CN111436421A - 一种人类精子冷冻保存方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种人类精子冷冻保存方法，包括以下步骤：S1、将精液液化，得到液化精液；S2、将S1得到的液化精液洗涤，离心，重复上述操作2～4次，然后在培养箱中培养，得到精子样品；S3、将S2得到的精子样品与海藻糖溶液混匀，得到混合液；S4、将S3得到的混合液与添加剂混合均匀，接着在CO2培养箱中平衡，然后装入冷冻管中，浸入液氮中进行玻璃化冷冻保存。本发明通过在精子冷冻保存过程中加入海藻糖溶液和L‑还原型谷胱甘肽溶液，增强冷冻后精子的复苏率和前向运动百分率，降低氧DNA损伤，改善了冻后精液的质量。

Description

一种人类精子冷冻保存方法
技术领域
本发明属于精子保存技术领域，具体涉及一种精子冷冻保存方法。
背景技术
随着现代文明进步与社会工业化发展，环境污染愈加严重，精液异常增多，导致不育症的发病率已达到10％，成为常见疾病。精子冷冻保存技术一直是保持生育能力和辅助生殖的重要手段。尽管在这一领域已经取得了广泛的进展，但精子在冷冻保存后活力和DNA完整性都有所降低。人类精子低温损伤的机制与冷休克、渗透胁迫、细胞内成冰和氧化应激有关。低温保存过程中产生的过量活性氧(ROS)通过膜脂过氧化、蛋白巯基氧化等机制影响精子的活力和受精能力。氧化应激还可引起精子核基因组DNA断裂。氧化应激是由促氧化剂和抗氧化剂之间的不平衡引起的，在这种不平衡中，促氧化剂占优势。因此，如何降低冷冻对精子的损伤，是精子冷冻技术中难以突破的瓶颈。
研究表明，抗氧化剂槲皮素、维生素E、褪黑激素、还原性谷胱甘肽(GSH)等有助于改善小鼠慢速冷冻和快速冷冻后解冻后精子的活力，然而关于使用抗氧化剂通过玻璃化冷冻保存人类精子的信息有限，且这些抗氧化剂还没有被用于人类精子的冷冻保存技术中。因此，研究抗氧化剂在人类精子冷冻保存方法中应用来改善冷冻后精子的活性是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种人类精子冷冻保存方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种人类精子冷冻保存方法，包括以下步骤：
S1、将精液液化，得到液化精液；
S2、将S1得到的液化精液洗涤，离心，重复上述操作2～4次，然后在培养箱中培养，得到精子样品；
S3、将S2得到的精子样品与海藻糖溶液混匀，得到混合液；
所述S2得到的精子样品与海藻糖溶液的体积比为1:1；
S4、将S3得到的混合液与添加剂混合均匀，接着在培养箱中平衡，然后装入保存容器中，浸入液氮中进行玻璃化冷冻保存；所述S3得到的混合液与冷冻液的体积比为200:1；
所述添加剂由以下浓度的组分组成：
L-还原型谷胱甘肽15.365～122.92g/L、氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水。
优选的，步骤S1中，所述液化温度为25～37℃，液化时间为30～60min。
优选的，步骤S2中，所述S1得到的液化精液通过人输卵管液(Human TubalFluid，HTF)进行洗涤，且所述HTF液由以下浓度的组分组成：
氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水；
优选的，所述S1得到的液化精液与HTF液的体积比为1:2。
优选的，步骤S3中，所述海藻糖溶液的浓度为0.25～1.0mol/L。
优选的，步骤S2和S4中，所述培养箱为CO2培养箱。
优选的，步骤S4中，所述保存容器为冷冻麦管。
本发明与现有技术相比，其有益效果在于：
(1)本发明提供的精子冷冻保存方法可增强冷冻后精子的复苏率和前向运动百分率，降低氧DNA损伤，改善冻后精液质量；
(2)本发明提供的精子冷冻保存方法通过加入海藻糖溶液，将非渗透低温保护剂海藻糖这种天然糖，应用于精子冷冻保存，避免了渗透低温保护剂如甘油对人体精子的不利影响；
(3)本发明提供的精子冷冻保存方法通过加入添加剂，能够将抗氧化剂谷胱甘肽引入精子冷冻保存，中和了精子冷冻保存过程中产生的氧化应激反应；
(4)本发明通过对海藻糖溶液和添加剂中谷胱甘肽浓度的调控，对冻后精子的活性进行研究，研究结果表明，当海藻糖溶液和谷胱甘肽浓度分别为0.5mol/L和100mM时，冷冻后的精子具有最优的复苏率和前向运动百分率。
附图说明
图1为本发明实施例中的管中管系统的示意图。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。
下面各实施例中未注明具体条件的试验方法，均按照本领域的常规方法和条件进行，所用原料均为市售。
以下实施例中的HTF液由以下浓度的组分组成：
氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水。且HTF液通过以下方法制备得到：将各组分依次分别溶于超纯水中，人血清白蛋白最后加入，待完全溶解后定容，于超净台内0.22μm孔径滤膜过滤得到，pH维持在7.2～7.8，于-80℃超低温冰箱保存；
实施例1
一种人类精子冷冻保存方法，具体包括以下步骤：
S1、采用常规方法取得精液，直接收集在无菌取精杯内，然后将精液在25℃下液化，得到液化精液；
S2、将S1得到的液化精液与HTF液按照体积比1:2混合进行洗涤，然后在400g下离心10min，去除上部液体，重复上述操作2次，然后在CO2培养箱中培养，得到精子样品；
S3、将S2得到的精子样品与海藻糖溶液按照体积比1:1混匀，得到混合液，混合液中精子的最终浓度为15-20×106/mL；
其中海藻糖溶液的浓度为0.5mol/L；海藻糖溶液的具体制备方法为：称取海藻糖1.8917g，完全溶解于超纯水中，接着加超纯水使最终体积为10mL，混匀后于超净台内0.22μm孔径滤膜除菌过滤，无菌分装得到，然后在4℃或室温条件下避光保存；
S4、将S3得到的混合液与添加剂按照体积比为200:1混合均匀，接着在CO2培养箱中平衡10min，将50μL精子样本加载到管中管系统，如图1所示，管中管系统是由标准的0.25mL麦管(美国IMV技术目录#005565)和标准的0.5mL麦管(IMV Technologies,USA,catalog#005569)组成，具体加载方法为：将精子样本加载到标准的0.25mL麦管的中间部分，接着将装载有精子样本的0.25mL麦管放入标准的0.5mL吸管中，其插头端在同一侧，将0.5mL麦管的插头端热封后，用脉冲封口机将0.25ml和0.5mL麦管的开口端一起热封，然后直接水平浸入液氮(LN2，-196℃)中进行玻璃化冷冻保存；
所述添加剂具体由以下浓度的组分组成：L-还原型谷胱甘肽30.73g/L(100mM)、氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水；添加剂通过以下方法制备得到：将其他组分依次分别溶于超纯水中，接着加入人血清白蛋白，最后加入L-还原型谷胱甘肽，待完全溶解后定容，于超净台内0.22μm孔径滤膜过滤得到，于-20℃避光保存。
实施例2
实施例2提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于步骤S3中，海藻糖溶液的浓度为0.25mol/L。
实施例3
实施例3提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于步骤S3中，海藻糖溶液的浓度为1.0mol/L。
实施例4
实施例4提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于步骤S4中，添加剂中L-还原型谷胱甘肽的浓度为15.365g/L(50mM)。
实施例5
实施例5提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于步骤S4中，添加剂中L-还原型谷胱甘肽的浓度为61.46g/L(200mM)。
实施例6
实施例6提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于步骤S4中，添加剂中L-还原型谷胱甘肽的浓度为122.92g/L(400mM)。
对比例1
对比例1提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于步骤S2得到的精子样品不与海藻糖溶液混合，直接进行步骤S4操作。
对比例2
对比例2提供的人类精子冷冻保存方法与实施例1相同，区别仅在于添加剂中不含L-还原型谷胱甘肽。
一、下面以实施例1-3和对比例1为例，研究海藻糖溶液浓度对冷冻精子活性的影响。
选用21岁到35岁之间的男性健康志愿者在禁欲3-7天后的精液(排除体积<2ml、浓度<3.5×107/ml、运动进行性<50％、精子形态正常<30％的精液)作为样品，采用实施例1-3和对比例1提供的冷冻保存方法分别对精液进行冷冻保存，1周后，将冷冻保存的精子样本在37℃的水浴中融化2分钟，接着切断两端的热封，将精子悬液排出到1mL预热的HTF培养基中进行稀释，然后进行分析，分别观察比较其精子活力恢复率和前向运动能力恢复率，结果见下表1。
表1冷冻保存后精子活力恢复率、前向运动能力恢复率
精子活力恢复率(％) 前向运动能力恢复率(％)
实施例1 39.33±2.29 34.19±3.47
实施例2 23.9％±2.7％ 18.4％±6.6％
实施例3 20.1％±3.9％ 17.5％±6.5％
对比例1 3.8％±1.5％ 3.3％±1.5％
通过表1结果可知，与对比例1相比，实施例1-3提供的冷冻保存方法均显著提高了冷冻精子的总活力和渐进活力，这是由于海藻糖的加入对精子总活力和渐进活力均有显著的冷冻保护作用，且实施例1提供的冷冻保存方法获得的冷冻精子的活性最优，说明本发明提供的冷冻保存方法中加入的最佳海藻糖浓度为0.5mol/L。
二、下面以实施例1、实施例4-6和对比例2为例，研究添加剂中L-还原型谷胱甘肽的浓度对冷冻精子活性的影响。
选用21岁到35岁之间的男性健康志愿者在禁欲3-7天后的精液(排除体积<2ml、浓度<3.5×107/ml、运动进行性<50％、精子形态正常<30％的精液)作为样品，采用实施例1、实施例4-6和对比例2提供的冷冻保存方法分别对精液进行冷冻保存后，分别观察比较其精子活力恢复率和前向运动能力恢复率，结果见下表2。
表2精子活力、前向运动能力恢复率以及DNA损伤率
精子活力恢复率(％) 前向运动能力恢复率(％) DNA损伤率(％)
实施例1 39.33±2.29 34.19±3.47％ 5.65±0.37％
实施例4 29.6±8.3％ 24.2±7.6％ 7.15±0.71％
实施例5 27.4±6.8％ 25.1±6.3％ 8.96±1.89％
实施例6 26.5±8.2％ 25.7±7.3％ 7.92±0.59％
对比例2 24.4±2.9％ 21.5±2.6％ 11.30±0.42％
通过表2结果可知，与对比例2相比，实施例1、实施例4-6提供的冷冻保存方法均显著提高了冷冻精子的总活力和渐进活力，降低精子细胞核DNA的损伤，这是因为L-还原型谷胱甘肽的加入中和了精子冷冻保存过程中产生的氧化应激反应，且实施例1提供的冷冻保存方法获得的冷冻精子的活性最优，说明本发明提供的冷冻保存方法中所加入添加剂中L-还原型谷胱甘肽最佳的浓度为100mM。
综上所述，本发明实施例通过在精子冷冻保存过程中通过加入海藻糖溶液以及谷胱甘肽溶液，能够避免渗透保护剂对人体精子的损伤，而且还中和了冷冻保存过程中的氧化应激反应，因此，本发明提供的精子冷冻保存方法可增强冷冻后精子的复苏率和前向运动百分率，降低氧DNA损伤，改善冻后精液的质量。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选实施例及其效果，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (5)

1.一种人类精子冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将精液液化，得到液化精液；
S2、将S1得到的液化精液洗涤，离心，重复上述操作2～4次，然后在培养箱中培养，得到精子样品；
S3、将S2得到的精子样品与海藻糖溶液混匀，得到混合液；
所述S2得到的精子样品与海藻糖溶液的体积比为1:1，且所述海藻糖溶液的浓度为0.25～1.0mol/L；
S4、将S3得到的混合液与添加剂混合均匀，接着在培养箱中平衡，然后装入保存容器中，浸入液氮中进行玻璃化冷冻保存；所述S3得到的混合液与冷冻液的体积比为200:1；
所述添加剂由以下浓度的组分组成：
L-还原型谷胱甘肽15.365～122.92g/L、氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水。
2.根据权利要求1所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤S2中，所述S1得到的液化精液通过人输卵管液进行洗涤，且所述人输卵管液由以下浓度的组分组成：
氯化钠5.7154g/L、氯化钾0.3496g/L、硫酸镁0.0241g/L、磷酸二氢钾0.0504g/L、二水合氯化钙0.3000g/L、碳酸氢钠2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸钠0.0363g/L、乳酸钠3.9968g/L、硫酸庆大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量为超纯水。
3.根据权利要求2所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，所述S1得到的液化精液与人输卵管液的体积比为1:2。
4.根据权利要求1所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤S2和S4中，所述培养箱为CO2培养箱。
5.根据权利要求1所述的人类精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤S4中，所述保存容器为冷冻麦管。
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Citations (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3850995A (en) * 1995-11-09 1997-05-29 Medical Research Council Use of cyb medium for the transportation and storage of sperm
WO2001075172A1 (en) * 2000-03-31 2001-10-11 University Of Southern California Epigenetic sequences for esophageal adenocarcinoma
CN103805559A (zh) * 2014-01-02 2014-05-21 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种新型精子洗涤培养液及其制备方法
CN104164401A (zh) * 2014-08-12 2014-11-26 沈阳洁瑞生物技术有限公司 精子洗涤液及其制备方法
CN104195105A (zh) * 2014-08-19 2014-12-10 杭州安体科技有限公司 一种提高人精子活力的体外培养体系试剂盒及其使用方法
CN104365583A (zh) * 2014-11-07 2015-02-25 郜鸿生物科技（上海）有限公司 一种稀少精子冷冻保护剂及其应用
RU2576841C2 (ru) * 2014-07-21 2016-03-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследвательский радиологический центр" Министерства зравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИРЦ" Минздрава России) Состав для криоконсервации сперматозоидов
CN105746494A (zh) * 2016-04-21 2016-07-13 山西省人口计生委科学研究所 一种含有d-海藻糖的人类精子冷冻保护剂及其制备方法
CN106561633A (zh) * 2016-11-10 2017-04-19 金华职业技术学院 一种人类精子冷冻保存液及人类精子冷冻保存方法
CN107034180A (zh) * 2017-05-24 2017-08-11 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子洗涤液及其制备方法
CN107926930A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子冷冻液及其制备方法
CN107988149A (zh) * 2017-11-22 2018-05-04 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子活力液及其制备方法
CN108378022A (zh) * 2018-05-09 2018-08-10 中南大学 一种人类精子冷冻保护剂
CN108378019A (zh) * 2018-03-13 2018-08-10 洛阳轩智生物科技有限公司 一种人精原干细胞的冻存液
CN108651440A (zh) * 2018-04-18 2018-10-16 中南大学 一种人类精液超快速冷冻保存体系
EP3420817A1 (en) * 2006-06-12 2019-01-02 The Jackson Laboratory Sperm cryoprotective media
CN109337862A (zh) * 2018-11-23 2019-02-15 北京太东生物科技有限公司 一种精子洗涤液及其制备方法和应用
CN109329272A (zh) * 2018-11-23 2019-02-15 北京太东生物科技有限公司 一种精子冻存液及其制备方法和应用
CN109628380A (zh) * 2018-12-25 2019-04-16 深圳韦拓生物科技有限公司 一种人体外受精液及其制备方法
CN110604129A (zh) * 2019-10-28 2019-12-24 浙江大学 一种湖羊精液冷冻保存液及其用途
CN110724666A (zh) * 2019-10-29 2020-01-24 力妲康生命科学(上海)有限公司 一种精子清洗液及其制备方法和应用
CN111149795A (zh) * 2020-01-14 2020-05-15 成都艾伟孚生物科技有限公司 一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法
CN111183972A (zh) * 2020-01-14 2020-05-22 成都艾伟孚生物科技有限公司 一种组合物及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法

Patent Citations (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3850995A (en) * 1995-11-09 1997-05-29 Medical Research Council Use of cyb medium for the transportation and storage of sperm
WO2001075172A1 (en) * 2000-03-31 2001-10-11 University Of Southern California Epigenetic sequences for esophageal adenocarcinoma
EP3420817A1 (en) * 2006-06-12 2019-01-02 The Jackson Laboratory Sperm cryoprotective media
CN103805559A (zh) * 2014-01-02 2014-05-21 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种新型精子洗涤培养液及其制备方法
RU2576841C2 (ru) * 2014-07-21 2016-03-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследвательский радиологический центр" Министерства зравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИРЦ" Минздрава России) Состав для криоконсервации сперматозоидов
CN104164401A (zh) * 2014-08-12 2014-11-26 沈阳洁瑞生物技术有限公司 精子洗涤液及其制备方法
CN104195105A (zh) * 2014-08-19 2014-12-10 杭州安体科技有限公司 一种提高人精子活力的体外培养体系试剂盒及其使用方法
CN104365583A (zh) * 2014-11-07 2015-02-25 郜鸿生物科技（上海）有限公司 一种稀少精子冷冻保护剂及其应用
CN105746494A (zh) * 2016-04-21 2016-07-13 山西省人口计生委科学研究所 一种含有d-海藻糖的人类精子冷冻保护剂及其制备方法
CN106561633A (zh) * 2016-11-10 2017-04-19 金华职业技术学院 一种人类精子冷冻保存液及人类精子冷冻保存方法
CN107034180A (zh) * 2017-05-24 2017-08-11 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子洗涤液及其制备方法
CN107926930A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子冷冻液及其制备方法
CN107988149A (zh) * 2017-11-22 2018-05-04 瑞柏生物（中国）股份有限公司 一种精子活力液及其制备方法
CN108378019A (zh) * 2018-03-13 2018-08-10 洛阳轩智生物科技有限公司 一种人精原干细胞的冻存液
CN108651440A (zh) * 2018-04-18 2018-10-16 中南大学 一种人类精液超快速冷冻保存体系
CN108378022A (zh) * 2018-05-09 2018-08-10 中南大学 一种人类精子冷冻保护剂
CN109337862A (zh) * 2018-11-23 2019-02-15 北京太东生物科技有限公司 一种精子洗涤液及其制备方法和应用
CN109329272A (zh) * 2018-11-23 2019-02-15 北京太东生物科技有限公司 一种精子冻存液及其制备方法和应用
CN109628380A (zh) * 2018-12-25 2019-04-16 深圳韦拓生物科技有限公司 一种人体外受精液及其制备方法
CN110604129A (zh) * 2019-10-28 2019-12-24 浙江大学 一种湖羊精液冷冻保存液及其用途
CN110724666A (zh) * 2019-10-29 2020-01-24 力妲康生命科学(上海)有限公司 一种精子清洗液及其制备方法和应用
CN111149795A (zh) * 2020-01-14 2020-05-15 成都艾伟孚生物科技有限公司 一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法
CN111183972A (zh) * 2020-01-14 2020-05-22 成都艾伟孚生物科技有限公司 一种组合物及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EILISH T.DONNELLY等: "Glutathione and hypotaurinein vitro: effects on human sperm motility, DNA integrity and production of reactive oxygen species", 《MUTAGENESIS》 *
J.GADEA等: "Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation:Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders", 《CRYOBIOLOGY》 *
宋春英等: "海藻糖对冷冻后人类精子活力的影响", 《中国生育健康杂志》 *
张文举等: "GSH对体外保存精子品质和受精力影响的研究进展", 《中国兽医科学》 *
舒志全等: "海藻糖和蛋黄在人类精子冻干保存中的保护作用", 《中国生物医学工程学报》 *

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