CN111732638B

CN111732638B - 一种针对SARS-CoV-2的疫苗

Info

Publication number: CN111732638B
Application number: CN202010632922.XA
Authority: CN
Inventors: 傅文彬; 丁珊; 高兴; 张千里; 沈琼
Original assignee: Shanghai Bowei Biotechnology Co ltd; Chongqing Bloomer Bio Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Shanghai Bowei Biotechnology Co ltd; Chongqing Bloomer Bio Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-07-02
Filing date: 2020-07-02
Publication date: 2022-01-25
Anticipated expiration: 2040-07-02
Also published as: CN111732638A

Abstract

本发明提供一种针对SARS‑CoV‑2的疫苗。本发明采用改造后的SARS‑CoV‑2的S蛋白，尤其是氨基酸序列如SEQ ID NO：2、如SEQ ID NO：3或者SEQ ID NO：4所示蛋白质用于制备疫苗制剂，具有较好的免疫原性，为治疗SARS‑CoV‑2引起的疾病提供了新的方案。

Description

一种针对SARS-CoV-2的疫苗

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域，特别是涉及一种针对SARS-CoV-2的疫苗。

背景技术

冠状病毒(coronavirus)隶属于套式病毒目(Nidovirales)的冠状病毒科(cirinaviridae)，根据基因组同源性，可将其分为4个属：α、β、γ、δ，其中β属又可分为4个系——a、b、c、 d。冠状病毒可感染多种脊椎动物，包括人、鼠、猪、蝙蝠、猫、牛、鸡等。数十年来陆续发现了多种感染人类的冠状病毒，包括上世纪60年代分离自英国的HCoV-OC43、HCoV-229E， 2002年在中国爆发的SARS-CoV，2004年出现于荷兰的HCoV-NL63，2005年分离自中国香港的 HCoV-HKU1，2012年在中东爆发的MERS-CoV。这些病毒大多引起呼吸道疾病，其中 SARS-CoV和MERS-CoV分别引发了2002-2003年的重症急性呼吸综合征和2012-2015年的中东呼吸综合征爆发性流行，死亡率分别达到10％和40％，是近年来较严重的公共卫生事件，引起了全球性的恐慌。SARS-CoV在2004年以后突然消失，目前暂无复苏流行的迹象。MERS-CoV的感染仍局限于中东地区，虽然在韩国造成过一定范围的流行，但并未造成全球性的持续性大流行。2019年底出现了一种传播能力极强的新型冠状病毒——SARS-CoV-2(2019-nCoV)，其感染后引起COVID-19，在2020年造成世界范围内的大流行。截止于2020 年5月底，全球累计感染人数超过三百万，累计死亡人数超过35万。

SARS-CoV-2与已知的SARS样冠状病毒同源性较高，同样归类于β属b系。其与源自蝙蝠的bat-SL-CoVZC45(MG772933.1)和bat-SL-CoVZXC21(MG772934.1)有88-89％的相似性，与不同来源的SARS-CoV毒株的同源性约为76-79％。此外，SARS-CoV-2感染细胞的主要细胞表面受体也与SARS-CoV一致，同样使用细胞表面的人血管紧张素转化酶(HumanAngiotensin-Converting Enzyme 2，ACE2)。

冠状病毒属于单股正链RNA(ssRNA)包膜病毒，病毒颗粒直径约60-220nm，基因组全长约30kb，是目前已知的拥有最大基因组的正链RNA病毒。其基因组可分为三个主要部分： ORF1a，ORF1b和结构蛋白区域，结构蛋白包括病毒表面刺突蛋白S(spike protein)，包膜蛋白E(Envelope protein)，膜蛋白M(Membrane protein)，核壳蛋白N(nulceocapsidphosphorprotein)。其中S蛋白组成的同源三聚体形成病毒表面的冠状刺突，负责受体结合与膜融合，对于冠状病毒感染和入侵细胞起关键作用。S蛋白是一种典型的I型病毒融合蛋白，可分为S1亚基，S2亚基，跨膜区和膜内区。S1亚基位于N端，形成刺突头部结构，包含宿主细胞受体结合区(receptor binding domain，RBD)。S2亚基位于S1亚基的C端，由一条融合肽段与两个疏水螺旋重复区(HR1，HR2)组成，是S蛋白的融合中心。

接种预防性疫苗是最有效的传染病防控手段，不过目前仍没有上市的人用冠状病毒疫苗。 SARS-CoV康复病例分析研究表明，有效的免疫保护机制主要依赖于高水平的中和抗体反应。而在治疗SARS-CoV-2感染病例的多种尝试中，康复病人的血清提供的被动免疫可达到比较好的抗病毒治疗效果。因此开发基于体液免疫的SARS-CoV-2疫苗是最有效的防控手段。

基于SARS-CoV和MERS-CoV的研究表明，S蛋白是冠状病毒的主要中和抗体识别区域，也是目前SARS-CoV疫苗、MERS-CoV疫苗和SARS-CoV-2疫苗的主要候选抗原。

目前尚未报道有疫苗用于预防SARS-CoV-2的感染。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种针对SARS-CoV-2的疫苗，用于解决现有技术中缺乏有效的SARS-CoV-2抗原制剂的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明一方面提供了一种分离的抗原肽，所述抗原肽为氨基酸序列如SEQ ID NO：1-12任一所示多肽或其保守性变异多肽。

抗原肽通过改造SARS-CoV-2中S蛋白获得，具体为S蛋白的N端和C端被截短不同长度，所述改造S蛋白包括宿主细胞受体结合区RBD。

进一步地，所述改造S蛋白选自以下任一：RBD193、RBD194、RBD219、RBD220、RBD237、 RBD258、RBD263、RBD290、RBD301、RBD333、RBD343、RBD386。

优选地，所述抗原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或者SEQ ID NO：4所示。

本领域技术人员已知，本发明所述的肽可以在氨基酸序列之间的一个或多个位置进行翻译后修饰。

发明还提供上述抗原肽的类似物。这些类似物与天然的肽差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸) 的类似物。应理解，本发明的肽并不限于上述例举的代表性的肽。

修饰(通常不改变一级结构)形式包括：体内或体外的肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的肽。这种修饰可以通过将肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的肽。

本发明的另一方面提供了分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码如上所述的抗原肽。

所述核酸可以是cDNA。所述核酸分子可以主要由编码本发明所述抗原肽的核酸序列组成，或可以仅编码本发明所述的肽。此类核酸分子可以用本领域已知的方法合成。由于遗传密码的简并性，本领域技术人员应理解，不同核酸序列的核酸分子可以编码相同的氨基酸序列。

于一实施例中，所述RBD193蛋白序列如SEQ ID NO：1所示，其DNA编码序列如SEQID NO：13所示。

于一实施例中，所述RBD194蛋白序列如SEQ ID NO：2所示，其DNA编码序列如SEQID NO：14所示。

于一实施例中，所述RBD219蛋白序列如SEQ ID NO：3所示，其DNA编码序列如SEQID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18所示。

于一实施例中，所述RBD220蛋白序列如SEQ ID NO：4所示，其DNA编码序列如SEQID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：22所示。

于一实施例中，所述RBD237蛋白序列如SEQ ID NO：5所示，其DNA编码序列如SEQID NO：23所示。

于一实施例中，所述RBD258蛋白序列如SEQ ID NO：6所示，其DNA编码序列如SEQID NO：24所示。

于一实施例中，所述RBD263蛋白序列如SEQ ID NO：7所示，其DNA编码序列如SEQID NO：25所示。

于一实施例中，所述RBD290蛋白序列如SEQ ID NO：8所示，其DNA编码序列如SEQID NO：26所示。

于一实施例中，所述RBD301蛋白序列如SEQ ID NO：9所示，其DNA编码序列如SEQID NO：27所示。

于一实施例中，所述RBD333蛋白序列如SEQ ID NO：10所示，其DNA编码序列如SEQID NO：28所示。

于一实施例中，所述RBD343蛋白序列如SEQ ID NO：11所示，其DNA编码序列如SEQID NO：29所示。

于一实施例中，所述RBD386蛋白序列如SEQ ID NO：12所示，其DNA编码序列如SEQID NO：30所示。

本发明的另一方面提供了一种用于表达针对SARS-CoV-2的抗原的表达载体，所述表达载体含有上述多核苷酸。

合适的载体是载体构建领域已知的，包括启动子的选择和其他调控元件，比如增强子元件。本发明所述的载体包括适合引入细胞的序列。比如，所述载体可以是表达载体，在该载体中，所述多肽的编码序列受到它自身顺式作用调控元件的控制，载体的设计便于宿主细胞的基因整合或基因替换等。

进一步地，所述表达载体通过质粒改造获得。

进一步地，所述质粒为pPICZαA，pPICZαB，pPICZαC，pPIC9K，pGAPZαA，pGAPZαB，pGAPZαC，pPIC6αA，pPIC6αB，pPIC6αC，pYes2/CTα-factor等酵母工程质粒。

进一步地，所述表达载体为在质粒pPICZαB的XhoI与NotI位点之间插入上述核苷酸。

进一步地，所述表达载体内含有启动子和终止子。

更进一步的，所述启动子选自AOX1，GAP，DAS，MOX，FMD，FLAD1，PEX8，YPT1， TPS1，ADH1，ADH2，PGK1，ENO，YPK1，GAL-10，CUP1，PHO5等酵母启动子，所述终止子选自AOX1(TT)，GAP(TT)，DAS(TT)，MOX(TT)，FMD(TT)，FLAD1(TT)， PEX8(TT)，YPT1(TT)，TPS1(TT)，ADH1(TT)，ADH2(TT)，PGK1(TT)，ENO(TT)， YPK1(TT)，GAL-10(TT)，CUP1(TT)，PHO5(TT)等酵母终止子。

本发明的另一方面提供了一种用于表达SARS-CoV-2抗原的表达系统，所述表达系统包括生物工程菌，所述生物工程菌中含有或者整合有上述表达载体。

进一步地，所述生物工程菌选自酵母。

更进一步地，所述酵母选自酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、脆壁克鲁维氏酵母(Kluyveromyces fragilis)、乳酸克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)，以及栗酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe) 中的任一种。

本发明的另一方面提供了一种疫苗制剂，所述疫苗制剂中含有如上所述抗原肽和佐剂。

较佳地，所述佐剂可以是氢氧化铝。

本发明的另一方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物中含有如上所述抗原肽、多核苷酸、表达载体或者表达系统。

所述药物组合物或者疫苗适用于任何适当的给药途径，如注射(包括皮下，肌肉，腹腔或静脉注射)、吸入或口服、或经鼻、或经肛门等途径。所述组合物可以通过药学领域已知的任何方法制备，例如在无菌条件下，通过将活性成分与载体或赋形剂混合。

根据用于治疗的疾病或病症、患者的个体年龄和状况等，本发明制剂的给药剂量可以在较宽的范围内变化。恰当的给药剂量将由医师最终决定。

本发明的另一方面提供了制备针对SARS-CoV-2的抗原的方法，所述方法选自以下任一：

a)利用化学合成方法合成所需抗原肽；

b)在合适的条件下培养上述生物工程菌并使其表达所述抗原肽。

进一步地，所述方法b)具体包括：

1)构建上述表达载体；

2)将所述表达载体导入生物工程菌；

3)培养生物工程菌，并收集生物工程菌表达的目的蛋白。

优选地，所述表达载体内含有编码氨基酸序列如SEQ ID NO：1-12任一项所示或其保守性变异多肽。

进一步地，所述生物工程菌选自酵母。

本发明的另一方面提供了上述抗原肽、多核苷酸、表达载体或者表达系统在制备针对 SARS-CoV-2的疫苗制剂中的应用。

本发明的另一方面提供了如上所述抗原肽在制备针对SARS-CoV-2的抗体中的应用。

如上所述，本发明具有以下有益效果：

本发明方法制备的SARS-CoV-2重组疫苗抗原具有正确的空间结构，可结合SARS-CoV-2 的受体ACE2；经动物实验验证含有本发明方法制备的SARS-CoV-2重组疫苗制剂具有较好的免疫原性，可诱导产生特异性抗体。

附图说明

图1显示为质粒pPICZαB结构示意图。

图2-1显示为质粒RBD193-pPICZαB结构示意图。

图2-2显示为质粒RBD194-pPICZαB结构示意图。

图2-3显示为质粒RBD219-1-pPICZαB结构示意图。

图2-4显示为质粒RBD219-2-pPICZαB结构示意图。

图2-5显示为质粒RBD219-3-pPICZαB结构示意图。

图2-6显示为质粒RBD219-4-pPICZαB结构示意图。

图2-7显示为质粒RBD220-1-pPICZαB结构示意图。

图2-8显示为质粒RBD220-2-pPICZαB结构示意图。

图2-9显示为质粒RBD220-3-pPICZαB结构示意图。

图2-10显示为质粒RBD220-4-pPICZαB结构示意图。

图2-11显示为质粒RBD237-pPICZαB结构示意图。

图2-12显示为质粒RBD258-pPICZαB结构示意图。

图2-13显示为质粒RBD263-pPICZαB结构示意图。

图2-14显示为质粒RBD290-pPICZαB结构示意图。

图2-15显示为质粒RBD301-pPICZαB结构示意图。

图2-16显示为质粒RBD333-pPICZαB结构示意图。

图2-17显示为质粒RBD343-pPICZαB结构示意图。

图2-18显示为质粒RBD386-pPICZαB结构示意图。

图3显示为SDS-PAGE鉴定RBD193酵母分泌表达，1:Marker；2～5:RBD193。

图4显示为SDS-PAGE鉴定RBD194、RBD220-1、RBD220-2、RBD220-3、RBD220-4 酵母分泌表达，1:Marker；2:RBD194；3:RBD220-1；4:RBD220-2；5:RBD2203；6:RBD220-4。

图5-1显示为SDS-PAGE鉴定RBD219-1、RBD219-2、RBD219-3、RBD219-4酵母分泌表达，1:Marker；2-5:RBD219-1；6-7:RBD219-2；8:X33(阴性对照)。

图5-2显示为SDS-PAGE鉴定RBD219-1、RBD219-2、RBD219-3、RBD219-4酵母分泌表达，9:Marker；10-12:RBD219-3；13-15:RBD219-4；16:X33(阴性对照)。

图6显示为SDS-PAGE鉴定RBD237、RBD263酵母分泌表达，1:Marker；2-5:RBD237；6-9: RBD263。

图7显示为SDS-PAGE鉴定RBD258、RBD290酵母分泌表达，1:Marker；2-5:RBD258；6-9: RBD290。

图8显示为SDS-PAGE鉴定RBD301、RBD333酵母分泌表达，1,3-5:RBD301；2:Marker；6-9:RBD333。

图9显示为SDS-PAGE鉴定RBD343、RBD386酵母分泌表达，1-2,4-5:RBD343；3:Marker； 6-9:RBD386。

图10显示为SDS-PAGE鉴定N端和C端截短不同长度的S蛋白酵母分泌表达，1:Marker； 2:RBD193；3:RBD194；4:RBD219-2；5:RBD220-2；6:RBD237；7:RBD258；8:RBD270；9:RBD301；10:RBD333。

图11显示为WB鉴定N端和C端截短不同长度的S蛋白酵母分泌表达，1:Marker；2:RBD193；3:RBD194；4:RBD219；5:RBD220；6:RBD237；7:RBD258；8:RBD270；9:RBD301； 10:RBD333。

图12显示为SDS鉴定RBD194发酵表达，1:Marker；2:诱导0小时；3:诱导12小时；4:诱导24小时；5:诱导36小时；6:诱导48小时；7:诱导60小时.。

图13显示为SDS鉴定RBD219发酵表达，1:Marker；2:诱导0小时；3:诱导12小时；4:诱导24小时；5:诱导36小时；6:诱导48小时；7:诱导60小时。

图14显示为SDS鉴定RBD220发酵表达，1:Marker；2:诱导0小时；3:诱导12小时；4:诱导24小时；5:诱导36小时；6:诱导48小时；7:诱导60小时。

图15显示为SDS鉴定RBD194、RBD219、RBD220纯化样品，1:Marker；2:RBD220(2ug)；3:RBD220(5ug)；4:RBD220(10ug)；5:RBD219(2ug)；6:RBD219(5ug)；7:RBD219(10ug)；8:RBD194(2ug)；9:RBD194(5ug)；10:RBD194(10ug)。

图16显示为WB鉴定RBD194、RBD219、RBD220纯化样品，1:Marker；2-3:X33破菌上清；4:RBD219；5:RBD194；6:RBD220。

图17显示为RBD194、RBD219、RBD220纯化样品体外受体结合能力检测。

图18显示为RBD194、RBD219、RBD220纯化样品中和单抗结合能力检测，1A:RBD220；1B:RBD219；1C:RBD194；2A:RBD-His(南京金斯瑞生物)；2B:RBD-Fc(北京义翘神州) 图。

图19显示为RBD194、RBD219、RBD220疫苗制剂免疫Balb/c小鼠后诱导的抗体滴度。

具体实施方式

本发明根据酵母密码子偏爱性合成编码N端和C端截短不同长度的S蛋白的DNA序列，合成所得的基因连接到毕赤酵母表达载体上，得到表达N端和C端截短不同长度的S蛋白的表达质粒，重组毕赤酵母质粒属于分泌表达型质粒。重组质粒通过基因工程方法整合到毕赤酵母基因组中，经筛选得到表达菌株，以此重组表达菌株为种子，表达得到N端和C端截短不同长度的S蛋白。通过柱层析等纯化方法获得高纯度的N端和C端截短不同长度的S蛋白，纯化后的N端和C端截短不同长度的S蛋白吸附适当的佐剂(如铝佐剂)成为重组疫苗制剂。

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。

实施例1 N端和C端截短不同长度的S蛋白工程菌株构建

1.表达基因的选择与密码子的优化设计

编码N端和C端截短不同长度的S蛋白的氨基酸序列参照中国株 2019-nCoV_HKU-SZ-002a_2020(GenBank登录号MN938384.1)，RBD193蛋白序列如SEQ ID NO：1所示；RBD194蛋白序列如SEQ ID NO：2所示；RBD219蛋白序列如SEQ ID NO：3 所示；RBD220蛋白序列如SEQ ID NO：4所示；RBD237蛋白序列如SEQ ID NO：5所示； RBD258蛋白序列如SEQ ID NO：6所示；RBD263蛋白序列如SEQ ID NO：7所示；RBD290 蛋白序列如SEQ ID NO：8所示；RBD301蛋白序列如SEQ ID NO：9所示；RBD333蛋白序列如SEQ ID NO：10所示；RBD343蛋白序列如SEQ ID NO：11所示；RBD386蛋白序列如 SEQ ID NO：12所示。

对SEQ ID NO:1-12所示氨基酸序列的对应DNA编码序列进行改造，密码子尽可能采用酵母表系统中使用频率较高的密码子，同时避免了可能影响表达的转录因子结合区、重复序列和RNA高级结构。密码子优化后得到的RBD193 DNA编码序列如SEQ ID NO：13所示；RBD194 DNA编码序列如SEQ ID NO：14所示；RBD219 DNA编码序列如SEQ ID NO：15 所示、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18所示；RBD220 DNA编码序列如 SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：22所示；RBD237 DNA 编码序列如SEQ IDNO：23所示；RBD258 DNA编码序列如SEQ ID NO：24所示；RBD263 DNA编码序列如SEQ ID NO：25所示；RBD290 DNA编码序列如SEQ ID NO：26所示； RBD301 DNA编码序列如SEQ ID NO：27所示；RBD333 DNA编码序列如SEQ ID NO：28 所示；RBD343 DNA编码序列如SEQ ID NO：29所示；RBD386 DNA编码序列如SEQ ID NO： 30所示。

SED ID NO：1

ITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFT NVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLY RLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSF ELLHAPATV

SED ID NO：2

NITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCF TNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYL YRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLS FELLHAPATV

SED ID NO：3

ITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFT NVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLY RLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSF ELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTG

SED ID NO：4

NITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCF TNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYL YRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLS FELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTG

SED ID NO：5

AVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVY AWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPG QTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQ AGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATV

SED ID NO：6

NITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCF TNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYL YRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLS FELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAV RDPQTLEILDIT

SED ID NO：7

AVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVY AWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPG QTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQ AGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVK NKCVNFNFNGLTGTG

SED ID NO：8

NITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCF TNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYL YRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLS FELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAV RDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEV

SED ID NO：9

AVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVY AWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPG QTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQ AGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVK NKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDIT

SED ID NO：10

AVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVY AWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPG QTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQ AGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVK NKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVI TPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEV

SED ID NO：11

NITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLC FTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNY LYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVV LSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTT DAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRV YSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICAS

SED ID NO：12

AVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASV YAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIA PGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEI YQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTN LVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGG VSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICAS

SED ID NO：13

ATCACCAACTTGTGTCCATTCGGTGAGGTTTTCAACGCCACTAGATTCGCTTCTGTTTAC GCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCTAACTGTGTCGCCGACTACTCTGTCTTGTACAACTC CGCCTCTTTCTCCACTTTCAAGTGTTACGGTGTTTCTCCAACTAAGTTGAACGATCTTTG CTTCACCAATGTCTACGCTGACTCTTTCGTTATCAGAGGTGACGAAGTCAGACAAATCG CTCCAGGTCAGACTGGAAAGATTGCCGACTACAACTACAAGTTGCCAGACGATTTCAC TGGTTGCGTTATCGCTTGGAACTCCAACAATTTGGACTCTAAGGTTGGTGGAAACTACA ACTATTTGTACAGATTGTTCAGAAAGTCTAACTTGAAGCCTTTCGAGAGAGACATCTCT ACTGAAATCTACCAGGCCGGTTCTACTCCTTGTAACGGAGTTGAAGGTTTCAACTGTTA CTTCCCATTGCAATCCTACGGTTTCCAGCCAACCAATGGTGTTGGATACCAACCATACA GAGTTGTCGTTTTGTCCTTTGAACTTTTGCACGCTCCAGCCACTGTT

SED ID NO：14

AACATCACCAACTTGTGTCCATTCGGTGAGGTTTTCAACGCCACTAGATTCGCTTCTGT TTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCTAACTGTGTCGCCGACTACTCTGTCTTGTACA ACTCCGCCTCTTTCTCCACTTTCAAGTGTTACGGTGTTTCTCCAACTAAGTTGAACGAT CTTTGCTTCACCAATGTCTACGCTGACTCTTTCGTTATCAGAGGTGACGAAGTCAGACA AATCGCTCCAGGTCAGACTGGAAAGATTGCCGACTACAACTACAAGTTGCCAGACGAT TTCACTGGTTGCGTTATCGCTTGGAACTCCAACAATTTGGACTCTAAGGTTGGTGGAAA CTACAACTATTTGTACAGATTGTTCAGAAAGTCTAACTTGAAGCCTTTCGAGAGAGACA TCTCTACTGAAATCTACCAGGCCGGTTCTACTCCTTGTAACGGAGTTGAAGGTTTCAAC TGTTACTTCCCATTGCAATCCTACGGTTTCCAGCCAACCAATGGTGTTGGATACCAACCA TACAGAGTTGTCGTTTTGTCCTTTGAACTTTTGCACGCTCCAGCCACTGTT

SED ID NO：15

ATCACCAACTTGTGTCCATTCGGTGAGGTTTTCAACGCCACTAGATTCGCTTCTGTTTAC GCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCTAACTGTGTCGCCGACTACTCTGTCTTGTACAACTC CGCCTCTTTCTCCACTTTCAAGTGTTACGGTGTTTCTCCAACTAAGTTGAACGATCTTTG CTTCACCAATGTCTACGCTGACTCTTTCGTTATCAGAGGTGACGAAGTCAGACAAATCG CTCCAGGTCAGACTGGAAAGATTGCCGACTACAACTACAAGTTGCCAGACGATTTCAC TGGTTGCGTTATCGCTTGGAACTCCAACAATTTGGACTCTAAGGTTGGTGGAAACTACA ACTATTTGTACAGATTGTTCAGAAAGTCTAACTTGAAGCCTTTCGAGAGAGACATCTCT ACTGAAATCTACCAGGCCGGTTCTACTCCTTGTAACGGAGTTGAAGGTTTCAACTGTTA CTTCCCATTGCAATCCTACGGTTTCCAGCCAACCAATGGTGTTGGATACCAACCATACA GAGTTGTCGTTTTGTCCTTTGAACTTTTGCACGCTCCAGCCACTGTTTGTGGTCCTAAGAAGTCTACTAACTTGGTTAAGAACAAGTGTGTCAACTTTAACTTCAATGGTTTGACTGG AACTGGT

SED ID NO：16

ATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAGATTCGCCTCCGTTTA CGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACTCGGTTTTGTACAAC TCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACCAAGTTGAACGACCT GTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGACGAGGTGAGACAG ATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAAGCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCAAGGTCGGAGGCAA TTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCCATTCGAGAGAGAC ATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGCGTCGAAGGTTTCA ACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGGTGTCGGCTACCAG CCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTGCTACTGTCTGCGG ACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTTCAACTTCAACGG ATTGACTGGCACCGGT

SED ID NO：17

ATCACTAACTTGTGCCCTTTCGGAGAAGTCTTCAACGCTACTAGATTCGCCTCTGTTTAC GCCTGGAACCGTAAGAGAATCTCTAACTGCGTTGCCGACTACTCTGTTTTGTACAACTC TGCCTCCTTCTCTACTTTCAAGTGTTACGGTGTTTCTCCTACCAAGTTGAACGACTTGTG TTTCACTAACGTTTACGCTGACTCCTTCGTCATTAGAGGAGACGAGGTTAGACAGATCG CTCCTGGTCAGACTGGCAAGATCGCTGATTACAACTATAAGTTGCCTGATGACTTCACC GGTTGTGTCATCGCTTGGAACTCTAACAACTTGGACTCCAAGGTTGGAGGTAACTACA ACTACTTGTACAGACTTTTCAGAAAGTCTAACTTGAAGCCATTTGAAAGAGACATCTCT ACTGAGATCTACCAGGCTGGTTCCACTCCATGCAACGGTGTTGAGGGTTTCAACTGTTA CTTCCCTTTGCAGTCTTACGGTTTCCAGCCTACTAACGGAGTTGGTTACCAGCCTTACA GAGTCGTTGTCTTGTCTTTCGAGTTGCTTCACGCCCCTGCAACTGTTTGCGGACCAAAGAAGTCCACTAACTTGGTTAAGAACAAGTGTGTTAACTTCAACTTCAACGGATTGACTG GTACTGGT

SED ID NO：18

ATCACTAACTTGTGCCCATTCGGCGAAGTTTTCAACGCCACCAGATTCGCATCTGTCTA CGCTTGGAACAGAAAGCGTATCTCGAACTGTGTTGCCGACTACTCCGTTCTTTACAACT CCGCTTCTTTCTCGACCTTCAAGTGCTACGGAGTTTCTCCTACTAAGTTGAACGACCTC TGTTTCACTAACGTCTACGCCGATTCTTTCGTCATCAGAGGTGACGAAGTTAGACAGAT TGCCCCTGGACAAACTGGCAAGATCGCTGATTACAACTACAAGTTGCCAGACGACTTC ACTGGCTGTGTTATCGCCTGGAACTCCAATAACCTTGACTCTAAGGTCGGTGGAAACTA TAACTACTTGTACAGATTGTTCAGAAAATCCAACCTGAAGCCTTTCGAGAGAGACATTT CCACTGAGATCTACCAAGCTGGATCTACCCCTTGTAACGGTGTCGAGGGCTTCAATTGC TACTTCCCATTGCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACTAACGGTGTTGGTTACCAACCATAC AGAGTGGTTGTCTTGTCCTTCGAGTTGCTCCACGCTCCAGCTACCGTCTGTGGTCCAAAGAAATCCACCAACTTGGTCAAGAACAAGTGCGTCAATTTCAACTTCAACGGTCTTACC GGTACTGGA

SED ID NO：19

AACATCACCAACTTGTGTCCATTCGGTGAGGTTTTCAACGCCACTAGATTCGCTTCTGT TTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCTAACTGTGTCGCCGACTACTCTGTCTTGTACA ACTCCGCCTCTTTCTCCACTTTCAAGTGTTACGGTGTTTCTCCAACTAAGTTGAACGAT CTTTGCTTCACCAATGTCTACGCTGACTCTTTCGTTATCAGAGGTGACGAAGTCAGACA AATCGCTCCAGGTCAGACTGGAAAGATTGCCGACTACAACTACAAGTTGCCAGACGAT TTCACTGGTTGCGTTATCGCTTGGAACTCCAACAATTTGGACTCTAAGGTTGGTGGAAA CTACAACTATTTGTACAGATTGTTCAGAAAGTCTAACTTGAAGCCTTTCGAGAGAGACA TCTCTACTGAAATCTACCAGGCCGGTTCTACTCCTTGTAACGGAGTTGAAGGTTTCAAC TGTTACTTCCCATTGCAATCCTACGGTTTCCAGCCAACCAATGGTGTTGGATACCAACCA TACAGAGTTGTCGTTTTGTCCTTTGAACTTTTGCACGCTCCAGCCACTGTTTGTGGTCCTAAGAAGTCTACTAACTTGGTTAAGAACAAGTGTGTCAACTTTAACTTCAATGGTTTGA CTGGAACTGGT

SED ID NO：20

AACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAGATTCGCCTCCGT TTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACTCGGTTTTGTAC AACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACCAAGTTGAACGA CCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGACGAGGTGAGA CAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAAGCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCAAGGTCGGAGG CAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCCATTCGAGAGA GACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGCGTCGAAGGTT TCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGGTGTCGGCTAC CAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTGCTACTGTCTG CGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTTCAACTTCAA CGGATTGACTGGCACCGGT

SED ID NO：21

AACATCACTAACTTGTGCCCTTTCGGAGAAGTCTTCAACGCTACTAGATTCGCCTCTGT TTACGCCTGGAACCGTAAGAGAATCTCTAACTGCGTTGCCGACTACTCTGTTTTGTACA ACTCTGCCTCCTTCTCTACTTTCAAGTGTTACGGTGTTTCTCCTACCAAGTTGAACGACT TGTGTTTCACTAACGTTTACGCTGACTCCTTCGTCATTAGAGGAGACGAGGTTAGACAG ATCGCTCCTGGTCAGACTGGCAAGATCGCTGATTACAACTATAAGTTGCCTGATGACTT CACCGGTTGTGTCATCGCTTGGAACTCTAACAACTTGGACTCCAAGGTTGGAGGTAAC TACAACTACTTGTACAGACTTTTCAGAAAGTCTAACTTGAAGCCATTTGAAAGAGACAT CTCTACTGAGATCTACCAGGCTGGTTCCACTCCATGCAACGGTGTTGAGGGTTTCAACT GTTACTTCCCTTTGCAGTCTTACGGTTTCCAGCCTACTAACGGAGTTGGTTACCAGCCTT ACAGAGTCGTTGTCTTGTCTTTCGAGTTGCTTCACGCCCCTGCAACTGTTTGCGGACCAAAGAAGTCCACTAACTTGGTTAAGAACAAGTGTGTTAACTTCAACTTCAACGGATTGA CTGGTACTGGT

SED ID NO：22

AACATCACTAACTTGTGCCCATTCGGCGAAGTTTTCAACGCCACCAGATTCGCATCTGT CTACGCTTGGAACAGAAAGCGTATCTCGAACTGTGTTGCCGACTACTCCGTTCTTTACA ACTCCGCTTCTTTCTCGACCTTCAAGTGCTACGGAGTTTCTCCTACTAAGTTGAACGAC CTCTGTTTCACTAACGTCTACGCCGATTCTTTCGTCATCAGAGGTGACGAAGTTAGACA GATTGCCCCTGGACAAACTGGCAAGATCGCTGATTACAACTACAAGTTGCCAGACGAC TTCACTGGCTGTGTTATCGCCTGGAACTCCAATAACCTTGACTCTAAGGTCGGTGGAAA CTATAACTACTTGTACAGATTGTTCAGAAAATCCAACCTGAAGCCTTTCGAGAGAGACA TTTCCACTGAGATCTACCAAGCTGGATCTACCCCTTGTAACGGTGTCGAGGGCTTCAAT TGCTACTTCCCATTGCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACTAACGGTGTTGGTTACCAACCA TACAGAGTGGTTGTCTTGTCCTTCGAGTTGCTCCACGCTCCAGCTACCGTCTGTGGTCCAAAGAAATCCACCAACTTGGTCAAGAACAAGTGCGTCAATTTCAACTTCAACGGTCTT ACCGGTACTGGA

SED ID NO：23

GCCGTTGACTGTGCACTGGATCCTCTGTCGGAGACCAAGTGCACCCTGAAGTCTTTCA CCGTCGAGAAGGGTATCTACCAGACCTCCAACTTCAGAGTTCAGCCTACCGAGTCTATC GTGAGATTCCCAAACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAG ATTCGCCTCCGTTTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACT CGGTTTTGTACAACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACC AAGTTGAACGACCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGA CGAGGTGAGACAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAA GCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCA AGGTCGGAGGCAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCC ATTCGAGAGAGACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGC GTCGAAGGTTTCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGG TGTCGGCTACCAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTG CTACTGTC

SED ID NO：24

AACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAGATTCGCCTCCGT TTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACTCGGTTTTGTAC AACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACCAAGTTGAACGA CCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGACGAGGTGAGA CAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAAGCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCAAGGTCGGAGG CAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCCATTCGAGAGA GACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGCGTCGAAGGTT TCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGGTGTCGGCTAC CAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTGCTACTGTCTG CGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTTCAACTTCAA CGGATTGACTGGCACCGGTGTCCTCACTGAATCTAACAAGAAGTTCCTGCCTTTCCAGC AATTCGGAAGAGACATTGCCGACACTACCGACGCTGTTAGAGACCCTCAGACCCTTGA GATCCTGGACATTACC

SED ID NO：25

GCCGTTGACTGTGCACTGGATCCTCTGTCGGAGACCAAGTGCACCCTGAAGTCTTTCA CCGTCGAGAAGGGTATCTACCAGACCTCCAACTTCAGAGTTCAGCCTACCGAGTCTATC GTGAGATTCCCAAACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAG ATTCGCCTCCGTTTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACT CGGTTTTGTACAACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACC AAGTTGAACGACCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGA CGAGGTGAGACAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAA GCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCA AGGTCGGAGGCAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCC ATTCGAGAGAGACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGC GTCGAAGGTTTCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGG TGTCGGCTACCAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTG CTACTGTCTGCGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTT CAACTTCAACGGATTGACTGGCACCGGT

SED ID NO：26

AACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAGATTCGCCTCCGT TTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACTCGGTTTTGTAC AACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACCAAGTTGAACGA CCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGACGAGGTGAGA CAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAAGCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCAAGGTCGGAGG CAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCCATTCGAGAGA GACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGCGTCGAAGGTT TCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGGTGTCGGCTAC CAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTGCTACTGTCTG CGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTTCAACTTCAA CGGATTGACTGGCACCGGTGTCCTCACTGAATCTAACAAGAAGTTCCTGCCTTTCCAGC AATTCGGAAGAGACATTGCCGACACTACCGACGCTGTTAGAGACCCTCAGACCCTTGA GATCCTGGACATTACCCCTTGTTCCTTCGGAGGCGTTTCTGTGATCACCCCTGGTACTAA CACCTCCAACCAGGTTGCAGTTCTGTACCAGGACGTCAACTGCACCGAGGTG

SED ID NO：27

GCCGTTGACTGTGCACTGGATCCTCTGTCGGAGACCAAGTGCACCCTGAAGTCTTTCAC CGTCGAGAAGGGTATCTACCAGACCTCCAACTTCAGAGTTCAGCCTACCGAGTCTATCG TGAGATTCCCAAACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAGAT TCGCCTCCGTTTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACTCG GTTTTGTACAACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACCAAG TTGAACGACCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGACGA GGTGAGACAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAAGCTG CCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCAAGGT CGGAGGCAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCCATTCG AGAGAGACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGCGTCGAAGGTTTCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGGTGTCGGC TACCAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTGCTACTGTC TGCGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTTCAACTTCA ACGGATTGACTGGCACCGGTGTCCTCACTGAATCTAACAAGAAGTTCCTGCCTTTCCAG CAATTCGGAAGAGACATTGCCGACACTACCGACGCTGTTAGAGACCCTCAGACCCTTGAGATCCTGGACATTACC

SED ID NO：28

GCCGTTGACTGTGCACTGGATCCTCTGTCGGAGACCAAGTGCACCCTGAAGTCTTTCA CCGTCGAGAAGGGTATCTACCAGACCTCCAACTTCAGAGTTCAGCCTACCGAGTCTATC GTGAGATTCCCAAACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAG ATTCGCCTCCGTTTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACT CGGTTTTGTACAACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACC AAGTTGAACGACCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGA CGAGGTGAGACAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAA GCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCA AGGTCGGAGGCAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCC ATTCGAGAGAGACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGC GTCGAAGGTTTCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGG TGTCGGCTACCAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTG CTACTGTCTGCGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTT CAACTTCAACGGATTGACTGGCACCGGTGTCCTCACTGAATCTAACAAGAAGTTCCTG CCTTTCCAGCAATTCGGAAGAGACATTGCCGACACTACCGACGCTGTTAGAGACCCTC AGACCCTTGAGATCCTGGACATTACCCCTTGTTCCTTCGGAGGCGTTTCTGTGATCACC CCTGGTACTAACACCTCCAACCAGGTTGCAGTTCTGTACCAGGACGTCAACTGCACCG AGGTG

SED ID NO：29

AACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAGATTCGCCTCCGT TTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACTCGGTTTTGTAC AACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACCAAGTTGAACGA CCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGACGAGGTGAGA CAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAAGCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCAAGGTCGGAGG CAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCCATTCGAGAGA GACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGCGTCGAAGGTT TCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGGTGTCGGCTAC CAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTGCTACTGTCTG CGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTTCAACTTCAA CGGATTGACTGGCACCGGTGTCCTCACTGAATCTAACAAGAAGTTCCTGCCTTTCCAGC AATTCGGAAGAGACATTGCCGACACTACCGACGCTGTTAGAGACCCTCAGACCCTTGA GATCCTGGACATTACCCCTTGTTCCTTCGGAGGCGTTTCTGTGATCACCCCTGGTACTAA CACCTCCAACCAGGTTGCAGTTCTGTACCAGGACGTCAACTGCACCGAGGTGCCAGTT GCCATCCACGCTGACCAGTTGACCCCAACCTGGAGAGTCTACTCGACCGGTTCTAACG TGTTCCAGACCAGAGCTGGCTGCCTGATTGGTGCCGAGCACGTTAACAACTCCTACGA GTGCGACATCCCTATTGGCGCTGGTATCTGCGCATCC

SED ID NO：30

GCCGTTGACTGTGCACTGGATCCTCTGTCGGAGACCAAGTGCACCCTGAAGTCTTTCA CCGTCGAGAAGGGTATCTACCAGACCTCCAACTTCAGAGTTCAGCCTACCGAGTCTATC GTGAGATTCCCAAACATCACTAACCTGTGCCCTTTCGGCGAGGTCTTCAACGCTACCAG ATTCGCCTCCGTTTACGCTTGGAACAGAAAGAGAATCTCCAACTGCGTTGCCGACTACT CGGTTTTGTACAACTCTGCTTCCTTCAGCACCTTCAAGTGCTACGGCGTTTCCCCTACC AAGTTGAACGACCTGTGTTTCACCAACGTTTACGCCGACTCCTTCGTTATCAGAGGTGA CGAGGTGAGACAGATCGCTCCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAACTACAA GCTGCCTGATGACTTCACCGGATGTGTCATTGCTTGGAACTCTAACAACCTGGACTCCA AGGTCGGAGGCAATTACAACTACTTGTACAGACTGTTCAGAAAGTCGAACCTTAAGCC ATTCGAGAGAGACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCTGGTTCTACGCCATGCAACGGC GTCGAAGGTTTCAACTGCTACTTCCCTCTTCAGTCTTACGGATTCCAGCCTACCAACGG TGTCGGCTACCAGCCTTACAGAGTTGTGGTCTTGTCTTTCGAGCTGTTGCACGCCCCTG CTACTGTCTGCGGACCAAAGAAGTCGACCAACCTGGTGAAGAACAAGTGCGTTAACTT CAACTTCAACGGATTGACTGGCACCGGTGTCCTCACTGAATCTAACAAGAAGTTCCTG CCTTTCCAGCAATTCGGAAGAGACATTGCCGACACTACCGACGCTGTTAGAGACCCTC AGACCCTTGAGATCCTGGACATTACCCCTTGTTCCTTCGGAGGCGTTTCTGTGATCACC CCTGGTACTAACACCTCCAACCAGGTTGCAGTTCTGTACCAGGACGTCAACTGCACCG AGGTGCCAGTTGCCATCCACGCTGACCAGTTGACCCCAACCTGGAGAGTCTACTCGAC CGGTTCTAACGTGTTCCAGACCAGAGCTGGCTGCCTGATTGGTGCCGAGCACGTTAAC AACTCCTACGAGTGCGACATCCCTATTGGCGCTGGTATCTGCGCATCC

2.N端和C端截短不同长度的S蛋白重组表达载体的构建

设计5’端和3’端分别含有XhoI酶切位点和NotI酶切位点的RBD193、RBD194、RBD219、 RBD220、RBD237、RBD258、RBD263、RBD290、RBD301、RBD333、RBD343、RBD386 表达序列并进行全基因合成，获得SEQ ID NO:13-30所示序列的核苷酸片段。

采用XhoI酶和NotI酶的混合酶酶切处理RBD193、RBD194、RBD219、RBD220、RBD237、RBD258、RBD263、RBD290、RBD301、RBD333、RBD343、RBD386表达序列与pPICZαB 质粒(购自Thermo Fishier)，酶切后的片段由T4 DNA连接酶连接，获得的重组质粒转化大肠杆菌DH5α菌株，37℃过夜倒置培养。挑取部分克隆抽提质粒，以XhoI酶和NotI酶切鉴定，构建成功的重组质粒分别命名为RBD193-pPICZαB、RBD194-pPICZαB、 RBD219-1-pPICZαB、RBD219-2-pPICZαB、RBD219-3-pPICZαB、RBD219-4-pPICZαB、 RBD220-1-pPICZαB、RBD220-2-pPICZαB、RBD220-3-pPICZαB、RBD220-4-pPICZαB、 RBD237-pPICZαB、RBD258-pPICZαB、RBD263-pPICZαB、RBD290-pPICZαB、 RBD301-pPICZαB、RBD333-pPICZαB、RBD343-pPICZαB和RBD386-pPICZαB(图2)。

3.N端和C端截短不同长度的S蛋白重组表达菌株构建

毕赤酵母X33菌株购自Thermo Fishier。将重组构建的RBD193-pPICZαB、 RBD194-pPICZαB、RBD219-1-pPICZαB、RBD219-2-pPICZαB、RBD219-3-pPICZαB、 RBD219-4-pPICZαB、RBD220-1-pPICZαB、RBD220-2-pPICZαB、RBD220-3-pPICZαB、 RBD220-4-pPICZαB、RBD237-pPICZαB、RBD258-pPICZαB、RBD263-pPICZαB、 RBD290-pPICZαB、RBD301-pPICZαB、RBD333-pPICZαB、RBD343-pPICZαB和 RBD386-pPICZαB质粒分别由SacI酶线性化，电转毕赤酵母，电转条件为1500V，120Ω，50μF。电转后菌液涂布YPDS平板(200μg/ml Zeocin)，30℃倒置培养2-3天。挑取部分克隆进行表达验证，分别使用SDS-PAGE和WB验证培养基上清中重组蛋白的表达情况。构建得到的工程菌株分别命名为RBD193-pPICZαB-X33、RBD194-pPICZαB-X33、RBD219-1-pPICZαB-X33、 RBD219-2-pPICZαB-X33、RBD219-3-pPICZαB-X33、RBD219-4-pPICZαB-X33、 RBD220-1-pPICZαB-X33、RBD220-2-pPICZαB-X33、RBD220-3-pPICZαB-X33、RBD220-4-pPICZαB-X33、RBD237-pPICZαB-X33、RBD258-pPICZαB-X33、 RBD263-pPICZαB-X33、RBD290-pPICZαB-X33、RBD301-pPICZαB-X33、 RBD333-pPICZαB-X33、RBD343-pPICZαB-X33和RBD386-pPICZαB-X33。

RBD193、RBD194、RBD219、RBD220的表达结果(图3-5)显示，酵母培养上清中存在明确的异源蛋白表达条带。RBD193、RBD194、RBD219、RBD220的理论分子量分别为 21.7kD、21.8kD、24.4kD、24.5kD，不过这四种蛋白的实际表达产物的分子量高于理论分子量，说明这些表达产物存在不同程度的糖基化。而不同DNA编码序列的RBD219和RBD220 的表达情况也有一定的差异，相对而言，RBD219-2和RBD220-2的表达效果最好。

相较于表达较明确的RBD193、RBD194、RBD219、RBD220，其他分子设计(RBD237、RBD258、RBD263、RBD290、RBD301、RBD333、RBD343、RBD386)的表达量较低(图 6-9)。为了对不同抗原分子表达情况进行验证比较，挑取了不同分子设计的分泌表达上清进行SDS-PAGE和WB检测。结果(图10)显示，表达情况较好的是RBD219-2和RBD220-2，其次是RBD193和RBD194。

基于上述诱导表达结果可知，不同长度的RBD分子设计的毕赤酵母分泌表达情况存在较大的差异，为了满足生产规模的新冠疫苗制备，选择表达情况较理想的RBD219、RBD220、 RBD194作为候选疫苗抗原，开展进一步的工艺研究和免疫原性验证。

实施例2 RBD194、RBD219、RBD220的制备工艺

1.RBD194、RBD219、RBD220的发酵罐培养

将甘油管保存的RBD194、RBD219、RBD220表达菌株，按1:1000比例(v/v)接种于YPG培养基中，摇瓶培养16-24小时。按1:20的比例(v/v)接种至发酵培养基(Basic salts)，通过调节转速、罐压和通气量维持溶氧值，并补加甘油使酵母菌体增长。待甘油消耗结束后，补加甲醇诱导，通过调节转速、罐压和通气量维持溶氧值，诱导60-70小时后，终止发酵。离心后取发酵上清液，用于后续纯化。取不同时间的发酵上清液进行SDS-PAGE鉴定(图 12-14)，结果显示RBD194、RBD219、RBD220的分泌表达情况随诱导时间延长而不断增加，表达量符合大规模生产需求。

2.RBD194、RBD219、RBD220的纯化

发酵上清液加入硫酸铵溶液至终浓度为2mol/L，混合均匀待层析分离。Butyl疏水层析柱先用2mol/L硫酸铵、20mmol/L Tris pH8.0缓冲液平衡后，上样并淋洗。用1mol/L硫酸铵、 20mmol/L Tris pH8.0缓冲液清洗杂蛋白，0.5mol/L硫酸铵、20mmol/L Tris pH8.0缓冲液洗脱目的蛋白，并收集用于下一步层析。G25层析柱先用20mmol/L Tris pH9.0缓冲液平衡后，上一步层析收集液上样，继续换液洗脱，并收集用于下一步层析。Q阴离子层析柱先用20mmol/L Tris pH9.0缓冲液平衡后，上一步层析收集液上样，用含0.15mol/L氯化钠的20mmol/L Tris pH9.0缓冲液洗脱目的蛋白，收集得到的目的蛋白即纯化的抗原，冻存于-80℃。并对纯化产物进行SDS-PAGE纯度鉴定(图15)、WB特异性鉴定(图16)和BCA蛋白定量。结果表明， RBD194、RBD219、RBD220纯化样品的电泳纯度>95％，工艺得率达300-500mg/L发酵上清。

实施例3 RBD194、RBD219、RBD220的受体结合性能检测

1.体外受体结合验证

以0.2μg可溶性ACE2(南京金斯瑞生物)包被96孔板，4℃放置过夜，PBST洗板5次。每孔加入封闭液(含5％奶粉的PBST)，置37℃2小时。PBST洗板5次。分别将0.05μg和0.005μg的RBD194、RBD219、RBD220样品加入酶标板，室温孵育1小时。PBST洗板5次。每孔加入 100μl1:2500稀释的SARS-CoV-2S1兔单抗(义翘神州)，室温孵育1小时。PBST洗板5次。每孔加入100μl 1:1000稀释的山羊抗兔IgG-HRP(北京鼎国)，室温孵育1小时。PBST洗板5次。每孔加入100μl新鲜配制的显色液(TMB显色)，37℃显色10分钟。每孔加入50μl 2M硫酸终止显色，振荡混匀后使用酶标仪读数，测定波长为450nm，参比波长为620nm。

检测结果显示RBD219、RBD220均表现出良好的受体结合能力，结合效果与商业化的 RBD-Fc(义翘神州)相当，可见这两种抗原蛋白很好地保留了SARS-CoV-2受体结构区域的空间结构。RBD194的受体结合能力较弱，推测其结构存在缺陷，无法模拟天然的SARS-CoV-2 受体结构区域。

2.中和单抗结合验证

裁剪合适大小的PVDF膜，用ddH₂O浸润PVDF膜和滤纸。将充分浸润的滤纸垫与PVDF膜一起放入狭缝点膜装置。联通狭缝点膜装置与真空泵，真空抽滤。每个狭缝点样100μl，PVDF 膜晾干后置于TBST溶液中漂洗5分钟，5％脱脂奶粉(TBST)封闭30分钟。将封闭号的PVDF 膜转移至一抗杂交液(SARS-CoV-2人源化中和单抗，1:2000稀释)，杂交1小时，TBST洗涤三次。将一抗杂交后的PVDF膜转移至二抗杂交液(羊抗兔，1:5000稀释)，杂交1小时，TBST洗涤三次。杂交后的PVDF膜加入显色液(TMB显色)，显色后加入ddH₂O终止反应。检测结果显示RBD194无法结合中和单抗，说明其空间结构与天然SARS-CoV-2存在差异。RBD219 和RBD220的纯化样品均可识别SARS-CoV-2中和单抗，说明这两种表达产物保留了天然 SARS-CoV-2的有效中和表位，可作为疫苗候选抗原。

实施例4 RBD194、RBD219、RBD220的免疫原性检测

1.疫苗制备

将纯化获得的RBD194、RBD219、RBD220分别吸附氢氧化铝佐剂制备获得RBD194、RBD219、RBD220疫苗成品。

2.小鼠免疫原性

取6-8周龄Balb/c雌鼠35只，随机分成7组，0天腹腔免疫，7、14天皮下注射免疫，28天采血检测抗体滴度与中和抗体滴度。7个疫苗制剂分组如下：50μg RBD194+500μg氢氧化铝，5μg RBD219+500μg氢氧化铝，50μg RBD219+500μg氢氧化铝，5μg RBD220+500μg 氢氧化铝，50μg RBD220+500μg氢氧化铝，50μg RBD219(无佐剂对照组)，500μg氢氧化铝 (铝佐剂阴性对照组)。

3.抗体滴度检测

以10μg RBD220包被96孔板，4℃放置过夜，PBST洗板5次。每孔加入封闭液(含5％奶粉的PBST)，置37℃2小时。PBST洗板5次。血清样品按2倍(或其他相应倍数)梯度进行稀释，100μl/孔加入酶标板，室温孵育1小时。PBST洗板5次。每孔加入100μl 1:5000 稀释的羊抗鼠IgG-HRP(北京鼎国)，室温孵育1小时。PBST洗板5次。每孔加入100μl新鲜配制的显色液(TMB显色)，37℃显色10分钟。每孔加入50μl 2M硫酸终止显色，振荡混匀后使用酶标仪读数，测定波长为450nm，参比波长为620nm。

检测结果(图19)显示，辅以铝佐剂的RBD219、RBD220疫苗制剂可诱导小鼠产生高水平的RBD特异性抗体反应，并且免疫反应高于RBD194疫苗组、RBD219抗原组(无氢氧化铝佐剂)和氢氧化铝组。

序列表

<110> 重庆博唯佰泰生物制药有限公司

上海博唯生物科技有限公司

<120> 一种针对SARS-CoV-2的疫苗

<160> 30

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 193

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe

1 5 10 15

Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala

20 25 30

Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys

35 40 45

Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val

50 55 60

Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala

65 70 75 80

Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp

85 90 95

Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser

100 105 110

Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser

115 120 125

Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala

130 135 140

Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro

145 150 155 160

Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro

165 170 175

Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr

180 185 190

Val

<210> 2

<211> 194

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg

1 5 10 15

Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val

20 25 30

Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys

35 40 45

Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn

50 55 60

Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile

65 70 75 80

Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro

85 90 95

Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp

100 105 110

Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys

115 120 125

Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln

130 135 140

Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln

165 170 175

Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala

180 185 190

Thr Val

<210> 3

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe

1 5 10 15

Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala

20 25 30

Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys

35 40 45

Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val

50 55 60

Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala

65 70 75 80

Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp

85 90 95

Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser

100 105 110

Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser

115 120 125

Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala

130 135 140

Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro

145 150 155 160

Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro

165 170 175

Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr

180 185 190

Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val

195 200 205

Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly

210 215

<210> 4

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg

1 5 10 15

Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val

20 25 30

Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys

35 40 45

Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn

50 55 60

Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile

65 70 75 80

Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro

85 90 95

Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp

100 105 110

Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys

115 120 125

Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln

130 135 140

Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln

165 170 175

Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala

180 185 190

Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys

195 200 205

Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly

210 215 220

<210> 5

<211> 237

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu

1 5 10 15

Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

20 25 30

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

35 40 45

Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

50 55 60

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

65 70 75 80

Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

85 90 95

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

100 105 110

Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

115 120 125

Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

130 135 140

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

145 150 155 160

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

165 170 175

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro

180 185 190

Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

195 200 205

Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

210 215 220

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val

225 230 235

<210> 6

<211> 258

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg

1 5 10 15

Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val

20 25 30

Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys

35 40 45

Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn

50 55 60

Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile

65 70 75 80

Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro

85 90 95

Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp

100 105 110

Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys

115 120 125

Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln

130 135 140

Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln

165 170 175

Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala

180 185 190

Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys

195 200 205

Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu

210 215 220

Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala

225 230 235 240

Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp

245 250 255

Ile Thr

<210> 7

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu

1 5 10 15

Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

20 25 30

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

35 40 45

Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

50 55 60

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

65 70 75 80

Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

85 90 95

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

100 105 110

Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

115 120 125

Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

130 135 140

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

145 150 155 160

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

165 170 175

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro

180 185 190

Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

195 200 205

Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

210 215 220

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

225 230 235 240

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe

245 250 255

Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly

260

<210> 8

<211> 290

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg

1 5 10 15

Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val

20 25 30

Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys

35 40 45

Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn

50 55 60

Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile

65 70 75 80

Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro

85 90 95

Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp

100 105 110

Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys

115 120 125

Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln

130 135 140

Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln

165 170 175

Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala

180 185 190

Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys

195 200 205

Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu

210 215 220

Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala

225 230 235 240

Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp

245 250 255

Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr

260 265 270

Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr

275 280 285

Glu Val

290

<210> 9

<211> 301

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu

1 5 10 15

Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

20 25 30

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

35 40 45

Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

50 55 60

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

65 70 75 80

Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

85 90 95

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

100 105 110

Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

115 120 125

Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

130 135 140

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

145 150 155 160

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

165 170 175

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro

180 185 190

Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

195 200 205

Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

210 215 220

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

225 230 235 240

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe

245 250 255

Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe

260 265 270

Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala

275 280 285

Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr

290 295 300

<210> 10

<211> 333

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu

1 5 10 15

Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

20 25 30

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

35 40 45

Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

50 55 60

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

65 70 75 80

Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

85 90 95

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

100 105 110

Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

115 120 125

Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

130 135 140

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

145 150 155 160

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

165 170 175

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro

180 185 190

Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

195 200 205

Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

210 215 220

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

225 230 235 240

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe

245 250 255

Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe

260 265 270

Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala

275 280 285

Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser

290 295 300

Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln

305 310 315 320

Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val

325 330

<210> 11

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg

1 5 10 15

Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val

20 25 30

Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys

35 40 45

Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn

50 55 60

Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile

65 70 75 80

Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro

85 90 95

Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp

100 105 110

Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys

115 120 125

Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln

130 135 140

Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln

165 170 175

Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala

180 185 190

Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys

195 200 205

Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu

210 215 220

Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala

225 230 235 240

Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp

245 250 255

Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr

260 265 270

Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr

275 280 285

Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg

290 295 300

Val Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu

305 310 315 320

Ile Gly Ala Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile

325 330 335

Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser

340

<210> 12

<211> 386

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu

1 5 10 15

Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

20 25 30

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

35 40 45

Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

50 55 60

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

65 70 75 80

Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

85 90 95

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

100 105 110

Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

115 120 125

Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

130 135 140

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

145 150 155 160

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

165 170 175

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro

180 185 190

Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

195 200 205

Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

210 215 220

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

225 230 235 240

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe

245 250 255

Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe

260 265 270

Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala

275 280 285

Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser

290 295 300

Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln

305 310 315 320

Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala

325 330 335

Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly

340 345 350

Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His

355 360 365

Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys

370 375 380

Ala Ser

385

<210> 13

<211> 579

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

atcaccaact tgtgtccatt cggtgaggtt ttcaacgcca ctagattcgc ttctgtttac 60

gcttggaaca gaaagagaat ctctaactgt gtcgccgact actctgtctt gtacaactcc 120

gcctctttct ccactttcaa gtgttacggt gtttctccaa ctaagttgaa cgatctttgc 180

ttcaccaatg tctacgctga ctctttcgtt atcagaggtg acgaagtcag acaaatcgct 240

ccaggtcaga ctggaaagat tgccgactac aactacaagt tgccagacga tttcactggt 300

tgcgttatcg cttggaactc caacaatttg gactctaagg ttggtggaaa ctacaactat 360

ttgtacagat tgttcagaaa gtctaacttg aagcctttcg agagagacat ctctactgaa 420

atctaccagg ccggttctac tccttgtaac ggagttgaag gtttcaactg ttacttccca 480

ttgcaatcct acggtttcca gccaaccaat ggtgttggat accaaccata cagagttgtc 540

gttttgtcct ttgaactttt gcacgctcca gccactgtt 579

<210> 14

<211> 582

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

aacatcacca acttgtgtcc attcggtgag gttttcaacg ccactagatt cgcttctgtt 60

tacgcttgga acagaaagag aatctctaac tgtgtcgccg actactctgt cttgtacaac 120

tccgcctctt tctccacttt caagtgttac ggtgtttctc caactaagtt gaacgatctt 180

tgcttcacca atgtctacgc tgactctttc gttatcagag gtgacgaagt cagacaaatc 240

gctccaggtc agactggaaa gattgccgac tacaactaca agttgccaga cgatttcact 300

ggttgcgtta tcgcttggaa ctccaacaat ttggactcta aggttggtgg aaactacaac 360

tatttgtaca gattgttcag aaagtctaac ttgaagcctt tcgagagaga catctctact 420

gaaatctacc aggccggttc tactccttgt aacggagttg aaggtttcaa ctgttacttc 480

ccattgcaat cctacggttt ccagccaacc aatggtgttg gataccaacc atacagagtt 540

gtcgttttgt cctttgaact tttgcacgct ccagccactg tt 582

<210> 15

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

atcaccaact tgtgtccatt cggtgaggtt ttcaacgcca ctagattcgc ttctgtttac 60

gcttggaaca gaaagagaat ctctaactgt gtcgccgact actctgtctt gtacaactcc 120

gcctctttct ccactttcaa gtgttacggt gtttctccaa ctaagttgaa cgatctttgc 180

ttcaccaatg tctacgctga ctctttcgtt atcagaggtg acgaagtcag acaaatcgct 240

ccaggtcaga ctggaaagat tgccgactac aactacaagt tgccagacga tttcactggt 300

tgcgttatcg cttggaactc caacaatttg gactctaagg ttggtggaaa ctacaactat 360

ttgtacagat tgttcagaaa gtctaacttg aagcctttcg agagagacat ctctactgaa 420

atctaccagg ccggttctac tccttgtaac ggagttgaag gtttcaactg ttacttccca 480

ttgcaatcct acggtttcca gccaaccaat ggtgttggat accaaccata cagagttgtc 540

gttttgtcct ttgaactttt gcacgctcca gccactgttt gtggtcctaa gaagtctact 600

aacttggtta agaacaagtg tgtcaacttt aacttcaatg gtttgactgg aactggt 657

<210> 16

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

atcactaacc tgtgcccttt cggcgaggtc ttcaacgcta ccagattcgc ctccgtttac 60

gcttggaaca gaaagagaat ctccaactgc gttgccgact actcggtttt gtacaactct 120

gcttccttca gcaccttcaa gtgctacggc gtttccccta ccaagttgaa cgacctgtgt 180

ttcaccaacg tttacgccga ctccttcgtt atcagaggtg acgaggtgag acagatcgct 240

ccaggacaga ccggcaagat cgcagactac aactacaagc tgcctgatga cttcaccgga 300

tgtgtcattg cttggaactc taacaacctg gactccaagg tcggaggcaa ttacaactac 360

ttgtacagac tgttcagaaa gtcgaacctt aagccattcg agagagacat ctccaccgag 420

atctaccagg ctggttctac gccatgcaac ggcgtcgaag gtttcaactg ctacttccct 480

cttcagtctt acggattcca gcctaccaac ggtgtcggct accagcctta cagagttgtg 540

gtcttgtctt tcgagctgtt gcacgcccct gctactgtct gcggaccaaa gaagtcgacc 600

aacctggtga agaacaagtg cgttaacttc aacttcaacg gattgactgg caccggt 657

<210> 17

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

atcactaact tgtgcccttt cggagaagtc ttcaacgcta ctagattcgc ctctgtttac 60

gcctggaacc gtaagagaat ctctaactgc gttgccgact actctgtttt gtacaactct 120

gcctccttct ctactttcaa gtgttacggt gtttctccta ccaagttgaa cgacttgtgt 180

ttcactaacg tttacgctga ctccttcgtc attagaggag acgaggttag acagatcgct 240

cctggtcaga ctggcaagat cgctgattac aactataagt tgcctgatga cttcaccggt 300

tgtgtcatcg cttggaactc taacaacttg gactccaagg ttggaggtaa ctacaactac 360

ttgtacagac ttttcagaaa gtctaacttg aagccatttg aaagagacat ctctactgag 420

atctaccagg ctggttccac tccatgcaac ggtgttgagg gtttcaactg ttacttccct 480

ttgcagtctt acggtttcca gcctactaac ggagttggtt accagcctta cagagtcgtt 540

gtcttgtctt tcgagttgct tcacgcccct gcaactgttt gcggaccaaa gaagtccact 600

aacttggtta agaacaagtg tgttaacttc aacttcaacg gattgactgg tactggt 657

<210> 18

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

atcactaact tgtgcccatt cggcgaagtt ttcaacgcca ccagattcgc atctgtctac 60

gcttggaaca gaaagcgtat ctcgaactgt gttgccgact actccgttct ttacaactcc 120

gcttctttct cgaccttcaa gtgctacgga gtttctccta ctaagttgaa cgacctctgt 180

ttcactaacg tctacgccga ttctttcgtc atcagaggtg acgaagttag acagattgcc 240

cctggacaaa ctggcaagat cgctgattac aactacaagt tgccagacga cttcactggc 300

tgtgttatcg cctggaactc caataacctt gactctaagg tcggtggaaa ctataactac 360

ttgtacagat tgttcagaaa atccaacctg aagcctttcg agagagacat ttccactgag 420

atctaccaag ctggatctac cccttgtaac ggtgtcgagg gcttcaattg ctacttccca 480

ttgcagtctt acggattcca gcctactaac ggtgttggtt accaaccata cagagtggtt 540

gtcttgtcct tcgagttgct ccacgctcca gctaccgtct gtggtccaaa gaaatccacc 600

aacttggtca agaacaagtg cgtcaatttc aacttcaacg gtcttaccgg tactgga 657

<210> 19

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

aacatcacca acttgtgtcc attcggtgag gttttcaacg ccactagatt cgcttctgtt 60

tacgcttgga acagaaagag aatctctaac tgtgtcgccg actactctgt cttgtacaac 120

tccgcctctt tctccacttt caagtgttac ggtgtttctc caactaagtt gaacgatctt 180

tgcttcacca atgtctacgc tgactctttc gttatcagag gtgacgaagt cagacaaatc 240

gctccaggtc agactggaaa gattgccgac tacaactaca agttgccaga cgatttcact 300

ggttgcgtta tcgcttggaa ctccaacaat ttggactcta aggttggtgg aaactacaac 360

tatttgtaca gattgttcag aaagtctaac ttgaagcctt tcgagagaga catctctact 420

gaaatctacc aggccggttc tactccttgt aacggagttg aaggtttcaa ctgttacttc 480

ccattgcaat cctacggttt ccagccaacc aatggtgttg gataccaacc atacagagtt 540

gtcgttttgt cctttgaact tttgcacgct ccagccactg tttgtggtcc taagaagtct 600

actaacttgg ttaagaacaa gtgtgtcaac tttaacttca atggtttgac tggaactggt 660

<210> 20

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

aacatcacta acctgtgccc tttcggcgag gtcttcaacg ctaccagatt cgcctccgtt 60

tacgcttgga acagaaagag aatctccaac tgcgttgccg actactcggt tttgtacaac 120

tctgcttcct tcagcacctt caagtgctac ggcgtttccc ctaccaagtt gaacgacctg 180

tgtttcacca acgtttacgc cgactccttc gttatcagag gtgacgaggt gagacagatc 240

gctccaggac agaccggcaa gatcgcagac tacaactaca agctgcctga tgacttcacc 300

ggatgtgtca ttgcttggaa ctctaacaac ctggactcca aggtcggagg caattacaac 360

tacttgtaca gactgttcag aaagtcgaac cttaagccat tcgagagaga catctccacc 420

gagatctacc aggctggttc tacgccatgc aacggcgtcg aaggtttcaa ctgctacttc 480

cctcttcagt cttacggatt ccagcctacc aacggtgtcg gctaccagcc ttacagagtt 540

gtggtcttgt ctttcgagct gttgcacgcc cctgctactg tctgcggacc aaagaagtcg 600

accaacctgg tgaagaacaa gtgcgttaac ttcaacttca acggattgac tggcaccggt 660

<210> 21

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

aacatcacta acttgtgccc tttcggagaa gtcttcaacg ctactagatt cgcctctgtt 60

tacgcctgga accgtaagag aatctctaac tgcgttgccg actactctgt tttgtacaac 120

tctgcctcct tctctacttt caagtgttac ggtgtttctc ctaccaagtt gaacgacttg 180

tgtttcacta acgtttacgc tgactccttc gtcattagag gagacgaggt tagacagatc 240

gctcctggtc agactggcaa gatcgctgat tacaactata agttgcctga tgacttcacc 300

ggttgtgtca tcgcttggaa ctctaacaac ttggactcca aggttggagg taactacaac 360

tacttgtaca gacttttcag aaagtctaac ttgaagccat ttgaaagaga catctctact 420

gagatctacc aggctggttc cactccatgc aacggtgttg agggtttcaa ctgttacttc 480

cctttgcagt cttacggttt ccagcctact aacggagttg gttaccagcc ttacagagtc 540

gttgtcttgt ctttcgagtt gcttcacgcc cctgcaactg tttgcggacc aaagaagtcc 600

actaacttgg ttaagaacaa gtgtgttaac ttcaacttca acggattgac tggtactggt 660

<210> 22

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

aacatcacta acttgtgccc attcggcgaa gttttcaacg ccaccagatt cgcatctgtc 60

tacgcttgga acagaaagcg tatctcgaac tgtgttgccg actactccgt tctttacaac 120

tccgcttctt tctcgacctt caagtgctac ggagtttctc ctactaagtt gaacgacctc 180

tgtttcacta acgtctacgc cgattctttc gtcatcagag gtgacgaagt tagacagatt 240

gcccctggac aaactggcaa gatcgctgat tacaactaca agttgccaga cgacttcact 300

ggctgtgtta tcgcctggaa ctccaataac cttgactcta aggtcggtgg aaactataac 360

tacttgtaca gattgttcag aaaatccaac ctgaagcctt tcgagagaga catttccact 420

gagatctacc aagctggatc taccccttgt aacggtgtcg agggcttcaa ttgctacttc 480

ccattgcagt cttacggatt ccagcctact aacggtgttg gttaccaacc atacagagtg 540

gttgtcttgt ccttcgagtt gctccacgct ccagctaccg tctgtggtcc aaagaaatcc 600

accaacttgg tcaagaacaa gtgcgtcaat ttcaacttca acggtcttac cggtactgga 660

<210> 23

<211> 711

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

gccgttgact gtgcactgga tcctctgtcg gagaccaagt gcaccctgaa gtctttcacc 60

gtcgagaagg gtatctacca gacctccaac ttcagagttc agcctaccga gtctatcgtg 120

agattcccaa acatcactaa cctgtgccct ttcggcgagg tcttcaacgc taccagattc 180

gcctccgttt acgcttggaa cagaaagaga atctccaact gcgttgccga ctactcggtt 240

ttgtacaact ctgcttcctt cagcaccttc aagtgctacg gcgtttcccc taccaagttg 300

aacgacctgt gtttcaccaa cgtttacgcc gactccttcg ttatcagagg tgacgaggtg 360

agacagatcg ctccaggaca gaccggcaag atcgcagact acaactacaa gctgcctgat 420

gacttcaccg gatgtgtcat tgcttggaac tctaacaacc tggactccaa ggtcggaggc 480

aattacaact acttgtacag actgttcaga aagtcgaacc ttaagccatt cgagagagac 540

atctccaccg agatctacca ggctggttct acgccatgca acggcgtcga aggtttcaac 600

tgctacttcc ctcttcagtc ttacggattc cagcctacca acggtgtcgg ctaccagcct 660

tacagagttg tggtcttgtc tttcgagctg ttgcacgccc ctgctactgt c 711

<210> 24

<211> 774

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

aacatcacta acctgtgccc tttcggcgag gtcttcaacg ctaccagatt cgcctccgtt 60

tacgcttgga acagaaagag aatctccaac tgcgttgccg actactcggt tttgtacaac 120

tctgcttcct tcagcacctt caagtgctac ggcgtttccc ctaccaagtt gaacgacctg 180

tgtttcacca acgtttacgc cgactccttc gttatcagag gtgacgaggt gagacagatc 240

gctccaggac agaccggcaa gatcgcagac tacaactaca agctgcctga tgacttcacc 300

ggatgtgtca ttgcttggaa ctctaacaac ctggactcca aggtcggagg caattacaac 360

tacttgtaca gactgttcag aaagtcgaac cttaagccat tcgagagaga catctccacc 420

gagatctacc aggctggttc tacgccatgc aacggcgtcg aaggtttcaa ctgctacttc 480

cctcttcagt cttacggatt ccagcctacc aacggtgtcg gctaccagcc ttacagagtt 540

gtggtcttgt ctttcgagct gttgcacgcc cctgctactg tctgcggacc aaagaagtcg 600

accaacctgg tgaagaacaa gtgcgttaac ttcaacttca acggattgac tggcaccggt 660

gtcctcactg aatctaacaa gaagttcctg cctttccagc aattcggaag agacattgcc 720

gacactaccg acgctgttag agaccctcag acccttgaga tcctggacat tacc 774

<210> 25

<211> 789

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

gccgttgact gtgcactgga tcctctgtcg gagaccaagt gcaccctgaa gtctttcacc 60

gtcgagaagg gtatctacca gacctccaac ttcagagttc agcctaccga gtctatcgtg 120

agattcccaa acatcactaa cctgtgccct ttcggcgagg tcttcaacgc taccagattc 180

gcctccgttt acgcttggaa cagaaagaga atctccaact gcgttgccga ctactcggtt 240

ttgtacaact ctgcttcctt cagcaccttc aagtgctacg gcgtttcccc taccaagttg 300

aacgacctgt gtttcaccaa cgtttacgcc gactccttcg ttatcagagg tgacgaggtg 360

agacagatcg ctccaggaca gaccggcaag atcgcagact acaactacaa gctgcctgat 420

gacttcaccg gatgtgtcat tgcttggaac tctaacaacc tggactccaa ggtcggaggc 480

aattacaact acttgtacag actgttcaga aagtcgaacc ttaagccatt cgagagagac 540

atctccaccg agatctacca ggctggttct acgccatgca acggcgtcga aggtttcaac 600

tgctacttcc ctcttcagtc ttacggattc cagcctacca acggtgtcgg ctaccagcct 660

tacagagttg tggtcttgtc tttcgagctg ttgcacgccc ctgctactgt ctgcggacca 720

aagaagtcga ccaacctggt gaagaacaag tgcgttaact tcaacttcaa cggattgact 780

ggcaccggt 789

<210> 26

<211> 870

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

aacatcacta acctgtgccc tttcggcgag gtcttcaacg ctaccagatt cgcctccgtt 60

tacgcttgga acagaaagag aatctccaac tgcgttgccg actactcggt tttgtacaac 120

tctgcttcct tcagcacctt caagtgctac ggcgtttccc ctaccaagtt gaacgacctg 180

tgtttcacca acgtttacgc cgactccttc gttatcagag gtgacgaggt gagacagatc 240

gctccaggac agaccggcaa gatcgcagac tacaactaca agctgcctga tgacttcacc 300

ggatgtgtca ttgcttggaa ctctaacaac ctggactcca aggtcggagg caattacaac 360

tacttgtaca gactgttcag aaagtcgaac cttaagccat tcgagagaga catctccacc 420

gagatctacc aggctggttc tacgccatgc aacggcgtcg aaggtttcaa ctgctacttc 480

cctcttcagt cttacggatt ccagcctacc aacggtgtcg gctaccagcc ttacagagtt 540

gtggtcttgt ctttcgagct gttgcacgcc cctgctactg tctgcggacc aaagaagtcg 600

accaacctgg tgaagaacaa gtgcgttaac ttcaacttca acggattgac tggcaccggt 660

gtcctcactg aatctaacaa gaagttcctg cctttccagc aattcggaag agacattgcc 720

gacactaccg acgctgttag agaccctcag acccttgaga tcctggacat taccccttgt 780

tccttcggag gcgtttctgt gatcacccct ggtactaaca cctccaacca ggttgcagtt 840

ctgtaccagg acgtcaactg caccgaggtg 870

<210> 27

<211> 903

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

gccgttgact gtgcactgga tcctctgtcg gagaccaagt gcaccctgaa gtctttcacc 60

gtcgagaagg gtatctacca gacctccaac ttcagagttc agcctaccga gtctatcgtg 120

agattcccaa acatcactaa cctgtgccct ttcggcgagg tcttcaacgc taccagattc 180

gcctccgttt acgcttggaa cagaaagaga atctccaact gcgttgccga ctactcggtt 240

ttgtacaact ctgcttcctt cagcaccttc aagtgctacg gcgtttcccc taccaagttg 300

aacgacctgt gtttcaccaa cgtttacgcc gactccttcg ttatcagagg tgacgaggtg 360

agacagatcg ctccaggaca gaccggcaag atcgcagact acaactacaa gctgcctgat 420

gacttcaccg gatgtgtcat tgcttggaac tctaacaacc tggactccaa ggtcggaggc 480

aattacaact acttgtacag actgttcaga aagtcgaacc ttaagccatt cgagagagac 540

atctccaccg agatctacca ggctggttct acgccatgca acggcgtcga aggtttcaac 600

tgctacttcc ctcttcagtc ttacggattc cagcctacca acggtgtcgg ctaccagcct 660

tacagagttg tggtcttgtc tttcgagctg ttgcacgccc ctgctactgt ctgcggacca 720

aagaagtcga ccaacctggt gaagaacaag tgcgttaact tcaacttcaa cggattgact 780

ggcaccggtg tcctcactga atctaacaag aagttcctgc ctttccagca attcggaaga 840

gacattgccg acactaccga cgctgttaga gaccctcaga cccttgagat cctggacatt 900

acc 903

<210> 28

<211> 999

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

gccgttgact gtgcactgga tcctctgtcg gagaccaagt gcaccctgaa gtctttcacc 60

gtcgagaagg gtatctacca gacctccaac ttcagagttc agcctaccga gtctatcgtg 120

agattcccaa acatcactaa cctgtgccct ttcggcgagg tcttcaacgc taccagattc 180

gcctccgttt acgcttggaa cagaaagaga atctccaact gcgttgccga ctactcggtt 240

ttgtacaact ctgcttcctt cagcaccttc aagtgctacg gcgtttcccc taccaagttg 300

aacgacctgt gtttcaccaa cgtttacgcc gactccttcg ttatcagagg tgacgaggtg 360

agacagatcg ctccaggaca gaccggcaag atcgcagact acaactacaa gctgcctgat 420

gacttcaccg gatgtgtcat tgcttggaac tctaacaacc tggactccaa ggtcggaggc 480

aattacaact acttgtacag actgttcaga aagtcgaacc ttaagccatt cgagagagac 540

atctccaccg agatctacca ggctggttct acgccatgca acggcgtcga aggtttcaac 600

tgctacttcc ctcttcagtc ttacggattc cagcctacca acggtgtcgg ctaccagcct 660

tacagagttg tggtcttgtc tttcgagctg ttgcacgccc ctgctactgt ctgcggacca 720

aagaagtcga ccaacctggt gaagaacaag tgcgttaact tcaacttcaa cggattgact 780

ggcaccggtg tcctcactga atctaacaag aagttcctgc ctttccagca attcggaaga 840

gacattgccg acactaccga cgctgttaga gaccctcaga cccttgagat cctggacatt 900

accccttgtt ccttcggagg cgtttctgtg atcacccctg gtactaacac ctccaaccag 960

gttgcagttc tgtaccagga cgtcaactgc accgaggtg 999

<210> 29

<211> 1029

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

aacatcacta acctgtgccc tttcggcgag gtcttcaacg ctaccagatt cgcctccgtt 60

tacgcttgga acagaaagag aatctccaac tgcgttgccg actactcggt tttgtacaac 120

tctgcttcct tcagcacctt caagtgctac ggcgtttccc ctaccaagtt gaacgacctg 180

tgtttcacca acgtttacgc cgactccttc gttatcagag gtgacgaggt gagacagatc 240

gctccaggac agaccggcaa gatcgcagac tacaactaca agctgcctga tgacttcacc 300

ggatgtgtca ttgcttggaa ctctaacaac ctggactcca aggtcggagg caattacaac 360

tacttgtaca gactgttcag aaagtcgaac cttaagccat tcgagagaga catctccacc 420

gagatctacc aggctggttc tacgccatgc aacggcgtcg aaggtttcaa ctgctacttc 480

cctcttcagt cttacggatt ccagcctacc aacggtgtcg gctaccagcc ttacagagtt 540

gtggtcttgt ctttcgagct gttgcacgcc cctgctactg tctgcggacc aaagaagtcg 600

accaacctgg tgaagaacaa gtgcgttaac ttcaacttca acggattgac tggcaccggt 660

gtcctcactg aatctaacaa gaagttcctg cctttccagc aattcggaag agacattgcc 720

gacactaccg acgctgttag agaccctcag acccttgaga tcctggacat taccccttgt 780

tccttcggag gcgtttctgt gatcacccct ggtactaaca cctccaacca ggttgcagtt 840

ctgtaccagg acgtcaactg caccgaggtg ccagttgcca tccacgctga ccagttgacc 900

ccaacctgga gagtctactc gaccggttct aacgtgttcc agaccagagc tggctgcctg 960

attggtgccg agcacgttaa caactcctac gagtgcgaca tccctattgg cgctggtatc 1020

tgcgcatcc 1029

<210> 30

<211> 1158

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

gccgttgact gtgcactgga tcctctgtcg gagaccaagt gcaccctgaa gtctttcacc 60

gtcgagaagg gtatctacca gacctccaac ttcagagttc agcctaccga gtctatcgtg 120

agattcccaa acatcactaa cctgtgccct ttcggcgagg tcttcaacgc taccagattc 180

gcctccgttt acgcttggaa cagaaagaga atctccaact gcgttgccga ctactcggtt 240

ttgtacaact ctgcttcctt cagcaccttc aagtgctacg gcgtttcccc taccaagttg 300

aacgacctgt gtttcaccaa cgtttacgcc gactccttcg ttatcagagg tgacgaggtg 360

agacagatcg ctccaggaca gaccggcaag atcgcagact acaactacaa gctgcctgat 420

gacttcaccg gatgtgtcat tgcttggaac tctaacaacc tggactccaa ggtcggaggc 480

aattacaact acttgtacag actgttcaga aagtcgaacc ttaagccatt cgagagagac 540

atctccaccg agatctacca ggctggttct acgccatgca acggcgtcga aggtttcaac 600

tgctacttcc ctcttcagtc ttacggattc cagcctacca acggtgtcgg ctaccagcct 660

tacagagttg tggtcttgtc tttcgagctg ttgcacgccc ctgctactgt ctgcggacca 720

aagaagtcga ccaacctggt gaagaacaag tgcgttaact tcaacttcaa cggattgact 780

ggcaccggtg tcctcactga atctaacaag aagttcctgc ctttccagca attcggaaga 840

gacattgccg acactaccga cgctgttaga gaccctcaga cccttgagat cctggacatt 900

accccttgtt ccttcggagg cgtttctgtg atcacccctg gtactaacac ctccaaccag 960

gttgcagttc tgtaccagga cgtcaactgc accgaggtgc cagttgccat ccacgctgac 1020

cagttgaccc caacctggag agtctactcg accggttcta acgtgttcca gaccagagct 1080

ggctgcctga ttggtgccga gcacgttaac aactcctacg agtgcgacat ccctattggc 1140

gctggtatct gcgcatcc 1158

Claims

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码氨基酸序列如SEQ ID NO：2-4任一所示的抗原肽，多核苷酸的碱基序列如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：20任一所示。

2.一种表达载体，含有如权利要求1所述的多核苷酸。

3.如权利要求2所述表达载体，其特征在于，所述载体选自：pPICZαA，pPICZαB，pPICZαC，pPIC9K，pGAPZαA，pGAPZαB，pGAPZαC，pPIC6αA，pPIC6αB，pPIC6αC或pYes2/CTα-factor。

4.一种表达系统，包括生物工程菌，所述生物工程菌中含有或者整合有如权利要求2或3所述的表达载体。

5.根据权利要求4所述的表达系统，其特征在于，所述生物工程菌选自酵母。

6.如权利要求1所述多核苷酸、权利要求2或3所述表达载体、或者权利要求4-5中任一项所述的表达系统在制备疫苗制剂中的应用。