CN1844144A - 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 - Google Patents
一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1844144A CN1844144A CN 200610040414 CN200610040414A CN1844144A CN 1844144 A CN1844144 A CN 1844144A CN 200610040414 CN200610040414 CN 200610040414 CN 200610040414 A CN200610040414 A CN 200610040414A CN 1844144 A CN1844144 A CN 1844144A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yolk
- antibody
- egg
- yolk antibody
- filtration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 21
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 23
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 16
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 16
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 12
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 10
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 claims description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 6
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 6
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 5
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 claims description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 4
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims description 4
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 claims description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 3
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 claims description 3
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 claims description 3
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 3
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 claims description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 claims description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 claims description 3
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 claims description 3
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 claims description 2
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 claims description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 claims description 2
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical group [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 claims description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 2
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 5
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 2
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 2
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 2
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 2
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 2
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010064696 N,O-diacetylmuramidase Proteins 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，属于生物制品和工业化分离技术领域。本发明采用食品级天然高分子胶高效提取技术，结合超滤技术，实现了工业化规模从蛋黄中分离提取高生物活性卵黄抗体，年产10吨以上。产品中卵黄抗体含量可达30％－50％，同时蛋清和剩余蛋黄经加工后，还可得到蛋白粉、蛋黄粉或蛋黄油与蛋黄卵磷脂等副产品。本发明采用了生物免疫、膜分离等高新技术，具有技术含量高，资源利用度高，自动化程度高的特点，是清洁工艺生产绿色生物活性食品的典型代表。
Description
技术领域
一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，属于生物制品和工业化分离技术领域。
背景技术
鸡卵黄中富含卵黄抗体、高磷蛋白等生物活性蛋白，并被认为是活性抗体含量与活性最高，也是最廉价的资源。但迄今为止，还没有如人们所期望的那样得到工业化利用。其主要原因是因为卵黄中含有丰富的脂肪、蛋白质、胆固醇、卵磷脂等多种物质，对卵黄抗体的工业化分离造成了严重的困难。目前分离卵黄抗体的方法主要有以下几种：(1)采用乙醇、聚乙二醇、丙酮等有机试剂分离的方法，虽然分离效果较好，但因为卵黄抗体主要是用于功能食品添加剂、生物医药等领域，因此如采用上述办法则有以下几个方面的问题。一是成本较高(试剂耗量大，如目前普遍采用的PEG-6000的用量最高达到12％的高浓度)；二是工艺复杂，操作条件难以掌握，且易造成卵黄抗体活性损失；三是产品最终有化学有害物质残留，产品的安全性达不到要求。(2)采用离子交换、金属螯合色谱、亲和色谱分离的方法，虽然纯度较高，但生产规模只以克计，而成本更可高达每克上百元。(3)采用CMC、海藻酸钠和壳聚糖等大分子胶的水相抽提法，由于直接将大分子胶加入蛋黄体系，因此抽提效率较低，并在蛋黄中仍然含有较多的杂质及CMC、海藻酸钠等残留胶体大分子，直接影响了下一步超滤分离浓缩工艺。
发明内容
本发明的目的是提供一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，采用食品级天然高分子胶高效澄清技术，结合低温超滤浓缩分离新工艺，彻底解决了在分离过程中蛋黄液中残留高分子胶体的缺点，有利于卵黄抗体的分离提取，同时又使得蛋黄液可以得到进一步的应用。采用本发明能够以年产10吨以上的规模生产高生物活性卵黄抗体产品。同时剩余蛋清和蛋黄粉经加工后，还可得到蛋白粉、剩余蛋黄粉或蛋黄油与蛋黄卵磷脂等副产品，使得蛋黄的加工深度得到了极大的提高，产品附加值也大增加，而成本则远低于以前的方法。
本发明的技术方案：主要创新点有如下几点：(1)以蛋鸡为生物转化器，采用疫苗对蛋鸡进行免疫接种，以提高卵黄抗体的生物效价，一般可提高16倍至64倍。其疫苗为人体口腔、胃肠道常见致病菌、病毒等，如致病性大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、变异链球菌或胃幽门螺杆菌。上述菌种与免疫佐剂制成疫苗后，对20～25周龄的蛋鸡进行免疫注射，共4～6次，其鸡蛋中的抗体高活性可维持1年左右。如只需生产普通的、无特异性的蛋黄抗体也可以省掉此免疫步骤，而生产工艺则完全相同。(2)采用食品级天然高分子胶高效澄清技术，结合工业化超滤浓缩分离技术，从蛋黄中分离提取活性卵黄抗体，使活性卵黄抗体的低成本、工业化分离得以实现，可达到年产10吨以上卵黄抗体产品的生产规模。卵黄抗体的产品纯度可达到30％-50％。(3)采用有机膜或陶瓷膜微滤对浓缩液进行冷除菌，其产品的总菌数可小于500CFU/g，大大好于类似产品一初乳粉或初乳清粉中的微生物指标。(4)整个工艺流程都在低温下(0～12℃)进行，确保了产品的高生物活性。
本发明的工艺为：
(1)将蛋鸡免疫后所产之新鲜鸡蛋或普通新鲜鸡蛋作为原料，经检查消毒后，采用手工或机械方式分离蛋清和蛋黄。蛋清可直接经喷雾干燥制得副产品蛋白粉，或经发酵后喷雾干燥制得脱糖蛋白粉。将蛋黄经纯水稀释、搅拌、离心或沉淀分离后，得卵黄抗体粗提液，技术条件为：蛋黄∶纯水＝1∶6～20(w/w)，直接搅拌5～25分钟，用蝶式离心机3000～8000r/min分离或在0～12℃下自然沉降4～16小时后分离。上清液为卵黄抗体粗提液。沉淀物(剩余蛋黄)经喷雾干燥后制得副产品蛋黄粉或采用超临界提取方法分离得到蛋黄卵磷脂、蛋黄油和剩余蛋黄粉等副产品。
(2)将卵黄抗体粗提液，按顺序加入食品级天然高分子胶和食品级无机或有机钙盐，分别经搅拌、离心分离或板框过滤后得到澄清液，技术条件为：食品级天然高分子胶为阿拉伯胶、卡拉胶、海藻酸钠、黄原胶等，无机或有机钙盐为食品级醋酸钙、氯化钙、乳酸钙等，其组成比例视料液情况而稍有不同，食品级天然高分子胶的用量为卵黄抗体粗提液质量的0.01％～2.8％，搅拌5～30min，然后静置10min～40min后，经蝶式离心或板框过滤后去除沉淀物，蝶式离心机2000～5000r/min分离或加入卵黄抗体粗提液质量的0.1％～1.5％的硅藻土进行板框过滤，沉淀物等杂质弃去，取澄清液。
(3)澄清液进行低温连续超滤膜分离，得到浓缩截留液。超滤温度为4～12℃，超滤膜的截留相对分子质量为50,000～150,000，采用聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)、改性聚砜膜(PS膜)或聚醚砜膜(POS)。膜总面积可达300M2以上。
(4)超滤透过液主要是一些低分子物质，可弃去。最后将浓缩截留液在4～12℃微滤除菌，微滤膜材料为改性聚砜膜(PS膜)或陶瓷膜等，孔径为0.1-0.5μm。
(5)微滤透过液在-40～-30℃冷冻120分钟，再逐步升温至30℃，干燥22小时，得到主产品生物活性卵黄抗体。
本发明的有益效果：
(1)通过鸡的疫苗免疫可得到高含量，高效价的活性卵黄抗体，极大地提高了对人体常见致病菌的抑菌能力，一般效价可提高16～64倍。
(2)该工艺采用食品级天然高分子胶提取技术，大大降低了后道工序中超滤膜的污染，使得工业化超滤生产得以实现。
(3)超滤工艺具有无相态变化，不存在高温或化学因素破坏的优点，从根本上攻克了卵黄抗体在加工过程中容易失活的难关，可最大程度地保留产品的活性。
(4)微滤除菌既能够去除包括活菌体和死菌体在内的绝大多数的细菌体，又保留了产品的生物活性，而其他方法(如巴氏热杀菌或辐照低温杀菌)都会使蛋黄抗体的效价大大降低，从而大大降低产品的生物活性。
(5)由于该工艺在水相提取卵黄抗体时，只使用了纯水，不必调节pH，从而使得对副产品蛋黄粉或全蛋粉的影响比其他工艺要小得多。而且采用了膜分离等高新技术后，可保证卵黄抗体产品中不含任何有害物质，不含激素，高效安全。
(6)提高了资源利用度，在生产过程中避免使用有机溶剂等有害物质，减少污染，保护了环境。
(7)自动化程度较高，操作条件容易掌握，生产效率高，生产成本可大幅降低。
附图说明
图1高生物活性卵黄抗体制备工艺流程框图。
具体实施方式
实施例1
将10吨新鲜鸡蛋经消毒、打蛋、分蛋，所得蛋清经喷雾干燥或微生物发酵后制得副产品蛋白粉或脱糖蛋白粉约600公斤左右，所得蛋黄约2.3吨加入25～45吨纯水，搅拌15分钟，沉淀4～16小时，离心分离。沉淀物为剩余蛋黄，经喷雾干燥制得副产品蛋黄粉，约1200公斤左右。上清液为卵黄抗体粗提液，按配比加入食品级添加剂黄原胶和乳酸钙，搅拌15分钟，经板框过滤后将沉淀物弃去。澄清液经POS膜超滤，4～12℃，膜面积100m2。浓缩截留液经0.22μmPS膜或陶瓷微滤膜除菌后，再急冻至-40～-30℃，保持120min左右，然后在不大于10Pa真空度，不超过30℃条件下干燥22小时，得到主产品生物活性卵黄抗体，约为23～30公斤。
实施例2
蛋鸡的免疫方法：免疫的疫苗为人体口腔、胃肠道常见致病菌或病毒：致病性大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、变异链球菌或胃幽门螺杆菌，上述菌种与免疫佐剂制成疫苗后，对20～25周龄的蛋鸡进行免疫注射，共4～6次。
取10吨蛋鸡经上述方法免疫后所产之新鲜鸡蛋为原料，所得卵黄抗体粗提液，按配比加入食品添加剂卡拉胶和氯化钙，其余操作同实施例1，所得主产品为高生物活性卵黄抗体，比实施例1从普通鸡蛋中所得的生物活性卵黄抗体的生物效价高16～64倍。
应用例
本产品可用于含生物活性卵黄抗体的婴儿、老年人及免疫功能低下人群的功能食品中，如婴儿仿母乳产品，其主要成分有活性抗体(即活性免疫球蛋白)、乳铁蛋白、DHA(及EPA)、溶菌酶、低分子量蛋白质和碳水化合物，其配比近似于母乳组成，由低含量的乳糖、矿物质、50％以上的蛋白质和不少于5％的免疫球蛋白和1％的乳铁蛋白组成，稀释成浓度3.0-5.0g/L的溶液，其免疫活力与初乳相近。这类婴儿食品在脂肪酸和活性抗体的组成含量上与母乳相近，有利于婴儿吸收并提高对疾病的免疫能力，对婴儿的生长发育也有明显的促进作用。另外，也可直接添加于新一代仿母乳婴儿配方奶粉中，生产功能性更接近于母乳的新一代婴儿配方奶粉，其产品含有0.2％～2.0％以上的生物活性卵黄抗体。
Claims (7)
1.一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，其特征是采用食品级天然高分子胶提取技术，结合超滤技术，从蛋黄中分离生物活性卵黄抗体，其工艺为：
(1)以蛋鸡免疫后所产之新鲜鸡蛋或普通新鲜鸡蛋为原料，经消毒、分离蛋清后，将所得蛋黄液经纯水稀释、搅拌、离心或沉淀分离处理：蛋黄∶纯水质量比为1∶6～20，搅拌5～25分钟，用蝶式离心机3000～8000r/min分离或在0～12℃下自然沉降4～16小时，上清液为卵黄抗体粗提液；
(2)卵黄抗体粗提液中依次加入食品级天然高分子胶和食品级无机或有机钙盐，经搅拌、离心分离或板框过滤处理：食品级天然高分子胶的用量为卵黄抗体粗提液质量的0.01％～2.8％，食品级无机或有机钙盐的用量为卵黄抗体粗提液质量的0.01％～3.50％，搅拌5～30分钟，静置10～40分钟，蝶式离心机2000～5000r/min分离，或加入卵黄抗体粗提液质量的0.1％～1.5％的硅藻土进行板框过滤，取澄清液；
(3)将澄清液进行连续超滤膜分离，得到浓缩截留液，超滤温度4～12℃，超滤膜的截留相对分子质量为50,000～150,000，膜材料为聚偏氟乙烯膜、改性聚砜膜或聚醚砜膜；
(4)将浓缩截留液在4～12℃微滤除菌，微滤膜孔径为0.1-0.5μm，膜材料为陶瓷膜或改性聚砜膜；
(5)将微滤透过液经-40～-30℃冷冻120分钟，再逐步升温至30℃，干燥22小时，得到主产品生物活性卵黄抗体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是蛋鸡的免疫：免疫的疫苗为人体口腔、胃肠道常见致病菌或病毒：致病性大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、变异链球菌或胃幽门螺杆菌，上述菌种与免疫佐剂制成疫苗后，对20～25周龄的蛋鸡进行免疫注射，共4～6次，蛋鸡经免疫后所产之新鲜鸡蛋比普通鸡蛋所含有卵黄抗体的生物效价高16～64倍，其鸡蛋中的抗体高活性可维持1年。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所用食品级天然高分子胶为阿拉伯胶、卡拉胶、海藻酸钠或黄原胶，所用食品级无机或有机钙盐为醋酸钙、氯化钙或乳酸钙。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是采用微滤技术对超滤浓缩截留液进行冷除菌，主产品生物活性卵黄抗体的微生物指标总菌数小于500CFU/g。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是主产品生物活性卵黄抗体中卵黄抗体的含量达到30％-50％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征是实现了年产10吨以上的工业化规模生产生物活性卵黄抗体。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征是原料鸡蛋分离所得之蛋清，直接经喷雾干燥制得副产品蛋白粉，或者经发酵后喷雾干燥制得副产品脱糖蛋白粉；蛋黄经抽提后的剩余蛋黄沉淀物经喷雾干燥制得副产品蛋黄粉，或进一步加工得到蛋黄油与蛋黄卵磷脂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200610040414A CN100575362C (zh) | 2006-05-08 | 2006-05-08 | 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200610040414A CN100575362C (zh) | 2006-05-08 | 2006-05-08 | 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1844144A true CN1844144A (zh) | 2006-10-11 |
| CN100575362C CN100575362C (zh) | 2009-12-30 |
Family
ID=37063114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200610040414A Expired - Fee Related CN100575362C (zh) | 2006-05-08 | 2006-05-08 | 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100575362C (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102308914A (zh) * | 2011-07-25 | 2012-01-11 | 大连赛姆生物工程技术有限公司 | 一种动物食疗性卵黄抗体全蛋液膏状制剂及其制备方法 |
| WO2012016429A1 (en) * | 2010-08-03 | 2012-02-09 | Asia Hepato Gene Co. | Compositions and methods for treating hepatitis virus infection |
| CN102516389A (zh) * | 2011-12-28 | 2012-06-27 | 黑龙江省农业科学院畜牧研究所 | 一种提取禽流感卵黄抗体的方法 |
| CN103709247A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-09 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 一种ⅰ型、新型鸭肝炎二价卵黄抗体的制备方法及其产品和应用 |
| CN104045708A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-09-17 | 安徽林苑农副食品有限公司 | 一种利用鸡蛋制作免疫球蛋白的方法 |
| CN107043415A (zh) * | 2017-03-07 | 2017-08-15 | 尤丽康（江苏）生物医药有限公司 | 一种卵黄免疫球蛋白的提取方法 |
| CN107383189A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-11-24 | 山东阿斯可来生物技术有限公司 | 卵黄抗体干燥粉制备的方法 |
| CN110627899A (zh) * | 2019-10-09 | 2019-12-31 | 山东天牧生物科技有限公司 | 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 |
| CN111718410A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-09-29 | 江南大学 | 一种制备卵黄免疫球蛋白的方法 |
| CN112048533A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-12-08 | 青岛润达生物科技有限公司 | 一种高效抗体粉的制备方法 |
-
2006
- 2006-05-08 CN CN200610040414A patent/CN100575362C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102884079B (zh) * | 2010-08-03 | 2014-12-10 | 华肝基因股份有限公司 | 治疗肝炎病毒感染的组合物及方法 |
| WO2012016429A1 (en) * | 2010-08-03 | 2012-02-09 | Asia Hepato Gene Co. | Compositions and methods for treating hepatitis virus infection |
| CN102884079A (zh) * | 2010-08-03 | 2013-01-16 | 华肝基因股份有限公司 | 治疗肝炎病毒感染的组合物及方法 |
| CN102308914A (zh) * | 2011-07-25 | 2012-01-11 | 大连赛姆生物工程技术有限公司 | 一种动物食疗性卵黄抗体全蛋液膏状制剂及其制备方法 |
| CN102516389A (zh) * | 2011-12-28 | 2012-06-27 | 黑龙江省农业科学院畜牧研究所 | 一种提取禽流感卵黄抗体的方法 |
| CN103709247A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-09 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 一种ⅰ型、新型鸭肝炎二价卵黄抗体的制备方法及其产品和应用 |
| CN103709247B (zh) * | 2013-12-30 | 2016-02-10 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | 一种ⅰ型、新型鸭肝炎二价卵黄抗体的制备方法及其产品和应用 |
| CN104045708A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-09-17 | 安徽林苑农副食品有限公司 | 一种利用鸡蛋制作免疫球蛋白的方法 |
| CN107043415A (zh) * | 2017-03-07 | 2017-08-15 | 尤丽康（江苏）生物医药有限公司 | 一种卵黄免疫球蛋白的提取方法 |
| CN107383189A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-11-24 | 山东阿斯可来生物技术有限公司 | 卵黄抗体干燥粉制备的方法 |
| CN110627899A (zh) * | 2019-10-09 | 2019-12-31 | 山东天牧生物科技有限公司 | 一种呼肠孤病毒和细小病毒卵黄抗体锭及其制备方法 |
| CN111718410A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-09-29 | 江南大学 | 一种制备卵黄免疫球蛋白的方法 |
| CN111718410B (zh) * | 2020-06-05 | 2022-10-11 | 江南大学 | 一种制备卵黄免疫球蛋白的方法 |
| CN112048533A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-12-08 | 青岛润达生物科技有限公司 | 一种高效抗体粉的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100575362C (zh) | 2009-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100575362C (zh) | 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法 | |
| DK202100114Y4 (da) | Separation af 2’-FL fra en fermentationskulturopløsning | |
| CN101974589B (zh) | 一种酶解和膜分离制备免疫活性大豆肽的方法 | |
| CN102154163A (zh) | 一种3′-唾液酸乳糖的制备方法 | |
| CN103160482B (zh) | 一种共分离制备鸡蛋清溶菌酶与活性蛋白的方法 | |
| JPWO2009008362A1 (ja) | シアル酸化合物含有組成物の製造方法 | |
| JPH07502889A (ja) | 初乳フラクション、その製造方法および細胞培養培地補充物質としてのその使用方法 | |
| CN111718410B (zh) | 一种制备卵黄免疫球蛋白的方法 | |
| CN105218666A (zh) | 一种采用阳离子多糖制备高生物活性卵黄抗体的方法 | |
| CN1129609C (zh) | 一种絮凝澄清－超滤浓缩工艺生产复合免疫活性蛋白的方法 | |
| CN103642853A (zh) | 一种l-苹果酸提取新工艺 | |
| CN101380469A (zh) | 大菱鲆红体病虹彩病毒灭活疫苗的生产工艺 | |
| IE47149B1 (en) | Vaccine | |
| JP3929085B2 (ja) | ガングリオシド高含有組成物の製造法 | |
| WO2023221758A1 (zh) | 三糖的新晶型 | |
| CN106866817A (zh) | 一种提取鸭坦布苏病毒病卵黄抗体的工艺方法 | |
| CN108728375B (zh) | 奶牛瘤胃菌群的体外培养及保存方法 | |
| CN1629183A (zh) | 从牦牛奶中提取的活性乳蛋白及其方法和应用 | |
| CN1288169C (zh) | 海参粘多糖的制备方法 | |
| CN104558225B (zh) | 一种针对肠道细菌的荚膜多糖提取方法 | |
| CN1478422A (zh) | 富含海参粘多糖食品及其制备方法 | |
| JP4980942B2 (ja) | 卵黄タンパク質の製造法 | |
| CN107674898A (zh) | 一种由维生素k2发酵液中提取蛋白质的方法 | |
| CN101040632B (zh) | 抗阪歧肠杆菌特异性免疫奶制品及其制备方法 | |
| CN1137269C (zh) | 一种海产小杂鱼提取物的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: JIANGSU KANGDE EGG INDUSTRY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: JIANGNAN UNIVERSITY Effective date: 20150420 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 214036 WUXI, JIANGSU PROVINCE TO: 226600 NANTONG, JIANGSU PROVINCE |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20150420 Address after: 226600, No. 199, Yao Middle Road, Haian County Development Zone, Nantong County, Jiangsu, China Patentee after: JIANGSU KANGDE EGGS Co.,Ltd. Address before: 214036 Jiangsu city of Wuxi Province River Road No. 170 Patentee before: Jiangnan University |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20061011 Assignee: Guangdong Beijing Hao pharmaceutical science and technology development Co. Assignor: JIANGSU KANGDE EGGS Co.,Ltd. Contract record no.: 2015440000685 Denomination of invention: Process for preparing yelk antibody with high bioactivity Granted publication date: 20091230 License type: Common License Record date: 20151016 |
|
| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model | ||
| EM01 | Change of recordation of patent licensing contract |
Change date: 20170908 Contract record no.: 2015440000685 Assignee after: Guangdong Beijing Hao Biological Pharmaceutical Co.,Ltd. Assignee before: Guangdong Beijing Hao pharmaceutical science and technology development Co. |
|
| EM01 | Change of recordation of patent licensing contract | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20091230 |