CN111235087B - 一种棉花原生质体制备方法 - Google Patents
一种棉花原生质体制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111235087B CN111235087B CN202010052295.2A CN202010052295A CN111235087B CN 111235087 B CN111235087 B CN 111235087B CN 202010052295 A CN202010052295 A CN 202010052295A CN 111235087 B CN111235087 B CN 111235087B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protoplast
- cotton
- solution
- enzymolysis
- placing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 title claims abstract description 84
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 title claims abstract description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 241000241602 Gossypianthus Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 6
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 6
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 6
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims description 5
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 claims description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims description 3
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 238000010378 bimolecular fluorescence complementation Methods 0.000 description 6
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明提供了一种棉花原生质体制备方法，属于植物细胞生物学技术领域，包括如下步骤：(1)取棉花花朵，用刀片将花瓣切成细丝；(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入5‑8ml酶解液，之后酶解；(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤；(4)取滤液加入离心管，第一次离心；(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液。可在1.5‑2小时内完成棉花原生质体的制备，大大缩短了棉花原生质体制备所需要的时间，并有利于保证原生质体活力，数量也能满足后续瞬时转化的需要，大大提高了棉花原生质体制备效率。
Description
技术领域
本发明涉及植物细胞生物学技术领域，具体涉及一种棉花原生质体制备方法。
背景技术
原生质体是植物细胞生物学研究的重要工具，以原生质体为受体进行瞬时转化，可广泛用于目标基因蛋白的亚细胞定位、启动子及蛋白活性检测、BIFC(bimolecularfluorescence complementation双分子荧光互补)蛋白与蛋白互作等基因功能研究。原生质体制备在拟南芥、烟草等植物中研究较多，而在棉花中原生质体制备及应用的研究较少。棉花基因的亚细胞定位、BIFC等基因功能分析往往是利用农杆菌介导法或基因枪法瞬时转化洋葱表皮或烟草来实现的。然而，由于不同物种的遗传差异，细胞内环境及所包含的生物分子不同，棉花基因的功能分析在其他物种中异源表达来进行研究存在出现假阳性结果的风险。棉花内源基因的分析及研究在棉花内源表达系统中进行才更具可靠。因此，高效制备棉花原生质体是促进实现在棉花内源表达系统中进行亚细胞定位及BIFC等其他基因功能分析的重要手段。已有棉花原生质体制备以幼嫩叶片为材料，制备过程耗时长，及影响制备效率又一定程度影响原生质体的活力，进而一定程度制约了利用棉花原生质体来进行亚细胞定位、BIFC等研究。
发明内容
针对上述现有的棉花原生质体制备以幼嫩叶片为材料，制备过程耗时长，制备效率低下，进一步影响原生质体活力的缺陷，本发明提出了一种棉花原生质体制备方法。
一种棉花原生质体制备方法，包括如下步骤：
(1)取棉花花朵，剥下花瓣并置于培养皿中，用刀片将花瓣切成细丝；
(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入5-8ml酶解液，之后将细胞培养板置于摇床上震荡酶解；
(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤；
(4)取滤液加入离心管，第一次离心，原生质体沉淀于离心管底；
(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，轻轻晃动重悬原生质体沉淀，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液经计数及活力检测后可用于瞬时转化。
本申请的技术方案中，以棉花花瓣为材料制备棉花原生质体，进行酶解、过滤、两次离心沉淀后得到原生质体重悬液，可在1.5-2小时内完成棉花原生质体的制备，大大缩短了棉花原生质体制备所需要的时间，并有利于保证原生质体活力，数量也能满足后续瞬时转化的需要，大大提高了棉花原生质体制备效率，解决了上述现有的棉花原生质体制备以幼嫩叶片为材料，制备过程耗时长，制备效率低下，进一步影响原生质体活力的缺陷。
优选的，步骤(1)中棉花花朵为开花当天的新鲜棉花花朵，细丝的宽度为0.8-1.2mm
更为优选的，细丝的宽度为1mm。
优选的，步骤(2)中酶解液加入后，将细胞板置于28℃摇床，15转/分钟震荡，酶解1-1.5个小时。
更为优选的，酶解1.25小时。
优选的，步骤(3)中酶解结束后，用六层400目的尼龙网对酶解反应液进行过滤。
优选的，步骤(4)中，滤液加入50ml离心管中，第一次离心为800rpm-1000rpm室温离心3-5min。
更为优选的，步骤(4)中，滤液加入50ml离心管中，第一次离心为900rpm室温离心4min。
优选的，步骤(5)中，第二次离心为800rpm-1000rpm离心5min，第一W5溶液10ml和第二W5溶液2ml。
更为优选的，第一W5溶液和第二W5溶液相同，均包括0.9009g的NaCl、1.3875g的CaCl2、0.0373g的KCl、0.03905g的MES、0.09g的葡萄糖，并用无菌水定容至100ml。此时制备的第一W5溶液或第二W5溶液为100ml。
优选的，步骤(2)中酶解液包括0.9g-1.2g纤维素酶、0.3g-0.5g的离析酶、6.558g-9.473g的甘露醇、0.1491g的KCl、0.3905g的MES、0.111g CaCl2、0.5g的PVP，并用无菌水定容至100ml。制备的酶解液为100ml。
更为优选的，步骤(2)中酶解液包括1.05g纤维素酶、0.4g的离析酶、8.016g的甘露醇、0.1491g的KCl、0.3905g的MES、0.111g CaCl2、0.5g的PVP，并用无菌水定容至100ml。制备的酶解液为100ml。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
(1)酶解时间短，仅需要1-1.5个小时；
(2)可在1.5-2小时内完成棉花原生质体的制备，大大缩短了棉花原生质体制备所需要的时间，并有利于保证原生质体活力；
(3)数量也能满足后续瞬时转化的需要，大大提高了棉花原生质体制备效率；
(4)制备的棉花原生质体可用于棉花基因的瞬时转化，来进行亚细胞定位、BIFC等棉花基因功能分析。
附图说明
图1为本发明10倍镜下1小时制备得到的棉花原生质体。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作优选的详细说明。
实施例1
一种棉花原生质体制备方法，包括如下步骤：
(1)取棉花花朵，剥下花瓣并置于培养皿中，用刀片将花瓣切成细丝，棉花花朵为开花当天的新鲜棉花花朵，细丝的宽度为0.8mm；
(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入5ml酶解液，之后将细胞培养板置于摇床上震荡酶解，酶解液加入后，将细胞板置于28℃摇床，15转/分钟震荡，酶解1个小时，酶解液包括0.9gg纤维素酶、0.3gg的离析酶、6.558gg的甘露醇、0.1491g的KCl、0.3905g的MES、0.111g CaCl2、0.5g的PVP，并用无菌水定容至100ml；
(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤，酶解结束后，用六层400目的尼龙网对酶解反应液进行过滤；
(4)取滤液加入离心管，第一次离心，原生质体沉淀于离心管底，滤液加入50ml离心管中，第一次离心为800rpm室温离心5min；
(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，轻轻晃动重悬原生质体沉淀，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液经计数及活力检测后可用于瞬时转化，第二次离心为800rpm离心5min，第一W5溶液10ml和第二W5溶液2ml；第一W5溶液和第二W5溶液相同，包括0.9009g的NaCl、1.3875g的CaCl2、0.0373g的KCl、0.03905g的MES、0.09g的葡萄糖，并用无菌水定容至100ml。
实施例2
一种棉花原生质体制备方法，包括如下步骤：
(1)取棉花花朵，剥下花瓣并置于培养皿中，用刀片将花瓣切成细丝，棉花花朵为开花当天的新鲜棉花花朵，细丝的宽度为1mm；
(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入6.5ml酶解液，之后将细胞培养板置于摇床上震荡酶解，酶解液加入后，将细胞板置于28℃摇床，15转/分钟震荡，酶解1.25个小时，酶解液包括1.05g纤维素酶、0.4g的离析酶、8.016g的甘露醇、0.1491g的KCl、0.3905g的MES、0.111g CaCl2、0.5g的PVP，并用无菌水定容至100ml；
(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤，酶解结束后，用六层400目的尼龙网对酶解反应液进行过滤；
(4)取滤液加入离心管，第一次离心，原生质体沉淀于离心管底，滤液加入50ml离心管中，第一次离心为900rpm室温离心4min；
(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，轻轻晃动重悬原生质体沉淀，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液经计数及活力检测后可用于瞬时转化，第二次离心为900rpm离心5min，第一W5溶液10ml和第二W5溶液2ml；第一W5溶液和第二W5溶液相同，包括0.9009g的NaCl、1.3875g的CaCl2、0.0373g的KCl、0.03905g的MES、0.09g的葡萄糖，并用无菌水定容至100ml。
实施例3
一种棉花原生质体制备方法，包括如下步骤：
(1)取棉花花朵，剥下花瓣并置于培养皿中，用刀片将花瓣切成细丝，棉花花朵为开花当天的新鲜棉花花朵，细丝的宽度为1.2mm；
(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入8ml酶解液，之后将细胞培养板置于摇床上震荡酶解，酶解液加入后，将细胞板置于28℃摇床，15转/分钟震荡，酶解1.5个小时，酶解液包括1.2g纤维素酶、0.5g的离析酶、9.473g的甘露醇、0.1491g的KCl、0.3905g的MES、0.111g CaCl2、0.5g的PVP，并用无菌水定容至100ml；
(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤，酶解结束后，用六层400目的尼龙网对酶解反应液进行过滤；
(4)取滤液加入离心管，第一次离心，原生质体沉淀于离心管底，滤液加入50ml离心管中，第一次离心为1000rpm室温离心3min；
(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，轻轻晃动重悬原生质体沉淀，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液经计数及活力检测后可用于瞬时转化，第二次离心为1000rpm离心5min，第一W5溶液10ml和第二W5溶液2ml；第一W5溶液和第二W5溶液相同，包括0.9009g的NaCl、1.3875g的CaCl2、0.0373g的KCl、0.03905g的MES、0.09g的葡萄糖，并用无菌水定容至100ml。
试验例1
取10ul实施例2得到的原生质体重悬液滴在0.1mm血球计数板上进行计数，原生质体数量平均在0.4x106/ml。
试验例2
图如1所示，取上述实施例1得到的原生质体重悬液500ml，加入12微升FDA溶液，混匀，室温静置5min。在荧光显微镜下观察并分别统计明场下观察到的原生质体数目和荧光场下发绿色荧光的原生质体数目。经统计和计算所制备到的原生质体活力＝视野中观察到的发绿色荧光的原生质体个数/视野中观察到的原生质体总数＝80％左右，原生质体活力良好。
其中，图1中左图a为明场条件下的原生质体，右图b为荧光场下FDA染色后的原生质体。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。
Claims (8)
1.一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）取棉花花朵，剥下花瓣并置于培养皿中，用刀片将花瓣切成细丝；
（2）将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入5-8ml酶解液，之后将细胞培养板置于摇床上震荡酶解；酶解液加入后，将细胞板置于28℃摇床，15转/分钟震荡，酶解1-1.5个小时；酶解液包括0.9g-1.2g纤维素酶、0.3g-0.5g的离析酶、6.558g-9.473g的甘露醇、0.1491g的KCl、0.3905g的MES、0.111g CaCl2、0.5g的PVP，并用无菌水定容至100ml；
（3）酶解结束后对酶解反应液进行过滤；
（4）取滤液加入离心管，第一次离心，原生质体沉淀于离心管底；
（5）用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，轻轻晃动重悬原生质体沉淀，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液经计数及活力检测后可用于瞬时转化。
2.根据权利要求1所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，步骤（1）中棉花花朵为开花当天的新鲜棉花花朵，细丝的宽度为0.8-1.2mm。
3.根据权利要求2所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，细丝的宽度为1mm。
4.根据权利要求1所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，酶解1.25小时。
5.根据权利要求1所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，步骤（3）中酶解结束后，用六层400目的尼龙网对酶解反应液进行过滤。
6.根据权利要求1所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，步骤（4）中，滤液加入50ml离心管中，第一次离心为800rpm-1000rpm室温离心3-5min。
7.根据权利要求1所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，步骤（5）中，第二次离心为800rpm-1000rpm离心5min，第一W5溶液10ml和第二W5溶液2ml。
8.根据权利要求7所述的一种棉花原生质体制备方法，其特征在于，第一W5溶液和第二W5溶液相同，包括0.9009g的NaCl、1.3875g的CaCl2、0.0373g的KCl、0.03905g的MES、0.09g的葡萄糖，并用无菌水定容至100ml。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010052295.2A CN111235087B (zh) | 2020-01-17 | 2020-01-17 | 一种棉花原生质体制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010052295.2A CN111235087B (zh) | 2020-01-17 | 2020-01-17 | 一种棉花原生质体制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111235087A CN111235087A (zh) | 2020-06-05 |
| CN111235087B true CN111235087B (zh) | 2022-07-29 |
Family
ID=70871203
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010052295.2A Expired - Fee Related CN111235087B (zh) | 2020-01-17 | 2020-01-17 | 一种棉花原生质体制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111235087B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112063576B (zh) * | 2020-09-23 | 2022-03-25 | 山东师范大学 | 一种以植物幼嫩完整叶为材料快速提取表皮细胞原生质体的方法 |
| CN112458036A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-03-09 | 上海交通大学 | 一种茄子原生质体的制备及瞬时转化方法 |
| CN112980766A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-06-18 | 华中农业大学 | 一种棉花下胚轴单细胞的分离方法 |
| CN113684173B (zh) * | 2021-09-28 | 2023-07-28 | 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 | 一种分离西瓜果实原生质体的方法 |
| CN117363558A (zh) * | 2023-12-07 | 2024-01-09 | 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 | 一种原生质体的制备方法和原生质体的转化方法及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102791865A (zh) * | 2009-12-21 | 2012-11-21 | 凯津公司 | 用于转染原生质体的改进技术 |
| CN104830896A (zh) * | 2015-04-13 | 2015-08-12 | 北京林业大学 | 一种用植物花瓣细胞原生质体表达蛋白的方法 |
| CN109810937A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-05-28 | 中国农业科学院棉花研究所 | 一种亚洲棉原生质体的分离与外源基因转化的方法 |
-
2020
- 2020-01-17 CN CN202010052295.2A patent/CN111235087B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102791865A (zh) * | 2009-12-21 | 2012-11-21 | 凯津公司 | 用于转染原生质体的改进技术 |
| CN104830896A (zh) * | 2015-04-13 | 2015-08-12 | 北京林业大学 | 一种用植物花瓣细胞原生质体表达蛋白的方法 |
| CN109810937A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-05-28 | 中国农业科学院棉花研究所 | 一种亚洲棉原生质体的分离与外源基因转化的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Protoplast isolation and development of a transient expressionsystem for sweet cherry (Prunus avium L.);Liping Yao et al.;《Scientia Horticulturae》;20160617;第209卷;第14-21页 * |
| 几种植物花粉生殖细胞的融合实验;吴新莉等;《植物学报》;19911231;第33卷(第12期);第897-904页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111235087A (zh) | 2020-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111235087B (zh) | 一种棉花原生质体制备方法 | |
| CN107267549B (zh) | 一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法 | |
| CN106167787B (zh) | 一种光皮桦木质部原生质体制备及瞬时转化的方法 | |
| CN108546670A (zh) | 一种高粱原生质体的制备方法及制备的原生质体的转化方法 | |
| CN112813017B (zh) | 国兰原生质体瞬时表达系统及其构建方法与应用 | |
| CN113652390B (zh) | 一种紫薇原生质体的制备方法 | |
| CN114214264B (zh) | 一种草莓原生质体分离纯化及基因瞬时表达的方法 | |
| CN112680473B (zh) | 甜瓜瞬时表达系统的建立和应用 | |
| CN112442476B (zh) | 一种绣球原生质体制备及瞬时转化的方法 | |
| CN111979173B (zh) | 一种高粱原生质体的制备方法及瞬时表达转化的方法 | |
| CN111718887B (zh) | 一种用于分离花生不同组织器官原生质体的方法及其应用 | |
| CN110577925B (zh) | 一种制备水稻根原生质体的组合物和方法 | |
| CN110468093B (zh) | 一种大白菜的原生质体制备及遗传转化方法 | |
| CN113249296B (zh) | 一种茶树新鲜组织原生质体的分离与纯化方法 | |
| CN105274131B (zh) | 一种peg介导胶孢炭疽病菌原生质体遗传转化的方法 | |
| CN110343717B (zh) | 杉木外源基因高效瞬时转化体系的建立方法 | |
| CN112391370B (zh) | 一种制备油松针叶原生质体的方法 | |
| Gupta et al. | A simple protocol for a rapid and consistent production of a large number of viable protoplasts from the Ulvophycean species | |
| CN110669718A (zh) | 一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化的方法 | |
| CN116496972A (zh) | 月季花瓣原生质体的提取和转化 | |
| CN114214305B (zh) | 一种制备蓝果忍冬原生质体的酶解液及其制备方法和应用 | |
| CN113430161A (zh) | 一种高效分离制备狗牙根原生质体的方法 | |
| CN113403254B (zh) | 一种蜡梅原生质体的制备方法 | |
| CN110724660B (zh) | 一种樟子松针叶原生质体的制备方法及应用 | |
| CN117286092A (zh) | 一种小黑杨叶肉原生质体制备及转化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20220729 |