CN110724666A - 一种精子清洗液及其制备方法和应用 - Google Patents

一种精子清洗液及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种精子清洗液，包括以下含量的组分：氯化钠5～8g/L、碳酸氢钠3～5g/L、缓冲剂3～8g/L、人血清白蛋白3～6g/L、葡萄糖2～5g/L、氯化钾1～3g/L、乳酸钙0.1～0.5g/L、磷酸二氢钾0.1～0.3g/L、丙酮酸钠0.01～0.05g/L、螯合剂0.02～0.06g/L、谷胱甘肽0.01～0.03g/L、甘油3～10ml/L和乙醇5～10ml/L。本发明还提供了该精子清洗液的制备方法和应用。本发明的精子清洗液可以有效的去除精子细胞上的二氧化硅杂质，并在清洗的过程中保证精子细胞的正常存活，为后续的受精过程做好准备。

Description

一种精子清洗液及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于细胞生物学技术领域，特别涉及一种精子清洗液及其制备方法和应用。
背景技术
精子清洗液用于清洗经过密度梯度分离后的精子细胞。精子的密度梯度分离过程可以有效去除淋巴细胞、上皮细胞、异常或未成熟精子、细胞碎片、细菌甚至是病毒。其具体原理是正常精子与畸形精子、不活动精子及精液中的其他细胞成分在运动能力、运动轨迹和浮力密度等方面出现差异，在密度梯度溶液柱中运行的能力也有差异，离心后，精液中的各种成分在密度梯度溶液柱中达到平衡，停留在各自的等浮力密度点上，从而达到分类正常精子的目的。具体的精子的密度梯度分离过程是在分离管中加入精子梯度分离液，以形成梯度层，以实现分离精子。精子梯度分离液是可用于过滤细胞的特殊液体。精子梯度分离液中具有分离剂，该分离剂采用硅烷包覆的二氧化硅颗粒。分离后得到的精子细胞上会附有少量二氧化硅杂质。因此，需要利用精子清洗液洗去精子细胞上的二氧化硅杂质，并在清洗的过程中，保证精子细胞的正常存活，为后续的受精过程准备。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种精子清洗液及其制备方法和应用，可以有效的去除精子细胞上的二氧化硅杂质，并在清洗的过程中保证精子细胞的正常存活，为后续的受精过程做好准备。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：一种精子清洗液，包括以下含量的组分：氯化钠5～8g/L、碳酸氢钠3～5g/L、缓冲剂3～8g/L、人血清白蛋白3～6g/L、葡萄糖2～5g/L、氯化钾1～3g/L、乳酸钙0.1～0.5g/L、磷酸二氢钾0.1～0.3g/L、丙酮酸钠0.01～0.05g/L、螯合剂0.02～0.06g/L、谷胱甘肽0.01～0.03g/L、甘油3～10ml/L和乙醇5～10ml/L。
优选的，所述缓冲剂为磷酸盐缓冲剂、HEPES缓冲剂、Tris-Hcl缓冲剂中的一种。
优选的，所述螯合剂为EDTA。
上述精子清洗液的pH为7.35～7.8，渗透压为285～340mOsmol/kg。
本发明提供了一种精子清洗液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取氯化钠、碳酸氢钠、缓冲剂、葡萄糖、氯化钾、乳酸钙、磷酸二氢钾、丙酮酸钠、螯合剂和谷胱甘肽，加水制成溶液；
(2)向步骤(1)制备的溶液中加入甘油和乙醇；
(3)加入人血清蛋白，然后加水定容。
上述步骤(3)定容后得到的溶液还需经过微米滤芯进行过滤。
本发明还提供了上述精子清洗液在清洗精子细胞中的应用。
具体的，该精子清洗液是用于清洗经过密度梯度分离得到的精子细胞。
本发明的有益效果是：
(1)精子清洗液中的氯化钠、碳酸氢钠、氯化钾、乳酸钙、磷酸二氢钾和丙酮酸钠可以为精子细胞提供适合且正确的离子水平，为精子细胞提供适合的生存环境，保证精子细胞的正常存活；
(2)精子清洗液中的葡萄糖、乳酸钙、丙酮酸钠和谷胱甘肽可以为精子细胞提供能量，以保证后续在受精时的正常顶体反应；
(3)精子清洗液中的螯合剂可以防止有效成分沉淀，提高有效成分的分散性；
(4)其中的缓冲剂可以对精子清洗液的pH进行调节，使得其pH维持在7.35～7.8；精子清洗液中的各组分相互配合，将精子清洗液的渗透压维持在285～340mOsmol/kg之间；
(5)其中的人血清蛋白可以作为赋形剂，起到赋形、充当分子载体和提高分子稳定性的作用，同时又具有缓冲作用，使精子不会产生粘连，保证精子可以正常运动；
(6)其中，乙醇的加入，可以在清洗精子细胞时，提高二氧化硅杂质的分散能力，使其可以高度分散于精子清洗液中，保证二氧化硅杂质的去除；甘油的加入，可以与乙醇共同作用，进一步提高二氧化硅杂质的分散能力，使二氧化硅杂质最大程度分散于精子清洗液中，提高清洗效果；而且，甘油又具有稳定细胞成分的作用。
具体实施方式
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例1
一种精子清洗液，包括以下含量的组分：氯化钠5g/L、碳酸氢钠4g/L、HEPES缓冲剂3g/L、人血清白蛋白5g/L、葡萄糖2g/L、氯化钾1g/L、乳酸钙0.5g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、丙酮酸钠0.05g/L、EDTA螯合剂0.02g/L、谷胱甘肽0.03g/L、甘油10ml/L和乙醇10ml/L。
上述精子清洗液的pH为7.5，渗透压为300mOsmol/kg。
上述精子清洗液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取5g氯化钠、4g碳酸氢钠、3g HEPES缓冲剂、2g葡萄糖、1g氯化钾、0.5g乳酸钙、0.3g磷酸二氢钾、0.05g丙酮酸钠、0.02gEDTA螯合剂和0.03g谷胱甘肽，加水制成溶液；
(2)向步骤(1)制备的溶液中加入10ml甘油和10ml乙醇；
(3)加入5g人血清蛋白，然后加水定容至1L。
上述步骤(3)定容后得到的溶液还需经过微米滤芯进行过滤。
本发明还提供了上述精子清洗液在清洗精子细胞中的应用。
具体的，该精子清洗液是用于清洗经过密度梯度分离得到的精子细胞；具体过程为：将经过密度梯度分离得到的精子细胞置于离心管中，然后加入适量的精子清洗液，混匀，离心，吸弃上部液体，该清洗过程可进行多次。
实施例2
一种精子清洗液，包括以下含量的组分：氯化钠6g/L、碳酸氢钠3g/L、HEPES缓冲剂8g/L、人血清白蛋白3g/L、葡萄糖3g/L、氯化钾2g/L、乳酸钙0.1g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、丙酮酸钠0.03g/L、EDTA螯合剂0.05g/L、谷胱甘肽0.01g/L、甘油5ml/L和乙醇8ml/L。
上述精子清洗液的pH为7.35，渗透压为298mOsmol/kg。
上述精子清洗液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取6g氯化钠、3g碳酸氢钠、8g HEPES缓冲剂、3g葡萄糖、2g氯化钾、0.1g乳酸钙、0.1g磷酸二氢钾、0.03g丙酮酸钠、0.05gEDTA螯合剂和0.01g谷胱甘肽，加水制成溶液；
(2)向步骤(1)制备的溶液中加入5ml甘油和8ml乙醇；
(3)加入3g人血清蛋白，然后加水定容至1L。
上述步骤(3)定容后得到的溶液还需经过微米滤芯进行过滤。
本发明还提供了上述精子清洗液在清洗精子细胞中的应用。
具体的，该精子清洗液是用于清洗经过密度梯度分离得到的精子细胞；具体过程为：将经过密度梯度分离得到的精子细胞置于离心管中，然后加入适量的精子清洗液，混匀，离心，吸弃上部液体，该清洗过程可进行多次。
实施例3
一种精子清洗液，包括以下含量的组分：氯化钠8g/L、碳酸氢钠5g/L、HEPES缓冲剂5g/L、人血清白蛋白6g/L、葡萄糖5g/L、氯化钾3g/L、乳酸钙0.3g/L、磷酸二氢钾0.2g/L、丙酮酸钠0.01g/L、EDTA螯合剂0.06g/L、谷胱甘肽0.02g/L、甘油3ml/L和乙醇5ml/L。
上述精子清洗液的pH为7.8，渗透压为300mOsmol/kg。
上述精子清洗液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取8g氯化钠、5g碳酸氢钠、5g HEPES缓冲剂、5g葡萄糖、3g氯化钾、0.3g乳酸钙、0.2g磷酸二氢钾、0.01g丙酮酸钠、0.06gEDTA螯合剂和0.02g谷胱甘肽，加水制成溶液；
(2)向步骤(1)制备的溶液中加入3ml甘油和5ml乙醇；
(3)加入6g人血清蛋白，然后加水定容至1L。
上述步骤(3)定容后得到的溶液还需经过微米滤芯进行过滤。
本发明还提供了上述精子清洗液在清洗精子细胞中的应用。
具体的，该精子清洗液是用于清洗经过密度梯度分离得到的精子细胞；具体过程为：将经过密度梯度分离得到的精子细胞置于离心管中，然后加入适量的精子清洗液，混匀，离心，吸弃上部液体，该清洗过程可进行多次。
利用实施例1-3制备的精子清洗液分别对精子细胞进行清洗后，不仅可以有效的去除二氧化硅杂质，而且可以保证精子细胞的正常存活。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (8)

1.一种精子清洗液，其特征在于，包括以下含量的组分：氯化钠5～8g/L、碳酸氢钠3～5g/L、缓冲剂3～8g/L、人血清白蛋白3～6g/L、葡萄糖2～5g/L、氯化钾1～3g/L、乳酸钙0.1～0.5g/L、磷酸二氢钾0.1～0.3g/L、丙酮酸钠0.01～0.05g/L、螯合剂0.02～0.06g/L、谷胱甘肽0.01～0.03g/L、甘油3～10ml/L和乙醇5～10ml/L。
2.根据权利要求1所述的一种精子清洗液，其特征在于：所述缓冲剂为磷酸盐缓冲剂、HEPES缓冲剂、Tris-Hcl缓冲剂中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种精子清洗液，其特征在于，所述螯合剂为EDTA。
4.根据权利要求1所述的一种精子清洗液，其特征在于，该精子清洗液的pH为7.35～7.8，渗透压为285～340mOsmol/kg。
5.如权利要求1至4任一项所述的一种精子清洗液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取氯化钠、碳酸氢钠、缓冲剂、葡萄糖、氯化钾、乳酸钙、磷酸二氢钾、丙酮酸钠、螯合剂和谷胱甘肽，加水制成溶液；
(2)向步骤(1)制备的溶液中加入甘油和乙醇；
(3)加入人血清蛋白，然后加水定容。
6.根据权利要求1所述的一种精子清洗液的制备方法，其特征在于，步骤(3)定容后得到的溶液经过微米滤芯进行过滤。
7.权利要求1至4任一项所述的精子清洗液在清洗精子细胞中的应用。
8.根据权利要求7所述的精子清洗液的应用，其特征在于，该精子清洗液用于清洗经过密度梯度分离得到的精子细胞。
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