CN110618188A

CN110618188A - 一种益母草注射液中阳离子含量检测方法

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Publication number: CN110618188A
Application number: CN201910895222.7A
Authority: CN
Inventors: 刘昭华; 江燕; 史平伍
Original assignee: CHENGDU FIRST PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: CHENGDU FIRST PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2019-09-20
Filing date: 2019-09-20
Publication date: 2019-12-27

Abstract

本发明公开了一种益母草注射液中阳离子含量检测方法，它包括如下步骤：(1)阳离子标准曲线的建立；(2)待测样品中阳离子含量测定：取供试品溶液和空白溶液，注入ICP‑MS仪检测，根据标准曲线得到待测样品中阳离子含量。本发明益母草注射液中阳离子含量检测方法，能同时测定益母草注射液中的钠离子、钾离子、钙离子和镁离子，样品无须前处理，操作简便、结果准确，可有效控制益母草注射液中的阳离子，从而保证益母草注射液安全性。

Description

一种益母草注射液中阳离子含量检测方法

技术领域

本发明具体涉及一种益母草注射液中阳离子含量检测方法。

背景技术

中药注射剂是我国独创的新剂型，它的出现改变了中药的传统给药方式，它的研发成为中药现代化的热点之一，但其与普通制剂相比，从临床应用的角度来看，属高风险品种，因此，中药注射剂的安全性问题一直是国内外关注的焦点。近年来，随着中药注射剂的发展及在临床上越来越广泛的应用，相关不良反应的报道也开始逐渐增多，其中微量元素的检测和限量控制十分重要。人体内主要的微量元素钾、钙、镁和钠作为药物药性物质基础的重要组成部分，与药物的药性、药效乃至毒副作用密切相关，因此，微量元素钾、钙、镁和钠的准确测定对药效研究、药品摄入的安全性问题有着十分重要的意义。

益母草注射液为子宫收缩药，用于止血调经，是临床常用中药。主要有效成分为生物碱，根据物质基础研究结果表明，益母草注射液中生物碱主要由盐酸水苏碱和氯化胆碱组成，其中盐酸水苏碱约占生物碱总量的90％。有报道采用HPLC—ELSD法建立益母草注射液指纹图谱，杨超等.益母草注射液指纹图谱的研究[J].药物分析杂志.2016,36(7):1219-1224，通过高效液相色谱法仅能测定注射液中钾、钠两种阳离子，不能检测钙、镁离子，如注射液中钙镁超标，会导致高钙血症，高镁血症，这种不能全面检测阳离子的方法，给注射液的使用带来了很大的隐患。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种益母草注射液中阳离子含量检测方法，它包括如下步骤：

(1)阳离子标准曲线的建立

a、对照品溶液的制备：取阳离子标准溶液，加硝酸溶液配制成系列浓度对照品溶液；

b、内标溶液制备：取Ge标准溶液，加硝酸溶液配制成内标溶液；

c、对照品溶液的测定：

分别取系列浓度对照品溶液与内标溶液注入ICP-MS仪检测，测定仪器响应值，得到阳离子的标准曲线；ICP-MS工作参数如下：

RF功率：1200-1800w；采用深度：5-10mm；积分时间0.005-0.20s；

(2)待测样品中阳离子含量测定：

d、供试品溶液和空白溶液的制备：分别取益母草注射液和纯水，加硝酸溶液混匀，得供试品溶液和空白溶液；

e、供试品溶液的测定：

分别取供试品溶液和空白溶液与内标溶液注入ICP-MS仪检测，以步骤c相同的参数检测，根据步骤(1)的标准曲线得到待测样品中阳离子含量。

进一步地，步骤a所述对照品溶液中阳离子浓度为5～400ng/ml。

进一步地，所述阳离子为钠离子、镁离子、钾离子和/或钙离子。

进一步地，步骤b所述内标溶液中Ge含量为500ng/ml。

进一步地，步骤d所述供试品溶液中益母草注射液与硝酸溶液的体积比为1：500或1：12500；所述空白溶液中纯水与硝酸溶液的体积比为1：500或1：12500。

更进一步地，所述益母草注射液与硝酸溶液的体积比为1：500时，测定的是益母草注射液中的镁离子和/或钙离子；所述益母草注射液与硝酸溶液的体积比为1：12500时，测定的是益母草注射液中的钠离子和/或钾离子。

进一步地，所述硝酸溶液浓度为2％；所述2％硝酸溶液中含200ng/ml Au。

进一步地，步骤c所述ICP-MS工作参数中RF功率：1550w；采用深度：8mm；积分时间0.1s。

进一步地，步骤c所述工作参数中载气流量1.01L/min；雾气泵转速为0.1rps；雾气室温度：2℃。

进一步地，所述工作参数中采样锥类型Ni，采样锥孔径：1.0mm；分析模式：定量，重复3次。

本发明益母草注射液中阳离子含量检测方法，能同时测定益母草注射液中的钠离子、钾离子、钙离子和镁离子，样品无须前处理，操作简便、结果准确，可有效控制益母草注射液中的阳离子，从而保证益母草注射液安全性。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1各元素线性曲线

具体实施方式

实施例1、本发明益母草注射液中阳离子检测

(1)阳离子标准曲线的建立

a、对照品溶液的制备：

取Na、Mg、K、Ca标准溶液，加2％硝酸溶液(含200ng/ml Au)稀释成浓度为100000ng/ml的储备液，并将储备液加2％硝酸溶液(含200ng/ml Au)逐级稀释成系列浓度(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)；

b、内标溶液制备：取Ge标准溶液，加2％硝酸溶液(含200ng/ml Au)稀释成500ng/ml内标溶液；

c、对照品溶液的测定：

分别取系列浓度对照品溶液注入ICP-MS仪检测，同时采用蠕动泵在线注入内标溶液，测定仪器响应值，得到阳离子的标准曲线；ICP-MS工作参数如下：

RF功率：1550w；采用深度：8mm；积分时间0.10s；载气流量1.01L/min；雾气泵转速为0.1rps；雾气室温度：2℃；采样锥类型Ni，采样锥孔径：1.0mm；分析模式：定量，重复3次。

(2)待测样品中阳离子含量测定：

d、供试品溶液和空白溶液的制备：

精密量取1ml益母草注射液于50ml塑料容量瓶中，用2％硝酸溶液(含200ng/mlAu)定容至刻度，摇匀，再精密吸取1ml益母草注射液于10ml塑料容量瓶中，用2％硝酸溶液(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀，即得Mg、Ca待测液。取纯水，同法制备空白溶液；

精密量取1ml益母草注射液于50ml塑料容量瓶中，用2％硝酸溶液(含200ng/mlAu)定容至刻度，摇匀，再精密吸取1ml益母草注射液于10ml塑料容量瓶中，用2％硝酸溶液(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀，再精密吸取1ml益母草注射液于25ml塑料容量瓶中，用2％硝酸溶液(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀即得Na、K待测液。取纯水，同法制备空白溶液；

e、供试品溶液的测定：

分别取供试品溶液和空白溶液注入ICP-MS仪检测，同时采用蠕动泵在线注入内标溶液，以步骤c相同的参数检测，根据步骤(1)的标准曲线得到待测样品中Mg、Ca、Na、K含量。

以下通过试验例来说明本发明的有益效果。

试验例1

1试验样品及试剂试药

1.1试验样品

样品信息见表1。

表1样品信息

1.2试剂试药

Na标准液：国家有色金属及电子材料分析测试中心，唯一标识码：184028-4，浓度：1000μg/mL；

Mg标准液：国家有色金属及电子材料分析测试中心，唯一标识码：182019-3，浓度：1000μg/mL；

K标准液：国家有色金属及电子材料分析测试中心，唯一标识码：187043-4，浓度：1000μg/mL；

Ca标准液：国家有色金属及电子材料分析测试中心，唯一标识码：183011-2，浓度：1000μg/mL；

Au标准液：国家有色金属及电子材料分析测试中心，唯一标识码：174046-2，浓度：1000μg/mL；

Ge标准溶液作为内标：国家有色金属及电子材料分析测试中心，唯一标识码：175053，浓度：1000μg/ml；

硝酸：Fisher Chemical，批号：1553723，浓度：>68％；

超纯水：密理博advantage100超纯水仪制超纯水。

1.3仪器

Agilent7700型电感耦合等离子体质谱仪；

密理博advantage100超纯水仪。

2测定方法

益母草注射液离子(Na、Mg、K、Ca)含量测定法：按《中国药典2015版》四部附录0412，采用电感耦合等离子体-质谱法(ICP-MS)测定，用标准曲线法定量。

为避免干扰，试验中所用器皿均为塑料制品(PP材质)。

2.1 ICP-MS仪器条件

RF功率：1550w；载气流量：1.01L/min；雾化泵转速：0.1rps；雾化室温度：2℃；采样深度：8mm；采样锥类型：Ni；采样锥孔径：1.0mm；采样间隔：105s。分析模式：定量，重复3次；积分时间：0.10s。

监测质量数如下：见表2

表2监测质量数

元素	质量数	模式
			Na	23	He
Mg	24	He
			K	39	He
Ca	44	He
			Ge(内标)	72	He

2.2对照品溶液制备

分别精密吸取Na、Mg、K、Ca标准液适量，加2％HNO₃(含200ng/ml Au)稀释成浓度为100000ng/ml的储备液，并将储备液加2％HNO₃(含200ng/ml Au)逐级稀释成系列浓度(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)。

2.3供试品溶液制备

Mg、Ca待测液的制备：取待测样品2支，合并，摇匀，作为待测液。精密量取待测液1ml至50ml塑料容量瓶并用2％HNO₃(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀；再精密吸取1ml至10ml塑料容量瓶，用2％HNO₃(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀即得。取纯水同法制备空白。

Na、K待测液的制备：取本品2支，合并，摇匀，作为待测液。精密量取待测液1ml至50ml塑料容量瓶并用2％HNO₃(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀；再精密吸取1ml至10ml塑料容量瓶，用2％HNO₃(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀；再精密吸取1ml至25ml塑料容量瓶，用2％HNO₃(含200ng/ml Au)定容至刻度，摇匀即得。取纯水同法制备空白。

2.4标准曲线测定

取所制对照品溶液进样分析，以元素浓度为横坐标，相应仪器响应(比率)为纵坐标，绘制标准曲线。

2.5供试品溶液测定

将制备的供试品溶液在相同条件下测定，并扣除空白液浓度后，按标准曲线法计算供试品溶液中Na、Mg、K、Ca元素的浓度(单位：ng/ml)。

3测试方法验证

3.1线性范围

取浓度为5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml的Na、Mg、K、Ca对照品溶液，照前述方法进样分析，以各元素浓度为横坐标，仪器响应(比率)为纵坐标，绘制标准曲线,见下图1。

结果表明，本方法在测定Na、Mg、K、Ca元素浓度为0～400ng/ml时，r为0.9978～0.9999，其线性关系均良好。

3.2精密度

取线性项下浓度为50ng/ml的Na、Mg、K、Ca混合对照品溶液采用ICP-MS测定，照前述方法进样分析，重复进样6次，测定其响应值(ng/ml),考察对照品溶液精密度。结果见表3。

表3对照品溶液精密度(ng/ml)

测试结果表明，该方法对Na、Mg、K、Ca元素测定精密度良好。

3.3样品重复性

取样品(批号：190301)按照供试品溶液的制备方法，平行制备6份，测定各元素浓度，考察样品供试液的重复性，结果见表4。(注：表中样品浓度小于该元素的方法检测限时，则以小于该元素的方法检测限计，且当此时计算RSD无实际意义，故以\计)。

表4样品供试液的重复性(ng/ml)

以上结果表明，该方法对Na、Mg、K、Ca元素测定重复性良好。

3.4准确性

为避免样品不均匀带来的测量差异，取样品(批号190301)5瓶，倒入洁净塑料容器中，混合均匀，作为待测液。

Mg、Ca回收溶液的制备：精密量取1000μl待测液置50ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液(浓度为100000ng/ml混合对照液)5μl、10μl、15μl，按“2.3供试品溶液的制备”方法制备的加标浓度为50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml，各浓度平行制备3份。同法制备未加对照品溶液的供试样品液。

Na、K回收溶液的制备：精密量取1000μl待测液置50ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液(浓度为10000ng/ml混合对照液)125μl、250μl、375μl，按“2.3供试品溶液的制备”方法制备的加标浓度为50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml，各浓度平行制备3份。同法制备未加对照品溶液的供试样品液。

样品本底结果为6次样品重复性的平均值见下表5。

表5样品本底结果

经过计算，各元素回收率见下表6-表9：

表6 Na元素回收率

表7 Mg元素回收率

表8 K元素回收率

表9 Ca元素回收率

以上结果表明，Na、Mg、K、Ca元素加标浓度为50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml时(加标样品液各元素浓度均在标准曲线范围内)，该方法的回收率好，准确度高。

3.5稳定性

(1)取浓度为50ng/ml的Na、Mg、K、Ca混合对照品溶液照上述方法分别在不同时间点进样测定，结果如下表10。

表10对照品溶液稳定性(ng/ml)

元素	0h	1h	2.5h	4h	平均值	RSD
							Na	47.91	46.25	46.60	43.66	46.11	3.86％
Mg	47.22	52.39	48.62	46.60	48.71	5.33％
							K	47.01	52.07	46.59	46.25	47.98	5.72％
Ca	47.47	50.08	46.75	46.51	47.70	3.43％

(2)取供试品溶液(批号190301)照上述方法分别在不同时间点进样测定，Na、Mg、K、Ca元素含量结果如下表11-表12。

表11供试品溶液稳定性(ng/ml)

元素	0h	0.5h	2h	5h	平均值	RSD
							Na	27.33	27.13	24.38	29.73	27.14	8.06％
K	167.05	174.74	167.86	183.97	177.64	4.41％

表12供试品溶液稳定性(ng/ml)

元素	0h	1h	5h	平均值	RSD
						Mg	38.89	37.26	39.81	38.65	3.34％
Ca	46.70	49.28	48.76	48.25	2.83％

结果表明Na、Mg、K、Ca离子浓度变化均微量，测定的对照品及供试品溶液稳定性良好。

3.6检测限及定量限

取校正空白溶液照上述方法进样测定重复11次，以仪器自动计算检测限作为本次测试仪器检测限，以仪器检测限10/3倍作为本次测试仪器定量限，结果如下表13。

表13检测限和定量限

元素	Na	Mg	K	Ca
					检测限(ng/ml)	6.3020	0.5487	6.492	13.8400
定量限(ng/ml)	21.07	1.83	21.64	46.13
					方法检测限(mg/ml)	0.08	0.0003	0.08	0.01
方法定量限(mg/ml)	0.26	0.001	0.27	0.02

计算公式：

综上表明，该测定方法线性良好、精密度高、准确度高、稳定性好、重复性好，可用于成都第一制药有限公司生产的益母草注射液中Na、Mg、K、Ca离子迁移的测定。

3.7样品测定

取各批次样品，依法制备供试品溶液，采用电感耦合等离子体发射光谱-质谱法(ICP-MS)测定Na、Mg、K、Ca离子含量，每批样品同法测定2份。按标准曲线法计算浓度(如测得浓度低于该元素的方法检测限，则以小于该元素方法检测限计)，将测定结果换算成“mg/ml”，见下表14：

表14样品测定结果(mg/ml)

4小结

13批样品益母草注射液样品中，钠离子Na⁺含量为0.26mg/ml～1.11mg/ml，镁离子Mg⁺含量为0.01mg/ml～0.43mg/ml，钾离子K⁺含量为0.36mg/ml～3.93mg/ml，钙离子Ca²⁺含量为0.02mg/ml～0.06mg/ml。

综上，本发明益母草注射液中阳离子含量检测方法，能同时测定益母草注射液中的钠离子、钾离子、钙离子和镁离子，样品无须前处理，操作简便、准确度高，可有效监测益母草注射液中的阳离子，从而保证益母草注射液安全性。

Claims

1.一种益母草注射液中阳离子含量检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)阳离子标准曲线的建立

c、对照品溶液的测定：

RF功率：1200-1800w；采用深度：5-10mm；积分时间0.005-0.20s；

(2)待测样品中阳离子含量测定：

e、供试品溶液的测定：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a所述对照品溶液中阳离子浓度为5～400ng/ml。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述阳离子为钠离子、镁离子、钾离子和/或钙离子。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b所述内标溶液中Ge含量为500ng/ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d所述供试品溶液中益母草注射液与硝酸溶液的体积比为1：500或1：12500；所述空白溶液中纯水与硝酸溶液的体积比为1：500或1：12500。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述益母草注射液与硝酸溶液的体积比为1：500时，测定的是益母草注射液中的镁离子和/或钙离子；所述益母草注射液与硝酸溶液的体积比为1：12500时，测定的是益母草注射液中的钠离子和/或钾离子。

7.根据权利要求1、5或6所述的方法，其特征在于：所述硝酸溶液浓度为2％；所述2％硝酸溶液中含200ng/mlAu。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c所述ICP-MS工作参数中RF功率：1550w；采用深度：8mm；积分时间0.1s。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c所述工作参数中载气流量1.01L/min；雾气泵转速为0.1rps；雾气室温度：2℃。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述工作参数中采样锥类型Ni，采样锥孔径：1.0mm；分析模式：定量，重复3次。