WO2023246853A1 - 抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用 - Google Patents

抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用 Download PDF

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芦迪
霍永庭
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Definitions

  • the purpose of the present invention is to provide anti-novel coronavirus humanized multivalent binding proteins and their applications.
  • the multivalent binding protein provided by the invention can effectively block the binding of the wild strain, Delta variant strain and Omicron variant SARS-COV-2 RBD protein to the human ACE2 receptor protein, and compared with the monovalent binding protein, the invention is humanized Multivalent binding proteins have more significant novel coronavirus neutralizing activity.
  • the present invention provides a recombinant vector carrying the nucleic acid.
  • the present invention provides a host cell carrying the nucleic acid or comprising the recombinant vector.
  • Figure 2 is a graph showing the neutralizing activity results of R1382, R1406, and R1407 against the wild strain of novel coronavirus.
  • Figure 3 is a graph showing the results of the neutralizing activity of R1463, R1475, and R1464 against the wild strain of novel coronavirus.
  • Figure 4 is a graph showing the results of the neutralizing activity of R1382, R1406, and R1407 against the Delta variant new coronavirus.
  • Figure 5 shows the neutralizing activity results of R1463, R1475, and R1464 against the Delta mutant strain of new coronavirus. Fruit picture.
  • Figure 6 is a graph showing the results of the neutralizing activity of R1382, R1406, and R1407 against the Omicron variant new coronavirus.
  • Figure 7 is a graph showing the results of the neutralizing activity of R1463, R1475, and R1464 against the Omicron mutant new coronavirus.
  • the present invention will be further described below with reference to specific examples, but the examples do not limit the present invention in any form.
  • the reagents, methods and equipment used in the present invention are conventional reagents, methods and equipment in this technical field.
  • Non-naturally occurring amino acids include, but are not limited to, alpha-aminoadipic acid, aminobutyric acid, citrulline, homocitrulline, homoleucine, homoarginine, hydroxyproline, norleucine, pyridine Alanine, sarcosine, etc.
  • amino acid sequence refers to the sequence in which amino acids are connected to form a peptide chain (or polypeptide).
  • the amino acid sequence can only be read in one direction.
  • the present invention does not exclude the modification of other substances on the amino acid chain, such as sugars, lipids, etc., and the present invention is not limited to the 20 commonly used amino acids.
  • Fc region refers to the C-terminal region of an immunoglobulin, which is a functional structural unit composed of CH2 and CH3 in the heavy chain constant domain.
  • the Fc region has no ability to bind antigen, however it has half-life-extended properties and has a constant amino acid sequence.
  • the invention provides an anti-new coronavirus humanized multivalent binding protein, which includes at least two antigen epitope binding domains, and the antigen epitope binding domain is VHH.
  • the amino acid sequence of the VHH is such as SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 As shown, or as shown by an amino acid sequence having at least 95% similarity to SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
  • the amino acid sequence of the VHH has at least 95% sequence similarity to SEQ ID NO: 1, and the VHH includes the complementarity determining regions CDR1, CDR2 and CDR3 of SEQ ID NO: 1; or the VHH The amino acid sequence has at least 95% sequence similarity with SEQ ID NO:2, and the VHH includes the complementarity determining regions CDR1, CDR2 and CDR3 of SEQ ID NO:2;
  • the number of the epitope binding domains is 2-6, such as 2, 3, 4, 5 or 6.
  • the multivalent binding protein includes 3 of the epitope binding domains.
  • the C-terminal or N-terminal of the polypeptide chain of the multivalent binding protein is connected to a His tag; optionally, the amino acid sequence of the His tag is as shown in SEQ ID NO: 10;
  • the half-life extending domain is selected from the group consisting of an immunoglobulin Fc region or a serum albumin binding domain.
  • the immunoglobulin is selected from the group consisting of IgA, IgD, IgE, IgG and IgM;
  • the half-life extending domain is an immunoglobulin Fc region, and the epitope binding domain is linked to the N-terminus or C-terminus of the Fc region.
  • the multivalent binding protein forms a dimer structure through interchain disulfide bonds in the Fc region.
  • the multivalent binding protein includes 3 epitope binding domains
  • the Multivalent binding proteins include polypeptide chains of the following formula (a) or formula (b):
  • VHH1, VHH2, and VHH3 are the epitope binding domains described in any of the previous items, and L1 and L2 are connecting peptides.
  • the connecting peptide is preferably SEQ ID NO: 11 ;
  • Fc is an immunoglobulin Fc region, and the Fc is preferably SEQ ID NO: 3.
  • amino acid sequence of the multivalent binding protein is as shown in any one of SEQ ID NO: 6-9.
  • amino acid sequence of the multivalent binding protein is as shown in SEQ ID NO:7.
  • the invention also provides fusion proteins comprising said multivalent binding protein.
  • conjugates refers to the multivalent binding protein of the present invention and an enzyme phase (such as horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, etc.), radioactive isotope, fluorescent compound or chemiluminescent compound, therapeutic agent, etc. Conjugates obtained by coupling one or more of them, these conjugates can be used to detect the new coronavirus, prepare drugs to treat and/or prevent the new coronavirus, or treat new coronavirus infections.
  • enzyme phase such as horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, etc.
  • radioactive isotope such as horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, etc.
  • fluorescent compound or chemiluminescent compound such as chemiluminescent compound, therapeutic agent, etc.
  • the invention also provides nucleic acids encoding said multivalent binding proteins, or encoding said fusion proteins, or encoding said conjugates.
  • the nucleic acid is usually RNA or DNA, and the nucleic acid molecule can be single-stranded or double-stranded.
  • a nucleic acid is "operably linked" when it is placed into a functional relationship with another nucleic acid sequence.
  • a promoter or enhancer is operably linked to a coding sequence if it affects the transcription of the coding sequence.
  • DNA nucleic acids are used when ligated into vectors.
  • nucleic acid molecule sequence encoding the protein of the present invention can be obtained entirely through chemical synthesis.
  • the invention also provides recombinant vectors carrying the nucleic acid.
  • the invention also provides host cells carrying the nucleic acid or comprising the recombinant vector.
  • the term "host cell” includes prokaryotic cells and eukaryotic cells.
  • prokaryotic host cells include E. coli, Bacillus subtilis, etc.
  • Host cells used to express multivalent binding proteins include E. coli, yeast cells, insect cells, COS cells, CHO cells, etc. After the transformed host cell is obtained, the cell can be cultured under conditions suitable for expressing the multivalent binding protein of the present invention, thereby expressing the multivalent binding protein; and then the expressed multivalent binding protein is isolated.
  • the pharmaceutical composition further includes a pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carriers binders, glidants, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments, flavoring agents, etc. can be used for oral administration; buffers, preservatives Agents, pain relievers, solubilizers, isotonic agents, stabilizers, etc. can be used in injection mixtures; and bases, excipients, lubricants, preservatives, etc. can be used in topical administration.
  • the pharmaceutical composition further contains pharmaceutically acceptable excipients.
  • the present invention also provides the use of the multivalent binding protein, the fusion protein, the conjugate, the nucleic acid, the recombinant vector, or the host cell in the preparation of drugs for treating and/or preventing the new coronavirus. Applications.
  • the present invention provides a method for treating novel coronavirus disease, which method includes administering to a subject in need a therapeutically effective amount of the multivalent binding protein, the fusion protein, and the conjugate protein described in any one of the preceding items.
  • compound, the nucleic acid, the recombinant vector, or the host cell includes administering to a subject in need a therapeutically effective amount of the multivalent binding protein, the fusion protein, and the conjugate protein described in any one of the preceding items.
  • the present invention provides a multivalent binding protein, the fusion protein, the conjugate, the nucleic acid, the recombinant vector, or the host cell described in any of the preceding items for use as a drug.
  • the medicine is used to treat and/or prevent diseases caused by the new coronavirus.
  • the present invention also provides a method for preparing the multivalent binding protein, which includes: cultivating the host cell, and isolating and purifying the multivalent binding protein from the culture product.
  • the maternal sequence of R1406 and R1407 is RX011 (the amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 1), and the sequence structure is: R1406: VHH-Linker-VHH-Linker-VHH-Fc region, R1407: Fc region-VHH -Linker-VHH-Linker-VHH; the parent sequence of R1475 and R1464 is RX017 (the amino acid sequence is shown in SEQ ID NO:2), and the sequence structure is: R1475:VHH-Linker-VHH-His tag, R1464:His Tag-VHH-Linker-VHH-Linker-VHH; the amino acid sequence of the Fc region is shown in SEQ ID NO:3, and the amino acid sequence of the His tag is HHHHHH (SEQ ID NO:10).
  • R1382 amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 4
  • R1463 amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 5
  • the sequence structures are: R1382: RX011VHH-Fc region, R1463: RX017VHH-His Label.
  • Expi293 was cultured at 37°C, 8% carbon dioxide, and 130 rpm, and the cells were counted before transfection.
  • the 2E6 cells were inoculated into a 1L shake flask, and the culture system was about 300 ml.
  • -MEM reagent in a 50ml centrifuge tube, mix gently, and incubate at room temperature for 5 minutes, label it as tube B; add the PEI diluent in tube B dropwise to the DNA diluent in tube A, mix gently, and incubate at room temperature for 15 minutes. , after the incubation, add the PEI-target plasmid complex to Expi293 cells and place them in a 37°C shaker to continue culturing. Samples were collected after D7-D10.
  • the transiently transfected cell expression solution was centrifuged at 9000rpm/20min, the supernatant was collected, and then sterilized and filtered through a 0.22 ⁇ m filter membrane. Purification was performed using ProA affinity chromatography. The process is as follows, using AKTA york 150 chromatography equipment, Equilibrate the chromatography column (such as MabSelectSuRe LX, GE) with at least 5CV of equilibration buffer (10mM PBS), load the sample to the chromatography column, so that the target protein is adsorbed on the chromatography column and other impurities penetrate and separate.
  • AKTA york 150 chromatography equipment Equilibrate the chromatography column (such as MabSelectSuRe LX, GE) with at least 5CV of equilibration buffer (10mM PBS), load the sample to the chromatography column, so that the target protein is adsorbed on the chromatography column and other impurities penetrate and separate.
  • the binding protein was prepared by conventional methods, and the expression supernatant was purified by ProA affinity chromatography.
  • the process is as follows, use AKTA york 150 chromatography equipment, balance the chromatography column (such as MabSelectSuRe LX, GE) with at least 5CV equilibrium buffer (10mM PBS), load the sample to the chromatography column, and allow the target protein to be adsorbed on the chromatography column. Other impurities penetrate and separate.
  • Neutralization buffer (1M) is pre-added to the collection tube. Tris, pH8.0), the added volume of neutralizing buffer is determined based on the estimated content of the elution sample, generally 10% of the elution volume is added.
  • the titer and purity results of the anti-new coronavirus humanized multivalent binding protein are shown in Table 2. The results show that the titer and purity data of the humanized multivalent binding protein are very ideal.
  • Coating solution 50mm pH 9.51CB;
  • Coating temperature 2°C-8°C
  • the competitive method was used to detect the neutralizing activity of the humanized multivalent binding protein prepared in Example 2 against the Delta variant SARS-COV-2 RBD protein, using R1382 and R1463 as controls.
  • the viral protein coated in the experiment was: Delta Mutated strain SARS-COV-2 RBD protein (Ag101), 2ug/ml, the specific experimental steps are the same as in Example 3.
  • the results of the neutralizing activity of the humanized multivalent binding protein against the Delta variant new coronavirus are shown in Table 4, Figure 4 and Figure 5.
  • the results in Table 4, Figure 4 and Figure 5 show that the human The sourced multivalent binding protein can effectively block the binding of the Delta variant SARS-COV-2 RBD protein and the human ACE2 receptor protein, and all have novel coronavirus neutralizing activity; among them, compared with the control group, R1406, R1407, R1475 and R1464 showed significant neutralizing activity against the Delta mutant strain of new coronavirus.

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Abstract

涉及抗体技术领域，具体而言，涉及抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用。该多价结合蛋白能有效阻断野生株、Delta变异株和Omicron变异株SARS-COV-2RBD蛋白与人ACE2受体蛋白的结合，且相比单价结合蛋白，其具有更显著的新型冠状病毒中和活性，可广泛用于新型冠状病毒的预防和治疗。

Description

抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用
本申请请求2022年06月24日向中国国家知识产权局提交的专利申请号为202210724686.3，发明名称为“抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用”的中国专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入本申请。
技术领域
本发明属于抗体技术领域。更具体地，涉及抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用。
背景技术
传统的单克隆抗体分子质量过大(150kD)，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分；另外，传统的抗体具有很高的免疫原性，而改造的抗体很难达到原来的亲和力，限制了其在临床上的广泛应用。
自2019年爆发以来，新型冠状病毒(SARS-COV-2)在全世界各地广泛传播；另外，陆续发现了多种类型的新型冠状病毒变异株，如2020年10月在印度首次发现新型冠状病毒Delta变异株，2021年11月24日首次从南非发现了新型冠状病毒Omicron变异株。变异株是指在原有病毒的基因组基础上发生了某一个基因碱基的突变、或者某些碱基的缺失，发生突变或者碱基缺失会导致病毒的性质发生变化，病毒可能会出现比如传染性、宿主范围、传播力度、毒力、致病力、病情的严重程度、预后以及免疫原性的改变。这样就会导致临床整个发病过程以及流行病学发生变化，甚至对于免疫原性以及免疫的预防也可能会出现影响，造成了严重的经济损失、社会负担和其他负面影响。因此，亟需开发对新型冠状病毒野生株和突变株有特异性疗效的药物。
发明内容
本发明的目的是提供抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用。本发明提供的多价结合蛋白能有效阻断野生株、Delta变异株和Omicron变异株SARS-COV-2 RBD蛋白与人ACE2受体蛋白的结合，且相比单价结合蛋白，本发明人源化多价结合蛋白具有更显著的新型冠状病毒中和活性。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
第一方面，本发明提供了抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白，其包括至少 两个抗原表位结合结构域，所述抗原表位结合结构域为VHH；所述VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，或如与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少95％相似性的氨基酸序列所示。
第二方面，本发明提供了融合蛋白，其包含所述多价结合蛋白。
第三方面，本发明提供了缀合物，其包含所述多价结合蛋白。
第四方面，本发明提供了核酸，所述核酸编码所述多价结合蛋白、或编码所述融合蛋白、或编码所述缀合物。
第五方面，本发明提供了重组载体，所述重组载体携带所述核酸。
第六方面，本发明提供了宿主细胞，所述宿主细胞携带所述核酸、或包含所述重组载体。
第七方面，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物含有所述多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞。
第八方面，本发明提供了所述多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞在制备治疗和/或预防新型冠状病毒的药物中的应用。
第九方面，本发明提供了一种制备所述多价结合蛋白的方法，其包括：培养所述的宿主细胞，从培养产物中分离纯化获得所述多价结合蛋白。
第十方面，本发明提供了一种治疗新型冠状病毒疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的前面任一项所述的多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞。
第十一方面，本发明提供了一种用作药物的前面任一项所述的多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞；可选的，所述药物用于治疗新型冠状病毒疾病。
附图说明
图1是本发明多价结合蛋白R1406、R1407、R1475、R1464的结构图。
图2是R1382、R1406、R1407对野生株新型冠状病毒的中和活性结果图。
图3是R1463、R1475、R1464对野生株新型冠状病毒的中和活性结果图。
图4是R1382、R1406、R1407对Delta变异株新型冠状病毒的中和活性结果图。
图5是R1463、R1475、R1464对Delta变异株新型冠状病毒的中和活性结 果图。
图6是R1382、R1406、R1407对Omicron变异株新型冠状病毒的中和活性结果图。
图7是R1463、R1475、R1464对Omicron变异株新型冠状病毒的中和活性结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
本发明中，术语“氨基酸”表示天然存在或非天然存在的羧基α-氨基酸。术语“氨基酸”用在本申请中可以包括天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸包括丙氨酸(三字母密码：Ala，单字母密码：A)，精氨酸(Arg，R)，天冬酰胺(Asn，N)，天冬氨酸(Asp，D)，半胱氨酸(Cys，C)，谷氨酰胺(Gln，Q)，谷氨酸(Glu，E)，甘氨酸(Gly，G)，组氨酸(His，H)，异亮氨酸(Ile，I)，亮氨酸(Leu，L)，赖氨酸(Lys，K)，甲硫氨酸(Met，M)，苯丙氨酸(Phe，F)，脯氨酸(Pro，P)，丝氨酸(Ser，S)，苏氨酸(Thr，T)，色氨酸(Trp，W)，酪氨酸(Tyr，Y)，和缬氨酸(Val，V)。非天然存在的氨基酸包括但不限于α-氨基己二酸，氨基丁酸，瓜氨酸，高瓜氨酸，高亮氨酸，高精氨酸，羟基脯氨酸，正亮氨酸，吡啶基丙氨酸，肌氨酸等。
本发明中，术语“氨基酸序列”是指氨基酸相互连接形成肽链(或多肽)的顺序，氨基酸序列只能按照一个方向读取。氨基酸有100多种不同类型，其中20种常用，本发明不排除氨基酸链上有其他物质，例如糖类、脂类等修饰，本发明也不限于20中常用的氨基酸。
本发明中，术语“Fc区”是指免疫球蛋白的C端区域，该区域是由重链恒定结构域中CH2和CH3组成的功能性结构单元。Fc区没有结合抗原的能力，然而其具有半衰期延长的性质，并且具有恒定的氨基酸序列。
本发明提供了抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白，其包括至少两个抗原表位结合结构域，所述抗原表位结合结构域为VHH。
在一些实施方式中，所述VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2 所示，或如与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少95％相似性的氨基酸序列所示。
在一些实施方式中，所述VHH的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％序列相似性，且所述VHH包含SEQ ID NO:1的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3；或所述VHH的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％序列相似性，且所述VHH包含SEQ ID NO:2的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3；
在一些实施方式中，所述抗原表位结合结构域的数量为2-6个，例如为2个、3个、4个、5个或6个。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白包括3个所述抗原表位结合结构域。
在一些实施方式中，所述抗原表位结合结构域通过连接肽连接。本领域常用的连接肽均可用于本发明中。
在优选实施方式中，所述连接肽的氨基酸序列为：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:11)。
在优选实施方式中，所述连接的方式为串联。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白包括2个抗原表位结合结构域，所述2个抗原表位结合结构域通过连接肽串联连接；
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白包括3个抗原表位结合结构域，所述3个抗原表位结合结构域通过连接肽串联连接；
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白的多肽链的C端或N端连接His标签；可选地，所述His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白还包括半衰期延长结构域。
在优选实施方式中，所述半衰期延长结构域选自免疫球蛋白Fc区或血清白蛋白结合结构域。
在优选实施方式中，所述免疫球蛋白选自IgA、IgD、IgE、IgG和IgM；
在一些实施方式中，所述半衰期延长结构域为免疫球蛋白Fc区，所述抗原表位结合结构域连接至所述Fc区的N端或C端。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白通过所述Fc区的链间二硫键形成二聚体结构。
在优选实施方式中，所述Fc区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白包括3个抗原表位结合结构域，所述 多价结合蛋白包括如下式(a)或式(b)的多肽链：
式(a)：[VHH1]-[L1]-[VHH2]-[L2]-[VHH3]-[Fc]，
式(b)：[Fc]-[VHH1]-[L1]-[VHH2]-[L2]-[VHH3]，
其中，式(a)和式(b)中，VHH1、VHH2、VHH3为前面任一项所述的抗原表位结合结构域，L1、L2为连接肽，所述连接肽优选SEQ ID NO:11；Fc为免疫球蛋白Fc区，所述Fc优选SEQ ID NO:3。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6～9任一所示。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。
在一些实施方式中，所述多价结合蛋白的氨基酸序列可以不含有His标签，也可以含有His标签。
本发明还提供了融合蛋白，其包含所述多价结合蛋白。
本发明中，术语“融合蛋白”是指本发明多价结合蛋白与其他功能性蛋白片段等融合在一起得到的融合蛋白。
本发明还提供了缀合物，其包含所述多价结合蛋白。
本发明中，术语“缀合物”是指本发明多价结合蛋白与酶相(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、放射性同位素、荧光化合物或化学发光化合物、治疗剂等中的一种或多种相偶联得到的缀合物，这些缀合物可用于检测新冠病毒、制备治疗和/或预防新型冠状病毒的药物、或治疗新冠病毒感染疾病。
本发明还提供了核酸，所述核酸编码所述多价结合蛋白、或编码所述融合蛋白、或编码所述缀合物。
本发明中，核酸通常是RNA或DNA，核酸分子可以是单链或双链的。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。当其连入载体时采用DNA核酸。
目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白的核酸分子序列。
本发明还提供了重组载体，所述重组载体携带所述核酸。
在本发明中，术语“载体”包括质粒、表达载体、克隆载体、病毒载体等。可选用本领域已知的各种载体。比如，选用市售的载体，然后将编码本发明多价 结合蛋白的核酸序列可操作地连于表达调控序列，可以形成重组载体。
本发明还提供了宿主细胞，所述宿主细胞携带所述核酸、或包含所述重组载体。
在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。用于表达多价结合蛋白的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞、COS细胞、CHO细胞等。在获得转化的宿主细胞后，可在适合表达本发明多价结合蛋白的条件下培养该细胞，从而表达出多价结合蛋白；然后再分离出表达的多价结合蛋白。
本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物含有所述多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞。
在一些实施方式中，所述药物组合物还包含可药用载体。作为可药用载体，黏合剂、助流剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、助悬剂、色素、矫味剂等可用于经口施用；缓冲剂、防腐剂、疼痛减轻剂、增溶剂、等张剂、稳定剂等可用于注射用混合物；以及基质、赋形剂、润滑剂、防腐剂等可用于表面施用。
在一些实施方案中，所述药物组合物还含有药学上可接受的辅料。
本发明还提供了所述多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞在制备治疗和/或预防新型冠状病毒的药物中的应用。
本发明提供了一种治疗新型冠状病毒疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的前面任一项所述的多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞。
本发明提供了一种用作药物的前面任一项所述的多价结合蛋白、所述融合蛋白、所述缀合物、所述核酸、所述重组载体、或所述宿主细胞。可选的，所述药物用于治疗和/或预防新型冠状病毒引起的疾病。
本发明还提供了一种制备所述多价结合蛋白的方法，其包括：培养所述的宿主细胞，从培养产物中分离纯化获得所述多价结合蛋白。
实施例1抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白的设计构建
利用Fc区或His标签，结合VHH结构域串联设计不同结构的人源化多价结 合蛋白。改造后的人源化多价结合蛋白的结构如图1所示，具体氨基酸序列如表1所示：
其中，R1406、R1407的母本序列为RX011(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)，序列结构依次为：R1406:VHH-Linker-VHH-Linker-VHH-Fc区，R1407:Fc区-VHH-Linker-VHH-Linker-VHH；R1475、R1464的母本序列为RX017(氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示)，序列结构依次为：R1475:VHH-Linker-VHH-His标签，R1464:His标签-VHH-Linker-VHH-Linker-VHH；Fc区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，His标签的氨基酸序列为HHHHHH(SEQ ID NO:10)。
并以R1382(氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示)、R1463(氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示):作为对照，序列结构依次为：R1382：RX011VHH-Fc区，R1463：RX017VHH-His标签。

表1人源化多价结合蛋白的氨基酸序列

实施例2抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白的制备
蛋白瞬转表达：
将含有目的基因的质粒通过与转染试剂PEI形成阳离子复合物后，导入到宿主细胞Expi293，质粒在细胞内期间，质粒上的外源基因在细胞内发生转录翻译，从而得到目的蛋白。
Expi293在37℃、8％二氧化碳、130rpm条件培养，并在转染前通过细胞计数，将2E6的细胞接种至1L摇瓶中，培养体系约为300ml。配制转染复合物准备转染：首先将750μg目标质粒加入到含有15ml Opti-MEM试剂的50ml离心管中，轻轻混匀，标记为A管；将1.5mg转染试剂PEI加入到含有15ml Opti-MEM试剂的50ml离心管中，轻轻混匀后，室温孵育5min，标记为B管；将B管PEI稀释液逐滴加入到A管DNA稀释液中，轻轻混匀后，室温孵育15min，孵育结束后，将PEI-目标质粒复合物加入到Expi293细胞，置于37℃摇床中继续培养。直到D7-D10后收样。
复合物样品的纯化：
瞬转细胞表达液经过9000rpm/20min离心，收集上清，再经过0.22μm滤膜除菌过滤。纯化采用ProA亲和层析。过程如下，使用AKTA avant 150层析设备， 用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)平衡层析柱(如MabSelectSuRe LX，GE)，加载样品至层析柱，使目标蛋白吸附在层析柱上而其他杂质穿透分离。完成上样后使用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)再次冲洗层析柱，随后使用洗脱缓冲液(20mM NaAc，pH＝3.4)洗脱目标蛋白，收集管中预先加入中和缓冲液(1M Tris，pH8.0)，中和缓冲液的加入体积根据洗脱样品的预估含量而定，一般加入10％洗脱体积量。
常规方法进行结合蛋白的制备，表达上清采用ProA亲和层析纯化。过程如下，使用AKTA avant 150层析设备，用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)平衡层析柱(如MabSelectSuRe LX，GE)，加载样品至层析柱，使目标蛋白吸附在层析柱上而其他杂质穿透分离。完成上样后使用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)再次冲洗层析柱，随后使用洗脱缓冲液(20mM NaAc，pH＝3.4)洗脱目标蛋白，收集管中预先加入中和缓冲液(1M Tris，pH8.0)，中和缓冲液的加入体积根据洗脱样品的预估含量而定，一般加入10％洗脱体积量。
样品使用Biotek-Epoch-Take-3进行浓度测定，利用A280方法检测结合蛋白浓度，即以消光系数E.C.＝1.37(根据氨基酸序列预测)，光程＝0.05mm(Take-3板不同孔光程有细微差异，会自动校正)，通过设备检测样品吸光值，按照Lambert-Beer law计算待测结合蛋白的浓度。样品浓度过低则需要进行超滤浓缩，使用超滤浓缩管(Ultra-15 Centrifugal Filter Devices，30kD)按照说明书提供的通用操作方法，将样品浓度浓缩至＞0.5mg/ml；收集浓缩端样品，0.22um无菌针头滤器除菌过滤(科百特，PES，0.22um，直径13mm)后分装冻存备用。
抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白的滴度和纯度结果如表2所示，结果显示，人源化多价结合蛋白的滴度和纯度数据都很理想。
表2抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白的滴度和纯度结果

实施例3人源化多价结合蛋白对野生株新型冠状病毒的中和活性
使用竞争法检测实施例2制备得到的人源化多价结合蛋白对野生株SARS-COV-2 RBD蛋白的中和活性，以R1382、R1463作为对照，具体实验步骤如下：
包被条件：
病毒蛋白：野生株SARS-COV-2 RBD蛋白(Ag27)，2ug/ml；
包被液：50mm pH 9.51CB；
包被体积：100ul/孔；
包被温度：2℃-8℃；
包被时间：18小时；
封闭液：含1％BSA+1×PBS；
封闭温度：37℃；
封闭时间：3小时；
加样：加50ul待测结合蛋白(所有结合蛋白起始浓度是5ug/mL，并按照5倍进行系列梯度稀释)，孵育30min，使用洗板液(1 x PBS)清洗5次后，加入50ul ACE2蛋白，使用洗板液(1 x PBS)清洗3次后，显色检测。
人源化多价结合蛋白对野生株新型冠状病毒的中和活性结果如表3、图2和图3所示，表3、图2和图3的结果显示，实施例2制备得到的人源化多价结合蛋白具有新型冠状病毒中和活性，能有效阻断野生株SARS-COV-2 RBD蛋白与人ACE2受体蛋白的结合；其中，与对照组相比，R1406、R1407、R1475、R1464显示出显著的野生株新型冠状病毒中和活性。
表3人源化多价结合蛋白对野生株新型冠状病毒的中和活性结果

实施例4人源化多价结合蛋白对Delta变异株新型冠状病毒的中和活性
使用竞争法检测实施例2制备得到的人源化多价结合蛋白对Delta变异株SARS-COV-2 RBD蛋白的中和活性，以R1382、R1463作为对照，实验中包被的病毒蛋白为：Delta变异株SARS-COV-2 RBD蛋白(Ag101)，2ug/ml，具体实验步骤同实施例3。
人源化多价结合蛋白对Delta变异株新型冠状病毒的中和活性结果如表4、图4和图5所示，表4、图4和图5的结果显示，实施例2制备得到的人源化多价结合蛋白能有效阻断Delta变异株SARS-COV-2 RBD蛋白与人ACE2受体蛋白的结合，都有新型冠状病毒中和活性；其中，与对照组相比，R1406、R1407、R1475、R1464显示出显著的Delta变异株新型冠状病毒中和活性。
表4人源化多价结合蛋白对Delta变异株新型冠状病毒的中和活性结果
实施例5人源化多价结合蛋白对Omicron变异株新型冠状病毒的中和活性
使用竞争法检测实施例2制备得到的人源化多价结合蛋白对Omicron变异株SARS-COV-2 RBD蛋白的中和活性，以R1382、R1463作为对照，实验中包被的病毒蛋白为：Omicron变异株SARS-COV-2 RBD蛋白(covsK20)，2ug/ml，具体实验步骤同实施例3。
人源化多价结合蛋白对Omicron变异株新型冠状病毒的中和活性结果如表5、图6和图7所示，结果显示，实施例2制备得到的人源化多价结合蛋白能有效阻断Omicron变异株SARS-COV-2 RBD蛋白与人ACE2受体蛋白的结合，都有新型冠状病毒中和活性；其中，与对照组相比，R1406、R1407、R1475、R1464显示出显著的Omicron变异株新型冠状病毒中和活性。
表5人源化多价结合蛋白对Omicron变异株新型冠状病毒的中和活性结果
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (17)

  1. 抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白，其包括至少两个抗原表位结合结构域，所述抗原表位结合结构域为VHH；所述VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，或如与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少95％相似性的氨基酸序列所示。
  2. 根据权利要求1所述多价结合蛋白，所述VHH的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％序列相似性，且所述VHH包含SEQ ID NO:1的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3；或
    所述VHH的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％序列相似性，且所述VHH包含SEQ ID NO:2的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3。
  3. 根据权利要求1或2所述多价结合蛋白，所述抗原表位结合结构域的数量为2、3、4、5或6个；可选地，所述多价结合蛋白包括3个所述抗原表位结合结构域。
  4. 根据权利要求1至3任一项所述多价结合蛋白，所述抗原表位结合结构域通过连接肽连接；
    可选地，所述抗原表位结合结构域串联连接；
    可选地，所述多价结合蛋白包括2个抗原表位结合结构域，所述2个抗原表位结合结构域通过连接肽串联连接，或者所述多价结合蛋白包括3个抗原表位结合结构域，所述3个抗原表位结合结构域通过连接肽串联连接；
    可选地，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；
    可选地，所述多价结合蛋白的多肽链的C端或N端连接His标签；可选地，所述His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
  5. 根据权利要求1至4任一项所述多价结合蛋白，所述多价结合蛋白包括半衰期延长结构域；
    可选地，所述半衰期延长结构域选自免疫球蛋白Fc区或血清白蛋白结合结构域；
    可选地，所述免疫球蛋白选自IgA、IgD、IgE、IgG和IgM；
    可选地，所述Fc区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
  6. 根据权利要求1至5任一项所述多价结合蛋白，所述半衰期延长结构域为免疫球蛋白Fc区，所述抗原表位结合结构域连接至所述Fc区的N端或C端；
    可选地，所述多价结合蛋白通过所述Fc区的链间二硫键形成二聚体结构；
    可选地，所述多价结合蛋白包括3个抗原表位结合结构域，所述多价结合蛋白包括如下式(a)或式(b)的多肽链：
    式(a)：[VHH1]-[L1]-[VHH2]-[L2]-[VHH3]-[Fc]，
    式(b)：[Fc]-[VHH1]-[L1]-[VHH2]-[L2]-[VHH3]，
    其中，式(a)和式(b)中，VHH1、VHH2、VHH3为抗原表位结合结构域，L1、L2为连接肽，所述连接肽优选SEQ ID NO:11；Fc为免疫球蛋白Fc区，所述Fc优选SEQ ID NO:3。
  7. 根据权利要求1至6任一项所述多价结合蛋白，所述多价结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6～9任一所示。
  8. 融合蛋白，其包含权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白。
  9. 缀合物，其包含权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白。
  10. 核酸，所述核酸编码权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白、或编码权利要求8所述融合蛋白、或编码权利要求9所述缀合物。
  11. 重组载体，所述重组载体携带权利要求10所述核酸。
  12. 宿主细胞，所述宿主细胞携带权利要求10所述核酸、或包含权利要求11所述重组载体。
  13. 药物组合物，所述药物组合物含有权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白、权利要求8所述融合蛋白、权利要求9所述缀合物、权利要求10所述核酸、权利要求11所述重组载体、或权利要求12所述宿主细胞。
  14. 权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白、权利要求8所述融合蛋白、权利要求9所述缀合物、权利要求10所述核酸、权利要求11所述重组载体、或权利要求12所述宿主细胞在制备治疗和/或预防新型冠状病毒的药物中的应用。
  15. 一种制备权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白的方法，其包括：培养权利要求12所述的宿主细胞，从培养产物中分离纯化获得所述多价结合蛋白。
  16. 一种治疗新型冠状病毒疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白、权利要求8所述融合蛋白、权利要求9所述缀合物、权利要求10所述核酸、权利要求11所述重组载体、或权利要求12所述宿主细胞。
  17. 用作药物的权利要求1至7任一项所述多价结合蛋白、权利要求8所述 融合蛋白、权利要求9所述缀合物、权利要求10所述核酸、权利要求11所述重组载体、或权利要求12所述宿主细胞；可选的，所述药物用于治疗和/或预防新型冠状病毒引起的疾病。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117327174A (zh) * 2022-06-24 2024-01-02 广东菲鹏制药股份有限公司 抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111358943A (zh) * 2020-03-03 2020-07-03 重庆医科大学附属永川医院 一种新冠病毒的双靶向免疫增强型多价疫苗及其制备方法
CN112707968A (zh) * 2020-12-17 2021-04-27 江苏普瑞康生物医药科技有限公司 一种用于检测新冠病毒中和抗体的重组的受体结合蛋白、重组的受体蛋白
CN113018427A (zh) * 2021-03-10 2021-06-25 江苏健安生物科技有限公司 基于新冠病毒中和抗原表位的多价融合蛋白疫苗
WO2021170113A1 (zh) * 2020-02-29 2021-09-02 南京金斯瑞生物科技有限公司 ACE-2-Fc融合蛋白治疗冠状病毒的方法
WO2022032660A1 (zh) * 2020-08-14 2022-02-17 武汉友微生物技术有限公司 新型冠状病毒rbd融合蛋白
CN114106162A (zh) * 2020-08-28 2022-03-01 安源医药科技（上海）有限公司 一种新型冠状病毒Spike蛋白抗体及其用途
CN114349851A (zh) * 2021-12-22 2022-04-15 上海纳为生物技术有限公司 新冠病毒中和抗体及其制备方法和应用
CN115057938A (zh) * 2022-06-24 2022-09-16 广东菲鹏制药股份有限公司 抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL377611A1 (pl) * 2002-12-20 2006-02-06 Biogen Idec Ma Inc. Czynniki dla receptora limfotoksyny beta w połączeniu z czynnikami chemioterapeutycznymi
CN108251431B (zh) * 2015-03-05 2020-12-08 北京百特美博生物科技有限公司 双载体系统及其用途
EP3944877A1 (en) * 2020-07-29 2022-02-02 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Nanobodies sars-cov2
CN114276442B (zh) * 2020-09-23 2023-05-16 深圳市因诺赛生物科技有限公司 新型冠状病毒（sars-cov-2）刺突蛋白结合分子及其应用
WO2022105772A1 (zh) * 2020-11-18 2022-05-27 三优生物医药(上海)有限公司 针对冠状病毒具有中和活性的双特异性抗体及其用途
WO2022184027A1 (zh) * 2021-03-01 2022-09-09 中国科学院微生物研究所 一种新型冠状病毒多价抗原、其制备方法和应用
CN114634556B (zh) * 2022-04-01 2023-12-19 中国科学院微生物研究所 一种新冠病毒Delta和Omicron变异株嵌合抗原、其制备方法和应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021170113A1 (zh) * 2020-02-29 2021-09-02 南京金斯瑞生物科技有限公司 ACE-2-Fc融合蛋白治疗冠状病毒的方法
CN111358943A (zh) * 2020-03-03 2020-07-03 重庆医科大学附属永川医院 一种新冠病毒的双靶向免疫增强型多价疫苗及其制备方法
WO2022032660A1 (zh) * 2020-08-14 2022-02-17 武汉友微生物技术有限公司 新型冠状病毒rbd融合蛋白
CN114106162A (zh) * 2020-08-28 2022-03-01 安源医药科技（上海）有限公司 一种新型冠状病毒Spike蛋白抗体及其用途
CN112707968A (zh) * 2020-12-17 2021-04-27 江苏普瑞康生物医药科技有限公司 一种用于检测新冠病毒中和抗体的重组的受体结合蛋白、重组的受体蛋白
CN113018427A (zh) * 2021-03-10 2021-06-25 江苏健安生物科技有限公司 基于新冠病毒中和抗原表位的多价融合蛋白疫苗
CN114349851A (zh) * 2021-12-22 2022-04-15 上海纳为生物技术有限公司 新冠病毒中和抗体及其制备方法和应用
CN115057938A (zh) * 2022-06-24 2022-09-16 广东菲鹏制药股份有限公司 抗新型冠状病毒人源化多价结合蛋白及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAO-AN YANG, YANG YIN-HUI, LI JIA-MING, LV FU-SHUANG, LIU HONG, CHANG GUO-HUI,: "Screening and epitope mapping of monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus", CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, vol. 26, no. 3, 30 March 2006 (2006-03-30), pages 215 - 219, XP093120643 *
DATABASE Protein 5 October 2022 (2022-10-05), ANONYMOUS : "Chain E, Nanobody B5 ", XP093120645, retrieved from NCBI Database accession no. 7Z1C_E *
DATABASE Protein 8 March 2021 (2021-03-08), ANONYMOUS : "immunoglobulin heavy chain variable region, partial [Homo sapiens]", XP093120633, retrieved from NCBI Database accession no. QSI98620 *

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