置测试参数:在37℃条件下,同时在第1孔吸取50uL样本和第9孔吸取50uL碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液,加入第10孔内,混匀,反应6min。再分别使用第3孔内、第4孔内、第5孔内的工作清洗液清洗第10孔内的磁珠三次,然后,对磁珠进行收集。同时,吸取第11孔内的发光底物工作液加入到第13孔中,反应1min后,读取发光值。通过校准曲线,计算得出样品浓度值。
1、根据公开的专利CN112698042A-检测人生长分化因子-15的荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用中所提到人生长分化因子-15检测试剂盒制备方法,制备相同的试剂盒作为比对试剂盒,使用对应的荧光免疫分析仪进行检测。
1.1不同浓度的人生长分化因子15校准品的发光值测试结果如表1,建立校准曲线,如图1所示。
表1
1.2最低检出限
以磷酸盐缓冲盐溶液作为空白样本,用本申请制备的检测条和比对试剂同时测定20次,分别以本申请制备的检测条测试发光值均值和比对试剂测试信号值加上两倍的标准差带入拟合曲线进行回归。结果本申请制备的检测条的最低检出限是4.00pg/mL,比对试剂最低检出限是19.78pg/mL,可见本发明制备的检测条制备方法灵敏度度高。结果见表2。
表2
1.3重复性评价
本发明试剂与比对试剂,重复检测两个水平质控20次,计算CV值,结果表明,本申请制备的试剂条的质控水平1 的CV值为1.01%,质控水平2 的CV值为0.99%;比对试剂条的质控水平1的 CV值为9.03%,质控水平2的 CV值为8.33%。可见本发明制备的检测条制备方法重复性好,结果见表3。
表3
/>
1.4线性测试结果
用磷酸盐缓冲盐溶液稀释浓度为1600pg/ml的样本,稀释比例为1/400、1/320、1/160、1/80、1/40/、1/20、1/10、1/5、1/2和1,以得到10个不同浓度梯度的样品, 分别测试本申请制备的试剂盒和比对试剂盒。每个浓度的样本重复测试3次,分别求出测定结果的均值。以稀释浓度为自变量,以测定结果均值为因变量求出线性回归方程和线性回归系数,根据线性回归方程计算理论浓度与实际浓度的相对偏差和绝对偏差,结果表明,本申请制备的试剂盒,在[4.0~1600]pg/mL区间内,线性相关系数(r)不低于0.9990,且在线性区间[4.0~50]pg/mL内,绝对偏差在±1.0ng/mL范围内;在线性区间[50~1600]pg/mL内,相对偏差在±3%范围内。可见本申请制备的试剂盒的制备方法线性好,结果见表4和表5。
表4:本申请制备的试剂盒的线性测试结果
表5:比对试剂盒的线性测试结果
1.5检测结果的准确性的评价
纯品经对比试剂盒赋值后配制成浓度约为400pg/mL(允许偏差为±10%)的人生长分化因子-15样本(A)加入到血清B中,所加入人生长分化因子-15样本与血清B之间的体积比例为1:19,每份样本各测定3次取平均值。根据以下公式计算结果,可见本发明制备的检测条制备方法回收率在101.37%,准确度好。
R=[c×(V0+V)-C0×V0]÷(V×cs)×1
式中:R为回收率,V为加入A液的体积,V0为血清样本B的体积,c为血清样本加入A液后的检测浓度,c0为血清样本B的检测浓度,cs为A液的浓度。
表6:本申请制备的试剂盒的准确度测试结果
1.6稳定性评价
1.6.1在2-8℃温度下的稳定性:将本申请制备的试剂盒和比对试剂盒同时在2-8℃温度下进行密封保存,分别于每月第一天,检测质控品水平1和质控品水平2的浓度,连续测试3次,求均值,计算偏差。结果表明,本申请制备的试剂盒在2-8℃温度下保存24个月,偏差在7%以内,表明能稳定保存2年。比对试剂盒在2-8℃保存24个月,偏差在20%,表明不能稳定保存2年。结果见表6、表7、表8和表9。
表7:本申请制备的试剂盒的质控品水平1在2-8℃下的稳定性
表8:比对试剂盒的质控品水平1在2-8℃下的稳定性
表9:本申请制备的试剂盒的质控品水平2在2-8℃下的稳定性
表10:比对试剂盒的质控品水平2在2-8℃下的稳定性
1.6.2 进行37℃老化加速时的稳定性
将本申请制备的试剂盒和比对试剂盒,同时放入37℃下进行密封保存。每24小时检测一次质控品水平1和质控品水平2的浓度,连续测试3次,持续13天,求均值,计算偏差。结果表明,本申请制备的试剂盒加速老化13天后,偏差在9%以内,比对试剂盒的偏差超过20%,表明本申请制备的试剂盒稳定性更好。结果见表11和表12。
表11:质控品水平1进行37℃老化加速时的稳定性
表12:质控品水平2进行37℃老化加速时的稳定性
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、“一个具体实施例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对所述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的范围内,根据本发明的技术方案及其发明的构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种人生长分化因子15即时检测试剂盒,其特征在于,包括:碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液、羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液、发光底物工作液和工作清洗液;
所述碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第一表面活性剂和第一抗体稳定剂;
所述羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液中含有第二表面活性剂和第二抗体稳定剂;
所述第一表面活性剂包括二乙二醇单月桂酸酯、2,5-二甲氧基四氢呋喃和山梨醇聚氧乙烯醚四油酸酯;
所述第一抗体稳定剂包括壳聚糖和氨基葡萄糖;
所述第二表面活性剂包括甲基葡萄糖苷倍半硬脂酸酯、聚乙二醇20000和吐温-20;
所述第二抗体稳定剂包括聚丙烯延胡索酸酯和Proclin300;
所述碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液包括碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液和碱性磷酸酶稀释液;
所述碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体保存液和所述碱性磷酸酶稀释液按体积比值1:100进行混合;
所述碱性磷酸酶稀释液包括2.40-2.44g/L三羟甲基氨基甲烷、1.41%盐酸、8.50-9.50g/L氯化钠、9.5-10.5g/L牛血清白蛋白、
0.05%Proclin300、1.4-1.6g/L壳聚糖、9.6-10.0g/L氨基葡萄糖和0.01g/L苋菜红;所述1.41%盐酸是指盐酸在碱性磷酸酶稀释液中体积分数为1.41%,所述0.05%Proclin300是Proclin300在碱性磷酸酶稀释液中体积分数为0.05%
所述羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液包括羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液和磁珠稀释液;
所述羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体保存液和所述磁珠稀释液按体积比值1:20进行混合;
所述磁珠稀释液包括5.60-6.00g/L十二水合磷酸氢二钠、
0.58-0.60g/L二水合磷酸二氢钠、8.50-9.50g/L氯化钠、
9.5-10.5g/L牛血清白蛋白、95-105g/L蔗糖、45-55g/L乳糖、0.1%吐温-20、0.1%Proclin300、60-70g/L聚乙二醇20000和2.95-3.05g/L聚丙烯延胡索酸酯,所述0.1%吐温-20是吐温-20在磁珠稀释液中体积分数为0.1%,所述0.1%Proclin300是Proclin300在磁珠稀释液中体积分数为0.1%。
2.根据权利要求1所述的人生长分化因子15即时检测试剂盒,其特征在于,还包括人生长分化因子15校准品和质控品;
所述人生长分化因子15校准品包括浓度分别为1500pg/mL、750pg/mL、250pg/mL、50pg/mL、25pg/mL和0pg/mL的人生长分化因子15蛋白溶液;
所述质控品包括浓度分别为600pg/mL和200pg/mL的人生长分化因子15蛋白溶液。
3.根据权利要求2所述的人生长分化因子15即时检测试剂盒,其特征在于,所述工作清洗液包括1.15-1.25g/L三羟甲基氨基甲烷、0.07%盐酸、8.95-9.05g/L氯化钠、0.05%吐温-20、0.08-0.12g/L聚氧丙烯硬脂酸酯和0.1%Proclin300,所述0.07%盐酸是指盐酸在作清洗液中的体积分数为0.07%,所述0.05%吐温-20是吐温-20在工作清洗液中体积分数为0.05%,所述0.1%Proclin300是Proclin300在磁珠稀释液中体积分数为0.1%。
4.一种权利要求1至3任一项所述的人生长分化因子15即时检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
制备所述检测试剂盒的碱性磷酸酶标记抗人生长分化因子15抗体工作液:将碱性磷酸酶进行氧化;向氧化后的所述碱性磷酸酶的溶液中加入抗人生长分化因子15抗体,使氧化后的所述碱性磷酸酶标记所述抗人生长分化因子15抗体;将标记有所述碱性磷酸酶的所述抗人生长分化因子15抗体加入碱性磷酸酶稀释液中;
制备所述检测试剂盒的羟基磁珠包被抗人生长分化因子15抗体工作液:对磁珠进行清洗;将清洗完的所述磁珠进行活化;向活化后的所述磁珠中加入所述抗人生长分化因子15抗体,使所述磁珠包被所述抗人生长分化因子15抗体;对包被所述抗人生长分化因子15抗体的所述磁珠进行清洗;向清洗完的包被所述抗人生长分化因子15抗体的所述磁珠内加入磁珠稀释液。
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Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114480626B (zh) * | 2022-03-14 | 2022-10-11 | 青岛大学附属医院 | 一种子痫前期相关的基因及其应用 |
Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000154112A (ja) * | 1998-06-01 | 2000-06-06 | Ajinomoto Co Inc | 新規化粧料組成物 |
CN1644221A (zh) * | 2005-01-26 | 2005-07-27 | 徐小良 | 多孔材料与凝胶的复合材料及其应用 |
CN105126179A (zh) * | 2009-07-14 | 2015-12-09 | 波利皮得有限公司 | 持续释放药物载体组合物 |
CN105548572A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-05-04 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 检测免疫球蛋白d含量的试剂盒、方法及用途 |
CN105842458A (zh) * | 2016-03-24 | 2016-08-10 | 山东盛百灵医药科技有限公司 | 一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法 |
WO2016159960A1 (en) * | 2015-03-30 | 2016-10-06 | Hycor Biomedical, Inc. | Automated immunoanalyzer system for performing diagnostic assays for autoimmune and infectious diseases |
KR101686877B1 (ko) * | 2015-09-01 | 2016-12-16 | 충남대학교산학협력단 | GDF15 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 IgA 신병증 진단 또는 예후 분석용 키트 |
CN206362809U (zh) * | 2016-08-31 | 2017-07-28 | 朱海燕 | 人生长分化因子‑15的检测试纸组件 |
CN107942072A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 肾损伤因子1检测试剂盒 |
CN107966432A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-04-27 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种测定可溶性生长刺激表达基因2蛋白含量的试剂盒及其测试方法 |
JP2019070659A (ja) * | 2018-12-21 | 2019-05-09 | 国立大学法人福井大学 | 子宮肉腫検出用血液マーカー、子宮肉腫検出用キット、および、子宮肉腫診断のためのデータの取得方法 |
CN111638364A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-09-08 | 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 | Gdf15快速定量荧光微球检测装置及其制备方法 |
CN112067824A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-12-11 | 河南沃迈生物科技有限公司 | 一种bnp检测试剂盒 |
CN112255407A (zh) * | 2020-10-12 | 2021-01-22 | 中拓生物有限公司 | 一种新型的血清甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用 |
CN112698042A (zh) * | 2020-12-17 | 2021-04-23 | 北京赛诺浦生物技术有限公司 | 检测人生长分化因子-15的荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用 |
CN113252905A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-08-13 | 北京赛诺浦生物技术有限公司 | 人生长分化因子-15磁微粒化学发光检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8784893B2 (en) * | 2007-02-05 | 2014-07-22 | Carbylan Therapeutics, Inc. | Polymer formulations for delivery of bioactive agents |
KR101838786B1 (ko) * | 2012-09-26 | 2018-03-15 | 율리우스-막시밀리안스 우니버지태트 뷔르츠부르크 | 성장 및 분화 인자 15 (gdf-15)에 대한 모노클로날 항체 |
JO3711B1 (ar) * | 2015-07-13 | 2021-01-31 | H Lundbeck As | أجسام مضادة محددة لبروتين تاو وطرق استعمالها |
EP3356827B1 (en) * | 2015-10-02 | 2023-12-06 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Gdf-15 as a diagnostic marker to predict the clinical outcome of a treatment with immune checkpoint blockers |
-
2021
- 2021-08-31 CN CN202111010718.5A patent/CN113702647B/zh active Active
Patent Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000154112A (ja) * | 1998-06-01 | 2000-06-06 | Ajinomoto Co Inc | 新規化粧料組成物 |
CN1644221A (zh) * | 2005-01-26 | 2005-07-27 | 徐小良 | 多孔材料与凝胶的复合材料及其应用 |
CN105126179A (zh) * | 2009-07-14 | 2015-12-09 | 波利皮得有限公司 | 持续释放药物载体组合物 |
WO2016159960A1 (en) * | 2015-03-30 | 2016-10-06 | Hycor Biomedical, Inc. | Automated immunoanalyzer system for performing diagnostic assays for autoimmune and infectious diseases |
KR101686877B1 (ko) * | 2015-09-01 | 2016-12-16 | 충남대학교산학협력단 | GDF15 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 IgA 신병증 진단 또는 예후 분석용 키트 |
CN105548572A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-05-04 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 检测免疫球蛋白d含量的试剂盒、方法及用途 |
CN105842458A (zh) * | 2016-03-24 | 2016-08-10 | 山东盛百灵医药科技有限公司 | 一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法 |
CN206362809U (zh) * | 2016-08-31 | 2017-07-28 | 朱海燕 | 人生长分化因子‑15的检测试纸组件 |
CN107942072A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-20 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 肾损伤因子1检测试剂盒 |
CN107966432A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-04-27 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种测定可溶性生长刺激表达基因2蛋白含量的试剂盒及其测试方法 |
JP2019070659A (ja) * | 2018-12-21 | 2019-05-09 | 国立大学法人福井大学 | 子宮肉腫検出用血液マーカー、子宮肉腫検出用キット、および、子宮肉腫診断のためのデータの取得方法 |
CN111638364A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-09-08 | 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 | Gdf15快速定量荧光微球检测装置及其制备方法 |
CN112067824A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-12-11 | 河南沃迈生物科技有限公司 | 一种bnp检测试剂盒 |
CN112255407A (zh) * | 2020-10-12 | 2021-01-22 | 中拓生物有限公司 | 一种新型的血清甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用 |
CN112698042A (zh) * | 2020-12-17 | 2021-04-23 | 北京赛诺浦生物技术有限公司 | 检测人生长分化因子-15的荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用 |
CN113252905A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-08-13 | 北京赛诺浦生物技术有限公司 | 人生长分化因子-15磁微粒化学发光检测试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
Combination of Controllably Released Platelet Rich Plasma Alginate Beads and Bone Morphogenic Protein-2 Gene-Modified Mesenchymal Stem Cells for Bone Regeneration;Gabriela Fernandes等;J. Periodontol;20160430;第87卷(第4期);470-480 * |
Identification of growth differentiation factor 15 as a profibrotic factor in mouse liver fibrosis progression;Peng Qi等;Int. J. Exp. Pathol.;20210513;第102卷(第3期);148-156 * |
多发性骨髓瘤患者血清GDF15的检测及临床意义;赵娜;中国优秀硕士学位论文全文数据库;20140515(第05期);第1-32页 * |
多囊卵巢综合征患者血浆GDF-9、GDF-15水平与骨转换生化指标及骨密度参数的关系;薛敏敏等;中国妇幼保健;20181215;第33卷(第24期);第5709-5712页 * |
魏英杰等主编.生物标志物与心力衰竭.中国协和医科大学出版社,2017,(第1版),第250-251页. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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