CN1112918A

CN1112918A - 氟化维生素d3衍生物

Info

Publication number: CN1112918A
Application number: CN95102263A
Authority: CN
Inventors: T·I·多兰; S-J·希维; M·R·乌思寇克斯
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1994-03-11
Filing date: 1995-03-08
Publication date: 1995-12-06
Anticipated expiration: 2015-03-08
Also published as: RU2142803C1; PH31333A; ATE165595T1; ZA951798B; US5384314B1; KR100360732B1; CA2141652A1; BR9501035A; FI951134A0; ES2116634T3; PL179120B1; JPH07258208A; NO950920L; AU687972B2; RU95103438A; DE69502223D1; EP0671387A1; CZ288793B6; AU1364495A; CN1051227C

Abstract

本发明涉及可用下式表征的1α-氟-25-羟基 -16烯-23-炔-胆钙化甾醇，它可用作治疗皮脂腺疾病如痤疮和皮脂溢性皮炎的药剂。它可通过从具有保护甲硅烷基的羟基的相应化合物中除去甲硅烷基保护基而制得。

Description

本发明涉及化合物1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇，它可用下式进一步表征：

可用作为治疗皮脂腺疾病，如痤疮或皮脂溢性皮炎的药剂。

另一方面，本发明涉及包含式Ⅰ化合物的药物组合物和这种化合物对于制备治疗上述疾病的药物的应用。

1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇可按下列反应图解制备

在以上反应图解中，式Ⅰ的化合物通过与式2的相应化合物反应转变为式3的化合物：

在-60℃-90℃，优选-75℃下，在极性、非质子传递溶剂如干醚或更优选的干四氢呋喃中，在强碱如烷基锂如丁基锂存在下进行反应。式2的化合物是已知的（J.Org.Chem.1990，55，243）或可按已知的方法制备。

式3化合物的保护基通过与氟盐，如氟化四丁铵在极性有机溶剂如醚，或更优选的是四氢呋喃中进行反应除去，得到式Ⅰ的相应化合物。

1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇可用作为治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎的药剂。

可以给需要这种治疗的患者局部擦用1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇来治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎。更具体地说，为了治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎，可以给人局部擦用1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇，剂量为每天每克局部制剂0.01-100μg。

可以给需要这种治疗的患者口服1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇来治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎。更具体地说，为了治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎，每日口服大约0.01-10μg剂量的1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇。

1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇作为治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎的药剂的有效活性可用本领域中已知的下列试验程序来证实。

方法

1.体外

按J.Invest Dermatol.96∶341-348（1991）中所述的方法从成人皮脂腺中分离皮脂细胞并在生长受到抑制的3T3小鼠成纤维细胞层上培养。

在含有10%胎牛血清和4μg/ml地塞米松的Iscove氏培养基中培养这些细胞。

将细胞铺敷在不含1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇的培养基上。初始平板培养后24-48小时，将培养物转移到含有本发明化合物的新鲜培养基中。每隔48小时，将培养物转移到含有本发明化合物的新鲜培养基中。在收获的当天，用0.03%EDTA的PBS漂洗培养物，只除去3T3成纤维细胞。将剩余的皮脂细胞集落在0.05%胰蛋白酶/0.03% EDTA中温育以得到皮脂细胞的单细胞悬浮液。将细胞稀释，强力混合以维持单细胞悬浮液，并用血细胞计数器计数。

用下列方法处理试验化合物。制备储备溶液，即10^-2M脱气100%乙醇溶液，将其储存于-20℃的暗处。储存1个月以上的溶液不再使用。在实验期间，将溶液分成几等份，融化一次，使用时直接稀释到完全培养基中至适当的浓度（10^-6、10^-7、10^-8和10^-9M）。试验化合物为

（1）1，25-二羟基胆钙化甾醇;和

（2）1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇。

结果

用浓度如下的化合物进行抑制皮脂细胞增殖的体外试验：10^-6、10^-7、10^-8和10^-9M。1，25-二羟基胆钙化甾醇是一种使雄性Syri-an仓鼠耳内皮脂腺尺寸减小的药剂。

结果列在表1中，以与对照相比抑制皮脂细胞增殖达50%所需的化合物量表示（ED₅₀）。对照是只用稀释剂处理的培养物。

表1

在体外对人皮脂细胞增殖的抑制

化合物 ED50(μM)

1,25-二羟基胆钙化甾醇 0.05

1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔- 0.001

胆钙化甾醇

结果表明本发明的化合物在体外抑制人皮脂细胞增殖。因此，本发明的化合物可用作治疗痤疮的药剂。

2.体内仓鼠耳模型

a.局部研究

在仓鼠耳皮脂腺模型中评价化合物的局部抗痤疮活性。为了这些研究，将化合物溶于丙酮中。每天（每周五天）将50μl含药溶液注入仓鼠右耳背面。对照仓鼠接受50ml丙酮。4周后将动物处死。取耳，进行组织学评价。将腹表面与耳的其余部分分开。距耳顶端5mm取-2mm的圆片，在溶于100%丙二醇的0.1% Sudan Black B中染色过夜。脱色后，通过用Donsato影像分析系统进行影像分析由模截面确定皮脂腺面积。对于每个剂量80-120个皮脂腺，其数据以根据对照动物的百分比变化表示。结果列于表2中。

表2

4周局部给药对仓鼠皮脂腺

尺寸的作用

化合物剂量仓鼠耳皮脂腺尺寸

(μg/动物) 的变化

(模截面分析)

1α-氟-25-羟基-

16-烯-23-炔-

胆钙化甾醇 0.001 -3ns

0.01 -18ns

0.1 -28ns

1.0 -40

ns＝根据对照在统计学上是不显著的

b.口服研究

试验目的是评价口服本发明的化合物对仓鼠皮脂腺的作用。将200μl本发明的化合物溶于吐温20/水/乙醇（50/40/100），每天（一周5天）通过管饲法喂给雄性Golden Syrian仓鼠。4周后处死动物，对耳进行组织学评价。一只耳用10%缓冲福尔马林固定，进行石蜡包埋处理，制成切片，并用苏木精和曙红染色。通过用Leitz TAS Plus系统对用组织学方法制备的耳的模截面进行影响像分析测量皮脂腺面积。由此项研究得到的数据如下所示。以每一剂量48个皮脂腺的平均面积表示。

表3

4周口服给药对仓鼠皮脂腺

尺寸的作用

化合物剂量仓鼠耳皮脂腺尺寸

(μg/kg) 的变化%

(模截面分析)

1α-氟-25-羟基-

16-烯-23-炔-

胆钙化甾醇 0.05 -28

0.5 -28

5.0 -34

50.0 -35

以上数据表明本发明的化合物可用作治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎的药剂。

包含1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇的口服剂量形式可与药物上可接受的载体材料一起制成胶囊、片剂等。

可掺加到胶囊等中的药物上可接受的载体材料的实例如下：粘合剂如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉、或明胶;赋形剂如磷酸二钙;崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸，等等;润滑剂如硬脂酸镁;甜味剂如蔗糖、乳糖、或糖精;调味剂如薄荷、冬清油或樱桃油。作为包衣材料或用于修饰剂量单位的物理形式的各种不同的其它材料也可存在。例如，片剂可用紫胶、糖或两者包衣。糖浆或酏剂可含有活性化合物，作为甜味剂的蔗糖，作为防腐剂的羟苯甲酸甲酯和羟苯甲酸丙酯，染料，和调味剂如樱桃或橙味食用香料。

包含1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇的局部剂量形式包括：软膏和乳剂，包括具有油质、可吸收、水溶性和乳液型基剂，如矿脂、羊毛脂、聚乙二醇等的制剂。

洗剂为液体制剂。从简单的溶液到含有细碎物质的含水制剂或氢化醇制剂。洗剂可含有悬浮剂或分散剂，，例如，纤维素衍生物如乙基纤维素、甲基纤维等等;明胶或树胶，其使有效成分掺混到由水、醇、甘油等组成的媒介物中。

凝胶剂是通过使含有有效成分的溶液或悬浮液在载体媒介物中胶凝而制得的半固体制剂。媒介物可以是含水的或无水的，用胶凝剂，如羧基聚亚甲基使之胶凝，用碱，如氢氧化钠和胺如聚乙烯可可胺中和至适当的凝胶稠度。

本文中所用的玉语“局部”表示在发炎部位施用掺入适宜的药用载体中的有效成分用于发挥局部作用。因此，局部组合物包括那些化合物直接与皮肤接触外用的药物形式。局部剂型包括凝胶剂、乳剂、洗剂、软膏、粉剂、气雾剂和将药物涂到皮肤上的其它常规形式（通过使式Ⅰ的化合物与已知的药用局部载体材料混合而制得）。除了用于皮肤之外，本发明的局部组合物还可用于治疗适于局部用药的粘膜的炎症，例如，可将局部组合物涂到口内或下结肠内粘膜上。

实施例1

（1α，3β，5Z，7E）-1-氟-3[[（1，1-二甲基-乙基）二甲基甲硅烷基]氧基]-25-[（三甲基甲硅烷基）氧基]-9，10-开环胆甾-5，7，10，（19），16-四烯-23-炔

在-75℃下，向217mg（0.461mmol）[3s-（1Z，3α，5β]-（2-[3-氟-5-[[（1，1-二甲基乙基）二甲基甲硅烷基]氧基]-2-亚甲基环亚己基]乙基]二苯膦氧化物于6ml干四氢呋喃的溶液中滴加0.27ml（0.43mmol）1.6M正丁基锂的己烷溶液。搅拌混合物6分钟后，滴加120mg（0.346mmol）[1（R^＊），3αR^＊，3αβ，7αα）]-3，3α-5，6，7，7α-六氢-1-（1，5-二甲基-5-[（三甲基甲硅烷基）氧基]-3-己炔）-7α-甲基-4H-茚-4-酮于5ml于四氢呋喃的溶液。在-75℃下搅拌混合物1.5小时并加入1M酒石酸钠钾水溶液和2M碳酸氢钾水溶液的1∶1混合物使混合物骤冷，用乙酸乙酯萃取该混合物，有机相用盐水洗，干燥（Na₂SO₄），过滤，并蒸发至干。通过在硅胶上用乙酸乙酯-己烷（1∶15）进行柱层析纯化残余物，得到136mg（66%）玻璃状（1α，3β，5Z，7E）-1-氟-3[[（1，1-二甲基-乙基）-二甲基甲硅烷基]氧基]-25-[（三甲基甲硅烷基）氧基]-9，10-开环胆甾-5，6，10（19），16-四烯-23-炔：

IR（CHCl₃）2230，840cm^-1;

¹H NMR（CDCl₃）δ0.08（s，6H），0.17（s，9H），0.72（s，3H），0.88（s，9H），1.13（d，J＝8Hz，3H），1.44（s，6H），2.51（m，1H），282（m，1H），4.17（brs，1H），5.11（s，1H），5.12（dm，J＝48Hz，1H），5.37（s，2H），6.10（d，J＝12Hz，1H），6.34（d，J＝12Hz，1H）

质谱，m/e578（M⁺-HF）。

实施例2

1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇

向132mg（0.220mmol）（1α，3β，5Z，7E）-1-氟-3[[（1，1-二甲基-乙基）二甲基甲硅烷基]氧基]-25-[（三甲基甲硅烷基）氧基]-9，10-开环胆甾-5，7，10（19），16-四烯-23-炔于8ml干四氢呋喃的溶液中加入1.38ml（1.38mmol）1M氟化四丁铵的四氨呋喃溶液。将混合物在室温下搅拌16小时。用水稀释后，用乙酸乙酯萃取混合物。有机相用水、盐水洗，干燥（Na₂SO₄）并蒸发至干。通过在硅胶上用乙酸乙酯-己烷（1∶13）作为洗脱剂进行柱层析钝化残余物，得到81mg（89%）玻璃状1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇：

质谱，m/e392（M⁺-HF）。

实施例3

口服剂型软明胶胶囊A和B

A mg/胶囊

1α-氟-25-羟基-

16-烯-23-炔-

胆钙化甾醇 0.00001-0.010

丁基化羟基甲苯(BHT) 0.016

丁基化羟基茴香醚(BHA) 0.016

Myglyol^R-812或聚乙二醇 160

400(适量)

B mg/胶囊

1α-氟-25-羟基-

16-烯-23-炔-

胆钙化甾醇 0.00001-0.010

α-生育酚 0.016

Myglyol^R-812或聚乙二醇 160

400(适量)

Claims

1、化合物，1a-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇。

2、权利要求1的化合物，用作治疗活性化合物，特别是用于治疗皮脂腺疾病，尤其是痤疮或皮脂溢性皮炎。

3、权利要求1的化合物的制备方法，该方法包括从具有保护甲硅烷基的羟基的相应化合物中除去甲硅烷基保护基。

4、一种药物组合物，特别是用于治疗皮脂腺疾病如痤疮或皮脂溢性皮炎，其包括有效量的1α-氟-25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化甾醇和载体材料。

5、权利要求1的化合物的用途，其用于制备治疗皮脂腺疾病，尤其是痤疮或皮脂溢性皮炎的药物组合物。

6、上述的化合物、组合物、用途和方法具体参见实施例。