CN105548572A - 检测免疫球蛋白d含量的试剂盒、方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品;所述试剂R1包括:第一缓冲液、第一电解质、表面活性剂、第一稳定剂、高分子促进剂和第一防腐剂;所述试剂R2包括:第二缓冲液、抗人免疫球蛋白D抗体、第二电解质、第二稳定剂和第二防腐剂;所述免疫球蛋白D校准品包括:第三缓冲液、第三稳定剂、第三防腐剂、抗氧化剂和抗人免疫球蛋白D抗原。本发明还公开一种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒的在检测免疫球蛋白D含量中的用途及一种采用检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D轻链含量的方法。本发明的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒及方法,用于简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量。
Description
技术领域
本发明属于检测免疫球蛋白D含量的技术领域,具体涉及一种检测免疫球蛋白D的试剂盒、方法及用途。
背景技术
免疫球蛋白D(ImmunoglobulinD,IgD)分子量为185KD,半衰期为2.8天,人血清中的含量很低,主要由扁桃体、脾等处浆细胞产生,免疫球蛋白D(IgD)是重链类型为δ(delta)的免疫球蛋白,含量小于总免疫球蛋白的1%,稳定性差,易被热和血液中的蛋白水解酶所降解。免疫球蛋白D始终处于B细胞表面,在早期B细胞应答的初始阶段起关键作用。
IgD升高主要见于慢性骨髓炎、皮肤感染、流行性出血热、胶原性疾病和吸烟者;IgD降低见于原发性无丙种球蛋白血症、硅沉着病、细胞毒药物治疗后。
目前检测IgD的方法主要是酶联免疫法(ELISA)、单项免疫扩散法(SIRD)和免疫比浊法。酶联免疫法该方法为非均相免疫检测系统,测定过程较为繁琐,耗时长,缺少单位测试运行时间,自动化程度不高,批间差和重复性相对较大,需要配备多种专门设备,一定程度上增加了成本。单项免疫扩散法灵敏度相对较高,方法较简便,不易受干扰,但精确度以及特异性较差。
发明内容
本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,可以简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种上述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒的在检测免疫球蛋白D含量中的用途,可用于简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种采用上述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法,可以简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
为了实现上述发明目的,本发明实施例的技术方案如下:
一种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品;所述试剂R1包括:第一缓冲液10~500mmol/L、第一电解质5~50g/L、表面活性剂0.5~50g/L、第一稳定剂0.5~10g/L、高分子促进剂1~100g/L和第一防腐剂1~10g/L;所述试剂R2包括:第二缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v、第二电解质5~50g/L、第二稳定剂0.5~10g/L和第二防腐剂1~10g/L;所述免疫球蛋白D校准品包括:第三缓冲液10~500mmol/L、第三稳定剂5~50g/L、第三防腐剂1~10g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和抗人免疫球蛋白D抗原。
进一步:所述试剂R1的pH为6~9。
进一步:所述试剂R2的pH为6~9。
进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种;和/或,所述第一稳定剂、所述第二稳定剂和所述第三稳定剂均选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种;和/或,所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种;和/或,所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种;和/或,所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种;和/或,所述高分子促进剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种;和/或,所述抗人免疫球蛋白D抗体选自鼠抗人、鸡抗人、兔抗人、羊抗人或牛抗人免疫球蛋白D抗体;和/或,所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
进一步:所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的成分相同。
进一步:所述第三缓冲液为甘氨酸缓冲液。
进一步,所述试剂R1包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、氯化钠5~50g/L、TritonX1000.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙烯醚1~100g/L和叠氮钠1~10g/L,所述试剂R1的pH为6~9;所述试剂R2包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v、氯化钠5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L和叠氮钠1~10g/L,所述试剂R2的pH为6~9;所述免疫球蛋白D校准品包括:甘氨酸缓冲液10~500mmol/L、牛血清蛋白5~50g/L、叠氮钠1~10g/L、二丁基羟基甲苯0.01~10g/L和免疫球蛋白D抗原。
一种如上所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒在检测免疫球蛋白D含量中的用途。
以及,一种采用如上所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法,包括:向待测样品中加入所述试剂R1,所述待测样品的体积为4μL,所述试剂R1的体积为250μL,得到第一混合液,并得到所述第一混合液的吸光度OD1;向所述第一混合液中加入所述试剂R2,所述试剂R2的体积为50μL,得到第二混合液,并得到所述第二混合液的吸光度OD2;使用所述免疫球蛋白D校准品得到标准曲线,根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中免疫球蛋白D的含量。
本发明实施例的有益效果如下:
1、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,使用简便快速,可简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量。
2、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,与进口对比试剂实验表明,本发明的试剂盒中的试剂具有较高的准确度和很好的特异性,能够满足临床快速高通量检测样本的要求,检测效率明显提高。
3、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,使用了经过筛选后的最优化的试剂组合,使得试剂的稳定性大大提高,在2~8℃的环境下,可以稳定存放一年以上,因此在临床应用上具有广阔的前景。
4、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,还具有灵敏度高,可自动化等特点。
5、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒使其具有检测免疫球蛋白D的用途。
6、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法,简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量,检测效率较高,在临床应用上具有广阔的前景。
附图说明
图1是本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的方法的流程图;
图2是本发明的实施例1的免疫球蛋白D含量的检测方法的流程示意图;
图3是本发明的实施例1的检测免疫球蛋白D含量的标准曲线;
图4是本发明的实施例8的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒与国外对比试剂的比较结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图和实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明提供了一种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒。该试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品。
其中,试剂R1包括:第一缓冲液10~500mmol/L、第一电解质5~50g/L、表面活性剂0.5~50g/L、第一稳定剂0.5~10g/L、高分子促进剂1~100g/L和第一防腐剂1~10g/L。
试剂R2包括:第二缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v(相当于抗人免疫球蛋白D抗体的浓度为50~500g/L)、第二电解质5~50g/L、第二稳定剂0.5~10g/L和第二防腐剂1~10g/L。本发明中,w/v表示的意思是单位体积的溶液中所含的溶质质量。
C1抑制剂校准品包括:第三缓冲液10~500mmol/L、第三稳定剂5~50g/L、第三防腐剂1~10g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和抗人免疫球蛋白D抗原。
优选的,试剂R1的pH为6~9。
优选的,试剂R2的pH为6~9。
优选的,试剂R1中,第一缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸Hepes缓冲液中的一种或几种。第一电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种。第一稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。高分子促进剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种。第一防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
优选的,试剂R2中,第二缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸Hepes缓冲液中的一种或几种。抗人免疫球蛋白D抗体选自鼠抗人、鸡抗人、兔抗人、羊抗人或牛抗人免疫球蛋白D抗体。第二电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。第二稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。第二防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
优选的,免疫球蛋白D校准品中,第三缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸Hepes缓冲液中的一种或几种。第三稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。第三防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
更优选的,试剂R1中的第一缓冲液和试剂R2中的第二缓冲液的成分相同。
更优选的,第三缓冲液为甘氨酸缓冲液。
更优选的,该试剂盒包括如下的成分:
试剂R1包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、氯化钠5~50g/L、TritonX1000.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙烯醚1~100g/L和叠氮钠1~10g/L。试剂R1的pH为6~9。试剂R2包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v、氯化钠5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L和叠氮钠1~10g/L。试剂R2的pH为6~9。免疫球蛋白D校准品包括:甘氨酸缓冲液10~500mmol/L、牛血清蛋白5~50g/L、叠氮钠1~10g/L、二丁基羟基甲苯0.01~10g/L和免疫球蛋白D抗原。
本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒使用简便快速,可简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量;具有较高的准确度和很好的特异性,能够满足临床快速高通量检测样本的要求,检测效率明显提高;试剂的稳定性大大提高,在2~8℃的环境下,可以稳定存放一年以上,因此在临床应用上具有广阔的前景;还具有灵敏度高,可自动化等特点。
本发明实施例还提供了一种上述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒的在检测免疫球蛋白D含量中的用途,可以用于简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例还提供了一种采用上述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法。采用本发明的试剂盒检测的方法为免疫比浊法。如图1所示,为本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的方法的流程图。该方法包括如下的步骤:
步骤S10:向待测样品中加入试剂R1,待测样品的体积为4μL,试剂R1的体积为250μL,得到第一混合液,并得到第一混合液的吸光度OD1。
步骤S20:向第一混合液中加入试剂R2,试剂R2的体积为50μL,得到第二混合液,并得到第二混合液的吸光度OD2。
步骤S30:使用免疫球蛋白D校准品得到标准曲线,根据吸光度OD1和吸光度OD2在标准曲线上得到待测样品中免疫球蛋白D的含量。
其中,标准曲线的拟合模式包括:Spline、二次方程、logit-log3p、logit-log4p、logit-log5p或Polygonal。
下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
该检测免疫球蛋白D含量的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
免疫球蛋白D校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的免疫球蛋白D抗原添加到上述其他试剂混合液中,混合得到免疫球蛋白D校准品。本实施例配制6个不同浓度的免疫球蛋白D校准品,其免疫球蛋白D抗原的浓度分别为:0U/L、50U/L、100U/L、200U/L、300U/L和400U/L。将免疫球蛋白D校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。
采用上述试剂盒,通过日立7080全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析。如图2所示,为本发明的实施例1的免疫球蛋白D含量的检测方法的流程示意图。首先,使用免疫球蛋白D校准品在全自动生化分析仪上通过内置logit-log(4p)曲线拟合模式拟合标准曲线。如图3所示,为本发明的实施例1的检测免疫球蛋白D含量的标准曲线。然后,向待测样品中加入试剂R1,待测样品的体积为4μL,试剂R1的体积为250μL,混合得到第一混合液,并在37℃保温5分钟,然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2,试剂R2体积为50μL,得到第二混合液,并在37℃保温5分钟,读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2,在标准曲线上得到待测样品的免疫球蛋白D的含量。检测的主波长为340nm,副波长为700nm。
实施例2
该检测免疫球蛋白D的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
免疫球蛋白D校准品包括如下的成分:
本实施例选用高浓度单点校准品,因此免疫球蛋白D抗原浓度为400U/L。在使用时用生理盐水稀释成6个不同浓度的免疫球蛋白D校准品,其免疫球蛋白D抗原的浓度分别为:0U/L、50U/L、100U/L、200U/L、300U/L和400U/L。然后将免疫球蛋白D校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。
采用上述试剂盒,通过日立7080全自动生化分析仪进行检测分析。检测方法同实施例1。
实施例3
该检测免疫球蛋白D的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
免疫球蛋白D校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的免疫球蛋白D抗原添加到上述其他试剂混合液中,混合得到免疫球蛋白D校准品。本实施例配制6个不同浓度的免疫球蛋白D校准品,其免疫球蛋白D抗原的浓度分别为:0U/L、50U/L、100U/L、200U/L、300U/L和400U/L。将免疫球蛋白D用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。
采用上述试剂盒,通过日立7080全自动生化分析仪进行检测分析。检测方法同实施例1。
实施例4
该检测免疫球蛋白D的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
免疫球蛋白D校准品包括如下的成分:
本实施例选用高浓度单点校准品,因此免疫球蛋白D抗原浓度为400U/L。将免疫球蛋白D校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。在使用时用生理盐水稀释成6个不同浓度的免疫球蛋白D校准品,其免疫球蛋白D抗原的浓度分别为:0U/L、50U/L、100U/L、200U/L、300U/L和400U/L。
采用上述试剂盒,通过日立7080全自动生化分析仪进行检测分析。检测方法同实施例1。
实施例5检测免疫球蛋白D的试剂盒检测低限实验
检测低限定义为样品单次检测可以达到的非空白检测响应量对应的分析物量。通常估计99.7%的可能性:检测低限空白+3S0。计算出3S0和减去空白后的假定代表的最低浓度为C,则本法的检测低限为
对已知浓度样本做线性稀释,得到低值样本。采用实施例1的试剂盒和检测方法,用日立7080生化分析仪测定样本吸光度,不同浓度样本分别作天间检测20次,再计算平均值和空白的标准偏差SD数值,检测结果如表1所示。例如,10U/L组减去空白后的吸光度均值为5.10×10-4A,水的3SD为4.45×10-4。假定这段范围内免疫球蛋白D含量和吸光度值成线性,则计算得到免疫球蛋白D检测低限:10U/L×4.45×10-4/5.10×10-4=8.73U/L。
表1检测免疫球蛋白D的试剂盒检测低限实验数据表
实施例6线性范围检测
将免疫球蛋白D参考标准品用生理盐水稀释,浓度在0~500U/L区间内分成10个浓度。按照实施例1的试剂盒及检测方法,每个浓度样本重复检测3次,结果如表2所示。将检测浓度的平均值与实际浓度进行回收率分析,结果显示偏差均小于10%的,表示线性能达到500U/L。
表2本发明实施例的试剂盒线性范围检测结果
实施例7精密度检测
通过2个不同浓度的免疫球蛋白D血清,来测定本发明的试剂盒(采用实施例1的试剂盒)批内精密度以及批间精密度,结果如表3和表4所示,本发明的试剂盒批内精密度是2.80%和1.92%,批间精密度是4.58%和3.0%。
表3本发明的试剂盒批内精密度
样品浓度 | 100.0U/L | 300.0U/L |
测定均值 | 98.3U/L | 305.2U/L |
标准差 | 2.75 | 5.86 |
批内精密度 | 2.80% | 1.92% |
表4本发明的试剂盒批间精密度
样品浓度 | 100.0U/L | 300.0U/L |
测定均值 | 99.6U/L | 297.2U/L |
标准差 | 4.56 | 8.92 |
批间精密度 | 4.58% | 3.0% |
实施例8
本发明的试剂盒与免疫球蛋白D对比试剂(免疫比浊法,购自DIALAB)对照测定40例临床标本血清,测定结果如表5所示。本实施例试剂盒及测定方法同实施例1,免疫球蛋白D对比试剂按照说明书设定相关参数,使用日立7180全自动生化分析仪对样本进行分析。
表5本发明试剂盒与对照试剂检测值比较结果
线性回归得到的回归方程为y=0.9978x-2.6813,相关系数R2=0.9952。如图4所示,为本发明的实施例8的检测免疫球蛋白D试剂盒与国外对比试剂的比较结果示意图。图4示出了相关性。数据表明,本发明试剂盒与对比试剂相关性很好,说明本发明试剂盒对检测免疫球蛋白D含量具有很好的特异性和准确度。
实施例9抗干扰性试验
本发明试剂盒(采用实施例1的试剂盒)与对比试剂盒同时进行了抗干扰性试验,试验结果如表6所示。加入干扰物后,对各种干扰物的相对误差均在10%以内。对照试剂对各种干扰物的相对误差都超过10%。即使检测样品中存在一定浓度的干扰物包括血红蛋白、胆红素、Vc、甘油三酯等,对本发明试剂盒的测定结果影响很小。
表6本发明的试剂盒抗干扰性试验结果
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包括在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于,包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准品;所述试剂R1包括:第一缓冲液10~500mmol/L、第一电解质5~50g/L、表面活性剂0.5~50g/L、第一稳定剂0.5~10g/L、高分子促进剂1~100g/L和第一防腐剂1~10g/L;所述试剂R2包括:第二缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v、第二电解质5~50g/L、第二稳定剂0.5~10g/L和第二防腐剂1~10g/L;所述免疫球蛋白D校准品包括:第三缓冲液10~500mmol/L、第三稳定剂5~50g/L、第三防腐剂1~10g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和抗人免疫球蛋白D抗原。
2.如权利要求1所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于:所述试剂R1的pH为6~9。
3.如权利要求1所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于:所述试剂R2的pH为6~9。
4.如权利要求1所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于:
所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种;和/或,
所述第一稳定剂、所述第二稳定剂和所述第三稳定剂均选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种;和/或,
所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种;和/或,
所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种;和/或,
所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种;和/或,
所述高分子促进剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种;和/或,
所述抗人免疫球蛋白D抗体选自鼠抗人、鸡抗人、兔抗人、羊抗人或牛抗人免疫球蛋白D抗体;和/或,
所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
5.如权利要求1所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于:所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的成分相同。
6.如权利要求1所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于:所述第三缓冲液为甘氨酸缓冲液。
7.如权利要求1所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒,其特征在于,
所述试剂R1包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、氯化钠5~50g/L、TritonX1000.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙烯醚1~100g/L和叠氮钠1~10g/L,所述试剂R1的pH为6~9;
所述试剂R2包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v、氯化钠5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L和叠氮钠1~10g/L,所述试剂R2的pH为6~9;
所述免疫球蛋白D校准品包括:甘氨酸缓冲液10~500mmol/L、牛血清蛋白5~50g/L、叠氮钠1~10g/L、二丁基羟基甲苯0.01~10g/L和免疫球蛋白D抗原。
8.一种如权利要求1~7任一项所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒在检测免疫球蛋白D含量中的用途。
9.一种采用如权利要求1~7任一项所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法,其特征在于,包括:
向待测样品中加入所述试剂R1,所述待测样品的体积为4μL,所述试剂R1的体积为250μL,得到第一混合液,并得到所述第一混合液的吸光度OD1;
向所述第一混合液中加入所述试剂R2,所述试剂R2的体积为50μL,得到第二混合液,并得到所述第二混合液的吸光度OD2;
使用所述免疫球蛋白D校准品得到标准曲线,根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中免疫球蛋白D的含量。
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