PL179120B1

PL179120B1 - oraz zawierajaca go kompozycja farmaceutyczna PL PL PL PL

Info

Publication number: PL179120B1
Application number: PL95307629A
Authority: PL
Inventors: Thomas I Doran; Shian-Jan Shiuey; Milan Radoje Uskokovic
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1994-03-11
Filing date: 1995-03-10
Publication date: 2000-07-31
Also published as: RU95103438A; US5384314A; HUT70746A; KR950032046A; EP0671387B1; FI951134A; ATE165595T1; BR9501035A; KR100360732B1; CZ63295A3; RU2142803C1; ES2116634T3; JP2659345B2; NO950920L; HU9500666D0; IL112887A0; CA2141652A1; DE69502223T2; CN1051227C; PL307629A1

Abstract

1. 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-chole- kalcyferol o wzorze 1. WZOR 1 PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazkujest 1a,-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol, sposób jego wytwarzania oraz zawierająca go kompozycja farmaceutyczna.

1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol jest przedstawiony wzorem 1 i można go stosować jako środek do leczenia schorzeń gruczołu łojowego, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry.

Wynalazek obejmuje więc też kompozycje farmaceutyczne zawierające związek o wzorze 1 do leczenia powyższych schorzeń.

Sposób według wynalazku wytwarzania 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolu o wzorze 1 polega na tym, że z (1α 3β, 5Z, 7E)-1-fluoro-3-[[(1,1-dimetyloetylo)(di^m^tydosililioksy]-25-[(t^iime^^^,losililo)ok:^^^·]^^, 10-sekocholesta-5,7,10 (19), 16-tetraen-23-inu usuwa się sililowe grupy ochronne drogąreakcji z soląfluorową, w polarnym rozpuszczalniku organicznym, takim jak eter.

Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku, zwłaszcza do leczenia schorzeń gruczołu łojowego, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry, zawiera skuteczną ilość la-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolu oraz nośnik.

Sposób wytwarzania la-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolu o wzorze 1 przedstawia podany na rysunku schemat. Zgodnie z tym schematem związek o wzorze 4 przeprowadza się w związek o wzorze 3 drogąreakcji ze związkiem o wzorze 2.

Reakcję prowadzi się w temperaturze od -60°C do -90°C, korzystnie -75°C, w polarnym, aprotycznym rozpuszczalniku organicznym, takim jak bezwodny eter albo korzystnie bezwodny tetrahydrofuran, w obecności mocnej zasady, takiej jak związek alkilolitowy, taki jak butylolit. Związek o wzorze 2 jest znany /J. Org. Chem. 1990,55,243/ albo też można go wytwarzać znanymi metodami.

Grupy ochronne związku o wzorze 3 usuwa się drogąreakcji z soląfluorową, takąjak fluorek tetrabutylo-amoniowy, w polarnym rozpuszczalniku organicznym, takim jak eter albo korzystnie tetrahydrofuran, otrzymując związek o wzorze 1.

lα-fluoro-25-hydroksγ-16-eno-23-ino-choltkalcyftrol stosuje się jako środek do leczenia schorzeń gruczołów łojowych, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry.

la-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol można stosować miejscowo do leczenia schorzeń gruczołów łoj owych, takichjak trądzik albo łoj otokowe zapalenie skóry, wobec osobników wymagających takiego leczenia. W szczególności 1α-fluoro-25-hydroksy-16-tno-23-ino-cholekalcyferol można stosować miejscowo wobec ludzi w dawkach w zakresie

0,01 do 100 (jg na gram preparatu do stosowania miejscowego dziennie do leczenia schorzeń gruczołów łojowych, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry.

la-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol można też podawać doustnie do leczenia schorzeń gruczołów łojowych, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry wobec osobników wymagających takiego leczenia. W szczególności 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol można podawać doustnie w dawkach w zakresie około 0,01-10 (g dziennie do leczenia schorzeń gruczołów łojowych, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry.

Korzystne działanie 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolujako środka do leczenia schorzeń gruczołu łojowego, takichjak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry, można wykazać za pomocą następujących znanych testów.

Metody

1. In vitro

Komórki łojowe wyodrębnia się z gruczołów łojowych dojrzałych osobników ludzkich według J. Invest. Dermatol. 96:341-348 /1991/ i hoduje na warstwie 3T3 fibroblastów myszy o zahamowanym wzroście. Komórki hoduje się w pożywce Iscove zawierającej 10% płodowej surowicy cielęcej i 4 jogml deksametazonu. Komórki umieszcza się w pożywce bez 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolu. Po upływie 24-48 godzin po początkowym posiewie do kultur dodaje się świeżą pożywkę zawierającą związek według wynalazku. Co 48 godzin do kultur dodaje się świeżąpożywkę zawierającą związek według wynalazku. W dniu zbioru hodowli kultury przemywa się za pomocą 0,03% EDTA w PBS w celu usunięcia tylko 3T3 fibroblastów. Pozostałe kolonie komórek łojowych poddaje się inkubacji w 0,05% trypsyny/0,03% EDTA w celu uzyskania zawiesiny jednokomórkowej komórek łojowych. Komórki rozcieńcza się, miesza energicznie dla utrzymania jednokomórkowej zawiesiny i liczy w hemocytometrze.

Testowane związki poddaje się obróbce w następujący sposób. Roztwory podstawowe sporządza się jako roztwory 10’²M w odgazowanym 100% etanolu i przetrzymuje w temperaturze -20°C w ciemności. Roztworów nie używa się po przechowywaniu dłuższym niż jeden miesiąc. W czasie stosowania doświadczalnego roztwory, których jednakowe objętości przenosi się do probówek, rozmraża się raz i stosuje drogą bezpośredniego rozcieńczania w pełnej pożywce do odpowiedniego stężenia 10’⁶, 10'⁷, 10'⁸ i 10'⁹ M. Jako testowane związki stosuje się /1/ 1,25-dihydroksycholekalcyferol i /2/ 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol.

Wyniki

Związki testuje się pod kątem hamowania proliferacji komórek łojowych in vitro przy następujących stężeniach: 10⁶, 10’7, 10⁸ i 10⁹ M. 1,25-dihydroksycholckacyferol jest środkiem zmniej szaj ącym wielkość gruczołów łoj owych w uszach samca złocistego chomika syryj skiego.

Wyniki zebrane sąw tabeli 1, przy czym podaje się ilość związku niezbędną do zahamowania proliferacji komórek łojowych o 5 0% w porównaniu z próbąkontrolną/ED₅0^/. Próba kontrolna stanowi hodowlę traktowaną tylko rozcieńczalnikiem.

Tabela 1

Hamowanie proliferacji ludzkich komórek łojowych in vitro

Związek	ED₅₀/ąM/
1,25-dihydroksycholekalcyferol	0,05
1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol	0,001

Wyniki te wykazują, że związek według wynalazku hamuje proliferację ludzkich komórek łojowych in vitro. W związku z tym związek według wynalazku można stosować jako środek do leczenia trądziku.

179 120

2. Test uszny u chomika in vivo a. Badanie miejscowe

Związek poddaje się ocenie na działanie miejscowe przeciw trądzikowi w teście na gruczołach łojowych uszu chomika. Do testu tego związek rozpuszcza się w acetonie. 50 pl roztworu zawierającego lek aplikuje się dziennie /5 dni w tygodniu/ na grzbietową stronę prawego ucha chomika. Chomiki kontrolne otrzymują 50 pl acetonu. Zwierzęta uśmierca się po upływie 4 tygodni. Uszy usuwa się i poddaje ocenie histologicznej. Wewnętirziąpowierzchnię oddziela się od reszty ucha. Wycinek 2 mm usuwa się w odległości 5 mm od koniuszka ucha i barwi przez noc w 0,1% czerni sudanowej B rozpuszczonej w 100% glikolu propylenowym. Po usunięciu barwnika powierzchnię gruczołów łojowych określa się z przekroju za pomocą analizy obrazu z zastosowaniem układu Donsato Image Analysis System. Dane wyraża się jako procentową zmianę wobec zwierząt kontrolnych dla 80-120 gruczołów łojowych na dawkę. Wyniki zebrane są w tabeli 2.

Tabela 2

Wpływ 4-tygodniowego miejscowego dawkowania u chomika na wielkość gruczołu łojowego

Związek	Dawka pg/zwierzę	Zmiana wielkości gruczołu łojowego ucha chomika według analizy przekroju
la-fluoro-25-hydrok5y-16-eno-23-ino-cholekalcyferol	0,001	-3 ns
	0,01	-18 ns
	0,1	-28 ns
	1,0	-40

ns = nie statystycznie znaczące wobec kontroli

b. Badanie oralne

Celem testu jest ocena działania związku według wynalazku na gruczoły łojowe w uchu chomika po oralnym podawaniu związku. 200 pl związku według wynalazku rozpuszczonego w Tween 20/wodzie/etanolu /50/40/100 podaje się dziennie /5 dni w tygodniu/ przez zgłębnik samcom złocistego chomika syryjskiego. Zwierzęta uśmierca się po upływie 4 tygodni i uszy poddaje się ocenie histologicznej. Jedno ucho utrwala się za pomocą 10% buforowanej formaliny, zatapia w parafinie, przecina i barwi za pomocą hematoksyliny i eozyny. Powierzchnię gruczołów łojowych mierzy się na histologicznie spreparowanych przekrojach ucha za pomocą analizy obrazu z zastosowaniem układu Leitz TAS Plus. Dane uzyskane w tym teście podane są w tabeli 3. Dane te podają średnią powierzchnię 48 gruczołów łojowych na dawkę.

Tabela 3

Wpływ 4-tygodniowego dawkowania oralnego u chomika na wielkość gruczołu łojowego

Związek	Dawka pg/kg	1 % zmiany wielkości gruczołu łojowego w uchu chomika według analizy przekroju
1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno- -23-ino-cholekalcyferol	0,05	-28
	0,5	-28
	5,0	-34
	50,0	-35

Powyższe dane wykazują, że związek według wynalazku można stosować jako środek w leczeniu schorzeń gruczołu łojowego, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry.

Doustne postacie do dawkowania zawierające 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol mogą występować jako kapsułki, tabletki i inne wraz z farmaceutycznie dopuszczalnymi nośnikami.

175) 120

Jako przykłady farmaceutycznie dopuszczalnych nośników, które można stosować w kapsułkach i innych wymienia się następujące substancje: środki wiążące, takie jak tragakant, guma arabska, skrobia kukurydziana lub żelatyna; podłoże, takie jak fosforan diwapniowy; środek rozkruszający, taki jak skrobia kukurydziana, skrobia ziemniaczana, kwas alginowy itp; środki zwiększające poślizg, takie jak stearynian magnezu, środki słodzące, takie jak sacharoza, laktoza albo sacharyna; środki aromatyzujące, takie jak mięta pieprzowa, olejek starzęślowy lub wiśniowy. Można też stosować inne substancje do powlekania albo innego modyfikowania fizycznej postaci dawki jednostkowej. Przykładowo tabletki można powlekać za pomocą szelaku, cukru, albo obydwoma. Syropy lub eliksiry mogą zawierać substancję czynną, sacharozę jako środek słodzący, metylo- i propylo-parabeny jako środki konserwujące, barwnik oraz substancję aromatyzującą, takąjak aromat wiśniowy lub pomarańczowy.

Jako miejscowe postacie do dawkowania zawierające 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol wymienia się maście i kremy obejmujące preparaty zawierające podłoża oleiste, wchłanialne, rozpuszczalne w wodzie i typu emulsji, takie jak wazelina, lanolina, glikole polietylenowe i tym podobne.

Preparaty płynne stanowiąkompozycje ciekłe i obejmujązakres od prostych roztworów do wodnych lub wodnoalkoholowych preparatów zawierających subtelnie rozdrobnione substancje. Płyny takie mogą zawierać środki utrzymujące zawiesinę albo środki dyspergujące, na przykład pochodne celulozy, takie jak etyloceluloza, metyloceluloza itp: żelatyna albo żywice, które wbudowują substancję czynnądo podłoża składającego się z wody, alkoholu, gliceryny itp.

Żele sąpreparatami pół-stałymi otrzymywanymi przez żelowanie roztworu lub zawiesiny substancji czynnej w podłożu nośnika. Podłoża, które mogą być wodne lub bezwodne, żeluje się z zastosowaniem środka żelującego, takiego jak karboksypolimetylen, i zobojętnia do właściwej konsystencji żelu za pomocą alkaliów, takich jak wodorotlenek sodu, i amin, takich jak polietylenokokoamina.

W opisie niniejszym określenie „miejscowy” oznacza stosowanie substancji czynnej, wbudowanej w odpowiedni nośnik farmaceutyczny, na obszar stanu zapalnego w celu wywarcia miejscowego działania. Tak więc, kompozycje do stosowania miejscowego obejm ujątakie postacie farmaceutyczne, w których związek aplikuje się zewnętrznie drogąbezpośredniego kontaktu ze skórą. Postacie do stosowania miejscowego obejmują żele, kremy, płyny, maście, pudry, aerozole i inne postacie konwencjonalne do aplikowania na skórę, otrzymywane przez zmieszanie związku o wzorze 1 ze znanymi farmaceutycznymi nośnikami do stosowania miejscowego. Dodatkowo do aplikowania na skórę, miejscowe kompozycje według wynalazku można też stosować do leczenia stanów zapalnych błon śluzowych, gdy błony takie są dostępne dla miejscowego podawania leku. Na przykład, kompozycje miejscowe można stosować wobec śluzowej wyściółki jamy ustnej albo dolnej części okrężnicy.

Następujące przykłady bliżej wyjaśniają wynalazek.

Przykład I. /let, 3β, 5Z,7E/-1-fluoro-3-[[/1,1-dimetylo-etylo/-dimetylosililo]-oksy]-25-[/trimetylosililo/-oksy]-9,10-sekocholesta-5,7,10,/19,16-tetraen-23-in

Do roztworu 217 mg/0,461 mmola/ tlenku [3S-/1z, 3α, 5e]-[2-[3-fluoro-5-[[/1,1-dimetyloetylo/-dimetylosililo]-oksy]-2-metylenocykloheksylidieno]-etylo]-difenylofosfmy w 6 ml bezwodnego tetrahydrofuranu wkrapla się w temperaturze -75°C 0,27 ml /0,43 mmola/ 1,6 M roztworu n-butylolitu w heksanie. Mieszaninę miesza się w ciągu 6 minut, po czym wkrapla roztwór 120 mg /0,346 mmola/ [1/R*/, 3aR*-3ae, 7aa/]-3,3a,5,6,7,7a-heksOhydro-1-/1,5-dimetylo-5-[/trimetylosiliło/-oksy]-3-heksynylo/-7a-metylo-4H-indeno-4-onu w 5 ml bezwodnego tetrahydrofuranu. Mieszaninę miesza się w temperaturze -75°C w ciągu 1,50 godziny i hartuje, dodając mieszaninę 1: 1 1M wodnego roztworu winianu potasowo-sodowego i 2m wodnego roztworu wodorowęglanu potasu. Mieszaninę ekstrahuje się octanem etylu, a fazę organiczną przemywa się solanką, suszy nadNa₂SO₄, sączy i odparowuje do sucha. Pozostałość oczyszcza się na kolumnie chromatograficznej na żelu krzemionkowym, stosując octan etylu - heksan /1: 15/ i otrzymuje 136 mg /66%/ /1a, 3β, 5Z, 7E/-l-fluoro-3-[[/lll-dimetylo-etyllo/-dimetylosili6

179 120 lo]-oksy]-25-[/trimetylosililo/-oksy]-9,10-sekocholesta-5,7, 10/19/,16-tetraen-23-inu w postaci szkliwa.

IR/CHCLj/2230, 840 cm'¹;

‘H-NMR /CDCl₃/ó 0,08 /s, 6H/, 0,17 /s, 9H/, 0,72 /s, 3H/, 0,88 /s, 9H/, 1,13 /d, J = 8 Hz, 3H/, 1,44 /s, 6H/, 2,51 /m, 1H/, 282 /m, 1H/, 4,17/br, s, 1H/, 5,11 /s, 1H/, 5,12 /dm, J = 48 Hz, 1H/, 5,37 /s, 2H/, 6,10 /d, J = 12 Hz, 1H/, 6,34 /d, J = 12 Hz, 1H/; widmo masowe, m/e 578 /M+-HF/.

Przykład II. 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol

Do roztworu 132 mg/0,220 minioWNa 3 β, 5Z, 7E/-1-fluoro-3-[[/1,1-dimetylo-etylo/-dimetylosililo]-oksy]-25-[/trimetylosililo/-oksy]-9,10-sekocholesta-5, 7, 10/19/, 16-tetraen-23-inu w 8 ml bezwodnego tetrahydrofuranu wprowadza się 1,38 ml /1,38 mmoli/ 1M fluorku tetrabutyloamoniowego w tetrahydrofuranie. Mieszaninę miesza się w temperaturze pokojowej w ciągu 16 godzin. Po rozcieńczeniu wodą mieszaninę ekstrahuje się octanem etylu. Fazę organicznąprzemywa się wodą, solanką, suszy /Na₂SO4/ i odparowuje do sucha. Pozostałość oczyszcza się drogą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym, stosując octan etylu - heksan /1:1:3/ jako eluent i otrzymuje 81 mg /89%/ 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolu w postaci szkliwa.

/α/2°+74,7 /C 0,15, MeOH/;

IR/CHCl₃/ 3600,2230, 1649 cm⁴;

UV_max /EtOH/ 242, 267 nm;

‘H-NMR/CDCty δ 0,72 /s, 3H/, 1,13 /d, J = 8 Hz, 3H/, 1,48 /s, 6H/, 2,63 /m, 1H/, 283 /m, 1H/, 4,24/br, s, 1H/, 5,12/s, 1H/, 5,14/dm, J = 48 Hz, 1H/, 5,38 /s, 1H/, 5,40/s, 1H/, 6,12 /d, J = 12 Hz, 1H/, 6,41 /d, J = 12 Hz, 1H/: widmo masowe m/e 392 /M+-HF/.

Przykład III. Jako postacie do podawania doustnego sporządza się miękkie kapsułki żelatynowe A i B o następującym składzie.

A.	mgkaapsu&ę
1 a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-
-Cholekalcyferol	0,00001-0,010
butylowany hydroksytoluen /BHT/	0,016
butylowany hydroksyanizol /BHA/	0,016
MyglyolR-812 albo glikol polietylenowy 400 qs	160
B.	mg/kapsu&ę
1 a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-
-Cholekalcyfer	0030^(^(^(^^-00)10
a-Tokoferol	0,016
MyglyolR-812 lub glikol polietylenowy 400 qs	100

179 120

WZÓR 2

179 120

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz.

Cena 2,00 żt.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferol o wzorze 1.
2. Sposób wytwarzania 1a-fluoro-25-hydroksy-16-eno-23-ino-cholekalcyferolu o wzorze 1, znamienny tym, że z (1α, 3β, 5Z, 7E)-1-fluoro-3[[(1,1-dimetyloetylo)dimetylosilil]oksy]-25-[(trimetylosililo)oksy]-9,10-sekocholesta-5,7,10(19), 16-tetraen-23-inu usuwa się sililowe grupy ochronne drogąreakcji z soląfluorową, w polarnym rozpuszczalniku organicznym takim jak eter.
3. Kompozycja farmaceutyczna, zwłaszcza do leczenia schorzeń gruczołu łojowego, takich jak trądzik albo łojotokowe zapalenie skóry, znamienna tym, że zawiera skuteczną ilość la,-fluoro-25-h.ydroksy-16-eno-23-mo-cholekalcyferolu oraz nośnik.