CN107926930A - 一种精子冷冻液及其制备方法 - Google Patents
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- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
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Abstract
本发明涉及一种精子冷冻液及其制备方法，属于人类辅助生殖技术领域。所述精子冷冻液是将甘油以20‑30％的浓度溶解于含有蔗糖、抗菌素、指示剂的盐溶液中配制而成。本发明所述的精子冷冻液中添加了甘油和蔗糖，甘油和蔗糖作为细胞保护剂，不仅可以温和有效地保护精子的活力和DNA的完整性，还能保护睾丸组织细胞的活性，进而保护睾丸内精子的活力，提高精子的受精率，同时，也为辅助生殖技术的安全性提供了有力保证。
Description
技术领域
本发明涉及一种精子冷冻液及其制备方法，属于人类辅助生殖技术领域。
背景技术
人类辅助生殖技术中，要通过对精子和睾丸活检组织冷冻，以保护精子的活力及其质膜完整性。常规的精子冷冻液是以HEPES或者MOPS盐溶液为缓冲的蛋黄溶液，不能有效地保精子的活力和完整性，尤其对活检睾丸组织的保存不够完好。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种各项质控达标的精子冷冻液，不仅可以有效地改善精子的活力，提高冷冻精子人工授精(IUI)的成功率，而且也为辅助生殖技术的安全性提供了有力保证。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：
一种精子冷冻液，其特征在于：将甘油以20-30％的浓度溶解于含有蔗糖、抗菌素、指示剂的盐溶液中配制而成。
优选的：所述蔗糖的浓度为0.1-0.3mol/L。
优选的：抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。
优选的：所述指示剂为酚红，浓度9-10μg/ml。
优选的：所述盐溶液是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物培养溶液；其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、HEPES或者MOPS19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L；
所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级的重组人血清白蛋白干粉溶解于在盐水溶液中制备而成，终浓度为15-20mg/ml。
所述精子冷冻液的制备方法，包括以下步骤：
1、称量好各种组分，备用；
2、配制盐溶液：称量好的组分中，先将除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.3μM滤膜过滤，内毒素＜0.015EU/ml；然后，依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠，制得盐溶液；
3、检测步骤2所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值保持为7.0-7.4；
4、按照预配置的容量，配制蔗糖的工作浓度为0.1-0.3mol/L；
5、按照预配置的容量，将终浓度为15-20mg/ml的重组人血清白蛋白补充到盐溶液中；
6、将甘油以20-30％的工作浓度溶解于步骤5制得的盐溶液中，到充分溶解止；
7、将步骤6所得溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：7.20-7.45；
B、渗透压：1720-2020mOsm/Kg；
C、内毒素：＜0.15EU/ml；
D、一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
8、将配置好的溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。
有益效果：本发明所述的精子冷冻液中添加了甘油和蔗糖，甘油和蔗糖作为细胞保护剂，不仅可以温和有效地保护精子的活力和DNA的完整性，还能保护睾丸组织细胞的活性，进而保护睾丸内精子的活力，提高精子的受精率，同时，也为辅助生殖技术的安全性提供了有力保证。
具体实施方式
下面结合具体实施实施方式对本发明做进一步说明。
本发明所述的精子冷冻液，是将甘油以20-30％的浓度溶解于含有蔗糖、抗菌素、指示剂的盐溶液中配制而成。
所述蔗糖的浓度为0.1-0.3mol/L；抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml；所述指示剂为酚红，浓度9-10μg/ml。
所述盐溶液是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物培养溶液；其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、HEPES或者MOPS19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L；
所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级的重组人血清白蛋白干粉溶解于在盐水溶液中制备而成，终浓度为15-20mg/ml。
所述精子冷冻液的制备方法，包括以下步骤：
1、称量好各种组分，备用；
2、配制盐溶液：称量好的组分中，先将除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.3μM滤膜过滤，内毒素＜0.015EU/ml；然后，依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠，制得盐溶液；
3、检测步骤2所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值保持为7.0-7.4；
4、按照预配置的容量，配制蔗糖的工作浓度为0.1-0.3mol/L；
5、按照预配置的容量，将终浓度为15-20mg/ml的重组人血清白蛋白补充到盐溶液中；
6、将甘油以20-30％的工作浓度溶解于步骤5制得的盐溶液中，到充分溶解止；
7、将步骤6所得溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：7.20-7.45；
B、渗透压：1720-2020mOsm/Kg；
C、内毒素：＜0.15EU/ml；
D、一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
8、将配置好的溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。
【存储说明和稳定性】
存储：将分装好的精子冷冻液存放于2℃-8℃，使用前移至室温(20-25℃)。应尽可能减少液体暴露于CO2的环境，防止7.0或更低的pH水平。不要暴露在高于39℃的温度下。
稳定性：可以直到标签上显示的到期日期。使用无菌程序除去所需体积的产品，一旦移除，不要将任何量的产品返回原始容器；如果产品变色、浑浊或有微生物污染迹象，请勿使用。
为避免污染问题，使用无菌技术进行处理，并在完成操作后丢弃瓶子或小瓶中剩余的任何多余产品。
【具体使用方法】
1、在禁欲2至3天后通过手淫收集精液，使样品在室温或37℃液化30分钟。
2、解冻一小瓶精子冷冻液等分试样，平衡至室温或37℃；为达到更好的效果在该步中可加入抗生素。
3、液化的样品转移到无菌的15mL锥形离心管中；测定试样体积，并逐滴加入适当体积的解冻的精子冷冻液，直到样品与培养基之比达到3∶1；例如，对于每1mL样品加入0.33mL培养基。
4、将样品-培养基混合物等分至已标记的冷冻管或吸管中；为了避免其因膨胀而溢出，不可向冷冻管内加入过多的液体。
5、精子样品可直接冷冻，也可使用程序化的冷冻设备或蒸汽冷冻程序进行缓慢冷冻。
6、缓慢冷却的可选方案：将填充的冷冻管放置在铝架上；将铝架浸入室温水浴(即含有500mL水的塑料烧杯)中，然后再将烧杯置于冰箱(2至8℃)中60至90分钟，进行冷冻。
7、冷冻程序结束后，将精子冷冻管置于液氮中保存。
Claims (6)
1.一种精子冷冻液，其特征在于：将甘油以20-30％的浓度溶解于含有蔗糖、抗菌素、指示剂的盐溶液中配制而成。
2.根据权利要求1所述的精子冷冻液，其特征在于：所述蔗糖的浓度为0.1-0.3mol/L。
3.根据权利要求2所述的精子冷冻液，其特征在于：抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。
4.根据权利要求3所述的精子冷冻液，其特征在于：所述指示剂为酚红，浓度9-10μg/ml。
5.根据权利要求4所述的精子冷冻液，其特征在于：所述盐溶液是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物培养溶液；其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、HEPES或者MOPS19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L；
所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级的重组人血清白蛋白干粉溶解于在盐水溶液中制备而成，终浓度为15-20mg/ml。
6.如权利要求5所述精子冷冻液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)称量好各种组分，备用；
(2)配制盐溶液：称量好的组分中，先将除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.3μM滤膜过滤，内毒素＜0.015EU/ml；然后，依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠，制得盐溶液；
(3)检测步骤(2)所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值保持为7.0-7.4；
(4)按照预配置的容量，配制蔗糖的工作浓度为0.1-0.3mol/L；
(5)按照预配置的容量，将终浓度为15-20mg/ml的重组人血清白蛋白补充到盐溶液中；
(6)将甘油以20-30％的工作浓度溶解于步骤(5)制得的盐溶液中，到充分溶解止；
(7)将步骤(6)所得溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：7.20-7.45；
B、渗透压：1720-2020mOsm/Kg；
C、内毒素：＜0.15EU/ml；
D、一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
(8)将配置好的溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108739796A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-11-06 | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 | 一种玻璃化冷冻液及其制备方法 |
| CN108753698A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-11-06 | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 | 一种玻璃化解冻液及其制备方法 |
| CN108849851A (zh) * | 2018-05-16 | 2018-11-23 | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 | 一种聚乙烯吡咯烷酮溶液及其制备方法 |
| CN109329272A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-02-15 | 北京太东生物科技有限公司 | 一种精子冻存液及其制备方法和应用 |
| CN111202051A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-29 | 东蕴医疗科技(上海)有限公司 | 一种用于人类辅助生殖的精子冷冻液及其制备方法 |
| CN111436421A (zh) * | 2020-05-21 | 2020-07-24 | 新乡医学院三全学院 | 一种人类精子冷冻保存方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030013074A1 (en) * | 2000-12-04 | 2003-01-16 | Kenzo Bamba | Cell-preservation liquid and method of preserving cells by using the liquid |
| CN104130974A (zh) * | 2014-08-08 | 2014-11-05 | 山东威高新生医疗器械有限公司 | 精子制动液及其制备方法 |
| CN107027741A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-08-11 | 四川大学华西第二医院 | 一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法 |
-
2017
- 2017-11-22 CN CN201711231907.9A patent/CN107926930A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030013074A1 (en) * | 2000-12-04 | 2003-01-16 | Kenzo Bamba | Cell-preservation liquid and method of preserving cells by using the liquid |
| CN104130974A (zh) * | 2014-08-08 | 2014-11-05 | 山东威高新生医疗器械有限公司 | 精子制动液及其制备方法 |
| CN107027741A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-08-11 | 四川大学华西第二医院 | 一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108849851A (zh) * | 2018-05-16 | 2018-11-23 | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 | 一种聚乙烯吡咯烷酮溶液及其制备方法 |
| CN108739796A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-11-06 | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 | 一种玻璃化冷冻液及其制备方法 |
| CN108753698A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-11-06 | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 | 一种玻璃化解冻液及其制备方法 |
| CN109329272A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-02-15 | 北京太东生物科技有限公司 | 一种精子冻存液及其制备方法和应用 |
| CN111202051A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-29 | 东蕴医疗科技(上海)有限公司 | 一种用于人类辅助生殖的精子冷冻液及其制备方法 |
| CN111436421A (zh) * | 2020-05-21 | 2020-07-24 | 新乡医学院三全学院 | 一种人类精子冷冻保存方法 |
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