CN106916220A - 一种重组人血清白蛋白溶液及其制备方法 - Google Patents

一种重组人血清白蛋白溶液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种重组人血清白蛋白溶液及其制备方法，属于人工辅助生殖技术领域。采用重组人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的盐溶液中配制而成。本发明是利用医疗级重组人血清白蛋白(rHSA)完全溶解于盐溶液中制备而成，不仅可以为多用途培养基提供优异的蛋白质来源，还排除了人源性病原体及毒素的可能性，从而大大提高辅助生殖的安全性。

Description

一种重组人血清白蛋白溶液及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种重组人血清白蛋白溶液及其制备方法，属于人工辅助生殖技术领域。
背景技术
人血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛，是当前的研究热点之一。在体液中，人血清白蛋白可以运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多治疗分子等，同时维持血液正常的渗透压。在临床上，人血清白蛋白可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂。
在人工辅助生殖技术领域，人血清白蛋白用于辅助生殖程序，包括配子和胚胎操作，作为培养基和精子、卵母细胞/胚胎操作培养基的营养补充。
现有技术中，常规的人源性血清白蛋白(HSA)主要来源于人的血清，存在着潜在的人源性病原体及毒素的风险，为辅助生殖技术带来重大安全性问题。
我国辅助生殖技术中的血清白蛋白溶液几乎完全依赖进口，不仅成本高且溶液经长途运输和海关检查后，其有效性受到不同程度的影响，甚至变质或者氨化，如果使用变质或者氨化的血清白蛋白溶液，将对辅助生殖的治疗带来极为有害的后果和风险。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种各项质控指标达到体外受精培养液蛋白营养标准，使用安全、无病原体和内毒素的重组人血清白蛋白溶液及其制备方法，为辅助生殖技术的安全性提供了有力保证。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：
一种重组人血清白蛋白溶液，其特征在于：采用重组人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的盐溶液中配制而成。
优选的，所述盐溶液是常规生理氯化钠盐溶液。
优选的，所述盐溶液是以HEPES、MOPS或碳酸氢钠为缓冲剂，并以钠、钾、钙、镁离子为基础的化合物溶液。
优选的，所述的盐溶液是以是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液，其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、HEPES或者MOPS 19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、D型或L型乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L。
优选的，所述抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。
所述重组人血清白蛋白溶液的制备方法，包括以下步骤：
1、称量好各种组分，备用；
2、称量好的组分中，除了抗菌素、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.2μM滤膜过滤，内毒素＜0.5EU/ml；
3、向步骤2制得的盐溶液中依次加入称量好的抗菌素、碳酸氢钠；
4、检测步骤3所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值保持为7.0-7.4，pH值如果不在范围内，则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值；
5、按照预配置的容量，将重组人血清白蛋白干粉按终浓度为100mg/ml的浓度溶解于盐溶液中，到充分溶解为止；
6、将步骤5所得重组人血清白蛋白溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：6.8-7.4；
B、渗透压：270-290mOsm/Kg；
C、内毒素：＜1.0EU/ml；
D.一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
7、将配置好的酶溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。
有益效果：本发明是利用医疗级重组人血清白蛋白(rHSA)完全溶解于盐溶液中制备而成，不仅可以为多用途培养基提供优异的蛋白质来源，还排除了人源性病原体及毒素的可能性，从而大大提高辅助生殖的安全性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：
本实施例所述重组人血清白蛋白溶液，采用重组人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的盐溶液中配制而成。所述盐溶液是常规的生理氯化钠盐溶液。所述抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。
本实施例所述重组人血清白蛋白溶液的制备方法，包括以下步骤：
1、配制盐溶液：按0.9％的浓度称量氯化钠，将其溶于超纯注射级用水中，然后加入称量好的抗菌素，止至完全溶解。
2、检测步骤1所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-270mOsm/Kg，所述pH值在20-25℃温度条件下保持为7.0-7.4；pH值如果不在范围内，则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值；
3、按照预配置的容量，将重组人血清白蛋白干粉按终浓度为100mg/ml的浓度溶解于盐溶液中，到充分溶解为止；
4、将步骤3所得重组人血清白蛋白溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：6.8-7.4；
B、渗透压：270-290mOsm/Kg；
C、内毒素：＜1.0EU/ml；
D.一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
5、将配置好的酶溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。
实施例2：
本实施例所述重组人血清白蛋白溶液，采用重组人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的盐溶液中配制而成。所述抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。
所述的盐溶液是以是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液，其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、HEPES或者MOPS 19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、D型或L型乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L。
本实施例所述重组人血清白蛋白溶液的制备方法，包括以下步骤：
1、称量好各种组分，备用；
2、称量好的组分中，除了抗菌素、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.2μM滤膜过滤，内毒素＜0.5EU/ml；
3、向步骤2制得的盐溶液中依次加入称量好的抗菌素、碳酸氢钠；
4、检测步骤3所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值在20-25℃温度条件下保持为7.0-7.4；pH值如果不在范围内，则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值；
5、按照预配置的容量，将重组人血清白蛋白干粉按终浓度为100mg/ml的浓度溶解于盐溶液中，到充分溶解为止；
6、将步骤5所得重组人血清白蛋白溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：6.8-7.4；
B、渗透压：270-290mOsm/Kg；
C、内毒素：＜1.0EU/ml；
D.一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
7、将配置好的酶溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。
【存储说明和稳定性】
存储未冷却的瓶子，冷藏在2-8℃，不要冷冻或暴露于高于39℃的温度环境。重组人血清白蛋白是稳定的，可存储至在小瓶和试剂盒标签上显示的有效期。使用无菌程序除去所需的体积，不要将任何卷返回到原始容器。
【具体使用方法】
实验室使用多功能培养基用于精子、卵母细胞和胚胎培养以及冷冻和解冻液的蛋白质补充。蛋白质补充的量因实验室之间不同而变化，并且也取决于配子和胚胎使用的不同阶段。一般将重组人血清白蛋白(rHSA)100mg/ml溶液补充至5mg/ml的多功能培养基中。
【注意事项】
不要使用任何瓶子显示颗粒物质，浑浊或不清楚或淡黄色或显示任何微生物污染的迹象的介质。不要使用任何无菌包装已损坏的瓶子。
重组人血清白蛋白不能用作注射产品，内含抗菌素。为了避免污染问题，使用无菌技术进行处理，并在完成程序后丢弃瓶中残留的多余介质。

Claims (6)

1.一种重组人血清白蛋白溶液，其特征在于：采用重组人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的盐溶液中配制而成。
2.根据权利要求1所述的重组人血清白蛋白溶液，其特征在于：所述盐溶液是常规生理氯化钠盐溶液。
3.根据权利要求1所述的重组人血清白蛋白溶液，其特征在于：所述盐溶液是以HEPES、MOPS或碳酸氢钠为缓冲剂，并以钠、钾、钙、镁离子为基础的化合物溶液。
4.根据权利要求1所述的重组人血清白蛋白溶液，其特征在于：所述的盐溶液是以是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液，其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、HEPES或者MOPS19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、D型或L型乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L。
5.根据权利要求1所述的重组人血清白蛋白溶液，其特征在于：所述抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。
6.如权利要求4所述重组人血清白蛋白溶液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)称量好各种组分，备用；
(2)称量好的组分中，除了抗菌素、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.2μM滤膜过滤，内毒素＜0.5EU/ml；
(3)向步骤(2)制得的盐溶液中依次加入称量好的抗菌素、碳酸氢钠；
(4)检测步骤(3)所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值保持为7.0-7.4，pH值如果不在范围内，则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH值；
(5)按照预配置的容量，将重组人血清白蛋白干粉按终浓度为100mg/ml的浓度溶解于盐溶液中，到充分溶解为止；
(6)将步骤(5)所得重组人血清白蛋白溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：
A、30-37℃条件下pH值：6.8-7.4；
B、渗透压：270-290mOsm/Kg；
C、内毒素：＜1.0EU/ml；
D.一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；
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