CN111333704B - 新型冠状病毒covid-19疫苗、制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医学领域，涉及新型冠状病毒COVID‑19疫苗、制备方法及其应用。本发明经筛选获得了新型冠状病毒COVID‑19疫苗的优势抗原(RBD)表位，为了提高该抗原的免疫源性，将其与免疫球蛋白连接制备成RBD‑Fc融合蛋白，本发明的融合蛋白可用于开发新型冠状病毒COVID‑19的蛋白疫苗以及预防或治疗新型冠状病毒COVID‑19的药物。

Description

新型冠状病毒COVID-19疫苗、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及免疫治疗领域，涉及新型冠状病毒COVID-19疫苗、制备方法及其应用。
背景技术
新型冠状病毒COVID-19的肆虐严重危害人们的生命健康，疫苗是有效的防护病毒感染的方法。本申请通过分析新型冠状病毒COVID-19的序列特征，筛选和优化了可以用于制备新型冠状病毒COVID-19疫苗的优势抗原表位片段，并将该蛋白片段与人Fc片段融合，制备成新型的病毒疫苗。
发明内容
根据本发明的第一方面，本发明提供了一种新型冠状病毒COVID-19疫苗的优势抗原表位片段，所述抗原表位片段包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或其序列衍生物。
根据本发明的第二方面，本发明还提供了编码前面所述的抗原表位片段的核酸分子。
进一步，所述核酸分子包含SEQ ID NO.2所示的多核苷酸序列或其简并序列。
根据本发明的第三方面，本发明还提供了包含前面所述的核酸分子的载体。
根据本发明的第四方面，本发明还提供了包含前面所述的核酸分子或前面所述的载体的细胞。
根据本发明的第五方面，本发明提供了一种制备前面所述的抗原表位片段的方法，所述方法包括在合适的环境下培养前面所述的细胞。
根据本发明的第六方面，本发明提供了一种疫苗，所述疫苗包含前面所述的抗原表位片段、前面所述的核酸分子、或前面所述的载体。
根据本发明的第七方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括前面所述的抗原表位片段，前面所述的核酸分子、前面所述的载体、前面所述的细胞、或前面所述的疫苗，以及药学上可接受的载体。
根据本发明的第八方面，本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包含前面所述的抗原表位片段。
进一步，所述融合蛋白还包含免疫球蛋白Fc片段。
进一步，所述免疫球蛋白Fc片段来源包括人、小鼠、兔子、牛、山羊、猪、小鼠、兔、仓鼠、大鼠、或豚鼠等其他动物。
所述免疫球蛋白Fc片段可以是来自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的Fc片段，或者通过它们的组合或杂合体制备而来的Fc片段；优选为来自IgG或IgA。
进一步，所述免疫球蛋白Fc片段是人IgG Fc片段。
进一步，人IgG Fc片段选自人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的Fc片段中的任一个。
在本发明的具体实施方案中，人IgG Fc片段包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或其序列衍生物。
在本发明的具体实施方案中，所述融合蛋白包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列或其序列衍生物。
根据本发明的第九方面，本发明提供了编码前面所述的融合蛋白的核酸分子。
进一步，所述核酸分子包含SEQ ID NO.5所示的多核苷酸序列或其简并序列。
根据本发明的第十方面，本发明提供了包含第九方面所述的核酸分子的载体。
根据本发明的第十一方面，本发明提供了包含第九方面所述的核酸分子或第十方面所述的载体的细胞。
根据本发明的第十二方面，本发明提供了一种制备前面所述的融合蛋白的方法，所述方法包括在合适的环境下培养第十一方面所述的细胞。
根据本发明的第十三方面，本发明提供了一种疫苗，所述疫苗包含前面所述的融合蛋白、第九方面所述的核酸分子、或第十方面所述的载体。
根据本发明的第十四方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括前面所述的融合蛋白，第九方面所述的核酸分子、第十方面所述的载体、第十一方面所述的细胞、或第十三方面所述的疫苗，以及药学上可接受的载体。
根据本发明的第十五方面，本发明提供了一种用于在受试者中诱导针对新型冠状病毒COVID-19的抗体的方法，所述方法包括给所述受试者施用本发明前面所述的疫苗，本发明前面所述的抗原表位片段、本发明前面所述的融合蛋白、本发明前面所述的核酸分子，本发明前面所述的载体、本发明前面所述的细胞、或本发明前面所述的药物组合物。
根据本发明的第十六方面，本发明提供了根据前面所述的方法制备的抗体。
根据本发明的第十七方面，本发明提供了一种疫苗，所述疫苗包含前面所述的抗体或其功能部分。
根据本发明的第十八方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括前面所述的抗体或第十七方面所述的疫苗。
根据本发明的第十九方面，本发明提供了一种抗新型冠状病毒COVID-19感染的方法，所述方法包括给所述受试者施用本发明前面所述的疫苗，前面所述的抗原表位片段、前面所述的融合蛋白、前面所述的核酸分子，前面所述的载体、前面所述的细胞、前面所述的药物组合物、或前面所述的抗体。
根据本发明的第二十方面，本发明提供了一种增加前面所述的抗原表位片段的免疫原性的方法，所述方法包括将所述抗原表位片段连接于免疫球蛋白Fc片段。
所述免疫球蛋白Fc片段同前面所描述的。
根据本发明的第二十一方面，本发明提供了一种制备前面所述的融合蛋白的方法，所述方法包括将前面所述的抗原表位片段连接于免疫球蛋白Fc片段。
所述免疫球蛋白Fc片段同前面所描述的。
根据本发明的第二十二方面，本发明提供了前面所述的抗原表位片段在制备前面所述的融合蛋白、前面所述的疫苗、前面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
根据本发明的第二十二方面，本发明提供了前面所述的融合蛋白在制备第十三方面或第十七方面所述的疫苗、或第十四方面或第十八方面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第二方面或第三方面所述的核酸分子、第四方面所述的载体在制备前面所述的疫苗、前面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第五方面所述的细胞在制备前面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第九方面所述的核酸分子，第十方面所述的载体在制备第十三方面或第十七方面所述的疫苗、第十四方面或第十八方面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第十一方面所述的细胞在制备第十四方面或第十八方面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第六方面的疫苗在制备前面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第十三方面的疫苗在制备第十四方面或第十八方面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
第十七方面所述的疫苗在制备第十八方面所述的药物组合物、或前面所述的抗体中的应用。
前面所述的抗原表位片段、前面所述的融合蛋白、前面所述的疫苗，前面所述的核酸分子，前面所述的载体、前面所述的细胞、或前面所述的药物组合物在制备针对新型冠状病毒COVID-19的抗体中的应用。
前面所述的抗原表位片段、前面所述的融合蛋白、前面所述的疫苗，前面所述的核酸分子，前面所述的载体、前面所述的细胞、或前面所述的药物组合物在制备抗新型冠状病毒COVID-19感染的药物中的应用。
本发明的所述氨基酸序列衍生物是由于一个或多个氨基酸残基的缺失、插入、非保守性或保守性取代或它们的组合而不同于天然氨基酸序列的序列，是具有鱼天然氨基酸序列同样的生物学活性或提高了结构稳定性(如抗热、抗pH等)的衍生物。
本发明的所述氨基酸序列衍生物与天然氨基酸序列的序列同一性至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。
本发明的疫苗还包括佐剂，所述佐剂包括铝胶佐剂、皂苷、油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂、丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基(alkenyl)衍生物的共聚物、RIBI佐剂系统、Block co-polymer、SAF-M、单磷酰脂质A、Avridine脂质-胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽或Gel佐剂中的一种或几种。
附图说明
图1显示本发明的融合蛋白的SEC纯度检测结果图；
图2显示本发明的融合蛋白的SDS-PAGE结果图；
图3显示本发明的融合蛋白与hACE2受体结合的生物学活性结果图；
图4显示RBD-Fc蛋白免疫小鼠血清ELISA结果图。
具体实施方式
实施例1 筛选新型冠状病毒COVID-19疫苗的优势抗原(RBD)表位
经筛选获得新型冠状病毒COVID-19疫苗的优势抗原(RBD)表位，氨基酸序列如SEQID NO.1所示，优化后编码核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
实施例2 新型冠状病毒COVID-19疫苗的优势抗原表位与Fc蛋白(RBD-Fc)的融合、表达及其鉴定
采用的免疫球蛋白Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码核酸序列如SEQID NO.6所示。RBD-Fc氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，RBD-Fc氨基酸序列确定后进行编码核酸序列的优化并合成，RBD-Fc的编码核酸序列如SEQ ID NO.5所示。为方便试验顺利操作进行，质粒构建过程中使用到的工具载体由ZY-CDMO载体(由北京昭衍生物技术有限公司自主设计合成并申请了专利，申请号为201910738072.9)将PmeI酶切位点和HindIII酶切位点位置互换，合成的RBD-Fc序列5’端带有EcoRI酶切位点，3’端带有HindIII酶切位点，将其插入到载体的EcoRI和HindIII之间，构建获得真核表达新型冠状病毒COVID-19疫苗载体质粒。
于125ml细胞培养摇瓶中接种30ml密度0.5×106cells/ml的HEK293细胞，当细胞密度生长至3×106cells/ml以上，细胞活率95％以上。细胞以1～2×107vc/ml接种至摇瓶中备用，先使用转染缓冲液与质粒混合均匀，再使用转染缓冲液与一定比例的转染试剂混合均匀，将转染试剂混合液加入质粒混合液中混合均匀，室温静置10min，最后将转染复合物逐滴加入到放置有细胞悬液的摇瓶中，在37℃、5％CO2、转速125rpm的摇床中培养5-7天，收集培养液上清进行纯化。采用AKTA(GE公司)进行RBD-Fc蛋白的分离纯化。首先收集过Protein A亲和层析柱(MabSelect SuRe)pH在3.4-3.6范围(用280nm进行监测)的洗脱液，调pH值至7.0，上样到分子筛层析柱(SUPERDEX 200)，280nm进行监控和收集样品，超滤浓缩后获得RBD-FC蛋白。
对所获得的蛋白进行SEC纯度检测结果如图1所示，SEC纯度为97.04％。
对所得蛋白进行SDS-PAGE结果如图2所示，其中泳道1是蛋白Marker，泳道2是RBD-Fc。
实施例3 重组RBD-Fc蛋白与hACE2受体结合的生物学活性
通过流式细胞术的方法鉴定重组RBD-Fc蛋白结合hACE2受体的生物学活性。
实验步骤：
1、向96孔细胞培养板中加入经稀释的待测血清，每孔25μl。血清首孔稀释度1:5，进行四个连续等比稀释。再加入2019-nCoV RBD-Fc蛋白，RBD-Fc蛋白浓度1μg/ml，每孔25μl。室温震荡30min，然后37℃静置10min。
2、用胰酶消化细胞，用10ml完全培养基终止消化。然后水平离心(1600rpm，4℃，6min)。
3、用10ml FPBS重悬细胞，然后水平离心(1600rpm，4℃，6min)。
4、用10ml FPBS重悬细胞，对细胞计数，估算其总数，然后水平离心(1600rpm，4℃，6min)。
5、根据细胞总数估算值，加入适量FPBS使其浓度为5×106个/ml。将细胞加入96孔板，50μl/孔。室温震荡10min，37℃静置30min。
6、准备相应数量的流式管，做好标记，加入1ml FPBS。将96孔板内混合物轻轻吹吸混匀，转移至相应流式管中，轻轻震荡混匀。水平离心(1600rpm，4℃，6min)。
7、弃上清，将流式管倒置在吸水纸上，然后立即正立在流式管架上。拍打管架侧壁，使细胞松散。
8、如此再洗涤两次。
9、向流式管中加入FPBS稀释的二抗，100μl/管，使用锡箔纸盖住流式管。室温震荡10min，37℃静置30min。
10、同前述方法洗涤三次。
11、加入200μl FPBS，轻轻吹吸混匀，转移200μl至96孔板中，上机检测。
实验结果：
结果如图3所示，结果表明，RBD-Fc蛋白与高表达hACE2分子的HeLa-hACE2细胞能有效结合，而与普通HeLa不结合。从而确证了重组RBD-Fc蛋白具有与hACE2结合的生物活性。
实施例4 新型冠状病毒COVID-19疫苗(RBD-Fc)在小鼠体内的免疫及抗体效价鉴定
RBD-Fc蛋白免疫小鼠血清ELISA鉴定
小鼠经2019-nCoV RBD-m/hFc蛋白免疫后，对其血清进行抗体滴度检测。
实验步骤：
1、取96孔酶标板，分别包被相应抗原蛋白，包被浓度1μg/ml，每孔50μl。4℃静置过夜。
2、使用洗板机洗涤酶标板一次，拍干。
3、加入3％BSA封闭液，每孔100μl。37℃静置1h。
4、使用洗板机洗涤酶标板一次，拍干。
5、另取一新96孔酶标板，对小鼠血清进行连续等比稀释。
6、将稀释的血清加到步骤1中的三块酶标板中，每孔50μl。37℃静置45min。
7、使用洗板机洗涤酶标板三次，拍干。
8、加入稀释的山羊抗小鼠抗体(稀释度1：5000)，每孔50μl。37℃静置30min。
9、使用洗板机洗涤酶标板三次，拍干。
10、加入显色液，每孔50μl。显色约1min。
11、加入终止液，每孔50μl。
12、使用酶标仪读取OD450处吸光度。
实验结果：
RBD-hFc蛋白免疫小鼠血清ELISA结果如表1和图4所示。结果表明，重组RBD-hFc蛋白具有良好的免疫原性，可以有效诱导产生针对病毒Spike蛋白RBD的特异性抗体，可用于预防或治疗新型冠状病毒COVID-19感染。
表1 RBD-hFc蛋白免疫小鼠血清ELISA结果统计
Figure BDA0002390556890000091
(401～405为铝佐剂)
序列表
<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所
中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
北京昭衍生物技术有限公司
<120> 新型冠状病毒COVID-19 疫苗、制备方法及其应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
1 5 10 15
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
20 25 30
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
35 40 45
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
50 55 60
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
65 70 75 80
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
85 90 95
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
100 105 110
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
115 120 125
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
130 135 140
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
165 170 175
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
180 185 190
Thr Val
<210> 2
<211> 582
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aacatcacca acctgtgccc cttcggcgag gtgttcaacg ccaccaggtt cgccagcgtg 60
tacgcctgga acaggaaaag gatcagtaac tgcgtggccg actactccgt gctgtacaac 120
tccgcctcct tctccacctt caaatgctat ggcgtgtccc ccaccaagct gaacgatctg 180
tgtttcacca acgtgtacgc cgactccttc gtgattaggg gcgacgaggt gcgccagatc 240
gcccctggtc agaccggcaa gatcgccgat tataactaca agctgcccga cgacttcacc 300
ggctgcgtga tcgcctggaa ctccaacaat ctggatagca aggtgggtgg aaactacaat 360
tacctgtaca gactgttccg caaatccaac ctgaagccct tcgaaaggga catctccaca 420
gagatctacc aggccggctc caccccctgc aacggagtgg agggcttcaa ctgctacttc 480
cccctgcagt cctacggctt ccagcccacc aacggcgtgg gataccagcc ctacagagtg 540
gtggtgctgt ccttcgagct gctgcacgcc cccgccaccg tg 582
<210> 3
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
50 55 60
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
100 105 110
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
130 135 140
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
180 185 190
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
195 200 205
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
210 215 220
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 4
<211> 429
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
1 5 10 15
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
20 25 30
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
35 40 45
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
50 55 60
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
65 70 75 80
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
85 90 95
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
100 105 110
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
115 120 125
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
130 135 140
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
165 170 175
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
180 185 190
Thr Val Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
195 200 205
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
210 215 220
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
225 230 235 240
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
245 250 255
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
260 265 270
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
275 280 285
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
290 295 300
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
305 310 315 320
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
325 330 335
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
340 345 350
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
355 360 365
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
370 375 380
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
385 390 395 400
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
405 410 415
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
420 425
<210> 5
<211> 1287
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aacatcacca acctgtgccc cttcggcgag gtgttcaacg ccaccaggtt cgccagcgtg 60
tacgcctgga acaggaaaag gatcagtaac tgcgtggccg actactccgt gctgtacaac 120
tccgcctcct tctccacctt caaatgctat ggcgtgtccc ccaccaagct gaacgatctg 180
tgtttcacca acgtgtacgc cgactccttc gtgattaggg gcgacgaggt gcgccagatc 240
gcccctggtc agaccggcaa gatcgccgat tataactaca agctgcccga cgacttcacc 300
ggctgcgtga tcgcctggaa ctccaacaat ctggatagca aggtgggtgg aaactacaat 360
tacctgtaca gactgttccg caaatccaac ctgaagccct tcgaaaggga catctccaca 420
gagatctacc aggccggctc caccccctgc aacggagtgg agggcttcaa ctgctacttc 480
cccctgcagt cctacggctt ccagcccacc aacggcgtgg gataccagcc ctacagagtg 540
gtggtgctgt ccttcgagct gctgcacgcc cccgccaccg tggctgctgc tgaacctaaa 600
tcctgcgaca agacacacac ctgccccccc tgccctgccc ctgaactgct gggaggcccc 660
tccgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacacactga tgatctcccg gacccccgag 720
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaagatcccg aagtgaaatt taattggtac 780
gtggacggcg tggaggtgca caatgcaaag acaaaaccca gggaggaaca gtacaatagt 840
acatacaggg tggtgagcgt gctgacagtg ctgcatcagg attggctgaa cgggaaggag 900
tataagtgca aggtgtccaa caaggccctg cccgccccca ttgagaagac catctccaaa 960
gccaagggcc agcccaggga gccccaggtg tacaccctgc cacccagcag agacgagctg 1020
accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaaaggct tctacccctc cgacatcgcc 1080
gtggaatggg aatcaaacgg ccagcctgag aacaactaca aaacaacacc ccccgtgctg 1140
gacagcgacg gcagcttctt cctgtactcc aagctgacag tggacaagtc caggtggcag 1200
cagggcaacg tgttcagttg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ttacacccag 1260
aagtccctgt ccctgtcccc cggcaag 1287
<210> 6
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gctgctgctg aacctaaatc ctgcgacaag acacacacct gccccccctg ccctgcccct 60
gaactgctgg gaggcccctc cgtgttcctg ttccccccca agcccaagga cacactgatg 120
atctcccgga cccccgaggt gacctgcgtg gtggtggacg tgtcccacga agatcccgaa 180
gtgaaattta attggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgcaaagac aaaacccagg 240
gaggaacagt acaatagtac atacagggtg gtgagcgtgc tgacagtgct gcatcaggat 300
tggctgaacg ggaaggagta taagtgcaag gtgtccaaca aggccctgcc cgcccccatt 360
gagaagacca tctccaaagc caagggccag cccagggagc cccaggtgta caccctgcca 420
cccagcagag acgagctgac caagaaccag gtgagcctga cctgcctggt gaaaggcttc 480
tacccctccg acatcgccgt ggaatgggaa tcaaacggcc agcctgagaa caactacaaa 540
acaacacccc ccgtgctgga cagcgacggc agcttcttcc tgtactccaa gctgacagtg 600
gacaagtcca ggtggcagca gggcaacgtg ttcagttgct ccgtgatgca cgaggccctg 660
cacaaccatt acacccagaa gtccctgtcc ctgtcccccg gcaag 705

Claims (20)

1.新型冠状病毒COVID-19疫苗的优势抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述的抗原表位肽的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的序列是指SEQ IDNO.2所示的多核苷酸序列或其简并序列。
4.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求1所述的抗原表位肽以及免疫球蛋白Fc片段组成。
5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc片段来源包括人、小鼠、兔子、牛、山羊、猪、小鼠、兔、仓鼠、大鼠、或豚鼠。
6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc片段是IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的Fc片段。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc包括 IgG1 Fc片段、IgG2 Fc片段、IgG3 Fc片段、或IgG4 Fc片段。
8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc片段是人 IgG Fc片段，其包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或其序列衍生物。
9.根据权利要求4-8中任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
10.编码权利要求4-9中任一项所述的融合蛋白的核酸分子。
11.根据权利要求10所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的序列是指SEQ IDNO.5所示的多核苷酸序列或其简并序列。
12.包含权利要求10或11所述的核酸分子的载体。
13.包含权利要求10或11所述的核酸分子或权利要求12所述的载体的细胞。
14.一种制备权利要求4-9中任一项所述的融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括在合适的环境下培养权利要求13所述的细胞，或
所述方法包括将权利要求1所述的抗原表位肽连接于免疫球蛋白Fc片段。
15.一种疫苗，其特征在于，所述疫苗包含权利要求4-9中任一项所述的融合蛋白、权利要求10或11所述的核酸分子，或权利要求12所述的载体。
16.权利要求1所述的抗原表位肽、权利要求4-9中任一项所述的融合蛋白、权利要求10或11所述的核酸分子、权利要求12所述的载体，或权利要求13所述的细胞在制备权利要求15所述的疫苗中的应用。
17.权利要求4-9中任一项所述的融合蛋白在制备权利要求13所述的细胞或权利要求15所述的疫苗中的应用。
18.权利要求10或11所述的核酸分子、权利要求12所述的载体在制备权利要求13所述的细胞或权利要求15所述的疫苗中的应用。
19.权利要求1所述的抗原表位肽、权利要求4-9中任一项所述的融合蛋白、权利要求15所述的疫苗、权利要求10或11所述的核酸分子、权利要求12所述的载体，或权利要求13所述的细胞在制备抗新型冠状病毒COVID-19感染的药物中的应用。
20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，所述药物是针对新型冠状病毒COVID-19的抗体。
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