CN1288169C - 海参粘多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种富含海参粘多糖食品及其制备方法，它主要是以海参为原料，采用碱解，单、双外源酶酶解或自溶酶与外源酶结合酶解，然后对分离的母液进行醇溶，提纯，制得粘多糖纯品。将该粘多糖加到酒中，可得海参酒；将该粘多糖与中药提取液混合，经浓缩、制粒、烘干可得冲剂；将该粘多糖与中药提取液混合，经澄清、调味、过滤、灭菌得口服液；将该粘多糖与中药提取液混合，加入淀粉压片得片剂；将该粘多糖与β-环状糊精混合煮沸，经真空干燥后包装可得胶囊。本发明将海参中少量的粘多糖提取出来，将其制成具有一定含量的功能食品，以便使其充分发挥抗癌及提高免疫力的作用。

Description

海参粘多糖的制备方法

本申请为“富含海参粘多糖食品及其制备方法”的分案申请，原申请日2002年8月30日，原申请号02132846.3。

技术领域  本发明涉及一种食品，特别是海产品食品。

背景技术  众所周知，海参粘多糖具有增强免疫力、抗肿瘤作用。但是，目前市场上销售的海参制品多为全参产品，其虽含有海参粘多糖，但其含量很少，很难发挥其应有的作用。

发明内容  本发明是以海参为原料，采用现代生物技术和食品高新技术提取海参粘多糖，并将其制成多种功能保健食品的方法。

一、海参粘多糖的提取

1、原料及处理：取干海参进行发泡；或取盐渍海参，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净；或取新鲜海参，直接去内脏、去筋、洗净。然后向上述海参加0～5倍体积的水，用组织捣碎机将其壁破碎。

2、提取方法

①碱解与单酶水解相结合

在40～70℃条件下加入0.2～0.8％的固体K₂CO₃，搅拌下水解1～5小时。之后用6摩尔/升盐酸调pH7～9，(且在酶解过程中保持pH值在此范围)，加入质量分数为0.3～0.5％的胰蛋白酶(酶活5×10⁴u/g)保持温度在45～55℃，搅拌下酶解2～7小时。之后速冷至30℃以下，保持30分钟后终止反应。用6摩尔/升盐酸调pH至中性，高速离心(6000转/分)分离15分钟，得到的沉淀物为不溶水解物，其中含有12％左右的蛋白，可以此为基料，将其进一步加工成粉状、颗粒状、片剂或经特殊处理制成口服液等系列产品。向离心所得母液缓缓加入95％乙醇(质量百分比为30～80％)，此时不断搅拌，并于10℃以下温度过夜。之后离心，所得上清液可进行减压蒸馏，不仅可回收乙醇，还能获得海参水解产物，可以其为基料进一步加工成各种功能食品，收集离心的沉淀物，并依次用90～100％的乙醇洗涤、丙酮脱水，于40～70℃干燥或真空干燥，得到的产物即为海参粘多糖粗品。

②碱解与双酶水解相结合

在40～70℃条件下，加入0.2～0.8％的固体K₂CO₃，搅拌下水解1～5小时，之后用6摩尔/升盐酸调pH1～5，加入0.3～0.5％胃蛋白酶(酶活7.8×10⁵u/g)，在40～60℃水浴中搅拌酶解3～10小时，同时保持pH在上述范围内。再用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH7～9，加入0.3～0.5％胰蛋白酶(酶活5×10⁴u/g)在45～55℃水浴中搅拌酶解2～7小时，同时保持pH在上述范围内。酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用6摩尔/升盐酸调pH值至中性，高速离心(6000转/分)分离15分钟，沉淀物为不溶水解物，收集母液。余下操作同单酶水解。

③自溶后外源酶酶解

I自溶：

a将海参浆放入无菌酶解罐中在pH6～7.5、于0～4℃温度下自溶24～48小时；

或b将海参浆放入无菌酶解罐中，于pH6～7.5、常温自溶6～8小时；

或c将海参浆用紫外线照射10～30分钟后，用浓度为0.06～0.08摩尔/升的氯化钠在pH7.0～7.5、温度为40～65℃(每分钟升高5℃)的梯度温度进行处理。

II外源酶酶解：将经上述三种自溶方法之一获得的自溶液用6摩尔/升盐酸调pH至1～5，加入0.3～0.5％胃蛋白酶，在40～60℃酶解1～2小时。酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH值至中性，高速离心分离，沉淀物为不溶水解物，收集母液。余下操作同单酶水解。

④自溶酶作为外源酶与外源酶相结合酶解

I自溶酶提取方法：将新鲜的海参肠组织捣碎，溶于2～15倍的0.1M磷酸盐缓冲液(pH6～7.5)，静置抽提2～13小时。之后离心，去除沉淀，在上清液中缓慢加入固体硫酸铵至10～30％饱和度，使之溶解，盐析2～24小时，冷冻离心，去沉淀。在上清液中加入固体硫酸铵至80～95％饱和度，盐析6～48小时，之后透析6～48小时，离心，取沉淀，将此沉淀溶解于0.1M磷酸缓冲液(pH6～7.5)中，再次透析6～48小时，冷冻离心，得沉淀，以上过程均在10℃下进行，将沉淀冷冻干燥得自溶酶粉，也可将此酶粉用G-25凝胶柱纯化。

II自溶酶酶解：向海参浆中加入0.3～3％上述自溶酶粉，在pH6～8、温度15～30℃下酶解3～8小时，

III外源酶酶解：用6摩尔/升盐酸调pH1～5，加入0.3～0.5％胃蛋白酶，于40～60℃酶解1～2小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH值至中性，高速离心分离，沉淀物为不溶水解物，收集母液，余下操作同单酶水解。

3、纯化：将粗多糖溶解在1∶10～50(克/毫升)水里，离心除去不溶物，在上清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度为0.5～4摩尔/升，10℃以下冷藏过夜。10℃以下收集沉淀。再用前次一半体积的水将其溶解，用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至9～11，保持45～55℃滴加H₂O₂脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点。冷却后离心除去不溶物，清液冷却至4℃以下，用6摩尔/升盐酸调pH至1.5～2.5，离心除沉淀，清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度达0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，10℃以下收集沉淀，用乙醇洗涤，丙酮脱水，干燥得粘多糖纯品。

二、以海参粘多糖为基料，制备功能保健食品。

1、海参酒的制备：将海参粘多糖溶解于4～60度酒中，使其浓度达0.01～1000毫克/升。

2、冲剂的制备：

①混合：将海参粘多糖基料与添加物混合，基料占混合物0.05～20％，这些添加物可以是具有保健效果的中药提取液，也可以是增加营养价值的乳制品、鸡蛋、植物蛋白等，还可以是改善口味的白砂糖、蜂蜜及柠檬酸等。

②离心、过滤：除去大部分残渣及因混合而产生的新不溶物。在离心前要经热交换器和冷交换器处理，以使得因混合而产生的沉淀尽快形成。在浓缩前还要用板框过滤机除去密度较小的悬浮颗粒。

③浓缩：先采用真空度86.25～98.64Kpa真空浓缩，温度低于50℃，真空浓缩可加快浓缩速度，并保持产品的色泽。当真空浓缩液既粘稠又不太粘容器壁时，改用夹层锅敞口浓缩，直至其密度≥1.0克/厘米³。

④混合制粒：所使用的蔗糖粉和可溶性淀粉需要经过磨细和过筛处理。浓缩液∶可溶性淀粉∶蔗糖粉＝1∶1∶2。使用食用酒精调节干湿度，在混合机中充分混合且干湿度适中后用造粒机制粒。

⑤烘干、包装：选粒完毕后，于60～80℃烘干，至水分低于4％，包装材料选择防潮的材料。

3、胶囊的制备

①造粒：采用微胶囊技术进行造粒处理，即在提取液中加入粘多糖，再加入0.5～3％的β-环状糊精，煮2～10分钟，这样能使水解产物中残留的腥涩味通过β-环状糊精包裹，使不愉快的腥涩味被掩盖，还可以使水解产物中的有效成分与外界环境隔绝，防止产生不利的品质变化，从而有效保持营养成分和其它的生理活性物质。

②干燥：可通过真空冷冻干燥，即将上述微胶囊化的水解物放入冷冻干燥机，控制温度在-40℃以下，真空度133×10^-3pa，直到水分低于4％即可，也可通过喷雾干燥，先采用真空浓缩设备进行浓缩，控制真空度在86.25～98.64Kpa，温度45～65℃，浓缩时开启蒸汽阀缓缓升温，逐步提高真空度，当浓缩物料固形物达4～17％时，进行喷雾干燥。喷粉的料液温度在45～50℃，料泵压力控制在19.6～49Kpa，排风温度60～68℃，进风温度150～180℃。

③冷却、包装：筛去干燥产物的块状物，于50～60％相对湿度的环境下冷却到室温，将冷却好的产物装入胶囊。

说明：本发明中，酶解得到的可溶或不溶蛋白水解产物均可采用与上述方法相同的方法制备胶囊。

4、口服液的制备

①混合：将海参粘多糖基料与添加物混合，基料占混合物0.05～20％，对添加剂的说明，与冲剂的制备相同。

②澄清：加入0.1～0.5％果胶及0～7％蜂蜜作为絮凝剂，以加速溶液中悬浮颗粒和杂蛋白的沉淀。蜂蜜也可作为调味剂，加入后搅拌均匀，自然冷却，静置使沉淀完全。

③过滤：采用离心或压滤方法，得清液为母液。

④调味：将母液稀释0～60倍，以稀释后溶液的重量添加1～7％白砂糖(或0.05～0.2％蛋白糖、6～12％蔗糖)，0.02～0.4％柠檬酸，0.01～0.05％食盐，0.1～0.2％维生素C，0.5～9％蜂蜜。

⑤澄清：以硅藻土加压过滤，再经孔径为5μm和0.05μm两级微孔滤膜过滤，彻底清除营养液中的细小悬浮颗粒和细菌。

⑥灭菌、包装：采用巴氏杀菌(80℃，30分钟)后灌装。

说明：如果以酶解的可溶或不溶蛋白水解产物为原料制备口服液时，虽可采用与上述相同的方法，但必须进行脱腥处理，即加入0～0.2％柠檬酸与0～0.2％苹果酸的混酸，于80～100℃处理10～30分钟；或者加入0.2～0.4％葡萄糖在90～100℃水浴上加热10～30分钟。

5、片剂的制备

将海参粘多糖与其它多糖或中草药混合(方法同冲剂制备)在压片前加入5～10％淀粉或淀粉填充剂、压片。

本发明具有如下优点：

1、将少量的海参粘多糖集中起来，制成具有一定含量的功能食品，进而使之充分发挥抗癌及增强免疫力的作用。

2、本发明中采用海参自溶与外源酶相结合的方法，一则降低成本，同时也减少引入外源酶对产品的污染。

具体实施方式

例1海参酒的制备

取10公斤干海参进行泡发，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加50升体积水，在40℃条件下，添加80克固体碳酸钾，搅拌下水解1小时。之后用6摩尔/升盐酸调pH为7，且在酶解过程中始终保持pH在此范围。加入30克胰蛋白酶(酶活5×10⁴u/g)保持温度在45～47℃，搅拌条件下酶解7小时。之后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用6摩尔/升盐酸回调pH至中性。高速(6000转/分)离心分离，收集母液。在不断搅拌下，缓缓加入95％乙醇8公斤，低温(≤10℃)过夜。之后离心收集沉淀，并依次用90％乙醇洗涤，丙酮脱水，再于40～70℃温度干燥得海参粗多糖。将粗多糖溶解在2升水里，离心除去不溶物，在上清液中加入490克乙酸钾，冷藏(10℃以下)过夜。再于10℃以下收集沉淀，再用1升的水将其溶解。用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至9，保持50℃滴加双氧水脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点。冷却后离心除去不溶物，清液冷至0℃左右，用6摩尔/升盐酸调pH至1.5，离心除沉淀，清液中加入245克/升乙酸钾，10℃以下冷藏过夜。10℃以下收集沉淀，之后用乙醇洗涤、丙酮脱水，干燥得海参粘多糖纯品。取1克提取的粘多糖纯品溶解于1升60度酒中，得到的产品即为含粘多糖的海参酒。

例2海参酒的制备

取10公斤干海参进行泡发，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加50升体积水，在40℃条件下，添加20克固体碳酸钾，搅拌下水解5小时。之后用6摩尔/升盐酸调pH为9，且在酶解过程中始终保持pH在此范围。加入50克胰蛋白酶(酶活5×10⁴u/g)，保持温度在53～55℃，搅拌条件下酶解2小时。之后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用6摩尔/升盐酸回调pH至中性。高速(6000转/分)离心分离，收集母液。在不断搅拌下，缓缓加入95％乙醇3公斤，低温(≤10℃)过夜。之后离心收集沉淀，并依次用100％乙醇洗涤，丙酮脱水，再于86.25～98.64Kpa真空度干燥得海参粗多糖。将粗多糖溶解在10升水里，离心除去不溶物，在上清液中加入784克乙酸钾，冷藏(10℃以下)过夜。再于10℃以下收集沉淀，再用5升的水将其溶解。用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至11，保持50℃滴加双氧水脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点。冷却后离心除去不溶物，清液冷却至0℃左右，用6摩尔/升盐酸调pH至2.5，离心除沉淀，清液中加入392克/升乙酸钾，10℃以下冷藏过夜。10℃以下收集沉淀，之后用乙醇洗涤、丙酮脱水，干燥得海参粘多糖纯品。取0.01毫克提取的粘多糖纯品溶解于1升4度酒中，得到的产品即为含粘多糖的海参酒。

例3海参粘多糖冲剂的制备

取100公斤盐渍海参，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加500升水，在40℃条件下，添加200克固体碳酸钾，搅拌下水解5小时。之后用6摩尔/升盐酸调pH为1，加入500克胃蛋白酶(酶活7.8×10⁵u/g)在40℃水浴中搅拌酶解10小时，同时保持pH在上述范围内。之后用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至7，加入500克胰蛋白酶(酶活5×10⁵u/g)在45℃水浴中搅拌酶解2小时，且保持pH在上述范围进一步酶解，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用6摩尔/升盐酸将pH调至中性，高速(6000转/分)离心分离15分钟，收集母液。在不断搅拌下，缓缓加入30公斤乙醇，余下操作与例1相同。将粗多糖溶解在60升水中，离心除去不溶物，在上清液中加入5880克乙酸钾，10℃以下过夜。10℃以下收集沉淀，再用30升水将其溶解。用6摩尔/升氢氧化钾调pH至9，保持50℃滴加双氧水脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点，冷却后离心除去不溶物，清液冷却至0℃左右，用6摩尔/升盐酸调pH至1.5，离心除沉淀，清液中加入2940克乙酸钾，10℃以下过夜。10℃以下收集沉淀，之后乙醇洗涤、丙酮脱水，干燥，得多糖纯品。

另取4公斤枸杞子、4公斤红景天加40公斤水煮开，文火保持1小时，过滤取滤液，浓缩至36升，在浓缩液中加入95升乙醇，静置10小时后过滤，用蒸馏法将乙醇蒸出得提取液，取由上述方法获得的12.5克海参粘多糖，与由上述方法获得的25公斤提取液混合，经热交换器与冷交换器处理后离心，再用板框过滤机除去密度较小的悬浮微粒，之后采用真空度为86.25～96.64Kpa真空浓缩，温度低于50℃。当真空浓缩液既粘稠又不太粘容器壁时，改用夹层锅敞口浓缩，直至其密度为1.0克/厘米³。之后将浓缩液、可溶性淀粉和蔗糖粉以1∶1∶2的比例混合，用食用酒精调节干湿度，在混合机中充分混合且干湿度适中后，用造粒机制粒。造粒完毕后，在60～80℃条件下烘干，至水分3.8％最后用铝箔包装。

例4海参粘多糖冲剂的制备

取100公斤盐渍海参，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加400升水，在70℃条件下，添加800克固体碳酸钾，搅拌下水解1小时。之后用6摩尔/升盐酸调pH至5，加入300克胃蛋白酶(酶活7.8×10⁵u/g)在60℃水浴中搅拌酶解3小时，同时保持pH在上述范围内。之后用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至9，加入300克胰蛋白酶(酶活5×10⁵u/g)在55℃水浴中搅拌酶解7小时，且保持pH在上述范围进一步酶解，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用6摩尔/升盐酸将pH调至中性，高速(6000转/分)离心分离15分钟，收集母液。在不断搅拌下，缓缓加入80公斤乙醇，余下操作与例2相同。将粗多糖溶解在60升水中，离心除去不溶物。在上清液中加入5880克乙酸钾，10℃以下过夜。10℃以下收集沉淀，再用30升水将其溶解，用6摩尔/升氢氧化钾调pH至11，保持50℃滴加双氧水脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点，冷却后离心除去不溶物，清液冷却至0℃左右，用6摩尔/升盐酸调pH值至2.5，离心除沉淀，清液中加入2940克乙酸钾，10℃以下过夜。10℃以下收集沉淀，之后乙醇洗涤、丙酮脱水，干燥，得多糖纯品。

另取4公斤大枣、4公斤桂圆加40公斤水煮开，文火保持1小时，过滤取滤液，浓缩至20升，在浓缩液中加入95升乙醇，静置10小时过滤，用蒸馏法将乙醇蒸出得提取液，取由上述方法获得的3公斤海参粘多糖，与由上述方法获得的15公斤提取液混合，经热交换器与冷交换器处理后离心，再用板框过滤机除去密度较小的悬浮微粒，之后采用真空度为86.25～96.64Kpa真空浓缩，温度低于50℃。当真空浓缩液既粘稠又不太粘容器壁时，改用夹层锅敞口浓缩，直至其密度为1.0克/厘米³。之后将浓缩液、可溶性淀粉和蔗糖粉以1∶1∶2的比例混合，用食用酒精调节干湿度，在混合机中充分混合且干湿度适中后，用造粒机制粒。造粒完毕后，在60～80℃条件下烘干，至水分4％最后用铝箔包装。

例5海参粘多糖口服液的制备

取40公斤鲜海参，去内脏、去筋，洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加200升的水，在pH为6常温放置6小时，使海参自溶，之后用6摩尔/升盐酸调pH为1，加入120克胃蛋白酶，于40～45℃酶解2小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应，用0.5摩尔/升氢氧化钾，回调pH值至中性，余下操作与例1相同，得粘多糖纯品。

另取1.6公斤红景天、1.6公斤大枣加16公斤水煮开，文火保持1小时，过滤取滤液，浓缩至8升，在浓缩液中加入95升乙醇静置，用蒸馏法将乙醇蒸出得提取液，取由上述方法获得的1.2公斤海参粘多糖，与由上述方法获得的6公斤提取液混合。加30克果胶搅拌均匀，自然冷却，静置2小时，使沉淀完全。采用离心(4000转/分，15分钟)取上清夜，将此液稀释60倍，添加4.32千克白糖、86.4克柠檬酸、43.2克食盐、432克维生素C、2.16克蜂蜜混匀，以硅藻土加压过滤，再经孔径为5μm和0.5μm两级微孔滤膜过滤。再将滤液进行80℃，30分钟的巴氏杀菌，后即可灌装。

例6海参粘多糖口服液的制备

取40公斤鲜海参，去内脏、去筋，洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，在pH值为6常温放置8小时，使海参自溶，之后用6摩尔/升盐酸调pH为5，加入150克胃蛋白酶，于55～60℃酶解1小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应，用0.5摩尔/升氢氧化钾，回调pH值至中性，余下操作与例2相同，得粘多糖纯品。

另取1.6公斤枸杞子、1.6公斤桂圆加16公斤水煮开，文火保持1小时，过滤取滤液，浓缩至15升，在浓缩液中加入95升乙醇静置，用蒸馏法将乙醇蒸出得提取液，取由上述方法获得的6克海参粘多糖，与由上述方法获得的12公斤提取液混合。加12克果胶、0.84千克蜂蜜搅拌均匀，自然冷却，静置3小时，使沉淀完全。采用压滤，取滤液，添加0.91千克白糖、52克柠檬酸、6.5克食盐、26克维生素C、1.17克蜂蜜混匀，以硅藻土加压过滤，再经孔径为5μm和0.5μm两级微孔滤膜过滤。再将滤液进行80℃，30分钟的巴氏杀菌，后即可灌装。

例7海参胶囊的制备

取40公斤新鲜海参，去内脏、去筋，洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加80升的水，打匀。将此海参浆用紫外线照射10分钟，然后用浓度为0.06摩尔/升氯化钠在pH为7，温度为40～65℃(每3分钟升高5℃)的梯度温度条件下进行自溶处理。之后用6摩尔/升盐酸调pH为1，加入160克胃蛋白酶酶解2小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。余下操作与例1相同，得到海参粘多糖纯品。

另取大枣80公斤、桂圆80公斤加水800升，重复例3中制备提取液的操作，得提取液160升，加入80克粘多糖，再加入800克β-环状糊精，煮2分钟，放入冷冻干燥机干燥，控制温度在-40℃以下，真空度133×10^-3pa，直至水分4％时终止。之后筛去块状物，于50％相对湿度的环境下冷却为室温，将冷却好的产物装入胶囊。

例8海参胶囊的制备

取40公斤新鲜海参，去内脏、去筋，洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加120升的水，打匀。将此海参浆用紫外线照射30分钟，然后用浓度为0.08摩尔/升氯化钠在pH为7.5，温度为40～65℃(每3分钟升高5℃)的梯度温度条件下进行自溶处理。之后用6摩尔/升盐酸调pH为5，加入180克胃蛋白酶酶解1小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。余下操作与例2相同，得到海参粘多糖纯品。

另取枸杞子80公斤、红景天80公斤加水800升，重复例3中制备提取液的操作，得提取液160升，加入80克粘多糖，再加入4800克β-环状糊精，煮10分钟，控制真空度在86.25～98.64Kpa、温度45～65℃，进行浓缩，当浓缩物料中固形物为4％时，开始喷雾干燥，喷粉料液温度45～50℃，料泵压力19.6～49.0Kpa，排风温度60～68℃，进风温度150～180℃。之后筛去块状物，于60％相对湿度的环境下冷却为室温，将冷却好的产物装入胶囊。

例9海参粘多糖片剂的制备

将200公斤新鲜海参肠组织捣碎，溶于400升0.1M磷酸钠缓冲液(pH6.0～7.5)中，静置抽提13小时，之后离心除去沉淀，在上清液中加入固体硫酸铵至80％饱和度，盐析48小时，之后透析6小时离心取沉淀，将沉淀溶解于0.1M磷酸缓冲溶液(pH6.0～7.5)中，再次透析48小时，离心得沉淀，以上操作均在10℃以下进行，将沉淀冷冻干燥得自溶酶酶粉。

另取50公斤泡发的干海参，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净，然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加250升水打匀。搅拌条件下加入150克由上述方法提取的自溶酶，在pH6、温度15℃条件下酶解8小时，之后用6摩尔/升盐酸将pH调至1，加入150克胃蛋白酶，于40～45℃条件下酶解2小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。余下操作与例1相同，得粘多糖纯品。取100克粘多糖，加到由400克红景天、200克大枣、200克桂圆及2000毫升水制得的提取液中，然后加入5克β-环状糊精，煮10分钟，再送入冷冻干燥机中干燥，控制温度在-40℃以下，真空度133×10^-3pa，直到水分为4％终止。取300克上述干粉加入30克淀粉经压片机压片即可得海参粘多糖片。

例10海参粘多糖片剂的制备

将200公斤新鲜海参肠组织捣碎，溶于3000升0.1M磷酸钠缓冲液(pH6.0～7.5)中，静置抽提2小时，之后离心除去沉淀，在上清液中加入固体硫酸铵至95％饱和度，盐析6小时，之后透析48小时离心取沉淀，将沉淀溶解于0.1M磷酸缓冲溶液(pH6.0～7.5)中，再次透析6小时，离心得沉淀，以上操作均在10℃以下进行，将沉淀冷冻干燥得自溶酶酶粉。

另取50公斤泡发的干海参，用刀沿有缺口的一侧纵向剖开，去掉参嘴及腔中杂物，在清水中洗净，然后用组织捣碎机将其体壁破碎。搅拌条件下加入1500克由上述方法提取的自溶酶，在pH8，温度30℃条件下酶解3小时，之后用6摩尔/升盐酸将pH调至5，加入250克胃蛋白酶，在55～60℃条件下酶解1小时，酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。余下操作与例2相同，得粘多糖纯品。取100克粘多糖，加到由400克红景天、200克大枣、200克桂圆及2000毫升水制得的提取液中，然后加入30克β-环状糊精，煮2分钟，再送入冷冻干燥机中干燥，控制温度在-40℃以下，真空度133×10^-3pa，直到水分为4％终止。取300克上述干粉加入15克淀粉经压片机压片即可得海参粘多糖片。

例11海参蛋白水解液饮料的制备

取40公斤新鲜海参，去内脏、去筋，洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，并添加200升的水。将海参浆在pH为6，温度为4℃条件下，于无菌的酶解罐中自溶24小时，之后用6摩尔/升盐酸调pH为5，加入200克胃蛋白酶，于40℃酶解2小时。酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用0.5摩尔/升氢氧化钾回调pH至中性，高速(6000转/分)离心分离，收集母液，在不断搅拌下缓缓加入32公斤95％乙醇，于10℃以下低温过夜。之后离心得上清液，进行减压蒸馏回收乙醇，将余下的液体过滤，采用95～100℃持续2分钟，灭菌备用。然后接入保加利亚乳酸杆菌，菌种子液接种量120克，发酵温度30℃。同时添加120克脱脂奶粉及120克葡萄糖在pH4.0，酸度0.4％时，将温度降至6℃以下，停止发酵。在发酵液中加入120克白砂糖混匀，并经高压均质机以20Mpa的压力均质。将经上述过程制得的发酵液加热到80℃，趁热装瓶，密封，再经巴氏杀菌(80℃，30分钟)后冷却至室温。

例12海参粘多糖片剂的制备

取40公斤新鲜海参，去内脏、去筋，洗净。然后用组织捣碎机将其体壁破碎，将海参浆在pH为7.5，温度为0℃条件下，于无菌的酶解罐中自溶48小时，之后用6摩尔/升盐酸调pH为1，加入120克胃蛋白酶，于60℃酶解1小时。酶解后速冷至30℃以下，保持30分钟，终止反应。用0.5摩尔/升氢氧化钾回调pH至中性，高速(6000转/分)离心分离，收集母液，在不断搅拌下缓缓加入12公斤95％乙醇，于10℃以下低温过夜。之后离心得上清液，进行减压蒸馏回收乙醇，将余下的液体过滤，采用超高温瞬时加热法，灭菌备用。然后接入保加利亚乳酸杆菌，菌种子液接种量40克，发酵温度50℃。同时添加40克脱脂奶粉及20克葡萄糖，在pH4.5，酸度0.2％时，将温度降至6℃以下，停止发酵。在发酵液中加入40克白砂糖混匀，并经高压均质机以40Mpa的压力均质。将经上述过程制得的发酵液加热到80℃，趁热装瓶，密封，再经巴氏杀菌(80℃，30分钟)后冷却至室温。

注：本申请文件中所用的百分比均为重量百分比。

Claims (3)

1、一种海参粘多糖的制备方法，其特征在于：

①原料及处理：取经处理的干海参或盐渍海参或鲜海参添加0～5倍体积的水，用组织捣碎机将其体壁破碎，

②提取海参粘多糖

a自溶：将海参浆在pH6～7.5、温度为0～4℃的条件下自溶24～48小时，

b酶解：用6摩尔/升盐酸将自溶液pH调至1～5，加入0.3～0.5％胃蛋白酶，于40～60℃条件下酶解1～2小时，酶解后速冷到30℃以下，保持30分钟，

c分离：用0.5摩尔/升氢氧化钾调酶解液pH至中性，高速离心分离，收集母液，

d醇溶：搅拌下缓缓加入质量百分数为30～80％的95％乙醇，≤10℃过夜，

e提纯：离心收集沉淀，并依次用90～100％乙醇洗涤，丙酮脱水之后在40～70℃干燥或真空干燥，得海参粘多糖粗品，

③纯化：将粘多糖粗品溶解在1∶10～50g/ml水里，离心，在清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度为0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，低温收集沉淀，再用前次一半体积的水将其溶解，用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至9～11，保持45～55℃滴加H₂O₂脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点，冷却，离心，将上清液冷却至4℃以下，用6摩尔/升盐酸调pH1.5～2.5，离心，向上清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度达0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，低温收集沉淀，之后乙醇洗涤，丙酮脱水，干燥得粘多糖纯品。

2、一种海参粘多糖的制备方法，其特征在于：

①原料及处理：取经处理的干海参或盐渍海参或鲜海参添加0～5倍体积的水，用组织捣碎机将其体壁破碎，

②提取海参粘多糖

a自溶：将海参浆在pH6～7.5常温下自溶6～8小时，

b酶解：用6摩尔/升盐酸将自溶液pH调至1～5，加入0.3～0.5％胃蛋白酶，于40～60℃条件下酶解1～2小时，酶解后速冷到30℃以下，保持30分钟，

c分离：用0.5摩尔/升氢氧化钾调酶解液pH至中性，高速离心分离，收集母液，

d醇溶：搅拌下缓缓加入质量百分数为30～80％的95％乙醇，≤10℃过夜，

e提纯：离心收集沉淀，并依次用90～100％乙醇洗涤，丙酮脱水之后在40～70℃干燥或真空干燥，得海参粘多糖粗品，

③纯化：将粘多糖粗品溶解在1∶10～50g/ml水里，离心，在清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度为0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，低温收集沉淀，再用前次一半体积的水将其溶解，用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至9～11，保持45～55℃滴加H₂O₂脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点，冷却，离心，将上清液冷却至4℃以下，用6摩尔/升盐酸调pH1.5～2.5，离心，向上清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度达0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，低温收集沉淀，之后乙醇洗涤，丙酮脱水，干燥得粘多糖纯品。

3、一种海参粘多糖的制备方法，其特征在于：

①原料及处理：取经处理的干海参或盐渍海参或鲜海参添加0～5倍体积的水，用组织捣碎机将其体壁破碎，

②提取海参粘多糖

a自溶：将海参浆用紫外线照射10～30分钟后，用浓度为0.06～0.08摩尔/升的氯化钠在pH7.0～7.5、温度为40～65℃，保持每3分钟升高5℃的梯度温度的条件下进行处理，

b酶解：用6摩尔/升盐酸将自溶液pH调至1～5，加入0.3～0.5％胃蛋白酶，于40～60℃条件下酶解1～2小时，酶解后速冷到30℃以下，保持30分钟，

c分离：用0.5摩尔/升氢氧化钾调酶解液pH至中性，高速离心分离，收集母液，

d醇溶：搅拌下缓缓加入质量百分数为30～80％的95％乙醇，≤10℃过夜，

e提纯：离心收集沉淀，并依次用90～100％乙醇洗涤，丙酮脱水之后在40～70℃干燥或真空干燥，得海参粘多糖粗品，

③纯化：将粘多糖粗品溶解在1∶10～50g/ml水里，离心，在清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度为0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，低温收集沉淀，再用前次一半体积的水将其溶解，用0.5摩尔/升氢氧化钾调pH至9～11，保持45～55℃滴加H₂O₂脱色至多糖水解液呈浅黄色为终点，冷却，离心，将上清液冷却至4℃以下，用6摩尔/升盐酸调pH1.5～2.5，离心，向上清液中加入固体乙酸钾，使其在溶液中浓度达0.5～4摩尔/升，冷藏过夜，低温收集沉淀，之后乙醇洗涤，丙酮脱水，干燥得粘多糖纯品。