DE69502223T2

DE69502223T2 - Neue Verwendung von 1Alpha-fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholecalciferol

Info

Publication number: DE69502223T2
Application number: DE69502223T
Authority: DE
Inventors: Thomas I Doran; Shian-Jan Shiuey; Milan Radoje Uskokovic
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1994-03-11
Filing date: 1995-02-27
Publication date: 1998-10-29
Anticipated expiration: 2015-02-28
Also published as: RU2142803C1; PH31333A; ATE165595T1; ZA951798B; US5384314B1; KR100360732B1; CA2141652A1; BR9501035A; FI951134A0; ES2116634T3; PL179120B1; JPH07258208A; NO950920L; AU687972B2; RU95103438A; DE69502223D1; EP0671387A1; CZ288793B6; AU1364495A; CN1051227C

Description

Es wurde gefunden, daß die Verbindung 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciferol, die durch die nachstehende Formel wiedergegeben werden kann:
als Mittel zur Behandlung von Talgdrüsenkrankheiten, wie Akne oder Seborrhoe, nützlich ist.
Die vorliegende Erfindung betnfft demgemäß die Verwendung dieser Verbindung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung der vorstehenden Krankheiten.
1α:-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciferol, dessen biologische Eigenschaften in Proc. Workshop Vitamin D, 1988, 433-4; Cancer Res. 1990, 6857-64 und Endocrinology 1991, 1876-84 beschrieben sind, kann nach dem folgenden Reaktionsschema hergestellt werden:
Nach dem vorstehenden Reaktionsschema wird die Verbindung der Formel 1 durch Umsetzung mit einer entsprechenden Verbindung der Formel:
zu einer Verbindung der Formel 3 umgewandelt.
Die Umsetzung wird bei -60ºC bis -90ºC, vorzugsweise -75ºC, in einem polaren, aprotischen organischen Lösungsmittel, wie trockenem Ether oder stärker bevorzugt trockenem Tetrahydrofuran, in Gegenwart einer starken Base, wie einem Alkyllithium, z.B. Butyllithium, durchgeführt. Die Verbindung der Formel 2 ist bekannt (J. Org. Chem. 1990, 55, 243) oder sie kann nach bekannten Verfahren hergestellt werden.
Die Schutzgruppen einer Verbindung der Formel 3 werden durch Umsetzung mit einem Fluorsalz, wie Tetrabutylammoniumfluorid, in einem polaren, organischen Lösungsmittel, wie Ether oder stärker bevorzugt Tetrahydrofüran, entfernt, wobei eine entsprechende Verbindung der Formel 1 erhalten wird.
1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciferol ist als Mittel zur Behandlung von Talgdrösenkrankheiten, wie Akne oder Seborrhoe, verwendbar.
1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23 -yn-cholcalciferol kann zur Behandlung von Talgdrusenkrankheiten, wie Akne oder Seborrhoe, an Personen, die eine solche Behandlung benötigen, topisch angewendet werden. Insbesondere kann 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en- 23-yn-cholcalciferol an Menschen topisch in Dosen verabreicht werden, die im Bereich von 0,01 bis 100 ug pro Gramm der topischen Formulierung pro Tag zur Behandlung von Talgdrüsenkrankheiten, wie Akne oder Seborrhoe, liegen.
1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciferol kann zur Behandlung von Talgdrüsenkranheiten, wie Akne oder Seborrhoe, an Personen, die die Behandlung benötigen, oral verabreicht werden. Insbesondere kann 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23 -yn-cholcalciferol oral zur Behandlung von Talgdrusenkranheiten, wie Akne oder Seborrhoe, in Dosen verabreicht werden, die im Bereich von etwa 0,01 bis 10 ug pro Tag liegen.
Die nützliche Wirkung von 10:-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciferol als Mittel zur Behandlung von Talgdrüsenkrankheiten, wie Akne oder Seborrhoe, kann durch die nachstehenden Testverfahren, die im Fachgebiet bekannt sind, gezeigt werden.

Testverfahren

1. In vitro

Aus Talgdrüsen von erwachsenen Menschen wurden Talgzellen, wie in J. Invest. Dermatol. 96:341-348 (1991), isoliert und auf einer Schicht von im Wachstum gehemmten 3T3-Mausfibroblasten gezüchtet.
Die Zellen wurden in Iscove's Medium gezüchtet, das 10% fetales Kalbsserum und 4 ug/ml Dexamethason enthielt.
Die Zellen wurden ohne 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciterol auf das Medium ausgebracht. 24-48 Stunden nach dem Beginn des Ausbringens erhielten die Kulturen frisches Medium, das die erfindungsgemäße Verbindung enthielt. Nach jeweils 48 Stunden erhielten die Kulturen frisches Medium, das die Verbindung der Erfindung enthielt. Am Tage der Gewinnung wurden die Kulturen mit 0,03% EDTA in PBS abgespült, wobei nur die 3T3-Fibroblasten entfernt wurden. Die verbliebenen Sebocytenkolonien wurden in 0,05% Trypsin/0,03% EDTA inkubiert, wobei eine Einzelzellensuspension von Sebocyten erzeugt wurde. Die Zellen wurden verdünnt, gründlich gemischt, wobei eine Einzelzellensuspension beibehalten wurde, und in einem Hämocytometer gezählt.
Die geprüften Verbindungen wurden auffolgende Weise behandelt. In entgastem 100%igem Ethanol wurden Kolonienlösungen als 10&supmin;² M Lösungen hergestellt und im Dunkeln bei -20ºC gelagert. Die Lösungen wurden nach einer Lagerung von mehr als einem Monat nicht verwendet. Während der experimentellen Verwendung wurden die Lösungen, die aufgeteilt wurden, einmal aufgetaut und unter Verdünnung auf die geeignete Konzentration von 10&supmin;&sup6;, 10&supmin;&sup7;, 10&supmin;&sup8; und 10&supmin;&sup9; M als vollständiges Medium verwendet. Es wurden die Verbindungen
(1) 1,25-Dihydroxycholcalciferol; und
(2) 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholcalciferol geprüft.

Ergebnisse

Die Verbindungen wurden bei den Konzentrationen 10&supmin;&sup6;, 10&supmin;&sup7;, 10&supmin;&sup8; und 10&supmin;&sup9; M in vitro auf die Hemmung der Wucherung von Talgzellen geprüft. 1,25-Dihydroxycholcalciferol ist ein Mittel zur Verringerung der Größe von Talgdrüsen in Ohren des männlichen Syrian Hamsters.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 als die Menge der Verbindung zusammengefaßt, die die Wucherung der Talgzellen um 50%, verglichen mit einer Kontrolle (ED&sub5;&sub0;), hemmt. Die Kontrolle war eine Kultur, die nur mit dem Verdünnungsmittel behandelt wurde. Tabelle 1 In vitro Hemmung der Wucherung von menschlichen Sebocvten
Die Ergebnisse zeigen, daß die ertindungsgemäße Verbindung in vitro die Wucherung von menschlichen Sebocyten hemmt. Deshalb ist die ertindungsgemäße Verbindung als Mittel zur Behandlung von Akne nützlich.

2. In vivo Hamsterohr-Modell

a. Topische Untersuchung
Die Verbindung wurde durch das Talgdrüsenmodell am Ohr des Hamsters auf die topische Wirkung gegen Akne ausgewertet. Für diese Untersuchungen wurde die Verbindung in Aceton gelöst. Fünfzig (50) ul der das Arzneimittel enthaltenden Lösung wurden täglich (5 Tage pro Woche) auf die dorsale Seite des rechten Ohrs des Hamsters angewendet. Die Hamster als Kontrolltiere erhielten 50 ul Aceton. Die Tiere wurden nach 4 Wochen getötet. Die Ohren wurden entfernt und zur histologischen Auswertung vorbereitet. Die ventrale Oberfläche wurde von dem Rest des Ohres abgetrennt. 5 mm von der Spitze des Ohres wurde ein 2 mm Stück ausgestanzt und in 0,1% Sudan Black B, das in 100% Propylenglykol gelöst war, über Nacht angefärbt. Nach dem Entfärben wurden die Flächen der Talgdrüsen aus den Querschnitten durch die Bildanalyse unter Verwendung eines Donsato Image Analysis System-Apparats bestimmt. Die Werte wurden als prozentuale Veränderung gegenüber den Kontrolltieren für 80-120 Talgdrüsen pro Dosis ausgedrückt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefaßt. Tabelle 2 Wirkung einer 4 Wochen langen topischen Anwendung auf die Größe der Talgdrüsen von Hamstern
ns = aus den Kontrollen wurde keine statistische Signifikanz erhalten
b. Orale Untersuchung
Der Zweck dieses Tests bestand in der Auswertung der Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindung auf die Talgdrüsen der Ohren des Hamsters nach der oralen Gabe der Verbindung. Es wurden täglich (5 Tage pro Woche) 200 ul der erfindungsgemäßen Verbindung, die in Twee20/Wasser/Ethanol (50/40/100) gelöst war, an männliche Golden Syrian Hamster durch den Schlund verabreicht. Die Tiere wurden nach 4 Wochen getötet und die Ohren zur histologischen Auswertung vorbereitet. Ein Ohr wurde mit 10%igem gepufferten Formalin fixiert, in Paraffin eingebettet, zerlegt und mit Hämatoxylin und Eosin angefärbt. Die Fläche der Talgdrüsen wurde an histologisch präparierten Querschnitten des Ohrs durch Bildanalyse unter Verwendung eines Leitz TAS Plus-Systems gemessen. Die aus dieser Studie erhaltenen Werte sind nachstehend angegeben. Die Werte sind als durchschnittliche Flächen von 48 Talgdrüsen pro Dosis angegeben. Tabelle 3 Wirkung einer 4 Wochen langen oralen Anwendung auf die Größe der Talgdrüsen beim Hamster
Die vorstehenden Werte zeigen, daß die erfindungsgemäße Verbindung als Mittel zur Behandlung von Talgdrüsenkrankheiten, wie Akne oder Seborrhoe, nützlich ist.
Die oralen Dosierungsformen, die 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23 -yn-cholcalciferol umfassen, können in Kapseln, Tabletten und dergleichen mit pharmazeutisch verträglichen Trägermaterialien vermischt werden.
Beispiele für pharmazeutisch verträgliche Trägermaterialien, die in die Kapseln und dergleichen eingemischt werden können, sind: ein Bindemittel, wie Tragantgummi, Gummi arabicum, Maisstärke oder Gelatine; ein Excipient, wie Dicalciumphosphat; ein Zerfallsmittel, wie Maisstärke, Kartoffelstärke, Alginsaure und dergleichen; ein Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, ein Süßstoff, wie Sucrose, Lactose oder Saccharin; ein Geschmacksmittel, wie Pfefferminz, Immergrünöl oder Kirscharoma. Es können verschiedene andere Materialien als Überzüge oder zur weiteren Modifizierung der physikalischen Form der Dosierungseinheit vorhanden sein. Tabletten können, zum Beispiel, rnit Schellack, Zucker oder mit beiden Stoffen überzogen werden. Ein Sirup oder ein Elixier kann den Wirkstoff, Sucrose als Süßstoff, Methyl- und Propylparaban als Konservierungsmittel, einen Farbstoff und einen Geschmacksstoff, wie Kirsch- oder Orangenaroma, enthalten.
Dosierungsformen für topische Anwendungen, die 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23- yn-cholcalciferol umfassen, schließen Salben und Cremes ein,die Formulierungen mit ölhaltigen, absorbierbaren, in Wasser löslichen und emulsionsartigen Grundstoffen, wie Petrolatum, Lanolin, Polyethylenglykolen und dergleichen umfassen.
Lotionen sind flüssige Arzneimittel und sie können von einfachen Lösungen bis zu wäßrigen oder wäßrig-alkoholischen Präparaten variieren, die fein verteilte Substanzen enthalten. Lotionen können Suspensions- oder Dispersionsmittel, zum Beispiel Cellulosederivate, wie Ethylcellulose, Methylcellulose und dergleichen; Gelatine oder Gummis, die den Wirkstoff in einen Träger einbringen, der aus Wasser, Alkohol, Glycerin und dergleichen besteht, enthalten.
Gele sind halbfeste Anwendungsformen, die durch Gelieren einer Lösung oder einer Suspension des Wirkstoffs in einer Trägersubstanz hergestellt werden. Die Trägersubstanzen, die wäßrig oder wasserfrei sein können, werden unter Verwendung eines Geliermittels, wie Carboxypolymethylen, geliert und unter Verwendung von Alkali, wie Natriumhydroxid, und Ammen, wie Polyethylenkokosamin, zu einer geeigneten Gelkonsistenz neutralisiert.
Der Ausdruck "topisch", wie er hier verwendet wird, bezeichnet die Verwendung des Wirkstoffs, der in einem geeigneten pharmazeutsichen Träger eingemischt ist, durch Anwendung an dem Ort der Entzündung zur Ausübung der örtlichen Wirkung. Demgemäß schließen topische Zusammensetzungen die pharmazeutischen Darreichungsformen ein, mit denen die Verbindung durch direkten Kontakt mit der Haut äußerlich angewendet wird. Die topischen Dosierungsformen umfassen Gele, Cremes, Lotionen, Salben, Pulver, Aerosole und andere übliche Formen zur Anwendung von Arzneimitteln auf die Haut, die durch Vermischen einer Verbindung der Formel I mit bekannten pharmazeutischen topischen Trägermaterialien erhalten werden. Außer der Anwendung auf die Haut können die topischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung auch zur Behandlung von Entzündungen von Schleimhäuten angewendet werden, wenn die Schleimhäute für die topische Anwendung des Arzneimittels zugänglich sind. Die topische Zusammensetzung kann, zum Beispiel, auf den Schleimbelag des Mundes oder des unteren Dickdarms angewendet werden.

Beispiel

Orale Dosierungsform: weiche Gelatinekapseln A und B

Claims

1. Verwendung der Verbindung 1α-Fluor-25-hydroxy-16-en-23-yn-cholecalciferol für die Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung von Talgdrüsen Krankheiten, insbesondere von Akne oder Seborrhoe.