CN100575362C

CN100575362C - 一种高生物活性卵黄抗体的制备方法

Info

Publication number: CN100575362C
Application number: CN200610040414A
Authority: CN
Inventors: 杨严俊; 徐榕榕
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangsu Kangde Eggs Co ltd
Priority date: 2006-05-08
Filing date: 2006-05-08
Publication date: 2009-12-30
Anticipated expiration: 2026-05-08
Also published as: CN1844144A

Abstract

一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，属于生物制品和工业化分离技术领域。本发明采用食品级天然高分子胶高效提取技术，结合超滤技术，实现了工业化规模从蛋黄中分离提取高生物活性卵黄抗体，年产10吨以上。产品中卵黄抗体含量可达30%-50%，同时蛋清和剩余蛋黄经加工后，还可得到蛋白粉、蛋黄粉或蛋黄油与蛋黄卵磷脂等副产品。本发明采用了生物免疫、膜分离等高新技术，具有技术含量高，资源利用度高，自动化程度高的特点，是清洁工艺生产绿色生物活性食品的典型代表。

Description

一种高生物活性卵黄抗体的制备方法

技术领域

一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，属于生物制品和工业化分离技术领域。

背景技术

鸡卵黄中富含卵黄抗体、高磷蛋白等生物活性蛋白，并被认为是活性抗体含量与活性最高，也是最廉价的资源。但迄今为止，还没有如人们所期望的那样得到工业化利用。其主要原因是因为卵黄中含有丰富的脂肪、蛋白质、胆固醇、卵磷脂等多种物质，对卵黄抗体的工业化分离造成了严重的困难。目前分离卵黄抗体的方法主要有以下几种：(1)采用乙醇、聚乙二醇、丙酮等有机试剂分离的方法，虽然分离效果较好，但因为卵黄抗体主要是用于功能食品添加剂、生物医药等领域，因此如采用上述办法则有以下几个方面的问题。一是成本较高(试剂耗量大，如目前普遍采用的PEG-6000的用量最高达到12％的高浓度)；二是工艺复杂，操作条件难以掌握，且易造成卵黄抗体活性损失；三是产品最终有化学有害物质残留，产品的安全性达不到要求。(2)采用离子交换、金属螯合色谱、亲和色谱分离的方法，虽然纯度较高，但生产规模只以克计，而成本更可高达每克上百元。(3)采用CMC、海藻酸钠和壳聚糖等大分子胶的水相抽提法，由于直接将大分子胶加入蛋黄体系，因此抽提效率较低，并在蛋黄中仍然含有较多的杂质及CMC、海藻酸钠等残留胶体大分子，直接影响了下一步超滤分离浓缩工艺。

发明内容

本发明的目的是提供一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，采用食品级天然高分子胶高效澄清技术，结合低温超滤浓缩分离新工艺，彻底解决了在分离过程中蛋黄液中残留高分子胶体的缺点，有利于卵黄抗体的分离提取，同时又使得蛋黄液可以得到进一步的应用。采用本发明能够以年产10吨以上的规模生产高生物活性卵黄抗体产品。同时剩余蛋清和蛋黄粉经加工后，还可得到蛋白粉、剩余蛋黄粉或蛋黄油与蛋黄卵磷脂等副产品，使得蛋黄的加工深度得到了极大的提高，产品附加值也大增加，而成本则远低于以前的方法。

本发明的技术方案：主要创新点有如下几点：(1)以蛋鸡为生物转化器，采用疫苗对蛋鸡进行免疫接种，以提高卵黄抗体的生物效价，一般可提高16倍至64倍。其疫苗为人体口腔、胃肠道常见致病菌、病毒等，如致病性大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、变异链球菌或胃幽门螺杆菌。上述菌种与免疫佐剂制成疫苗后，对20～25周龄的蛋鸡进行免疫注射，共4～6次，其鸡蛋中的抗体高活性可维持1年左右。如只需生产普通的、无特异性的蛋黄抗体也可以省掉此免疫步骤，而生产工艺则完全相同。(2)采用食品级天然高分子胶高效澄清技术，结合工业化超滤浓缩分离技术，从蛋黄中分离提取活性卵黄抗体，使活性卵黄抗体的低成本、工业化分离得以实现，可达到年产10吨以上卵黄抗体产品的生产规模。卵黄抗体的产品纯度可达到30％-50％。(3)采用有机膜或陶瓷膜微滤对浓缩液进行冷除菌，其产品的总菌数可小于500CFU/g，大大好于类似产品一初乳粉或初乳清粉中的微生物指标。(4)整个工艺流程都在低温下(0～12℃)进行，确保了产品的高生物活性。

本发明的工艺为：

(1)将蛋鸡免疫后所产之新鲜鸡蛋或普通新鲜鸡蛋作为原料，经检查消毒后，采用手工或机械方式分离蛋清和蛋黄。蛋清可直接经喷雾干燥制得副产品蛋白粉，或经发酵后喷雾干燥制得脱糖蛋白粉。将蛋黄经纯水稀释、搅拌、离心或沉淀分离后，得卵黄抗体粗提液，技术条件为：蛋黄∶纯水＝1∶6～20(w/w)，直接搅拌5～25分钟，用蝶式离心机3000～8000r/min分离或在0～12℃下自然沉降4～16小时后分离。上清液为卵黄抗体粗提液。沉淀物(剩余蛋黄)经喷雾干燥后制得副产品蛋黄粉或采用超临界提取方法分离得到蛋黄卵磷脂、蛋黄油和剩余蛋黄粉等副产品。

(2)将卵黄抗体粗提液，按顺序加入食品级天然高分子胶和食品级无机或有机钙盐，分别经搅拌、离心分离或板框过滤后得到澄清液，技术条件为：食品级天然高分子胶为阿拉伯胶、卡拉胶、海藻酸钠、黄原胶等，无机或有机钙盐为食品级醋酸钙、氯化钙、乳酸钙等，其组成比例视料液情况而稍有不同，食品级天然高分子胶的用量为卵黄抗体粗提液质量的0.01％～2.8％，搅拌5～30min，然后静置10min～40min后，经蝶式离心或板框过滤后去除沉淀物，蝶式离心机2000～5000r/min分离或加入卵黄抗体粗提液质量的0.1％～1.5％的硅藻土进行板框过滤，沉淀物等杂质弃去，取澄清液。

(3)澄清液进行低温连续超滤膜分离，得到浓缩截留液。超滤温度为4～12℃，超滤膜的截留相对分子质量为50,000～150,000，采用聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)、改性聚砜膜(PS膜)或聚醚砜膜(POS)。膜总面积可达300M²以上。

(4)超滤透过液主要是一些低分子物质，可弃去。最后将浓缩截留液在4～12℃微滤除菌，微滤膜材料为改性聚砜膜(PS膜)或陶瓷膜等，孔径为0.1-0.5μm。

(5)微滤透过液在-40～-30℃冷冻120分钟，再逐步升温至30℃，干燥22小时，得到主产品生物活性卵黄抗体。

本发明的有益效果：

(1)通过鸡的疫苗免疫可得到高含量，高效价的活性卵黄抗体，极大地提高了对人体常见致病菌的抑菌能力，一般效价可提高16～64倍。

(2)该工艺采用食品级天然高分子胶提取技术，大大降低了后道工序中超滤膜的污染，使得工业化超滤生产得以实现。

(3)超滤工艺具有无相态变化，不存在高温或化学因素破坏的优点，从根本上攻克了卵黄抗体在加工过程中容易失活的难关，可最大程度地保留产品的活性。

(4)微滤除菌既能够去除包括活菌体和死菌体在内的绝大多数的细菌体，又保留了产品的生物活性，而其他方法(如巴氏热杀菌或辐照低温杀菌)都会使蛋黄抗体的效价大大降低，从而大大降低产品的生物活性。

(5)由于该工艺在水相提取卵黄抗体时，只使用了纯水，不必调节pH，从而使得对副产品蛋黄粉或全蛋粉的影响比其他工艺要小得多。而且采用了膜分离等高新技术后，可保证卵黄抗体产品中不含任何有害物质，不含激素，高效安全。

(6)提高了资源利用度，在生产过程中避免使用有机溶剂等有害物质，减少污染，保护了环境。

(7)自动化程度较高，操作条件容易掌握，生产效率高，生产成本可大幅降低。

附图说明

图1高生物活性卵黄抗体制备工艺流程框图。

具体实施方式

实施例1

将10吨新鲜鸡蛋经消毒、打蛋、分蛋，所得蛋清经喷雾干燥或微生物发酵后制得副产品蛋白粉或脱糖蛋白粉约600公斤左右，所得蛋黄约2.3吨加入25～45吨纯水，搅拌15分钟，沉淀4～16小时，离心分离。沉淀物为剩余蛋黄，经喷雾干燥制得副产品蛋黄粉，约1200公斤左右。上清液为卵黄抗体粗提液，按配比加入食品级添加剂黄原胶和乳酸钙，搅拌15分钟，经板框过滤后将沉淀物弃去。澄清液经POS膜超滤，4～12℃，膜面积100m²。浓缩截留液经0.22μmPS膜或陶瓷微滤膜除菌后，再急冻至-40～-30℃，保持120min左右，然后在不大于10Pa真空度，不超过30℃条件下干燥22小时，得到主产品生物活性卵黄抗体，约为23～30公斤。

实施例2

蛋鸡的免疫方法：免疫的疫苗为人体口腔、胃肠道常见致病菌或病毒：致病性大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、变异链球菌或胃幽门螺杆菌，上述菌种与免疫佐剂制成疫苗后，对20～25周龄的蛋鸡进行免疫注射，共4～6次。

取10吨蛋鸡经上述方法免疫后所产之新鲜鸡蛋为原料，所得卵黄抗体粗提液，按配比加入食品添加剂卡拉胶和氯化钙，其余操作同实施例1，所得主产品为高生物活性卵黄抗体，比实施例1从普通鸡蛋中所得的生物活性卵黄抗体的生物效价高16～64倍。

应用例

本产品可用于含生物活性卵黄抗体的婴儿、老年人及免疫功能低下人群的功能食品中，如婴儿仿母乳产品，其主要成分有活性抗体(即活性免疫球蛋白)、乳铁蛋白、DHA(及EPA)、溶菌酶、低分子量蛋白质和碳水化合物，其配比近似于母乳组成，由低含量的乳糖、矿物质、50％以上的蛋白质和不少于5％的免疫球蛋白和1％的乳铁蛋白组成，稀释成浓度3.0-5.0g/L的溶液，其免疫活力与初乳相近。这类婴儿食品在脂肪酸和活性抗体的组成含量上与母乳相近，有利于婴儿吸收并提高对疾病的免疫能力，对婴儿的生长发育也有明显的促进作用。另外，也可直接添加于新一代仿母乳婴儿配方奶粉中，生产功能性更接近于母乳的新一代婴儿配方奶粉，其产品含有0.2％～2.0％以上的生物活性卵黄抗体。

Claims

1.一种高生物活性卵黄抗体的制备方法，其特征是采用食品级天然高分子胶提取技术，结合超滤技术，从蛋黄中分离生物活性卵黄抗体，其工艺为：

(1)以蛋鸡免疫后所产之新鲜鸡蛋或普通新鲜鸡蛋为原料，经消毒、分离蛋清后，将所得蛋黄液经纯水稀释、搅拌、离心或沉淀分离处理：蛋黄∶纯水质量比为1∶6～20，搅拌5～25分钟，用蝶式离心机3000～8000r/min分离或在0～12℃下自然沉降4～16小时，上清液为卵黄抗体粗提液；

(2)卵黄抗体粗提液中依次加入食品级天然高分子胶和食品级无机或有机钙盐，搅拌后，离心分离或板框过滤处理：搅拌5～30分钟，静置10～40分钟，蝶式离心机2000～5000r/min分离或加入卵黄抗体粗提液质量的0.1％～1.5％的硅藻土进行板框过滤，取澄清液；食品级天然高分子胶的用量为卵黄抗体粗提液质量的0.01％～2.8％，食品级无机或有机钙盐的用量为卵黄抗体粗提液质量的0.01％～3.50％；

(3)将澄清液进行超滤膜分离，得到浓缩截留液，超滤温度4～12℃，超滤膜的截留相对分子质量为50,000～150,000，膜材料为聚偏氟乙烯膜、改性聚砜膜或聚醚砜膜；

(4)将浓缩截留液在4～12℃微滤除菌，微滤膜孔径为0.1-0.5μm，膜材料为陶瓷膜或改性聚砜膜；

(5)将微滤透过液经-40～-30℃冷冻120分钟，再逐步升温至30℃，干燥22小时，得到主产品生物活性卵黄抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所用食品级天然高分子胶为阿拉伯胶、卡拉胶、海藻酸钠或黄原胶，所用食品级无机或有机钙盐为醋酸钙、氯化钙或乳酸钙。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是采用微滤技术对超滤浓缩截留液进行冷除菌，主产品生物活性卵黄抗体的微生物指标总菌数小于500CFU/g。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是主产品生物活性卵黄抗体中卵黄抗体的含量达到30％-50％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是实现了年产10吨以上的工业化规模生产生物活性卵黄抗体。