CN110627899A - 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 - Google Patents
一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110627899A CN110627899A CN201910954299.7A CN201910954299A CN110627899A CN 110627899 A CN110627899 A CN 110627899A CN 201910954299 A CN201910954299 A CN 201910954299A CN 110627899 A CN110627899 A CN 110627899A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yolk
- reovirus
- parvovirus
- preparation
- filtrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 title claims abstract description 107
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 title claims abstract description 45
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 title claims abstract description 43
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 39
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 title abstract description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000007779 soft material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 41
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 32
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 29
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 27
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 26
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 25
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 24
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 24
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 24
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 23
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 23
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 23
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 17
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 17
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 16
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 16
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 14
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 12
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 claims description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 12
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 12
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 claims description 12
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 claims description 12
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 claims description 12
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 12
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 11
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 11
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 claims description 10
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims description 8
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 8
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 8
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 8
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 8
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 7
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 5
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 4
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 abstract description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 4
- 235000010603 pastilles Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 16
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 241001503699 Muscovy duck parvovirus Species 0.000 description 3
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 2
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 2
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- SYHGEUNFJIGTRX-UHFFFAOYSA-N methylenedioxypyrovalerone Chemical compound C=1C=C2OCOC2=CC=1C(=O)C(CCC)N1CCCC1 SYHGEUNFJIGTRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241001212582 Ancara Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/04—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from milk
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法，属于卵黄抗体锭领域。本发明采用锭制剂提取的新型呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体提取率高，依次通过稀释、过滤、沉淀脂类、沉淀抗体、制软材包被、压锭的步骤，制备的卵黄抗体的纯度高，提取效率好，本发明制备的卵黄抗体在预防和治疗畜禽疾病方面具有特异性强、作用迅速、无残留等优点，尤其是在治疗与预防水禽呼肠孤病毒、细小病毒具有极佳疗效，而且，本发明的方法可以得到了广泛应用。本发明的方法来源广泛、成本低、无过敏反应且有营养作用，高免卵黄抗体锭,易于保存、运输和应用，可以用于制成各种畜禽疾病，尤其是水禽的呼肠孤病毒、细小病毒的治疗药物。
Description
技术领域
本发明涉及卵黄抗体锭技术领域，尤其涉及一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法。
背景技术
水禽的新型呼肠孤病毒、细小病发病率和死亡率都很高，不仅给养殖业带来很大的危害，而且危及人类的健康。呼肠孤病毒有多种血清型，容易产生耐药性，给疾病的治疗带来了难度。尤其在现代规模化、集约化养殖小区更容易引发此病，还常和鸭肝病毒、禽流感等混合感染，引起大批量死亡，给养殖生产带来巨大的经济损失。水禽呼肠孤病毒和细小病毒目前国内主要采用灭活疫苗，但其使用效果存在差异，且抗体保护时间短，需多次免疫才能获得较强的免疫力。而水禽呼肠孤病毒和细小病毒传染迅速，致病性高，目前还无复合有显著免疫保护力的疫苗可用，灭活苗起效慢，复合抗体有效补充免疫空白期，起效快，效果明显。所以水禽的呼肠孤病毒、细小病毒的抗体属于空白。
卵黄抗体在预防和治疗畜禽疾病方面具有特异性强、作用迅速、无残留等优点，得到了广泛应用。而且，从免疫预防和治疗角度考虑，高免卵黄具有此功效，其来源广泛、成本低、无过敏反应且有营养作用。高免卵黄抗体锭易于保存、运输和应用，在临床试验中已初见成效。因此，如何提取和保存卵黄抗体有效效价，对于卵黄的应用至关重要。现有的提取方法为简单的酸化水法，分离率低，提取效价不稳定。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法。本发明制得的呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭能有效保证抗体的效价，且能够提高抗体的吸收利用率。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭的制备方法，包括以下步骤：
(1)饲养免疫鸡苗：选取健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在所述鸡苗的鸡翅下肌肉注射呼肠孤病毒和细小病毒灭活疫苗进行首免，然后分别进行强化免疫，所述首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达10log2～14log2时收集鸡蛋；
(2)鸡蛋的消毒冷藏：将所述鸡蛋依次进行清洗、消毒、晾干，然后置于4℃下冷藏；
(3)收集蛋黄：将所述步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄搅拌均匀；
(4)稀释蛋黄液：将所述步骤(3)蛋黄与水混合后置于4℃的冷藏室内静置，得到稀释蛋黄液；
(5)过滤：将所述步骤(4)蛋黄稀释液过滤，取过滤液；
(6)沉淀脂类物质：将所述步骤(5)过滤液、生理盐水与羧甲基纤维素混合进行沉淀，得到上清液；
(7)过滤：将所述步骤(6)上清液过滤，取过滤液；
(8)沉淀抗体物质：将所述步骤(7)过滤液与硫酸钠混合进行沉淀，取固体物质；
(9)制锭：将所述步骤(8)固体物质、辅料、蔗糖以及β-环糊精混合，得到软材，然后依次制粒、干燥和压制成锭，得到所述呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
优选地，所述步骤(4)中蛋黄与水的体积比为1:2～4。
优选地，所述步骤(4)中混合后还包括杀菌，所述杀菌的过程为：将所述混合液加热至65～68℃，并保持300秒，然后在10～30秒内冷却到4～5℃。
优选地，所述步骤(6)中过滤液与生理盐水的体积比为1:2～4，所得羧甲基纤维素以羧甲基纤维素溶液的形式加入，所述羧甲基纤维素溶液的浓度为10～30g/L。
优选地，所述步骤(6)中羧甲基纤维素溶液的用量为过滤液的体积的0.3倍。
优选地，所述步骤(6)和(8)中沉淀的温度独立地为10～15℃，时间独立地为12～24h。
优选地，所述步骤(8)中硫酸钠以硫酸钠溶液的形式加入，所述硫酸钠溶液的浓度为10～30g/L。
优选地，所述步骤(9)中固体物质与辅料的质量比为1：3～1：6。
优选地，所述蔗糖的用量为固体物质质量的15～40％，所述β-环糊精的用量为固体物质质量的1～3％。
本发明还提供了上述技术方案所述制备方法制得的呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
本发明提供了一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭的制备方法，包括以下步骤：(1)饲养免疫鸡苗：选取健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在所述鸡苗的鸡翅下肌肉注射呼肠孤病毒和细小病毒灭活疫苗进行首免，然后分别进行强化免疫，所述首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达10log2～14log2时收集鸡蛋；(2)鸡蛋的消毒冷藏：将所述鸡蛋依次进行清洗、消毒、晾干，然后置于4℃下冷藏；(3)收集蛋黄：将所述步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄搅拌均匀；(4)稀释蛋黄液：将所述步骤(3)蛋黄与水混合后置于4℃的冷藏室内静置，得到稀释蛋黄液；(5)过滤：将所述步骤(4)蛋黄稀释液过滤，取过滤液；(6)沉淀脂类物质：将所述步骤(5)过滤液、生理盐水与羧甲基纤维素混合进行沉淀，得到上清液；(7)过滤：将所述步骤(6)上清液过滤，取过滤液；(8)沉淀抗体物质：将所述步骤(7)过滤液与硫酸钠混合进行沉淀，取固体物质；(9)制锭：将所述步骤(8)固体物质、辅料、蔗糖以及β-环糊精混合，得到软材，然后依次制粒、干燥和压制成锭，得到所述呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明采用锭制剂提取的新型呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体提取率高，依次通过稀释、过滤、沉淀脂类、沉淀抗体、制软材包被、压锭的步骤，制备的卵黄抗体的纯度高，提取效率好，本发明制备的卵黄抗体在预防和治疗畜禽疾病方面具有特异性强、作用迅速、无残留等优点，尤其是在治疗与预防水禽呼肠孤病毒、细小病毒具有极佳疗效，而且，本发明的方法可以得到了广泛应用。本发明的方法来源广泛、成本低、无过敏反应且有营养作用，高免卵黄抗体锭,易于保存、运输和应用，可以用于制成各种畜禽疾病，尤其是水禽的呼肠孤病毒、细小病毒的治疗药物。
具体实施方式
本发明提供了一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭的制备方法，包括以下步骤：
(1)饲养免疫鸡苗：选取健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在所述鸡苗的鸡翅下肌肉注射呼肠孤病毒和细小病毒灭活疫苗进行首免，然后分别进行强化免疫，所述首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达10log2～14log2时收集鸡蛋；
(2)鸡蛋的消毒冷藏：将所述鸡蛋依次进行清洗、消毒、晾干，然后置于4℃下冷藏；
(3)收集蛋黄：将所述步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄搅拌均匀；
(4)稀释蛋黄液：将所述步骤(3)蛋黄与水混合后置于4℃的冷藏室内静置，得到稀释蛋黄液；
(5)过滤：将所述步骤(4)蛋黄稀释液过滤，取过滤液；
(6)沉淀脂类物质：将所述步骤(5)过滤液、生理盐水与羧甲基纤维素混合进行沉淀，得到上清液；
(7)过滤：将所述步骤(6)上清液过滤，取过滤液；
(8)沉淀抗体物质：将所述步骤(7)过滤液与硫酸钠混合进行沉淀，取固体物质；
(9)制锭：将所述步骤(8)固体物质、辅料、蔗糖以及β-环糊精混合，得到软材，然后依次制粒、干燥和压制成锭，得到所述呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
本发明饲养免疫鸡苗：选取健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在所述鸡苗的鸡翅下肌肉注射呼肠孤病毒和细小病毒灭活疫苗进行首免，然后分别进行强化免疫，所述首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达10log2～14log2时收集鸡蛋。在本发明中，所述呼肠孤病毒的强化免疫优选在首免后一周进行，所述细小病毒的强化免疫优选在首免后两周进行。在本发明中，所述强化免疫的用量优选与首免时相同。
本发明进行鸡蛋的消毒冷藏：将所述鸡蛋依次进行清洗、消毒、晾干，然后置于4℃下冷藏。
本发明收集蛋黄：将所述冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄搅拌均匀。在本发明中，将蛋黄搅拌均匀优选使用搅拌机，所述搅拌机的搅拌速率优选为150～200r/min，搅拌时间优选为15～20min。
本发明稀释蛋黄液：将所述蛋黄与水混合后置于4℃的冷藏室内静置，得到稀释蛋黄液。在本发明中，所述蛋黄与水的体积比优选为1:2～4。
在本发明中，所述混合后优选还包括杀菌，所述杀菌的过程优选为：将所述混合液加热至65～68℃，并保持300秒，然后在10～30秒内冷却到4～5℃。
本发明将所述蛋黄稀释液过滤，取过滤液。在本发明中，所述过滤优选使用过滤膜。在本发明中，所述过滤膜的滤孔大小优选为15微米。
本发明沉淀脂类物质：将所述过滤液、生理盐水与羧甲基纤维素混合进行沉淀，得到上清液。在本发明中，所述过滤液与生理盐水的体积比优选为1:2～4，所得羧甲基纤维素优选以羧甲基纤维素溶液的形式加入，所述羧甲基纤维素溶液的浓度优选为10～30g/L，所述羧甲基纤维素溶液的用量优选为过滤液的体积的0.3倍。
在本发明中，所述沉淀的温度优选为10～15℃，时间优选为12～24h。
本发明将所述上清液过滤，取过滤液。在本发明中，所述过滤优选为筛分过滤，所述筛分过滤优选使用中空纤维过滤器，所述中空纤维过滤器的筛分的抗体分子量大小优选为5～10万分子量。
本发明沉淀抗体物质：将所述过滤液与硫酸钠混合进行沉淀，取固体物质。在本发明中，所述硫酸钠优选以硫酸钠溶液的形式加入，所述硫酸钠溶液的浓度优选为10～30g/L。
在本发明中，所述沉淀的温度优选为10～15℃，时间优选为12～24h。
本发明制锭：将所述固体物质、辅料、蔗糖以及β-环糊精混合，得到软材，然后依次制粒、干燥和压制成锭，得到所述呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
本发明中，所述固体物质与辅料的质量比优选为1：3～1：6。本发明对所述辅料的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的种类即可。
在本发明中，所述蔗糖的用量优选为固体物质质量的15～40％，所述β-环糊精的用量优选为固体物质质量的1～3％。
在本发明中，所述β-环糊精和蔗糖对固体物质和辅料的包封率优选达到90％以上。
在本发明中，所述干燥优选在热风循环干燥机中进行，所述干燥的温度优选为60～75℃，时间优选为1～3小时。
在本发明中，所述压制成锭优选使用压锭机压制每锭100克，然后用铝箔袋包装，置于4℃下冷藏。
为了进一步说明本发明，下面结合实例对本发明提供的呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例一
卵黄抗体干燥粉制备的方法，包括以下步骤：
(1)饲养免疫鸡苗：选取一定数量的健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在各只鸡苗的鸡翅下肌肉注射新型呼肠孤病毒、细小病毒灭活疫苗进行首免，于1周、2周之后分别进行相同剂量的强化免疫，首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达10log2以上时收集鸡蛋；
(2)鸡蛋的消毒冷藏：将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后利用消毒液进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下冷藏；
(3)收集蛋黄：将步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄利用搅拌机搅拌均匀；搅拌机的搅拌速率为150r/min，搅拌时间为15min；
(4)稀释蛋黄液：边搅拌边缓慢加入2倍蛋黄体积的去离子蒸馏水，完全加完去离子蒸馏水后继续搅拌20min，之后置于4℃的冷藏室内静置3h；
(5)过滤：将所述步骤(4)得到的蛋黄稀释液利用过滤膜进行过滤，取过滤液；滤膜的滤孔大小为15微米。
(6)沉淀脂类物质：向过滤液中加人2倍体积的生理盐水震荡混匀，加入浓度为30g/L的羧甲基纤维素(羧甲基纤维素溶液的用量为过滤液的体积的0.3倍)，搅拌均匀，在15℃下作用24h，利用沉降离心机离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，之后静置沉淀，取上清液；
(7)过滤：将所述步骤(6)得到的上清液利用过滤膜进行过滤，取过滤液；
(8)沉淀抗体物质：向过滤液中加入浓度为300g/L的硫酸钠，搅拌均匀，在15℃下作用12h，利用管式离心机离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，之后收取离心管中固体物质；
(9)制锭：抗体膏(固体物质与辅料的质量比为1：3)与加入蔗糖40％、β-环糊精3％包被制造软材，软材后制粒，热风循环干燥机采用60℃烘干，3小时，制成干燥颗粒，压锭机压制每锭100克，用铝箔袋包装，置于4℃下冷藏。
实施例二
卵黄抗体干燥粉制备的方法，包括以下步骤：
(1)饲养免疫鸡苗：选取一定数量的健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在各只鸡苗的鸡翅下肌肉注射新型呼肠孤病毒、细小病毒灭活疫苗进行首免，于1周、2周之后分别进行相同剂量的强化免疫，首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达14log2时收集鸡蛋；
(2)鸡蛋的消毒冷藏：将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后利用消毒液进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下冷藏；
(3)收集蛋黄：将步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄利用搅拌机搅拌均匀；搅拌机的搅拌速率为200r/min，搅拌时间为20min；
(4)稀释蛋黄液：边搅拌边缓慢加入3倍蛋黄体积的去离子蒸馏水，完全加完去离子蒸馏水后继续搅拌20min，之后置于4℃的冷藏室内静置5h；
所述的步骤(4)，还设置有杀菌步骤，杀菌的条件是将稀释蛋黄液液加热至65℃，并保持此温度300秒，之后在10秒内将其急速冷却到4℃。
(5)过滤：将所述步骤(4)得到的蛋黄稀释液利用过滤膜进行过滤，取过滤液；
(6)沉淀脂类物质：向过滤液中加人2倍体积的生理盐水震荡混匀,加入浓度为30g/L的羧甲基纤维素(羧甲基纤维素溶液的用量为过滤液的体积的0.3倍)，搅拌均匀，在15℃下作用24h，利用沉降离心机离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，之后静置沉淀，取上清液；
(7)过滤：将所述步骤(6)得到的上清液利用过滤膜进行过滤，取过滤液；滤膜的滤孔大小为15微米。
(8)沉淀抗体物质：向过滤液中加入浓度为300g/L的硫酸钠溶液，搅拌均匀，在15℃下作用12h，利用管式离心机离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，之后收取离心管中固体物质；
(9)制锭：抗体膏(固体物质与辅料的质量比为1：6)与加入蔗糖40％，β-环糊精3％包被制造软材，软材后制粒，热风循环干燥机采用60℃烘干3小时，制成干燥颗粒，压锭机压制每锭100克，用铝箔袋包装，置于4℃下冷藏。
实施例三
卵黄抗体干燥粉制备的方法包括以下步骤：
(1)饲养免疫鸡苗：选取一定数量的健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在各只鸡苗的鸡翅下肌肉注射新型呼肠孤病毒、细小病毒灭活疫苗进行首免，于1周、2周之后分别进行相同剂量的强化免疫，首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达12log2时收集鸡蛋；
(2)鸡蛋的消毒冷藏：将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后利用消毒液进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下冷藏；
(3)收集蛋黄：将步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄利用搅拌机搅拌均匀；搅拌机的搅拌速率为180r/min，搅拌时间为18min；
(4)稀释蛋黄液：边搅拌边缓慢加入2.5倍蛋黄体积的去离子蒸馏水，完全加完去离子蒸馏水后继续搅拌20min，之后置于4℃的冷藏室内静置4h；
所述步骤(4)还设置有杀菌步骤，杀菌的条件是将稀释蛋黄液液加热至68℃，并保持此温度300秒，之后在10秒内将其急速冷却到5℃。
(5)过滤：将所述步骤(4)得到的蛋黄稀释液利用过滤膜进行过滤，取过滤液；
(6)沉淀脂类物质：向过滤液中加人2倍体积的生理盐水震荡混匀,加入浓度为30g/L的羧甲基纤维素(羧甲基纤维素溶液的用量为过滤液的体积的0.3倍)，搅拌均匀，在15℃下作用24h，利用沉降离心机离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，之后静置沉淀，取上清液；
(7)过滤：将所述步骤(6)得到的上清液利用过滤膜进行过滤，取过滤液；滤膜的滤孔大小为15微米
(8)沉淀抗体物质：向过滤液中加入浓度为300g/L的硫酸钠，搅拌均匀，在15℃下作用12h，利用管式离心机离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，之后收取离心管中固体物质；
(9)制锭：抗体膏与加入蔗糖40％、β-环糊精3％包被制造软材，软材后制粒，热风循环干燥机采用60℃烘干3小时，制成干燥颗粒，压锭机压制每锭100克，用铝箔袋包装，置于4℃下冷藏。
试验例本发明所得新型呼肠孤病毒和细小病毒复合抗体锭试验研究：
1.耐热储存试验
将本实施例1的产品置于37℃环境中，分别保存1周、2周、1月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用NDRV和MDPV测定法，分别测定新型呼肠孤病毒和水禽细小病毒的卵黄抗体血凝抑制效价。结果如表1所示。由表1数据可知，本产品在37℃环境下，保存12个月内，其分别对新型呼肠孤病毒和水禽细小病毒抑制作用保持不变，当保存时间为12个月-24个月，其对新型呼肠孤病毒和水禽细小病毒抑制作用有所下降；同时，由结果可知，本产品对新型呼肠孤病毒和水禽细小病毒抑制作用时间保持在16个月内稳定不变，当保存时间超过16个月，其抑制作用明显下降。综上，由耐热储存试验可知，本发明产品在37℃的保存条件下，其最佳保存与使用期限为16个月。
表1本实施例1产品的保存试验结果
| 1周 | 2周 | 1月 | 4月 | 8月 | 12月 | 16月 | 20月 | 24月 | |
| NDRV | 1:32 | 1:32 | 1:32 | 1:32 | 1:32 | 1:32 | 1:16 | 1:16 | 1:16 |
| MDPV | 1:64 | 1:64 | 1:64 | 1:64 | 1:64 | 1:64 | 1:32 | 1:32 | 1:32 |
2.保护力试验：
选7日龄雏鸭50只，其中20只作为试验组，每只口服2羽份本实施例1的产品，另30只作为对照。24h后取试验组全部雏鸭和20只对照组雏鸭肌肉注NDRV和MDPV病毒稀释液，剩余10只作为空白对照，记录96h死亡情况。见表2。由表2可知，试验组的保护率在90％以上，攻毒对照组死亡率90％，空白对照组雏鸭无死亡情况。由此表明，本产品对新型呼肠孤病毒和水禽细小病毒有显著的治疗效果。
表2感染鸡只死亡率结果
本发明采用制备方法提取的卵黄抗体提取率高，依次通过稀释、过滤、沉淀脂类的步骤，制备的卵黄抗体的纯度高，提取效率好，在预防和治疗畜禽疾病方面具有特异性强、作用迅速、无残留等优点，尤其是在治疗与预防水禽呼肠孤病毒、细小病毒具有极佳疗效，而且，本发明的方法可以得到了广泛应用。本发明的方法来源广泛、成本低、无过敏反应且有营养作用，高免卵黄抗体粉,易于保存、运输和应用，可以用于制成各种畜禽疾病，尤其是禽流感、安卡拉病的治疗药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)饲养免疫鸡苗：选取健康的25周龄的鸡苗，隔离饲养，并在所述鸡苗的鸡翅下肌肉注射呼肠孤病毒和细小病毒灭活疫苗进行首免，然后分别进行强化免疫，所述首免后检测鸡苗的血清中抗体水平达10log2～14log2时收集鸡蛋；
(2)鸡蛋的消毒冷藏：将所述鸡蛋依次进行清洗、消毒、晾干，然后置于4℃下冷藏；
(3)收集蛋黄：将所述步骤(2)冷藏后的鸡蛋打蛋，并在4℃且无菌的条件下将蛋清与蛋黄分离，取蛋黄，将蛋黄搅拌均匀；
(4)稀释蛋黄液：将所述步骤(3)蛋黄与水混合后置于4℃的冷藏室内静置，得到稀释蛋黄液；
(5)过滤：将所述步骤(4)蛋黄稀释液过滤，取过滤液；
(6)沉淀脂类物质：将所述步骤(5)过滤液、生理盐水与羧甲基纤维素混合进行沉淀，得到上清液；
(7)过滤：将所述步骤(6)上清液过滤，取过滤液；
(8)沉淀抗体物质：将所述步骤(7)过滤液与硫酸钠混合进行沉淀，取固体物质；
(9)制锭：将所述步骤(8)固体物质、辅料、蔗糖以及β-环糊精混合，得到软材，然后依次制粒、干燥和压制成锭，得到所述呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中蛋黄与水的体积比为1:2～4。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中混合后还包括杀菌，所述杀菌的过程为：将所述混合液加热至65～68℃，并保持300秒，然后在10～30秒内冷却到4～5℃。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中过滤液与生理盐水的体积比为1:2～4，所得羧甲基纤维素以羧甲基纤维素溶液的形式加入，所述羧甲基纤维素溶液的浓度为10～30g/L。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中羧甲基纤维素溶液的用量为过滤液的体积的0.3倍。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)和(8)中沉淀的温度独立地为10～15℃，时间独立地为12～24h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(8)中硫酸钠以硫酸钠溶液的形式加入，所述硫酸钠溶液的浓度为10～30g/L。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(9)中固体物质与辅料的质量比为1：3～1：6。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蔗糖的用量为固体物质质量的15～40％，所述β-环糊精的用量为固体物质质量的1～3％。
10.权利要求1～9任一项所述制备方法制得的呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910954299.7A CN110627899A (zh) | 2019-10-09 | 2019-10-09 | 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910954299.7A CN110627899A (zh) | 2019-10-09 | 2019-10-09 | 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110627899A true CN110627899A (zh) | 2019-12-31 |
Family
ID=68975886
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910954299.7A Pending CN110627899A (zh) | 2019-10-09 | 2019-10-09 | 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110627899A (zh) |
Citations (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1844144A (zh) * | 2006-05-08 | 2006-10-11 | 江南大学 | 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 |
| CN101081866A (zh) * | 2006-05-29 | 2007-12-05 | 雅臣药业集团（远东）有限公司 | 抗家畜和水产病原体的特异性IgY或复合IgY及其应用 |
| CN103694348A (zh) * | 2013-12-10 | 2014-04-02 | 刘聚祥 | 一种治疗猪病毒性腹泻生物制剂的制备和应用方法 |
| CN103796683A (zh) * | 2011-04-21 | 2014-05-14 | 塔夫茨大学信托人 | 用于活性试剂稳定化的方法和组合物 |
| CN104151435A (zh) * | 2014-08-21 | 2014-11-19 | 四川万可泰生物技术有限责任公司 | 一种防治幽门螺杆菌的含分子内佐剂的重组基因、蛋白及生物制品 |
| CN104162160A (zh) * | 2013-07-24 | 2014-11-26 | 河南联合英伟饲料有限公司 | 饲料添加剂用抗病毒组合物、冻干粉、制备方法及应用 |
| CN104349789A (zh) * | 2012-04-05 | 2015-02-11 | 戈特弗里德·希姆莱 | 分泌性免疫球蛋白复合物 |
| CN105585632A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-05-18 | 重庆三杰众鑫生物工程有限公司 | 肉鸭细小病毒精制卵黄抗体 |
| CN105891469A (zh) * | 2014-11-14 | 2016-08-24 | 宁波大学 | 一种三疣梭子蟹呼肠孤病毒检测试纸条及其制备方法 |
| CN103936850B (zh) * | 2014-04-16 | 2017-01-18 | 华中农业大学 | 用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液及应用 |
| CN107043415A (zh) * | 2017-03-07 | 2017-08-15 | 尤丽康（江苏）生物医药有限公司 | 一种卵黄免疫球蛋白的提取方法 |
| CN107383189A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-11-24 | 山东阿斯可来生物技术有限公司 | 卵黄抗体干燥粉制备的方法 |
| CN107586333A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-01-16 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法 |
| CN107739406A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-02-27 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒二联卵黄抗体的制备方法 |
| CN108715613A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-10-30 | 四川农业大学 | 鸭源鹅细小病毒的卵黄抗体制备方法 |
| CN108794627A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-13 | 重庆永健生物技术有限责任公司 | 一种鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体的制备方法 |
| CN108912227A (zh) * | 2018-08-10 | 2018-11-30 | 山东农业大学 | 一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法和应用 |
-
2019
- 2019-10-09 CN CN201910954299.7A patent/CN110627899A/zh active Pending
Patent Citations (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1844144A (zh) * | 2006-05-08 | 2006-10-11 | 江南大学 | 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 |
| CN101081866A (zh) * | 2006-05-29 | 2007-12-05 | 雅臣药业集团（远东）有限公司 | 抗家畜和水产病原体的特异性IgY或复合IgY及其应用 |
| CN103796683A (zh) * | 2011-04-21 | 2014-05-14 | 塔夫茨大学信托人 | 用于活性试剂稳定化的方法和组合物 |
| CN104349789A (zh) * | 2012-04-05 | 2015-02-11 | 戈特弗里德·希姆莱 | 分泌性免疫球蛋白复合物 |
| CN104162160A (zh) * | 2013-07-24 | 2014-11-26 | 河南联合英伟饲料有限公司 | 饲料添加剂用抗病毒组合物、冻干粉、制备方法及应用 |
| CN103694348A (zh) * | 2013-12-10 | 2014-04-02 | 刘聚祥 | 一种治疗猪病毒性腹泻生物制剂的制备和应用方法 |
| CN103936850B (zh) * | 2014-04-16 | 2017-01-18 | 华中农业大学 | 用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液及应用 |
| CN104151435A (zh) * | 2014-08-21 | 2014-11-19 | 四川万可泰生物技术有限责任公司 | 一种防治幽门螺杆菌的含分子内佐剂的重组基因、蛋白及生物制品 |
| CN105891469A (zh) * | 2014-11-14 | 2016-08-24 | 宁波大学 | 一种三疣梭子蟹呼肠孤病毒检测试纸条及其制备方法 |
| CN105585632A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-05-18 | 重庆三杰众鑫生物工程有限公司 | 肉鸭细小病毒精制卵黄抗体 |
| CN107043415A (zh) * | 2017-03-07 | 2017-08-15 | 尤丽康（江苏）生物医药有限公司 | 一种卵黄免疫球蛋白的提取方法 |
| CN107383189A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-11-24 | 山东阿斯可来生物技术有限公司 | 卵黄抗体干燥粉制备的方法 |
| CN107586333A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-01-16 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法 |
| CN107739406A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-02-27 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒二联卵黄抗体的制备方法 |
| CN108715613A (zh) * | 2018-06-05 | 2018-10-30 | 四川农业大学 | 鸭源鹅细小病毒的卵黄抗体制备方法 |
| CN108794627A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-13 | 重庆永健生物技术有限责任公司 | 一种鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体的制备方法 |
| CN108912227A (zh) * | 2018-08-10 | 2018-11-30 | 山东农业大学 | 一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| BASANT B. SHAH等: "SEPARATION of EGG YOLK PROTEINS and LIPIDS WITH CARBOXYMETHYL CELLULOSE", 《JOURNAL OF FOOD PROCESSING AND PRESERVATION》 * |
| CHENYAOTONG等: "A simple method for isolating chicken egg yolk immunoglobulin using effective delipidation solution and ammonium sulfate", 《POULTRY SCIENCE》 * |
| HUNG-MIN CHANG等: "Isolation of Immunoglobulin from Egg Yolk by Anionic Polysaccharides", 《J. AGRIC. FOOD CHEM.》 * |
| SHOFIQUR RAHMAN等: "Oral passive IgY-based immunotherapeutics", 《HUMAN VACCINES & IMMUNOTHERAPEUTICS》 * |
| 史同瑞等: "卵黄免疫球蛋白提取和纯化方法", 《中国家禽》 * |
| 王宏: "《鸡病最新防治技术》", 31 October 1997, 辽宁科学技术出版社 * |
| 郭鑫: "《动物免疫学实验教程 第2版》", 28 February 2017, 中国农业大学出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111000993B (zh) | 一种鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN102716483A (zh) | 一种鸭瘟卵黄抗体冻干粉及其制备方法 | |
| CN103172732B (zh) | 一种抗小鹅瘟蛋黄抗体及其制备方法 | |
| CN104606675B (zh) | 一种禽用多联特异性卵黄抗体及转移因子的制备方法 | |
| CN104258389B (zh) | 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| CN113493507B (zh) | 新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体及其制备方法和应用 | |
| CN110078819A (zh) | 一种抗非洲猪瘟的抗体及其制备方法 | |
| CN101690811A (zh) | 一种鸡传染性法氏囊病浓缩冻干卵黄抗体复合制剂及其制备工艺 | |
| CN106563125B (zh) | 鸭甲肝病毒ⅲ型复合物活疫苗及其制备方法 | |
| CN110627899A (zh) | 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 | |
| CN112608382B (zh) | 鸭呼肠孤病毒病、鸭病毒性肝炎二联卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN104208675B (zh) | 一种抗鸡病毒性疾病的混合冻干粉及其制备方法 | |
| NL8005577A (nl) | Werkwijze voor het bereiden van een vaccin. | |
| CN104984337A (zh) | 一种鸡新城疫、禽流感抗原抗体复合物灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN111035760A (zh) | 一种小鹅瘟精制卵黄抗体的制备方法 | |
| CN106928349A (zh) | 一种禽腺病毒4型卵黄抗体制备方法 | |
| CN109223716B (zh) | 一种抗猪流行性腹泻、猪瘟、伪狂犬和传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉及其制备方法 | |
| CN112552398A (zh) | 一种鸭病毒性肝炎卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN111087467A (zh) | 鸭病毒性肝炎、鸭大舌病二联多价卵黄抗体的制备方法 | |
| CN113214388B (zh) | 一种鹅星状病毒卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN108703952A (zh) | 一种猪瘟口服弱毒冻干疫苗用冻干保护剂及应用 | |
| CN106466478A (zh) | 一种免疫组合物、含有该组合物疫苗及其应用 | |
| Lindenmann | The use of viruses as immunological potentiators | |
| CN114539396B (zh) | 一种牛肠道病毒卵黄抗体及制剂 | |
| CN111166874A (zh) | 一种小鹅瘟口服精制卵黄抗体的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191231 |