CN1121379C - 具负性激素和/或拮抗剂活性视黄醛衍生物的合成和用途 - Google Patents

具负性激素和/或拮抗剂活性视黄醛衍生物的合成和用途 Download PDF

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Abstract

芳基取代和芳基及(3-氧代-1-丙烯基)-取代的苯并吡喃、苯并噻喃、1，2-二氢喹啉和5，6-二氢萘衍生物具有视黄醛衍生物负性激素和/或拮抗剂样的生物活性。为了预防或降低RAR兴奋剂对于所结合的受体位点的作用，本发明的RAR拮抗剂可以给予哺乳动物包括人类。尤其可以给予或与视黄醛衍生物药物共同给予所述RAR兴奋剂，以便预防或改善由视黄醛衍生物或维生素A或维生素A前体引起的毒性或副作用。所述视黄醛衍生物负性激素可用于加强其它视黄醛衍生物和核受体兴奋剂的活性。例如，视黄醛衍生物负性激素(称为AGN 193109)在体外反式激活测试中有效地增加其它视黄醛衍生物和甾体激素的效力。此外，反式激活测试可以用于鉴定具有负性激素活性的化合物。这些测试方法基于负性激素下行调节设计用来加工组成性转录激活因子结构域的嵌合视黄醛衍生物受体能力。

Description

具负性激素和/或拮抗剂活性视黄醛衍生物的合成和用途
               本发明的范围
本发明涉及具有视黄醛衍生物负性激素(retinoid negative hormone)和/或视黄醛衍生物拮抗剂样生物活性的新的化合物。更准确地说，本发明涉及4-芳基取代苯并吡喃、4-芳基取代苯并噻喃、4-芳基取代1，2-二氢喹啉和8-芳基取代5，6-二氢萘衍生物(它们也可以被取代的3-氧代-1-丙烯基基团所取代)。这些新的化合物具有视黄醛衍生物拮抗剂样的活性，用于治疗或预防视黄醛衍生物和维生素A及维生素A的前体在哺乳动物中引起的毒性，并作为使用视黄醛衍生物治疗哺乳动物的辅助剂，以便预防或改善不需要的副作用。本发明还涉及视黄醛衍生物负性激素用于增加其它视黄醛衍生物和甾体激素的生物活性并抑制非配体结合视黄酸受体基础活性的用途。
              本发明的背景
具有视黄醛衍生物样活性的化合物在本领域内为众所周知的，并在许多美国的和其它国家的专利中和科学出版物中已有描述。视黄醛衍生物样活性用于治疗哺乳动物包括人类，以便治愈或减轻与许多疾病有关的症状为本领域内众所周知和普遍接受。
已知视黄醛衍生物(维生素A及其衍生物)具有广泛的活性，包括在不同的生物系统中对于细胞增生和分化的作用。该活性已经使得视黄醛衍生物用于治疗各种疾病，包括皮肤病和癌症。现有技术已经开发了大量的具有视黄醛衍生物样生物活性的化合物，大量的专利和化学文献介绍了这类化合物。相关的专利文献包括美国专利号4980369，5006550，5015658，5045551，5089509，5134159，5162546，5234926，5248777，5264578，5272156，5278318，5324744，5346895，5346915，5348972，5348975，5380877，5399561，5407937(转让给本申请的同一受让人)，和其中所引用的专利和出版物，它们尤其介绍或涉及具有视黄醛衍生物样生物活性的苯并二氢吡喃、二氢苯并噻喃和1，2，3，4-四氢喹啉衍生物。此外，几个申请是悬而未决的，它们转让给本申请的受让人，它们涉及具有视黄醛衍生物样活性的其它化合物。
美国专利号4740519(Shroot et al.)，4826969(Maignan et al.)，4326055(Loeliger et al.)，5130335(Chandraratna et al.)，5037825(klaus etal.)，5231113(Chandraratna et al.)，5324840(Chandraratna)，5344959(Chandraratna)，5130335(Chandraratna et al.)，公开的欧洲专利申请号0176034A(Wuest et al.)，0350846A(Klaus et al.)，0176032A(Frickel etal.)，0176033A(Frickel et al.)，0253302A(Klaus et al.)，0303915A(Bryceet al.)，英国专利申请GB 2190378A(Klaus et al.)，德国专利申请号DE3715955A1(Klaus et al.)，DE 3602473A1(Wuest et al.)和下列文章：J.Amer.Acad.Derm.15：756-764(1986)(Sporn et al.)，Chem.Pharm.Bull.33：404-407(1985)(Shudo et al.)，J.Med Chem.31：2182-2192(1988)(Kagechika et al.)， Chemistry and Biology of Synthetic Retinoids CRCPress Inc.1990 pp.334-335，354(Dawson et al.)中介绍或涉及包括四氢萘基部分和具有视黄醛衍生物样的或有关的生物活性的化合物。美国专利号4391731(Boller et al.)介绍了用于液晶组成中的四氢化萘衍生物。
Kagechika等人在J.Med.Chem 32：834(1989)中的文章介绍了某些具有视黄醛衍生物样活性的6-(3-氧代-1-丙烯基)-1，2，3，4-四甲基-1，2，3，4-四氢化萘衍生物和相关的黄酮化合物。Shudo等人在Chem.Pharm.Bull.33：404(1985)和Jetten等人在Cancer Research 47：3523(1987)中的文章介绍或涉及其它的3-氧代-1-丙烯基衍生物(查耳酮化合物)和它们的视黄醛衍生物样的或相关的生物活性。
不幸的是，具有视黄醛衍生物样活性的化合物(视黄醛衍生物)在治疗剂量水平下，也引起一些不需要的副作用，包括头痛、畸形发生、粘膜与皮肤的毒性、肌与骨骼的毒性、异常脂质血症(dyslipidemias)、皮肤刺激、头痛和对肝的毒性。这些副作用限制了视黄醛衍生物用于治疗疾病的可接受性和实用性。
在本领域内现在普遍认为：在哺乳动物(和其它生物)中存在两种主要类型的视黄醛衍生物受体。这两种主要类型或家族(family)的受体分别称作RARs和RXRs。在每类型内有亚型：在RAR家族内，其亚型称作RAR-α、RAR-β和RAR-γ，在RXR中，其亚型为：RXR-α、RXR-β和RXR-γ。这两家族受体为转录因子，根据它们的配体结合特异性可以将其彼此区分开。全反式-RA(ATRA)结合并激活一类视黄酸受体(RARs)包括RAR-α、RAR-β和RAR-γ。不同的配体9-顺式-RA(9C-RA)结合并激活RARs和视黄醛衍生物X受体(RXR)家族的成员。
在本领域中也已经确定两种主要的视黄醛衍生物受体类型和几种亚型的分布在哺乳动物的各类组织和器官中是不均匀的。此外，在本领域内已经普遍认为视黄醛衍生物的许多不需要的副作用是受一种或多种RAR受体亚型介导的。因此，在视黄醛衍生物受体上具有兴奋剂样活性的化合物中，对于主要类型或家族之一的特异性或选择性及甚至对于一个受体家族中的一种或多种亚型的特异性或选择性被认为是所需要的药理学性质。
最近，在本领域已经开发与RAR受体结合，而不引起所述应答即由相同受体的兴奋剂引起应答的化合物。因而，结合RAR受体而不引起“视黄醛衍生物”应答的化合物或药物为在生物测定和系统中能够(在某种程度上或多或少地)阻滞RAR兴奋剂的活性。更具体地说，就本领域内的科学和专利文献而言，公开的PCT申请WO 94/14777介绍了某些与RAR视黄醛衍生物受体结合的杂环羧酸衍生物，在该申请中，据说用于治疗某些疾病例如痤疮、牛皮癣、风湿性关节炎和病毒性感染。在Yoshimura等人的文章[J Med.Chem.38：3163-3173(1995)]中公开了类似的内容。Kaneko等人在Med.Chem Res.1：220-225(1991)；Apfel等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：7129-7133 Augusty1992 Cell Biology；Eckhardt等人在Toxicology Letters 70：299-308(1994)；Keidel等人在Molecular and Cellular Biology 14：287-298(1994)；和Eyrolles等人在J.Med.Chem.37：1508-1517(1994)中介绍了对一个或多个RAR视黄醛衍生物亚型上具有拮抗剂样活性的化合物。
除了使用视黄醛衍生物治疗的不需要的副作用外，偶尔也会出现由维生素A或维生素A前体过量引起的严重的疾病，它或者由于服用过量的维生素补剂或者由于摄入含有高含量的所述维生素的某些鱼和动物的肝脏所造成的。具有维生素A过多综合征的慢性或急性毒性包括头痛、脱皮、骨的毒性、异常脂质血症等。近年来，使用维生素A类似物即视黄醛衍生物所引起的毒性已经显而易见，基本概括为维生素A过多综合征的毒性，提示一种常见的生物诱因即RAR激活。这些毒性目前主要通过支持性的方法来治疗并避免进一步与成因因子接触，无论它是肝脏、维生素补剂还是视黄醛衍生物。尽管部分毒性可以随着时间的推移而解除，其它一些(例如早熟性骺板闭合)为永久性的。
一般而言，特定的解毒药为通过药剂用于中毒的最好治疗，然而，在成千上万个化合物中只有大约24个化合物或化合物类型为已知的特异性解毒药。显然，特异性解毒药在治疗维生素A过多症和视黄醛衍生物毒性方面是有价值的。确实随着不断增加的有效力的视黄醛衍生物在临床上使用，用于视黄醛衍生物中毒的特异性解毒药可以挽救许多生命。
            本发明概述
本发明包括式I化合物：
Figure C9619789600111
式1
其中X为S、O、NR’，其中R’为H或1-6个碳原子的烷基，或
X为[C(R1)2]n其中R1独立为H或1-6个碳原子的烷基，及n为0-2之间的整数；
R2为氢、1-6个碳原子的低级烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6个碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6个碳原子的烷氧基或1-6个碳原子的烷硫基；
R3为氢、1-6个碳原子的低级烷基或F；
m为0-3的整数；
o为0-3的整数；
Z为-C≡C-，
-N＝N-，
-N＝CR1-，
-CR1＝N，
-(CR1＝CR1)n’-其中n’为0-5的整数，
-CO-NR1-，
-CS-NR1-，
-NR1-CO，
-NR1-CS，
-COO-，
-OCO-，
-CSO-，
-OCS-；
Y是苯基或萘基或选自吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的杂芳基，所述苯基和杂芳基可选被一个或两个R2基团取代，或
当Z为-(CR1＝CR1)n’-和n’为3、4或5时，则Y代表在该(CR1＝CR1)n’基团和B之间的直接价键；
A为(CH2)q其中q为0-5，具有3-6个碳原子的低级支链烷基，具有3-6个碳原子的环烷基、具有2-6个碳原子和1或2个双键的链烯基，具有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；
B为氢，COOH或其药学上可接受的盐，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低级烷基甲硅烷基，其中R7为烷基、环烷基或含有1-5个碳原子的链烯基，R8为1-10个碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10个碳原子，或5-10个碳原子的环烷基，或R8为苯基或低级烷基苯基，R9和R10独立为氢，1-10个碳原子的烷基，或5-10个碳原子的环烷基，或苯基或低级烷基苯基，R11为低级烷基、苯基或低级烷基苯基，R12为低级烷基，及R13为2-5个碳原子的二价烷基，和
R14为(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-杂芳基，其中所述杂芳基具有选自O、S和N的1-3个杂原子，r为0-5的整数，和
R15独立为H，F，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，N(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10个碳原子的烷基，具有1-10个碳原子的氟代烷基，具有1-10个碳原子和1-3个双键的链烯基，具有1-10个碳原子和1-3个三键的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基独立具有1-6个碳原子。
本发明还包括式101化合物：
Figure C9619789600131
式101
其中X为S、O、NR’，其中R’为H或1-6个碳原子的烷基，或
X为[C(R1)2]n其中R1独立为H或1-6个碳原子的烷基，及n为0-2之间的整数；
R2为氢、1-6个碳原子的低级烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6个碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6个碳原子的烷氧基或1-6个碳原子的烷硫基；
R3为氢、1-6个碳原子的低级烷基或F；
m为0-3的整数；
o为0-3的整数；
Y是苯基或萘基或选自吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的杂芳基，所述苯基和杂芳基可选被一个或两个R2基团取代；
A为(CH2)q其中q为0-5，具有3-6个碳原子的低级支链烷基，具有3-6个碳原子的环烷基、具有2-6个碳原子和1或2个双键的链烯基，具有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；
B为氢，COOH或其药学上可接受的盐，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低级烷基甲硅烷基，其中R7为烷基、环烷基或含有1-5个碳原子的链烯基，R8为1-10个碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10个碳原子，或5-10个碳原子的环烷基，或R8为苯基或低级烷基苯基，R9和R10独立为氢，1-10个碳原子的烷基，或5-10个碳原子的环烷基，或苯基或低级烷基苯基，R11为低级烷基、苯基或低级烷基苯基，R12为低级烷基，及R13为2-5个碳原子的二价烷基，和
R14为(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-杂芳基，其中所述杂芳基具有选自O、S和N的1-3个杂原子，r为0-5的整数，和
R15独立为H，F，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，N(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10个碳原子的烷基，具有1-10个碳原子的氟代烷基，具有1-10个碳原子和1-3个双键的链烯基，具有1-10个碳原子和1-3个三键的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基独立具有1-6个碳原子；
R16为H、1-6个碳原子的低级烷基；
R17为H、1-6个碳原子的低级烷基、OH或OCOR11，和
p为0或1，假如当p为1时，则没有R17取代基，m为0-2的整数。
本发明的化合物用于预防给予视黄醛衍生物以便治疗或预防某些疾病时视黄醛衍生物的某些不需要的副作用。为此，本发明的化合物可以与视黄醛衍生物共同给药。本发明的化合物也用于治疗由于过量服用视黄醛衍生物药物或维生素A或这类药物中毒导致的急性或慢性毒性。
本发明另外涉及在生物系统中(包括哺乳动物)RAR拮抗剂用于阻滞所有或部分RAR受体位点，以便预防或降低在这类受体位点上RAR兴奋剂的作用的用途。更具体地说，本发明涉及用于(a)预防和(b)治疗视黄醛衍生物(包括维生素A或维生素A前体)慢性或急性毒性和视黄醛衍生物治疗中的副作用的RAR拮抗剂的用途。
本发明的一个具体方面，提供治疗哺乳动物病理症状的方法。所治疗的疾病与视黄酸受体活性有关。该方法包括给予哺乳动物能与下列视黄酸受体亚型：RARα、RARβ和RARγ之一结合的视黄醛衍生物拮抗剂或负性激素。以药学有效量给予所述拮抗剂或负性激素，以便提供对抗哺乳动物病理症状的有益的治疗作用。
作为急性或慢性视黄醛衍生物或维生素A中毒的解毒药，可以经肠道即：胃插管或食物/水混合物，或胃肠外例如腹膜内、肌内、皮下或皮肤局部等给予RAR拮抗剂。对于给药途径的唯一的要求是它必须能够传递所述拮抗剂到靶组织。可以单独或与赋形剂混合配制RAR拮抗剂。在经肠道给药的情况下，RAR拮抗剂不必配制成溶液。
作为使用视黄醛衍生物治疗的辅助剂，并且为了预防给予视黄醛衍生物药物的一种或多种副作用，可以类似地经肠道或胃肠外给予RAR拮抗剂。不必以相同的给药途径给予RAR拮抗剂和RAR兴奋剂。其关键是在接触RAR兴奋剂时，足够量的RAR拮抗剂持续地存在于有关组织中。为了预防视黄醛衍生物的毒性，最好在用RAR兴奋剂治疗的同时或预先给予RAR拮抗剂。在许多情况下，将通过不同于兴奋剂的途径给予RAR拮抗剂。例如，通过皮肤局部给予RAR拮抗剂可以预防或改善经肠道给予视黄醛衍生物的不需要的皮肤作用。
本发明的另一个方面是鉴定视黄醛衍生物负性激素的方法。该方法包括下列步骤：获得含有对于结合重组视黄醛衍生物受体转录应答的报告基因的转染细胞，所述重组视黄醛衍生物受体至少具有位于完整的视黄醛衍生物受体的DNA结合结构域C-端的蛋白结构域，测定在未处理转染细胞中报告基因表达的基础水平，使所述未处理的转染细胞在不加入视黄醛衍生物的条件下繁殖，用待检验负性激素活性的视黄醛衍生物处理该转染细胞，测定在处理细胞中报告基因表达的水平，比较处理细胞和未处理细胞中测定的报告基因表达的水平，并鉴定作为视黄醛衍生物负性激素的那些与未处理细胞中测得的报告基因表达的基础水平相比处理细胞中产生的降低水平的报告基因表达的视黄醛衍生物。在本方法一些优选的实施方案中，所述完整的受体为RAR-α、RAR-β和RAR-γ亚型。在另一些实施方案中，所述完整的受体为RXR-α、RXR-β和RXR-γ亚型。所述重组受体也可以是重组RAR或RXR受体。在某些实施方案中，所述重组受体为具有组成性转录激活因子结构结构域嵌合体(chimeric)的视黄醛衍生物受体。该组成性转录激活因子结构域可以包括具有一个净负电荷的许多氨基酸或具有病毒转录激活因子结构域例如单纯性疱疹病毒VP-16转录激活因子结构域的氨基酸序列。在其中所述组成性转录激活因子结构域具有一个净负电荷的实施方案中，所述视黄醛衍生物受体可以是重组体并从中缺失DNA结合结构域，例如对于除了视黄酸应答元件外的顺式-调控元件特异性的DNA结合结构域。这些元件包括雌激素应答元件。优选使所述转染细胞在基本上缺失内源性视黄醛衍生物的生长培养基例如包含活性炭提取血清的生长培养基中繁殖。在该方法中，所述报告基因可以是荧光素酶基因，在此情况下，所述测定步骤可以包括发光法(luminometry)。所述报告基因也可以是β-半乳糖苷酶基因，在此情况下，所述测定步骤将包括β-半乳糖苷酶测定法。所述转染细胞可以是转染的哺乳动物细胞，例如绿猴细胞或人细胞。
本发明的另一个方面为加强给予哺乳动物的甾族化合物超家族受体兴奋剂的药理活性的方法。该方法包括与甾体化合物超家族受体兴奋剂一起给哺乳动物共服包含药学有效剂量的视黄醛衍生物负性激素，以加强所述甾体化合物超家族受体激动剂的药理活性。该药理活性在体外报告基因反式激活测试中例如通过测试抗-AP-1活性是可测定的。所述待加强的药理活性可以是抗增生活性，例如在视网膜色素沉着上皮细胞(retinal pigment epithelium)中可测定的活性类型。所述甾体化合物超家族受体兴奋剂可以是下列任何兴奋剂：视黄醛衍生物受体兴奋剂、维生素D受体兴奋剂、糖皮质激素受体兴奋剂、甲状腺激素受体兴奋剂、过氧化物酶体激活增生剂受体兴奋剂或雌激素受体兴奋剂。所述视黄醛衍生物受体兴奋剂可以是RAR兴奋剂例如全-反式-视黄酸或13-顺式视黄酸。所述视黄醛衍生物受体兴奋剂也可以是RXR兴奋剂。优选的维生素D受体兴奋剂为1，25-二羟基维生素D3。优选的糖皮质激素受体兴奋剂为地塞米松。优选的甲状腺激素受体兴奋剂为3，3’，5-三碘甲状腺氨酸。所述视黄醛衍生物负性激素为RAR-特异性视黄醛衍生物负性激素，它优选具有低于或约等于30nM的离解常数。所述RAR-特异性视黄醛衍生物负性激素的实例包括AGN 193109，AGN 193385，AGN 193389和AGN 193871。含有药学上有效剂量的视黄醛衍生物负性激素的组合物可以同时作为甾体化合物超家族兴奋剂共服，并且在共服前混合。它们也可以作为分开的成分共服。
              附图简介
图1显示AGN 193109的化学结构。
图2A-2F为显示AGN 139109在RARs上抑制ATRA依赖性反式激活作用的系列线图。图2A和2B代表在RAR-α受体上的活性；图2C和2D代表在RAR-β受体上的活性；图2E和2F代表在RAR-γ受体上的活性。在图2A、2C和2E中，空心方形代表视黄酸处理而实心圆形代表AGN 193109处理。在图2B、2D和2F中，单独的线代表用10-8M ATRA和改变浓度的AGN 193109处理后所测定的荧光素酶活性，。
图3A和3B代表用报告质粒ERE-tk-Luc和表达质粒ER-RAR-α转染的和用不同浓度的ATRA(图3A)或AGN 193109(图3B)刺激的CV-1细胞中测定的荧光素酶活性的线图。取值点代表三个独立荧光素酶测定的均数±SEM。使用不同量的共转染ER-RAR-α(0.05，0.1和0.2μg/孔)进行转染的结果在每一个图形中表示。
图4A和4B代表用报告质粒ERE-tk-Luc和表达质粒ER-RAR-β转染的和用不同浓度的ATRA(图4A)或AGN 193109(图4B)刺激的CV-1细胞中荧光素酶活性的线图。取值点代表三个独立荧光素酶测定的均数±SEM。使用不同量的共转染ER-RAR-β(0.05，0.1和0.2μg/孔)进行转染的结果在每一个图形中表示。
图5A和5B代表用报告质粒ERE-tk-Luc和表达质粒ER-RAR-γ转染的和用不同浓度的ATRA(图5A)或AGN 193109(图5B)刺激的CV-1细胞中测定的荧光素酶活性的线图。取值点代表三个独立荧光素酶测定的均数±SEM。使用不同量的共转染ER-RAR-γ(0.05，0.1和0.2μg/孔)进行转染的结果在每一个图形中表示。
图6显示用ERE-tk-Luc报告质粒及单独的ER-RXR-α嵌合体受体表达质粒或与RAR-γ-VP-16表达质粒一起共转染CV-1细胞的ATRA和AGN 193109剂量应答。用ATRA(方形)和AGN 193109(菱形)处理ER-RXR-α共转染细胞。用ATRA(圆形)或AGN 193109(三角形)处理合用ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16共转染的细胞。
图7显示代表用ERE-tk-Luc报告质粒和ER-RAR-γ表达构成物转染的，然后用10-8M的ATRA和表示在横轴上的不同浓度试验化合物处理的CV-1细胞的溶解产物中记录的荧光素酶活性测定值的线图。所述试验化合物为AGN 193109(方形)、AGN 193357(空心菱形)、AGN 193385(圆形)、AGN 193389(三角形)、AGN 193840(实心方形)和AGN 192870(实心菱形)。
图8显示代表用ERE-tk-Luc报告质粒和RAR-γ-VP-16及ER-RXR-α表达构成物转染的，然后用表示在横轴上的不同浓度试验化合物处理的CV-1细胞的溶解产物中记录的荧光素酶活性测定值的线图。所述试验化合物为ATRA(空心方形)、AGN 193109(空心圆形)、AGN 193174(空心三角形)、AGN 193199(实心方形)、AGN 193385(实心圆形)、AGN 193389(倒三角形)、AGN 193840(斜的实心方形)和AGN 193871(半实心菱形)。
图9A、9B和9C用图解法表示利用AGN 193109可以调节RAR(阴影部分)和在反式激活测试的内容中所述负性共激活因子蛋白(-)之间的相互作用的机理。图9A显示负性共激活因子蛋白和正性共激活因子蛋白(+)与RAR的结合平衡。在无配体的情况下，产生报告基因的基础水平的转录。如图9B中所述，加入RAR兴奋剂促进正性共激活因子蛋白与RAR的结合并导致上行调节(upregulated)的报告基因转录。如图9C中所述，加入AGN 193109促进负性共激活因子蛋白与RAR的结合并阻止报告基因的转录。
图10为显示用浓度保持在10-8M的AGN 193109抑制作为AGN191183浓度(10-10-10-12M)的函数的TPA诱导的Str-AP1-CAT表达的条形图。将单独使用AGN 191183进行的试验所获结果以阴影线条表示，而带条纹线条代表合用AGN 193109和AGN 191183处理的结果。
图11用图解法表示利用AGN 193109可以加强RARs和其它核受体家族成员活性的机理。如该图解所述，诱导的RARs(具有AB-C-DEF结构域空心长方形)已经增加了在抗-AP1测试中对RAR配体的敏感性，因为存在于有限的供给物中的负性共激活因子蛋白(ncp)被分离成(sequester)RARs，从而导致两个族群：RAR+ncp和RAR-ncp。RAR-ncp已经增加了对配体的敏感性。非RAR核因子(具有AB-C-DEF结构域的带阴影的长方形)已经增加了对同族配体的敏感性，因为通过AGN 193109的活性已经将ncp分离成RAR。使用标准名称如“AB”(不依赖配体的反式激活结构域)、“C”(DNA结合结构域)和“DEF”(配体调节的反式激活结构域和二聚结构域)指定所述核受体的模式结构域。
图12为显示AGN 193109对于在使用MTV-DR3-Luc报告质粒转染的CV-1细胞中1，25-二羟基维生素D3剂量应答作用的线图。用1，25-二羟基维生素D3(实心方形)、1，25-二羟基维生素D3和10-8M AGN193109(实心三角形)、1，25-二羟基维生素D3和10-7M AGN 193109(实心圆形)处理转染子。
图13为显示AGN 193109(10nM)共服对于1，25-二羟基维生素D3-介导的对TPA诱导的Str-AP1-CAT活性抑制的作用条形图。实心条代表对于单独用1，25-二羟基维生素D3处理的转染细胞中CAT活性的抑制作用。空心条代表对于用混合的1，25-二羟基维生素D3和AGN193109处理的转染细胞中CAT活性的抑制作用。
如14为显示单独的AGN 193109和与AGN 191183的混合物形式对于用RAR-γ和RAR应答MTV-TREp-Luc报告构成物共转染HeLa细胞的作用线图。在该图中介绍的药物处理为：单独的AGN 193109(方形)、与10-10M AGN 191183合用的AGN 193109(菱形)和与10-9M AGN191183合用的AGN 193109。
图15为显示作为EGF(实心方形)的应答，但不作为对单独的限定的培养基应答(空心圆形)的增生的ECE16-1细胞的线图。用实心三角形代表单独用AGN 193109处理的细胞。实心圆形代表用10nMAGN 191183和0-1000nM AGN 193109处理细胞所获得的结果。
图16为显示存在或不存在AGN 191183视黄醛衍生物兴奋剂的情况下，AGN 193109对于CaSki细胞增生的作用的条形图。除了在单独限定培养基(DM)中繁殖的样品(空心条)外，所有的样品组接受20ng/ml的表皮生长因子(EGF)。带条纹条形代表在没有AGN 193109情况下繁殖的样品。实心条形代表在1000nM AGN 193109存在的情况下繁殖的样品。用在该过程中的AGN 191183的浓度被表示在横轴上。
图17为显示AGN 193109加强在视网膜色素上皮(RPE)细胞上ATRA抗增生活性的剂量应答曲线。用实心方形代表单独用ATRA处理的样品。用实心圆形代表用合用的ATRA和AGN 193109(10-7M)处理的样品。用于处理不同样品的ATRA的浓度在横轴上给出。
图18为显示13-顺式-RA和ATRA抑制RPE细胞生长和AGN193109加强13-顺式-RA的抗增生活性的剂量应答曲线。显示在所述剂量应答中的不同样品处理包括单独的13-顺式-RA(实心方形)、与AGN 193109(10-6M)混合的13-顺式-RA(实心圆形)、与AGN 193109(10-8M)混合的13-顺式-RA(实心三角形)和ATRA(实心菱形)。用于所述样品处理中的13-顺式-RA和ATRA浓度表示于横轴上。
图19为显示AGN 193109增强在原始RPE细胞培养物中地塞米松的抗增生活性的剂量应答曲线。显示在所述剂量应答中的不同样品处理包括ATRA(实心方形)、单独的地塞米松(实心圆形)、与AGN193109(10-8M)合用的地塞米松(实心三角形)和与AGN 193109(10-6M)合用的地塞米松(实心菱形)。用于所述样品处理中的地塞米松和ATRA浓度表示于横轴上。
图20为显示AGN 193109增强在原始RPE细胞培养物中甲状腺激素(T3)的抗增生活性的剂量应答曲线。显示在所述剂量应答中的不同样品处理包括ATRA(实心方形)、单独的T3(实心圆形)、与AGN193109(10-8M)合用的T3(实心三角形)、与AGN 193109(10-6M)合用的T3(实心菱形)。用于所述样品处理中的T3和ATRA浓度表示于横轴上。
                   本发明的详细介绍 定义
就本发明而言，RAR拮抗剂定义为结合一个或多个具有Kd低于1微摩尔(Kd＜1μM)的RAR亚型的化合物，然而，它不引起在受体共转染测试中RAR亚型调节基因的显著的转录激活作用。拮抗剂一般为抑制兴奋剂活性的化学试剂。从而，受体拮抗剂的活性一般通过其抑制兴奋剂活性的能力来测定。
RAR兴奋剂定义为结合一个或多个具有Kd低于1微摩尔(Kd＜1μM)的RAR受体亚型并引起在受体共转染测试中RAR亚型调节基因的转录激活作用的化合物。术语“RAR兴奋剂”包括可以结合和/或激活除了RARs外，含有其它受体例如RXR受体的化合物。
在此，负性激素或反兴奋剂为使得所述受体采取相对于不存在任何受体情况下基础状态的非活动性状态的受体配体。从而，尽管拮抗剂可以抑制兴奋剂的活性，负性激素为可以在无兴奋剂的情况下改变所述受体构象的配体。Bond等人[Nature 374：272(1995)]已经研究了负性激素或反兴奋剂的概念。更准确地说，Bond等人已经提出在非活性构象和自发的活性构象之间的平衡中存在非配体结合的β2-肾上腺素能受体。提出兴奋剂使活性构象中的受体稳定。相反，认为反兴奋剂稳定非活性受体构象。从而，尽管拮抗剂通过抑制兴奋剂显示其活性，另外，负性激素可以在无兴奋剂存在的情况下，通过抑制非配体结合受体向活性构象自发性转化显示其活性。只有一类拮抗剂将作为负性激素发挥作用。如在此所述，AGN 193109为拮抗剂和负性激素。迄今为止，还没有其它的视黄醛衍生物显示出具有负性激素活性。
在此，共同给予两种药理活性化合物指的是或者体外或者体内给予两种单独的化学实体。共同给予指的是同时给予独立的制剂；同时给予制剂的混合物；以及给予一种制剂后再给予第二种制剂。在所有情况下，共同给予的制剂将彼此结合发挥作用。
术语烷基指的是(包括)任何(所有)已知的一般烷基、支链烷基和环烷基。术语链烯基指的是(包括)具有一个或多个不饱和位置的一般的链烯基、支链链烯基和环链烯基。类似，术语炔基指的是(包括)具有一个或多个三键的一般炔基和支链炔基。
低级烷基指的是在一般的低级烷基的情况下，以上确定的广泛定义的具有1-6个碳原子的烷基，及适用于3-6个碳原子的低级支链和环烷基。类似地低级链烯基定义为具有2-6个碳原子的一般的低级链烯基，和3-6个碳原子的支链和环状的低级链烯基。类似地，低级炔基也定义为具有2-6个碳原子的一般的低级炔基和4-6个碳原子的支链低级炔基。
在此所用术语“酯”指的是(包括)在一般用于有机化学术语所定义范围内的任何化合物。它包括有机酯和无机酯。当B(式1或式101中的)为-COOH时，该术语包括用醇或硫醇(优选使用具有1-6个碳原子的脂肪族醇)处理该官能度衍生的产物。当所述酯衍生自其中B为-CH2OH的化合物时，该术语包括衍生自能够形成酯的有机酸包括磷基酸和硫基酸的化合物或具有式-CH2OCOR11的化合物，其中R11为任何取代或未取代的脂肪族、芳香族、杂芳族或脂肪族芳基(优选在脂肪族部分具有1-6个碳原子)。
在本申请中除非另外指明，优选的酯衍生自10个或少于10个碳原子的饱和脂肪族醇或酸或5-10个碳原子的环状或饱和脂肪族环状醇和酸。特别优选的脂肪族酯为衍生自低级烷酸和醇的酯。也优选苯基或低级烷基苯基酯。
酰胺具有一般有机化学中术语的定义。在此，它包括未取代的酰胺和所有脂肪族和芳族的一取代和二取代的酰胺。在本申请中除非另外指明，优选的酰胺为由10个或少于10个碳原子的饱和脂肪基衍生的一取代和二取代酰胺或5-10个碳原子的环状或饱和脂肪族环状基衍生的一或二取代酰胺。特别优选的酰胺为由取代和未取代低级烷基胺衍生的酰胺。也优选取代和未取代苯基或低级烷基苯基胺衍生的一或二取代酰胺。也优选未取代的酰胺。
缩醛和缩酮包括式-CK的基团，其中K为(-OR)2。在此，R为低级烷基。K也可以是-OR7O-，其中R7为2-5个碳原子的低级烷基，直链或支链。
可以制备任何具有能形成盐的官能度，例如酸官能度的本发明化合物的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐为保留母体化合物的活性，并不产生对于接受给药受试者的任何有害的或不适当作用的盐。
药学上可接受的盐可以来自于有机或无机碱。该盐可以是单价或多价离子。特别感兴趣的是无机离子，钠、钾、钙和镁。使用胺可以制备有机盐，特别是铵盐，例如一-、二-和三-烷基胺或乙醇胺。使用咖啡碱、三甲醇氨基甲烷和类似分子也可以形成盐。其中有足够碱性的氮原子以便能形成酸的加成盐，它可以使用任何无机或有机酸或烷基化剂例如碘甲烷来形成。优选的盐为使用无机酸例如盐酸、硫酸或磷酸形成的盐。也可以使用任何简单有机酸例如一-、二-或三-酸中的任何一种。
本发明的一些化合物可以具有反式和顺式(E和Z)异构体。此外，本发明的化合物可以包括一个或多个手性中性，从而，可以以对映体或非对映体的形式存在。本发明的范围准备包括所有的这类异构体本身以及顺式和反式异构体的混合物，也包括非对映体混合物和对映体(光学异构体)的外消旋的混合物。在本申请中，当没有特别提及化合物(或不对称碳原子)的构型(顺式、反式或R或S)时，则指的是这类异构体的混合物或其中任何一种异构体。
具有视黄醛衍生物拮抗剂样生物活性的芳基取代的苯并吡喃、苯 并噻喃、1，2-二氢喹啉和5，6-二氢萘的衍生物
对于式1中的符号Y而言，优选的本发明化合物为其中Y是苯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基的化合物。更优选的化合物是其中Y是苯基或吡啶基的化合物，最好是Y为苯基的化合物。对于所述Y(苯基)和Y(吡啶基)上的取代基而言，优选的化合物为其中所述苯基被Z和A-B基团1，4(对位)取代的化合物和其中吡啶环被Z和A-B基团2，5取代的化合物。(在“吡啶”命名法中2，5位取代相当于“烟酸”命名法中6位取代。)在本发明优选的化合物中，或者在Y基团上没有可选的R2取代基或者所述可选的R2取代基为氟(F)。
优选化合物的A-B基团为(CH2)n-COOH或(CH2)n-COOR8，其中n和R8如上所定义。最好n为零和R8为低级烷基，或n为零及B为COOH或其药学上可接受的盐。
在大部分本发明化合物的优选实施例中，X为[C(R1)2]n，其中n为1。此外，也优选其中n为零(茚衍生物)和其中X为S或O(苯并噻喃和苯并吡喃衍生物)的化合物。当X为[C(R1)2]n和n为1时，则R1优选为1-6个碳原子的烷基，更优选甲基。
优选连接到式1化合物的四氢萘、苯并吡喃、苯并噻喃或二氢喹啉部分的芳族部分上的R2基团为H、F或CF3。R3优选为氢或甲基，更优选为氢。
涉及在本发明化合物中的和在式1中所表示的基团Z，在大多数优选的实施例中，Z代表炔键(Z＝-C≡C-)。然而，“连接基团”Z也优选为重氮基(Z＝-N＝N-)，优选为烯或多烯基团(Z＝-(CR1＝CR1)n’-)，优选为酯基(Z＝-COO-)，酰胺(Z＝-CO-NR2-)或硫代酰胺(Z＝-CS-NR2-)键。
涉及R14基团，优选其中R14为苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和2-噻唑基的化合物。优选R15基团(R14上的取代基)为氢、低级烷基、三氟甲基、氯、低级烷氧基或羟基。
涉及式2、式3、式4、式5和式5a的本发明最优选化合物示于表1中。式2                                                式3，
Figure C9619789600262
式4                                                式5式5a
                    表1化合物   式      R14 *             Z            R2 * R8 *#1       2    4-甲基苯基           -C≡C-        H    Et1a      2    苯基                 -C≡C-        H    Et2       2    3-甲基苯基           -C≡C-        H    Et3       2    2-甲基苯基           -C≡C-        H    Et4       2    3，5-二甲基苯基      -C＝C-        H    Et5       2    4-乙基苯基           -C≡C-        H    Et6       2    4-丁基苯基           -C≡C-        H    Et7       2    4-氯代苯基           -C≡C-        H    Et8       2    4-甲氧基苯基         -C≡C-        H    Et9       2    4-三氟甲基苯基       -C≡C-        H    Et10      2    2-吡啶基             -C≡C-        H    Et11      2    3-吡啶基             -C≡C-        H    Et12      2    2-甲基-5-吡啶基      -C≡C-        H    Et13      2    3-羟基苯基           -C≡C-        H    Et14      2    4-羟基苯基           -C≡C-        H    Et15      2    5-甲基-2-噻唑基      -C≡C-        H    Et15a     2    2-噻唑基             -C≡C-        H    Et16      2    4-甲基-2-噻唑基      -C≡C-        H    Et17      2    4，5-二甲基-2-噻唑基 -C≡C-        H    Et18      2    2-甲基-5-吡啶基      -C≡C-        H    H19      2    2-吡啶基             -C≡C-        H    H20      2    3-甲基苯基           -C≡C-        H    H21      2    4-乙基苯基           -C≡C-        H    H22      2    4-甲氧基苯基         -C≡C-        H    H23      2    4-三氟甲基苯基       -C≡C-        H    H24      2    3，5-二甲基苯基      -C≡C-        H    H25      2    4-氯代苯基           -C≡C-        H    H26      2    3-吡啶基             -C≡C-        H    H27      2    2-甲基苯基           -C≡C-        H    H28      2    3-羟基苯基           -C≡C-        H    H29      2    4-羟基苯基           -C≡C-        H    H30      2    5-甲基-2-噻唑基      -C≡C-        H    H30a     2    2-噻唑基             -C≡C-        H    H31      2    4-甲基-2-噻唑基      -C≡C-        H    H32      2    4，5-二甲基-2-噻唑基 -C≡C-        H    H33      2    5-甲基-2-噻吩基      -C≡C-        H    Et33a     2    2-噻吩基             -C≡C-        H    Et34      2    5-甲基-2-噻吩基      -C≡C-        H    H34a     2    2-噻吩基             -C≡C-        H    H35      2    4-甲基苯基           -CONH-        H    Et36      2    4-甲基苯基           -CONH-        H    H37      2    4-甲基苯基           -COO-         H    Et38      2    4-甲基苯塞           -COO-         H  (CH2)2Si(CH3)39      2    4-甲基苯基           -COO-         H    H40      2    4-甲基苯基           -CONH-        F    Et41      2    4-甲基苯基           -CONH         F    H42      2    4-甲基苯基           -CSNH-        H    Et43      2    4-甲基苯基           -CSNH-        H    H44      2    4-甲基苯基           -CH＝CH-      H    Et 45    2    4-甲基苯基    -CH＝CH-     H    H46a   2    4-甲基苯基    -N＝N-       H    Et46b   2    4-甲基苯基    -N＝N-       H    H47    3    4-甲基苯基    -C ≡ C-     H    Et48    3    4-甲基苯基    -C≡C-       H    H49    4    4-甲基苯基    -C≡C-       H    Et50    4    4-甲基苯基    -C≡C-       H    H51    5    4-甲基苯基    -            -    Et52    5    4-甲基苯基    -            -    H60    2    4-甲基苯基    -C≡C-       H    H60a   2    苯基          -C≡C-       H    H61    2    4-钉基苯基    -C≡C-       H    H62    2    4-甲基苯基    -CSNH        F    Et63    2    4-甲基苯基    -CSNH        F    H64    5a   4-甲基苯基    ----         -    Et65    5a   4-甲基苯基    ----         -    H66    2    2-呋喃基      -C≡C-       H    Et67    2    2-呋喃基      -C≡C-       H    H
具有视黄醛衍生物拮抗剂样生物活性的芳基和(3-氧代-1-丙烯基) 取代的苯并吡喃、苯并噻喃、1，2-二氢喹啉和5，6-二氢萘的衍生物
参照式101中的符号Y，优选的本发明化合物为其中Y是苯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基的化合物。更优选的化合物为其中Y是苯基或吡啶基的化合物，最优选的化合物为其中Y是苯基的化合物。就所述Y(苯基)和Y(吡啶基)上的取代基而言，优选的化合物为其中所述苯基被-CR16＝CR17-和A-B基团1，4(对位)取代的化合物和其中吡啶环被-CR16＝CR17-和A-B基团2，5取代的化合物。(在“吡啶”命名法中2，5位取代相当于“烟酸”命名法中6位取代。)在本发明优选的化合物中，在Y基团上没有可选的R2取代基。
优选化合物的A-B基团为(CH2)n-COOH或(CH2)n-COOR8，其中n和R8如上所定义。最好n为零和R8为低级烷基，或n为零及B为COOH或其药学上可接受的盐。
在本发明化合物的优选实施例中，X为[C(R1)2]n，其中n为1。此外，也优选其中X为S或O(苯并噻喃和苯并吡喃衍生物)的化合物。当X为[C(R1)2]n和n为1时，则R1优选为1-6个碳原子的烷基，更优选甲基。
优选连接到式101化合物的四氢萘、苯并吡喃、苯并噻喃或二氢喹啉部分的芳族部分上的R2基团为H、F或CF3。R3优选为氢或甲基，更优选为氢。
涉及R14基团，优选其中R14为苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和2-噻唑基的化合物。优选R15基团(R14基团的取代基)为氢、低级烷基、三氟甲基、氯、低级烷氧基或羟基。
涉及式102的本发明优选化合物示于表2中。
Figure C9619789600291
                    式102
                     表2化合物                  R15 *                R8 *101                    CH3                 H102                    CH3                 Et103                    H                    H104                    H                    Et生物活性，给药形式
如上所述，本发明的化合物为一种或多种RAR受体亚型的拮抗剂。这意味着本发明化合物与一种或多种的RAR受体亚型结合，然而不触发由相同受体的兴奋剂触发的应答。部分本发明的化合物为所有三种RAR受体亚型(RAR-α、RAR-β和RAR-γ)的拮抗剂，并称为“RAR全拮抗剂”。其它的部分化合物仅为一种或两种RAR受体亚型的拮抗剂。在本发明范围内的部分化合物为一种或两种RAR受体亚型的部分兴奋剂和其余亚型的拮抗剂。本发明化合物不与RXR受体结合，从而它们既不是RXR的兴奋剂也不是RXR的拮抗剂。
根据位点和需要抑制或改善的不需要的副作用的性质，根据本发明使用的化合物可以仅是一种或两种RAR受体亚型的拮抗剂。根据本发明所用的部分化合物可以是一种或两种RAR受体亚型的部分兴奋剂和其余亚型的拮抗剂。一般而言，如果所述拮抗剂是作用在RAR受体一种或多种亚型上(它或它们是造成食用过量中毒或不需要的副作用的主要原因)，根据本发明这类化合物是有用的。在此关系中注意到，一般而言，如果在下述共转染测试中所述化合物不引起受体调节报告基因显著的转录激活作用，然而与具有Kd值低于约1μM的受体结合，则认为该化合物是某一给定受体亚型的拮抗剂。
是否化合物为RAR拮抗剂，从而根据本发明可以使用，在以下的测试中可以检验。
在公开的PCT申请号WO94/17796中(在1994年8月18日公开)详细介绍了嵌合体受体反式激活测试，它检验在RAR-α、RAR-β和RAR-γ、RXR-α受体亚型中兴奋剂样活性，它是基于Feigner P.L.和Holm M.的工作[Focus Vol 11，No.2(1989)]。所述公开是美国申请系列号08/016404(在1993年2月11日申请，以美国专利5455265授权)的PCT的相应部分。在该测试中，化合物应不引起通过特定受体亚型(RAR-α、RAR-β和RAR-γ)报告基因的显著激活作用，以便作为RAR的合格拮抗剂用于本发明中。
在公开的PCT申请号WO93/11755(尤其在30-33页和37-41页中，在1993年6月24日公开)中分别介绍了测定本发明化合物的拮抗剂/兴奋剂样活性或其与几种视黄醛衍生物受体亚型的结合能力的全受体反式激活测定和配体结合测定。以下也提供全受体反式激活测定的介绍。全受体反式激活测定
使用RAR报告质粒MTV-TREp-LUC(50ng)，以及通过Heyman等人(Cell 68：397-406)的磷酸钙方法，在自动96孔格式(format)中的RAR表达媒介物(10ng)之一未转染CV1细胞(5000细胞/孔)。就RXR-α和RXR-γ的反式激活测定而言，基本按照Heyman等人(上述)和Allegretto等人(J.Biol.Chem.268：26625-26633)所述方法，使用RXR-应答报告质粒CRBPII-tk-LUC(50ng)以及合适的RXR表达媒介物(10ng)。就RXR-β反式激活测定而言，如上所述使用RXR-应答报告质粒CPRE-tk-LUC(50mg)以及RXR-β表达媒介物(10mg)。这些报告质粒分别含有来自人CRBPII的DRI元件和来自启动子的某些DRI元件(见Mangelsdorf et al. The Retinoids：Biology，Chemistry and Medicine，pp.319-349，Raven Press Ltd.，New York和Heyman et al.，上述)。使用β-半乳糖苷酶(50ng)表达媒介物作为在转染中的内对照物以便使转染效率方面的变异标准化。将所述细胞一式三份转染6小时，然后用视黄醛衍生物孵化36小时，并测定其提取物的荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性。Heyman等人(上述)和Allegretto等人(上述)已经介绍了用于全受体反式激活的详细的试验过程。在该测定中得到的结果以EC50数值表示，同样在嵌合体受体反式激活测定中也以EC50数值表示。配体结合测定的结果以Kd数值表示。见Cheng et al.Biochemical Pharmacology22：3099-3108。
化合物不应该通过在全受体反式激活测定中某一受体亚型(RAR-α、RAR-β或RAR-γ)，引起受体基因的显著激活，以作为合格的用于本发明中的RAR拮抗剂。最后但一样重要，化合物应该在Kd低于约1微摩尔(Kd＜1μM)的配体结合测定中与至少一个RAR受体亚型结合，以便能够作为所述结合的受体亚型的拮抗剂发挥功能，假定同一受体亚型不被所述化合物显著激活。
就本发明的某些实例性化合物而言，下表3显示全受体反式激活测定的结果，表4中介绍了与所有反式视黄酸有关的试验化合物测定的效率(以百分率表示)。表5显示了对本发明的某些实例性化合物的配体结合测定的结果。
                        表3
                  全受体反式激活测定
化合物#                        EC50      (nM)
             RARα             RARB      RARγ             RXRα            RXRB     RXRγ
18           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
19           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
20           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
21           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
22           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
23           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
24           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
25           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
26           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
27           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
28           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
29           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
30           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
31           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
32           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
34           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
36           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
39           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
41           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
45           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
46b          0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
52           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
60           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
61           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
63           0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
101          0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00
103          0.00       0.00      0.00      0.00      0.00     0.00在表3中0.0表示所述化合物在该测定中的活性(有效性)比所有反式视黄酸活性低20％。
                     表4
       全反式激活测定效率(相当RA活性的％)化合物#
       RARα              RARB      RARγ            RXRα            RXRB       RXRγ18         4.00       1.00      0.00      2.00      10.00      1.019         0.00       5.0       3.0       0.0       9.0        4.020         3.0        4.0       0.00      4.00      0.00       3.021         2.00       2.00      2.00      3.00      0.00       3.0022         0.00       0.00      2.00      1.00      0.00       2.0023         0.00       6.00      3.00      1.00      0.00       4.0024         3.00       7.00      4.00      1.00      0.00       3.0025         2.00       3.00      3.00      5.00      0.00       3.0026         1.00       6.00      0.00      2.00      0.00       3.0027         9.00       14.00     6.00      2.00      0.00       4.0028         2.00       10.00     2.00      2.00      0.00       3.0029         0.00       6.00      11.00     0.00      6.00       2.0030         3.00       5.00      1.00      0.00      9.00       3.0031         4.00       14.00     2.00      1.00      8.00       6.0032         0.00       2.00      2.00      1.00      0.00       2.0034         3.00       5.00      2.00      1.00      0.00       3.0036         1.00       5.00      0.00      1.00      7.00       2.0039         1.00       7.00      9.00      2.00      0.00       1.0041         3.00       5.00      6.00      1.00      0.00       3.0045         2.00       0.00      7.00      3.00      8.00       0.0046b        4.00       5.00      3.00      2.00      0.00       4.0052         0.00       15.00     3.00      0.00      0.00       10.0060         0.00       1.00      4.00      3.00      0.00       3.0061         2.00       2.00      0.00      1.00      0.00       3.0063         2.00       2.00      7.00      1.00      0.00       1.00101        0.00       4.00      2.00      1.00      0.00       3.0103        4.00       12.0      7.0       0.00      0.0        2.0
                               表5
                          配体结合测定
化合物  #       Kd       (nM)
              RARα              RARB      RARγ              RXRα            RXRB     RXRγ
18            24.00      11.00     24.00      0.00      0.00     0.00
19            565        210       659        0.00      0.00     0.00
20            130.00     22.0      34.00      0.00      0.00     0.00
21            16         9         13         0.00      0.00     0.00
22            24.0       17.0      27.0       0.00      0.00     0.00
23            32.00      25.00     31.00      0.00      0.00     0.00
24            699        235       286        0.00      0.00     0.00
25            50         17        20         0.00      0.00     0.00
26            40.00      31.00     36.00      0.00      0.00     0.00
27            69.00      14.00     26.00      0.00      0.00     0.00
28            669        77        236        0.00      0.00     0.00
29            234        48        80         0.00      0.00     0.00
30            683        141       219        0.00      0.00     0.00
31            370        52.00     100.00     0.00      0.00     0.00
32            0.00       89.00     169.00     0.00      0.00     0.00
34            52.00      30.00     17.00      0.00      0.00     0.00
36            13.00      550.00    0.00       0.00      0.00     0.00
39            67.00      38.00     113.00     0.00      0.00     0.00
41            5.1        491       725        0.00      0.00     0.00
45            12.0       2.80      17.0       0.00      0.00     0.00
46b           250        3.70      5.80       0.00      0.00     0.00
52            60.00      63.00     56.00      0.00      0.00     0.00
60            1.5        1.9       3.3        0.00      0.00     0.00
61            96         15        16         0.00      0.00     0.00
63            133        3219      0.00       0.00      0.00     0.00
101           750        143       637        0.00      0.00     0.00
103           301        273       261        0.00      0.00     0.00表5中0.0表示大于1000nM的值。
正如从归结于表3、4和5中的试验结果可见，其中显示的本发明的实例性化合物为RAR受体亚型的拮抗剂，然而不具有对于RXR受体亚型的亲和力。(本发明的其它化合物可以是部分然而不是所有RAR受体亚型的拮抗剂并且是其余RAR亚型的兴奋剂。)由于这一性质，本发明的化合物可以在生物测定中用于阻滞RAR兴奋剂的活性。在哺乳动物包括人类中，可以与RAR兴奋剂一起共同给予本发明的化合物，通过药理选择性或位点特异性传递，优选防止RAR兴奋剂的不需要的副作用。本发明的化合物也可以用于治疗由于过量服用维生素A补剂或摄入含有高含量维生素A的某些鱼和动物的肝脏导致的慢性或急性维生素A过量。此外，本发明的化合物也可以用于由视黄醛衍生物药物引起的急性或慢性毒性。在本领域内已知：观察到的维生素A过多综合症(头痛、脱皮、骨毒性、异常脂质血症)的毒性与使用其它视黄醛衍生物观察到的毒性类似或相同，提示共同的生物学因素，即RAR激活。因为本发明的化合物阻滞RAR激活，所以它们适用于治疗上述毒性。
当将本发明的化合物局部共同给药于皮肤上时，本发明的化合物基本上能够防止由RAR兴奋剂视黄醛衍生物所诱导的皮肤刺激。类似，可以将本发明的化合物局部用药给予皮肤，以便在全身性给予RAR兴奋剂化合物的患者或动物中阻滞皮肤刺激。本发明的化合物可以加速自预先存在的视黄醛衍生物毒性的恢复，可以阻滞由共同给予视黄醛衍生物所引起的血甘油三酯过多和可以阻滞由RAR兴奋剂(视黄醛衍生物)引起的骨毒性。
一般而言，作为根据本发明在哺乳动物中的治疗用法，可以经肠道或皮肤表面给予所述拮抗剂化合物，作为已经不再继续服用致病因子(维生素A前体或其它视黄醛衍生物)后的维生素A、维生素A前体的解毒剂或由于过量服用或长期接触导致的视黄醛衍生物毒性的解毒剂。可选将所述拮抗剂化合物与根据本发明的视黄醛衍生物药物一起共同给药，在此情况下，所述视黄醛衍生物提供有益的治疗作用，而所述共同给予的拮抗剂改善或除去所述视黄醛衍生物的一种或多种不需要的副作用。就这种类型用法而言，可以在特定部位给予所述拮抗剂，例如作为皮肤表面涂抹的乳膏或洗剂，而所述共给予的视黄醛衍生物可以经肠道给药。
就根据本发明的治疗用法而言，将所述拮抗剂化合物掺入药用组合物中例如片剂、丸剂、胶囊、溶液剂、悬浮液、乳膏、软膏、凝胶、油膏、洗剂等，使用本身为本领域内熟知的药学上可接受的赋形剂和载体。例如在Remington’s Pharmaceutical Science(Edition 17，MackPublishing Company，Easton，Pennsylvania)中详细介绍了皮肤表面制剂的制备。就皮肤表面用法而言，也可以以粉末或喷雾剂尤其气溶胶形式给予拮抗剂化合物。如果全身性给予该药物，可以将其配制成粉末、丸剂、片剂等或适合口服的糖浆剂或酏剂。就静脉或腹膜内注射而言，将所述拮抗剂化合物制成能够注射给药的溶液或悬浮液。在某些情况下，配制注射用拮抗剂化合物是有用的。在某些情况下，配制所述拮抗剂化合物为栓剂或置于皮下或肌肉注射的缓释制剂是有用的。
以根据本发明的有效治疗剂量给予所述拮抗剂化合物。治疗浓度为使具体病症(例如由于接触视黄醛衍生物或维生素A引起的毒性或视黄醛衍生物药物的副作用)减轻或阻止其扩张的浓度。可以理解，当共同给予所述拮抗剂化合物以便阻滞视黄醛衍生物诱导的毒性或根据本发明的副作用时，以预防方式使用所述拮抗剂化合物以便防止具体病症例如皮肤刺激的发生。
有用的治疗或预防浓度随着病症的不同而变化，在某些情况下，随着所治疗疾病的严重性和患者对于治疗的敏感性可以改变所用浓度。因此，没有一种浓度可以一成不变地使用，而是根据慢性或急性视黄醛衍生物毒性的特殊性或治疗的有关症状需要加以改变。通过常规试验可以得到所需浓度。然而，预期每毫升制剂含有0.01-1.0毫克的拮抗剂化合物的制剂为皮肤表面使用的有效治疗浓度。如果需要全身性给药，预期每日每公斤体重0.01-5毫克的用量可以达到治疗效果。
利用RAR拮抗剂以便预防或治疗RAR兴奋剂诱导的毒性的基础是竞争性抑制由RAR兴奋剂激活RAR受体。RAR拮抗剂的这两种用途的主要差别在于有或没有先前存在的视黄醛衍生物毒性。以下将介绍的大部分的实施例涉及用于防止视黄醛衍生物毒性的视黄醛衍生物的用途，然而，在此所述的一般的方法也用于治疗先前存在的视黄醛衍生物毒性。
显示用于预防或治疗视黄醛衍生物毒性和/或视黄醛衍生物药物的副作用的RAR用途的试验介绍实施例1：皮肤表面使用的拮抗剂治疗由局部皮肤使用兴奋剂诱导的 皮肤刺激
化合物4-[(E)-2-(5，6，7，8-四氢-5，5，8，8-四甲基萘-2-基)丙烯-1-基]苯甲酸(称为AGN 191183)在现有技术中被认为是有效的RAR兴奋剂(例如见美国专利5324840的说明书部分和图2b)。(“AGN”数字为本发明的合作受让人所使用的任意指定的参考数字，目的是识别化合物)
4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN192869也称作化合物60a)为以下介绍的制备过程中的化合物。该化合物为RAR拮抗剂。
也通过在裸鼠皮肤表面给予RAR拮抗剂AGN 192869可以阻滞由皮肤表面给予RAR兴奋剂剂AGN 191183诱导的皮肤刺激。
更具体地说，通过日常主观评价脱皮和擦伤，在半定量级别上测定皮肤刺激。一个单一数字(皮肤表面刺激指数)概括了在试验过程中在动物体上产生的皮肤刺激。皮肤刺激指数如下计算。所述皮肤表面刺激指数为综合脱皮指数和综合擦伤指数的代数和。对于脱皮和擦伤的综合指数分别在0-9和0-8的范围内，并且考虑所述观察脱皮和擦伤的最大严重性、发作时间和平均严重性。
按5分级给脱皮的严重性评分，按4分级给擦伤的严重性评分，较高的指数反映较大的严重性。综合指数的最高严重分值为在观察过程中给某一动物打的最高日常严重性指数。
就综合指数的开始发作分值而言，所指定的0-4范围的指数如下：
                   表6
     严重性2或2以上的外观脱皮或擦伤次数
      (天)                        发作指数的次数
        8                                0
        6-7                              1
        5                                2
        3-4                              3
        1-2                              4
综合指数的平均严重性分值为日常脱皮或擦伤指数的总合除以观察的天数。治疗的第一天不计算在内，因为所述药物在第一次治疗时还没有发挥作用。
为了计算综合脱皮和擦伤指数，将平均严重性和发作指数的次数加和并除以2。将该结果加到最高严重性指数中。然后将综合脱皮和擦伤指数加和以便给出总的皮肤表面刺激指数。每个动物有其皮肤表面刺激指数，其值被表示为每组动物的单独指数的均值±SD。该值近似成整数。
用丙酮、AGN 191183、AGN 192869或AGN 192869和AGN191183的某种混合物连续5天皮肤表面处理雌性裸鼠[Crl：SKH1-hrBR](8-12周龄，n＝6)。各个化合物的剂量示于表7中。以总体积为4ml/kg(约0.1ml)将所述治疗剂涂抹到动物的背侧皮肤上。每天观察小鼠并就脱皮和擦伤进行评分直到最后一次治疗后3天，即第8天为止。
                                表7
                      实施例1的试验设计和结果
              剂量             剂量          摩尔比
            AGN 191183      AGN 192869       (192869：      皮肤表面
组         (mg/kg/d)       (mg/kg/d)      (191183       刺激指数
A              0                 0             --             0±0
B            0.025               0             --             8±2
C            0.025             0.06            2∶1           5±2
D            0.025             0.30           10∶1           2±1
E            0.025             1.5            50∶1           1±0
F              0               1.5             --             0±0
在表7中给出了实施例1的皮肤表面刺激评分。在剂量为1.5mg/kg/d(组F)下，丙酮(溶媒)或AGN 192869(拮抗剂)不引起可观察到的皮肤表面刺激。在剂量为0.025mg/kg/d情况下，AGN 191183(RAR兴奋剂)引起适度的皮肤表面刺激。然而，使用AGN 192869以剂量依赖形式抑制AGN 191183诱导的皮肤表面刺激，在50倍摩尔过量的AGN 192869的存在下，几乎完全消除刺激作用。这表明皮肤表面RAR拮抗剂阻滞由皮肤表面RAR兴奋剂引起的皮肤刺激。当所述RAR拮抗剂更有效时，例如化合物4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN 193109在本申请中也称作化合物60)，使用较低的拮抗剂与兴奋剂的摩尔比可以达到对RAR兴奋剂诱导的皮肤刺激的完全阻滞。
实施例2：通过皮肤表面使用拮抗剂来阻滞由口服兴奋剂所诱导 的皮肤刺激
在该实施例中使用有效力的RAR兴奋剂AGN 191183(4-[(E)-2-(5，6，7，8-四氢-5，5，8，8-四甲基萘-2-基)丙烯-1-基]苯甲酸)和有效力的RAR拮抗剂4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN 193109，化合物60)并利用试验动物(小鼠)的体重作为全身性RAR兴奋剂接触的标志。
使用玉米油或悬浮在玉米油(5ml/kg)中的AGN 191183(0.26mg/kg)通过胃内插管给予各组中的雌性裸鼠(8-12周龄，n＝6)。同时在小鼠的背侧皮肤上表面给予溶媒(97.6％丙酮/2.4％二甲亚砜)或AGN193109在溶媒中的溶液(6ml/kg)。用于不同组的特定剂量示于表8中。连续4天每日给药。将小鼠称重并按照实施例1中所述给每日的皮肤表面刺激评分，直到最后一次试验后1天为止。通过由最初体重(第一天)减去最终体重(第五天)，除以最初体重并乘以100％，计算体重变化的百分比。如实施例1中所述计算皮肤表面刺激指数。
对于不同组的表面刺激指数和失去体重示于表8中。分别通过皮肤表面和口服给予溶媒即丙酮和玉米油的联合治疗不引起皮肤表面刺激或失去体重。类似，利用口服溶媒和皮肤表面给予拮抗剂AGN193109联合治疗不产生皮肤表面刺激或失去体重。单独口服AGN191183导致显著失去体重和皮肤刺激。当与较低剂量的AGN 193109一起使用时，AGN 191183诱导的皮肤刺激被显著地降低，而在较高剂量的AGN 193109下可以完全阻滞。通过皮肤表面给予AGN193109，以与剂量相关的方式也阻滞AGN 191183诱导的失去体重，然而该阻滞不完全。因而，皮肤表面给予AGN 193109优选阻滞AGN191183的皮肤毒性。假定低剂量的AGN 193109被全身性吸收，从而部分阻滞由AGN 191183诱导的失去体重。然而，这种吸收在具有较低渗透性皮肤的动物例如人类中可能较低。另外，AGN 193109对于失去体重的抑制作用可能是由于改善了AGN 191183诱导的皮肤刺激的结果。
                           表8
                   实施例2的试验设计和结果
          皮肤表面使用        口服AGN191183       增加或失去的
                                                                     皮肤表面
          AGN193109的剂量         的剂量             体重％
组         (mg/kg/d)            (mg/kg/d)                         刺激指数
A              0                      0              1±2              0±0
B              0                     0.26           (21±6)            8±1
C             0.12                   0.26           (9±5)             1±1
D             0.47                   0.26           (3±5)             0±1
E             0.47                    0              3±3              0±0
从而，实施例2显示皮肤表面给予RAR拮抗剂可用于优选阻滞由口服给予RAR兴奋剂诱导的皮肤刺激。
实施例3：皮肤表面使用拮抗剂加速自预先存在的视黄醛衍生物 毒性的恢复
在该实施例中，通过皮肤表面给予RAR兴奋剂AGN 191183诱导失去体重，然后经皮肤表面给予溶媒或RAR拮抗剂AGN 193109治疗所述试验动物。
连续2天，每天用在溶媒(97.6％丙酮/2.4％DMSO，4ml/kg)中的AGN 191183(0.13mg/kg/d)经皮肤表面处理雌性裸鼠(8-12周龄，n＝5)。然后，从第三天开始，连续3天，每天用溶媒或在溶媒中的AGN193109(4mg/kg)经皮肤表面处理各组中相同的小鼠(n＝5)。在1-5天和第8天称量小鼠。体重表示为均值±SD。使用未配对的、二-尾部t-检验(two-tailed t-test)从统计学上比较均值。当P＜0.05时，认为差异显著。
                                   表9
                               实施例3的结果
 治疗                             体重(g)
 (3-5天)
               第1天     第2天     第3天     第4天     第5天     第8天
  溶媒         24.6±1.5  23.9±1.2  21.4±1.2  20.3±1.7  21.0±1.4  24.7±1.0
 AGN 193109    23.9±1.0  23.5±1.2  21.4±0.6  22.2±0.7  22.8±0.8  25.0±1.1
实施例3中体重随时间的变化过程示于表9中。由于在第一天和第二天AGN 191183处理的结果，两组小鼠的体重在第二天和第三天平行下降。然而，AGN 193109处理与溶媒处理相比在第四天和第五天显著增加体重。这些数据显示通过其后使用AGN 193109的处理加速自AGN 191183诱导的失去体重的恢复。在第八天，两组小鼠之间体重没有显著差异，显示在给定的足够时间内，可达到完全恢复。从而，RAR拮抗剂可以有效地减轻RAR兴奋剂诱导的毒性，即使RAR兴奋剂诱导的毒性在RAR拮抗剂处理之前，即在所述RAR兴奋剂毒性方案中。
实施例4：口服给予拮抗剂阻滞由口服共同给予视黄醛衍生物兴 奋剂诱导的血甘油三酯过多症
5-[(E)-2-(5，6，7，8-四氢-3，5，5，8，8-五甲基萘-2-基)丙烯-1-基]-2-噻吩羧酸为已知的RAR/RXR全-兴奋剂(见美国专利5324840，表32)并称为AGN 191659。该化合物口服用于在大鼠中诱导急性血甘油三酯过多症，口服共同给予AGN 193109(化合物60)以便阻滞AGN 191659诱导的血甘油三酯过多症。
使用玉米油(溶媒)、AGN 191659、AGN 193109或AGN 191659和AGN 193109的混合物，经胃管给予雄性Fescher大鼠(6-7周龄，n＝5)。给予在玉米油中的微细悬浮液形式的AGN 191659和AGN193109。所述试验设计，包括所用剂量示于表10中。
在二氧化碳麻醉下，自下静脉腔中抽取血样。通过低速离心将血清自血液中分出。利用市场上可买到成套仪器并适用于96-孔接种板格的标准分光光度终点测定法测定总的血清甘油三酯(甘油三酯加甘油)。血清甘油三酯的水平表示为均值±SD。通过单向方差分析从统计学上比较均值，如果发现显著性差异，然后进行Dunnett’s检验。当P＜0.05时认为差异显著。
如在表10中所示，AGN 191659本身引起相对溶媒处理血清甘油三酯的显著升高。AGN 193109本身不显著增加血清甘油三酯。AGN193109和AGN 191659的摩尔比为1∶1和5∶1的混合物显著降低血清甘
        油三酯到与对照没有显著区别的水平。
                          表10
                  实施例4的试验设计和结果
组  治疗(剂量)                        血清甘油三 (mg/dl)
A       溶媒                              55.0±3.1
B    AGN 193109(19.6mg/kg)                52.4±6.3
C    AGN 191659(3.7mg/kg)                 122.5±27.6
D    AGN 193109(3.9mg/kg)                 55.7±14.7
     +AGN 191659(3.7mg/kg)
E    AGN 193109(19.6mg/kg)                72.7±8.9
     +AGN 191659(3.7mg/kg)
实施例4显示可以使用RAR拮抗剂阻滞由共同给予的视黄醛衍生物诱导的血甘油三酯过多症。实施例5：胃肠外使用拮抗剂阻滞由胃肠外共同给予视黄醛衍生物兴 奋剂诱导的骨毒性
实施例5显示RAR拮抗剂可以阻滞由RAR兴奋剂诱导的骨毒性。在该实施例中，使用AGN 193109以便在豚鼠中阻滞由共同给予RAR兴奋剂AGN 191183引起的早熟性骺板闭合。
将含有溶媒(20％二甲亚砜/80％聚乙二醇-300)、AGN 191183(0.06mg/ml)或与AGN 193109(0.34mg/ml)结合的AGN 191183(0.06mg/ml)的渗透泵腹膜内移植入各组的雄性Hartley豚鼠(约3周龄，n＝4)体内。由制造商设计的渗透泵可每小时传递约5μl溶液，连续14天。
在移植14天后通过二氧化碳窒息处死动物。取出左胫骨并置于10％的缓冲福尔马林中。通过与甲酸/福尔马林溶液接触3-4天使该胫骨脱钙，并制备石蜡切片。通过标准方法，用苏木素和曙红使切片染色。检查近端胫骨骺板并根据闭合或未闭合评分。为此，将骺板闭合规定为所示骺生长板软骨连续性中断，即被骨和/或成纤维细胞组织所代替。
四只周溶媒处理的豚鼠没有一只在所示试验结束时显示骺板闭合。这是预料之中的，因为豚鼠胫骨近端骺板一般直到所述动物至少10月龄才闭合。所有四只AGN 191183处理的豚鼠显示部分或完全骺板闭合。然而，用AGN 191183和AGN 193109的混合物处理任何一只豚鼠均未显示骺板闭合。从而，当胃肠外共同给予这些化合物时，以5倍摩尔过量的AGN 193109完全阻滞AGN 191183诱导的骨毒性。RAR拮抗剂化合物
化合物4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN 193109，化合物60)和4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN 192869，化合物60a)为RAR拮抗剂的实例，将它们用于上述动物试验以便阻滞根据本发明的RAR受体。下式(式1)化合物作为根据本发明使用的其它RAR拮抗剂化合物其它的和一般的实例。
                  式1
在式1中，X为S、O、NR’，其中R’为H或1-6个碳原子的烷基，或
X为[C(R1)2]n其中R1为H或1-6个碳原子的烷基，及n为0或1的整数；
R2为氢、1-6个碳原子的低级烷基、F、CF3、1-6个碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6个碳原子的烷氧基或1-6个碳原子的烷硫基；
R3为氢、1-6个碳原子的低级烷基或F；
m为0-3的整数；
o为0-3的整数；
Z为-C≡C-，
   -N＝N-，
-N＝CR1-，
-CR1＝N，
-(CR1＝CR1)n’-其中n’为0-5的整数，
-CO-NR1-，
-CS-NR1-，
-NR1-CO，
-NR1-CS，
-COO-，
-OCO-，
-CSO-，
-OCS-；
Y是苯基或萘基或选自吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的杂芳基，所述苯基和杂芳基可选被一个或两个R2基团取代，或
当Z为-(CR1＝CR1)n-和n’为3、4或5时，则Y代表在该(CR1＝CR1)n基团和B之间的直接价键；
A为(CH2)q其中q为0-5，具有3-6个碳原子的低级支链烷基，具有3-6个碳原子的环烷基、具有2-6个碳原子和1或2个双键的链烯基，具有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；
B为氢，COOH或其药学上可接受的盐，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低级烷基甲硅烷基，其中R7为含有1-5个碳原子的烷基、环烷基或链烯基，R8为1-10个碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10个碳原子，或5-10个碳原子的环烷基，或R8为苯基或低级烷基苯基，R9和R10独立为氢，1-10个碳原子的烷基，或5-10个碳原子的环烷基，或苯基或低级烷基苯基，R11为低级烷基、苯基或低级烷基苯基，R12为低级烷基，及R13为2-5个碳原子的二价烷基，和
R14为(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-杂芳基，其中所述杂芳基具有选自O、S和N的1-3个杂原子，r为0-5的整数，和
R15独立为H，F，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，N(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10个碳原子的烷基，具有1-10个碳原子的氟代烷基，具有1-10个碳原子和1-3个双键的链烯基，具有1-10个碳原子和1-3个三键的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基独立具有1-6个碳原子。芳基取代化合物的合成方法
通过在此介绍的合成化学途径可以制备式1实例性RAR拮抗剂化合物。合成化学家将容易赞同在此所设立的反应条件为可以一般化到任何及所有由式1所代表的化合物的特定实施方案。反应图式1反应图式1     (续)
反应图式1显示式1化合物的合成，其中Z基团为乙炔基(-C≡C-)和X为[C(R1)2]n，其中n为1。换句话说，反应图式1显示本发明的乙炔基取代的二氢萘衍生物的合成。根据该图式，使式6四氢萘-1-酮化合物溴化以提供式7溴代衍生物。所述式6化合物已经带有所需的R1、R2和R3取代基(它们根据以上式1所定义)。式6化合物的优选实例为3，4-二氢-4，4-二甲基-1(2H)-萘，它在化学文献中被介绍[Arnold etal.J.Am.Chem.Soc.69：2322-2325(1947)]。自1-溴-3-苯基丙烷合成该化合物的优选的途径也在本申请的实验部分被介绍。
然后，使式7化合物与(三甲基甲硅烷基)乙炔反应，提供式8(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代-3，4-二氢-萘-1(2H)-酮。与(三甲基甲硅烷基)乙炔的反应一般在碘化亚酮、合适的催化剂[一般具有式Pd(PPh3)2Cl2]、酸性受体(例如三乙胺)的存在下，在惰性气体(氩气)中，加热(约100℃)进行。一般反应时间为约24小时。然后，使式8(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代-3，4-二氢-萘-1(2H)-酮与碱(氢氧化钾或碳酸钾)在醇溶剂例如甲醇中反应，提供式9乙炔基取代-3，4-二氢-1-萘-1(2H)-酮。然后，使式9化合物与芳族或杂芳族试剂X1-Y(R2)-A-B’(式10)在碘化亚酮、合适的催化剂(一般为Pd(PPh3)2Cl2)、酸性受体(例如三乙胺)的存在下，在惰性气体(氩气)中偶合。可选将式9化合物的锌盐(或其它合适的金属盐)与式10反应剂在Pd(PPh3)4或类似的复合物存在下偶合。一般与试剂X1-Y(R2)-A-B’(式10)的偶合反应在室温或适度升高的温度下进行。一般而言，在乙炔基芳基衍生物或其锌盐和卤素取代芳基或杂芳基化合物(例如式10试剂)之间的偶合过程在美国专利5264456中被介绍。式11化合物为本发明实例性化合物或其在B’基团中保护的衍生物(通过本领域内众所周知的反应可以容易地将该保护基除去)的前体，。通过本领域内熟知的这类反应和转化，可以将所述式11化合物转变成所述实例性化合物的其它前体。通过转化为“同系物和衍生物”的这类反应在反应图式1中被说明。用于几个实例性化合物合成的这类转变之一为酯基(当B或B’为酯基时)的皂化以便提供游离羧酸或其盐。
一般而言，通过本领域内众所周知的反应可以获得式10卤素取代芳基或杂芳基化合物。这类化合物的实例为4-碘代苯甲酸乙酯，例如它可以通过4-碘代苯甲酸的酯化而得到。另一实例为6-碘代烟酸乙酯(ethyl 6-iodonicotinoate)，它可以通过在6-氯烟酸上进行卤素交换反应，然后酯化而得。一般而言，关于式11化合物的衍生化和/或式10的芳基和杂芳基化合物(它们然后可以与式9化合物反应)的合成，可以利用下列众所周知和公开的一般原理和工艺。
一般通过在酸性催化剂例如氯化氢或亚硫酰氯的存在下，在合适的醇的溶液中，回流所述酸将羧酸酯化。可选将所述羧酸与合适的醇在二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶存在下缩合。用常规方法回收和纯化所述酯。通过March所述方法(Advanced Organic Chemistry，2ndEdition，McGraw-Hill Book Company，p.810)可以容易地制备缩醛和缩酮。醇、醛和酮均可以通过例如在McOmie(Plenum Publishing Press，1973)和Protecting Groups(Ed.Greene，John Wiley&Sons，1981)中所介绍的已知方法分别形成醚和酯、缩醛或缩酮来保护。
为了在进行反应图式1的偶合反应(其中相当于式10的所述化合物不能从市场上买到)之前，增加式10化合物中n的值，通过在Arndt-Eistert条件或其它容许的反应过程下连续地处理，使芳族或杂芳族羧酸符合要求(homologation)。也可选通过合适的方法，使不是羧酸的衍生物符合要求。然后，通过以上所述的通法使符合要求的酸酯化。
例如通过为具有实践经验的有机化学家所熟知的合成图式，可以制备其中A为具有一个或多个双键的链烯基的式10化合物(或其它中间体或实例化合物)；例如通过Wittig等反应或通过自α-卤代芳基烷基羧酸、酯或类似的羧基醛(carboxaldehyde)中除去卤素导入双键。通过相应的芳基甲基酮与强碱例如二异丙基氨基锂反应(与氯代磷酸二乙酯反应，然后加入二异丙基氨基锂)可以制备其中A基团具有三键(乙炔基)的式10化合物(或其它中间体或实例化合物)。
由相应的酯可以容易地获得由式11化合物(或其它中间体或实例化合物)衍生的酸和盐。使用碱金属碱的碱性皂化将提供所述酸。例如可以将式11酯(或其它中间体或实例化合物)溶解在极性溶剂例如链烷醇中，优选在惰性气体中，在室温下，使用约3摩尔过量的碱例如氢氧化锂或氢氧化钾。将所述溶液搅拌一定时间，15-20小时，冷却，酸化并通过常规方法回收其水解产物。
通过本领域内任何已知的、合适的酰胺化方法由相应的酯或羧酸可以形成酰胺。制备这类化合物的一个方法为转变羧酸为酰氯，然后用氢氧化铵或适合的胺处理该化合物。
通过使用亚硫酰氯或其它的方法(J.March， Advanced Organic Chemistry，2nd Edition，McGram-Hill Book Company)将相应的酸转化为酰氯，然后用硼氢化钠(March，lbid，p.1124)还原所述酰氯，产生相应的醇来制备醇。可选使用氢化锂铝在低温下还原酯。在Williamson反应条件下(March，Ibid，p.357)使用合适的卤化烷使这些醇烷基化，产生相应的醚。通过使所述醇与合适的酸在酸性催化剂或二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶的存在下反应，可以将所述醇转化为酯。
使用温和的氧化剂例如二氯甲烷中的重铬酸吡啶鎓(Corey，E.J.，Schmidt，G.，Tet.Lett.399，1979)或二氯甲烷中的二甲亚砜/草酰氯(Omura，K.，Swern，D.，Tetrahedron 34：1651(1978))可以由相应的一级醇制备醛。
通过用烷基Grignard试剂或类似的试剂处理所述醛，然后氧化可以由合适的醛制备酮。
通过在March，Ibid，p.810中所述方法，由相应的醛或酮制备缩醛或缩酮。
由相应的卤化芳族或杂芳族化合物(优选其中所述卤素为碘)可以制备其中B是氢的式10化合物(或其它中间体或实例性化合物)。
再次参考反应图式1，使式11化合物与双(三甲基甲硅烷基)氨化钠和2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯代吡啶在惰性醚类溶剂例如四氢呋喃中，于低温(-78℃和0℃)下反应。所述内容被显示在反应图式1中，其中通常将未分离的钠盐中间体表示在括号中，如式12。所述反应产生式13所代表的三氟甲基磺酰氧基衍生物。(Tf＝SO2CF3)。然后，通过与由所述芳基或杂芳基化合物R14H所衍生有机金属衍生物反应，将式13化合物转变成为以式14所表示的本发明的实例性化合物，所述有机金属衍生物的分子式为R14Met(Met代表一价金属)，优选R14Li(R14如式1中所定义)。所述与有机金属衍生物(优选分子式R14Li的锂衍生物)的反应一般在惰性醚类溶剂(例如四氢呋喃)中，在氯化锌(ZnCl2)和四(三苯基磷)-钯(0)(Pd(PPh3)4)的存在下进行。如果所述有机锂试剂R14Li市场上不能买到，可以由所述化合物R14H(或其卤素衍生物R14-X1其中X1为卤素)在本领域内已知的醚类溶剂中制备。所述试剂R14Li和式13化合物之间反应的温度范围一般而言在约-78℃-50℃内。根据以上所讨论的反应，可以将式14化合物转变成其它同系物和衍生物。
也可以将反应图式1中所示的式7中间体7-溴-四氢萘-1-酮化合物与具有式R14MgBr(R14如式1中所定义)的Grignard试剂发生转化产生式15叔醇。通过用酸处理使所述叔醇脱水提供式16的3，4-二氢-7-溴代萘衍生物，它作为合成本发明的其它化合物的中间体(见反应图式6、7和8)。反应图式2
Figure C9619789600531
参照反应图式2，介绍了上述化合物的合成途径，其中对于式1而言，X为S、O或NR’，及Z为乙炔基(-C≡C-)。在该反应序列中的原料为具有式17所示结构的溴代苯酚、溴代硫酚或溴代苯胺。为了简化本说明书，在其后的介绍中，可以认为X主要是硫，用于制备苯并噻喃衍生物。然而，应记住的是：在此所述的图式(包括对于本领域内的技术人员是显而易见的改进)也适用于制备本发明的苯并吡喃(X＝O)和二氢喹啉(X＝NR’)化合物。因而，使式17化合物优选对溴硫酚、对溴苯酚或对溴苯胺在碱性条件下与式18的3-溴羧酸反应。在该反应图式中，所述符号具有式1中所述的定义。作为式18反应剂的实例(其中R3为氢)为3-溴丙酸。与式18的3-溴羧酸反应产生式19化合物。通过用酸处理使后者环合产生具有式20的6-溴二氢苯并噻喃-4-酮衍生物(当X为S时)或6-溴苯并二氢吡喃衍生物(当X为O时)。然后使式20溴代化合物在反应图式1中所述的用于转化式7溴代化合物成为本发明的化合物的类似条件下，经过基本相同的反应顺序。从而，简单概括如下：使式20溴代化合物与(三甲基甲硅烷基)乙炔反应提供式21的6-(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代二氢苯并噻喃-4-酮或苯并二氢噻喃-4-酮化合物。然后，使式21的6-(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代二氢苯并噻喃-4-酮化合物与碱(氢氧化钾或碳酸钾)反应提供式22的乙炔基取代6-乙炔基取代二氢苯并噻喃-4-酮化合物。然后，使式22化合物与芳族或杂芳族试剂X1-Y(R2)-A-B’(式10)在反应图式1类似反应中所述相似条件下偶合产生式23化合物。
然后，使式23化合物在反应图式1中所述类似反应中相似条件下与双(三甲基甲硅烷基)氨化钠和2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶反应产生式24所代表的4-三氟甲基磺酰氧基苯并噻喃或苯并吡喃衍生物。然后，通过与衍生自如反应图式1中所述的芳基或杂芳基化合物R14H的有机金属衍生物反应，使式24化合物转变成式25所示的化合物。
类似于反应图式1的式7中间体7-溴-四氢萘-1-酮化合物的用途，式20中间体6-溴二氢苯并噻喃-4-酮化合物也可以用于本发明范围内的其它化合物的制备(如以下反应图式6、7和8中所述)。在类似于反应图式1中所述的反应中，也可以将式25化合物转变成其它同系物和衍生物。反应图式3
Figure C9619789600551
反应图式3介绍其中对于式1而言，X为[C(R1)2]n，n为0及Z为乙炔官能团(-C≡C-)的化合物的合成途径。根据该反应图式，按照类似于以上图式1和2中所述反应的反应顺序(由三甲基甲硅烷基乙炔开始反应)，使式26的6-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-酮衍生物反应，经过式27-30的中间体提供式31茚衍生物。在反应图式3范围内的优选实施方案中，所述原料为6-溴-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮，根据化学文献它可以得到(见Smith er al.Org.Prep.Proced.Int.1978，10，123-131)。如下所述，式26化合物例如6-溴-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮也可以用于本发明中所用的其它实例性化合物的合成中。反应图式4
参照反应图式4，介绍实例性化合物的合成途径，其中对于式1而言，Z为-(CR1＝CR1)n-，n’为3、4或5，及Y代表在(CR1＝CR1)n基团和B之间的直接结合键。介绍了例如其中X基团为[C(R1)2]n及n为1(二氢萘衍生物)的合成途径。此外，应该理解在反应图式4和其后其它图式中介绍的反应和合成工艺(包括对于本领域内技术人员是显而易见的改进)也适用于其中X为S、O或NR’(苯并噻喃、苯并吡喃或二氢喹啉衍生物)或[C(R1)2]n及n为0(茚衍生物)的衍生物。
根据反应图式4，使式32的1，2，3，4-四氢萘衍生物与酰氯(R1COCl)在Friedel Crafts条件下反应，并在例如Jones氧化反应中使所生成的乙酰化产物氧化，产生式33的异构的6-和7-乙酰基-1(2H)-萘酮衍生物的混合物。在该反应的特别优选的实施例中，所述式32原料为1，2，3，4-四氢-1，1-二甲基萘(已知化合物)，它可以根据在本申请实验部分中所述的方法制备。使式33的7-乙酰基-1(2H)-萘酮衍生物与乙二醇在酸的存在下反应，以式34的缩酮衍生物形式保护外向环酮部分的氧代官能团。然后，使式34的缩酮与式R14MgBr(符号如式1中所定义)的Grignard试剂反应，产生式35的叔醇。然后，除去二氧戊环保护基并通过用酸处理所述叔醇脱水提供式36的3，4-二氢-7-乙酰基萘衍生物。使式36化合物的酮官能团经过在强碱条件下与使用式37膦酸酯(phosphonate)试剂的Horner Emmons(或类似的)反应，在还原后产生式38醛化合物。另一个在强碱条件下使用式39试剂的Horner Emmons(或类似的)反应提供式40化合物。根据上述反应，后者可以转变成其它的同系物和衍生物。用于制备优选化合物的式37 Horner Emmons试剂的特定实例为氰基甲基膦酸二乙酯；式39的Horner Emmons试剂的实例为(E)-3-乙氧基羰基-2-甲基烯丙基膦酸二乙酯。反应图式5
Figure C9619789600591
反应图式5介绍用于制备其中Z基团为偶氮基(-N＝N-)的化合物的合成方法。如同反应图式4，介绍了例如其中X基团为[C(R1)2]n及n为1(二氢萘衍生物)的合成途径。此外，应该理解所述合成工艺(包括对于本领域内技术人员是显而易见的改进)也适用于用于本发明中的所有偶氮化合物，即其中X为S、O或NR’(苯并噻喃、苯并吡喃或二氢喹啉衍生物)或[C(R1)2]n及n为0(茚衍生物)的衍生物。从而，在基本为标准的硝化条件下，将硝基引入式6起始化合物中产生式41的3，4-二氢-7-硝基-1(2H)-萘酮衍生物。使后者还原成式42的3，4-二氢-7-氨基-1(2H)-萘酮衍生物，然后与式ON-Y(R2)-A-B(式43)的亚硝基化合物在一般用于制备偶氮化合物的条件(冰乙酸)下反应。根据本领域内已知的反应可以获得式43亚硝基化合物。用于合成优选化合物的该化合物的特定实例为4-亚硝基苯甲酸乙酯。然后，使式44的偶氮化合物与双(三甲基甲硅烷基)氨化钠和2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶反应产生式45所代表的4-三氟甲基磺酰氧基衍生物。然后，通过与衍生自芳基或杂芳基化合物R14H的有机金属衍生物反应，将式45化合物转变成式46中所示的偶氮化合物。这后两个反应即转变4-三氟甲基磺酰氧基衍生物和其后与有机金属衍生物的反应在上述反应图式1、2和3中已经被介绍，并用于产生实例性RAR拮抗剂化合物的几种优选的合成方法中。反应图式6
Figure C9619789600611
反应图式6介绍了用于制备其中对于式1而言，Z基团为COO-或CONR1(R1优选为H)化合物的优选合成方法。这些酯和酰胺衍生物由式16的3，4-二氢-7-溴代萘衍生物(它可以按照反应图式1中所述获得)制备。从而，使式16化合物与强碱例如叔丁基锂在惰性醚类溶剂例如四氢呋喃中，在低温下反应，并加入二氧化碳(CO2)提供式47的5，6-二氢-2-萘羧酸衍生物。然后，使式47化合物与式X2-Y(R2)-A-B(式48)的化合物反应，其中X2代表OH或NR1基团，R1优选为氢。本领域内的技术人员将理解：式48化合物为根据现有技术可以得到的芳基或杂芳基羟基或氨基衍生物。式47和式48化合物之间的反应可以在各种已知的酯或酰胺形成条件下进行，例如二者在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶存在下偶合。可选将式47化合物转变成相应的酰氯以便在碱存在下与式48化合物偶合。如上所述，可以将式49的酰胺或酯化合物转变成其它的同系物和衍生物。尽管作为其中式1的X基团为[C(R1)2]n和n为1(二氢萘衍生物)的实例介绍和显示了反应图式6，在此所述方法可适用于制备苯并吡喃、苯并噻喃、二氢喹啉以及茚的衍生物。
根据美国专利号5324744所述内容，其中对于式1而言，Z为-OCO-、NR1CO的本发明化合物以及相应的硫酯和硫代酰胺同系物可以由衍生自式16化合物(其中所述溴官能团用氨基或羟基取代)的中间体制备。反应图式7
Figure C9619789600621
反应图式7介绍用于制备其中对于式1而言，Z为-(CR1＝CR1)n-和n’为0化合物的优选的合成方法。在式16化合物和由式10卤代化合物衍生的Grignard试剂之间的偶合反应中可以得到所述式50化合物。所述偶合反应一般在锌盐和镍(Ni(0))催化剂存在下，在惰性醚类溶剂例如四氢呋喃中进行。如上所述，可以将式50化合物转变成其它同系物和衍生物。反应图式8
参考反应图式8介绍了用于制备其中Z为-(CR1＝CR1)n-和n’为1化合物的优选合成方法。更准确地说，反应图式8介绍用于制备那些为二氢萘衍生物及其中Z基团代表乙烯基(-CH＝CH-)官能团的化合物的优选的方法。然而，在此所述的一般工艺(包括对于本领域内技术人员是显而易见的改进)可适用于类似的苯并吡喃、苯并噻喃、二氢喹啉化合物和适用于其中乙烯基被取代的化合物。从而，根据反应图式8，在合适的催化剂[一般具有式Pd(PPh3)]、酸性受体(例如三乙胺)存在下，在惰性气体(氩气)中，使式7的7-溴-1(2H)-萘酮衍生物与结构为-CH2＝CH-Y(R2)-A-B(式51)的乙烯基衍生物反应。该反应的条件类似于式9乙炔基衍生物与式10试剂(例如见反应图式1)的偶合过程的条件，并且这类反应一般在本领域内称为Heck反应。根据现有技术可以得到式51乙烯基衍生物，用于本发明中优选化合物合成的这类试剂的实例为4-乙烯基苯甲酸乙酯。
所述Heck偶合反应的产物为式52乙烯基衍生物，然后通过用双(三甲基甲硅烷基)氨化钠和2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶处理产生式53的4-三氟甲基磺酰氧基衍生物，其后如上所述，与衍生自芳基或杂芳基化合物R14H的有机金属衍生物反应，将其转化为用于本发明中的化合物。可以将产生的式54化合物转变为其它的同系物和衍生物。
通过使用Wittig或Horner Emmons反应的合成图式，也可以得到式54化合物。例如，可以使式33(见反应图式4)中间体与溴化三苯基磷(Wittig)试剂或更优选与具有结构式(EtO)2PO-CH2-Y(R2)-A-B的膦酸二乙酯(Horner Emmons)试剂反应(如类似于美国专利5324840中所述的Horner Emmons反应)。所述Horner Emmons反应提供在结构上类似于式52的中间体化合物，并通过在反应图式8中所述用于式52化合物的反应顺序将该中间体转变成为式54化合物。芳基和(3-氧代-1-丙烯基)-取代化合物的合成方法
通过在此所述的合成化学途径可以制备具有式101的实例性RAR拮抗剂化合物。合成化学家容易理解：在此所设立的条件为可以一般化到任何及全部由式101所代表的化合物的特定实施方案。反应图式101
Figure C9619789600651
反应图式101(续)
反应图式101介绍式101化合物的合成，其中X为[C(R1)2]n，n为1，p为零及R17为H或低级烷基。换句话说，反应图式101介绍本发明化合物的合成，它们为3，4-二氢萘的衍生物。根据该图式，被R3和R2基团(如同式101中所定义)适当取代的式103四氢萘化合物作为原料。式103化合物优选的实例为1，3，3，4-四氢-1，1-二甲基-萘，它在化学文献(Mathur et al.Tetrahedron，1985，41：1509)中被介绍。在本申请的实验部分中也介绍了自1-溴-3-苯基丙烷合成该化合物的优选的途径。
在Friedel Crafts类型的反应中，使式103化合物与具有结构为R16CH2COCl(R16如同式101中所定义)的酰氯反应，然后，用三氧化铬在乙酸中氧化提供异构的6和7乙酰基-3，4-二氢-1(2H)-萘酮衍生物。在反应图式101中只显示了从本发明角度出发是重要的6-酰基化合物的结构式(式104)。在本发明优选的化合物的制备过程中，R1基团代表甲基，R2、R3和R16为H，从而，相应于式104的优选中间体为3，4-二氢-4，4-二甲基-6-乙酰基-1(2H)-萘酮。
然后，例如通过用酸中的乙二醇处理，将式104化合物的外向环酮官能团作为缩酮保护，提供式105的1，3-二氧戊环基衍生物。然后，使式105化合物与式R14MgBr(R14如同式101中的定义)的Grignard试剂反应产生式106的1，2，3，4-四氢-1-羟基-萘衍生物。然后，通过用酸处理和脱水使式106化合物的外向环酮官能团去保护，产生式107化合物。用于从式105化合物获得式107化合物的另一种方法为使式105化合物与双(三甲基甲硅烷基)氨化钠和2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶(Tf＝SO2CF3)在惰性醚类溶剂例如四氢呋喃，在低温下(-78℃-0℃)反应。该反应通过钠盐中间体进行，该中间体一般不分离，在反应图式101中不表示。总的反应产生三氟甲基磺酰氧基衍生物，然后，使其与衍生自芳基或杂芳基化合物R14H的有机金属衍生物反应，如此所述有机金属衍生物的分子式为R14Met(Met代表一价金属)，优选R14Li(R14如同式101中的定义)。所述与有机金属衍生物优选式R14Li的锂衍生物的反应一般在惰性醚类溶剂中(例如四氢呋喃)，在氯化锌(ZnCl2)和四(三苯基磷)-钯(0)(Pd(PPh3)4)存在下进行。如果不能从市场上买到，可以根据现有技术的已知的方法从化合物R14H(或其卤素衍生物R14-X1，其中X1为卤素)，在醚类溶剂中制备有机金属试剂R14Li。一般而言，试剂R14Li和三氟甲基磺酰氧基衍生物间反应的温度范围在约-78℃-50℃内。
式107酮化合物和式108醛或酮之间缩合的结果形成本发明化合物。在制备本发明的优选实例性化合物的过程中，式108试剂为4-羧基苯甲醛(R17-H)。在式108范围内的并适合于缩合反应及用于本发明范围内化合物(式101)合成的其它试剂的实例为：5-羧基-吡啶-2-醛、4-羧基-吡啶-2-醛、4-羧基-噻吩-2-醛、5-羧基-噻吩-2-醛、4-羧基-呋喃-2-醛、5-羧基-呋喃-2-醛、4-羧基苯乙酮、2-乙酰基-吡啶-5-甲酸、2-乙酰基-吡啶-4-甲酸、2-乙酰基-噻吩-4-甲酸、2-乙酰基-噻吩-5-甲酸、2-乙酰基-呋喃-4-甲酸和2-乙酰基-呋喃-5-甲酸。根据化学文献可以得到后面的化合物；例如见Decroix et al.，J.Chem.Res.(S)，4：134(1978)；Dawson et al.，J.Med.Chem.29：1282(1983)；and Queguiner et al.，Bull Soc.Chimique de France No.10，pp.3678-3683(1969)。所述式107和式108化合物之间的缩合反应在碱存在下，在醇溶剂中进行。优选所述反应在乙醇中，在氢氧化钠存在下进行。本领域内的技术熟练人员将该缩合反应称为醛醇缩合，在此所述的优选实施例中(式107酮与式108醛的缩合)称为Claisen-Schmidt反应。[见March： Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，pp.694-695，McGraw Hill(1968)]。式109化合物在本发明的范围内，也可以经过进一步转化产生本发明的其它化合物。另外，式108的A-B基团只有在经过一种或多种其性质为众所周知和在有经验化学家的技术范围内的合成转变后，可以是本发明范围内如式101所定义的基团。例如，在所述A-B基团上进行的反应可以是去保护、容许反应(homologation)、酯化、皂化、酰胺形成等反应。
一般而言，就式109化合物的衍生化和/或式108芳基和杂芳基化合物的合成(然后，它们可以与式107化合物反应)而言，可以使用下列众所周知的和公开的一般性原理和合成工艺。
如上所述，一般通过使所述酸在合适的醇溶液中，在酸性催化剂例如盐酸或亚硫酰氯的存在下回流将所述羧酸酯化。另外，可以使所述羧酸与合适的醇在二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶存在下缩合。可用常规方法回收和提纯酯。通过在March， Advanced Organic Chemistry(2nd Edition，McGraw-Hill Book Company，p.810)中所述方法可以容易地制备缩醛和缩酮。通过已知的方法(例如在McOmie，Plenum Publishing Press，1973和Protecting Groups，Ed.Greene，JohnWiley&Sons，1981中所述方法)通过分别形成相应的醚和酯、缩醛或缩酮，可以保护所有的醇、醛和酮。
为了在进行反应图式101的缩合反应(其中相当于式108的所述化合物不能从市场上买到)之前，增加式108化合物中n的值，通过在Arndt-Eistert条件或其它容许反应过程下连续地处理，使芳族或杂芳族羧酸符合要求(同时将所述醛基保护)。也可选通过合适的方法，使不是羧酸的衍生物符合要求。然后，通过以上所述的通法使符合要求的酸酯化。
例如通过为具有实践经验的有机化学家所熟知的合成图式，例如通过Wittig等反应或通过自α-卤代芳基烷基羧酸、酯或类似的羧基醛中除去卤素导入双键，可以制备其中A为具有一个或多个双键的链烯基的式108化合物(或本发明的其它中间体，当适用时)。通过相应的芳基甲基酮与强碱例如二异丙基氨基锂反应(与氯代磷酸二乙酯反应，然后加入二异丙基氨基锂)可以制备其中A基团具有一个三键(乙炔基)的式108化合物(或本发明的其它中间体，当适用时)。
作为所述缩合反应的结果或由相应的酯可以容易地直接获得由式109化合物(或本发明的其它中间体或化合物，当适用时)衍生的酸和盐。使用碱金属碱的碱性皂化将提供所述酸。例如可以将式109酯(或本发明的其它中间体或化合物，当适用时)溶解在极性溶剂例如链烷醇中，优选在惰性气体中，在室温下，使用约3摩尔过量的碱例如氢氧化锂或氢氧化钾。将所述溶液搅拌一定时间，15-20小时，冷却，酸化并通过常规方法回收其水解产物。
通过本领域内任何已知的、合适的酰胺化方法由相应的酯或羧酸可以形成酰胺。制备这类化合物的一个方法为转变酸为酰氯，然后用氢氧化铵或适合的胺处理该化合物。
通过使用亚硫酰氯或其它的方法(J.March， Advanced Organic Chemistry，2nd Edition，McGram-Hill Book Company)将相应的酸转化为酰氯，然后用硼氢化钠(March，lbid，p.1124)还原所述酰氯，产生相应的醇来制备醇。可选使用氢化锂铝在低温下还原酯。在Williamson反应条件下(March，Ibid，p.357)使用合适的卤化烷使这些醇烷基化，产生相应的醚。通过使所述醇与合适的酸在酸性催化剂或二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶的存在下反应，可以将所述醇转化为酯。
使用温和的氧化剂例如二氯甲烷中的重铬酸吡啶鎓(Corey，E.J.，Schmidt，G.，Tet.Lett.399，1979)或二氯甲烷中的二甲亚砜/草酰氯(Omura，K.，Swern，D.，Tetrahedron 34：1651(1978))可以由相应的一级醇制备醛。
通过用烷基Grignard试剂或类似的试剂处理所述醛，然后氧化可以由合适的醛制备酮。
通过在March，Ibid，p.810中所述方法，由相应的醛或酮可以制备缩醛或缩酮。反应图式102
Figure C9619789600711
反应图式102(续)
参照反应图式102，介绍其中对于式101而言，p为零，在所述缩合环结构的芳基部分中R2为OH及R17为OH的那些本发明化合物的合成途径。本领域内的技术熟练人员容易理解这些化合物为以烯醇形式的β-二酮。反应图式102也介绍其中p为1的那些本发明化合物的合成途径。本领域内的技术熟练人员容易理解后面的化合物为黄酮。从而，根据该反应图式，使式110的1，2，3，4-四氢-6-甲氧基萘-1-酮衍生物与二烃基锌(R1Zn)在四氯化钛存在下，在合适的溶剂例如二氯甲烷中反应，用偕位的二烃基R1R1代替氧代官能团，产生其中R1为低级烷基的式111化合物。在根据反应图式102制备的本发明化合物的优选实例中，R3基团为氢及R1为甲基。因此，所述二烃基锌为二甲基锌，及优选的式110原料为1，2，3，4-四氢-6-甲氧基萘-1-酮。后一化合物可从市场上买到，例如从Aldrich Chemical Company买到。然后，用三氧化铬在乙酸和乙酸酐中氧化式111的1，2，3，4-四氢-1，2-二烷基-6-甲氧基萘衍生物产生式112的1，2，3，4-四氢-3，4-二烷基-7-甲氧基萘-1-酮衍生物。使式112酮化合物与Grignard试剂(R14MgBr，R14如式101中所定义)反应产生式113的1-羟基-1-芳基-3，4-二氢-3，4-二烷基-7-甲氧基萘衍生物。通过加热，优选在酸中加热，使式113的羟基化合物经过消除过程，产生式114的二氢萘化合物。通过用三溴化硼在合适的溶剂例如二氯甲烷中处理，从式114的化合物的酚甲醚官能团中除去甲基，然后用引入R16CH2CO基团的酰化剂使所述酚羟基酰化，产生式115化合物。在优选的实施方案中，R16为H，从而所述酰化剂为乙酰氯或乙酸酐。使所述酰化反应在碱性溶剂例如吡啶中进行。使式115酰基化酚化合物与三氯化铝在高温下反应，使其经过Fries重排并产生式116的1-芳基-3，4-二烷基-3，4-二氢-6-乙酰基-7-羟基-萘化合物。用引入CO-Y(R2)-A-B基团的酰化剂(例如酰氯)使式116化合物的酚羟基酰化，产生式117化合物。在所述酰氯试剂Cl-CO-Y(R2)-A-B(或类似的酰化剂)中，符号Y、R2和A-B具有式101中的定义。在制备根据本反应图式的本发明的优选化合物的过程中，该试剂为ClCOC6H4COOEt(对苯二甲酸的半乙酯半酰氯)。
使式117化合物与强碱例如吡啶中的氢氧化钾反应，作为分子内Claisen缩合反应的结果产生式118化合物。式118化合物在本发明和式101范围内，其中在缩合环部分的芳族部分中具有羟基作为R2取代基，及R17为羟基。根据前述反应(分子内Claisen缩合)和以前提及的Fries重排，注意到在本说明书中提及可能的反应机理，以便全面地解释在此所述的反应并有助于本领域内技术人员完成在此所述反应和制备本发明的化合物的工作。此外，本发明人不希望受到反应机理和理论的约束，从而在此介绍的本发明不应该受到限制。
使式118化合物与强酸例如硫酸在合适的质子溶剂例如乙酸中反应产生式119黄酮化合物。式119化合物也是在式101范围内(其中p为1)的本发明化合物。可以使式118和式119化合物经过进一步反应和转化过程，提供如以上反应图式101中所述的其它同系物和衍生物。反应图式102中表明转化为同系物和衍生物的过程。反应图式103
参考反应图式103，显示产生其中对于式101而言，X为S、O或NR’，p为零及R17为H或低级烷基的那些本发明化合物的合成途径。然而，利用在反应图式102中所示的一般合成原理，本领域内的技术熟练人员可以对所示的合成方法加以改进，也可以得到其中X为S、O或NR’及p为1或其中X为S、O或NR’及p为零，在所述缩合环部分的芳族部分中R2基团为OH和R17为OH的本发明化合物。
反应图式103的原料为式120的苯酚、苯硫酚或苯胺衍生物。在本发明的优选化合物中，R2和R16基团均为氢，式120的优选原料为3-乙烯基-苯硫酚或3-乙烯基-苯酚，它们为化学文献中已知的化合物[Nuyken，et al.Polym.Bull(Berlin)11：165(1984)]。为了简化说明，在其后的介绍中，可以认为X主要是硫，用于制备本发明的苯并噻喃衍生物。然而，应记住的是：在此所述的图式(包括对于本领域内的技术人员是显而易见的改进)也适用于制备本发明范围内的苯并吡喃(X＝O)和二氢喹啉(X＝NR’)化合物。因而，使式120化合物在碱性条件下与式121的3-溴羧酸反应。在该反应图式中，所述符号具有式101中所述的定义。作为式121试剂的实例(其中R3为氢)为3-溴丙酸。与式121的3-溴羧酸反应产生式122化合物。通过用酸处理使后者环合产生具有式123的7-乙烯基-二氢苯并噻喃-4-酮衍生物(当X为S时)或7-乙烯基-苯并二氢吡喃衍生物(当X为O时)。然后使式123的7-乙烯基-二氢苯并噻喃-4-酮衍生物或7-乙烯基-苯并二氢吡喃-4-酮衍生物在Pd(II)Cl2和CuCl2催化剂存在下氧化提供式124的相应7-酰基(酮)化合物。本领域内的技术熟练人员称后一反应为Wacker氧化。例如通过用酸中的乙二醇处理，将式124化合物的外向环酮基以缩酮的形式保护，提供式125的1，3-二氧戊环基衍生物。然后，使式125化合物经过类似于在反应图式101中式105化合物的反应顺序。从而，使式125的1，3-二氧戊环基衍生物与式R14MgBr的Grignard试剂反应，产生式126叔醇，然后在酸中使其脱水提供式127的苯并噻喃(X为S)、苯并吡喃(X为O)或二氢喹啉衍生物(X为NR’)。然后，使式127酮化合物在碱存在下，在醛醇缩合(Claisen Schmidt)反应中与式108试剂反应，提供式128的本发明化合物。如以上反应图式101和102中所述可以将式128化合物进一步转变成同系物和衍生物。
                       特定实施例 2-羟基-2-甲基-5-苯基戊烷
将100.0g(0.492mol)的1-溴-3-苯基丙烷的100ml乙醚溶液加入13.16g(0.541mol)镁屑在200ml无水乙醚的混合物中，加入5-10ml的所述溶液后，停止加料直到所述Grignard试剂形成开始进行为止。然后用1小时加入剩余的溴化物。于35℃下，搅拌该Grignard试剂20分钟，然后用45分钟加入31.64g(0.541mol)的丙酮。在冷却到0℃以前，于室温下搅拌该反应物过夜，并小心加入20％盐酸酸化。用乙醚(3×200ml)提取其水层，在用硫酸镁干燥前用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层。减压除去溶剂，并蒸馏其残余物，得到63.0g(72％)淡黄色油状产物：
bp99-102℃/0.5mm Hg.1H NMR(CDCl3)：δ7.28-7.18(5H，m)，2.63(2H，t，J＝7.5Hz)，1.68 (2H，m)，1.52 (2H，m)，1.20 (6H，s).1，2，3，4-四氢-1，1-二甲基萘
将五氧化二磷(55.3g，0.390mol)在400ml甲磺酸中的混合物在氩气下于105℃加热直到所述固体溶解为止。将所形成的溶液冷却到室温并在搅拌下缓慢地加入2-羟基-2-甲基-5-苯基戊烷(63.0g，0.354mol)。4小时后，小心地将该溶液倒入1升冰中使反应物骤冷。用乙醚(4×125ml)提取所形成的混合物，并在用硫酸镁干燥前用水、饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层。减压浓缩该溶液，然后蒸馏产生51.0g(90％)澄清无色油状物：
bp.65.67℃/1.1mmHg.1H NMR(CDCl3)：δ7.32(1H，d，J＝7.4Hz)，7.16-7.05(3H，m)，2.77(2H，t，J＝6.3Hz)，1.80 (2H，m)，1.66 (2H，m)，1.28(6H，s).3，4-二氢-4，4-二甲基-1(2H)-萘酮(化合物A)
将350ml冰乙酸和170ml乙酸酐的溶液冷却到0℃，并分小批量小心加入25.0g(0.25mol)三氧化铬。在加入120ml苯以前，搅拌所形成的混合物30分钟。缓慢加入在30ml苯溶液中的1，2，3，4-四氢-1，1-二甲基萘。在加料结束后，将反应物于0℃下搅拌4小时。用水(200ml)稀释该溶液并用乙醚(5×50ml)提取。在用硫酸镁干燥前用水、饱和碳酸钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层。减压除去溶剂，并蒸馏产生16.0g(74％)的淡黄色油状产物：
                                         bp 93-96℃/0.3mm Hg 1H NMR(CDCl3)：δ8.02(1H，dd，J＝1.3，7.8Hz)，7.53(1H，m)，7.42(1H，d，J＝7.9Hz)，7.29(1H，m)，2.74(2H，t，J＝6.8Hz)，2.02(2H，t，J＝6.8Hz)，1.40(6H，s).3，4-二氢-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)
将9.5g(71.4mmol)三氯化铝和3ml二氯甲烷的混合物加入带有高效回流冷凝器、干燥管和加料漏斗的100ml三颈烧瓶中。于室温，搅拌下滴加3，4-二氢-4，4-二甲基-1(2H)-萘酮(5.0g，28.7mmol)(注意：放热反应！)到该混合物中。然后，非常缓慢地加入5.5g(34.5mmol)溴，然后于室温搅拌所形成的混合物2小时。(注意：如果搅拌停止，所述混合物温度会升到70℃，直到再次开始搅拌。)然后，通过缓慢加入冰冷却的6M盐酸使反应骤冷。用乙醚提取该混合物，并在用硫酸镁干燥前，用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠洗涤合并后的有机层。减压除去溶剂，并蒸馏其残留物，提供5.8g(80％)淡黄色油状产物(放置后固化)：                                       bp：140℃/0.4mm Hg.1H NMR(CDCl3)：δ8.11(1H，d，J＝3.0Hz)，7.61(1H，dd，J＝3.0，9.0Hz)，7.31(1H，d，J＝9.0Hz)，2.72(2H，t，J＝6.0Hz)，2.01(2H，t，J＝6.0Hz)，1.28(6H，s).1，2，3，4-四氢-1-羟基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物C)
分两份将4-溴甲苯(5.40g，31.8mmol)在10ml THF中的溶液加入镁屑(648.0mg，27.0mmol)在25ml THF中的混合物中。通过加入2ml所述溶液使反应开始，然后通过加料漏斗缓慢加入其余溶液。于室温下搅拌所述混合物1小时，然后用套管将该溶液转移到第二个烧瓶中。将4.0g(15.9mmol)的3，4-二氢-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)的15ml THF溶液加入到所形成的Grignard试剂中。将所形成的溶液加热到回流过夜，冷却到室温，通过小心加入冰冷却的10％盐酸使反应物骤冷。用乙醚提取然后用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后经硫酸镁干燥。减压除去溶剂提供油状产物，经拄层析纯化(己烷/乙酸乙酯，96∶4)提供无色产物：
                                          1H NMR(CDCl3)：δ7.36 (1H，dd，J ＝ 2.1，7.6Hz)，7.26(3H，m)，7.12(3H，s)，2.34(3H，s)，2.24-2.04(2H，m)，1.81(1H，m)，1.55(1H，m)，1.35(3H，s)，1.30(3H，s).3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物D)
将3.4g(9.85mmol)的1，2，3，4-四氢-1-羟基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物C)和40ml的苯加入带有Dean-Stark分水器的烧瓶内。加入催化量的对甲基苯磺酸一水合物并将所形成的溶液加热到回流达2小时。冷却到室温后，加入乙醚并用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液，然后经硫酸镁干燥。减压除去溶剂，拄层析纯化(100％己烷/硅胶)提供无色固体状目的化合物：
                            1H NMR(CDCl3)：δ7.32(1H，dd，J＝2.1，8.2Hz)，7.21(5H，m)，7.15(1H，d，J＝2.1Hz)，5.98(1H，t，J＝4.7Hz)，2.40(3H，s)，2.32(2H，d，J＝4.7Hz)，1.30(6H，s).7-乙炔基-3，4-二氢-4，4-二甲基萘-1(2H)-酮(化合物E)
将0.97g(1.3mmol)氯化双(三苯基磷)钯(II)和0.26g(1.3mmol)的碘化亚铜加入7g(27.6mmol)的3，4-二氢-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)在150ml三乙胺的溶液中(通入氩气流15分钟)。将氩气通入所述反应混合物中达5分钟，然后加入39ml(36.6mmol)的(三甲基甲硅烷基)乙炔。将所述反应混合物密封在压力管中并置于预热的油浴中(100℃)达24小时。然后，经硅藻土(Celite)过滤所述反应混合物，用乙醚洗涤并在真空浓缩该滤液产生粗品7-(三甲基甲硅烷基)乙炔基-3，4-二氢-4，4-二甲基萘-1(2H)-酮。将0.6g(4.3mmol)的碳酸钾加入所述粗品TMS-乙炔基化合物的50ml甲醇溶液中。将该混合物在室温下搅拌8小时然后过滤。真空浓缩其滤液，用乙醚稀释，用水、10％盐酸和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩。经拄层析纯化(硅胶，10％乙酸乙酯-己烷)，产生白色固体状的目的化合物：
                                                PMR(CDCl3)：δ1.39(6H，s)，2.02(2H，t，J＝7.0Hz)，2.73(2H，t，J＝7.0Hz)，3.08(1H，s)，7.39(1H，d，J＝8.2Hz)，7.61(1H，dd，J＝1.8，8.2Hz)，8.14(1H，d，J＝91.8Hz).4-碘代苯甲酸乙酯
将2ml亚硫酰氯加入10g(40.32mmol)4-碘代苯甲酸在100ml无水乙醇的悬浮液中，然后在回流状态下加热该混合物3小时。真空除去溶剂并将其残留物溶解在100ml乙醚中。用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠溶液洗涤该醚溶液并经硫酸镁干燥。然后，真空除去溶剂，使其残留物经Kugelrohr蒸馏(100℃，0.55mm)产生无色油状的目的化合物：PMR(CDCl3)：δ1.42(3H，t，J～7Hz)，4.4(2H，q，J～7Hz)，7.8(4H).6-碘代烟酸
将碘化钠(20.59g，137.40mmol)在氩气下冷却到-78℃，然后加入氢碘酸(97.13g，759.34mmol)。移去制冷浴，并搅拌该悬浮液5分钟。将6-氯烟酸(22.09g，140.20mmol)加入该混合物中并将所形成的混合物缓慢温热到室温并搅拌。在125℃加热该混合物至回流达24小时，冷却到室温并倒入0℃的丙酮(500ml)中。过滤收集黄色的固体，用200ml1N的硫酸氢钠水溶液洗涤。经甲醇重结晶(用乙醚洗涤结晶)提供白色结晶状的目的化合物：mp177-179℃[lit.mp 187-192，Newkome et al.″Reductive Dehalogenationof Electron-Poor Heterocycles：Nicotinic Acid Derivatives*J.Org.Chem.51：953-954(1986).1H NMR(DMSO-d6)：δ8.81(1H，dd，J＝0.8，2.4Hz)，8.01(1H，dd，J＝0.8，8.2Hz)，7.91(1H，dd，J＝2.4，8.2Hz).6-碘代烟酸乙酯
将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(19.86g，103.6mmol)在二氯甲烷(250ml)中的溶液加入6-碘代烟酸(23.38g，94.20mmol)在二氯甲烷(100ml)的悬浮液中。将乙醇(12.40g，269.27mmol)，然后二甲氨基吡啶(1.15g，9.41mmol)加入该混合物中。将该混合物于50℃下加热24.5小时，真空浓缩，并用水(200ml)稀释，然后用乙醚(550ml)提取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)并浓缩成黄色固体。经快速层析纯化(硅胶，10％乙酸乙酯-己烷)提供白色针晶状目的化合物：as white needles：mp 48-49℃；1H NMR(CDCl3)：δ8.94(1H，d，J＝2.1Hz)，7.91(1H，dd，J＝2.1，8.2Hz)，7.85(1H，d，J＝8.2Hz)，4.41(2H，q，J＝7.1Hz)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz).4-[(5，6，7，8-四氢-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物 F)
将5g(7.2mmol)双(三苯基磷)氯化钯(II)和1.4g(7.2mmol)碘化亚铜加入4g(21.7mmol)的7-乙炔基-3，4-二氢-4，4-二甲基萘-1(2H)-酮(化合物E)(通入氩气流15分钟)和6g(21.7mmol)4-碘代苯甲酸乙酯在100ml三乙胺的溶液中。向该混合物中通入氩气5分钟，然后于室温下搅拌18小时。使该反应混合物经硅藻土过滤并真空浓缩其滤液。经快速层析纯化(硅胶，10％乙酸乙酯-己烷)产生白色固体状的目的化合物：
                     PMR(CDCl3)：δ1.41(3H，t，J＝7.2Hz)，1.41(6H，s)，2.04(2H，t，J＝6.5Hz)，2.76(2H，t，J＝6.5Hz)，4.40(2H，q，J＝7.2Hz)，7.44(1H，d，J＝8.2Hz)，7.59 (2H，d，J＝8.4Hz)，7.68(1H，dd，J＝1.8，8.2Hz)，8.04(2H，d，J＝8.4Hz)，8.15(1H，d，J＝1.8Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲 酸乙酯(化合物G)
将500.0mg(1.44mmol)4-(5，6，7，8-四氢-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物F)在4.0ml THF中的溶液加入291.6mg(1.59mmol)双(三甲基甲硅烷基)氨化钠在5.6ml THF中的冷溶液(-78℃)中。将该反应混合物于-78℃搅拌35分钟，然后加入601.2mg(1.59mmol)5-氯(2-双-三氟甲基磺酰基)酰亚胺在4.0ml THF中的溶液。于-78℃搅拌1小时后，将该溶液温热到0℃并搅拌2小时。通过加入饱和氯化铵水溶液使反应物骤冷。用乙酸乙酯(50ml)提取该混合物并用5％氢氧化钠水溶液、水和盐水洗涤合并的有机层。使该有机相经硫酸钠干燥，然后真空浓缩为黄色油状物。经柱层析纯化(硅胶，7％乙酸乙酯-己烷)产生无色固体状的目的化合物：
        1H NMR(CDCl3)：δ8.04(2H，dd，J＝1.8，8.4Hz)，7.60(2H，dd，J＝1.8，8.4Hz)，7.51(2H，m)，7.32(1H，d，J＝8.0Hz)，4.40(2H，q，J＝7.1Hz)，6.02(1H，t，J＝5.0Hz)，2.44(2H，d，J＝5.0Hz)，1.43(3H，t，J＝7.1Hz)，1.33(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化 合物1)
通过加入189.9mg(1.74ml，2.96mmol)的叔丁基锂(1.7M的己烷溶液)到253.6mg(1.482mmol)的4-溴代甲苯在2.0ml THF的冷溶液(-78℃)中制备4-甲苯基锂(lithiototulene)溶液。搅拌30分钟后，加入269.4mg(1.977mmol)的氯化锌在3.0ml THF中的溶液。将所形成的溶液温热到室温，搅拌30分钟，并经套管加入到472.9mg(0.988mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)和50mg(0.04mmol)的四(三苯基磷)钯(0)在4.0mlTHF的溶液中。将所形成的溶液于50℃加热45分钟，冷却到室温，并用饱和氯化铵水溶液稀释。用乙酸乙酯(40ml)提取该混合物并用水和盐水洗涤合并的有机层。使其有机相经硫酸钠干燥并真空浓缩到黄色油状物。经柱层析纯化(硅胶，5％乙酸乙酯-己烷)产生无色固体状的目的化合物。1H NMR(d6-丙酮)：
  δt.35(6H，s)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，2.36(2H，d，J＝4.7Hz)，2.42(3H，s)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，7.25(5H，m)，7.35(2H，m)，7.52(2H，d，J＝8.5Hz)，7.98(2H，d，J ＝8.5Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-苯基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1a)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用58.2mg(0.36ml，0.69mmol)苯基锂(在环己烷/乙醚中的1.8M溶液)、116.1mg(0.85mmol)氯化锌和13.8mg(0.01mmol)四(三苯基磷)钯(0)将203.8mg(0.43mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：
                              PMR(CDCl3)：δ1.36(6H，s)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，2.37(2H，d，J＝4.7Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，6.02(1H，t，J＝4.7Hz)，7.20(1H，d，J＝1.5Hz)，7.27 (1H，m)，7.39(6H，m)，7.52(2H，d，J＝8.2Hz)，7.98(2H，d，J＝8.2Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化 合物2)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的284.8mg(2.090mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和3-甲苯基锂[通过加入201.2mg(1.86ml，3.14mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到274.0mg(1.568mmol)的3-甲基溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                      1H NMR(CDCl3)：δ7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.39-7.14(7H，m)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.60(3H，s)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化 合物3)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在4.0ml THF中的199.4mg(1.463mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和2-甲苯基锂[通过加入133.9mg(1.23ml，2.09mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到178.7mg(1.045mmol)的2-甲基溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将200.0mg(0.418mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                     1H NMR(CDCl3)：δ7.97(2H，d，J＝8.4Hz)，7.50(2H，d，J＝8.4Hz)，7.49-7.19(6H，m)，6.81(1H，d，J＝1.6Hz)，5.89(1H，t，J＝4.5Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.43-2.14(2H，dq，J＝3.7，5.4Hz)，2.15(3H，s)，1.39-1.34(9H，m).
4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3，5-二甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙 酯(化合物4)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的249.0mg(1.827mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和3，5-二甲基苯基锂[通过加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到249.0mg(1.305mmol)的3，5-二甲基溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                         1H NMR(CDCl3)：δ7.98 (2H，d，J＝8.4Hz)，7.52(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40-7.33(2H，m)，7.20(1H，d，J＝1.6Hz)，7.00(1H，s)，6.97 (2H，s)，5.97(1H，t，J＝4.8Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.36-(6H，s)，2.34(2H，d，J＝4.8Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.37(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-乙基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化 合物5)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的249.0mg(1.827mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和4-乙苯基锂[通过加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到244.0mg(1.305mmol)的4-乙基溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                1H NMR(CDCl3)：δ7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.42-7.24(7H，m)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.71(2H，q，J＝7.6Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-(1，1-二甲基乙基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯 甲酸乙酯(化合物6)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化锌和4-叔丁基苯基锂[通过加入100.6mg(0.97ml，1.57mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.5M溶液)到167.0mg(0.78mmol)的4-叔丁基溴代苯在1.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：1H NMR(CDCl3)：δ7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.28-7.45(7H，m)，6.02(1H，t，J＝4.9Hz)，4.38(2H，q，J＝7.2Hz)，2.36(2H，d，J＝4.9Hz)，1.59(3H，s)，1.40(3H，t，J＝7.2Hz)，1.39(9H，s)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物7)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的249.0mg(1.827mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和4-氯苯基锂[通过加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到252.4mg(1.305mmol)的4-氯-1-溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                              1H NMR(CDCl3)：δ7.98(2H，d，J＝8.4Hz)，7.53(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40-7.27(6H，m)，7.12(1H，d，J＝1.6Hz)，6.00(1H，t，J＝4.8Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝4.8Hz)，1.40(2H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲氧基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯 (化合物8)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的249.0mg(1.827mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和4-甲氧基苯基锂[通过加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到244.1mg(1.305mmol)的4-甲氧基-1-溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                            1H NMR(CDCl3)：δ7.98(2H，d，J＝8.5Hz)，7.52(2H，d，J＝8.6Hz)，7.40-7.21(5H，m)，6.95(2H，d，J＝8.7Hz)，5.97(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，4.34(3H，s)，2.34(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-三氟甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙 酯(化合物9)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的249.0mg(1.827mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和4-三氟甲基苯基锂[通过加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到296.6mg(1.305mmol)的4-三氟甲基溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：1H NMR(CDCl3)：δ7.98(2H，d，J＝8.5Hz)，7.67(2H，d，J＝8.3 Hz)，7.54-7.36(6H，m)，7.10(1H，d，J＝1.6Hz)，6.06(1H，t，J＝4.8Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.38(2H，d，J＝4.8Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35(6H，s)。4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物10)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化锌和2-吡啶锂(lithiopyridine)[通过加入100.6mg(0.97ml，1.57mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.5M溶液)到123.8mg(0.784mmol)的2-溴吡啶在1.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：1H NMR(d6.丙酮)：^[δ8.64(1H，m)，7.99(2H，d，J＝8.5Hz)，7.85(1H，ddd，J＝1.8，7.7，9.5Hz)，7.58(2H，d，J＝8.4Hz)，7.50(1H，d，J＝7.7Hz)，7.47(2 H，d，J＝1.1Hz)，7.35(2H，m)，6.32(1H，t，J＝4.8Hz)，4.34(2H，q，J＝7.2Hz)，2.42(2H，d，J＝7.4Hz)，1.35(3H，t，J＝7.0hz)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物11)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化锌和3-吡啶锂[通过加入100.2mg(0.92ml，1.56mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.5M溶液)到123.8mg(0.784mmol)的3-溴吡啶在1.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制备]将170.0mg(0.35mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：1H NMR(CDCl3)：δ8.63-8.61(2H，dd，J＝1.7Hz)，7.992H，d，J＝8.4Hz)，7.67(1H，dt，J＝7.9Hz)，7.52(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43-7.34(3H，m)，7.10(1H，d，J＝1.6Hz)，6.07(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.40(2H，d，J＝4.7Hz)，1.390(3H，t，J＝7.1Hz)，1.36(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-甲基-5-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙 酯(化合物12)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化锌和2-甲基-5-吡啶锂[通过加入100.5mg(0.92ml，1.57mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到134.8mg(0.784mmol)的2-甲基-5-溴吡啶在1.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：
                               1H NMR(CDCl3)：δ8.50(1H，d，J＝2.2Hz)，7.99(2H，d，J＝8.3Hz)，7.56(1H，dd，J＝2.3，8.0Hz)，7.53(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43(1H，dd，J＝2.3，8.0Hz)，7.37(2Hd，J＝8.0Hz)，7.21(1H，d，J＝8.1Hz)，7.11(1H，d，J＝1.5Hz)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，4.38(2H，q，J＝7.2Hz)，2.63(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.6Hz)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2- 萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物H)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的150.0mg(1.10mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和3-(2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基锂[通过加入100.2mg(0.92ml，1.564mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到226.0mg(0.787mmol)的3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将150.0mg(0.314mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                 1H NMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40-7.22(4H，m)，6.95(1H，d，J＝7.6Hz)，6.84-6.82(2H，m)，6.00(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(3H，s)，0.99(9H，s)，0.23 (6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氢基)苯基)-2- 萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物I)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的209.0mg(1.53mmol)氯化锌、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基锂[通过加入140.3mg(1.30ml，2.19mmol)的叔丁基锂(在戊烷中的1.7M溶液)到315.0mg(1.09mmol)的4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)溴代苯在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将210.0mg(0.439mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                             1H NMR(CDCl3)：δ7.98 (2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.39-7.25(3H，m)，7.21(2H，d，J＝8.5Hz)，5.87(2H，d，J＝8.5Hz)，5.96(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.33(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.33(6H，s)，1.01(9H，s)，0.25(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-羟基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化 合物13)
于室温下，将91.5mg(0.35ml，0.35mmol)的氟化四丁基铵(在THF中的1M溶液)加入60.0mg(0.114mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)-苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物H)在1.0ml THF的溶液中。搅拌过夜后，用乙酸乙酯稀释该溶液，在经硫酸镁干燥之前，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。减压除去溶剂，然后经柱层析纯化(4∶1，己烷∶乙酸乙酯)提供无色固体状的目的化合物：                                                           1H NMR(CDCl3)：δ7.98(2H，d，J＝7.8Hz)，7.52(2H，d，J＝8.3Hz)，7.39-7.21(4H，m)，6.93(1H，d，J＝7.5Hz)，6.84(1H，d，7.1Hz)，6.83(1H，s)，6.01 1H，t，J＝4.7Hz)，4.91(1H，s)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-羟基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化 合物14)
于室温下，将73.2mg(0.29ml，0.29mmol)的氟化四丁基铵(在THF中的1M溶液)加入50.0mg(0.095mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物I)在1.0ml THF的溶液中。搅拌过夜后，用乙酸乙酯稀释该溶液，在经硫酸镁干燥之前，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。减压除去溶剂，然后经柱层析纯化(4∶1，己烷∶乙酸乙酯)提供无色固体状的目的化合物：                                                             1H NMR(CDCl3)：δ7.98(2H，d，J＝8.2Hz)，7.52(2H，d，J＝8.3Hz)，7.41-7.20(5H，m)，6.88(2H， d，J＝8.4Hz)5.96(1H，t，J＝4.5Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.34(2H，d，J＝4.5Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(5-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙 酯(化合物15)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在4.0ml THF中的150.0mg(1.10mmol)氯化锌、14mg(0.012mmol)四(三苯基磷)钯(0)和5-甲基噻唑-2-基锂[通过加入53.2mg(0.53ml，0.83mmol)的正丁基锂(在戊烷中的1.55M溶液)到82.0mg(0.83mmol)的5-甲基噻唑在5.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将264.0mg(0.552mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                     1H NMR(CDCl3)：δ7.99(2H，d，J＝7.8Hz)，7.88(1H，d，J＝1.5Hz)，7.55(2H，d，J＝7.8Hz)，7.54(1H，s)，7.45(1H，dd，J＝1.5，8.0Hz)，7.35(1H，d，J＝7.9Hz)，6.48(1H，t，J＝4.8Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，2.51(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.8Hz)，1.40(3H，s)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物15a)
通过将41.2mg(0.42ml，0.63mmol)的正丁基锂(在己烷中的1.5M溶液)加入53.4mg(0.63mmol)噻唑在1.0ml THF的冷却溶液(-78℃)中制备2-噻唑锂(2-lithiothiazole)溶液。搅拌该溶液30分钟，然后加入113.9mg(0.84mmol)氯化锌在1.5ml THF中的溶液。将所形成的溶液温热到室温，搅拌30分钟，然后经套管将该有机锌加入200.0mg(0.42mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)和12.4mg(0.01mmol)的四(三苯基磷)钯(0)在1.5ml THF的溶液中。将所形成的溶液在50℃下加热45分钟，冷却到室温并用饱和氯化铵水溶液稀释。用乙酸乙酯(40ml)提取该混合物，并用水和盐水洗涤合并的有机层。使该有机相经硫酸钠干燥，并真空浓缩到黄色油状物。经柱层析纯化(硅胶，20％乙酸乙酯-己烷)产生无色油状的目的化合物：
           PMR(CDCl3)：δ1.35(6H，s)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，2.42(2H，d，J＝4.8Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，6.57(1H，t，J＝4.8Hz)，7.33(1H，d，J＝3.3Hz)，7.36(1H，d，J＝8.0Hz)，7.46(1H，dd，J＝1.7，8.1Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.87(1H，d，J＝1.7Hz)，7.92(1H，d，J＝3.3Hz)，8.00(2H，d，J＝8.4Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙 酯(化合物16)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在6.0ml THF中的168.0mg(1.23mmol)氯化锌、16mg(0.014mmol)的四(三苯基磷)钯(0)和4-甲基噻唑-2-基锂[通过加入59.6mg(0.60ml，0.93mmol)的正丁基锂(在己烷中的1.55M溶液)到92.0mg(0.93mmol)的4-甲基噻唑在6.0ml THF的冷溶液(-78℃)中制备]将295.0mg(0.617mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：
                                                                         1H NMR(CDCl3)：δ8.00(2H，d，J＝8.4Hz)，7.80(1H，d，J＝1.7Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.45(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.35(1H，d，J＝8.0Hz)，6.87(1H，s)，6.52(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.2Hz)，2.54(3H，s)，2.39(2H，d，J＝4.7Hz)，1.40(3H，t，J＝7.2Hz)，1.33(3H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲 酸乙酯(化合物17)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的110.0mg(0.84mmol)氯化锌、12mg(0.011mmol)四(三苯基磷)钯(0)和4，5-二甲基噻唑-2-基锂[通过加入40.2mg(0.39ml，0.63mmol)的正丁基锂(在己烷中的1.55M溶液)到71.0mg(0.63mmol)的4，5-二甲基噻唑在2.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将200.0mg(0.418mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                       1H NMR(CDCl3):δ8.00(2H，d，J＝8.4Hz)，7.82(1H，d，J＝1.7Hz)，7.54(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.33 91H，d，J＝8.0Hz)，6.45(1H，t，J＝4.9Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，2.41(3H，s)，2.40(3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.9Hz)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-甲基-5-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化 合物18)
于室温下，搅拌81.7mg(0.194mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-甲基-5-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物12)和40.7mg(0.969mmol)的LiOH-H2O在3ml THF/水(3∶1，v/v)中的溶液过夜。通过加入饱和氯化铵水溶液抑制该反应，并用乙酸乙酯提取。用水和盐水洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥，真空浓缩产生无色固体状目的化合物：1H NMR(d6-DMSO)：δ8.41(1H，d，J＝1.9Hz)，7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.63(1H，dd，J＝2.3，7.9Hz)，7.59(2H，d，J＝8.3Hz)，7.49(2H，m)，7.33(1H，d，J＝7.8Hz)，6.95(1H，s)，6.11(1H，t，J＝4.5Hz)，2.52 (3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.6Hz)，1.31(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 19)
于室温下，搅拌80.0mg(0.196mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物10)和20.6mg(0.491mmol)的LiOH-H2O在3ml THF/水(3∶1，v/v)中的溶液过夜。通过加入饱和氯化铵水溶液抑制该反应，并用乙酸乙酯提取。用水和盐水洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥，真空浓缩产生无色固体状目的化合物：1H NMR(d6-DMSO)：δ8.64(1H，m)，7.94(2H，d，J＝8.3Hz)，7.87(1H，dt，J＝1.7，7.8Hz)，7.58(2H，d，J＝8.3Hz)，7.50(1H，d，J＝8.2Hz)，7.47(2H，s)，7.37(1H，m)，7.25(1H，s)，6.30(1H，t，J＝4.6Hz)，2.39 (2H，d，J＝4.6Hz)，1.31(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 20)
将28.0mg(0.70mmol，0.7ml)的氢氧化钠(1M水溶液)加入30.0mg(0.071mmol)4-((5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物2)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：                    1H NMR(DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.5Hz)，7.59(2H，d，J＝8.5Hz)，7.46(2H，s)，7.32-7.13(4H，m)，7.10(1H，s)，6.98(1H，t，J＝4.5Hz)，2.34(3H，s)，2.31(2H，d，J＝4.5Hz)，1.30(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-乙基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 21)
将28.0mg(0.70mmol，0.7ml)的氢氧化钠(1M水溶液)加入47.0mg(0.108mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-乙基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物5)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：                                                                                1H NMR(DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.59(2H，d，J＝8.3Hz)，7.46(2H，s)，7.29-7.21(4H，m)，7.02(1H，s)，6.01(1H，t，J＝4.5Hz)，2.64(2H，q，J＝7.5Hz)，2.33(2H，d，J＝4.5Hz)，1.29(6H，s)，1.22(3H，t，J＝7.5Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲氧基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合 物22)
将40.0mg(1.00mmol，1.0ml)的氢氧化钠(1M水溶液)加入80.0mg(0.183mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲氧基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物8)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：              1H NMR(DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.60(2H，d，J＝8.3Hz)，7.45(2H，s)，7.24(2H，d，J＝8.6Hz)，7.02-5.89(3H，m)，5.98(1H，t，J＝4.4Hz)，3.79(3H，s)，2.31(2H，d，J＝4.7Hz)，1.29(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-三氟甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化 合物23)
将60.0mg(1.50mmol，1.50ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入70.0mg(0.148mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-三氟甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物9)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：
   1H NMR(DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.80(2H，d，J＝8.1Hz)，7.61-7.47(6H，m)，6.97(2H，s)，6.16(1H，t，J＝4.5Hz)，2.37(2H，d，J＝4.6Hz)，1.30(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3，5-二甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化 合物24)
将48.0mg(1.20mmol，1.20ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入90.0mg(0.207mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3，5-二甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物4)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：                                                                         1HNMR(DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.2Hz)，7.59(2H，d，J＝8.2Hz)，7.45(2H，s)，7.00(1H，s)，6.97(1H，s)，5.97(1H，t，J＝4.5Hz)，2.31(2H，d，J＝4.5Hz)，2.30(6H，s)，1.29(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 25)
将48.0mg(1.20mmol，1.20ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入80.0mg(0.181mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物7)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：
                                                                                  1H NMR(DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.60(2H，d，J＝8.3Hz)，7.51-7.48(4H，m)，7.34(2H，d，J＝8.4Hz)，6.97(1H，s)，6.07(1H，t，J＝4.5Hz)，2.34(2H，d，J＝4.6Hz)，1.29(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 26)
将48.0mg(1.20mmol，1.20ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入45.0mg(0.110mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物11)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：                                                                         1H NMR(DMSO)：δ8.60(1H，d，j＝4.6Hz)，8.55(1H，s)，7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.76(1H，d，J＝7.5Hz)，7.60(2H，d，J＝8.3Hz)，7.51-7.46(3H，m)，6.94(1H，s)，6.14(1H，t，J＝4.5Hz)，2.37(2H，d，J＝4.5Hz)，1.31(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 27)
将60.0mg(1.50mmol，1.50ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入80.0mg(0.190mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物3)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：                                                                         1HNMR(DMSO)：δ7.89(2H，d，J＝8.4Hz)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz)，7.46(2H，s)，7.29-7.14(4H，m)，6.59(1H，s)，5.90(1H，t，J＝4.7Hz)，2.39(2H，m)，2.60(3H，s)，1.39(3H，s)，1.29(3H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-羟基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 28)
将40.0mg(1.00mmol，1.00ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入40.0mg(0.076mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物H)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：
              1H NMR (d6-丙酮)：δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.49(2H，d，J＝8.4 z)，7.35(2H，s)，7.15-7.07(2H，m)，6.77-6.69(3H，m)，5.92(1H，t，J＝4.7Hz)，2.25(2H，d，J＝4.7Hz)，1.23(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-羟基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 29)
将60.0mg(1.50mmol，1.50ml)的氢氧化钠(1.0M水溶液)加入75.0mg(0.143mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物I)在3ml乙醇和2ml THF的溶液中。将该溶液在50℃下加热2小时，冷却到室温并用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：
                       1H NMR(d6-丙酮):δ8.01(2H，d，J＝8.3Hz)，7.59(2H，d，J＝8.4Hz)，7.45(2H，s)，7.20-7.17(3H，m)，6.92-6.89(2H，m)，5.97(1H，t，J＝4.7Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(5-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化 合物30)
于室温下，将氢氧化钠水溶液(1ml，1M，1mmol)加入100mg(0.23mmol)4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(5-甲基噻唑-2-基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物15)和4ml乙醇的溶液中。将该形成的溶液在50℃下加热1小时并真空浓缩。使其残留物悬浮在二氯甲烷和醚(5∶1)溶液中，用1M盐酸水溶液酸化到pH为5。使其分层，并用盐水洗涤其有机层，干燥(硫酸钠)，过滤并减压除去溶剂，产生白色固体状的目的化合物：  1H NMR(d6-DMSO)：δ7.96(1H，d，J＝1.7Hz)，7.95(2H，d，J＝8.0Hz)，7.65(2H，d，J＝8.0Hz)，7.64(1H，s)，7.53(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.46(1H，d，J＝8.0Hz)，6.59(1H，t，J＝4.5Hz)，2.50(3H，s)，2.39(2H，d，J＝4.5Hz)，1.27(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 30a)
于室温下，搅拌33.9mg(0.08mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物15a)和8.5mg(0.20mmol)的LiOH-H2O在3ml THF/水(3∶1，v/v)中的溶液过夜。通过加入饱和氯化铵水溶液抑制该反应，并用乙酸乙酯提取。用水和盐水洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥，真空浓缩产生无色固体状目的化合物：
                                                                                     PMR(d6-DMSO)：δ1.29(6H，s)，2.42(2H，d，J＝4.6Hz)，6.68(1H，t，J＝4.6Hz)，7.51(2H，m)，7.62(2H，d，J＝8.2Hz)，7.77(1H，d，J＝3.3Hz)，7.93(2H，d，J＝8.2Hz)，7.98(1H，d，J＝3.3Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化 合物31)
于室温下，将氢氧化钠水溶液(1ml，1M，1mmol)加入4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基噻唑-2-基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物16)(145.0mg，0.34mmol)和4ml乙醇的溶液中。将所形成的溶液在50℃下加热1小时并真空浓缩。使其残留物悬浮在二氯甲烷和醚(5∶1)溶液中，用1M盐酸水溶液酸化到pH为5。使其分层，并用盐水洗涤其有机层，干燥(硫酸钠)，过滤并减压除去溶剂，产生白色固体状的目的化合物：
                        1H NMR(d6-DMSO)：δ7.94(2H，d，J＝8.1Hz)，7.87(1H，d，J＝1.6Hz)，7.63(2H，d，J＝8.3Hz)，7.50(1H，dd，J＝1.6，8.1Hz)，7.45(1H，d，J＝8.1Hz)，7.27(1H，s)，6.58(1H，t，J＝4.8Hz)，2.43(3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.8Hz)，1.26(6H，s).4-[(5，6-二氧-5，5-二甲基-8-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲 酸(化合物32)
于室温下，将氢氧化钠水溶液(1ml，1M，1mmol)加入4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物17)(58.0mg，0.13mmol)和4ml乙醇的溶液中。将所形成的溶液在50℃下加热1小时并真空浓缩。使其残留物悬浮在二氯甲烷和醚(5∶1)溶液中，用1M盐酸水溶液酸化到pH为5。使其分层，并用盐水洗涤其有机层，干燥(硫酸钠)，过滤并减压除去溶剂，产生白色固体状的目的化合物：
                1H NMR(d6-DMSO)：δ7.94(2H，d，J＝8.4Hz)，7.86(1H，d，J＝1.6Hz)，7.61(2H，d，J＝8.3Hz)，7.50(1H，dd，J＝1.6，8.0Hz)，7.45(1H，d，J＝8.0Hz)，6.51(1H，t，J＝4.9Hz)，2.37(3H，s)，2.36(2H，d，J＝4.6Hz)，2.32(3H，s)，1.26(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(5-甲基-2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙 酯(化合物33)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0ml THF中的202.0mg(1.48mmol)氯化锌、24mg(0.022mmol)四(三苯基磷)钯(0)和5-甲基-2-噻吩锂[通过加入58.6mg(0.36ml，0.915mmol)的正丁基锂(在己烷中的2.5M溶液)到89.8mg(0.915mmol)的2-甲基噻吩在2.0ml THF的冷溶液(-78℃)中制备]将170.0mg(0.366mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：
                                                                   1H NMR(CDCl3)：δ8.00(2H，d，J＝8.3Hz)，7.59(1H，d，J＝1.7Hz)，7.55(2H，d，J＝8.2Hz)，7.43(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.35(1H，d，J＝8.0Hz)，6.87(1H，d，J＝3.5Hz)，6.74(1H，d，J＝2.8Hz)，6.15(1H，t，J＝4.8Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，2.52(3H，s)，2.32(2H，d，J＝4.8Hz).1.40(3H，t，7.1Hz)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物33a)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用186.8mg(1.37mmol)氯化锌、37.1mg(0.03mmol)四(三苯基磷)钯(0)和2-噻吩锂[通过加入65.9mg(0.69ml，1.03mmol)的正丁基锂(在己烷中的1.5M溶液)到86.5mg(1.03mmol)的噻吩在1.0ml THF的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                         PMR(CDCl3)：δ1.33(6H，s)，1.36(3H，t，J＝7.1Hz)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，4.34(2H，q，J＝7.2Hz)，6.25(1H，t，J＝4.7Hz)，7.13(2H，m)，7.47(4H，m)，7.62(2H，d，J＝8.5Hz)，8.00(2H，d，J＝8.5Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(5-甲基-2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化 合物34)
于室温下，将氢氧化钠水溶液(1ml，1M，1mmol)加入4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(5-甲基-2-噻吩基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物33)(35.0mg，0.082mmol)在2ml乙醇和1ml THF的溶液中。将所形成的溶液在室温下搅拌过夜，然后用10％盐酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后经硫酸钠干燥，减压除去溶剂，提供无色固体状的目的化合物：
1H NMR(d6-丙酮)：δ8.03(2H，d，J＝8.6Hz)，7.63(2H，d，J＝8.6Hz)，7.54-7.48(3H，m)，6.89(1H，m)，6.18(1H，t，J＝4.7Hz)，2.49(3H，s)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 34a)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)相同的方法，使用在水中的17.8mg(0.42mmol)LiOH，将70.0mg(0.17mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物33a)转变成目的化合物(无色固体)：                                                           PMR(d6-DMSO)：δ1.27(6H，s)，2.33(2H，d，J＝4.9Hz)，6.23(1H，t，J＝4.9Hz)，7.14(2H，m)，7.38-7.56(4H，m)，7.61(2H，d，J＝8.3Hz)，7.92(2H，d，J＝8.3Hz).5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)
将3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物D)(250.0mg，0.764mmol)在2.0ml THF中的溶液冷却到-78℃，并缓慢加入1.0ml的叔丁基锂(1.68mmol，1.7M戊烷溶液)。于-78℃搅拌1小时后，将气体二氧化碳(通过干冰的蒸发而产生，经过干燥管)鼓泡通入反应物中达1小时。然后，使该反应液温热到室温，通过加入10％盐酸抑制反应。用乙酸乙酯提取，然后用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥。减压除去溶剂，并用己烷洗涤该固体提供无色固体目的化合物：                                                         1H NMR(CDCl3)δ7.94(1H，dd，J＝1.8，8.1Hz)，7.76(1H，d，J＝1.8Hz)，7.45(1H，d，J＝8.1Hz)，7.24(4H，m)，6.01(1H，t，J＝4.7Hz)，2.40(3H，s)，2.36(2H，d，J＝4.7Hz)，1.35(6H，s).4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯 (化合物35)
于室温下，将170.0mg(0.58mmol)的5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、115.0mg(0.70mmol)的4-氨基苯甲酸乙酯、145.0mg(0.76mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和92.4mg(0.76mmol)的4-二甲氨基吡啶在6.0ml DMF中的溶液搅拌过夜。加入乙酸乙酯，并用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤所形成的溶液，然后经硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，通过柱层析(10-15％乙酸乙酯/己烷)分离无色固体状的产物：
                                                                      1H NMR(CDCl3)：δ8.02(2H，d，J＝8.7Hz)，7.72(2H，m)，7.65(2H，d，J＝8.7Hz)，7.52(1H，d，J＝1.8Hz)，7.48(1H，d，J＝8.0-Hz)，7.25(4H，m)，6.15(1H，t，J＝4.9Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.40(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.9Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.37(6H，s).4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸(化 合物36)
将240.1mg氢氧化钠(6.00mmol，3.0ml 2M的水溶液)加入26.5mg(0.06mmol)的4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物35)在3.0ml乙醇和4.0ml THF中的溶液中。于室温下搅拌72小时后，通过加入10％盐酸抑制该反应。用乙酸乙酯提取，经硫酸镁干燥有机层，在减压除去溶剂后提供固体。经乙腈结晶提供无色固体状的目的化合物：                         1H NMR(d6-DMSO)：δ10.4(1H，s)，7.91-7.81(5H，m)，7.54(1H，d，J＝8.1Hz)，7.45(1H，d，J＝1.7Hz)，7.23(4H，s)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，2.35(5H.s).1.33(6H，s).4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸乙酯 (化合物37)
于室温下，将25.0mg(0.086mmol)的5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、17.5mg(0.103mmol)的4-羟基苯甲酸乙酯、21.4mg(0.112mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和12.6mg(0.103mmol)的4-二甲氨基吡啶在2.0ml DMF中的溶液搅拌过夜。加入乙酸乙酯，并在用硫酸镁干燥以前，用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤所形成的溶液。减压除去溶剂后，通过柱层析(10％乙酸乙酯/己烷)分离淡黄色固体状的产物：
                                                                   1H NMR(CDCl3)：δ8.08(2H，d，J＝8.1Hz)，8.05(1H，dd，J＝1.8，8.1Hz)，7.89(1H，d，J＝1.8Hz)，7.50(2H，d，J＝8.1Hz)，7.22(5H，m)，6.05(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.39(2H，d，J＝4.7Hz)，2.38(3H，s)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.37(6H，s).4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸2-三 甲硅基乙酯(化合物38)
于室温下，将93.5mg(0.320mmol)的5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、76.0mg(0.319mmol)的4-羟基苯甲酸2-三甲硅基乙酯、80.0mg(0.417mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和51.0mg(0.417mmol)的4-二甲氨基吡啶在4.0ml DMF中的溶液搅拌过夜。加入乙酸乙酯，并在用硫酸镁干燥以前，用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤所形成的溶液。减压除去溶剂后，通过柱层析(5％乙酸乙酯/己烷)分离无色固体状的产物：                                                                                 1H NMR(CDCl3)：δ8.08(2H，d，J＝8.8Hz)，8.05(1H，dd，J＝1.8，8.1Hz)，7.50(1H，d，J＝8.1Hz)，7.26-7.18(6H，m)，6.05(1H，t，J＝4，7Hz)，4.42(2H，t，J＝8.4Hz)，2.40(2H，d，J＝4.7Hz)，2.39(3H，s)，1.38(6H，s)，0.09(9H，s).4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸(化 合物39)
于室温下，将110.0mg(0.213mmol)的4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸2-三甲硅基乙酯(化合物38)和167.3mg氟化四丁基铵(0.640mmol，0.64ml在THF中的1M溶液)在2.0ml THF中的溶液搅拌22小时。加入乙酸乙酯，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤所形成的溶液，然后经硫酸镁干燥。减压除去溶剂并用乙酸乙酯和乙腈洗涤残留固体提供无色固体状的目的化合物：
                                                                   1H NMR(d6-丙酮)：δ8.10(2H，d，J＝8.8Hz)，8.06(1H，dd，J＝2.0，8.1Hz)，7.82(1H，d，J＝1.9Hz)，7.64(1H，d，J＝8.1Hz)，7.35(2H，d，J＝8.6Hz)，7.25(4H，m)，6.08(1H，t，J＝4.7Hz)，2.42(2H，d，J＝4.7Hz)，2.35(3H，s)，1.39(6H，s).2-氟-4-[ [(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲 酸乙酯(化合物40)
将115.0mg(0.41mmol)的5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、89.0mg(0.49mmol)的2-氟-4-氨基苯甲酸乙酯、102.0mg(0.53mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和65.0mg(0.53mmol)的4-二甲氨基吡啶在5.0ml DMF中的溶液于50℃下搅拌1小时，然后于室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，并在用硫酸镁干燥以前，用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤所形成的溶液。减压除去溶剂后，通过柱层析(20％乙酸乙酯/己烷)分离无色固体状的产物：
           1H NMR(CDCl3)：δ7.96(1H，s)，7.89(1H，t，J＝8.4Hz)，7.70(2H，m)，7.52(1H，d，J＝1.9Hz)，7.45(1H，d，J＝8.1Hz)，7.23(5H，m)，6.04(1H，t，J＝4.8Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.38(3H，s)，2.35(2H，d，J＝4.8Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.36(6H，s).2-氟-4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲 酸(化合物41)
将40.0mg氢氧化钠(1.00mmol，1.0ml1M的水溶液)加入41.6mg(0.091mmol)的2-氟-4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物40)在2.0ml乙醇和2.0ml THF中的溶液中。于室温下搅拌过夜后，通过加入10％盐酸抑制该反应。用乙酸乙酯提取，经硫酸镁干燥有机层，在减压除去溶剂后提供固体。经乙腈结晶提供淡黄色固体状的目的化合物：                                          1H NMR(d6-丙酮)：δ9.84(1H，s)，7.94-7.83(3H，m)，7.64(1H，dd，J＝2.0Hz)，7.53(2H，d，J＝8.1Hz)，7.23(4H，s)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，2.36(3H，s)，1.35(6H，s).4-[[5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸 乙酯(化合物42)
将110.0mg(0.25mmol)的4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物35)和121.0mg(0.30mmol)的[2，4-双(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫代-2，4-diphosphetane-2，4-二硫醚](Lawesson’s试剂)在12.0ml苯中的溶液回流过夜。在冷却到室温后，将所述混合物过滤并减压浓缩其滤液。经柱层析(10-25％乙酸乙酯/己烷)分离黄色固体状的目的化合物：
                        1H NMR(CDCl3)：δ8.92(1H，s)，8.06(2H，t，J＝8.5Hz)，7.88-7.70(3H，m)，7.42(2H，d，J＝8.1Hz)，7.18(4H，m)，6.03(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.38(3H，s)，2，36(2H，d，J＝4.7Hz)，1.56(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35(6H，s).4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸 (化合物43)
将60.0mg氢氧化钠(1.50mmol，1.5ml 1M的水溶液)加入84.0mg(0.184mmol)的4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物42)在2.0ml乙醇和2.0ml THF中的溶液中。于室温下搅拌过夜后，通过加入10％盐酸抑制该反应。用乙酸乙酯提取，经硫酸镁干燥有机层，在减压除去溶剂后提供固体。经乙腈结晶提供黄色固体状的目的化合物：
                                                                  1H NMR(d6-丙酮)：δ10.96(1H，s)，8.05(4H，m)，7.72(1H，dd，J＝2.0，8.0Hz)，7.54(1H，s)，7.46(1H，d，J＝8.1Hz)，7.20(4H，m)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，2.33(3H，s)，1.35(6H，s).2-乙酰基-6-溴代萘(化合物L)
将21.0g(267mmol)乙酰氯加入44.0g(0.212mol)2-溴代萘和34.0g(0.255mol)的三氯化铝在400ml硝基苯的冷的(10℃)混合物中。将该机械搅拌下的反应混合物温热到室温，在40℃下加热18小时。在冰浴中冷却到0℃后，通过加入12M盐酸(70ml)抑制反应。使其分层，并用水和稀的碳酸氢钠水溶液洗涤其有机相。Kugelrohr蒸馏，然后经10％乙酸乙酯-己烷重结晶产生23g黄褐色固体状的目的化合物：                   1H NMR(CDCl3):δ8.44(1H，br s)，8.04-8.10(2H，m)，7.85(1H，d，J＝8.5Hz)，7.82(1H，d，J＝8.8Hz)，7.64(1H，d，J＝8.8Hz)，2.73(3H，s).6-溴-2-萘甲酸(化合物M)
将4g(16.06mmol)2-乙酰基-6-溴代萘(化合物L)在50ml1，4-二氧六环中的溶液加入次氯酸钠(62ml，5.25％的水溶液(w/w)，3.6g，48.18mmol)和氢氧化钠(6.4g，160.6mmol)在50ml水的溶液中。将该黄色溶液在油浴中于70℃下加热2小时，冷却到室温，用乙醚(2×50ml)提取。用亚硫酸氢钠溶液稀释其水层(直到碘化钾指示液保持无色为止)，然后用1 N硫酸酸化(pH＜2)产生白色沉淀。用乙醚提取该混合物，并用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机相，干燥(硫酸镁)和浓缩产生3.54g(88％)固体状的目的化合物：                                         1H NMR(DMSO-d6)：δ8.63(1H，br s)，8.32(1H，d，J＝2.0Hz)，8.10(1H，d，J＝8.8Hz)，8.00-8.05(2H，m)，7.74(1H，dd，J＝2.0，8.8Hz).6-溴-2-萘甲酸乙酯(化合物N)
18 M硫酸(2ml)加入3.1g(12.43mmol)的6-溴-2-萘甲酸(化合物M)在乙醇(30ml，23.55g，511.0mmol)的溶液中。将该溶液回流30分钟，冷却到室温，在戊烷(100ml)和水(100ml)之间分配该反应混合物。用戊烷(100ml)提取其水相，用饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)并浓缩产生灰白色的固体。经快速层析纯化(硅胶，10％乙酸乙酯∶己烷)提供白色固体状的目的化合物：
       1H NMR(CDCl3)：δ8.58(1H，br s)，8.10(1H，dd，J＝1.7，9Hz)，8.06(1H，d，J＝2Hz)，7.83(1H，d，J＝9Hz)，7.80(1H，d，J＝9Hz)，7.62(1H，dd，J＝2，9Hz).(E)-4-[2-5，6，7，8-四氢-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙烯基1-苯甲酸乙酯 (化合物O)
将124.0mg(0.40mmol)的三(2-甲基苯基)磷，然后44.0mg(0.20mmol)的乙酸钯(II)加入520.0mg(2.00mmol)的3，4-二氢-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)和510.0mg(2.90mmol)的4-乙烯基苯甲酸乙酯在4.0ml三乙胺(通入氩气25分钟脱气)的溶液中。将所形成的溶液于95℃加热2.5小时，冷却到室温，减压浓缩。经柱层析纯化(10％乙酸乙酯/己烷)提供无色固体状的目的化合物：                                          1HNMR(CDCl3)：δ8.19(1H，d，J＝2.0Hz)，8.03(2H，d，J＝8.4Hz)，7.69(1H，dd，J＝2.0，8.2Hz)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz)，7.45(1H，d，J＝8.2Hz)，7.20(2H，s)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，2.76(2H，t，J＝6.5Hz)，2.04(2H，t，J＝6.5Hz)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz，and 6H，s).(E)-4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔 基]-苯甲酸乙酯(化合物P)
将700.0mg(2.00mmol)的(E)-4-[2-(5，6，7，8-四氢-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物O)在25.0ml THF中的溶液加入440.0mg(2.40mmol)的双(三甲基硅基)氨化钠在10.0ml THF的冷的(-78℃)溶液中。于-78℃搅拌1.5小时后，一次性加入960.0mg(2.40mmol)的2[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶.30分钟后，将该溶液温热到0℃并搅拌3小时。通过加入饱和氯化铵水溶液抑制该反应，用乙酸乙酯提取。用5％氢氧化钠水溶液洗涤合并的提取物，干燥(硫酸钠)，减压除去溶剂。经柱层析(7％乙酸乙酯/己烷)分离无色固体状的目的化合物：
     1H NMR(CDCl3)：δ8.04(1H，d，J＝8.4Hz)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz)，7.52(1H，s)，7.49(1H，d，J＝8.0Hz)，7.33(1H，d，J＝8.0Hz)，7.20(1H，d，J＝16.4Hz)，7.10(1H，d，J＝16.4Hz)，6.00(1H，t，J＝4.9Hz)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，2.43(2H，d，J＝4.9Hz)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz)，1.32(6H，s).(E)-4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸 乙酯(化合物44)
于-78℃，通过将130.7mg的叔丁基锂(2.04mmol，1.20ml 1.7M的戊烷溶液)加入374.5mg(2.20mmol)的4-溴甲苯在2.5ml THF的溶液中制备4-甲苯锂溶液。30分钟后，加入313.4mg(2.30mmol)氯化锌在2.0ml THF中的溶液。将所形成的溶液温热到室温，搅拌1.25小时，然后经套管加到285.0mg(0.590mmol)的(E)-4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物P)和29.0mg(0.025mmol)的四(三苯基磷)钯(0)在2.0ml THF的溶液中。于室温下，搅拌所形成的溶液1小时，然后于55℃搅拌2小时。冷却到室温后，通过加入饱和氯化铵水溶液抑制该反应。用乙酸乙酯提取该混合物，并用5％氢氧化钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤合并的提取物，在减压浓缩以前经硫酸钠干燥。经柱层析(10％乙酸乙酯/己烷)分离无色固体状目的化合物：                         1H NMR(CDCl3)：δ7.96(2H，d，J＝8.1Hz)，7.47(2H，d，J＝8.1Hz)，7.43-7.16(7H，m)，7.07(1H，d，J＝16.3Hz)，6.93(1H，d，J＝16.3Hz)，5.97(1H，t，J＝4.7Hz)，4.39(2H，q，J＝7.0Hz)，2.41(3H，s)，2.33(1H，d，J＝4.7Hz)，1.38(3H，t，J＝7.0Hz)，1.33(6H，s).(E)-4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸 (化合物45)
将30.0mg的氢氧化锂(0.909mmol，1.0ml 1.1M溶液)和1.0ml甲醇加入65.0mg(0.190mmol)的(E)-4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物44)在4.0ml THF的溶液中。将该溶液于55℃下加热3小时，冷却到室温，并减压浓缩。将其残留物溶于水中并用己烷提取。用10％盐酸酸化其水层到pH1，并用乙醚提取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，用乙酸乙酯稀释，产生澄清的溶液，并经硫酸钠干燥。减压除去溶剂产生无色固体状的目的化合物：                                        1H NMR(d6-DMSO)：δ7.86(2H，d，J＝8.4Hz)，7.66(2H，d，J＝8.4Hz)，7.58(1H，dd，J＝1.7，8.1Hz)，7.41(1H，d，J＝8.1Hz)，7.28(1H，d，J＝16.5Hz)，7.23(4H，s)，7.08(1H，d，J＝1.7Hz)，7.07(1H，d，J＝16.5Hz)，5.97(1H，t，J＝4.6Hz)，2.35(3H，s)，2.31(1H，d，J＝4.6Hz)，1.29(6H，s).4-[2-(1，1-二甲基-3-(4-甲基苯基)-5-茚基)乙炔基]-苯甲酸乙酯(化合物 47)
将32.0mg(0.187mmol)的4-溴甲苯在1.0ml THF中的溶液冷却到-78℃并缓慢地加入24.0mg叔丁基锂(0.375mmol，0.22ml在戊烷中的1.7M溶液)。将该黄色溶液搅拌30分钟，同时加入29.8mg(0.219mmol)的氯化锌的1ml THF溶液。将所形成的溶液温热到室温，30分钟后加到含有在1ml THF中的29.0mg(0.062mmol)4-[2-(1，1-二甲基-3-(三氟甲基磺酰基)氧基-5-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物FF)和2.9mg(0.003mmol)的四(三苯基磷)钯(0)的第二个烧瓶中。将所形成的溶液在50℃下加热1小时，然后于室温下搅拌4小时。通过加入饱和氯化铵水溶液抑制该反应，然后用乙醚提取。用水、饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，在减压浓缩以前经硫酸镁干燥。经柱层析(10％乙醚/已烷)分离无色油状目的化合物：                                                     1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ8.03(2H，d，J＝8.5Hz)，7.66(1H，s)，7.58(2H，d，J＝8.5 Hz)，7.50(2H，d，J＝8.0Hz)，7.46(1H，d，J＝7.9Hz)，7.38(1H，d，J＝7.7Hz)，7.28(2H，d，J＝9Hz)，6.43(1H，s)，4.40(2H，q，J＝7.2Hz)，2.43(3H，s)，1.41(3H，t；+6H，s).4-[2-(1，1-二甲基-3-(4-甲基苯基)-5-茚基)乙炔基]-苯甲酸(化合物48)
将5.2mg(0.12mmol)LiOH.H2O加入10.0mg(0.025mmol)的4-[2-(1，1-二甲基-3-(4-甲基苯基)-5-茚基)乙炔基]-苯甲酸乙酯(化合物47)在0.5ml THF/H2O(3∶1 v/v)的溶液中。在室温下搅拌48小时后，用己烷提取该溶液并用饱和氯化铵水溶液酸化其水层。加入固体氯化钠并用乙酸乙酯提取所形成的混合物。干燥(硫酸钠)合并的有机层并减压浓缩产生无色固体状的目的化合物：                                1H NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ7.95(2H，d，J＝8.3Hz)，7.65(2H，d，J＝8.3Hz)，7.57(2H，m)，7.49(3H，m)，7.30(2H，d，J＝7.9Hz)，6.61(1H，s)，2.36(3H，s)，1.36(6H，s).3-(4-溴代苯硫基氧基)丙酸
将6.79g(35.7mmol)4-溴代苯硫酚加入1.44g(35.7mmol)氢氧化钠在20.0ml脱气水(通入氩气)的溶液中。将所形成的混合物于室温下搅拌30分钟。将2.26g(16.3mmol)的碳酸钾和15ml脱气的水加入第二个烧瓶中。将5.00g(32.7mmol)的3-溴代丙酸(分批)加入该溶液中。将所形成的羧酸钾溶液加入所述硫醇钠溶液中，于室温下搅拌所形成的混合物48小时。将该混合物过滤，并用苯提取其滤液，弃去合并的有机层。用10％盐酸酸化含水层并用乙酸乙酯提取。用饱和氯化钠水溶液洗涤该合并的有机层，经硫酸镁干燥，减压浓缩。经乙醚-己烷重结晶所形成的固体产生灰白色结晶状的目的化合物：
                                     1H NMR(CDCl3)：δ7.43(2H，d，J＝8.4Hz)，7.25(2H，d，J＝8.4Hz)，3.15(2H，t，J＝7.3Hz)，2.68(2H，t，J＝7.3Hz).2，3-二氢-6-溴-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮
将3.63g(13.9mmol)的3-(4-溴代苯硫氧基)丙酸在60ml甲磺酸中的溶液于75℃下加热1.5小时。冷却到室温后，用水稀释该溶液并用乙酸乙酯提取。用2N氢氧化钠水溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后经硫酸镁干燥。减压除去溶剂后提供黄色固体，从中经柱层析(3％乙酸乙酯-己烷)分离淡黄色固体状的产物：
                                                        1H NMR(CDCl3)：δ8.22(1H，d，J＝2.1Hz)，7.48 1H，dd，J＝2.1，8.3Hz)，7.17(1H，d，J＝8.5Hz)，3.24(2H，t，J＝6.4Hz)，2.98(2H，t，J＝6.7Hz).2，3-二氢-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮
将1.00g(4.11mmol)的2，3-二氢-6-溴-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮和78.3mg(0.41mmol)的Cul在15.0ml THF和6.0ml Et2NH中的溶液通入氩气5分钟。将2.0ml(1.39g，14.2mmol)的(三甲基甲硅烷基)乙炔，然后288.5mg(0.41mmol)的氯化双(三苯基磷)钯(II)加入该溶液中。于室温下，搅拌所形成的黑暗色溶液3天，然后经硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。在经硫酸镁干燥以前用水和饱和氯化钠水溶液洗涤该滤液。经柱层析(4％乙酸乙酯-己烷)分离橙色油状物的目的化合物：
                                                          1H NMR(CDCl3)：δ8.13(1H，d，J＝1.9Hz)，7.36(1H，dd，J＝2.1，8.2Hz)，7.14(1H，d，J＝8.2Hz)，3.19(2H，d，J＝6.3Hz)，2.91(2H，d.J＝6.3Hz)，0.21(9H，s).2，3-二氢-6-乙炔基-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮
于室温下，搅拌含有600.0mg(2.25mmol)的2，3-二氢-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮和100.0mg(0.72mmol)碳酸钾在15ml甲醇中的溶液20小时。用水稀释该溶液并用乙醚提取。在经硫酸镁干燥以前用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层。减压除去溶剂提供橙色固体状的目的化合物：                                1H NMR(CDCl3)：δ8.17(1H，d，J＝1.8Hz)，7.40(1H，dd，J＝1.8，8.2Hz)，7.19(1H，d，J＝8.2Hz)，3.22(2H，t，J＝6.3Hz)，3.08(1H，s)2.94(2H，t，J＝6.3Hz).4-[2-(6-(2，3-二氢-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮基))乙炔基]苯甲酸乙酯
将氩气通入405.0mg(2.15mmol)2，3-二氢-6-乙炔基-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮和594.0mg(2.15mmol)的4-碘代苯甲酸乙酯在15ml三乙胺和3ml THF中的溶液达15分钟。将503.0mg(0.72mmol)的氯化双(三苯基磷)钯(II)和137.0mg(0.72mmol)的Cul加入该溶液中。于室温下搅拌该溶液20小时，然后经硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。减压除去溶剂提供棕色固体。柱层析纯化(3％乙酸乙酯∶己烷)提供橙色固体状的目的化合物：
                   1H NMR(d6-丙酮)：δ8.15(1H，d，J＝2.0Hz)，8.02(2H，d，J＝8.5Hz)，7.69(2H，d，J＝8.5Hz)，7.61(1H，dd，J＝2.1，8.3Hz)，7.40(1H，d，J＝8.2Hz)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz)，3.40(2H，t，J＝6.3Hz)，2.96(2H，t，J＝6.3Hz)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(6-(4-(三氟甲基磺酰基)氧基-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸 乙酯
将370.0mg(1.10mmol)的4-[2-(6-(2，3-二氢-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮基))乙炔基]苯甲酸乙酯在4.0ml THF中的溶液加入冷却到-78℃的221.9mg(1.21mmol)的双(三甲基甲硅烷基)氨化钠在3.0ml THF中的溶液中。30分钟后，缓慢加入2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶在4.0ml THF的溶液中。将该反应物缓慢地温热到室温，5小时后通过加入饱和氯化铵水溶液抑制反应。用乙酸乙酯提取该混合物，并在用硫酸镁干燥以前，用5％氢氧化钠水溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层。减压除去溶剂，然后经柱层析(4％乙酸乙酯-己烷)提供淡黄色固体状的目的化合物：
                    1H NMR(d6丙酮)：δ8.12(2H，d，J＝8.5Hz)，7.66(2H，d，J＝8.5Hz)，7.56(1H，d，J＝1.7Hz)，7.49(1H，dd，J＝1.7，8，1Hz)，7.40(1H，d，J＝8.1Hz)，6.33(1H，t，J＝5.7Hz)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz)，3.82(2H，d，J＝5.7Hz)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(6-(4-(4-甲基苯基)-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物49)
于-78℃下，将88.4mg(1.38mmol，0.81ml的1.7M戊烷溶液)的叔丁基锂加入120.8mg(0.70mmol)的4-溴甲苯在2.0ml THF的溶液中。30分钟后，加入131.6mg(0.97mmol)的氯化锌在2.0ml THF中的溶液，使形成的淡黄色溶液温热到室温。搅拌40分钟，然后将该溶液加入含有129.2mg(0.28mmol)的4-[2-(6-(4-(三氟甲基磺酰基)氧基-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯、14.0mg(0.012mmol)的四(三苯基磷)钯(0)和2.0ml THF的第二个烧瓶中。将所形成的溶液于50℃下加热5小时，冷却到室温，通过加入饱和的氯化铵溶液抑制该反应。用乙酸乙酯提取该混合物，用水和饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后干燥(硫酸镁)并浓缩成为橙色油状物。经柱层析(3-5％乙酸乙酯-己烷)分离无色固体状的目的化合物：
                                         1H NMR(d6-丙酮)：δ7.98(2H，d，J＝8.3Hz)，7.58(2H，d，J＝8.2Hz)，7.44-7.38(2H，m)，7.26-7.15(5H，m)，6.14(1H，t，J＝5.8Hz)，4.34(2H，q，J＝7.1Hz)，3.53(2H，d，J＝5.8Hz)，2.37(2H，s)，1.35(3H，t，J＝7.1Hz).4-[ 2-(6-(4-(4-甲基苯基)-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸(化合物50)
将160.0mg(4.00mmol，2.0ml 2M的水溶液)加入29.0mg(0，07mmol)的4-[2-(6-(4-(4-甲基苯基)-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物49)在2.0ml THF和2.0ml乙醇的溶液中。将所形成的溶液在35℃下搅拌2小时，然后冷却到室温并再搅拌2小时。通过加入10％盐酸水溶液抑制该反应并用乙酸乙酯提取。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥。减压除去溶剂，提供固体，用乙腈洗涤，高真空干燥产生淡黄色固体状的目的化合物：
                    1H NMR(d6-DMSO)：δ7.90(2H，d，J＝8.4Hz)，7.59(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40(4H，m)，7.25-7.13(4H，m)，7.02(1H，d，J＝1.7Hz)，6.11(1H，t，J＝5.7Hz)，3.54(2H，d，J＝5.7Hz)，2.34(3H，s).3，4-二氢-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物R)；3，4-二氢-4，4-二 甲基-6-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物S)
用20分钟将在二氯甲烷(20ml)中的乙酰氯(15g，192mmol)和1，2，3，4-四氢-1，1-二甲基萘(24.4g，152mmol)加入三氯化铝(26.3g，199.0mmol)在二氯甲烷(55ml)中的冷却(0℃)混合物中。将该反应混合物温热到室温并搅拌4小时。将冰(200g)加入所述反应烧瓶中，用醚(400ml)稀释该混合物。使其分层，用硫酸镁干燥以前，用10％盐酸(50ml)、水(50ml)、10％碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液(50ml)洗涤有机相。蒸馏除去溶剂提供溶于苯(50ml)中的黄色油状物。
在氩气下，用20分钟分小批量将三氧化铬(50g，503mmol)加入乙酸(240ml)和乙酸酐(120ml)的冷(0℃)溶液中。于0℃下搅拌该混合物30分钟，用苯(120ml)稀释。在搅拌下，用20分钟，通过加料漏斗加入以上制备的苯溶液。8小时后，通过于0℃下仔细加入异丙醇(50ml)，然后水(100ml)抑制该反应。15分钟后，用醚(1100ml)和水(200ml)稀释该反应混合物，然后用固体碳酸氢钠(200g)中和。用水(100ml)和饱和氯化钠水溶液(2×100ml)洗涤该醚层，经硫酸镁干燥。减压除去溶剂提供异构体二酮的混合物，经层析(5％乙酸乙酯/己烷)可将其分离。(化合物R)：
                                                                                 1H NMR(CDCl3)：δ8.55(1H，d，J＝2.0Hz)，8.13(1H，dd，J＝2.0，8.3Hz)，7.53(1H，d，J＝8.3Hz)，2.77(2H，t，J＝6.6Hz)，2.62(3H，s)，2.05(2H，t，J＝6.6Hz)，1.41(6H，s)，(化合物S)：1H NMR(CDCl3)：δ8.10(1H，d，J＝8.1Hz)，8.02(1H，d，J＝1.6Hz)，7.82(1H，dd，J＝1.6，8.1Hz)，2.77(2H，t，J＝7.1Hz)，2.64 (3H，s)，2.05(2H，t，J＝7.1Hz)，1.44(6H，s).3，4-二氢-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))-1(2H)-萘酮(化合物 T)
使用Dean-Stark仪将3，4-二氢-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物R)(140.0mg，0.60mmol)、乙二醇(55.0mg，0.90mmol)、对-甲苯磺酸一水合物(4mg)和苯(25ml)混合物回流12小时。通过加入10％碳酸氢钠水溶液抑制该反应，用醚(2×75ml)提取。用水(5ml)和饱和氯化钠水溶液(5ml)洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥。减压除去溶剂提供油状目的化合物：                                            1H NMR(CDCl3)：δ8.13(1H，d，J＝2.0Hz)，7.64(1H，dd，J＝2.0，8.2Hz)，7.40(1H，d，J＝8.2Hz)，3.97-4.10(2H，m)，3.70-3.83(2H，m)，2.73(2H，t，J＝6.5Hz)，2.01(2H，t，J＝6.5Hz)，1.64(3H，s)，1.39(6H，s).1，2，3，4-四氢-1-羟基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧 戊环基))萘(化合物U)
将3，4-二氢-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))-1(2H)-萘酮(化合物T)(135.0mg，0.52mmol)在5ml THF中的溶液加入195.4mg(1.00mmol)的对-甲苯甲酰溴化镁(1.0ml，1M醚溶液)在2ml THF的溶液中。使该溶液回流16小时，冷却到室温，并用醚(50ml)稀释。用水(5ml)和饱和氯化铵水溶液(5ml)洗涤该溶液，经硫酸镁干燥。减压除去溶剂，柱层析(5％乙酸乙酯/己烷)提供固体状目的化合物：1H NMR(CDCl3)：δ7.37(2H，d)，7.21(1H，s)，7.13(2H，d，J＝8.5Hz)，7.08(2H，d，J＝8.5Hz)，3.88-3.99(2H，m)，3.58-3.75(2H，m)，2.34(3H，s)，2.12-2.30(2H，m)，1.79-1.90(1H，m)，1.57(3H，s)，1.48-1.58(1H，m)，1.38(3H，s)，1.31(3H，s).3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-乙酰基萘(化合物V)
将130.0mg(0.38mmol)的1，2，3，4-四氢-1-羟基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))萘(化合物U)、对-甲苯磺酸一水合物(4mg)和苯(5ml)的混合物回流16小时。在冷却到室温后，用醚(100ml)稀释该反应混合物并用10％碳酸氢钠水溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤。经硫酸镁干燥其有机层，减压除去溶剂产生固体状的目的化合物：                              1H NMR(CDCl3)：δ7.83(1H，dd，J＝1.8，8.0Hz)，7.66(1H，d，J＝1.8Hz)，7.45(1H，d，J＝8.0Hz)，7.25(2H，d，J＝8.5Hz)，7.22(2H，d，J＝8.5Hz)，6.03(1H，t，J＝6.3Hz)，2.47(3H，s)，2.41(3H，s)，2.37(2H，d，J＝6.3Hz)，1.36(6H，s).(E)-3-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯腈(化合物 W)
将氰基甲基磷酸二乙酯(450.0mg，2.50mmol)加入氢化钠(48.0mg，2.00mmol)在THF(6ml)的淤浆中。40分钟后，加入95.0mg(0.33mmol)的3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-乙酰基萘(化合物V)在THF(4ml)的溶液中。将该混合物搅拌16小时，用醚(100ml)稀释，在经硫酸镁干燥前用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。减压除去溶剂，柱层析(3％乙酸乙酯∶己烷)纯化提供固体目的化合物：                                          1H NMR(CDCl3)：δ7.39(1H，d，J＝1H)，7.32(1H，dd，J＝2.0，8.1Hz)，7.20-7.25(4H，brs)，7.15(1H，d，J＝2.0Hz)，6.03(1H，t，J＝6.0Hz)，5.44(1H，s)，2.42(3H，s)，2.36(2H，d，J＝6.0 Hz)，2.35(3H，s)，1.35(6H，s).(E)-3-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯醛(化合物X)
将0.50ml(0.50mmol)的氢化二异丁基铝(1M的二氯甲烷溶液)加入84.0mg(0.29mmol)的(E)-3-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯腈(化合物W)在二氯甲烷(4ml)的冷的(-78℃)溶液中。搅拌1小时后，通过加入用醚(100ml)稀释的2-丙醇(1ml)于-78℃抑制反应。温热到室温后，用水、10％盐酸和饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。经硫酸镁干燥其有机层，减压除去溶剂产生油状的目的化合物：        1H NMR(CDCl3)：δ10.12(1H，d，J＝7.9Hz)，7.43(2H，s)，7.19-7.28(5H，m)，6.27(1H，d，J＝7.9Hz)，6.03(1H，t，J＝4.8Hz)，2.47(3H，s)，2.42(3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.8Hz)，1.37(6H，s).(E，E，E)-3-甲基-7-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)--2-萘基)-2，4，6-辛 三烯酸乙酯(化合物51)
将在己烷中的26.0mg(0.41mmol，0.65ml)正丁基锂(1.6M溶液)加入264.0mg(1.00mmol)的(E)-3-乙氧基羰基-2-甲基烯丙基磷酸二乙酯[根据J.Org.Chem.39：821(1974)制备]在THF(2ml)的冷却(-78℃)溶液中，然后立即加入在THF(3ml)中的82.0mg(0.26mmol)的(E)-3-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯醛(化合物X)。1小时后，用醚(60ml)稀释该反应混合物，用水(5ml)、饱和氯化钠水溶液(5ml)洗涤并经硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，经柱层析纯化(5％乙酸乙酯/己烷，然后经HPLC使用1％乙酸乙酯/己烷)分离油状的目的化合物：                                    1H NMR (丙酮-d6)：δ7.36-7.43(2H，m)，7.18-7.27(4H，m)，7.17(1H，d，J＝1.7Hz)，7.08(1H，dd，J＝11.2，15.2Hz)，6.46(1H，d，J＝11.2Hz)，6.38(1H，d，J＝15.2Hz)，5.98(1H，t，J＝4.7Hz)，5.78 (1H，s)，4.10(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35 (3H，s)，2.33(3H，s)，2.32(2H，d，J＝4.7Hz)，2.12(3H，s)，1.31(6H，s)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz).(E，E，E)-3-甲基-7-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2，4，6-辛 三烯酸(化合物52)
将12.0mg(0.50mmol)的LiOH(0.5ml，1M溶液)加入在THF(1ml)和甲醇(1ml)中的85.0mg(0.20mmol)的(E，E，E)-3-甲基-7-(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2，4，6-辛三烯酸乙酯(化合物51)的溶液中。将该混合物搅拌6小时，用醚(60ml)稀释，用10％盐酸(1ml)酸化。在经硫酸镁干燥以前，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。减压除去溶剂提供固体状的目的化合物，使其经丙酮重结晶纯化：
                                                                         1H NMR(丙酮-d6)：δ7.35-7.45(2H，m)，7.19-7.28(4H，m)，7.17(1H，d，J＝1.8Hz)，7.09(1H，dd，J＝11.5，15.1Hz)，6.48(1H，d，J＝11.5Hz)，6.42(1H，d，J＝15.1Hz)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，5.82(1H，s)，2.36(3H，s)，2.33(2H，d，J＝4.7Hz)，2.32(3H，s)，2.13(3H，s)，1.32(6H，s).3，4-二氢-4，4-二甲基-7-硝基-1(2H)-萘酮(化合物Y)
将783.0mg(4.49mmol)3，4-二氢-4，4-二甲基-1(2H)-萘酮缓慢加入在-5℃(冰氯化钠浴)中的1.7ml(3.0g，30.6mmol，18M)的硫酸中。缓慢加入426.7mg(6.88mmol，0.43ml，16M)的硝酸和1.31g(0.013mol，0.74ml，18M)硫酸的溶液。20分钟后，加入冰，用乙酸乙酯提取所形成的混合物。减压浓缩合并的提取物，产生残留物，从中经柱层析(10％乙酸乙酯∶己烷)分离淡黄色固体状的目的化合物：
                                            1H NMR(CDCl3)：δ8.83(1H，d，J＝2.6Hz)，8.31(1H，dd，J＝2.8，8.9Hz)，7.62(1H，d，J＝8.7Hz)，2.81(2H，t，J＝6.5Hz)，2.08(2H，t，J＝6.5Hz)，1.45(6H，s).3，4-二氢-4，4-二甲基-7-氨基-1(2H)-萘酮(化合物Z)
在1个大气压氢气下，使用催化量的10％钯炭，于室温下搅拌230.0mg(1.05mmol)3，4-二氢-4，4-二甲基-7-硝基-1(2H)-萘酮(化合物Y)在5.0ml乙酸乙酯中的溶液达24小时。经硅藻土垫过滤除去所述催化剂，减压浓缩其滤液产生暗绿色油状的目的化合物：
                                                                                 1H NMR(CDCl3)：δ7.30(1H，d，J＝2.7Hz)，7.22(1H，d，J＝8.4Hz)，6.88(1H，dd，J＝2.7，8.5Hz)，2.70(2H，t，J＝6.6Hz)，1.97(2H，t，J＝6.6HZ)，1.34(6H，s).4-[(5，6，7，8-四氢-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物 AA)
将180.0mg(1.00mmol)的4-亚硝基苯甲酸乙酯加入198.7mg(1.05mmol)的3，4-二氢-4，4-二甲基-7-氨基-1(2H)-萘酮(化合物Z)在5.0ml冰乙酸的溶液中。于室温下，将所形成的溶液搅拌过夜，然后减压浓缩。经柱层析(15％乙酸乙酯∶己烷)自其残留油状物中分离出红色固体状的产物：          1H NMR(CDCl3)δ8.57(1H，d，J＝2.0Hz)，8.19(2H，d，J＝8.4Hz)，8.07(1H，d，J＝8.0Hz)，7.94(2H，d，J＝8.4Hz)，7.58(1H，d，J＝8.6Hz)，4.41(2H，q，J＝7.1Hz)，2.79(2H，t，J＝6.6Hz)，2.07(2H，t，J＝7.02Hz)，1.44(6H，s)，1.42(3H，t，J＝7.1Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)偶氮]-苯甲酸 乙酯(化合物BB)
将在2ml THF中的153.0mg(0.437mmol)的4-[(5，6，7，8-四氢-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物AA)于-78℃加入90.4mg双(三甲基甲硅烷基)氨化钠(0.48mmol，0.48ml的1.0M THF溶液)在2.0ml THF的溶液中。于-78℃搅拌所述暗红色的溶液30分钟，然后加入204.0mg(0.520mmol)的2-[N，N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]-5-氯吡啶在2.0ml THF中的溶液。使所述反应混合物温热到室温，3小时后，通过加入水抑制该反应。减压将其有机层浓缩为红色油状物，经柱层析(25％乙酸乙酯∶己烷)分离出红色油状的产物：
                                                          1H NMR(CDCl3)：δ8.21(2H，d，J＝8.6Hz)，7.96(2H，d，J＝8.6Hz)，7.94(2H，m)，7.49(1H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，t，J＝2.5Hz)，4.42(2H，q，J＝7.1Hz)，2.49(2H，d，J＝4.8Hz)，1.44(3H，t，J＝7.1Hz)，1.38(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合 物46a)
通过加入62.9mg(0.58ml，0.98mmol)的叔丁基锂(1.7M的戊烷溶液)到84.0mg(0.491mmol)的4-溴甲苯在1.0ml THF的冷溶液(-78℃)中制备4-甲苯锂溶液。搅拌30分钟后，加入107.0mg(0.785mmol)的氯化锌在2.0ml THF中的溶液。将所形成的溶液温热到室温，搅拌30分钟，通过套管加到94.7mg(0.196mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)偶氮]-苯甲酸乙酯(化合物BB)和25mg(0.02mmol)的四(三苯基磷)钯(0)在2.0ml THF的溶液中。于50℃下，将所形成的溶液加热1.5小时，冷却到室温，用饱和氯化铵水溶液稀释。用乙酸乙酯(40ml)提取该混合物，并用水和盐水洗涤合并的有机层。将该有机相用硫酸钠干燥，真空浓缩，经柱层析(25％乙酸乙酯∶己烷)分离红色固体状的目的化合物：            1H NMR(CDCl3)：δ8.21(2H，d，J＝8.6Hz)，7.96(2H，d，J＝8.6Hz)，7.94(2H，m)，7.49(1H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，t，J＝2.5Hz)，4.42(2H，q，J＝7.1Hz)，2.49(2H，d，J＝4.8Hz)，1.44(3H，t，J＝7.1Hz)，1.38(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)偶氮]苯甲酸(化合物 46b)
将80.0mg(2.00mmol)氢氧化钠(2.0ml，1M水溶液)加入16.5mg(0.042mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物46a)在THF(2ml)和乙醇(1ml)的溶液中。于室温下，将所述混合物搅拌12小时，用10％盐酸酸化并用乙酸乙酯提取。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后经硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，经乙酸乙酯/己烷重结晶其残留物，提供红色固体状的目的化合物：                                                                   1H NMR(丙酮-d6)：δ8.19(2H，d，J＝8.4Hz)，7.92(2H，d，J＝8.5hz)，7.88(2H，dd，J＝2.1，6.1Hz)，7.66(1H，s)，7.64(2H，d，J＝2.3Hz)，7.28(4H，d，J＝3.0Hz)，6.09(1H，t，J＝2.5Hz)，2.42(2H，d，J＝4.8Hz)，2.39(3H，s)，1.40(6H，s).6-(2-三甲基甲硅烷基)乙炔基-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物 CC)
将259.6mg(1.363mmol)的碘化亚酮(I)、956.9mg(1.363mmol)的氯化双(三苯基磷)钯(II)和3.14g(34.08mmol)的(三甲基甲硅烷基)乙炔加入815.0mg(3.41mmol)的6-溴-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(见Smith et al.Org.Prep.Proced.Int.1978 10 123-131)在100ml脱气三乙胺(通入氩气20分钟)的溶液中。于70℃下加热该混合物42小时，冷却到室温，经硅胶滤垫过滤，并用醚洗涤。在经硫酸镁干燥以前，用水、1M盐酸、水，最终用饱和氯化钠水溶液洗涤该滤液。减压浓缩该溶液，然后经柱层析(硅胶，10％乙醚-己烷)纯化提供棕色油状的目的化合物：
        1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.79(1H，d，J＝1.4Hz)，7.69(1H，dd，J＝1.6，8.3Hz)，7.42(1H，d，J＝8.5Hz)，2.60(2H，s)，1.41(6H，s)，0.26(9H，s).6-乙炔基-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物DD)
将197.3mg(1.43mmol)的碳酸钾一次性加入875.0mg(3.41mmol)的6-(2-三甲基甲硅烷基)乙炔基-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物CC)在28ml甲醇的溶液中。于室温下搅拌6小时后，使所述混合物通过硅藻土滤垫并减压浓缩其滤液。将其残留油状物置于硅胶柱上并用5％乙酸乙酯-己烷洗脱产生无色油状的目的产物：
                                                             1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.82(1H，s)，7.72(1H，dd，J＝1.6，7.8Hz)，7.47(1H，d，J＝8.4Hz)，3.11(1H，s)，2.61(2H，s)，1.43(6H，s).4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-7-氧代-2-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物 EE)
在280.0mg(1.520mmol)的6-乙炔基-2，3-二氢-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物DD)和419.6mg(1.520mmol)的4-碘代苯甲酸乙酯在5ml三乙胺的溶液中通入氩气40分钟。将271.0mg(1.033mmol)的三苯基磷、53.5mg(0.281mmol)的碘化亚酮(I)和53.5mg(0.076mmol)的氯化双(三苯基磷)钯(II)加入该溶液中。将所形成的混合物在回流状态下加热2.5小时，冷却到室温，用乙醚稀释。经硅藻土滤垫过滤后，用水、1M盐酸和饱和氯化钠水溶液洗涤滤液，然后经硫酸镁干燥，减压浓缩。经柱层析(15％乙酸乙酯-己烷)分离淡黄色固体状的目的化合物：                                                             1H NMR(300MHz，d6-丙酮)：δ8.05(2H，d，J＝8.6Hz)，7.87(1H，dd，J＝1.4，8.1Hz)，7.75(2H，m)，7.70(2H，d，J＝8.5Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.60(2H，s)，1.45(6H，s)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(1，1-二甲基-3-(三氟甲基-磺酰基)氧基-5-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯 (化合物FF)
将88.0mg(0.48mmol)的双(三甲基甲硅烷基)氨化钠在0.5mlTHF中的溶液冷却到-78℃，并加入145.0mg(0.436mmol)的4-[2-(5，6-二氢-5，5-二甲基-7-氧代-2-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物EE)在1.0ml THF中的溶液。30分钟后，加入181.7mg(0.480mmol)的2-[N，N-双(三氟甲磺酰基)氨基]-5-氯吡啶在1.0ml THF中的溶液。使所述反应物缓慢温热到室温，在5小时后，通过加入饱和的氯化铵水溶液抑制反应。用乙酸乙酯提取该混合物，用5％氢氧化钠水溶液、水和饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后干燥(硫酸镁)并减压浓缩。经柱层析(10％乙醚-己烷)分离无色固体状的产物：
     1H NMR(300MHz，d6-；丙酮)：δ8.05(2H，d，J＝8.3Hz)，7.69(2H，d，J＝8.4Hz)，7.63(2H，s)，7.55(1H，s)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，1.44(6H，s)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 60)
于室温下搅拌142.6mg(0.339mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)和35.6mg(0.848mmol)的LiOH-H2O在12ml THF/水(4∶1，v/v)中的溶液过夜。用己烷提取该反应混合物，并用5％的氢氧化钠水溶液提取己烷部分。合并水层并用1M盐酸酸化，然后用乙酸乙酯和乙醚提取。经硫酸钠干燥合并的有机层，真空浓缩产生无色固体状的目的化合物：                            1H NMR(d6-DMSO)：δ7.91(2H，d，J＝8.4Hz)，7.60(2H，d，J＝8.4Hz)，7.47(2H，s)，7.23(4H，q，J＝8.1Hz)，7.01(1H，s)，6.01(1H，t，J＝4.6Hz)，2.35(3H，s)，2.33(2H，d，J＝4.8Hz)，1.30(6H，s).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-苯基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物60a)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)相同的通用方法，使用5.9mg(0.14mmol)在水中的LiOH将27.0mg(0.07mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-苯基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1a)转变成目的化合物(无色固体)：
                                                            PMR(d6-DMSO)：δ1.31(6H，s)，2.35(2H，d，J＝4.5Hz)，6.05(1H，t，J＝J＝J＝4.5Hz)，7.00(1H，s)，7.33(2H，d，J＝6.2Hz)，7.44(4H，m)，7.59(2H，d，J＝8.1Hz)，7.90(2H，d，J＝8.1Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-(1，1-二甲基乙基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯 甲酸(化合物61)
于室温下搅拌80.0mg(0.173mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-(1，1-二甲基乙基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物6)和18.1mg(0.432mmol)的LiOH-H2O在6ml THF/水(3∶1，v/v)中的溶液过夜。用己烷提取该反应混合物，并用1M盐酸酸化剩余的水层，然后用乙酸乙酯提取。经硫酸钠干燥合并的有机层，真空浓缩产生无色固体状的目的化合物：             1H NMR(d6-DMSO)：δ7.82(2H，d，J＝8.2Hz)，7.44(6H，m)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.02(1H，s)，6.01(1H，t，J＝4.6Hz)，2.32(2H，d，J＝4.7Hz)，1.32(9H，s)，1.29(6H，s).2-氟-4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基] 苯甲酸乙酯(化合物62)
将54.4mg(0.119mmol)的2-氟-4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物40)和57.7mg(0.143mmol)的[2，4-双(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫代-2，4-diphosphetane-2，4-二硫醚](Lawesson’s试剂)在12.0ml苯中的溶液回流过夜。在冷却到室温后，将所述混合物过滤并减压浓缩其滤液。经柱层析(10-25％乙酸乙酯/己烷)分离黄色固体状的目的化合物：
                                  1H NMR(CDCl3)：δ9.08(1H，s)，7.92(1H，br s)，7.90(1H，t，J＝8.2Hz)，7.66(1H，dd，J＝2.0，6.0Hz)，7.38(3H，m)，7.18(4H，m)，6.01(1H，t，J＝4.7 Hz)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz)，2.36(3H，s)，2.33(2H，d，J＝4.7Hz)，1.38(3H，t，J＝7.1Hz)，1.33(6H，s)·2-氟-4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基] 苯甲酸(化合物63)
将55mg氢氧化钠(1.4mmol)和1.0ml水加入46.5mg(0.098mmol)的2-氟-4-[[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物62)在1.0ml乙醇和1.0ml THF的溶液中。于室温下搅拌过夜后，加入乙酸乙酯，通过加入10％的盐酸抑制该反应。用乙酸乙酯提取，然后用水、饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥。减压除去溶剂提供固体，使其经乙腈结晶提供淡黄色固体状的目的化合物：
                                                           1H NMR(d6-丙酮)：δ11.05(1H，s)，8.02(1H，m)，7.99(1H，t，J＝8.3Hz)，7.75(1H，m)，7.69(1H，dd，J＝2.0，6.1Hz)，7.52(1H，s)，7.46(1H，d，J＝8.1Hz)，7.21(4H，m)，6.04(1H，t，J＝4.8Hz)，2.37(2H，d，J＝4.8Hz)，2.33(3H，s)，1.36(6H，s).5’，6’-二氢-5’，5’-二甲基-8’-(4-甲基苯基)-[2，2’-联萘]-6-甲酸乙酯(化合 物64)
于室温，在氩气下将镁屑(0.044g，1.82mmol)加入3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴代萘(化合物D)(0.45g，1.40mmol)和THF(2.1ml)的溶液中。加入两滴二溴乙烷，将该溶液(缓慢变浑浊和黄色)于回流状态加热1.5小时。在第二个烧瓶中，加入氯化锌(0.210g，1.54mmol)，它在高真空下融化，冷却到室温并溶于THF(3ml)中。将所述Grignard试剂加入第二个烧瓶中，30分钟后，在室温下，加入0.293g(1.05mmol)的6-溴-2-萘甲酸乙酯(化合物N)和THF(2ml)的溶液。在第三个烧瓶中，制备Ni(PPh3)4和THF的溶液如下：将1M的氢化二异丁基铝溶液和己烷(2.5ml，2.5mmol)加入NiCl2(PPh3)2(0.82g，1.25mmol)和PPh3(0.66g，2.5mmol)在THF(3.5ml)的溶液中，用THF稀释所形成的溶液到总体积为15ml并于室温下搅拌15分钟。以15分钟的间隔将三份0.60ml等份的Ni(PPh3)4溶液加入第二个烧瓶中。于室温下搅拌所形成的悬浮液2小时。通过加入5ml1N的盐酸水溶液抑制反应，并在用乙酸乙酯提取其产物以前搅拌1小时。合并其有机层，用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并真空除去溶剂。其残留物经己烷结晶产生130mg纯物质。减压浓缩其母液，并经硅胶层析(95∶5己烷∶乙酸乙酯)纯化其残留物产生另外170mg无色固体状的目的化合物(总收率＝300mg，64％)：
                    1H NMR(CDCl3)δ8.57(s，1H)，8.05(dd，1H，J＝1.7，8.0Hz)，7.84-7.95(重迭 d′s，3H)，7.66(dd，1H，J＝1.7，8.5Hz)，7.58(dd，1H，J＝2.0，8.0Hz)，7.48(d，1H，J＝8.0Hz)，7.43(d，1H，J＝2.0Hz)，7.32(d，2H，J＝8.0Hz)，7.21(d，2H，J＝8.0Hz)，6.04(t，1H，J＝4.8Hz)，4.44(q，2H，J＝7.1Hz)，2.40(s，3H)，2.39(d，2H，J＝4.8Hz)，1.45(t，3H，J＝7.1Hz)，1.39(s，6H).5’，6’-二氢-5’，5’-二甲基-8’-(4-甲基苯基)-[2，2’-联萘]-6-甲酸(化合物65)
将5’，6’-二氢-5’，5’-二甲基-8’-(4-甲基苯基)-[2，2’-联萘]-6-甲酸乙酯(化合物64)(0.19g，0.43mmol)、乙醇(8ml)和1N氢氧化钠水溶液(2ml)的溶液于60℃加热3小时。将该溶液冷却到0℃并用1N的盐酸水溶液酸化。用乙酸乙酯提取其产物，合并有机层，用水、盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并真空除去溶剂。将其残留物于0℃经THF/乙酸乙酯重结晶产生35mg的纯物质。减压浓缩其母液，使其残留物经硅胶层析纯化(100％乙酸乙酯)产生另外125mg无色固体状的目的化合物(总收率＝160mg，90％)：                      1H NMR(DMSO-d6)δ8.57(s，1H)，8.11(d，1H，J＝8.7Hz)，7.96-7.82(重迭d’S，3H)，7.65(d，2H，J＝7.6Hz)，7.50(d，1H，J＝7.9Hz)，7.28(s，1H)，7.26(d，2H，J＝8.3Hz)，7.21(d，2H，J＝8.3Hz)，6.01(t，1H，J＝4.5Hz)，3.34(br s，1H)，2.31(s，3H)，2.31(d，2H，J＝4.5Hz)，1.31(s，6H).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合 物66)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化锌、24.1mg(0.02mmol)四(三苯基磷)钯(0)和2-呋喃基锂[通过加入53.4mg(0.52ml，0.78mmol)的正丁基锂(在己烷中的1.5M溶液)到53.4mg(0.784mmol)的呋喃在1.0ml THF中的冷溶液(-78℃)中制备]将250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)转变成目的化合物(无色固体)：                                     PMR(CDCl3)：δ1.32(6H，s)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝5.0Hz)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，6.41(1H，t，J＝5.0Hz)，6.50(2H，s)，7.36(1H，d，J＝8.0Hz)，7.45(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.49(1H，s)，7.57(2H，d，J＝8.2Hz)，7.63(1H，d，J＝1.7Hz)，8.02(2H，d，J＝8.2Hz).4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物 67)
使用与制备4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)相同的通用方法，使用16.0mg(0.38mmol)在水中的LiOH将4-[(5，6-二氢-5，5-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物66)转变成目的化合物(无色固体)：
                                  PMR(d6-DMSO)：δ1.26(6H，s)，2.33(2H，d，J＝4.9Hz)，6.41(1H，t，J＝4.9Hz)，6.60(2H，m)，7.45-7.53(3H，m)，7.64(2H，d，J＝8.3Hz)，7.75(1H，d，J＝1.6Hz)，7.93(2H，d，J＝8.3Hz).3，4-二氢-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100C)和3，4-二氢- 4，4-二甲基-6-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100D)
用20分钟，将在二氯甲烷(20ml)中的乙酰氯(15g，192mmol)和1，2，3，4-四氢-1，1-二甲基萘(24.4g，152mmol)加入三氯化铝(26.3g，199.0mmol)在二氯甲烷(55ml)中的冷的(0℃)混合物中。将该反应混合物温热到室温并搅拌4小时。将冰(200g)加入所述反应烧瓶中，并用醚(400ml)稀释该混合物。分离水层和有机层，用10％盐酸(50ml)、水(50ml)、10％碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液(50ml)洗涤该有机相，然后干燥(硫酸镁)。蒸馏除去溶剂提供溶于苯(50ml)中的黄色油状物。
在氩气下，用20分钟分小批量将三氧化铬(50g，503mmol)加入乙酸(240ml)和乙酸酐(120ml)的冷溶液(0℃)中。于0℃下，搅拌该混合物30分钟并用苯(120ml)稀释。搅拌下，用20分钟，通过加料漏斗加入以上制备的苯溶液。8小时后，通过于0℃小心加入异丙醇(50ml)然后加入水(100ml)抑制反应。15分钟后，用醚(1100ml)和水(200ml)稀释该反应混合物，然后用固体碳酸氢钠(200g)中和。用水(100ml)，然后用饱和氯化钠水溶液(2×100ml)洗涤其醚层并经硫酸镁干燥。减压除去溶剂，提供异构体二酮的混合物，它们可以经层析(5％乙酸乙酯/己烷)分离。(化合物100C)：
  1H NMR(CDCl3)：δ8.55(1H，d，J＝2.0Hz)，8.13(1H，dd，J＝2.0，8.3Hz)，7.53(1H，d，J＝8.3Hz)，2.77(2H，t，J＝6.6Hz)，2.62(3H，s)，2.05(2H，t，J＝6.6Hz)，1.41(6H，s).(化合物100D)：1H NMR(CDCl3)：δ8.10(1H，d，J＝8.1Hz)，8.02(1H，d，J＝1.6Hz)，7.82(1H，dd，J＝1.6，8.1Hz)，2.77(2H，t，J＝7.1Hz)，2.64(3H，s)，2.05(2H，t，J＝7.1Hz)，1.44(6H，s)，3，4-二氢-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))-1(2H)-萘酮(化合物 100E)
将1.80g(8.34mmol)3，4-二氢-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100C)和3，4-二氢-4，4-二甲基-6-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100D)的1∶5混合物在50ml苯中的溶液与517.7mg(8.34mmol)的乙二醇和20.0mg(0.11mmol)的对-甲苯磺酸一水合物混合。将所形成的溶液在回流状态下加热18小时，冷却到室温，并减压浓缩。通过柱层析(10％乙酸乙酯-己烷)分离无色油状的目的化合物。
                                                             1H NMR(CDCl3)：δ 8.01(1H，d，J＝8.2Hz)，7.51(1H，s)，7.43(1H，dd，J＝1.7，6.4Hz)，4.07(2H，m)，3.79(2H，m)，2.74(2H，t，J＝6.5Hz)，2.04(2H，t，J＝7.1Hz)，1.67(3H，s)，1.46(6H，s).1，2，3，4-四氢-1-羟基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧 戊环基))萘(化合物100F)
将3，4-二氢-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))-1(2H)-萘酮(化合物100E，200.0mg，0.769mmol)在THF(5ml)中的溶液加入496.2mg(2.54mmol)对-甲苯基溴化镁在20ml THF中的溶液(2.54ml，1M醚溶液)中。将该溶液回流16小时，冷却到室温，用水、饱和氯化铵水溶液洗涤，并经硫酸镁干燥。减压除去溶剂，经柱层析纯化(10％乙酸乙酯/己烷)提供无色固体状的目的化合物：
                                                 1H NMR(CDCl3)：δ7.49(1H)，d，J＝1.7Hz)，7.19(2H，m)，7.10(2H，d，J＝7.9Hz)，7.04(1H，d，J＝8.2Hz)，4.05(2H，m)，3.80(2H，m)，2.34(3H，s)，2.21(1H，m)，2.10(1H，m)，1.88(1H，m)，1.65(3H，s)，1.54(1H，m)，1.39(3H，s)，1.33(3H，s).3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-乙酰基萘(化合物100G)
将1，2，3，4-四氢-1-羟基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))萘(化合物100F，160.0mg，0.52mmol)、对-甲苯磺酸一水合物(4mg)和30ml苯的溶液回流12小时。冷却到室温后，将该反应混合物用醚(100ml)稀释并用10％碳酸氢钠水溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，减压除去溶剂产生目的化合物，将其经柱层析(10％乙酸乙酯-己烷)分离产生黄色油状的目的化合物：                   1H NMR(CDCl3)：δ7.97(1H，d，J＝1.8Hz)7.67(1H，dd，J＝1.7，6.4Hz)，7.22(4H，s)，7.13(1H，d，J＝8.1Hz)，6.10(1H，t，J＝4.5Hz)，2.59(3H，s)，2.40(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，1.38(6H，s).4-[3-氧代-3-(7，8-二氢-5-(4-甲基苯基)-8，8-二甲基-2-萘基)-1-丙烯基]-苯 甲酸(化合物101)
将53.1mg(0.354mmol)4-羧基苯甲醛和80mg(2.00mmol，2.0ml1M氢氧化钠水溶液)加入78.7mg(0.272mmol)的3，4-二氢-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-乙酰基萘(化合物100G)在4.0ml甲醇的溶液中。将所形成的溶液于室温下搅拌12小时，减压浓缩，并将残留的油状物溶于乙酸乙酯中。用10％盐酸处理该溶液，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤其有机层，然后经硫酸钠干燥。减压除去溶剂产生无色固体状的目的化合物，使其经乙腈重结晶纯化：                                             1H NMR(丙酮d6)：δ8.00(7H，m)，7.83(1H，d，J＝15.6Hz)，7.24(4H，s)，7.13(1H，d，J＝8.1Hz)，6.12(1H，t，J＝4.5Hz)，2.42(2H，d，J＝4.8Hz)，2.38(3H，s)，1.41(6H，s).3，4-二氢-1-苯基-4，4-二甲基-6-乙酰基萘(化合物100H)
将496.2mg的苯基溴化镁(2.54mmol，2.54ml 1M的乙醚溶液)加入508.0mg(1.95mmol)的3，4-二氢-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊环基))-1(2H)-萘酮(化合物100E)在10ml THF的溶液中。将所形成的溶液在回流状态下加热8小时，加入水，并继续加热30分钟。减压除去THF并用乙酸乙酯提取其含水的残留物。使合并的有机层经硫酸镁干燥，减压浓缩，经柱层析(10％乙酸乙酯-己烷)自该残留物中分离无色油状的目的化合物：                                   1H NMR(CDCl3)：δ7.97(1H，d，J＝1.8Hz)，7.67(1H，dd，J＝2.1，8.0Hz)，7.34 (5H，m)，7.10(1H，d，J＝8.1Hz)，6.12(1H，d，J＝4.6Hz)，2.59(3H，s)，2.39(2H，d，J＝4.8Hz)，1.38(6H，s).4-[3-氧代-3-(7，8-二氢-5-苯基-8，8-二甲基-2-萘基)-1-丙烯基]-苯甲酸(化 合物103)将120.0mg的氢氧化钠(3.00mmol，3.0ml 1M水溶液)加入115.0mg(0.42mmol)_3，4-二氢-1-苯基-4，4-二甲基-6-乙酰基萘(化合物100H)和65.0mg(0.43mmol)的4-甲酰基-苯甲酸在5.0ml乙醇和1.0ml THF的溶液中。于室温下搅拌所形成的黄色溶液12小时。用6％盐酸水溶液酸化该溶液并用乙酸乙酯提取。使合并的有机层经硫酸镁干燥，减压浓缩，经柱层析(50％乙酸乙酯-己烷)分离出淡黄色固体状的目的化合物：                1H NMR(CDCl3)：δ8.13(2H，d，J＝7.7Hz)，8.04(1H，s)，7.81(1H，d，J＝15.5Hz)，7.75(3H，m)，7.60(1H，d，J＝15.5Hz)，7.35(5H，m)，7.14(1H，d，J＝8.1Hz)，6.15(1H，t，J.＝4.2Hz)，2.41(2H，d，J＝4.2Hz)，1.41(6H，s).
                                增强核受体兴奋剂的方法 概述和介绍
已经发现，显示负性激素活性的作为子集的视黄醛衍生物拮抗剂可用于增强其它视黄醛衍生物和甾体受体超家族激素的生物活性。所述的其它视黄醛衍生物和甾体受体超家族激素可以是内源性激素或药物制剂。从而，例如当与视黄醛衍生物负性激素一起使用时，在引起特异的生物作用方面，药用视黄醛衍生物兴奋剂的某些活性得到加强。这种联合给药的方法有利于最大限度地降低药用视黄醛衍生物的不需要的副作用，因为可以使用较低剂量的药用视黄醛衍生物以改善疗效。
更具体地说，已经发现AGN 193109(具有图1所示结构的合成视黄醛衍生物)显示独特的和未预料到的药理活性。AGN 193109显示对于RAR亚型核受体的高亲合力而不激活这些受体或刺激视黄醛衍生物应答基因的转录。而AGN 193109抑制由视黄醛衍生物兴奋剂激活的RARs，从而作为视黄醛衍生物拮抗剂发挥作用。
另外，已经发现可以使用视黄醛衍生物负性激素而不与视黄醛衍生物兴奋剂或甾体激素共同给药，以便控制某些疾病症状。更准确地说，在此所公开的视黄醛衍生物负性激素可以下行调节对于未与配体结合的RARs的应答基因的高水平基础转录。例如，如果未控制的细胞增生起因于作为对于未与配体结合的RARs应答的基因的活性，则通过给予使RARs灭活的视黄醛衍生物负性激素可以降低基因活性。结果，依赖于未与配体结合的RARs的活性的细胞增生可以被所述负性激素抑制。使用常规的拮抗剂不能达到抑制未与配体结合的RARs的作用。
重要的是，已经发现AGN 193109既可以抑制RAR的基础活性，有时又可以增强其它视黄醛衍生物和甾体受体超家族激素兴奋剂的活性。在本发明的上下文中，如果在所述负性激素的存在下，降低浓度的兴奋剂引起与单独使用所述兴奋剂所能得到基本上相同的定量应答，则认为负性激素例如AGN 193109增强激素兴奋剂。所述定量应答例如可以在体外报告基因测定法中测定。从而，如果与AGN 193109一起使用，当以特定剂量和浓度使用时，AGN 193109可以增强引起所需应答的治疗性视黄醛衍生物，较低剂量或浓度的所述治疗性视黄醛衍生物可以用于产生与单独使用所述治疗性的视黄醛衍生物时较高剂量或浓度的所述治疗性视黄醛衍生物基本相同的效果。可以通过共同给予AGN 193109所增强的兴奋剂包括RAR兴奋剂、维生素D受体兴奋剂、糖皮质激素受体兴奋剂和甲状腺激素受体兴奋剂。更具体地说，可以通过共同给药所增强的特异性兴奋剂包括：ATRA、13-顺式视黄酸、合成的RAR兴奋剂AGN 191183、1，25-二羟基维生素D3、地塞米松和甲状腺激素(3，3’，5-三碘代甲状腺氨酸)。在此也公开可以用于鉴定可以通过与AGN 193109共同给药所增强的其它激素的方法。
从而，从某种意义上并未期望AGN 193109作为简单的视黄醛衍生物拮抗剂，而是作为可以增强核受体家族不同成员活性的负性激素。我们也公开了可以解释负性激素活性和AGN 193109增强其它核受体配体活性能力的可能的机理。该机理结合了已知参与视黄醛衍生物依赖性信息传递通道的元件(elements)和另外结合了新的负性调节组分。
本领域内的普通技术人员可以理解作为AGN 193109结合的高亲和力靶的RARs为调节各种视黄醛衍生物应答基因的表达的转录因子。已经鉴定了作为RARs的顺式-调控DNA的结合位点为以视黄醛衍生物依赖性方式被转录调节的邻近基因。已经详细定义了称为视黄酸应答元件(RAREs)的结合所述DNA位点的RAR。重要的是所述RAREs与由一个RAR和一个RXR组成的异质二聚体结合。所述异质二聚体的RXR组分的功能为促进RAR/RXR异质二聚体和RARE之间高亲合力的相互作用(Mangelsdorf et al.The Retinoid Receptors in  The Retinoids：Biology，Chemistry and Medicine，2nd edition，eds.Sporn et al.，Raven Press，Ltd.，New York 1994)。
如以下所详细介绍的内容，涉及AGN 193109负性激素活性的发现与涉及假定的负性共激活因子蛋白(NCP)与RAR的相互作用的机理一致。根据该提出的机理，这种相互作用被AGN 193109所稳定化。
我们的结果进一步显示AGN 193109可以调节作为与除了为AGN 193109所占据的RARs以外的核受体相互作用的NCP的细胞内的有效性。其次，AGN 193109可以增强包括与所述RARs分享有结合NCP能力的核受体的转录调节转递通道。在这一点上，AGN193109显示调节不同的核受体转递通道的能力和调节对于常规视黄醛衍生物拮抗剂而言所不能期待的活性的能力。因此，AGN 193109用作增强核受体配体活性的药剂，包括内源性激素和处方药。该特异性的实例说明更加普遍的原理，即任何核受体负性激素将增强竞争性结合NCP的其它核受体的活性。
尽管其它与在此所述类似或等同的物质和方法可以用于本发明的实施和验证，现介绍优选的方法和物质。可以用于完成在此所述不同的核酸处理和过程的方法的一般参考可见Molecular Cloning：ALaboratory Manual(Sambrook et al.eds.Cold Spring Harbor Lab Publ.1989)和Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel et al.eds.，Greene Publishing ASSociates and Wiley-Interscience 1987)。以下为导致本发明形成的实验和结果的介绍。
实施例6介绍用于证明AGN 193109具有高的亲合力与三种RARs中的每一种结合而不激活视黄醛衍生物依赖性基因表达的方法。
                      实施例6
AGN 193109具有高的亲合力与RARs结合而不反式激活视黄醛 衍生物依赖性基因表达
使用基本根据Allegretto等人[J.Biol.Chem.268：26625(1993)]所述方法采用杆状病毒表达系统，将人类RAR-α、RAR-β和RAR-γ受体分别表达为重组蛋白。分别使用所述重组受体蛋白以利用Heyman等人[Cell 68：397(1992)]所述[3H]-ATRA置换测定法测定AGN 193109结合的亲合力。根据Cheng等人[Biochemical Pharmacology 22：3099(1973)]所述方法测定离解常数(Kds)。
也检验AGN 193109在用RAR表达型载体和视黄醛衍生物应答报告基因构成物短暂共转染的CV-1细胞中反式激活RARs的能力。用ΔMTV-TREp-Luc报告质粒将受体表达型载体pRShRAR-α[Giguere etal.Nature 330：624(1987)]、pRShRAR-β[Benbrook et al.Nature333：669(1988)]和pRShRAR-γ[Ishikawa et al.Mol.Endocrinol.4：837(1990)]分别共转染。所述ΔMTV-TREp-Luc质粒与Umesono等人[Nature 336：262(1988)]所述ΔMTV-TREp-CAT报告构成物基本相同，除了所述氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因被多核苷酸序列编码的萤火虫荧光素酶取代。使用Molecular Cloning：A Laboratory Manual(Sambrook et al.eds.Cold Spring Harbor Lab Publ.1989)中所述磷酸钙共沉淀方法完成绿猴CV-1细胞转染过程。以密度为4×104/孔，将CV-1细胞平面接种到12孔的多孔平面接种板上，并用含有0.7μg报告质粒和0.1μg根据标准实验方法的受体质粒的磷酸钙沉淀短暂转染。18小时后，洗涤细胞以便转移该沉淀物并再加入含有10％的活性炭提取的牛胚胎血清(Gemini Bio-Products)的Dulbecco’s改进Eagle’s培养基(DMEM)(Gibco)。单独用溶媒(乙醇)或AGN 193109(10-9-10-6M)处理细胞18小时。制备在0.1M KPO4(pH7.8)、1.0％TRION X-100、1.0mMDTT、2mM EDTA中的细胞溶解产物。按照de Wet等人[Mol.Cell.Biol.7：725(1987)]所述方法，使用萤火虫荧光素(AnalyticalLuminescence Laboratory)和EG&G Berthold 96孔平面接种板式发光计测定荧光素酶的活性。所报道的荧光素酶值用一式三份测定值的均值±SEM表示。
表11中的结果表明AGN 193109具有高的亲合力与RAR-α、RAR-β和RAR-γ的每一种结合而不激活视黄醛衍生物依赖性基因表达。更准确地说，AGN 193109与具有的Kd值在2-3nM范围内的三种受体中的每一种结合。尽管存在这种紧密的结合，当与由ATRA刺激的诱导相比，AGN 193109不激活基因表达。因此，AGN 193109的最大有效浓度的一半(EC50)不能测定。尽管未示于表中，也发现AGN具有不可测定的对于RXRs的亲合力。
                          表11
            AGN 193109结合和RARs的反式激活
    RAR-α     RAR-β     RAR-γ
EC50(nM)     无活性     无活性     无活性
Kd(nM)     2     2     3
实施例7介绍用于证明AGN 193109为ATRA依赖性基因表达的拮抗剂的方法。
                   实施例7
对由ATRA引起的RAR反式激活的AGN 193109依赖性抑制
在通过Sambrook等人(Molecular Cloning：A Laboratory ManualCold Spring Harbor Lab Publ.1989)的磷酸钙共沉淀方法共转染CV-1细胞中，研究了AGN 193109拮抗ATRA介导的RAR激活的能力。用Hollenberg等人[Cell 55：899(1988)]所述ΔMTV-Luc报告质粒将真核细胞表达型载体pRShRAR-α[Giguere et al.Nature 330：624(1987)]、pRShRAR-β[Benbrook et al.Nature 333：669(1988)]和pRShRAR-γ[Ishikawa et al.Mol.Endocrinol.4：837(1990)]共转染。所述报告质粒引人注目地含有两个复制的TRE-复发的应答元件。磷酸钙转染过程完全按照实施例6中所述进行。用单独溶媒(乙醇)、ATRA(10-9-10-6M)、AGN 193109(10-9-10-6M)或与AGN 193109(10-9-10-6M)混合的10-8MATRA处理细胞达18小时。也按照实施例6中所述进行细胞溶解产物和荧光素酶活性的测定。
这些过程的结果表示于图2A-图2F中，其中荧光素酶值用一式三份测定值的均值±SEM表示。更准确地说，在示于图2A、2C和2E中的结果表明用ATRA刺激转染细胞导致荧光素酶活性上的剂量应答增加。这证实在所述实验系统中ATRA激活三种RARs中的每一种，并提供作为测定拮抗剂活性的比较的基础。示于图2B、2D和2F中的绘图结果显示用10nM ATRA共处理转染细胞和增加AGN 193109的浓度导致抑制荧光素酶的活性。尤其同样剂量的AGN 193109和ATRA相对单独使用ATRA产生对于所有三种RAR亚型大于50％的抑制。比较在不同浓度AGN 193109存在下的ATRA剂量应答显示ATRA受到AGN 193109的竞争性的抑制。显而易见，在图2中所示所有图形上的横轴代表视黄醛衍生物浓度的log值。这些结果证明AGN 193109是有效力的RAR拮抗剂。
其次，我们进行阐明以下AGN 193109拮抗剂活性机理的实验。本领域内的普通技术人员可以理解：核受体激活被认为涉及为配体结合所诱导的受体的构象变化。蛋白酶保护测试的结果确实已经证实核激素兴奋剂和拮抗剂使得受体蛋白采取不同的构象形式[Keidel et al.Mol.Cell.Biol.14：287(1994)；Allan et al.J.Biol.Chem.267：19513(1992)]。我们利用这种测试方法以便确定是否AGN 193109和ATRA使得RAR-α采取不同的构象。将AGN 193583(RAR-α选择性拮抗剂)作为阳性对照，已知它可作为蛋白酶敏感性的拮抗剂特异性模型。
实施例8介绍用于检测由AGN 193109的结合所产生的RAR-α构象变化一种方法。如下所示，该过程结果出人预料地显示AGN 193109导致胰蛋白酶敏感性模型，它与ATRA(RAR兴奋剂)诱导的模型基本相同，而不同于模式RAR拮抗剂诱导的模型。这一发现提示AGN193109具有不同于其它视黄醛衍生物拮抗剂的性质。
                    实施例8
                蛋白酶保护分析
构成于载体pGEM3Z(Pharmacia)中并含有RAR-αcDNA[Giguereet al.Nature 330：624(1987)]的质粒与TNT-偶联的网状细胞溶解产物体外转录-翻译系统(Promega)结合使用以便制备[35S]-蛋氨酸标记RAR-α。所标记蛋白RAR-α的有限的蛋白水解消化根据Keidel等人[Mol.Cell.Biol.14：287(1994)]所述的方法进行。将等份含有[35S]-蛋氨酸标记RAR-α的网状细胞溶解产物用ATRA、AGN 193583或AGN193109以总体积为9μl，在冰冻下，孵育45分钟。对于所有实验而言，视黄醛衍生物的最终浓度对于ATRA和AGN 193109为100nM，对于AGN 193583为1000nM。在所述视黄醛衍生物最终浓度间的差异为基于ATRA和AGN 193109(在RAR-α上具有的Kd分别为2和10nM)和AGN 193583(在RAR-α上具有的Kd≥100nM)的相对亲合力上的差异的大约10倍。在配体结合后，将1μl适当浓度的胰蛋白酶加入该混合物中产生为25、50或100μg/ml的终浓度。于室温下孵化样品10分钟，并加入SDS-样品缓冲液终止胰蛋白酶消化。根据标准方法，使样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影。
所述兴奋剂和拮抗剂均产生胰蛋白酶敏感性的不同模型，它们不同于未与配基结合受体的消化所得的结果。放射自显影的结果显示在不加入视黄醛衍生物的情况下，25、50或100μg/ml浓度的胰蛋白酶于室温下，在10分钟内完全消化放射性标记的RAR-α。ATRA的预先结合产生两种主要的耐蛋白酶种的表象。RAR-α选择性拮抗剂AGN 193583的预先结合产生耐蛋白酶种，其分子量低于由ATRA预先结合所产生的种的分子量。该结果显示视黄醛衍生物兴奋剂和拮抗剂导致通过改变的胰蛋白酶敏感性可检测到的构象变化。令人感到吃惊的是，AGN 193109预先结合产生蛋白酶保护模式，它与ATRA预先结合产生的模式很难区分。
以上结果证实AGN 193109与RAR-α结合并改变其构象。令人感兴趣的是，与拮抗剂(AGN 193583)结合产生的变化比较，这种构象变化的性质与兴奋剂(ATRA)结合产生的构象变化更为相似。显然，AGN193109依赖性拮抗作用机理是独特的。
我们考虑了能够解释AGN 193109拮抗剂活性的可能的机理。尤其，我们使用标准凝胶位移测定法以便检验是否AGN 193109干扰RAR/RXR异质二聚体的形成或抑制RAR和其同族DNA结合位点间的相互作用。
实施例9介绍用于证明AGN 193109既不抑制RAR/RXR二聚合作用又不抑制二聚体与靶向DNA结合的凝胶电泳移动性位移测定法。
                  实施例9
              凝胶位移分析
除了省去35S标记的蛋氨酸外，基本按照实施例8中所述产生体外翻译的RAR-α。使用含有Mangelsdorf等人[Nature 345：224-229(1990)]所述RXR-αcDNA的基于pBluescript(II)(SK)的载体作为产生体外转录本的模板类似地产生体外翻译的RXR-α。使所述标记的RAR-α和RXR-α(单独或混合)或与AGN 193109(10-6M)预先结合(单独或混合)与具有序列5’-TCAGGTCACCAGGAGGTCAGA-3’(SEQ IDNO：1)的末端标记DR-5 RARE双链探针相互作用。按照标准的实验室方法，将所述结合混合物在非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳和放射自显影。出现在放射自显影谱上对于该凝胶上所有路径为常见的单独延迟种(species)代表在网状细胞溶解产物中存在的未定义的结合探子因子。只有RAR/RXR组合产生视黄醛衍生物受体特异性延迟种。单独的RAR或单独与所述探子结合的RXR均不产生这种位移种。AGN193109的存在不减少这种相互作用。
这些结果显示AGN 193109基本不改变RAR-α的同质或异质二聚性质。另外，AGN 193109不抑制受体二聚体与含有关连结合位点的DNA片段的相互作用。
考虑到表现AGN 193109特征的独特的性质，我们继续研究是否该拮抗剂另外抑制未与配体结合的RARs的活性。用于进行该检测的受体/报告质粒体系有利地显示不加入视黄醛衍生物兴奋剂下高水平的组成活性。更准确地说，这些方法使用ER-RAR嵌合受体和ERE-tk-Luc报告系统。所述ERE-tk-Luc质粒包括连接HSV胸苷激酶启动子和荧光素报告基因的质粒tk-Luc上游的Xenopus vitellogenin A2基因5’-旁侧区的雌激素应答的-397至-87区[如Klein-Hitpass等人所述，Cell 46：1053-1061(1986)]。所述ER-RAR嵌合受体由融合所述RARs的“D-E-F”结构域的雌激素受体DNA结合结构域所组成。本领域内的普通技术人员可以理解该“D-E-F”结构域起着与视黄醛衍生物结合的功能，以便提供视黄醛衍生物诱导的反式激活功能及提供用于与RXR异质二聚作用的接触位点。从而，在该报告系统中荧光素酶的表达取决于所述转染嵌合受体构成物的激活作用。
实施例10介绍了用于证明AGN 193109抑制起因于未与配体结合的RARs的基础基因活性的方法。在不加入视黄醛衍生物兴奋剂情况下进行这些过程。以下表示的结果提供AGN 193109显示负性激素活性的首次证明。
                   实施例10
对于视黄醛衍生物调节的报告质粒在短暂共转染细胞系中的基 础基因活性的阻遏作用
用ERE-tk-Luc报告质粒和ER-RAR-α、ER-RAR-β或ER-RAR-γ表达质粒使CV-1细胞共转染。所述ERE-tk-Luc质粒含有Xenopuslaevis vitellogenin A2基因的雌激素应答启动子元件并与Klein-Hitpass等人所述[Cell 46：1053(1986)]的报告质粒基本相同，除了该CAT报告基因被多核苷酸序列编码的荧光素酶取代。Graupner等人[Biochem.Biophys.Res.Comm.179：1554(1991)]已经介绍了用于所述共转染的ER-RAR-α、ER-RAR-β或ER-RAR-γ嵌合受体编码的多核苷酸。使这些多核苷酸与Ellis等人[Cell 45：721(1986)]所述的pECE表达载体连接并在SV-40启动子的转录控制下被表达。完全按照实施例6中所述的方法，使用0.5μg/孔的报告质粒及0.05μg、0.10μg或0.2μg/孔的受体质粒进行磷酸钙转染过程。用单独溶媒(乙醇)、ATRA(10-9-10-6M)或AGN 193109(10-9-10-6M)处理细胞达18小时。如实施例6中所述进行细胞溶解产物和荧光素酶活性的测定。
在图3A、4A和5A中所示的结果证实ATRA很强地诱导在所有转染子中荧光素酶的表达。作为这三种转染嵌合RAR异构体的荧光素酶的基础水平表达范围在约7000-40000相对光单位(light units)(rlu)并在某种程度上取决于用在所述转染中的受体质粒的量。从而，如所预期的一样，这三种嵌合受体可为ATRA激活。更准确地说，所有这三种受体与ATRA结合并激活暂居于ERE-tk-Luc质粒上的荧光素酶报告基因的转录。
图3B、4B和5B表示在没有任何外源性视黄醛衍生物兴奋剂的情况下获得的AGN 193109剂量应答曲线。令人感兴趣的是，ER-RAR-α(图3B)基本不受AGN 193109的影响，而ER-RAR-β和ER-RAR-γ嵌合受体(分别为图4B和5B)显示AGN 193109剂量应答的荧光素酶报告质粒活性的降低。
我们另外通过检验AGN 193109抑制由设计具有组成转录激活因子结构域的嵌合RAR-γ受体介导基因表达的能力，研究了其负性激素活性。更准确地说，我们在两种类型的荧光素酶报告系统中使用融合HSV VP-16(称为RAR-γ-VP-16)的酸性激活因子结构域的组成活性RAR-γ嵌合受体。第一种由用ER-RARs和ER-RXR-α共转染的ERE-tk-Luc报告质粒所组成。第二种利用ΔMTV-TREp-Luc报告质粒代替ERE-tk-Luc报告质粒。
实施例11介绍用于证明AGN 193109可以抑制RAR的转录激活因子结构域活性的方法。以下所示的结果证明AGN 193109可以抑制在没有兴奋剂情况下的RAR依赖性基因表达并证实AGN 193109显示负性激素活性。
                     实施例11
对在短暂转染的细胞中RAR-VP-16活性的阻遏作用
根据实施例6中所述的磷酸钙共沉淀技术，用0.5μg/孔的ERE-tk-Luc荧光素酶报告质粒、0.1μg/孔的ER-RXR-α嵌合受体表达质粒及0μg或0.1μg/孔的RAR-γ-VP-16表达质粒使CV-1细胞短暂共转染。所述嵌合受体ER-RXR-α由融合雌激素受体DNA结合结构域[Graupner et al.Biochem.Biophys.Res.Comm.179：1554(1991)]的RXR-α[Mangelsdorf，et al.Nature 345：224-229(1990)]激素结合结构域(氨基酸181-458)所组成并由基于Ellis等人[Cell 45：721(1986)]所述表达载体pECE的SV-40所表达。RAR-γ-VP-16与Nagpal等人[EMBO J.12：2349(1993)]所述VP16RAR-γ1表达质粒相同，并给具有与全长度RAR--γ的氨基端融合的HSV的VP-16蛋白的激活结构域的嵌合蛋白编码。转染后18小时，用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗细胞并加入含有已经用炭提取除去视黄醛衍生物的10％FBS(Gemini Bio-Products)的DMEM(Gibco-BRL)。用适当稀释的AGN 193109或在乙醇溶媒中的ATRA或单独的乙醇处理细胞达18小时，然后用PBS漂洗并用0.1MKPO4(pH7.8)、1.0％TRITON X-100、1.0nM DTT、2nM EDTA溶解。根据de Wet等人[Mol.Cell.Biol.7：725(1987)]所述方法，使用萤火虫荧光素(Analytical Luminescence Laboratory)和EG&G Berthold 96孔平面接种发光计测定荧光素酶活性。荧光素酶值用一式三份测定值的均值±SEM表示。
如图6中所示，用ERE-tk-Luc报告构成物使CV-1细胞转染，所述ER-RAR-α嵌合表达质粒显示由ATRA引起的弱的激活荧光素酶活性，可能是由于ATRA异构化为9C-RA，即对于RXRs而言的天然配体[Heyman et al.Cell 68：397(1992)]。用报告质粒和嵌合受体质粒的相同混合物转染，但经AGN 193109处理的细胞并不对荧光素酶活性显示出任何作用。因为AGN 193109不与RXRs结合，该后一结果是预料到的。类似地用ERE-tk-Luc报告质粒转染CV-1细胞，然而用ER-RAR嵌合受体表达质粒代替在ATRA处理后显示极强的荧光素酶活性诱导作用的ER-RXR-α。
相反，在所述转染混合物中RAR-γ-VP-16表达质粒与ER-RXR-α和ERE-tk-Luc质粒的包涵物导致在没有任何加入视黄醛衍生物的情况下测定时，基础荧光素酶活性的显著的增加。当与单独使用ER-RXR-α转染的细胞所得结果相比时，对于ER-RXR-α/RAR-γ-VP-16共转染子而言，所观测到的基础荧光素酶活性上的增加显示重组ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16蛋白可以异质二聚合。该异质二聚体与所述顺式调节雌激素应答元件的相互作用导致所述VP-16激活结构域对于ERE-tk-Luc报告质粒的启动子区的靶向性。用ATRA处理该三重转染细胞导致超过高的基础水平的荧光素酶活性的适度增加。然而，用AGN 193109处理该三重转染子导致荧光素酶活性上剂量依赖性降低。重要的是，图6显示AGN 193109处理用ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16共转染的细胞导致在约10-8M AGN 193109下出现具有最大抑制的对荧光素酶活性的阻遏作用。
通过其中使AGN 193109与RAR结合导致RAR中构象变化(它使促进反式-作用负性共激活因子蛋白的结合的负性构象稳定化)的模型，解释了我们的观察结果即AGN 193109阻遏在RXR存在下的RAR-γ-VP-16的组成转录激活功能。当通过NCP使AGN 193109/RAR复合物结合时，RAR能够上行调节对激活的RARs为一般应答的基因的转录。我们的模型进一步提出细胞内储备的NCP在某些方面浓度为有限的，并可以通过AGN 193109刺激于RARs的络合而将其耗竭。
在图6中表示的结果另外显示甚至在10-6M AGN 193109下，ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16蛋白可以相互作用形成能够激活所述报告基因转染的异质二聚体。更准确地说，用ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16转染并以足以提供最大抑制的浓度(10-8-10-6M)的AGN 193109处理的细胞产生示数为约16000rlu的荧光素酶活性。相反，只用ER-RXR-α转染，然后以浓度高达10-6M的AGN 193109处理的细胞显示荧光素酶表达的水平只有约8000rlu。甚至在10-6M的AGN 193109存在下，在表达ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16的细胞中得到较高水平的荧光素酶活性的事实显示在这两种重组受体间存在持续的相互作用。由AGN193109对RAR-γ-VP-16活性的阻遏作用提示用VP-16激活作用可以共同控制(codominate)NCP相互作用的调节。因此，我们认识到调节一般不被AGN 193109依赖性方式的视黄醛衍生物所调节的基因的表达是可能的。
作为AGN 193109可调节基因的候选者包括那些被转录因子复合物激活的可调节基因，它们由于RARs结合或异质二聚的非RAR因子所组成，其中所述非RAR因子不要求RAR兴奋剂激活。而用RAR兴奋剂的刺激可以基本对该基因的表达没有影响，给予AGN 193109可以促进含有AGN 193109/RAR/NCP的非活性转录复合物的形成。其次，加入AGN 193109视黄醛衍生物负性激素可以下行调节其它视黄醛衍生物不敏感基因转录。
相同的机理可以解释AGN 193109可以阻遏在HL-60细胞中的组织转谷氨酰胺酶(TGase)基因活性。由三个被5和7个碱对隔开的典型的视黄醛衍生物的半位点组成的视黄醛衍生物应答元件在该基因的转录控制区中一直为相同的。尽管TGase可以被RXR选择性兴奋剂诱导，它对RAR选择性兴奋剂不应答。通过RAR/RXR异质二聚体使TGase视黄醛衍生物应答元件结合(Davies et al.in Press)。令人感兴趣的是，AGN 193109能够阻遏由RXR兴奋剂诱导的TGase活性。通过该负性激素使NCPs与所述异质二聚体的RAR组分分离，从而阻遏有关RXR的活性的能力可以解释该AGN 193109介导的阻遏作用。
通过使用RAR-γ-VP-16和表达构成物及使用所述AMTV-TREp-Luc报告质粒取代RAR-γ-VP-16和ER-RXR-α表达构成物与ERE-tk-Luc报告质粒结合，我们也获得了支持与实施例11所述内容一致结论的结果。于上述结果一致，我们发现AGN 193109抑制在ΔMTV-TREp-Luc报告质粒上的RAR-γ-VP-16的活性。从而，当该嵌合受体直接与视黄酸受体应答元件结合，代替间接与在报告质粒的启动子区中雌激素应答元件结合时，AGN 193109阻遏RAR-γ-VP-16的活性。这些发现证明用于鉴定具有负性激素活性试剂的测定不必限于使用特定的报告质粒。代之，用于鉴定视黄醛衍生物负性激素的实验系统所包括的重要特征涉及检测化合物阻遏设计含有组成性转录激活结构域的RAR的活性的能力。
一般而言，可以确定视黄醛衍生物负性激素为视黄醛类化合物的子集，它们在转染细胞中阻遏报告基因的基本水平的表达，所述报告基因为对于包括至少位于受体的DNA结合结构域的C端的视黄醛衍生物受体结构域的视黄醛衍生物受体或嵌合受体的直接或间接结合的转录应答。该方法已经被采用作为用于鉴定视黄醛衍生物负性激素的筛选方法。在本发明筛选方法的不同实施方案中，用于寻找负性激素的受体结构为可变的。更准确地说，所述视黄醛衍生物受体可以是RAR或RXR的亚型。可选设计所述受体包括组成性转录激活因子结构域。用于筛选负性激素的视黄醛衍生物受体可选含有作为对于所述天然受体为内源性的DNA结合结构域的替代物的异质的DNA结合结构域。然而，当在筛选方法中使用第二种受体时，其中第二种受体可以与用于寻找负性激素的视黄醛衍生物受体二聚合，然后该视黄醛衍生物受体可以不需要DNA结合结构域，因为它间接通过与本身结合在转录控制区的第二种受体的二聚合可以被连接到所述受体基因的转录控制区上。
在所述筛选方法的实施中，在体外检测方法中，一般测定化合物阻遏报告质粒的基础表达的能力。基础表达代表在没有外源性加入的视黄醛衍生物兴奋剂存在的条件下，在转染细胞中报告质粒表达的基线水平。可选采取步骤，通过例如活性炭提取用于体外培养细胞的血清的方法自所述转染细胞的周围除去内源性视黄醛衍生物配体。
用于所述筛选方法中的报告基因的实例包括那些编码的荧光素酶、β半乳糖甙酶、氯霉素乙酰基转移酶或者能通过免疫化学方法检测的细胞表面抗原。实际上，没有预期报告基因的性质对于方法的可操作性是至关重要的。然而，所述报告基因的构成物的转录调控区必须包括一个或多个顺式调控元件，它们为用于寻找负性激素的转录因子的靶子。例如，如果一个人想要鉴定RAR负性激素，那么所述报告因子构成物转录调节区可以含有可为含RAR蛋白结合的顺式调控元件。在该实例中，在RAR的DNA结合结构域与所述报告因子构成物的转录调控区的顺式调控元件之间应该具有相应关系。从而，如果具有组成性转录激活因子结构域和DNA结合结构域(它们可以结合顺式调控雌激素应答元件)的嵌合RAR用于所述筛选方法中，则所述报告因子构成物的转录调控区应该含有雌激素应答元件。
Mangelsdorf等人[The Retinoid Receptors in The Retinoids：Biology，Chmistry and Medicine，2nd edition，eds.Sporn et al.，Raven Press，Ltd.，New York(1994)]公开了用于报告基因测试中的直接结合视黄醛衍生物受体(RAREs)的顺式调控元件的实例。间接结合嵌合受体的顺式调控元件的实例包括对于任何DNA结合蛋白而言的DNA结合位点，其中所述蛋白的DNA结合结构域可以被加入由连接视黄醛衍生物受体的该DNA结合结构域组成的嵌合受体中。可以被设计进入嵌合受体并将识别异质顺式调控元件的异质DNA结合结构域的特定实例包括那些识别雌激素应答元件。从而，用于所述识别方法中的嵌合受体的视黄醛衍生物受体部分不必含有视黄醛衍生物受体的DNA结合，然而至少必须含有视黄醛衍生物受体的配体结合结构域。
结合所述顺式调控元件的间接视黄醛衍生物受体的其它实例包括能结合所述顺式调控元件和与视黄醛衍生物受体二聚合的蛋白的用途。在该情况下，所述视黄醛衍生物受体只通过与负责DNA结合的蛋白结合而与所述顺式调控元件结合。该系统的实例将包括由融合RXR的异质DNA结合结构域组成的并含有至少与负责与RARs二聚合的RXR的结构域的融合蛋白的用途。共诱导的RARs可以与该结合顺式调控元件的融合蛋白二聚合。我们认为任何与RARs二聚合导致所述RAR与所述顺式调控元件的间接结合的顺式调控元件结合蛋白也将适用于负性激素筛选方法。
在所述筛选方法的优选方案中，视黄醛衍生物负性激素被鉴定为可以阻遏已经增加了基础活性的设计RAR转录因子的基础表达的视黄醛衍生物。尽管对于所述筛选方法的可操作性而言不是必需的，然而用于下列实施例中的设计RAR包括组成性转录激活结构域。在没有任何视黄醛衍生物的情况下，采用嵌合受体很好地提供了一种升高报告基因的基础表达的方法。尽管在以上详述的方法中已经使用短暂转染，组成性表达嵌合受体的稳定转染细胞系也用于所述筛选方法中。
如下列实施例中所公开的，对于设计含有对雌激素应答顺式调控元件特异性的DNA结合结构域的第二受体而言，具有组成性转录激活因子结构域的嵌合视黄醛衍生物受体为可异质二聚的。在该情况下，具有组成性转录激活因子结构域的嵌合视黄醛衍生物受体，间接经过与结合DNA靶向序列的第二受体结合，与顺式调控区控制报告基因表达关联。更具体地说，第二受体被设计含有识别雌激素应答元件的DNA结合结构域。在上游启动子区中具有雌激素应答元件的报告基因对没有具组成性转录激活因子结构域的转染嵌合受体情况下的视黄醛衍生物兴奋剂不应答更为有利。因此，所有报告基因活性起因于所述转染受体。雌激素应答元件DNA结合结构域和雌激素应答元件顺式调控元件的联合使用目的仅为说明。本领域内的普通技术人员将理解对于非RARE顺式调控元件具有特异性的工程(engineered)受体的其它联合形式也用于本发明筛选方法的实施中。
用于所述筛选方法中的细胞为可以被转染的真核细胞。这些细胞可以为动物细胞例如人类、灵长类或啮齿动物细胞。我们使用CV-1细胞已经取得了非常好的结果，然而，适当地期待其它培养细胞系也可以成功地使用。任何本领域内已知的常规转染方法可以用于诱导编码具有组成性转录激活因子结构域的嵌合视黄醛衍生物受体的表达构成物。
所述组成性转录激活因子结构域由大部分氨基酸组成，它们可能具有通过在中性pH条件下一个负电荷所表示的整体酸性。例如，所述组成性转录激活因子结构域可以具有也在病毒转录因子中发现的氨基酸序列。具有组成性转录激活因子结构域的病毒转录因子的一个实例为单纯性疱疹病毒16。然而，其它病毒或合成性转录激活因子结构域也可以用于编码具有组成性转录激活因子结构域的嵌合视黄醛衍生物受体的表达构成物的构成中。
如下所述，我们已经开发了用于鉴定视黄醛衍生物负性激素的一般化的筛选方法。该筛选方法提供将简单的拮抗剂与负性激素区分开的方法。表12列出显示对于RAR-γ有效亲合力的几种视黄醛衍生物化合物，只对ATRA例外，在短暂共转染反式激活测试中它们不反式激活该受体。从而，我们检测了这些化合物是否哪些为RAR-γ拮抗剂，即使有的话，这些拮抗剂中那些显示负性激素活性。
                       实施例12
          对于视黄醛衍生物负性激素的测试
通过在Molecular Cloning：A Laboratory Manual(Sambrook et al.eds.Cold Spring Harbor Lab Publ.1989)中所述磷酸钙共沉淀方法，用0.5μgERE-tk-Luc报告质粒和0.1μgER-RAR-γ[Graupner et al.Biochem.Biophys.Res.Comm.179：1554(1991)]嵌合表达质粒使4×104CV-1细胞转染。18小时后，用PBS漂洗细胞并加入含有10％活性炭提取的FBS(Gemini Bio-Products)的DMEM(Gibco-BRL)。用在乙醇中的10-8M ATRA或单独用乙醇处理细胞。此外，用10-9、10-8、10-7或10-6M表12中所列的化合物处理经ATRA处理的细胞。18小时后，将细胞在PBS中漂洗并溶解在0.1M KPO4(pH7.8)、1.0％TRITON X-100、1.0mM DTT、2mM EDTA中。根据de Wet等人[Mol.Cell.Biol.7：725(1987)]所述方法测定荧光素酶活性。
                             表12化合物                       Kd(nM)@RAR-γa   EC50(nM)@RAR-γbATRA                            12                  17AGN 193109                      6                   na(化合物60)AGN 193174                      52                  na(化合物34a)AGN 193199                      30                  naAGN 193385                      25                  na(化合物23)AGN 193389                  13                na(化合物25)AGN 193840                  40                naAGN 193871                  30                na(化合物50)
a通过3H-ATRA竞争性的与杆状病毒表达的RAR-γ的结合和应用Cheng-Prussof方程测定的相对亲合力(Kd)。
b用ΔMTV-TREp-Luc和RS-RAR-γ短暂共转染的CV-1细胞中测定的EC50。“na”代表无活性。
如部分在图7和表12中所示结果表明的，ATRA例外，表12中所列的所有化合物在RAR-γ上为视黄醛衍生物拮抗剂。
其次，筛选表2中鉴定的RAR-γ拮抗剂以便确定即使有的话那些也是视黄醛衍生物负性激素。根据在Molecular Cloning：A LaboratoryManual(Sambrook et al.eds.Cold Spring Harbor Lab Publ.1989)中所述磷酸钙方法，用0.5μgERE-tk-Luc报告质粒和0.1μgER-RXR-α[Graupner et al.Biochem.Biophys.Res.Comm.179：1554(1991)]和0.2μg RAR-γ-VP-16[Nagpal et al.EMBO J.12：2349(1993)]嵌合表达质粒使4×104 CV-1细胞转染。18小时后，用PBS漂洗细胞并加入含有10％活性炭提取的FBS(Gemini Bio-Products)的DMEM(Gibco-BRL)。用10-9、10-8、10-7或10-6M表12中所列的每种化合物处理细胞。用作为阴性对照的单独的乙醇溶媒处理细胞。18小时后，将细胞在PBS中漂洗并溶解在0.1M KPO4(pH7.8)、1.0％TRITON X-100、1.0mMDTT、2mM EDTA中。根据de Wet等人[Mol.Cell.Biol.7：725(1987)]前述方法测定荧光素酶活性。
如图8中所示，根据其对于RAR-γ-VP-16嵌合视黄醛衍生物受体的组成性转染激活功能的作用可以将表12中的视黄醛衍生物拮抗剂分成两类。一类(包括AGN 193174、AGN 193199和AGN 193840)尽管它们为ATRA拮抗剂，不阻遏RAR-γ-VP-16活性。相反，AGN193109、AGN 193385、AGN 193389和AGN 193871显示剂量依赖性阻遏RAR-γ-VP-16组成性活性。从而，尽管两组化合物均为RAR-γ拮抗剂，只有第二组化合物显示负性激素活性。该测试方法可以有利地将视黄醛衍生物负性激素与简单的视黄醛衍生物拮抗剂区分开。
前述试验结果表明AGN 193109满足定义负性激素的标准。更准确地说，在实施例11中所示的结果证明AGN 193109甚至在没有外源性加入的视黄醛衍生物配体的情况下，仍具有在RARs上施加抑制活性的能力。如此，该具有生物活性的化合物不取决于RARs和兴奋剂例如ATRA和AGN 191183之间相互作用的阻滞。这些发现导致得出结论：AGN 193109稳定RARs和NCPs之间的相互作用。如图9中所示，NCP/RAR/PCP的相互作用以平衡状态存在。兴奋剂的作用为增加PCP的相互作用并降低NCP的相互作用。如前文所述，我们的试验结果揭示通过给予AGN 193109可以调节对于其它受体而言NCP的细胞内有效性。更准确地说，我们发现AGN 193109可以促进NCP与RARs的复合作用，从而降低可用于与除RARs外的转录因子相互作用的NCP的细胞内储存。
其次，我们检验了AGN 193109对于兴奋剂介导的AP-1依赖性基因表达抑制的作用。在Endocr.Rev.14：651(1993)中，Pfhal公开了视黄醛衍生物通过包括抑制AP-1活性的机理可以下行调节基因表达。我们假定当与指定测定AP-1活性的模型系统中的视黄醛衍生物兴奋剂结合使用时，AGN 193109可以具有两种作用之一。首先，可以认为AGN 193109已经拮抗所述兴奋剂的作用，从而缓解对于AP-1活性的兴奋剂依赖性抑制。此外，AGN 193109可能已经增强了所述兴奋剂的活性，从而夸大对于AP-1活性的兴奋剂依赖性抑制作用。
实施例13介绍用于证明AGN 193109增强视黄醛衍生物兴奋剂的抗AP-1活性的方法。如下所述，AGN 191183视黄醛衍生物兴奋剂微弱地抑制AP-1依赖性基因表达。AGN 193109和视黄醛衍生物兴奋剂联合使用强烈抑制AP-1依赖性基因表达。AGN 193109本身基本上没有抗AP-1的活性。
                实施例13
AGN 193109增强视黄醛衍生物兴奋剂的抗AP-1活性
如Giguere等人[Nature 33：624(1987)]所述，利用LIOFECTAMINE(Life Technologies，Inc.)，使用1μg的Str-AP1-CAT报告基因构成物和0.2μg的质粒pRS-hRARα使HeLa细胞转染。通过克隆相应于大鼠pBLCAT3的HindIII-BamHI位点[LuckoW et al.，Nucl.Acids Res.15：5490(1987)]之间stromelysin-1启动子[Matrisian et al.，Mol.Cell.Biol.6：1679(1986)]的-84至+1位的DNA片段制备Str-AP1-CAT。所述stromelysin-1启动子的序列含有AP1结构域单元作为其唯一的增强子元件[Nicholson et al.，EMBO J.9：4443(1990)]。使具有如下序列的两种合成的低聚核苷酸退火制备所述启动子序列：5′-AGAAGCTTATGGAAGCAATTATGAGTCAGTTTGCGGGTGACTCTGCAAATACTGCCACTCTATAAAAGTTGGGCTCAGAAAGGTGGACCTCGAGGATCCAG-3′(SEQ ID NO：2)和5′-CTGGATCCTCGAGGTCCACCTTTCTGAGCCCAACTTTTATAGAGTGGCAGTATTTGCAGAGTCACCCGCAAACTGACTCATAATTGCTTCCATAAGCTTCT-3′(SEQ ID NO：3).如Nagpal等人[J.Biol.Chem.270：923(1995)]所述，完成包括转染、用合适的化合物处理和测定CAT活性的过程。
这些过程的结果表明AGN 193109加强所述视黄醛衍生物兴奋剂AGN 191183的抗AP-1活性。更准确地说，在浓度为10-12-10-10M的范围内，AGN 191183不抑制TPA诱导的Str-AP1-CAT表达。用AGN193109在浓度为10-10-10-8M范围内处理基本不抑制AP-1介导的报告基因的活性。然而，在图10中所示的结果表明以浓度为10-12-10-10M的范围内，使用AGN 193109(10-8M)和AGN 191183联合刺激所述转染子基本上抑制TPA诱导的Str-AP1-CAT表达的12％-21％的量。因而，在AGN 191183这一视黄醛衍生物兴奋剂一般不抑制AP-1活性的条件下，AGN 193109加强AGN 191183抗AP-1活性。
我们认为，通过可能涉及NCPs到RARs的AGN 193109依赖性受体内聚的机理，AGN 193109加强所述兴奋剂介导的对AP-1活性的阻遏作用。RARs属于超家族的核受体，它也包括作为1，25-二羟基维生素D3、糖皮质激素、甲状腺激素、雌激素和黄体酮的受体。假定结合NCPs的能力可为核受体超家族的不同成员所分享是合理的。这使我们推测AGN 193109可以加强与该超家族核受体相互作用的一种或多种配体的抗AP-1活性。
在先实施例中所述的结果清楚地表明AGN 193109加强视黄醛衍生物兴奋剂的抗AP-1活性。更准确地说，AGN 193109降低可以检测到AGN 191183的抗AP-1活性的阈剂量。因为AGN 193109本身基本没有抗AP-1活性，其对于核受体兴奋剂的作用为协同作用。我们也发现AGN 193109负性激素加强作为维生素D3受体的天然配体的1，25-二羟基维生素D3的抗AP-1活性。
在先实施例中观察到的AGN 193109和AGN 191183之间的协同作用必然意味着所述视黄醛衍生物兴奋剂的抗AP-1活性和AGN193109介导的加强该活性必定根据不同的机理。如果这两种制剂的作用机理为相同的，从而导致AGN 193109和所述兴奋剂的联合作用的效果是相加的。然而，联合的结果显示比单独使用任何一种制剂均更有效，其效果在该发现之前是没有预料到的。
使用比所述视黄醛衍生物兴奋剂约100倍摩尔过量的AGN193109，有效地完成所述RAR兴奋剂的AGN 193109介导的加强作用。因此，大部分的RARs应该被AGN 193109所结合，只留下非常少的RARs供兴奋剂结合。尽管存在这一事实，未与AGN 193109结合的RARs群能够结合视黄醛衍生物兴奋剂并有力地刺激作为抑制报告基因表达可测的兴奋剂依赖性应答。从而，我们的数据提示为AGN193109所诱导的RARs的可能的异质性。
AGN 193109的负性激素活性起因于其促进RARs和NCPs相互作用的能力，提供理解AGN 193109和视黄醛衍生物兴奋剂之间协同作用的基础。我们的结果与其中AGN 193109处理细胞促进RARs和NCPs的结合，从而降低所述细胞外游离NCP和游离RAR的数量的模型完全一致。这导致产生功能上有差异的两个RARs群。第一群由与NCPs结合的RARs所代表。该AGN 193109/RAR/NCP复合物不能为视黄醛衍生物兴奋剂所激活。第二群由RARs组成，它们不为NCP所结合并保留与兴奋剂的相互作用。后一细胞群称为“RAR”，表明在基本耗尽NCP的环境中的游离RARs。
RAR*s已经降低了通过平衡结合与NCP关联的可能性并具有增加了的对于可测的视黄醛衍生物兴奋剂的敏感性，例如作为抗AP-1活性的敏感性。所以如此是因为尽管通过给予AGN 193109耗竭细胞内的NCP的储存，然而还未耗尽PCP的储存。因此，游离RAR*s可以与视黄醛衍生物兴奋剂结合并在基本耗尽NCP的环境下与PCP因子相互作用。AGN 193109增加其它核受体对于其各自的兴奋剂的敏感性的能力可以归因于这些不同的核受体与相同的NCPs(它们与AGN 193109/RAR复合物相互作用)相互作用的能力。这种AGN193109介导可用于核受体家族成员的NCP的调节的模型用图解形式表示于图11中。
该图解模型使我们能预测AGN 193109可以调节除了视黄醛衍生物兴奋剂以外的核受体配体的活性。如在下列实施例中所述，我们证实AGN 193109在体外反式激活测试中加强1，25-二羟基维生素D3的活性。
实施例14介绍用于证明AGN 193109在反式激活测试中提高1，25-二羟基维生素D3活性的方法。
                      实施例14
    AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3的活性
使用Felgner等人[Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7413(1987)]所述的阳离子质脂体介导的转染方法转染Hela细胞。将5×104细胞平面接种在12孔的多孔接种板上并在加入10％FBS的DMEM中生长。使用2μg/孔的LIPOFECTAMINE试剂(Life Technologies，Inc.)，用含有来自连接报告质粒ΔMTV-Luc[Heyman et al.in Cell 68：397(1992)]的小鼠osteopontin基因的两个复制的1，25-二羟基维生素D3应答元件5’-GTACAAGGTTCACGAGGTTCACGTCTTA-3’(SEQ IDNO：4)[Ferraraet al.J.Biol.Chem.269：2971(1994)]和0.3μg的质粒pGEM3Z(Pharmacia，Inc.)作为载体DNA，以使DNA的最终浓度为1.0μg/孔，在无血清的培养基中使细胞共转染。转染后6小时，供给细胞终浓度为10％的含有活性炭提取的FBS的的生长培养基。转染后18小时，用单独溶媒(乙醇)或以终浓度为10-8或10-7M的AGN 193109的乙醇溶液处理细胞。6小时后，加入乙醇中的1，25-二羟基维生素D3到终浓度为10-10-10-7M。用1，25-二羟基维生素D3处理后18小时溶解并收获细胞。如上所述，测定荧光素酶活性。该实验系统可以使用监视和使1，25-二羟基维生素D3依赖性基因表达定量化的方便的方法。
图12中所示结果表明，当与单独使用1，25-二羟基维生素D3所获结果相比时，与1，25-二羟基维生素D3共同给予AGN 193109使其剂量应答曲线向左位移。这证实在体外反式激活测试中AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3的效力。更准确地说，图12以图解的方式介绍了浓度低至10-100 nM的AGN 193109使得1，25-二羟基维生素D3的活性大约增加10倍。需要10-8M浓度的1，25-二羟基维生素D3以便产生约2000 rlu的荧光素酶表达，而当将该维生素与浓度为10-8-10-7M的AGN 193109共同给予时，产生同样的荧光素酶量只需要1，25-二羟基维生素D3浓度1/10的量。尽管在图12中的图中未显示，使用浓度为10-9-10-8M的AGN 193109可以获得基本相同的结果。因而，共同给予AGN 193109基本降低在没有所述负性激素的情况下，产生类似的效果所需1，25-二羟基维生素D3的量。
令人感兴趣的是，当用共同转染的维生素D受体(VDR)表达质粒重复以上过程时，在AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3活性的能力上有一致的降低。我们对于该结果的解释为VDRs的过量表达可以影响AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3活性的能力。从而，配体受体的细胞内浓度(在组织特异性方式上可以不同)可以影响AGN193109加强与该受体结合的配体活性的能力。这又与模型一致，其中titratable NCPs有助于调节所述维生素D3的应答并支持以上提出的模型。
如下列实施例中所述，我们也证实AGN 193109也加强1，25-二羟基维生素D3的抗AP-1活性。我们的用于AGN 193109作用活性的模型通过在该药物的存在下引起NCPs与RARs迫切结合解释了这一观察结果。存在于Hela细胞中的内源性维生素D受体可能被给予更多的对于1，25-二羟基维生素D3配体的敏感性，其结果为夸大了该配体抑制来自Str-AP1-CAT报告因子的表达。
实施例15介绍了用于证明AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3的抗AP-1活性的方法。
                      实施例15
AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3的抗AP-1活性
根据Nagpal等人[J.Biol.Chem.270：923(1995)]所述方法，使用LIPOFECTAMINE，用1μg的Str-AP1-CAT使Lela细胞转染。用单独的AGN 193109(10-9-10-7M)、单独的1，25-二羟基维生素D3(10-12-10-7M)或在10-8M的AGN 193109存在下的1，25-二羟基维生素D3(10-12-10-7M)处理转染的细胞。
这些过程的结果表明AGN 193109加强1，25-二羟基维生素D3抑制TPA诱导的AP-1活性的能力。当以10-9-10-7M的浓度范围单独使用时，AGN 193109无可检测到的抗AP-1活性。在图13中所示的结果显示1，25-二羟基维生素D3只有在10-8-10-7M的浓度范围内才阻遏TPA刺激的活性。分析在10-8M AGN 193109存在下，1，25-二羟基维生素D3介导对TPA刺激的CAT活性的阻遏作用表明抗AP-1活性在10-10-10-9M的1，25-二羟基维生素D3下为可检测到的，并且与单独用1，25-二羟基维生素D3治疗相比，在10-8-10-7M剂量下活性增加。该AGN 193109依赖性调节1，25-二羟基维生素D3介导的抗AP-1活性与其中NCP对RARs的螯合作用使得该NCP不能用于与其它核受体家族成员相互作用的模型一致。因而，使该受体对于1，25-二羟基维生素D3治疗更敏感。
以下RAR介导反式激活和抗AP-1活性的机理可能不同。该结论基于我们的观察即高剂量的AGN 193109完全抑制反式激活而基本不抑制抗AP-1活性。因而，希望获得其它的证据以便支持作为由AGN193109治疗介导的RAR*形成的模型。为此，我们研究是否AGN193109可以加强RAR特异性兴奋剂AGN 191183在体外反式激活测试中的活性。
实施例16介绍用于证明193109加强RAR特异性兴奋剂AGN191183活性的方法。该过程的结果显示在特定情况下，AGN 193109提高RAR特异性视黄醛衍生物的效力并提供AGN 193109促进RAR*形成的强有力的证据。
              实施例16
   通过共同给予AGN 193109加强视黄醛衍生物的效力
使用Felgner等人[Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7413(1987)]所述的阳离子质脂体介导的转染方法转染Hela细胞。将5×104细胞平面接种在12孔的多孔接种板上并在加入10％FBS的DMEM中生长。使用LIOFECTAMINE试剂(2μg/孔，Life Technologies，Inc.)，用含有插入报告质粒ΔMTV-Luc[Heyman et al.in Cell 68：397(1992)]中的两个复制TREpal应答元件5’-TCAGGTCATGACCTGA-3’(SEQ ID NO：5)的0.7μg的报告质粒MTV-TREp-Luc和0.1μg的RAR-γ表达质粒pRShRAR-γ(Ishikawa et al.Mol.Endocrinol.4：837(1990))在不含血清培养基中使细胞共转染。转染后6小时，供给细胞终浓度为10％的含有活性炭提取的FBS的生长培养基。转染后18小时，用单独溶媒(乙醇)或以终浓度为10-11-10-8M的AGN 193109的乙醇溶液处理细胞。6小时后，加入乙醇中的AGN 191183到终浓度为0、10-10或10-9M。用AGN 191183处理后18小时收获细胞并如上所述，测定荧光素酶活性。
初步实验表明10-9 M的AGN 193109在抑制对于10-9M的AGN191183在Hela细胞中的应答相对无效。这与10-9M的AGN 193109抑制在CV-1细胞中的10-8M ATRA(图2)形成对照。
在图14中所示的结果支持AGN 193109刺激RAR*形成的预测。与AGN 193109的拮抗剂和负性激素活性的鉴定一致，用AGN 193109处理导致两相性的剂量应答曲线。AGN 193109的最低剂量(10-11-10-10M)导致超过单独AGN 191183的对荧光素酶活性的刺激。该作用提示RAR*s由AGN 193109所产生。令人好奇的是，该结果从AGN 193109的单独治疗中也可见，提示RAR*’s可以对内源性配体产生应答。AGN 191183为合成的视黄醛衍生物兴奋剂，与ATRA类似，通过RARs激活转录。AGN 191183代替实施例7中的ATRA将给出定量的类似结果(即AGN 193109将拮抗10nM AGN 191183的作用)。实施例16说明：尽管AGN 193109可以作为RAR兴奋剂的拮抗剂发挥作用，剂量给药条件可以容易地识别，其中AGN 193109共同给药加强了由RAR兴奋剂介导的激活作用。注意到用于实施例16中化合物的剂量基本低于在实施例7所述方法中使用的剂量是重要的。我们认为AGN193109治疗可以导致RAR异质性RARs对于RAR*s。表观异质性(即加强的能力)似乎在对于AP-1阻遏的反式激活中具有不同的窗口。所述曲线为双相的原因为随着AGN 193109量的增加，可以用于与所述兴奋剂结合的RAR成比例地降低。这对于AP-1阻遏情况似乎不是这样，我们仍然推测这种差异必然反映通过相同受体物种反式激活和AP-1阻遏的两种不同的机理。
临床结果已经证实一些视黄醛衍生物用于抑制恶化前和恶化的颈损害部分的生长。用于支持该结论的实例性研究已由Graham等人在West J.Med.145：192(1986)，由Lippman等人在J.Natl.Cancer Inst.84：241(1992)和由Weiner等人在Invest.New Drugs 4：241(1986)上发表。
类似的结论得到用于培养细胞以使不同的视黄醛衍生物的抗增生作用定量的体外研究结果的支持。更准确地说，Agarwal等人在Cancer Res.51：3982(1991)中使用ECE16-1细胞系于颈发育不良的早期阶段的模型并证明视黄酸可以抑制表皮生长因子(EGF)依赖性细胞增生。
实施例17介绍用于证明AGN 193109可以拮抗AGN 191183视黄醛衍生物兴奋剂的活性(它可以抑制ECE16-1细胞系的增生)的方法。
                    实施例17
AGN 193109拮抗视黄醛衍生物在ECE16-1细胞中的抗增生作用
在含有DMEM：F12(3∶1)、非必需氨基酸、5％FBS、5μg/ml转铁蛋白、2nM的3，3’，5-三碘甲状腺氨酸(甲状腺激素或“T3”)、0.1nM的霍乱毒素、2nM的L-谷氨酰胺、1.8×10-4M的腺嘌呤和10ng/ml EGF的全培养基中，以密度为1×104细胞/cm2接种ECE16-1细胞。使细胞附在接种平面上过夜，然后转移到含有DMEM：F12(3：1)、2mM L-谷氨酰胺、非必需氨基酸、0.1％牛血清白蛋白、1.8×10-4M的腺嘌呤、5μg/ml转铁蛋白、2nM的T3、50μg/ml抗坏血酸、100μg/ml链霉素、100单位/ml的青霉素和50μg/ml庆大霉素的限定的培养基中。补充10ng/ml EGF到限定的培养基(DM)中。EGF处理的细胞接受10nM的AGN 191183视黄醛衍生物兴奋剂结合0、0.1、1.0、10、100或1000nM AGN 193109，或者单独1000nM的AGN193109。处理3天后，如Hembree等人[Cancer Res.54：3160(1994)]所述收获细胞并用COULTER计数器测细胞数目。
图15中所示结果证明作为对EGF的应答但不在单独的限定培养基中ECE16-1细胞增生。这证实了由Andreatta-van Leyen等人[J.Cell.Physio.160：265(1994)]和由Hembress等人[Cancer Res.54：3160(1994)]所公开的发现结果。加入10nM AGN 191183和0 nM的AGN 193109完全抑制EGF介导的增生。因而，AGN 191183为有效的抗增生视黄醛衍生物。增加AGN 193109浓度由0nM-10nM拮抗AGN 191183介导的生长抑制达约50％。10倍摩尔过量的AGN 193109完全逆转AGN 191183的抗增生作用。用1000nM 193109单独处理细胞对于EGF介导的增生增加没有作用。这些结果证明AGN 193109拮抗视黄醛衍生物的抗增生作用，然而当用于处理代表颈上皮的细胞(它对视黄醛衍生物例如AGN 191183的生长抑制敏感)时，其本身基本上没有抗增生的作用。引人注意的是，没有证据表明使用ECE16-1模式系统，AGN193109加强AGN 191183兴奋剂的抗增生作用。
与ECE16-1细胞系所代表的模式系统相比，有其它实施例，其中与颈发育不良有关的细胞增生不能被视黄醛衍生物兴奋剂所抑制。例如，Agarwal等人[Cancer Res.54：2108(1994)]介绍CaSki细胞作为颈肿瘤模型的用途，它们对于视黄醛衍生物治疗无应答。如下所述，除了抑制细胞增生外，视黄醛衍生物治疗对于CaSki细胞的生长速率基本没有影响。以下实施例强调AGN 193109负性激素对于该细胞系增生速率的作用。其结果出人预料地证明AGN 193109可以抑制颈肿瘤细胞(它们对于视黄醛衍生物兴奋剂的抗增生作用无应答)的增生。
实施例18介绍用于证明AGN 193109对于其它视黄醛衍生物例如AGN 191183的抗增生作用无应答的颈肿瘤细胞系生长的抑制作用的方法。AGN 193109在无加入的视黄醛衍生物存在下明显地显示抗增生的活性。
                   实施例18
AGN 193109抑制来自CaSki颈癌细胞系的增生速率
我们检验了EGF以10-6M浓度单独或与AGN 191183视黄醛衍生物兴奋剂和/或AGN 193109负性激素结合对于CaSki细胞增生的作用。如上所述涉及ECE16-1细胞的研究的方法进行细胞增生测试。将EGF加入所述视黄醛衍生物处理培养物中，以便产生终浓度20ng/ml。在存在或不存在10-6M的AGF 193109的情况下，用AGN191183(10-10-10-6M)处理细胞总共3天。如合适，每天用新的培养基和两种视黄醛衍生物中的每一种替换所述培养基。如上所述，用COULTOER计数器测定细胞数量。
图16的所示结果表明CaSki细胞对于视黄醛衍生物兴奋剂的作用基本不应和AGN 193109显示在无加入的视黄醛衍生物存在下抗增生活性。在所述培养基中EGF的存在刺激CaSki细胞生长。该结论是基于代表无AGN 191183的斜线条和代表单独限定的生长培养基(“DM”)的空心条的比较。AGN 191183处理对于CaSki肿瘤细胞系没有抗增生的作用。我们忽视与视黄醛衍生物兴奋剂有关的细胞增生速率中任何微小的增加，因为在所述视黄醛衍生物浓度上1万倍的增加与在增生速率上只大约增加20％相关联。从而，AGN 191183兴奋剂对于CaSki细胞的增生速率基本没有作用。
在图16中所示结果也表明AGN 193109抑制CaSki颈表皮细胞系的增生。该结论基于作为“0”AGN 191183黑色条和“0”AGN191183斜线条的测定结果的比较。从而，AGN 193109当用于处理由视黄醛衍生物兴奋剂例如AGN 191183抑制不生长的颈肿瘤细胞时，能够刺激无加入的视黄醛衍生物存在下的生物应答。
我们的发现即AGN 193109负性激素能够抑制细胞增生与其中未与配体结合的RAR介导的为增生所需要的基因表达的模型一致。尽管RAR兴奋剂例如AGN 191183基本对于细胞增生没有作用或略微有促进作用，AGN 193109具有抗增生作用。所述AGN 193109负性激素可能与RARs结合，从而促进NCP结合和使得RARs采用非活性构象。根据我们的模型，它阻遏受未与配体结合的RARs正性调节的基因活性。所述AGN 193109下型调节未与配体结合的RARs的活性的能力可能产生于其促进RARs与NCPs结合的能力。
本领域的普通技术人员将理解某些视黄醛衍生物兴奋剂用于控制视网膜脱离后细胞生长的不需要的结果。在视网膜脱离后，视网膜色素上皮细胞(RPE)间变、增生和迁移到视网膜下空间中。该过程对于针对视网膜再附着的外科手术的成功具有不利的影响。Campochiaro等人[Invest.Opthal&Vis.Sci.32：65(1991)]已经证明RAR兴奋剂例如ATRA显示对于初级的人RPE培养物的生长的抗增生作用。视黄醛衍生物兴奋剂也已经显示降低视网膜再附着手术后视网膜脱离的机会[Fekrat et al.Opthamology 102：412(1994)]。如下列实施例中所公开的内容，我们分析了AGN 193109负性激素抑制在初级人RPE培养物中生长的能力。
实施例19介绍了用于证明AGN 193109加强在人视网膜色素上皮细胞的初级培养物中的视黄醛衍生物拮抗剂的抗增生作用。
                       实施例19
         AGN 193109加强ATRA的抗增生活性
根据Campochiaro等人[Invest.Opthal&Vis.Sci.32：65(1991)]中所述方法确立人视网膜色素上皮细胞(RPE)的初级培养物。将5×104细胞平面接种到在24孔多孔接种板的16-mm孔的含有5％FBS的DMEM(Gibco)中。细胞模拟用单独的乙醇溶媒、乙醇中的ATRA(10-10-10-6M)、乙醇中的AGN 193109(10-10-10-6M)或ATRA(10-10-10-6M)和10-6M的AGN 193109处理。给细胞提供含有合适浓度的这些化合物的新的培养基，每两天一次，总共处理5天。通过用胰蛋白酶温和消化自所述接种板上转移细胞，用电子细胞计数器记录细胞数量。
在图17中所示的结果显示AGN 193109令人注目地加强ATRA对于RPE细胞的抗增生活性。用ATRA处理初级RPE细胞导致在RPE细胞增生方面剂量依赖性降低，与对照培养物相比在10-6M ATRA下降低约40％。在所述过程中任何检测浓度下，AGN 193109处理基本不改变RPE细胞的生长速度。出乎意料的是，ATRA(10-11-10-6M)和10-6M的AGN 193109的联合使用具有比单独的ATRA更强的抗增生活性。从而，AGN 193109共处理加强ATRA的抗增生作用。更准确地说，在所述图中所示的结果表明只使用10-10M ATRA结合10-7MAGN 193109可以获得10-8M ATRA的抗增生作用。从而，AGN193109负性激素可有利地提高ATRA的抗增生活性约100倍。
在独立的实验中，比较ATRA(10-11-10-6M)与ATRA和10-6M的AGN 193109的抗增生作用再次表明在AGN 193109在存在下，初级RPE细胞对于ATRA的敏感性明显增加。在该系统中，AGN 193109当单独适用时，既不作为视黄醛衍生物拮抗剂发挥作用，也不显示抗增生作用。然而，共同给予AGN 193109加强所述视黄醛衍生物兴奋剂的抗增生作用。
使用上述测定RPE细胞增生的条件和技术，检验AGN 193109在初级RPE培养物中加强13-顺式视黄酸(13-顺式RA)的抗增生作用。引人注目的是，13-顺式RA在临床上是重要的化合物。更具体地说，13-顺式RA结合干扰素2α[Lippman et al.J.Natl.Cancer Inst.84：241(1992)；Moore et al.Seminars in Hematology 31：31(1994)]用于治疗几种疾病，包括痤疮[Peck et al.N.Engl.J.Med.300：329(1977)；Jones et al.Br.J.Dermatol.108：333(1980)]和皮肤和子宫颈鳞状细胞癌。
在图18中所示结果显示13-顺式RA(10-12-10-6M)和ATRA(10-12-10-6M)均可以有效地抑制RPE细胞生长。引人注目的是，13-顺式异构体当与ATRA比较在该测试中效力约低两个数量级。与使用AGN193109和ATRA(上述)共同给药获得的结果类似，共同给予AGN193109(10-8或10-6M)及13-顺式RA(10-12-10-6M)在RPE细胞增生的调节表达中显著地增加13-顺式RA的效力。与单独用13-顺式RA处理相比，共同给予AGN 193109提高了13-顺式RA的效力。从而，AGN193109加强13-顺式RA的抗增生活性。
其次，我们检验了AGN 193109加强初级RPE细胞培养物中其它核受体激素的活性的能力。地塞米松(合成糖皮质激素受体兴奋剂)为一类因其有效的抗炎和免疫抑制性质临床上已经使用的化合物的一个成员。甲状腺激素(T3；3，3’，5’-三碘代甲状腺氨酸)为主要用于在治疗甲状腺机能减退的激素替代疗法中的天然甲状腺激素受体兴奋剂。用于这些实验中的方法与上述用于使用ATRA和13-顺式RA过程中所述方法一致。
这些方法的结果显示共同给予AGN 193109和所述核受体兴奋剂加强所述核受体兴奋剂的抗增生活性。更准确地说，在图19中所示结果显示用地塞米松(10-11-10-6M)或ATRA(10-12-10-6M)单一药物处理RPE细胞基本不能够抑制RPE细胞的增生。然而，用地塞米松(10-11-10-6M)和10-8或10-6M的AGN 193109处理RPE细胞阻遏RPE细胞增生到大约为用ATRA处理所引起的抑制的程度。类似地，图20中所示结果显示AGN 193109加强甲状腺激素的抗增生活性。与使用地塞米松所得结果类似，RPE细胞的增生对于使用甲状腺激素(10-11-10-6M)单独药物处理为不应的。然而，使用甲状腺激素(10-11-10-6M)和AGN193109(10-8或10-6M)共同处理RPE细胞，以甲状腺激素依赖性方式抑制RPE细胞的增生。我们得出结论：AGN 193109使得初级RPE培养物对于这些核受体兴奋剂的抗增生作用敏感。AGN 193109介导这些作用的机理可能涉及调节NCP/RAR的相互作用。
此外，我们检验了对于视黄醛衍生物兴奋剂敏感的其它实验系统中AGN 193109对于标记基因表达的作用。已知MRP8和stromelysin基因在各种生物系统中受到视黄醛衍生物兴奋剂的抑制作用。例如，Wilkinson等人[J.Cell Sci.91：221(1988)]和Madsen等人[J.Invest.Dermatol.99：299(1992)]已经公开在牛皮癣中MRP8基因的表达被提高。相反，在人的牛皮癣皮肤(Nagpal et al.，submitted 1995)、在人的角化细胞培养物[Chandraratna et al.J.Invest.Dermatol.102：625(1994)]和在培养的人的新生包皮角化细胞[Thacher et al.J.Invest.Dermatol.104：594(1995)]中视黄醛衍生物兴奋剂AGN 190168阻遏MRP8基因的表达。Nagpal等人[J.Biol.Chem.270：923(1995)]已经公开了在培养的人的新生包皮角化细胞中，视黄醛衍生物兴奋剂例如AGN 190168阻遏stromelysin mRNA的水平。我们分析了在用AGN 191183兴奋剂或AGN 193109处理培养的人的新生包皮角化细胞后，这些基因调节的表达。
实施例20介绍用于显示AGN 193109抑制在培养的角化细胞中的MRP-8的表达。
                    实施例20
     AGN 193109抑制在角化细胞中的MRP-8的表达
根据Nagpal等人[J.Biol.Chem.270：923(1995)]所述方法将初期的包皮角化细胞分离并在购自Clonetics的角化细胞生长培养基(KGM)中培养。用AGN 191183(10-7M)或AGN 193109(10-6M)处理3天后，按照标准方法，自处理和对照角化细胞中分离总的细胞RNA。使用作为甘油醛磷酸盐脱氢酶(GAPDH)看家基因或MRP-8特异的引物将其mRNA逆转录成为cDNA，它然后在扩增记录中作为模板。所述GAPDH引物具有以下序列：5’-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3’(SEQ ID NO：6)和5’-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC-3’(SEQ ID NO：7)。所述MRP-8引物具有的序列为：5’-ACGCGTCCGGAAGACCTGGT-3’(SEQ IDNO：8)和5’-ATTCTGCAGGTACATGTCCA-3’(SEQ ID NO：9)。从12个循环开始到21个循环结束的每一个循环PCR扩增后，转移来自MRP-8扩增反应的等份试样(10μl)。类似地，从15个循环开始到24个循环结束的每一个PCR循环后，转移GAPDH扩增反应的等份试样。将样品在2％琼脂糖凝胶中进行电泳并通过溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶嗡染色检测所分离的扩增产物。所述扩增产物的染色强度作为对于给定的引物系列特异性的起始mRNA的定量测定。
该过程的结果显示AGN 191183和AGN 193109独立地抑制MRP-8在角化细胞中的表达。所述染色GAPDH扩增产物的强度在代表自对照物、AGN 191183就AGN 193109处理的角化细胞中分离的起始物质的凝胶的流道中基本为相等的。代表GAPDH扩增产物的弱带为在相应在18个循环的PCR扩增后转移的样品的流道中首先可检测到的。在凝胶的不同流道中等量染色强度表明等量的起始物质用于所有样品中。因此，在代表MRP-8扩增产物的染色带的强度中的差异表示在不同的起始样品中MRP-8 mRNA表达中的差异。如同所预料的，与未处理的对照相比，在AGN 191183(10-7M)处理的培养基中使MRP-8扩增信号被抑制。如通过染色扩增产物的较低强度所判断的，AGN 193109(10-6M)处理培养的角化细胞也阻遏MRP8的表达。
如下列实施例中所述，AGN 193109也抑制在角化细胞中第二标记基因的表达。Nagpal等人[J.Biol.Chem.270：923(1995)]公开了stromelysin mRNA表达在培养的人的新生包皮角化细胞中受RAR特异性兴奋剂的下行调节。Nicholson等人[EMBO J.9：4443(1990)]公开AP-1启动子元件在stromelysin-1基因的视黄醛衍生物依赖性负性调节中起着重要的作用。从而，确定AGN 193109是否可以改变该基因的表达是重要的。
实施例21介绍用于证明AGN 193109在无外源性加入的视黄醛衍生物兴奋剂存在的情况下抑制stromelysin-1基因的表达。
                  实施例21
AGN 193109抑制在培养的角化细胞中的stromelysin-1的表达
用RAR兴奋剂AGN 191183(10-7M)或AGN 193109(10-6M)将初期包皮角化细胞模式处理或处理24小时。由模式处理和视黄醛衍生物处理的角化细胞制备的总的RNA反式转录并完全按照Nagpal等人[J.Biol.Chem.270：923(1995)]所述方法，使用β-肌动蛋白或stromelysin-1寡引物使所形成的cDNAPCR扩增。从PCR扩增的18个循环开始的每3个循环后，自所述PCR扩增反应转移样品(10μl)。将该样品在2％琼脂糖凝胶中进行电泳并在溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓染色后进行检测。
这些过程的结果表明AGN 193109在没有外源性加入的视黄醛衍生物兴奋剂的情况下抑制stromelysin基因表达。更准确地说，代表β-肌动蛋白扩增产物的溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓染色带在PCR的18个循环后的琼脂糖凝胶中是容易检测的。尽管所有带强度随着所述扩增作用循环的增加而增加，代表AGN 191183处理细胞的样品中染色带强度略有降低。这表明稍降低量的RNA必定已经存在于相应用AGN 191183处理的细胞的起始样品中。该结果也表明stromelysin-1 mRNA在PCR扩增的33个循环开始的模式处理的角化细胞中是可检测的。如所期待的，如通过与来自模式处理样品的样品相比的较弱的带的强度所判断的，AGN 191183(10-7M)处理后，stromelysin-1 mRNA的表达受到抑制。当使常态化到β-肌动蛋白扩增产物的强度并与在MRP-8表达测定中所获得的结果一致时，角化细胞的AGN 193109(10-6M)处理导致下行调节stromelysin-1 mRNA的水平。实际上，由AGN 193109处理刺激的下行调节与用RAR兴奋剂AGN191183处理角化细胞引起的下行调节无区别。
正如在此所公开的，AGN 193109可以具有调节共同给予的甾体超家族兴奋剂活性的三种可能作用中的任何一种。首先，AGN 193109可以没有作用。其次，AGN 193109可以拮抗所述兴奋剂的作用，从而导致所述兴奋剂活性的降低。最后，AGN 193109可以加强所述兴奋剂的活性，从而导致由所述兴奋剂产生的测定的效果的刺激作用。
具有可以被AGN 193109所调节的活性的化合物包括视黄醛衍生物受体兴奋剂和与甾体受体超家族的其它成员结合的兴奋剂。后一类型的兴奋剂包括维生素D受体兴奋剂、糖皮质激素受体兴奋剂和甲状腺激素受体兴奋剂。具有目前未知配体的过氧化物酶增生剂-激活受体、雌激素受体和孤儿受体也可以被AGN 193109加强。其中所述甾体超家族兴奋剂为RAR兴奋剂的情况下，AGN 193109可以拮抗或加强该兴奋剂的活性。其中与AGN 193109结合使用的兴奋剂为可以与除了RAR外的核受体结合的化合物的情况下，共同给予AGN 193109将没有作用或对该兴奋剂系统变得敏感，以至使该兴奋剂的活性得到加强。
用于检测在具体系统中AGN 193109将具有三种可能活性中的哪一种的一般化实例性方法如下。本说明书介绍AGN 193109与甾体受体超家族兴奋剂共同给药的每种可能的结果。用于评价AGN 193109调节核受体兴奋剂活性的能力的生物学系统包括(但不限于)：已建立组织培养细胞系、病毒转化细胞系、体外-体内初级培养细胞和利用活体的体内研究。在这类系统中，AGN 193109生物作用的测定可以包括测定各种生物学端点(endpoint)的任何一个。这些端点包括：细胞增生分析、程序化细胞死亡分析(apoptosis)、通过基因表达测试的细胞差异状态分析、细胞在裸鼠中形成肿瘤能力的分析和短暂和稳定的引种报告基因构成物后基因表达的分析。
为了说明，指定为mRNA“X”的mRNA种在自器官“Z”分离的初级培养的“Y”细胞中由基因“X”表达。在标准的培养条件下，其中保留几个“Y”细胞遗传标记，包括基因“X”的表达，加入视黄醛衍生物兴奋剂导致“X”mRNA富余性的降低。通过分离细胞mRNA和通过聚合酶链反应、核糖核酸酶保护或RNA印迹方法例如Northern分析测定XmRNA富余性水平可以评价基因X的表达的分析。在分离器官Z后，在合适的生长培养基中培养初级Y细胞。然后，将该初级培养物接种到用于放大细胞群的组织培养接种板中。该步骤有助于将所述细胞分离成4个样品组，以便可以使用各种剂量的视黄醛衍生物兴奋剂和AGN 193109。第一组为对照组，只接受溶媒。第二组以足以提供最终浓度为10-11-10-6M的量接受RAR兴奋剂、视黄酸(在乙醇中给予)。最低剂量可以根据所述系统的敏感性由经验确定。该确定方法在本领域内普通技术人员所知的一般实验范围内。第三组将以处理第二组细胞所用的相同剂量接受所述核受体兴奋剂和接受常量的AGN 193109。用于处理第三组细胞的AGN 193109的剂量将由经验确定，但应该接近于AGN 193109对于RAR亚型的亲合力常数(Kd)(即至少10-8M)。第四组接受最低剂量的AGN 193109，包括用于在第三组中兴奋剂共同给药。作为该剂量制度的改变将用AGN193109代替上述实施例中所述的视黄醛衍生物兴奋剂，具体在第二组中，并用常量的视黄醛衍生物兴奋剂代替AGN 193109，具体在第三和第四组中。在合适的孵育期后，以适于检测作为兴奋剂活性的指示器测定的生物学端点的方式收获细胞。
例如，分析AGN 193109对于基因表达的视黄酸依赖性调节的作用包括在自根据上述四种方案中每一种处理的细胞收获的mRNA储备中，比较mRNA种X的富余性。来自所述对照细胞的RNA将用作测定XmRNA的基线表达并代表相应于不阻遏的条件。将该水平与用视黄酸处理的细胞衍生的mRNA的储备中测定的水平相比较可以测定该兴奋剂对于基因表达的作用。然后，可以将定量水平的产生于视黄酸处理的特异性mRNAs表达与来自用单独的AGN 193109或与视黄酸结合的AGN 193109平行处理细胞的mRNA富余性相比较。该一般化的实例介绍了共同给予AGN 193109对于由视黄醛衍生物兴奋剂阻遏的基因表达作用的分析的同时，该实例另外也介绍了共同给予AGN193109对于由视黄醛衍生物兴奋剂所诱导的基因的作用的分析。用于确定是否AGN 193109将作为兴奋剂、作为负性激素发挥作用或在特定系统中无作用的重要特征包括定量地比较存在和不存在AGN193109情况下所述作用的大小。
其中AGN 193109加强共同给予的兴奋剂的活性的实例为与视黄酸共同给予AGN 193109产生相对单独用视黄酸处理的细胞所测水平的被进一步阻遏的XmRNA表达的水平的情况。更准确地说，比较在Y轴上的生物作用(即对XmRNA富余性的阻遏作用)对于X轴上的兴奋剂的剂量(对数尺度)的剂量应答曲线，能够比较存在和不存在AGN193109共同给药的情况下，兴奋剂介导对XmRNA富余性的阻遏作用。通过在所述剂量应答曲线中向左位移而表明AGN 193109使对于所述兴奋剂的生物应答敏感化，从而加强所述兴奋剂活性的能力。更准确地说，在存在AGN 193109的情况下，将需要较少的兴奋剂以便获得与单独使用所述兴奋剂所获得的相同的生物学作用。
共同给予兴奋剂的AGN 193109介导的拮抗作用的实例为其中与视黄酸共同给予AGN 193109产生与单独用视黄酸处理的细胞中所测水平相比被阻遏较低的X mRNA表达的水平的情况。比较在存在和不存在AGN 193109情况下，XmRNA阻遏对于兴奋剂剂量的log值的剂量应答曲线表明在所述剂量应答曲线中向右位移。更准确地说，在存在AGN 193109的情况下，需要更多的兴奋剂以便获得与单独使用所述兴奋剂所获得的相同的生物学作用。
其中AGN 193109介导拮抗作用或加强作用的上述实例介绍AGN193109与视黄醛衍生物兴奋剂共同给药的实验结果。然而，如果与AGN 193109共同给予的所述兴奋剂为能够与除了RAR之外的甾体受体超家族成员结合并激活，则不是拮抗该兴奋剂，AGN 193109可能对于所述兴奋剂的活性没有作用。如果AGN 193109与这类兴奋剂共同处理产生与单独使用兴奋剂处理细胞所测水平相同的mRNA表达的水平，则AGN 193109通过促进RAR：NCP结合影响NCPs的有效性的能力在该系统中不显示。这是AGN 193109对于共同给予的兴奋剂没有作用的实例。拮抗作用实例
在实施例7中所述方法中例举了用于测定AGN193109与视黄醛衍生物兴奋剂共同给药作用的一般化的实例中所介绍的方法。使用乙醇(对照，组1)、最终浓度为10-9-10-6M的AGN 193109(组2)、与10-8M的视黄酸共同给药的终浓度为10-9-10-6M的AGN 193109(组3)或视黄酸(10-8M，组4)处理与三种视黄酸受体之一共转染的CV-1细胞和所述视黄醛衍生物兴奋剂诱导的MTV-TREp-Luc受体构成物。将组1的荧光素酶活性与组4的荧光素酶活性相比能够测定在无加入的AGN193109存在下测定视黄醛衍生物兴奋剂诱导的荧光素酶报告基因的表达。将在组3细胞中荧光素酶报告基因表达与在组4细胞中测定的结果相比较表明AGN 193109在该系统中作为视黄醛衍生物兴奋剂的抑制剂发挥作用。拮抗作用的实例
用于测定AGN193109与视黄醛衍生物兴奋剂共同给药作用的一般化的实例中所介绍的方法在实施例17中类似地用于测定AGN193109在ECE-16-1转化的颈上皮细胞中作为视黄醛衍生物兴奋剂介导的对EGF-刺激的细胞增生阻遏作用的拮抗剂的功能。在该过程中，ECE-16-1细胞的处理包括单独用EGF处理对照样品(组1)、用EGF和AGN 193109的组合物以终浓度为10-6M(组2)处理样品、用终浓度为10-10-10-6M EGF和AGN 193109的组合物与浓度为10-8M的单剂量的视黄醛衍生物兴奋剂AGN 191183共同给药(组3)处理样品和用浓度为10-8M的EGF和AGN 191183组合物(组4)处理样品。在处理三天后，测定细胞增生速率。测定由EGF已经刺激增生的细胞是可能的，因为包括其它对照处理，其中将细胞置于不含有EGF的限定培养基中。将组1中细胞的数目与组4中细胞的数目比较能够测定RAR兴奋剂AGN191183阻遏EGF-刺激的ECE-16-1细胞的增生。比较组3与组4表明AGN 193109拮抗该系统中RAR兴奋剂的活性。增强作用实例
用于测定AGN193109与视黄醛衍生物兴奋剂共同给药作用的一般化的实例中所介绍的方法也用于实施例14中，以便确定AGN193109加强在用1，25-二羟基维生素D3诱导的MTV-VDRE-Luc报告基因转染的Hela细胞中核受体兴奋剂的活性。转染细胞的处理包括单独溶媒(对照，组1)、终浓度为10-10-10-7M的1，25-二羟基维生素D3(组2)、终浓度为10-10-10-7M的1，25-二羟基维生素D3与终浓度为10-8或10-7M的AGN 193109共同给药(组3)和以终浓度为10-8或10-7M的AGN 193109的单一药物处理(组4)。将组1(对照)细胞中所测荧光素酶活性与组2细胞荧光素酶活性比较能够确定1，25-二羟基维生素D3刺激荧光素酶活性为剂量依赖性的。比较在组4(AGN 193109单独给药处理)细胞中测定的荧光素酶活性与在组3(共同给予AGN 193109)细胞中测定的荧光素酶活性，类似地能够在给定浓度的AGN 193109的存在下测定剂量依赖性1，25-二羟基维生素D3刺激的荧光素酶活性。在该情况下，零值代表在单独用AGN 193109(组4)处理的细胞中荧光素酶活性。该剂量制度考虑比较1，25-二羟基维生素D3三种剂量应答曲线。比较无AGN 193109情况下1，25-二羟基维生素D3的剂量应答曲线与代表共同给予AGN 193109(10-8或10-7M)的曲线的结果证明如通过在半数最大应答中向左位移所证实的加强所述兴奋剂的活性。增强作用的实例
在用于测定AGN 193109与视黄醛衍生物兴奋剂共同给药的作用的一般化的实例中所述方法进一步用于在实施例19中测定AGN193109加强在人视网膜色素上皮细胞的初级培养物中RAR兴奋剂的抗增生活性。细胞的处理包括：单独的乙醇溶媒(组1)、以终浓度为10-10-10-6M的视黄酸(组2)、以终浓度为10-10-10-6M的视黄酸共同给予10-6M AGN 193109(组3)和以终浓度为10-10-10-6M单独的AGN193109(组4)。比较使用组1和组2细胞获得的测定结果考虑确定通过视黄酸的剂量依赖性抑制这些细胞的增生。类似地，比较使用组3细胞获得的结果与组1所获结果考虑确定在共同给予AGN 193109的情况下，通过视黄酸的剂量依赖性抑制这些细胞的增生。组4证明AGN193109当作为单独处理药物时，基本上没有改变这些细胞增生速率的能力。比较在组2和组3中产生的视黄酸介导细胞增生的阻遏作用的剂量应答曲线为AGN 193109使初级RPE细胞对于所述RAR兴奋剂的抗增生作用敏感，从而加强RAR兴奋剂活性的结论提供基础。
如上所述，Agarwal等人[Cancer Res.54：2108(1994)]认为与HPV永生化ECE-16-1细胞生长不同，CaSki细胞的生长不受用视黄醛衍生物兴奋剂处理的抑制。如同在此所公开的内容，我们出乎意外地发现在不存在视黄醛衍生物兴奋剂的情况下，CaSki细胞的生长受到AGN193109的抑制。以下实施例解释AGN 193109如何用于抑制体内CaSki细胞瘤的生长。
                     实施例22
   在给予AGN 193109后抑制CaSki细胞瘤在裸鼠中的生长
将1×106 CaSki细胞注射到一组裸鼠的每一只中。使用对于本领域内技术人员所熟知的技术评价肿瘤的形成。注射后，将小鼠随机分成对照组和试验组。所述对照组接受空白药。试验组给予AGN193109。给予空白药的动物接受胃内插管给予玉米油。在治疗期间，试验组的动物每天接受20μmol/kg玉米油中的AGN 193109。使用有刻度的测径器测定以立方毫升为单位的肿瘤体积。以肿瘤体积作为时间的函数作图。通过在研究期间肿瘤的大小和数目来判断，接受AGN193109的小鼠与对照组小鼠的肿瘤相比显示其肿瘤在生长速率上明显较低。该结果提供体内的证明即AGN 193109抑制对包括给予视黄醛衍生物兴奋剂的治疗具有耐药性的晚期颈癌的生长。
如上所述，CaSki细胞为颈肿瘤的模型，它们对于视黄醛衍生物兴奋剂治疗不应答。然而，我们公开在不用视黄醛衍生物兴奋剂治疗的情况下，用AGN 193109抑制CaSki细胞的生长。AGN 193109抑制CaSki细胞增生的能力提示AGN 193109可以用于治疗对于视黄醛衍生物兴奋剂治疗不敏感的颈癌。下列实施例介绍一种能用于评价AGN 193109在治疗颈癌方面的治疗效果的方法。
                实施例23
评价在患有颈癌的患者中AGN 193109的治疗效果
首先鉴定具有晚期颈癌的患者。根据本领域内普通技术人员所熟知的方法进行颈组织活检。根据标准技术将来自扩散肿瘤的细胞在组织培养基中繁殖，以便提供足以分成三个样品组的细胞数目。为此使用Agarwal等人[Cancer Res.54：2108(1994)]所述的培养条件。第一组作为对照组并接受单独的溶媒(乙醇)。第二组用浓度为10-10-10-6M的RAR兴奋剂视黄酸处理。第三组用剂量范围在10-10-10-6M的AGN193109处理。每日为细胞提供新的生长培养基并提供对于每个样品组为适当的上述视黄醛衍生物。三天后，使用电子细胞计数器记录细胞个数。比较对照培养物中细胞的数目与在视黄酸处理培养物中细胞的数目的结果表明RAR兴奋剂基本不抑制培养的颈癌细胞的生长速度。相反，用AGN 193109处理的细胞显示当与对照组中的细胞计数相比时，在细胞数目上显示剂量依赖性降低。其中AGN 193109处理抑制培养的颈癌细胞增生的结果显示AGN 193109是用于治疗具有转移的颈癌患者的有用的治疗剂。
在目的是证明AGN 193109在所述疾病中的有益的治疗作用的随机临床研究中，招募已经经过外科手术除去主要的肿瘤的颈癌患者。将患者分成两组。第一组为对照组而第二组用AGN 193109治疗。将AGN 193109与药学上可接受的赋形剂混合产生适于全身给药的组合物，所用技术为本领域内的技术人员所熟知的。所述对照组给予空白制剂试验组给予含有AGN 193109负性激素的所述制剂。以最大耐受剂量给药于患者每隔一天给药，持续三个月到一年。通过测定一定时间后的无疾病存活使所述研究的结果定量。接受AGN 193109的各患者显示在无疾病存活上的显著地增加，包括显示其转移疾病完全缓解的一些不成比例的患者。该结果显示AGN 193109具有体内治疗对视黄醛衍生物兴奋剂例如视黄酸的抗增生作用不应答的颈癌的用途。
如上所述，AGN 193109加强在人视网膜色素上皮细胞的初级培养物中RAR兴奋剂的抗增生活性。因此，合理的期待在体内共同给予AGN 193109和RAR兴奋剂增加该兴奋剂的治疗指数，因为为获得相同的治疗终点将需要较少量的RAR兴奋剂。此外，已经证明AGN193109使得人视网膜色素上皮细胞的初级培养物对于糖皮质激素和甲状腺激素受体兴奋剂的抗增生作用敏感。下列PVR兔模型将用于两种独立的研究中，以便证明通过共同给予AGN 193109和RAR兴奋剂(13-顺式视黄酸)或分别给予甲状腺激素受体兴奋剂增加治疗指数。引人注意的是由Sen等人[Arch.Opthalmol.106：1291(1988)]提出的兔视网膜重新脱离模型已经用于证明在体外抑制初级RPE细胞增生的视黄醛衍生物兴奋剂也降低体内视网膜脱离的次数[Araia et al.Invest.Opthalmol.34：522(1993)]。从而，对于它们作为预防视网膜脱离的药物而言，在体外和体内视黄醛衍生物的兴奋剂的活性之间的联系已经建立。下列实施例解释AGN 193109如何可以用于针对预防视网膜脱离的治疗用途中。
                      实施例24
AGN 193109在治疗增生性玻璃体视网膜病(PVR)中增加甾体超 家族受体兴奋剂的治疗性的用途
在第一个研究中，根据Sen等人[Arch.Opthalmol.106：1291(1988)]所述的方法将人RPE细胞注射入兔眼的玻璃体腔。玻璃体腔内注射后，将兔分为五组：第一组(对照)通过玻璃体内注射单独接受溶媒。第二组通过玻璃体内注射接受作为单独药物治疗的视黄酸(100μg)。第三组通过玻璃体内注射接受作为单独药物治疗的AGN 193109(100μg)。第四组通过玻璃体内注射接受以组2给药量的1/10剂量的RAR兴奋剂(视黄酸)(10μg)。第五组通过玻璃体内注射接受AGN193109(100μg)和视黄酸(10μg)的组合物。在玻璃体内注射人RPE细胞后一天动物接受单独玻璃体内注射适当的治疗药物。通过间接检眼镜检查法在第7天、第14天和第28天检查兔子并就牵引性视网膜脱离的次数和严重性评分。注射100μg视黄酸组中的兔子显示与对照组兔子或单独接受AGN 193109或视黄酸(10μg)的兔子相比显著地降低视网膜脱离的次数和严重性。共同给予AGN 193109和视黄酸(10μg)组中的兔子与对照组、AGN 193109或视黄酸(10μg)组中的兔子相比显示显著地降低视网膜脱离的次数和严重性。这些结果证明AGN193109改善PVR体内模型中RAR兴奋剂视黄酸的治疗指数。
在第二个研究中，首先提供将人RPE细胞注射入兔眼的玻璃体腔中的兔子，然后分成四个组。第一组(对照)通过玻璃体内注射单独接受溶媒。第二组通过玻璃体内注射接受作为单独药物治疗的甲状腺激素(100μg)。第三组通过玻璃体内注射给予作为单独药物治疗的AGN193109(100μg)。第四组给予AGN 193109(100μg)和甲状腺激素(100μg)的组合物。通过间接检眼镜检查法在第7天、第14天和第28天检查兔子并就牵引性视网膜脱离的次数和严重性评分。比较所述四个组中视网膜脱离的次数和严重性的结果显示用AGN 193109或甲状腺激素的单独药物治疗当与对照组兔子相比不抑制视网膜脱离。相反，给予AGN 193109和甲状腺激素组合物的组的兔子显示明显降低视网膜脱离的次数和严重性。该结果证明AGN 193109改善PVR体内模型中甲状腺激素的治疗指数。
以下实施例介绍AGN 193109如何用于提高RAR兴奋剂用于治疗视网膜重新再附着外科手术后患者的治疗指数。
                    实施例25
      增加RAR兴奋剂13-顺式视黄酸治疗指数
首先鉴定具有由PVR引起的视网膜脱离的一些成年自愿者。每个人均经过使用本领域内标准技术进行的视网膜脱离的外科修复手术。然后，将患者分成五组。对照组由经过视网膜脱离外科修复且没有接受任何视黄醛类化合物的患者所组成。第二组在手术后每天两次口服接受40mg 13-顺式视黄酸达四周。第三组在手术后每日两次口服接受40mg AGN 103109达四周。第四组在手术后每天两次口服接受4mg13-顺式视黄酸达四周。在手术后每天两次口服接受40mg AGN 103109结合4mg的13-顺式视黄酸达四周。基本按照Fekrat等人[Ophthalmology 102：412(1995)]所述进行治疗方案和评价药物效力。
使用为本领域内普通技术人员所熟知的检眼镜检查技术监测在9个月的时间内在所有五个组中术后患者视网膜重复脱离的次数和严重性。接受40mg口服13-顺式视黄酸的患者当与对照组患者、每天两次接受4mg的13-顺式视黄酸的患者或每日两次接受40mg AGN 193109的患者相比时显示明显地降低视网膜重复脱离的次数。检验在手术后每天两次联合接受口服40mg AGN 103109和口服4mg的13-顺式视黄酸达四周患者组的结果显示在该患者组中的治疗结果等同或好于术后每天两次接受口服40mg的13-顺式视黄酸达四周的患者的治疗效果。该结果证明AGN 193109负性激素通过降低PVR患者中视网膜重复脱离的次数和严重性改善RAR兴奋剂的治疗指数。用于鉴定核受体负性激素的一般化检测
以上我们已经证明AGN 193109可以作为能够阻遏RAR核受体的基础转录活性的负性激素发挥作用。其次，我们已经介绍了使用由ERE-tk-Luc荧光素酶报告质粒和ER-RXR-α及RAR-γ-VP-16受体表达质粒共转染的CV-1细胞，以便为简单拮抗剂的RAR配体与那些具有负性激素活性的配体区别开来的检测方法。
我们已经得出结论：RAR负性激素通过促进提高RAR和NCPs之间的相互作用介导阻遏RAR介导的转录活性。此外，我们已经证明AGN 193109可以以与甾体超家族的核受体的成员之间相互分享NCPs一致的方式加强其它核受体兴奋剂的作用。如此，可以指定并筛选配体以便鉴定在这些非RAR核受体上具有负性激素活性的化合物。
我们的基于使用由ERE-tk-Luc荧光素酶报告质粒和ER-RXR-α及RAR-γ-VP-16受体表达质粒共转染的CV-1细胞的RAR负性激素筛选的方法一般可以被采用，以至将RAR-γ-VP-16质粒的RAR-γ部分转化为过氧化物酶增生剂激活受体(PPAR)、维生素D受体(VDR)、甲状腺激素受体(T3R)或任何其它能够与RXR异质二聚的甾体超家族核受体。与这些质粒共转染的CV-1细胞可以表达高基础水平的荧光素酶活性。能够结合取代RAR-γ部分的受体的配体结合结构域的配体通过测定其阻遏荧光素酶活性的能力可以容易地被筛选负性激素活性。
对于不与RXR异质二聚的的甾体超家族核受体(例如糖皮质激素和雌激素受体)而言，使用GR-VP-16或ER-VP-16受体和由融合异质启动子元件和荧光素酶或其它报告基因的适宜的糖皮质激素或雌激素应答元件组成的荧光素酶报告质粒可以取得最终结果。一般化的负性激素筛选测试方法的基本特征为包括至少用于筛选反向兴奋剂的特定核受体的配体结合结构域和用于将所述核受体配体结构域集中于报告基因的启动子的方法。这可以通过使用受体的天然DNA结合位点或可选通过构成具有异质DNA结合结构域的嵌合受体及相应使用在DNA调节元件控制下的报告基因(它可以被所述异质DNA结合结构域识别)而被达到。在优选实施方案中，表达可用于筛选反向兴奋剂的核受体的质粒可以表达作为含有组合激活结构域例如HSV VP-16激活结构域的融合蛋白的该核受体，以便提供容许的高基础活性。该高基础活性有效地增加测试的灵敏度，从而使得能够分析在没有加入的核受体兴奋剂的情况下阻遏基础转录活性的核受体配体。
下列实施例介绍可以用于筛选在甲状腺激素受体上具有负性激素活性的化合物的一个方法。
                        实施例26
         鉴定甲状腺激素受体负性激素的方法
用荧光素酶报告质粒ERE-tk-Luc和质粒ER-RXR-α及T3R-VP-16共转染CV-1细胞。T3R-VP-16与RAR-γ-VP-16相同，除了RAR-γ-VP-16受体的RAR-γ部分已经被甲状腺激素受体cDNA所代替。如此，T3R-VP-16表达在与甲状腺激素受体的N端结构中的HSV VP-16的激活结构域的融合蛋白。为此使用标准的转染和细胞培养方法。在转染后，漂洗细胞并提供含有已经用活性炭提取的10％牛胚胎血清的生长培养基。用单独的溶媒(乙醇)、甲状腺激素(10-9-10-10M)或化合物TR-1(10-9-10-6M)处理细胞。TR-1为合成的甲状腺激素受体配体，它显示在竞争性结合研究中对于所述甲状腺激素受体强的亲合力，然而它在使用甲状腺激素应答报告基因和甲状腺激素受体表达质粒的短暂共转染反式激活测试中不激活转染的甲状腺激素受体。此外，TR-1能够拮抗甲状腺激素介导的反式激活及本身为甲状腺受体拮抗剂。
分析来自用ERE-tk-Luc、ER-RXR-α及T3R-VP-16转染的CV-1细胞的荧光素酶活性显示在溶媒处理的细胞中高基础水平的荧光素酶报告基因活性。用甲状腺激素处理的细胞显示以剂量依赖性方式荧光素酶的活性略有增加。用TR-1处理的细胞显示在荧光素酶活性中剂量依赖性降低。这表明TR-1显示甲状腺受体反向兴奋剂活性，假定是由于增加了NCP与甲状腺激素受体的相互作用。
通过用RAR兴奋剂处理阻遏人初级视网膜色素上皮细胞的增生速度。该观察的治疗值已经显示在视网膜重新附着手术后的术后使用视黄醛衍生物治疗中。以上我们已经证明AGN 193109 RAR负性激素可以使初级RPE细胞对于在共同给药过程中的ATRA和13-顺式视黄酸的抗增生作用敏感。此外，AGN 193109也显示使RPE细胞对于其它核受体兴奋剂的抗增生作用敏感。更准确地说，AGN 193109使RPE细胞对于糖皮质激素兴奋剂、地塞米松和甲状腺激素兴奋剂3，3’，5-三碘代甲状腺氨酸(T3)的抗增生作用敏感。这些数据与我们的工作模型一致，其中AGN 193109调节在所述核受体家族成员之间分享的NCPs的有效性。用甲状腺激素受体反向兴奋剂TR-1处理RPE细胞将类似地改变分享NCPs的有效性，以至与非甲状腺受体兴奋剂例如RAR兴奋剂13-顺式视黄酸共同给药将导致与作为单独药物处理的13-顺式视黄酸相比增强对于RPE培养物的抗增生作用。
下列实施例介绍可用于使初级RPE细胞对于RAR兴奋剂的抗增生活性更敏感的一个方法。引人注意的是，该实施例进一步介绍通过与负性激素共同给药如何加强RAR兴奋剂的活性。
               实施例27
通过共同给予TR-1甲状腺激素反向兴奋剂使初级视网膜色素上 皮细胞对于RAR兴奋剂的抗增生作用敏感
根据标准方法得到人初级RPE细胞并培养。将该培养的细胞分成四个组并如下处理。组1接受单独的溶媒(乙醇)。组2用浓度在10-11-10-6M的13-顺式视黄酸处理。组3用浓度在10-11-10-1M的甲状腺激素反向兴奋剂TR-1处理。组4用浓度在10-11-10-6M的13-顺式视黄酸及TR-1共处理。在总的五天处理过程中每两天为细胞重新提供新的生长培养基并用合适的化合物重新处理。通过用电子细胞计数器测定培养物中的细胞数目使在所述试验过程中的增生速率定量。
TR-1处理细胞(组3)显示基本与对照组(组1)细胞相同的细胞增生的速率并且这种反向兴奋剂对于所述培养物测定的生长速度没有影响。用13-顺式视黄酸(组2)处理的细胞显示在细胞数目上的剂量依赖性降低。比较在组4细胞(共同给予13-顺式RA和TR-1)的细胞增生中的剂量依赖性降低与在组3中所获得结果证明如同通过组4相对组2细胞，所述RAR兴奋剂的剂量应答曲线向左位移所确定的，共同给予TR-1甲状腺激素受体反向兴奋剂使RPE培养物对于13-顺式视黄酸的抗增生作用敏感。

Claims (44)

1.具有下式的化合物：
其中X为S、O、NR’，其中R’为H或1-6个碳原子的烷基；
R2为氢、1-6个碳原子的低级烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6个碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6个碳原子的烷氧基或1-6个碳原子的烷硫基；
R3为氢、1-6个碳原子的低级烷基或F；
m为0-3的整数；
o为0-3的整数；
Z为-C≡C-，
-N＝N-，
-N＝CR1-，其中R1为H或1-6个碳原子的烷基，
-CR1＝N-，
-(CR1＝CR1)n，-其中n’为0-5的整数，
-CO-NR1-，
-CS-NR1-，
-NR1-CO，
-NR1-CS，
-COO-，
-OCO-，
-CSO-，
-OCS-；
Y是苯基或萘基或选自吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的杂芳基，所述苯基和杂芳基可选被一个或两个R2基团取代，或
当Z为-(CR1＝CR1)n’-和n’为3、4或5时，则Y代表在该(CR1＝CR1)n’基团和B之间的直接价键；
A为(CH2)q其中q为0-5，具有3-6个碳原子的低级支链烷基，具有3-6个碳原子的环烷基、具有2-6个碳原子和1或2个双键的链烯基，具有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；
B为氢，COOH或其药学上可接受的盐，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低级烷基甲硅烷基，其中R7为烷基、环烷基或含有1-5个碳原子的链烯基，R8为1-10个碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10个碳原子，或5-10个碳原子的环烷基，或R8为苯基或低级烷基苯基，R9和R10独立为氢，1-10个碳原子的烷基，或5-10个碳原子的环烷基，或苯基或低级烷基苯基，R11为低级烷基、苯基或低级烷基苯基，R12为低级烷基，及R13为2-5个碳原子的二价烷基，和
R14为(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-杂芳基，其中所述杂芳基具有选自O、S和N的1-3个杂原子，r为0-5的整数，和
R15独立为H，F，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)，COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10个碳原子的烷基，具有1-10个碳原子的氟代烷基，具有1-10个碳原子和1-3个双键的链烯基，具有1-10个碳原子和1-3个三键的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基独立具有1-6个碳原子。
2.权利要求1的化合物，其中Y为苯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基。
3.权利要求1的化合物，其中Y为苯基。
4.权利要求3的化合物，其中所述苯环为1，4(对位)取代。
5.权利要求1的化合物，其中Y为萘基。
6.权利要求1的化合物，其中Y为吡啶基。
7.权利要求1的化合物，其中Y为噻吩基或呋喃基。
8.权利要求1的化合物，其中Z为-(CR1-CR1)n’-和n’为3、4或5及Y代表在该(CR1＝CR1)n’基团和B之间的直接价键。
9.权利要求1的化合物，其中R2为H、F或CF3。
10.权利要求1的化合物，其中R3为H或甲基。
11.权利要求1的化合物，其中R14为(R15)r-苯基。
12.权利要求1的化合物，其中R14为(R15)r-杂芳基。
13.权利要求12的化合物，其中R14为(R15)r-杂芳基，其中所述杂芳基为具有1或2个杂原子的5或6元环。
14.权利要求13的化合物，其中所述杂芳基选自2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和2-噻唑基。
15.权利要求1的化合物，其中R15基团为H、CF3、F、低级烷基、低级烷氧基、羟基或氯。
16.权利要求1的化合物，其中Z为-C≡C-。
17.权利要求1的化合物，其中Z为-N＝N-。
18.权利要求1的化合物，其中Z为-CO-NR1-。
19.权利要求1的化合物，其中Z为-CS-NR1-。
20.权利要求1的化合物，其中Z为-CS-NR1-。
21.权利要求1的化合物，其中Z为-COO-。
22.权利要求1的化合物，其中Z为-(CR1＝CR1)n’-和n’为1。
23.具有下式的化合物：
其中X为[C(R1)2]n其中R1为H或1-6个碳原子的烷基，及n为0-2之间的整数；
R2为氢、1-6个碳原子的低级烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6个碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6个碳原子的烷氧基或1-6个碳原子的烷硫基；
R3为氢、1-6个碳原子的低级烷基或F；
m为0-3的整数；
o为0-3的整数；
Z为-(CR1＝CR1)n’-其中n’为0或2-5的整数；
Y是苯基或萘基或选自吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的杂芳基，所述苯基和杂芳基可选被一个或两个R2基团取代，或
当Z为-(CR1＝CR1)n’-和n’为3、4或5时，则Y代表在该(CR1＝CR1)n’基团和B之间的直接价键；
A为(CH2)q其中q为0-5，具有3-6个碳原子的低级支链烷基，具有3-6个碳原子的环烷基、具有2-6个碳原子和1或2个双键的链烯基，具有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；
B为氢，COOH或其药学上可接受的盐，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低级烷基甲硅烷基，其中R7为烷基、环烷基或含有1-5个碳原子的链烯基，R8为1-10个碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10个碳原子，或5-10个碳原子的环烷基，或R8为苯基或低级烷基苯基，R9和R10独立为氢，1-10个碳原子的烷基，或5-10个碳原子的环烷基，或苯基或低级烷基苯基，R11为低级烷基、苯基或低级烷基苯基，R12为低级烷基，及R13为2-5个碳原子的二价烷基，和
R14为(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-杂芳基，其中所述杂芳基具有选自O、S和N的1-3个杂原子，r为0-5的整数，和
R15独立为H，F，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)，COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10个碳原子的烷基，具有1-10个碳原子的氟代烷基，具有1-10个碳原子和1-3个双键的链烯基，具有1-10个碳原子和1-3个三键的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基独立具有1-6个碳原子。
24.权利要求23的化合物，其中n’为3。
25.权利要求23的化合物，其中n’为0。
26.权利要求24的化合物，其中n为1。
27.权利要求26的化合物，其中A为(CH2)q其中q为O。
28.权利要求27的化合物，其中B为COOH或其药学上可接受的盐、COOR8或CONR9R10。
29.权利要求25的化合物，其中n为1。
30.权利要求29的化合物，其中Y为萘基。
31.权利要求30的化合物，其中所述萘基为2，6取代。
32.权利要求31的化合物，其中A为(CH2)q其中q为0。
33.权利要求32的化合物，其中B为COOH或其药学上可接受的盐、COOR8或CONR9R10。
34.权利要求1的化合物，其中X为S。
35.权利要求34的化合物，其中Z为-C≡C-。
36.权利要求35的化合物，其中Y为苯基。
37.权利要求36的化合物，其中R14为(R15)r-苯基。
38.权利要求37的化合物，其中R15为低级烷基。
39.权利要求38的化合物，其中A为(CH2)q其中q为0。
40.权利要求39的化合物，其中B为COOH、COOR8或其药学上可接受的盐。
41.权利要求40的化合物，其中m为0。
42.具有下式的化合物：
Figure C9619789600071
其中R15为1-6个碳原子的低级烷基和R8 *为H、1-8个碳原子的低级烷基或所述化合物的药学上可接受的盐。
43.权利要求42的化合物，其中R15为甲基。
44.权利要求43的化合物，其中R8 *为H或所述化合物的药学上可接受的盐。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107176945A (zh) * 2016-03-11 2017-09-19 中国科学院上海有机化学研究所 一种视黄酸类化合物、其制备方法、中间体及应用

Families Citing this family (120)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7655699B1 (en) 1992-04-22 2010-02-02 Eisai Inc. Compounds having selective activity for retinoid X receptors, and means for modulation of processes mediated by retinoid X receptors
GB9222253D0 (en) * 1992-10-23 1992-12-09 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9304920D0 (en) * 1993-03-10 1993-04-28 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9304919D0 (en) * 1993-03-10 1993-04-28 Celltech Ltd Chemical compounds
ATE260911T1 (de) * 1993-12-22 2004-03-15 Celltech R&D Ltd Trisubstituierte phenyl-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung als phosphodiesterase (typ iv) hemmstoffe
US6245774B1 (en) 1994-06-21 2001-06-12 Celltech Therapeutics Limited Tri-substituted phenyl or pyridine derivatives
US6942980B1 (en) * 1995-09-01 2005-09-13 Allergan, Inc. Methods of identifying compounds having nuclear receptor negative hormone and/or antagonist activities
US5958954A (en) * 1995-09-01 1999-09-28 Allergan Sales, Inc. Synthesis and use of retinoid compounds having negative hormone and/or antagonist activities
GB9523675D0 (en) * 1995-11-20 1996-01-24 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9526243D0 (en) * 1995-12-21 1996-02-21 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9526245D0 (en) * 1995-12-21 1996-02-21 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US5877207A (en) * 1996-03-11 1999-03-02 Allergan Sales, Inc. Synthesis and use of retinoid compounds having negative hormone and/or antagonist activities
HUP9902645A3 (en) * 1996-03-18 1999-12-28 Eisai Co Ltd Fused-ring carboxylic acid derivatives
GB9608435D0 (en) * 1996-04-24 1996-06-26 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US5773594A (en) 1996-06-21 1998-06-30 Allergan Alkyl or aryl substituted dihydronaphthalene derivatives having retinoid and/or retinoid antagonist-like biological activity
CA2258313A1 (en) * 1996-06-21 1997-12-24 Allergan Sales, Inc. Substituted tetrahydronaphthalene and dihydronaphthalene derivatives having retinoid and/or retinoid antagonist-like biological activity
US6555690B2 (en) * 1996-06-21 2003-04-29 Allergan, Inc. Alkyl or aryl substituted dihydronaphthalene derivatives having retinoid and/or retinoid antagonist-like biological activity
GB9619284D0 (en) * 1996-09-16 1996-10-30 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9622363D0 (en) * 1996-10-28 1997-01-08 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9625184D0 (en) * 1996-12-04 1997-01-22 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
JP2001507349A (ja) * 1996-12-23 2001-06-05 セルテック セラピューティックス リミテッド 縮合多環式２−アミノピリミジン誘導体、それらの製造およびたんぱく質チロシンキナーゼ抑制因子としてのそれらの使用
US5760276A (en) * 1997-03-06 1998-06-02 Allergan Aryl-and heteroarylcyclohexenyl substituted alkenes having retinoid agonist, antagonist or inverse agonist type biological activity
AU6955898A (en) * 1997-04-11 1998-11-11 Bristol-Myers Squibb Company Retinoid antagonists and uses thereof
KR20040031107A (ko) * 1997-11-12 2004-04-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 레티노이드 길항제를 이용한 제2형 ｔ-보조세포 중재면역질환의 치료
WO2000018885A1 (en) * 1998-09-29 2000-04-06 Gamida Cell Ltd. Methods of controlling proliferation and differentiation of stem and progenitor cells
US6048873A (en) * 1998-10-01 2000-04-11 Allergan Sales, Inc. Tetrahdroquinolin-2-one 6 or 7-yl, tetrahdroquinilin-2-thione 6 or 7-yl pentadienoic acid and related derivatives having retinoid-like biological activity
US6403638B1 (en) 1998-10-01 2002-06-11 Allergan Sales, Inc. 2,4-pentadienoic acid derivatives having selective activity for retinoid X (RXR) receptors
US6147224A (en) * 1998-10-01 2000-11-14 Allergan Sales, Inc. 2,4-pentadienoic acid derivatives having selective activity for retinoid X (RXR) receptors
CA2346687A1 (en) * 1998-10-08 2000-04-13 Allergan Sales, Inc. Use of rar antagonists or inverse agonists as male anit-fertility agents
US6521641B1 (en) * 1998-10-08 2003-02-18 Allergan, Inc. Male anti-fertility agents
EP1137940A4 (en) * 1998-10-23 2004-06-02 Glaxo Group Ltd METHOD FOR IDENTIFYING LIGANDS OF NUCLEAR RECEPTORS
US6326397B1 (en) 1998-11-10 2001-12-04 Hoffman-La Roche Inc. Retinoid antagonists and use thereof
US6054623A (en) * 1998-12-18 2000-04-25 Alliedsignal Inc. Hydroxythiol grignard reaction synthesis
TR200102587T2 (tr) * 1999-03-08 2002-03-21 Basilea Pharmaceutica Ag Retinoid antagonistleri ve bunlarìn kullanìmlarì.
AU4225500A (en) * 1999-04-14 2000-11-14 Allergan Sales, Inc. Methods and compositions for the treatment and prevention of lung disease
WO2000061233A2 (en) * 1999-04-14 2000-10-19 Allergan Sales, Inc. Methods and compositions for the treatment and prevention of lung disease involving a specific rar-gamma agonist
ATE365158T1 (de) 1999-04-28 2007-07-15 Inst Med Molecular Design Inc Pyrimidincarbonsäurederivate
DE60016404T2 (de) 1999-06-11 2005-10-27 Allergan, Inc., Irvine Organosiliciumvebindungen mit der fähigkeit zur modulation von im zellkern lokalisierten hormonrezeptoren
US6906057B1 (en) 1999-06-11 2005-06-14 Allergan, Inc. Methods for modulating FXR receptor activity
US6566372B1 (en) 1999-08-27 2003-05-20 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Bicyclic androgen and progesterone receptor modulator compounds and methods
US6667313B1 (en) 1999-08-27 2003-12-23 Ligand Pharmaceuticals Inc. 8-substituted-6-triflouromethyl-9-pyrido [3,2-G] quinoline compounds as androgen receptor modulators
WO2001016139A1 (en) 1999-08-27 2001-03-08 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Androgen receptor modulator compounds and methods
AU7586600A (en) * 1999-09-14 2001-04-17 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Rxr modulators with improved pharmacologic profile
US6313168B1 (en) * 1999-12-15 2001-11-06 Allergan Sales, Inc. Use of retinoid receptor antagonists in the treatment of cartilage and bone pathologies
US20030114482A1 (en) * 1999-12-15 2003-06-19 Maurizio Pacifici Use of retinoid receptor antagonists or agonists in the treatment of cartilage and bone pathologies
AU2001290816A1 (en) 2000-09-13 2002-03-26 Bristol-Myers Squibb Company Retinoic acid receptor antagonists as promoters of angiogenesis
US20030003517A1 (en) * 2001-03-22 2003-01-02 Klein Elliott S. Methods of detecting dissociated nuclear hormone receptor ligands
US20020193403A1 (en) * 2001-05-03 2002-12-19 Allergan Sales, Inc. Methods of treating hyperlipidemia
EP1465869B1 (en) 2001-12-21 2013-05-15 Exelixis Patent Company LLC Modulators of lxr
US7482366B2 (en) 2001-12-21 2009-01-27 X-Ceptor Therapeutics, Inc. Modulators of LXR
IL152904A0 (en) * 2002-01-24 2003-06-24 Gamida Cell Ltd Utilization of retinoid and vitamin d receptor antagonists for expansion of renewable stem cell populations
WO2003062404A1 (en) * 2002-01-25 2003-07-31 Gamida-Cell Ltd. Methods of expanding stem and progenitor cells and expanded cell populations obtained thereby
WO2004001376A2 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Sention, Inc. Apparatus for polynucleotide detection and quantitation
WO2004014388A1 (en) * 2002-08-13 2004-02-19 Warner-Lambert Company Llc 6,6-fused heteroaryl derivatives as matrix metalloproteinase inhibitors
US7105566B2 (en) * 2002-10-22 2006-09-12 Allergan, Inc. Methods of treatment during vascular procedures
FR2847255B1 (fr) * 2002-11-18 2006-11-17 Galderma Res & Dev Nouveaux ligands antagonistes des recepteurs rars, leur procede de preparation et leur utilisation en medecine humaine ainsi qu'en cosmetique
DE60312548T2 (de) * 2002-11-18 2007-12-13 Galderma Research & Development, S.N.C. Neue liganden, die antagonisten der rar-rezeptoren sind, herstellungsverfahren für diese liganden und verwendung dieser liganden in der humanmedizin und in der kosmetik
AU2004261301A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-10 Allergan, Inc. Methods of therapeutic treatment using amounts of retinoid components
US20050026950A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-03 Allergan, Inc. Methods of therapeutic treatment using retinoids to achieve consistent bioavailability
US20050026958A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-03 Allergan, Inc. Methods of therapeutic treatment using amounts of retinoid components
US20050026949A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-03 Allergan, Inc. Methods of therapeutic treatment using amounts of retinoids without regard to body weight
US20070224278A1 (en) * 2003-11-12 2007-09-27 Lyons Robert T Low immunogenicity corticosteroid compositions
US20050250737A1 (en) * 2003-11-12 2005-11-10 Allergan, Inc. Therapeutic ophthalmic compositions containing retinal friendly excipients and related methods
US20050101582A1 (en) * 2003-11-12 2005-05-12 Allergan, Inc. Compositions and methods for treating a posterior segment of an eye
US20060141049A1 (en) * 2003-11-12 2006-06-29 Allergan, Inc. Triamcinolone compositions for intravitreal administration to treat ocular conditions
DE602004019685D1 (de) * 2003-12-26 2009-04-09 Allergan Inc DISUBSTITUIERTE CHALCOGENOXIME MIT ANTAGONISTISCHER WIRKUNG AM RAR(Gamma)-RETINOIDREZEPTOR
AU2005209201B2 (en) 2004-01-20 2010-06-03 Allergan, Inc. Compositions for localized therapy of the eye, comprising preferably triamcinolone acetonide and hyaluronic acid
US20070059336A1 (en) * 2004-04-30 2007-03-15 Allergan, Inc. Anti-angiogenic sustained release intraocular implants and related methods
US9498457B2 (en) 2004-04-30 2016-11-22 Allergan, Inc. Hypotensive prostamide-containing biodegradable intraocular implants and related implants
US8673341B2 (en) 2004-04-30 2014-03-18 Allergan, Inc. Intraocular pressure reduction with intracameral bimatoprost implants
US7799336B2 (en) 2004-04-30 2010-09-21 Allergan, Inc. Hypotensive lipid-containing biodegradable intraocular implants and related methods
US20050244465A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Drug delivery systems and methods for treatment of an eye
US8591885B2 (en) * 2004-04-30 2013-11-26 Allergan, Inc. Carbonic anhydrase inhibitor sustained release intraocular drug delivery systems
BRPI0510485A (pt) 2004-04-30 2007-11-13 Allergan Inc implantes inibidores de tirosina cinase intravìtreos biodegradáveis
US8425929B2 (en) * 2004-04-30 2013-04-23 Allergan, Inc. Sustained release intraocular implants and methods for preventing retinal dysfunction
US8147865B2 (en) * 2004-04-30 2012-04-03 Allergan, Inc. Steroid-containing sustained release intraocular implants and related methods
US20050244471A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Estradiol derivative and estratopone containing sustained release intraocular implants and related methods
US20050244472A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Intraocular drug delivery systems containing excipients with reduced toxicity and related methods
US20050244463A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Sustained release intraocular implants and methods for treating ocular vasculopathies
US8119154B2 (en) 2004-04-30 2012-02-21 Allergan, Inc. Sustained release intraocular implants and related methods
US7993634B2 (en) 2004-04-30 2011-08-09 Allergan, Inc. Oil-in-oil emulsified polymeric implants containing a hypotensive lipid and related methods
US20050244461A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Controlled release drug delivery systems and methods for treatment of an eye
US20050244466A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Photodynamic therapy in conjunction with intraocular implants
US7771742B2 (en) 2004-04-30 2010-08-10 Allergan, Inc. Sustained release intraocular implants containing tyrosine kinase inhibitors and related methods
US20050244478A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Anti-excititoxic sustained release intraocular implants and related methods
US20050244458A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Sustained release intraocular implants and methods for treating ocular neuropathies
US8455656B2 (en) 2004-04-30 2013-06-04 Allergan, Inc. Kinase inhibitors
US20050244462A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Devices and methods for treating a mammalian eye
US8722097B2 (en) 2004-04-30 2014-05-13 Allergan, Inc. Oil-in-water method for making polymeric implants containing a hypotensive lipid
JP2008505978A (ja) * 2004-07-12 2008-02-28 アラーガン、インコーポレイテッド 眼病用組成物および眼病治療法
EP1621191A1 (en) * 2004-07-29 2006-02-01 Werner Bollag Treatment of inflammatory diseases by RXR Antagonists
EP1799812A4 (en) 2004-09-16 2009-09-09 Gamida Cell Ltd EX VIVO CULTIVATION METHODS OF STEM CELLS AND PRECURSOR BY CO-CULTURE WITH MESENCHYMAL CELLS
BRPI0616454A2 (pt) 2005-09-30 2011-06-21 Vitae Pharmaceuticals Inc métodos de tratamento de cáncer
US8846393B2 (en) 2005-11-29 2014-09-30 Gamida-Cell Ltd. Methods of improving stem cell homing and engraftment
ES2702128T3 (es) * 2006-05-16 2019-02-27 Io Therapeutics Llc Antagonista o agonista inverso de RAR para uso en el tratamiento de efectos secundarios de quimioterapia y/o terapia de radiación
US8969415B2 (en) 2006-12-01 2015-03-03 Allergan, Inc. Intraocular drug delivery systems
WO2008106177A2 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 University Of Kentucky Research Foundation Method for alleviating side effects of retinoic acid therapy and/or improving efficacy without interfering with efficacy
US7911053B2 (en) * 2007-04-19 2011-03-22 Marvell World Trade Ltd. Semiconductor packaging with internal wiring bus
US8082730B2 (en) * 2008-05-20 2011-12-27 Caterpillar Inc. Engine system having particulate reduction device and method
KR101041281B1 (ko) * 2009-05-18 2011-06-14 주식회사 니프코코리아 자동차의 에어벤트 다이얼
BR122017013201B1 (pt) 2009-11-09 2018-05-15 Allergan, Inc. Composição para a estimulação de crescimento capilar
WO2012167018A1 (en) 2011-06-03 2012-12-06 Allergan, Inc. Targeted delivery of retinoid compounds to the sebaceous glands
US20130190395A1 (en) 2011-12-13 2013-07-25 Dartmouth College Autoimmune disorder treatment using rxr agonists
BR112014020119A2 (pt) 2012-02-13 2020-10-27 Gamida-Cell Ltd cultura de células-tronco mesenquimais
US9567569B2 (en) 2012-07-23 2017-02-14 Gamida Cell Ltd. Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells
US9175266B2 (en) 2012-07-23 2015-11-03 Gamida Cell Ltd. Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity
US20140094512A1 (en) 2012-10-02 2014-04-03 Nikolas Gunkel Method of modulating the degree of adipose tissue deposited intramuscularly
CN109602691A (zh) 2013-02-15 2019-04-12 阿勒根公司 持续药物递送植入物
KR102489706B1 (ko) 2015-10-31 2023-01-17 아이오 테라퓨틱스, 인크. Rxr 아고니스트와 갑상선 호르몬의 조합을 사용한 신경계 질환의 치료
ES2898676T3 (es) 2015-11-25 2022-03-08 Io Therapeutics Inc Agonistas selectivos de rar-alfa resistentes a CYP26 en el tratamiento del cáncer
US10995052B2 (en) * 2016-02-03 2021-05-04 Galderma Research & Development Biaromatic propynyl compounds, pharmaceutical and cosmetic compositions containing same, and uses thereof
JP7169647B2 (ja) 2016-03-10 2022-11-11 アイオー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｒｘｒアゴニストおよび甲状腺ホルモンの組み合わせでの筋肉障害の治療
CA3016876C (en) 2016-03-10 2021-12-28 Io Therapeutics, Inc. Treatment of autoimmune diseases with combinations of rxr agonists and thyroid hormones
WO2017152725A1 (zh) * 2016-03-11 2017-09-14 中国科学院上海有机化学研究所 一种视黄酸类化合物、其制备方法、中间体及应用
EP3468600A4 (en) 2016-06-10 2019-11-13 IO Therapeutics, Inc. RETINOID COMPOUNDS AND RELECTIVE REXINOIDS OF THE RECEPTOR AND IMMUNE MODULATORS FOR IMMUNOTHERAPY OF CANCER
KR20200029544A (ko) 2017-07-13 2020-03-18 아이오 테라퓨틱스, 인크. 암 면역요법을 위해 면역 조절제와 조합된 면역조절 레티노이드 및 렉시노이드 화합물
AU2018326617B2 (en) 2017-08-31 2022-12-01 Io Therapeutics, Inc. Rar selective agonists in combination with immune modulators for cancer immunotherapy
AU2018335393A1 (en) 2017-09-20 2020-04-02 Io Therapeutics, Inc. Treatment of disease with esters of selective RXR agonists
US10966950B2 (en) 2019-06-11 2021-04-06 Io Therapeutics, Inc. Use of an RXR agonist in treating HER2+ cancers
US11896558B2 (en) 2021-12-07 2024-02-13 Io Therapeutics, Inc. Use of an RXR agonist and taxanes in treating Her2+ cancers

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0661259A1 (en) * 1994-01-03 1995-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Substituted (5,6)-dihydronaphthalenyl compounds having retinoid-like activity

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5217867A (en) * 1988-11-30 1993-06-08 The Salk Institute For Biological Studies Receptors: their identification, characterization, preparation and use
AU633045B2 (en) * 1988-12-23 1993-01-21 Salk Institute For Biological Studies, The Receptor transcription-repression activity compositions and methods
EP0478787B1 (en) * 1990-03-20 1994-12-21 Shionogi & Co., Ltd. Novel process for producing benzoic acid derivative
AU2579692A (en) * 1991-09-17 1993-04-27 Salk Institute For Biological Studies, The Receptor of the thyroid/steroid hormone receptor superfamily
EP0617020A1 (en) * 1992-04-02 1994-09-28 Shudo, Koichi, Prof. Dr. Carboxylic acid derivatives having retinoic acid-like activity
EP0983991B1 (en) * 1992-04-22 2003-12-17 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Compounds having selectivity for retinoid x receptors
KR0126300B1 (ko) * 1992-12-28 1997-12-26 나이토 하루오 레티노이드 수용체(rar)에 결합하는 헤테로고리 탄산유도체

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0661259A1 (en) * 1994-01-03 1995-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Substituted (5,6)-dihydronaphthalenyl compounds having retinoid-like activity

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107176945A (zh) * 2016-03-11 2017-09-19 中国科学院上海有机化学研究所 一种视黄酸类化合物、其制备方法、中间体及应用
CN107176945B (zh) * 2016-03-11 2021-06-08 中国科学院上海有机化学研究所 一种视黄酸类化合物、其制备方法、中间体及应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP2002504887A (ja) 2002-02-12
IL153306A0 (en) 2003-07-06
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WO1997009297A2 (en) 1997-03-13
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EP0931786A2 (en) 1999-07-28
ATE246669T1 (de) 2003-08-15
KR100447047B1 (ko) 2004-09-07
IL153307A0 (en) 2003-07-06
HUP9902337A2 (hu) 1999-10-28
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CZ62198A3 (cs) 1998-11-11
ES2205380T3 (es) 2004-05-01
AU713586B2 (en) 1999-12-02
WO1997009297A3 (en) 1997-08-28
CN1360890A (zh) 2002-07-31
HK1018771A1 (en) 2000-01-07
NZ500397A (en) 2001-06-29
EP0931786B1 (en) 2003-08-06
KR100447046B1 (ko) 2004-11-17
JP4295357B2 (ja) 2009-07-15
KR20040004463A (ko) 2004-01-13
IL153296A0 (en) 2003-07-06
CA2230672A1 (en) 1997-03-13
US5776699A (en) 1998-07-07
NO980880L (no) 1998-04-27
RU2203884C2 (ru) 2003-05-10
PL188705B1 (pl) 2005-03-31
ATE233726T1 (de) 2003-03-15
DE69629399D1 (de) 2003-09-11
ES2195014T3 (es) 2003-12-01
NZ319762A (en) 2000-01-28
IL123490A (en) 2010-05-17
IL153305A0 (en) 2003-07-06
NO980880D0 (no) 1998-02-27
DE69626528T2 (de) 2003-12-24

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